BR112014004620B1 - uso do ‘peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária’, composição de vacina e combinação de vacina - Google Patents
uso do ‘peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária’, composição de vacina e combinação de vacina Download PDFInfo
- Publication number
- BR112014004620B1 BR112014004620B1 BR112014004620-4A BR112014004620A BR112014004620B1 BR 112014004620 B1 BR112014004620 B1 BR 112014004620B1 BR 112014004620 A BR112014004620 A BR 112014004620A BR 112014004620 B1 BR112014004620 B1 BR 112014004620B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- pacap
- fish
- vaccine
- fact
- group
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 58
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 title claims abstract description 12
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 title claims abstract description 12
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 30
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 8
- 244000078703 ectoparasite Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 74
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 17
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 5
- 235000014105 formulated food Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 5
- 101150060255 MZB1 gene Proteins 0.000 abstract description 4
- 101100462550 Mus musculus Adcyap1 gene Proteins 0.000 abstract description 4
- 229940126513 cyclase activator Drugs 0.000 abstract 2
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 88
- 102000002808 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Human genes 0.000 description 24
- 108010004684 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Proteins 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 17
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 14
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 13
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 11
- 241000277275 Oncorhynchus mykiss Species 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 10
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 9
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 9
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 9
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 9
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 9
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 8
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 7
- 241000710921 Infectious pancreatic necrosis virus Species 0.000 description 7
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 7
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 7
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 7
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 6
- 241000711825 Viral hemorrhagic septicemia virus Species 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 5
- 241000248482 Ichthyophthirius multifiliis Species 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 5
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 5
- 241000721191 Clarias gariepinus Species 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 4
- 241000252498 Ictalurus punctatus Species 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 102000008482 12E7 Antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010020567 12E7 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 241001611004 Caligus rogercresseyi Species 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 3
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 3
- 241000277289 Salmo salar Species 0.000 description 3
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 3
- 102000055135 Vasoactive Intestinal Peptide Human genes 0.000 description 3
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 3
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 241000546112 Infectious salmon anemia virus Species 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 101900220844 Viral hemorrhagic septicemia virus Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XULKGRJEOPRYTO-UHFFFAOYSA-N vip-pacap Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C)C(=O)NC(C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(N)CC=1N=CNC=1)C(C)C)C(C)O)CC1=CC=C(O)C=C1 XULKGRJEOPRYTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQNRVGJCPCNMKT-LFVJCYFKSA-N 2-[(e)-[[2-(4-benzylpiperazin-1-ium-1-yl)acetyl]hydrazinylidene]methyl]-6-prop-2-enylphenolate Chemical compound [O-]C1=C(CC=C)C=CC=C1\C=N\NC(=O)C[NH+]1CCN(CC=2C=CC=CC=2)CC1 YQNRVGJCPCNMKT-LFVJCYFKSA-N 0.000 description 1
- 208000009663 Acute Necrotizing Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 244000293323 Cosmos caudatus Species 0.000 description 1
- 241000252231 Cyprinus Species 0.000 description 1
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 101000838335 Homo sapiens Dual specificity protein phosphatase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001025337 Homo sapiens High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 1
- 101001080401 Homo sapiens Proteasome assembly chaperone 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229960005552 PAC-1 Drugs 0.000 description 1
- 108020000631 PAC1 receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010058096 Pancreatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 102100027583 Proteasome assembly chaperone 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 102000005737 Type I Pituitary Adenylate Cyclase-Activating Polypeptide Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006851 antioxidant defense Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010211 hemagglutination inhibition (HI) assay Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002260 hypophysiotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003076 neurotropic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- UFTCZKMBJOPXDM-XXFCQBPRSA-N pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CN=CN1 UFTCZKMBJOPXDM-XXFCQBPRSA-N 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0003—Invertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/04—Chelating agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/10011—Birnaviridae
- C12N2720/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
uso do peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária, composição de vacina e combinação de vacina a presente invenção se relaciona com o uso do peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária (pacap) como adjuvante molecular para vacinas. entre outras aplicações, ditas vacinas podem ser empregadas na proteção contra agentes infecciosos, tais como vírus, bactérias e ectoparasitas que afetam os mamíferos, as aves e os organismos aquáticos. o pacap, combinado com um antígeno particular, demonstra sua efetividade como adjuvante ao aumentar a resposta imunológica do hospedeiro contra dito antígeno. este tipo de resposta pode ser observada quando as composições ou combinações de vacinas que compreendem pacap são administradas por via oral, injeção, ou por banhos de imersão no caso dos organismos aquáticos.
Description
“USO DO ‘PEPTÍDEO ATIVADOR DA ADENILATO CICLASE DE PITUITÁRIA', COMPOSIÇÃO DE VACINA E COMBINAÇÃO DE VACINA”
Campo da técnica [0001] A presente invenção se relaciona com o campo da medicina, a biologia molecular e a imunologia, especificamente, com o desenvolvimento das vacinas e de adjuvantes para as mesmas. Em particular, a presente invenção revela o uso do peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária (PACAP) como adjuvante molecular para vacinas, as quais são empregadas em estratégias de imunização.
Estado da técnica anterior [0002] O objetivo fundamental da vacinação é a indução de uma resposta imune específica e efetiva contra um patógeno, que produza a proteção contra uma infecção e/ou contra uma doença e que resulte em sua erradicação. O conceito de que a resposta imune contra um determinado antígeno pode ser melhorada pela adição de determinados compostos na formulação de vacina foi demonstrado há aproximadamente 100 anos, quando os sais de alumínio foram introduzidos nas formulações e foram denominados adjuvantes (G. Leroux-Roels (20 0) Vaccine 28S C25-C36).
[0003] As vacinas tradicionais consistem em micro-organismos patógenos inativados ou atenuados, ou em toxinas derivadas destes microorganismos. Apesar de que o uso de micro-organismos patógenos inativados ou atenuados apresenta uma elevada imunogenicidade, atualmente é pouco atrativo na vacinologia, pela alta toxicidade que apresentam estas preparações. Portanto, existe um interesse crescente nos adjuvantes nas investigações relacionadas com o desenvolvimento de novas gerações de vacinas baseadas em subunidades proteicas recombinantes, peptídeos sintéticos e ácido desoxirribonucleico (DNA) plasmídico. Estas novas variantes, ainda que menos tóxicas, são em sua maioria menos imunogênicas
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 8/34 / 24 quando são administradas sem um adjuvante imunoestimulador. Esta é a razão pela qual, nos últimos anos, incrementou-se a necessidade de obter adjuvantes seguros e mais potentes (Saenz et al. (20 0) Vaccine 28 (47): 75567562).
[0004] Ainda que o uso dos adjuvantes seja bem conhecido, a maneira pela qual estes atuam é menos clara. Considera-se que, de maneira geral, estes últimos incrementam a eficácia das vacinas através de vários mecanismos que incluem: 1) o incremento do processamento e apresentação do antígeno pelas células dendríticas, 2) a indução de um sinal de perigo mediante as vias de sinalização mediadas pelos receptores que reconhecem os padrões associados a patógenos, como os receptores tipo Toll e 3) mediante a ativação de um sinal coestimulador que ativa os linfócitos. Estes mecanismos são desencadeados através da indução de citoquinas e a sobrerregulação da expressão dos sinais coestimuladores apropriados (Secombes (2010) Fish & Shellfish Immunology, 409-416).
[0005] Como adjuvantes foram estudadas várias moléculas endógenas e proteínas (Ying e Kwang (2000) Fish & Shellfish Immunology 10, 375-378; Lingnau et al. (2007) Expert Rev Vaccines 6 (5): 741-6; Zhang et al. (2010) Vaccine 28: 5 14-5127), e foi demonstrado que alguns peptídeos com propriedades imunoestimulantes podem atuar como adjuvantes in vivo, ao estimular a resposta imune de antígenos de natureza peptídica e proteica (Saenz et al. (2010) Vaccine 28 (47): 7556-7562). O PACAP pertence à superfamília da secretina/glucagon/peptídeo intestinal vasoativo (Miyata et al (1989) Biochem Biophys Res Commun 164: 567-574). Ele é um neuropeptídio multifuncional, que desempenha importantes funções como fator hipofisiotrópico e neurotrópico, como neurotransmissor, neuromodulador e vasodilatador nos mamíferos (Arimura A. (1998) Japanese Journal of Physiology 48: 301-31). Ademais, foi demonstrada sua função na regulação da divisão celular, a diferenciação e a morte celular (Sherwood et
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 9/34 / 24 al. (2000) Endocrine Review 21: 619-670). Este peptídeo existe biologicamente em duas formas moleculares, de 38 (PACAP38) e de 27 (PACAP27) aminoácidos, respectivamente (Miyata et al. (1990) Biochemical and Biophysical Research Communications 70:643-8). As ações biológicas do PACAP são mediadas pela interação do peptídeo com dois tipos de receptores que pertencem à família dos receptores acoplados à adenilato ciclase: o receptor de tipo I, que é altamente específico para o PACAP e se nomeia como PAC-1, e os receptores de tipo II, que apresentam a mesma afinidade pelo o PACAP que pelo o peptídeo intestinal vasoativo (VIP), e que são conhecidos como VPAC-1 e VPAC-2 (Vaudry et al. (2000) Pharmacol Rev 52: 269-324).
[0006] O PACAP tem uma ampla distribuição nos diferentes tecidos, incluindo aqueles relacionados com o sistema imune, ainda que a presença deste peptídeo e de seus receptores nas células do sistema imune nos mamíferos só foi parcialmente esclarecida (Gaytan et al. (1994) Cell Tissue Res 276:223-7; Abad et al. (2002) NeurolmmunoModulation 10:177-86).
[0007] O PACAP modula a resposta inflamatória, mediante a regulação da interleucina-6 (IL-6) e da interleucina-10 (IL-10) (Martínez et al. (1996) J Immunol 156(11):4128-36; Martínez et al. (1998) J Neuroimmunol 85(2): 155-67); Martínez et al. (1998) J Leukoc Biol 63(5):591-601).
[0008] Nos macrófagos cativados, o PACAP inibe a produção de citoquinas pro-inflamatórias e estimula a produção de citoquinas antiinflamatórias, permitindo desta forma a homeostase do sistema imune. Adicionalmente, sabe-se que o PACAP reduz a expressão das moléculas coestimuladoras B7.1/B7.2 e a subsequente ativação das células T auxiliadoras (Th, do inglês T helper). Por outro lado, nos macrófagos previamente estimulados o PACAP inibe, através de seus receptores PAC-1, a produção de IL-6, suprimindo assim a inflamação (Martínez et al. (1998) J Neuroimmunol 85(2): 155-67; Martínez et al. (1998) J Leukoc Biol. 1998;
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 10/34 / 24
63(5):591-601). A ação inibidora do PACAP sobre a transcrição da IL-6 ante uma intensa estimulação inflamatória ou uma intoxicação ajuda na proteção tissular e na homeostase do sistema imune (Martínez et al. (1998) J Neuroimmunol 85(2): 155-67; Martínez et al. (1998) J Leukoc Biol. 1998 May;63(5):591-601). Em contraste, nos macrófagos não estimulados, o PACAP induz a expressão de B7.2 e promove a diferenciação celular para um fenótipo Th2 (Delgado e Ganea (2001 ) Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 49(2): 101-10). Foi informada a presença de PACAP nos órgãos linfóides de patos (Squillacioti et al. (2005) Anatomía, Histologia, Embryologia. Volume 34, Issue Supplement s1, page 49).
[0009] Foi proposto o uso do PACAP nos mamíferos como agente terapêutico para tratar doenças autoimunes tais como o choque séptico, a artrite reumatóide e a doença de Crohn (Gomariz et al. (2006) Ann. N.Y. Acad. Sci. 1070: 51-74). Sabe-se que nas doenças autoimunes existe uma resposta imune descontrolada contra sustâncias e tecidos próprios dos organismos. Neste sentido, o PACAP previne a inflamação em modelos animais de doenças autoimunes mediante um balanço adequado de citoquinas e quimioquinas e seus receptores, através do recrutamento de células do sistema imune e mediante a regulação da geração e da ativação de células Th1 e das citoquinas que estas células secretam.
[00010] Além disso, sabe-se que moléculas envolvidas na homeostase do sistema imune tais como os receptores tipo Toll são essenciais para a ativação da resposta imune inata, o que potencializa a resposta imune adaptativa. Todavia, este tipo de resposta pode conduzir à patogênese da inflamação aguda e/ou crônica, a autoimunidade e ao câncer (Gomariz et al. (2010) Current Pharmaceutical Design 16: 1063-1080). Neste sentido, sabe-se que o sistema VIP-PACAP intervêm na regulação da expressão dos genes que codificam estes receptores tipo Toll (Gomariz et al. (2006) Ann. N.Y. Acad. Sci. 1070: 51-74), podendo provocar ambos peptídeos desordens nas vias de
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 11/34 / 24 regulação da produção destes receptores.
[00011] O PACAP atenua os níveis circulantes e inibe a liberação de citoquinas mediada pela molécula endógena HMGB1 (do inglês, high mobility group box 1) (Tang et al. (2008) International Immunopharmacology 8(12): 1646-1651). Sabe-se que a molécula HMGB1 e os peptídeos derivados da mesma são capazes de atuar como adjuvantes ao aumentar a resposta imune contra antígenos de natureza peptídica e proteica (Saenz et al. (2010) Vaccine 28 (47): 7556-7562).
[00012] O conhecimento sobre a função do PACAP na modulação do sistema imune nos peixes se limita a estudos realizados pelo presente grupo de trabalho nos quais se demonstra que a administração do PACAP de Ciarías gariepinus recombinante, mediante banhos de imersão ou injeção, não só promove o crescimento quanto estimula parâmetros da imunidade inata (lisozima, metabólitos derivados da atividade do óxido nítrico e defesas antioxidantes) e imunidade adquirida (IgM) em larvas e em juvenis dos peixes (Carpió et al. (2008) Fish and Shellfish Immunology 25:439-45; Lugo et al. (2010) Fish and Shellfish Immunology 29:513-520). Estas propriedades do peptídeo se revelaram no pedido de patente Neuropéptidos para el cultivo de organismos acuáticos, com número de publicação internacional WO2007/059714.
[00013] Na atualidade mantém-se o interesse na identificação de compostos que possam ser empregados como adjuvantes seguros e mais potentes, e que possam ser incorporados nas vacinas existentes e nas que se encontram em desenvolvimento, tanto no campo da medicina humana como na veterinária.
Explicação da invenção [00014] A presente invenção resolve o problema acima mencionado, ao prover uma nova alternativa de adjuvante capaz de potenciar fortemente a resposta imune para um antígeno administrado conjuntamente e portanto,
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 12/34 / 24 constituir um adjuvante altamente eficaz. É um objeto da presente invenção o uso do peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária (PACAP) como adjuvante molecular de antígenos que se encontram presentes em vacinas, as quais são empregadas em diferentes estratégias de imunização. Em uma realização da invenção ditas vacinas, que compreendem PACAP como adjuvante, são desenhadas para a imunização contra agentes infecciosos. Estes agentes infecciosos podem ser vírus, bactérias e ectoparasitas, entre outros. Em uma realização particular, ditos agentes infecciosos afetam mamíferos, aves e peixes.
[00015] O termo peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária (PACAP), como se utiliza na presente invenção, inclui esta molécula em qualquer de suas variantes (PACAP27 ou PACAP38), seja isolada de sua fonte natural, de origem sintética ou produzida mediante a tecnologia do DNA recombinante; e abarca seu emprego como peptídeo ou em forma de ácidos nucleicos.
[00016] No contexto desta invenção o termo adjuvante molecular se refere a qualquer molécula de natureza proteica capaz de modular a resposta imune contra um antígeno de vacina, produzindo um incremento da mesma.
[00017] Não existem investigações até o presente que demonstrem o uso do PACAP como adjuvante molecular. Como se disse anteriormente, foi proposto o uso do peptídeo nos mamíferos como agente terapêutico para tratar doenças autoimunes tais como o choque séptico, a artrite reumatóide e a doença de Crohn (Gomariz et al. (2006) Ann. N.Y. Acad. Sci. 1070: 51-74). Neste sentido, o PACAP previne a inflamação em modelos animais de doenças autoimunes mediante um balanço adequado de citoquinas e quimioquinas e seus receptores, através do recrutamento de células do sistema imune e mediante a regulação da geração e da ativação de células Th1 e das citoquinas que estas células secretam. Tendo em conta estas constatações, resulta inesperado o efeito encontrado como parte dos estudos da requerente
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 13/34 / 24 que demonstram que a administração do PACAP em combinação com um antígeno incrementa a resposta imunitária contra dito antígeno, mediante a estimulação de citoquinas pro-estimulatórias e do aumento de outros elementos da resposta imune humoral.
[00018] Por outro lado, sabe-se que o sistema VIP-PACAP intervém na regulação da expressão dos genes que codificam os receptores tipo Toll (Gomariz et al. (2006) Ann. N.Y. Acad. Sci. 1070: 51-74), podendo provocar ambos peptídeos desordens nas vias de regulação da produção destes receptores, o que faz que seu uso como adjuvante para vacinas não seja óbvio. Outro elemento contraposto ao novo uso do PACAP, revelado nesta invenção, é a demonstração de que este peptídeo atenua os níveis circulantes e inibe a liberação de citoquinas mediada pela molécula endógena HMGB1 (Tang et al. (2008) International Immunopharmacology 8(12): 1646-1651 ).
[00019] Na presente invenção demonstra-se pela primeira vez, que o incremento na resposta imune específica contra o antígeno de vacina que se coadministra com o PACAP, é observado tanto ao nível da resposta humoral como a nível de resposta celular.
[00020] É também objeto da presente invenção uma composição de vacina que compreende o peptídeo PACAP como adjuvante, pelo menos um antígeno de interesse de vacina, e veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Esta composição de vacina que contém o PACAP como adjuvante e pelo menos um antígeno de interesse provoca uma resposta imunológica contra o antígeno ou antígenos de interesse, local ou sistêmica. As composições de vacinas ou vacinas, da presente invenção, podem estar baseadas, por exemplo, em proteínas recombinantes, cepas microbianas atenuadas ou ácidos nucleicos. Em uma materialização da invenção ditas composições de vacinas se administram pela via oral, por injeção, ou por banhos de imersão.
[00021] No contexto da invenção, em ditas composições de vacinas, o
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 14/34 / 24
PACAP se administra como peptídeo obtido por isolamento de sua fonte natural, de forma sintética, ou mediante a tecnologia do DNA recombinante. Também pode ser empregado em forma de ácidos nucleicos.
[00022] Em diferentes materializações da presente invenção as vacinas que compreendem PACAP em combinação com vários antígenos se administram a mamíferos, aves e peixes, demonstrando-se por primeira vez um efeito adjuvante para o PACAP. Inesperadamente, se observou que a administração do neuropeptídeo PACAP combinado com um antígeno incrementa os níveis de anticorpos específicos contra dito antígeno em mamíferos, aves e peixes. Adicionalmente, se demonstrou pela primeira vez in vitro que a administração do PACAP incrementa significativamente os transcritos de interleucina 1 beta (IL 1 β) e interleucina 15 (IL15) em leucócitos de peixes.
[00023] Em diferentes realizações da presente invenção, que revela composições ou combinações de vacinas que compreendem o PACAP como adjuvante, utiliza-se diversos antígenos, tais como ovo albumina (OVA), a glicoproteína E2 da envoltura do vírus da Peste Porcina Clássica (VPPC), a hemaglutinina (HA) do vírus da influenza aviária, o polipeptídeo my32 de Caligus rogercresseyi, células inativadas de Aeromonas hydrophila, a poliproteína de 106 kDa (NH2-VP2-VP4VP3-COOH) do vírus da necrose pancreática infecciosa (do inglês: infectious pancreatic necrosis vírus, abreviado IPNV), a glicoproteína G do vírus da septicemia hemorrágica viral (do inglês: viral hemorrhagic septicemia vírus, abreviado VHSV) e o parasita ciliado Ichthyophthirius multifiliis.
[00024] Em uma realização particular da invenção, nas composições de vacinas, se caracterizam porque o PACAP se aplica em uma concentração de PACAP é aplicado como alimento formulado, em uma concentração de 50 750 pg/kg de alimento. Em uma segunda concentração de 0.1-10 pg por grama do peso corporal PACAP é aplicado por injeção. Em outra realizaçãoda
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 15/34 / 24 invenção, PACAP é aplicado em organismos aquáticos mediante banhos de imersão, em uma concentração de 50-1000 gg por litro de água.
[00025] Em outra realização da invenção, os antígenos e o adjuvante PACAP podem ser parte de uma combinação de vacina cujos elementos se administram de forma simultânea, separada ou sequencial no curso de um mesmo protocolo de imunização. Em uma realização particular da invenção, a combinação se aplica na prevenção de infecções virales, bacterianas e doenças parasitárias. Para essa combinação de vacina, PACAp e o antígeno, ou antígenos, são administrados oralmente, por injeção ou por banhos de imersão.
[00026] Em uma realização particular, o PACAP se aplica como alimento formulado, a uma concentração de entre 50 e 750 pg/kg de ração. Em uma segunda realização da invenção, o PACAP se aplica por injeção, em uma concentração de entre 0,1 e 10 gg de peptídeo por grama do peso corporal. Em outra realização da invenção, o PACAP se aplica a os peixes por banhos de imersão, em uma concentração de 50-1000 gg de PACAP por litro de água.
[00027] Outro aspecto desta invenção é um método para aumentar a resposta imune contra um antígeno de vacina em que se aplica uma composição de vacina que compreende o peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária (PACAP) como adjuvante de dito antígeno. De acordo com o método revelado na invenção, o PACAP como adjuvante e o antígeno se podem administrar de forma simultânea, separada ou sequencial no curso de um mesmo esquema de imunização. O PACAP se aplica como adjuvante no método da invenção como peptídeo que ha sido obtido por isolamento de sua fonte natural, por sínteses química ou mediante a tecnologia do DNA recombinante. Também a invenção compreende um método donde o PACAP que se aplica como adjuvante se administra em forma de ácidos nucleicos. De acordo ao método da invenção, o incremento na resposta imune, específica
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 16/34 / 24 contra o antígeno de vacina de interesse, se observa tanto a nível da resposta humoral como a nível de resposta celular.
[00028] Como demonstrado em várias materializações da invenção, o aprimoramento ou aumento na resposta imune contra o antígeno de interesse se reverte em maiores níveis de proteção frente a diversos agentes infecciosos; incluindo entidades virais, bacterianas e ectoparasitas.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [00029] Figura 1. Títulos de imunoglobulinas (IgG) totais (A), lgG1 (B) e lgG2a (C) induzidos pela imunização de ratos com OVA coadministrada com o neuropeptídeo PACAP38. Estabeleceu-se 2 grupos de ensaio, de 6 animais cada um. O Grupo controle negativo (tampão fosfato salino (PBS)/OVA) foi inoculado por via intraperitoneal, a os dias 0 e 7 com uma dose de 6 g de OVA em 0,2 mL de PBS. O Grupo que ademais recebeu PACAP38 (PBS/OVA peptídeo) foi inoculado por via intraperitoneal, nos dias 0 e 7 com uma dose de 6 g de OVA + 0,5 de PACAP38 em 0,2 mL de PBS. Letras diferentes indicam diferenças estatisticamente significativas.
[00030] Figura 2. Avaliação de resposta celular em porcos vacinados com a composição de vacina baseada em E2-PACAP, medida em linfócitos de porco isolados no dia 5 posterior a vacinação com E2 (grupo 1), E2+PACAP (grupo 2) e placebo (grupo 3). (A) Ensaio de linfoproliferação: Os resultados se expressam em índices de estimulação (IE), definido como a relação entre os contagens por minuto (cpm) do cultivo estimulado e os cpm do cultivo de controle não tratado. A resposta linfoproliferativa com um IE >2 foi considerada como positiva; (B) Resposta de secreção IFN-γ: foi determinada mediante reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. Os valores são expressos como a média aritmética de 2 ΔΔΠ. (**) p<0,01.
[00031] Figura 3. Títulos de inibição da hemaglutinação em frangos imunizados com 20 pg de HA ou HA-PACAP (A). As médias aritméticas dos títulos de anticorpos são expressas como o log2 do valor do recíproco da
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 17/34 / 24 diluição mais alta do soro na qual se produz a inibição da hemaglutinação. Resposta celular nos frangos imunizados (B). A resposta de secreção IFN-γ foi determinada mediante PCR em tempo real. Os valores são expressos como a média aritmética de 2 ΔΔΠ. (**) p<0,01.
[00032] Figura 4. Análise por PCR em tempo real do efeito in vitro do PACAP38 sobre a transcrição da IL 1 β em leucócitos de sangue periférico (A) e de rim anterior (B) de trutas sãs. Avaliou-se o efeito do PACAP38 nas concentrações de 10-10, 10-9 e 10-8 M, nas 48 horas de tratamento. O experimento foi repetido 4 vezes. Os cultivos de leucócitos foram tratados por duplicação e as reações de PCR foram realizadas em triplicata. Os dados são expressos como a média da expressão relativa do gene de interesse (IL 1 β) com respeito ao gene endógeno de expressão constitutiva fator de elongação 1α (EFa) ± desvio padrão da média (DS). O valor * (p<0.05) indica que a expressão relativa do gene de interesse era estatisticamente superior com respeito a sua expressão relativa nos cultivos de leucócitos não tratados (controle negativo).
[00033] Figura 5. Análises de expressão por PCR em tempo real do efeito in vitro do PACAP38 sobre a transcrição da interleucina 15 (IL 15) em leucócitos de sangue periférico (A) e de rim anterior (B) de trutas sãs. Avaliou-se o efeito do PACAP38 nas concentrações de 10-10, 10~9 e 10-8 M, nas 48 horas pós tratamento. O experimento foi repetido 4 vezes. Os cultivos de leucócitos foram tratados por duplicação e as reações de PCR foram realizadas em triplicata. Os dados são expressos como a média da expressão relativa do gene de interesse (IL 15) com respeito ao gene endógeno de expressão de IL 15 relacionado ao fator de alongamento endógeno EF1a ± desvio padrão da média (DS). (*) p<0.05.
[00034] Figura 6. Título de anticorpos aglutinantes contra A. hydrophila em carpa comum. Os valores do eixo e representam a média ± erro padrão. (*) p<0.05, (**) p<0.01. Grupo 1: Injetados com PBS, Grupo 2:
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 18/34 / 24
Injetados com células de A. hydrophila inativadas com formalina, Grupo 3: Injetados com células de A. hydrophila inativadas com formalina e PACAP (1 qg/ peixe).
[00035] Figura 7. Efeito da coadministração por via intramuscular da vacina de DNA (pP-IPNV) a uma dose de 1 qg/peixe, com um plasmideo que apresenta a sequência de DNA complementar do PACAP de Ciarías gariepinus, sob o promotor imediato prematuro do citomegalovírus humano (pCMV-PACAP). A 30 dias pós-vacinação, os peixes foram expostos ao vírus mediante injeção intraperitoneal de 100 ql de IPNV (1x107 Dose infectiva média em cultivo de tecido (TCID50) mL-1 por peixe). A 7 dias pós-infecção, foram sacrificados 10 peixes por grupo e avaliou-se a carga viral em rim anterior por transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) em tempo real. Os valores representam a média ± desvio padrão. As letras diferentes em superescrito representam diferenças estatisticamente significativas entre os grupos. Grupo 1: Peixes injetados com PBS, Grupo 2: Peixes injetados com pP-IPNV, a uma dose de 1 qg/peixe, Grupo 3: Grupo ao que se coadministrou pP-IPNV 1 g/peixe e pCMV-PACAP a uma dose de 0,5 qg de pCMV-PACAP/peixe, Grupo 4: Grupo ao que se coadministrou a vacina pP-IPNV (1 qg/peixe) e pCMV a uma dose de 0,5 qg de pCMV/peixe, Grupo 5: Grupo ao que se coadministrou pP-IPNV a uma dose de 1 qg/peixe e pCMV-PACAP a uma dose de 0,05 qg de pCMV-PACAP/peixe, Grupo 6: Grupo ao que se coadministrou pP-IPNV (1 qg/peixe) e pCMV a uma dose de 0,05 qg de pCMV/peixe.
[00036] Figura 8. Porcentagem de mortalidade acumulada em trutas arcoiris de 10 g imunizadas por via intramuscular com uma vacina de DNA baseada no gene que codifica a glicoproteína G do VHSV (pG-VHSV) e o peptídeo PACAP. A 4 semanas pós-vacinação os peixes foram expostos ao vírus (1x105 TCID50 mL-1 por peixe) mediante banhos de imersão. Avaliou-se a mortalidade acumulada durante 4 semanas post-desafio. Grupo 1: Peixes
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 19/34 / 24 injetados com PBS. Grupo 2: pG-VHSV (0,01 pg/peixe), Grupo 3: pG-VHSV 0,01 pg/peixe e PACAP 0,1 pg PACAP/peixe, Grupo 4: pG-VHSV 0,01 pg/peixe e PACAP 0,5 pg de PACAP/peixe.
Exposição detalhada de modos de realização/Exemplos de realização Exemplo 1. Efeito da coimunização da OVA e o PACAP sobre a resposta imune humoral em ratos [00037] Selecionou-se 12 ratos BALB/c fêmeas, com um peso corporal de 20 g, e separou-se em 2 grupos de ensaio, de 6 animais cada um. O Grupo de controle negativo (PBS/OVA) foi inoculado por via intraperitoneal, nos dias 0 e 7 com uma dose de 6 pg de OVA em 0,2 mL de PBS. O Grupo tratado com PACAP38 (PBS/OVA+peptídeo) foi inoculado por via intraperitoneal (IP), nos dias 0 e 7 com uma dose de 6 pg de OVA + 0,5 pg de PACAP38 em 0,2 mL de PBS. No dia 15 do protocolo de imunização, extraiu-se sangue dos animais e avaliou-se os títulos de IgG totais, lgG1 e lgG2a.
[00038] Na Figura 1A, B e C apresentam-se os títulos de IgG totais, lgG1 e lgG2a, respectivamente, induzidos pela imunização de ratos com OVA coadministrada com o PACAP38. Os animais do grupo PBS/OVA+peptídeo mostraram um título de IgG totais específicas a OVA estatisticamente superior ao grupo de controle (Figura 1A). De igual forma, observou-se que os títulos de lgG1 e lgG2a específicos a OVA no grupo imunizado com OVA+PACAP foram significativamente superiores aos observados no grupo imunizado sól com OVA.
Exemplo 2. Avaliação da resposta celular em porcos vacinados com a composição de vacina baseada em E2-PACAP [00039] O antígeno E2 é a glicoproteína majoritária do envoltório do VPPC. Com o objetivo de avaliar a resposta celular em porcos vacinados com a composição de vacina baseada em E2-PACAP, e compará-la com a produzida pelo antígeno E2, selecionou-se 18 porcos sadios, de 20 kg de peso
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 20/34 / 24 média, e sorologicamente negativos ao VPPC, procedentes de uma unidade sem antecedentes da doença e sem vacinar nos 3 anos precedentes. Os porcos foram distribuídos em 3 grupos de 6 animais cada um, com água e ração ad libitum. A cada animal se aplicou a composição de vacina com as seguintes quantidades de antígeno: 25 gg de E2 recombinante (Grupo 1) e 25 gg de E2 coadministrado com similar quantidade de PACAP38 (Grupo 2). Estabeleceu como Grupo 3 um grupo placebo. Os imunógenos foram formulados em uma emulsão de adjuvante oleoso e foram inoculados mediante injeção de 2 ml por via intramuscular (IM Realizou-se uma só imunização. Os animais foram confrontados no dia 8 pós-imunização com o VPPC por via IM (105 dose letal média (DL50) do isolamento Margarita). Realizou-se uma análise diária de signos clínicos e tomou-se amostras de sangue nos dias 3 e 5 para avaliar linfoproliferação e expressão de IFN-γ, como indicadores de resposta celular. Nos animais vacinados com E2-PACAP detectou-se um aumento da resposta dos linfócitos durante o ensaio de proliferação (Fig. 2A) e níveis elevados de IFN-γ no dia 5 (Fig. 2B), em comparação com os outros grupos. Isto demonstra que a coadministração do antígeno E2 com PACAP produz uma resposta imune celular contra o VPPC.
Exemplo 3. Efeito da coimunização em frangos da HA do vírus da influenza aviária (vírus A/VietNam1203/2004) e o PACAP sobre a resposta imune humoral e celular.
[00040] Para a imunização utilizou-se frangos Leghorn brancos, de 3 semanas de idade. Distribuiu-se 10 frangos por grupo experimental. Estabeleceu-se 3 grupos experimentais:
Grupo 1: 20 gg de HA
Grupo 2: 20 gg de HA+ 0,5 gg de PACAP27
Grupo 3: 20 gg de soroalbumina bovina [00041] A HA foi obtida por via recombinante, expressa em células de mamíferos. As distintas formulações foram formuladas em Montanide 888 e
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 21/34 / 24 foram administrdas em um volume final de 0,5 mL por via subcutânea. Os animais foram se reimunizados no dia 28 pós-imunização. Amostras de sangue foram recolhidas nos dias 0, 14, 28, 35, 42 e 49, para obter os soros necessários para a detecção de anticorpos protetores, mediante um ensaio de inibição da hemaglutinação, e para a extração de leucócitos, com o objetivo de avaliar a resposta celular produzida pelas vacinas in vitro.
[00042] Os resultados mostraram que os frangos imunizados com HAPACAP mostraram uma resposta humoral superior aos frangos imunizados com HA, a partir do dia 35, posterior à administração da dose de reimunização (Fig. 3A). A resposta celular, medida pela estimulação de IFN-γ, mostrou um incremento no grupo tratado com HA-PACAP em comparação aos grupos imunizados com HA ou o grupo de controle (Fig. 3B).
Exemplo 4. Efeito do PACAP sobre a expressão da ILI-β e IL15 em leucócitos de sangue periférico e de rim anterior de truta arcoiris (Oncorhynchus mykiss} sãs.
[00043] Utilizou-se juvenis de truta arcoiris (O. mykiss), de aproximadamente 50 gramas de peso, livres de VHSV, IPNV e de vírus da anemia infecciosa do salmão (ISAV). Os peixes (n=5) foram anestesiados com o sal do ácido metanossulfônico (Sigma, USA) e deles se extraiu assepticamente, primeiro sangue periférico da veia caudal e, posteriormente, o rim anterior. Isolou-se leucócitos do sangue periférico e do rim anterior a partir de 5 trutas, de forma independente, seguindo o método descrito por Graham e Secombes (Graham e Secombes (1998) Immunology 65:293-7).
[00044] As células foram ressuspensas em meio L-15 com 5% de soro fetal bovino, a uma concentração de 5x106 células por mL, e foram dispensadas em placas de 24 poços a 1 mL por poço. Os leucócitos foram tratados com 3 concentrações de PACAP38 de C. gariepinus, obtido por síntese química (10-10 M, 10-9 M e 10-8 M), por duplicação, e utilizou-se como controle negativo uma suspensão de leucócitos não tratados dispensados por
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 22/34 / 24 duplicação.
[00045] Os níveis de IL1 β e IL 5 foram avaliadas 48 horas depois dos tratamentos. Para isso, purificou-se ácido ribonucleico (RNA) total dos cultivos de leucócitos controles e os tratados com PACAP, mediante o método descrito por Chomczynski e Sacchi (Chomczynski e Sacchi (1987) Anal. Biochem. 162:156-9).
[00046] Tendo em conta que os iniciadores para amplificar IL1 β e IL15 não discriminam entre DNA complementar (DNAc) e DNA genômico, tratou-se os RNA total purificados a partir dos diferentes tecidos com uma nuclease de DNA, especificamente com a RQ1 RNase-free DNAse (Promega).
[00047] Para a síntese dos DNAc utilizou-se um jogo comercial de reativos que emprega a transcriptase reversa SuperScript III (Invitrogen). Finalmente, para as reações de PCR quantitativas (qPCR) utilizou-se uma mescla de PCR de origem comercial: Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystem). Os resultados das qPCR foram normalizados contra um gene endógeno de expressão constitutiva, especificamente o EF 1a, e realizouse por triplicata. Os resultados foram expressos como 2 AC1, onde o ACt equivale ao resto do valor de ciclo umbral (Ct) do gene avaliado menos o valor de Ct do gene normalizador (EF 1α).
[00048] Os níveis da proteína IL 1β aumentaram depois de 48 horas de tratamento nos cultivos de leucócitos de sangue periférico tratados com 10-10 M de PACAP38. Na dose de 10-9 M observou-se também um efeito estimulador de PACAP38 sobre a transcrição deste gene, com respeito ao controle negativo, porém os níveis de expressão detectados foram inferiores aos níveis obtidos com a dose de 10-10 M. Estes resultados demonstram um efeito positivo de PACAP38 sobre a transcrição da IL1 β, a concentrações baixas (na faixa de 10-9 -10-10 M) (Figura 4A). Em leucócitos de rim anterior, o efeito do PACAP 38 sobre a transcrição da IL1 β é mais moderado que em
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 23/34 / 24 leucócitos de sangue periférico, observando-se um efeito estimulador na dose de 10-9 M e 10-8 M (Figura 4B).
[00049] Adicionalmente, observou-se um efeito estimulador do PACAP38 sobre a expressão da IL15 nos cultivos de leucócitos estimulados com PACAP38 nas dose de 10-10 e 10~9 M. Obteve-se os maiores valores de expressão na dose de 10-9 M (Figura 5A). Em leucócitos de rim anterior, igualmente ao observado com a expressão da IL 1 β, o efeito foi mais moderado observando-se níveis de expressão da IL15 estatisticamente superiores ao controle negativo, na dose intermedia de 10-9 M (Figura 5B).
[00050] Exemplo 5. Ensaio de desafio controlado, com infestação por Caligus rogercresseyi em salmões (Salmo salar) previamente imunizados por via intraperitoneal com o antígeno my32, e my32 coadministrado com PACAP.
[00051] A proteína my32 foi obtida de forma recombinante, no precipitado de ruptura de E. coli. Sabe-se que esta proteína, administrada por via intraperitoneal (IP), produzia 57% de inibição da infestação na segunda geração de parasitos em um ensaio de desafio com C. rogercresseyi em S. salar (Carpió et al. (20 1 ) Vaccine. 201 1 29(15):2810-20).
[00052] Para demonstrar o efeito adjuvante do PACAP sobre esta proteína, concebeu-se um experimento de vacinação e desafio em S. salar, em condições controladas, em que se estabeceu 6 grupos experimentais de 25 animais (80 g de peso médio) cada um:
Grupo 1: Injetados IP com PBS
Grupo 2: Injetados IP com PACAP38 a uma dose de 1 pg/peixe
Grupo 3: Injetados IP com my32 a uma dose de 3 pg/grama peso corporal (gpc)
Grupo 4: Coadministração mediante injeção IP de my32 a uma dose de 3 pg/gpc e PACAP a uma dose de 1 pg/peixe
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 24/34 / 24
Grupo 5: Peixes injetados IP com my32, a uma dose de 3 pg/gpc, e alimentados com ração formulado com 250 pg de PACAP/ kg de ração diariamente, durante uma semana pre e pos-imunização com my32. [00053] Durante o curso do experimento os peixes foram alimentados duas vezes ao dia com uma fórmula comercial balanceada não medicada, à razão de 1 % de seu peso corporal, com exceção do grupo 5, a que administrou uma semana pré- e pós-imunização a mesma fórmula comercial formulada com PACAP, segundo descrito por Adelmann et al. ((2008) Vaccine 26, 837-844) para a administração oral de uma cepa atenuada do vírus VHSV.
[00054] Depois de 500 unidades térmicas arbitrárias, os peixes se adaptaram à a água de mar por duas semanas. Posteriormente, adicionou-se a cada tanque 2000 ± 200 copepoditos. Os peixes foram mantidos sem fluxo de água, na obscuridade e nas condições de temperatura, salinidade e oxígênio sugeridas por Stone et al. (Dis Aquat Organ, 2000, 41: 141-149) por 24 dias. A viragem e a filtração de água foram realizadas de forma manual cada 48 horas. Após 24 dias, anestesiou-se e sacrificou-se os peixes, e realizou-se a contagem de parasitas em um estereomicroscópio. Os resultados que são mostrados na Tabela 1 evidenciam uma redução nos níveis de infestação nos grupos tratados com PACAP, my32 e PACAP+my32. A maior redução ocorreu nos grupos 4 e 5, o que evidencia o efeito adjuvante do PACAP sobre o antígeno coadministrado.
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 25/34 / 24
Tabela 1. Contagem de parasitas a 24 dias pós-desafio em experimentos de vacinação e desafio com C. rogrecresseyi
| Grupos experimentais | Número de parasitas/peixe | Inibição da infestação |
| PBS | 37 + 3a | - |
| PACAP | 29 +5b | 22 |
| my32 | 7 + 8c | 55 |
| PACAP-IP +my32-IP | 8+3d | 79 |
| PACAP-oral +my32-IP | 5+2e | 86 |
As letras indicam diferenças estatisticamente significativas A porcentagem de inibição da infestação se calcula como 1 (número de parasitas no grupo experimental/número de parasitas no controle de PBS)*100
Exemplo 6. Efeito adjuvante do PACAP na resposta imune humoral de carpa comum (Cyprinus carpióó versus Aeromonas hydrophila [00055] O experimento foi realizado com carpas (C. carpió) de 40 ± 10 g. Estas foram mantidas em aquários de 600 L a uma temperatura de 28 ± 2°C. Estabeleceu-se 3 grupos experimentais de 10 carpas cada um, nos quais se injetou por via intraperitoneal os seguintes imunógenos:
Grupo 1: PBS
Grupo 2: Células de A. hydrophila inativadas
Grupo 3: Células de A. hydrophila inativadas e 1 gg de PACAP38 por peixe.
[00056] Os peixes foram injetadas no dia 0 e 14 e coletou-se sangue da veia caudal dos mesmos nos dias 0 e 21. Os resultados mostraram que os títulos de anticorpos aglutinantes eram significativamente maiores no grupo imunizado com a bactéria mais o PACAP em comparação com o grupo imunizado com a bactéria somente (Fig. 6). Estes resultados demonstram o efeito de PACAP como adjuvante molecular em peixes. A preparação das células de A. hydrophila e a determinação dos títulos de anticorpos foram realizadas segundo Yin et al. ((1996) Fish & Shellfish Immunology 6, 57-69). Exemplo 7. Ensaio de desafio controlado, com infestação por A. hydrophila em carpa comum (C. carpió) previamente imunizadas por via
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 26/34 / 24 intraperitoneal com a bactéria inativada e a bactéria inativada coadministrada com PACAP.
[00057] O experimento foi realizado com carpa comum (C. carpió) de 30 ± 5 g. Estas foram mantidas em aquários de 250 L a uma temperatura de 30 ± 2°C. Estabeleceu-se 3 grupos experimentais, de 20 carpas cada um, nos quais se injetou intraperitonealmente:
Grupo 1: PBS
Grupo 2: Células de A. hydrophila inativadas
Grupo 3: Células de A. hydrophila inativadas e 1 pg de PACAP38 por peixe.
[00058] Os peixes foram injetados no dia 0 e 14. No dia 21 realizou-se o desafio mediante a injeção IP da DL50 da bactéria e registrou-se a mortalidade durante 7 dias. Calculou-se a porcentagem relativa de sobrevida (RPS) como:
RPS (%)= (% de mortalidade de controles-% mortalidade de tratados)/ (% de mortalidade de controles) x100 [00059] O resultado foi 65% de RPS no Grupo 2 e 95% no Grupo 3, o que demonstra que a administração do PACAP incrementa a taxa de sobrevida dos peixes vacinados e desafiados contra o patógeno.
Exemplo 8. Efeito da coadministração do PACAP com uma vacina de DNA baseada no gene que codifica a poliproteína de 106 kDa (NH2-VP2VP4VP3-COOH) do IPNV em trutas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) desafiadas experimentalmente com o vírus.
[00060] Realizou-se um experimento para avaliar o efeito da coadministração por via intramuscular do PACAP com uma vacina de DNA baseada no gene que codifica a poliproteína de 106 kDa (NH2-VP2-VP4VP3COOH) do IPNV em trutas arcoíris desafiadas experimentalmente com dito vírus. Formou-se 6 grupos experimentais de 15 peixes cada um (12 + 1 g), e foram mantidos em água a 10-12 °C:
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 27/34 / 24
Grupo 1: Peixes injetados com PBS
Grupo 2: Peixes injetados com a vacina de DNA (pP-IPNV) a uma dose de 1 pg pez
Grupo 3: Grupo ao que se le coinjetou a vacina de DNA (pPIPNV) a uma dose de 1 μο/peixe com um plasmídeo que presenta a sequência de DNAc do PACAP de C. gariepinus, bajo o promotor inmediato temprano do citomegalovírus humano (pCMV-PACAP), a uma dose de 0,5 μ9 de pCMV-PACAP/peixe.
Grupo 4: Grupo em que se coinjetou a vacina pP-IPNV (1 μ9/ρβζ) com um plasmídeo de controle negativo que não porta a sequência de DNA complementar de PACAP sob o promotor CMV (pCMV) a uma dose de 0,5 μ9 de pCMV-PACAP/peixe.
Grupo 5: Grupo no que se coinjetou a vacina de DNA (pPIPNV) a uma dose de 1 μ9/ρβζ com um plasmídeo que apresenta a sequência de DNA complementar do PACAP de Ciarías gariepinus sob o promotor imediato prematuro do citomegalovírus humano (pCMV-PACAP) a uma dose de 0,05 pg de pCMV- PACAP/peixe.
Grupo 6: Grupo em que se coinjetou a vacina pP-IPNV (1 pg/peixe) com um plasmídeo de controle negativo que não porta a sequência de DNA complementar de PACAP sob o promotor CMV (pCMV) a uma dose de 0,05 pg de pCMV-PACAP/peixe.
[00061] A 30 dias de pós-vacinação, os peixes foram expostos ao vírus, mediante injeção intraperitoneal de 100 pl de IPNV (1x107 TCID50 mL1 por peixe). A 7 dias de pós-infecção, 10 peixes por grupo foram sacrificados e se avaliou a carga viral em rim anterior.
[00062] Para determinar a carga viral, isolou-se o RNA das amostras individuais e realizou-se a reação de transcrição reversa a partir de 1 pg de RNA. A detecção da expressão do gene VP1 foi avaliada mediante PCR em tempo real. Os resultados são mostrados na Figura 7.
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 28/34 / 24 [00063] A coadministração de pP-IPNV e pCMV-PACAP diminuiu significativamente a carga viral, em comparação com o grupo em que se coinjetou pP-IPNV e os vetores vazios. Não houve diferenças entre as doses de pCMV-PACAP ensaiadas.
Exemplo 9. Efeito da coadministração do peptídeo PACAP com uma vacina de DNA baseada no gene que codifica a glicoproteína G do VHSV em trutas arcoíris (O. mykiss) desafiadas experimentalmente com o vírus.
[00064] Realizou-se um experimento para avaliar o efeito da coadministração por via intramuscular do PACAP de Ciarias gariepinus com uma vacina de DNA baseada no gene que codifica a glicoproteína G do VHSV (pG-VHSV) em trutas arcoíris desafiadas experimentalmente com dito vírus. Formou-se 4 grupos experimentais, de 20 peixes cada um (10 ± 2 g), e foram mantidos em água a 10-12°C:
Grupo 1: Peixes injetados com PBS.
Grupo 2: Grupo no qual se injetou a vacina de DNA pGVHSV (0,01 pg/peixe).
Grupo 3: Grupo no que se coinjetou a vacina de DNA pGVHSV a uma dose de 0,01 pg/peixe com o PACAP de C. gariepinus a uma dose de 0,1 pg de PACAP/peixe.
Grupo 4: Grupo no que se coinjetou a vacina de DNA pGVHSV a uma dose de 0,01 pg/peixe com o PACAP de C. gariepinus a uma dose de 0,5 pg de PACAP/peixe. A 4 semanas pós-vacinação os peixes foram expostos ao vírus, mediante banhos de imersão durante 2 h, em água contendo uma dose infectiva de VHSV de (1x105 TCID50 ml-1 por peixe). Avaliou-se a mortalidade acumulada durante 4 semanas pós-desafio e os resultados são mostrados na Figura 8.
[00065] A coadministração do peptídeo com a vacina de DNA reduziu a mortalidade em 15 e 29%, em comparação com a administração da vacina de DNA apenas, para as dose de peptídeo de 0,1 e 0,5 pg de PACAP/peixe,
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 29/34 / 24 respectivamente.
Exemplo 10. Efeito da administração do PACAP após a imunização com terontes do parasita ciliado Ichthyophthirius multifiliis sobre a sobrevida de peixe gato do canal (Ictalurus punctatus) [00066] Realizou-se um experimento para avaliar o efeito da administração do PACAP, posterior à imunização com terontes do parasita ciliado /. multifUiis, sobre a sobrevida do peixe gato do canal (/. punctatus), siguiendo o procedimento de vacinação e desafio proposto por Wang e Dickerson ((2002) Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 9(1), 176-181). Para esto se utilizaron peixes de 12 ± 5 g. Estabeleceu-se 4 grupos experimentais de 25 peixes cada um:
Grupo 1: Peixes imunizados nos dias 1 e 35 com PBS.
Grupo 2: Peixes imunizados no dia 1 com 8000 terontes vivos de I. multifiliis e no dia 35 com 10 000 terontes vivos do parasita.
Grupo 3: Peixes imunizados no dia 1 com 8000 de terontes vivos de I multifiliis e no dia 35 com 10 000 terontes vivos do parasita. A estes peixes também se administrou o PACAP38 mediante 6 banhos de imersão a uma dose de 100 qg de peptídeo/litro de água durante 1 hora, em dias alternados nas duas semanas prévias ao desafio.
Grupo 4: Peixes imunizados no dia 1 com 8000 de terontes vivos de I. multifiliis e no dia 35 com 10 000 terontes vivos do parasita. Estes peixes foram submetidos aos banhos de imersão durante 1 hora porém sem o peptídeo PACAP, mediante um procedimento similar ao Grupo 3.
[00067] Previamente à imunização os peixes foram tratados com formalina para remover os ectoparasitas existentes. Os peixes foram mantidos a 23 ± 2°C, em fluxo continuo de água. No dia 84, os peixes foram desafiados com 15 000 terontes. Os dados da mortalidade foram obtidos durante os 30 dias posteriores ao desafio. Os resultados são mostrados na Tabela 2. Estes demonstram um incremento de 27% na sobrevida dos peixes imunizados e
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 30/34 / 24 tratados de cada vez com o PACAP.
Tabela 2. Sobrevida de I. punctatus imunizados com terontes vivos de I. multifiliis, tratados ou não com PACAP mediante banhos de imersão e desafiados com o parasita.
| Grupos experimentais | Número de peixes desafiados/Número de peixes que sobreviveram | Porcentagem de sobrevida (%) |
| PBS | 25/0 | 0 |
| Terontes vivos | 25/15 | 60 |
| Terontes vivos + PACAPBi | 25/22 | 87 |
| Terontes vivos + Bi | 25/14 | 58 |
ib: Estes peixes foram submetidos a 6 banhos de imersão durante 1 hora, em dias alternados nas duas semanas prévias ao desafio.
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 31/34
Claims (13)
1. Uso do “peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária” (PACAP), caracterizado pelo fato de que é como adjuvante molecular para antígenos de vacinas para a prevenção de doenças causadas por agentes infecciosos em peixe.
2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o PACAP é administrado como peptídeo ou como ácidos nucleicos.
3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o PACAP que é obtido a) por isolamento de sua fonte natural, b) de forma sintética, ou c) mediante a tecnologia do DNA recombinante.
4. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o agente infeccioso é um vírus, uma bactéria ou um ectoparasita.
5. Composição de vacina, caracterizada pelo fato de que compreende o “peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária” (PACAP), pelo menos um antígeno de vacina para a prevenção de doenças causadas por agentes infecciosos em peixe, e veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.
6. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que ela é administrada por via oral, por injeção, ou por banhos de imersão.
7. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o PACAP é administrado como peptídeo obtido a) por isolamento de sua fonte natural, b) de forma sintética, ou c) mediante a tecnologia do DNA recombinante; ou em forma de ácidos nucleicos.
8. Composição de acordo com a reivindicação 6 ou 7. caracterizada pelo fato de que o PACAP é empregado em uma concentração de 50-750 pg/kg de ração se aplicado como alimento formulado, em uma concentração de 0,1-10 pg por grama do peso corporal se aplicado por
Petição 870190081884, de 22/08/2019, pág. 32/34
2 / 2 injeção; ou em uma concentração de 50-1000 pg por litro de água se aplicado mediante banhos de imersão.
9. Combinação de vacina, caracterizada pelo fato de que compreende “o peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária” (PACAP) e pelo menos um antígeno de vacina para a prevenção de doenças causadas por agentes infecciosos em peixe.
10. Combinação de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o PACAP e o antígeno são administrados de forma simultânea, separada ou sequencial no curso de um mesmo esquema de imunização.
11. Combinação de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o PACAP é empregado em uma concentração de 50-750 pg/kg de ração se aplicado como alimento formulado, em uma concentração de 0,1-10 pg por grama do peso corporal se aplicado por injeção; ou em uma concentração de 50- 1000 pg por litro de água se aplicado mediante banhos de imersão.
12. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, caracterizada pelo fato de ser para uso no aumento de uma resposta imune contra um antígeno de vacina.
13. Composição de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que antígeno é administrado de forma simultânea, separada ou sequencial no curso de um mesmo esquema de imunização.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU2011000167A CU24075B1 (es) | 2011-08-26 | 2011-08-26 | Composición vacunal que comprende el péptido activador de la adenilato ciclasa de pituitaria como adyuvante molecular. |
| PCT/CU2012/000004 WO2013029570A1 (es) | 2011-08-26 | 2012-08-24 | Uso del pacap como adyuvante molecular para vacunas |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR112014004620A2 BR112014004620A2 (pt) | 2017-03-21 |
| BR112014004620B1 true BR112014004620B1 (pt) | 2019-10-29 |
Family
ID=47046313
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112014004620-4A BR112014004620B1 (pt) | 2011-08-26 | 2012-08-24 | uso do ‘peptídeo ativador da adenilato ciclase de pituitária’, composição de vacina e combinação de vacina |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9549977B2 (pt) |
| EP (1) | EP2749291B1 (pt) |
| JP (1) | JP6077541B2 (pt) |
| KR (1) | KR101857705B1 (pt) |
| CN (1) | CN103874510A (pt) |
| AU (1) | AU2012303887B2 (pt) |
| BR (1) | BR112014004620B1 (pt) |
| CA (1) | CA2844898C (pt) |
| CL (1) | CL2014000386A1 (pt) |
| CU (1) | CU24075B1 (pt) |
| ES (1) | ES2648337T3 (pt) |
| MX (1) | MX351725B (pt) |
| MY (1) | MY191697A (pt) |
| NO (1) | NO2749291T3 (pt) |
| PH (1) | PH12014500397B1 (pt) |
| PT (1) | PT2749291T (pt) |
| RU (1) | RU2580294C2 (pt) |
| SG (1) | SG11201400215SA (pt) |
| WO (1) | WO2013029570A1 (pt) |
| ZA (1) | ZA201401271B (pt) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190060057A (ko) | 2017-11-24 | 2019-06-03 | 유병희 | 웰빙 무드등 |
| WO2020230869A1 (ja) * | 2019-05-14 | 2020-11-19 | 千寿製薬株式会社 | Ｐａｃａｐペプチド又はｐａｃａｐの安定化ペプチドを含む神経栄養性角膜炎の予防又は治療用組成物 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE65568B1 (en) * | 1990-10-22 | 1995-11-01 | Unilever Plc | Vaccine compositions for fish |
| AU7726600A (en) * | 1999-09-28 | 2001-04-30 | Bayer Corporation | Pituitary adenylate cyclase activating peptide (pacap) receptor 3 (r3) agonists and their pharmacological methods of use |
| GB0427267D0 (en) * | 2004-12-13 | 2005-01-12 | Maria Teresa De Magistris | Peptide adjuvants |
| CU23557A1 (es) * | 2005-11-22 | 2010-07-20 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Neuropéptidos para el cultivo de organismos acuáticos |
| CA2779496A1 (en) * | 2009-11-02 | 2011-05-05 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogs of pitutary adenylate cyclase-activating polypeptide (pacap) and methods for their use |
| CN103255089B (zh) * | 2013-05-03 | 2015-08-05 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一株强毒迟缓爱德华氏菌疫苗株及其应用 |
-
2011
- 2011-08-26 CU CU2011000167A patent/CU24075B1/es active IP Right Grant
-
2012
- 2012-08-24 AU AU2012303887A patent/AU2012303887B2/en not_active Ceased
- 2012-08-24 JP JP2014526385A patent/JP6077541B2/ja active Active
- 2012-08-24 US US14/238,377 patent/US9549977B2/en active Active
- 2012-08-24 ES ES12775123.8T patent/ES2648337T3/es active Active
- 2012-08-24 PH PH1/2014/500397A patent/PH12014500397B1/en unknown
- 2012-08-24 MY MYPI2014700419A patent/MY191697A/en unknown
- 2012-08-24 CN CN201280041829.5A patent/CN103874510A/zh active Pending
- 2012-08-24 SG SG11201400215SA patent/SG11201400215SA/en unknown
- 2012-08-24 WO PCT/CU2012/000004 patent/WO2013029570A1/es active Application Filing
- 2012-08-24 BR BR112014004620-4A patent/BR112014004620B1/pt active IP Right Grant
- 2012-08-24 MX MX2014002214A patent/MX351725B/es active IP Right Grant
- 2012-08-24 RU RU2014111465/15A patent/RU2580294C2/ru active
- 2012-08-24 KR KR1020147006186A patent/KR101857705B1/ko active Active
- 2012-08-24 EP EP12775123.8A patent/EP2749291B1/en active Active
- 2012-08-24 PT PT127751238T patent/PT2749291T/pt unknown
- 2012-08-24 CA CA2844898A patent/CA2844898C/en active Active
- 2012-08-24 NO NO12775123A patent/NO2749291T3/no unknown
-
2014
- 2014-02-14 CL CL2014000386A patent/CL2014000386A1/es unknown
- 2014-02-19 ZA ZA2014/01271A patent/ZA201401271B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103874510A (zh) | 2014-06-18 |
| US20140294889A1 (en) | 2014-10-02 |
| PH12014500397B1 (en) | 2018-09-12 |
| PT2749291T (pt) | 2017-11-24 |
| CA2844898C (en) | 2021-06-22 |
| SG11201400215SA (en) | 2014-09-26 |
| PH12014500397A1 (en) | 2014-04-14 |
| CL2014000386A1 (es) | 2014-07-11 |
| ES2648337T3 (es) | 2018-01-02 |
| JP2014524450A (ja) | 2014-09-22 |
| CU20110167A7 (es) | 2013-06-28 |
| EP2749291B1 (en) | 2017-10-18 |
| US9549977B2 (en) | 2017-01-24 |
| AU2012303887A1 (en) | 2014-03-06 |
| MX2014002214A (es) | 2014-04-30 |
| WO2013029570A1 (es) | 2013-03-07 |
| KR101857705B1 (ko) | 2018-06-20 |
| RU2014111465A (ru) | 2015-10-10 |
| CA2844898A1 (en) | 2013-03-07 |
| AU2012303887B2 (en) | 2017-06-22 |
| CU24075B1 (es) | 2015-01-29 |
| MY191697A (en) | 2022-07-07 |
| EP2749291A1 (en) | 2014-07-02 |
| BR112014004620A2 (pt) | 2017-03-21 |
| NO2749291T3 (pt) | 2018-03-17 |
| ZA201401271B (en) | 2015-04-29 |
| KR20140064847A (ko) | 2014-05-28 |
| RU2580294C2 (ru) | 2016-04-10 |
| MX351725B (es) | 2017-10-25 |
| JP6077541B2 (ja) | 2017-02-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107250353B (zh) | 二价猪流感病毒疫苗 | |
| Chang et al. | Adjuvant activity of fish type I interferon shown in a virus DNA vaccination model | |
| CN113454102A (zh) | 非洲猪瘟疫苗 | |
| ES2632429T3 (es) | Vacunas subunitarias de rotavirus y procedimientos para la fabricación y utilización de las mismas | |
| ES2347566T3 (es) | Inmunomodulador que comprende celulas enteras de bacterias tsukamurella. | |
| ES2648337T3 (es) | Uso del PACAP como adyuvante molecular para vacunas | |
| ES2800033T3 (es) | Una vacuna para usar contra la infección asintomática por Lawsonia en un cerdo | |
| ES2549669T3 (es) | Propiedades de coadyuvancia y potenciación inmunitaria de productos naturales de Onchocerca volvulus | |
| US20220040289A1 (en) | Rabies Composition Comprising Pika Adjuvant | |
| Martín-Martín et al. | Potential of the Escherichia coli LT (R192G/L211A) toxoid as a mucosal adjuvant for rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) | |
| WO2013171548A2 (es) | Peptidos que inducen en peces una respuesta inmune contra copepodos y/o un escudo mucoso, vacunas, usos y métodos para modular la respuesta inmune de un pez y/o inducir la generación de un escudo mucoso | |
| PT1553979E (pt) | Proteína g de ihnv para estimulação imunitária | |
| ES2798282T3 (es) | Una vacuna para usar contra la infección asintomática por Lawsonia en un cerdo | |
| JP5971625B2 (ja) | アジュバント、及び水産用ワクチン | |
| EA009937B1 (ru) | Индукторы монопараиммунитета, основанные на ослабленных вирусах миксомы кролика | |
| EP3037539A1 (en) | Recombinant vaccine against viral hemorrhagic septicemia virus | |
| KR102089655B1 (ko) | 소 코로나바이러스 감염증 예방용 kwd20v-102 주의 약독화 생백신 조성물 | |
| KR20160044764A (ko) | 면역력을 증강시키는 아쥬반트를 포함하는 구제역 백신 조성물 및 이의 제조방법 | |
| El-shahedy et al. | Immunostimulant activity of levamisole to polyvalent FMD vaccine in buffaloes | |
| SIVASANKAR | HOST IMMUNE RESPONSES TO RANAVIRUS INFECTION IN MARINE AND FRESHWATER FISHES | |
| WO2019222864A1 (es) | Composicion inmunoestimulante comprendiendo microbacterias p. salmonis conjugado con derivados de heliotropium filifoliumun y al menos un diluyente; metodo y uso para inmunizar organismos acuaticos | |
| Sawant | DEEMED UNIVERSITY | |
| WO2019095082A1 (es) | Bacteria lactococcus lactis transformada, productora de interferon gamma (ifng) de salmo salar, alimento y composicion que la comprende, para inmunoestimular especies acuicolas | |
| Baqar et al. | Modulation of immune responses to Bacterial vaccine antigens in Mice: Use of Cytokines as oral mucosal Adjuvants | |
| BR122015019697B1 (pt) | composição de vacina para west nile, e uso de plasmídeo com inserções de sequência de dna de vírus west nile na preparação da mesma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B07D | Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette] | ||
| B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
| B07E | Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette] |
Free format text: NOTIFICACAO DE ANUENCIA RELACIONADA COM O ART 229 DA LPI |
|
| B06T | Formal requirements before examination [chapter 6.20 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 24/08/2012, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. (CO) 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 24/08/2012, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS |