RU2518293C2

RU2518293C2 - Средство против ожирения, питание или напиток против ожирения, улучшающее толерантность к глюкозе средство и питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе

Info

Publication number: RU2518293C2
Application number: RU2012109558/10A
Authority: RU
Inventors: Сидзуки КОНДО; Канетада СИМИДЗУ
Original assignee: Моринага Милк Индастри Ко., Лтд.
Priority date: 2009-09-17
Filing date: 2010-09-17
Publication date: 2014-06-10
Also published as: JP4834798B2; KR20120043111A; EP2478910A1; US8497114B2; MX2012002343A; EP2478910B1; DK2478910T3; US20120171167A1; CN102970997A; AU2010296332B2; BR112012005768B1; AU2010296332A1; BR122020016728B1; WO2011034166A1; JPWO2011034166A1; PL2478910T3; BR112012005768A2; CA2774073A1; RU2012109558A; CA2774073C

Abstract

Группа изобретения относится к области биотехнологии. Штамм Bifidobacterium breve MCC 1274 FERM BP-11175 проявляет низкий коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту. Штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%. Штамм используют для снижения или предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе в составе фармацевтической композиции или средства. Для снижения или предотвращения ожирения или для улучшения толерантности к глюкозе осуществляют введение нуждающемуся субъекту указанного штамма в эффективном количестве. Предложены также пищевой продукт и напиток, содержащие средство на основе указанного штамма. 9 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 7 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к средству против ожирения, питанию или напитку против ожирения, улучшающему толерантность к глюкозе средству и питанию или напитку для улучшения толерантности к глюкозе, содержащему определенные штаммы Bifidobacterium breve в качестве активного ингредиента.

Приоритет испрашивается по заявке Японии № 2009-215836 от 17 сентября 2009 года, содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Поскольку образ жизни японцев становится более западным, и старение популяции быстро продолжает расти, продолжает расти и количество пациентов с заболеваниями, связанными с образом жизни, такими как ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярные болезни и диабет. Одной из основных причин данных типов заболеваний, связанных с образом жизни, является ожирение, и важность предотвращения и лечения ожирения подчеркивают повсеместно. Кроме того, ожирение также считают нежелательным с точки зрения внешности и красоты, и диеты для предотвращения или лечения ожирения вызывают значительный интерес.

На фоне повышенного внимания к ожирению, диагностический критерий, известный как "метаболический синдром", определяют как повышение вероятности будущего развития связанного с образом жизни заболевания, и в целях предотвращения и/или лечения метаболического синдрома на медицинских осмотрах применяют измерение окружности талии.

Примеры способов, общепринято применяемых для лечения ожирения, включают диетические (диетические ограничения и голодание) способы лечения на основе физических упражнений (способствующие потреблению энергии посредством упражнений) и способы лечения на основе лекарственных средств. Примеры лекарственных средств, применяемых в настоящее время в способах лечения на основе лекарственных средств, включают орлистат, ингибирующий абсорбцию жира в кишечнике (такой как лекарственные средства "Ксеникал" (зарегистрированная торговая марка), производимое Roche Ltd., и "Алли" (зарегистрированная торговая марка), производимое GlaxoSmithKline plc.)), и акарбозу, являющуюся ингибитором гликолитического фермента (α-глюкозидазы) (такую как лекарственное средство "Глюкобай" (зарегистрированная торговая марка), производимое Bayer AG).

Однако чрезмерное применение данных способов лечения может вызывать ряд проблем, включая нарушение здоровья пациента, повышение веса по причине возобновления симптомов и сложность достижения непрерывного или долговременного лечения. В частности, в случае способов лечения на основе лекарственных средств проблемой также могут являться побочные эффекты. Кроме того, лекарственные средства, применяемые в способах лечения на основе лекарственных средств, являются фармацевтическими лекарственными средствами, и их не так легко применять.

Ранее сообщали об исследованиях ингибирования ожирения с применением микроорганизмов, таких как лактобактерии. Например, в непатентном документе 1 сообщают, что экзогенно гиперхолистеринемическим (ExHC) крысам, крысам с ожирением (Wistar fatty) и мышам с ожирением и диабетом (KK-A^y) вводили питание, содержащее 10% живых высушенных Bifidobacterium bifidum G9-1, снижали уровни триацилглицерина и холестерина в крови и печени. Однако при применении указанного выше бактериального штамма для получения указанных выше эффектов питание необходимо смешивать с большим количеством бактерий, и соблюдение режима и непрерывное поедание их в эффективном количестве затруднительно.

Кроме того, известно, что конъюгированная линолевая кислота (CLA) проявляет физиологическую активность, включая действие против ожирения. Например, в непатентном документе 2 сообщают об исследовании на животных, в котором при смешивании CLA с питанием в количествах 0, 0,25, 0,5 и 1% выявляли, что при количествах 0,5% или выше масса тела и телесный жир снижались в зависимости от концентрации.

В отношении CLA известно, что бактерии, такие как бактерии рода Bifidobacterium, обладают способностью превращать линолевую кислоту (LA) в CLA (функция превращения в CLA), и предлагаются различные способы с применением данных бактерий. Например, в патентном документе 1 описывают, что все из Bifidobacterium breve CBG-C2, Bifidobacterium pseudocatenulatum CBG-C4 и Enterococcus faecium CBG-C5 проявляют повышенную функциональность относительно превращения CLA, и в таблице 1 указано, что Bifidobacterium breve CBG-C2 превращает LA в CLA с высоким коэффициентом превращения в CLA 54,7%. Кроме того, в патентном документе 1 также описывают применение производящих CLA композиций, содержащих данные бактериальные штаммы, в качестве активных ингредиентов для предотвращения или лечения заболеваний, ингибируемых CLA (таких как злокачественные новообразования, атеросклероз, диабет и ожирение).

Однако, при введении CLA или бактерий, обладающих повышенной функцией превращения в CLA, в качестве части диеты, нацеленной на лечение ожирения или предотвращение ожирения, существует опасность возникновения побочных эффектов.

В качестве примера данных побочных эффектов CLA в непатентном документе 3 сообщают, что при смешивании 1% CLA с кормом для мышей и введении в течение более 8 месяцев, наблюдали атрофию жировой ткани, повышение уровня инсулина и снижение толерантности к глюкозе. Кроме того, в непатентном документе 4 сообщают, что при приеме людьми приблизительно 3 г CLA ежедневно в течение продолжительного периода толерантность к глюкозе обладает тенденцией к ухудшению, о чем свидетельствует снижение чувствительности к инсулину и повышение маркеров окисления в моче.

Кроме того, среднее количество потребляемой японцами LA составляет приблизительно 11 г (смотри непатентный документ 5), и, таким образом, при введении бактерий, обладающих повышенной функцией превращения в CLA, CLA будет продуцироваться в больших количествах. Например, если 11 г LA превращают в CLA с указанным выше коэффициентом превращения 54,7%, то получают 6,02 г CLA. Если таким образом получать большое количество CLA, то возникает опасность возникновения указанных выше побочных эффектов.

ДОКУМЕНТЫ УРОВНЯ ТЕХНИКИ

ПАТЕНТНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

[Патентный документ 1] Опубликованный перевод PCT № 2005-522216 на японский язык.

НЕПАТЕНТНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

[Непатентный документ 1] "Effects of bifidobacteria on obese and diabetic animal models", Igaku no ayumi [Progress in Medicine], 205(4), 273 to 274 (2003).

[Непатентный документ 2] "Conjugated linoleic acid rapidly reduces body fat content in mice without affecting energy intake", The American Journal of Physiology, 25 276, 1172 to 1179(1999).

[Непатентный документ 3] "Conjugated linoleic acid supplementation reduces adipose tissue by apoptosis and develops lipodystrophy in mice", DIABETES, 49, 1534 to 1541 (2000).

[Непатентный документ 4] "Effects of cis-9, trans-11 conjugated linoleic acid 5 supplementation on insulin sensitivity, lipid peroxidation, and proinflammatory markers in obese men", The American Journal of Clinical Nutrition, 80, 279 to 283 (2004).

[Непатентный документ 5] "The current state of linoleic acid ingestion", Shishitsu Eiyougaku [Lipid Nutrition], 11, 25 to 31 (2002).

ЗАДАЧИ, РЕШАЕМЫЕ ИЗОБРЕТЕНИЕМ

Принимая во внимание указанные выше обстоятельства, целью настоящего изобретения является предоставление средства против ожирения и улучшающего толерантность к глюкозе средства, эффективных для предотвращения или лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, а также обладающих повышенной безопасностью, а также предоставление питания или напитков, содержащих данные средства.

СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ

В результате интенсивных исследований авторы настоящего изобретения обнаруживали, что Bifidobacterium breve, проявляющий низкий коэффициент превращения в конъюгированную линолевую кислоту, обладает действием против ожирения и улучшающим толерантность к глюкозе действием, независящими от конъюгированной линолевой кислоты, и на основе этих данных они способны осуществлять настоящее изобретение.

Для достижения указанной выше цели, настоящее изобретение принимает описанные ниже формы.

(1) Средство против ожирения, содержащее в качестве активного ингредиента Bifidobacterium breve, для которого коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту, определяемый описываемым ниже способом, составляет не более 10%.

Бактериальные клетки указанного выше Bifidobacterium breve суспендировали при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, и количество получаемой конъюгированной линолевой кислоты измеряли после инкубации в течение 48 часов при 37°C, и коэффициент превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту определяли по формуле ниже.

Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100

(2) Средство против ожирения по (1), где Bifidobacterium breve является Bifidobacterium breve MCC 1274 и/или Bifidobacterium breve ATCC 15700.

(3) Питание или напиток против ожирения, содержащие средство против ожирения по (1) или (2).

(4) Улучшающее толерантность к глюкозе средство, содержащее в качестве активного ингредиента Bifidobacterium breve, для которого коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту, определяемый описываемым ниже способом, составляет не более 10%.

Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота) × 100

(5) Улучшающее толерантность к глюкозе средство по (4), где Bifidobacterium breve является Bifidobacterium breve MCC 1274 и/или Bifidobacterium breve ATCC 15700.

(6) Питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе, содержащие улучшающее толерантность к глюкозе средство по (4) или (5).

Кроме того, настоящее изобретение относится к указанным ниже аспектам.

<1> Бактерия рода Bifidobacterium для применения в лечении ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, где

бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<2> Применение бактерии рода Bifidobacterium для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, где

<3> Применение бактерии рода Bifidobacterium для получения композиции и, предпочтительно, фармацевтической композиции для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, где

<4> Фармацевтическая композиция, содержащая бактерию рода Bifidobacterium, применяемую для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, и фармацевтически приемлемый носитель, причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<5> Применение фармацевтической композиции, содержащей бактерию рода Bifidobacterium и фармацевтически приемлемый носитель, для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<6> Бактерия рода Bifidobacterium по п. <1>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<7> Бактерия рода Bifidobacterium по п. <6>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<8> Применение бактерии рода Bifidobacterium по п. <2> или <3>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<9> Применение бактерии рода Bifidobacterium по п. <8>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<10> Фармацевтическая композиция по п. <4>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<11> Фармацевтическая композиция по п. <10>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<12> Применение фармацевтической композиции по п. <5>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<13> Применение фармацевтической композиции по п. <12>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<14> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство, содержащее бактерию рода Bifidobacterium в качестве активного ингредиента, где

<15> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по п. <14>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<16> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по п. <15>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<17> Питание или напиток против ожирения или питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе, содержащие средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по любому из пп. с <14> по <16>.

<18> Бактериальный штамм, являющийся Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175).

<19> Бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для применения в лечении ожирения или улучшении толерантности к глюкозе.

<20> Применение бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

<21> Применение бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для получения композиции для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

<22> Фармацевтическая композиция, содержащая бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для применения в лечении ожирения или улучшении толерантности к глюкозе, и фармацевтически приемлемый носитель.

<23> Применение фармацевтической композиции, содержащей бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, и фармацевтически приемлемый носитель, для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

<24> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство, содержащее в качестве активного ингредиента бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<25> Способ лечения или предотвращения ожирения, включающий введение нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму бактерии рода Bifidobacterium, в количестве, эффективном для лечения или предотвращения ожирения,

причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<26> Способ лечения или предотвращения ожирения по п. <25>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<27> Способ лечения или предотвращения ожирения по п. <26>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<28> Способ улучшения толерантности к глюкозе, включающий введение нуждающемуся в улучшении толерантности к глюкозе индивидууму бактерии рода Bifidobacterium, в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе, причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<29> Способ улучшения толерантности к глюкозе по п. <28>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<30> Способ улучшения толерантности к глюкозе по п. <29>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<31> Способ лечения или предотвращения ожирения, включающий введение нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, в количестве, эффективном для лечения или предотвращения ожирения.

<32> Способ улучшения толерантности к глюкозе, включающий введение нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе.

ТЕХНИЧЕСКИЙ РЕЗУЛЬТАТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к средству против ожирения и улучшающему толерантность к глюкозе средству, эффективному для предотвращения или лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе и также обладающему повышенной безопасностью, а также относится к питанию или напиткам, содержащим данные средства. Кроме того, настоящее изобретение относится к бактерии рода Bifidobacterium и, в частности, Bifidobacterium breve, эффективной для предотвращения или лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе или резистентности к инсулину, а также обладает повышенной безопасностью, а также фармацевтической композиции, содержащей бактерию рода Bifidobacterium.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 является графиком, иллюстрирующим тенденции повышения массы тела для контрольной группы и группы, которой вводят Bifidobacterium breve ATCC 15700, в тестовом примере 2.

Фиг. 2 является графиком, иллюстрирующим тенденции повышения массы тела для контрольной группы и группы, которой вводят Bifidobacterium breve MCC 1274, в тестовом примере 2.

Фиг. 3 является графиком, иллюстрирующим результаты измерения массы эпидидимальной жировой ткани в тестовом примере 2.

Фиг. 4 является графиком, иллюстрирующим результаты измерения величины HOMA-IR (Гомеостатическая модель оценки резистентности к инсулину) в тестовом примере 2.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Bifidobacterium breve (далее в настоящем документе часто сокращаемая как "B. breve"), принадлежащая роду Bifidobacterium, применяемому в настоящем изобретении, является B. breve, для которой коэффициент превращения линолевой кислоты (LA) в конъюгированную линолевую кислоту (CLA) (далее в настоящем документе также обозначаемый как "коэффициент превращения в CLA"), определяемый описываемым ниже способом, составляет не более 10%.

Бактериальные клетки указанного выше B. breve суспендируют при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную LA в концентрации 500 мкг/мл, и количество получаемой CLA измеряют после инкубации в течение 48 часов при 37°C, и коэффициент превращения (%) в CLA определяют по формуле ниже.

Коэффициент превращения (%) = (количество получаемой CLA/количество добавленной LA)×100

Указанное выше "количество получаемой CLA" можно измерять, например, с применением описываемого ниже способа.

Во-первых, после 48 часов инкубации указанную выше жидкую среду подвергают разделению центрифугированием.

Удаляют супернатант, к супернатанту добавляют объем изопропилового спирта, равный двум объемам супернатанта, и перемешивают, затем в смесь добавляют объем гексана, равный 1,5 объемам супернатанта, и после перемешивания в течение 3 минут смесь оставляют отстаиваться, и удаляют слой гексана. Коэффициент поглощения слоя гексана измеряют при 233 нм, и концентрацию CLA (мкг/мл) в слое гексана определяют на основе сравнения со стандартными материалами (цис-9,транс-11-конъюгированной линолевой кислотой), и вычисляют количество CLA (мкг), содержащейся в указанном выше супернатанте.

При этом к полученному после удаления супернатанта остатку добавляют количество дистиллированной воды, в 5 раз превышающее количество остатка, и перемешивают, таким образом, получая суспензию. В суспензию добавляют объем изопропилового спирта, равный двум объемам суспензии, и перемешивают, в смесь добавляют объем гексана, равный 1,5 объемам суспензии, и после перемешивания в течение 3 минут смесь оставляют отстаиваться, и удаляют слой гексана. Концентрацию CLA (мкг/мл) в слое гексана определяют тем же способом, что указано выше, и вычисляют количество CLA (мкг), содержащейся в остатке.

Общие количества CLA, содержащейся в супернатанте и остатке, записывают как "количество получаемой CLA".

Жидкая среда может являться любой средой, подходящей для культивирования B. breve, и ее можно соответствующим образом выбирать из общепринятых жидких сред. Конкретные примеры включают среду MRS (de Man Rogossa Sharpe), ABCM (среда для культивирования анаэробных бактерий) и среда RCA (усиленный клостридиальный агар).

В изложенном выше описании приводят пример, в котором в качестве стандартного материала применяют цис-9,транс-11-конъюгированную линолевую кислоту, но вычисляемые количества CLA, по существу, являются теми же даже при применении другого изомера, такого как транс-10,цис-12-конъюгированная линолевая кислота.

Коэффициент превращения в CLA является индикатором величины функции превращения в CLA (способности превращать LA в CLA), которой обладает B. breve.

B. breve, проявляющий коэффициент превращения в CLA не более 10% (далее в настоящем документе также обозначаемый как "B. breve с низким превращением в CLA"), обладает независящим от CLA действием против ожирения.

"Действие против ожирения" описывает действие, предотвращающее или снижающее ожирение посредством супрессии повышения массы и/или супрессии повышения телесного жира.

В настоящем изобретении термин "ожирение" относится не только к простому состоянию наличия большой массы тела, но также и к состоянию, при котором доля жировой ткани среди структурных компонентов тела является аномально большой.

В последние годы сообщали, в терминах накопления подкожного жира и висцерального жира, что заболевания зрелого возраста, такие как высокое артериальное давление, гиперлипидемия и диабет, больше связаны с ожирением с накоплением висцерального жира, при котором жир накапливается между органами, чем с ожирением с накоплением подкожного жира, при котором жир накапливается в подкожной ткани. Как показано в тестовом примере 2 ниже, B. breve с низким превращением в CLA обладает ингибирующим повышение массы тела эффектом и, в частности, обладает эффектом ингибирования накопления висцерального жира. Таким образом, питание и напитки, содержащие средство против ожирения и улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению, эффективны для предотвращения и лечения указанных выше заболеваний.

Кроме того, поскольку B. breve с низким превращением в CLA обладает ограниченной способностью превращать LA в CLA, существует минимальная опасность возникновения вызываемых CLA побочных эффектов, таких как атрофия жировой ткани, повышение уровня инсулина и снижение толерантности к глюкозе. Другими словами, если, как описано в указанном выше непатентном документе 5, среднее количество потребляемой японцами LA составляет приблизительно 11 г, и коэффициент превращения в CLA является высоким, то LA превращается в CLA in vivo, и существует значительная опасность возникновения вызываемых CLA побочных эффектов, но, поскольку применяемый настоящем изобретении B. breve проявляет низкий коэффициент превращения в CLA, предполагают, что вызываемые CLA побочные эффекты не возникнут, что делает лечение чрезвычайно безопасным.

Таким образом, можно безопасно принимать средство против ожирения по настоящему изобретению и можно достигать действия против ожирения смешиванием средства против ожирения с питанием или напитком и затем введением в количестве, эффективном количества питания или напитка пациенту с ожирением или нуждающемуся в диете здоровому человеку или домашнему животному ежедневно или в течение продолжительного периода времени, если потребуется.

Кроме того, B. breve с низким превращением в CLA не вызывает аномальной толерантности к глюкозе, являющейся одним из известных побочных эффектов CLA, и, как показано в тестовом примере 2 ниже, по существу, обладает улучшающим толерантность к глюкозе действием и улучшающим резистентность к инсулину действием.

Таким образом, можно безопасно принимать улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению и можно достигать улучшающего толерантность к глюкозе действия и улучшающего резистентность к инсулину действия смешиванием улучшающего толерантность к глюкозе средства с питанием или напитком и затем введением в количестве, эффективном количества питания или напитка пациенту с диабетом или нуждающемуся в улучшении толерантности здоровому человеку или домашнему животному ежедневно или в течение продолжительного периода времени, если потребуется.

Применяемый в настоящем изобретении B. breve с низким превращением в CLA может являться любым B. breve, для которого коэффициент превращения в CLA составляет не более 10%, и например, новый штамм B. breve, выделенный и идентифицированный из образца, такого как экскременты малолетнего ребенка, или общепринятый штамм B. breve можно подвергать измерению коэффициента превращения в CLA с применением описанного выше способа, и затем соответствующим образом можно выбирать любой штамм, для которого измеренный коэффициент превращения составляет 10% или менее.

Примеры штаммов B. breve с низким превращением в CLA включают B. breve MCC 1274 и Β breve ATCC 15700.

B. breve MCC 1274 является принадлежащим роду Bifidobacterium бактериальным штаммом, полученным и идентифицированным авторами настоящего изобретения с применением описываемого ниже способа и хранящимся в Международном хранилище патентованных организмов Национального института прогрессивной промышленной науки и технологии (Central 6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, Japan (почтовый индекс: 305-8566)) на 25 августа 2009 года (учетный номер: FERM BP-11175).

(Получение и идентификация B. breve MCC 1274)

Применяя экскременты японского ребенка в качестве образца, образец разбавляли анаэробным разбавителем (разбавителем, описанным на странице 322 "Chounaikin no Sekai" [The World of Enteric Bacteria] (Tomotari Mitsuoka, опубликованного Soubunsha Co., Ltd., 1980), наносили на плоскую пластину агаровой среды BL (описанной на странице 319 "Chounaikin no Sekai") и затем инкубировали в анаэробных условиях при 37°C в течение 72 часов. Среди получаемых колоний проявляющие морфологические характеристики Bifidobacterium штаммы являлись грамположительными, и колонии, содержащие при микроскопическом исследовании нанесенного образца палочковидные, булавовидные или Y-образные бактериальные клетки, собирали и наносили полосками на агаровую среду BL, и затем повторяли инкубацию в анаэробных условиях с применением того же способа, как описано выше, для получения чистых выделенных бактериальных штаммов. Указанный выше бактериальный штамм называли B. breve MCC 1274.

Исследовали бактериологические свойства B. breve MCC 1274, включая форму клеток, подвижность, спорообразование, окрашивание по Граму, активность каталазы, газообразование при поглощении глюкозы и ферментацию сахаров. Оценку ферментации сахаров осуществляли с применением набора API 50CH (производимого bioMerieux, Japan) с определениями, производимыми по способу, описываемому в предоставляемой вместе с набором инструкции производителя. Другими словами, после инкубации в течение ночи бактериальную жидкость применяли для высевания на каждый из субстратов, затем субстраты инкубировали при 37°C внутри перчаточного бокса с анаэробными условиями и на седьмой день инкубации определяли состояние ферментации сахара каждого из субстратов. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 Бактериологические свойства Bifidobacterium breve MCC 1274
		MCC 1274
1	Форма клеток	Плеоморфные палочки
2	Подвижность	Отсутствует
3	Спорообразование	Отсутствует
4	Окрашивание по Граму	Положительное
5	Активность каталазы	-
6	Газообразование при поглощении глюкозы	-
7	Ферментация сахара (1) Контроль (2) Глицерин (3) Эритритол (4) D-Арабиноза (5) L-Арабиноза (6) Рибоза (7) D-Ксилоза	- - - ± - + -
	(8) L-Ксилоза (9) Адонитол (10) β-метилксилозид (11) Галактоза (12) D-Глюкоза (13) D-Фруктоза (14) D-Маннит (15) L-Сорбоза (16) Рамноза (17) Дульцит (18) Инозитол (19) Маннит (20) Сорбит (21) α-Метил-D-манноза (22) α-Метил-D-глюкоза (23) N-ацетилглюкозамин (24) Амигдалин (25) Арбутин (26) Эскулин (27) Салицин (28) Целлобиоза (29) Мальтоза (30) Лактоза (31) Мелибиоза (32) Сахароза (33) Трегалоза (34) Инулин (35) Мелецитоза (36) D-рафиноза (37) Амидон (38) Гликоген (39) Ксилит (40) β-Генциобиоза (41) D-Тураноза (42) D-Ликсоза	- - - + + + + - - - - + + ± + + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -

(43) D-Тагатоза
(44) D-Фукоза
(45) L-Фукоза
(46) D-арабит
(47) L-арабит
(48) Глюконат
(49) 2-кето-глюконат
(50) 5-кето-глюконат

-
-
+
-
-
-
-
±

Затем для исследования генетических характеристик B. breve MCC 1274 идентифицировали последовательность генов рРНК 16S указанного выше бактериального штамма с применением общепринятых способов. Посредством определения последовательности генов рРНК 16S B. breve MCC 1274 с применением анализа BLAST для осуществления поиска гомологии последовательности в базе данных U.S. National Center for Biotechnology Information (NCBI) выявляли 99% гомологии со стандартным штаммом B. breve, известным как B. breve CM 1192^T, что свидетельствует о том, что штамм являлся Bifidobacterium breve.

Указанные выше результаты подтверждали, что Bifidobacterium breve MCC 1274 обладал бактериологическими свойствами Bifidobacterium breve и являлся бактериальным штаммом, принадлежащим к роду Bifidobacterium breve.

B. breve с низким превращением в CLA, включенный в средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента, может являться одним бактериальным штаммом или двумя или более штаммами.

Кроме того, средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению можно составлять только из указанного выше активного ингредиента, или оно может являться композицией или фармацевтической композицией, содержащей активный ингредиент и другие необязательные компоненты помимо активного ингредиента. Не существует конкретных ограничений данных необязательных компонентов при условии, что они являются фармацевтически приемлемыми, и можно включать любые добавки (такие как описываемые ниже фармацевтические носители), как правило, добавляемые в фармацевтические композиции.

Настоящее изобретение относится к способу лечения или предотвращения ожирения, включающему введение B. breve по настоящему изобретению нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму в количестве, эффективном для лечения или предотвращения ожирения.

Кроме того, настоящее изобретение также относится к способу улучшения толерантности к глюкозе, включающему введение B. breve по настоящему изобретению нуждающемуся в улучшении толерантности к глюкозе индивидууму в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе.

В настоящем описании "лечение" ожирения относится к введению средства против ожирения по настоящему изобретению в целях снижения или поддержания массы тела индивидуума. Одним из возможных результатов данного лечения может являться снижение массы тела индивидуума по сравнению с массой тела индивидуума непосредственно перед началом введения средства против ожирения по настоящему изобретению. Кроме того, другим возможным результатом лечения может являться супрессия повышения массы тела индивидуума по сравнению с повышением массы тела индивидуума непосредственно перед началом введения средства против ожирения по настоящему изобретению.

Кроме того, "предотвращение" ожирения относится к введению средства против ожирения по настоящему изобретению в целях снижения или поддержания массы тела индивидуума с риском ожирения. Один возможный результат данного предотвращения может включать поддержание или снижение массы тела "индивидуума с риском ожирения" по сравнению с массой тела индивидуума непосредственно перед началом введения средства против ожирения по настоящему изобретению. Кроме того, другим возможным результатом предотвращения может являться супрессия повышения массы тела индивидуума по сравнению с повышением массы тела индивидуума непосредственно перед началом введения средства против ожирения по настоящему изобретению.

В данном описании "улучшение" толерантности к глюкозе относится к введению улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению в целях поддержания или улучшения толерантности к глюкозе у индивидуума. Один возможный результат улучшения толерантности к глюкозе может включать поддержание или улучшение толерантности к глюкозе у индивидуума по сравнению с толерантностью к глюкозе у индивидуума непосредственно перед началом введения улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению. Кроме того, другим возможным результатом улучшения толерантности к глюкозе может являться супрессия снижения толерантности к глюкозе у индивидуума по сравнению с толерантностью к глюкозе у индивидуума непосредственно перед началом введения улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению.

"Введение (administration)" средства против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе средства, или "введение (administrating)" средства против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе средства описывает введение средства против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению нуждающемуся в лечении, предотвращении или улучшении индивидууму.

В данном описании нуждающимся в лечении, предотвращении или улучшении "индивидуумом" является животное, являющееся объектом лечения, предотвращения, улучшения, наблюдения или эксперимента и, предпочтительно, являющееся млекопитающим и, наиболее предпочтительно, человеком.

Нуждающийся в лечении, предотвращении или улучшении "индивидуум" представляется собой индивидуума, нуждающегося в способе лечения, предотвращения или улучшения, предписываемом исследователем, ветеринаром, врачом или другим клиницистом.

Способ введения средства против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению может являться пероральным или парентеральным, но, предпочтительно, является пероральным. Примеры парентерального введения включают трансректальное введение и т.п.

Не существует конкретных ограничений дозировки средства против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению, и дозу можно соответствующим образом определять в соответствии с желаемым эффектом лечения ожирения или эффектом улучшения толерантности к глюкозе с учетом действия против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе действия применяемого B. breve с низким превращением в CLA и способа введения.

Например, в случаях, если в качестве активного ингредиента применяют B. breve MCC 1274 и/или B. breve ATCC 15700 и введение осуществляют перорально, обычная суточная доза, эффективная для лечения или предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, вычисляемая как количество бактерий на 1 кг массы тела (КОЕ/кг массы тела), составляет, предпочтительно, 1×10⁶ КОЕ/кг массы тела или выше и, более предпочтительно, 1×10⁸ КОЕ/кг или выше.

Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению можно вводить в однократной суточной дозе или вводить в различных случаях.

Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению можно получать в любой заранее предопределенной лекарственной форме в соответствии с применяемым способом введения.

Примеры лекарственной формы средства против ожирения или улучшающего толерантность к глюкозе средства по настоящему изобретению в случае перорального введения включают твердые составы, такие как порошки, гранулы, таблетки и капсулы, и жидкие составы, такие как сиропы, суспензии и эмульсии. Кроме того, в случае парентерального введения примеры лекарственной формы включают суппозитории, мази и спреи.

Получение таких составов можно осуществлять с применением общепринятых способов в соответствии с лекарственной формой.

При получении состав можно составлять только из активного ингредиента, или он также может включать соответствующий фармацевтический носитель.

В случаях если добавляют фармацевтический носитель, не существует конкретных ограничений смешиваемого количества активного ингредиента в средстве против ожирения или улучшающем толерантность к глюкозе средстве по настоящему изобретению, и данное количество можно определять соответствующим образом в соответствии с лекарственной формой, такой как порошок, таблетка или капсула. Как правило, содержание бактерий находится в диапазоне от 1×10⁶ до 1×10¹² КОЕ/г, предпочтительно, составляет от 1×10⁸ до 1×10¹² КОЕ/г и, более предпочтительно, составляет от 1×10¹⁰ до 1×10¹² КОЕ/г.

В зависимости от лекарственной формы в качестве фармацевтического носителя можно применять любой общепринятый фармацевтически приемлемый органический или неорганический носитель.

Например, в случае твердых составов примеры носителя включают эксципиенты, связывающие средства, разрыхлители, смазочные средства, стабилизаторы и корректирующие средства и т.п.

Примеры эксципиентов включают производные сахаров, такие как лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и сорбит, производные крахмала, такие как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, α-крахмал, декстрин и карбоксиметилкрахмал, производные целлюлозы, такие как кристаллическая целлюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза кальция, а также гуммиарабик, декстран, пуллулан, производные кремниевой кислоты, такие как легкая безводная кремниевая кислота, синтетический силикат алюминия иалюминометасиликат магния, производные фосфорной кислоты, такие как фосфат кальция, производные угольной кислоты, такие как карбонат кальция, и производные серной кислоты, такие как сульфат кальция.

В дополнение к указанным выше эксципиентам примеры связывающих средств включают желатин, поливинилпирролидон и макрогол.

В дополнение к указанным выше эксципиентам примеры разрыхлителей включают химически модифицированные производные крахмала или целлюлозы, такие как кроскармеллоза натрия, карбоксиметилкрахмал натрия и сшитый поливинилпирролидон.

Примеры смазочных средств включают тальк, стеариновую кислоту, стеараты металлов, такие как стеарат кальция и стеарат магния, коллоидный диоксид кремния, воски, такие как пчелиный воск и спермацетовый воск, борную кислоту, этиленгликоль, карбоновые кислоты, такие как фумаровая кислота и адипиновая кислота, карбоксилаты натрия, такие как бензоат натрия, сульфаты, такие как сульфат натрия, лейцин, лаурилсульфаты, такие как лаурилсульфат натрия и лаурилсульфат магния, силикаты, такие как ангидрид кремниевой кислоты и гидрат кремниевой кислоты, и производные крахмала.

Примеры стабилизаторов включают сложные эфиры пара-гидроксибензойной кислоты, такие как метилпарабен и пропилпарабен, спирты, такие как хлорбутанол, бензиловый спирт и фенилэтиловый спирт, хлорид бензалкония, уксусный ангидрид и сорбиновую кислоту.

Примеры корректирующих средств включают подсластители, подкислители и ароматизаторы.

В случае жидких составов для перорального введения примеры носителя включают растворители, такие как вода, и корректирующие средства.

Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению можно добавлять в любой из множества фармацевтических препаратов, продуктов питания или питательных продуктов или т.п.

Питание или напиток против ожирения по настоящему изобретению содержит описанное выше средство против ожирения по настоящему изобретению. Потребляя питание или напиток против ожирения, достигают эффекта, схожего с таковым при введении средства против ожирения по настоящему изобретению.

Питание или напиток против ожирения по настоящему изобретению также является эффективным для приведения себя в форму или диеты посредством супрессии повышения телесного жира или снижения телесного жира.

Хотя не существует конкретных ограничений количества средства против ожирения в питании или напитке против ожирения по настоящему изобретению, предпочтительным является поглощаемое без любых конкретных затруднений количество, обеспечивающее суточную дозу B. breve с низким превращением в CLA, обеспечивающую эффективное лечение ожирения, и количество B. breve с низким превращением в CLA, как правило, находится в диапазоне от 1×10⁶ до 1×10¹² КОЕ/г, предпочтительно, составляет от 1×10⁸ до 1×10¹² КОЕ/г, и, более предпочтительно, составляет от 1×10¹⁰ до 1×1012 КОЕ/г.

Питание или напиток против ожирения по настоящему изобретению можно получать с применением средства против ожирения и других компонентов, приемлемых для включения в питание и напитки в качестве сырых материалов, или можно получать добавлением средства против ожирения по настоящему изобретению в существующее питание или напиток, содержащие другие компоненты.

Например, если питание или напиток против ожирения по настоящему изобретению является кисломолочным продуктом, то питание или напиток против ожирения можно получать добавлением B. breve с низким превращением в CLA в кисломолочный продукт, или он может являться кисломолочным продуктом, получаемым с применением B. breve с низким превращением в CLA в качестве закваски.

Не существует конкретных ограничений других включенных в питание или напиток компонентов при условии, что компоненты одобрены для добавления в питание и напитки нормативными документами в области питания, такими как Food Sanitation Act, и не нарушают действие против ожирения. Примеры компонентов, которые можно включать в питание или напиток, включают сахара, такие как декстрин и крахмал, белки, такие как желатин, белок сои и кукурузный белок, аминокислоты, такие как аланин, глутамин и изолейцин, полисахариды, такие как целлюлоза и гуммиарабик, и масла и жиры, такие как соевое масло и средние триглицериды жирных кислот.

Не существует конкретных ограничений формы питания или напитка, включающих любую форму пищевой композиции, составленной из B. breve с низким превращением в CLA и носителя, приемлемого для включения в питание и напитки. Конкретные примеры включают все виды форм питания и напитка, включая твердые продукты питания, такие как хлеб, жевательная резинка, печенье, шоколад, кондитерские изделия и хлопья, джемообразные, кремообразные и гелеобразные продукты питания, такие как джем, мороженое, йогурт и желе, и напитки, такие как соки, кофе и какао. Кроме того, B. breve с низким превращением в CLA также можно добавлять в ароматизаторы и пищевые добавки и т.п.

В случаях если питание или напиток против ожирения по настоящему изобретению является кисломолочным продуктом, получаемым с применением B. breve с низким превращением в CLA в качестве закваски, можно применять B. breve с низким превращением в CLA в отдельности в течение ферментации, или можно осуществлять смешанную инкубацию с применением B. breve с низким превращением в CLA и другой закваски.

Примеры данных других заквасок включают закваски, как правило, применяемые в получении кисломолочных продуктов, такие как другие бактерии рода Bifidobacterium (такие как Bifidobacteria: B. pseudocatenulatum, B. catenulatum, B. bifidum, B. longum, B. infantis и B. adolescentis) и другие общепринятые лактобактерии, как правило, применяемые в качестве заквасок для кисломолочных продуктов. Конкретные примеры данных лактобактерий включают Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei и Lactobacillus gasseri.

Кисломолочные продукты можно получать с применением общепринятого способа. Один из примеров способа получения кисломолочных продуктов представлен ниже.

Во-первых, получают смесь сырого материала, содержащую сырое молоко. Помимо сырого молока смесь сырого материала в случае необходимости также может содержать другие компоненты, такие как масла и жиры, сахара и вода. Например, сырой материал, содержащий жир, такой как масло или сливки, можно добавлять в качестве жирового компонента. Примеры сахаров, которые можно добавлять, включают общепринятые подсластители, такие как сахароза, мальтоза, глюкоза, фруктоза, декстрин и редуцирующая мальтоза. В случае получения твердого йогурта можно добавлять предварительно набухший желатин и/или разбавленный раствор агара. В случае получения мягкого йогурта можно добавлять белковый и/или полисахаридный загуститель. В случае получения питьевого йогурта можно добавлять высокометоксилированный пектин в количестве от 0 до 0,3% по массе в качестве стабилизатора, хотя предпочтительно не добавлять высокометоксилированный пектин.

Не существует конкретных ограничений способа, применяемого для получения смеси сырого материала, и, например, в сырое молоко можно добавлять другие включаемые по необходимости компоненты и затем получаемую смесь перемешивать и смешивать для получения смеси сырого материала

Доля сырого молока в смеси сырого материала, вычисляемая как нежировая твердая фракция, предпочтительно, находится в диапазоне от 1 до 15% по массе и, более предпочтительно, от 8 до 15% по массе.

Затем, смесь сырого материала подвергают тепловой стерилизации. Хотя не существует конкретных ограничений способа стерилизации или условий нагрева, предпочтительной является температура нагрева от 80 до 140°C, и время нагрева, предпочтительно, находится в диапазоне от 5 до 15 минут в случае дозированной обработки, или в диапазоне от 2 секунд до 15 минут в случае способа HTST.

Затем в подвергнутую тепловой стерилизации смесь сырого материала вносят бактерии-закваску и осуществляют ферментацию. Условия ферментации, включая применяемое для внесения количество закваски, температуру ферментации и время ферментации, можно соответствующим образом устанавливать в соответствии с факторами, такими как тип применяемой закваски, и вид и свойства получаемого кисломолочного продукта. В зависимости от формы продукта после внесения закваски смесь можно помещать в контейнер для ферментации, или ферментацию можно проводить в бродильном чане.

После ферментации смесь быстро охлаждают для получения кисломолочного продукта. В зависимости от типа продукта и свойств продукта можно проводить этап гомогенизации продукта после охлаждения или этап добавления других сырых материалов после охлаждения, таких как ароматизаторов.

Получаемый таким образом кисломолочный продукт можно применять без дополнительной тепловой стерилизации в качестве продукта с живыми бактериями, делающего возможным поглощение живых бифидобактерий. Продукты с живыми бактериями хранят, транспортируют и продают при низкой температуре не более 10°C, и, предпочтительно, при температуре от 0 до 5°C.

Питание или напиток против ожирения по настоящему изобретению, предпочтительно, продают в качестве питания или напитка, на котором указывают его применение против ожирения, например, применяя выражение "против ожирения" или "питание (или напиток), обладающие эффектом против ожирения".

Следует отметить, что выражение, применяемое для описанного выше типа указания, не ограничено фразой "против ожирения", и, разумеется, любые другие выражения, указывающие на эффект против ожирения, также включены в объем по настоящему изобретению. Примеры других таких выражений могут включать "эффект предотвращения ожирения", "эффект улучшения при ожирении", "эффект супрессии повышения массы", " эффект супрессии повышения телесного жира" или "диетический эффект", и питание или напиток можно продавать с указанием на продукте одного или нескольких из данных выражений.

Кроме того, схожим образом, питание или напиток также можно продавать в качестве питания или напитка с указанием его применения в предотвращении и/или улучшении связанных с образом жизни заболеваний, для которых ожирение является известной причиной, таких как гиперлипидемия, высокое артериальное давление и диабет.

Питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе по настоящему изобретению, предпочтительно, продают в качестве питания или напитка, на котором явно указывают его применение для улучшения толерантности к глюкозе, например, с применением выражения "для улучшения толерантности к глюкозе " или "питание (или напиток), обладающее улучшающим толерантность к глюкозе эффектом".

Следует отметить, что выражение, применяемое для описанного выше типа указаний, не ограничено фразой "для улучшения толерантности к глюкозе ", и, разумеется, любые выражения, указывающие на улучшающий толерантность к глюкозе эффект, также включены в объем по настоящему изобретению.

Кроме того, схожим образом питание или напиток также можно продавать в качестве питания или напитка с указанием его применения в предотвращении и/или улучшении связанных с образом жизни заболеваний, для которых снижение толерантности к глюкозе или резистентность к инсулину является известной причиной, таких как диабет и другие связанные с образом жизни заболевания.

Действие, связанное с указанным выше термином "указывать", включает все действия для информирования потребителя об описанном выше применения, и любые отображения, напоминающие потребителям об указанном выше применении или позволяющие потребителям узнавать об указанном выше применении, по аналогии, входят в объем "указания" по настоящему изобретению независимо от цели указания, содержания указания, или объекта, или средства или т.п. указания. Однако, предпочтительно, указание дают с применением выражения, позволяющего потребителям непосредственно узнавать об указанном выше применении. Конкретные примеры указания включают действия указания описанного выше применения на коммерческих продуктах, относящихся к питанию или напитку по настоящему изобретению, или упаковкам коммерческих продуктов, действия обозначения, передачи, отображения в целях обозначения, или передачи, или распространения коммерческих продуктов или их упаковок с указанием, указывающим на описанное выше применение, и действия указания описанного выше применения в рекламе, прейскурантах или деловых документах, относящихся к продуктам, посредством их отображения или распространения, или указания применения в информации, включая такую рекламу, прейскуранты или деловые документы, и предоставления информации электронным способом (таким как через интернет).

Содержание указания (указанное содержание), предпочтительно, одобрено правительством или подобным учреждением интересующей страны (например, указание в форме, основанной на санкции, предоставляемой на основе любых различных систем, применяемых правительством данной страны), и такое указанное содержание, предпочтительно, прикреплять к упаковкам, контейнерам, каталогам, рекламным средствам, применяемым в местах продажи, таким как публикации и POP, и другим документам.

Кроме того, другие примеры указаний включают указания в качестве лечебного питания, функционального питания, энтерального питания, питания для специального диетического применения, полезного для здоровья питания, питания для поддержания здоровья, питания c заявленной пищевой ценностью и препарата общего воздействия. В частности, в случае Японии другие примеры включают указания, одобренные Министерством здравоохранения, труда и социального обеспечения, такие как указания, одобренные на основе системы питания для поддержания здоровья и других схожих систем. Примеры последних включают указания в качестве питания для поддержания здоровья, указания в качестве питания, подходящего для поддержания здоровья, указаний на влияние на строение и функции тела и указания на снижение риска заболевания. Более конкретно, их характерные примеры включают указания в качестве питания для поддержания здоровья (особенно указания на применение для здоровья), предписанные в регламенте по приведению в исполнение Закона о развитии здравоохранения (Указ № 86, Министерство здравоохранения, труда и социального обеспечения, Япония, 30 апреля 2003 года) и схожие указания.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение более подробно описано ниже с применением ряда тестовых примеров и примеров, но настоящее изобретение не ограничено следующими примерами.

<Тестовый пример 1: Измерение коэффициента превращения в CLA>

Бактериальные клетки B. breve (MCC 1274 или ATCC 15700) в концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл суспендировали в жидкой среде MRS (MRS (de Man Rogossa Sharpe), продукте Difco (зарегистрированная торговая марка), производимом Becton Dickinson and Company), содержащем добавленную LA в концентрации 500 мкг/мл, и затем среду инкубировали в течение 48 часов при 37°C.

Затем, супернатант удаляли, к супернатанту добавляли объем изопропилового спирта, равный двум объемам супернатанта, и перемешивали, затем в смесь добавляли объем гексана, равный 1,5 объемам супернатанта, и после перемешивания в течение 3 минут смесь оставляли отстаиваться, и удаляли слой гексана. Коэффициент поглощения слоя гексана измеряли при 233 нм, и с применением калибровочной кривой, полученной с применением стандартных материалов (цис-9, транс-11-конъюгированной линолевой кислотой), определяли концентрацию CLA (мкг/мл) в слое гексана и вычисляли количество CLA (мкг), содержащейся в указанном выше супернатанте.

При этом к полученному после удаления супернатанта остатку добавляли количество дистиллированной воды, в 5 раз превышающее количество остатка, и перемешивали, таким образом, получая суспензию. В суспензию добавляли объем изопропилового спирта, равный двум объемам суспензии, и перемешивали, в смесь добавляли объем гексана, равный 1,5 объемам суспензии, и после перемешивания в течение 3 минут смесь оставляли отстаиваться, и удаляли слой гексана. Концентрацию CLA (мкг/мл) в слое гексана определяли тем же способом, что указано выше, и вычисляли количество CLA (мкг), содержащейся в остатке.

Общие количества CLA, содержащейся в супернатанте и остатке, записывали как "количество получаемой CLA", и коэффициент превращения (%) LA в CLA определяли по формуле ниже. Результаты представлены в таблице 2.

Коэффициент превращения (%) = (количество получаемой CLA/количество добавленной LA) × 100

Как показано в результатах ниже, два штамма (MCC 1274 и ATCC 15700) проявляли коэффициенты превращения в CLA 10% или ниже.

Таблица 2
	Коэффициент превращения в CLA (%)
MCC 1274	10,0
ATCC 15700	5,0

<Тестовый пример 2: Исследование эффектов введения B. breve с низким превращением в CLA модельным мышам с индуцированным диетой ожирением>

Применяли 18 самцов мышей C57BL/6J по 6 мышей в каждой из трех групп. После применения диеты с высоким содержанием жира45% в течение 4 недель для вызывания у мышей ожирения, 10% сухое обезжиренное молоко смешивали с кормом для контрольной группы, 10% сухое обезжиренное молоко, содержащее суспендированный в нем бактериальный штамм MCC 1274, смешивали с кормом для группы, которой вводят MCC 1274, и 10% сухое обезжиренное молоко, содержащее суспендированный в нем бактериальный штамм ATCC 15700, смешивали с кормом для группы, которой вводят ATCC 15700, и каждую группу кормили в течение дальнейших 8 недель. В это время количество MCC 1274 или ATCC 15700, добавляемых в порошковое молоко посредством суспендирования, устанавливали таким образом, что количество B. breve, поглощаемых в сутки, составляло приблизительно 1 миллиард бактерий на мышь. Кроме того, в качестве корма применяли корм, содержащий 22% по массе жирных кислот (из которых количество линолевой кислоты составляло приблизительно 3,1% по массе).

В течение тестового периода измеряли только массу тела каждой мыши и затем, после завершения теста, мышей убивали и вскрывали, и измеряли массу тела и массу эпилдидимальной жировой ткани.

Тенденции повышения массы тела в течение тестового периода представлены на фиг. 1 и фиг. 2. Результаты на фиг. 1 и фиг. 2 показали, что, хотя масса тела повышалась во всех группах по сравнению с контрольной группой, 2 группы, которым вводили MCC 1274 или ATCC 15700, проявляли значительную супрессию повышения массы тела (по сравнению с контрольной группой масса тела в тестовых группах снижалась приблизительно на 18% или больше, свидетельствуя о значимом различии при p<0,05).

Кроме того, масса эпидидимальной жировой ткани после вскрытия представлена на фиг. 3. Результаты на фиг. 3 демонстрируют массу эпидидимальной жировой ткани после вскрытия 2,66 г в контрольной группе, 2,17 г в группе, которой вводили MCC 1274, и 2,32 г в группе, которой вводили ATCC 15700, подтверждая, что MCC 1274 и ATCC 15700 подавляют повышение массы жировой ткани (по сравнению с контрольной группой масса жировой ткани снижалась на 18,4% в группе MCC 1274 и 12,8% в группе ATCC 15700, что является значимыми различиями при p<0,05).

На основе указанных выше результатов становится очевидно, что бактериальные штаммы B. breve MCC 1274 и B. breve ATCC 15700 обладают действием против ожирения, включая супрессирующее действие на повышение массы тела и супрессирующее действие на повышение телесного жира, и, в частности, способны супрессировать повышение (накопление) телесного жира.

Кроме того, во время вскрытия общепринятыми способами также измеряли уровень инсулина в крови и уровень сахара в крови, и из полученных результатов измерения вычисляли величину HOMA-IR, действующую как индикатор резистентности к инсулину, с применением числовой формулы (1) ниже.

Величина HOMA-IR = уровень сахара в крови (мг/дл) × уровень инсулина в крови (мкМЕ/мл) + 405 (1)

Как показано на фиг. 4, результаты демонстрируют величину 32,10 в контрольной группе, величину 11,87 в группе, которой вводили MCC 1274, и величину 10,55 в группе, которой вводили ATCC 15700, подтверждая, что B. breve MCC 1274 и ATCC 15700 проявляют улучшение толерантности к глюкозе и улучшение резистентности к инсулину (значимое различие при p<0,05 по сравнению с контрольной группой).

Из указанных выше результатов становится очевидно, что B. breve не только не вызывает побочных эффектов, связанных с конъюгированной линолевой кислотой, то также и улучшает толерантность к глюкозе и резистентность к инсулину.

Как показано в приведенных выше результатах, B. breve с низким превращением в CLA, проявляли коэффициент превращения в CLA не более 10%, обладая действием против ожирения, включая супрессирующее действие на повышение массы тела и супрессирующее действие на повышение телесного жира у мышей с индуцируемым диетой ожирением.

В указанном выше тестовом примере 2, если предположить, что B. breve с низким превращением в CLA в корме превращали LA (3,1%) в CLA, то количество CLA в корме будет составлять не более 0,3%. Для достижения эффекта против ожирения или снижения телесного жира за счет CLA у мышей с индуцируемым диетой ожирением необходимо смешивать, по меньшей мере, 0,5% CLA с кормом (смотри непатентный документ 5), и, принимая во внимание этот факт, B. breve с низким превращением в CLA обладает независящим от CLA действием против ожирения.

<Пример 1: Порошковый состав>

Среду с восстановленным сухим обезжиренным молоком (содержащую 13% по массе сухого обезжиренного молока и 0,5% по массе дрожжевого экстракта) стерилизовали при 95°C в течение 30 минут. Затем среду инокулировали культурой для посева B. breve ATCC 15700 и затем инкубировали в течение 16 часов при 37°C. Получаемый при инкубации препарат лиофилизировали для получения порошкового состава B. breve ATCC 15700. Количество бактерий B. breve ATCC 15700, содержащихся в получаемом порошковом составе, составляло 8,5×10¹⁰ КОЕ/г.

Данный порошковый состав можно применять без последующих модификаций в средстве против ожирения, питании или напитке против ожирения, улучшающем толерантность к глюкозе средстве или питании или напитке для улучшения толерантности к глюкозе по настоящему изобретению.

<Пример 2: Порошковый состав>

За исключением применения B. breve MCC 1274 вместо B. breve ATCC 15700, порошковый состав получали тем же способом, что и в примере 1. Количество бактерий B. breve MCC 1274, содержащихся в получаемом порошковом составе, составляло 5,5×10¹⁰ КОЕ/г.

<Пример 3: Йогурт>

1000 мл 11% (масс./масс.) среды с сухим обезжиренным молоком, содержащей 0,5% (масс./масс.) дрожжевого экстракта, стерилизовали при 90°C в течение 30 минут, и затем среду инокулировали 100 мл культурой для посева B. breve ATCC 15700 и инкубировали в течение 16 часов при 37°C.

При раздельном получении 1500 мл 10% (масс./масс.) среды с восстановленным сухим обезжиренным молоком стерилизовали при 90°C в течение 30 минут, и затем среду инокулировали 50 мл смешанной культуры Streptococcus thermophilus (производимых Chr. Hansen A/S) и Lactobacillus bulgaricus (производимых Chr. Hansen A/S) и инкубировали в течение 5 часов при 42°C.

Кроме того, при другом способе получения 50 л сырого молока, содержащего 3,0% (масс./масс.) молочного жира и 9% (масс./масс.) нежировых твердых веществ молока, нагревали до 70°C, гомогенизировали под давлением 15 мПа, стерилизовали при 90°C в течение 10 минут и затем охлаждали до 40°C. Данную простерилизованную основу инокулировали 750 мл предварительно инкубированной культурой B. breve ATCC 15700 и 300 мл инкубированной смешанной культуры Streptococcus thermophilus и Lactobacillus bulgaricus, полученной смесью наполняли контейнер из многослойного материала (объем: 500 мл) со слоями алюминия. Контейнер запечатывали и инкубировали при 37°C до достижения pH 4,6, и затем немедленно охлаждали.

Таким образом, получаемый йогурт обладал содержанием молочной кислоты 0,81% и содержал 1,1 10⁸ КОЕ/мл B.breve АТСС 15700.

Данный йогурт можно применять без последующих модификаций в качестве питания или напитка против ожирения или питания или напитка для улучшения толерантности к глюкозе по настоящему изобретению.

<Пример 4: Йогурт>

За исключением применения В. breve МСС 1274 вместо В. breve АТСС 15700, йогурт получали тем же образом, что и в примере 3.

Полученный йогурт содержал 8,5 10⁷ КОЕ/мл В. breve МСС 1274.

<Пример 5: Клубничный джем>

К 500 г клубничного джема добавляли 10 г порошкообразной композиции по примеру 2 с получением клубничного джема, содержащего штамм Bifidobacterium breve МСС 1274 (FERM ВР-11175).

<Пример 6: Томатный сок>

К 500 г томатного сока добавляли 50 г порошкообразной композиции по примеру 2 с получением томатного сока, содержащего штамм Bifidobacterium breve МСС 1274 (FERM ВР-11175).

<Пример 7: Коровье молоко>

К 1000 мл коровьего молока добавляли 100 г порошкообразной композиции по примеру 2 с получением молочного продукта, содержащего штамм Bifidobacterium breve МСС 1274 (FERM ВР-11175).

Claims

1. Бактериальный штамм Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175, проявляющий низкий коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту, для потребления млекопитающим.

2. Применение бактериального штамма Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) для получения композиции для снижения или предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

3. Применение по п.2, в котором получаемая композиция дополнительно содержит бактериальный штамм Bifidobacterium breve АТСС 15700.

4. Применение по п.2 или 3, в котором указанный штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%)=(получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

5. Применение бактериального штамма Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) для снижения или предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

6. Применение по п.5, в котором указанный штамм используют в комбинации с бактериальным штаммом Bifidobacterium breve АТСС 15700.

7. Применение по п.5 или 6, в котором указанный штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%)=(получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100

8. Фармацевтическая композиция для снижения или предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, содержащая бактериальный штамм Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175).

9. Фармацевтическая композиция по п.8, дополнительно содержащая бактериальный штамм Bifidobacterium breve АТСС 15700.

10. Фармацевтическая композиция по п.8 или 9, в которой указанный штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%)=(получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота) 400.

11. Фармацевтическая композиция по п.8 или 9, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.

12. Средство снижения или предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, содержащее в качестве активного ингредиента бактериальный штамм Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175).

13. Средство по п.12, дополнительно содержащее в качестве активного ингредиента бактериальный штамм Bifidobacterium breve АТСС 15700.

14. Средство по п.12 или 13, в котором указанный штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%)=(получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

15. Способ снижения или предотвращения ожирения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в снижении или предотвращении ожирения, бактериального штамма Bifidobacterium breve МСС 127 4 (FERM ВР-11175) в количестве, эффективном для снижения или предотвращения ожирения.

16. Способ по п.15, который дополнительно включает введение указанному субъекту бактериального штамма Bifidobacterium breve АТСС 15700.

17. Способ по п.15 или 16, в котором указанный штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%)=(получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

18. Способ улучшения толерантности к глюкозе, включающий введение субъекту, нуждающемуся в улучшении толерантности к глюкозе, бактериального штамма Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе.

19. Способ по п.18, который дополнительно включает введение указанному субъекту бактериального штамма Bifidobacterium breve АТСС 15700.

20. Способ по п.18 или 19, в котором указанный штамм проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%)=(получаемая конъюгированная линолевая кислота / добавляемая линолевая кислота)×100.

21. Пищевой продукт для предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, содержащий средство по любому из пп.12-14.

22. Напиток для предотвращения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, содержащий средство по любому из пп.12-14.