BR112012021401B1

BR112012021401B1 - forma de dosagem oral

Info

Publication number: BR112012021401B1
Application number: BR112012021401A
Authority: BR
Inventors: Castelli Cristina
Original assignee: Emisphere Tech Inc
Priority date: 2010-02-24
Filing date: 2011-02-23
Publication date: 2019-12-24
Also published as: TWI590829B; US20110207693A1; CL2012002358A1; JP2015193660A; EP3028709A1; AU2011220867B2; MX2012009914A; RU2012136176A; KR20130026429A; JP2013520511A; JP2017101081A; RU2576511C2; WO2011106378A3; EP3028709B1; CO6602160A2; US20200206247A1; TW201200139A; BR112012021401A2; AU2011220867A1; CA2996757A1

Abstract

forma de dosagem oral métodos para normalizar níveis de vitamina b12 em pacientes com baixa vitamina b12 e métodos para normalizar variabilidade entre sujeitos no tratamento de tais pacientes são descritos. métodos de redução de mma e/ou níveis de homocisteína e composições farmacêuticas úteis para efetuar tais mudanças também são descritos.

Description

FORMA DE DOSAGEM ORAL

Campo da invenção [001] Esta divulgação refere-se geralmente a métodos para normalizar os níveis de vitamina B12 em pacientes com baixa vitamina Bi₂ e a métodos para normalizar a variabilidade entre sujeitos no tratamento de tais pacientes. Esta divulgação refere-se também a métodos de redução de níveis de ácido metil malônico (MMA) e/ou homocisteína e composições farmacêuticas úteis para efetuar tais mudanças.

Fundamentos da invenção [002] A vitamina Bi₂ é importante para o funcionamento normal do cérebro e do sistema nervoso e para a formação do sangue. Ela está envolvida no metabolismo de todas as células do corpo afetando especialmente a síntese e regulação de DNA, mas também a síntese de ácidos graxos e a produção de energia. Seus efeitos não são ainda completamente conhecidos.

[003] A cianocobalamina é uma forma estável e amplamente usada de vitamina Bi₂. A vitamina Bi₂ é excretada na bile e sofre alguma reciclagem entero-hepática. A vitamina B_i2absorvida é transportada através de proteínas de ligação de Bi2 específicas, transcobalamina I e II, para os vários tecidos. O fígado é o principal órgão para armazenamento de vitamina Bi₂.

[004] A deficiência de vitamina Bi₂ ocorre de insuficiência alimentar, a deficiência de Fator Intrínseco, perturbações intestinais, tal como má absorção, gastrectomia, atrofia gástrica, ressecção do íleo e doença inflamatória crônica do intestino. O uso crônico de fármacos, tal como inibidores da bomba de prótons e metformina, também induz a

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2/45 deficiência de vitamina Bi₂. A deficiência de vitamina Bi₂ pode potencialmente causar danos graves e irreversíveis, especialmente para o cérebro e sistema nervoso.

[005] O tratamento tradicional para a deficiência de vitamina B_i2 é através de injeções intramusculares (IM) . Normalmente, nos Estados Unidos, as injeções de cianocobalamina são dadas frequentemente dentro do primeiro mês (por exemplo, 6 a 9 injeções) , seguidas de injeções de manutenção tal como prescritas pelo médico. Após o período inicial do tratamento ou quando ocorre a remissão clínica, o tratamento é continuado por toda a vida, muitas vezes em uma programação mensal. Vários esquemas de tratamento e doses encontram-se descritos na literatura, começando com a dosagem frequente e a transição para a dosagem de manutenção menos frequente. Ver Hvas et al., Haematologica 2006, 137:2481-84.

[006] A cianocobalamina oral também tem sido usada para tratar a deficiência de vitamina B_i2í mas com muitos não apresenta boa resposta. Um estudo foi em pacientes com anemia perniciosa e dois foram em pacientes com má absorção de cobalamina do alimento. Os resultados indicaram que 80 a 90% dos pacientes atingiram níveis séricos normais de B_i2 nos 3 meses de estudos e 95% foram normalizados no estudo de 2,5 anos. As melhorias clínicas foram relatadas em apenas 20 a 30% dos pacientes (Andres et al., Eur J Intern Med 2003, 18:221-26). Um estudo em curto prazo com duração de 1 semana, de 1000 pg/dia de B_i2 oral indicou que os níveis de B_i2aumentaram por um valor médio de 0,23 pg/L (230 pg/ml) em 17 de 20 pacientes idosos (Kaltenbach et al., Ann Med Interne 2003, 154:91-95).

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3/45 [007] Além disso, a capacidade de tratamentos orais para corresponder com B12 parenteral na restauração de forma rápida e confiável ou manutenção de estoques de Bi₂ na maioria ou em todos os pacientes ainda está em questão. Como resultado, o tratamento IM permanece em amplo uso clínico, em algumas regiões, incluindo os Estados Unidos. Uma recente revisão sistemática de estudos de intervenção com Bi₂ oral randomizados controlados analisou as respostas de biomarcadores para a intervenção com B_i2 oral em 8 estudos (Hoey et al., Am J Clin Nutr 2009, 89 (suppl) :1981S-96S) . As respostas de cobalamina, MMA, homocisteína (HC) e de holotranscobalamina foram avaliadas. Verificou-se que as ingestões de B_i2 produziram efeitos altamente variáveis sobre as concentrações de B_i2 no sangue e que a análise do subgrupo de sexo ou idade não conseguiu explicar a variabilidade. Os autores observaram que alguns documentos não relataram informações suficientes para conferir uma imagem clara da resposta clínica. Carmel (Food Nutr Bull 2008, 29:S177-S187), também comentou sobre os estudos de intervenção com B_i2íobservando que a dependência de valores médios e as estatísticas do grupo em estudos de suplementação com B_i2 pode muitas vezes esconder subconjuntos de pessoas com pouca ou nenhuma melhora e que em três estudos prospectivos de suplementação com B_i2 em idosos citados neste artigo as pobres respostas geralmente não foram adicionalmente estudadas para examinar a causa da pobre responsividade.

[008] A administração de B_i2 IM é inconveniente, relativamente dispendiosa quando os corpos médicos estão envolvidos na dosagem, difícil no idoso e em pessoas frágeis

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4/45 onde a massa muscular não é suficiente e pode ser dolorosa (Butler et al., Fam Pract 2006, 3:279-85) . O tratamento com Bi2 oral atual é ainda visto como menos confiável do que a administração parenteral e a monitoração de pacientes é aconselhável com mais frequência do que com a administração parenteral (Lane et al., Ann Pharmacother 2002; 36: 1268-72) . Assim, existe uma necessidade contínua de tratamentos orais mais confiáveis e eficazes para a deficiência de vitamina B12, que diminuam a variabilidade entre os sujeitos.

Breve sumário da invenção [009] Os presentes inventores verificaram que os níveis de vitamina B12, ácido metil malônico (MMA), e/ou de homocisteína podem ser surpreendentemente rapidamente normalizados (por exemplo, dentro de 15 dias de tratamento) em um paciente com uma deficiência de vitamina Bi₂ e/ou níveis de homocisteína e/ou MMA elevados, quando administrado por via oral com certas formulações contendo ácido de sódio N-[8(2-hidroxibenzoil)amino]caprílico (SNAC) e vitamina B12. Os inventores verificaram ainda que todos os pacientes que foram administrados por via oral com formulação de SNAC/vitamina B12 responderam positivamente ao tratamento.

[010] Em um aspecto, a presente invenção diz respeito a um método para normalizar os níveis de vitamina Bi₂ (por exemplo, dentro de 15 dias de tratamento) em um paciente com uma deficiência de vitamina Bi₂ através da administração diária de uma ou mais formas de dosagem oral compreendendo ácido N-[8-(2-hidroxibenzoil)amino] caprílico (NAC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina Bi₂. Em uma modalidade, o paciente sofre de

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5/45 deficiência de vitamina Bi₂ devido a insuficiência alimentar, a deficiência de Fator Intrínseco, perturbações intestinais, tal como má absorção, gastrectomia, atrofia gástrica, ressecção do íleo e doença inflamatória crônica do intestino. [Oil] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para normalizar níveis de holotranscobalamina (vitamina Bi₂ ativa) (por exemplo, dentro de 15 dias de tratamento) em pacientes com baixos níveis de vitamina Bi₂ativa pela administração diária de uma ou mais formas de dosagem oral que compreendem NAC, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina Bi₂.

[012] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para reduzir os níveis de MMA em um paciente com níveis de MMA elevados pela administração diária de uma ou mais formas de dosagem oral que compreendem o NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina Bi₂.

[013] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a um método para reduzir os níveis de homocisteína em um paciente com níveis elevados de homocisteína pela administração diária de um ou mais formas de dosagem oral que compreendem NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina Bi₂.

[014] Em ainda outro aspecto, a presente invenção diz respeito a um método para reduzir a variabilidade entre sujeitos no tratamento oral de pacientes que sofrem de deficiência de vitamina B_i2 e/ou nível de MMA e/ou homocisteína elevados. O método inclui, para cada paciente, a administração diária de uma ou mais formas de dosagem oral

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6/45 que compreendem NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina B12. Em uma modalidade, o método alcança uma taxa de resposta dos pacientes semelhante ou melhor do que a observada para a administração por via intramuscular.

[015] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a um método para melhorar a taxa de resposta dos pacientes ao tratamento por via oral com vitamina B12. O método inclui, para cada paciente, a administração diária de uma ou mais formas de dosagem oral que compreendem NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina B12. Em uma modalidade, os pacientes sofrem de baixa de vitamina Bi₂ ou deficiência de vitamina Bi₂.

[016] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a uma composição farmacêutica compreendendo (a) vitamina B12, (b) NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC), e (c) ácido fólico. Esta composição farmacêutica pode ser usada em qualquer um dos métodos acima mencionados.

[017] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a um método para reduzir ou prevenir a deficiência de vitamina B12 induzida por um inibidor de bomba de prótons em um paciente pela administração oral de (a) um inibidor de bomba de prótons (tal como omeprazol ou esomeprazol) , (b) vitamina Bi₂, (c) NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC), e, opcionalmente, (d) ácido fólico. Todos os componentes podem estar em formas de dosagem iguais ou separadas. Em uma modalidade preferida, os componentes (b), (c) e, opcionalmente, (d) são incorporados em uma forma

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7/45 de dosagem única e são coadministrados (por exemplo, simultaneamente ou dentro de 15 minutos) com o inibidor de bomba de prótons. Em uma outra modalidade preferida, todos os componentes (isto é, os componentes (a) , (b) , (c) e, opcionalmente, (d)) são incorporados em uma forma de dosagem única. Ainda uma outra modalidade preferida é um método para reduzir ou prevenir a deficiência de vitamina Bi₂ induzida por um inibidor de bomba de prótons em um paciente sendo tratado

com um inibidor	de	bomba de	prótons por	(i) descontinuar o
tratamento	com	o	inibidor	de	bomba	de	prótons, e (ii)
administrar	(a)	um	inibidor	de	bomba	de	prótons (tal como

omeprazol ou esomeprazol) , (b) vitamina B12, (c) NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC), e opcionalmente, (d) ácido fólico.

[018] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a uma composição farmacêutica compreendendo (a) um inibidor de bomba de prótons (tal como omeprazol ou esomeprazol) , (b) vitamina B12, (c) sal de NAC, ou um sal farmaceuticamente aceitável (tal como SNAC), e, opcionalmente, (d) ácido fólico.

[019] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a um método para reduzir ou prevenir a deficiência de vitamina B_i2 induzida pela metformina em um paciente através da administração oral de (a) metformina, (b) vitamina Bi₂, (c) NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável de do mesmo (tal como SNAC), e, opcionalmente, (d) ácido fólico. Todos os componentes podem estar em formas de dosagem iguais ou separadas. Em uma modalidade preferida, os componentes (b) , (c) e, opcionalmente, (d) são incorporados em uma forma de

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8/45 dosagem única, e são coadministrados (por exemplo, simultaneamente ou dentro de 15 minutos) com a metformina. Em uma outra modalidade preferida, todos os componentes (isto é, os componentes (a), (b), (c) e, opcionalmente, (d)) são incorporados em uma forma de dosagem única. Ainda uma outra modalidade preferida é um método para reduzir ou prevenir a deficiência de vitamina Bi₂ induzida pela metformina em um paciente sendo tratado com metformina por (i) descontinuação

do tratamento	com	metformina, e	(ii)	administração de	(a)
metformina,	(b)	vitamina Bi₂₍	(c)	NAC ou um	sal
farmaceuticamente	aceitável do	mesmo	(tal como SNAC)	e,

opcionalmente, ácido (d) fólico.

[020] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a uma composição farmacêutica compreendendo (a) metformina, (b) vitamina Bi₂, (c) NAC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC), e opcionalmente (d) fólico ácido.

[021] Em uma modalidade preferida dos métodos da presente invenção, a quantidade diária total de ácido N-[8-(2hidroxibenzoil) amino] caprílico ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo varia de cerca de 50 a cerca de 250 mg e a quantidade total diária de vitamina Bi₂ varia entre cerca de 0,5 a cerca de 2 mg

Breve descrição dos desenhos [022] A Figura 1 mostra a mudança percentual média (SD) a partir de linha de base (PCFB), em concentrações séricas de cobalamina por dia de estudo para os sujeitos descritos no Exemplo 7;

[023] A Figura 2 mostra a mudança percentual média (SD) a

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9/45 partir de linha de base (PCFB) nas concentrações plasmáticas de MMA por dia de estudo para os sujeitos descritos no Exemplo 7;

[024] A Figura 3 mostra a mudança percentual média (SD) a partir de linha de base (PCFB) nas concentrações plasmáticas de homocisteína por dia de estudo para os sujeitos descritos no Exemplo 7;

[025] A Figura 4 é um gráfico de dispersão de concentração de holotranscobalamina versus a concentração de cobalamina pelo tratamento no Dia 61 para sujeitos descritos no Exemplo 7;

[026] A Figura 5 é um gráfico de dispersão da concentração de holotranscobalamina versus a concentração de cobalamina pelo tratamento no Dia 91 para os sujeitos descritos no Exemplo 7; e [027] A Figura 6 é um gráfico de barras das concentrações médias (SD) para cobalamina por dia de estudo para os sujeitos descritos no Exemplo 7.

Descrição detalhada [028] O termo cerca de ou aproximadamente significa dentro de uma faixa de erro aceitável para o valor particular, tal como determinado por uma pessoa com habilidades comuns na técnica, a qual irá depender, em parte, de como o valor é medido ou determinado, ou seja, as limitações do sistema de medição. Por exemplo, cerca de pode significar dentro de 1 ou mais que 1 desvio padrão, por prática na técnica. Alternativamente, cerca de em relação às formulações pode significar mais ou menos um intervalo de até 20%, preferencialmente até 10%, mais preferencialmente de

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10/45 até 5%.

[029] Tal como usado aqui, o termo SNAC refere-se a sódio N-[8-(2-hidroxibenzoil) amino]caprilato. SNAC é também conhecido como sódio-N-saliciloil-8-aminocaprilato, monossódio 8-(N-saliciloilamino) octanoato, sal monossódio de ácido N-(saliciloil)-8-amino-octanóico, monossódio N-{8-(2 fenoxibenzoil)amino}octanoato, sal de monossódio E414, sódio 8-[(2-hidroxibenzoil)amino]octanoato e salcaprozato. SNAC tem a estrutura:

[030] Em modalidades adicionais de qualquer um dos métodos aqui descritos, o NAC ou outros sal farmaceuticamente aceitável de SNAC podem ser usados em lugar do SNAC. Por exemplo, um sal dissódico do NAC pode ser usado. Além disso, qualquer forma no estado sólido de SNAC pode ser usada. As formas de estado sólido adequadas de SNAC são descritas na Publicação de Patente US 2009/0143330, que é aqui incorporada por referência.

[031] Em modalidades adicionais de qualquer um dos métodos aqui descritos, os agentes de distribuição diferentes

de SNAC (e	seu	ácido livre ou outros sais	farmaceuticamente
aceitáveis	dos	mesmos) podem	ser	usados em	combinação	com a
vitamina	B12.	Tais agentes	de	distribuição podem	ser
combinados	ou	usados em	vez	de NAC,	ou seus	sais

farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de agentes de

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11/45 distribuição incluem, mas não estão limitados a, ácido N-(10[2-hidroxibenzoil]amino)decanóico (o ácido livre de SNAD), ácido N-(8-[2-hidroxi-5-clorobenzoil]-amino)octanóico (5CNAC), ácido 4-[(2-hidroxi-4-cloro-benzoil)-amino]butanoico (4-CNAB), 8-(2-hidroxifenóxi)octildietanolamina (HPOD), ácido 8-(N-2-hidroxi-4-metóxibenzoil)-aminocaprílico (4-MOAC) e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos (por exemplo, sais de monossódicos e dissódicos dos mesmos). 0 termo SNAD refere-se ao sal monossódico de ácido N-(10-[2hidroxibenzoil]amino) decanóico. Outros agentes de distribuição adequados são descritos, por exemplo, nas Publicações Internacionais WO 96/30036, WO 98/34632, e WO 2007/121318 e Patentes US 5.650.386, 5.773.647, e 5.866.536, todas as quais sendo aqui incorporadas por referência.

[032] O termo vitamina Bi₂ refere-se a qualquer membro de um grupo de compostos contendo cobalto conhecidos como cobalaminas que incluem, mas não estão limitados a, cianocobalamina, hidroxocobalamina, metilcobalamina e 5deoxiadenosilcobalamina. Em uma modalidade, a vitamina B_i2 é cianocobalamina.

[033] Em certas modalidades de qualquer um dos métodos descritos na presente invenção, o paciente tem um nível de vitamina B_i2 abaixo de cerca de 500 pg/mL. Por exemplo, o paciente pode ter um nível de vitamina Bi₂ abaixo de cerca de 400, cerca de 350, cerca de 300, cerca de 250 ou cerca de 200 pg/mL.

[034] Em certas modalidades de qualquer um dos métodos descritos na presente invenção, o paciente tem um nível de holotranscobalamina plasmática (vitamina B_i2 ativa) abaixo de

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12/45 cerca de 100 pmol/L. Por exemplo, o paciente pode ter um nível de vitamina B12 ativa no plasma abaixo de cerca de 50 ou cerca de 25 pmol/L.

[035] Em certas modalidades de qualquer um dos métodos descritos na presente invenção, o paciente tem um nível de MMA sérico de pelo menos cerca de 150 nmol/L. Por exemplo, o paciente pode ter um nível sérico de MMA de pelo menos cerca de 175 nmol/L, pelo menos cerca de 200 nmol/L ou pelo menos cerca de 225 nmol/L.

[036] Em certas modalidades de qualquer um dos métodos descritos na presente invenção, o paciente tem um nível de homocisteína plasmática de pelo menos cerca de 13 pmol/L. Por exemplo, o paciente pode ter um nível de homocisteína plasmática de pelo menos cerca de 14 pmol/L.

[037] Em um outro aspecto, a presente invenção diz respeito a um método para reduzir a variabilidade entre sujeitos no tratamento oral de pacientes que sofrem de baixa vitamina B12 ou deficiência de vitamina B12, o método compreendendo, para cada paciente, administrar diariamente uma ou mais formas de dosagem oral compreendendo ácido N-[8(2-hidroxibenzoil) amino]caprílico (NAC) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina Bi₂.

[038] Nos métodos da presente invenção, a forma de dosagem oral de NAC (ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo) e vitamina B12 é preferencialmente administrada diariamente durante, pelo menos, 15, 30, 60, ou 90 dias.

[039] Em ainda outro aspecto, a presente invenção referese a um método para melhorar a taxa de resposta dos pacientes

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13/45 ao tratamento por via oral com a vitamina Bi₂ pela administração diária a cada paciente de uma ou mais formas de dosagem oral compreendendo ácido N-[8-(2-hidroxibenzoil) amino] caprílico (NAC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e vitamina Bi₂. Em uma modalidade, os pacientes sofrem de baixa de vitamina Bi₂ ou deficiência de vitamina Bi₂.

[040] Em uma modalidade, qualquer um dos métodos descritos aqui alcança uma taxa de resposta para pacientes semelhante ou melhor que a observada para a administração por via intramuscular.

[041] Em um aspecto adicional, a presente invenção diz respeito a composições farmacêuticas compreendendo: (a) a vitamina Bi₂, (b) ácido N-[8-(2-hidroxibenzoil) amino]caprílico (NAC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) , e (c) opcionalmente, um ou mais outros agentes biologicamente ativos úteis em qualquer um dos métodos aqui descritos. Exemplos de agentes ativos adicionais incluem, mas não estão limitados a, ácido fólico. Em uma modalidade, a razão de peso de NAC (ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, tal como SNAC) para a vitamina Bi₂ na composição farmacêutica é de cerca de 25:1 a cerca de 500:1, [042] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica oral que compreende (a) vitamina B12, (b) ácido N-[8-(2-hidroxibenzoil) amino] caprílico (NAC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (tal como SNAC) e (c) ácido fólico. A razão de peso para quantidade de vitamina B_i2 e SNAC (ou outra forma de NAC) pode ser como aqui

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14/45 descrita. Em uma modalidade, a composição farmacêutica oral inclui a partir de cerca de 0,01 mg até cerca de 25 mg de vitamina Bi₂, de cerca de 1 mg até cerca de 1400 mg de SNAC, e de cerca de 100 até cerca de 1000 pg de ácido fólico. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica oral inclui de cerca de 6 pg até cerca de 10 mg de vitamina B_i2, de cerca de

10 mg	até cerca de 250	mg de SNAC,	e	de <	:erca de	100	até
cerca	de 800 pg de ácido	fólico.
[043]	Em modalidades	adicionais,	a	quantidade	de ácido
fólico	na composição varia de cerca	de	0, 05	pg até	cerca	de
1000 pg. Por exemplo, de	cerca de 1	pg	até	cerca de	800	pg.

de cerca de 10 pg até cerca de 800 pg, de cerca de 100 pg até cerca de 800 pg, de cerca de 250 a cerca de 800 pg, de cerca de 250 a cerca 500 pg ou de cerca de 400 pg até cerca de 800 pg. Por exemplo, a quantidade de ácido fólico na composição pode ser de cerca de 200 pg, cerca de 250 pg, cerca de 300 pg, cerca de 400 pg, cerca de 500 pg, cerca de 600 pg, cerca de 700 pg ou cerca de 800 pg.

[044] Em modalidades adicionais de qualquer um dos métodos descritos na presente invenção, o paciente é aquele que não respondeu ao tratamento com vitamina B_i2 oral existente (ou, por exemplo, tratamento oral com uma formulação de vitamina B_i2í que não inclui SNAC) .

[045] Em modalidades adicionais de qualquer um dos métodos aqui descritos, a presente invenção relaciona-se com a administração de uma forma de dosagem em comprimidos.

[046] Em modalidades adicionais, a forma de dosagem, tal como uma forma de dosagem em comprimidos, pode conter de cerca de 0,01 mg até cerca de 25 mg de vitamina B_i2 e de cerca

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15/45 de 1 mg até cerca de 600 mg de SNAC. Por exemplo, a forma de dosagem pode conter entre cerca de 0,02 mg até cerca de 25 mg de vitamina Bi₂ ou de cerca de 0,1 mg até cerca de 20 mg de vitamina Bi₂ ou de cerca de 0,5 mg a 10 mg de vitamina Bi₂ e de cerca de 10 mg até cerca de 200 mg de SNAC, ou de cerca de 10 mg até cerca de 250 mg de SNAC em cada comprimido.

[047] Em uma modalidade, a forma de dosagem, tal como uma forma de dosagem em comprimidos, contém de cerca de 0,5 até cerca de 1,5 mg de vitamina B_i2 e de cerca de 50 a cerca de 150 mg de SNAC, tal como cerca de 1 mg de vitamina Bi₂ e cerca de 100 mg de SNAC.

[048] Em outras modalidades, a razão de peso de vitamina B_i2 para SNAC é de cerca de 2:1 até cerca de 1:700, tal como de cerca de 1:2 a cerca de 1:600, de cerca de 1:2 a cerca de 1:200, de cerca de 1:2 a cerca de 1:100, de cerca de 1:3 a cerca de 1:20, ou de cerca de 1:4 a cerca de 1:10, Em uma modalidade, a razão de peso de vitamina B_i2 para SNAC é cerca de 1 para 100.

[049] Em outras modalidades, a forma de dosagem (por exemplo, um comprimido) contém opcionalmente excipientes, emulsionantes, estabilizantes, edulcorantes, agentes aromatizantes, diluentes (tal como fosfato de cálcio dibásico), ligantes (tal como povidona), agentes corantes e/ou agentes solubilizantes, lubrificantes (tal como estearato de magnésio), ou qualquer combinação destes. Os excipientes, emulsionantes, estabilizantes, edulcorantes, agentes aromatizantes, diluentes, agentes corantes e agentes de solubilização adequados incluem os descritos no Handbook of Pharmaceutical Excipients (quarta edição) por Raymond C.

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Rowe, Paul J. Sheskey e Paul J. Weller.

[050] Por exemplo, a forma de dosagem contém, opcionalmente, de cerca de 1 até cerca de 150 mg de fosfato dibásico de cálcio e, opcionalmente, contém de cerca de 0,5 até cerca de 10 mg de povidona. Para outro exemplo, o fosfato dibásico de cálcio está presente em uma quantidade de cerca de 50 até cerca de 150 mg e povidona está presente em uma quantidade de cerca de 1 a cerca de 8 mg. Em certas modalidades, o fosfato de cálcio dibásico está presente em uma quantidade de cerca de 75 até cerca de 125 mg e a povidona está presente em uma quantidade de cerca de 1,5 a cerca de 5 mg. Por exemplo, o fosfato dibásico de cálcio está presente em uma quantidade de cerca de 90 até cerca de 100 mg e a povidona está presente em uma quantidade de cerca de 1,5 a cerca de 5 mg. Em uma forma de dosagem exemplar, o fosfato dibásico de cálcio está presente em uma quantidade de cerca de 95 mg e povidona está presente em uma quantidade de cerca de 2 mg. Em uma modalidade adicional, o estearato de magnésio está presente em uma quantidade de cerca de 0,5 a cerca de 5 mg, tal como de cerca de 1 até cerca de 3 mg, por exemplo cerca de 2 mg.

[051] Sem pretender estar limitado por qualquer teoria particular de operação, acredita-se que a absorção gastrointestinal de vitamina Bi₂ depende da presença de proteína de fator intrínseco suficiente, secretada de células parietais gástricas. A dieta média fornece de cerca 10 mcg/dia de vitamina B_i2 em uma forma ligada à proteína que está disponível para a absorção após a digestão normal. A vitamina B_i2 é ligada ao fator intrínseco, durante o trânsito

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17/45 através do estômago; a separação ocorre no íleo terminal, e a vitamina B12 entra na célula mucosal para absorção através de um processo mediado por receptores. Em seguida, é transportada pelas proteínas de ligação de transcobalamina. Uma pequena quantidade (aproximadamente 1% da quantidade total ingerida) é absorvida por difusão simples, mas este mecanismo é adequado apenas com doses muito grandes. Acredita-se também que SNAC permite que a vitamina B12 se desvie do seu processo mediado por receptores usual.

[052] O termo tratamento ou tratar significa qualquer tratamento de uma doença ou distúrbio em um mamífero, incluindo: prevenção ou proteção contra a doença ou distúrbio, ou seja, fazendo com que os sintomas clínicos não se desenvolvam; inibição da doença, ou distúrbio, isto é, interromper ou suprimir o desenvolvimento de sintomas clínicos e/ou alívio da doença ou distúrbio, ou seja, causar a regressão dos sintomas clínicos.

[053] O paciente pode sofrer de deficiência de vitamina B12, devido à má absorção que pode estar associada com as seguintes condições: (1) anemia addisoniana (perniciosa), (2) patologia gastrointestinal, disfunção, ou cirurgia, incluindo enteropatia por glúten ou sprue, supercrescimento de pequenas bactérias intestinais, (3) gastrectomia total ou parcial, (4) infestação por tênia de peixe (5), malignidade do pâncreas ou intestino, ou (6) deficiência de ácido fólico. Por exemplo, o paciente pode ter (1) uma deficiência na dieta de vitamina B12, (2) anemia perniciosa, (3) má absorção da vitamina Bi₂ a partir de perturbações funcionais da absorção mediado pelo fator intrínseco, gastrectomia, doença inflamatória do

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18/45 intestino, distúrbios de absorção de vitamina Bi₂ na dieta relacionados com a idade, supercrescimento bacteriano do intestino ou uso crônico de inibidores de bomba de prótons ou metformina, ou (4) condições que afetam o intestino delgado, como esprue tropical, doença de Crohn, alcoolismo crônico, cirurgia abdominal ou intestinal que afeta a produção de Fator Intrínseco. As manifestações de deficiência de vitamina Bi2 incluem anemia perniciosa e degeneração neurológica. Além disso, o mau estado de Bi₂ tem sido ligado a condições relacionadas com a saúde, tal como a cognição deficiente, doença de Alzheimer, depressão e má saúde óssea. 0 paciente pode também sofrer de deficiência de vitamina Bi₂ devido ao uso crônico de certos medicamentos, tal como inibidores da bomba de prótons ou metformina que levam à deficiência de vitamina Bi₂.

[054] Os métodos da presente invenção também são úteis para fornecer aos pacientes que requerem um excesso de quantidades normais de vitamina Bi₂, tal como devido a gravidez, tirotoxicose, anemia hemolítica, hemorragia, malignidade, doença hepática e renal.

[055] O termo proteína de fator intrínseco refere-se a uma glicoproteína produzida pelas células parietais do estômago. Esta glicoproteína facilita a absorção de vitamina Bi2 mais tarde no íleo terminal.

[056] As concentrações de vitamina B_i2 séricas normais variam tipicamente, por exemplo, de cerca de 200 a 900 pg/mL, com uma concentração média plasmática normal de cerca de 450 pg/mL. (Veja, por exemplo, AHFS Drug Information: McEvoy, G.K. ed. American Society of Health-System Pharmacists,

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2007) . As concentrações séricas de vitamina Bi₂ de menos de cerca de 200 pg/mL indicam a deficiência de vitamina Bi₂, as concentrações séricas de B_i2 de cerca de 200 até cerca de 350 pg/mL, quando combinada com níveis de MMA e homocisteína total elevados podem ser considerados como sinais de um empobrecimento de armazenamento de tecido. Veja-se, por exemplo, Carmel R, et al., Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program, 62-81, 2003. Tais indivíduos podem ser tratados pelos métodos descritos no presente documento. Quando os níveis séricos de B_i2 estão abaixo de cerca de 350 a 400 pg/mL, os sujeitos podem ser considerados deficientes limítrofes de Bi₂. Ver, por exemplo, Cravens D, et al., Journal of Family Practice, 56(1) 62-63, 2007; Ramsay, ID et al., Clin. Exp. Dermatol., 15(4), 277-81, 1990, Tais sujeitos podem ser tratados pelos métodos descritos no presente documento.

[057] Os inibidores da bomba de prótons apropriados incluem, mas não estão limitados a, omeprazol, hidroxiomeprazol, esomeprazol, tenatoprazol, lansoprazol, pantoprazol, rabeprazol, dontoprazol, habeprazol, perprazol, ransoprazol, pariprazol, leminoprazol, timoprazol, disulprazol, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Em uma modalidade, a forma de dosagem oral contém entre cerca de 5 e cerca de 60 mg de qualquer um destes inibidores de bomba de prótons (tal como omeprazol, esomeprazol, ou pantoprazol). Em uma modalidade preferida, a forma de dosagem oral contém 10, 20 ou 40 mg do inibidor de bomba de prótons. Em outra modalidade, a dosagem diária de qualquer um destes inibidores de bomba de prótons (tal como omeprazol,

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20/45 esomeprazol, ou pantoprazol) varia de cerca de 5 a cerca de 60 mg por dia. Em uma modalidade preferida, a dosagem diária é de 10, 20 ou 40 mg do inibidor de bomba de prótons.

[058] As formas de dosagem orais que contêm um inibidor da bomba de prótons ou metformina podem ter o inibidor de bomba de prótons ou metformina em uma camada separada a partir do NAC (ou sal do mesmo) e vitamina Bi₂. Isto permite que a camada de metformina ou inibidor de bomba de prótons forneça uma liberação diferente (por exemplo, liberação imediata ou prolongada) da camada de vitamina B12/NAC.

[059] Um sujeito ou paciente no qual a administração da composição farmacêutica oral é um regime terapêutico eficaz para uma doença ou distúrbio é preferencialmente um humano, mas pode ser qualquer animal, incluindo um animal de laboratório, no contexto de uma experiência de atividade, teste ou triagem. Assim, como pode ser prontamente apreciado por um versado na técnica, os métodos e composições da presente invenção são particularmente adequados para administração a qualquer animal, particularmente um mamífero (por exemplo, um humano) , e incluindo, mas não se limitando de forma alguma a, humanos, animais domésticos, tal como sujeitos felinos ou caninos, animais de fazenda, tal como, mas não limitados a sujeitos bovinos, equinos, caprinos, ovinos, e porcinos, animais selvagens (tanto na selva ou em um jardim zoológico), animais de pesquisa, tal como camundongos, ratos, coelhos, cabras, ovelhas, porcos, cães, gatos, etc., espécies de aves, tal como galinhas, perus, aves canoras, etc., isto é, para uso em medicina veterinária.

[060] Os exemplos seguintes são dados como ilustrações

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21/45 específicas da presente invenção. Deve ser entendido,

contudo, que a invenção	não	está	limitada	aos	detalhes
específicos	estabelecidos	nos	exempl	os.	Todas	as	partes e
percentagens	nos exemplos,	bem	como	no	resto	do	relatório

descritivo, estão em peso, salvo indicação em contrário.

[061] Além disso, qualquer faixa de números recitada no relatório descritivo ou parágrafos a seguir que descreve ou reivindica vários aspectos da invenção, tal como a que representa um conjunto particular de propriedades, unidades de medida, condições, estados físicos ou percentagens, é destinada a incorporar literalmente expressamente neste documento por referência ou de outra forma qualquer número que cai dentro de tal faixa, incluindo qualquer subconjunto de números ou faixas incluídas dentro de qualquer faixa assim recitada.

[062] Exemplo 1. Preparação de ácido N-[8-(2hidroxibenzoil) amino]caprílico e SNAC [063] O método de preparação de ácido N-[8-(2hidroxibenzoil)amino]caprílico e SNAC envolve as seguintes etapas: O material de partida é salicilamida, que é convertido para formar carsalam (1,3-benzoxazina-2,4-diona). A segunda etapa envolve a alquilação de carsalam. A penúltima etapa é uma hidrólise para clivar o grupo de proteção etil no final da cadeia de alquil e abrir o anel heterocíclico que forma o ácido livre de SNAC. Na etapa final, o sal de sódio do ácido livre SNAC é formado por reação com uma quantidade estequiométrica com 1% de excesso da base de hidróxido de sódio. Após resfriamento o produto precipitado é isolado por centrifugação e seco sob vácuo, antes de ser embalado. Os

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22/45 controles em processo para o esquema de síntese são dados na

Tabela 1.

Tabela 1

Controles em Processo para Processo de Fabricação de SNAC.

Etapa	Reação	Produto Desejado	Especificação	Controle em Processo
1	Carsalam	Carsalam	<10% de salicilamida	HPLC
2	Alquilação	Carsalam alquilada	<8% de Carsalam	HPLC
3	Hidrólise	Ácido livre de SNAC	<0,5%	LOD
4	Sal de Sódio	Sal de sódio de SNAC	95-105%	HPLC

Exemplo 2. Preparação de Comprimidos de Vitamina B12 [064] Os punções e a matriz do comprimido são verificadas para garantir que estão limpas e que as suas superfícies estão polvilhadas com pó de estearato de magnésio. A vitamina Bi2, SNAC, carreador, excipiente, emulsionante, estabilizante, edulcorante, agente aromatizante, diluente, agente de coloração, agente de solubilização são peneirados através de uma peneira #35 e transferidos para um recipiente selado. 50 mg de vitamina Bi₂ são pesados e misturados com 11 gramas de um carreadorr, excipiente, emulsionante, estabilizante, edulcorante, agente aromatizante, diluente, agente de coloração e/ou um agente de solubilização. 100 comprimidos de vitamina Bi₂ são feitos, com cada comprimido contendo 0,5 mg de vitamina B_i2 e de 110 mg de um carreador, um agente emulsionante, excipiente, estabilizante, edulcorante, agente aromatizante, diluente, agente de coloração e/ou solubilizante. Estes comprimidos são usados como controle.

[065] Exemplo 3. Preparação de Comprimidos de Vitamina

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Biz e SNAC [066] 50 mg de vitamina Bi₂ e 1 grama de SNAC são pesados e cuidadosamente misturados com 10 g de um carreador, excipiente, emulsionante, estabilizante, edulcorante, agente aromatizante, diluente, agente de coloração e/ou um agente de solubilização. 100 comprimidos de vitamina B12 são feitos, com cada comprimido contendo 0,5 mg de vitamina Bi₂, 10 mg de SNAC e 100 mg de um carreador, excipiente, emulsionante, estabilizante, edulcorante, agente aromatizante, diluente, agente de coloração e/ou agente de solubilização. O processo é repetido para fazer os lotes de comprimidos contendo 1,0 mg, 0,8 mg, 0,6 mg, 0,4 mg e 0,2 mg de vitamina B12, respectivamente.

[067] Estes comprimidos têm as especificações de liberação do componente SNAC como mostrado na Tabela 2:

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Tabela 2

Testes	Especificação	Métodos Analíticos
Aparência	Pó branco a castanho claro com tonalidade rosa	AM001
Teste de Identificação para sódio FTIR	Confirma a presença de sódio em conformidade com o padrão de referência	USP <191> USP <197K>
Faixa de Fusão/Temperatura	193 - 203°C com uma faixa que não excede 5°C	USP <741>
Teor de Água	NMT 3,0 %	USP <921> Método I
Metais Pesados	< 20 ppm	USP <231> Método II
Teor de Sódio	6,9 a 8,4 %	AM017
Solventes Residuais Etanol Heptano	Menos que 4000 ppm Menos que 500 ppm	AM008 AM008
Ensaio como sal de sódio SNAC (como é)	90,0 a 110,0 % p/p	AM016

[068] Exemplo 4. Preparação de Comprimidos para Teste em Ratos [069] Os comprimidos com quatro tipos diferentes de ingredientes foram feitos como se segue:

(1) 8,8 mg de vitamina Bi₂, 35 mg de SNAC foram pesados, completamente misturados e transformados em comprimidos para administração em ratos, (2) 8,8 mg de vitamina Bi₂, 35 mg de SNAC e 5 mg de capmul PG -8 (monocaprilato de propileno glicol) foram pesados, completamente misturados e transformados em um comprimido, (3) 8,8 mg de vitamina B_i2í 35 mg de SNAC e 0,9 mg de povidona foram pesados, completamente misturados e transformados em comprimidos. Cada um dos quatro

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25/45 processos foi repetido para produzir mais comprimidos.

[070] Exemplo 5. Dosagem em ratos Sprague-Dawley [071] Ratos Sprague-Dawley machos (325 a 350g) foram dosados com vitamina B12 por via intravenosa (0,5 mg/kg) individualmente, ou por via oral com os comprimidos feitos no Exemplo 4 em uma dose de 50 mg/kg, a vitamina B12 individualmente ou em combinação com SNAC a 200 mg/kg. As amostras de sangue foram colhidas aos 0, 3, 10, 20, 30, 60, 120, 240 e 360 minutos após a dosagem. As amostras de plasma foram analisadas para a vitamina B12 por RIA. As métricas de farmacocinética (PK) independentes de modelos obtidas após a administração de uma combinação de vitamina B12/SNAC foram comparadas com as obtidas após a administração de vitamina B12 individualmente. Os resultados são mostrados na Tabela 3.

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CO <Ν

PQ <ΰ c Η Ê <ΰ

0) ο ι<ΰ

Ο·

Ο co <ΰ ρ <ΰ m

to OJ <ΰ

0) <ΰ <ΰ ρ <ΰ

0) co

0)

0) co ο Π <ΰ -Ρ co

0) (Ζ

Biodisponibilidade Média	o\°		CN O	CO
AUC (ug*min/mL)	Q ω	i-l	cn
Média	-xT 00 m kO	CN 00 CN	cn CN CN m
Tmax (min)	Q ω	cn cn		00 LD
Média		CN m	-xT CN
Cmax (ug/mL)	Q ω	kO o	O o	-xT CN
Média	m CN	-xT O	σ>
Grupo (N=5)	<N PQ <ü C H Ê <ü -P H > > 0) U b Cn Cn Ê m o	50mg/kg de Vitamina Bi₂individualmente (PO)	50mg/kg de Vitamina B_i2+ 200mg/kg de SNAC (PO)

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27/45 [072] Exemplo 6. Preparação de Comprimidos para Teste em Sujeitos Humanos [073] Os comprimidos foram feitos de cianocobalamina, SNAC, Kollidon 90F, Emcompress USP/EP anidro e Estearato de Magnésio, NF/BP/ EP/JP. Cada comprimido contém os seguintes ingredientes, tal como mostrado na Tabela 4:

Tabela 4

Ingrediente	mg/comprimido
Cianocobalamina, USP (Intragranular)	5, 00
SNAC (Intragranular)	100,00
Kollidon 90F, NF/EP/JP (Povidona K90; Intragranular)	2, 00
Emcompress USP/EP Anidro (Fosfato de Cálcio Dibásico, Anidro; Intragranular)	70, 00
Emcompress USP/EP Anidro (Fosfato de Cálcio Dibásico, Anidro; Extragranular)	21, 00
Estearato de Magnésio, NF/BP/EP/JP (extragranular)	2, 00
Peso total	200, 0

[074] Exemplo 7: Estudo em Aberto (Open Label) Randomizado [075] No presente estudo, a eficácia e segurança da formulação oral de vitamina Bi₂ (1 mg) da presente invenção e cianocobalamina intramuscular (IM) (1 mg) foram avaliados em sujeitos com deficiência de vitamina B_i2 branda.

Projeto de Estudo:

[076] Este foi um estudo em aberto, randomizado de 60 dias, com uma prorrogação de 30 dias, realizado em sujeitos com deficiência de Bi₂. Os sujeitos foram designados para um tratamento de acordo com um esquema de randomização preparado por um estatístico no início do estudo. O esquema de

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28/45 randomização foi estratifiçado tal que um número equilibrado de machos e fêmeas foi designado a cada grupo de tratamento. Os indivíduos foram randomizados para receber um comprimido oral de 1000 pg, administrado uma vez ao dia por 90 dias ou 1000 pg de cianocobalamina, administrada IM nos dias 1, 3, 7, 10, 14, 21, 30, 60 e 90.

[077] Um único comprimido foi autoadministrado no estado em jejum e pelo menos uma hora antes da refeição da manhã com 50 mL de água. A administração IM do fármaco em estudo foi realizada pelo pessoal do estudo, na pesquisa clínica, de manhã, no estado em jejum e pelo menos 1 hora antes da refeição da manhã nos Dias de estudo 1, 3, 7, 10, 14, 21, 30, 60 e 90. Para indivíduos designados para receber comprimidos, a adesão ao tratamento foi baseada em um relato diário do sujeito. As amostras de sangue para avaliações farmacodinâmicos (variáveis de eficácia) foram coletadas de todos os sujeitos da linha de base antes da administração (Dia 1), e nos Dias 15, 31, 61 e 91. A coleta das amostras foi realizada cerca de 24 horas após a administração da última dose, antes da administração da dose do dia, e no estado em jejum.

Materiais:

[078] Cianocobalamina estéril para injeção, 1000 pg/mL USP foi usada como frascos individuais de 1 mL.

[079] A composição dos comprimidos administrada aos sujeitos é mostrada na Tabela 5.

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Tabela 5

Ingrediente	mg/comprimido
Cianocobalamina, USP	1, 00
SNAC	100,00
Povidona	2, 00
Fosfato de Cálcio Dibásico	95, 00
Estearato de Magnésio	2, 00
Peso Total (mg)	200,00

Sujeitos:

[080] Um total de 50 sujeitos adultos do sexo masculino e feminino foi randomizado para receber o fármaco em estudo. Vinte e dois dos 24 pacientes (91,7%) randomizados para receber comprimidos completaram o estudo como o planejado. Vinte e seis sujeitos foram randomizados para receber Bi₂ IM e 26 (100%) dos sujeitos completaram o estudo como o planejado. Estes sujeitos sofria de leve deficiência de vitamina Bi₂.

[081] Os sujeitos elegíveis, conforme critérios de inclusão eram homens ou mulheres cujos dados laboratoriais clínicos mostraram deficiência de vitamina B_i2 definida como cobalamina sérica abaixo de 350 pg/mL. Para entrar no estudo, os sujeitos eram obrigados a ter 60 de idade anos ou mais, ou 18 anos ou mais velhos com anormalidades gastrointestinais, incluindo, mas não limitadas a, cirurgia gastrointestinal (por exemplo, gastrectomia, derivação gástrica), ressecção ileal, atrofia gástrica, doença celíaca, doença de Crohn, ou uso prolongado (> 3 meses) de inibidores da bomba de prótons, ou em uma dieta restrita (como vegetariano ou vegetariano rígido). Os critérios de inclusão adicionais foram uma boa saúde geral, como indicado pela falta de resultados significativos na história clínica, exame físico, exames

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30/45 laboratoriais clínicos, sinais vitais, ECG e função renal normal, conforme determinado pela depuração da creatinina estimada calculada com a fórmula de Cockcroft e Gault, uma vez que a função renal prejudicada pode elevar os valores de homocisteína (HC), ácido metilmalônico (MMA) e holotranscobalamina (Herrmann et al., Clin Chem Lab Med 2003; 41: 1478-88). Os critérios de exclusão incluíram o tratamento atual de um prestador de cuidados de saúde para tratar a deficiência e/ou sintomas de vitamina Bi₂, o uso diário de antiácidos neutralizantes (por exemplo, Maalox®), incapacidade para ingerir a medicação oral; qualquer valor de laboratório clinicamente significativo na triagem; hipersensibilidade ou reação alérgica à vitamina B_i2; participação em um estudo de pesquisa clínica envolvendo uma nova entidade química dentro de 30 dias após a dose do primeiro estudo, e os níveis de folato abaixo do intervalo de referência fornecido pelo laboratório clínico.

[082] Os fatores de confusão no diagnóstico e tratamento da deficiência de vitamina B_i2 incluem deficiência de folato, insuficiência renal e deficiência de vitamina B6. A deficiência de folato pode causar muitos dos mesmos sintomas que a deficiência de vitamina Bi₂, como HC total elevado. A insuficiência renal pode elevar os níveis de MMA no sangue, e uma deficiência de vitamina B6 ou hipotiroidismo pode levar a HC total elevada. Estes parâmetros clínicos de deficiência de vitamina B_i2, quando designados a outras causas, não respondem ao tratamento com Bi₂. Os sujeitos com as deficiências acima foram excluídos do estudo.

[083] Os sujeitos registraram medicações concomitantes

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31/45 (incluindo vitaminas, suplementos de ervas e antiácidos) e eventos adversos em diárias distribuídas no estudo do Dia 1. Os sujeitos randomizados para receber tratamento oral também registraram informações de dosagem (data e hora) e tempo de refeições consumidas antes e após cada dose.

Tratamentos:

[084] O comprimido oral de 1000 pg foi tomado em jejum como um único comprimido com 50 ml de água. Cada dose foi auto-administrada diariamente, durante 90 dias, após uma noite de jejum e 1 hora antes da refeição da manhã. Nenhum líquido foi consumido por pelo menos 1 hora antes e 1 hora após a dosagem.

[085] 1000 pg cianocobalamina foram administrados IM como 1 mL a partir de um frasco que contém 1000 pg/ml de fármaco. A administração do fármaco em estudo foi realizada pelo pessoal do estudo, na pesquisa clínica, de manhã, em estado de jejum e pelo menos 1 hora antes da refeição da manhã nos dias de estudo 1, 3, 7, 10, 14, 21, 30, 60 e 90.

Processamento de Amostra de Sangue:

[086] Os níveis de cobalamina sérica (B12) foram determinados através de um método de detecção de imunoensaio enzimático de micropartículas validado (MEIA) com uma faixa de calibração de 100 a 2000 pg/mL. Os procedimentos de diluição da amostra foram validados até diluição de 4 vezes. Os níveis séricos de MMA foram determinados por um método de LC/MS/MS validado, com uma faixa de calibração de 5 a 200 ng/mL. Os níveis plasmáticos de HC foram determinados por um método de detecção de imunoensaio de polarização por fluorescência (FIPA) validado com um padrão de calibração de

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2,5 a 50 μιηοΙ/L; e os níveis de holotranscobalamina plasmática (Bi₂ ativa) foram determinados usando um método de MEIA validado, com uma faixa de calibração de 8 a 128 pmol/L. Os procedimentos de diluição da amostra foram validados até diluição de 32 vezes.

Avaliações de Segurança:

[087] As avaliações de segurança consistiram na monitoração de eventos adversos (EAs), hematologia, química e resultados dos testes laboratoriais de urina, medicação concomitante, avaliação dos sinais vitais, ECG e resultados de exame físico.

[088] Um ECG de _i2 derivações de repouso foi registrado na triagem e na visita do Fim de Estudo antes da descarga do estudo. Os parâmetros de ECG registrados incluíram taxa ventricular (bpm), intervalo PR (ms), duração de QRS (ms), o intervalo QT (ms), intervalo QTc (ms, correção de Bazett) . Um exame físico foi realizado na triagem e na visita de fim de estudo antes da descarga do estudo.

Avaliações de Eficácia:

[089] A variável de eficácia primária foi a dos níveis séricos de cobalamina no Dia 61. O resultado de eficácia primário em comparação com à proporção de sujeitos em cada grupo de tratamento, cujos níveis de cobalamina foram normalizados (> 350 pg/mL) no Dia 61. As variáveis de eficácia secundárias foram os níveis séricos de cobalamina no Dia 91, os níveis séricos de MMA no Dia 61 e Dia 91 e os níveis plasmáticos totais de HC no Dia 61 e Dia 91.

[090] Os resultados de eficácia secundários foram: comparação da proporção de sujeitos em cada grupo de

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33/45 tratamento cujos níveis de cobalamina foram normalizados (> 350 pg/mL) no Dia 91; a comparação entre a mudança percentual média da linha de base dos níveis séricos de cobalamina entre os sujeitos de cada grupo de tratamento no Dia 61 e Dia 91; a comparação da mudança percentual média da linha de base dos níveis séricos de MMA entre os sujeitos em cada grupo de tratamento no Dia 61 e Dia 91; a comparação da mudança percentual média da linha de base de HC plasmática total entre os sujeitos em cada grupo de tratamento no Dia 61 e Dia 91; a comparação do primeiro tempo médio para normalizar o soro de cobalamina (> 350 pg/mL) entre os sujeitos em cada grupo de tratamento no Dia 61 e Dia 91. As variáveis de eficácia exploratórias e os resultados foram: níveis de holotranscobalamina plasmática no Dia 61 e Dia 91 medidos por: comparação da proporção de sujeitos em cada grupo de tratamento, cujos níveis de holotranscobalamina foram normalizados (> 40 pmol/L) no Dia 61 e Dia 91; relação entre os níveis de cobalamina e holotranscobalamina no Dia 61 e Dia 91.

Análise Estatística:

[091] As análises estatísticas e programação foram realizadas usando SAS (Versão 9.1, SAS Institute, Cary, Carolina do Norte, EUA).

[092] Três populações de análise foram usadas. A população com intenção-para-tratar (ITT) incluiu todos os pacientes randomizados na triagem, independentemente de se eles receberam o produto de estudo. As análises usando os sujeitos designados da população com ITT para o grupo ao qual foram randomizados. A população por protocolo incluiu todos

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34/45 os sujeitos randomizados que receberam pelo menos 90% de seu tratamento de estudo designado, que não tiveram a falta de linha de base e avaliações séricas de cobalamina no Dia 61, e que atenderam todos os critérios de inclusão e nenhum critério de exclusão. As análises principais foram conduzidas na população com ITT.

[093] A população de segurança incluiu todos os sujeitos randomizados que receberam pelo menos uma administração de produto do estudo e que tiveram pelo menos uma avaliação de segurança subsequente. Os sujeitos são incluídos neste grupo com base no tratamento atual recebido. Todas as análises de segurança foram realizadas na população de segurança.

[094] A análise dos resultados de eficácia primários em comparação com a proporção de sujeitos em cada grupo de tratamento, cujos níveis de cobalamina foram normalizados (isto é, cobalamina > 350 pg/mL) no Dia 61 de visita. O número e a frequência de sujeitos normalizados foram calculados. O intervalo de confiança a 90% da diferença nas proporções (comprimido - IM B12) foi calculado e apresentado usando procedimentos precisos. A conclusão de não inferioridade foi feita se o limite inferior do intervalo de confiança preciso a 90% bilateral para a diferença entre as duas proporções (comprimido - IM Bi₂) excedeu -0,15.

[095] As análises para todos os resultados secundários usaram apenas os dados disponíveis (ou seja, sem imputação de dados faltantes que ocorrem após a primeira dose do medicamento em estudo). Para todos os testes de hipóteses secundárias, um valor-p de <0,05 indicou um resultado estatisticamente significativo. Não foram feitos ajustes para

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35/45 a multiplicidade. Para sujeitos com os dados da linha de base em falta, o valor de triagem mais recente foi usado como linha de base para o cálculo da mudança da linha de base e variação percentual da linha de base.

[096] A mudança da linha de base (CFB) é definida como (X-B) . A mudança percentual da mudança da linha de base (PCFB) é definida como PCFB=100(X-B)/B, em que B é a medição de linha de base (pré-dose do Dia 1) e X é a medida no Dia 61 ou Dia 91, conforme necessário.

[097] A proporção de sujeitos que alcançaram a normalização dos níveis de cobalamina (isto é, cobalamina > 350 pg/mL) no Dia 91 deve ser analisada usando a mesma metodologia como indicado acima para a análise primária (isto é, Dia 61). O PCFB para os níveis de cobalamina nos Dias 61 e 91 foi analisado usando ANCOVA com a medição de cobalamina de linha de base e grupo de tratamento como efeitos fixos. Para cada resultado e cada ponto de tempo, a diferença média entre os dois grupos foi testada. O PCFB para os níveis de MMA e HC nos Dias 61 e 91 foram analisado usando ANCOVA com o grupo de tratamento e medição de MMA ou HC de linha de base como efeitos fixos. Para cada resultado e cada ponto de tempo, a diferença média entre os grupos foi testada.

[098] O tempo para a primeira normalização de cobalamina (> 350 pg/mL) a partir do Dia 1 ao Dia 61 e do Dia 1 ao Dia 91 foi analisada usando um teste de log-rank. As curvas de Kaplan-Meier, razão de risco e seu intervalo de confiança de 95% foram calculados. O tempo zero foi considerado como Dia 1 do Estudo.

[099] A proporção de sujeitos que alcançaram a

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36/45 normalização dos níveis de holotranscobalamina (> 40 pmol/L) no Dia 61 e Dia 91 foi analisada usando a mesma metodologia como indicada para a análise primária. A relação entre os níveis de cobalamina e holotranscobalamina no Dia 61 e Dia 91, e de PCFB no Dia 61 ao Dia 91 foi explorada. A relação foi analisada graficamente.

Resultados:

Linha de Base e Demografia de Paciente [100] Um total de 50 sujeitos saudáveis [11 (22,0%) do sexo masculino, 39 (78, 0%) do sexo feminino] foi randomizado para receber o medicamento em estudo. A média (SD) de idade foi de 53,2 (15,33) anos e a raça foi de 40 (80,0%) Caucasianos e 10 (20,0%) Negros. As médias (SD) dos níveis séricos de cobalamina na triagem foram semelhantes entre os pacientes randomizados para receber vitamina Bi₂ oral [285,5 (54,27) pg/mL] em comparação com sujeitos randomizados para receber B_i2 IM [262, 0 (54, 61) pg/mL].

Eficácia [101] A proporção de sujeitos em cada grupo de tratamento cujos níveis de cobalamina foram normalizados (^ 350 pg/mL) no Dia 61 (resultado de eficácia primária) e no Dia 91 (resultado de eficácia secundária) é apresentada na Tabela 6 (população com ITT). Os resultados foram semelhantes para ambas as populações.

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Tabela 6

Responsivos à Cobalamina

Dia de Estudo	Estatística	Grupo de Tratamento
B_i2 Oral (N=24)	Biz IM (N=26)
Dia 15	N	23	26
Responsivo (%) 1	23 (100, 0)	26 (100, 0)
Não Responsivo (%)	0 (0,0)	0 (0,0)
Dia 61	N	23	26
Responsivo (%)1	23 (100, 0)	26 (100, 0)
Não Responsivo (%)	0 (0,0)	0 (0,0)
Dia 91	N	22	26
Responsivo (%)1	22 (100,0)	26 (100, 0)
Não Responsivo (%)	0 (0,0)	0 (0,0)

- Um responsivo é definido como um sujeito com um nível de cobalamina > = 350 pg/mL. Há 13 sujeitos no grupo Bi₂ oral e 14 sujeitos do grupo Bi₂ IM com nível de cobalamina > = 350 pg/mL no início do estudo.

[103] Todos os sujeitos de cada grupo de tratamento alcançaram normalização dos níveis séricos de cobalamina (isto é, os níveis de cobalamina > 350 pg/mL) no Dia 15.

[104] Não houve nenhuma diferença estatística entre os grupos de tratamento para a mudança percentual média da linha de base (PCFB) nos níveis séricos de cobalamina no Dia 61 (p= 0, 1326) e no Dia 91 (p= 0, 4273) . No Dia 61, a mudança percentual média (SD) nos níveis de cobalamina foi 452,5 (353,19) e 714,6 (732,11) para os sujeitos nos grupos de tratamento de B_i2 oral e B_i2 IM, respectivamente. No Dia 91, a mudança percentual média (SP) nos níveis de cobalamina foi 526,9 (350,62) e 608,9 (446,68) para os sujeitos nos grupos de tratamento B_i2 oral e B_i2 IM, respectivamente. Os resultados foram idênticos para a população com ITT e para a população

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38/45 do protocolo. A Figura 1 mostra PCFB médio nos níveis de cobalamina por dia de estudo na população com ITT. Como pode ser visto a partir da Figura 1, o grupo de Bi₂ oral surpreendentemente mostrou níveis séricos de cobalamina normalizados no primeiro ponto de tempo (Dia 15) . Estes sujeitos mantiveram níveis séricos médios de vitamina Bi₂normalizados em toda a duração do estudo, até e incluindo o Dia 91.

[105] Os sujeitos no grupo de tratamento de B_i2 oral surpreendentemente mostraram níveis de vitamina Bi₂ ativa normalizadas no primeiro ponto de tempo (Dia 15) . Estes sujeitos mantiveram níveis de vitamina Bi₂ ativa normalizados em todo o estudo, até e incluindo o Dia 91.

[106] Não houve diferença estatística entre os grupos de tratamento para PCFB médio nos níveis séricos de MMA no Dia 61 (p= 0,6179) . No Dia 61, a mudança percentual média (SD) nos níveis de MMA foi -30,55 (26,655) e -28,17 (24,754) para os sujeitos nos grupos de tratamento de B_i2 oral e B_i2 IM, respectivamente.

[107] No Dia 91, o grupo de tratamento oral exibiu um PCFB médio nos níveis séricos de MMA que foi superior ao grupo de B_i2 IM (p = 0,0334). No Dia 91, a mudança percentual média (SD) , em nível de MMA foi 39,29 (24, 939) e 26,58 (25,643) para sujeitos nos grupos de tratamento de B_i2 oral e B_i2 IM, respectivamente. A Figura 2 mostra o PCFB médio nos níveis de MMA por dia de estudo na população com ITT. Os sujeitos no grupo de tratamento de B_i2 oral surpreendentemente mostraram níveis de ácido metil malanônico normalizados no primeiro ponto de tempo (Dia 15) . Estes sujeitos mantiveram

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os níveis de MMA	normalizados	em todo	o	estudo, até	e
incluindo o Dia 91.
[108]	Não houve	diferença estatística	entre os grupos	de
tratamento para PCFB médio nos	níveis de	HC	plasmáticos	no
Dia 61	(p=0,6368)	e no Dia 91	(p= 0,5140) .	No Dia 61,	a
mudança	percentual	média (SD) nos níveis	de	HC foi -21,	94
(19,034)	e -17,49	(24, 099) para	os sujeitos	nos grupos	de

tratamento de Bi₂ oral e Bi₂ IM, respectivamente. No Dia 91, a mudança percentual média (SD) nos níveis de HC foi -14,36 (28,375) e -8,805 (28,5406) para os sujeitos nos grupos de tratamento de B_i2 oral e B_i2 IM, respectivamente. A Figura 3 mostra o PCFB médio dos níveis de HC por dia de estudo na população com ITT. Os sujeitos no grupo de tratamento de B_i2oral surpreendentemente mostraram níveis de ácido de homocisteína normalizados no primeiro ponto de tempo (Dia 15) . Estes sujeitos mantiveram níveis de homocisteína normalizados em todo o estudo, até e incluindo o Dia 91.

[109] A proporção de sujeitos em cada grupo de tratamento cujos níveis de holotranscobalamina plasmática foram normalizados (> 40 pmol/L) no Dia 61 e Dia 91 (resultado exploratório) é apresentada na Tabela 7 (população com ITT).

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Tabela 7

Responsivos à Holotranscobalamina

Dia de Estudo	Estatísticas	Grupo de Tratamento
Bi2 Oral (N=24)	Bi2 IM (N=26)
Dia 15	n	23	26
Responsivo (%) 1	23 (100, 0)	26 (100, 0)
Não Responsivo (%)	0 (0,0)	0 (0,0)
Dia 61	n	22	26
Responsivo (%)1	22 (100,0)	26 (100, 0)
Não Responsivo (%)	0 (0,0)	0 (0,0)
Dia 91	N	22	26
Responsivo (%)1	22 (100,0)	26 (100, 0)
Não Responsivo (%)	0 (0,0)	0 (0,0)

- Um responsivo é definido como um sujeito com um nível de holotranscobalamina > = 40 pmol/L. Não houve amostra para um sujeito como do Dia 61 e, portanto, esse sujeito não foi contado nas categorias de responsivo ou não responsivo.

[110] Todos os sujeitos (100%) em ambos os grupos de tratamento, e em ambas as populações, tiveram níveis plasmáticos holotranscobalamina > 40 pmol/L no Dia 61 e no Dia 91.

[111] Gráficos de dispersão dos níveis de holotranscobalamina em relação aos níveis de cobalamina nos Dias 61 e 91 para os sujeitos em cada grupo de tratamento na população com ITT são fornecidos nas Figuras 4 e 5. Em geral, verifica-se que para os sujeitos em cada grupo de tratamento, na medida em que os níveis de cobalamina aumentam, um aumento nos níveis de holotranscobalamina é observado no Dia 61 e no Dia 91.

[112] As Tabelas 5 e 6 apresentam dados de cobalamina, holotranscobalamina, MMA e HC individuais após o tratamento

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IM e oral, respectivamente. A Figura 6 é um gráfico de barras das concentrações médias (SD) séricas de cobalamina na linha de base (Dia 1) e Dias 15, 31, 61, e 91 após ambos os tratamentos. Todos os pacientes incluídos triados pelo laboratório clínico tiveram valores de cobalamina <350 pg/mL. Quando o método de cobalamina validado foi usado 13 sujeitos em Bi2 Eligen® e 14 sujeitos no grupo IM foram> ou = a 350 pg/mL. A maioria destes pacientes estava dentro de 10% dos 350 pg/mL. Todos os sujeitos apresentaram normalização de cobalamina e holotranscobalamina no Dia 61 e a normalização foi mantida no Dia 91. Biomarcadores, MMA e HC, foram reduzidos em pacientes que tinham níveis elevados na triagem (sujeitos 102, 103, 202, 203 e 239 para o grupo de IM e 101, 228, 232 e 233 para o grupo oral). Foi observada uma redução na maior parte dos pacientes cujas concentrações de biomarcadores estavam na faixa normal.

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Tabela 8

Gru]	do de Tratamento com IM
Parâmetror	Dia	Média	Desvio Padrão (SD)	Covariância Percentual (%CV)
Bi2 Total (pg/mL)	1	369	180	49
15	2434	1181	49
61	2258	1082	48
91	2057	935	46
HTC (pmol/L)	1	34,32	8,11	24
15	899	353	39
61	739	295	40
91	877	405	46
MMA (nmol/L)	1	232	142	61
15	128	41	32
61	148	77	52
91	149	63	42
Homocisteína (pmol/L)	1	13	3	24
15	10	3	28
61	11	3	26
91	12	4	31

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Tabela 9

Grupo de Tratamento Oral

Parâmetro	Dia	Média	Desvio Padrão (SD)	Covariância Percentual (%CV)
Bi2 Total (pg/mL)	1	390	186	48
15	1677	1018	61
61	1828	1134	62
91	1914	946	49
HTC (pmol/L)	1	40	16	41
15	540	379	70
61	519	337	65
91	626	432	69
MMA (nmol/L)	1	220	123	56
15	143	62	43
61	142	88	62
91	134	56	42
Homocisteína (pmol/L)	1	14	5	34
15	11	3	27
61	10	3	26
91	11	3	29

Perfil de Segurança [114] Um total de 50 sujeitos adultos saudáveis do sexo masculino e feminino foi exposto pelo menos uma vez ao fármaco em estudo durante este estudo. No geral, 28 (56,0%) sujeitos relataram pelo menos um evento adverso (AE) durante

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44/45 o estudo. Todos AEs relatados foram considerados EAs emergentes do tratamento (TEAEs). Treze (54,2%) e 15 (57,7%) sujeitos relataram pelo menos um AE após a administração de Bi2 oral e Bi₂ IM, respectivamente. Três sujeitos (11,5%), todos os que recebem B_i2 IM, relataram eventos adversos graves (SAEs). Nenhum sujeito descontinuou o tratamento de estudo por causa de um AE.

[115] Uma visão geral de eventos adversos reportados durante o estudo é apresentada na Tabela 10.

Tabela 10

Categoria*	Tratamento	Geral (N=50)
Bi2 Oral (N=24)	Bi2 IM (N=26)
n (%)	n (%)	n (%)
Sujeitos com AEs	13 (54,2)	15 (57,7)	28 (56, 0)
Sujeitos com TEAEs	13 (54,2)	15 (57,7)	28 (56, 0)
Sujeitos com SAEs	0 (0)	3 (11,5)	3 (6,0)
Sujeitos que descontinuaram por causa de um AE	0 (0)	0 (0)	0 (0)

- Sujeitos podem cair em mais de uma categoria.

[116] Nenhum sujeito descontinuou o tratamento devido a um AE. Três sujeitos, todos randomizados para receber B_i2 IM, experimentaram um SAE durante este estudo.

Discussão:

[117] O estudo demonstrou que os tratamentos com B_i2 oral e Bi2 IM produziram normalização de cobalamina (> 350 pg/mL) em todos os membros dessa população de sujeitos levemente deficientes de B_i2 em 15 dias ou menos. Além disso, este efeito foi mantido por 3 meses de duração do estudo. A população de estudo incluiu sujeitos que poderiam ter sido esperados para terem deficiência de vitamina Bi₂ relacionada à idade e alguns que tiveram condições subjacentes

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45/45 gastrointestinais conhecidas por interferir com a absorção de vitamina B12. Apesar da normalização de cobalamina em todos os sujeitos, as diferenças foram evidentes entre os dois regimes de tratamento. 0 regime de dosagem IM padrão usado neste estudo envolveu múltiplas injeções no primeiro mês e produziu valores mais elevados para a cobalamina do que B12 oral. Com a frequência de dosagem IM mudada para mensal, os valores médios de cobalamina tenderam a diminuir entre 2 e 3 meses. Em contraste o tratamento diário com Bi₂ oral resultou em melhora dos valores de cobalamina em todo o estudo e no Dia 91 os valores médios para os dois grupos de tratamento foram similares (2057 ± 935 pg/mL e 1914 ± 946 pg/mL para B12 IM e oral, respectivamente). Todos os pacientes testados até o momento neste estudo responderam positivamente ao tratamento com SNAC/vitamina Bi₂.

[118] Os princípios, as modalidades preferidas e os modos de operação da presente invenção foram descritos no relatório descritivo antecedente. A invenção que se destina a ser protegida aqui, contudo, não deve ser interpretada como limitada às formas particulares divulgadas, uma vez que estas devem ser consideradas como ilustrativas em vez de restritivas. Variações e mudanças podem ser feitas por aqueles versados na técnica, sem se afastar do espírito da invenção.

[119] O conteúdo de todas as patentes, pedidos de patentes e publicações citadas neste documento é aqui incorporado por referência na sua totalidade, na medida permitida.

Claims

1. Forma de dosagem oral, caracterizada pelo fato de compreender:

(a) vitamina Bi₂;

(b) ácido N-[8-(2-hidroxibenzoil)amino]caprilico ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (c) ácido fólico, a dita forma de dosagem compreendendo de 50 a 250 mg de ácido N-[8-(2-hidroxibenzoil)amino]caprilico ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de 0,5 a 2 mg de vitamina B12.

2. Forma de dosagem oral, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de compreender:

(a) um inibidor da bomba de prótons;

(b) vitamina Bi₂;

(c) sódio N-[8-(2-hidroxibenzoil)amino]caprilato; e (d) ácido fólico.

3. Forma de dosagem oral, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de compreender:

(a) a metformina;

(b) vitamina Bi₂;

(c) sódio N-[8-(2-hidroxibenzoil)amino]caprilato; e (d) ácido fólico.