BR112012005768B1 - uso de cepa bacteriana, composição compreendendo a referida cepa, alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose - Google Patents

Abstract

AGENTE ANTIOBESIDADE, BEBIDA OU ALIMENTO ANTIOBESIDADE, AGENTE DE MELHORAMENTO DE TOLERÂNCIA À GLICOSE, E ALIMENTO OU BEBIDA PARA O MELHORAMENTO DE TOLERÂNCIA À GLICOSE. A presente invenção refere-se a um agente antiobesidade ou um agente de melhoramento de tolerância à glicose contendo uma bactéria que pertence ao gênero Bifidobacterium como um ingrediente ativo, em que a bactéria que pertence ao gênero Bifidobacterium exibe uma taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%. A presente invenção é capaz de prover um agente antiobesidade e um agente de melhoramento de tolerância à glicose que são eficazes para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhoramento de tolerância à glicose e também exibem segurança superior, bem como provisão de que alimentos ou bebidas contendo esses agentes. Além disso, a presente invenção é também capaz de prover uma bactéria do gênero Bifidobacterium, e em particular uma Bifidobacterium breve, que é eficaz para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhoramento de tolerância à glicose e também exibe segurança superior, bem como provisão de que uma composição farmacêutica contendo essa bactéria.

Description

Campo da Técnica

[0001] A presente invenção refere-se a um agente antiobesidade, a um alimento ou bebida antiobesidade, a um agente de melhoramento de tolerância à glicose, e a um alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose que contêm uma Bifidobacterium breve específica como um ingrediente ativo.

[0002] Prioridade é reivindicada no Pedido de Patente Japonês No. 2009-215836, depositado em 17 de setembro de 2009, cujo conteúdo é incorporado aqui por referência.

Antecedentes da Técnica

[0003] Como o estilo de vida das pessoas japonesas? se torna mais ocidentalizado e o envelhecimento da população continua a progredir rapidamente, o número de pacientes com doenças relacionadas com estilo de vida tais como doença de coração isquêmica, doença cerebrovascular e diabetes continua a aumentar. Uma das principais causas desses tipos de doenças relacionadas com estilo de vida é obesidade, e a importância da prevenção e melhoramento de obesidade é amplamente enfatizada. Além disso, obesidade é também visto como indesejável a partir dos pontos de vista da aparência e beleza, e há muito interesse na dieta para a finalidade de prevenção ou melhoramento de obesidade.

[0004] Contra esse tipo de prática ciente de obesidade aumenta da, um critério de diagnóstico conhecido como "síndrome metabólica" foi identificada como aumento da probabilidade do futuro início de doença relacionada com estilo de vida, e medição de circunferência da cintura é usada nos checkups médicos com a finalidade de prevenção e/ou melhoramento da síndrome metabólica.

[0005] Exemplos de métodos que são convencionalmente usados para tratar obesidade incluem tratamentos com dieta (restrição de dieta e jejuando), tratamentos à base de exercício (promoção de consumo de energia através de exercício), e tratamentos à base de fár- maco. Exemplos de fármacos atualmente usados nos tratamentos à base de fármaco incluem Orlistat, que inibe a absorção de gordura no trato intestinal (tais como os fármacos "Xenical" (uma marca registrada) produzido pela Roche Ltd., e "Alli" (uma marca registrada) fabrico pela GlaxoSmithKline plc.), e Acarbose, que é um inibidor da enzima de glicilítica (α-glucosidase) (tal como o fármaco "Glucobay" (uma marca registrada) fabricado pela Bayer AG).

[0006] No entanto, uso excesso desses tratamentos podem causar numerosos problemas, incluindo diminuição da saúde do paciente, aumento de peso devido a rebote, e dificuldade de realizar o tratamento de longo prazo ou contínuo. Particularmente no caso dos métodos à base de fármaco, efeitos colaterais tendem também a ser um problema. Além disso, os fármacos usados nos tratamentos à base de fár- maco são fármacos farmacêuticos, e não são particularmente fácies de se usar.

[0007] Testes na inibição de obesidade usando-se micróbios tais como bactérias de ácido láctico foram anteriormente relatadas. Por exemplo, Documento 1 não patentário relata que quando um alimento contendo 10% de Bifidobacterium bifidum G9-1 seco vivo foi alimentado a ratos exogenamente hipercolesterolêmicos (ExHC), ratos obesos (Wistar fatty), e camundos obesos e diabéticos (KK-Ay), os níveis de triacilglicerol e colesterol no sangue e fígado diminuídos. No entanto, quando uma cepa bacteriana acima é usada, uma grande quantidade das bactérias devem ser misturadas no alimento para se obter os efeitos desejado, e assegurando ingestão rotineira e contínua da quanti- dade eficaz é difícil.

[0008] Além do mais, ácido linoleico conjugado (CLA) é conhecido como exibindo atividade fisiológica incluindo uma ação antiobesidade. For exemplo, Documento 2 não patentário relata um estudo de animal em que misturação de CLA para dentro do alimento em quantidades de 0, 0.25, 0,5 e 1% revelaram que, a quantidades de 0,5% ou mais alta, peso de corpo e gordura no corpo foram reduzidas de um modo dependente de concentração.

[0009] Em relação a CLA, é conhecido que bactérias tal como do gênero Bifidobacterium têm a capacidade de converter ácido linoleico (LA) em CLA (função de conversão de CLA), e várias técnicas foram propostas que utilizam essas bactérias. Por exemplo, Documento 1 de patente revela que a Bifidobacterium breve CBG-C2, Bifidobacterium pseudocatenulatum CBG-C4 e Enterococcus faecium CBG-C5 todas exibem funcionalidade de conversão de CLA superior, e Tabela 1 revela que uma Bifidobacterium breve CBG-C2 convertia LA em CLA com uma alta taxa de conversão de CLA de 54,7%. Além disso, Documento 1 de patente também revela o uso de composições de geração de CLA compreendendo essas cepas bacterianas como ingredientes ativos na prevenção ou tratamento de doenças que são inibidas por CLA (tais como câncer, esclerose arterial, diabetes e obesidade).

[00010] No entanto, quando CLA ou bactérias tendo uma função de conversão de CLA superior são administradas como parte de um dieta visada ou no tratamento de obesidade ou prevenção de obesidade, há um perigo que efeitos colaterais podem ocorrer.

[00011] Como um exemplo desses efeitos colaterais de CLA, Documento 3 não patentário relata que quando 1% de CLA foi misturado com ração de camundongo e foi administrado durante um período de 8 meses, atrofia do tecido adiposo, um aumento no nível de insulina, e uma redução na tolerância à glicose foram todos observados. Além disso, Documento 4 não patentário relata que quando seres humanos ingeriam cerca de 3 g de CLA diariamente durante um período contínuo, tolerância à glicose tendia a piorar, como evidenciado por uma diminuição na sensibilidade a insulina e um aumento nos marcadores de oxidação na urina.

[00012] Além do mais, a quantidade de ingestão média de LA por pessoa japonesa é cerca de 11 g (vide o Documento 5 não patentário), e portanto se bactérias tendo a função de conversão de CLA alta for administrada, CLA será produzido em grandes quantidades. Por exemplo, se 11 g de LA forem convertidos em CLA com a taxa de conversão acima mencionada de 54,7%, então 6,02 g de CLA serão produzidos. Se uma grande quantidade de CLA for produzida desse modo, então efeitos colaterais mencionados acima se tornam uma preocupação.

LISTA DE CITAÇÃO Documentos de patentes

[00013] [Documento 1 de patente] Tradução publicada japonesa? No. 2005-522216 de PCT Documentos não patentários

[00014] [Documento 1 não patentário] "Efeitos de bifidobactérias sobre modelos de animais obesos e diabéticos", Igaku no ayumi [Progresso na medicina], 205(4), 273 to 274

[00015] [Documento 2 não patentário 2] "Ácido linoleico conjugado rapidamente reduz teor de gordura no corpo em camundongos sem afetar ingestão de energia", The American Journal of Physiology, 276, 1172 a 1179 (1999)

[00016] [Documento 3 não patentário] "Suplementação de ácido linoleico conjugado reduz tecido adiposo por apoptose e desenvolve lipodistrofia em camundongo", DIABETES, 49, 1534 a 1541 (2000)

[00017] [Documento não patentário 4] "Efeitos de suplementação de ácido cis-9, trans-11 linoleico conjugado na sensibilidade a insulina, peroxidação de lipídio, e marcadores pró-inflamatórios nos homens obesos", The American Journal of Clinical Nutrition, 80, 279 a 283 (2004)

[00018] [Documento 5 não patentário] "O estado atual de ingestão de ácido linoleico", Shishitsu Eiyougaku [Lipid Nutrition], 11, 25 a 31 (2002)

Revelação da Invenção Problemas a serem resolvidos pela invenção

[00019] A presente invenção leva nas circunstâncias acima em consideração, com um objetivo de provisão de um agente antiobesida- de e um agente de melhoramento de tolerância à glicose que são eficazes para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhoramento da tolerância à glicose e também exibem segurança superior, bem como provisão de que alimentos ou bebidas contendo esses agentes.

Meio de resolver os problemas

[00020] Como um resultado da investigação extensa, os inventores da presente invenção revelaram que Bifidobacterium breve, que exibe uma baixa taxa de conversão em ácido linoleico conjugado, tem uma ação antiobesidade e uma ação de melhoramento de tolerância à glicose que são independentes de ácido linoleico conjugado, e com base nessa constatação, eles foram capazes de completar a presente invenção.

[00021] A fim de alcançar o objetivo descrito acima, a presente invenção adota as formas descritas abaixo. (1) Um agente antiobesidade contendo, como um ingrediente ativo, uma Bifidobacterium breve par a qual a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado, determinada de acordo com o procedimento descrito abaixo, não é mais do que 10%.

[00022] Células bacterianas da Bifidobacterium breve acima são suspensas a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, e depois da incubação por 48 horas a 37°C, a quantidade de ácido linoleico conjugado produzido é medida, e a taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado é determinada da fórmula abaixo.

(2) O agente antiobesidade de acordo com (1), em que a Bifidobacterium breve é Bifidobacterium breve MCC 1274 e/ou Bifidobacterium breve ATCC 15700. (3) Um alimento ou bebida antiobesidade contendo o agente antiobesidade de acordo com (1) ou (2). (4) Um agente de melhoramento de tolerância à glicose contendo, como um ingrediente ativo, a Bifidobacterium breve para a qual a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado, determinada de acordo com o procedimento descrito abaixo, não é mais do que 10%.

[00023] Células bacterianas da Bifidobacterium breve acima são suspensas a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, e depois da incubação por 48 horas a 37°C, a quantidade de ácido linoleico conjugado produzido é medida, e a taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado é determinada da fórmula abaixo.

(5) O agente de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com (4), em que a Bifidobacterium breve é Bifidobacterium breve MCC 1274 e/ou Bifidobacterium breve ATCC 15700. (6) Um alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose, contendo o agente de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com (4) ou (5).

[00024] Além do mais, a presente invenção inclui os aspectos listados abaixo. < 1> Uma bactéria do gênero Bifidobacterium, para o uso no tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula:

< 2> Uso de uma bactéria do gênero Bifidobacterium para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula:

< 3> Uso de uma bactéria do gênero Bifidobacterium para a produção de uma composição, e de preferência uma composição far-macêutica, para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula:

< 4> uma composição farmacêutica contendo uma bactéria do gênero Bifidobacterium usada para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, e um veículo farmaceuticamen- te aceitável, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula:

< 5> Uso de uma composição farmacêutica contendo uma bactéria do gênero Bifidobacterium e um veículo farmaceuticamente aceitável para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula: , _,., (ácido linoleico conjugadoproduzido'l

< 6> A bactéria de gênero Bifidobacterium de acordo com <1>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 7> A bactéria de gênero Bifidobacterium de acordo com <6>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 8> O uso de uma bactéria do gênero Bifidobacterium de acordo com <2> ou <3>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 9> O uso de uma bactéria do gênero Bifidobacterium de acordo com <8>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP- 11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 10> A composição farmacêutica de acordo com <4>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 11> A composição farmacêutica de acordo com <10>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 12> O uso de uma composição farmacêutica de acordo com <5>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 13> O uso de uma composição farmacêutica de acordo com <12>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 14> Um agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose contendo uma bactéria do gênero Bifidobacterium como um ingrediente ativo, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula:

< 15> O agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com <14>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 16> O agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com <15>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 17> Um alimento ou bebida antiobesidade ou um alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose, contendo o agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com qualquer um de <14> a <16>. < 18> Uma cepa bacteriana que é Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175). < 19> Uma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700, para o uso no tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose. < 20> Uso duma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bi-fidobacterium breve ATCC 15700 para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose. < 21> Uso duma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) and Bifidobacterium breve ATCC 15700 para a produção de uma composição para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose. < 22> uma composição farmacêutica contendo uma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700 para o uso no tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, e um veículo farmaceuticamente aceitável. < 23> Uso de uma composição farmacêutica contendo uma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700, e um veículo farmaceuticamente aceitável, para o tratamento antiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose. < 24> Um agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose contendo, como um ingrediente ativo, uma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 25> Um método de tratamento ou prevenção de obesidade que envolve administração de uma quantidade de uma bactéria do gênero Bifidobacterium que é eficaz no tratamento ou prevenção de obesidade a um indivíduo que exige tratamento ou prevenção de obesidade, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula: _ . _ .... (ácido linoleico conjugadoproduzido'l ...

< 26> O método de tratamento ou prevenção de obesidade de acordo com <25>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 27> O método de tratamento ou prevenção de obesidade de acordo com <26>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 28> Um método de melhoramento de tolerância à glicose que envolve administração de uma quantidade de uma bactéria do gênero Bifidobacterium que é eficaz no melhoramento de tolerância à glicose a um indivíduo que exige melhoramento de tolerância à glicose, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium exibe a taxa de conversão de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado de não mais do que 10%, a taxa de conversão sendo determinada por suspensão de células bacterianas da bactéria de gênero Bifidobacterium a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de ácido linoleico de 500 μg/mL, realizando incubação por 48 horas a 37°C, medição subsequente da quantidade de ácido linoleico conjugado produzido, e então o cálculo da taxa de conversão (%) de ácido linoleico em ácido linoleico conjugado da fórmula:

< 29> O método de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com <28>, em que a bactéria de gênero Bifidobacterium é uma Bifidobacterium breve. < 30> O método de melhoramento de tolerância à glicose de acordo com <29>, em que a Bifidobacterium breve é selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP- 11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700. < 31> Um método de tratamento ou prevenção de obesidade que envolve administração de uma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP- 11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700, em uma quantidade que é eficaz no tratamento ou prevenção de obesidade, a um indivíduo que exige tratamento ou prevenção de obesidade. < 32> Um método de melhoramento de tolerância à glicose que envolve administração de uma cepa bacteriana selecionada do grupo que consiste de Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP- 11175) e Bifidobacterium breve ATCC 15700, em uma quantidade que é eficaz no melhoramento de tolerância à glicose, a um indivíduo que exige melhoramento de tolerância à glicose.

Efeito da Invenção

[00025] A presente invenção é capaz de prover um agente antiobe- sidade e um agente de melhoramento de tolerância à glicose que são eficazes para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhoramento de tolerância à glicose e também exibem segurança superior, bem como provisão de que alimentos ou bebidas contendo esses agentes. Além disso, a presente invenção é também capaz de prover uma bactéria do gênero Bifidobacterium, e particularmente a Bifidobacterium breve, que é eficaz para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhoramento de tolerância à glicose ou resistência a insulina e também exibe segurança superior, bem como uma composição farmacêutica contendo a bactéria de gênero Bifidobacterium.

Breve Descrição dos Desenhos

[00026] Figura 1 é um gráfico que ilustra as tendências no aumento de peso de corpo para um grupo de controle e um grupo de administração de Bifidobacterium breve ATCC 15700 no exemplo de teste 2.

[00027] Figura 2 é um gráfico que ilustra as tendências no aumento de peso de corpo para um grupo de controle e um grupo de administração de Bifidobacterium breve MCC 1274 no exemplo de teste 2.

[00028] Figura 3 é um gráfico que ilustra os resultados da medição do peso de tecido adiposo epididimal no exemplo de teste 2.

[00029] Figura 4 é um gráfico que ilustra os resultados da medição do valor de HOMA-IR (Avaliação de modelo de homeostase de resistência a insulina) no exemplo de teste 2. Concretizações para a realização da invenção

[00030] Uma Bifidobacterium breve (aqui em seguida frequentemente abrevida como "B. breve") que pertence ao gênero Bifidobacterium que é usada na presente invenção é uma B. breve para a qual a taxa de conversão de ácido linoleico (LA) em ácido linoleico conjugado (CLA) (aqui em seguida também chamada da "taxa de conversão de CLA"), determinada de acordo com o procedimento descrito abaixo, não é mais do que 10%.

[00031] Células bacterianas da B. breve acima são suspensas a uma concentração de 2x107 CFU/mL em um meio líquido contendo uma concentração adicionada de LA de 500 μg/mL, e depois da incubação por 48 horas a 37°C, a quantidade de CLA produzida é medida, e a taxa de conversão de CLA (%) é determinada da fórmula abaixo. „ , ~ (quantidadede CLA produzida)

[00032] Uma "quantidade de CLA produzida" mencionada acima pode ser transferida, por exemplo, usando-se o procedimento descrito abaixo.

[00033] Primeiramente, após as 48 horas de incubação, o meio líquido exposto acima é submetido a separação por centrífuga.

[00034] O sobrenadante é recuperado, um volume de álcool isopro- pílico duas vezes que do sobrenadante é adicionado ao sobrenadante e é misturado, um volume de hexano 1,5 vezes que do sobrenadante é então adicionado à mistura, e depois de misturação por 3 minutos, a mistura é deixada se depositar e a camada de hexano é recuperada. A absorbância da camada de hexano a 233 nm é medida, e com base em uma comparação com materiais padrão (ácido cis-9, trans-11 lino- leico conjugado), a concentração de CLA (μg/mL) dentro da camada de hexano é determinada e a quantidade de CLA (μg) contida dentro do sobrenadante acima é calculada.

[00035] Entretanto, ao resíduo deixado após a recuperação do so- brenadante é adicionada e é misturada uma quantidade de água destilada 5 vezes que do resíduo, assim formando uma suspensão. Um volume de álcool isopropílico duas vezes que da suspensão é adicionado à suspensão e é misturado, um volume de hexano 1,5 vezes que da suspensão é então adicionado à mistura, e depois de misturação por 3 minutos, a mistura é deixada se depositar e a camada de hexano é recuperada. A concentração de CLA (μg/mL) dentro da camada de hexano é determinada do mesmo modo que aquela descrita acima, e a quantidade de CLA (μg) contida dentro do resíduo é calculada.

[00036] O total das quantidades de CLA contidas dentro do sobrena- dante e o resíduo é registrado como a "quantidade de CLA produzida".

[00037] O meio líquido pode ser qualquer meio capaz de cultivar B. breve, e pode ser selecionado aproximadamente de meio líquido convencional. Exemplos específicos incluem o meio de MRS (de Man Ro- gossa Sharpe), de ABCM (meio de cultura bacteriana anaeróbica) e meio de RCA (Ágar clostridial reforçado).

[00038] A descrição exposta acima descreve um exemplo em que ácido cis-9, trans-11 linoleico conjugado é usado como o material padrão, mas as quantidades calculadas de CLA são substancialmente as mesmas mesmo se um isômero diferente tal como ácido trans-10, cis- 12 linoleico conjugado for usado.

[00039] A taxa de conversão de CLA é um indicador da magnitude da função da conversão de CLA (a capacidade de converter LA em CLA) prosseguiu pela B. breve.

[00040] B. breve que exibe a taxa de conversão de CLA de não mais do que 10% (aqui em seguida também chamada de "B. breve de baixa conversão de CLA") tem uma ação de antiobesidade que não depende do CLA.

[00041] Uma "ação de antiobesidade" descreve uma ação que previne ou melhora obesidade por supressão do ganho de peso e/ou supressão de aumentos na gordura no corpo.

[00042] Na presente invenção, o termo "obesidade" não se refere apenas ao estado simples de ter um grande peso de corpo, mas também a um estado em que a proporção de tecido adiposo entre os componentes estruturais do corpo é de modo anormal grande.

[00043] Em anos recentes foi relatado que, em termos do acúmulo de gordura subcutânea e gordura visceral, obesidade de gordura visceral, em que a gordura se acumula entre os órgãos, devem mais provavelmente estar associados a doenças de adulto tal como pressão alta de sangue, hiperlipidemia e diabetes então obesidade de gordura subcutânea, em que a gordura se acumula dentro do tecido subcutâneo. Como ilustrado no exemplo de teste 2 abaixo, B. breve de baixa conversão de CLA tem um efeito de inibição no aumento de peso de corpo, e em particular, tem um efeito de inibição do acúmulo da gordura visceral. Correspondentemente, alimentos e bebidas contendo o agente antiobesidade e agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção são eficazes na prevenção e no tratamento das doenças expostas acima.

[00044] Além do mais, uma vez que B. de baixa conversão de CLA tem uma capacidade limitada de converter LA em CLA, há perigo mínimo dos efeitos colaterais causados por CLA tal como atrofia do tecido adiposo, aumento no nível de insulina, e redução na tolerância à glicose. Em outras palavras, se, com revelado no Documento 5 não patentário mencionado acima, a quantidade de ingestão média de LA pela pessoa japonesa é cerca de 11 g, e a taxa de conversão de CLA é alta, então LA é convertido em CLA in vivo, e há perigo considerável de efeitos colaterais causados por CLA, mas porque a B. breve usada na presente invenção tem uma baixa taxa de conversão de CLA, é su-posto que efeitos colaterais causados por CLA não ocorrerão, tornando o tratamento extremamente seguro.

[00045] Correspondentemente, o agente antiobesidade da presente invenção pode ser ingerido de modo seguro, e por combinação do agente antiobesidade em um alimento ou bebida, e então administração de uma quantidade eficaz do alimento ou bebida a um paciente obeso ou um ser humano saudável ou animal de estimação que tem necessidade da dieta, ou com uma base de dia a dia ou durante um período prolongado se necessário, uma ação de antiobesidade pode ser realize?

[00046] Além disso, B. breve de baixa conversão de CLA não causa tolerância anormal a glicose, que é um dos efeitos colaterais conhecidos de CLA, e como ilustrados no exemplo de teste 2 abaixo, realmente tem a tolerância a ação de melhoramento de glicose e uma ação de melhoramento de resistência a insulina.

[00047] Correspondentemente, o agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção pode ser ingerido de modo seguro, e por combinação do agente de melhoramento de tolerância à glicose em um alimento ou bebida, e então administração de uma quantidade eficaz do alimento ou bebida a um paciente diabético ou um animal de estimação ou ser humano saudável tem necessidade de tolerância à glicose melhoramento, ou com base de dia a dia ou durante um período prolongado se necessário, a tolerância a ação de melhoramento de glicose e uma ação de melhoramento de resistência a insulina pode ser realizada.

[00048] A B. breve de baixa conversão de CLA usada na presente invenção pode ser qualquer B. breve para a qual a taxa de conversão de CLA não é mais do que 10%, e, por exemplo, uma nova cepa de B. breve isolada e identificada de uma amostra tal como as fezes de uma criança humana ou uma cepa de B. breve convencional pode ser submetida a medição da taxa de conversão de CLA usando-se o procedimento descrito acima, e qualquer cepa para a qual a taxa de conversão medida é de 10% ou menos pode ser selecionada apropriadamente. Exemplos de cepas de B: breve de baixa conversão de CLA incluem B. breve MCC 1274 e B. breve ATCC 15700.

[00049] B. breve MCC 1274 é uma cepa bacteriana que pertence ao gênero Bifidobacterium que foi adquirida e foi identificada pelos requerentes da presente invenção usando-se o procedimento delineado abaixo, e foi depositada com o International Patent Organism Depositary of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Central 6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, Japão (código de área: 305-8566)) em 25 de agosto de 2009 (número de acesso: FERM BP-11175). (Aquisição e identificação de B. breve MCC 1274)

[00050] Usando-se fezes oriunda de criança japonesa? como uma amostra, a amostra foi diluída com um diluente anaeróbico (um diluen- te revelado na pág. 322 de "Chounaikin no Sekai" [The World of Enteric Bacteria] (por Tomotari Mitsuoka, publicado por Soubunsha Co., Ltd., 1980), aplicado a uma placa plana de um meio de ágar de BL (revelado na pág. 319 de "Chounaikin no Sekai"), e então anaerobica- mente incubado a 37°C por 72 horas. Entre as colônias resultantes, aquelas cepas que exibiam características morfológicas de uma Bifidobacterium, eram Gram positivas, e exibiam uma célula bacteriana de forma em vara, de forma em taco ou de forma em Y quando uma espécie aplicada foi observada sob um microscópio foram coletadas e foram aplicadas em linhas a um meio de ágar de BL, e incubação ana- eróbica foi então repetida usando-se o mesmo método que aquele descrito acima para se obter as cepas bacterianas isoladas puras. A cepa bacteriana mencionada acima foi chamada B. breve MCC 1274.

[00051] As propriedades bacteriológicas de B. breve MCC 1274 foram investigadas, incluindo a forma de célula, motilidade, formação de esporo, manchamento de Gram, atividade de catalase, produção de gás a partir da glicose, e fermentação de açúcares. Avaliação da fermentação de açúcares foi realizada usando-se um kit de API 50CH (fabricado pela bioMerieux, Japão), com determinações feitas de acordo com o método revelado no manual provido com o kit. Em outras palavras, após a incubação de um dia para o outro, o líquido bacteria- no foi usado para inocular cada um dos substratos, os substratos fo- ram então incubados a 37°C dentro de uma caixa de luva anaeróbica, e no sétimo dia de incubação, o estado de fermentação de açúcar de cada um dos substratos foi determinado. Os resultados são mostrados na Tabela 1. Tabela 1

[00052] Subsequentemente, a fim de investigar características genéticas de B. breve MCC 1274, a sequenciação de base genética de 16S rRNA da cepa bacteriana exposta acima foi identificada usando- se métodos convencionais. Determinação da sequência de base genética de 16S rRNA de B. breve MCC 1274 usando-se análise de BLAST para realizar uma busca de homologia da sequência de base dentro da base de dados do centro nacional U.S. para a informação de biotecnologia (NCBI) revelou 99% de homologia com a cepa de B. breve padrão conhecida como B. breve CM 1192T, indicando a cepa era uma Bifidobacterium breve.

[00053] Os resultados acima confirmaram que Bifidobacterium breve MCC 1274 tinha as propriedades bacteriológicas de uma Bifidobacterium breve, e era uma cepa bacteriana que pertence à espécie Bifidobacterium breve.

[00054] A B. breve de baixa conversão de CLA que o agente antio- besidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção inclui como um ingrediente ativo pode ser uma única cepa bacteriana ou duas ou mais cepas.

[00055] Além disso, o agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção pode ser composto unicamente pelo ingrediente ativo acima mencionado, ou pode ser uma composição ou uma composição farmacêutica contendo o ingrediente ativo e outros componentes opcionais além do ingrediente ativo. Não há limitações particulares nesses componentes opcionais com a condição que eles sejam farmaceuticamente aceitáveis, e qualquer um dos aditi-vos (tais como os veículos farmacêuticos descritos abaixo) tipicamente adicionados a composições farmacêuticas podem ser incluídas.

[00056] A presente invenção provê um método de tratamento ou prevenção de obesidade que envolve administração de uma B. breve de acordo com a presente invenção, em uma quantidade que é eficaz no tratamento ou prevenção de obesidade, a um indivíduo que exige tratamento ou prevenção de obesidade.

[00057] Além disso, a presente invenção também provê um método de melhoramento de tolerância à glicose que envolve administração de uma B. breve de acordo com a presente invenção, em uma quantidade que é eficaz no melhoramento de tolerância à glicose, a um indivíduo que exige melhoramento de tolerância à glicose.

[00058] Nessa descrição, "tratamento" de obesidade refere-se à administração do agente antiobesidade da presente invenção para a finalidade de redução ou manutenção do peso de corpo de um indivíduo. Um resultado possível desse tratamento pode ser uma redução no peso de corpo do indivíduo em comparação com o peso de corpo do indivíduo imediatamente antes do início de administração do agente antiobesidade da presente invenção. Além disso, um outro resultado possível do tratamento pode ser uma supressão do aumento no peso de corpo do indivíduo em comparação com o aumento do peso de corpo do indivíduo imediatamente antes do início de administração do agente antiobesidade da presente invenção.

[00059] Além do mais, "prevenção" de obesidade refere-se à admi-nistração do agente antiobesidade da presente invenção para a finalidade de redução ou manutenção do peso de corpo de um indivíduo em risco de obesidade. Um resultado possível dessa prevenção pode envolver a manutenção ou redução do peso de corpo do "indivíduo em risco de obesidade" em comparação com o peso de corpo do indivíduo imediatamente antes do início de administração do agente antiobesi- dade da presente invenção. Além disso, um outro resultado possível da prevenção pode ser uma supressão do aumento no peso de corpo do indivíduo em comparação com o aumento de peso de corpo do indivíduo imediatamente antes do início de administração do agente an- tiobesidade da presente invenção.

[00060] Nessa descrição, "melhoramento" da tolerância à glicose refere-se à administração do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção para a finalidade de manutenção ou melhoramento da tolerância à glicose de um indivíduo. Um resultado possível desse melhoramento de tolerância à glicose pode envolver manutenção ou melhoramento da tolerância à glicose do indivíduo em comparação com a tolerância à glicose do indivíduo imediatamente antes do início de administração do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção. Além disso, um outro resultado possível do melhoramento de tolerância à glicose pode ser uma supressão de qualquer diminuição na tolerância à glicose do indivíduo em comparação com a tolerância à glicose do indivíduo imediatamente antes do início de administração do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção.

[00061] "Administração" do agente antiobesidade ou do agente de melhoramento de tolerância à glicose, ou "administração" do agente antiobesidade ou do agente de melhoramento de tolerância à glicose descreve o fornecimento do agente antiobesidade ou do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção a um indi-víduo necessitando tratamento, prevenção ou melhoramento.

[00062] Nessa descrição, um "indivíduo" que necessita tratamento, prevenção ou melhoramento é um animal que é o indivíduo de um tra-tamento, prevenção, melhoramento, observação ou experiência, e é de preferência um mamífero, e mais de preferência um ser humano.

[00063] Um "indivíduo" que exige tratamento, prevenção ou melho-ramento descreve um indivíduo que necessita um método de tratamento, prevenção ou melhoramento prescrito por um pesquisador, veterinário, doutor médico ou outro clínico.

[00064] A rota de administração do agente antiobesidade ou agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção pode ser ou oral ou parenteral, mas é de preferência oral. Exemplos de adminis-tração parenteral incluem administração transretal e semelhantes.

[00065] Não há nenhuma limitação particular na dose do agente antiobesidade ou do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção, e a dose pode ser determinada apropriadamente de acordo com o efeito de antiobesidade desejado ou efeito de me-lhoramento de tolerância à glicose, com devida consideração da ação de antiobesidade ou tolerância a ação de melhoramento de glicose da B. breve de baixa conversão de CLA sendo usada e a rota de adminis-tração.

[00066] Por exemplo, naqueles casos onde B. breve MCC 1274 e/ou B. breve ATCC 15700 é usada como o ingrediente ativo e administração é realizada oralmente, a dose diária usual que é eficaz para o tratamento ou prevenção de obesidade ou o melhoramento de tolerância à glicose,::calculada como a contagem bacteriana por 1 kg de peso de corpo (CFU/kg de peso de corpo), é de preferência 1xio6 CFU/kg peso de corpo ou maior, e é mais de preferência 1xio8 CFU/kg ou maior.

[00067] O agente antiobesidade ou o agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção pode ser administrado em uma única dose diária, ou administrado em uma pluralidade de ocasiões.

[00068] O agente antiobesidade ou o agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção pode ser produzido em qualquer foram de dosagem predeterminada de acordo com o método de administração a ser usado.

[00069] Exemplos da forma de dosagem do agente antiobesidade ou do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção, no caso de administração oral, incluem formulações sólidas tais como pós, grânulos, comprimidos e cápsulas e formulações líquidas tais como xaropes, suspensões e emulsões. Além disso, no caso de administração parenteral, exemplos da forma de dosagem incluem supositórios, pomadas e sprays.

[00070] Produção dessas formulações pode ser conduzida usando- se métodos convencionais, de acordo com a forma de dosagem.

[00071] Durante a produção, a formulação podem ser composto unicamente do ingrediente ativo, ou pode também incluir um veículo farmaceuticamente apropriado.

[00072] Naqueles casos onde um veículo farmacêutico é adicionado, não há nenhuma limitação particular na quantidade de combinação do ingrediente ativo dentro do agente antiobesidade ou do agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção, e essa quantidade pode ser determinada aproximadamente de acordo com a forma de dosagem, tal como um pó, comprimido ou cápsula. O teor bacteriano está tipicamente dentro de uma faixa de 1x106 a ixio12 CFU/g, é de preferência de 1xio8 a ixio12 CFU/g, e é mais de preferência de 1x1010 a 1x1012 CFU/g.

[00073] Como o veículo farmacêutico, qualquer veículo inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável pode ser usado, dependendo da forma de dosagem.

[00074] Por exemplo, no caso de formulações sólidas, exemplos do veículo incluem excipientes, aglutinantes, desintegrantes, lubrificantes, estabilizadores e agentes corretivos e semelhantes.

[00075] Exemplos dos excipientes incluem derivados de açúcar tais como lactose, sacarose, glicose, manitol e sorbitol, derivados de amido tais como amido milho, amido de batata, α-amido, dextrina e amido carboximetila, derivados de celulose tais como celulose cristalina, hi- droxipropil celulose, hidroxipropilmetil celulose, carboximetil celulose e carboximetilcelulose cálcica, bem como goma arábica, dextrano, pulu- lano, derivados de silicato tais como ácido silícico anidro leve, silicato de alumínio sintético e aluminometassilicato de magnésio, derivados de fosfato tal como fosfato de cálcio, derivados de carbonato tal como carbonato de cálcio e derivados de sulfato tal como sulfato de cálcio.

[00076] Exemplos dos aglutinantes incluem, além dos excipientes mencionados acima, gelatina, polivinilpirrolidona e magrogol.

[00077] Exemplos dos desintegrantes incluem, além dos excipien- tes mencionados acima, amido quimicamente modificado ou derivados de celulose tais como as croscarmelose sódica, amido de carboximeti- la sódica e polivinil pirrolidona reticulada.

[00078] Exemplos dos lubrificantes incluem talco, ácido esteárico, estearatos de metal tais como estearato de cálcio e estearato de mag-nésio, sílica coloidal, ceras tais como goma de cera e cera de esper-maceti, ácido bórico, glicol, ácidos carboxílicos tais como ácido fumári- co e ácido adípico, carboxilatos de sódio tal como benzoato de sódio, sulfatos tais como sulfato de sódio, leucina, sulfatos de laurila tais como sulfato de laurila de sódio e sulfato de laurila de magnésio, silicatos tais como as anidrido de ácido salicílico e hidrato de ácido salicílico, e derivados de amido.

[00079] Exemplos dos estabilizadores incluem ésteres de ácido pa- ra-hidroxibenzóico tais como metilparabeno e propilparabeno, álcoois tais como clorobutanol, álcool benzílico e álcool defeniletila, cloreto de benzalcônio, anidrido acético e ácido sórbico.

[00080] Exemplos dos agentes corretivos? Incluem adoçantes, aci- dulantes e fragrâncias.

[00081] No caso de formulações líquidas para a administração oral, exemplos do veículo incluem solventes tais como água, e agentes cor-retivos?.

[00082] O agente antiobesidade ou o agente de melhoramento de tolerância à glicose da presente invenção pode ser adicionado a qualquer um dos vários produtos farmacêuticos, gêneros alimentícios ou produtos nutricionais ou semelhantes.

[00083] Um alimento ou uma bebida antiobesidade da presente invenção contém o agente antiobesidade da presente invenção descrito acima. Por ingestão do alimento antiobesidade ou bebida, um efeito similar é obtido àquele alcançado pela administração do agente antio- besidade da presente invenção.

[00084] O alimento antiobesidade ou a bebida da presente invenção é também eficaz para a aparência ou dieta por supressão de aumentos na gordura no corpo ou redução de gordura no corpo.

[00085] Embora não haja nenhuma limitação particular na quantidade do agente antiobesidade dentro do alimento antiobesidade ou bebida da presente invenção, uma quantidade que permite uma dose diária da B. breve de baixa conversão de CLA que provê um efeito de antiobesidade eficaz a ser ingerida sem qualquer dificuldade particular é preferida, e a quantidade da B. breve de baixa conversão de CLA está tipicamente dentro da faixa de 1x106 a ixio12 CFU/g, é de preferência de 1x108 a ixio12 CFU/g, e é mais de preferência de lxio10 a 1x1012 CFU/g.

[00086] O alimento antiobesidade ou bebida da presente invenção pode ser produzido usando-se o agente antiobesidade e outros componentes aceitáveis para a inclusão dentro do alimento e bebidas como matérias primas, ou pode ser produzido por adição do agente anti- obesidade da presente invenção a um alimento ou bebida existente contendo outros componentes.

[00087] Por exemplo, se o alimento antiobesidade ou bebida da presente invenção for um produto de leite fermentado, então o alimento ou bebida de antiobesidade pode ser produzido por adição de uma a B. breve de baixa conversão de CLA em um leite fermentado, ou pode ser um leite fermentado produzido por uso da B. breve de baixa conversão de CLA como um iniciador.

[00088] Não há nenhuma limitação particular sobre os outros com- ponentes incluídos dentro do alimento ou bebida, com a condição de que os componentes fossem aprovados para adição a alimentos e bebidas em regulações de alimento tal como Food Sanitation Act, e não prejudicam a ação de antiobesidade. Exemplos de componentes que podem ser incluídos dentro do alimento ou bebida incluem açúcares tais como dextrina e amido, proteínas tais como gelatina, proteína de soja, e proteína de milho, aminoácidos tais como alanina, glutamina e isoleucina, polissacarídeos tais como celulose e goma arábica, e óleos e gorduras tais como óleo de soja e triglicerídeos de ácido graxo de cadeia média.

[00089] Não há nenhuma limitação particular na forma do alimento ou bebida, que inclui qualquer forma de composição comestível composta da B. breve de baixa conversão de CLA e um veículo que é aceitável para inclusão dentro dos alimento e bebidas. Exemplos específicos incluem a totalidade de modos de formas de alimento e bebida, incluindo alimentos sólidos tais como pão, goma de mascar, cookies, chocolate, artigo de confeitaria e cereais, alimentos à base de geleia, à base de creme e à base de gel tais como geleia, sorvete, iogurte e gelatina, e bebidas tais como sucos, café e chocolate. Além disso, a B. breve de baixa conversão de CLA pode também ser adicionada a aromatizantes e aditivos de alimento e semelhantes.

[00090] Naqueles casos onde o bebida ou alimento antiobesidade da presente invenção é um produto de leite fermentado produzido usando-se a B. breve de baixa conversão de CLA como um iniciador, a B. breve de baixa conversão de CLA pode ser usado sozinho durante a fermentação, ou uma incubação mista pode ser realizada usando-se a B. breve de baixa conversão de CLA e um outro iniciador.

[00091] Exemplos desses outros iniciadores incluem aqueles iniciadores tipicamente usados na produção de produtos de leite fermentados, tais como outras bactérias do gênero Bifidobacterium (tais como a Bifidobacteria: B. pseudocatenulatum, B. catenulatum, B. bifidum, B. longum, B. infantis e B. adolescentis), e outras bactérias de ácido láctico convencionais usadas como iniciadores para produtos de leite fer-mentados. Exemplos específicos dessas bactérias de ácido láctico in-cluem Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei e Lactobacillus gasseri.

[00092] O leite fermentado pode ser produzido usando-se um método convencional. Um exemplo de um método de produção de um leite fermentado é delineado abaixo.

[00093] Em primeiro lugar, uma mistura da matéria prima contendo o leite da matéria prima é preparada. Além do leite da matéria prima, a mistura da matéria prima pode também conter outros componentes tais como óleos e gorduras, açúcares e água, de acordo com a necessidade. Por exemplo, uma matéria prima contendo gordura tal como manteiga ou creme pode ser adicionado como um componente de gordura. Exemplos de açúcares que podem ser adicionados incluem adoçantes típicos tais como sacarose, maltose, glicose, frutose, dextrina e maltose reduzida. Naqueles casos onde um iogurte duro deve ser produzido, gelatina pré-intumescida e/ou uma solução de ágar dissolvida podem ser adicionadas. Naqueles casos onde um iogurte mole deve ser produzido, proteína de soro de leite e/ou um espessante de polissacarídeo podem ser adicionados. Naqueles casos onde um iogurte de bebida deve ser produzido, pectina de alto teor de metoxila pode ser adicionada em uma quantidade de 0 a 0,3% por massa como um estabilizador, embora seja preferível que absolutamente nenhuma pectina de alto teor de metoxila seja adicionada.

[00094] Não há nenhuma limitação particular no método usado para a produção da mistura da matéria prima, e por exemplo, os outros com-ponentes que estão incluídos de acordo com a necessidade podem ser adicionados ao leite da matéria prima, e a mistura resultante então é agitada e é misturada para se obter a mistura da matéria prima.

[00095] A razão de combinação do leite da matéria prima dentro da mistura da matéria prima, calculada como uma fração sólida de não gordura, está de preferência dentro de uma faixa de 1 a 15% por massa, e mais de preferência de 8 a 15% por massa.

[00096] Subsequentemente, a mistura da matéria prima é submetida a um tratamento de esterilização térmico. Embora não haja nenhuma limitação particular sobre o método de esterilização ou as condições de aquecimento, uma temperatura de aquecimento de 80 a 140°C é preferida, e o tempo de aquecimento está de preferência dentro de uma faixa de 5 a 15 minutos no caso de um tratamento de carga, ou dentro de uma faixa de 2 segundos a 15 minutos no caso de um método de HTST.

[00097] A mistura da matéria prima esterilizada por calor é então inoculada com as bactérias de iniciador, e fermentação é realizada. As condições de fermentação, incluindo a quantidade do iniciador usado para a inoculação, a temperatura de fermentação e o tempo de fer-mentação podem ser ajustados aproximadamente de acordo com fatores tal como o tipo de iniciador empregado, e a variedade e propriedades do produto de leite fermentado sendo produzidas. Dependendo da forma do produto, após a inoculação com o iniciador, a mistura pode ser colocada dentro de um recipiente para a fermentação, ou a fermentação pode ser conduzida em um tanque de fermentação.

[00098] Após a fermentação, a mistura é resfriada rapidamente para se obter o produto de leite fermentado. Dependendo do tipo de produto e das propriedades de produto, de uma etapa de homogeneização do produto após o resfriamento, ou de uma etapa de adição de outras matérias primas tais como aromatizantes após o resfriamento pode ser realizado.

[00099] O leite fermentado obtido desse modo pode ser usado, sem outra esterilização por calor, como um produto de tipo bactéria viva que permite ingestão da bifidobactérias vivas. Produtos de tipo bactérias vivas são armazenadas e são comercializadas em uma temperatura baixa de não mais do que 10°C, e de preferência uma temperatura de 0 a 5°C.

[000100] A bebida ou alimento antiobesidade de acordo com a presente invenção é de preferência comercializada como um alimento ou bebida que indica seu uso para aplicações de antiobesidade, por exemplo, por emprego da expressão "antiobesidade" ou "alimento (ou bebida) tendo um efeito de antiobesidade".

[000101] Seria observado que a expressão usada para o tipo de indi-cação descrita acima não é limitada à frase "antiobesidade", e é des-necessário dizer, quaisquer outras expressões que indicam um efeito de antiobesidade estão incluídos dentro do escopo da presente invenção. Exemplos de tais outras expressões podem incluir "efeito de prevenção de obesidade", "efeito de aperfeiçoamento de obesidade", "efeito de supressão de aumento de peso", "efeito de supressão de aumento de gordura no corpo" ou "efeito de dieta", e o alimento ou bebida pode ser comercializado com uma ou mais dessas expressões indicadas no produto.

[000102] Além disso, de um modo similar, o alimento ou bebida pode também ser comercializado como um alimento ou bebida que indicada seu uso na prevenção e/ou melhoramento de doenças do estilo de vida para as quais obesidade é uma causa conhecida, tal como hiperli- pidemia, pressão alta de sangue e diabetes.

[000103] O alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose de acordo com a presente invenção é de preferência comercia-lizado como um alimento ou bebida que publicamente indica seu uso para o melhoramento de tolerância à glicose, por exemplo, por emprego da expressão "para melhoramento de tolerância à glicose" ou "ali- mento (ou bebida) tendo um efeito de melhoramento de tolerância à glicose".

[000104] Seria observado que a expressão usada para o tipo de indi-cação descrita acima não é limitada à frase "para melhoramento de tolerância à glicose", e é desnecessário dizer, quaisquer outras ex-pressões que indicam um efeito de melhoramento de tolerância à glicose estão também incluídos dentro do escopo da presente invenção.

[000105] Além disso, de um modo similar, o alimento ou bebida pode também ser comercializado como um alimento ou bebida que indica seu uso na prevenção e/ou melhoramento de doenças do estilo de vida para as quais uma redução na tolerância à glicose ou resistência a insulina é uma causa conhecida, tais como diabetes e outras doenças do estilo de vida.

[000106] A ação associada ao termo exposto acima "indicar" inclui todas as ações para a informação de consumidores sobre o uso descrito acima, e quaisquer exibições de consumidores restantes do uso descrito acima ou permitindo que consumidores reconheçam o uso descrito acima por analogia caiam dentro do escopo da "indicação" de acordo com a presente invenção, sem restrição da finalidade da indicação, cujo conteúdo da indicação, ou objetivo ou meio ou semelhantes da indicação. No entanto, a indicação é de preferência dada usando-se uma expressão que permite que consumidores diretamente reconheçam o uso mencionado acima. Exemplos específicos da indicação incluem ações de indicação do uso mencionado acima nos produtos comerciais com relação ao alimento ou bebida de acordo com a presente invenção ou embalagens dos produtos comerciais, ações de distribuição, fornecimento, exibição para a finalidade de distribuição ou fornecimento, ou de modo importante dos produtos comerciais ou suas embalagens com uma indicação indicando o uso descrito acima, e ações de indicação do uso descrito acima nas propagandas, listas de preço ou papéis comerciais com relação aos produtos por exibição ou distribuição deles, ou indicação do uso dentro da informação incluindo tais pro-pagandas, listas de preço ou papéis comerciais e provisão de que a in-formação por um método eletromagnético (tal como a Internet).

[000107] O conteúdo da indicação (conteúdo indicado) é de preferência aprovado pelo governo ou semelhantes do país em questão (por exemplo, uma indicação em uma forma com base em uma aprovação concedida com base em qualquer um dos vários sistemas estabelecidos pelo governo daqueles países), e tal conteúdo indicado é de preferência ligado a embalagens, recipientes, catálogos, meios de anúncio usados nos sítios de venta tais como panfletos e POPs, e outros documentos.

[000108] Além do mais, outros exemplos da indicação incluem indicações como uma alimento saudável, alimento funcional, alimento enteral, alimento para uso de dieta especial, alimento com reivindicações de saúde, alimento para os usos saudáveis especificados, alimento com reivindicações funcionais de nutriente, e quase-fármaco. Particularmente no caso de Japão, outros exemplos incluem indicações aprovadas pelo Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-estar, tais como indicações aprovadas com base no sistema alimentício para os usos saudáveis especificados e outros sistemas similares. Exemplos do últimos incluem indicações como alimento para usos saudáveis especificados, indicações como alimento qualificado para usos saudáveis especificados, in-dicações da influência sobre as estruturas ou funções do corpo, e indi-cações de redução nas reivindicações de risco de doença. Mais especi-ficamente, seus exemplos típicos incluem indicações como alimento para usos saudáveis especificados (especialmente, indicações do uso para a saúde) prescritos na regulações da aplicação da Lei de Promoção de Saúde (Ministerial ordinance No. 86, Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-estar, Japão, 30 de abril de 2003) e indicações similares.

Exemplo

[000109] A presente invenção é descrita em mais detalhes abaixo usando-se uma série de exemplos de teste e exemplos, mas a presente invenção é de maneira alguma limitada pelos seguintes exemplos.

Exemplo de teste 1: Medição da taxa de conversão de CLA

[000110] Células bacterianas de B. breve (MCC 1274 ou ATCC 15700) a uma concentração de 2*107 CFU/mL foram suspensas em um caldo de meio de MRS (MRS (de Man Rogossa Sharpe), um produto de Difco (marca registrada), fabricada pela Becton Dickinson and Company) contendo uma concentração adicionada de LA of 500 μg/mL, e o meio foi então incubado por 48 horas a 37°C.

[000111] Subsequentemente, o sobrenadante foi recuperado, um volume de álcool isopropílico duas vezes que do sobrenadante foi adicionado ao sobrenadante foi misturado, um volume de hexano 1,5 vezes que do sobrenadante foi então adicionado à mistura, e depois de mis- turação para 3 minutos, a mistura foi deixada se depositar e as camadas de hexano foram recuperadas. A absorbância da camada de hexano a 233 nm foi medida, e usando-se uma curva de calibração preparada usando-se materiais padrão (ácido cis-9, trans-11 linoleico conjugado), a concentração de CLA (μg/mL) dentro da camada de hexano foi determinada e a quantidade de CLA (μg) contida dentro do sobre- nadante acima foi calculada.

[000112] Entretanto, ao resíduo deixado após a recuperação do so- brenadante foi adicionada e foi misturada uma quantidade de água destilada 5 vezes que do resíduo, assim formando uma suspensão. Um volume de álcool isopropílico duas vezes que da suspensão foi adicionado à suspensão e é misturada, um volume de hexano 1,5 vezes que da suspensão foi então adicionado à mistura, e depois de mis- turação para 3 minutos, a mistura foi deixada se depositar e a camada de hexano foi recuperada. A concentração de CLA (μg/mL) dentro da camada de hexano foi determinada do mesmo modo que aquela descrita acima, e a quantidade de CLA (μg) contida dentro do resíduo foi calculada.

[000113] O total das quantidades de CLA contidas dentro do sobre- nadante e o resíduo foi registrado como a "quantidade de CLA produ-zida", e a taxa de conversão (%) de LA em CLA foi determinada da fórmula abaixo. Os resultados são mostrados na Tabela 2.

[000114] Como mostrado pelos resultados abaixo, as duas cepas (MCC 1274 e ATCC 15700) ambas exibiam as taxas de conversão de CLA de 10% ou menos. Tabela 2

Exemplo de teste 2: Investigação dos efeitos de Administração de Baixa conversão de CLA de B. breve em camundongos de modelo tendo obesidade induzida por dieta

[000115] 18 camundongos manchos C57BL/6J foram usados, com 6 camundongos agrupados em cada um de três grupos. Depois da ad-ministração de um dieta de alto teor de gordura de 45% durante um período de 4 semanas para tornar obeso camundongos, 10% de um pó de leite desnatado foi misturado com o alimento de um grupo de controle, 10% de um pó de leite desnatado contendo a cepa bacteria- na MCC 1274 suspensa ali foi misturada com o alimento de um grupo de administração de MCC 1274, e 10% de um pó de leite desnatado contendo a cepa bacteriana ATCC 15700 suspensa ali foi misturada com o alimento de um grupo de administração de ATCC 15700, e cada grupo foi alimentado por umas outras 8 semas. Nesse momento, a quantidade do MCC 1274 ou ATCC 15700 adicionada ao leite em pó por suspensão ali foi ajustada de modo que a quantidade da B. breve ingerida por dia era cerca 1 bilhão bactérias por camundongo. Além disso, um alimento contendo 22% por massa de ácidos graxos (da qual a quantidade de ácido linoleico era cerca 3,1% por massa) foi usado como o alimento.

[000116] Durante o período de teste, apenas o peso de corpo de cada camundongo foi medido, e então após a conclusão do teste, os camundongos foram mortos e foram dissecados, e o peso de corpo e o peso do tecido adiposo epididimal foram medidos.

[000117] As tendências no aumento de peso de corpo durante o período de teste são mostradas nas figura 1 e figura 2. Os resultados nas figura 1 e figura 2 revelam que embora o peso de corpo aumentasse em todos os grupos, em comparação com o grupo de controle, os 2 grupos que foram administrados com o MCC 1274 ou ATCC 15700 exibiam supressão significativa do aumento no peso de corpo (em comparação com o grupo de controle, o peso de corpo nos grupos de teste diminuiu por cerca 18% ou mais, indicando uma diferença significativa a p<0,05).

[000118] Além disso, o peso de tecido adiposo epididimal na dissecação é mostrado na figura 3. Os resultados na figura 3 revelam um peso de tecido adiposo epididimal na dissecação 2,66 g para o grupo de controle, 2,17 g para o grupo de administração de MCC 1274, e 2,32 g para o grupo de administração de ATCC 15700, confirmando que o MCC 1274 e o ATCC 15700 suprimiam aumentos no peso de adipose (em comparação com o grupo de controle, o peso de tecido adiposo diminuiu por 18,4% no grupo de MCC 1274 e 12.8% no grupo de ATCC 15700, que têm diferenças significativas a p<0,05).

[000119] Com base nos resultados acima estava claro que as cepas bacterianas B. breve MCC 1274 e B. breve ATCC 15700 tinham uma ação de antiobesidade, incluindo uma ação de supressão de aumento de peso de corpo e uma ação de supressão de aumento de gordura no corpo, e em particular, eram capazes de suprimir aumentos no (acúmulo de) gordura no corpo.

[000120] Além do mais, na hora de dissecação, o nível de insulina no sangue e o nível de açúcar no sangue eram também medidos por mé-todos convencionais, e dos valores de medição resultantes, o valor de HOMA-IR, que age como um indicador de resistência a insulina, foi calculado usando-se a fórmula numérica (1) abaixo.

[000121] Como mostrado na figura 4, os resultados revelaram um valor de 32,10 para o grupo de controle, um valor de 11,87 para o grupo de administração de MCC 1274, e um valor de 10,55 para o grupo de administração de ATCC 15700, confirmando que B. breve MCC 1274 e ATCC 15700 exibiam melhoramento de tolerância à glicose e melhoramento de resistência a insulina. (uma diferença significativa a p<0,05 em comparação com o grupo de controle).

[000122] A partir dos resultados acima era evidente que a B. breve não estava apenas livre dos efeitos colaterais associados a ácido lino- leico conjugado, mas também melhoraram a tolerância à glicose e a resistência a insulina.

[000123] Como indicado pelos resultados acima, B. breve de baixa conversão de CLA tendo a taxa de conversão de CLA de não mais do que 10% exibia uma ação de antiobesidade, incluindo uma ação de supressão de aumento de peso de corpo e uma ação de supressão de aumento gordura no corpo, em camundongos com obesidade induzida por dieta.

[000124] No Exemplo de teste 2 exposto acima, se for admitida que o LA (3.1%) dentro do alimento foi convertida em CLA pela B. breve de baixa conversão de CLA, então a quantidade de CLA dentro do alimento não seria mais do que 0,3%. A fim de alcançar um efeito de an- tiobesidade ou uma redução na gordura no corpo devido a CLA nos camundongos obesos induzidos por dieta, pelo menos 0,5% de CLA deve ser misturado com o alimento (vide o Documento 5 não patentá- rio), e considerando-se esse fato, a B. breve de baixa conversão de CLA exibe uma ação de antiobesidade que é independente de CLA. Exemplo 1: Formulação em pó

[000125] Um meio de leite em pó desnatado reconstituído (contendo 13% em peso de pó de leite desnatado e 0,5% em peso de um extrato de levedura) foi esterilizado a 95°C por 30 minutos. Subsequentemente, o meio foi inoculado com uma cultura de semeadura de B. breve ATCC 15700 e então foi incubado por 16 horas a 37°C. O produto incubado resultante foi seco por congelamento para se obter uma formulação em pó de B. breve ATCC 15700. A contagem bacteriana de B. breve ATCC 15700 contida dentro da formulação em pó obtida era de 8,5x1010 CFU/g.

[000126] Essa formulação em pó pode ser usada, sem outra modificação, dentro de um agente antiobesidade, bebida ou alimento antio- besidade, agente de melhoramento de tolerância à glicose ou alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose de acordo com a presente invenção.

Exemplo 2: Formulação em pó

[000127] Com a exceção de usando-se B. breve MCC 1274 ao invés da B. breve ATCC 15700, a formulação em pó foi preparada do mesmo modo que Exemplo 1. A contagem bacteriana de B. breve MCC 1274 contida dentro da formulação em pó obtida era de 5,5x1010 CFU/g.

[000128] Essa formulação em pó pode ser usada, sem outra modificação, dentro de um agente antiobesidade, bebida ou alimento antio- besidade, agente de melhoramento de tolerância à glicose ou alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose de acordo com a presente invenção.

Exemplo 3: Iogurte

[000129] 1000 mL de um meio de 11% (p/p) de leite em pó desnata do contendo 0,5% (p/p) de um extrato de levedura foi esterilizado a 90°C por 30 minutos, e o meio foi então inoculado com 100 mL de uma cultura de semeadura de B. breve ATCC 15700 e foi incubado por 16 horas a 37°C.

[000130] Em uma preparação separada, 1500 mL de um meio de 10% de (p/p) leite desnatado reconstituído foi esterilizado a 90°C por 30 minutos, e o meio foi então inoculado com 50 mL de uma cultura mista de Streptococcus thermophilus (fabricado pela Chr. Hansen A/S) e Lactobacillus bulgaricus (fabricado pelo Chr. Hansen A/S) e foi incubado por 5 horas a 42°C.

[000131] Além disso, em ainda uma outra preparação, 50 L de um leite bruto contendo 3,0% (p/p) gordura de leite e 9% (p/p) de sólidos de leite sem gordura foram aquecidos até 70°C, foram homogeneizados a uma pressão de 15 MPa, foram esterilizados a 90°C por 10 minutos, e então foram resfriados até 40°C. Essa base esterilizada com 750 mL da cultura de B. breve ATCC 15700 anteriormente incubada e 300 mL da cultura mista incubada de Streptococcus thermophilus e Lactobacillus bulgaricus, a mistura resultante foi usada para encher um recipiente de múltiplas camadas (volume: 500 mL) foi imprensada por alumínio. O recipiente foi selado e foi incubado a 37°C até que o pH alcançasse 4,6, e foi então imediatamente resfriado.

[000132] O iogurte assim obtido tinha um valor de ácido láctico de 0,81%, e continha 1,1*108 CFU/mL da B. breve ATCC 15700.

[000133] Esse iogurte pode ser usado, sem outra modificação, como um alimento ou bebida antiobesidade ou um alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose de acordo com a presente in-venção.

Exemplo 4: Iogurte

[000134] Com a exceção de uso de B. breve MCC 1274 ao invés da B. breve ATCC 15700, um iogurte foi preparado do mesmo modo que Exemplo 3.

[000135] O iogurte resultante continha 8,5x107 CFU/mL da B. breve MCC 1274.

[000136] Esse iogurte pode ser usado, sem qualquer modificação, como um alimento ou bebida antiobesidade ou um alimento ou bebida para o melhoramento de tolerância à glicose de acordo com a presente invenção.

Aplicabilidade Industrial

[000137] A presente invenção é capaz de prover um agente antiobe- sidade e um agente de melhoramento de tolerância à glicose que são eficazes para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhora-mento de tolerância à glicose e também exibem segurança superior, bem como provisão de que alimentos ou bebidas contendo esses agentes. Além disso, a presente invenção é também capaz de prover uma bactéria do gênero Bifidobacterium, e em particular a Bifidobacterium breve, que é eficaz para a prevenção ou tratamento de obesidade ou o melhoramento de tolerância à glicose ou resistência à insulina e também exibe segurança superior, bem como provisão de que uma composição farmacêutica contendo essa bactéria. Número de Acesso FERM BP-11175

Claims (3)

1. Uso de uma cepa bacteriana que é Bifidobacterium breve MCC 1274, código de depósito FERM BP-11175, caracterizado pelo fato de ser para a produção de uma composição para o tratamento an- tiobesidade ou melhoramento de tolerância à glicose, em que o trata-mento antiobesidade é definido como sendo o tratamento uma redução no peso corporal do indivíduo em comparação com o peso corporal do indivíduo imediatamente antes do início da administração da composição, ou o tratamento sendo uma supressão do aumento no peso corporal do indivíduo em comparação com o aumento do peso corporal do indivíduo imediatamente antes do início da administração da composição, e a melhoria da tolerância à glicose é definida como a melhoria da tolerância à glicose que envolve a manutenção ou melhoria da tolerância à glicose do indivíduo em comparação com a tolerância à glicose do indivíduo imediatamente antes do início da administração da composição, ou a melhoria da tolerância à glicose é uma supressão de qualquer diminuição na tolerância à glicose do indivíduo em comparação com a tolerância à glicose do indivíduo imediatamente antes do início de administração da composição.

2. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma cepa bacteriana que é Bifidobacterium breve MCC 1274, código de depósito FERM BP-11175, e um veículo farmaceuti- camente aceitável, em que o conteúdo bacteriano está em uma faixa de 1x106 a 1x1012 UFC/g; o veículo farmaceuticamente aceitável é selecionado a partir de excipiente, aglutinante, desintegrante, lubrificante, estabilizador e agente corretivo; o excipiente é selecionado a partir de derivados de açúcar como lactose, sacarose, glicose, manitol e sorbitol, derivados de amido como amido de milho, amido de batata, α-amido, dextrina e amido car- boximetila, derivados de celulose como celulose cristalina, hidroxipropil celulose, hidroxipropilmetil celulose, carboximetil celulose e carboxime- tilcelulose cálcica, goma arábica, dextrano, pululano, derivados de sili- cato como ácido silícico anidro leve, silicato de alumínio sintético e aluminometassilicato de magnésio, derivados de fosfato como fosfato de cálcio, derivados de carbonato como carbonato de cálcio e derivados de sulfato como sulfato de cálcio; o aglutinante é selecionado dentre, além do excipiente mencionado acima, gelatina, polivinilpirrolidona e magrogol; o desintegrante é selecionado dentre, além do excipiente mencionado acima, amido quimicamente modificado ou derivados de celulose como croscarmelose sódica, amido de carboximetila sódica e polivinil pirrolidona reticulada; o lubrificante é selecionado a partir de talco; ácido esteárico; estearatos metálicos como estearato de cálcio e estearato de magnésio; sílica coloidal; ceras como goma de cera e cera de esper- macete; ácido bórico; glicol; ácidos carboxílicos como ácido fumárico e ácido adípico; carboxilatos de sódio como benzoato de sódio; sulfatos como sulfato de sódio; leucina; lauril sulfatos como sulfato de laurila de sódio e sulfato de laurila de magnésio; silicatos como anidrido de ácido salicílico e hidrato de ácido salicílico; e derivados de amido; o estabilizador é selecionado a partir de ésteres do ácido para-hidroxibenzóico como metilparabeno e propilparabeno; álcoois como clorobutanol, álcool benzílico e álcool defeniletila; cloreto de benzalcônio; anidrido acético e ácido sórbico; e o agente corretivo é selecionado entre adoçantes, acidulan- tes e fragrâncias.

3. Bebida ou alimento antiobesidade, ou alimento ou bebida para o melhoramento da tolerância à glicose, caracterizado(a) pelo fa- to de que compreende a composição farmacêutica como definida na reivindicação 2, e a antiobesidade e a melhoria da tolerância à glicose são como definidas na reivindicação 1.

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