CN115054942A - 一种博落回提取物的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物提取物技术领域，公开了一种博落回提取物的制备方法和应用。该制备方法，包括以下步骤：向博落回粉末中加入水，然后加压升温至120‑220℃，保持10‑60min；再固液分离得滤液，即制得博落回提取物。本发明在博落回提取物的制备中，将水加压升温至120‑220℃形成亚临界水，利用亚临界水提取博落回。通过控制升温的温度和提取的时间，能够促进博落回中活性成分的溶出，显著提高博落回提取物的抗氧化性能，尤其是ABTS清除能力，能够应用于抗氧化产品的制备。该制备方法能够缩短提取时间，使用设备少，提取过程流畅易控制，不使用任何有机溶剂，操作安全，生产成本低。
Description
技术领域
本发明属于植物提取物技术领域，具体涉及一种博落回提取物的制备方法和应用。
背景技术
博落回是罂粟科，博落回属多年生直立草本植物。该种全草入药可治跌打损伤、关节炎、汗斑、恶疮、蜂螫伤及麻醉镇痛、消肿；作农药可防治稻椿象、稻苞虫、钉螺等。博落回提取物主要包括血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐片碱，具有一定的杀菌活性和抗肿癌作用，被广泛用于医药、生物医药、兽医兽药、精细化工产品原料中。
目前博落回提取物的提取多采用传统方法，如热水浸提、醇回流等。一方面因溶剂极性较为单一导致无法对多种不同极性的生物活性物质进行有效提取；另一方面因植物细胞壁的作用导致溶剂不能很好地接触到细胞内组分，因此存在产品产率低、活性差的缺点。博落回提取物具有一定的抗氧化性，但是目前采用热水浸提、醇回流等方法制备的博落回提取物，虽然能够在一定程度上提高产率，但是其抗氧化性较低，尤其是ABTS清除能力较差，无法满足抗氧化产品的要求。
因此，亟需提供一种博落回提取物的制备方法，有利于博落回中活性成分的溶出，能够提高博落回提取物的抗氧化性能。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种博落回提取物的制备方法和应用。该制备方法有利于博落回中活性成分的溶出，能够提高博落回提取物的抗氧化性能。
本发明第一方面提供了一种博落回提取物的制备方法。
具体地，一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
向博落回粉末中加入水，然后加压升温至120-220℃，保持10-60min；再固液分离得滤液，即制得所述博落回提取物。
在博落回提取物的制备中，将水加压升温至120-220℃，形成亚临界水，以高温高压水(亚临界水)作为提取媒介，博落回活性物质从样品基质中的各个活性位解吸出来，发生一个扩散传质过程。一方面，在高温高压下，博落回原料表面受到破坏，压力增大有利于活性物质从基质孔中溶解出来，又因为高温高压下的水类似于一种流体，结合了气态与液态水的低黏度，高渗透性，扩散性等特点，因此其具有高效的传质效率。另一方面，高温下，水分子氢键开始断裂，极性，介电常数下降，使其类似于有机溶剂，能够更好溶解极性低的博落回活性物质。发明人在研究中发现，当控制升温的温度和保持时间，即控制亚临界水的温度和提取的时间，能够显著提高博落回提取物的抗氧化性能，尤其是ABTS清除能力。
优选地，所述博落回粉末是过40-100目筛制得；进一步优选地，所述博落回粉末是过60-80目筛制得。
优选地，所述博落回粉末是由博落回叶子经晒干、粉碎得到的。
优选地，所述博落回粉末与所述水的料液比为20-200g/L；进一步优选地，所述博落回粉末与所述水的料液比为30-150g/L；更优选地，所述博落回粉末与所述水的料液比为50-150g/L。
优选地，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-190℃，保持10-60min；进一步优选地，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-170℃，保持10-45min；更优选地，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-160℃，保持10-45min；最优选地，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-160℃，保持10-20min。
具体地，如向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130℃，保持15min；向所述博落回粉末中加入水后加压升温至160℃，保持15min；向所述博落回粉末中加入水后加压升温至150℃，保持20min。
优选地，在进行所述固液分离的步骤前，先将提取液自然冷却至室温。
更为具体地，一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：将博落回叶子粉碎，过40-100目筛得到博落回粉末，备用；以料液比为20-200g/L，将所述博落回粉末和水置入反应釜中，将反应釜封闭后放置于温度加热控制仪中，控制温度为120-220℃，压力为相应温度下的饱和蒸汽压，保持10-60min后，自然冷却至室温，固液分离后得到所述博落回提取物。
本发明第二方面提供了一种博落回提取物的制备方法的应用。
具体地，所述制备方法在制备抗氧化产品中的应用。
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
(1)本发明在博落回提取物的制备中，将水加压升温至120-220℃形成亚临界水，利用亚临界水提取博落回。通过控制升温的温度和提取的时间，能够促进博落回中活性成分的溶出，显著提高博落回提取物的抗氧化性能，尤其是ABTS清除能力，能够应用于抗氧化产品的制备。
(2)本发明提供的制备方法能够提高博落回提取物的产率，缩短提取时间，使用设备少，提取过程流畅易控制，不使用任何有机溶剂，操作安全，生产成本低。
附图说明
图1为实施例4制备的博落回提取物的抑菌效果图。
具体实施方式
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
实施例1
一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将博落回叶粉碎，过60目筛，得博落回粉末，备用；
(2)向1L水中加入100g博落回粉(料液比为100g/L)，然后置入反应釜中，将反应釜封闭后放置于温度加热控制仪中，反应釜中物料温度控制在130℃，压力为相应温度下的饱和蒸汽压(2.7Mpa)，物料温度在130℃下保持15min后，自然冷却至室温，液渣分离得到滤液，即制得博落回提取物。
将博落回提取物蒸除水分，测试血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为16.0mg当量血根碱/g原料。
实施例2
一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将博落回叶粉碎，过60目筛，得博落回粉末，备用；
(2)向1L水中加入50g博落回粉(料液比为50g/L)，然后置入反应釜中，将反应釜封闭后放置于温度加热控制仪中，反应釜中物料温度控制在190℃，压力为相应温度下的饱和蒸汽压(12.5Mpa)，物料温度在190℃下保持30min后，自然冷却至室温，液渣分离得到滤液，即制得博落回提取物。
将博落回提取物蒸除水分，测试血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为20.1mg当量血根碱/g原料。
实施例3
一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将博落回叶粉碎，过60目筛，得博落回粉末，备用；
(2)向1L水中加入150g博落回粉(料液比为150g/L)，然后置入反应釜中，将反应釜封闭后放置于温度加热控制仪中，反应釜中物料温度控制在160℃，压力为相应温度下的饱和蒸汽压(6.1Mpa)，物料温度在160℃下保持15min后，自然冷却至室温，液渣分离得到滤液，即制得博落回提取物。
将博落回提取物蒸除水分，测试血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为20.6mg当量血根碱/g原料。
实施例4
一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将博落回叶粉碎，过60目筛，得博落回粉末，备用；
(2)向1L水中加入100g博落回粉(料液比为100g/L)，然后置入反应釜中，将反应釜封闭后放置于温度加热控制仪中，反应釜中物料温度控制在190℃，压力为相应温度下的饱和蒸汽压(12.5Mpa)，物料温度在190℃下保持45min后，自然冷却至室温，液渣分离得到滤液，即制得博落回提取物。
将博落回提取物蒸除水分，测试血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为35.19mg当量血根碱/g原料。
对比例1
一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将博落回叶粉碎，过60目筛，得博落回粉末，备用；
(2)取10g博落回粉末和200mL蒸馏水加入到容器中，将加热至100℃。待煮沸后，保持15min，然后冷却至室温，过滤，收集滤液，得到博落回提取物。将博落回提取物蒸除水分，测试血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为18.71mg当量血根碱/g原料。
对比例2
一种博落回提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将博落回叶粉碎，过60目筛，得博落回粉末，备用；
(2)取100g博落回粉末和1L蒸馏水加入到容器中，将加热至100℃。待煮沸后，保持30min；然后冷却至室温，过滤，收集滤液，得到博落回提取物。将博落回提取物蒸除水分，测试血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为16.55mg当量血根碱/g原料。
产品效果测试
1.抗氧化测试具体过程
(1)DPPH自由基清除能力
将DPPH溶解于甲醇中形成0.1mmol/L(即0.0394g/L)的溶液，将2mL稀释博落回提取物溶解于2mL的DPPH溶液中的混合液，将混合液放在黑暗中放置60min，以未加入博落回提取物的2mL DPPH+2mL去离子水作为对照组，然后分别测试517nm处的吸光度。
DPPH自由基清除能力＝(未加入博落回提取物的DPPH吸光度-加入博落回提取物的DPPH吸光度)/未加入博落回提取物的DPPH吸光度。
(2)ABTS自由基清除能力
将10mg ABTS稀释于2.6mL过硫酸钾溶液中(0.6615g/L,2.45mM)得ABTS溶液，使用前，将ABTS溶液在室温下于黑暗中放置12-16h，然后将ABTS溶液稀释至0.70±0.02吸光度，将1mL稀释的博落回提取物加入到3mL的ABTS溶液中，静置在黑暗室温下60min，测试734nm下的加入博落回提取物和未加入博落回提取物的吸光度。
ABTS自由基清除能力＝(未加入博落回提取物的ABTS吸光度-加入博落回提取物的ABTS吸光度)/未加入博落回提取物的ABTS吸光度。
测试结果如表1所示。
表1
由表1可知，相较于对比例1-2制备的博落回提取物，本发明实施例1-4制备的博落回提取物的抗氧化性得到了明显的提升，其并不取决于血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量，其中对比例1中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为18.71mg当量血根碱/g原料；实施例1中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱的总含量为16.0mg当量血根碱/g原料，而实施例1制备的博落回提取物的DPPH自由基清除率为89.2％，高出对比例1 6.38％，ABTS自由基清除率为96.50％，高出对比例1 37.63％。由表1也可知，当提取温度为120-160℃时，其抗氧化能力更强，尤其是ABTS自由基清除能力。
(3)抑菌效果测试
细菌：按比例配制好MH琼脂，将其与培养皿、移液枪头等其他物品包装好，放到灭菌锅里，121℃下灭菌20min。而像移液枪等不能进入灭菌锅的物品用酒精喷洒灭菌。待灭菌结束后，将测试需要用到的物品转移到超净台里，打开紫外照射一段时间。结束照射后，点燃酒精灯，趁MH琼脂还没凝固前将其倒入培养皿中，备用。将提前准备好的菌悬液稀释至106-107CFU/mL(用浊度仪确定)，移取100μL，均匀涂在MH琼脂上。然后用针头过滤器对博落回提取液进行过滤，再用无菌水依次稀释相应倍数。将4个牛津杯等间距放在琼脂上，并往杯中加入不同浓度提取液，37℃下培养1d，观察是否有抑菌圈。将博落回提取液稀释至4、8、16、32、64、128倍，测试抑菌效果。测试结果如表2、表3、表4所示。
表2实施例1制备的博落回提取物的抑菌效果
注：“—”表示无菌生长；“+”表示有菌生长
表3实施例4制备的博落回提取物的抑菌效果
注：“—”表示无菌生长；“+”表示有菌生长
表4对比例1制备的博落回提取物的抑菌效果
注：“—”表示无菌生长；“+”表示有菌生长
由表2-4可知，本发明实施例1、4制备的博落回提取物对细菌的抑制效果优于对比例1制备的博落回提取物。实施例4制备的博落回提取物的抑菌效果图如图1所示。在图1中，A是对金黄葡萄球菌的抑制效果图，B是对大肠杆菌的抑制效果图，图1中分别显示了不稀释、稀释2倍、稀释4倍以及对照组的抑菌圈。本发明制备的博落回提取物对金黄葡萄球菌的抑制效果优于大肠杆菌；且本发明提供的制备方法，还能够提高博落回提取物的抑菌效果。
Claims (10)
1.一种博落回提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
向博落回粉末中加入水，然后加压升温至120-220℃，保持10-60min；再固液分离得滤液，即制得所述博落回提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述博落回粉末是过40-100目筛制得。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述博落回粉末是由博落回叶子经晒干、粉碎得到的。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述博落回粉末与所述水的料液比为20-200g/L。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述博落回粉末与所述水的料液比为30-150g/L。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-190℃，保持10-60min。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-170℃，保持10-45min。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，向所述博落回粉末中加入水后加压升温至130-160℃，保持10-20min。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在进行所述固液分离的步骤前，先将提取液自然冷却至室温。
10.权利要求1-9中任一项所述的博落回提取物的制备方法在制备抗氧化产品中的应用。
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