CN108546590A - 紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法 - Google Patents

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Abstract

紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，包括以下步骤：（1）提取紫苏提取液；（2）制环糊精混悬液；（3）将环糊精混悬液与司盘‑80混合，加入紫苏提取液，搅拌均匀；（4）将混合液过滤分离出环糊精，静置分层，将两相分离；向环糊精中加入乙醇，得到紫苏精油a；（5）取两相层上层，除去乙醇和司盘‑80，得紫苏精油b；（6）将紫苏精油a和紫苏精油b混合，得紫苏精油c，加入吐温‑80，再加入无菌水，并充分拌匀后，获得紫苏精油产品；（7）取紫苏精油产品，加入吐温‑80无菌水溶液，即得紫苏精油抑菌剂；（8）密闭贮存空间内喷洒使用。本发明能抑制橘青霉生长繁殖，防止其腐烂变质，并延长柑橘保藏时间。

Description

紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法
技术领域
本发明涉及一种紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，尤其是涉及一种超声提取-双油相系统纯化紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法。
背景技术
柑橘采收后及贮运过程中病害严重，极易受到青霉菌、绿霉菌等子囊菌门真菌的侵染导致腐烂变质，烂果率很高。很多专家学者也提出对于柑橘类果实采后贮藏管理中的病害防控，应以青霉菌或绿霉菌为最主要对象。
紫苏精油，又称紫苏挥发油，是紫苏香气成分经过蒸馏冷凝之后形成的重要混合物，多见于紫苏茎、叶和花之中，含量一般为0.55%～ 0.58%，主要含有紫苏醛、柠檬烯等成分，其中含量最高的一般为紫苏醛。
紫苏精油可广泛应用于香料、香水及食品配料领域，同时由于精油中具有众多的强抑菌物质，可用于治疗细菌真菌疾病。有文章提到不同稀释浓度的青霉菌菌悬液1mL加入含有1‰的自制紫苏油的中药糖浆制剂中，加盖，于室温下放置3天，然后移取1mL至固体平皿中进行培养来计算菌落数，结果发现紫苏油显示出与常用防腐剂尼泊金乙酯类似的抑制青霉菌的效力（张子扬, 苏崇贤, 陈定强. 紫苏油、桂皮油与常用防腐剂抑菌力的比较.中国中药杂志, 1990, 15(2): 31-33）。
目前水蒸气蒸馏法和超临界流体萃取技术在紫苏精油提取纯化上得到了广泛的实际应用，尤其是后者被视为是一种环境友好、高效、节能的新型绿色分离技术。但两者均存在一定的局限性：水蒸气蒸馏法由于加热易造成热敏性成分的降解和挥发性成分的损失，可导致有效成分的丧失（刘娜. 超临界流体萃取技术在中药提取的应用.广州化工,2017, 45(24):31-33）；而超临界萃取技术虽然避免了挥发油中有效成分的氧化分解，提高了提取效率，但原料需要经过干燥等预处理，且萃取过程中其他非药用成分或杂质的提取溶出的可能性也大大增加，进一步影响药理作用或药效。有文献指出22个组分仅出现在超临界流体萃取紫苏叶精油中，而水蒸气蒸馏法中并无这些大分子组分（凌育赵.二种方法提取紫苏挥发油的气相色谱一质谱比较.中国调味品,2005, 11:18-20,30）。上述方法都可能导致所得紫苏精油的成份氧化降解或者引起无效成分增多，进一步影响药理作用或功能性作用的发挥。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种成份较稳定的紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，能延长柑橘常温贮藏时间。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是，紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，包括以下步骤：
（1）取紫苏茎、叶或/和花，用乙醇作为提取溶剂，40-45℃下超声提取30-60min，过滤，得到紫苏提取液；
优选超声提取的功率为140-150W，频率40-42kHz；
（2）取环糊精溶解在水中，制成质量浓度为8%-15%的环糊精混悬液；
（3）将步骤（2）所得环糊精混悬液与司盘-80（Span-80）以质量比4-6:1混合，形成双油相纯化系统液，并在搅拌条件下加入步骤（1）所得紫苏提取液，双油相纯化系统液与紫苏提取液的质量比为1:0.8-1.2，搅拌均匀；
（4）将经步骤（3）处理的混合液过滤分离出环糊精，然后静置分层，将两相分离，上层主要含司盘-80、乙醇及紫苏精油，下层主要含水、乙醇；向环糊精中加入乙醇充分搅拌30-60min，释放囊心，得到紫苏精油a；
（5）取步骤（4）所得两相层上层，减压蒸馏除去乙醇和司盘-80，得紫苏精油b；
（6）将紫苏精油a和紫苏精油b混合，得紫苏精油c，加入相当于紫苏精油c体积1/6-1/4的吐温-80，不断搅拌并充分溶解后，再加入相当于吐温-80体积8-10倍的无菌水，并充分拌匀后，获得紫苏精油产品，备用；
（7）取步骤（6）所得紫苏精油产品，加入质量浓度为10%的吐温-80无菌水溶液，稀释（优选稀释100-400倍），充分混匀，即得紫苏精油抑菌剂；
（8）使用方法：密闭贮存空间内喷洒使用；优选按照25-30mL/m3的用量对贮存空间进行喷洒。
本发明提供紫苏精油的提取纯化方案，即超声提取-双油相系统纯化，并将纯化后紫苏精油用特定的溶剂来制备抑菌剂，采用喷洒贮存空间的方式应用于柑橘的保存，可比水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法获得的紫苏精油更为有效地抑制橘青霉生长繁殖，防止其腐烂变质，并延长柑橘保藏时间。
本发明之超声提取-双油相系统纯化后紫苏精油在柑橘贮存中的应用，涉及中药挥发油精制及应用研究领域，即将纯化后紫苏精油作为有效且唯一组分来制备植物源抑菌剂，并采用喷洒贮存空间的方式应用于柑橘的保存，可比水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法获得的紫苏精油更为有效地抑制橘青霉生长繁殖，防止其腐烂变质，并延长柑橘保藏时间。
我们采用的先超声提取紫苏，然后双油相系统纯化精油的方法，能避免水蒸气蒸馏法加热引起的遇热破坏和超临界流体萃取法的干燥预处理，而且没有引入传统的毒性有机溶剂。将此种方法处理的紫苏精油经过适当的溶剂均匀分散后应用于柑橘的常温贮藏，比现有前两者方法，可更为有效地抑制橘青霉生长繁殖，防止其腐烂变质，并延长柑橘保藏时间。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
本实施例包括以下步骤：
包括以下步骤：
（1）取紫苏茎、叶或/和花，用乙醇作为提取溶剂，45℃下超声提取60min，过滤，得到紫苏提取液；
超声提取的功率为140W，频率42kHz；
（2）取环糊精溶解在水中，制成质量浓度为15%的环糊精混悬液；
（3）将步骤（2）所得环糊精混悬液与司盘-80（Span-80）以质量比4:1混合，形成双油相纯化系统液，并在搅拌条件下加入步骤（1）所得紫苏提取液，双油相纯化系统液与紫苏提取液的质量比为1:1，搅拌均匀；
（4）将经步骤（3）处理的混合液过滤分离出环糊精，然后静置分层，将两相分离，上层主要含司盘-80、乙醇及紫苏精油，下层主要含水、乙醇；向环糊精中加入乙醇充分搅拌60min，释放囊心，得到紫苏精油a；
（5）取步骤（4）所得两相层上层，减压蒸馏除去乙醇和司盘-80，得紫苏精油b；
（6）将紫苏精油a和紫苏精油b混合，得紫苏精油c，加入相当于紫苏精油c体积1/5的吐温-80，不断搅拌并充分溶解后，加入相当于吐温-80体积9倍的无菌水，并充分拌匀后，获得紫苏精油产品，备用；
（7）取步骤（6）所得紫苏精油产品，加入质量浓度为10%的吐温-80无菌水溶液，稀释400倍，充分混匀，即得紫苏精油抑菌剂；
（8）使用方法：密闭贮存空间内喷洒使用；按照25mL/m3的用量对贮存空间进行喷洒。
抑菌杀菌效果评价
取2.5mg/mL的两性霉素-B（水溶性）水溶液作为阳性对照，质量浓度为10%的吐温-80无菌水作为阴性对照，另分别取三种方法提取纯化并稀释400倍的紫苏精油A、B、C，A为水蒸气蒸馏法，B为超临界流体萃取法，C为本发明实施例1的超声提取-双油相系统纯化法，共5个样品，分别检验其抑菌杀菌效果。
1. 体外抑菌实验
1.1 菌丝抑制率：采用菌块法测定。用打孔器切取6 mm橘青霉菌块。将上述菌块置于90mm平皿中央。28摄氏度下培养4-5天。菌丝抑制率=100-[(R2/r2)×100]。
1.2 孢子抑制率：采用6mm纸片法测定。
2. 体内抑菌实验：在贮藏宽皮柑橘的密闭仓库中按照25 mL/m3的用量喷洒药液。待药液干燥后，小块橘皮组织被分离，置于2%的水琼脂培养皿中央。在橘皮组织上同一表面进行桔青霉孢子悬浮液定量接种，每个处理接种50 µL。28℃条件下避光培养16 h。用透明胶带收集孢子，将胶带放置于载玻片上，添加0.1mL乳酸和甘油（乳酸：甘油：水=1:2:1，V:V:V），100倍显微镜下计算所有孢子和发芽分生孢子。发芽孢子抑制率计算工艺：IR%=(药物未处理组的分生孢子发芽率-药物处理组的分生孢子发芽率)/药物未处理组的分生孢子发芽率。

Claims (4)

1.紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取紫苏茎、叶或/和花，用乙醇作为提取溶剂，40-45℃下超声提取30-60min，过滤，得到紫苏提取液；
（2）取环糊精溶解在水中，制成质量浓度为8%-15%的环糊精混悬液；
（3）将步骤（2）所得环糊精混悬液与司盘-80以质量比4-6:1混合，形成双油相纯化系统液，并在搅拌条件下加入步骤（1）所得紫苏提取液，双油相纯化系统液与紫苏提取液的质量比为1:0.8-1.2，搅拌均匀；
（4）将经步骤（3）处理的混合液过滤分离出环糊精，然后静置分层，将两相分离；向环糊精中加入乙醇充分搅拌30-60min，释放囊心，得到紫苏精油a；
（5）取步骤（4）所得两相层上层，减压蒸馏除去乙醇和司盘-80，得紫苏精油b；
（6）将紫苏精油a和紫苏精油b混合，得紫苏精油c，加入相当于紫苏精油c体积1/6-1/4的吐温-80，不断搅拌并充分溶解后，再加入相当于吐温-80体积8-10倍的无菌水，并充分拌匀后，获得紫苏精油产品，备用；
（7）取步骤（6）所得紫苏精油产品，加入质量浓度为10%的吐温-80无菌水溶液，稀释，充分混匀，即得紫苏精油抑菌剂；
（8）使用方法：密闭贮存空间内喷洒使用。
2.根据权利要求1所述的紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，其特征在于，步骤（1）中，超声提取的功率为140-150W，频率40-42kHz。
3.根据权利要求1或2所述的紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，其特征在于，步骤（7）中，将紫苏精油产品稀释100-400倍。
4.根据权利要求1或2所述的紫苏精油在柑橘常温贮存过程中的应用方法，其特征在于，步骤（8）中，按照25-30mL/m3的用量对贮存空间进行喷洒。
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