BG96928A - Синтетични мембранни везикули съдържащи функционално активни сляти пептиди като освобождаващи лекарства системи - Google Patents

Синтетични мембранни везикули съдържащи функционално активни сляти пептиди като освобождаващи лекарства системи Download PDF

Info

Publication number
BG96928A
BG96928A BG96928A BG9692892A BG96928A BG 96928 A BG96928 A BG 96928A BG 96928 A BG96928 A BG 96928A BG 9692892 A BG9692892 A BG 9692892A BG 96928 A BG96928 A BG 96928A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
vesicles
membrane
cell
detergent
vesicle
Prior art date
Application number
BG96928A
Other languages
English (en)
Other versions
BG61215B1 (en
Inventor
Reinhard Glueck
Peter Klein
Peter Hermann
Original Assignee
Nika Health Products Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nika Health Products Limited filed Critical Nika Health Products Limited
Publication of BG96928A publication Critical patent/BG96928A/bg
Publication of BG61215B1 publication Critical patent/BG61215B1/bg

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6839—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting material from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A61K47/6913—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome the liposome being modified on its surface by an antibody
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Feedback Control In General (AREA)
  • Measurement And Recording Of Electrical Phenomena And Electrical Characteristics Of The Living Body (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Fittings On The Vehicle Exterior For Carrying Loads, And Devices For Holding Or Mounting Articles (AREA)
  • Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Air Conditioning Control Device (AREA)

Abstract

1. Фосфолипидна двуслойна везикула, включваща клетъчно специфични маркери върху мембраната и съдържаща поне едно фармацевтично активно вещество, характеризираща се с това, че клетъчно специфичните маркери имат най-малко 90% биологична активност, приизмерване съгласно luеsснеr & gluеск, аnтivirаl rеsеаrсн 14, стр. 39-50, 1990 година. 15 претенции

Description

Изобретението се отнася до синтетични мембранни везикули /липозоми/, както е описано в преамбюла на претенция 1,и особено до везикули, представящи на повърхността си молекули на сляти пептиди или други клетъчно специфични протеини«Молекулата слят пептид може да бъде под формата на синтетичен или пречистел пептид или като част от класообразно разклонен гликопротеин от обвит вирус,например хемаглутинин от грипния, парагрипния или Та rest вируси «Клетъчно специфичния протеин
V може да бъде 1^ (г антитяло,например Q7) 4 антитяло.
Когато едно трябва да премине лекарство се прилага на даден субект,то обикновено ф от мястото на приложение до плазменото пространство ι следователно,начинът на приложение може да окаже значим ефект върху фа] макокинетичния профил на лекарството в кръвообръщението. Така-, при оралнс приложение на лекарство,когато е подходящо,се стига до слабо начало на негевото действие и ненадеждно,при достигането на оптимално ниво на лекарството в плазмата.Обратното,при интравенозно инжиктиране се стига д<
-2бързо и точно установяване на нито в кръвообръщенито,за сметка на извее тна болка и неразположение на пациента.Въпреки това,даже когато лекареч твотосе инжектира директно,в ситемата на кръвообръщението,връзката между администрираната доза,нивото на лекарството и продължителността на действието му,въобще, не е проста.Тези параметри се определят с помоща на мрежа от сложни и често съревноваващи се пътеки,водещи или до акумолиране на активните лекарствени молекули на предназначеното место /мишена/ или до инактивиране и изхвърляне на лекарството.Тези пътища включват биотрансформация в черния дроб или в други тъкани,екскреция чрез бъбреците или» жлъчния секрет,свързване на лекарствата към фиксирани ш циркулиращи клетки или макромолекули,пасивно или ядиирано преминаване ι лекарството през мембранните бариери //ге^т^ ,U/.A./1979/:2)гс^- /)/_$·pjZA/CU? i?S, μ irs/Af P'/eSS^
В последните години се наблюдава голям интерес към перспективата да се влияе върху разпределението -иметаболизма на лекарствата по благоприятни начини,чрез използуване на различни видове носители или освобо) даващи лекарства системи.Тези систими са предназначени да контролират един или повече от следващите параметри p-h cSicC · ? ксхгии-.съ 56, 683-690/ :
(J &/ степента на приложение на лекарството в определено телесно прост /Jи И/ с< и о . /<./1975/, ранство;
Ь/ разпределението и локализирането на лекарството в тялото; с/ продължителността или степента на метаболизъм на лекарството.
Значително подобрение на контролираните освобождаващи лекарства системи представлява развитието на липозомите,които за първи път се ога сват от/3с>»1^-/2с-еа(- сЛ vclisd } ΜβΜο Λ' bld a n J' ^C\/1965/,JJ . kof. 13, 238-252/.В наши дни литерагтурата претендира за екстравагатно разнообразие от облаги,които ще се спечелят чрез представянето на дадени лекарства в липозоми.Те мгот най· общо да се групират в следващите направления :
1о Липозомите могат да преминават през биологичните мембрани и да улесняват преноса /транспорта/ на лекарства през обикновено непропускливи бариери.Липозомите улесняват,в частност,вътреклетъчното навлизане на капсулирани съединения.
2о Липозомите могат да бъдат определени да взаимодействуват със специфични тъкани,като подобряват специфичността на лекарството и намаля ват токсичността му.
Зо Фармакокинетиката на лекарствата може да бъде благоприятнао модиф] фицирана от липозомите,чрез модулиране на освобождаването на лекарството, разпределението и отстраняването му от кръвоносното система.
4. .Химично и метаболично лабилните лекарства могот да бъдат предпаз вани от дезактивация чрез липозомите.
Лекарствата,представляващи потенциален интерес за терапевтиката, могат да бъдат отделяни по този начин,тъй като капсулираните съединения проявяват,поне tn ь /го ,модифицирани свойства,при сравнение с немоди фицираните субстанциИоЗа съжаление,ранните надежди по отношение на рехимиотерапията не бяха напълно осъществени Fro 4^ волюционно новия достъп до от експерименталните факти /Fiddef /1981/,/,^//5/· / Ζ ύ у*; с С. / у /га С Ч Ге d ' d /<1 J /} £ £ У е г /кЧ гЧ По-добри резултати,при
Cl Λ? Cc Ί/’-Α , ' I, ξ4 A d, C C- d J~J- /.
на липозомише като вектори,моизползуване гат да бъдат постигнати чрез въоражаване на липозомите със специфични протеини.Ако,веществата,съдържащи се в липозомите трябва да се отделят почуспешно при избраните органи или тъкани,трябваше да бъдат създадени тези техники на въоръжаване,с цел да се избегна натрупването на липазоь ми на нежелани места /като по този начин се намалява токсичността/ и оптимизирането на отделянето при специфични клетки /като така се подсилва желания ефект/.
При някои изследвания-се използува покриването на липозомите със струпани имуноглуболини,с цел да се оптимизира освобождаването при фа—4— гоцитни ρβ клетки //гм^/Х·, «А. tvn d c £ , /ф . Z .
/X9?'V, 4’VrVr ·&Γ·,13. ’59-^3 AinMr^h ,М.С.,Ои , ί .Η., ζ<7di е Γ>Н · , (Л 2JГУ ~>т^\ а>7-η г O'· А. н<А Z^· * T? , S ./1960/:
'Зил^ц· λ ν d ' !> ,В»Н.&-ц<4 £->χ ,H.tf · tidJ ·/ 255—
270 · ;-7 ό4~ /Μί^ * co·, fl Μ-Ύ/’ Ζ^Γ^α и-, X
Следващо подобрение е описано от c^d /Т&Тъ/, $4 Lcdc^ . /¾^ ., 65f 537-544, където въорънаването на липозомите се засилва чрез асоцииране на клетъчно специфични !%&- антитела.Ефекта от лппозомите се увеличи от 3 до 25 пъти, при поставяне на различни щамове клетки в присъствие на липовомв,асоциирани с имуноглуболт ни сре.’цу посочените клетъчни щамове .Използуваната техника показва,че въоръжените липозоми по този начин,не успяват да се слеят с клетъчната мембрана и следователно се избягва ефикасното освобождаване на лекарства в клетките./Дефгч-^е^ ·» , 'J . V. , / ft- · , , S’ .0. i ·Ζ) */l 79/e · ш 4s-/· 1 <} 585-0’91/ · йай-значймотс подобреное при производството на освобождаващи лекарства системи бе въоръжаването на липозомите с вирусни протеини : линозомните мембрани се реконституират с протеини като хемаглутинина ОТ грипния вирус //$Ζ>ιΧ4 сф Λ ·,/^ί^Ζ tC. 2. t
ТЗ . /1975/,£а«-.с«^ 2, в--^/.ефикасността и специфичността на ранната вирусна взаимодействие с клетката гостоприемник /абсорбция,пенетрация/може да бъде предадено на линсзомните носителя чрез инкорпориране на подходящиие вирусни протеини в липозомчите мембрани.Наистина, инкорпорирането на клас.образно разклонени протеини от Сендай вирус, в двойния слой на липозомите,в оди до най-малко 100 пъти увеличение,при прилагане на м^шп 1 клетки от А фрагмента на дифтерийния токсин,сравнени със съдържащи Фрагмент Д липозоми,без класообразни разклонения /(ЛхД-|с4<^ , Т · ,i6i ·, Sfo *и 9 и нц /197ж/· Сф' . · £0,10-20/.
Ol>_£t <d%
наглутинин· ,к,е.А- еЛ ·//3)ор
Главнята пречки при горните «етоди се .дължат на липсата на напълно активни сляти белтъци, на грипния хемаглутинин.Грипните А вируси навлизат/пенетрират/ в тяхните клетки гостоприемници чрез мембранна фузия. След прикрепянс към клетъчната повърхност,вирусните частици навлязат в клетките и се транспортират до ендозомите и лизозоиите.Киселата среда в тези оргаиеля активира фузията/слжваието/ между мембраните на вируса и на клетката гостоприемник.Предимството на везикулярнс-клетъчна фузия пр; ниско рИ се основава на /акта,че съдържимото на всзикулите се освобожда* ва слсд навлизането на в клетъчната дитоплазма /рН в ендозома е около 5,2/.0ткрктието на индуцирената при ниско рИ фузия на глвкопротвжни·· на грипния вирус доведе до многобройни опита да се развият ефективно ос· вобождаващтите лекарства-системи чрез хиаозоми ’въоръжени* с грипен хеА' са. .4τ
ДрбЗ/, 72?, 766-250, използуват рсконститупрани везикуля от грипни хем! глутияйнови гликопротеяжи във·· г фосфатйдилхавии/ от яйчен жъжтъ^4 спин-белязън босфатадилхолин/холестерол /моларно отношение 1,6 : 0,4 : 1/. Препарати с подходящо отн(жени е Гфотожн-ливд /1 :44 и 1 :10Ь мол/мол/ съдържат возикулн с диаметър от 100 - 300 нм и е гяяяма плътност на класообразнкте разклонения на повърхността,но има и някои неудобства :
1/ Поради високото съдържание на холестерол и остатъците д<зтергент,те показа ат намалена ецдоцитозя на фагоцетните клетки.Самите су описват само обб активност;но според по-скоро разработения,подобрен метод-тест,активността е само 1 /\/ след 7 /виж прг.иср 19 по-долух
Възможно ? това да се дължи на гакта,ч<: оЛ~ използуват
Тг$4еи Х-100,който частично реагира с хемагл,утин?/гна и не се отстранява напълно чрез диализа.
в детайли
2/ За да се изучиГ^алВта на компонентите на вирусната мембрана при .узпята, е нужня да сме във възможно т да манипулираме тези компоненти. За тази цел се изисква метод за изолиране и реконституяране на вирусните
-υмасообразно разклонени протеини,продудирайки реконституирани вирозсми е пълна биологична активност към яузия.Въпреки усилията на
U9 сЛ «,не Сй описва* реконституиране на вирусните обвивки за грипния ввруе,които да показват пълна биологивна активност към фузия.
S/ Ярикренянето на въоръжените* липозоми,съдържащи фармацевтично актимвни вещества,към специфични клетки,не може да се демонстрира·
Повечето от другите методи,използувани за реконституиране на вита русни обвивки,се базират на разтворимост^аа вирусната мембрана е детервс гент и след седиментация на вътрешните вирусни протеини и генетичния ма териал се отделя детергента от супердатантата.Детергенти с висока кри тична шщелна концентрация,като октилглукозид,могат ефективно да се отстранят чрез диализа.Реконституиране,чрез използуване на октилюкозид еа описани е* за вирус /$ FV / /)4еЛациг ,А., ,Μ· с-ν,Α ,К»/1981/,116, 27 - Зб/; вируса на везикулярния стоматит /vrv/zm^^ ,ο.,^λδ^ζ ,/ζ.,τ^ι^ ,?.г.
,^./1984/,^ . /W . . 259 , 4622 - 4628/; грипния
Вирус , £ ·Τ·0·,0>®^-4 ,Κ·, ,Η·^) · , р ./1980/L ’r\r^j ум ,104,294-302/: и Сендай вируе /Мсц-^ рп, ,М.Ь ., ΙΛ ^ ·, Г<?Аг_
АА-гФуАц- ./1985/, .,
149,591 - 599/.Въпреки това ,не се продуцират истински реконституирани вирусни обвивки,във всеки един от тези случа1.йапример,вирозомите форми· рани от £F\/ са с пременено съотношение протеини-липиди, спрямо това на вирусната мембряна, а вмрозомите продуцирани от не проявяват био логична активност към фузия.
друг метод,описан в литературата,е отделянето на класообразнвте разклонения вб грипния вирус от вирусните частици с бромелайн.Получения по този начин хемагл^тинин се прикрепя към липозомите ,/J ., I«WHiM ,А. U/Xite .,2(50 /δ/ 29?3-2981/.0снов ната пречка при този метод, е ограничената биологична активност на подобни зезикули,дължаща се на разцеяване е бромелайн·
Така,техническият проблей,подчертаващ настоящето изобретение,е да се осигурят везикули,които да транспортират желаните лекарства или фармацевтично активни субстанции до специфичните клетки,такива като макро# фаГите,Т^-помощните клетки,мозъчни?е клетки или други клетки на специфични органи,които везикули,след това ое прикрепят плътно към тези клет· кк,навлизат в клетките чрез Фагоцитоза или ендоцитоза,така че да се освободи желаното лекарство в дитоплазмата па ^сланата клетка,непосредствено след еидоцитозат*.
разрешението ла горе-опьсанпя технически проблем се постига чрез осигуряване на вируените хемаглутининови вирозоми,охарактеризирани в първа претенция.Специфичните варианти на осъществяване на изобретението и на подобрените везикули са описани в подпретенции от 2 до Р.Метод да получаване на такива везикули е описан в претенции 10 и 11.Приложение на такива везикули е описано в претенции 1с и 13.
Съгласно това,се осигуряват вирусни хемаглутининови вирозоми,които включват липозома,идеална за ендоцитоза и напълно активен/биологично клетъчно-специфичен маркер,за предпочитан® вирусен хемаглутинов гликопротеин /ли негов производен,или синтетицен слят пептид,способен да индуцира непосредствената Фузия на спомената вкрозша след еадоцитоза,11м желаната клетка.
друг вариант за осъществявана на изобретението е теди,при който подходящ крослинкер,койтс се адсорбира върху специфичната липовома,се използува в сместа заедно със специфично антитяло, насочен» ям отгаворя ния рецептор на желаната клетка,за да индуцира механизма на ендоцитоза, което е свързано към крослинкера по такъв начин,чс да остане напълно бя ологично активно.
Основната характеристика на тези освобовдоваед лекарства везикуи е,че те носят върху повърхността си въпросните напълно активни вирусни гликопротеини или тяхни производни и биологично активни,специфични ажп тела,способни да се прикрепят към аелалухе клетки,,-,а навя а ат в клетки-8т^^агоцитоза или ендоцитоза,да индуцират непосредствената фузия на тези везикули с вътрешната цитоплазматична мембраната да освободят съдържанието на вирозомите в цитоплазматана клетките.Благодарение на напълно активните сляти пептиди,съгласно изобретението,лекарствата се освобождават веднага след фагоцитозата,с цел да се избегне нежелания продължителен престой в еидоцитозомвте,което би дало начало на неспецифична деградация на фармацевтичните субстанции,съдържащи се във вирусните хемаглутининови везикули,съгласно настоящето изобретаниа.При pH 5,грипните сляти пептиди от повърхността на везикулите се активират по същия начин, като при случая е живия грипен вирус.Съдържимото на везикулите се освобождава в цитоплазмата,какао при случая с грипния вирус и освободения нуклеопротеин.
Терминът •липозома* шнаея до среден размер сросфолипиди с биламеларна структура,изготвени чрез контролирано отстроняване на детерге: та.Размера на везикулите,първонач^и- «^ирани при отстроняването на детергента,зависи от използувания дстергентхи Фосфолипид,и при някои случа#,от метода и скоростта на отстраняване на детергента.
Настоящето изобретение се отнася също така до метод за приготвяне на везикули,специално подходящи за фагоцитоза.Методът включва следните етапи :
1/ Разтваряне на един или няколко фосфолипид» в нейонен детергент;
2/ формиране на везикули чрез отстраняване на детергента с микроносители от палистиролови перли /омрежен строеж - влажни - 20-50;
3/ извършва се определено механично движение,по време на отстранява нето на детергента;
4/ желания диаметър на везикулите /50 -100 нм/се постига чрез ултра звукова обработка.
Друг вареант на осъществяване на настоящето изобретение се отнася до везикули,при които фосфолипидите включват 70-955» фосфатидилхолин и
5-30?? тегловни от друг фосфолипид,като фосфатидилетаноламин.Съдържани-Οето на холестерол е за предпочитане под 1%.
Термин·» слят пептид се отнася до вируднд класообразно разклонени гликояротеини,включващи слятия пептид.Един вариант на осъществяван! на настоящето изобретение се отнася до пълния хемаглутининов тример на класообразните разклонения на вирусната повърхност или до един мономер илил до едва или две разцепени субединици,гликопептидите ΗΛ1 и НА2,съдъ ржащи функционалния слят пептид.Друг вариант на осъществяване на настоящето изобретение се отнася до самия слят пептид,изолиран или синтетичн! получен.Един от предпочитоните варианти на осъществяване на настоящето изобретение е този,при който споменатите полипептиди,включващи слятия пептид,се отнасят до грипни хемаглутинини,по-специално от подтип A-H^N
Терминат крослинкер си отнася ;о органична хетерофункционална молекула,способна дас8вързва към повърхността на везикулите,приготвени съгласно изобретението и способни да свързват полипептиди.Предпочитан вариант за осъществяване на настоящето изобретение е този, ту- който тази долекула е органична,бидункционална молекула,съдържаща карбоксилна група и тиолвва група,по-специално сулросукцинимидил-/ $-/производно, като S* -4*/р-малеимидо-фенил/-бутират, ST -ацетат, ί-2-Λη -азндо-о-нитробензамидо/етил-1,3^-дитиопропионат, ^-6-/4’-азидо-2’-нитрофениламино/ хексанват -/4-азидофенилдитио/пропионат, ^-2/р-азидосалицил-амидо/ ©τμ-Ι,Β’-αητιοπροπηοηβτ, 'ъ-2/биотинамидо/-етил1,3,-дитиопропионат,$’-6/биотинамидо/хексаноат, ζ -3-/4-хн рроксифенил/пропионат, ^-/4-йодоацетга амино бензоат,^ -4-/А/ -малеимидометил/циклохексан-1-карбоксилат, $ -2,2, 5,5-те«раметилпиролин-1-оксил-НС1·
Терминът клетъчно специфичен* протеин или маркер,се отнадя да протеин способен да се свврзва към крослинкера на повърхността на ввзиклетъчкате кулата w да се свързва към<рецепторите,Ш1дуциращи механизма на ендоцдтоза.Предпочитан вариант на настоящето изобретение е този,при който тази молекула се отнася до клетъчен-рецептор^специФичв· антитяло,по-специално до моноклонално антитяло.
-10Пркмерите и фигурите илюстрират изобретението :
ДВМШк!
Изготвяне на синтетични мембранни везикули от Фосфатидилхолин с напмно функционално активни вирусни сляти пептиди в хемаглутининов тример от грипния вирус и съдържащи екстран сулфат,като антивирусно я лекарство.
игура 1 показва схемата на метода;окръжностите представляват теч ни разтвори или суспенсии;квадратите представляват твърди образувания ийи преципитати.Най-общо :
Смесват се слятия буоерен разтвор F В,съдържащ 2700 мг. сухо вещество и хемаглутининова суспрнвия НА,съдържаща 46 мг. НА и 31,1 мкмола вирусм фосоолипиди VfPL и се подлагат на ултрацентрффугиране U-C1.Получената плътна маса се разтворя е разтвор П1,седържащ слятия буфер Р В и октаетилен гликол монододоцилов етер ОЕ & като умерен детергент.Следващо ултрацентрофугираве U С2 води до супернатанта 1У,садържаща F В,НА, VPL и 0Е£,към която се добавя антивирусния /лекарство/ декстрая сулфат за получаване на разтвор V.Междувременно,фосфатидилхолинов />С/разротационен твор VI се подлага на изсушаване чрез* вакуум-изпарител в облодънна колба, пр- което се получава тънък PC-слой на вътрешната повърхност на колбата.Разтвор V се прибавя към този слой и се получава разтвор VII,който се третира трикратно с микроносители от поиистиролови перли РВМ за отсч траняване на ОЕ & до получаване на разтвор VIII,в който се проявяват везикулите VE6- от желания размер,в следствие на ултразвукова обработка ;получената суспенсня IX се разрежда с HaCI -разтвор Х,до образуване»» на лекарствената суспенсия 3 £ .
В детайли :
узионния/слят/ разтвор /1/съдържа 7,9 мг. NaCl/мл, 4,4мг/мл трк натриевцитрат дихидрат,2,1 мг/мл 2-морфолиноетан сулс^онова киселина монохидрат /УЕ-5/,и 1,2 мг/мл Ь1-хидроксиетил-п- перазин-Н»-2-етан сулфонова киселина във Μ,ο /рн аюстирано на 7,3 с l-Ν НаОН/.
-11Грипния вирус Дам АДанхайски/ 16/89 /ЙЗН2// се развива в алантоиеа яа кокоше яйце и се пречиства двукратно чрез ултрацентрофугиране в захарозен градиент,както е описано от ? л l^Tl/i/ ro 44,39€ -40е/.Суспевоия/П/ от пречистен грипен вирион,съдържа 266 мкг./мл хемаглутинин от грипен вирус и общо количество 31,1 шшола вирусни фосфолипиди,които са определени както следва :
Вирусни осфолипиди се екстрахират съгласно .tL^> ,ч. <4 , Г . £ .Н ./1957/; J .СРсщ .226,497-509/.
За анализ на «ррани фосфолипидите,тежката органична фаза се изпарява и остатъка или се подлага на определяне на фосфатите /^<-^,р.Г .фГ’Ьс;ς<ζ ,Т*.У -c-bJ ,Н./195б/;Х)и^7 .CUi^ .28,1756-1758/,или да се разтвори в малко количество хлороформ-метанол за последваща ДЛ с/ тънкослойни хроматографини анализ на Фосфолипидите.Силикагелови плаки /ktrJi/ се използуват и се проявяват в система разтворители хлора/орм-метанолоцетна киселина-вода /25:15:4:2; об/об/об/об/.Отдилнте Фосфолипиди се визуализират чрез експониране с йод и се идентифицират на основата иа техните &.F стойности /сравнение с контролни проби/.Протеините се определят по модифициран метод на Лоури /iWo-rob , (τ.Λ ./1977/; ΪΜ. fan..
.83,346-356/.
Общо количество 173мл от разтвор /YL/ се смесва със същото количество от въпросния слят буферен разтвор Д/.Този разреден грипен вирус се уплътнява чрез ултрацентрофугиране при 100,000 х за 10 минути.
15,3 мл детергентвн разтвор,съдържащ 54 мг/мл Д 100мкмола/мл/ от октаетилен гликол монододецилов етер /ОЕбг/ във въпросния слет бус ерен разтвор, се прибавя към уплътнения грипен вирус.Това отговаря а 18мкг - 33,3 нмола ОЕф· Ж& миг хемаглут”Нии.Сяед десет минути, уплътнен ат а у утайка се разтваря напълно.Разтворът се подлага в продължение «а 1 час на ултрацентрофугиране при 100,000 х^! · 3000 мг от изсушеното антивирус но лекарство декстран сулфат /L.fa-e i (TbutJc , X · , /7г7~>
14,39-50/ се прибавят към останалата супернатанта IV,съдър
-12жаща разтворен грипен хемаглутининов тример Плюс несъществен остатък от невраминидаза ж други съставки,които образуват разтвор V.
с©:атидилхолии се разтваря в смес 2:1 на хлороформ и метанол, до концентрация 10мг/мл.28мл от този разтвор VI внимателно се изпаряват чрез прилагане на вакуум-ротационен изпарител,като се образува тънък фосфолипиден слой от 280 мг по вътрешната повърхност на облодънна колба.
Разтвор V сега се прибавя към фосфолипидния слей в облодънната колба.След пене 15 минутно разбъркване и пълно разтваряне на фосфатидаг х оляна,образувания разтвор VII се прехвърля в стъклен контейнер заедно с 4,8 г. микроиосителж от полистиролави перли РВМ,с омреиена структура с размер /влажни/ от 25-50.
Контейнерът се разклаща,така че съдържанието да се придвижи двукратно за секунда от единия до другия краЙ.Един час по-късно,суспенсията се аспирира с тънка пипета и се прехвърля в нов контейнер с 2,4г. ми· кроносители от полистиролови перли от същия размер.Контейнера се разбър· ква в продължение на 30 минути.Процедурата се повтаря двукратно.След последната стъпка,получения разтвор VIII се отделя от перлите,фиксира се на водна баня и се подлатаг на ултазвукова обработка на апарат /бгсл^р^BV, честота 50 кйг-ilO^. 10 секунди ултразвук©! шок се повтаря двукратно,през интервали от 10 секунди всеки,и се получа· ват везикули със. среден размер ее с диаметър от около 50-100нм.Крайният разтвор IX се разрежда 1:100 с бизиологичен NaCl разтвор X.
Приготвяне на синтетични мембранни везикули,съдържащи антивирусно антитяло лекарство,адсорбирано върху хемаглутининов тример от грипния вирус и CJ) 4 моноклонални антитела.
Везикулите се приготвят,съгласно пример 1,със следните модийикаци! вместо 1вмг,само 9мг фосфатидилхолин,и 1мг фосфатидилетаноламин /кефали ин/ ife мл. се разтварят в 2:1 смес от хлороформ и метанол.
-13След приготвянето на хемагл. тининовите в език ули, съгласно приер!, 20 мг сулфосукциииждил-4-/М-малеидоуенил/-бутират /£МРВ//като крослинкер/ ее в 2 мл. вода,се прибавят към разтвора.След 1 чае престой на стайна температура и при внимателно разклащане,везикулжте се уплътняват чрез ултрацентрооугиране при 100,000 х q в продължение на 10 минута.
мл от ЗА /(Ус-къ L·,/се прибавят към центрофугата/уплътнението/.Ресуспендираният материал се разклащат внимателно за няколко секунди на всеки 5 минути в продължение на 1 час при стай на температура.Накрая,се уплътнява отнаво/за атстраняване на несвързаните антителаДрез унтрацентрофугиране при 100,000 х<? за 10 минути,.
Центрофугата се ресуепендира в 1,500 мл Оизиологичен ратвор на NaCl.
ВШ.ер......
Пример 2 се повтаря със следните модификации:
Вместо декстранов сулфат,1000мг. от ммидазолкарбоксамид и 1000 мг х^дрокси-уреа /фармацевтично ефикасно срещу меланоми укакто е описано OTiGfu V/Ht r- <^hJ (,2г , /п'7^0-7,1'/' _
УУУУгс.рДе 03/1979//се прибавят към разтвор IV/виж пример 1/.
След прибавяне на крослинкера и по-нататъшно обработване както в пример 2,1мг от моноклоналните антитела /също R 24 както е описано от
Vol.82.p· 1242; или
0,5 мг 155 - 0,5 мг Ь72 както е описано от .^г>с ,R. S /1989/,р. 782-787/ се прибавят към разтвора на везикулите VES като се достига доследния общ състав за 1000 човешки дози :
мг хемаглутинин
250 мг фссЛатидилхолин мг &осс атидилетаноламин /кефалин/ мг крое-линкер /s^/у/ -X МРВ/ мг манаклонално антитяло
1000 мг имидазол-карбоксимпд
1000 мг хидроксм-уреа
-14Тези все още конвенционални препарати,трябва да бадат приложени в пет-кратно количествено дозиране,т.е. посочените количества са заЗ 200 човешки дози само.
.....t А.
Пример 2 се повтаря със следните модификации :
Вместо декетранов сулфат,се добавят към разтвор IV /виж пример 1/ по 1000 мг от всеки^е$$1ге«енв от следващите фармацевтични препарати : адрипластин,ендоксан,флуорурацил /както е описано от Ля
р. 309, 1979/ и колхицин ДТбгА^/.
След прибавяне на крослинкера и по-нататъшна обработка,както в мр пример 2;1 мг от моноклонално антитяло <J2)B1 /както е описано от »Α·_Γ ·, Сс^тп а у- — γη<^ .Vol · 23·ρ·31, 19вб/ се прибавят към разтвора е везикули Jg.$ ,до получаване на пълен с®став за 1000 човешки дози от фармацевтичния препарат срещу -карциноми.
мг. хемаглутинин
250 мг фосфатидилхолин мг фосйатидметаноламин мг крослинкер /<ίΦ^4 - ГА/М/ мг моноклонално антитяло
1000 мг адрипластин
1000 мг ендоксан
1000 мг Флуорурацил
Пример 5 :
Примери 1 и2 се повтарят със следните модификации :
Вместо грипен хемаглутииинов тример,се използуват мономерите,влючващи слятите белтъци.Хемаглутинин-2-мономера,включващ слятия белтък, се получава чрез разцепвана на Т-Н моста чрез химическо редуциране с 4-дитиотреитол /V) ТТ, £;w/ и последващо отделяне от хемаглутинин-1 пептида чрез гел-хроматография /Уе/»^с-4 (Z 50/при pH 6.Пречистения
-15хемаглутинин-2-мономер е суспендяран,1ато суспенсията съдържа 180мкг мояомери,включително слятия пептид.
Пример 6 :
Пример 2 се повтаря със следните модификации :
Вместо грипния хемаглутининоп® тример,се използува нативния белтък.Грипният слят пептид,използуван за приготвяне на синтетични мембран ни везикули,се получава чрез химичен* синтез.Може да се използува коя да е от изброените на иг. 2 аминокиселинни последователности .Бе установено,че разположението на поне една,за предпочитане три,цистеинови групи на единия край на съответната последователност^ благоприятно за 'узионн ата/слятата/ активност.
Разтворът с един от тези синтетични сляти пептиди съдържа 4 мкг на мл.
Везикулите съдържащи единот горните сляти пептпди се приготвят по следния начин :
мг фосфатидилхолин и 1мг ф-осфатидилетаноламин на мл. се разтварят в смее 2:1 на хлороформ и метанол. 28 мл от разтвора внимателно се изпаряват чрез прилагане на вакуум ротационен изпарител,при което се оформя тънък Сосфолипиден слой по вътрешната повърхност на облодънна кобба.
Зг. декстран сулфат се разтварят в 1С-,3 мл в детергентен разтвор, съдържащ ЮООмкмола октаетилен гликол монододецилов етер на 1 мл. от фу зионния буфер;разтвора се прибавя след това към Фосфолияидния слей в об лодънната колба.След разбъркване в продължение на поне 15 минути и наяъ пълно разтваряне на фосфолипидния слой,разтвора се прехвърля в стъклен контейнер заедно с 4,8г. мнкроносители от полистиролови перли с пореста структура /влажна/ от 25-50.
След това контейнерът се разклаща по такъв начин,че съдържанието да ее придвижва двукратно за секунда,от от единия до другия край.Един час по-късно,суспенсията се аспирира с тънка пипета и сг прехвърля в но нов контейнер с 2,4 г. микроноситеии от полистиролови перли със същия
16размер.Контейнерът се разклада в продължение на 30 минути .Процедурата ·< се повтаря двукратно.След последната стъпка,полученият разтвор се отстранява от перлите,фиксира се на задна баня и се подлага но ултразвукова обработка на апарат R,с } АнгсЛс7 BV,c честота 50 к
митуен ултразвуков шок се повтаря двукратно бфед интервали от 10 секунди всеки,което води до везикули със среден размер от около 50-100 ни в диаметър,
Към суспенсията се прибавят 2 мл вода,съдържаща 20 мг. сулфо-^МЛВ
След 1 час престой прг стайна температура,нри леко разклащан!
везикулите се уплътняват чрез 15 митутно ултрацеитроФугирвве при 100,001 х Q ·
Към уплътнената утайка се прибавят 2 мл разтвор,съдържащ синтетич* ния слят пептид.Ресуспендирания материал се разклаща внимателна в продъз жение на няколко секунди на всеки 5 минути ,в продължение на 1 час на стайна температура.Накрая,материалът отново се уплътнява /за да се отделят нс свързваните слятп попт-ди/чрез ултрацентрофугираве при 100,000 х за 10 минути .Уплътнената утайка се ресуспендира в 200 мл Физиологичен Nad.
Пример 7 ;
Пример С co повтаря със» следните модификации :
мл от разтвор съдържащ 2 мкг от синтетичния слят пептид и 2 мм съдържащи 100 мкг - Lc^ ЗА се прибавят към утайката съдържаща везикулите· ресуспендираният материал се разклаща внимателни няколко секунд1 на всеки 5 минути,в продължение на 1 час при стайна температура.Накрая, материала се уплътнява отново /с цел да се отстранят не свързаните слитж белтъци и специфични белтъци/чрез ; лтраценирофугиране при 100,000 х^’ за 10 минути.Утайката се ресуспендира в 200 мл физиологичен разтвор на NaC Пример 6 :
Везикули,съгласно пример 1 до 4,се приготвят с слятиня пептид или хемаглутинин от йеревируеи,рабдовируси,парагрипни или тога вируси.
-17а/ Рабдовируса на бяса се продуцира в човешки дишгоидни клетки.Получените супернатанти,съдържаща 107 вируса яа бяса на мл.,се пречистват и концентрират в захарозен градиент чрез ултрацентра^угиране.Суспенеията с вирусите на бяса съдържа 210 fe°%я с а на мл ϊ се обработва по-нататък,съгласно пример 1.
Ь/ Парагрипен вирус тип Ш с-с етежда развива в алантоиса на кокоше яйце и се пречиства двукратно чрез ултрацентрофугиране в захарозен градиент,съгласно пример 1.Пречистеният парагрипен вирион се суспендира до 24омкг хемаглутинин от парагрипен вирус на мл. и. по-нататък се обработва съгласно пример 1.
С/ Тогавиррсът на рубеолата се продуцира в човешки диплоидни клетки и се пречиства,съгласно а/.Пречистеният рубеолен вирион се суспендира до 20Ь мкг на мл. ез хемаглутинин от вируса на рубеолата и се обработва по-нататък,съгласно рример 1.
я ?
Антивирусните лекарства се приготвят,съгласно пример 1. Мишият PBL -SCrj) се третират е рибонуклеазен димер в продължение на 14 дни, 10 дни алтернативно с разтвор на фосфатен буфе само,с декстран сулфат или рибонуклеазен димер/приготвен съгласно пример 1 от РСТ/Ш 90/00141/ на три нива за дозировка,с декстранов сулфат в ляпозоми,или рибонуклеазен димер в липозоми,като и двете се обработват по-нататък съгласно пр? мер 1 от настоящето изобретение.Третирането се инициира едновременно с това на вируса с 100 ТОП) Ρ)θ от HIV-ljjjg.Мишите U -PBL -SCC7) се оценяват според данните от вирусната инжекция /вирусни изолати,РС£ детекция на провирусните секвенции/иа 2,4 и 6-тата седмици,следващи вирусната инжекция.Резултата от изучаването показва процента животни във всяка от третираните групи «м-ввеми от кой вирус са изолирани :
разтвор на фосфатен бушер /празна проба/ 80^ рибонуклеазен димер 0.001 мг/кг 92# рибонуклеазен димер 0.1 мг/ал 30'
-15декстран сулФат 10 мг/кг ВЗ рибонуклеазен димер 10 мг/кг 63^ декстран сулблт 10 мг/кг в линозоми 14rf рибонуклеазеч димер в лепозсп^
Резултатите отизследваиото показват предпазван·;·; на по-голямата част от третираните миши fcn-PBL -SCl D от 1IV инфекция,след 12 часа от инжектирането на 0,1 мг/кг рибонуклеазен димер,10 мг/кг декстран сулфат,липозоми съдържащи рибонуклеазен дпмер, и липозода съдьр-жащи декстран сулфат.Защитата с рибонуклеазен димер при 10 мг/кг е странична което може· 61 се дължи на факта,че прт- високите степени на дозиране,рибонуклеазния димер подтиска имунитетаЛе ое наблюдава защитен ефект на рибонуклеазния димер пр·- 0,001 иг/кг.Все пак,е рибон/клеазния димер,включен в липозоми,съгласно настоящето изобретение,успешната норма се подобрява от 634 на 25Ф,за сметка на високите дози.Очаквот се по нататъшни подобрения чрез оптималната степен на дозиране в липозомите.
До същият извод се достига,когато мишки със слабо Функциониращо РР< присаждане,на края на експеримента се изключват ои анализа,въпреки имуноглобулин че с»ава ясно от аиализа на нивата на ч OBeffiKMHsW^m^' и -глобин PCF анализа,че третиране с липозоми с рибонуклеазен димер,както и е липозоми с декстран сулфат,интерсерира е преживяемостта на човешките клетки .Изключването на /щ-РВЬ мишките от основата на човопкваа функция нал. га някои разлики между директното антивирусно въздействие и имуномодулаторната активност.
npy^...Ui.......
При теста за фузия,описан от LuacKsi' ch+iJ £4/1990/А?
14,39-50/везикули приготвени,съгласио пример 1 се сравняват с реконструирани грипни везикули,приготвени съгласно метода на^с^АSctU’ ozf- *4 · в*8 фузионна активност е моделните мембрани :
_гаснеа£_ла
Фиг. 3 показва кинетиката н^флуоресценцията на Щ8-белязан грипен вирус А с 7) ОРС-хол е старал ликозони· Повишаването на Флуопесценцията
-19изразява в % /гаснено та ‘ХчуоресценциятаДизчислена според £«j'JLr /вж по-горе/.
Началната степан на узкя ег получава от тангежтата към кривата на Лузия при време 0,когато *.узията/сливането/ co инициира /прекъсната ляния яа фиг. 3/.Крива 2 отговаря яа активността на сливане на везикулж: приготвени съгласно метода на 4Ά
ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

Claims (15)

1. фосфолипидна дву-слойна везикула, включваща клетъчно опецжфичнж маркери върху мембраната и съдържаща, жоне едно фармацевтично активно м карство,характеризираща *се е това,че клетъчно специфичните маркери им аз най-малко 90% биологична активност,при измерване съгласно £ &
» /9ή ta £ X2er&c<rc/f 14,39-50·
2. Везикула,съгласно претенция 1,характеризираща се с това че,съдър» жанието на холастерол е под 10%,за предпочитане под 2% тегловно и/или съдържанието на детергент а мембраната е по-малко от 10,за предпочитане по-малко от 1 ррЬ ·
3· Везикула,съгласно претенции 1 или 2,характеризираща се с това,че е с диаметър по-малък от 100 им. и за предпочитане е около 80 им.
4. Везикула,съгласно‘коя да е от горните претенции,характеризираща се с това,че клетъчно специфи^йите маркери включват поне едно - за пре; почитане моноклонално антитяло·
5· Везикула,съгласно коя да е от горните претенции,характеризираща се с това,че клетъчно специфичните маркери се подбират от групата, състс яща се от тримерен или мономерен хемаглутинин,една или две разцепени субединици вместогликопептиди НА1 и НА2,слят пептид изолиран от естествени източници,синтетичен ’слят пептид*.
6. Везикула,съгласно претенция 5,характеризираща се с това,че хеиаглутинина произлиза поне от един член от групата,състоящ^ се^от гришнп вирус,за предпочитане от под-тип А-Н^К-ррабдовирус^парагрипния вирус и тогавирус. ·
7· Везикула,съгласно коя да е претенция ои 1 до 3,характеризираща с< с това,че клетъчно специфичните маркери включват най-малко един слят пептид под формата на аминокиселинна секвенция,най-мадко един край на секвенцията да е образуван от поне една цистеинова група,за предпочита! от три цистеинови групи.
8. Везикула,съгласно коя да е от горните претенции,при която фосфолипидътпроизлиза от най-малко един член на групата състояща се от грипния зирус,за предпочитане от подтип А-Н^1М^,рабдовирус,парагрипния в» рус я тогавирус,в комбинация с 2 до 100-,за предпочитане 5 до 15 пъти * количество фосфатидилхолин. :
I
9. Везикула,съгласно коя да е от горните претенции,характеризираща ; се с това,че фосфолипидът от мембраната съдържа 70 до 95% тегловни фосфатидилхолин и 5 до 30,за предпочитане 10 до 20% тегловни фосфатиджлетаноламин;
- 5 до 10,за предпочитане 6 до 8% тегловни крослинкър,за предпочитан· производен на сулфосукцинимидил и поне един клетъчно спе цифичен слят пептид,свързани към мембраната.
10· Метод за приготвяне на^росфолипидна дву-слойна везикула,вкл1нваща хемаглутинин като клетъчно специфичен маркер върху мембраната и а съдържащ най-малко еджо фармацевтично активно лекарство,като хемаглутининат съдържа най-малко един слят белтък и при която хемаглутинина е отделен от вирусен щам,с помоца на не-йонен детергент и ултрацентрофугиране,харакатеризеращ се с това,че се използува не-йонен детергент,за предпочитане октаетилен гликол монододецил етер,който не реагира с хе маглутинина, при което след ултрацентрофугирене ,въм супернатантата се прибавя желаното активно лекарство,а детергента се отделът чрез многократно третиране на разтвора с микроносители от полистиролови перли,за предпочитане с омрежен строеж - влажни - от 20 до 50,след което се офор мят везикули с желания размер ррез обраротка на разтвора с ултразвук.
11. Метод,съгласно претенция 10,характеризиращ се с това,че детер гентния разтвор е с концентрация между 10 и 250,за предпочитане между
80 и 120 мкмол и/или детергента се отделя от разтвора чрез прилаганто на 1 до 2,за предпочитане около 1,5 г. микроносители от полистиролови перли,на 100 мг детергент.
12. Приложение на везикулите съгласно коя да е претенция от 1 до 9,или изготвени-съгласно претенции 10 или11, за фармацевтични препарати срещу СПИН.
13. Приложение,съгласно претенция 12,при което везикулите съдържат поне едно от следващите вещества:декстран-сулфат,димер на рибонуклеаза, димер на лизозим-.
14. Прилажение на везикулите съгласно кря да е претенция от 1 до 9, или изготвени съгласно претенции 10 или 11,за фармацевтични препарати срещу карциноми. ’
15. Приложение,съгласно претенция 14,при което везикулите ст ьржат най-малко едно от следващите вещества:имидазол-карбоксамид,хидроксиуреа,адрипластин,ендоксан,флуоро-урацил,колхицин.
BG96928A 1991-02-02 1992-09-29 Synthetic membrane vesicles containing functionally active fusion peptides as drug delivery systems BG61215B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP91101414A EP0497997B1 (en) 1991-02-02 1991-02-02 Synthetic membrane vesicles containing functionally active fusion peptides as drug delivery systems
PCT/EP1992/000089 WO1992013525A1 (en) 1991-02-02 1992-01-17 Synthetic membrane vesicles containing functionally active fusion peptides as drug delivery systems

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG96928A true BG96928A (bg) 1994-03-24
BG61215B1 BG61215B1 (en) 1997-03-31

Family

ID=8206362

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG96928A BG61215B1 (en) 1991-02-02 1992-09-29 Synthetic membrane vesicles containing functionally active fusion peptides as drug delivery systems

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6040167A (bg)
EP (1) EP0497997B1 (bg)
JP (1) JP3404037B2 (bg)
KR (1) KR100205693B1 (bg)
AT (1) ATE125154T1 (bg)
AU (1) AU657730B2 (bg)
BG (1) BG61215B1 (bg)
BR (1) BR9204116A (bg)
CA (1) CA2079685C (bg)
DE (1) DE69111414T2 (bg)
DK (1) DK0497997T3 (bg)
ES (1) ES2077086T3 (bg)
FI (1) FI109969B (bg)
GE (1) GEP20002229B (bg)
GR (1) GR3017490T3 (bg)
HK (1) HK56696A (bg)
HU (1) HU215533B (bg)
NO (1) NO306194B1 (bg)
PL (2) PL296382A1 (bg)
RO (1) RO114736B1 (bg)
RU (1) RU2125868C1 (bg)
WO (1) WO1992013525A1 (bg)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2079444C (en) * 1991-02-14 2004-02-03 Rimona Margalit Binding of recognizing substances to liposomes
US5603872A (en) * 1991-02-14 1997-02-18 Baxter International Inc. Method of binding recognizing substances to liposomes
US5879656A (en) * 1993-10-26 1999-03-09 Thomas Jefferson University Methods of treating metastatic colorectal cancer with ST receptor binding compounds
US7097839B1 (en) * 1993-10-26 2006-08-29 Thomas Jefferson University ST receptor binding compounds and methods of using the same
WO1995032706A1 (en) * 1994-05-31 1995-12-07 Inex Pharmaceuticals Corp. Virosome-mediated intracellular delivery of therapeutic agents
US6861053B1 (en) * 1999-08-11 2005-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing or treating irritable bowel syndrome and other disorders caused by small intestinal bacterial overgrowth
US5908777A (en) * 1995-06-23 1999-06-01 University Of Pittsburgh Lipidic vector for nucleic acid delivery
WO1997004748A2 (en) * 1995-08-01 1997-02-13 Advanced Therapies, Inc. Enhanced artificial viral envelopes for cellular delivery of therapeutic substances
NZ332666A (en) * 1996-05-08 2000-05-26 Nika Health Products Ltd Cationic virosomes having a positively charged lipid bilayer membrane with an integrated viral fusogenic peptide as genetic transfer systems for use in gene therapy
JP2002532514A (ja) * 1998-12-14 2002-10-02 デンドレオン コーポレイション 主要組織適合性複合体クラスｉ拘束抗原提示の増強のための、組成物および方法
US7148324B1 (en) 1998-12-14 2006-12-12 Dendreon Corporation Compositions and methods for enhancement of major histocompatibility complex class I restricted antigen presentation
EP1140202A1 (en) 1998-12-24 2001-10-10 Ucb S.A. Peptidic product, process and composition
CZ20021216A3 (cs) * 1999-10-08 2002-10-16 Nika Health Products Limited Lipidové váčky obsahující DOSPER
ES2202218T3 (es) * 1999-12-17 2004-04-01 Schott Glas Capsula fulminante activable inductivamente para sistemas de retencion de pasajeros y circuito de prueba para esta capsula fulminante.
US20040028687A1 (en) * 2002-01-15 2004-02-12 Waelti Ernst Rudolf Methods and compositions for the targeted delivery of therapeutic substances to specific cells and tissues
US20040176283A1 (en) * 2002-04-01 2004-09-09 Robinson John A. Methods and compositions for the design of synthetic vaccines
DE50312971D1 (de) * 2002-04-29 2010-09-23 Biotesys Gmbh Polymerisierte peptid-modifizierte lipide als biologische transportsysteme für mikronutrients
EP1447080A1 (en) 2003-02-13 2004-08-18 Bestewil Holding B.V. Method for producing virosome-like particles
CN103948545B (zh) 2004-05-03 2017-10-03 益普生生物制药公司 用于药物输送的脂质体
US8658203B2 (en) 2004-05-03 2014-02-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Liposomes useful for drug delivery to the brain
WO2007048019A2 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 The Penn State Research Foundation Delivery system for diagnostic and therapeutic agents
CN105769931B (zh) * 2006-09-15 2021-04-27 渥太华医院研究机构 溶瘤弹状病毒
EP3362049A1 (en) 2015-10-16 2018-08-22 Ipsen Biopharm Ltd. Stabilizing camptothecin pharmaceutical compositions

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0047480B1 (en) * 1980-09-05 1986-02-05 Institut Armand Frappier Formation of an immunosome exclusively made of viral antigens reconstituted on an artificial membrane
US4871488A (en) * 1985-04-22 1989-10-03 Albany Medical College Of Union University Reconstituting viral glycoproteins into large phospholipid vesicles
US4663161A (en) * 1985-04-22 1987-05-05 Mannino Raphael J Liposome methods and compositions
US4790987A (en) * 1985-11-15 1988-12-13 Research Corporation Viral glycoprotein subunit vaccine
US5000960A (en) * 1987-03-13 1991-03-19 Micro-Pak, Inc. Protein coupling to lipid vesicles
IL86650A0 (en) * 1987-06-30 1988-11-30 Biophor Corp Animal derived cells and liposomes,having an antigenic protein incorporated into their membrane
WO1991003258A1 (en) * 1989-09-01 1991-03-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoliposomes for transmittal of activating signals to cells
AU652778B2 (en) * 1990-10-15 1994-09-08 Quest International B.V. Treatment composition

Also Published As

Publication number Publication date
PL170169B1 (en) 1996-10-31
JP3404037B2 (ja) 2003-05-06
CA2079685C (en) 2001-11-27
KR100205693B1 (en) 1999-07-01
ATE125154T1 (de) 1995-08-15
FI109969B (fi) 2002-11-15
RU2125868C1 (ru) 1999-02-10
BG61215B1 (en) 1997-03-31
EP0497997A1 (en) 1992-08-12
NO306194B1 (no) 1999-10-04
AU1169392A (en) 1992-09-07
BR9204116A (pt) 1993-06-08
HU9203141D0 (en) 1992-12-28
GEP20002229B (en) 2000-09-25
NO923703L (no) 1992-11-26
RO114736B1 (ro) 1999-07-30
DE69111414T2 (de) 1996-02-01
US6040167A (en) 2000-03-21
JPH05505406A (ja) 1993-08-12
NO923703D0 (no) 1992-09-24
FI924418A (fi) 1993-04-03
DE69111414D1 (de) 1995-08-24
DK0497997T3 (da) 1995-11-27
EP0497997B1 (en) 1995-07-19
ES2077086T3 (es) 1995-11-16
GR3017490T3 (en) 1995-12-31
HK56696A (en) 1996-04-12
HUT66194A (en) 1994-10-28
CA2079685A1 (en) 1992-08-03
FI924418A0 (fi) 1992-10-01
PL296382A1 (en) 1993-11-02
WO1992013525A1 (en) 1992-08-20
AU657730B2 (en) 1995-03-23
HU215533B (hu) 1999-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG96928A (bg) Синтетични мембранни везикули съдържащи функционално активни сляти пептиди като освобождаващи лекарства системи
Huang et al. A malaria vaccine adjuvant based on recombinant antigen binding to liposomes
Caracciolo Liposome–protein corona in a physiological environment: challenges and opportunities for targeted delivery of nanomedicines
Zhu et al. Matrix metalloprotease 2-responsive multifunctional liposomal nanocarrier for enhanced tumor targeting
US7205273B2 (en) Fusogenic liposomes
EP3283056B3 (en) Nanostructures comprising cobalt porphyrin-phospholipid conjugates and polyhistidine-tags
ES2696623T3 (es) Liposomas funcionalizados útiles para la administración de compuestos bioactivos
CN106619515A (zh) 脂质体组合物及其用途
TWI673062B (zh) 粒狀疫苗調配物
KR20090040906A (ko) 바이러스 감염의 리포솜 치료
Tauran et al. Cellular and in vivo biological activities of the calix [n] arenes
CN111954530A (zh) γ聚谷氨酸化培美曲塞及其用途
JP5775073B2 (ja) 両親媒性分子の混合物および融合による細胞膜修飾方法
CN114555127A (zh) 制备聚谷氨酸化抗叶酸剂的方法以及它们的组合物的用途
Kalra et al. Virosomes: as a drug delivery carrier
JP5069920B2 (ja) マンノース６−リン酸−ポリエチレングリコール結合体
KR20070095881A (ko) 인플루엔자 바이러스 및 비형 간염 바이러스로부터의항원을 포함하는 비로좀 입자
CN110198740B (zh) 用于硼中子捕获疗法的新的bsh复合体
US9023384B2 (en) Liposome and method for injecting substance to cell using this liposome
JP2018070539A (ja) 正電荷脂質と多糖誘導体を含む微粒子担体
Cho et al. Enhanced cytotoxicity of doxorubicin encapsulated in liposomes with reconstituted Sendai F-proteins
EP4140475A1 (en) Synthetic virus-like lipoparticles
Prathyusha et al. Review on virosomes
HU219353B (en) Synthetic membrane vesicles as vehicles containing functionally active fusional peptides and pharmaceutical compositions comprising them
US9944676B2 (en) Cationic lipid formulations for regressing established tumor