CN114555127A - 制备聚谷氨酸化抗叶酸剂的方法以及它们的组合物的用途 - Google Patents

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Abstract

本文提供了制备聚谷氨酸化化合物如聚谷氨酸化抗叶酸剂和/或包含所述聚谷氨酸化化合物的药物组合物如脂质体组合物的方法。本文还提供了基本上纯的聚谷氨酸化化合物或其药学上可接受的盐，或包含所述聚谷氨酸化化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物如脂质体组合物。本公开进一步提供了使用所述聚谷氨酸化化合物和组合物来治疗疾病的方法，所述疾病包括过度增生性疾病如癌症、免疫系统病症如类风湿性关节炎以及感染性疾病如HIV、疟疾和血吸虫病。

Description

制备聚谷氨酸化抗叶酸剂的方法以及它们的组合物的用途
背景技术
本公开总体上涉及制备聚谷氨酸化化合物(特别是聚谷氨酸化抗叶酸剂)或其药学上可接受的盐、包含所述聚谷氨酸化化合物的药物组合物如脂质体组合物或药学上可接受的盐的方法，以及使用所述化合物和组合物来治疗疾病的方法，所述疾病包括过度增生性疾病(如癌症)、免疫系统病症(如类风湿性关节炎)以及感染性疾病(如HIV、疟疾和血吸虫病)。
叶酸是介导参与核苷酸生物合成和DNA修复的一碳单元的转移、高半胱氨酸(Hcy)的再甲基化以及DNA、蛋白质和脂质的甲基化的必不可少的辅因子。血液中叶酸的唯一循环形式是单谷氨酸盐，并且叶酸单谷氨酸盐是穿过细胞膜转运的唯一形式的叶酸-同样，可聚谷氨酸化抗叶酸剂的单谷氨酸盐形式穿过细胞膜转运。一旦被摄取到细胞中，细胞内叶酸就通过酶叶酰聚-γ-谷氨酸合成酶(FPGS)转化为聚谷氨酸盐。
抗叶酸剂通过还原性叶酸载体(RFC)系统和叶酸受体(FR)α和β以及质子偶联叶酸转运蛋白(PCFT)转运到细胞中，所述质子偶联叶酸转运蛋白通常在较低pH值环境中活性最高。RFC是在生理pH下抗叶酸剂的主要转运蛋白，并且在正常细胞和患病细胞中均普遍表达。因此，抗叶酸剂治疗常常遭受剂量限制性毒性，这是癌症化学疗法的主要障碍。一旦进入细胞内，抗叶酸剂就通过FPGS聚谷氨酸化，这可在抗叶酸剂的L-γ羧基键联中添加至多6个谷氨酰基。FPGS对抗叶酸剂的L-γ聚谷氨酸化至少有两个主要治疗目的：(1)它大大增强抗叶酸剂对DHFR的亲和力和抑制活性；和(2)它促进聚谷氨酸化抗叶酸剂的累积，与抗叶酸剂(单谷氨酸盐)不同，聚谷氨酸化抗叶酸剂不易被细胞外排泵转运出细胞。
虽然靶向叶酸代谢和核苷酸生物合成是确立已久的癌症治疗策略，但对于抗叶酸剂而言，由于缺乏肿瘤选择性以及原发性(de novo)和获得性耐药性的存在，临床功效受到限制。抗叶酸剂通常在DNA和RNA合成过程中起作用，并且因此对快速分裂的细胞(如恶性细胞和髓样细胞)具有更大的毒性作用。骨髓抑制通常是抗叶酸剂疗法的剂量限制性毒性，并且限制了抗叶酸剂的临床应用。
对抗叶酸剂疗法的耐药性通常与以下中的一项或多项相关：(a)细胞外排泵活性增加，(b)抗叶酸剂至细胞中的转运减少，(c)DHFR活性增强，(d)叶酰聚-γ-谷氨酸合成酶(FPGS)活性降低，以及(e)γ-谷氨酰水解酶(GGH)活性增加，所述γ-谷氨酰水解酶裂解连接至叶酸和抗叶酸剂的γ聚谷氨酸链。
长期(＞30年)观察结果(即各种抗叶酸剂的较高水平聚谷氨酸盐与较低水平的谷氨酸盐相比具有更大的效力)所面临的挑战一直是，科学界依赖于细胞内FPGS介导的机制来将较低水平的谷氨酸盐转化为它们的更高水平的形式。本公开提供了化学合成、更大规模的方法和将较高水平的聚谷氨酸盐形式的抗叶酸剂直接递送至细胞中的手段，而不必依赖于细胞机制来实现这一目的。
发明内容
在各种实施方案中，本公开部分地基于本文所述的有利合成方法，所述合成方法允许大规模合成例如呈基本上纯的形式的聚谷氨酸化化合物，特别是聚谷氨酸化抗叶酸剂，如γ-聚谷氨酸化抗叶酸剂和/或α-聚谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，本公开还提供了药物组合物(如脂质体组合物)，所述药物组合物包含聚谷氨酸化抗叶酸剂，如基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂；和使用所述组合物的方法。所提供的聚谷氨酸化抗叶酸剂，如基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂，如γ聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物和/或α-聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物，可用于例如克服与抗叶酸剂疗法相关的剂量限制毒性和治疗耐药性相关的药理学挑战。在一些实施方案中，所提供的方法向癌细胞递送γ或α聚谷氨酸化形式的抗叶酸剂，同时(1)使对正常组织细胞的暴露最小化/减少，(2)优化/改善基于抗叶酸剂的剂对癌细胞的细胞毒性作用，和(3)使外排泵以及其它限制抗叶酸剂的治疗功效的耐药机制的影响最小化/减少。
本公开的一些实施方案涉及一种制备聚谷氨酸化药物，特别是聚谷氨酸化抗叶酸剂或其药学上可接受的盐的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使式I的受保护的聚谷氨酸或其盐与具有式Z-COOH的抗叶酸剂或其活化形式在酰胺形成条件下反应以形成式II化合物或其盐，其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Pg1在每次出现时独立地是羧酸保护基团，并且n可以是0-20的整数，其中Z是所述抗叶酸剂的残基。
Figure BDA0003575147470000031
在一些具体实施方案中，Z是例如选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。在一些实施方案中，Z是培美曲塞的残基。在一些实施方案中，n是2-6，如2、3、4或5。在一些实施方案中，式I或式II中的所有谷氨酸单元都呈L形式。在一些实施方案中，式I或式II中的所有谷氨酸单元都呈D形式。在一些实施方案中，所述反应包括使所述式I化合物与所述抗叶酸剂在选自氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU和T3P的酰胺偶联试剂存在下反应。在一些实施方案中，式I的所述受保护的聚谷氨酸或其盐可通过本文所述的方法例如以基本上纯的形式合成。在一些实施方案中，所述方法还包括使所述式II化合物或其盐脱保护以提供式III化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000041
其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，所述方法还包括将所述式III化合物或其盐转化为式IV的碱金属盐(例如，钠盐)：
Figure BDA0003575147470000042
其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Z和n在本文中定义，M+是碱金属反离子，如Li+、Na+或K+。
在一些实施方案中，所述方法包括使式I-α的受保护的聚谷氨酸或其盐与具有式Z-COOH的抗叶酸剂或其活化形式在酰胺形成条件下反应以形成式II-α的化合物或其盐，其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Pg1在每次出现时独立地是羧酸保护基团，并且n可以是0-20的整数，其中Z是所述抗叶酸剂的残基。
Figure BDA0003575147470000051
在一些具体实施方案中，Z是例如选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。在一些实施方案中，Z是培美曲塞的残基。在一些实施方案中，n是2-6，如2、3、4或5。在一些实施方案中，式I-α或式II-α中的所有谷氨酸单元都呈L形式。在一些实施方案中，式I-α或式II-α中的所有谷氨酸单元都呈D形式。在一些实施方案中，所述反应包括使所述式I-α化合物与所述抗叶酸剂在选自氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU和T3P的酰胺偶联试剂存在下反应。在一些实施方案中，式I-α的所述受保护的聚谷氨酸或其盐可通过本文所述的方法例如以基本上纯的形式合成。在一些实施方案中，所述方法还包括使所述式II-α化合物或其盐脱保护以提供式III-α化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000061
其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，所述方法还包括将所述式III-α化合物或其盐转化为式IV-α的碱金属盐(例如，钠盐)：
Figure BDA0003575147470000062
其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Z和n在本文中定义，M+是碱金属反离子，如Li+、Na+或K+。
本文的合成方法可提供可用于药物组合物中的高纯度合成中间体或产物。例如，在一些实施方案中，本公开提供了一种基本上纯的式III化合物(例如，如本文所述的式III-1-L、III-1-D)或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)。在一些实施方案中，本公开提供了一种基本上纯的式IV化合物(例如，如本文所述的式IV-1-L、IV-1-D)。在一些实施方案中，式III或IV中的Z是例如选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。在一些实施方案中，Z是培美曲塞的残基。在一些实施方案中，式III或IV中的n是2-6，如2、3、4或5。在一些实施方案中，式III或式IV中的所有谷氨酸单元都呈L形式。在一些实施方案中，式III或式IV中的所有谷氨酸单元都呈D形式。在一些实施方案中，所述基本上纯的式III化合物(例如，如本文所述的式III-1-L、III-1-D)或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。在一些实施方案中，所述基本上纯的式IV化合物(例如，如本文所述的式IV-1-L、IV-1-D)或其药学上可接受的盐具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。
在一些实施方案中，本公开提供了一种基本上纯的式III-α(例如，如本文所述的式III-1-L-α、III-1-D-α)化合物或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)。在一些实施方案中，本公开提供了一种基本上纯的式IV-α(例如，如本文所述的式IV-1-L-α、IV-1-D-α)化合物。在一些实施方案中，式III-α或IV-α中的Z是例如选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。在一些实施方案中，Z是培美曲塞的残基。在一些实施方案中，式III-α或IV-α中的n是2-6，如2、3、4或5。在一些实施方案中，式III-α或式IV-α中的所有谷氨酸单元都呈L形式。在一些实施方案中，式III-α或式IV-α中的所有谷氨酸单元都呈D形式。在一些实施方案中，所述基本上纯的式III-α(例如，如本文所述的式III-1-L-α、III-1-D-α)化合物或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。在一些实施方案中，所述基本上纯的式IV-α(例如，如本文所述的式IV-1-L-α、IV-1-D-α)化合物或其药学上可接受的盐具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。
本公开的一些实施方案还涉及药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的式III或IV化合物，例如如本文定义的基本上纯的式III或IV化合物，例如，基本上纯的式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐、或式IV-1-L或IV-1-D的化合物。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是水溶液或悬浮液。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是脂质体组合物(例如，本文所述的)，所述脂质体组合物可任选地被聚乙二醇化。在一些实施方案中，所述脂质体组合物具有至少10％的载药量。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含连接至PEG(如果适用)和所述脂质体的外部中的一者或两者的靶向部分，并且其中所述靶向部分对目标靶细胞上的表面抗原具有特异性亲和力。
本公开的一些实施方案还涉及药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的式III-α或IV-α化合物，例如如本文定义的基本上纯的式III-α或IV-α化合物，例如，基本上纯的式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐、或式IV-1-L-α或IV-1-D-α的化合物。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是水溶液或悬浮液。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是脂质体组合物(例如，本文所述的)，所述脂质体组合物可任选地被聚乙二醇化。在一些实施方案中，所述脂质体组合物具有至少10％的载药量。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含连接至PEG(如果适用)和所述脂质体的外部中的一者或两者的靶向部分，并且其中所述靶向部分对目标靶细胞上的表面抗原具有特异性亲和力。
本公开的一些实施方案还涉及例如使用本文所述的基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂(如γ聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物和/或α聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物)或包含所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂的药物组合物(如脂质体组合物)治疗疾病的方法，所述疾病如增生性疾病、免疫系统疾病、感染性疾病等。在一些实施方案中，所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂包含如本文所述的基本上纯的式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐、或式IV-1-L或IV-1-D的化合物。在一些实施方案中，所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂包含如本文所述的基本上纯的式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐、或式IV-1-L-α或IV-1-D-α的化合物。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的例如基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂或包含所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述癌症选自由以下组成的组：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。在一些实施方案中，所述癌细胞在其表面上表达由脂质体组合物的靶向部分结合的叶酸受体。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗免疫系统病症的方法，所述方法包括向患有免疫系统病症或有患免疫系统病症风险的受试者施用有效量的例如基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂或包含所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂的药物组合物。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向患有感染性疾病病症或有患感染性疾病病症风险的受试者施用有效量的例如基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂或包含所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂的药物组合物。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于将聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至在表面上表达叶酸受体的肿瘤的方法，所述方法包括：向患有所述肿瘤的受试者施用一定量的例如基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂或包含所述基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂的药物组合物，以将治疗有效剂量的所述聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至所述肿瘤。
本公开的一些实施方案还涉及一种制备脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；以及加工所述混合物以形成含有所述聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体。在一些实施方案中，所述方法包括形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；加工所述混合物以形成包埋和/或包封聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体；以及在所述脂质体的表面上提供靶向部分，例如提供对叶酸受体α(FR-a)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)中的至少一者具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是如本文定义的基本上纯的聚谷氨酸化抗叶酸剂，例如，基本上纯的式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐、或式IV-1-L或IV-1-D的γPANTIFOL，基本上纯的式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐、或式IV-1-L-α或IV-1-D-α的αPANTIFOL。
应当理解，前述发明内容和以下具体实施方式都仅是示例性和解释性的，并且不限制本文的本发明。
附图说明
图1示出纯度为98.65％的化合物J的HPLC迹线。
图2示出纯度为99.17％的化合物K的HPLC迹线。
图3示出纯度为98.03％的化合物L的HPLC迹线。
图4示出纯度为98.35％的化合物100的HPLC迹线。
具体实施方式
本公开总体上涉及制备聚谷氨酸化化合物(如聚谷氨酸化抗叶酸剂)和/或包含所述聚谷氨酸化化合物的药物组合物(如脂质体组合物)的方法。在一些实施方案中，还提供了基本上纯的聚谷氨酸化化合物或其药学上可接受的盐，或包含所述聚谷氨酸化化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物(如脂质体组合物)。在一些实施方案中，本公开进一步提供了使用所述聚谷氨酸化化合物和组合物来治疗疾病的方法，所述疾病包括过度增生性疾病如癌症、免疫系统病症如类风湿性关节炎以及感染性疾病如HIV、疟疾和血吸虫病。
本公开部分地基于本文所述的有利合成方法。如本文所论述，本文所述的合成方法(1)可容易地适用于大规模合成，例如千克级规模合成；(2)可具有高产率，在合成过程中没有外消旋化或外消旋化最小化，并且用于纯化的程序简单，如通过结晶；并且(3)可提供高纯度中间体和/或产物，包括与γ聚谷氨酸化抗叶酸剂有关的式I、II、III和IV的化合物及其盐和与α聚谷氨酸化抗叶酸剂有关的式I-α、II-α、III-α和IV-α的化合物及其盐。这些高纯度中间体和/或产物也是本公开的新型组合物。
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语都具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。
应当理解，当在本文用语言“包含”来描述实施方案时，还提供了就“含有”、“由……组成”和/或“主要由……组成”而言所描述的其它类似实施方案。然而，当在权利要求书中用作过渡性短语时，应分别且在适当的法律和事实背景下对每个短语进行解释(例如，在权利要求书中，过渡性短语“包含”更多被视为开放性短语，而“由……组成”更排他性，并且“基本上由……组成”取得中间立场)。
如本文中所用，除非明确指出或从上下文中清楚地得知这并非意图，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数个指示物。
如本文所用，修饰与本发明相关的量的术语“约”是指数值量的变化，所述变化可能由于常规测试和处理；由于这种测试和处理中的疏忽错误；由于本发明中所采用的成分的制造、来源或纯度的差异等而发生。如本文所用，“约”特定值还包括所述特定值，例如，约10％包括10％。无论是否由术语“约”修饰，权利要求书均包括所列举数量的等效值。在一个实施方案中，术语“约”是指在所报告数值的20％以内。
如本文中诸如“A和/或B”的短语中所用的术语“和/或”意图包括A和B；A或B；A(单独)和B(单独)。同样，如在诸如“A、B和/或C”的短语中所用的术语“和/或”意图涵盖以下实施方案中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。例如，在本文的实施方案中，本公开的化合物可被描述为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。在此类实施方案中，应理解，相应的化合物可具有根据HPLC至少90％的纯度，具有按重量计至少90％的纯度，或具有根据HPLC和按重量计两者至少90％的纯度。
标题和副标题仅出于方便和/或形式上的合规性使用，不限制主题技术，并且不与主题技术的描述的解释结合提及。在各种实施方案中，可将在本公开的一个标题或一个副标题下描述的特征与在其它标题或副标题下描述的特征组合。此外，在实施方案中不一定必须一起使用单个标题或单个副标题下的所有特征。
对于本文的化学结构，应理解为所有部分及其组合保持适当的化合价。
还应理解，本文可变部分的具体实施方案可与具有相同标识符的另一个具体实施方案相同或不同。
具体官能团和化学术语的定义在下文更详细地描述。化学元素是根据元素周期表，CAS版本，Handbook of Chemistry and Physics,第75版，内封面来鉴定，并且具体官能团通常如其中所描述来定义。此外，有机化学的一般原理以及具体官能部分和反应性描述于Thomas Sorrell,Organic Chemistry,University Science Books,Sausalito,1999；Smith和March,March’s Advanced Organic Chemistry,第5版,John Wiley&Sons,Inc.,New York,2001；Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers,Inc.,New York,1989；以及Carruthers,Some Modern Methods of Organic Synthesis,第3版,Cambridge University Press,Cambridge,1987中。本公开不意图以任何方式受限于本文所述的示例性取代基列表。
本文所述的化合物可包含一个或多个不对称中心，并且因此能够以多种异构体形式(例如对映异构体和/或非对映异构体)存在。例如，本文所述的化合物可呈单独对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或者可呈立体异构体混合物(包括外消旋混合物以及富含一种或多种立体异构体的混合物)的形式。异构体可通过本领域的技术人员已知的方法从混合物中分离，所述方法包括手性高效液相色谱法(HPLC)以及手性盐的形成和结晶；或者优选的异构体可通过不对称合成来制备。参见例如，Jacques等人,Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Wilen等人,Tetrahedron 33:2725(1977)；Eliel,Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw–Hill,NY,1962)；以及Wilen,Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions第268页(E.L.Eliel,编辑,Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN 1972)。本发明另外涵盖呈基本上不含其它异构体的单独异构体形式，以及可替代地呈不同异构体的混合物(包括外消旋混合物)形式的本文所述的化合物。
当列出值的范围时，意图涵盖所述范围内的每个值和子范围。例如，“C1–6”意图涵盖C1、C2、C3、C4、C5、C6、C1–6、C1–5、C1–4、C1–3、C1–2、C2–6、C2–5、C2–4、C2–3、C3–6、C3–5、C3–4、C4–6、C4–5和C5–6。
如本文所用，术语“本公开的化合物”或“本发明的化合物”是指本文所述的根据式I、式II、式III、式IV、式I-α、式II-α、式III-α、式IV-α、式II-环状、式III-环状、式II-环状-α、式III-环状-α或其任何亚式的化合物、或其合成前体、其同位素标记的化合物(如其中氢原子中的一个被氘原子取代且丰度高于其天然丰度的氘化类似物)、其可能的立体异构体(包括非对映异构体、对映异构体和外消旋混合物)、其互变异构体、其构象异构体和/或盐如其药学上可接受的盐(例如，酸加成盐如HCl盐或碱加成盐如Na盐)中的任一者。本公开的化合物的水合物和溶剂合物被认为是本公开的组合物，其中所述一种或多种化合物分别与水或溶剂缔合。
特征在于具有式III或式IV或式III-α或式IV-α或式III-环状或式III-环状-α的本公开化合物可用于药物组合物中和/或用于药物组合物。特征在于具有式I或式II或式I-α或式II-α的本公开化合物通常是合成中间体并且不直接用于制备药物组合物。
术语“本公开的γ聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“本公开的γ聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“本公开的γPANTIFOL”、“本文所述(或公开或定义)的γPANTIFOL”及其迭代形式在本文中用来指特征在于具有本文定义的式III或式IV或式III-环状的本公开化合物，其中式III或式IV中的基团Z是抗叶酸剂的残基。基本上纯的“本公开的γPANTIFOL”是指特征在于具有式III或式IV或式III-环状的本公开化合物，其中式III或式IV中的基团Z是抗叶酸剂的残基，所述化合物如本文所定义是基本上纯的。在本文所述的实施方案中，除非从上下文中另外显而易见，否则术语“γPANTIFOL”，无论是否后跟术语“本公开的”或“本文所述的(或公开的或定义的)”，都应理解为是指“本公开的γPANTIFOL”。
术语“本公开的α聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“本公开的α聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“本公开的αPANTIFOL”、“本文所述(或公开或定义)的αPANTIFOL”及其迭代形式在本文中用来指特征在于具有本文定义的式III-α或式IV-α或式III-环状-α的本公开化合物，其中式III-α或式IV-α中的基团Z是抗叶酸剂的残基。基本上纯的“本公开的αPANTIFOL”是指特征在于具有式III-α或式IV-α或式III-环状-α的本公开化合物，其中式III-α或式IV-α中的基团Z是抗叶酸剂的残基，所述化合物如本文所定义是基本上纯的。在本文所述的实施方案中，除非从上下文中另外明显，否则术语“αPANTIFOL”，无论是否后跟术语“本公开的”或“本文所述的(或公开的或定义的)”，都应理解为是指“本公开的αPANTIFOL”。
术语“本公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“本公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“本公开的PANTIFOL”、“本文所述(或公开或定义)的PANTIFOL”及其迭代形式在本文中用来指如本文定义的本公开的αPANTIFOL和/或本公开的γPANTIFOL。基本上纯的“本公开的PANTIFOL”是指如本文定义的基本上纯的本公开的αPANTIFOL或基本上纯的本公开的γPANTIFOL。在本文所述的实施方案中，除非从上下文中另外明显，否则术语“PANTIFOL”，无论是否后跟术语“本公开的”或“本文所述的(或公开的或定义的)”，都应理解为是指“本公开的PANTIFOL”。在本文所述的任何实施方案中，除非从上下文中另外显而易见，否则“PANTIFOL”可以是如本文定义的本公开的αPANTIFOL。在本文所述的任何实施方案中，除非从上下文中另外显而易见，否则术语“PANTIFOL”还可以是如本文定义的本公开的γPANTIFOL。
包含本文所述的PANTIFOL的组合物(如脂质体组合物)也应理解为涉及αPANTIFOL和γPANTIFOL中的任一者或两者。例如，在一些实施方案中，LP-PANTIFOL可以是Lp-γPANTIFOL，如PLp-γPANTIFOL、NTLp-γPANTIFOL、NTPLp-γPANTIFOL、TLp-γPANTIFOL或TPLp-γPANTIFOL。在一些实施方案中，LP-PANTIFOL可以是Lp-αPANTIFOL，如PLp-αPANTIFOL、NTLp-αPANTIFOL、NTPLp-αPANTIFOL、TLp-αPANTIFOL或TPLp-αPANTIFOL。
在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的γPANTIFOL或γPANTIFOL可以是本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)，或式IV-1-L或IV-1-D)。在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的αPANTIFOL或αPANTIFOL可以是本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α、或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)。在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的PANTIFOL或PANTIFOL可以是本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α、或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)，本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐或钠盐)，或式IV-1-L或IV-1-D)，或它们的组合。
在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的γPANTIFOL或γPANTIFOL可以是式IV-L或IV-D(例如，IV-1-L或IV-1-D)的碱金属盐，如呈基本上纯的形式。在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的αPANTIFOL或αPANTIFOL可以是式IV-L-α或IV-D-α(例如，IV-1-L-α或IV-1-D-α)的碱金属盐，如呈基本上纯的形式。
在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的γPANTIFOL或γPANTIFOL可以是式III-L或III-D(例如，III-1-L或III-1-D)的化合物或其药学上可接受的盐，如呈基本上纯的形式。在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的αPANTIFOL或αPANTIFOL可以是式III-L-α或III-D-α(例如，III-1-L-α或III-1-D-α)的化合物或其药学上可接受的盐，如呈基本上纯的形式。
在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的γPANTIFOL或γPANTIFOL可以是药学上可接受的酸加成盐，如式III-L或III-D(例如，III-1-L或III-1-D)的HCl盐，如呈基本上纯的形式。在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文明显相反，否则本公开的αPANTIFOL或αPANTIFOL可以是药学上可接受的酸加成盐，如式III-L-α或III-D-α(例如，III-1-L-α或III-1-D-α)的HCl盐，如呈基本上纯的形式。
本公开的化合物可以同位素标记或富集形式存在，所述形式含有原子质量或质量数不同于自然界中发现的最丰富的原子质量或质量数的一个或多个原子。同位素可以是放射性或非放射性同位素。诸如氢、碳、磷、硫、氟、氯和碘的原子的同位素包括但不限于2H、3H、13C、14C、15N、18O、32P、35S、18F、36Cl和125I。含有这些和/或其它原子的其它同位素的化合物在本发明的范围内。例如，在一些实施方案中，本公开的PANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D、III-1-L-α、III-1-D-α、IV-1-L、IV-1-D、IV-1-L-α或IV-1-D-α)可例如用13C和/或15N同位素标记以用作参考化合物。应理解，这些同位素标记或富集形式和含有此类形式的制剂也可用作治疗剂或诊断剂。
如本文所用，短语化合物的“施用”、“施用”化合物或它们的其它变体意指向需要治疗的个体提供所述化合物或所述化合物的前药。
“任选取代的”基团，如任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基，是指未取代或取代的相应基团。一般来说，术语“取代的”，无论之前有无术语“任选地”，都意指基团(例如，碳或氮原子)上存在的至少一个氢被可允许的取代基替代，所述可允许的取代基例如是取代后产生稳定化合物的取代基，所述稳定化合物例如是不会自发地如通过重排、环化、消除或其它反应而进行转化的化合物。除非另有说明，否则“取代的”基团在所述基团的一个或多个可取代的位置处具有取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置被取代时，所述取代基在每个位置处可以是相同或不同的。通常，当被取代时，本文中任选取代的基团可被1-5个取代基取代。在适用的情况下，取代基可以是碳原子取代基、氮原子取代基、氧原子取代基或硫原子取代基。
术语“离去基团”被赋予其在合成有机化学领域中的普通含义并且是指能够被亲核试剂置换的原子或基团。参见例如，Smith,March Advanced Organic Chemistry第6版(501-502)。合适的离去基团的实例包括但不限于卤素(如F、Cl、Br或I(碘))、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、烷烃磺酰基氧基、芳基烃磺酰基氧基、烷基-羰基氧基(例如，乙酰氧基)、芳基羰基氧基、芳氧基、甲氧基、N,O-二甲基羟基氨基、苯基呫吨基(pixyl)和卤代甲酸酯。
术语“纯度”和“杂质”根据它们各自的本领域接受的含义使用。术语“根据HPLC的纯度”、“HPLC纯度”及其迭代形式用于指如使用HPLC方法(例如，实施例部分中描述的HPLC方法)测量的相应化合物的纯度，表示为HPLC面积百分比。在本文所述的任何实施方案中，除非另有说明或与上下文相反，否则本公开的γPANTIFOL的HPLC纯度可根据实施例部分中描述的HPLC方法2测量，并表示为使用210nm作为检测方法的HPLC迹线中代表化合物的峰的面积百分比。图3和4示出使用HPLC方法2的示例性HPLC迹线和纯度测定。在一些实施方案中，其它HPLC方法如使用不同柱、不同梯度等的那些也可用于测量本公开的化合物的纯度。尽管测试样品的重量百分比纯度也可通过HPLC方法确定，如本文所用，除非具体地提及为按重量计的纯度，否则纯度术语如根据HPLC的纯度或HPLC纯度或类似术语不应理解为是指按重量计的纯度。然而，在本文的实施方案中，本公开的基本上纯的化合物可以是如通过HPLC纯度、按重量计或两者测量的基本上纯的。在一些实施方案中，术语“基本上纯的”是指根据HPLC的纯度，如至少90％，例如至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的HPLC纯度。除非另有说明或从上下文中显而易见，否则本文中的HPLC纯度并不表示对映体纯度。
在一些实施方案中，本公开的化合物在本文中被描述为基本上不含一种或多种杂质。在此类实施方案中，除非另有说明或从上下文中显而易见，否则所描述的百分比是指如通过HPLC测量的一种或多种杂质的量，表示为代表所述一种或多种杂质的峰的面积百分比。例如，在一些实施方案中，据称式III(例如，式III-L或III-D)的化合物基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式III化合物。在此类实施方案中，“10％”等是指代表其中n不为4的一种或多种式III化合物的一个或多个峰的面积百分比。为避免疑问，当存在两种或更多种杂质时，基本上不含一种或多种杂质应理解为没有任何一种单独杂质以大于指定百分比，如上述“10％”的量存在。在一些实施方案中，杂质的总量小于指定百分比。其它类似的实施方案应该类似地解释。
当本公开的化合物在本文中被描述为基本上不含特定对映异构体或非对映异构体时，所描述的百分比是指特定对映异构体或非对映异构体的量，所述量可通过例如手性HPLC测量，表示为代表特定对映异构体或非对映异构体的峰的面积百分比。
术语“互变异构体”或“互变异构的”是指由氢原子的至少一个形式迁移以及至少一个化合价改变(如，单键变为双键、三键变为单键，或反之亦然)产生的两种或更多种可互变的化合物。互变异构体的精确比例取决于若干因素，包括温度、溶剂和pH。互变异构化(即，提供互变异构对的反应)可由酸或碱催化。示例性的互变异构化包括酮至烯醇、酰胺至酰亚胺、内酰胺至内酰亚胺、烯胺至亚胺和烯胺至(不同的烯胺)互变异构化。
除非另外指明，否则术语“抗叶酸剂”和“ANTIFOL”可互换使用来包括抗叶酸剂的盐、酸和/或游离碱形式(例如，抗叶酸二钠)。含有抗叶酸剂盐的组合物还可含有多种阳离子中的任一种，如Na+、Mg2+、K+、NH4+和/或Ca2+。在特定实施方案中，所述盐是药学上可接受的盐。抗叶酸剂含有一个L-γ谷氨酰基，并且因此出于本公开的目的被认为是单谷氨酸化的。
抗叶酸剂可以是聚谷氨酸化的任何已知的或将来衍生的叶酸或抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述抗叶酸剂选自LV(依托泊苷)，L-亚叶酸(L-5-甲酰四氢叶酸)；5-CH3-THF，5-甲基四氢叶酸；FA，叶酸；PteGlu，蝶酰谷氨酸(FA)；MTX，氨甲蝶呤；2-dMTX，2-脱氨基-MTX；2-CH3-MTX，2-脱氨基-2-甲基-MTX；AMT，氨基蝶呤；2-dAMT，2-脱氨基-AMT；2-CH3-AMT，2-脱氨基-2-甲基-AMT；10-EdAM，10-乙基-10-脱氮氨基蝶呤；PT523，Nα-(4-氨基-4-脱氧蝶酰基)-Nδ-(半邻苯二甲酰基)-L-鸟氨酸；DDATHF(洛美曲索)，5,10-二脱氮-5,6,7,8,-四氢叶酸；5-d(i)H4PteGlu，5-脱氮-5,6,7,8-四氢异叶酸；N9-CH3-5-d(i)H4PteGlu，N9-甲基-5-脱氮-5,6,7,8-四氢异叶酸；5-dPteHCysA，Nα-(5-脱氮蝶酰基)-L-高半胱氨酸；5-dPteAPBA，Nα-(5-脱氮蝶酰基)-DL-2-氨基-4-膦酰基丁酸；5-dPteOrn，Nα-(5-脱氮蝶酰基)-L-鸟氨酸；5-dH4PteHCysA，Nα-(5-脱氮-5,6,7,8-四氢蝶酰基)-L-高半胱氨酸；5-dH4PteAPBA，Nα-(5-脱氮-5,6,7,8-四氢蝶酰基)-DL-2-氨基-4-磷酸基丁酸；5-dH4PteOro，Nα-(5-脱氮-5,6,7,8-四氢蝶酰基)-L-鸟氨酸；CB3717，N10-炔丙基-5,8-二脱氮叶酸；ICI-198,583，2-脱氨基-2-甲基-N10-炔丙基-5,8-二脱氮叶酸；4-H-ICI-198,583，4-脱氧-ICI-198,583；4-OCH3-ICI-198,583，4-甲氧基-ICI-198,583Glu-to-Val-ICI-198,583；缬氨酸-ICI-198；583；Glu-to-Sub-ICI-198,583，2-氨基-辛二酸-ICI-198,583；7-CH3-ICI-198,583，7-甲基-ICI-198,583；ZD1694，N-[5(N-(3,4-二氢-2-甲基-4-氧代喹唑啉-6-基-甲基)氨基)2--噻吩基)]-L-谷氨酸；2-NH2-ZD1694，2-氨基-ZD1694；BW1843U89，(S)-2[5-(((1,2-二氢-3-甲基-1-氧代苯并(f)喹唑啉-9-基)甲基)氨基-)-1-氧代-2-异吲哚啉基]-戊二酸；LY231514，N-(4-(2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-5-基)乙基)-苯甲酰基]-L-谷氨酸；IAHQ，5,8-二脱氮异叶酸；2-dIAHQ，2-脱氨基-IAHQ；2-CH3-dIAHQ，2-脱氮基-2-甲基-IAHQ；5-d(i)PteGlu，5-脱氮异叶酸；N9-CH3-5-d(i)PteGlu，N9-甲基-5-脱氮异叶酸；N9-CHO-5-d(i)PteGlu，N9-甲酰基-5-脱氮异叶酸；AG337，3,4-二氢-2-氨基-6-甲基-4-氧代-5-(4-吡啶基硫代)喹唑啉；以及AG377，2,4-二氨基-6[N-(4-(苯基磺酰基)苄基)乙基)氨基]喹唑啉；或它们的立体异构体。
在一些实施方案中，所述抗叶酸剂是选自以下的成员：氨基蝶呤、氨甲蝶呤、雷替曲塞(也称为
Figure BDA0003575147470000211
ZD1694(RTX))、普来曲塞(也称为BGC 9331；ZD9331)、培美曲塞(也称为ALIMTA、LY231514)、洛美曲索(LMX)(5,10-二脱氮四氢叶酸)、具有二肽配体的环戊[g]喹唑啉、CB3717、CB300945(也称为BGC945)或它们的立体异构体，如6-R,S-BGC 945(ONX-0801)、CB300638(也称为BGC638)和BW1843U89。
术语“聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“聚谷氨酸化ANTIFOL”、“ANTIFOL-PG”、“PANTIFOL”及其迭代形式在本文中可互换使用来指除抗叶酸剂中的谷氨酰基外还包含至少一个谷氨酰基的抗叶酸剂组合物(即，ANTIFOL-PGn，其中n≥1)。在本文中提及γPANTIFOL(ANTIFOL-PG)中的谷氨酰基的数目时将抗叶酸剂中的谷氨酰基考虑在内。例如，除ANTIFOL的谷氨酰基外还含有5个谷氨酰基残基的ANTIFOL-PG组合物在本文中被称为六谷氨酸化抗叶酸剂或抗叶酸剂六谷氨酸盐。聚谷氨酸盐链包含N-末端谷氨酰基和一个或多个C-末端谷氨酰基。聚谷氨酸盐链的N-末端谷氨酰基不是经由其胺基团连接至另一个谷氨酰基，而是经由其羧酸基团连接至一个或多个谷氨酰基。在一些实施方案中，聚谷氨酸化抗叶酸剂的N-末端谷氨酰基是抗叶酸剂的谷氨酰基。聚谷氨酸盐链的一个或多个C-末端谷氨酰基经由其胺基团连接至另一个谷氨酰基，但不经由其羧酸基团连接至另一个谷氨酰基。
术语“α谷氨酰基”、“α谷氨酸盐”和“α键联”及其迭代形式在它们涉及谷氨酰基的键联时是指含有α羧基键联的谷氨酰基。在一些实施方案中，所提供的聚谷氨酸化抗叶酸剂的谷氨酰基没有一个含有α键联。
术语“γ谷氨酰基”、“γ谷氨酸盐”和“γ键联”在它们涉及谷氨酰基的键联时是指含有γ羧基键联的谷氨酰基。在一些实施方案中，γ键联是一个谷氨酰基的γ羧基与第二谷氨酰基之间的酰胺键。γ键联可位于谷氨酰基与抗叶酸剂中的谷氨酰基之间，或位于所述谷氨酰基与抗叶酸剂中不存在的第二谷氨酰基(如与抗叶酸剂连接的聚谷氨酸盐链中的谷氨酰基)之间。在一些实施方案中，γ键联是指抗叶酸剂的谷氨酰基的酰胺键。除非明确指出或从上下文中清楚地得知这并非意图，否则提及γ键联包括抗叶酸剂的谷氨酰基的γ键联。在一些实施方案中，γ谷氨酰基呈L形式。在一些实施方案中，γ谷氨酰基呈D形式。如本文所论述，在抗叶酸剂疗法中，抗叶酸剂进入细胞并且被酶叶酰聚-γ-谷氨酸合成酶(FPGS)聚谷氨酸化，所述酶将L谷氨酰基连续地添加至抗叶酸剂中的L-谷氨酰基内的谷氨酸盐的γ羧基。因此，在抗叶酸剂治疗期间，在细胞内不自然形成D-γ聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物。
术语“γ聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“γ-聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“γPANTIFOL”、“γ聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“聚谷氨酸化γ-ANTIFOL”、“γANTIFOL-PG”及其迭代形式在本文中可互换使用来指除抗叶酸剂的γ谷氨酰基外还包含至少一个具有γ羧基键联的γ谷氨酰基的抗叶酸剂组合物(例如，ANTIFOL-PGn，其中n≥1个γ谷氨酰基)。在本文中提及γPANTIFOL(γANTIFOL-PG)中的谷氨酰基的数目时将抗叶酸剂中的γ-谷氨酰基考虑在内。例如，除抗叶酸剂中的谷氨酰基外还含有5个γ-谷氨酰基的γANTIFOL-PG组合物在本文中可被称为γ六谷氨酸化抗叶酸剂或γ抗叶酸剂六谷氨酸盐。例如，在一些实施方案中，γ四谷氨酸盐、五谷氨酸盐或六谷氨酸盐抗叶酸剂可以是式III(例如，III-L或III-D)的化合物或其药学上可接受的盐或式IV(例如，IV-L或IV-D)的碱金属盐，其中n分别是2、3或4。
术语“α聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“α-聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“αPANTIFOL”、“α聚谷氨酸化抗叶酸剂”、“聚谷氨酸化α-ANTIFOL”、“αANTIFOL-PG”及其迭代形式在本文中可互换使用来指除抗叶酸剂的谷氨酰基外还包含至少一个具有α羧基键联的α谷氨酰基的抗叶酸剂组合物(例如，ANTIFOL-PGn，其中n≥1个α谷氨酰基)。在本文中提及αPANTIFOL(αANTIFOL-PG)中的谷氨酰基的数目时将抗叶酸剂中的谷氨酰基考虑在内。例如，除抗叶酸剂中的谷氨酰基外还含有5个α-谷氨酰基的αANTIFOL-PG组合物在本文中可被称为α六谷氨酸化抗叶酸剂或α抗叶酸剂六谷氨酸盐。例如，在一些实施方案中，α四谷氨酸盐、五谷氨酸盐或六谷氨酸盐抗叶酸剂可以是式III-α(例如，III-L-α或III-D-α)的化合物或其药学上可接受的盐或式IV-α(例如，IV-L-α或IV-D-α)的碱金属盐，其中n分别是2、3或4。
如本文所用，术语“分离的”是指呈自然界中未发现的形式的组合物。分离的γ聚谷氨酸化组合物包括已经被纯化至不再呈它们在自然界被发现的形式的程度的那些。在一些实施方案中，分离的γ聚谷氨酸化抗叶酸剂是基本上纯的。分离的组合物将不含或基本上不含与它们天然相关的材料，如可能在自然界或其制备环境(例如，细胞培养物)中与其一起存在的其它细胞组分，如蛋白质和核酸。所述γ聚谷氨酸化组合物可与稀释剂或佐剂一起配制，并且仍出于实际目的而分离-例如，当用于诊断或治疗时，所述γ聚谷氨酸化组合物通常将与药学上可接受的载体或稀释剂混合。在一些实施方案中，分离的γ聚谷氨酸化组合物(例如，γ聚谷氨酸盐和递送媒介物，如含有γ聚谷氨酸盐的脂质体含有少于1％或少于0.1％的不希望的DNA或蛋白质含量。在一些实施方案中，γ聚谷氨酸盐组合物(例如，γ聚谷氨酸盐和递送媒介物，如含有γ聚谷氨酸盐的脂质体)是“分离的”。
本文使用术语“靶向部分”来指对选定靶标(例如，细胞、细胞类型、组织、器官、身体的区域或区室，例如细胞、组织或器官区室)提供增强的亲和力的分子。靶向部分可包含各种各样的实体。靶向部分可包括天然存在的分子，或重组或合成分子。在一些实施方案中，靶向部分是抗体、抗原结合抗体片段、双特异性抗体或其它基于抗体的分子或化合物。在一些实施方案中，靶向部分是适体、高亲和性多聚体(avimer)、受体结合配体、核酸、生物素-抗生物素蛋白结合对、肽、蛋白质、碳水化合物、脂质、维生素、毒素、微生物的组分、激素、受体配体或它们的任何衍生物。其它靶向部分是本领域已知的并且由本公开所涵盖。
术语“特异性亲和力”或“特异性地结合”是指与替代物质(包括与目标表位不相关的蛋白质)相比，靶向部分(如抗体或抗原结合抗体片段)与表位、蛋白质或靶分子的反应或缔合更频繁、更快速、持续时间更长、亲和力更大或以上情况的一些组合。由于不同物种中同源蛋白质之间的序列同一性，在一些实施方案中，特异性亲和力可包括识别多于一种物种中的蛋白质或靶标的结合剂。同样，由于不同蛋白质的多肽序列的某些区域内的同源性，术语“特异性亲和力”或“特异性结合”可包括识别多于一种蛋白质或靶标的结合剂。应了解，在某些实施方案中，特异性地结合第一靶标的靶向部分可以或可以不特异性地结合第二靶标。因此，“特异性亲和力”并不一定需要(虽然可包括)唯一结合，即，结合至单一靶标。因此，在某些实施方案中，靶向部分可特异性地结合多于一个靶标。在某些实施方案中，多个靶标可由同一靶向部分结合。
术语“表位”是指能够由靶向部分(即，结合部分)如抗体识别并特异性地结合的抗原的那一部分。当抗原是多肽时，表位可由连续氨基酸和通过蛋白质的三级折叠而并置的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在蛋白质变性时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在蛋白质变性时丧失。表位通常包含至少3个、并且更通常至少5个或8-10个呈独特空间构象的氨基酸。
诸如“对靶标的结合亲和力”、“结合至靶标”的表述和本领域已知的类似表述是指可通过测定亲和常数，例如在给定抗原浓度下缔合和解离的靶向部分的量而直接测量的靶向部分的性质。可使用不同的方法来表征分子相互作用，如但不限于竞争分析、平衡分析和微量量热分析以及基于表面等离子体共振相互作用的实时相互作用分析(例如，使用
Figure BDA0003575147470000241
仪器)。这些方法是本领域技术人员众所周知的，并且描述于例如Neri等人,Tibtech 14:465-470(1996)和Jansson等人,J.Biol.Chem.272:8189-8197(1997)中。
术语“递送媒介物”通常是指用于辅助、促进或帮助聚谷氨酸化抗叶酸剂进入细胞的任何组合物。此类递送媒介物是本领域中已知的，并且包括但不限于脂质体、脂质球、聚合物(例如，聚合物-缀合物)、肽、蛋白质如抗体(例如，免疫缀合物，如抗体药物缀合物(ADC)和抗原结合抗体片段以及它们的衍生物)、细胞组分、环状寡糖(例如，环糊精)、胶束、微颗粒(例如，微球)、纳米颗粒(例如，脂质纳米颗粒、生物可降解的纳米颗粒和核-壳纳米颗粒)、水凝胶、脂蛋白颗粒、病毒序列、病毒材料或脂质或脂质体制剂以及它们的组合。递送媒介物可直接或间接连接至靶向部分。在一些实例中，靶向部分选自大分子、蛋白质、肽、单克隆抗体或脂肪酸脂质。
如本文所用，“有效量”是指足以提供医学上期望的结果的剂的剂量。有效量将随所需结果、所治疗或预防的特定疾患、所治疗受试者的年龄和身体状况、疾患的严重程度、治疗的持续时间、同步或组合疗法(如果有)的性质、具体施用途径以及健康执业医师的知识和专业技能内的类似因素。关于所阐述的目的，有效量可根据经验并且以常规方式来确定。在癌症的情况下，剂的有效量可减少癌细胞的数量；减小肿瘤的大小；抑制(即，在某种程度上减慢并优选阻止)癌细胞浸润至周围器官中；抑制(即，在某种程度上减慢并在优选阻止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；和/或在某种程度上减轻与病症相关的一种或多种症状。在药物可防止生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，它可为细胞抑制的和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，可例如通过评估存活的持续时间、无进展存活的持续时间(PFS)、应答率(例如，RR)、应答持续时间和/或生活质量来测量体内功效。
术语“过度增生性病症”、“增生性疾病”和“增生性病症”在本文中可互换使用，涉及过度或异常细胞的不想要的或不受控制的细胞增殖，所述细胞增殖不是所期望的，如肿瘤或增生性生长(无论是在体外还是体内)。在一些实施方案中，增生性疾病是癌症或肿瘤疾病(包括良性或癌性)和/或任何转移，无论所述癌症、肿瘤和/或转移位于何处。在一些实施方案中，增生性疾病是良性或恶性肿瘤。在一些实施方案中，增生性疾病是非癌性疾病。在一些实施方案中，增生性疾病是过度增生性疾患，如增生、纤维化(尤其是肺纤维化，但也包括其它类型的纤维化，如肾纤维化)、血管生成、银屑病、动脉粥样硬化和血管中的平滑肌增生，如狭窄或血管成形术后再狭窄。
“癌症”、“肿瘤”或“恶性疾病”被用作同义词，并且是指以细胞的不受控制的异常增殖、受影响细胞在局部或通过血流和淋巴系统扩散至身体其它部位(转移)的能力以及许多特征性结构和/或分子特征中的任一个为特征的多种疾病中的任一种。如本文所用的“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖(无论恶性还是良性)以及所有癌前和癌性细胞和组织。“癌性肿瘤”或“恶性细胞”应理解为具有特定结构性质、缺乏分化并且能够侵袭和转移的细胞。可使用本文提供的PANTIFOL组合物治疗的癌症包括但不限于非血液系统恶性疾病，包括例如肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症和黑素瘤；和血液系统恶性疾病，例如白血病、淋巴瘤和其它B细胞恶性疾病、骨髓瘤和其它浆细胞发育异常或恶液质。在一些实施方案中，所述癌症选自：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)癌症。可使用PANTIFOL组合物治疗的其它类型的癌症和肿瘤在本文中进行了描述或是本领域中另外已知的。术语“转移”是指肿瘤、癌症或瘤形成扩散或播散至受试者体内的其它部位、位置、区域或器官或组织系统，其中所述部位、位置、区域或器官或组织系统与原发性肿瘤、癌症或瘤形成不同。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增生性病症”和“肿瘤”在本文中提及时并不互相排斥。
诸如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(to treat)”的术语是指(a)治愈、减缓所诊断的病理性疾患或病症、减轻其症状和/或停止其进展的治疗措施和(b)预防和/或减缓目标疾病或疾患的发展的防治性或预防性措施。因此，需要治疗的受试者包括已经患有癌症、病症或疾病的受试者；有患癌症或疾患的风险的那些受试者；以及要预防感染或疾患的那些受试者。使用众所周知的医学和诊断技术，将受试者鉴定为“患有”本文提及的癌症、感染性疾病、免疫系统病症、过度增生性疾病或另一种疾病或病症或有患本文提及的癌症、感染性疾病、免疫系统病症、过度增生性疾病或另一种疾病或病症的风险。在某些实施方案中，如果受试者显示例如与疾病或疾患(例如，癌症、炎症和类风湿性关节炎)相关的症状的全部、部分或短暂改善或消除，则根据本文提供的方法成功地“治疗”所述受试者。在具体实施方案中，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(totreat)”是指改善增生性病症的至少一种可测量的物理参数，如肿瘤的生长，这不一定是患者可辨别的。在其它实施方案中，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(totreat)”是指在身体上通过例如稳定可辨别的症状或在生理上通过例如稳定物理参数或通过两者来抑制增生性病症的进展。在其它实施方案中，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(to treat)”是指肿瘤大小、肿瘤细胞增殖或存活或癌细胞计数的减少或稳定。可单独或与另外的治疗剂组合使用γ-PANTIFOL组合物进行治疗。还可单独或与另外的治疗剂组合使用αPANTIFOL组合物进行治疗。
“受试者”和“患者”以及“动物”可互换使用，并且是指哺乳动物如人患者和非人灵长类动物以及实验动物，如兔、大鼠和小鼠以及其它动物。动物包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如鸡、两栖动物和爬行动物。如本文所用的“哺乳动物”是指哺乳纲的任何成员，包括但不限于人和非人灵长类动物，如黑猩猩以及其它猿和猴物种；家畜，如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养哺乳动物，如狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物，如小鼠、大鼠和豚鼠，以及本领域已知的哺乳纲的其它成员。在特定实施方案中，患者是人。
“增生性病症的治疗”在本文中用来包括维持或减小肿瘤大小、诱导肿瘤消退(部分或完全)、抑制肿瘤生长和/或增加患有增生性病症的受试者的寿命。在一个实施方案中，所述增生性病症是实体瘤。此类肿瘤包括例如肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症和黑素瘤。在一个实施方案中，所述增生性病症是血液系统恶性疾病。此类血液系统恶性疾病包括例如白血病、淋巴瘤和其它B细胞恶性疾病、骨髓瘤和其它浆细胞发育异常或恶液质。
如本文所用的术语“自身免疫性疾病”被定义为由自身免疫应答引起的病症。自身免疫性疾病是对自身抗原的不适当和过度应答的结果。自身免疫性疾病的实例包括但不限于，艾迪生氏病、斑秃、强直性脊柱炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性腮腺炎、克罗恩氏病、糖尿病(I型)、营养不良性大疱型表皮松解症、附睾炎、肾小球性肾炎、格雷夫斯氏病、格林-巴利综合征、桥本氏病、溶血性贫血、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、重症肌无力、寻常型天疱疮、银屑病、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、斯耶格伦综合征、脊柱关节病、甲状腺炎、血管炎、白癜风、粘液性水肿、恶性贫血、溃疡性结肠炎等。
术语“炎症”和“炎症性疾病”可互换使用，并且是指以炎症为特征或由炎症引起的疾病或病症。“炎症”是指充当开始消除有害剂和受损组织的机制的对细胞损伤的局部应答，其特征在于毛细血管扩张、白细胞浸润、发红、发热和疼痛。炎症部位包括肺、胸膜、腱、淋巴结或腺体、小舌、阴道、脑、脊髓、鼻和咽粘膜、肌肉、皮肤、骨骼或骨组织、关节、膀胱、视网膜、子宫的宫颈、眼角、肠道、椎骨、直肠、肛门、滑囊、毛囊等。此类炎症性疾病包括但不限于炎症性肠病、类风湿病(例如，类风湿性关节炎)、其它关节炎疾病(例如，急性关节炎、急性痛风性关节炎、细菌性关节炎、慢性炎症性关节炎、退行性关节炎(骨关节炎)、感染性关节炎、幼年型关节炎、真菌性关节炎、神经病性关节炎、多发性关节炎、增生性关节炎、银屑病性关节炎、性病性关节炎、病毒性关节炎)、纤维组织炎、盆腔炎症性疾病、痤疮、银屑病、放线菌病、痢疾、胆汁性肝硬化、莱姆病、热疹、史蒂文斯-约翰逊综合症、腮腺炎、寻常型天疱疮和芽生菌病。炎症性肠病是胃肠道的慢性炎症性疾病，其包括但不限于克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和未确定型结肠炎。类风湿性关节炎是主要是关节、通常是多关节的慢性炎症性疾病，其特征是滑膜和关节结构中的炎症性改变以及肌肉萎缩和骨质疏松。
术语“治疗剂”在本文用来指可与过度增殖性细胞如癌细胞或免疫细胞相互作用、从而减轻所述细胞的增殖状态和/或杀死所述细胞的剂或其衍生物或前药。治疗剂的实例包括但不限于化学治疗剂、细胞毒性剂、基于铂的剂(例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂)、紫杉烷类(例如，
Figure BDA0003575147470000291
)、依托泊苷、烷化剂(例如，环磷酰胺、异环磷酰胺)、代谢拮抗剂(例如，抗叶酸剂(ANTIFOL)、5-氟尿嘧啶吉西他滨或其衍生物)、抗肿瘤抗生素(例如，丝裂霉素、阿霉素)、植物来源的抗肿瘤剂(例如，长春新碱、长春地辛、Taxol)。此类剂还可包括但不限于抗癌剂三甲曲沙、替莫唑胺、雷替曲塞、S-(4-硝基苄基)-6-硫代肌苷(NBMPR)、6-苄基胍(6-BG)、双-氯亚硝基脲(BCNU)和CAMPTOTHECINTM或它们中的任一者的治疗性衍生物。可适合根据所公开的方法使用的治疗剂的另外实例包括但不限于抗再狭窄剂、促增殖或抗增殖剂、抗炎剂、抗肿瘤剂、抗有丝分裂剂、抗血小板剂、抗凝血剂、抗血纤蛋白剂、抗凝血酶剂、细胞抑制剂、抗生素和其它抗感染剂、抗酶剂、抗代谢剂、血管生剂、细胞保护剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂和/或心脏保护剂。“治疗剂”还指上述剂的盐、酸和游离碱形式。
如本文所用，术语“化学治疗剂”当关于癌症疗法使用时，是指导致癌细胞死亡或抑制癌细胞的生长或扩散的任何剂。此类化学治疗剂的实例包括烷化剂、抗生素、抗代谢剂、植物来源的剂和激素。在一些实施方案中，所述化学治疗剂是顺铂。在一些实施方案中，所述化学治疗剂是卡铂。在一些实施方案中，所述化学治疗剂是奥沙利铂。在其它实施方案中，所述化学治疗剂是吉西他滨。在其它实施方案中，所述化学治疗剂是阿霉素。
术语“抗代谢药”在本文中用来指抑制代谢物的利用的抗肿瘤药物或其前药。抗代谢药的实例包括抗叶酸剂、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶前药如卡培他滨、5-氟脱氧尿苷一磷酸、阿糖胞苷、阿糖胞苷前药如奈拉滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、腺苷、喷司他丁、赤羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)和克拉屈滨。可用于实践本公开方法的抗代谢药包括核苷类似物，包括嘌呤或嘧啶类似物。在一些实施方案中，聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与选自以下的抗代谢药组合使用：氟嘧啶5-氟尿嘧啶、5-氟-2'-脱氧胞苷、阿糖胞苷、吉西他滨、曲沙他滨、地西他滨、氮杂胞苷、假异胞苷、泽布拉林、安西他滨、法扎拉滨、6-氮杂胞苷、卡培他滨、N4-十八烷基-阿糖胞苷、反油酸阿糖胞苷、氟达拉滨、克拉屈滨、氯法拉滨、奈拉滨、呋咯地辛(forodesine)和喷司他丁或它们的衍生物。在一个实例中，核苷类似物是核苷脱氨酶的底物，所述核苷脱氨酶是腺苷脱氨酶或胞苷脱氨酶。在一些实例中，核苷类似物选自氟达拉滨、阿糖胞苷、吉西他滨、地西他滨和氮杂胞苷或它们的衍生物。在某些实施方案中，抗代谢药是5-氟尿嘧啶。
如本文所用，“紫杉烷”是干扰或破坏微管稳定性、形成和/或功能的抗癌剂。紫杉烷剂包括紫杉醇和多西他赛以及它们的衍生物，其中所述衍生物通过与衍生它们的紫杉烷相同的作用方式对微管起作用。在某些实施方案中，紫杉烷是紫杉醇或多西他赛，或紫杉醇或多西他赛的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方案中，紫杉烷是紫杉醇
Figure BDA0003575147470000301
多西他赛
Figure BDA0003575147470000302
白蛋白结合型紫杉醇(纳米白蛋白结合型紫杉醇；
Figure BDA0003575147470000303
)、DHA-紫杉醇或PG-紫杉醇。
术语“药学上可接受的载体(pharmaceutically-acceptable carrier)”或“药学上可接受的载体(pharmaceutically acceptable carrier)”是指药物制剂中除活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。药学上可接受的载体可包括例如适于向人或其它受试者施用的一种或多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。
合成方法
本公开的某些实施方案涉及制备聚谷氨酸化化合物如γ聚谷氨酸化化合物、α聚谷氨酸化化合物或它们的药学上可接受的盐的合成方法。
γPANTIFOL
通常，本文中用于γPANTIFOL的合成方法可包括式I的聚谷氨酸或其盐与具有式Z-COOH的抗叶酸剂或其活化形式的酰胺偶联反应，以形成式II的聚谷氨酸化化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000311
其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Pg1在每次出现时独立地是羧酸保护基团，并且n可以是0-20的整数，其中Z是抗叶酸剂的残基。
如本文所用，Z-COOH应理解为不包括通常存在于抗叶酸剂中的单谷氨酰基。例如，已知具有D或L单谷氨酸单元的抗叶酸剂培美曲塞(呈酸形式)具有以下结构
Figure BDA0003575147470000321
在一些具体实施方案中，Z可据称为培美曲塞的残基。在此类实施方案中，Z是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000322
没有D-或L-谷氨酸单元。其它抗叶酸剂的残基应类似地理解。
如本文所用，羧酸的活化形式可包括其中羧酸基团的-OH被活化成离去基团的那些形式中的任一者。羧酸的典型活化形式包括相应的酰基卤、酸酐、N-连接的酰基-杂芳基(例如，酰基咪唑(例如，通过羰基二咪唑活化)、酰基吡啶基等)、活化酯，(1)通过各种碳二亚胺衍生物如N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)，(2)通过膦酸酐如丙烷膦酸酐(T3P)，(3)通过脲鎓如1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，或(4)通过鏻如苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)等产生的活化形式。
羧酸的非限制性活化形式包括具有式-C(O)-O-G的基团，其中G是任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基(例如，任选取代的苯基，如4-硝基苯基、2-硝基苯基等)、任选取代的杂芳基(例如，苯并三唑、1-羟基-苯并三唑(HOBt)的残基、1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)的残基等)、任选取代的杂环基(例如，N-琥珀酰亚胺)，或者G具有式-C(O)-GA，其中GA可以是任选取代的烷基(如异丁基)、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基(例如，任选取代的苯基)、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基。
本文的酰胺偶联反应不需要分离羧酸的活化形式。例如，在一些实施方案中，式I的聚谷氨酸或其盐可在酰胺偶联剂(例如，氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU或T3P)存在下与Z-COOH的羧酸反应，所述酰胺偶联剂原位活化羧酸。然而，在一些实施方案中，羧酸的分离的活化形式也可用于本文的合成方法。
式I的聚谷氨酸或其盐与Z-COOH的羧酸或其活化形式之间的酰胺偶联的合适条件在本领域中通常是已知的。各种酰胺偶联剂可用于本文的合成方法。非限制性的有用的酰胺偶联剂包括氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU或T3P。通常，当使用碳二亚胺偶联剂如DCC、DIC、EDCI等时，酰胺偶联反应还在苯并三唑如1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)等存在下进行。在一些实施方案中，还添加碱用于酰胺偶联。合适的碱包括无机碱如碳酸盐(例如，Na2CO3、NaHCO3)和有机碱如胺碱(例如，二异丙基乙胺、三乙胺、N-甲基吗啉、吡啶)等。本文中的酰胺偶联反应通常在使得手性中心不发生外消旋化或外消旋化最小化的条件下进行。示例性酰胺偶联反应条件显示在实施例部分中。
在一些实施方案中，本文的合成方法还包括使式II或其盐的Pg1基团脱保护，以形成式III的游离羧酸化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000341
其中Z和n在本文中定义。
在一些实施方案中，式II的每个Pg1基团均可在酸性条件下脱保护。例如，在一些实施方案中，式II的每个Pg1基团均是叔丁基。在一些实施方案中，式II化合物的脱保护可用酸如三氟乙酸(TFA)、HCl等来实现。
在一些实施方案中，本文的合成方法还包括将式III的游离羧酸化合物或其盐转化为式IV的碱金属盐：
Figure BDA0003575147470000342
其中M+是碱金属反离子，如Li+、Na+或K+。所述转化通常可通过使式III化合物或其盐与合适的碱金属碱例如NaOH等接触来进行。在一些实施方案中，式IV的碱金属盐可通过例如本文所述的任何合适的方法进一步分离、纯化和/或结晶。虽然未指定式IV中M+的摩尔当量，但不应将式IV理解为限于具有一摩尔当量的M+。需要说明的是，式IV中的M+通常可平衡式IV中羧酸基团的负电荷，式IV中每1摩尔带负电荷的羧酸基团有1摩尔M+。例如，在一些实施方案中，n是4，并且M+是Na+，式IV的碱金属盐可以是七钠盐，即7Na+以配衡羧酸的负电荷，从而使式IV是总体上中性的。在一些实施方案中，碱金属阳离子M+还可与一种或多种其它阳离子(例如，药学上可接受的阳离子)组合以配衡羧酸基团的负电荷，从而使式IV是总体上中性的。
本文所述的合成方法具有多种优点。如本文所论述，本文所述的合成方法(1)可容易地适用于大规模合成，例如千克级规模合成；(2)可具有高产率，在合成过程中没有外消旋化或外消旋化最小化，并且用于纯化的程序简单，如通过结晶；并且(3)可提供高纯度中间体和/或产物，包括式I、II、III和IV的化合物及其盐。(4)由于使用较少数量的重复步骤，因此可降低对制造设备的要求。这些高纯度中间体和/或产物也是本公开的新型组合物。
尽管本文所述的许多实施方案涉及经由酰胺形成通过羧酸基团聚谷氨酸化的药物(例如，抗叶酸剂)，但本公开不限于这种聚谷氨酸化模式。例如，本公开还考虑了具有其它官能团的药物分子(例如，抗叶酸剂)的聚谷氨酸化，使得酰胺键、碳-氮单键、酯键、氨基甲酸酯、脲、磺酰胺、氨基磺酸酯磺酰胺等可通过式I的聚谷氨酸盐或其保护/脱保护的衍生物的NH2或COOH基团形成。
另外，如对本领域技术人员将显而易见的，可能需要常规保护基团以防止某些官能团进行不需要的反应。各种官能团的合适保护基团以及用于保护和脱保护特定官能团的合适条件在本领域中是众所周知的。例如，许多保护基团描述于“Protective Groups inOrganic Synthesis”,第4版P.G.M.Wuts；T.W.Greene,John Wiley,2007以及其中引用的参考文献中。用于本文所述的反应的试剂通常是已知化合物或者可通过已知程序或其明显修改来制备。例如，许多试剂可从商业供应商如Aldrich Chemical Co.(Milwaukee,Wisconsin,USA)、Sigma(St.Louis,Missouri,USA)获得。其它试剂可通过标准参考教科书中描述的程序或其明显修改来制备，所述标准参考教科书如Fieser和Fieser's Reagentsfor Organic Synthesis,第1-15卷(John Wiley and Sons,1991)；Rodd's Chemistry ofCarbon Compounds,第1-5卷和增刊(Elsevier Science Publishers,1989)；OrganicReactions,第1-40卷(John Wiley and Sons,1991)；March's Advanced OrganicChemistry,(Wiley,第7版)；以及Larock's Comprehensive Organic Transformations(Wiley-VCH,1999)以及截至本文件的任何可用更新。
式I和制备
为了制备本文中的高纯度聚谷氨酸化抗叶酸剂，合成通常使用基本上纯的式I的聚谷氨酸或其盐。例如，对于合成方法，式I(例如，式I-L或I-D)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常可具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。本文描述了用于制备这种基本上纯的式I的聚谷氨酸盐的方法。
在一些实施方案中，基本上纯的式I的聚谷氨酸盐也呈立体异构纯或基本上纯的形式。在一些实施方案中，式I的聚谷氨酸盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I的聚谷氨酸盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。本领域技术人员可容易地确定对映异构体和/或非对映异构体的量，例如使用HPLC(例如，手性HPLC)。
在一些实施方案中，式I中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式I化合物是式I-L化合物：
Figure BDA0003575147470000371
其中Pg1和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-L的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-L的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-L的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-L的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式I中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式I化合物是式I-D化合物：
Figure BDA0003575147470000372
其中Pg1和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-D的聚谷氨酸盐也可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-D的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-D的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-D的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
各种羧酸保护基团适合用作式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1。羧酸保护基团(或者可替代地在本文中称为羧基保护基团)在本领域中通常是已知的，例如，如“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”,第4版P.G.M.Wuts；T.W.Greene,John Wiley,2007以及其中引用的参考文献中所描述。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1在每次出现时可以是可在酸性条件下除去的羧基保护基团，如叔烷基，诸如叔丁基。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1在每次出现时可以是可在碱性条件下除去的羧基保护基团，如甲基、乙基、苄基等。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1在每次出现时可以是可通过亲核攻击除去的羧基保护基团，如甲基、乙基、苄基。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1在每次出现时可以是可通过光反应除去的羧基保护基团，即保护基团是可光释放的保护基团。可光释放的保护基团是本领域已知的，例如，如Klan等人“Photoremovable Protecting Groups in Chemistry and Biology:ReactionMechanisms and Efficacy,”Chem.Rev.113:119-191(2013)中所描述。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1在每次出现时可以是可在氢化条件下除去的羧基保护基团，如苄基。
通常，式I(例如，式I-L或I-D)中的所有Pg1都是相同保护基团。然而，在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的Pg1基团也可以是不同的并且可在不同的条件下脱保护。例如，在一些实施方案中，C-末端羧酸基团(α-羧酸基团或γ-羧酸基团)的Pg1基团可与剩余羧酸基团的Pg1基团不同和/或正交。在此类实施方案中，C-末端羧酸基团(α-羧酸基团或γ-羧酸基团)的Pg1基团可在其它Pg1基团存在下选择性地脱保护，反之亦然，这允许C-末端羧酸基团的进一步官能化。
本文所述的式I(例如式I-L或I-D)的聚谷氨酸盐通常可包含2-20个谷氨酸单元，例如2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或多于5个。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)的聚谷氨酸盐可指特定低聚物，其中n是特定整数。例如，在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)中的n可以是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)的聚谷氨酸盐可以是六谷氨酸盐(n是4)，其可基本上不含其中n不为4的式I的聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，式I的聚谷氨酸盐还可指具有不同数量的谷氨酸单元的聚谷氨酸盐的混合物。例如，在一些实施方案中，式I的聚谷氨酸盐可包含式I的聚谷氨酸盐的混合物，其中n是0-18、0-13、2-6、0-8、0-3等。
式I(例如，式I-L或I-D)化合物通常由式I-P化合物或其盐的脱保护制备：
Figure BDA0003575147470000391
其中Pg2和Pg2’独立地是氢或氮保护基团，条件是Pg2和Pg2’中的至少一者是氮保护基团；或者Pg2和Pg2’与它们所连接的氮原子一起形成环状受保护的氨基。如本文所用，术语“胺保护基团”和“氮保护基团”可互换使用。氮保护基团在本领域中通常是已知的，例如，如“Protective Groups in Organic Synthesis”,第4版P.G.M.Wuts；T.W.Greene,JohnWiley,2007以及其中引用的参考文献中所描述。合适的氮保护基团的非限制性实例包括苄氧羰基(Cbz)(可通过氢解除去)、对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)(可通过氢解除去)、叔丁氧基羰基(Boc)(可通过酸如HCl或三氟乙酸或通过加热除去)、9-芴基甲基氧基羰基(FMOC)(可通过碱如哌啶除去)、乙酰基(Ac)(可通过用碱处理除去)、苯甲酰基(Bz)(可通过用碱处理，最通常用氨水或气态氨或甲胺处理除去)、苄基(Bn)(可通过氢解除去)、氨基甲酸酯(可通过酸和温和加热除去)、对甲氧基苄基(PMB)(可通过氢解除去)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)(可通过氢解除去)、对甲氧基苯基(PMP)(可通过硝酸铈(IV)铵除去)、琥珀酰亚胺(一种环状酰亚胺)(可通过用碱处理除去)、甲苯磺酰基(Ts)(可通过浓酸和强还原剂除去)和其它磺酰胺(Nosyl和Nps)(可通过二碘化钐、三丁基氢化锡等除去)。在一些实施方案中，Pg2和Pg2’两者都不是Fmoc。
通常，选择Pg2和Pg2’以使得脱保护可以高效率进行，从而使脱保护的产物，即式I化合物或其盐可直接用于与Z-COOH或其活化形式偶联。例如，在一些实施方案中，式I-P中的Pg2和Pg2’中的一者是氢，并且Pg2和Pg2’中的另一者是能够通过氢化脱保护的氮保护基团，例如Pg2是苄氧基羰基(Cbz)。在此类实施方案中，可以高效率进行脱保护，并且通常可直接使用脱保护的产物而无需进一步纯化。
在本文所述的任何实施方案中，式I-P的Pg1基团和胺保护基团可以是正交的。例如，在一些实施方案中，式I-P的胺保护基团可以是在氢化条件下可除去但在酸性条件(例如，TFA)下稳定的保护基团，而Pg1基团在氢化条件下稳定但在酸性条件(例如，TFA)下可除去。或者，在一些实施方案中，式I-P的胺保护基团可以是在氢化条件下稳定但在酸性条件(例如，TFA)下可除去的保护基团，而Pg1基团在氢化条件下可除去但在酸性条件(例如，TFA)下稳定。在一些实施方案中，式I-P中的Pg2和Pg2’中的一者是氢，并且Pg2和Pg2’中的另一者是能够通过氢化脱保护的氮保护基团，例如Pg2是苄氧基羰基。各种氢化条件都是合适的。通常，这种氢化可在非均相催化剂如Pd/C存在下、在H2气下、在诸如醇类溶剂(例如，甲醇、乙醇等)的溶剂中进行。在一些实施方案中，所有的Pg1基团都是酸可脱保护的保护基团，如叔丁基。
为了制备高纯度的式I化合物或其盐，所使用的式I-P(例如，式I-P-L或I-P-D)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常也是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。在一些实施方案中，式I-P化合物也可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-P化合物也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式I-P化合物中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式I-P化合物是式I-P-L化合物：
Figure BDA0003575147470000411
其中Pg1、Pg2、Pg2’和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-P-L化合物可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-P-L化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-P-L化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-P-L化合物也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式I-P中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式I-P化合物是式I-P-D化合物：
Figure BDA0003575147470000421
其中Pg1、Pg2、Pg2’和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-P-D化合物也可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-P-D化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-P-D化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-P-D化合物也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
式I-P(例如，式I-P-L或I-P-D)化合物通常通过酰胺偶联反应由受保护的谷氨酸或受保护的聚谷氨酸制备。例如，在一些实施方案中，制备式I-P化合物的方法包括：
使式S-1的酸或其活化形式与式S-2的受保护的聚谷氨酸或其盐在酰胺形成条件下反应以形成式S-3的化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000422
Figure BDA0003575147470000431
其中Pg1、Pg2和Pg2’在本文中定义，其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)，其中m+p＝n，并且n在本文中定义。在一些实施方案中，m是0-19，例如2-6(例如，3或4)。在一些实施方案中，p是0-19。通常，p是0。然而，在一些实施方案中，p不是0。本领域技术人员应理解，当m+p＝n时，式S-3与式I-P相同。在一些实施方案中，可使式S-3脱保护以提供式I化合物。可类似地制备式S-2化合物。
在一些实施方案中，式S-1中的p是0并且式I-P的谷氨酸单元一个接一个连续地引入。例如，在一些实施方案中，制备式I-P化合物的方法包括：
1)使式S-1-A的酸或其活化形式与式S-2-A的胺或其盐在酰胺形成条件下反应以提供式S-3-A的二聚体化合物：
Figure BDA0003575147470000441
2)使所述式S-3-A化合物的胺保护基团脱保护以形成S-2-B化合物或其盐；
Figure BDA0003575147470000442
3)使所述式S-2-B化合物或其盐与式S-1-A的酸或其活化形式在酰胺形成条件下反应以使链延长一个谷氨酸单元以提供式S-3-B的三聚体化合物：
Figure BDA0003575147470000451
其中n1是1；以及任选地
4)重复使所述胺保护基团脱保护和使所述脱保护的化合物与式S-1-A的酸或其活化形式在酰胺形成条件下反应的顺序以使延长链直到达到所需数量的谷氨酸单元以形成式I-P化合物：
Figure BDA0003575147470000452
其中Pg1、Pg2和Pg2’在本文中定义，其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)。制备式I-P(n是4)化合物的实施例提供于实施例部分中。
在一些实施方案中，本文的合成方法用于制备式I-P-L化合物。在此类实施方案中，用于所述方法的相应起始材料和/或中间体通常具有呈L形式的每个谷氨酸单元。例如，在一些实施方案中，式S-1、S-2、S-3、S-1-A、S-2-A、S-3-A、S-2-B和S-3-B中的每一者中的每个谷氨酸单元可呈L形式。例如，在一些实施方案中，式S-1、S-2和S-3的化合物可分别具有式S-1-L、S-2-L或S-3-L，其中变量在本文中定义：
Figure BDA0003575147470000461
在一些实施方案中，式S-1-L、S-2-L或S-3-L的化合物可分别不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式S-1-L、S-2-L或S-3-L的化合物也可分别不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式S-1-L、S-2-L或S-3-L的化合物也可分别以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，制备式I-P化合物的方法用于制备式I-P-D化合物。在此类实施方案中，用于所述方法的相应起始材料和/或中间体具有呈D形式的每个谷氨酸单元。例如，在一些实施方案中，式S-1、S-2、S-3、S-1-A、S-2-A、S-3-A、S-2-B和S-3-B中的每一者中的每个谷氨酸单元可呈D形式。
在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)化合物也可使用固相化学制备。例如，可将初始谷氨酰基残基键合至王氏树脂(Wang resin)(或其它合适的树脂或固体载体)，并且使用F-moc化学经由固相肽合成连续添加另外的谷氨酰基残基。添加最终的谷氨酰基残基后，将抗叶酸剂前体(例如，培美曲塞前体)与肽偶联，并且从所述树脂上裂解分子。在一些实施方案中，式I(例如，式I-L或I-D)化合物不是使用固相化学制备的。
式II和制备
式II化合物是聚谷氨酸化抗叶酸剂，其中式II中的Z是合适的抗叶酸剂的残基。非限制性的合适的抗叶酸剂包括在WO2018/031967、WO 2018/031968、WO 2018/031979、WO2018/031980、WO 2019/094648、PCT/US2019/016989和PCT/US2019/017004中描述的那些中的任一者，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。本文描述了一些示例性抗叶酸剂。尽管本公开的实施方案涉及聚谷氨酸化抗叶酸剂，但式I化合物或其盐可与具有羧酸基团的任何其它药物或其活化形式形成酰胺，以形成式II化合物或其盐，其中式II中的Z代表这种药物的残基。
式I化合物或其盐转化为相应的式II化合物或其盐通常可在手性中心没有外消旋化或外消旋化最小化的情况下进行。在一些实施方案中，式II的聚谷氨酸盐以立体异构纯或基本上纯的形式以大规模制备。例如，在一些实施方案中，本公开以超过10克的批量大小(如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多的批量大小等)提供呈立体异构纯或基本上纯形式的式II的聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，式II的聚谷氨酸盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式II的聚谷氨酸盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式II中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式II化合物是式II-L化合物：
Figure BDA0003575147470000481
其中Pg1、Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式II-L的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式II-L的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式II-L的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式II-L的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式II中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式II化合物是式II-D化合物：
Figure BDA0003575147470000491
其中Pg1、Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式II-D的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式II-D的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式II-D的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式II-D的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些具体实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)中的Z可以是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
在一些具体实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)中的Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470000492
在一些具体实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)中的Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000501
在一些实施方案中，Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000502
其中X是离去基团。在一些实施方案中，Z-COOH在与式I化合物在酰胺形成条件下反应后可形成中间体，所述中间体可进一步转化为环状结构：
Figure BDA0003575147470000511
(式II-环状)，其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)，Pg1和n(例如，n可以是0-20的整数，如2、3或4)在本文中定义，所述环状结构可进一步转化为下式化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470000512
(式III-环状)。
式II的Pg1和n可以是本文描述为适合于式I的聚谷氨酸盐的那些中的任一者。例如，在一些具体实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)中的n可以是0-20的整数，例如2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或大于5。在一些具体实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)中的Pg1可以是酸不稳定的羧酸保护基团，如叔丁基。
式II(例如，式II-L或II-D)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。在一些实施方案中，式II化合物也可呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。例如，在一些实施方案中，式II化合物可通过结晶，如使用合适的溶剂系统进行纯化。这种结晶的实例在实施例部分中示出。
在一些实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)化合物可以是基本上纯的特定低聚物，例如基本上纯的四谷氨酸盐(n是2)、基本上纯的五谷氨酸盐(n是3)、基本上纯的六谷氨酸盐(n是4)、基本上纯的七谷氨酸盐(n是5)等。在一些具体实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)化合物可以是基本上纯的六谷氨酸盐，其中式II中的n可以是4。例如，在此类实施方案中，式II(例如，式II-L或II-D)化合物可基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式II化合物。具有所列举纯度特征的式II化合物可通过控制用于与Z-COOH或其活化形式的酰胺偶联反应的相应式I的聚谷氨酸盐的纯度来制备。示例性程序在实施例部分中描述。
式III和制备
可使式II化合物或其盐脱保护以形成式III化合物或其盐。在一些实施方案中，式III化合物或其盐可以是基本上纯的。在一些实施方案中，式III化合物可以是酸加成盐，如TFA盐。式III的酸加成盐可以是基本上纯的，其可单独用于药物组合物中。在一些实施方案中，式III的酸加成盐也可用作中间体来制备式III的高纯度盐，如式IV的碱金属盐。当用作中间体时，式III的酸加成盐不必是药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，式III化合物以药学上可接受的盐(例如，钠盐)的形式存在，其包括一钠、二钠、三钠等，其中钠的数目至多为式III中的带负电荷的羧酸基团的数目。例如，当n是4时，式III中存在总计7个羧酸基团(不考虑Z基团中任何潜在的羧酸基团)，并且盐可以是单盐、二盐、三盐和至多七盐，如七钠盐。在一些实施方案中，式III化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，酸加成盐如HCl盐或碱加成盐如钠盐可用于控制克分子渗透压浓度，如在脂质体包封中维持适当的克分子渗透压浓度。
如本领域技术人员将理解的，当配制、进一步加工或施用本公开的PANTIFOL时，PANTIFOL的实际电离状态将取决于包含PANTIFOL的介质的pH。例如，当配制、进一步加工或施用式III化合物或其药学上可接受的盐时，式III化合物的实际电离状态将取决于包含式III化合物的介质的pH。以本公开的六谷氨酸化抗叶酸剂(n是4)作为实例，7个羧酸基团在介质pH为约6.5-7.0时可以是部分电离的，并且在较高pH如大于10下可以是完全电离的。因此，当配制为例如本文的脂质体组合物时，式III化合物或其药学上可接受的盐可根据配制介质的pH变得部分电离或完全电离，而不管是式III化合物的游离形式还是盐形式(例如，式III的HCl盐或式IV的碱金属盐)用作配制的起始药物物质。本公开的组合物如本文的脂质体组合物不应被理解为限于式III化合物的任何特定电离状态。在一些实施方案中，式III化合物在组合物中(例如在脂质体组合物中)的电离状态也可通过调节介质pH来控制。在一些实施方案中，组合物中式III化合物的电离状态可通过测量组合物的克分子渗透压浓度来监测。
短语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范围内，适合用于与人和低等动物的组织接触而无不适当的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐已在S.M.Berge等人J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1-19中进行了描述。
式III化合物可含有碱性和酸性官能团两者，并且可在需要时通过使用合适的酸或碱转化为药学上可接受的盐。
酸加成盐的实例包括但不局限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐)、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐以及十一烷酸盐。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括诸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸的此类无机酸，和诸如乙酸、富马酸、马来酸、4-甲基苯磺酸、琥珀酸和柠檬酸的此类有机酸。在一些实施方案中，式III化合物的药学上可接受的盐是酸加成盐，如HCl盐。
碱加成盐可通过使含有羧酸的部分与合适的碱(如但不局限于药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨水或有机伯胺、仲胺、叔胺反应来制备。药学上可接受的盐包括但不限于，基于碱金属或碱土金属，如但不限于锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等的阳离子；以及无毒性的季氨和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺等。可用于形成碱加成盐的有机胺的其它实例包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。在一些实施方案中，式III化合物的药学上可接受的盐是碱加成盐，诸如如本文所述的碱金属盐、碱土金属盐等。
在一些实施方案中，式II的每个Pg1基团是酸不稳定的保护基团，其可在酸性条件下脱保护。在一些实施方案中，式II的Pg1基团是相同的酸不稳定的保护基团。例如，在一些实施方案中，每个Pg1基团均可以是叔丁基。在一些实施方案中，式II化合物的脱保护可用酸如三氟乙酸(TFA)、HCl等来实现。
式II化合物或其盐转化为相应的式III化合物或其盐通常可在手性中心没有外消旋化或外消旋化最小化的情况下进行。在一些实施方案中，式III的聚谷氨酸盐以立体异构纯或基本上纯的形式以大规模制备。例如，在一些实施方案中，本公开以超过10克的批量大小(如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多的批量大小等)提供呈立体异构纯或基本上纯形式的式III的聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，式III的聚谷氨酸盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式III的聚谷氨酸盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式III中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式III化合物是式III-L化合物：
Figure BDA0003575147470000551
其中Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式III-L的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式III-L的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式III-L的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式III-L的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式III中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式III化合物是式III-D化合物：
Figure BDA0003575147470000552
其中Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式III-D的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式III-D的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式III-D的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式III-D的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些具体实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)中的Z可以是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
在一些具体实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)中的Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470000561
在一些具体实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)中的Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000562
Figure BDA0003575147470000571
在一些具体实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)中的n可以是0-20的整数，例如，2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或大于5。
式III(例如，式III-L或III-D)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。当提及式III化合物或其盐时，术语基本上纯的可指基本上纯的低聚物混合物(例如，n是2-5)，这意味着它基本上不含不为指定的低聚物混合物的杂质。在一些实施方案中，当提及式III化合物或其盐时，术语基本上纯的还可指基本上纯的特定低聚物(例如，n是2、3、4或5)，这意味着它基本上不含不为特定低聚物的杂质。
在一些实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)化合物可以是基本上纯的特定低聚物，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。例如，式III(例如，式III-L或III-D)化合物可以是基本上纯的四谷氨酸盐(n是2)、基本上纯的五谷氨酸盐(n是3)、基本上纯的六谷氨酸盐(n是4)、基本上纯的七谷氨酸盐(n是5)等。在一些具体实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)化合物可以是基本上纯的六谷氨酸盐，其中式III中的n是4。例如，在此类实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)化合物可基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式III化合物。
具有所列举的纯度特征的式III化合物可通过控制用于与Z-COOH或其活化形式的酰胺偶联反应的相应式I的聚谷氨酸盐和/或式II的受保护的聚谷氨酸化抗叶酸剂的纯度来制备。示例性程序在实施例部分中描述。
在一些实施方案中，式III(例如，式III-L或III-D)化合物也可使用固相化学制备。例如，可将初始谷氨酰基残基键合至王氏树脂(或其它合适的树脂或固体载体)，并且使用F-moc化学经由固相肽合成连续添加另外的谷氨酰基残基。添加最终的谷氨酰基残基后，将抗叶酸剂前体(例如，培美曲塞前体)与肽偶联，并且从所述树脂上裂解分子。在一些实施方案中，式III(例如，式I-L或I-D)化合物不是使用固相化学制备的。
如实施例部分中所示，在固相树脂上合成了两种培美曲塞γ聚谷氨酸盐(呈L形式或D形式)，并且将化合物通过LC-MS、NMR进行了充分表征，HPLC纯度为96％、98％，精确质量：1072.3621；计算值(M+H)：1073.3699，实测值(M+H)：1073.3687
Figure BDA0003575147470000591
式IV和制备
在一些实施方案中，本公开还提供了式IV(例如，本文所述)的碱金属盐。不希望受理论束缚，据信使用碱金属盐可以各种方式有益。碱金属盐通常比相应的游离酸形式或酸加成盐或其它盐水溶性更高。如实施例中所示，式IV的代表性碱金属盐是高度水溶性的。因此，在一些实施方案中，式IV的碱金属盐可更适合于制备其中良好的水溶性为有益的药物组合物，如制备水溶液制剂，或制备本文所述的脂质体组合物。此外，通过进一步加工步骤，碱金属盐可以比游离酸形式或酸加成盐更高的纯度制备。例如，在一些实施方案中，碱金属盐可由基本上纯的式III的酸加成盐制备，并且所得的碱金属盐可诸如通过结晶进一步纯化，以形成碱金属盐的固体形式，所述固体形式通常是基本上纯的。这种方法可极大地增强大规模制造并且可产生可用于制备各种药物组合物的高纯度活性药物成分，例如，如本文所述。
在一些实施方案中，式IV的碱金属盐呈固体形式。例如，在一些实施方案中，式IV的碱金属盐可以是无水形式、水合物、溶剂合物或它们的混合物。在一些实施方案中，式IV的碱金属盐是溶剂合物，例如乙醇类溶剂合物。
可通过用合适的碱如NaOH处理将式III化合物或其盐(例如，基本上纯的式III的酸加成盐)转化为式IV的碱金属盐来制备碱金属盐。在一些实施方案中，呈固体形式的基本上纯的式III化合物或其酸加成盐可用于制备式IV的盐。在一些实施方案中，式IV的碱金属盐可通过以下方法制备，所述方法包括：将基本上纯的式III化合物或其盐添加至碱金属碱水溶液例如NaOH溶液中，以在水中形成碱金属盐；以及将水中的碱金属盐添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可将沉淀的碱金属盐进一步溶解于水中，并且可将水溶液添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可重复在溶剂中溶解和沉淀的过程以达到所需纯度。在一些实施方案中，用于沉淀的溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，乙醇)。在一些实施方案中，可首先将呈固体形式的基本上纯的式III化合物或其酸加成盐(例如，TFA盐)溶解、部分溶解、悬浮或以其它方式混合在合适的溶剂中，所述溶剂可以是例如水、C1-4醇(例如，乙醇)或它们的混合物，并且可将合适的碱(例如，NaOH)以任何顺序同时或依次添加至所述溶剂中，这可将式III的酸加成盐转化为式IV的碱金属盐。
在一些实施方案中，本发明还提供了分离、纯化和/或结晶式IV的碱金属盐以提供基本上纯的式IV的盐的方法。在一些实施方案中，结晶可包括将式IV的碱金属盐溶解于水中，然后将水溶液添加至溶剂中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇等)。在一些实施方案中，溶剂是乙醇。其它分离、纯化和结晶技术是本领域已知的并且可用于本文的方法。通常，沉淀的式IV的碱金属盐基本上是纯的。在一些实施方案中，基本上纯的式IV的盐是水合物或溶剂合物。在一些实施方案中，基本上纯的式IV的盐呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
通常，式III化合物或其盐转化为式IV的碱金属盐可在手性中心没有外消旋化或外消旋化最小化的情况下进行。在一些实施方案中，式IV的碱金属盐以立体异构纯或基本上纯的形式以大规模制备。例如，在一些实施方案中，本公开以超过10克的批量大小(如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多的批量大小等)提供呈立体异构纯或基本上纯形式的式IV的碱金属盐。在一些实施方案中，式IV的碱金属盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV的碱金属盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式IV中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式IV化合物是式IV-L化合物：
Figure BDA0003575147470000611
其中Z、M+和n在本文中定义。在一些实施方案中，式IV-L的碱金属盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式IV-L的碱金属盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-L的碱金属盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式IV-L的碱金属盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式IV中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式IV化合物是式IV-D化合物：
Figure BDA0003575147470000621
其中Z、M+和n在本文中定义。在一些实施方案中，式IV-D的碱金属盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式IV-D的碱金属盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-D的碱金属盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式IV-D的碱金属盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些具体实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)中的Z可以是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
在一些具体实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)中的Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470000622
在一些具体实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)中的Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000631
在一些具体实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)中的n可以是0-20的整数，例如，2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或大于5。在一些实施方案中，M+是Na+。在一些实施方案中，n是4，M+是Na+，并且式IV的碱金属盐是七钠盐。
式IV(例如，式IV-L或IV-D)化合物通常是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。当提及式IV化合物时，术语基本上纯的可指基本上纯的低聚物混合物(例如，n是2-5)，这意味着它基本上不含不为指定的低聚物混合物的杂质。在一些实施方案中，当提及式IV化合物时，术语基本上纯的还可指基本上纯的特定低聚物(例如，n是2、3、4或5)，这意味着它基本上不含不为特定低聚物的杂质。
在一些实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)化合物可以是基本上纯的特定低聚物，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。例如，式IV(例如，式IV-L或IV-D)化合物可以是基本上纯的四谷氨酸盐(n是2)、基本上纯的五谷氨酸盐(n是3)、基本上纯的六谷氨酸盐(n是4)、基本上纯的七谷氨酸盐(n是5)等。在一些具体实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)化合物可以是基本上纯的六谷氨酸盐，其中式IV中的n可以是4。例如，在此类实施方案中，式IV(例如，式IV-L或IV-D)化合物可基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式IV化合物。
具有所列举的纯度特征的式IV化合物可通过控制用于与Z-COOH或其活化形式的酰胺偶联反应的相应式I的聚谷氨酸盐、式II的受保护的聚谷氨酸盐和/或式III化合物或其盐的纯度来制备。示例性程序在实施例部分中描述。
示例性具体化合物
在一些实施方案中，本公开还提供了式III-1的示例性具体化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470000641
其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式。在一些实施方案中，式III-1化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，式III-1化合物可呈药学上可接受的碱加成盐的形式，所述碱加成盐如钠盐，例如单钠、二钠、三钠、四钠、五钠、六钠或七钠盐。在一些实施方案中，本公开还提供了式III-1-L、式III-1-D的示例性具体化合物、它们的混合物或它们的药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470000651
在一些实施方案中，式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐(例如，本文所述)可以是基本上纯的，例如，它可基本上不含(例如，少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-2化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470000661
其中式III-2中的n是不为4的整数，或者n是4且谷氨酸单元中的至少一者不呈L形式。在一些实施方案中，式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-L化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，式III-1-L化合物可呈药学上可接受的碱加成盐的形式，所述碱加成盐如钠盐，例如单钠、二钠、三钠、四钠、五钠、六钠或七钠盐。
在一些实施方案中，式III-1-D化合物或其药学上可接受的盐(例如，本文所述)可以是基本上纯的，例如，它可基本上不含(例如，少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-2化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470000671
其中式III-2中的n是不为4的整数，或者n是4且谷氨酸单元中的至少一者不呈D形式。在一些实施方案中，式III-1-D化合物或其药学上可接受的盐可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式III-1-D化合物或其药学上可接受的盐呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-D化合物或其药学上可接受的盐可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式III-1-D化合物或其药学上可接受的盐的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-D化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，式III-1-D化合物可呈药学上可接受的碱加成盐的形式，所述碱加成盐如钠盐，例如单钠、二钠、三钠、四钠、五钠、六钠或七钠盐。
在一些实施方案中，本公开还提供了式IV-1的七钠盐：
Figure BDA0003575147470000681
其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式。
在一些实施方案中，本公开还提供了式IV-1-L、式IV-1-D或它们的混合物：
Figure BDA0003575147470000682
在一些实施方案中，式IV-1-L化合物可以是基本上纯的，例如，它可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式IV-1-L化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-1-L化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。在一些实施方案中，式IV-1-L化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-1-L的非钠盐。在一些实施方案中，式IV-1-L化合物呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式IV-1-L化合物可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式IV-1-L化合物的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
在一些实施方案中，式IV-1-D化合物可以是基本上纯的，例如，它可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式IV-1-D化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-1-D化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。在一些实施方案中，式IV-1-D化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-1-D的非钠盐。在一些实施方案中，式IV-1-D化合物呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式IV-1-D化合物可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式IV-1-D化合物的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
在一些实施方案中，本公开还提供了化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G、化合物H、化合物I、化合物J、化合物K、化合物L、化合物100和化合物110的具体合成中间体和产物，如实施例部分中所示。在一些实施方案中，化合物A-L和100以及110中的每一者是基本上纯的，例如具有大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。
在一些实施方案中，本公开还提供了化合物III-1-L的合成方法，所述合成方法包括基本上根据下文所示的方案的过程：
Figure BDA0003575147470000711
其中使PEM-酸或其活化形式与式I-1-L化合物偶联以提供式II-1-L的受保护的聚谷氨酸盐，随后可进行脱保护步骤以提供式III-1-L化合物。在一些实施方案中，所述方法还包括将式III-1-L化合物或其盐转化为式IV-1-L的碱金属盐。在一些实施方案中，式I-1-L、II-1-L、III-1-L和IV-1-L的化合物或盐中的每一者可以是基本上纯的，例如，大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。
在一些实施方案中，本公开还提供了由式III-1-L化合物或其盐(例如，基本上纯的式III-1-L化合物或其盐)制备化合物IV-1-L的碱金属盐的合成方法。在一些实施方案中，呈固体形式的式III-1-L化合物，例如基本上纯的式III-1-L化合物或其酸加成盐可用于制备式IV-1-L的盐。在一些实施方案中，式IV-1-L的碱金属盐可通过包括以下的方法制备：将基本上纯的式III-1-L化合物或其盐添加至碱金属碱水溶液例如NaOH溶液中，以在水中形成碱金属盐；以及将水中的碱金属盐添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可将沉淀的碱金属盐进一步溶解于水中，并且可将水溶液添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可重复在溶剂中溶解和沉淀的过程以达到所需纯度。在一些实施方案中，用于沉淀的溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，乙醇)。在一些实施方案中，可首先将呈固体形式的基本上纯的式III-1-L化合物或其酸加成盐(例如，TFA盐)溶解、部分溶解、悬浮或以其它方式混合在合适的溶剂中，所述溶剂可以是例如水、C1-4醇(例如，乙醇)或它们的混合物，并且可将合适的碱(例如，NaOH)以任何顺序同时或依次添加至所述溶剂中，这可将式III-1-L的酸加成盐转化为式IV-1-L的碱金属盐。
在一些实施方案中，本公开还提供了分离、纯化和/或结晶式IV-1-L的碱金属盐以提供基本上纯的式IV-1-L的盐的方法。在一些实施方案中，结晶可包括将式IV-1-L的碱金属盐溶解于水中，然后将水溶液添加至溶剂中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇等)。在一些实施方案中，溶剂是乙醇。其它分离、纯化和结晶技术是本领域已知的并且可用于本文的方法。通常，沉淀的式IV-1-L的碱金属盐是基本上纯的，例如大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-L的盐是水合物或溶剂合物。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-L的盐呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
在一些实施方案中，本公开还提供了化合物III-1-D的合成方法，所述合成方法包括基本上根据下文所示的方案的过程：
Figure BDA0003575147470000731
其中使PEM-酸或其活化形式与式I-1-D化合物偶联以提供式II-1-D的受保护的聚谷氨酸盐，随后可进行脱保护步骤以提供式III-1-D化合物。在一些实施方案中，所述方法还包括将式III-1-D化合物或其盐转化为式IV-1-D的碱金属盐。在一些实施方案中，式I-1-D、II-1-D、III-1-D和IV-1-D的化合物或盐中的每一者可以是基本上纯的，例如，大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。
在一些实施方案中，本公开还提供了由式III-1-D化合物或其盐(例如，基本上纯的式III-1-D化合物或其盐)制备化合物IV-1-D的碱金属盐的合成方法。在一些实施方案中，呈固体形式的式III-1-D化合物，例如基本上纯的式III-1-D化合物或其酸加成盐可用于制备式IV-1-D的盐。在一些实施方案中，式IV-1-D的碱金属盐可通过包括以下的方法制备：将基本上纯的式III-1-D化合物或其盐添加至碱金属碱水溶液例如NaOH溶液中，以在水中形成碱金属盐；以及将水中的碱金属盐添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可将沉淀的碱金属盐进一步溶解于水中，并且可将水溶液添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可重复在溶剂中溶解和沉淀的过程以达到所需纯度。在一些实施方案中，用于沉淀的溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，乙醇)。在一些实施方案中，可首先将呈固体形式的基本上纯的式III-1-D化合物或其酸加成盐(例如，TFA盐)溶解、部分溶解、悬浮或以其它方式混合在合适的溶剂中，所述溶剂可以是例如水、C1-4醇(例如，乙醇)或它们的混合物，并且可将合适的碱(例如，NaOH)以任何顺序同时或依次添加至所述溶剂中，这可将式III-1-D的酸加成盐转化为式IV-1-D的碱金属盐。
在一些实施方案中，本公开还提供了分离、纯化和/或结晶式IV-1-D的碱金属盐以提供基本上纯的式IV-1-D的盐的方法。在一些实施方案中，结晶可包括将式IV-1-D的碱金属盐溶解于水中，然后将水溶液添加至溶剂中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇等)。在一些实施方案中，溶剂是乙醇。其它分离、纯化和结晶技术是本领域已知的并且可用于本文的方法。通常，沉淀的式IV-1-D的碱金属盐是基本上纯的，例如大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-D的盐是水合物或溶剂合物。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-D的盐呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
如本文所述，本文中的基本上纯的化合物可以固体形式存在，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)。在一些实施方案中，呈非固体形式的药物组合物可通过溶解、悬浮或以其它方式混合本文中基本上纯的化合物的固体形式与其它成分来制备。
在一些实施方案中，包含本文中的基本上纯的化合物或盐和一种或多种其它成分的组合物可理解为通过将本文中的基本上纯的化合物或盐与一种或多种其它成分(如水、药学上可接受的赋形剂等)直接或间接混合而获得的组合物。
αPANTIFOL
尽管本文描述的许多实施方案涉及γ-聚谷氨酸化药物，但新的合成方法、药物组合物和治疗方法不限于此。例如，本公开还考虑了α-聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，α-聚谷氨酸化抗叶酸剂可通过使式I-α化合物与Z-COOH或其活化形式反应以在酰胺形成条件下形成α-聚谷氨酸药物(式II-α)或其盐来制备。然后可使式II-α化合物或其盐脱保护以提供式III-α化合物或其药学上可接受的盐。式IV-α化合物通常可由式III-α化合物或其盐与合适的碱金属碱如NaOH制备。式I-α化合物可通过各种方法获得，如通过使式S-1-α与S-2-α反应以提供式S-3-α的α连接的聚谷氨酸盐，然后可使所述α连接的聚谷氨酸盐脱保护以提供式I-α化合物或其盐。合适的酰胺偶联条件和包括Pg1、Pg2、Pg2’、m、n、p、M+和Z的变量可以是本文在描述γ-聚谷氨酸化药物的上下文中描述的那些中的任一者。此外，对于本文中列举了本公开的γ-聚谷氨酸化抗叶酸剂的任何实施方案，还提供了替代实施方案，其中γ-聚谷氨酸化抗叶酸剂用相应的α-聚谷氨酸化抗叶酸剂置换。例如，对于涉及包含基本上纯的式III化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物如脂质体组合物的实施方案，还提供了包含基本上纯的式III-α化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物的替代实施方案。在式III-α的一些实施方案中，n可以是4；Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470000751
所有谷氨酸单元都可呈L形式或者所有谷氨酸单元可呈D形式；和/或式III-α化合物可呈基本上纯的形式(例如，根据HPLC和/或按重量计至少90％)。在一些实施方案中，式III-α化合物呈具有式IV-α的钠盐形式，如当n是4时的七钠盐。
Figure BDA0003575147470000761
Figure BDA0003575147470000771
通常，本文的αPANTIFOL的合成方法可包括式I-α的聚谷氨酸或其盐与具有式Z-COOH的抗叶酸剂或其活化形式的酰胺偶联反应，以形成式II-α的聚谷氨酸化化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000781
其中每个谷氨酸单元可独立地呈D形式或L形式，Pg1在每次出现时独立地是羧酸保护基团，并且n可以是0-20的整数，其中Z是抗叶酸剂的残基。
与本文中γPANTIFOL的合成一样，本文的酰胺偶联反应不需要分离羧酸的活化形式。例如，在一些实施方案中，式I-α的聚谷氨酸或其盐可在酰胺偶联剂(例如，氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU或T3P)存在下与Z-COOH的羧酸反应，所述酰胺偶联剂原位活化羧酸。然而，在一些实施方案中，羧酸的分离的活化形式也可用于本文的合成方法。
式I-α的聚谷氨酸或其盐与Z-COOH的羧酸或其活化形式之间的酰胺偶联的合适条件在本领域中通常是已知的。各种酰胺偶联剂可用于本文的合成方法。非限制性的有用的酰胺偶联剂包括氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU或T3P。通常，当使用碳二亚胺偶联剂如DCC、DIC、EDCI等时，酰胺偶联反应还在苯并三唑如1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)等存在下进行。在一些实施方案中，还添加碱用于酰胺偶联。合适的碱包括无机碱如碳酸盐(例如，Na2CO3、NaHCO3)和有机碱如胺碱(例如，二异丙基乙胺、三乙胺、N-甲基吗啉、吡啶)等。本文中的酰胺偶联反应通常在使得手性中心不发生外消旋化或外消旋化最小化的条件下进行。示例性酰胺偶联反应条件显示在实施例部分中。
在一些实施方案中，本文的合成方法还包括使式II-α或其盐的Pg1基团脱保护，以形成式III-α的游离羧酸化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000791
其中Z和n在本文中定义。
在一些实施方案中，式II-α的每个Pg1基团均可在酸性条件下脱保护。例如，在一些实施方案中，式II-α的每个Pg1基团均是叔丁基。在一些实施方案中，式II-α化合物的脱保护可用酸如三氟乙酸(TFA)、HCl等来实现。
在一些实施方案中，本文的合成方法还包括将式III-α的游离羧酸化合物或其盐转化为式IV-α的碱金属盐：
Figure BDA0003575147470000801
其中M+是碱金属反离子，如Li+、Na+或K+。所述转化通常可通过使式III-α化合物或其盐与合适的碱金属碱例如NaOH等接触来进行。在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐可通过例如本文所述的任何合适的方法进一步分离、纯化和/或结晶。虽然未指定式IV-α中M+的摩尔当量，但不应将式IV-α理解为限于具有一摩尔当量的M+。需要说明的是，式IV-α中的M+通常可平衡式IV-α中羧酸基团的负电荷，式IV-α中每1摩尔带负电荷的羧酸基团有1摩尔M+。例如，在一些实施方案中，n是4，并且M+是Na+，式IV-α的碱金属盐可以是七钠盐，即7Na+以配衡羧酸的负电荷，从而使式IV-α是总体上中性的。在一些实施方案中，碱金属阳离子M+还可与一种或多种其它阳离子(例如，药学上可接受的阳离子)组合以配衡羧酸基团的负电荷，从而使式IV-α是总体上中性的。
本文所述的合成方法具有多种优点。如本文所论述，本文所述的合成方法(1)可容易地适用于大规模合成，例如千克级规模合成；(2)可具有高产率，在合成过程中没有外消旋化或外消旋化最小化，并且用于纯化的程序简单，如通过结晶；并且(3)可提供高纯度中间体和/或产物，包括式I-α、II-α、III-α和IV-α的化合物及其盐。(4)由于使用较少数量的重复步骤，因此可降低对制造设备的要求。这些高纯度中间体和/或产物也是本公开的新型组合物。
式I-α和制备
为了制备本文中的高纯度α聚谷氨酸化抗叶酸剂，合成通常使用基本上纯的式I-α的聚谷氨酸或其盐。例如，对于合成方法，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常可具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。
在一些实施方案中，基本上纯的式I-α的聚谷氨酸盐也呈立体异构纯或基本上纯的形式。在一些实施方案中，式I-α的聚谷氨酸盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-α的聚谷氨酸盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式I-α中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式I-α化合物是式I-L-α化合物：
Figure BDA0003575147470000811
其中Pg1和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-L-α的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-L-α的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-L-α的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-L-α的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式I-α中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式I-α化合物是式I-D-α化合物：
Figure BDA0003575147470000821
其中Pg1和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-D-α的聚谷氨酸盐也可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-D-α的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-D-α的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-D-α的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
各种羧酸保护基团适合用作式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1。羧酸保护基团(或者可替代地在本文中称为羧基保护基团)在本领域中通常是已知的，例如，如“Protective Groups in Organic Synthesis”,第4版P.G.M.Wuts；T.W.Greene,JohnWiley,2007以及其中引用的参考文献中所描述。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1在每次出现时可以是可在酸性条件下除去的羧基保护基团，如叔烷基，诸如叔丁基。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1在每次出现时可以是可在碱性条件下除去的羧基保护基团，如甲基、乙基、苄基等。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1在每次出现时可以是可通过亲核攻击除去的羧基保护基团，如甲基、乙基、苄基。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1在每次出现时可以是可通过光反应除去的羧基保护基团，即保护基团是可光释放的保护基团。可光释放的保护基团是本领域已知的，例如，如Klan等人“Photoremovable Protecting Groupsin Chemistry and Biology:Reaction Mechanisms and Efficacy,”Chem.Rev.113:119-191(2013)中所描述。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1在每次出现时可以是可在氢化条件下除去的羧基保护基团，如苄基。
通常，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的所有Pg1都是相同保护基团。然而，在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的Pg1基团也可以是不同的并且可在不同的条件下脱保护。例如，在一些实施方案中，C-末端羧酸基团(α-羧酸基团或γ-羧酸基团)的Pg1基团可与剩余羧酸基团的Pg1基团不同和/或正交。在此类实施方案中，C-末端羧酸基团(α-羧酸基团或γ-羧酸基团)的Pg1基团可在其它Pg1基团存在下选择性地脱保护，反之亦然，这允许C-末端羧酸基团的进一步官能化。
本文所述的式I-α(例如式I-L-α或I-D-α)的聚谷氨酸盐通常可包含2-20个谷氨酸单元，例如2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或多于5个。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)的聚谷氨酸盐可指特定低聚物，其中n是特定整数。例如，在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)中的n可以是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)的聚谷氨酸盐可以是六谷氨酸盐(n是4)，其可基本上不含其中n不为4的式I-α的聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，式I-α的聚谷氨酸盐还可指具有不同数量的谷氨酸单元的聚谷氨酸盐的混合物。例如，在一些实施方案中，式I-α的聚谷氨酸盐可包含式I-α的聚谷氨酸盐的混合物，其中n是0-18、0-13、2-6、0-8、0-3等。
式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)化合物通常由式I-P-α化合物或其盐的脱保护制备：
Figure BDA0003575147470000841
其中Pg2和Pg2’独立地是氢或氮保护基团，条件是Pg2和Pg2’中的至少一者是氮保护基团；或者Pg2和Pg2’与它们所连接的氮原子一起形成环状受保护的氨基。氮保护基团在本领域中通常是已知的，例如，如“Protective Groups in Organic Synthesis”,第4版P.G.M.Wuts；T.W.Greene,John Wiley,2007以及其中引用的参考文献中所描述。合适的氮保护基团的非限制性实例包括苄氧羰基(Cbz)(可通过氢解除去)、对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)(可通过氢解除去)、叔丁氧基羰基(Boc)(可通过酸如HCl或三氟乙酸或通过加热除去)、9-芴基甲基氧基羰基(FMOC)(可通过碱如哌啶除去)、乙酰基(Ac)(可通过用碱处理除去)、苯甲酰基(Bz)(可通过用碱处理，最通常用氨水或气态氨或甲胺处理除去)、苄基(Bn)(可通过氢解除去)、氨基甲酸酯(可通过酸和温和加热除去)、对甲氧基苄基(PMB)(可通过氢解除去)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)(可通过氢解除去)、对甲氧基苯基(PMP)(可通过硝酸铈(IV)铵除去)、琥珀酰亚胺(一种环状酰亚胺)(可通过用碱处理除去)、甲苯磺酰基(Ts)(可通过浓酸和强还原剂除去)和其它磺酰胺(Nosyl和Nps)(可通过二碘化钐、三丁基氢化锡等除去)。在一些实施方案中，Pg2和Pg2’两者都不是Fmoc。
通常，选择Pg2和Pg2’以使得脱保护可以高效率进行，从而使脱保护的产物，即式I-α化合物或其盐可直接用于与Z-COOH或其活化形式偶联。例如，在一些实施方案中，式I-P-α中的Pg2和Pg2’中的一者是氢，并且Pg2和Pg2’中的另一者是能够通过氢化脱保护的氮保护基团，例如Pg2是苄氧基羰基(Cbz)。在此类实施方案中，可以高效率进行脱保护，并且通常可直接使用脱保护的产物而无需进一步纯化。
在本文所述的任何实施方案中，式I-P-α的Pg1基团和胺保护基团可以是正交的。例如，在一些实施方案中，式I-P-α的胺保护基团可以是在氢化条件下可除去但在酸性条件(例如，TFA)下稳定的保护基团，而Pg1基团在氢化条件下稳定但在酸性条件(例如，TFA)下可除去。或者，在一些实施方案中，式I-P-α的胺保护基团可以是在氢化条件下稳定但在酸性条件(例如，TFA)下可除去的保护基团，而Pg1基团在氢化条件下可除去但在酸性条件(例如，TFA)下稳定。在一些实施方案中，式I-P-α中的Pg2和Pg2’中的一者是氢，并且Pg2和Pg2’中的另一者是能够通过氢化脱保护的氮保护基团，例如Pg2是苄氧基羰基。各种氢化条件都是合适的。通常，这种氢化可在非均相催化剂如Pd/C存在下、在H2气下、在诸如醇类溶剂(例如，甲醇、乙醇等)的溶剂中进行。在一些实施方案中，所有的Pg1基团都是酸可脱保护的保护基团，如叔丁基。
为了制备高纯度的式I-α化合物或其盐，所使用的式I-P-α(例如，式I-P-L-α或I-P-D-α)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常也是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。在一些实施方案中，式I-P-α化合物也可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-P-α化合物也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式I-P-α化合物中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式I-P-α化合物是式I-P-L-α化合物：
Figure BDA0003575147470000861
其中Pg1、Pg2、Pg2’和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-P-L-α化合物可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-P-L-α化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-P-L-α化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-P-L-α化合物也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式I-P-α中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式I-P-α化合物是式I-P-D-α化合物：
Figure BDA0003575147470000862
Figure BDA0003575147470000871
其中Pg1、Pg2、Pg2’和n在本文中定义。在一些实施方案中，式I-P-D-α化合物也可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式I-P-D-α化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式I-P-D-α化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式I-P-D-α化合物也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
式I-P-α(例如，式I-P-L-α或I-P-D-α)化合物通常通过酰胺偶联反应由受保护的谷氨酸或受保护的聚谷氨酸制备。例如，在一些实施方案中，制备式I-P-α化合物的方法包括：
a)使式S-1-α的酸或其活化形式与式S-2-α的受保护的聚谷氨酸或其盐在酰胺形成条件下反应以形成式S-3-α的化合物或其盐：
Figure BDA0003575147470000872
Figure BDA0003575147470000881
其中Pg1、Pg2和Pg2’在本文中定义，其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)，其中m+p＝n，并且n在本文中定义。在一些实施方案中，m是0-19，例如2-6(例如，3或4)。在一些实施方案中，p是0-19。通常，p是0。然而，在一些实施方案中，p不是0。本领域技术人员应理解，当m+p＝n时，式S-3-α与式I-P-α相同。在一些实施方案中，可使式S-3-α脱保护以提供式I-α化合物。可类似地制备式S-2-α化合物。
在一些实施方案中，式S-1-α中的p是0并且式I-P-α的谷氨酸单元一个接一个连续地引入。例如，在一些实施方案中，制备式I-P-α化合物的方法包括：
1)使式S-1-A-α的酸或其活化形式与式S-2-A-α的胺或其盐在酰胺形成条件下反应以提供式S-3-A-α的二聚体化合物：
Figure BDA0003575147470000882
Figure BDA0003575147470000891
2)使所述式S-3-A-α化合物的胺保护基团脱保护以形成S-2-B-α化合物或其盐；
Figure BDA0003575147470000892
3)使所述式S-2-B-α化合物或其盐与式S-1-A-α的酸或其活化形式在酰胺形成条件下反应以使链延长一个谷氨酸单元以提供式S-3-B-α的三聚体化合物：
Figure BDA0003575147470000901
其中n1是1；以及任选地
4)重复使所述胺保护基团脱保护和使所述脱保护的化合物与式S-1-A-α的酸或其活化形式在酰胺形成条件下反应的顺序以使延长链直到达到所需数量的谷氨酸单元以形成式I-P-α化合物：
Figure BDA0003575147470000902
其中Pg1、Pg2和Pg2’在本文中定义，其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)。制备式I-P-α(n是4)化合物的实施例提供于实施例部分中。
在一些实施方案中，本文的合成方法用于制备式I-P-L-α化合物。在此类实施方案中，用于所述方法的相应起始材料和/或中间体通常具有呈L形式的每个谷氨酸单元。例如，在一些实施方案中，式S-1-α、S-2-α、S-3-α、S-1-A-α、S-2-A-α、S-3-A-α、S-2-B-α和S-3-B-α中的每一者中的每个谷氨酸单元可呈L形式。例如，在一些实施方案中，式S-1-α、S-2-α和S-3-α的化合物可分别具有式S-1-L-α、S-2-L-α或S-3-L-α，其中变量在本文中定义：
Figure BDA0003575147470000911
在一些实施方案中，式S-1-L-α、S-2-L-α或S-3-L-α的化合物的化合物可分别不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式S-1-L-α、S-2-L-α或S-3-L-α的化合物也可分别不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式S-1-L-α、S-2-L-α或S-3-L-α的化合物也可分别以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，制备式I-P-α化合物的方法用于制备式I-P-D-α化合物。在此类实施方案中，用于所述方法的相应起始材料和/或中间体具有呈D形式的每个谷氨酸单元。例如，在一些实施方案中，式S-1-α、S-2-α、S-3-α、S-1-A-α、S-2-A-α、S-3-A-α、S-2-B-α和S-3-B-α中的每一者中的每个谷氨酸单元可呈D形式。
在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)化合物也可使用固相化学制备。例如，可将初始谷氨酰基残基键合至王氏树脂(或其它合适的树脂或固体载体)，并且使用F-moc化学经由固相肽合成连续添加另外的谷氨酰基残基。添加最终的谷氨酰基残基后，将抗叶酸剂前体(例如，培美曲塞前体)与肽偶联，并且从所述树脂上裂解分子。在一些实施方案中，式I-α(例如，式I-L-α或I-D-α)化合物不是使用固相化学制备的。
式II-α和制备
式II-α化合物是聚谷氨酸化抗叶酸剂，其中式II-α中的Z是合适的抗叶酸剂的残基。非限制性的合适的抗叶酸剂包括在WO 2018/031967、WO 2018/031968、WO 2018/031979、WO 2018/031980、WO 2019/094648、PCT/US2019/016989和PCT/US2019/017004中描述的那些中的任一者，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。本文描述了一些示例性抗叶酸剂。尽管本公开的实施方案涉及聚谷氨酸化抗叶酸剂，但式I化合物或其盐可与具有羧酸基团的任何其它药物或其活化形式形成酰胺，以形成式II-α化合物或其盐，其中式II-α中的Z代表这种药物的残基。
式I-α化合物或其盐转化为相应的式II-α化合物或其盐通常可在手性中心没有外消旋化或外消旋化最小化的情况下进行。在一些实施方案中，式II-α的聚谷氨酸盐以立体异构纯或基本上纯的形式以大规模制备。例如，在一些实施方案中，本公开以超过10克的批量大小(如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多的批量大小等)提供呈立体异构纯或基本上纯形式的式II-α的聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，式II-α的聚谷氨酸盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式II-α的聚谷氨酸盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式II-α中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式II-α化合物是式II-L-α化合物：
Figure BDA0003575147470000931
其中Pg1、Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式II-L-α的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式II-L-α的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式II-L-α的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式II-L-α的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式II-α中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式II-α化合物是式II-D-α化合物：
Figure BDA0003575147470000941
其中Pg1、Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式II-D-α的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式II-D-α的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式II-D-α的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式II-D-α的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些具体实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)中的Z可以是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
在一些具体实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)中的Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470000951
在一些具体实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)中的Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000952
在一些实施方案中，Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470000961
其中X是离去基团。在一些实施方案中，Z-COOH在与式I-α化合物在酰胺形成条件下反应后可形成中间体，所述中间体可进一步转化为环状结构：
Figure BDA0003575147470000962
(式II-环状-α)，其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)，Pg1和n(例如，n可以是0-20，如2、3或4)在本文中定义，所述环状结构可进一步转化为下式化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470000963
(式III-环状-α)。
式II-α的Pg1和n可以是本文描述为适合于式I-α的聚谷氨酸盐的那些中的任一者。例如，在一些具体实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)中的n可以是0-20的整数，例如2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或大于5。在一些具体实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)中的Pg1可以是酸不稳定的羧酸保护基团，如叔丁基。
式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。在一些实施方案中，式II-α化合物也可呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。例如，在一些实施方案中，式II-α化合物可通过结晶，如使用合适的溶剂系统进行纯化。
在一些实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)化合物可以是基本上纯的特定低聚物，例如基本上纯的四谷氨酸盐(n是2)、基本上纯的五谷氨酸盐(n是3)、基本上纯的六谷氨酸盐(n是4)、基本上纯的七谷氨酸盐(n是5)等。在一些具体实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)化合物可以是基本上纯的六谷氨酸盐，其中式II-α中的n可以是4。例如，在此类实施方案中，式II-α(例如，式II-L-α或II-D-α)化合物可基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式II-α化合物。具有所列举纯度特征的式II-α化合物可通过控制用于与Z-COOH或其活化形式的酰胺偶联反应的相应式I-α的聚谷氨酸盐的纯度来制备。示例性程序在实施例部分中描述。
式III-α和制备
可使式II-α化合物或其盐脱保护以形成式III-α化合物或其盐。在一些实施方案中，式III-α化合物或其盐可以是基本上纯的。在一些实施方案中，式III-α化合物可以是酸加成盐，如TFA盐。式III-α的酸加成盐可以是基本上纯的，其可单独用于药物组合物中。在一些实施方案中，式III-α的酸加成盐也可用作中间体来制备式III-α的高纯度盐，如式IV-α的碱金属盐。当用作中间体时，式III-α的酸加成盐不必是药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，式III-α化合物以药学上可接受的盐(例如，钠盐)的形式存在，其包括一钠、二钠、三钠等，其中钠的数目至多为式III-α中的带负电荷的羧酸基团的数目。例如，当n是4时，式III-α中存在总计7个羧酸基团(不考虑Z基团中任何潜在的羧酸基团)，并且盐可以是单盐、二盐、三盐和至多七盐，如七钠盐。在一些实施方案中，式III-α化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，酸加成盐如HCl盐或碱加成盐如钠盐可用于控制克分子渗透压浓度，如在脂质体包封中维持适当的克分子渗透压浓度。
如本领域技术人员将理解的，当配制、进一步加工或施用式III-α化合物或其药学上可接受的盐时，式III-α化合物的实际电离状态将取决于包含式III-α化合物的介质的pH。以本公开的六谷氨酸化抗叶酸剂(n是4)作为实例，7个羧酸基团在介质pH为约6.5-7.0时可以是部分电离的，并且在较高pH如大于10下可以是完全电离的。当配制为例如本文的脂质体组合物时，式III-α化合物或其药学上可接受的盐可根据配制介质的pH变得部分电离或完全电离，而不管是式III-α化合物的游离形式还是盐形式(例如，式III-α的HCl盐或式IV-α的碱金属盐)用作配制的起始药物物质。本公开的组合物如本文的脂质体组合物不应被理解为限于式III-α化合物的任何特定电离状态。在一些实施方案中，式III-α化合物在组合物中(例如在脂质体组合物中)的电离状态也可通过调节介质pH来控制。在一些实施方案中，组合物中式III-α化合物的电离状态可通过测量组合物的克分子渗透压浓度来监测。
式III-α化合物可含有碱性和酸性官能团两者，并且可在需要时通过使用合适的酸或碱转化为药学上可接受的盐。
酸加成盐的实例包括但不局限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐)、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐以及十一烷酸盐。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括诸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸的此类无机酸，和诸如乙酸、富马酸、马来酸、4-甲基苯磺酸、琥珀酸和柠檬酸的此类有机酸。在一些实施方案中，式III-α化合物的药学上可接受的盐是酸加成盐，如HCl盐。
碱加成盐可通过使含有羧酸的部分与合适的碱(如但不局限于药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨水或有机伯胺、仲胺、叔胺反应来制备。药学上可接受的盐包括但不限于，基于碱金属或碱土金属，如但不限于锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等的阳离子；以及无毒性的季氨和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺等。可用于形成碱加成盐的有机胺的其它实例包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。在一些实施方案中，式III-α化合物的药学上可接受的盐是碱加成盐，诸如如本文所述的碱金属盐、碱土金属盐等。
在一些实施方案中，式II-α的每个Pg1基团是酸不稳定的保护基团，其可在酸性条件下脱保护。在一些实施方案中，式II-α的Pg1基团是相同的酸不稳定的保护基团。例如，在一些实施方案中，每个Pg1基团均可以是叔丁基。在一些实施方案中，式II-α化合物的脱保护可用酸如三氟乙酸(TFA)、HCl等来实现。
式II-α化合物或其盐转化为相应的式III-α化合物或其盐通常可在手性中心没有外消旋化或外消旋化最小化的情况下进行。在一些实施方案中，式III-α的聚谷氨酸盐以立体异构纯或基本上纯的形式以大规模制备。例如，在一些实施方案中，本公开以超过10克的批量大小(如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多的批量大小等)提供呈立体异构纯或基本上纯形式的式III-α的聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，式III-α的聚谷氨酸盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式III-α的聚谷氨酸盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式III-α中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式III-α化合物是式III-L-α化合物：
Figure BDA0003575147470001001
其中Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式III-L-α的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式III-L-α的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式III-L-α的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式III-L-α的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式III-α中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式III-α化合物是式III-D-α化合物：
Figure BDA0003575147470001011
其中Z和n在本文中定义。在一些实施方案中，式III-D-α的聚谷氨酸盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式III-D-α的聚谷氨酸盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式III-D-α的聚谷氨酸盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式III-D-α的聚谷氨酸盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些具体实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)中的Z可以是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
在一些具体实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)中的Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470001012
在一些具体实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)中的Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470001021
在一些具体实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)中的n可以是0-20的整数，例如，2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或大于5。
式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)通常是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。当提及式III-α化合物或其盐时，术语基本上纯的可指基本上纯的低聚物混合物(例如，n是2-5)，这意味着它基本上不含不为指定的低聚物混合物的杂质。在一些实施方案中，当提及式III-α化合物或其盐时，术语基本上纯的还可指基本上纯的特定低聚物(例如，n是2、3、4或5)，这意味着它基本上不含不为特定低聚物的杂质。
在一些实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物可以是基本上纯的特定低聚物，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。例如，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物可以是基本上纯的四谷氨酸盐(n是2)、基本上纯的五谷氨酸盐(n是3)、基本上纯的六谷氨酸盐(n是4)、基本上纯的七谷氨酸盐(n是5)等。在一些具体实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物可以是基本上纯的六谷氨酸盐，其中式III-α中的n是4。例如，在此类实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物可基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式III-α化合物。
具有所列举的纯度特征的式III-α化合物可通过控制用于与Z-COOH或其活化形式的酰胺偶联反应的相应式I-α的聚谷氨酸盐和/或式II-α的受保护的聚谷氨酸化抗叶酸剂的纯度来制备。
在一些实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物也可使用固相化学制备。例如，可将初始谷氨酰基残基键合至王氏树脂(或其它合适的树脂或固体载体)，并且使用F-moc化学经由固相肽合成连续添加另外的谷氨酰基残基。添加最终的谷氨酰基残基后，将抗叶酸剂前体(例如，培美曲塞前体)与肽偶联，并且从所述树脂上裂解分子。在一些实施方案中，式III-α(例如，式III-L-α或III-D-α)化合物不是使用固相化学制备的。
式IV-α和制备
在一些实施方案中，本公开还提供了式IV-α(例如，本文所述)的碱金属盐。不希望受理论束缚，据信使用碱金属盐可以各种方式有益。碱金属盐通常比相应的游离酸形式或酸加成盐或其它盐水溶性更高。因此，在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐可更适合于制备其中良好的水溶性为有益的药物组合物，如制备水溶液制剂，或制备本文所述的脂质体组合物。此外，通过进一步加工步骤，碱金属盐可以比游离酸形式或酸加成盐更高的纯度制备。例如，在一些实施方案中，碱金属盐可由基本上纯的式III-α的酸加成盐制备，并且所得的碱金属盐可诸如通过结晶进一步纯化，以形成碱金属盐的固体形式，所述固体形式通常是基本上纯的。这种方法可极大地增强大规模制造并且可产生可用于制备各种药物组合物的高纯度活性药物成分，例如，如本文所述。
在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐呈固体形式。例如，在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐可以是无水形式、水合物、溶剂合物或它们的混合物。在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐是溶剂合物，例如乙醇类溶剂合物。
可通过用合适的碱如NaOH处理将式III-α化合物或其盐(例如，基本上纯的式III-α的酸加成盐)转化为式IV-α的碱金属盐来制备碱金属盐。在一些实施方案中，呈固体形式的基本上纯的式III-α化合物或其酸加成盐可用于制备式IV-α的盐。在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐可通过以下方法制备，所述方法包括：将基本上纯的式III-α化合物或其盐添加至碱金属碱水溶液例如NaOH溶液中，以在水中形成碱金属盐；以及将水中的碱金属盐添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可将沉淀的碱金属盐进一步溶解于水中，并且可将水溶液添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可重复在溶剂中溶解和沉淀的过程以达到所需纯度。在一些实施方案中，用于沉淀的溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，乙醇)。在一些实施方案中，可首先将呈固体形式的基本上纯的式III-α化合物或其酸加成盐(例如，TFA盐)溶解、部分溶解、悬浮或以其它方式混合在合适的溶剂中，所述溶剂可以是例如水、C1-4醇(例如，乙醇)或它们的混合物，并且可将合适的碱(例如，NaOH)以任何顺序同时或依次添加至所述溶剂中，这可将式III-α的酸加成盐转化为式IV-α的碱金属盐。
在一些实施方案中，本发明还提供了分离、纯化和/或结晶式IV-α的碱金属盐以提供基本上纯的式IV-α的盐的方法。在一些实施方案中，结晶可包括将式IV-α的碱金属盐溶解于水中，然后将水溶液添加至溶剂中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇等)。在一些实施方案中，溶剂是乙醇。其它分离、纯化和结晶技术是本领域已知的并且可用于本文的方法。通常，沉淀的式IV-α的碱金属盐基本上是纯的。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-α的盐是水合物或溶剂合物。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-α的盐呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
通常，式III-α化合物或其盐转化为式IV-α的碱金属盐可在手性中心没有外消旋化或外消旋化最小化的情况下进行。在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐以立体异构纯或基本上纯的形式以大规模制备。例如，在一些实施方案中，本公开以超过10克的批量大小(如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多的批量大小等)提供呈立体异构纯或基本上纯形式的式IV-α的碱金属盐。在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐可主要以一种对映体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或小于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-α的碱金属盐也可主要以一种非对映异构体形式存在，其可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。
在一些实施方案中，式IV-α中的每个谷氨酸单元呈L形式，并且式IV-α化合物是式IV-L-α化合物：
Figure BDA0003575147470001061
其中Z、M+和n在本文中定义。在一些实施方案中，式IV-L-α的碱金属盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式IV-L-α的碱金属盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-L-α的碱金属盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式IV-L-α的碱金属盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些实施方案中，式IV-α中的每个谷氨酸单元呈D形式，并且式IV-α化合物是式IV-D-α化合物：
Figure BDA0003575147470001062
其中Z、M+和n在本文中定义。在一些实施方案中，式IV-D-α的碱金属盐可以是立体异构纯的或基本上纯的。例如，在一些实施方案中，式IV-D-α的碱金属盐可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-D-α的碱金属盐也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。然而，在一些实施方案中，式IV-D-α的碱金属盐也可以外消旋混合物或以立体异构混合物形式存在。
在一些具体实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)中的Z可以是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
在一些具体实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)中的Z可以是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure BDA0003575147470001071
在一些具体实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)中的Z可以是具有下式的残基：
Figure BDA0003575147470001072
Figure BDA0003575147470001081
在一些具体实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)中的n可以是0-20的整数，例如，2-20、2-15、2-10、2-6、2-5或大于5。在一些实施方案中，M+是Na+。在一些实施方案中，n是4，M+是Na+，并且式IV的碱金属盐是七钠盐。
式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)化合物通常是基本上纯的，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。当提及式IV-α化合物时，术语基本上纯的可指基本上纯的低聚物混合物(例如，n是2-5)，这意味着它基本上不含不为指定的低聚物混合物的杂质。在一些实施方案中，当提及式IV-α化合物时，术语基本上纯的还可指基本上纯的特定低聚物(例如，n是2、3、4或5)，这意味着它基本上不含不为特定低聚物的杂质。
在一些实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)化合物可以是基本上纯的特定低聚物，例如，具有根据HPLC和/或按重量计至少90％(例如，至少90％、至少95％、至少98％、至少99％)的纯度。例如，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)化合物可以是基本上纯的四谷氨酸盐(n是2)、基本上纯的五谷氨酸盐(n是3)、基本上纯的六谷氨酸盐(n是4)、基本上纯的七谷氨酸盐(n是5)等。在一些具体实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)化合物可以是基本上纯的六谷氨酸盐，其中式IV-α中的n可以是4。例如，在此类实施方案中，式IV-α(例如，式IV-L-α或IV-D-α)化合物可基本上不含(例如，少于10％、少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其中n不为4的另一种式IV-α化合物。
具有所列举的纯度特征的式IV-α化合物可通过控制用于与Z-COOH或其活化形式的酰胺偶联反应的相应式I-α的聚谷氨酸盐、式II-α的受保护的聚谷氨酸盐和/或式III-α化合物或其盐的纯度来制备。示例性程序在实施例部分中描述。
示例性的具体α-聚谷氨酸化化合物
在一些实施方案中，本公开还提供了式III-1-α的示例性具体化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470001091
其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式。在一些实施方案中，式III-1-α化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，式III-1-α化合物可呈药学上可接受的碱加成盐的形式，所述碱加成盐如钠盐，例如单钠、二钠、三钠、四钠、五钠、六钠或七钠盐。在一些实施方案中，本公开还提供了式III-1-L-α、式III-1-D-α的示例性具体化合物、它们的混合物或它们的药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470001101
在一些实施方案中，式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐(例如，本文所述)可以是基本上纯的，例如，它可基本上不含(例如，少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-2-α化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470001102
其中式III-2-α中的n是不为4的整数，或者n是4且谷氨酸单元中的至少一者不呈L形式。在一些实施方案中，式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-L-α化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，式III-1-L-α化合物可呈药学上可接受的碱加成盐的形式，所述碱加成盐如钠盐，例如单钠、二钠、三钠、四钠、五钠、六钠或七钠盐。
在一些实施方案中，式III-1-D-α化合物或其药学上可接受的盐(例如，本文所述)可以是基本上纯的，例如，它可基本上不含(例如，少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-2-α化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003575147470001111
其中式III-2-α中的n是不为4的整数，或者n是4且谷氨酸单元中的至少一者不呈D形式。在一些实施方案中，式III-1-D-α化合物或其药学上可接受的盐可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式III-1-D-α化合物或其药学上可接受的盐呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-D-α化合物或其药学上可接受的盐可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式III-1-D-α化合物或其药学上可接受的盐的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式III-1-D-α化合物可呈药学上可接受的酸加成盐(如HCl盐)的形式。在一些实施方案中，式III-1-D-α化合物可呈药学上可接受的碱加成盐的形式，所述碱加成盐如钠盐，例如单钠、二钠、三钠、四钠、五钠、六钠或七钠盐。
在一些实施方案中，本公开还提供了式IV-1-α的七钠盐：
Figure BDA0003575147470001121
其中每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式。
在一些实施方案中，本公开还提供了式IV-1-L-α、式IV-1-D-α或它们的混合物：
Figure BDA0003575147470001131
在一些实施方案中，式IV-1-L-α化合物可以是基本上纯的，例如，它可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式IV-1-L-α化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-1-L-α化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。在一些实施方案中，式IV-1-L-α化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-1-L-α的非钠盐。在一些实施方案中，式IV-1-L-α化合物呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式IV-1-L-α化合物可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式IV-1-L-α化合物的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
在一些实施方案中，式IV-1-D-α化合物可以是基本上纯的，例如，它可被表征为具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度，例如根据HPLC至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的纯度。在一些实施方案中，式IV-1-D-α化合物可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)其它对映体形式。在一些实施方案中，式IV-1-D-α化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)任何其它非对映异构体。在一些实施方案中，式IV-1-D-α化合物也可不含或基本上不含(例如，含有少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％)式III-1-D-α的非钠盐。在一些实施方案中，式IV-1-D-α化合物呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，式IV-1-D-α化合物可以是水合物或溶剂合物，其可呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。在一些实施方案中，提供了基本上纯的式IV-1-D-α化合物的药物批料。在一些实施方案中，所述药物批料是至少10克，如约100克或更多、约1kg或更多、约5kg或更多、约10kg或更多等的批量大小。在一些实施方案中，药物批料呈固体形式，如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
在一些实施方案中，本公开还提供了具体的合成中间体，如化合物1、2、3、4、5和6，以及如实施例部分中所示的化合物200、210、220、230的产物。在一些实施方案中，所述中间体和化合物200、210、220和230中的每一者是基本上纯的，例如具有大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。
在一些实施方案中，本公开还提供了化合物III-1-L-α的合成方法，所述合成方法包括基本上根据下文所示的方案的过程：
Figure BDA0003575147470001151
其中PEM-酸或其活化形式与式I-1-L-α化合物偶联以提供式II-1-L-α的受保护的聚谷氨酸盐，随后可进行脱保护步骤以提供式III-1-L-α的化合物。在一些实施方案中，所述方法还包括将式III-1-L-α化合物或其盐转化为式IV-1-L-α的碱金属盐。在一些实施方案中，式I-1-L-α、II-1-L-α、III-1-L-α和IV-1-L-α的化合物或盐中的每一者可以是基本上纯的，例如，大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。
在一些实施方案中，本公开还提供了由式III-1-L-α化合物或其盐(例如，基本上纯的式III-1-L-α化合物或其盐)制备化合物IV-1-L-α的碱金属盐的合成方法。在一些实施方案中，呈固体形式的式III-1-L-α化合物，例如基本上纯的式III-1-L-α化合物或其酸加成盐可用于制备式IV-1-L-α的盐。在一些实施方案中，式IV-1-L-α的碱金属盐可通过以下方法制备，所述方法包括：将基本上纯的式III-1-L-α化合物或其盐添加至碱金属碱水溶液例如NaOH溶液中，以在水中形成碱金属盐；以及将水中的碱金属盐添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可将沉淀的碱金属盐进一步溶解于水中，并且可将水溶液添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可重复在溶剂中溶解和沉淀的过程以达到所需纯度。在一些实施方案中，用于沉淀的溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，乙醇)。在一些实施方案中，可首先将呈固体形式的基本上纯的式III-1-L-α化合物或其酸加成盐(例如，TFA盐)溶解、部分溶解、悬浮或以其它方式混合在合适的溶剂中，所述溶剂可以是例如水、C1-4醇(例如，乙醇)或它们的混合物，并且可将合适的碱(例如，NaOH)以任何顺序同时或依次添加至所述溶剂中，这可将式III-1-L-α的酸加成盐转化为式IV-1-L-α的碱金属盐。
在一些实施方案中，本公开还提供了分离、纯化和/或结晶式IV-1-L-α的碱金属盐以提供基本上纯的式IV-1-L-α的盐的方法。在一些实施方案中，结晶可包括将式IV-1-L-α的碱金属盐溶解于水中，然后将水溶液添加至溶剂中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇等)。在一些实施方案中，溶剂是乙醇。其它分离、纯化和结晶技术是本领域已知的并且可用于本文的方法。通常，沉淀的式IV-1-L-α的碱金属盐是基本上纯的，例如大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-L-α的盐是水合物或溶剂合物。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-L-α的盐呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
在一些实施方案中，本公开还提供了化合物III-1-D-α的合成方法，所述合成方法包括基本上根据下文所示的方案的过程：
Figure BDA0003575147470001171
其中PEM-酸或其活化形式与式I-1-D-α化合物偶联以提供式II-1-D-α的受保护的聚谷氨酸盐，随后可进行脱保护步骤以提供式III-1-D-α的化合物。在一些实施方案中，所述方法还包括将式III-1-D-α化合物或其盐转化为式IV-1-D-α的碱金属盐。在一些实施方案中，式I-1-D-α、II-1-D-α、III-1-D-α和IV-1-D-α的化合物或盐中的每一者可以是基本上纯的，例如，大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。
在一些实施方案中，本公开还提供了由式III-1-D-α化合物或其盐(例如，基本上纯的式III-1-D-α化合物或其盐)制备化合物IV-1-D-α的碱金属盐的合成方法。在一些实施方案中，呈固体形式的式III-1-D-α化合物，例如基本上纯的式III-1-D-α化合物或其酸加成盐可用于制备式IV-1-D-α的盐。在一些实施方案中，式IV-1-D-α的碱金属盐可通过以下方法制备，所述方法包括：将基本上纯的式III-1-D-α化合物或其盐添加至碱金属碱水溶液例如NaOH溶液中，以在水中形成碱金属盐；以及将水中的碱金属盐添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可将沉淀的碱金属盐进一步溶解于水中，并且可将水溶液添加至溶剂(例如，乙醇)中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，可重复在溶剂中溶解和沉淀的过程以达到所需纯度。在一些实施方案中，用于沉淀的溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，乙醇)。在一些实施方案中，可首先将呈固体形式的基本上纯的式III-1-D-α化合物或其酸加成盐(例如，TFA盐)溶解、部分溶解、悬浮或以其它方式混合在合适的溶剂中，所述溶剂可以是例如水、C1-4醇(例如，乙醇)或它们的混合物，并且可将合适的碱(例如，NaOH)以任何顺序同时或依次添加至所述溶剂中，这可将式III-1-D-α的酸加成盐转化为式IV-1-D-α的碱金属盐。
在一些实施方案中，本公开还提供了分离、纯化和/或结晶式IV-1-D-α的碱金属盐以提供基本上纯的式IV-1-D-α的盐的方法。在一些实施方案中，结晶可包括将式IV-1-D-α的碱金属盐溶解于水中，然后将水溶液添加至溶剂中以沉淀所述碱金属盐。在一些实施方案中，溶剂是醇类溶剂，如C1-4醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇等)。在一些实施方案中，溶剂是乙醇。其它分离、纯化和结晶技术是本领域已知的并且可用于本文的方法。通常，沉淀的式IV-1-D-α的碱金属盐是基本上纯的，例如大于90％(例如，大于95％、大于98％或大于99％)的HPLC纯度和/或按重量计的纯度。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-D-α的盐是水合物或溶剂合物。在一些实施方案中，基本上纯的式IV-1-D-α的盐呈结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
如本文所述，本文中的基本上纯的化合物可以固体形式存在，如本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)。在一些实施方案中，呈非固体形式的药物组合物可通过溶解、悬浮或以其它方式混合本文中基本上纯的化合物的固体形式与其它成分来制备。
组合物和使用方法
如WO 2018/031967、WO 2018/031968、WO 2018/031979、W O 2018/031980、WO2019/094648、PCT/US2019/016989和PCT/US 2019/017004(其各自的内容以引用的方式整体并入本文)中详细解释的，PANTIFOL复合物和组合物可用于治疗或预防各种疾病，包括但不限于过度增生性疾病(如癌症)、免疫系统病症(包括炎症和自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎)和感染性疾病(如HIV、疟疾和血吸虫病)。
因此，在各种实施方案中，本公开还提供了涉及本公开的一种或多种PANTIFOL如αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合的复合物、药物组合物(例如，脂质体组合物)和治疗方法。
聚谷氨酸化抗叶酸剂复合物
在一些实施方案中，本公开的PANTIFOL如αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合也可与包含治疗剂(例如，细胞毒性化合物如基于铂的化合物)的其它组合物形成复合物，如PCT/US2019/017004中所述。因此，在一些实施方案中，本公开还提供了包含本公开(例如，本文所述)的PANTIFOL(例如，αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和治疗剂或其盐或酸的PANTIFOL/复合物。在一些实施方案中，所述治疗剂是细胞毒性化合物，如化学治疗剂。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/复合物含有基于铂的药物，如基于铂的化学治疗剂(例如，顺铂、卡铂和奥沙利铂)。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/复合物含有基于紫杉烷的化学治疗剂(例如，卡铂和顺铂)。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/复合物含有环糊精。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/治疗剂的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中的PANTIFOL/治疗剂的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述PANTIFOL/治疗剂复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/治疗剂的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/治疗剂的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述PANTIFOL/治疗剂复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在一个替代实施方案中，所述PANTIFOL复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合和环糊精。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL(例如，PANTIFOL盐)/环糊精的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比是：1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比在1:1-20、1:1-10或1:2-8的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/环糊精的摩尔比是：1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述PANTIFOL/环糊精复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在一些实施方案中，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含PANTIFOL/基于铂的化学治疗剂复合物。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的PANTIFOL，如本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，基于铂的化学治疗剂选自：顺铂、卡铂和奥沙利铂，或其盐或酸。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/基于铂的化学治疗剂复合物包含顺铂、卡铂、奥沙利铂的类似物，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比是11:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的化学治疗剂的摩尔比在1:1-20、1:1-10或1:2-8的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL//基于铂的剂复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/基于铂的化学治疗剂复合物包含顺铂、卡铂、奥沙利铂的类似物，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的类似物的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的类似物的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的类似物的摩尔比是11:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的类似物的摩尔比是11:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的剂的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL//基于铂的类似物复合物被包封在脂质体中。
在其它实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物含有PANTIFOL和顺铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL//顺铂(或顺铂盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物含有PANTIFOL和卡铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡铂的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/卡铂(或卡铂盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物含有PANTIFOL和奥沙利铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL和选自以下的基于铂的化学治疗剂(“铂”)：奈达铂、庚铂、洛铂、赛特铂(stratoplatin)、卡铂(paraplatin)、顺铂(platinol)、环铂、右奥马铂、螺铂、吡铂、三铂、四铂、异丙铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM216、NK121、CI973、DWA 2114R、NDDP和dedaplatin，或其盐或酸。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/基于铂的化学治疗剂复合物包含奈达铂、庚铂、洛铂、赛特铂、卡铂、顺铂、环铂、右奥马铂、螺铂、吡铂、三铂、四铂、异丙铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM216、NK121、CI973、DWA 2114R、NDDP或dedaplatin的类似物，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/基于铂的化学治疗剂(“铂”)(或基于铂的化学治疗剂盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/铂(或铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/铂(或铂盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/铂(或铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/铂(或铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/铂(或铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/铂(或铂盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/铂(或其盐或酸或类似物)复合物被包封在脂质体中。
在一些实施方案中，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含PANTIFOL/基于紫杉烷的化学治疗剂(紫杉烷)复合物。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述基于紫杉烷的化学治疗剂选自：紫杉醇(PTX)、多西他赛(DTX)、拉洛他赛(LTX)和卡巴他赛(CTX)，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/紫杉烷(或紫杉烷盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL和紫杉醇(PTX)或其盐或酸。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)复合物包含紫杉醇(PTX)的类似物或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL和多西他赛(DTX)或其盐或酸。在其它实施方案中，所述PANTIFOL/多西他赛复合物包含多西他赛(DTX)的类似物或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/多西他赛(或多西他赛盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL和拉洛他赛(LTX)或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL和卡巴他赛(CTX)或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是：1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL和另一种抗代谢药或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。抗代谢药为一种化学物质，其结构类似于正常生物化学反应所需的代谢物，但与代谢物的不同之处足以干扰细胞的一种或多种正常功能(诸如细胞分裂)。在一些实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL(例如，αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和抗叶酸剂(ANTIFOL)或其盐或酸。在一些实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含PANTIFOL(例如，αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和选自以下的抗代谢药：吉西他滨、氟尿嘧啶、卡培他滨、抗叶酸剂(例如，抗叶酸剂、雷替曲塞)、替加氟、阿糖胞苷、硫鸟嘌呤、5-氮杂胞苷、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、6-硫鸟嘌呤、喷司他丁、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨，以及这些中的任一者的药学上可接受的盐或酸、酸或衍生物。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比在1-20:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比在1-10:1的范围内，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比在2-8:1的范围内，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比是1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)的摩尔比是1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/抗代谢药(或抗代谢药盐或酸，或前药)复合物被包封在脂质体中。
在另外的实施方案中，本公开提供了PANTIFOL(例如，本文公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和环糊精的复合物。环糊精(CD)是已显示通过形成复合物来改善许多药物的物理化学性质的多组环状寡糖。CD是由若干通过α-(1,4)键连接的D-葡萄糖单元组成的环状寡糖。这种环状构型提供了疏水性内部空腔，并且使CD呈截头圆锥形。许多羟基位于环的边缘，这使得CD亲脂性且可溶于水。结果，CD能够与各种各样的疏水剂形成复合物，并且因此改变这些络合剂的物理-化学性质。在一些实施方案中，所述复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
除非本文另有说明，否则术语“环糊精”或“CD”通常是指含有可变数目的(α-1,4)-连接的D-吡喃葡萄糖苷单元的母体或衍生的环状寡糖，其能够与抗叶酸剂-PG形成复合物。每个环糊精吡喃葡萄糖苷亚基在2位和3位具有仲羟基，并且在6位具有伯羟基。术语“母体”、“未衍生化”或“惰性”环糊精是指含有具有基本式C6H12O6的D-吡喃葡萄糖苷单元和葡萄糖结构而没有任何另外的化学取代的环糊精(例如，由6个D-吡喃葡萄糖苷单元组成的α-环糊精，由7个D-吡喃葡萄糖苷单元组成的β-环糊精，和由8个D-吡喃葡萄糖苷单元组成的γ-环糊精)。母体环糊精的物理和化学性质可通过将羟基与其它官能团衍生化来进行修饰。位于环糊精内相内的任何物质都被称为与环糊精“复合”，或者与环糊精形成了复合物(包合复合物)。
如本文所用，对PANTIFOL/环糊精复合物的环糊精组分没有特别限制，只要环糊精可与PANTIFOL形成复合物即可。在特定实施方案中，环糊精已经被衍生化以携带可电离的(例如，弱碱性和/或弱酸性)官能团，以促进与PANTIFOL的复合物形成和/或脂质体包封。
已知用可电离的化学基团修饰环糊精的羟基(如背对环糊精内相的那些羟基)可促进环糊精和与环糊精复合的治疗剂的负载。在一些实施方案中，所述PANTIFOL/环糊精复合物的环糊精具有至少2个、3个、4个、5个、6个、6个、7个、8个、9个或10个被可电离的化学基团取代的羟基。术语“带电荷的环糊精”是指其一个或多个羟基被带电荷的部分取代的环糊精。这样的部分本身可以是带电荷的基团，或者它可包含被一个或多个带电荷的部分取代的有机部分(例如，C1-C6烷基或C1-C6烷基醚部分)。
在一些实施方案中，CD衍生物的“可电离的”或“带电荷的”部分是弱可电离的。弱可电离部分是弱碱性或弱酸性的那些部分。根据CH3-W，弱碱性官能团(W)的pKa介于约6.0-9.0、6.5-8.5、7.0-8.0、7.5-8.0之间，以及其间的任何范围(包括端点)。同样，根据CH3-X，弱酸性官能团(X)的对数解离常数(pKa)介于约3.0-7.0、4.0-6.5、4.5-6.5、5.0-6.0、5.0-5.5之间，以及其间的任何范围(包括端点)。代表性的阴离子部分包括但不限于羧酸根、羧甲基、琥珀酰基、磺酰基、磷酸根、磺烷基醚、硫酸根碳酸根、硫代碳酸根、二硫代碳酸根、磷酸根、膦酸根、磺酸根、硝酸根和硼酸根基团。代表性的阳离子部分包括但不限于氨基、胍和季铵基团。
在另一个实施方案中，衍生化的环糊精是“聚阴离子”或“聚阳离子”。聚阴离子是具有多于一个带负电基团、从而导致多于两个单元的净负离子电荷的衍生化的环糊精。聚阳离子是具有多于一个带正电的基团、从而导致多于两个单元的净正离子电荷的衍生化的环糊精。
在另一个实施方案中，衍生化的环糊精是“可带电荷的两亲物”。“可带电荷的”是指两亲物的pK在pH 4至pH 8或8.5的范围内。因此，可带电荷的两亲物可以是弱酸或弱碱。本文中的“两性”是指具有阴离子和阳离子特性的可电离基团的衍生化的环糊精，其中：(a)阳离子和阴离子两亲物中的至少一者且任选地两者是可带电荷的，具有至少一个pK介于4与8至8.5之间的带电基团；(b)阳离子电荷在pH 4时占主导，并且(c)阴离子电荷在pH 8至8.5时占主导。
在一些实施方案中，无论是聚离子、两亲性还是其它形式，整体上“可电离的”或“带电的”衍生化的环糊精都是弱可电离的(即，pKai介于约4.0-8.5、4.5-8.0、5.0-7.5、5.5-7.0、6.0-6.5以及其间的任何范围(包括端点))。
环糊精的任一个、一些或所有α-D-吡喃葡萄糖苷单元中的任一个、一些或全部羟基可被修饰成如本文所述的可电离的化学基团。由于每个环糊精羟基的化学反应性不同，因此与修饰部分的反应可产生位置异构体和光学异构体的无定形混合物。或者，某些化学方法可使预先修饰的α-D-吡喃葡萄糖苷单元反应形成均匀的产物。
混合物中环糊精衍生物发生的聚集取代用称为取代度的术语来描述。例如，取代度为七的6-亚乙基二氨基-β-环糊精将由6-亚乙基二氨基-β-环糊精的异构体分布组成，其中每个6-亚乙基二氨基-β-环糊精分子的亚乙基二氨基的平均数量是七。环糊精衍生物混合物的取代度可使用质谱法或核磁共振光谱法常规地确定。
在一个实施方案中，背离环糊精内部的至少一个羟基部分被可电离的化学基团取代。例如，至少一个α-D-吡喃葡萄糖苷单元的C2、C3、C6、C2和C3、C2和C6、C3和C6以及全部三个C2-C3-C6羟基被可电离的化学基团取代。羟基的任何这种组合可类似地与经修饰的环糊精中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、多达全部的α-D-吡喃葡萄糖苷单元中组合，以及与本文所述的任何取代度组合。一种这样的衍生物是磺烷基醚环糊精(SAE-CD)。与母体环糊精相比，β环糊精的磺丁基醚衍生物(SBE-β-CD)已证明具有显著改善的水溶性。
在所公开的脂质体组合物中可与治疗剂复合的另外环糊精衍生物包括舒更葡糖(sugammadex)或Org-25969，其中γ-CD上的6-羟基已被羧基硫代乙酸酯醚键联和羟基丁烯基-β-CD取代。环糊精的替代形式包括：2,6-二-O-甲基-β-CD(DIMEB)、2-羟丙基-3-环糊精(HP-β-CD)、无规甲基化-β-环-糊精(RAMEB)、磺丁基醚β-环糊精(SBE-β-CD)和磺丁基醚-γ-环糊精(SBEγCD)、磺丁基化β-环糊精钠盐、(2-羟丙基)-α-环糊精、(2-羟丙基)-β-环糊精、(2-羟丙基)-γ-环糊精、2,6-二-O-甲基)-β-环糊精(DIMEB-50七)、2,3,6-三-O-甲基)-β-环糊精(TRIMEB七)、甲基-β-环糊精、八(6-脱氧-6-碘)-γ-环糊精和八(6-脱氧-6-溴)-γ-环糊精。
在一些实施方案中，所述一种或多种环糊精在水中具有高溶解度，以便将更大数量的环糊精截留在脂质体内相中。在一些实施方案中，环糊精的水溶性是至少10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL或更高。在一些实施方案中，所述一种或多种环糊精的水溶性在10-150mg/mL、20-100mg/mL、20-75mg/mL的范围内，并且以及其间的任何范围(包括端点)。
在一些实施方案中，环糊精与PANTIFOL和/或与环糊精复合的其它治疗剂之间的大缔合常数是优选的，并且可通过基于治疗剂的大小选择环糊精中的葡萄糖单元的数目来获得(参见例如，Albers等人,Crit.Rev.Therap.Drug Carrier Syst.12:311-337(1995)；Stella等人,Toxicol.Pathol.36:30-42(2008)。当缔合常数取决于pH时，可选择环糊精，以使得在脂质体内相的pH下缔合常数变大。结果，可进一步提高在环糊精存在下治疗剂的溶解度(标称溶解度)。在一些实施方案中，环糊精与治疗剂的缔合常数是100、200、300、400、500、600、700、800、900、1,000或更高。在一些实施方案中，环糊精与治疗剂的缔合常数在100-1、200、200-1,000、300-750的范围内，以及其间的任何范围。
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物的环糊精未衍生化。
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物的环糊精被衍生化。在其它实施方案中，所述复合物的环糊精衍生物具有式CD-1的结构：
Figure BDA0003575147470001371
其中：n是4、5或6；
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地是-H、直链或支链C1-C8-亚烷基或任选取代的直链或支链C1-C6基团，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的至少一者是直链或支链C1-C8-亚烷基(例如，C1-C8-(亚烷基)-SO3 -基团)；
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物的环糊精衍生物具有式CD-2的结构：
Figure BDA0003575147470001381
其中：n是4、5或6；
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地是-O-或-O-(C2-C6亚烷基)-SO3-基团；其中R1和R2中的至少一者独立地是-O-(C2-C6亚烷基)-SO3-基团；并且S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8和S9各自独立地是药学上可接受的阳离子。在其它实施方案中，药学上可接受的阳离子选自：碱金属，如Li+、Na+或K+；碱土金属，如Ca+2或Mg+2，以及铵离子和胺阳离子，如(C1-C6)-烷基胺、哌啶、吡嗪、(C1-C6)-烷醇胺和(C4-C8)-环烷醇胺的阳离子。在一些实施方案中，R1和R2中的至少一者独立地是-O-(C2-C6亚烷基)-SO3-基团，其为-O-(CH2)mSO3-基团，其中m是2至6，优选2至4(例如，-O-CH2CH2CH2SO3-或-O-CH2CH2CH2CH2SO3-)；并且S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8和S9各自独立地是H或药学上的阳离子，所述阳离子包括例如，碱金属(例如，Li+、Na+、K+)、碱土金属(例如，Ca+2、Mg+2)、铵离子和胺阳离子，如(C1-C6)-烷基胺、哌啶、吡嗪、(C1-C6)-烷醇-胺和(C4-C8)-环烷醇胺的阳离子：
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物的环糊精衍生物是美国专利号6,133,248、5,874,418、6,046,177、5,376,645、5,134,127、7,034,013、6,869,939；和国际申请公布号WO 02005/117911中公开的环糊精，所述专利各自的内容以引用的方式以其优先权并入本文。
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物的环糊精衍生物是磺烷基醚环糊精。在一些实施方案中，复合物的环糊精衍生物是磺丁基醚-3-环糊精，如
Figure BDA0003575147470001382
(CyDex Pharma.Inc.,Lenexa,Kansas)。用于制备磺丁基醚-3-环糊精和其它磺烷基醚环糊精的方法是本领域已知的。
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物中的环糊精衍生物是式CD-3的化合物：
Figure BDA0003575147470001391
其中R等于：
(a)(H)21-X或(-(CH2)4-SO3Na)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0；
(b)(H)21-X或(-(CH2CH(OH)CH3)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0；
(c)(H)21-X或(磺烷基醚)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0；或
(d)(H)21-X或(-(CH2)4-SO3Na)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0。
在另外的实施方案中，所述PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
PANTIFOL递送媒介物
在替代实施方案中，本公开提供了PANTIFOL递送系统及其在体外或体内将PANTIFOL(例如，αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)的有效负载递送至一个或多个细胞的用途。在一些实施方案中，本公开的PANTIFOL(例如，αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)与递送媒介物复合或并入递送媒介物中。此类递送媒介物是本领域中已知的，并且包括但不限于脂质体、脂质球、聚合物、肽、蛋白质，抗体(例如，ADC，如抗体-PANTIFOL缀合物)、细胞组分、环状寡糖(例如，环糊精)、纳米颗粒(例如，脂质纳米颗粒、生物可降解的纳米颗粒和核-壳纳米颗粒)、脂蛋白颗粒以及它们的组合。在特定实施方案中，递送媒介物是脂质体。在其它特定的实施方案中，递送媒介物是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，PANTIFOL递送系统包含本公开的PANTIFOL(例如，αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)。不希望受理论束缚，聚谷氨酸化抗叶酸剂在各种生理条件下可变得高度带负电荷，这使得它们在没有递送媒介物(例如本文所述的脂质体)的情况下对细胞的渗透性降低。本发明人还在Caco-2渗透性测定中测试了代表性PANTIFOL(没有任何递送媒介物)，并发现所测试的PANTIFOL基本上是不可渗透的。
脂质体
在一些实施方案中，本公开提供了脂质体组合物，所述脂质体组合物包含包封(即，填充有)PANTIFOL，如αPANTIFOL和/或γPANTIFOL的脂质体，在本文中可替代地称为Lp-PANTIFOL。在一些实施方案中，本公开提供了脂质体组合物，所述脂质体组合物包含包封(即，填充有)γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的γPANTIFOL)的脂质体，在本文中可替代地称为Lp-γPANTIFOL。在一些实施方案中，本公开提供了脂质体组合物，所述脂质体组合物包含包封(即，填充有)α聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的αPANTIFOL)的脂质体，在本文中可替代地称为Lp-αPANTIFOL。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含阴离子性或中性的脂质体。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含阳离子性的脂质体。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL组合物是非聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL组合物是非靶向的(NTLp-PANTIFOL)。在其它实施方案中，所述Lp-PANTIFOL组合物包含靶向部分(TLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在20nm至500nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在20nm至400nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在20nm至200nm范围内或其间的任何范围内的直径。在其它实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在20nm至150nm范围内或其间的任何范围内的直径。在其它实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在80nm至120nm范围内或其间的任何范围内的直径。在另外的实施方案中，在制备脂质体的过程中，将30％-70％、30％-60％或30％-50％w/w或其间的任何范围的聚谷氨酸化抗叶酸剂包封(包埋)在Lp-PANTIFOL中。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL组合物包含至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％(w/w)的聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，在制备脂质体的过程中，将至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％(w/w)的聚谷氨酸化抗叶酸剂包封在Lp-PANTIFOL中。
在一些实施方案中，所提供的脂质体还包含置于其外部的免疫刺激剂、可检测标记物或两者。免疫刺激剂或可检测标记物可离子键合或共价键合至脂质体的外部，包括例如，任选地键合至脂质体的空间稳定剂组分。
术语“免疫刺激剂(immunostimulatory agent)”，也称为“免疫刺激剂(immunostimulant)”和“免疫刺激剂(immunostimulator)”是指通过诱导免疫系统的任何组分的活化或增加其活性来刺激免疫(包括预先存在的免疫应答)的物质。这些免疫刺激剂可包括半抗原、佐剂、蛋白质免疫刺激剂、核酸免疫刺激剂和化学免疫刺激剂中的一者或多者。许多佐剂含有旨在刺激免疫应答的物质，如脂质A、百日咳博德特氏菌或结核分枝杆菌来源的蛋白质。某些佐剂可商购获得，例如，弗氏不完全佐剂和完全佐剂(DifcoLaboratories,Detroit,Mich.)；默克佐剂65(Merck and Company,Inc.,Rahway,N.J.)；AS-2(SmithKline Beecham,Philadelphia,Pa.)；铝盐，如氢氧化铝凝胶(明矾)或磷酸铝；钙、铁或锌的盐；酰化酪氨酸的不溶性悬浮液；酰化糖；阳离子或阴离子衍生的多糖；聚磷腈；生物可降解的微球；单磷酰脂质A和quil A；IFN-α、IFN-γ、FLT3-配体；和免疫刺激性抗体(例如，抗CTLA-4、抗CD28、抗CD3)。细胞因子，如GM-CSF、白介素-2、-7、-12和-15以及其它类似的生长因子也可用作佐剂。在一个优选的实施方案中，免疫刺激剂可以是选自以下中的至少一者：荧光素、DNP、β葡聚糖、β-1,3-葡聚糖、β-1,6-葡聚糖。在另一个优选的实施方案中，免疫刺激剂是Toll样受体(TLR)调节剂。在其它实施方案中，Toll样受体(TLR)调节剂是以下中的一者或多者：OXPAC、PGPC、eritoran脂质(例如，E5564)和消退素。
在一些实施方案中，所提供的脂质体还包含增加脂质体摄取至包括细胞溶质的目标细胞区室中的剂。在一些实施方案中，所述剂为脂质体内容物提供绕过溶酶体(例如，氯喹)的能力。在一些实施方案中，所述剂通过线粒体(例如，鞘磷脂和线粒体的组分)改善脂质体内容物的更新。
可检测标记物可例如至少包括可通过本领域已知的任何合适方法(例如磁共振成像(MRI)、光学成像、荧光/发光成像或核成像技术)检测的放射性同位素、荧光化合物、生物发光化合物、化学发光化合物、金属螯合剂、酶、染料、油墨、磁性化合物、生物催化剂或色素。
在一些实施方案中，通过将免疫刺激剂和/或可检测标记物与脂质体共孵育而将其连接至外部。例如，免疫刺激剂和/或可检测标记物可通过疏水相互作用或通过离子键如抗生物素蛋白/生物素键或金属螯合键(例如，Ni-NTA)与脂质体膜缔合。或者，免疫刺激剂或可检测标记物可共价键合至脂质体的外部，例如通过共价键合至脂质体组分或作为PEG的空间稳定剂。
一种示例性的试剂是异硫氰酸荧光素(FITC)，基于我们的实验，异硫氰酸荧光素出人意料地充当免疫刺激剂和可检测标记物两者。
在一些实施方案中，所述脂质体还包含增加脂质体摄取至包括细胞溶质的目标细胞区室中的剂。
在一些实施方案中，所述脂质体包含线粒体靶向剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含三苯基鏻(TPP)。用TPP对脂质体进行表面功能化的方法和机制是本领域已知的(例如，经由peg间隔基将TPP连接至脂质锚上并用硬脂基(硬脂基三苯基鏻(STPP)修饰TPP)。在一些实施方案中，所述脂质体包含高密度八-精氨酸酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含鞘磷脂和/或鞘磷脂代谢产物。用于配制本发明脂质体的鞘磷脂代谢物可包括例如神经酰胺、鞘氨醇或1-磷酸鞘氨醇。在一些实施方案中，所述脂质体包含若丹明123。在一些实施方案中，所述脂质体包含线粒体穿透肽。在一些实施方案中，所述脂质体包含选自以下的线粒体穿透剂：线粒体融合蛋白肽、线粒体靶向信号肽和触角足螺旋III同源结构域细胞穿透肽(ANT)(例如，包含RQ IKIWFQNRRMKWKKRKKRRQRRR,RKKRRXRRRGC)，或其线粒体穿透片段。在一些实施方案中，所述脂质体包含选自以下的线粒体穿透多核苷酸序列：RQIKIWFQNRRMKWKKRK KRRQRRR(SEQ ID NO:1),RKKRRXR RRGC其中X是任何天然或非天然氨基酸(SE Q ID NO:2)、CCGCCAAGAAGCG(SEQ ID NO:3)、GCGTGCACA CGCGCGTAGACTTCCCCCGCAAGTCACTCGTTAGCCCGCCAAG AAGCGACCCCTCCGGGGCGAGCTGAGCGGCGTGGCGCGGGGG CGTCAT(SEQID NO:4)、ACGTGCATACGCACGTAGACATTCC CCGCTTCCCACTCCAAAGTCCGCCAAGAAGCGTATCCCGCTGA GCGGCGTGGCGCGGGGGCGTCATCCGTCAGCTC(SEQ ID NO:5)或ACTTCCCCCGCAAGTCACTCGTTAGCCCGCCAAGAAGCGAC CCCTCCGGGGCGAGCTG(SEQ ID NO:6))，或其线粒体穿透片段。
在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中的脂质体包含选自下组的线粒体穿透剂：富含胍的类肽、四胍、三胍、双、单胍、富含胍的聚氨基甲酸酯、β-寡精氨酸、富含脯氨酸的树状聚合物以及鏻盐(例如，甲基三苯基-鏻和/或四苯基鏻)。
在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中的脂质体包含鞘磷脂和/或硬脂基-八-精氨酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含鞘磷脂和/或硬脂基-八-精氨酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含DOPE、鞘磷脂、硬脂基-八-精氨酸鞘磷脂和硬脂基-八-精氨酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含摩尔比为9:2:1的DOPE、鞘磷脂、硬脂基-八-精氨酸鞘磷脂和硬脂基-八-精氨酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含
Figure BDA0003575147470001441
系统或其变体。
在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中的脂质体包含诸如细胞穿透剂的剂，所述剂促进脂质体跨细胞膜的递送并为脂质体提供绕过内吞途径和溶酶体的恶劣环境的能力。细胞穿透剂是本领域中已知的，并且可常规地用于并且适合于制造和使用所提供的脂质体组合物。在一些实施方案中，细胞穿透/溶酶体旁路剂是氯喹。在一些实施方案中，细胞穿透剂是细胞穿透肽。在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中的脂质体包含选自下组的细胞穿透剂：RKKRRQRRR(SEQ ID NO:7)、GRKKRRQRRRTPQ(SEQ ID NO:8)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO:9)、AAVALLPAVLLALLA(SEQ ID NO:10)、MGLGLHLLVLAAALQ(SEQ IDNO:11)、GALFLGFLGAAGSTM(SEQ ID NO:12)、AGYLLGKINLKA LAALAKKIL(SEQ ID NO:13)、RVIRVWFQNKRCKDKK(SEQ ID NO:14)、RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO:15)、GLFEAIAGFIENGWEGMIDG(SEQ ID NO:16)、GWTLNSAGYLLGKIN(SEQ ID NO:17)、RSQSRSRYYRQRQRS(SEQ ID NO:18)、LAIPEQEY(SEQ ID NO:19)、LGIAEQEY(SEQ ID NO:20)、LGIPAQEY(SEQ ID NO:21)、LGIPEAEY(SEQ ID NO:22)、LGIPEQAY(SEQ ID NO:23)、LGIAEAEY(SEQ ID NO:24)、LGIPEAAY(SEQ ID NO:25)、LGIAEQAY(SEQ ID NO:26)、LGIAEAAY(SEQ IDNO:27)、LLIILRRRIRKQAHAHSK(SEQ ID NO:28)、LKALAALAKKIL(SEQ ID NO:29)、KLALKLALKALKAALKLA(SEQ ID NO:30)、KETWWETWWTEWSQPKKKRKV(SEQ ID NO:31)、DHQLNPAF(SEQ ID NO:32)、DPKGDPKG(SEQ ID NO:33)、VTVTVTVTVTGKGDPKPD(SEQ ID NO:34)、RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO:35)、GRKKRRQRRRPPQ(SEQ ID NO:36)、GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL(SEQ ID NO:37)、GRKKRRQRRR(SEQ ID NO:38)、RRRRRRR(SEQ ID NO:39)、RRRRRRRR(SEQ ID NO:40)、RRRRRRRRR(SEQ ID NO:41)、RRRRRRRR RR(SEQID NO:42)、RRRRRRRRRRR(SEQ ID NO:43)和YTIWMPENP RPGTPCDIFTNSRGKRASNGGGG(R)n，其中n＝2-15个呈L和/或D形式的R(SEQ ID NO:44)，或其细胞穿透片段。
如上所述，脂质体可包含空间稳定剂，所述空间稳定剂延长其循环寿命。对于掺入空间稳定剂的那些实施方案，所述空间稳定剂可以是选自以下的至少一个成员：聚乙二醇(PEG)；聚L-赖氨酸(PLL)；单唾液酸神经节苷脂(GM1)；聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)；聚(丙烯酰胺)(PAA)；聚(2-甲基-2-噁唑啉)；聚(2-乙基-2-噁唑啉)；磷脂酰聚甘油；聚[N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺]；两亲性聚-N-乙烯基吡咯烷酮；基于L-氨基酸的聚合物；低聚甘油；含聚乙二醇和聚环氧丙烷的共聚物；泊洛沙姆188；以及聚乙烯醇。在一些实施方案中，空间稳定剂或空间稳定剂的群体是PEG。在一个实施方案中，空间稳定剂是PEG。在另一个实施方案中，PEG具有200至5000道尔顿的数均分子量(Mn)。这些PEG可具有任何结构，如线性、支化、星形或梳状结构，并且可商购获得。
在一些实施方案中，本公开提供了包含含有PANTIFOL的聚乙二醇化脂质体(PLp-PANTIFOL)的脂质体组合物。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含阴离子性或中性的聚乙二醇化脂质体。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含阳离子性的聚乙二醇化脂质体。在一些实施方案中，所述PLp-PANTIFOL组合物是非靶向的(NTPLp-PANTIFOL)。在其它实施方案中，所述PLp-PANTIFOL组合物包含靶向部分(TPLp-PANTIFOL)。在另外的实施方案中，所述脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体，所述聚乙二醇化脂质体包含30％-70％、30％-60％或30％-50％的脂质体包埋的聚谷氨酸化抗叶酸剂，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体，所述聚乙二醇化脂质体包含至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的脂质体包埋的聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含直径在20nm至200nm范围内的聚乙二醇化脂质体。在其它实施方案中，所述脂质体组合物包含直径在80nm至120nm范围内的聚乙二醇化脂质体。
在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中大于70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂是五谷氨酸化的。在一些实施方案中，所提供的组合物中大于70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂是六谷氨酸化的。在一些实施方案中，所述组合物中大于70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂具有4-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述组合物中大于70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂具有4-10个、4-6个或超过5个α-谷氨酰基。
在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中大于30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂是四谷氨酸化的。在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中大于30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂是五谷氨酸化的。在一些实施方案中，所提供的脂质体组合物中大于30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的聚谷氨酸化抗叶酸剂是六谷氨酸化的。
在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物(例如，聚谷氨酸盐和递送媒介物，如含有聚谷氨酸盐的脂质体)在水溶液中。在一些实施方案中，以介于约0.005至约5000mg/M2(平方米体表面积)或介于约0.1至约1000mg/M2或其间的任何范围以脂质体组合物的形式施用所述聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物。在一些实施方案中，以约1mg/kg至约500mg/kg、1mg/kg至约250mg/kg、1mg/kg至约200mg/kg、1mg/kg至约150mg/kg、1mg/kg至约100mg/kg、1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg或约1mg/kg至约5mg/kg或其间的任何范围以脂质体组合物的形式施用所述PANTIFOL组合物。
脂质体组合物
所述脂质体组合物中含有的脂质体的脂质和其它组分可以是任何脂质，脂质组合和比例或脂质与其它脂质体组分的组合及其各自的比例是本领域中已知的。然而，本领域技术人员将理解，任何特定药物的脂质体包封，如但不限于本文所论述的聚谷氨酸化抗叶酸剂，可涉及大量常规实验，以实现有用和有功能的脂质体制剂。一般而言，所提供的脂质体可具有任何脂质体结构，例如，具有通过一个或多个脂质双层与外部介质隔离的内部空间的结构，或具有半透膜的任何微胶囊，所述半透膜具有亲脂性中心部分，其中所述膜隔离内部。脂质双层可以是以亲水性部分(亲水性部分)和疏水性部分(疏水性部分)为特征的两亲性分子的任何排列。一般来说，双层中的两亲性分子排列成二维片，其中疏水性部分向内定向，而亲水性部分向外定向。形成所提供的脂质体的两亲性分子可以是任何已知的或后来发现的两亲性分子，例如合成或天然来源的脂质或生物相容性脂质。脂质体也可由两亲性聚合物和表面活性剂形成，例如，聚合物体和囊泡。出于本公开的目的，但不限于，这些脂质体形成材料也称为“脂质”。
本文提供的脂质体组合物制剂可呈液体或干燥形式，如干粉或干饼。干粉或干饼可在例如冻干条件下进行初级干燥，或者任选地，干饼或干粉可仅经历初级干燥或者初级干燥和二次干燥两者。在干燥形式中，粉末或滤饼可例如具有1％至6％的水分，例如介于2％至5％之间的水分或介于2％至4％之间的水分。干燥的一种示例性方法是冻干(也称为冷冻-干燥(freeze-drying)或冷冻干燥(cryodessication))。本公开的任何组合物和方法可包括脂质体、冻干脂质体或由冻干脂质体重构的脂质体。在一些实施方案中，所公开的组合物和方法包括一种或多种冻干保护剂或冷冻保护剂。这些保护剂通常是多羟基化合物，例如糖(单糖、二糖和多糖)、多元醇及其衍生物、甘油或聚乙二醇、海藻糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、甘油或氨基糖苷。在其它实施方案中，冻干保护剂或冷冻保护剂占脂质体外部、脂质体内部或脂质体外部和内部两者的溶液的至多10％或至多20％。
在一些实施方案中，脂质体包括空间稳定剂，所述空间稳定剂延长其在循环中的寿命。一种或多种空间稳定剂如亲水性聚合物(聚乙二醇(PEG))、糖脂(单唾液酸神经节苷脂(GM1))或其它物质占据紧邻脂质体表面的空间，并从此空间中排除其它大分子。因此，阻碍了血浆调理素对脂质体表面的接近和结合，并且因此抑制了巨噬细胞与此类脂质体或任何其它清除机制的相互作用，并且增强了脂质体在循环中的寿命。在一些实施方案中，空间稳定剂或空间稳定剂的群体是PEG或包含PEG的组合。在其它实施方案中，空间稳定剂是PEG或包含数均分子量(Mn)为200至5000道尔顿的PEG的组合。这些PEG可具有任何结构，如线性、支化、星形或梳状结构，并且可商购获得。
在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在20nm至150nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体含有本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合，并且具有在20nm至150nm范围内的直径。在其它实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在30nm至150nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体含有本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合，并且具有在30nm至150nm范围内的直径，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在80nm至120nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体含有本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合，并且具有在80nm至120nm范围内的直径。在其它实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在40nm至70nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合，并且具有在40nm-70nm范围内的直径。
脂质体的性质受用于制备脂质体的脂质性质的影响。各种各样的脂质已被用于制备脂质体。这些包括阳离子脂质、阴离子脂质和中性脂质。在一些实施方案中，包含聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体是阴离子性的或中性的。在其它实施方案中，所提供的脂质体是阳离子性的。可常规地通过测量脂质体的ζ电位来确定电荷(例如，阴离子性、中性或阳离子性)。脂质体的ζ电位可为正、零或负。在一些实施方案中，脂质体的ζ电位小于或等于零。在一些实施方案中，脂质体的ζ电位在0至-150mV的范围内。在另一个实施方案中，脂质体的ζ电位在-30至-50mV的范围内。
在一些实施方案中，阳离子脂质用于制备阳离子脂质体，其通常用作基因转染剂。阳离子脂质体上的正电荷可与细胞表面上的负电荷相互作用。阳离子脂质体与细胞结合后，脂质体通过内吞作用在细胞内转运。
在一些优选的实施方案中，使用中性至阴离子脂质体。在优选的实施方案中，使用阴离子脂质体。使用例如诸如HSPC的中性脂质和诸如PEG-DSPE的阴离子脂质的混合物使得形成阴离子脂质体，所述阴离子脂质体不太可能与正常细胞非特异性结合。通过使用肿瘤靶向抗体，例如叶酸受体抗体，包括例如叶酸受体α抗体、叶酸受体β抗体和/或叶酸受体δ抗体，可实现与肿瘤细胞的特异性结合。
作为实例，至少一种(或一些)脂质是两亲性脂质，定义为具有亲水性部分和疏水性部分(通常为亲水性头部和疏水性尾部)。疏水性部分通常定向为疏水相(例如，在双层内)，而亲水性部分通常定向于水相(例如，在双层外)。亲水部分可包含极性或带电基团，如碳水化合物、磷酸酯、羧酸、硫酸根、氨基、巯基、硝基、羟基以及其它类似基团。疏水性部分可包含非极性基团，其包括但不限于长链饱和和不饱和脂族烃基以及被一个或多个芳族、脂环族或杂环基团取代的基团。两亲化合物的实例包括但不限于磷脂、氨基脂和鞘脂。
通常，例如，脂质是磷脂。磷脂包括但不限于磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸等。应理解，可使用其它脂质膜组分，如胆固醇、鞘磷脂和心磷脂。
包含本文提供的脂质体的脂质可以是阴离子性和中性(包括两性离子和极性)脂质，包括阴离子性和中性磷脂。在选定的pH下，中性脂质以不带电或中性的两性离子形式存在。在生理pH下，此类脂质包括例如二油酰基磷脂酰甘油(DOPG)、二酰基磷脂酰胆碱、二酰基磷脂酰乙醇胺、神经酰胺、鞘磷脂、脑磷脂、胆固醇、脑苷脂以及二酰基甘油。两性离子脂质的实例包括但不限于二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)和二油酰基磷脂酰丝氨酸(DOPS)。阴离子脂质在生理pH下带负电。这些脂质包括但不限于磷脂酰甘油、心磷脂、二酰基磷脂酰丝氨酸、二酰基磷脂酸、N-十二烷酰基磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰基磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰基磷脂酰乙醇胺、赖氨酰基磷脂酰甘油、棕榈酰基油酰基-磷脂酰甘油(POPG)以及与中性脂质连接的其它阴离子修饰基团。
共同地，阴离子脂质和中性脂质在本文中称为非阳离子脂质。此类脂质可含有磷，但不限于此。非阳离子脂质的实例包括卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰基-磷脂酰1-乙醇胺(DSPE)、棕榈酰基油酰基-磷脂酰乙醇胺(POPE)、棕榈酰剂-油酰基磷脂酰胆碱(POPC)、卵磷脂酰胆碱(EPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰基磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)、棕榈酰基油酰基磷脂酰甘油(POPG)、16-0-甲基PE、16-0-二甲基PE、18-1-反式PE、棕榈酰基油酰基-磷脂酰乙醇胺(POPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(SOPE)、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、磷酸双十六烷基酯和胆固醇。
可使用本领域已知的使用脂质体组分(liposomal component)(也称为脂质体组分(liposome component))的任何脂质体组装方法来组装脂质体。脂质体组分包括，例如，脂质如DSPE、HSPC、胆固醇和这些组分的衍生物。其它合适的脂质例如可从Avanti PolarLipids,Inc.(Alabaster,Alabama,USA)商购获得。适用于制备阴离子脂质体的可用的带负电荷或中性电荷的脂质的部分列表可以是例如以下中的至少一者：DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、DOPC、DMPE、DPPE、DOPE、DMPA·Na、DPPA·Na、DOPA·Na、DMPG·Na、DPPG·Na、DOPG·Na、DMPS·Na、DPPS·Na、DOPS·Na、DOPE-戊二酰·(Na)2、四肉豆蔻酰基心磷脂·(Na)2、DSPE-mPEG-2000·Na、DSPE-mPEG-5000·Na和DSPE-马来酰亚胺PEG-2000·Na。
在一些实施方案中，本文提供的PANTIFOL组合物被配制在包含阳离子脂质的脂质体中。在一个实施方案中，所述阳离子脂质选自但不限于国际申请公布号WO2012/040184、WO2011/153120、WO2011/149733、WO2011/090965、WO2011/043913、WO2011/022460、WO2012/061259、WO2012/054365、WO2012/044638、WO2010/080724、WO2010/21865和WO2008/103276、美国专利号7,893,302、7,404,969和8,283,333以及美国申请公布号US20100036115和US20120202871中描述的阳离子脂质，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。在另一个实施方案中，所述阳离子脂质可选自但不限于国际申请公布号WO2012/040184、WO2011/153120、WO201/1149733、WO2011/090965、WO2011/043913、WO2011/022460、WO2012/061259、WO2012/054365和WO2012/044638中描述的式A，所述申请各自以引用的方式整体并入本文。在另一个实施方案中，阳离子脂质可选自但不限于国际公布号WO2008103276的式CLI-CLXXIX、美国专利号7,893,302的式CLI-CLXXIX、美国专利号7,404,969的式CLI-CLXXXXII以及美国专利公布号US20100036115的式I-VI；所述专利各自以引用的方式整体并入本文。作为一个非限制性实例，阳离子脂质可选自(20Z,23Z)-N,N-二甲基二十九-20,23-二烯-10-胺、(17Z,20Z)-N,N-二甲基-二十六-17,20-二烯-9-胺、(1Z,19Z)-N5N-二甲基二十五-16,19-二烯-8-胺、(13Z,16Z)-N,N-二甲基二十二-13,16-二烯-5-胺、(12Z,15Z)-N,N-二甲基二十一-12,15-二烯-4-胺、(14Z,17Z)-N,N-二甲基-二十三-14,17-二烯-6-胺、(15Z,18Z)-N,N-二甲基二十四-15,18-二烯-7-胺、(18Z,21Z)-N,N-二甲基二十七-18,21-二烯-10-胺、(15Z,18Z)-N,N-二甲基二十四-15,18-二烯-5-胺、(14Z,17Z)-N,N-二甲基-二十三-14,17-二烯-4-胺、(19Z,22Z)-N,N-二甲基二十八-19,22-二烯-9-胺、(18Z,21Z)-N,N-二甲基二十七-18,21-二烯-8-胺、(17Z,20Z)-N,N-二甲基二十六-17,20-二烯-7-胺、(16Z,19Z)-N,N-二甲基二十五-16,19-二烯-6-胺、(22Z,25Z)-N,N-二甲基三十一-22,25-二烯-10-胺、(21Z,24Z)-N,N-二甲基-三十-21,24-二烯-9-胺、(18Z)-N,N-二甲基二十七-18-烯-10-胺、(17Z)-N,N-二甲基二十六-17-烯-9-胺、(19Z,22Z)-N,N-二甲基二十八-19,22-二烯-7-胺、N,N-二甲基二十七-10-胺、(20Z,23Z)-N-乙基-N-甲基-二十九-20,23-二烯-10-胺、1-[(11Z,14Z)-1-壬基二十-11,14-二烯-1-基]吡咯烷、(20Z)-N,N-二甲基-二十七-20-烯-10-胺、(15Z)-N,N-二甲基二十七-15-烯-10-胺、(14Z)-N,N-二甲基二十九-14-烯-10-胺、(17Z)-N,N-二甲基二十九-17-烯-10-胺、(24Z)-N,N-二甲基三十三-24-烯-10-胺、(20Z)-N,N-二甲基-二十九-20-烯-10-胺、(22Z)-N,N-二甲基三十一-22-烯-10-胺、(16Z)-N,N-二甲基二十五-16-烯-8-胺、(12Z,15Z)-N,N-二甲基-2-壬基二十一-12,15-二烯-1-胺、(13Z,16Z)-N,N-二甲基-3-壬基二十二-13,16-二烯-1-胺、N,N-二甲基-1-[(1S,2R)-2-辛基环丙基]十七-8-胺、1-[(1S,2R)-2-己基环丙基]-N,N-二甲基十九-10-胺、N,N-二甲基-1-[(1S,2R)-2-辛基环丙基]十九-10-胺、N,N-二甲基-21-[R1S,2R)-2-辛基环丙基]二十一-10-胺、N,N-二甲基-1-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-戊基环丙基]甲基}环丙基]十九-10-胺、N,N-二甲基-1-[(1S,2R)-2-辛基环丙基]十六-8-胺、N,N-二甲基-[(1R,2S)-2-十一烷基-环丙基]十四-5-胺、N,N-二甲基-3-{7-[(1S,2R)-2-辛基环丙基]庚基}十二-1-胺、1-[(1R,2S)-2-庚基环丙基]-N,N-二甲基十八-9-胺、1-[(1S,2R)-2-癸基环丙基]-N,N-二甲基十五-6-胺、N,N-二甲基-1-[(1S,2R)-2-辛基环丙基]十五-8-胺、R--N,N-二甲基-1-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]-3-(辛基氧基)丙-2-胺、S--N,N-二甲基-1-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]-3-(辛基氧基)丙-2-胺、1-{2-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]-1-[(辛基氧基)甲基]乙基}吡咯烷、(2S)-N,N-二甲基-1-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]-3-[(5Z)-辛-5-烯-1-基氧基]丙-2-胺、1-{2-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]-1-[(辛基氧基)甲基]乙基}氮杂环丁烷、(2S)-1-(己基氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]丙-2-胺、(2S)-1-(庚基氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]丙-2-胺、N,N-二甲基-1-(壬基氧基)-3-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]丙-2-胺、N,N-二甲基-1-[(9Z)-十八-9-烯-1-基氧基]-3-(辛基氧基)丙-2-胺；(2S)-N,N-二甲基-1-[(6Z,9Z,12Z)-十八-6,9,12-三烯-1-基氧基]-3-(辛基氧基)丙-2-胺、(2S)-1-[(11Z,14Z)-二十-11,14-二烯-1-基氧基]-N,N-二甲基-3-(戊基氧基)丙-2-胺、(2S)-1-(己基氧基)-3-[(11Z,14Z)-二十-11,14-二烯-1-基氧基]-N,N-二甲基丙-2-胺、1-[(11Z,14Z)-二十-11,14-二烯-1-基氧基]-N,N-二甲基-3-(辛基氧基)丙-2-胺、1-[(13Z,16Z)-二十二-13,16-二烯-1-基氧基]-N,N-二甲基-3-(辛基氧基)丙-2-胺、(2S)-1-[(13Z,16Z)-二十二-13,16-二烯-1-基氧基]-3-(己基氧基)-N,N-二甲基-丙-2-胺、(2S)-1-[(13Z)-二十二-13-烯-1-基氧基]-3-(己基氧基)-N,N-二甲基-丙-2-胺、1-[(13Z)-二十二-13-烯-1-基氧基]-N,N-二甲基-3-(辛基氧基)丙-2-胺、1-[(9Z)-十六-9-烯-1-基氧基]-N,N-二甲基-3-(辛基氧基)丙-2-胺、(2R)-N,N-二甲基-H(1-甲酰基辛基)氧基]-3-[(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]丙-2-胺、(2R)-1-[(3,7-二甲基辛基)氧基]-N,N-二甲基-3-R9Z,12Z)-十八-9,12-二烯-1-基氧基]丙-2-胺、N,N-二甲基-1-(辛基氧基)-3-({8-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-戊基环丙基]甲基}环丙基]辛基}氧基)丙-2-胺、N,N-二甲基-1-{[-(2-辛基环丙基)辛基]氧基}-3-(辛基氧基)丙-2-胺以及(11E,20Z,23Z)-N,N-二甲基二十九-11,20,2-三烯-10-胺或其药学上可接受的盐或立体异构体。
在一个实施方案中，脂质可以是可裂解脂质，如在国际公布号WO2012/170889中描述的那些，所述公布以引用的方式整体并入本文。
阳离子脂质可常规地使用本领域已知的和/或如国际公布号WO2012/040184、WO2011/153120、WO2011/149733、WO2011/090965、WO201/1043913、WO2011/022460、WO2012/061259、WO2012/054365、WO2012/044638、WO2010/080724和WO2010/21865中描述的方法来合成，所述公布各自以引用的方式整体并入本文。
脂质衍生物可至少包括，例如一种或多种空间稳定剂和/或官能团与脂质体组分的键合(优选共价键合)，之后应将空间稳定剂和/或官能团视为脂质体组分的一部分。官能团包括可用于将脂质体组分连接至另一部分(如蛋白质)的基团。此类官能团至少包括马来酰亚胺。这些空间稳定剂包括来自以下的至少一者：聚乙二醇(PEG)；聚-L-赖氨酸(PLL)；单唾液酸神经节苷脂(GM1)；聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)；聚(丙烯酰胺)(PAA)；聚(2-甲基-2-噁唑啉)；聚(2-乙基-2-噁唑啉)；磷脂酰聚甘油；聚[N-(2-羟基-丙基)甲基丙烯酰胺]；两亲性聚N-乙烯基吡咯烷酮；L-氨基酸基聚合物；以及聚乙烯醇。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物被配制在脂质-聚阳离子复合物中。脂质-聚阳离子复合物的形成可使用本领域中已知和/或如在美国公布号20120178702中描述的方法来完成，所述公布以引用的方式整体并入本文。作为非限制性实例，聚阳离子可包括阳离子肽或多肽，如但不限于聚赖氨酸、聚鸟氨酸和/或聚精氨酸以及在国际公布号WO2012/013326中描述的阳离子肽；所述公布以引用的方式整体并入本文。在另一个实施方案中，所述PANTIFOL被配制在脂质-聚阳离子复合物中，所述脂质-聚阳离子复合物还包含中性脂质，如但不限于胆固醇或二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。
由于脂质体的组分可包括与其结合的任何分子(即化学/试剂/蛋白质)，因此在一些实施方案中，所提供的脂质体的组分至少包括选自下组的成员：DSPE，DSPE-PEG，DSPE-马来酰亚胺，HSPC；HSPC-PEG；HSPC-马来酰亚胺；胆固醇；胆固醇-PEG；以及胆固醇-马来酰亚胺。在一些实施方案中，所提供的脂质体的组分包括DSPE，DSPE-PEG，DSPE-马来酰亚胺，HSPC；HSPC-PEG；HSPC马来酰亚胺；胆固醇；胆固醇-PEG；和胆固醇-马来酰亚胺。在一个优选的实施方案中，组成脂质体的脂质体组分包括DSPE；DSPE-FITC；DSPE-马来酰亚胺；胆固醇；和HSPC。
在另外的实施方案中，本文提供的脂质体组合物的脂质体包含氧化磷脂。在一些实施方案中，所述脂质体包含选自以下的成员的氧化磷脂：磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油-2-磷酸。在一些实施方案中，磷脂具有不饱和键。在一些实施方案中，磷脂是含花生四烯酸的磷脂。在另外的实施方案中，磷脂是sn-2-含氧的。在另外的实施方案中，磷脂不片段化。
在一些实施方案中，所公开的脂质体组合物的脂质体包含氧化的1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酰胆碱(OxPAPC)。如本文所用，术语“oxPAPC”是指通过1-棕榈酰基-2-花生四烯基-sn-甘油基-3-磷酰胆碱(PAPC)的氧化而产生的脂质，其产生含有片段化或全长含氧sn-2残基的氧化磷脂的混合物。充分表征的氧化片段化种类含有携带ω-醛或ω-羧基的五碳sn-2残基。花生四烯酸残基的氧化也产生含酯化异前列烷的磷脂。在一些实施方案中，除存在于oxPAPC中的其它氧化产物外，oxPAPC还包括HOdiA-PC、KOdiA-PC、HOOA-PC和KOOA-PC种类。在其它实施方案中，oxPAPC是含环氧异前列烷的磷脂。在其它实施方案中，oxPAPC是1-棕榈酰基-2-(5,6-环氧异前列烷E2)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(5,6-PEIPC)、1-棕榈酰基-2-(环氧-环戊烯酮)-sn-甘油基-3-磷酰胆碱(PECPC)和/或1-棕榈酰基-2-(环氧-异前列烷E2)-sn-甘油基-4-磷酸胆碱(PEIPC)。在一些实施方案中，磷脂具有不饱和键。在一些实施方案中，磷脂是含花生四烯酸的磷脂。在另外的实施方案中，磷脂是sn-2-含氧的。在另外的实施方案中，磷脂不片段化。
在一些实施方案中，脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物是聚乙二醇化的(即，聚乙二醇化的脂质体聚谷氨酸化(例如，五谷氨酸化的或六谷氨酸化的)抗叶酸剂(PLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，PLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL是水溶性的。即，PLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL呈水溶液形式。
在一些实施方案中，所公开的脂质体组合物的脂质体包含选自以下的脂质：1-棕榈酰基-2-戊二酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PGPC)；1-棕榈酰基-2-(9'氧代-壬酰基)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；1-棕榈酰基-2-肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；1-棕榈酰基-2-十六烷基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；1-棕榈酰基-2-壬二酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱；和1-棕榈酰基-2-乙酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱。在其它实施方案中，所述脂质体包含PGPC。
在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是pH 2至8，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是pH 5至8或pH 2至6，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是pH 5至8，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是pH 6至7，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是6至7.5、6.5至7.5、6.7至7.5或6.3至7.0，或其间的任何范围。
在一些实施方案中，脂质体脂质双层的至少一种组分是官能化的(或反应性的)。如本文所用，官能化组分是包含可用于将试剂和部分交联至脂质的反应性基团的组分。如果脂质被官能化，则其形成的任何脂质体也被官能化。在一些实施方案中，反应性基团是将与交联剂(或其它部分)反应以形成交联的基团。脂质体脂质双层中的反应性基团位于脂质上允许其接触交联剂并与另一部分(例如，空间稳定剂或靶向部分)交联的任何位置。在一些实施方案中，反应性基团在脂质的头部基团中，包括例如磷脂。在一些实施方案中，反应性基团是马来酰亚胺基团。马来酰亚胺基团可在二硫醇交联剂存在下彼此交联，所述二硫醇交联剂包括但不限于二硫苏糖醇(DTT)。
应当理解，进一步考虑了使用除上述那些之外的其它官能化脂质、其它反应性基团和其它交联剂。除马来酰亚胺基团外，所考虑的反应性基团的其它实例包括但不限于其它硫醇反应性基团、氨基如伯胺和仲胺、羧基、羟基、醛基、炔基、叠氮基、羰基、卤代乙酰基(例如，碘乙酰基)、亚氨酸酯基、N-羟基琥珀酰亚胺酯、巯基和吡啶基二硫化物基团。
可从许多商业来源获得官能化和非官能化脂质，包括Avanti Polar Lipids(Alabaster,AL)and Lipoid LLC(Newark,NJ)。
脂质体内部空间
在其它非限制性实施方案中，所提供的脂质体封闭内部空间。在一些实施方案中，内部空间包含但不限于水溶液。在一些实施方案中，内部空间包含如本文提供的聚谷氨酸化抗叶酸剂。在另外的实施方案中，脂质体的内部空间包含张度剂。在一些实施方案中。在一些实施方案中，张度剂的浓度(重量百分比)是0.1％-20％、1％-20％、0.5％-15％、1％-15％或1％-50％，或其间的任何范围。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含糖(例如，海藻糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、甘露糖醇、甘油、右旋糖、果糖等)。在其它实施方案中，糖的浓度(重量百分比)是0.1％-20％、1％-20％、0.5％-15％、1％-15％或1％-50％，或其间的任何范围。在一些实施方案中，脂质体内部空间的pH值是pH 2至8，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是pH 5至8，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是pH 6至7，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是6至7.5、6.5至7.5、6.7至7.5或6.3至7.0，或其间的任何范围。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在其它实施方案中，缓冲液是选自HEPES、柠檬酸盐或磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)的缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是15至200mM，或其间的任何范围。在其它实施方案中，缓冲液的浓度介于5至200mM之间、15至200、介于5至100mM之间、介于15至100mM之间、介于5至50mM之间、介于15至50mM之间、介于5至25mM之间、介于5至20mM之间、介于5至15mM之间或其间的任何范围。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的磷酸钠。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于5mM至500mM、或50mM至500mM之间或其间的任何范围的乙酸钠和乙酸钙。
在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含谷氨酰胺、谷氨酸盐和/或聚谷氨酸盐(例如，含有一个或多个γ谷氨酰基键联或1个或多个α谷氨酰基键联的二谷氨酸盐、三谷氨酸盐、四谷氨酸盐和/或五谷氨酸盐)。在其它实施方案中，谷氨酰胺、谷氨酸盐和/或聚谷氨酸盐的浓度重量百分比是0.1％-20％、1％-20％、0.5％-15％、1％-15％、5％-20％或1％-50％，或其间的任何范围。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含谷氨酰胺。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含谷氨酸盐。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含聚谷氨酸盐。在一些实施方案中，谷氨酰胺、谷氨酸盐和/或聚谷氨酸盐的浓度(重量百分比)是1％-15％或其间的任何范围。在另一实施方案中，谷氨酰胺、谷氨酸盐和/或聚谷氨酸盐以谷氨酰胺、谷氨酸盐和/或聚谷氨酸盐或一种或多种冻干保护剂或冷冻保护剂的任何组合的约5％至20％重量百分比存在，总浓度为5％至20％。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在其它实施方案中，缓冲液是HEPES缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。在其它实施方案中，柠檬酸盐缓冲液的浓度介于5至200mM之间。在一些实施方案中，内部空间的pH值介于2.8至6之间。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是6至7.5、6.5至7.5、6.7至7.5或6.3至7.0，或其间的任何范围。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是选自HEPES、柠檬酸盐或磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)的缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是15至200mM，或其间的任何范围。在其它实施方案中，缓冲液的浓度介于5至200mM之间、15至200、介于5至100mM之间、介于15至100mM之间、介于5至50mM之间、介于15至50mM之间、介于5至25mM之间、介于5至20mM之间、介于5至15mM之间或其间的任何范围。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的磷酸钠。在另外的实施方案中，脂质体的内部空间包含乙酸钠和/或乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于5mM至500mM、或50mM至500mM之间或其间的任何范围的乙酸钠和乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于50mM至500mM之间的乙酸钠和乙酸钙。
在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含谷氨酰胺。在其它实施方案中，谷氨酰胺的浓度重量百分比是0.1％-20％、1％-20％、0.5％-15％、1％-15％、5％-20％或1％-50％，或其间的任何范围。在一些实施方案中，谷氨酰胺的浓度(重量百分比)是1％-15％或其间的任何范围。在另一实施方案中，谷氨酰胺以谷氨酰胺或一种或多种冻干保护剂或冷冻保护剂的任何组合的约5％至20％重量百分比存在，总浓度为5％至20％。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在其它实施方案中，缓冲液是HEPES缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。在其它实施方案中，柠檬酸盐缓冲液的浓度介于5至200mM之间。在一些实施方案中，内部空间的pH值介于2.8至6之间。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是6至7.5、6.5至7.5、6.7至7.5或6.3至7.0，或其间的任何范围。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是选自HEPES、柠檬酸盐或磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)的缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是15至200mM，或其间的任何范围。在其它实施方案中，缓冲液的浓度介于5至200mM之间、15至200、介于5至100mM之间、介于15至100mM之间、介于5至50mM之间、介于15至50mM之间、介于5至25mM之间、介于5至20mM之间、介于5至15mM之间或其间的任何范围。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的磷酸钠。在另外的实施方案中，脂质体的内部空间包含乙酸钠和/或乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于5mM至500mM、或50mM至500mM之间或其间的任何范围的乙酸钠和乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于50mM至500mM之间的乙酸钠和乙酸钙。
在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含海藻糖。在其它实施方案中，海藻糖的浓度重量百分比是0.1％-20％、1％-20％、0.5％-15％、1％-15％、5％-20％或1％-50％，或其间的任何范围。在其它实施方案中，海藻糖的浓度(重量百分比)是1％-15％或其间的任何范围。在另一实施方案中，海藻糖以海藻糖或一种或多种冻干保护剂或冷冻保护剂的任何组合的约5％至20％重量百分比存在，总浓度为5％至20％。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在其它实施方案中，缓冲液是HEPES缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。在其它实施方案中，柠檬酸盐缓冲液的浓度介于5至200mM之间。在一些实施方案中，内部空间的pH值介于2.8至6之间。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是6至7.5、6.5至7.5、6.7至7.5或6.3至7.0，或其间的任何范围。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是选自HEPES、柠檬酸盐或磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)的缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是15至200mM，或其间的任何范围。在其它实施方案中，缓冲液的浓度介于5至200mM之间、15至200、介于5至100mM之间、介于15至100mM之间、介于5至50mM之间、介于15至50mM之间、介于5至25mM之间、介于5至20mM之间、介于5至15mM之间或其间的任何范围。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的磷酸钠。在另外的实施方案中，脂质体的内部空间包含乙酸钠和/或乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于5mM至500mM、或50mM至500mM之间或其间的任何范围的乙酸钠和乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于50mM至500mM之间的乙酸钠和乙酸钙。
在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含右旋糖。在其它实施方案中，右旋糖的浓度重量百分比是0.1％-20％、1％-20％、0.5％-15％、1％-15％、5％-20％或1％-50％，或其间的任何范围。在其它实施方案中，右旋糖的浓度(重量百分比)是1％-15％或其间的任何范围。在另一实施方案中，右旋糖以右旋糖或一种或多种冻干保护剂或冷冻保护剂的任何组合的约5％至20％重量百分比存在，总浓度为5％至20％。在一些实施方案中，包含脂质体组合物的溶液的pH值是6至7.5、6.5至7.5、6.7至7.5或6.3至7.0，或其间的任何范围。在一些实施方案中，内部空间包含缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是选自HEPES、柠檬酸盐或磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)的缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是磷酸钠(例如，磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是15至200mM，或其间的任何范围。在其它实施方案中，缓冲液的浓度介于5至200mM之间、15至200、介于5至100mM之间、介于15至100mM之间、介于5至50mM之间、介于15至50mM之间、介于5至25mM之间、介于5至20mM之间、介于5至15mM之间或其间的任何范围。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的HEPES。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的柠檬酸盐。在一些实施方案中，缓冲液是浓度为15至200mM或其间的任何范围的磷酸钠。在另外的实施方案中，脂质体的内部空间包含乙酸钠和/或乙酸钙。在一些实施方案中，脂质体的内部空间包含总浓度介于5mM至500mM、或50mM至500mM之间或其间的任何范围的乙酸钠和乙酸钙。
在另外的实施方案中，本公开提供了脂质体组合物，所述脂质体组合物包含包封(即，填充有)聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的γPANTIFOL或αPANTIFOL)的脂质体。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，本公开提供了一种脂质体组合物，所述脂质体组合物包含靶向且聚乙二醇化脂质体，所述脂质体包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化(例如，五谷氨酸化或六谷氨酸化)抗叶酸剂包含含有脂质体的介质，所述脂质体包含内部空间；设置在所述内部空间内的聚谷氨酸化抗叶酸剂水溶液；和靶向部分，所述靶向部分包含对至少一种叶酸受体具有特异性亲和力的蛋白质，并且其中所述靶向部分设置在所述脂质体的外部。在一些实施方案中，介质是水溶液。在一些实施方案中，所述内部空间、外部空间(例如，介质)或内部空间和介质两者均含有一种或多种上文列出的冻干保护剂或冷冻保护剂。在一些实施方案中，冷冻保护剂是甘露糖醇、海藻糖、山梨糖醇或蔗糖。
在一些实施方案中，包封聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体(即，Lp-PANTIFOL，包括PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)具有含有少于500,000或少于200,000个聚谷氨酸化抗叶酸剂分子(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D，或式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10,000至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且具有含有少于500,000或少于200,000个聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的(TLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的(NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。
在一些实施方案中，所述脂质体包封含有2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，Lp-PANTIFOL，包括PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10,000至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且具有含有少于500,000或少于200,000个含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的(TLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非靶向的并且是非聚乙二醇化的(NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非靶向的并且是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的含2-10个谷氨酰基的聚谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。
在一些实施方案中，所述脂质体包封本公开的四谷氨酸化抗叶酸剂(例如，Lp-PANTIFOL，包括PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个四谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10,000至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且具有含有少于500,000或少于200,000个四谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的(TLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个四谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的(NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个四谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的四谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述四谷氨酸化抗叶酸剂是γ四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述四谷氨酸化抗叶酸剂是α四谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，所述脂质体包封本公开的五谷氨酸化抗叶酸剂(例如，Lp-PANTIFOL，包括PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个五谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10,000至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且具有含有少于500,000或少于200,000个五谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的(TLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个五谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非靶向的并且是非聚乙二醇化的(NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个五谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分并且是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的γ五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非靶向的并且是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的五谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述五谷氨酸化抗叶酸剂是γ五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述五谷氨酸化抗叶酸剂是α五谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，所述脂质体包封本公开的六谷氨酸化抗叶酸剂(即，Lp-PANTIFOL，包括PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个六谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体内部空间含有介于10,000至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且具有含有少于500,000或少于200,000个六谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的(TLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个六谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体是非靶向的并且是非聚乙二醇化的(NTLp-PANTIFOL)，并且具有含有少于500,000或少于200,000个六谷氨酸化抗叶酸剂分子的内部空间。在一些实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在其它实施方案中，所述脂质体不含靶向部分，是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体的内部空间含有介于10,000至100,000个之间的六谷氨酸化抗叶酸剂分子，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述六谷氨酸化抗叶酸剂是γ六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述六谷氨酸化抗叶酸剂是α六谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，本公开提供了一种脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物，其中所述脂质体包封聚谷氨酸化抗叶酸剂或其盐或酸，以及一种或多种药学上可接受的水性载体。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有海藻糖。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有5重量％至20重量％的海藻糖。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间含有浓度介于1至200mM之间并且pH值介于2至8之间的HBS。在一些实施方案中，脂质体内部空间具有pH 5-8，或其间的任何范围。在一些实施方案中，脂质体内部空间具有pH 6-7，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述脂质体内部空间具有总浓度介于50mM至500mM之间或其间的任何范围的乙酸钠和乙酸钙。
非聚谷氨酸化的可聚谷氨酸化抗叶酸剂
在一些实施方案中，所述脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，Lp-PANTIFOL，包括PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)组合物包含本公开的PANTIFOL和一种或多种非聚谷氨酸化的可聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物。
在一些实施方案中，Lp-PANTIFOL(例如，PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本公开的α-PANTIFOL和/或γPANTIFOL)和抗叶酸剂(ANTIFOL)。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL(即，脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂)包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和选自由以下组成的组的可聚谷氨酸化抗叶酸剂：氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LMX)、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、AG2034、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和洛美曲索。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和培美曲塞。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和亚叶酸。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和三嗪抗叶酸剂衍生物(例如，磺酰氟三嗪，如NSC127755)。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT2)抑制剂。在一些实施方案中，所述SHMT2抑制剂是抗叶酸剂(例如，可聚谷氨酸化或不可聚谷氨酸化抗叶酸剂)。在一些实施方案中，所述SHMT2抑制剂是抗叶酸剂。
不可聚谷氨酸化抗叶酸剂
在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL(例如，PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)包含αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和所谓的“不可聚谷氨酸化”抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和抑制叶酸循环代谢途径中的一种或多种酶的不可聚谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述不可聚谷氨酸化抗叶酸剂抑制选自以下的一种或多种酶：胸苷酸合成酶(TS)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、甘氨酰胺核糖核苷酸(GAR)转化酶和氨基咪唑羧酰胺核糖核苷酸(AICAR)转化酶。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂和抑制DHFR的不可聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂和抑制TS的不可聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂和抑制GAR或AICAR转化酶的不可聚谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述不可聚谷氨酸化抗叶酸剂选自：三甲曲沙(TMQ)、吡曲克辛(BW301U)和talotrexin(PT523)。在其它实施方案中，所述不可聚谷氨酸化抗叶酸剂选自：诺拉曲塞(AG337)、普来曲塞(ZD9331，BGC9331)和BGC 945(ONX0801)或其药学上可接受的盐。
铂
在一些实施方案中，所述脂质体包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，Lp-PANTIFOL，如例如PLp-PANTIFOL、TPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL和NTLp-PANTIFOL)，包含αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和基于铂的化学治疗剂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸/基于铂的剂复合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含选自以下的基于铂的化学治疗剂：顺铂、卡铂和奥沙利铂，或其盐或酸。在其它实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含选自以下的基于铂的化学治疗剂的类似物：顺铂、卡铂或奥沙利铂，或其盐或酸。
在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和顺铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和顺铂类似物或其盐或酸。
在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和卡铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和卡铂类似物或其盐或酸。
在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和奥沙利铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和奥沙利铂类似物或其盐或酸。
在一些实施方案中，所述脂质体包含αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL)和选自以下的基于铂的化学治疗剂：奈达铂、庚铂和洛铂，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和选自以下的基于铂的化学治疗剂的类似物：奈达铂、庚铂和洛铂，或其盐或酸。
在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和选自以下的基于铂的化学治疗剂：赛特铂、卡铂、顺铂、环铂、右奥马铂、螺铂、吡铂、三铂、四铂、异丙铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM216、254-S、NK121、CI-973、DWA 2114R、NDDP和dedaplatin，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述Lp-PANTIFOL包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和选自以下的基于铂的化学治疗剂的类似物：赛特铂、卡铂、顺铂、环铂、右奥马铂、螺铂、吡铂、三铂、四铂、异丙铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM216、254-S、NK121、CI-973、DWA 2114R、NDDP和dedaplatin，或其盐或酸。
在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体还含有设置在所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者上的免疫刺激剂、可检测标记物和马来酰亚胺中的一者或多者。
环糊精
在另外的实施方案中，所述脂质体包含PANTIFOL(例如，本公开的γPANTIFOL和/或αPANTIFOL)和环糊精(例如，本文所述的环糊精)。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体是靶向脂质体组合物。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体包含由环糊精和治疗剂形成的复合物。在一些实施方案中，治疗剂是细胞毒性化合物或其盐或酸。在另一实施方案中，治疗剂是化学治疗剂或其盐或酸。在另一个实施方案中，治疗剂是基于铂的药物。在另一个实施方案中，治疗剂是基于紫杉烷的药物。在另外的实施方案中，环糊精/治疗剂复合物的治疗剂选自：吉西他滨、基于吉西他滨的治疗剂、阿霉素、抗叶酸剂、基于抗叶酸剂的化学治疗剂或其盐或酸、酸或游离碱形式。在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体是靶向脂质体组合物。在另外的实施方案中，所述复合物中环糊精/治疗剂的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中的PANTIFOL/治疗剂的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中PANTIFOL/治疗剂的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/治疗剂的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精//基于铂的剂复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体包含PANTIFOL和环糊精/基于铂的化学治疗剂复合物。在一些实施方案中，基于铂的化学治疗剂选自：顺铂、卡铂和奥沙利铂，或其盐或酸。在其它实施方案中，环糊精/基于铂的化学治疗剂复合物包含顺铂、卡铂、奥沙利铂的类似物，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体是靶向脂质体组合物。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精//基于铂的剂复合物被包封在脂质体中。
在一些实施方案中，基于铂的化学治疗剂选自：顺铂、卡铂和奥沙利铂，或其盐或酸。在其它实施方案中，环糊精/基于铂的化学治疗剂复合物包含顺铂、卡铂、奥沙利铂的类似物，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的剂的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。
在其它实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物含有环糊精和顺铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/顺铂(或顺铂盐或酸)的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精//顺铂(或顺铂盐或酸)复合物被包封在脂质体中。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物含有环糊精和卡铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡铂(或卡铂盐或酸)的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/卡铂(或卡铂盐或酸)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物含有环糊精和奥沙利铂或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比是：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含环糊精和选自以下的基于铂的化学治疗剂：奈达铂、庚铂、洛铂、赛特铂、卡铂、顺铂、环铂、右奥马铂、螺铂、吡铂、三铂、四铂、异丙铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM216、NK121、CI973、DWA 2114R、NDDP和dedaplatin，或其盐或酸。在其它实施方案中，所述环糊精/基于铂的化学治疗剂复合物包含奈达铂、庚铂、洛铂、赛特铂、卡铂、顺铂、环铂、右奥马铂、螺铂、吡铂、三铂、四铂、异丙铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM216、NK121、CI973、DWA 2114R、NDDP或dedaplatin的类似物，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/奥沙利铂(或奥沙利铂盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的化学治疗剂(或其盐或酸或类似物)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的化学治疗剂(或其盐或酸或类似物)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于铂的化学治疗剂(或其盐或酸或类似物)的摩尔比是：2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/基于铂的化学治疗剂(或其盐或酸或类似物)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在一些实施方案中，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含环糊精/基于紫杉烷的化学治疗剂复合物。在一些实施方案中，所述基于紫杉烷的化学治疗剂选自：紫杉醇(PTX)、多西他赛(DTX)、拉洛他赛(LTX)和卡巴他赛(CTX)，或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于紫杉烷的剂的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于紫杉烷的剂的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于紫杉烷的剂的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/基于紫杉烷的剂的摩尔比是：2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精//基于紫杉烷的剂复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含环糊精和紫杉醇(PTX)或其盐或酸。在其它实施方案中，所述环糊精/基于紫杉烷的化学治疗剂复合物包含紫杉醇(PTX)的类似物或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)的摩尔比是：2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/紫杉醇(或紫杉醇盐或酸)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含环糊精和多西他赛(DTX)或其盐或酸。在其它实施方案中，所述环糊精/基于紫杉烷的化学治疗剂复合物包含多西他赛(DTX)的类似物或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/多西他赛(或多西他赛盐或酸)的摩尔比是：2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/多西他赛(或多西他赛盐或酸)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含环糊精和拉洛他赛(LTX)或其盐或酸。在其它实施方案中，所述环糊精/基于紫杉烷的化学治疗剂复合物包含拉洛他赛(LTX)的类似物或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)的摩尔比是：2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/拉洛他赛(或拉洛他赛盐或酸)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种复合物，所述复合物包含环糊精和卡巴他赛(CTX)或其盐或酸。在其它实施方案中，所述环糊精/基于紫杉烷的化学治疗剂复合物包含卡巴他赛(CTX)的类似物或其盐或酸。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比在1-10:1的范围内。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或10:1。在一些实施方案中，所述复合物中环糊精/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:(21-50)或1:>50。在一些实施方案中，所述复合物中α环糊精/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)的摩尔比是：2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、(21-50):1或>50:1。在另外的实施方案中，所述环糊精/卡巴他赛(或卡巴他赛盐或酸)复合物被包封在脂质体中(例如，如本文所述或本领域另外已知的)。
所述环糊精/治疗剂复合物的环糊精可被衍生化或未衍生化。在一些实施方案中，环糊精被衍生化。在其它实施方案中，环糊精是衍生化的β-环糊精(例如，羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)和磺丁基醚β-CD(SBE)-β-环糊精))。在一些实施方案中，所述环糊精/治疗剂复合物的环糊精是衍生化的β-环糊精，所述衍生化的β-环糊精包含：羟基的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个2-羟丙基-3-基团取代；或羟基的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个磺烷基醚基团取代。在其它实施方案中，所述环糊精/治疗剂复合物的环糊精是衍生化的β-环糊精，所述衍生化的β-环糊精包含：羟基的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个磺丁基醚基团取代。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体组合物中所含的环糊精/治疗剂复合物的环糊精是式CD-1的衍生化的环糊精：
Figure BDA0003575147470001811
其中：n是4、5或6；并且其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地是-H、直链或支链C1-C8-亚烷基、2-羟丙基-3-基团；或任选取代的直链或支链C1-C6基团，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的至少一者是直链或支链C1-C8-亚烷基或2-羟丙基-3-基团。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体组合物中所含的环糊精/治疗剂复合物的环糊精是式CD-2的衍生化的环糊精：
Figure BDA0003575147470001812
其中：n是4、5或6；并且其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地是-O-或-O-(C2-C6亚烷基)-SO3-基团；其中R1和R2中的至少一者独立地是-O-(C2-C6亚烷基)-SO3-基团；并且S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8和S9各自独立地是–H或H或药学上可接受的阳离子。在其它实施方案中，其中所述药学上可接受的阳离子选自：碱金属，如Li+、Na+或K+；碱土金属，如Ca+2或Mg+2，以及铵离子和胺阳离子，如(C1-C6)-烷基胺、哌啶、吡嗪、(C1-C6)-烷醇胺和(C4-C8)-环烷醇胺的阳离子。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体包含介于100至100,000之间的环糊精/治疗剂复合物。
在一些实施方案中，PANTIFOL/环糊精复合物和/或环糊精/治疗剂复合物的环糊精衍生物是美国专利号6,133,248、5,874,418、6,046,177、5,376,645、5,134,127、7,034,013、6,869,939；和国际申请公布号WO 02005/117911中公开的环糊精，所述专利各自的内容以引用的方式以其优先权并入本文。
在一些实施方案中，所述环糊精/治疗剂复合物的环糊精衍生物是磺烷基醚环糊精。在一些实施方案中，复合物的环糊精衍生物是磺丁基醚-3-环糊精，如
Figure BDA0003575147470001822
(CyDex Pharma.Inc.,Lenexa,Kansas。用于制备磺丁基醚-3-环糊精和其它磺烷基醚环糊精的方法是本领域已知的。
在一些实施方案中，所述环糊精/治疗剂复合物的环糊精衍生物是式CD-3的化合物：
Figure BDA0003575147470001821
其中R等于：
(a)(H)21-X或(-(CH2)4-SO3Na)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0；
(b)(H)21-X或(-(CH2CH(OH)CH3)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0；
(c)(H)21-X或(磺烷基醚)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0；或
(d)(H)21-X或(-(CH2)4-SO3Na)x，并且x＝1.0-10.0、1.0-5.0、6.0-7.0或8.0-10.0。
可包含在PANTIFOL脂质体中并根据所公开的方法使用的另外的环糊精和环糊精/基于铂的治疗剂复合物在美国申请号62/583,432中公开，所述申请的内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体包含环糊精和基于铂的化学治疗剂或其盐的复合物。在一些实施方案中，所述基于铂的化学治疗剂是顺铂或顺铂类似物。在一些实施方案中，所述基于铂的化学治疗剂是卡铂。在另外的实施方案中，所述脂质体组合物包含选自以下的基于铂的化学治疗剂：卡铂、顺铂、奥沙利铂、沙铂、吡铂、奈达铂、三铂、四铂、脂铂(lipoplatin)、洛铂、奥马铂、折尼铂、铂-三胺、traplatin、恩洛铂、JM-216、254-S、NK121、CI-973、DWA 2114R、NDDP和dedaplatin。在一些实施方案中，所述PANTIFOL脂质体包含介于100至100,000之间的基于铂的化学治疗剂/CD复合物。在另外的实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体具有在20nm至500nm或20nm至200nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述组合物中的脂质体包含介于100至100,000之间的铂。
靶向的脂质体
在一些实施方案中，本公开提供了一种脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物，其中所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和靶向部分，所述靶向部分连接至PEG和所述脂质体的外部中的一者或两者，并且其中所述靶向部分对目标靶细胞上的表面抗原具有特异性亲和力。此类脂质体在本文中通常可称为“靶向脂质体”，例如包括在脂质体的表面上或以其它方式连接至脂质体的一种或多种靶向部分或生物分布调节剂的脂质体。靶向脂质体的靶向部分可以是能够特异性地结合所需靶标(例如，在目标靶细胞表面上表达的抗原靶标)的任何部分或剂。在一个实施方案中，所述靶向脂质体特异性地且优先地结合至目标靶细胞表面上的靶标，所述目标靶细胞使所述靶向脂质体内化，脂质体包封的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，γ五谷氨酸化抗叶酸剂或γ六谷氨酸化抗叶酸剂)在所述目标靶细胞中发挥其细胞毒性作用。在其它实施方案中，所述靶细胞是癌细胞、肿瘤细胞或转移细胞。在一些实施方案中，所述靶向脂质体是聚乙二醇化的。
术语“连接(attach)”或“连接(attached)”是指，例如，任何类型的键合，如共价键合、通过疏水相互作用的离子键合(例如，抗生物素蛋白-生物素)键合以及通过诸如马来酰亚胺的官能团或诸如PEG的接头键合。例如，可检测标记物、空间稳定剂、脂质体、脂质体组分、免疫刺激剂可通过马来酰亚胺官能团或PEG-马来酰亚胺基团直接彼此连接。
靶向部分的组成和来源不限于本公开的范围。在一些实施方案中，连接至脂质体的靶向部分是多肽或肽模拟物配体。肽和肽模拟物靶向部分包括具有天然存在的或修饰的肽的那些，例如D或L肽；γ、β或γ肽；N-甲基肽；氮杂肽；具有一个或多个酰胺的肽，即，键联被一种或多种脲、硫脲、氨基甲酸酯或磺酰基脲键联置换的肽；或环肽。肽模拟物是能够折叠成与天然肽相似的限定三维结构的分子。在一些实施方案中，肽或肽模拟物靶向部分是2-50个氨基酸长，例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸长。
在一些实施方案中，靶向部分多肽的长度是至少40个氨基酸残基。在其它实施方案中，靶向部分多肽的长度是至少50、60、75、100、125、150、175、200、250或300个氨基酸残基。
在另外的实施方案中，靶向部分多肽，如抗体或抗原结合抗体片段以在0.5x 10-10至10x 10-6范围内的平衡解离常数(Kd)结合靶抗原，如使用
Figure BDA0003575147470001851
分析所测定。
在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗体衍生物。在其它实施方案中，靶向部分多肽的结合结构域不源自抗体的抗原结合结构域。在一些实施方案中，靶向部分是源自结合支架的多肽，所述结合支架选自DARPin、affilin和犰狳重复序列、D结构域(参见例如，WO2016/164308)、Z结构域(亲和体(Affibody))、adnectin、脂质运载蛋白(lipocalin)、affilin、anticalin、打结素(knottin)、fynomer、atrimer、kunitz结构域(参见例如，WO2004/063337)、CTLA4或avimer(参见例如，美国公布号2004/0175756、2005/0053973、2005/0048512和2006/0008844)。
在另外的实施方案中，靶向部分是对靶细胞表面上表达的目标细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的抗体或抗体的抗原结合结构域的衍生物。在一些实施方案中，靶向部分是全长抗体。在一些实施方案中，靶向部分是抗体的抗原结合部分。在一些实施方案中，靶向部分是scFv。在其它实施方案中，靶向部分是Fab。在一些实施方案中，靶向部分包含源自抗体的抗原结合结构域的结合结构域(例如，scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、scFv、微型抗体、BiTE、Tandab、双抗体((VL-VH)2或(VH-VL)2)、单结构域抗体(例如，sdAb，如纳米抗体(VL或VH))和骆驼科动物VHH结构域)。在一些实施方案中，靶向部分包含抗体来源的一个或多个互补决定区(CDR)。用于所公开的靶向脂质体的合适的基于抗体的靶向部分的实例包括全长人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、抗体的抗原结合片段、单链抗体、单结构域抗体、双特异性抗体、合成抗体、聚乙二醇化抗体和多聚体抗体。所提供的靶向脂质体的抗体可具有上述特征的组合。例如，人源化抗体可以是抗原结合片段，并且也可聚乙二醇化和多聚化。
术语“人源化抗体”是指作为含有最少非人(例如，鼠)序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段的非人(例如，鼠)抗体形式。通常，人源化抗体是人免疫球蛋白，其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自具有所需特异性、亲和力和能力的非人物种(例如小鼠、大鼠、兔和仓鼠)的CDR的残基取代(Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988))。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被来自非人物种的抗体中的具有所需特异性、亲和力和能力的相应残基置换。可通过取代Fv框架区中和/或替代的非人残基内的额外残基来进一步修饰人源化抗体以改善并优化抗体特异性、亲和力和/或能力。一般来说，人源化抗体将基本上包含所有的至少一个并且通常两个或三个可变结构域，所述可变结构域含有所有或基本上所有对应于非人免疫球蛋白的CDR区，而所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体还可包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的至少一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例描述于美国专利号5,225,539和5,639,641中。
在其它实施方案中，靶向部分对目标靶细胞的表面抗原上的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，靶细胞是癌细胞。在一些实施方案中，靶细胞是肿瘤细胞。在其它实施方案中，靶细胞是免疫细胞。
在一些实施方案中，靶向部分对在肿瘤细胞表面抗原上表达的表位具有特异性亲和力。术语“肿瘤细胞表面抗原”是指特定过度增生性病症如癌症所共有的抗原。在一些实施方案中，靶向部分对作为肿瘤相关抗原(TAA)的肿瘤细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力。TAA是在肿瘤和一些正常细胞上均发现的抗原。当免疫系统不成熟且不能应答时，TAA可在胎儿发育过程中在正常细胞上表达，或者通常可在正常细胞上以极低的水平存在，而在肿瘤细胞上则以高得多的水平表达。由于肿瘤的动态性质，在一些情况下，肿瘤细胞可在某些阶段表达独特的抗原，并且在其它阶段还表达在非肿瘤细胞上也表达的抗原。因此，包含某种标志物作为TAA并不排除其被认为是肿瘤特异性抗原。在一些实施方案中，靶向部分对作为肿瘤特异性抗原(TSA)的肿瘤细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力。TSA是肿瘤细胞特有的抗原，并且不会在体内其它细胞上出现。在一些实施方案中，靶向部分对在癌症表面上表达的肿瘤细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力，所述癌症包括但不限于原发性或转移性黑素瘤、胸腺瘤、淋巴瘤、肉瘤、肺癌(例如，NSCLC或SCLC)、肝癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、子宫癌、宫颈癌、肾癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、间皮瘤和腺癌如乳腺癌、前列腺癌癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌和本领域已知的其它癌症。在一些实施方案中，靶向部分对在肿瘤微环境中在细胞表面上表达的细胞表面抗原(例如，和抗原如分别在内皮细胞和巨噬细胞上表达的VEGFR和TIE1或TIE2，或在肿瘤间质细胞如癌症相关成纤维细胞(CAF)、肿瘤浸润性T细胞和其它白细胞以及包括肥大细胞、嗜酸性粒细胞和肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的髓样细胞上表达的抗原)的表位具有特异性亲和力。
在一些实施方案中，靶向脂质体PANTIFOL组合物(例如，TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)包含靶向部分，与正常或非肿瘤细胞相比，所述靶向部分对在靶细胞(如癌细胞或肿瘤细胞)上优先/差异表达的癌症或肿瘤细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力，所述表位存在于肿瘤细胞中、但在非肿瘤细胞上不存在或不可接近。例如，在一些情况下，肿瘤抗原位于正常细胞和恶性癌细胞的表面上，但肿瘤表位仅暴露于癌细胞中。作为另一个实例，肿瘤细胞表面抗原可经历癌性状态的确认变化，所述变化引起癌细胞特异性表位存在。对本文所述或本领域另外已知的可靶向肿瘤细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分是有用的，并且由所公开的组合物和方法所涵盖。在一些实施方案中，具有肿瘤细胞表面抗原的肿瘤细胞是癌细胞。此类肿瘤细胞表面抗原的实例包括但不限于叶酸受体α、叶酸受体β和叶酸受体δ。
在其它实施方案中，靶向部分包含多肽靶向部分，如抗体或抗原结合抗体片段，并且所述靶向部分对叶酸受体具有结合特异性。在一些实施方案中，如使用
Figure BDA0003575147470001881
分析所测定，靶向部分以在0.5x10-10至10x 10-6范围内的平衡解离常数(Kd)结合叶酸受体。在一些实施方案中，由靶向部分结合的叶酸受体是选自以下的一种或多种叶酸受体：叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)。在另一实施方案中，靶向部分对至少两种选自叶酸受体α、叶酸受体β和叶酸受体δ的抗原具有特异性亲和力。在另一个实施方案中，靶向部分对叶酸受体α；叶酸受体β；和叶酸受体δ具有特异性亲和力。
在一些实施方案中，靶向部分对细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力，所述细胞表面抗原在结合时使靶向部分内化。在结合时使结合配偶体如抗体内化的许多细胞表面抗原是本领域已知的，并且被认为是本文公开的在靶向脂质体PANTIFOL组合物(例如，TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)上表达的靶向部分的结合靶标。
在一些实施方案中，靶向部分对选自以下的细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。
在一些实施方案中，靶向部分对选自甘露糖-6-磷酸受体、转铁蛋白受体和细胞粘附分子(CAM)的细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，靶向部分对CAM的表位具有特异性亲和力，所述CAM选自由以下组成的组：细胞间粘附分子(ICAM)、血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM)、活化白细胞粘附分子(ALCAM)、B-淋巴细胞细胞粘附分子(BL-CAM)、血管细胞粘附分子(VCAM)、粘膜血管地址素细胞粘附分子(MAdCAM)、CD44、LFA-2、LFA-3和基础免疫球蛋白。
本文讨论的叶酸受体(FR)不同于还原性叶酸载体(RFC)并且利用不同的途径将叶酸和抗叶酸剂带入细胞中。在一些实施方案中，靶向部分特异性地结合叶酸受体。在其它实施方案中，靶向部分特异性地结合选自叶酸受体α、叶酸受体β和叶酸受体δ的叶酸受体。可使用本领域已知的技术常规地产生针对叶酸受体α的抗体。此外，许多抗叶酸受体抗体的序列属于公共域和/或可商购获得并且易于获得。
针对叶酸受体的鼠抗体是可用作所公开的靶向脂质体的靶向部分的抗体的实例，是针对叶酸受体的鼠抗体。这些抗体的序列是已知的，并且描述于例如美国专利号5,646,253；8,388,972；8,871,206；和9,133,275以及国际申请号PCT/US2011/056966和PCT/US2012/046672中。例如，基于已经在公共结构域中公开的序列，可合成抗体的基因并将其置于瞬时表达载体中，并且在HEK-293瞬时表达系统中产生抗体。抗体可以是完整抗体、Fab或本文讨论或本领域已知的各种抗体变体中的任一种。
在一些实施方案中，靶向脂质体(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)在其表面上含有1至1,000个或超过1,000个靶向部分。在一些实施方案中，靶向脂质体含有30至1,000个、30至500个、30至250个或30-200个靶向部分或其间的任何范围。在一些实施方案中，靶向脂质体(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)在其表面上含有30至1,000个或超过1,000个靶向部分。在一些实施方案中，靶向脂质体含有30至500个、30至250个或30-200个靶向部分。在一些实施方案中，靶向脂质体含有少于220个靶向部分、少于200个靶向部分或少于175个靶向部分。在一些实施方案中，靶向部分非共价键合至脂质体的外部(例如，经由离子相互作用或GPI锚)。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，靶向脂质体(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)外部上的分子包括脂质、靶向部分、空间稳定剂(例如，PEG)、马来酰亚胺和胆固醇。在一些实施方案中，靶向部分经由马来酰亚胺官能团共价结合。在一些实施方案中，靶向部分与脂质体组分或空间稳定剂如PEG分子共价结合。在一些实施方案中，脂质体的所有靶向部分都结合至脂质体的一种组分，如PEG。在其它实施方案中，靶向脂质体的靶向部分结合至脂质体的不同组分。例如，一些靶向部分可结合至脂质组分或胆固醇，一些靶向部分可结合至空间稳定剂(例如，PEG)，并且其它靶向部分可结合至可检测标记物或另一个靶向部分。在一些实施方案中，靶向脂质体(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)的外部还包含设置在所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者上的免疫刺激剂、可检测标记物和马来酰亚胺中的一者或多者。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，靶向脂质体(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)是阴离子性或中性的。在一些实施方案中，靶向阴离子性或中性脂质体具有在20nm至500nm或20nm至200nm范围内或其间的任何范围内的直径。在其它实施方案中，靶向阴离子性或中性脂质体具有在80nm至120nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在其它实施方案中，靶向脂质体(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)是阳离子性的。在一些实施方案中，靶向阴离子性或中性脂质体具有在20nm至500nm或20nm至200nm范围内或其间的任何范围内的直径。在其它实施方案中，靶向阴离子性或中性脂质体具有在80nm至120nm范围内或其间的任何范围内的直径。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在另外的实施方案中，包含靶向脂质体的脂质体组合物(例如，TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL)包含30％-70％、30％-60％或30％-50％的脂质体包埋的本公开的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂，或其间的任何范围。在一些实施方案中，包含靶向脂质体的脂质体组合物包含至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％的包封(包埋)在靶向脂质体中的αPANTIFOL和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂的起始材料。
在一些实施方案中，所述靶向脂质体组合物包含30％-70％、30％-60％或30％-50％(w/w)的本公开的四谷氨酸化抗叶酸剂，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％(w/w)的四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，在制备靶向脂质体的过程期间，将至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％的四谷氨酸化抗叶酸剂的起始材料包封(包埋)在靶向脂质体中。在一些实施方案中，所述四谷氨酸化抗叶酸剂是γ四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述四谷氨酸化抗叶酸剂是α四谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，所述靶向脂质体组合物包含30％-70％、30％-60％或30％-50％(w/w)的本公开的五谷氨酸化抗叶酸剂，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％(w/w)的五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，在制备靶向脂质体的过程期间，将至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％的五谷氨酸化抗叶酸剂的起始材料包封(包埋)在靶向脂质体中。在一些实施方案中，所述五谷氨酸化抗叶酸剂是γ五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述五谷氨酸化抗叶酸剂是α五谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，所述靶向脂质体组合物包含30％-70％、30％-60％或30％-50％(w/w)的本公开的六谷氨酸化抗叶酸剂，或其间的任何范围。在一些实施方案中，所述靶向脂质体包含至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％(w/w)的六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，在制备靶向脂质体的过程期间，将至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％的六谷氨酸化抗叶酸剂的起始材料包封(包埋)在靶向脂质体中。在一些实施方案中，所述六谷氨酸化抗叶酸剂是γ六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述六谷氨酸化抗叶酸剂是α六谷氨酸化抗叶酸剂。
用于将多肽靶向部分与脂质体表面分子共价缔合的方法和技术是本领域已知的，并且可容易地用于制备TL-PANTIFOL或TPL-PANTIFOL脂质体组合物。
可采用非蛋白质靶向部分和其它组合物与脂质体表面的化学结合。因此，可使用本领域已知的任何连接或结合方法和/或任何合适的化学接头将非蛋白质部分共价或非共价连接至脂质体、包埋或吸附至脂质体上。此类交联剂和交联方法的确切类型和化学性质优选适合于所用亲和基团的类型和脂质体的性质。用于结合或吸附或连接靶向部分的方法也是本领域众所周知的。例如，在一些实施方案中，靶向部分可经由但不限于极性基团如氨基、SH、羟基、醛、甲酰基、羧基、His-标签或其它多肽连接至界面处的基团。另外，靶向部分可经由但不限于活性基团连接，所述活性基团如琥珀酸琥珀酰亚胺酯、氰尿酰氯、甲苯磺酰基活化基团、咪唑基团、CNBr、NHS、活化的CH、ECH、EAH、环氧基、硫代丙基、活化的硫醇等。此外，靶向部分可经由但不限于可包括或可不包括交联剂的疏水键(范德华力)或静电相互作用(例如，二价阴离子、聚阴离子、聚-阳离子等)连接。
脂质体的制造
在一些实施方案中，本公开提供了一种制备本文公开的脂质体组合物的方法。在一个实施方案中，所述方法包括形成混合物，所述混合物包含：(1)脂质体组分；和(2)在水溶液中的本公开的γ聚谷氨酸化(例如，五谷氨酸化或六谷氨酸化)抗叶酸剂。在一个实施方案中，所述方法包括形成混合物，所述混合物包含：(1)脂质体组分；和(2)在水溶液中的本公开的α聚谷氨酸化(例如，五谷氨酸化或六谷氨酸化)抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述混合物包含聚乙二醇化脂质体组分。然后将混合物均质化以在水溶液中形成脂质体。此外，可将混合物通过膜挤出以形成脂质体，所述脂质体将α或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂封闭在水溶液中。应理解，本公开的脂质体组分可包含任何脂质(包括胆固醇)，包括官能化脂质和与靶向部分、可检测标记物和空间稳定剂或所有这些的任何子集连接的脂质。还应注意，水溶液中的生物活性α或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂可包含本文讨论的或本领域另外已知的脂质体内部或外部的任何试剂和化学物质，包括例如缓冲剂、盐和冷冻保护剂。
在一些实施方案中，本公开提供了一种制备本文公开的靶向聚乙二醇化脂质体γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(靶向PLp-γPANTIFOL)或非靶向PLp-γPANTIFOL的方法。在一个实施方案中，所述方法包括形成混合物，所述混合物包含：(1)脂质体组分；(2)在水溶液中的本公开的γ聚谷氨酸化(例如，五谷氨酸化或六谷氨酸化)抗叶酸剂；和(3)靶向部分。在一些实施方案中，本公开提供了一种制备本文公开的靶向聚乙二醇化脂质体α聚谷氨酸化抗叶酸剂(靶向PLp-αPANTIFOL)或非靶向PLp-αPANTIFOL的方法。在一个实施方案中，所述方法包括形成混合物，所述混合物包含：(1)脂质体组分；(2)在水溶液中的本公开的α聚谷氨酸化(例如，五谷氨酸化或六谷氨酸化)抗叶酸剂；和(3)靶向部分。然后将混合物均质化以在水溶液中形成脂质体。此外，可将混合物通过膜挤出以形成脂质体，所述脂质体将靶向α或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂封闭在水溶液中。应理解，靶向聚乙二醇化脂质体组分可包含任何脂质(包括胆固醇)，包括官能化脂质和与靶向部分、可检测标记物和空间稳定剂或所有这些的任何子集连接的脂质。还应注意，靶向聚乙二醇化脂质体可包含本文所讨论的或本领域已知的脂质体内部或外部的任何试剂和化学品，包括例如缓冲剂、盐和冷冻保护剂。
上述方法任选地还包括在除去步骤后冻干组合物以形成冻干组合物的步骤。如上所述，水溶液中的靶向PTPLA或非靶向PTPLA可包含本文所述或本领域另外已知的冷冻保护剂。如果要冻干组合物，则冷冻保护剂可能是优选的。
另外，在冻干步骤后，所述方法任选地还包括通过在冻干步骤后将组合物溶解在溶剂中来重构冻干组合物的步骤。重构方法是本领域已知的。一种优选的溶剂是水。其它优选的溶剂包括盐水溶液和缓冲溶液。
尽管本文讨论了某些示例性实施方案，但应理解，脂质体可通过本领域已知的任何方法制备。参见例如，G.Gregoriadis(编辑),Liposome Technology,第1-3卷,第1版,1983；第2版,1993,CRC Press,45Boca Raton,Fla。适用于制备脂质体组合物的方法的实例包括挤出、反相蒸发、超声处理、溶剂(例如，乙醇)注入、微射流、洗涤剂透析、醚注入和脱水/再水合。脂质体的大小通常可通过控制用于低压挤出的膜的孔径或微射流中使用的压力和通过次数或本领域已知的任何其它合适的方法来控制。
通常，本公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂包含在脂质体的内部，即内部(内部)空间中。在一个实施方案中，将取代的铵部分或基本上完全从脂质体周围的外部介质中除去。可通过本领域已知的任何合适的手段(例如，稀释、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法、透析、超滤和沉淀)来完成这种去除。因此，制备上述或本领域另外已知的脂质体组合物的方法可任选地还包括在形成脂质体后例如通过均质化或通过挤出步骤除去脂质体外部的水溶液中的聚谷氨酸化抗叶酸剂的步骤。
在其它实施方案中，本公开提供了选择性地靶向叶酸受体的靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂(TPLp-PANTIFOL)，其包含：脂质体，所述脂质体包括内部空间；设置在所述内部空间内的聚谷氨酸化抗叶酸剂；与所述脂质体的外部连接的空间稳定剂分子；以及包含对至少一种叶酸受体具有特异性亲和力的蛋白质的靶向部分，所述靶向部分与空间稳定剂和脂质体的外部中的至少一者连接。此实施方案的组分可与针对本公开的其它实施方案所描述的相同。例如，靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂和可以是PEG的空间稳定剂如本公开的其它部分中所描述。
在一些实施方案中，本公开提供了一种制备靶向组合物的方法，所述靶向组合物包含聚乙二醇化脂质体，所述聚乙二醇化脂质体包含包埋的和/或包封的聚谷氨酸化抗叶酸剂；靶向部分是氨基酸链，所述氨基酸链包含多个氨基酸，所述靶向部分对至少一种类型的叶酸受体具有特异性亲和力，所述特异性亲和力被定义为对于至少一种类型的叶酸受体包括在0.5x 10-10至10x 10-6摩尔[0.05nM至10μM]范围内的平衡解离常数(Kd)，所述靶向部分连接至PEG和所述脂质体的外部中的一者或两者，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；加工所述混合物以形成包埋和/或包封聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体；以及在包埋和/或包封所述聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体的表面上提供靶向部分，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)中的至少一者具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；形成包埋和/或包封聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体，例如通过均质化或以其它方式加工所述混合物以形成脂质体；以及在包埋和/或包封所述聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体的表面上提供靶向部分，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)中的至少一者具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述加工包括以下中的一者或多者：薄膜水合、挤出、在线混合、乙醇注入技术、冻融技术、反相蒸发、动态高压微射流、微射流混合、复乳法、冷冻干燥复乳法、3D打印、膜接触器方法和搅拌，并且一旦形成了颗粒，就可通过挤出和超声处理中的一者或多者进一步改变颗粒的大小。在一些实施方案中，在制备脂质体的过程期间，将至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或超过75％的聚谷氨酸化抗叶酸剂的起始材料包封(包埋)在靶向脂质体中。在一些实施方案中，所述脂质体是阴离子性或中性的。在一些实施方案中，所述靶向部分对以下中的一者或多者具有特异性亲和力：叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)。在其它实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)和叶酸受体β(FR-β)具有特异性亲和力。在另外的实施方案中，所述靶向部分对肿瘤细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力，所述表位存在于肿瘤细胞上但在非肿瘤细胞上不存在或不可接近。
还可通过改变磷脂组成或通过将受体或反受体插入脂质体中而将脂质体制备成靶向特定细胞、器官或细胞器。例如，用高含量的非离子型表面活性剂制备的脂质体已经用于靶向肝脏。(参见例如，Ha yakawa等人的日本专利04-244,018；Kato等人,Biol.Pharm.Bull.16:960,1993。)二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)与大豆来源的甾醇糖苷混合物(SG)和胆固醇(Ch)的脂质体制剂也已证明可靶向肝脏。(参见例如，Shimizu等人,Biol.Pharm.Bull.20:881(1997))。
抗体递送媒介物
在另外的实施方案中，本公开提供了抗体递送媒介物(例如，ADC)。在一些实施方案中，本公开提供了具有式(A)-(L)-(PANTIFOL)的免疫缀合物，其中：(A)是抗体或抗体的抗原结合片段；(L)是接头；并且“(PANTIFOL)”是本文所述的PANTIFOL组合物；并且其中所述接头(L)将(A)连接至(PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述PANTIFOL是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段对目标细胞上细胞表面抗原的表位(例如，本文所述的表位和/或抗原)具有特异性亲和力。在某些实施方案中，所述抗体结合至在癌症/肿瘤的细胞膜中或细胞膜上(例如，细胞表面上)表达的抗原靶标，并且在与(抗原)靶标结合后，抗体被所述细胞内化，之后PANTIFOL在细胞内释放。在一些实施方案中，所述抗体是全长抗体。
(A)-(L)-(PANTIFOL)免疫缀合物的抗体或抗原结合抗体片段可以是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。不同类别的免疫球蛋白具有不同的且众所周知的亚基结构和三维构型。在某些实施方案中，抗体是IgG抗体。在一些实施方案中，抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在某些实施方案中，抗体是IgG1抗体。
在一些实施方案中，(A)是抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，(A)是抗体的抗原结合片段。
“接头”是能够将化合物(通常是药物，如PANTIFOL)以稳定的共价方式连接至抗体或抗体的抗原结合片段的任何化学部分。在化合物或抗体保持活性的条件下，接头可易感于或基本上抵抗酸诱导的裂解、光诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、酯酶诱导的裂解和二硫键裂解。合适的接头是本领域熟知的并且包括，例如，二硫基、硫醚基、酸不稳定性基团、光不稳定性基团、肽酶不稳定性基团以及酯酶不稳定性基团。接头还包括带电荷的接头及其亲水性形式。
在一些实施方案中，所述接头选自可裂解的接头、不可裂解的接头、亲水性接头以及基于二羧酸的接头。在另一个实施方案中，接头是不可裂解的接头。在另一个实施方案中，接头选自由以下组成的组：4-(2-吡啶基二硫代)戊酸N-琥珀酰亚胺酯(SPP)；4-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-琥珀酰亚胺酯(SPDB)或4-(2-吡啶基二硫代)-2-磺基丁酸N-琥珀酰亚胺酯(磺基-SPDB)；4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷-甲酸N-琥珀酰亚胺酯(SMCC)；4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷甲酸N-磺基琥珀酰亚胺酯(磺基SMCC)；4-(碘代乙酰基)-氨基苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯(SIAB)；以及N-琥珀酰亚胺基-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-马来酰亚胺)。在另一实施方案中，接头是N-琥珀酰亚胺基-[(N-马来酰亚胺基-丙酰胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-马来酰亚胺)。
在一些实施方案中，使用本领域已知的技术，直接或通过接头将聚谷氨酸化抗叶酸剂连接(偶联)至免疫缀合物的抗体或抗原结合抗体片段。一种或多种PANTIFOL的这种连接可包括许多化学机制，如共价结合、亲和力结合、插入、配位结合和络合。PANTIFOL与抗体或抗原结合抗体片段的共价结合可通过现有侧链的直接缩合或通过掺入外部桥联分子来实现。许多二价或多价剂可用于使用偶联剂将多肽与其它蛋白质缔合，所述偶联剂如碳二亚胺、二异氰酸酯、戊二醛、重氮苯和六亚甲基二胺。此列表并非意图穷尽本领域中已知的各种偶联剂，而是更常见偶联剂的示例。在一些实施方案中，将抗体或抗原结合抗体片段衍生化，然后连接至聚谷氨酸化抗叶酸剂。或者，可使用本领域已知的技术将PANTIFOL衍生化并连接至抗体或抗原结合抗体片段。
在一些实施方案中，免疫缀合物包含抗体或抗体的抗原结合片段和γPANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基(包括抗叶酸剂的谷氨酰基)。在一些实施方案中，所述免疫缀合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，抗体递送媒介物组合物包含聚谷氨酸化抗叶酸剂和对细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的抗体或抗原结合抗体片段，所述细胞表面抗原选自：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、ErbB4、EGFR、EGFRvIII、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR6、IGFR-1、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、SMO、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD8、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD28、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD98、CD105、CD133、CD138、cripto、IGF-1R、IGF-2R、EphA1、EphA受体、EphB受体、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA1、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB6、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CanAg、CALLA、c-Met、VEGFR-1、VEGFR-2、DDR1、PDGFRα、PDGFRβ、TrkA、TrkB、TrkC、UFO、LTK、ALK、Tie1、Tie2、PTK7、Ryk、TCR、NMDAR、LNGFR和MuSK。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分对源自或被确定为在特定受试者的癌症(肿瘤)上表达的细胞表面抗原(如新抗原)上的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含聚谷氨酸化抗叶酸剂和对选自甘露糖6-磷酸受体、转铁蛋白受体和细胞粘附分子(CAM)的抗原上的表位具有特异性亲和力的抗体或抗原结合抗体片段。在其它实施方案中，靶向部分对CAM的表位具有特异性亲和力，所述CAM选自由以下组成的组：细胞间粘附分子(ICAM)、血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM)、活化白细胞粘附分子(ALCAM)、B-淋巴细胞细胞粘附分子(BL-CAM)、血管细胞粘附分子(VCAM)、粘膜血管地址素细胞粘附分子(MAdCAM)、CD44、LFA-2、LFA-3和基础免疫球蛋白。在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含1、2、3、4、5、5-10或大于10种聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含1、2、3、4、5、5-10或大于10种五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含1、2、3、4、5、5-10或大于10种六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述抗体递送媒介物组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
药物组合物和施用
在一些实施方案中，脂质体组合物作为含有脂质体(例如，本文所述的)和载体(例如药学上可接受的载体)的药物组合物提供。所提供的药物组合物中所含的药学上可接受的载体的实例包括生理盐水、等渗右旋糖、等渗蔗糖、林格氏溶液和汉克斯溶液。在一些实施方案中，添加缓冲物质以维持药物组合物的储存稳定性的最佳pH值。在一些实施方案中，药物组合物的pH值介于6.0与7.5之间。在一些实施方案中，pH值介于6.3与7.0之间。在其它实施方案中，pH值是6.5。理想地，药物组合物的pH值允许脂质体膜脂质的稳定性和所包埋的实体的保留。通常浓度为2-20mM的组氨酸、羟乙基哌嗪-乙基磺酸盐(HEPES)、吗啉代乙基磺酸盐(MES)、琥珀酸盐、酒石酸盐和柠檬酸盐是示例性缓冲物质。其它合适的载体包括例如水、缓冲水溶液、0.4％NaCl和0.3％甘氨酸。可添加蛋白质、碳水化合物或聚合物稳定剂和张力调节剂，例如明胶、白蛋白、葡聚糖或聚乙烯吡咯烷酮。可用葡萄糖或更惰性的化合物如乳糖、蔗糖、甘露糖醇或糊精将组合物的张力调节至0.25-0.35mol/kg的生理水平。可使用本领域已知的常规灭菌技术(例如，通过过滤)对这些组合物进行常规灭菌。所得到的水溶液可包装使用或在无菌条件下过滤并冻干，冻干制剂在施用之前与无菌水性介质组合。
所提供的药物脂质体组合物还可含有接近生理条件所需的其它药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂，以及张力调节剂，例如乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾和氯化钙。另外，脂质体悬浮液可包括在储存时保护脂质免受自由基和脂质过氧化损害的脂质保护剂。亲脂性自由基淬灭剂如γ生育酚和水溶性铁特异性螯合剂如铁草胺是适合的。
所提供的流体药物制剂中的脂质体浓度可根据需要广泛变化，例如，通常小于约0.05重量％或至少约2重量％-10重量％至多至30重量％至50重量％并且将根据所选择的特定施用方式主要通过流体体积和粘度进行选择。例如，可增加浓度以降低与治疗相关的流体负荷。这可在患有动脉粥样硬化相关的充血性心力衰竭或严重高血压的患者中是特别合乎需要的。或者，可将主要由刺激性脂质组成的脂质体药物组合物稀释至低浓度以减轻施用部位的炎症。
一些实施方案涉及一种将聚谷氨酸化抗叶酸剂的靶向聚乙二醇化脂质体制剂递送至在表面上表达叶酸受体的肿瘤的方法。示例性方法包括以一定量施用本文提供的脂质体药物组合物以将治疗有效剂量的靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至肿瘤的步骤。
所施用的脂质体药物组合物的量将取决于脂质体内包埋的特定聚谷氨酸化抗叶酸剂、所治疗的疾病状态、所用脂质体的类型以及临床医生的判断。通常，所施用的脂质体药物组合物的量将足以递送治疗有效剂量的特定治疗性实体。
递送治疗有效剂量所必需的脂质体药物组合物的量可通过药物测试领域中常见的常规体外和体内方法来确定。参见例如，D.B.Budman,A.H.Calvert,E.K.Rowinsky(编辑).Handbook of Anticancer Drug Development,LWW,2003。各种治疗性组合物的治疗有效剂量是本领域技术人员已知的。在一些实施方案中，治疗性实体经由药物脂质体组合物递送并且提供至少与通过在其常规非脂质体制剂中施用相同量的治疗性实体获得的活性相同或更高的活性。通常，脂质体药物组合物的剂量最通常在每平方米体表面积约0.005与约5000mg之间的治疗性实体、每平方米体表面积约0.1与约1000mg之间的治疗性实体的范围内。
例如，如果受试者患有肿瘤，则有效量可以是减少肿瘤体积或负荷(例如通过对肿瘤成像所确定)的剂(例如，γ聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物或α聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物)的量。还可通过血液或其它体液或组织(例如活组织检查)中癌细胞的存在和/或频率来常规评估有效量。如果肿瘤正在影响组织或器官的正常功能，则可通过测量组织或器官的正常功能来常规评估有效量。在一些情况下，有效量是减轻或消除一种或多种、且优选所有症状所需的量。
还提供了包含聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物(例如，含有五谷氨酸化或六谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体)的药物组合物。药物组合物是无菌组合物，其包含样品脂质体，并且优选地包含聚谷氨酸化抗叶酸剂，优选地在药学上可接受的载体中。
除非本文另有说明，否则可使用多种施用途径。所选择的特定模式将取决于所选择的特定活性剂、所治疗的特定疾患和治疗功效所需的剂量。所提供的方法可使用医学上可接受的并根据良好医学实践的任何已知施用方式来实践。在一些实施方案中，施用途径是注射。在其它实施方案中，注射是通过胃肠外途径进行的，所述胃肠外途径选自肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、关节内、硬膜内、鞘内、静脉内、肌肉内或胸骨内注射。在一些实施方案中，施用途径是输注。在另外的实施方案中，施用途径是口服、经鼻、粘膜、舌下、气管内、眼部、直肠、阴道、眼部、局部、透皮、肺部或吸入。
含有PANTIFOL组合物，如本文所述的脂质体PANTIFOL组合物的治疗性组合物可常规地静脉内施用，例如通过注射单位剂量施用。当关于本文提供的治疗性组合物使用时，术语“单位剂量”是指适合作为单一剂量用于受试者的物理上分离的单位，每个单位含有与所需稀释剂(例如，载体或媒介物)缔合的经计算可产生所需治疗效果的预定量的活性物质。在一个具体实施方案中，皮下施用含有衔接子的治疗性组合物。
在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物以与剂量制剂相容的方式并以治疗有效量施用。待施用的量取决于待治疗的受试者、受试者的系统利用活性成分的能力以及所需的治疗效果的程度。施用所需要的活性成分的精确量取决于医师的判断并且是每一个个体所特有的。然而，用于全身施加的合适剂量范围在本文中公开并取决于施用途径。用于施用的合适方案也是可变的，但是通过初始施用、接着通过随后注射或其它施用在一个或多个小时间隔的重复剂量来代表。或者，考虑足以将血液中的浓度维持在体内疗法所规定的范围内的连续静脉内输注。
PANTIFOL组合物以符合良好医学实践的方式配制、确定剂量和施用。在此情形下的考虑因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定患者、个体患者的临床疾患、病症的病因、剂的递送部位、施用方法、施用时程以及医学从业者已知的其它因素。施用PANTIFOL组合物的剂量范围是足够大以产生所需作用的剂量范围，其中由靶分子介导的疾病症状得到改善。所述剂量不应大到导致不良的副作用，如高粘滞综合征、肺水肿、充血性心力衰竭以及本领域已知的其它不良副作用。一般来说，剂量将随患者的年龄、体重、身高、体表面积、健康状况(例如，肾和肝功能)、疾患、性别和疾病程度而变化，并且可常规地由本领域的普通技术人员确定。如果有任何并发症，则所述剂量可由单个医师调节。
对于治疗性和预防性用途有效的剂量时间表和量(即“给药方案”)将取决于多种因素，包括疾病或病症的病因、阶段和严重程度，所治疗受试者的健康状况、身体状态、年龄，以及PANTIFOL组合物的递送部位和方式。PANTIFOL组合物的治疗功效和毒性可通过细胞培养或实验动物中的标准药学、药理学和毒理学程序来确定。从这些程序获得的数据同样可用于配制一系列人类使用的剂量。此外，可使用已知程序容易地确定治疗指数(即，在50％的群体中治疗有效的剂量除以对50％的群体致死的剂量(ED50/LD50))。剂量优选在包括ED50的浓度范围内，具有很少毒性或没有毒性，并且可根据所采用的剂型、患者的敏感性和施用途径在此范围内变化。
剂量方案还考虑了本领域已知的药代动力学参数，如药物吸收率、生物利用度、代谢和清除率(参见例如，Hidalgo-Aragones,J.Steroid Biochem.Mol.Biol.58:611-617(1996)；Groning等人,Pharmazie51:337-341(1996)；Fotherby,Contraception 54:59-69(1996)；以及Johnson等人,J.Pharm.Sci.84:1144-1146(1995))。对于临床医生来说，确定所治疗的每个受试者的剂量方案完全在现有技术的范围内。此外，可根据受试者所需和耐受的剂量和频率施用PANTIFOL组合物的单次或多次给药。预防性和治疗性治疗的持续时间将根据所治疗的特定疾病或疾患而变化。一些疾病适合急性治疗，而其它则需要长期、慢性治疗。PANTIFOL组合物可与另外的治疗剂连续或同时施用。
在一些实施方案中，以每平方米体表面积0.005与5000mg之间的PANTIFOL的剂量或其间的任何范围以脂质体组合物的形式施用所述PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，以每平方米体表面积0.1与1000mg之间的PANTIFOL的剂量或其间的任何范围以脂质体组合物的形式施用所述PANTIFOL组合物。
在一些实施方案中，以1mg/kg至500mg/kg、1mg/kg至250mg/kg、1mg/kg至200mg/kg、1mg/kg至150mg/kg、1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至25mg/kg、1mg/kg至20mg/kg、1mg/kg至15mg/kg、1mg/kg至10mg/kg或1mg/kg至5mg/kg或其间的任何范围的剂量以免疫缀合物组合物的形式施用所述PANTIFOL组合物。
在另一个实施方案中，所述PANTIFOL组合物与一种或多种另外的治疗剂组合施用。
在一些实施方案中，将PLp-PANTIFOL和/或靶向PLp-PANTIFOL制备为输注组合物、注射组合物、胃肠外组合物或局部组合物。在其它实施方案中，注射包括以下中的一种或多种：腹膜内注射、直接肿瘤内注射、动脉内注射和静脉内注射、皮下注射、肌内注射、经验经皮和鼻内途径递送。在另一实施方案中，PLp-PANTIFOL和/或靶向PLp-PANTIFOL是液体溶液或悬浮液。然而，本文还提供了适于在注射前溶解或悬浮于液体媒介物中的固体形式。在一些实施方案中，根据本领域已知的方法将靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物配制成肠溶包衣片剂或凝胶胶囊。
在一些实施方案中，将靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂制剂施用至中枢神经系统肿瘤，使用脂质体的缓慢、持续的颅内输注直接进入肿瘤(例如，对流增强递送(CED))。参见Saito等人,Cancer Research 64:2572-2579(2004)；Mamot等人,J.Neuro-Oncology 68:1-9(2004)。在其它实施方案中，将制剂直接施加至组织表面。还提供了聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂制剂的缓释、pH依赖性释放以及其它特定的化学或环境条件介导的释放给药(例如，贮库型注射剂和易蚀植入物)。此类释放介导的组合物的实例在本文中进一步描述或是本领域中另外已知的。
对于通过吸入施用，组合物可在使用合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)的情况下以从加压包装或喷雾器呈现的气雾剂喷雾的形式方便地递送。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀以递送计量的量来确定。
当需要全身递送化合物时，所述化合物可配制用于通过注射(例如通过快速浓注或连续输注)进行胃肠外施用。用于注射的制剂可以单位剂型提供，例如在安瓿瓶或多剂量容器中。胃肠外药物制剂包括成分的水溶液。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液的粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。或者，可将脂质体的悬浮液制备成油基悬浮液。适合的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(如芝麻油)或合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酸酯)。
或者，非靶向或靶向聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂可呈粉末形式或冻干形式，用于在使用前用合适的载体(例如无菌无热原水)重构。
所提供的组合物(例如，α和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和含有α和/或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体)也可配制成直肠或阴道组合物，如(例如)含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯的栓剂或保留灌肠剂。
使用和治疗的方法
在另外的实施方案中，本公开提供了使用聚谷氨酸化抗叶酸剂(PANTIFOL)组合物如αPANTIFOL或γPANTIFOL组合物的方法。在一些实施方案中，所述γγPANTIFOL组合物用于治疗疾病或病症。在一些实施方案中，所述ααPANTIFOL组合物用于治疗疾病或病症。
在一些实施方案中，本公开提供了一种杀死细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的γPANTIFOL或本文公开的αPANTIFOL)的组合物接触。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所接触的细胞是哺乳动物细胞。在其它实施方案中，所接触的细胞是人类细胞。在一些实施方案中，所接触的细胞是过度增殖性细胞。在其它实施方案中，所述过度增殖性细胞是癌细胞。在其它实施方案中，所述癌细胞是原代细胞或来自获自/源自选自以下的癌症的细胞系的细胞：非血液系统恶性疾病，包括例如肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症和黑素瘤；和血液系统恶性疾病，例如白血病、淋巴瘤和其它B细胞恶性疾病、骨髓瘤和其它浆细胞发育异常或恶液质。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自结肠直肠癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自卵巢癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自子宫内膜癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自胰腺癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肝癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自头颈癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自骨肉瘤的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所述方法在体内进行。在其它实施方案中，所述方法在体外进行。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种杀死细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与含有聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体(例如，本文公开的Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)接触。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的(例如，PLp-PANTIFOL和NTPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体在其表面上包含特异性地结合细胞表面上的抗原的靶向部分(例如，TLp-PANTIFOL和TPLp-PANTIFOL)。在其它实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的并且在其表面上包含特异性地结合细胞表面上的抗原的靶向部分(例如，TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所接触的细胞是哺乳动物细胞。在其它实施方案中，所接触的细胞是人类细胞。在另外的实施方案中，所接触的细胞是过度增殖性细胞。在其它实施方案中，所述过度增殖性细胞是癌细胞。在其它实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自选自以下的癌症的细胞系的细胞：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自结肠直肠癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自卵巢癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自子宫内膜癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自胰腺癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肝癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自头颈癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自骨肉瘤的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所述方法在体内进行。在其它实施方案中，所述方法在体外进行。在一些实施方案中，所述脂质体含有PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，本公开提供了一种杀死过度增殖性细胞的方法，所述方法包括使过度增殖性细胞与包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，脂质体或抗体)接触。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是非靶向的。在其它实施方案中，递送媒介物是靶向的并且在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对过度增殖性细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分对过度增殖性细胞表面上的选自由以下组成的组的抗原上的表位具有特异性亲和力：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述方法在体内进行。在一些实施方案中，所述方法在体外进行。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含由4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基组成的PANTIFOL。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在某些特定实施方案中，使用脂质体递送媒介物执行杀死过度增殖性细胞的方法，所述脂质体递送媒介物包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述递送媒介物是非靶向脂质体。在一些实施方案中，所述递送媒介物在其表面上包含对过度增殖性细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分(例如，TLp-PANTIFOL和TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，所述脂质体在其表面上包含对过度增殖性细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在其它实施方案中，所述靶向部分对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的(例如，PLp-PANTIFOL和NTPLp-PANTIFOL)。在其它实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的，并且在其表面上包含对过度增殖性细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分(例如，TPLp-PANTIFOL)。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的，并且所述脂质体在其表面上包含对过度增殖性细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分(例如，TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体包含由4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基组成的PANTIFOL。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种抑制癌细胞的增殖的方法，所述方法包括使所述癌细胞与包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的γPANTIFOL)的递送媒介物(例如，脂质体或抗体)接触。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是非靶向的。在一些实施方案中，所述递送媒介物是靶向的并且在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对癌细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含对选自以下的细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述递送媒介物是对癌细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力的抗体。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是哺乳动物细胞。在其它实施方案中，所接触的癌细胞是人类细胞。在另外的实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自选自以下的癌症的细胞系的细胞：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自结肠直肠癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自卵巢癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自子宫内膜癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自胰腺癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肝癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自头颈癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自骨肉瘤的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所述方法在体内进行。在一些实施方案中，所述方法在体外进行。在一些实施方案中，所述递送媒介物是对以上列出的细胞表面抗原中的一者上的表位具有特异性亲和力的抗体。在其它实施方案中，靶向媒介物是脂质体，所述脂质体包含对癌细胞表面上的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在其它实施方案中，所述靶向媒介物是脂质体，所述脂质体包含对以上列出的细胞表面抗原中的一者上的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述递送媒介物是聚乙二醇化的脂质体。在其它实施方案中，所述递送媒介物是非聚乙二醇化的脂质体。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含PANTIFOL组合物，所述PANTIFOL组合物含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在其它实施方案中，本公开提供了一种抑制癌细胞的增殖的方法，所述方法包括使所述癌细胞与包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的脂质体接触。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体是非靶向的。在一些实施方案中，所述脂质体是靶向的并且在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对癌细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述脂质体包含对选自以下的细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是哺乳动物细胞。在其它实施方案中，所接触的癌细胞是人类细胞。在另外的实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自选自以下的癌症的细胞系的细胞：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自结肠直肠癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自卵巢癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自子宫内膜癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自胰腺癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自肝癌的细胞系的细胞。
在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自头颈癌的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所接触的癌细胞是原代细胞或来自获自/源自骨肉瘤的细胞系的细胞。在一些实施方案中，所述方法在体内进行。在一些实施方案中，所述方法在体外进行。在其它实施方案中，所述靶向媒介物是脂质体，所述脂质体包含对以上列出的细胞表面抗原中的一者上的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的。在其它实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述脂质体包含由4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基组成的PANTIFOL。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗过度增生性病症的方法，所述方法包括向患有过度增生性病症或有患过度增生性病症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所施用的递送媒介物包含对过度增殖性细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在另外的实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分特异性地结合选自以下的细胞表面抗原：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物不含对过度增殖性细胞的细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含由4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基组成的PANTIFOL。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，过度增生性病症是癌症。在一些实施方案中，过度增生性病症是自身免疫性疾病(例如，类风湿性关节炎)。在一些实施方案中，过度增生性病症是良性或恶性肿瘤；白血病、血液系统或淋巴系统恶性疾病。在其它实施方案中，过度增生性病症选自神经元病症、神经胶质病症、星形细胞病症、下丘脑病症、腺体病症、巨噬细胞病症、上皮病症、间质病症、囊胚腔病症、炎症性病症、血管生成和免疫病症，包括自身免疫性疾病。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗过度增生性病症的方法，所述方法包括向患有过度增生性病症或有患过度增生性病症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述脂质体包含对过度增殖性细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在另外的实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，所述靶向部分特异性地结合选自以下的细胞表面抗原：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所述脂质体不含对过度增殖性细胞的细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体包含由4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基组成的PANTIFOL。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，过度增生性病症是癌症。在一些实施方案中，过度增生性病症是自身免疫性疾病(例如，类风湿性关节炎)。在一些实施方案中，过度增生性病症是良性或恶性肿瘤；白血病、血液系统或淋巴系统恶性疾病。在其它实施方案中，过度增生性病症选自神经元病症、神经胶质病症、星形细胞病症、下丘脑病症、腺体病症、巨噬细胞病症、上皮病症、间质病症、囊胚腔病症、炎症性病症、血管生成和免疫病症，包括自身免疫性疾病。
可根据所公开的方法治疗的示例性过度增生性病症包括但不限于与良性、恶化前和恶性细胞增殖相关的病症，包括但不限于赘生物和肿瘤(例如，组织细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)、癌症(例如，肺癌、小细胞肺癌、胃肠癌、肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤(例如，骨肉瘤、卡波西肉瘤)和黑素瘤)、白血病、银屑病、骨疾病、纤维增生性病症(例如，结缔组织的纤维增生性病症)和动脉粥样硬化。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所施用的递送媒介物包含对癌细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述癌症选自：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病(例如，白血病或淋巴瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢癌。在一些实施方案中，所述癌症是子宫内膜癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是肝癌。在一些实施方案中，所述癌症是头颈癌。在一些实施方案中，所述癌症是骨肉瘤。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗、减轻或抑制转移的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所公开的方法尤其提供：(1)减少或抑制原发性肿瘤、癌症或瘤形成的生长、增殖、存活、迁移或侵袭；(2)减少或抑制可能或确实发展转移的原发性肿瘤、癌症或瘤形成的生长、增殖、存活、迁移或侵袭；(3)减少或抑制由原发性肿瘤、癌症或瘤形成引起的向与原发性肿瘤、癌症或瘤形成不同的一个或多个其它部位、位置、区域或系统转移的形成或建立；(4)在转移已经形成或建立后减少或抑制与原发性肿瘤、癌症或瘤形成不同的一个或多个其它部位、位置、区域或系统处的转移的生长或增殖；和/或(5)在转移已经形成或建立后减少或抑制另外的转移的形成或建立。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所施用的递送媒介物包含对癌细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述癌症选自：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病(例如，白血病或淋巴瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢癌。在一些实施方案中，所述癌症是子宫内膜癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是肝癌。在一些实施方案中，所述癌症是头颈癌。在一些实施方案中，所述癌症是骨肉瘤。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所施用的递送媒介物包含对癌细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在另外的实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分特异性地结合选自以下的细胞表面抗原：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述癌症选自：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病(例如，白血病或淋巴瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢癌。在一些实施方案中，所述癌症是子宫内膜癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是肝癌。在一些实施方案中，所述癌症是头颈癌。在一些实施方案中，所述癌症是骨肉瘤。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述脂质体是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述脂质体包含对癌细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在另外的实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，所述靶向部分特异性地结合选自以下的细胞表面抗原：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述癌症选自：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病(例如，白血病或淋巴瘤)。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所述脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈L形式的γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含αPANTIFOL，所述αPANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈L形式的α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈D形式的γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含αPANTIFOL，所述αPANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈D形式的α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的γ-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的脂质体组合物，所述脂质体组合物含有脂质体，所述脂质体包含γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和靶向部分，所述靶向部分对癌症表面上的抗原的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，所述靶向部分特异性地结合选自以下的细胞表面抗原：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，TPLp-γPANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含非聚乙二醇化的脂质体。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈L形式的γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈D形式的γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的γ-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含αPANTIFOL，所述αPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的α-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的α-谷氨酰基。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对肿瘤特异性抗原(TSA)或肿瘤相关抗原(TAA)的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体包含对选自以下的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分：肿瘤分化抗原(例如，MART1/MelanA、gp100(Pmel17)、酪氨酸酶、TRP1和TRP2)、肿瘤特异性多谱系抗原(例如，MAGE1、MAGE3、BAGE、GAGE1、GAGE2和p15)、过表达的胚胎抗原(例如，癌胚抗原(CEA))、过表达的致癌基因或突变的肿瘤抑制基因产物(例如，p53、Ras和HER2/neu)、由染色体易位产生的独特肿瘤抗原(例如，BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK和MYL-RAR)、病毒抗原(例如，爱泼斯坦巴尔病毒抗原EBVA、人乳头瘤病毒(HPV)抗原E6或E7)、GP 100)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、前列腺特异性抗原(PSA)、PTGER4、ITGA4、CD37、CD52、CD62L(L-选择素)、CXCR4、CD69、EVI2B CD361)、SLC39A8、MICB、LRRC70、CLELC2B、HMHA1、LST1和CMTM6(CKLFSF6)。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对血液系统肿瘤抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在其它实施方案中，所述靶向部分对选自以下的血液系统肿瘤抗原的表位具有特异性亲和力：CD19、CD20、CD22、CD30、CD138、CD33、CD34、CD38、CD123、CS1、ROR1、LewisY、Igκ轻链、TCR、BCMA、TACI、BAFFR(CD268)、CALLA和NKG2DL配体)。在一些实施方案中，所述脂质体包含对B细胞淋巴瘤特异性独特型免疫球蛋白或B细胞分化抗原(例如，CD19、CD20和CD37)的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体包含对多发性骨髓瘤细胞上的抗原(例如，CS-1、CD38、CD138、MUC1、HM1.24、CYP1B1、SP17、PRAME、威尔姆斯肿瘤1WT1)和热休克蛋白gp96)或髓样细胞上的抗原(例如，TSLPR和IL-7R)的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对实体瘤抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在其它实施方案中，所述靶向部分对选自以下的血液系统肿瘤抗原的表位具有特异性亲和力：二唾液酸神经节苷脂(GD2)、邻乙酰基GD2、EGFRvIII、ErbB2、VEGFR2、FAP、间皮素、IL13Ra2(神经胶质瘤)、cMET、PSMA、L1CAM、CEA和EGFR。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对选自以下的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-γ、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白γvβ3、γvβ5或γvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对选自以下的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分：CD137、PDL1、CTLA4、CD47、KIR、TNFRSF10B(DR5)、TIM3、PD1、cMet、糖脂F77、EGFRvIII、HLAA2(NY-ESO-1)、LAG3、CD134(OX40)、HVEM、BTLA、TNFRSF25(DR3)、CD133、MAGEA3、PSCA、MUC1、CD44v6、CD44v6/7、CD44v7/8、IL11Ra、ephA2、CAIX、MNCAIX、CSPG4、MUC16、EPCAM(EGP2)、TAG72、EGP40、ErbB受体家族、ErbB2(HER2)、ErbB3/4、RAGE1、GD3、FAR、LewisY、NCAM、HLAA1/MAGE1、MAGEA1、MAGEA3、MAGE-A4、B7H3、WT1、MelanA(MART1)、HPV E6、HPV E7、甲状腺球蛋白、酪氨酸酶、PSA、CLL1GD3、TnAg、FLT3、KIT、PRSS21、CD24、PDGFR-β、SSEA4、前列腺酶(prostase)、PAP、ELF2M、ephB2、IGF1、IGFII、IGFI受体、LMP2、gp100、bcr-ab1、岩藻糖基GM1、sLe、GM3、TGS5、叶酸受体β、TEM1(CD248)、TEM7R、CLDN6、TSHR、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD7a、HLE、CD179a、ALK、聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY—BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、LAGE1a、豆荚蛋白、E7、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT1、MAD-CT2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、前列腺特异性蛋白、存活蛋白、端粒酶、PCTA1(半乳凝素8)、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄性激素受体、细胞周期蛋白B1、MYCN、RhoC、TRP2、CYP1B1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES1、LCK、AKAP4、SSX2、逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧基酯酶、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRLS、IGLL1、TSP-180、MAGE4、MAGE5、MAGE6、VEGFR1、IGF1R、肝细胞生长因子受体、p185ErbB2、p180ErbB-3、nm-23H1、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、β-连环蛋白、CDK4、Mum1、p15、p16、43-9F、5T4、791Tgp72、β-人绒毛膜促性腺激素、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3、CA 27.29(BCAA)、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68、CO-029、FGF5、G250、HTgp-175、M344、MA50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO1、RCAS1、SDCCAG16、M2BP、TAAL6、TLP和TPS、胶质瘤相关抗原、γ-胎蛋白(AFP)、AFP的p26片段、凝集素反应性AFP以及TLR4。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对选自以下的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分：PDGFRA、VEGFR1、VEGFR3、神经纤毛蛋白1(NRP1)、神经纤毛蛋白2(NRP2)、乙胞素、PLGF、RET(转染重排)、TIE1、TIE2(TEK)、CA125、CD3、CD4、CD7、CD10、CD13、CD25 CD32、CD32b、CD44(例如，CD44v6)、CD47、CD49e(整联蛋白γ5)、CD54(ICAM)、CD55、CD64、CD74、CD80、CD90、CD200、CD147、CD166、CD200、ESA、SHH、DHH、IHH、patched1(PTCH1)、smoothened(SMO)、WNT1、WNT2B、WNT3A、WNT4、WNT4A、WNT5A、WNT5B、WNT7B、WNT8A、WNT10A、WNT10B、WNT16B、LKP5、LRP5、LRP6、FZD1、FZD2、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、Notch、Notch1、Notch3、Notch4、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2、Jagged3、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFRSF7(CD27)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF10A(TRAILRl、DR4)、TNFRSF11A(RANK)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFRSF19L(KELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、ILIRI、1L1R2、IL2R、IL5R、IL6R、1L8R、IL10R、IL12R、IL13R、IL15R、IL18R、IL19R、IL21R、IL23R、XAG1、XAG3、REGIV、FGFR1、FGFR2、FGFR3、ALK、ALK1、ALK7、ALCAM、Axl、TGFb、TGFb2、TGFb3、TGFBR1、IGFIIR、BMPRI、N-钙粘蛋白、E-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白、神经节苷脂GM2、神经节苷脂GD3、PSGR、DCC、CDCP1、CXCR2、CXCR7、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR10、密封蛋白1、密封蛋白2、密封蛋白3、密封蛋白4、TMEFF2、神经调节蛋白、MCSF、CSF、CSFR(fms)、GCSF、GCSFR、BCAM、BRCA1、BRCA2、HLA-DR、ABCC3、ABCB5、HM 1.24、LFA1、LYNX、S100A8、S100A9、SCF、冯维勒布兰德因子、Lewis Y6受体、CA G250(CA9)、CRYPTO、VLA5、HLADR、MUCl8、粘蛋白CanAg、EGFL7、整联蛋白avb3、整联蛋白γ5β活化素Blγ、白三烯B4受体(LTB4R)、神经降压素NT受体(NTR)、5T4癌胚抗原、肌腱蛋白C、MMP、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、MMP14、MMP26、组织蛋白酶G、SULF1、SULF2、MET、CA9、TM4SF1、多配体聚糖(SDCl)、肝配蛋白B4、TEM1、TGFβ1以及TGFBRII。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述脂质体包含靶向部分，所述靶向部分对与免疫系统病症(例如，自身免疫性病症和炎症性病症)相关的抗原的表位具有特异性亲和力，或与调控免疫应答相关。在一些实施方案中，所述靶向部分对在巨噬细胞(表达CD44)的表面上表达的细胞表面抗原的表位具有特异性亲和力。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对免疫抑制靶标的表位具有特异性亲和力的靶向部分。在另一个实施方案中，AD是选自以下的免疫抑制靶标的表位：IL1Ra、IL6R、CD26L、CD28、CD80、FcγRIIB。在另一个实施方案中，衔接子中的AD是选自以下的免疫刺激靶标的表位：CD25、CD28、CTLA4、PD1、B7H1(PDL1)、B7H4 TGFβ、TNFRSF4(OX40)、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF9(41BB、CD137)、TNFRSF14(HVEM)、TNFRSF25(DR3)和TNFRSF18(GITR)。
在一些实施方案中，所述脂质体包含对选自以下的抗原的表位具有特异性亲和力的靶向部分：IL1Rb、C3AR、C5AR、CXCR1、CXCR2、CCR1、CCR3、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、ChemR23、MPL、GP130、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9、TREM1、TREM2、CD49a(整联蛋白γ1)、整联蛋白a5b3、γ4整联蛋白亚基、A4B7整联蛋白、组织蛋白酶G、TNFRSF3(LTBR)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF11A(RANK)、TNFRSF16(NGFR)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、CD14、CD23、CD36、CD36L、CD39、CD91、CD153、CD164、CD200、CD200R、B71(CD80)、B72(CD86)、B7h、B7DC(PDL2)、ICOS、ICOSL、MHC、CD、B7H2、B7H3、B7x、SLAM、KIM1、SLAMF2、SLAMF3、SLAMF4、SLAMF5、SLAMF6、SLAMF7、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFRSF5(CD40)、IL1R、IL2R、IL4Ra、IL5R、IL6RIL15R、IL17R、IL17Rb、IL17RC、IL22RA、IL23R、TSLPR、B7RP1、cKit、GMCSF、GMCSFR、CD2、CD4、CD11a、CD18、CD30、CD40、CD86、CXCR3、CCR2、CCR4、CCR5、CCR8、RhD、IgE以及Rh。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有在其细胞表面上表达叶酸受体的癌症或有患所述癌症风险的受试者施用有效量的脂质体组合物，其中所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体包含(a)聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，γPANTIFOL或αPANTIFOL)和(b)对叶酸受体具有特异性结合亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和/或叶酸受体δ(FR-δ)具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和/或叶酸受体δ(FR-δ)具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)和叶酸受体β(FR-β)具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含非聚乙二醇化的脂质体。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈D形式的γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的γ-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含αPANTIFOL，所述αPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的α-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体组合物的脂质体包含六谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗上皮组织恶性疾病。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)癌症。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗卵巢癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗子宫内膜癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肝癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗头颈癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗骨肉瘤。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗肺癌(例如，非小细胞肺癌)的方法，所述方法包括向患有肺癌或有患肺癌风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在特定实施方案中，所述癌症是非小细胞肺癌。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述递送媒介物在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对肺癌(例如，非小细胞肺癌)细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：粘蛋白1、结合素4、NaPi2b、CD56、EGFR和SC-16。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗体的片段。在另外的实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，并且所述脂质体包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：粘蛋白1、结合素4、NaPi2b、CD56、EGFR和SC-16。在其它实施方案中，所述递送媒介物是聚乙二醇化脂质体，所述脂质体包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：粘蛋白1、结合素4、NaPi2b、CD56、EGFR和SC-16。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗胰腺癌的方法，所述方法包括向患有胰腺癌或有患胰腺癌风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体(ADC)或脂质体)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述递送媒介物在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对胰腺癌细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：TACSTD2(TROP2)、粘蛋白1、间皮素、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4和结合素4。在其它实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，并且所述脂质体包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：TACSTD2(TROP2)、粘蛋白1、间皮素、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4和结合素4。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌(雌激素受体-、孕激素受体-和HER2))的方法，所述方法包括向患有乳腺癌或有患乳腺癌风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是包含γ聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述递送媒介物在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对乳腺癌细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：LIV-1(ZIP6)、EGFR、HER2、HER3、粘蛋白1、GONMB和结合素4。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗体的片段。在另外的实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，并且所述脂质体包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：LIV-1(ZIP6)、EGFR、HER2、HER3、粘蛋白1、GONMB和结合素4。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患有血液系统癌症或有患血液系统癌症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述递送媒介物在其表面上包含靶向部分，所述靶向部分对血液癌细胞表面上的抗原上的表位具有特异性亲和力。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：CD30、CD79b、CD19、CD138、CD74、CD37、CD19、CD22、CD33、CD34和CD98。在其它实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，并且所述脂质体包含对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分：CD30、CD79b、CD19、CD138、CD74、CD37、CD19、CD22、CD33、CD34和CD98。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗患有癌症或有患癌症风险的受试者的方法，所述癌症可通过其细胞表面上的抗原的表达的来区分。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)，所述递送媒介物包含对所述癌症的表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分和聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗体的片段。在另外的实施方案中，所述递送媒介物是脂质体。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含由4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基组成的PANTIFOL。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，向患有癌症、实体瘤和/或转移或有患癌症、实体瘤和/或转移的风险的受试者施用所公开的组合物(例如，含有α或γ聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体)，所述癌症、实体瘤和/或转移可通过其细胞表面上的肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的表达来区分。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症、实体瘤和/或转移或有患癌症、实体瘤和/或转移风险的受试者施用有效量的包含靶向部分和聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)递送媒介物(例如，脂质体)，所述癌症、实体瘤和/或转移可通过其细胞表面上的肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的表达来区分，并且其中所述靶向部分对肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原上的表位具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是脂质体。在其它实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分对癌症、实体瘤和/或转移细胞表面上的表达的细胞表面抗原上的表位具有特异性亲和力，所述细胞表面抗原例如叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、ErbB4、EGFR、EGFRvIII、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR6、IGFR-1、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、SMO、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD8、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD28、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD98、CD105、CD133、CD138、cripto、IGF-1R、IGF-2R、EphA1、EphA受体、EphB受体、EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB6、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CanAg、CALLA、c-Met、VEGFR-1、VEGFR-2、DDR1、PDGFRα、PDGFRβ、TrkA、TrkB、TrkC、UFO、LTK、ALK、Tie1、Tie2、PTK7、Ryk、TCR、NMDAR、LNGFR和MuSK。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分对源自或被确定为在特定受试者的癌症(肿瘤)上表达的一种或多种细胞表面抗原(如新抗原)上的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈L形式的γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈L形式的γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或超过10个呈D形式的γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含γPANTIFOL，所述γPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的γ-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的γ-谷氨酰基。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含αPANTIFOL，所述αPANTIFOL含有2个、3个、4个、5个或超过5个呈L形式的α-谷氨酰基，和1个、2个、3个、4个、5个或超过5个呈D形式的α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。
在另外的实施方案中，所述靶向部分对选自以下的抗原上的表位具有特异性亲和力：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。
在其它实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，并且所述脂质体包含特异性地结合选自以下的细胞表面抗原的靶向部分：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所述脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述脂质体包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在其它实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)，所述递送媒介物在其表面上包含特异性地结合叶酸受体的靶向部分和聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)，所述癌症含有在其细胞表面上表达叶酸受体的细胞。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗体的抗原结合片段。在其它实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α、叶酸受体β或叶酸受体δ具有特异性亲和力。如本文所公开的，与正常细胞相比，含有γ聚谷氨酸化抗叶酸剂的叶酸受体靶向聚乙二醇化脂质体能够向癌细胞、且特别是表达叶酸受体的癌细胞递送大量γ聚谷氨酸化抗叶酸剂(即，与癌细胞不同的细胞不会主动摄取脂质体，和/或不表达叶酸受体)。表达叶酸受体的任何癌症都可根据所公开的方法进行治疗。应该注意的是，一些癌症可能在早期表达叶酸受体，而大多数癌症可能在晚期表达叶酸受体。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是脂质体。在其它实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于癌症维持疗法的方法，所述方法包括向正在进行癌症疗法或已经进行了癌症疗法的受试者施用有效量的脂质体组合物，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体含有聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物是PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，PLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含对癌细胞的表面抗原上的表位具有特异性亲和力的靶向部分(例如，TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化的且包含靶向部分的脂质体(例如，TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含靶向的脂质体和不包含靶向部分(例如，非靶向)的脂质体。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化的脂质体和非聚乙二醇化的脂质体。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含聚谷氨酸化抗叶酸剂，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的脂质体组合物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，通过本文公开的一种或多种方法治疗的癌症是实体瘤淋巴瘤。实体瘤淋巴瘤的实例包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和B细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，通过本文公开的一种或多种方法治疗的癌症是骨癌、脑癌、乳腺癌、结肠直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、上皮内肿瘤、黑素瘤成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、前列腺癌、成视网膜细胞瘤或横纹肌肉瘤。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含递送媒介物和γ聚谷氨酸化抗叶酸剂的组合物。在一些实施方案中，所施用的组合物包含聚乙二醇化的递送媒介物。在一些实施方案中，所施用的组合物包含靶向部分，所述靶向部分对目标靶细胞(如癌细胞)表面上的抗原的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗选自以下的癌症：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)癌症。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢癌。在一些实施方案中，所述癌症是子宫内膜癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是肝癌。在一些实施方案中，所述癌症是头颈癌。在一些实施方案中，所述癌症是骨肉瘤。
在一些实施方案中，所施用的组合物含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是免疫缀合物。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的脂质体组合物，所述脂质体组合物包含含有聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体(例如，Lp-PANTIFOL、PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗卵巢癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗子宫内膜癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肝癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗头颈癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗骨肉瘤。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，PLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含靶向脂质体的脂质体组合物(例如，TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)，其中所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(Lp-PANTIFOL)并且还包含对癌症上的表面抗原(表位)具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的脂质体组合物，所述脂质体组合物包含含有聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体(例如，Lp-PANTIFOL、PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)癌症。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗卵巢癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗子宫内膜癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肝癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗头颈癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗骨肉瘤。
在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，PLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的包含靶向脂质体的脂质体组合物(例如，TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)，其中所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(Lp-PANTIFOL)并且还包含对癌症上的表面抗原(表位)具有特异性亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠直肠癌、食道癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、肉瘤(例如，骨肉瘤)、脑癌、中枢神经系统癌症、黑素瘤、骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)癌症。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗卵巢癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗子宫内膜癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肝癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗头颈癌。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗骨肉瘤。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，PLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在其它实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有在其细胞表面上表达叶酸受体的癌症或有患所述癌症风险的受试者施用有效量的含有靶向脂质体的脂质体组合物(例如，TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)，其中所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体包含(a)聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，γPANTIFOL或αPANTIFOL)和(b)对叶酸受体具有特异性结合亲和力的靶向部分。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含聚乙二醇化脂质体(例如，TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述脂质体组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和/或叶酸受体δ(FR-δ)具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和/或叶酸受体δ(FR-δ)具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-α)和叶酸受体β(FR-β)具有特异性结合亲和力。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗选自以下的癌症：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)癌症。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗卵巢癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗子宫内膜癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗肝癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗头颈癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗骨肉瘤。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的脂质体组合物的脂质体包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的脂质体组合物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗免疫系统病症(例如，自身免疫性疾病，如炎症和类风湿性关节炎)的方法，所述方法包括向患有免疫系统病症或有患免疫系统病症风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，自身免疫性疾病是类风湿性关节炎。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。
在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所施用的递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分对与免疫系统病症相关的免疫细胞表面上的抗原的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂或α四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗感染性疾病(例如，HIV、疟疾和血吸虫病)的方法，所述方法包括向患有感染性疾病或有患感染性疾病风险的受试者施用有效量的包含聚谷氨酸化抗叶酸剂(例如，本文公开的PANTIFOL)的递送媒介物(例如，抗体或脂质体)。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式I II-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是非聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所施用的递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分对与感染性疾病相关的病原体表面上的抗原的表位具有特异性亲和力。在一些实施方案中，所述靶向部分是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含PANTIFOL，所述PANTIFOL含有4个、5个、2-10个、4-6个或超过5个γ-谷氨酰基或α-谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ四谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ五谷氨酸化抗叶酸剂或α五谷氨酸化抗叶酸剂。在其它实施方案中，所施用的递送媒介物包含γ六谷氨酸化抗叶酸剂或α六谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所施用的递送媒介物包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
在一些实施方案中，所施用的递送媒介物是脂质体或抗体。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述递送媒介物是抗体(例如，全长IgG抗体、双特异性抗体或scFv)。在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体(例如，Lp-PANTIFOL，如PLp-PANTIFOL、NTLp-PANTIFOL、NTPLp-PANTIFOL、TLp-PANTIFOL或TPLp-PANTIFOL)。在其它实施方案中，所述脂质体是聚乙二醇化的。在另外的实施方案中，所述递送媒介物在其表面上包含特异性地结合目标靶细胞表面上的抗原的靶向部分。在其它实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分，所述靶向部分特异性地结合选自以下的细胞表面抗原：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。
在其它实施方案中，所述递送媒介物是脂质体，并且所述脂质体包含特异性地结合选自以下的细胞表面抗原的靶向部分：GONMB、TACSTD2(TROP2)、CEACAM5、EPCAM、叶酸受体(例如，叶酸受体-α、叶酸受体-β或叶酸受体-δ)、粘蛋白1(MUC-1)、MUC-6、STEAP1、间皮素、结合素4、ENPP3、鸟苷酸环化酶C(GCC)、SLC44A4、NaPi2b、CD70(TNFSF7)、CA9(碳酸酐酶)、5T4(TPBG)、SLTRK6、SC-16、组织因子、LIV-1(ZIP6)、CGEN-15027、P-钙粘蛋白、纤连蛋白外结构域B(ED-B)、VEGFR2(CD309)、肌腱蛋白、胶原蛋白IV、骨膜蛋白、内皮素受体、HER2、HER3、EGFR、IGFR-1、EGFRvIII、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD11a、CD15、CD18、CD19、CD20、CD22、CD26、CD27L、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD74、CD79、CD79b、CD105、CD133、CD138、cripto、CD38、EphA受体、EphB受体、EphA2、整联蛋白(例如，整联蛋白αvβ3、αvβ5或αvβ6)、C242抗原、Apo2、PSGR、NGEP、PSCA、TMEFF2、内皮糖蛋白、PSMA、CD98、CD56、CanAg和CALLA。在一些实施方案中，所述脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，本公开提供了包含聚谷氨酸化抗叶酸剂的组合物用于制造用于治疗过度增生性疾病的药物的用途。在一些实施方案中，所述组合物包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述组合物包含含有靶向部分的脂质体。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是γ聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述γ聚谷氨酸化抗叶酸剂包含5个或更多个谷氨酰基。在一些实施方案中，所述γ聚谷氨酸化抗叶酸剂是五谷氨酸化的或六谷氨酸化的。在一些实施方案中，所述γ聚谷氨酸化抗叶酸剂在脂质体中。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是α聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述α聚谷氨酸化抗叶酸剂包含5个或更多个谷氨酰基。在一些实施方案中，所述α聚谷氨酸化抗叶酸剂是五谷氨酸化的或六谷氨酸化的。在一些实施方案中，所述α聚谷氨酸化抗叶酸剂在脂质体中。在一些实施方案中，所述过度增生性疾病是癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自：肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。在一些实施方案中，所述癌症选自：乳腺癌、晚期头颈癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、蕈样真菌病(皮肤T细胞淋巴瘤)、绒毛膜癌、绒毛膜腺瘤、非白血病性脑膜癌、软组织肉瘤(硬纤维瘤、侵袭性纤维瘤病)、膀胱癌和中枢神经系统(CNS)淋巴瘤。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗肺癌(例如，NSCLC或间皮瘤)。在一些实施方案中，施用所述脂质体组合物以治疗乳腺癌(例如，HER2++或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗卵巢癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗子宫内膜癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗肝癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗头颈癌。在一些实施方案中，施用所述组合物以治疗骨肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，所述过度增生性疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方案中，所述过度增生性疾病是炎症和类风湿性关节炎。
所公开的方法可在可能受益于本文预期的组合物(例如，γ聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物，如含有γ五谷氨酸化或γ六谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体；α聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物，如含有α五谷氨酸化或α六谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体)的递送的任何受试者中实践。哺乳动物受试者，且特别是人受试者是优选的。在一些实施方案中，受试者还包括动物，如家养宠物(例如，狗、猫、兔和雪貂)、牲畜或家畜(例如，牛、猪、羊，鸡和其它家禽)、马(如纯种马)、实验室动物(例如，小鼠、大鼠和兔)和其它哺乳动物。在其它实施方案中，受试者包括鱼和其它水生物种。
向其递送剂的受试者可以是正常受试者。或者，受试者可患有疾患或有发展疾患的风险，所述疾患可被诊断或可受益于一种或多种所提供的组合物的递送。在一些实施方案中，此类疾患包括癌症(例如，实体瘤癌症或非实体癌，如白血病)。在一些实施方案中，这些疾患(例如，癌症)涉及表达抗原的细胞，所述抗原可由本文公开的靶向聚乙二醇化脂质体γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和/或α聚谷氨酸化抗叶酸剂特异性地结合。在其它实施方案中，这些抗原特异性地结合靶向聚乙二醇化脂质体γ聚谷氨酸化抗叶酸剂并将所述聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂内化至细胞中。在一些实施方案中，所述靶向聚乙二醇化脂质体γ聚谷氨酸化抗叶酸剂和/或α聚谷氨酸化抗叶酸剂特异性地结合在癌细胞表面上表达的叶酸受体(例如，叶酸受体α(FR-α)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ))。
用于诊断可用所提供的组合物治疗的疾患的测试是本领域已知的并且对于医疗从业者来说是熟悉的。可使用市售抗体确定细胞类型是否表达叶酸受体。这些实验室测试包括但不限于显微镜分析、培养依赖性测试(如培养)和核酸检测测试。这些包括湿支架、染色增强显微镜、免疫显微镜(例如，FISH)、杂交显微术、颗粒凝集、酶联免疫吸附测定、尿液筛选测试、DNA探针杂交和血清学测试。除了进行上述实验室测试外，执业医师通常还会记录完整的病史并进行全面的体检。
患有癌症的受试者可以是例如具有可检测的癌细胞的受试者。例如，有患癌症风险的受试者可以是具有高于发展癌症的正常概率的受试者。这些受试者包括，例如，具有已证明与发展癌症的可能性更高相关的遗传异常的受试者、具有癌症家族素因的受试者、暴露于致癌因子(即致癌物)如烟草、石棉或其它化学毒素的受试者、以及先前接受过癌症治疗并明显缓解的受试者。
在一些实施方案中，本公开提供了用于将叶酸受体靶向的聚乙二醇化脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂以比在其细胞表面上不表达叶酸受体的细胞更高的速率(例如，高至少两倍、高至少三倍、高至少四倍或高至少五倍)选择性地递送至在表面上表达叶酸受体的肿瘤细胞的方法。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含Lγ聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含Lα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基或D-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含L和Dγ聚谷氨酸化抗叶酸剂或L和Dα聚谷氨酸化抗叶酸剂。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基或L-α谷氨酰基。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-γ谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-γ谷氨酰基。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化脂质体包含2个、3个、4个、5个或超过5个L-α谷氨酰基和2个、3个、4个、5个或超过5个D-α谷氨酰基。
组合疗法
在某些实施方案中，除了施用本文所述的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物之外，所述方法或治疗还包括施用至少一种另外的治疗剂。可在施用聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物之前、同时和/或之后施用另外的治疗剂。所述另外的治疗剂可与存在于含有聚谷氨酸化抗叶酸剂递送媒介物的溶液中的聚谷氨酸化抗叶酸剂递送媒介物(例如，与脂质体中的聚谷氨酸化抗叶酸剂共包封)缔合，或在与含有聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物的组合物分开的制剂中。还提供了包含多肽或剂与一种或多种另外的治疗剂的药物组合物。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂包括1、2、3或更多种另外的治疗剂。
使用两种或更多种治疗剂的组合疗法经常使用通过不同作用机制起作用的剂，虽然这并非必要的。使用具有不同作用机制的剂的组合疗法可产生相加或协同效应。组合疗法可允许每一剂的使用剂量低于单一疗法中所使用的剂量，从而降低毒性副作用和/或增加一种或多种多肽或剂的治疗指数。组合疗法可降低将发展耐药性癌细胞的可能性。在一些实施方案中，组合疗法包括影响免疫应答(例如，增强或活化应答)的治疗剂和影响(例如，抑制或杀死)肿瘤/癌细胞的治疗剂。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括施用有效量的本文公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物和生物制剂。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂与治疗性抗体组合施用。在其它实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂与抗CD抗体(例如，利妥昔单抗)或结合免疫检查点蛋白(例如，CTLA4、PD1、PDL1和TIM3)的抗体组合施用。在其它实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂与fc融合蛋白(例如，依那西普)组合施用。
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗免疫系统病症的方法，所述方法包括施用有效量的本文公开的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物和生物制剂。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂与治疗性抗体组合施用。在其它实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂与抗TNF抗体(例如，阿达木单抗)组合施用。在一些实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂与fc融合蛋白(例如，依那西普)组合施用。
在本文所述的方法的一些实施方案中，本文所述的PANTIFOL组合物与至少一种另外的治疗剂的组合产生相加或协同结果。在一些实施方案中，组合疗法使得PANTIFOL或剂的治疗指数增加。在一些实施方案中，组合疗法使得一种或多种另外治疗剂的治疗指数增加。在一些实施方案中，组合疗法使得PANTIFOL或剂的毒性和/或副作用降低。在一些实施方案中，组合疗法使得一种或多种另外治疗剂的毒性和/或副作用降低。
在一些实施方案中，除了施用本文所述的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物之外，本文所述的方法或治疗还包括施用选自以下的至少一种另外的治疗剂：抗微管蛋白剂、奥瑞斯他汀、DNA小沟结合剂、DNA复制抑制剂、烷化剂(例如，铂复合物，如顺铂、单(铂)、双(铂)和三核铂复合物及卡铂)、蒽环类药物、抗生素、抗叶酸剂(例如，可聚谷氨酸化的抗叶酸剂或不可聚谷氨酸化的抗叶酸剂)、抗有丝分裂剂(例如，长春花生物碱，如长春新碱、长春碱、长春瑞滨或长春地碱)、辐射敏化剂、类固醇、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂(例如，阿霉素HCl、柠檬酸柔红霉素、米托蒽醌HCl、放线菌素D、依托泊苷、拓扑替康HCl、替尼泊苷(VM-26)和伊立替康)、抗代谢药、化疗增敏剂、倍癌霉素、依托泊苷、氟化嘧啶、离子载体、拉克左素(lexitropsin)、亚硝基脲、顺铂、嘌呤抗代谢药、PARP抑制剂和嘌呤霉素。在某些实施方案中，第二治疗剂是烷化剂、抗代谢药、抗有丝分裂剂、拓扑异构酶抑制剂或血管生成抑制剂。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
可与本文所述的PANTIFOL组合物组合施用的治疗剂包括化学治疗剂。因此，在一些实施方案中，本文所述的方法或治疗还包括将本文所述的PANTIFOL组合物与化学治疗剂组合或与化学治疗剂混合物组合施用。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。用PANTIFOL组合物治疗可在施用化学疗法之前、同时或之后发生。组合施用可包括共同施用(无论是在单一药物制剂中还是使用分开的制剂)，或以任何顺序连续施用，但通常在一段期间内使用，从而使所有活性剂能够同时发挥其生物活性。此类化学治疗剂的制备和给药时间表可根据制造商的说明书使用或由技术熟练的从业人员根据经验决定。这种化学疗法的制备和给药时间表也描述于The Chemotherapy Source Book,第4版,2008,M.C.Perry,编辑,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,PA中。
可用于本发明的化学治疗剂包括但不限于烷化剂，如噻替哌和环磷酰胺
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烷基磺酸酯，如白消安、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮杂环丙院，诸如苯佐多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)和尤利多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基密胺(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基密胺；氮芥，如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酸胺、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆固醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，如卡莫司汀、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，如阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸、博来霉素(bleomycins)、放线菌素(cactinomycin)、卡奇霉素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycins)、更生霉素、道诺霉素、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药，如抗叶酸剂和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、抗叶酸剂、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、二去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷、5-FU；雄激素，如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素药，如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安丫啶(amsacrine)；贝曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；德福法明(defofamine)；秋水仙胺(de mecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸；2-乙基线肼；丙卡巴肼；PSK；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；尿烷(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷(Ara-C)；紫杉烷类，如紫杉醇
Figure BDA0003575147470002731
和多西他赛
Figure BDA0003575147470002732
苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯佩拉霉素(esperamicins)；卡培他滨
Figure BDA0003575147470002733
抗激素剂，如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬
Figure BDA0003575147470002734
抗雄激素，如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林和戈舍瑞林(goserelin)；以及根据上述任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方案中，另外的治疗剂是顺铂。在某些实施方案中，另外的治疗剂是卡铂。在其它实施方案中，另外的治疗剂是奥沙利铂(oxaloplatin)。
可与本文所述的PANTIFOL组合物组合施用的另外治疗剂包括一种或多种免疫治疗剂。
在一些实施方案中，本文所述的PANTIFOL组合物与抑制一种或多种T细胞相关的抑制性分子(例如，CTLA4、PD1、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3，CD223)、T细胞免疫球蛋白-3(TIM-3)、T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)、T细胞活化的V结构域Ig抑制因子(VISTA)、B7同源物3(B7-H3，CD276)、B和T细胞淋巴细胞衰减子(BTLA，CD272)或腺苷A2a受体(A2aR)或CD73)的免疫治疗剂组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与免疫治疗剂分开施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与免疫治疗剂同时(例如，同时或连续地)施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物和免疫治疗剂被包封在同一脂质体内或以其它方式与同一脂质体缔合。
在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与PD1抑制剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与派姆单抗组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与纳武单抗组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与PD1抑制剂分开施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与PD1抑制剂同时(例如，同时或连续地)施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物和PD1抑制剂被包封在同一脂质体内或以其它方式与同一脂质体缔合。
在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与PDL1抑制剂组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与阿特珠单抗组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与阿维鲁单抗组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与德瓦鲁单抗组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与PDR001组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与PDL-1抑制剂分开施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与PDL-1抑制剂同时(例如，同时或连续地)施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物和PDL-1抑制剂被包封在同一脂质体内或以其它方式与同一脂质体缔合。
在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与抑制CTLA4LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、B7-H3、BTLA、A2aR或CD73的活性的治疗剂组合施用PANTIFOL组合物。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与CTLA4抑制剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与伊匹单抗组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与LAG3抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与TSR-033、MK-4280、LAG525、BMS-986106或MGD013组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与TIM-3抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与MBG453或MEDI9447组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与TIGIT抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，PANTIFOL组合物与BMS-986207或OMP-31M32组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与VISTA抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与JNJ-61610588或CA-170组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与B7-H3抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与neoblituzumab、恩利珠单抗(enoblituzumab)、MGD009或8H9组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与BTLA抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与A2aR或CD73抑制剂组合施用PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与CPI444组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与免疫治疗剂分开施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与免疫治疗剂同时(例如，同时或连续地)施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物和免疫治疗剂被包封在同一脂质体内或以其它方式与同一脂质体缔合。
在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与抑制转化生长因子(TGF)-β、磷酸肌醇3-激酶γ(PI3Kγ)、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR，CD158)、CD47或吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)活性的治疗剂组合施用PANTIFOL组合物。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与TGFβ拮抗剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与M7824或盖伦塞替(Galusertinib)(LY2157299)组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与PI3Kγ拮抗剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与IPI-549组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与KIR拮抗剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与IPH4102或立鲁单抗(lirilumab)组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与CD47拮抗剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与Hu5F9-G4或TTI-621组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与IDO拮抗剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与BMS-986205、吲哚莫德(indoximod)或艾卡哚司他(epacadostat)组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与治疗剂分开施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与治疗剂同时(例如，同时或连续地)施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物和治疗剂被包封在同一脂质体内或以其它方式与同一脂质体缔合。
在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与治疗剂组合施用PANTIFOL组合物，所述治疗剂是OX40(CD134)、诱导型共刺激剂(ICOS)、糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关蛋白(GITR)、4-1BB(CD137)、CD40、CD27-CD70或Toll样受体(TLR)的激动剂。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与OX40激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与GSK3174998、MOXR0916、9B12、PF-04518600(PF-8600)、MEDI6383、MEDI0562、INCAGN01949或GSK3174998组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与ICOS激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与JTX-2011、GSK3359609或MEDI-570组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与GITR激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与TRX-518、AMG 228、BMS-986156、MEDI1873、MK-4166、INCAGN01876或GWN32组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与4-1BB激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与乌托鲁单抗(utomilumab)或乌瑞鲁单抗(urelumab)(PF-05082566)组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与CD40激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与CP-870893、APX005M、ADC-1013、鲁卡木单抗(lucatumumab)、Chi Lob 7/4、达西珠单抗(dacetuzumab)、SEA-CD40或RO7009789组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与CD27-CD70激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与ARGX-110或BMS-936561(MDX-1203)组合施用。在一些实施方案中，本文提供的治疗方法包括与TLR激动剂组合施用本文所述的PANTIFOL组合物。在其它实施方案中，所述PANTIFOL组合物与MEDI9197、PG545(pixatimod，pINN)或聚-ICLC组合施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与治疗剂分开施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物与治疗剂同时(例如，同时或连续地)施用。在一些实施方案中，所述PANTIFOL组合物和治疗剂被包封在同一脂质体内或以其它方式与同一脂质体缔合。
在一些实施方案中，本公开提供了组合疗法，其中本文所述的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与另一种DMARD组合施用。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在其它实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与柳氮磺胺吡啶或羟氯喹组合施用。在一些实施方案中，本公开提供了组合疗法，其中本文所述的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与氯喹组合施用。
在一些实施方案中，本公开提供了组合疗法，其中本文所述的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与类固醇组合施用。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在其它实施方案中，所述聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与泼尼松龙组合施用。
在一些实施方案中，本公开提供了组合疗法，其中本文所述的聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物与生物制剂组合施用。在一些实施方案中，所施用的聚谷氨酸化抗叶酸剂是本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。在一些实施方案中，所述生物制剂是治疗性抗体。在其它实施方案中，所述治疗剂结合TNF-α或CD-20。
包括PANTIFOL组合物的药盒
本公开还提供了药盒，所述药盒包括本文所述的PANTIFOL组合物并且可用于执行本文所述的方法。在某些实施方案中，药盒包括在一个或多个容器中的至少一种纯化的PANTIFOL组合物。在一些实施方案中，所述药盒包括本公开的αPANTIFOL和/或γPANTIFOL，如本公开的基本上纯的γPANTIFOL(例如，式III-1-L、III-1-D或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L或IV-1-D)或本公开的基本上纯的αPANTIFOL(例如，式III-1-L-α、III-1-D-α或其药学上可接受的盐，或式IV-1-L-α或IV-1-D-α)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述药盒含有进行检测测定所必需的和/或足够的所有组分，包括所有对照物、用于进行测定的指导以及用于结果的分析和呈现的任何必要的软件。本领域的技术人员将容易地认识到，所公开的剂可容易地并入本领域中熟知的已建立的药盒形式之一。
在一些实施方案中，所述药盒包括至少一种如本文公开的PANTIFOL组合物(例如，PANTIFOL脂质体)或其药物制剂的剂量(例如，用于治疗或诊断)。药盒还可包括适合的包装和/或使用所述组合物的说明书。药盒还可包括用于递送所述组合物或其药物制剂的装置，诸如，如本文所述和本领域技术人员已知的注射用注射器或其它装置。本领域的技术人员将容易地认识到，所公开的PANTIFOL组合物可容易地并入本领域中熟知的已建立的药盒形式之一。
还提供了包括PANTIFOL组合物以及至少一种另外的治疗剂的药盒。在某些实施方案中，所述第二(或更多)治疗剂是抗代谢药。在某些实施方案中，所述第二(或更多)治疗剂是化学治疗剂。
以下实施例是意图说明，但并非是以明确或隐含地任何方式、状态或形式限制本公开。虽然它们是可使用的实施例中的典型实施例，但可在不脱离本公开的范围的情况下使用本领域技术人员已知的其它程序、方法或技术。
实施例
优选实施方案的各种起始材料、中间体和化合物可在适当的情况下使用常规技术如沉淀、过滤、结晶、蒸发、蒸馏和色谱法进行分离和纯化。可使用常规方法，如通过熔点、元素分析、旋光度、质谱法、NMR(核磁共振)和各种其它光谱分析对这些化合物进行表征。下文更详细地描述了用于进行本文所述的产物合成的步骤的示例性实施方案。
实施例1.化合物J的合成
步骤1.
Figure BDA0003575147470002801
将二氯甲烷(DCM)(20kg，10V)和Cbz-Glu-OtBu(1.8kg,1.05当量)装入30L反应器中。将反应物质冷却至10℃。在10℃下将HATU(2.31kg，1.2当量)和二异丙基乙胺(DIPEA)(1.65kg，2.5当量)添加至反应混合物中。使所述反应混合物温至室温并搅拌30分钟。在室温下将Glu(OtBu)-OtBu-HCl(1.5kg，1.0当量)添加至所述反应混合物中。将所述反应混合物在室温下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明Glu(OtBu)-OtBu-HCl不可检测到。添加10％的柠檬酸水溶液(11.83kg)并搅拌10分钟。分离各层，并将有机层用10％柠檬酸水溶液(12.02kg)洗涤。分离各层，并将有机层用10％柠檬酸水溶液(12.22kg)洗涤。缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液(12.11kg)并搅拌10分钟。
分离各层，并将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(11.92kg)洗涤。将有机层用盐水(13.7kg)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶上柱色谱法(己烷/EtOAc＝5:1)纯化。将级分在真空下浓缩至2V(约3L)。添加己烷(8.25L，8V)并搅拌30分钟。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在空气中干燥，得到2.4kg的白色固体材料，具有99.5％纯度和81.8％产率。
步骤2.
Figure BDA0003575147470002811
将MeOH(12kg，6V)和化合物A(2.4kg，1.0当量)装入30L反应器中。进行了氮置换和保护。在10℃至20℃下添加10％Pd/C(0.25kg)。将反应混合物在氢气(H2)气氛下在45℃下搅拌12小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物A不可检测到。进行了氮置换。将混合物过滤。将滤液在真空下浓缩，得到1.83kg呈无色油状物的化合物B，具有98.8％纯度和定量产率。
将化合物B通过与步骤1中所述类似的过程转化为化合物C。将DCM(23.8kg，10V)、Cbz-Glu-OtBu(1.44kg,1.05当量)装入30L反应器中。将反应物质冷却至10℃。在10℃下将HATU(1.86kg，1.2当量)和DIPEA(0.68kg，1.3当量)添加至反应混合物中。使所述反应混合物温至室温并搅拌30分钟。在室温下将化合物B(1.81kg，1.0当量)添加至所述反应混合物中。将所述反应混合物在室温下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物B不可检测到。添加10％的柠檬酸水溶液(12.3kg)并搅拌10分钟。分离各层，并将有机层用10％柠檬酸水溶液(12.2kg)洗涤。分离各层，并将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(12.2kg)洗涤。将有机层用盐水(14.0kg)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。
将残余物通过硅胶上柱色谱法(己烷/EtOAc＝3:1)纯化。将级分在真空下浓缩至2V(约2.9L)。添加己烷(8.25kg，8V)并搅拌30分钟。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在空气中干燥，得到2.25kg的白色固体材料，具有99.7％纯度和69％产率。
步骤3.
Figure BDA0003575147470002821
将化合物C类似于步骤2中描述的程序转化为化合物D。将MeOH(8.5kg，5V)和化合物-C(2.1kg，1.0当量)装入30L反应器中。进行了氮置换和保护。在10℃至20℃下添加10％Pd/C(0.22kg)。将反应混合物在H2气氛下在45℃下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物C不可检测到。进行了氮置换。将混合物过滤。将滤液在真空下浓缩，得到1.75kg呈无色油状物的化合物D，具有99.7％纯度和定量产率。
将化合物D类似于步骤2中描述的程序转化为化合物E。将DCM(23kg，10V)、Cbz-Glu-OtBu(62.2g,1.05当量)装入2L反应器中。将反应物质冷却至10℃。在10℃下将HATU(80.3g，1.2当量)和DIPEA(29.5g，1.3当量)添加至反应混合物中。使所述反应混合物温至室温并搅拌30分钟。在室温下将化合物D(110.5g，1.0当量)添加至所述反应混合物中。将所述反应混合物在室温下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物D不可检测到。添加10％的柠檬酸水溶液(400mL)并搅拌10分钟。分离各层，并将有机层用10％柠檬酸水溶液(400mL)洗涤。分离各层，并将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)洗涤。将有机层用盐水(400mL)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。
将残余物通过硅胶上柱色谱法(己烷/EtOAc＝3:1)纯化。将级分在真空下浓缩至2.7V(约300mL)。添加己烷(1450mL，13V)并搅拌30分钟。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在空气中干燥，得到化合物E，115.1g的白色固体材料，具有99.6％纯度和70％产率。
步骤4.
Figure BDA0003575147470002831
通过步骤2和3中描述的类似程序将化合物E转化为化合物F。将MeOH(8.5kg，5V)和化合物-E(2.15kg，1.0当量)装入30L反应器中。氮气置换和保护。在10℃至20℃下添加10％Pd/C(0.22kg)。将反应混合物在H2气氛下在45℃下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物E不可检测到。氮气置换。将混合物过滤。将滤液在真空下浓缩，得到1.84kg呈无色油状物的化合物F，具有99.5％纯度和定量产率。
通过步骤2和3中描述的类似程序将化合物F转化为化合物G。将DCM(24kg，10V)、Cbz-Glu-OtBu(0.8kg,1.05当量)装入30L反应器中。将混合物冷却至10℃。在10℃下将HATU(1.03kg，1.2当量)和DIPEA(0.38kg，1.3当量)添加至反应混合物中。使所述反应混合物温至室温并搅拌30分钟。在室温下将化合物-F(1.84kg，1.0当量)添加至所述反应混合物中。将所述反应混合物在室温下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物F不可检测到。添加10％的柠檬酸水溶液(10.8kg)并搅拌10分钟。分离各层，并将有机层用10％柠檬酸水溶液(11kg)洗涤。分离各层，并将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(10.8kg)洗涤。将有机层用盐水(12.1kg)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶上柱色谱法(己烷/EtOAc＝2:1)纯化。将级分在真空下浓缩至2V(4L)。添加己烷(20.3kg，15V)并搅拌30分钟。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在空气中干燥，得到化合物G，2.16kg的白色固体材料，具有99.5％纯度和84％产率。
步骤5.
Figure BDA0003575147470002841
通过上述步骤2-4中描述的类似程序将化合物G转化为化合物H。将MeOH(11.8kg，5V)和化合物-G(2.12kg，1.0当量)装入30L反应器中。氮气置换和保护。在10℃至20℃下添加10％Pd/C(0.23kg)。将混合物在H2气氛下在45℃下进行氢解。通过210nm下的HPLC分析表明化合物G不可检测到。氮气置换。将混合物过滤。将滤液在真空下浓缩，得到1.86kg呈无色油状物的化合物-H，具有98.1％纯度和定量产率。
通过上述步骤2-4中描述的类似程序将化合物H转化为化合物I。将DCM(25.9kg，10V)、Cbz-Glu-OtBu(0.66kg,1.05当量)装入30L反应器中。将混合物冷却至10℃。在10℃下将HATU(0.84kg，1.2当量)和DIPEA(0.31kg，1.3当量)添加至反应混合物中。使所述反应混合物温至室温并搅拌30分钟。在室温下将化合物-H(1.86kg，1.0当量)添加至所述反应混合物中。将所述反应混合物在室温下搅拌20小时。通过210nm下的HPLC分析表明化合物H不可检测到。添加10％的柠檬酸水溶液(10.8kg)并搅拌10分钟。分离各层，并将有机层用10％柠檬酸水溶液(10.7kg)洗涤。缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液(10.5kg)并搅拌10分钟。将有机层用盐水(12kg)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶上柱色谱法(己烷/EtOAc＝2:1)纯化。将级分在真空下浓缩至2V(4L)。添加己烷(20.4kg，15V)并搅拌30分钟。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在空气中干燥，得到2.09kg呈白色固体的化合物-I，具有98.2％纯度和84.7％产率。
步骤6.
Figure BDA0003575147470002861
通过上述步骤2-5中描述的类似程序将化合物I转化为化合物J。将MeOH(16.6kg，10V)和化合物-I(2.08kg，1.0当量)装入30L反应器中。氮气置换和保护。在10℃至20℃下添加10％Pd/C(0.21kg)。将反应混合物在H2气氛下在45℃下进行氢解。在通过210nm下的HPLC分析表明在反应混合物中未检测到化合物I后，进行了氮气置换。将混合物过滤。将滤液在真空下浓缩。将残余物用异丙醚(3.9kg)处理并过滤，得到1.59kg呈白色固体的化合物-J，具有98.4％纯度和85％产率。
用于分析化合物-J的HPLC方法1：
Figure BDA0003575147470002862
色谱条件：梯度洗脱
时间(分钟) MPA(％) MPB(％) 洗脱
0 50 50 初始条件
15.00 0 100 线性
流动相A(MPA)：0.025％HCOOH/H2O(v/v)
流动相B(MPB)：0.025％HCOOH/ACN(CH3CN)(v/v)
实施例2.化合物100的合成
Figure BDA0003575147470002871
步骤7.
将DMF(14.5kg)、PEM-酸(0.385kg，1.0当量)装入30L反应器中。将混合物冷却至10℃。在10℃下将EDCI(0.27kg，1.1当量.)、HOBt(0.19kg，1.1当量)和DIPEA(0.21kg，1.2当量)添加至反应混合物中。使所述反应混合物温至室温并搅拌30分钟。在室温下将化合物-J(1.58kg，1.03当量)于DMF(6.3kg)中的溶液添加至反应混合物中。将所述反应混合物在室温下搅拌20小时。在通过210nm下的HPLC分析表明不可检测到PEM-酸后，将混合物用EtOAc(22.2kg)稀释。添加10％的柠檬酸水溶液(12.5kg)并搅拌10分钟。分离各层并用EtOAc(8.5kg x2)再萃取水层。合并三批EtOAc层并用10％柠檬酸水溶液(16.5kg)洗涤。缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液(16.4kg)并搅拌10分钟。将有机层用水(15.1kg)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。在45℃选将残余物溶解于DCM(7.0kg)和MeOH(0.28kg)中。添加MTBE(14.0kg)并将所得混合物搅拌30分钟。将混合物冷却至室温。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在空气中干燥，得到1.61kg呈白色固体的化合物-K，具有99.2％纯度和82.5％产率。用于分析化合物-K的纯度的HPLC是实施例1中所示的HPLC方法1。
步骤8.
将DCM(4.8kg)和TFA(30.5kg)装入30L反应器中。将混合物冷却至10℃。添加化合物-K(1.6kg,1.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌15小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc(14.4kg)处理。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在干燥烘箱中干燥，得到粗化合物-L。
将DCM(4.8kg)和TFA(30.5kg)装入30L反应器中。将混合物冷却至10℃。添加粗化合物-L。将反应混合物在室温下搅拌8小时。通过210nm下的HPLC对反应混合物的样品的分析表明化合物-L的纯度≥98％。将混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc(14.4kg)处理。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在干燥烘箱中干燥，得到1.22kg呈固体的化合物-L，具有98％纯度和定量产率。
HPLC方法2用于分析化合物-L的纯度：
Figure BDA0003575147470002891
色谱条件：梯度洗脱
时间(分钟) MPA(％) MPB(％) 洗脱
0 95 5 初始条件
15.00 65 35 线性
MPA：0.025％HCOOH/H2O(v/v)MPB：0.025％HCOOH/ACN(v/v)
步骤9.
将水(2.5kg)和NaOH(0.2kg)装入30L反应器中。将混合物冷却至0℃-5℃。添加化合物-L(1.21kg)。用5M NaOH水溶液(0.65L)将所述混合物的pH调节至9。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。监测pH，pH＝9。
在室温下将所得溶液逐滴添加至搅拌EtOH(52kg)中。用5M NaOH水溶液将混合物的pH调节至9并在室温下搅拌30分钟。过滤混合物并收集固体。将固体在干燥烘箱中干燥，得到粗化合物100(1.35kg)。
在
Figure BDA0003575147470002892
下将粗化合物100(1.35kg)溶解于水(2.3kg)中。在室温下将所得溶液逐滴添加至搅拌EtOH(36kg)中。将混合物在室温下搅拌30分钟。过滤混合物并收集固体。将固体在干燥烘箱中干燥，得到粗化合物100(1.28kg)。
在
Figure BDA0003575147470002902
下将粗化合物100(1.28kg)溶解于水(2.2kg)中。在室温下将所得溶液逐滴添加至搅拌EtOH(36.2kg)中。将混合物在室温下搅拌30分钟。过滤固体材料，得到湿固体。将固体在干燥烘箱中干燥，得到1.19kg呈固体的化合物100，具有98.3％纯度和93.7％产率。HPLC方法2用于化合物100的纯度分析。代表性高分辨率质量(M+H)实测值1073.3690，M+H计算值1073.3699。通过NMR、LC-MS和元素分析对化合物100进行了充分表征。
实施例3.化合物110的合成
Figure BDA0003575147470002901
化合物110是实施例2所示的化合物L的对映异构体。它如实施例1和2中所示类似地合成，除了使用D-谷氨酸起始材料/中间体代替。代表性高分辨率质谱数据：计算值(M+H)：1073.3699，实测值(M+H)：1073.3687。
化合物110也可类似于如实施例2中所示的化合物100转化为其盐，如七钠盐。
实施例4.化合物200的合成
Figure BDA0003575147470002911
按照与实施例1和2中所述类似的程序制备化合物200，除了对于六谷氨酸盐的制备，在有机胺碱NMM(N-甲基吗啡)存在下使酰胺偶联与ClCO2i-Bu反应。代表性高分辨率质谱数据：计算值(M+H)：1073.3699，实测值(M+H)：1073.3691。
实施例5.化合物210的合成
Figure BDA0003575147470002912
化合物210是实施例4中所示的化合物200的游离酸形式的对映异构体。它类似地合成，除了使用D-谷氨酸起始材料/中间体代替。代表性高分辨率质谱数据：计算值(M+H)：1073.3699，实测值(M+H)：1073.3691。
化合物210也可类似于如实施例4中所示的化合物200转化为其盐，如七钠盐。
实施例6.化合物100和110的固相合成
Figure BDA0003575147470002921
化合物100和110也可通过固相合成来制备。典型合成使用Symphony合成仪(GyrosProtein Technologies Inc.,USA)每个反应容器使用CTC树脂(负载：0.64mmol/g，批号：S7423817744)以及DMF中的0.2M氨基酸溶液、DMF中的0.2M HATU溶液和DMF中的0.4M NMM溶液。用20％于DMF中的哌啶持续3分钟和第二次持续15分钟除去Fmoc。洗涤步骤用NMP进行。使用TFA(140mL/mmol树脂，含有5％(v)milliQ-H2O持续2.5小时，将肽从固体载体上裂解下来。收集含有肽的TFA溶液并用TFA洗涤树脂。将TFA溶液在减压下浓缩并使用每7mLTFA混合物40mL冰冷乙醚/正戊烷(1:1，v/v)进行沉淀。离心后，将肽用冰冷乙醚/正戊烷(1:1，v/v)再洗涤一段时间并离心。然后，将粗肽溶解于5mL ACN/水1:1中并冻干。此步骤重复3次，得到所需产物。通过UPLC/ESI-MS(梯度：5％-55％B在2分钟内，流速：1mL/分钟，洗脱液A：100％H2O+0.05％TFA；洗脱液B：100％ACN+0.05％TFA)和用于MS分析的正离子电流对肽进行分析。然后将肽在标准酰胺偶联中与PEM-酸偶联。通过反相制备型HPLC纯化化合物。
或更一般地，可将初始谷氨酰基残基键合至王氏树脂(或其它合适的树脂或固体载体)，并且使用F-moc化学经由固相肽合成连续添加另外的谷氨酰基残基。添加最终的谷氨酰基残基后，将抗叶酸剂前体(例如，培美曲塞前体)与肽偶联，并且从所述树脂上裂解分子。或更一般地，培美曲塞聚谷氨酸盐的合成可如下进行：使用基于Fmoc/tBu的化学在2-氯三苯甲基树脂上使用标准固相肽合成进行聚谷氨酸肽的合成。PEM部分(Z)的连接是通过使用合适的偶联剂将未受保护的去谷氨酰基培美曲塞结构单元经由其苯甲酸偶联至肽的游离N-末端以形成酰胺键而在固体载体上进行的。使用三氟乙酸(TFA)与几种清除剂的混合物从树脂上裂解PEM肽并同时除去各种侧链保护基团。随后的处理包括从裂解混合物中沉淀，然后使用针对单个构建体定制的适当缓冲系统进行色谱纯化，从而产生具有所需纯度和量的PEM肽。纯化级分的冻干提供了所需的培美曲塞聚谷氨酸肽。
在固相树脂上合成了两种培美曲塞γ聚谷氨酸盐(呈L形式或D形式)，并且将化合物通过LC-MS、NMR进行了充分表征，HPLC纯度为96％和98％，精确质量：1072.3621；计算值(M+H)：1073.3699，实测值(M+H)：1073.3687。
对于化合物100，在pH 10.8的水中的旋光度为[a]D 10.5；对于化合物110，在pH10.8的水中的旋光度为[a]D-9.2
类似地，化合物200和210也可通过固相合成使用Symphony合成仪制备为化合物100和化合物110。
在固相树脂上合成了两种培美曲塞α聚谷氨酸盐(呈L形式或D形式)，并且将化合物通过LC-MS、NMR进行了充分表征，HPLC纯度为96％至98％，精确质量：1072.3621；计算值(M+H)：1073.3699，实测值(M+H)：1073.3691。
对于化合物200，在水中的旋光度为[a]D-33.9；对于化合物210，在水中的旋光度为[a]D+36.3。
实施例7.盐酸盐化合物220和230的制备
Figure BDA0003575147470002941
可替代地，将α-六聚谷氨酸化培美曲塞制备为HCl盐。如上述方案所示，将由实施例4中所示的化合物5得到的化合物6直接使用盐酸脱保护，以提供呈HCl盐的化合物220。化合物220的对映异构体(本文中称为化合物230)可类似地制备。
发明内容和摘要部分可阐明如发明人所构想的本发明的一个或多个但非所有的示例性实施方案，并且因此，并不意图以任何方式对本发明和随附权利要求进行限制。
本发明已经在上文中借助于说明特定功能的实施和其关系的功能性结构单元加以描述。为便于描述，本文中已经任意地界定这些功能性结构单元的边界。也可限定替代边界，只要指定功能及其相互关系被适当地执行。
关于描述为属的本发明的方面，所有个体物种单独地被认为是本发明的单独方面。如果本发明的方面被描述为“包含”特征，则实施方案也被认为是“由所述特征组成”或“基本上由所述特征组成”。
具体实施方案的前文描述将充分地揭示本发明的一般特性，以使得其它人通过应用本领域中的知识，在无过度实验且不背离本发明的一般概念的情况下，可容易地针对各种应用对这类具体实施方案进行修改和/或改变。因此，基于本文所呈现的教导内容以及指导内容，此类改编以及修改意图在所公开的实施方案的等同物的含义和范围内。应了解，本文的措辞或术语是出于描述而非限制的目的，以使得本说明书的术语或措辞应由熟练的技术人员根据教义和指导进行解释。
本发明的宽度和范围不应由任何上述示例性实施方案所限制。
本文所描述的各种方面、实施方案和选择全部可以任何和所有变化型式组合。
本说明书中提及的所有公布、专利和专利申请都以引用的方式并入本文，所述引用的程度就如同已特定地和个别地指示将各个别公布、专利或专利申请以引用的方式并入一般。如果本文献中的术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文献中的相同术语的任何含义或定义相冲突，则将以赋予本文献中的术语的含义或定义为准。

Claims (82)

1.一种制备聚谷氨酸化抗叶酸剂或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：
使式I的受保护的聚谷氨酸或其盐与具有式Z-COOH的抗叶酸剂或其活化形式在酰胺形成条件下反应以形成式II化合物或其盐，
Figure FDA0003575147460000011
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
Pg1在每次出现时独立地是羧酸保护基团，
n是0-20的整数(例如，3、4或5)，
并且Z是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述Z是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure FDA0003575147460000021
3.如权利要求1或2所述的方法，其中n是2-6(例如，3或4)。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述式I化合物或其盐是基本上纯的。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中Pg1在每次出现时是叔丁基。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述反应包括使所述式I化合物与所述抗叶酸剂在选自氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU和T3P的酰胺偶联试剂存在下反应。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，所述方法还包括使所述式II化合物或其盐脱保护以提供式III化合物或其盐：
Figure FDA0003575147460000022
8.如权利要求7所述的方法，所述方法还包括将所述式III化合物或其盐转化为式IV的碱金属盐：
Figure FDA0003575147460000031
其中M+是碱金属反离子。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中式I的所述受保护的聚谷氨酸或其盐通过包括以下的方法产生：
a)使式S-1的酸或其活化形式与式S-2的受保护的聚谷氨酸或其盐在酰胺形成条件下反应以形成式S-3的化合物或其盐
Figure FDA0003575147460000032
Figure FDA0003575147460000041
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
Pg1在上文定义，
Pg2和Pg2’独立地是氢或氮保护基团，条件是Pg2和Pg2’中的至少一者是氮保护基团；或者Pg2和Pg2’与它们所连接的氮原子一起形成环状受保护的氨基；
其中m是0-19的整数；p是0-19的整数；条件是m+p＝n；以及
b)除去Pg2和Pg2’中的一者或两者以提供式I的所述受保护的聚谷氨酸或其盐。
10.如权利要求9所述的方法，其中p是0。
11.如权利要求9或10所述的方法，其中m是2-6(例如，3或4)。
12.如权利要求9-11中任一项所述的方法，其中Pg2和Pg2’中的一者是氢，并且Pg2和Pg2’中的另一者是能够通过氢化脱保护的氮保护基团，例如苄氧基羰基。
13.一种基本上纯的式III化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003575147460000051
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
n是0-20的整数；并且
Z是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
其中所述基本上纯的化合物具有根据HPLC和/或按重量计至少90％的纯度。
14.如权利要求13所述的基本上纯的化合物，其中式III中的Z是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure FDA0003575147460000052
15.如权利要求13或14所述的基本上纯的化合物，其中式III中的n是2-6(例如，3或4)。
16.如权利要求13-15中任一项所述的基本上纯的化合物，其中所述式III化合物呈钠盐形式。
17.如权利要求13-16中任一项所述的基本上纯的化合物，其中所述式III化合物呈酸加成盐的形式。
18.一种基本上纯的式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003575147460000061
所述基本上纯的式III-1-L化合物或其药学上可接受的盐基本上不含式III-2化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003575147460000062
其中式III-2中的n是不为4的整数，或者n是4且谷氨酸单元中的至少一者不呈L形式。
19.如权利要求18所述的基本上纯的化合物，所述化合物呈钠盐形式。
20.一种式IV的碱金属盐：
Figure FDA0003575147460000071
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
n是0-20的整数；并且
Z是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基，
其中M+是碱金属反离子。
21.如权利要求20所述的碱金属盐，其中M+是Na+(例如，n是4，并且式IV的所述碱金属盐是七钠盐)。
22.如权利要求20或21所述的碱金属盐，其中Z是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure FDA0003575147460000072
23.如权利要求20-22中任一项所述的碱金属盐，其中n是2-6(例如，3、4或5)。
24.如权利要求20-23中任一项所述的碱金属盐，所述碱金属盐呈固体形式，例如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
25.如权利要求20-24中任一项所述的碱金属盐，所述碱金属盐呈无水形式、水合物或溶剂合物的形式。
26.如权利要求20-25中任一项所述的碱金属盐，所述碱金属盐具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。
27.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求13-19中任一项所述的基本上纯的化合物或权利要求20-26中任一项所述的碱金属盐。
28.如权利要求27所述的药物组合物，所述药物组合物被配制为水溶液或悬浮液。
29.如权利要求27所述的药物组合物，所述药物组合物被配制为脂质体组合物，其中所述脂质体任选地被聚乙二醇化。
30.如权利要求29所述的药物组合物，其中所述脂质体组合物具有至少10％的载药量。
31.如权利要求29或30所述的药物组合物，其中所述脂质体组合物包含连接至PEG和所述脂质体的外部中的一者或两者的靶向部分，并且其中所述靶向部分对目标靶细胞上的表面抗原具有特异性亲和力。
32.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的权利要求27-31中任一项所述的药物组合物。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。
34.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向具有癌细胞或有具有癌细胞风险的受试者施用有效量的权利要求27-31中任一项所述的组合物，所述癌细胞在其表面上表达由靶向部分结合的叶酸受体。
35.一种用于正在进行癌症疗法或已经进行了癌症疗法的受试者的维持疗法，所述维持疗法包括向正在进行癌症疗法或已经进行了癌症疗法的受试者施用有效量的权利要求27-31中任一项所述的组合物。
36.一种用于治疗免疫系统病症的方法，所述方法包括向患有免疫系统病症或有患免疫系统病症风险的受试者施用有效量的权利要求27-31中任一项所述的组合物。
37.一种用于治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向患有感染性疾病或有患感染性疾病风险的受试者施用有效量的权利要求27-31中任一项所述的组合物。
38.一种将聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至在表面上表达叶酸受体的肿瘤的方法，所述方法包括：向患有所述肿瘤的受试者施用一定量的权利要求27-31中任一项所述的组合物，以将治疗有效剂量的所述聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至所述肿瘤。
39.一种制备脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物的方法，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；以及加工所述混合物以形成含有所述聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体，其中所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是权利要求13-19中任一项所述的基本上纯的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求20-26中任一项所述的碱金属盐。
40.一种制备脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物的方法，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；加工所述混合物以形成包埋和/或包封聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体；以及在所述脂质体的表面上提供靶向部分，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-a)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)中的至少一者具有特异性亲和力，其中所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是权利要求13-19中任一项所述的基本上纯的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求20-26中任一项所述的碱金属盐。
41.如权利要求39或40所述的方法，其中所述加工步骤包括以下中的一个或多个：薄膜水合、挤出、在线混合、乙醇注入技术、冻融技术、反相蒸发、动态高压微射流、微射流混合、复乳法、冷冻干燥复乳法、3D打印、膜接触器方法和搅拌。
42.一种制备聚谷氨酸化抗叶酸剂或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：
使式I-α的受保护的聚谷氨酸或其盐与具有式Z-COOH的抗叶酸剂或其活化形式在酰胺形成条件下反应以形成式II-α的化合物或其盐，
Figure FDA0003575147460000101
Figure FDA0003575147460000111
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
Pg1在每次出现时独立地是羧酸保护基团，
n是0-20的整数(例如，3、4或5)，
并且Z是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述Z是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure FDA0003575147460000112
44.如权利要求42或43所述的方法，其中n是2-6(例如，3或4)。
45.如权利要求42-44中任一项所述的方法，其中所述式I-α化合物或其盐是基本上纯的。
46.如权利要求42-45中任一项所述的方法，其中Pg1在每次出现时是叔丁基。
47.如权利要求42-46中任一项所述的方法，其中所述反应包括使所述式I-α化合物与所述抗叶酸剂在选自氯异丁酸酯、DCC、DIC、PyBOP、PyAOP、EDCI、HATU、HBTU、TBTU和T3P的酰胺偶联试剂存在下反应。
48.如权利要求42-47中任一项所述的方法，所述方法还包括使所述式II-α化合物或其盐脱保护以提供式III-α化合物或其盐：
Figure FDA0003575147460000121
49.如权利要求48所述的方法，所述方法还包括将所述式III-α化合物或其盐转化为式IV-α的碱金属盐：
Figure FDA0003575147460000122
其中M+是碱金属反离子。
50.如权利要求42-49中任一项所述的方法，其中式I-α的所述受保护的聚谷氨酸或其盐通过包括以下的方法产生：
a)使式S-1-α的酸或其活化形式与式S-2-α的受保护的聚谷氨酸或其盐在酰胺形成条件下反应以形成式S-3-α的化合物或其盐
Figure FDA0003575147460000131
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
Pg1在上文定义，
Pg2和Pg2’独立地是氢或氮保护基团，条件是Pg2和Pg2’中的至少一者是氮保护基团；或者Pg2和Pg2’与它们所连接的氮原子一起形成环状受保护的氨基；
其中m是0-19的整数；p是0-19的整数；条件是m+p＝n；以及
b)除去Pg2和Pg2’中的一者或两者以提供式I-α的所述受保护的聚谷氨酸或其盐。
51.如权利要求50所述的方法，其中p是0。
52.如权利要求50或51所述的方法，其中m是2-6(例如，3或4)。
53.如权利要求50-52中任一项所述的方法，其中Pg2和Pg2’中的一者是氢，并且Pg2和Pg2’中的另一者是能够通过氢化脱保护的氮保护基团，例如苄氧基羰基。
54.一种基本上纯的式III-α化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003575147460000141
Figure FDA0003575147460000151
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
n是0-20的整数；并且
Z是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基，
其中所述基本上纯的化合物具有根据HPLC和/或按重量计至少90％的纯度。
55.如权利要求54所述的基本上纯的化合物，其中式III-α中的Z是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure FDA0003575147460000152
56.如权利要求54或55所述的基本上纯的化合物，其中式III-α中的n是2-6(例如，3或4)。
57.如权利要求54-56中任一项所述的基本上纯的化合物，其中所述式III-α化合物呈钠盐形式。
58.如权利要求54-57中任一项所述的基本上纯的化合物，其中所述式III-α化合物呈酸加成盐的形式。
59.一种基本上纯的式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003575147460000161
所述基本上纯的式III-1-L-α化合物或其药学上可接受的盐基本上不含式III-2-α化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003575147460000162
其中式III-2-α中的n是不为4的整数，或者n是4且谷氨酸单元中的至少一者不呈L形式。
60.如权利要求59所述的基本上纯的化合物，所述化合物呈钠盐形式。
61.一种式IV-α的碱金属盐：
Figure FDA0003575147460000171
其中：
每个谷氨酸单元独立地呈L形式或D形式(例如，所有谷氨酸单元都呈L形式或者所有谷氨酸单元都呈D形式)；
n是0-20的整数；并且
Z是选自氨甲蝶呤(MTX)、培美曲塞(PMX)、洛美曲索(LTX)、AG2034、雷替曲塞(RTX)、普拉曲沙、GW1843、氨基蝶呤、LY309887和LY222306的抗叶酸剂的残基，
其中M+是碱金属反离子。
62.如权利要求61所述的碱金属盐，其中M+是Na+(例如，n是4，并且式IV的所述碱金属盐是七钠盐)。
63.如权利要求61或62所述的碱金属盐，其中Z是培美曲塞的残基，所述残基具有下式：
Figure FDA0003575147460000172
64.如权利要求61-63中任一项所述的碱金属盐，其中n是2-6(例如，3、4或5)。
65.如权利要求61-64中任一项所述的碱金属盐，所述碱金属盐呈固体形式，例如结晶形式、非晶形式或它们的混合物。
66.如权利要求61-65中任一项所述的碱金属盐，所述碱金属盐呈无水形式、水合物或溶剂合物的形式。
67.如权利要求61-66中任一项所述的碱金属盐，所述碱金属盐具有根据HPLC至少90％和/或按重量计至少90％的纯度。
68.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求54-60中任一项所述的基本上纯的化合物或权利要求61-67中任一项所述的碱金属盐。
69.如权利要求68所述的药物组合物，所述药物组合物被配制为水溶液或悬浮液。
70.如权利要求68所述的药物组合物，所述药物组合物被配制为脂质体组合物，其中所述脂质体任选地被聚乙二醇化。
71.如权利要求70所述的药物组合物，其中所述脂质体组合物具有至少10％的载药量。
72.如权利要求70或71所述的药物组合物，其中所述脂质体组合物包含连接至PEG和所述脂质体的外部中的一者或两者的靶向部分，并且其中所述靶向部分对目标靶细胞上的表面抗原具有特异性亲和力。
73.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或有患癌症风险的受试者施用有效量的权利要求68-72中任一项所述的药物组合物。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、胃癌、胃肠癌、结肠癌、食道癌、宫颈癌、肾癌、胆管癌、胆囊癌和血液系统恶性疾病。
75.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向具有癌细胞或有具有癌细胞风险的受试者施用有效量的权利要求68-72中任一项所述的组合物，所述癌细胞在其表面上表达由靶向部分结合的叶酸受体。
76.一种用于正在进行癌症疗法或已经进行了癌症疗法的受试者的维持疗法，所述维持疗法包括向正在进行癌症疗法或已经进行了癌症疗法的受试者施用有效量的权利要求68-72中任一项所述的组合物。
77.一种用于治疗免疫系统病症的方法，所述方法包括向患有免疫系统病症或有患免疫系统病症风险的受试者施用有效量的权利要求68-72中任一项所述的组合物。
78.一种用于治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向患有感染性疾病或有患感染性疾病风险的受试者施用有效量的权利要求68-72中任一项所述的组合物。
79.一种将聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至在表面上表达叶酸受体的肿瘤的方法，所述方法包括：向患有所述肿瘤的受试者施用一定量的权利要求68-72中任一项所述的组合物，以将治疗有效剂量的所述聚谷氨酸化抗叶酸剂递送至所述肿瘤。
80.一种制备脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物的方法，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；以及加工所述混合物以形成含有所述聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体，其中所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是权利要求54-60中任一项所述的基本上纯的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求61-67中任一项所述的碱金属盐。
81.一种制备脂质体聚谷氨酸化抗叶酸剂组合物的方法，所述方法包括：形成在溶液中包含脂质体组分和聚谷氨酸化抗叶酸剂的混合物；使所述混合物均质化以在所述溶液中形成脂质体；加工所述混合物以形成包埋和/或包封聚谷氨酸化抗叶酸剂的脂质体；以及在所述脂质体的表面上提供靶向部分，所述靶向部分对叶酸受体α(FR-a)、叶酸受体β(FR-β)和叶酸受体δ(FR-δ)中的至少一者具有特异性亲和力，其中所述聚谷氨酸化抗叶酸剂是权利要求54-60中任一项所述的基本上纯的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求61-67中任一项所述的碱金属盐。
82.如权利要求80或81所述的方法，其中所述加工步骤包括以下中的一个或多个：薄膜水合、挤出、在线混合、乙醇注入技术、冻融技术、反相蒸发、动态高压微射流、微射流混合、复乳法、冷冻干燥复乳法、3D打印、膜接触器方法和搅拌。
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