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Trooëdë pour llëxtroot1on de Tétraoyolines dee bouillies de fermentation
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'La présente invention concerne des procédés pour l'extraction de tétracyclines des bouillies de fermentation.
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1\17\' tétracyclines on entend la 7-ohloro-tétracyclino, la tétra-' çyalioe et la 5-oxytëtraoyoline.
Les tétraayclines sont produites par fermentation miorobiologiquo dans des milieux de croissance sous la forme de
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solutions. aqueuses impures et délayées.
Ces solutions contiennent des impuretés organiques et anorganiques, qui doivent être séparées pour obtenir l'antibio-
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tique sous une forme th6ràpeutiquemnt utilisable.
Il a été maintenant trouvé que oos tétracyclines peuvent être séparées avantageusement des solutions acides.nbtenues des bouillies de fermentation par précipitation, en ajoutant des ions cuivre et des agents actifs en surface.
On peut utiliser divers sels de cuivre solubles dans l'eau, par exemple acétate,bromure,chlorure, nitrate, sulfate de cuivre,. etc, Toutefois, on préfère utiliser le sulfate de cuivre.
Dans le commerce on peut trouver de nombreux agents actifs en surface pouvant être utilisés dans le procédé selon l'invention,
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par exemple de s sulfates alcoyiiques sodiquea (ROSO 3Xa) et benzène sulfonate alooyiiuues eOdiqt1?S (R06H4S0Na) dans lesquels R est la chaîne de l'hydrocarbure contenant de 8 à 18 atome a de carbone, . La nature de l'agent actif en surface n'est pas critique ; . on peut utiliser divers agents qu'on trouve dans le COJDr#roe.
Le précipite est séparé de la bouillie de fermentation et les tétraoyolines sont isolées en dissolvant le précipité dans un solvant organique qui n'est pas soluble dans l'eau. Parmi les solvants les plus utiles, on peut citer les alcools contenant de 4 à 8 atomes de carbone, non solubles dans l'eau, par exemple
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l'alcool butylique normal, 1-pentanol, 2-pentanol, 7.-haxazol, 2-hexanol, 3-hexanol, ,-hep4ano,, 2-haptanol, 3-heptanol, 4-heptanol, 2-octanol, e tc .
Les ions cuivre sont séparés du complexe antibiotiquecuivre par extraction aqueuse avec un agent aqueux de chelation,
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qui doit avoir un6- affinité plus forte que ces antibiotiques visez vis du cuivre et qui sépare les ions cuivre dans une solution aqueuse Parmi , ces agents qui se trouvent actuellement dans le
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commerce figurent, l'acide éthylzod3ami,nertétra-sa6tique, l'acide
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nitrilotriacétique, N,N-di-(beta-hydroxyéthylcine, le sodium tripolyphosphate et le sodium hexamétaphosphate,
La phase organique contenant l'antibiotique peut être purifiée par les procédés connus.
Les procédés suivants ont pour but de montrer deux modes de réalisation de l'invention.
Prooédé A.
La phase organique, contenant l'antibiotique dissous, eat concentrés eous vide. On ajoute l'alcool soluble dans l'eau (alcool méthylique,éthylique et iaopropylique) pour obtenir une concentration de 100.000 à 150.000 gamma/cm3 d'antibiotique.
En ajoutant de l'acide ohlorhydrique concentré on obtient l'antibiotique soue forme de sel cristallin.
Procédé B.
La phase organique est concentrée sous vide et ensuite traitée avec une base organique, par exemple ole yl amine , linoleyl amine , N,N-dibenzyl-éthylènediamine, dibenzyl amine , ou des sels d'ammonium quaternaire, par exemple les Arquads, qui sont des sels d'ammonium quaternaires contenant un ou plusieurs groupes alooyliques ayant de 8 à 18 atomes de carbone.
Les aminés où les sels d'ammonium quaternaires forment des composés solubles avec les agents actifs en surface, présenta dans, le complexe.
. La tétracyoline peut être récupérée du solvant par une solution acide aqueuse, par exemple de l'acide chlorhydrique dilué,
Cet extrait aqueux, contenant l'antibiotique, peut être ensuite réglé à un pH de 3 à 7,3. Après quelques heures ou lorsque l'antibiotique s'est complètement déposé sous forme de base libre, l'antibiotique peut être filtré de la solution.
La température de purification ne paraît pas critique.;
Avant tout, le mycélium doit être filtré de la bouillie de fermentation et ensuite la bouillie doit être réglée à un pH
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acide dans la gamme de pH de 05 à 600. En utilisant une solution à une température Jusque 50 0,
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on facilite la filiation du mycélium et des autres impureté 'de la bouillie
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le pH de la séparation des ions cuivre du complexe tétracycline-cuivre dépend de l'agent de ohelation utilisé,, Par exemple, en utilisant 0 omma agent de chalatlon de l'acide éthylnd.am3,nctétacaacét.qu (Yeene ) le pll doit dtre un pH , j acide.
Pour que l'invention puisse être mieux comprise, elle sera
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d.br1te dans les exemples suivants, bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée.
2>lue Bxemle 1. litres Exemple I. libre mycélium Il 10 litres de bouillie de culture, libre du mycélium e t contenant 53, 5 gm de tëtraoycllne chlorhydrate sont acidifiés à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique. On rgle ensuite le pH à 0,5 avec de l'acide sulfurique à 25%.
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On ajoute 105 cm3 dtune solution à 20% de CuS04. 5Fi20. Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 900 cm3.
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de lauryl sulfate sOdique.
L'agitation est continuapendant 30 minutes. Le précipité est ensuite séparé de la bouillie épuisée, titrant 304 gamma/ce, et dissous dans 800 cm3 d'alcool butylique.
On ajoute à la solution d'alcool butylique 250 cm3 d'une solution à 10% de Verse ne , acidifiée à un pH de 2,1 avec de l'acide ' chlorhydrique à 37%. On agite les deux phases ensemble pendant trois heures.
Ensuite la phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à
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environ 300 cm .
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La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C. On ajoute au concentré la quantité d'Arquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé,
Le mélange est dilué avec 300 cm3 de n-hexane .
Toute la tétracycline est ensuite séparée de la phase organique; on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunie,
L'agitation est continuée pendant 1/2 heure et ensuite on filtre la solution et on ajoute 3,5 gm de Versene. On règle le filtrat à un pH de 4 à 6 avec NaOH à 10 %. On agite la solution pendant 12 heures, On filtre les cristaux de tétracycline base brute,on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C. On obtient 23 gm de tétraoyoline base brute, titrant
950 gamma mgm.
Exemple 2.
10 lt de bouillie de fomentation, libre du mycélium et contenant 33,5 gm de- tétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique. On règle ensuite le pH à une valeur égal-* à 2 avec du NaOH à 10 %.
On ajoute 105 cm3 d'une solution squeuse à 20% de CuSO4. 5H2O.
Après quelques minutes, on ajoute avec agitation 900 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes. Le précipité est ensuite séparé de la bouillie épuisée, titrant 102 gamma/om3, et dissous dans 800 cm3 d'alcool butylique.
On ajoute à la solution d'alcool butylique 250 cm3 d'une solution à 10% de Ve.rsene, acidifiée à pH 2,1 aveo de l'acide chlorhydrique à 37%. On agite les deux phases ensemble pendant trois heures.
La phase organique est ensuite séparée de la phase aqueuse
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool buty-
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liue et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier
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extrait. Les extraits organiques réun.Es sont aomentrés sous vide à environ 300 cm3.
La température pendant la concentration ne doit pas être
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supérieure à à 30 C .
On ajoute au concentré la quantité d'Arquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
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Le mélange est dilué ave c 300 cm3 de n-he xane Ensuite toute la tétracyoline e et séparée de ta 'l'InaSA
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*t ir m wè $-4 #- organique ,on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunie. L'agitation est continuée pesant 1/2 heure et ensuite
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on filtre -la solution et on ajoute 3,5 gm de Versene.
On ;règle le filtrat à un pTi de 4 à 6 avec Ya0E à 10%.
On agite la solution pendant 12 heures.
On filtre les cristaux de tétracycline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à â0 fJ , On obtient 24,5 ga de tétraoycline base brute, titrant 1027 gamma/mgm.
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Exemple io 5.
10 lt de bouillie de fermentation, débarrassée du mycélium et contenant 33, gm de tétraoyolim chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1.5 avec de l'acide sulfurique. On règle ensuite le pH
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à 3 avec du Naos à 10%.' On ajoute 105 ml d'une solution à 20% de CuS0.520.
Après quelques minutes on ajoute, avec agitation, 900 OM3 de 1laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipité est ensuite séparé de la bouillie épuisée, , titrant 122 gamma/on', et dissous dans 800 cm3 d'alcool butylique.
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On ajoute à la solution d'alcool butylique 250 cm , d'une solution à .4a de Verseno, acidifiée à pH 2,1 aveo de l'acide chlorhydriqoe à 57%.
' 0n agite les deux phases ensemble pendant trois heures.
Ensuite la phase organique est séparée de la phase aqueuse .
La phase aqueuse est séparée avec.200 cm3 d'alcool butylique et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier
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extrait. Les extraits organiques réunis sont coricenbrés sous ,vide à environ 30ü om3 , La température pendant la conce ntration ne doit pas être
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supérieure à ;0 C , On ajoute au concentré la quantité d'Arquad 16/50
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correspondant au laurylsulfate de ai",1(um utilisé. le mélange est dilué avec 300cm3 de n-hexane.
.La tétracycline est séparée de la phase organique avec.
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de l'acide sUlfurique 0.1/N.
Ensuite toute la tétracycline est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
L'.agitation est continuée pendant 1/2 heure et ensuite
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on filtre la solution et on ajoute 3,5 n de iivreene , On règle le filtrat à un pH de 4 à 6 avec NaOH à 10%.
On agite la solution pendant 12 heures.
On filtre les cristaux de tétracycline base brute, on les
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'.lave avec de l'eau et on lex concentre sous vide à 60 C. On obtient 24 gm de tétracyc1ire base brute , titrant 1010 gamma/mgm.
Exemple 4.
10 lt de bouillie de fermentation, débarrassée du mycélium
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et contenant 33, 5 gm de tétracycline chlordhydrate, sont acidifiés à un pH de 1. 5 avec de l'acide sulfurique. On rgle le pH
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à une valeur égale à 2 avec du NaOH à .0, , On ajoute 105 OM3 d'une solution à 20% de 01,1804 ..5O.
Après quelques minutes on ajoute, avec agitation, 1220 cm3 de laurylsulfonate de sodium,à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipité est ensuite séparé de la bouillie épuisée,
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titrant 170 gamma/cm, et es'clisfious dàne 800 CM3 d'alcool butylique.
On ajoute à la solution d'alcool butylique 250 cm 3 el 'u solution à 10% de Yexsene , acidifiée à un pif de J, avec de l'acide chlorhydrique à 3',, On agite les deux phases ensemble pendant trois heures. '
La phase organique est ensuite séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique, et l'alcool, après séparation,, est réuni avec le premier extraite
On concentre sous vide les extraits organiques réunis jusqu'à, environ 300 cm3.
La température pendant l@ concentration ne doit pas être
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supérieure à 3000. On ajoute au concentré la quantité d'Arquad 16/50 correspon-
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dant au laurylsulfonate de sodium utj.lwé, et le mélange est dilué avec 300 ml de n-he xa# . , On sépare ensuite la tétracyoli:# de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0,1 N.
Ensuite toute la tétraoyoline est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
On agite pendant 1/2 heure, on filtre la solution et on
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ajoute 3 , 5 gm de 1WeDB.
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on règle le filtrat a. une valeur pH de 4 à 6 avec ilaoiî 10%.
On agite ensuite la solution pendant 12 heures.
On filtre les cristaux de tétracycline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 0.
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On obtient 23, 2 gan de tétracycline base brute , titrant ' 980 gamma jmgm.
Exemple 5.
10 lt de 'bouillie de fermentation, débarrassée de
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mycélium et contenant 33, 5 n de tétracycline chlorhydrate, sont aoidifiés à un pH de 1,5 aveo de l'acide sulfurique.
On règle ensuite le pFI à une valeur égalet à 2 avec du RaOH à 10%..
On ajo<àij <oye, 105 om; d'une solution à 20% de OuS04.5H20.
Après quelques minutes on ajoute, avec agitation, 900 cm3
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de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
La précipité est ensuite séparé de la bouillie épuisée,
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titrant 102 gamma/cm ut est dissous dans 800 om3 d'alcool \ isoamylique. On ajoute à la solution d'alcool isoamylique 250 cm3
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d'une solution à 10% de Verse#, acidifiée à pH 2,1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%.
On agite les deux phases pendant trois heures. La phaee organique est ensuite séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool isoa-
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amylique, et l'alcool, après la séparation, est réuni aveo le premier extrait. Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 cm3.
La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
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On ajoute au concentré la quantité d'Arquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé, et le mélange est dilué avec 300 cm3 de n-hexane.
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La tétracycline aat séparée de la phase organique avec de l'acide sulfuriique 0.1N, Ensuite, toute la tétraoycllne est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.'
On agite la solution pendant 1/2 heure, ensuite on la
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filtre et on ajoute 3,5 gm de Verae:ne.
Le filtrat est réglé 4'un pFT de 4 à 6 avec du NaOH .0.
On agite la solution pendant 12 heures.
On filtre les cristaux de tétracycline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre à 60 C sous vide.
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On obtient 25 gm de tétrauyoline base brute , titrant 988 gamma/mgm.
Exemple 6,
10 lt de bouillie de fermentation, débarrassée du mycélium
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et contenant 33,5 gm de tétracyoline chlorhydrate, sont acidifiés à un pFi de 1,5 aveg de l'acide sulfurique , On règle le pH . une valeur égale à 2 avec du NaOH 10%.
On ajoute 105 OM3 d'une solution à 20% de CuS04.5H20, Apres quelques minute s, on ajoute, avec agitation, 900 os de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutée.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant
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102 gamma/om', et dissous dans 800 om3 d'alcool butylique , On ajoute à la solution d'alcool butylique 250 om;dtac1de nitrilotr1aoétiqus à 8, acidifié à un pH de 2.1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%.
On agite le s deux phases pendant trois heures.
On sépare ensuite la phase organique de la phase aqueuse,
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La"'bh8se aqueuse est ensuite séparée avec 200 cm d'alcool butylique, et l'alcool, aIt ,a ,; ar '..\ or es réu.. a ec 7.p r m
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extrait. Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à 300 cm3. La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
On ajoute au concentré la quantité d'Arquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
.le mélange e st dilué avec 300 cm3 de n-hexane.
Ensuite la tétracycline est séparée de la phase avec de l'acide sulfurique 0,1N.
Ensuite toute la tétracycline est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
On agite pendant 1/2 heure, ensuite on filtre la solution et on ajoute 3,5 gm d'acide nitriltriaoétique à 8%. '
On règle le filtrat à un pH de 4 à 6 avec NaOH à 10%.
On agite ensuite la solution pendant 12 heures.
On filtre les cristaux de tétracycline base brute, on les lave avec de l' e au, et on les concentre sous vide à 60 C.
On obtient 27,5 gm de tétracycline base brute , titrant 890 gamma/mgm.
Exemple 7.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue du mycélium et contenant 33,5 gm de tétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5avec de l'acide sulfurique.
On règle le pH à une valeur égale à 2 avec du NaOH 10%.
On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute,sous agitation, 900 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée et dissous dans 800 cm3 d'alcool isoamyliqùe.
A la solution d'alcool isoamylique on ajoute 250 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à un pH de 2,1 avec
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de l'acide chlorhydrique à 37%.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
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La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d' Ellco 01 isoamylique, et l'alcool, après séparation, est réuni aveo le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 400 ml.
Pendant la concentration la température ne doit pas
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être supérieure , 30 C, Au concentré on ajoute une quantité de N,N-dibenzyl.6thylnediam3,ne correspondant au laurysulfate de sodium utilisé. le mélange est dilué avec 400 om3 de n-hexane. La tétracycline est séparée de la phase organique avec
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de l'acide sulfurique OI.N.
Ensuite toute la t6treôyoliiya est séparée de la phase organique, on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Âpres agitation pendant 1/2 heure , on filtre la solution .et on ajoute 3,5 gm de Verse ne.
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xe filtrat est réglé à un pH de 4 à 6 avec du NaOH à 1%.
On agite la solution pendant !! heure s .
On filtre les cristaux de tétracyclines base brute, on les lave et on les comeritre sous vide à 6000.
On obtient 22,6 gm de tétracycline base brute, titrant 965 gamma/mgm.
Exemple 8.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium
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et contenant 35,5 gm de tétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5 ave @ de l'acide sulfurique.
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On règle le pH à une valeur égale a 2 avec du NaOH a 10J.
On ajoute 105 ml d'uns solution à 20 de Cuu0.5I20.
Apres quelques minutes on ajoute, sous agitation, 900 on? do laurylsulfate de sodium à 5À.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
La précipite est séparé de la bouillie épuisée, et est dissous dans 800 cm3 d'alcool butylique.
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A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm" d'une solution à 10% de Veraen;, acidifiée à pH 2 el avec de l'acide cl1orh1driqua à 37%.
On agite les deux phases pendant trois hem.'as.
La phase organique est.séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique, et l'alcool, aprLs séparation, est réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous
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vide à, environ 300 cm ,
Pendant la concentration la température ne doit pas être
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supérieure à 3C C .
Au concentré on ajoute une quantité de oleyl aminé correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
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Le mélange est dilué ave c z00 cm3 de n-hexane.
La tétracycline est séparée de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0,1N.
Ensuite toute la tétracyclines est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Après agitation pendant 1/2 heure,on filtre la solution et on ajoute, 3,5 gm de Versez ,
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Le filtrat est réglé à un pH de 4 à, 6 avec du NaOH à 10%.
On agite la solution pendant 12 heures.
On filtre les cristaux de tétracycline base brute,on les lave avec de l'eau, et on les concentre sous vide à 60 C.
On obtient 24 gm de tétracycline base brute, titrant 990 gamma/mgm.
Exemple 9.
10 lt de bouillie de fermentation,dépourvue du mycélium et contenant 33,5 gm de tétracycline chlorhydrate , sont acidifiés à un pH 1,5 avec de l'acide sulfurique .
On règle le pH à une valeur égale à 2 avec du NaOH à 10%.
On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 900 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée, et dissous dans 800 cm3 d'alcool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à un pH de 2,1 avec de l'aoide chlorhydrique à 37%.
()On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est ensuite séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique, et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait,
Les deux extraits organiques réunis sont lavés avec 200 cm3 d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium.
Les extraits organiques réunis sont concentrés aous vide pour obtenir un sirop dense.
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La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
Le concentré est dissous dans 220 cm3 d'alcool méthylique.
.'A la solution de méthanol on ajoute avec refroidissement,
25 cm3 d'acide chlorhydrique concentra.
On laisse la solution en réfrigérateur pendant 12 heures.
On filtre les cristaux formés et on leslave avec méthylisobutylcétone et éther. Après concentration sous vide à 40 C, on obtient 26 gm de tétracycline chlorhydrate brute, titrant 886 gamma/mgm.
Exemple 10.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 33,5gm de tétracycline hlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique .
On règle le pH à une valeur égale à 2 avec du NaOH à 10%.
On ajoute 105 on? d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 900 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes,
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée et est dissous dans 800 cm3 d'alcool isoamylique.
A la solution d'alcool isoamylique on ajoute 250 cm3 d'acide nitrilotriaoétique à 8%, acidifié à un pH de 2 avec de l'acide chlorhydrique à 37%.
Las deux .phases sont agitées pendant trois heures.
La phase organique est séparée-de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool isoamylique, et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait. Les deux extraits organiques réunis sont lavés avec 200 cm3 d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium.
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les extraits organiques réunie sont concentrée sous vide pour obtenir un sirop dense.. - l'amant la concentration la températurene doit pas être supérieure à 30 C.
Le concentré est dissous dans 220 cm3 d'alcool méthylique,
Dans la solution de méthanol on ajoute lentement, avec refroidissement, 25 cm3 d'acide chlorhydrique concentré.
Après refroidissement pendant 12 heures, les cristaux précipités de tétracycline brute sont filtrés et levés/avec méthyl- isobutylcétone et éther. Après concentration sous vide à 40 C, on obtient 27, 4 gm de tétracycline chlorhydrate brute, titrant 875 gamma/mgm.
Exemple 11.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 33,5 gm de tétracyclines chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5avec de l'acide sulfurique.
On règle le pH à une valeur égale à 2 avec du NaOH à 10%
On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H29.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 900 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée et est dissous dans 800 cm3 d'aloool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 om d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à un pH de 2,1 avec de 1'acide chlorhydrique à 37%. On'agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique et l'alcool, après réparation, est réuni aveo le premier extrait.
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Les deux extraits organiquas réunis sont lavés avec 200 cm3 d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium.
La phase aqueuse est ensuite concentrée sous vide pour obtenir un sirop dense,
Pendant la concentration, la température ne doit pas
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être supérieure à 30 C, Le ooncentré est dissous dans 220 em3 d'alcool éthylique, 6n ajoute lentement dans la solution d'éthanol, avec refroidissement, 25 cm3 d'acide ohlorhydrique concentré.
Après refroidissement pendant 12 heures les cristaux précipités de tétracycline brute sont filtrés et lavés avec
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méthylisobutyloétone et ét#r, Après condensation soup vide à 40 C, on obtient 25,4 gm de tétraoyoline chlorhydrate brute, titrant 880 gamma/mgm.
Exemple 12.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue du mycélium
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et contenant 31 gm d'oxytétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH 1,5avec de l'acide sulfurique,
On règle le .pH une valeur de 0,5 avec de l'acide sulfu- riquo à 25%.
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On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de OuS04,5H20.
Après quelques minutes on ajoute, avec agitation, 820 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
La précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant
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32 gauunalcm3, et est dissous dans 500 ce 3 d'alcool butylique .
4 la solution d'alcool butylique on ajoute 250 em3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à un pH de 2,1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%. On agite les deux phases pendant trois heures.
<Desc/Clms Page number 18>
La phase organique est ensuite séparée de la phase aqueuse ,
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique, et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide ,
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à environ 00 cm 3
Tendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
Au concentré on ajoute une quantité d'Arquad 16/50
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correspondant au .aury,eu7.ate (le sodium utilisé.' le mélange est dilué avec 300 ami de n-bexaoe.
L' oxytétraoycl1r.e est ensuite séparée de la phase organique avec de l'acide aulfurique 0,1 N.
Ensuite toute l'oxytétracyoline est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
,Après agitation pendant 1/2 heure on filtre la solution et on ajoute 4 gm de Verse ne .
EMI18.3
Le filtrat est réglé à un pH de 6 8 à 7,0 avec NaOH à lot.
La solution est ensuite agitée pendant 12 heures.
On filtre les cristaux d'oxytétracycline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C .
On obtient 20,7 gm d 'oxytétraoycline base brute, titrant 880 gamma/mgm.
Exemple 13.
10 1t de bouillie de fermentatione dépourvue de mycélium et contenant 31 ga dloxytétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique.
On règle le pH à une valeur égale à 2 avec du NaOH à 10%.
<Desc/Clms Page number 19>
On ajoute 105 cm3 d'une solution. à. 20% de OuS04.5H20, Âpres quelque,s minutes on ajoute, sous agitation, 820 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
,On continue l'agitation pendant 30 minutes,
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant
164 gamma/cm', e t e st diasous dans 500 cm3 d'alcool 'butylique .
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifia à un pH de 2,1 avec de l'acide chlorhydrique a. 37%.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 cm3.
Pendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
Au concentré on ajoute une quantité d'Arquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé,
La mélange est dilué avec 300 cm3 de n-hexane.
L'oxytétracycline e st ensuite séparée de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0.1N.
Toute l'oxytétracycline est ensuite séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Après agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution et on ajoute 4 gm de Veraene.
La filtrat est réglé à un pH de 6,8 à 7,0 avec du NaOH à 10%.
<Desc/Clms Page number 20>
Après agitation pendant 12 heures, on filtre les cristaux d'oxytétracycline base brute, on les lave avec de l'eau, et on les concentre sous vide à 60 C.
On obtient 22,7 gm d'oxytétracycline base brute, titrant 960 gamma/mgm.
Exemple 14
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 31 gm d'oxytétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique.
On règle ensuite le pH à une valeur de 3 avec du NaOH à io%.
On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelquesminutes, on ajoute sous agitation, 820 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
On continue l'agitation pendant 30 minutes .
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant 189 gamma/cm , et est dissous dans 500 cm3 d'alcool butylique ,
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm3 d'une .; solution à 10% de Veraene , acidifiée à un pH de 2.1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La .phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique , et l'alcool après séparation est réuni avec 'le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 cm3.
Pandant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
On ajoute au concentré uns quantité d'Arquad 16/50 cor- respondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
<Desc/Clms Page number 21>
Le mélange est dilué avec 300 cm3 de n-he xane .
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On sépare ensuite l'oxytétracyoline de la phase organique avec de -l'acide sulfurique 0.1N.
. Ensuite toute l'oxytétracycline est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux xéunis.
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'Après agitation pendant V2 heure, on filtre la solution et on ajoute 4 gm de Versene .
16 filtrat eat réglé à un pH de 6,8 à 7,0 avec NaOH à 10%.
On agite ensuite la solution pendant 12 heures, on filtre les cristaux d'oxytétraoyolino base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C!. On obtient 22,2 gm d'oxytétxacyoline base brute-; titrant 877 gamma/mgm.
Exemple 15.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium'
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et contenant 31 ,'oxytétraoycline chlorhydrate, sont acidifies 'un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique.
On rési ensu8 le pil à une valeur de 2. avec du Naos à 1G'v.
On ajoute 105, cm; d'une solution à 20% de OuS04,5H20.
Après quelques minutes, on ajoute, sous agitation, 1100 am3 de laurylaulfonate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
La précipité est séparé de la bouillie épuisée , titrant 193 gamma/cm3, et est dissous dans 500 cm3 d'alcool butylique ,
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm3 d'une solution à la$ de Versene., acidifiée à un pH de 2,1 avec de l'acide chlorhydrique à. 37%.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse .
<Desc/Clms Page number 22>
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La phase aqueuse est séparée avec 200 em3 d B1.cool butylique, et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait. les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 cm3.
Pendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
Au concentré on ajoute une quantité d'Arquad 16/50
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correspondant au laurylaulfonate de sodium utilisé.
Le mélange est dilué avec 300 am3 de n-hexane, L'oxytétracycline est séparée de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0..ri.
Ensuite toute l'oxytétracyo1ine est séparée de la phase organique,e t on ajoute 5 gm de charbon actif aux extrait aqueux réunie.
Apres agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution
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et on ajoute 4 où de Veraene. Le filtrat est régira. un pli de 6..5 à ',0 aveo du NaOH à 10%. Après agitation pendant 12 heures, on filtre les cristaux d'oxytétracyo1ina base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C.
On obtient 21,2 gm d'oxytétraoyollne base brute, titrant 912 gamma/mgm.
Exemple 16.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium
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et contenant 31 gm d'oxytêtraayal3.na chlorhydrate, sQnt .aa,d.f.âa à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique.
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On règle le pH à une valeur de 2 avec du NAOR à 10%, 1 On ajoute 105 em3 d'une solution à 20% de OuSO405H2 0. Après quelques minutes, on a joute, sous agitation, 820 cm3
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de 1&Urvjwuifate de sodium à 5%.
<Desc/Clms Page number 23>
L'agitation est continués payant 30 minutes. le précipita est séparé de la bouillie épuisée,titrant 164 gamma/cm3. et est dissous dans 500 cm3 d'alcool isoamylique.
A la solution d'alcool isoamylique on ajoute 250 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à un pH de 2,1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%.
* On agite les deux phases pendant trois heure s.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse,
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool isoamylique et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait.
' Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 cm3. pendant la concentration le température ne doit pas être supérieure à 30 C.
On ajoute au concentré une quantité d'Arquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé .
Le mélange est dilu6 avec300 on? de n-haxane .
On sépare ensuite l'oxytétracycline de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0.1N.
Ensuite toute l'oxytétracycline est séparée de la phase organique , et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Après agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution et on ajoute 4 gm de Versene.
Le filtrat est réglé à une valeur pH de 6,8 à 7,0 avec du NaOH à 10%.
Après agitation pendant 12 heures, on filtre les cristaux d'oxytétracycline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C.
On obtient 23,1 gm d'oxytétracycline base brute, titrant
930 gamma/mgm.
<Desc/Clms Page number 24>
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17 Bm:Q,e 11, 10 lt de bouillie de -ermenat. on, dépourvue de myo'liU1l1 et contenant 31 gn ci' oxytétrao101ine chlorhydrate, Sont acidifiés à un pH de 1,5 avec de l'acide sulfurique
On règle le pH à une valeur de 2 aveo du NaOH à la$.
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On ajoute 105 om d'une solution à 20% de CuS0..5HgO.
Après quelques minutes, on ajoute, sous agitation,
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$20 OM3 de '1aurylaulfate de sodium a. 5%. ' L'agitation est continuée perdant 30 Minutes.
La précipite est séparé de la bouillie épuisée, titrant
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1±4 ga=a/om3t et e st dissous dans 500 om3 d'alcool butylique. j la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm*' d'acide nitrilotriacétique à 8, acidifiée à un p>2,1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%. '"
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée aveo 200 cm3 d'alcool butylique,et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 on?*
Pendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
Au concentré on ajoute une quantité d'rquad 16/50 correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
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Le mélange est dilué avec 300 cia3 de n-hexane. L'oxytétraaycline est séparée de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0 1N, Ensuite toute 1'oxytétraoyoline est séparée de la phase organique, et on a joute.. 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis...
<Desc/Clms Page number 25>
Apres agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution et cn ajoute 4 gm de Versene.
Le filtrat est réglée un pH de 6,8 à 7,0 avec NaOH à 10%.
Après agitation pesant 12 heures, on filtre les cristaux d'oxytétraoyoline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C.
On obtient 22,5 gm d'oxtétracycline base brute, titrant 946 gamma/mgm.
Exemple 18.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 31 gm d'oxytétracycline chlorhydrate, sont acidifiée à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique.
On règle le pH à une valeur de 2 avec du NaOH à 10%.
On ajoute .-?05 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 820 cm3 de laurylsulfats de- sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée , et est disso@s dans 500 cm3 d'alcool isoamylique.
A la solution d'alcool isoamylique on ajoute 250 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à un pH=2,1 avec de l'acide ohlorhydrique à 37%.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse ,
La phase aqueuse est séparée avec 150 cm3 d'alcool isoa- mylique, et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait .
-Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 cm3.
<Desc/Clms Page number 26>
La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
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Au concentré on ajoute une quantité de N-N,.d.benzyhéthylènediamine correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
Le mélange est dilué avec 300 om3 de n-hexane.
L'oxytétracycline est séparée de la phase organique ave c de l'acide sulfurique 0,1N.
Ensui te toute l'oxytétraoyoline est séparée de la phase ' organique, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Après agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution et on ajoute 4 gm de Versene.
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Ze filtrat est réglé à un pH 1: 6.8 avec du NaOH à 10%. Après agitation pendant 12 heures, on 'filtre les cristaux d'oxytétracycline base brute, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 0 .
On obtient 21 gm d'oxytétraoylïne base brute, titrant 923 gamma/mgm.
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E:x:emle1 12.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 31 gnrd'oxytétraoyoline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH=<l,5 avec de l'acide sulfurique.
On règle le pH à une valeur égale à 2 avec du NaOH à la$.
On ajoute 105 em3 d'une solution à 20% de ouS0485H20,
Après quelques minutes on'ajoute, avec agitation, 820 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipita est séparé de la bouillie épuisée et est dissous dans 500 cm3 d'alcool butylique,
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm3 d'une
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solution a 10% de Verseret acidifié à un pEm2,1 avec de l'acide
<Desc/Clms Page number 27>
chlorhydrique à 37%.
On agite les doux phases pendant trois heures, La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
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;, La phase aqueuse est séparée aveo 200 om d"alcool butylique,et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont concentrés sous vide à environ 300 ml.
. La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
Au concentré on ajoute une quantité d'oléylamine cor-
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respondant au laurylsulfate de sodium utilisé. la mélange est dilué avec 500 cm 3 de n.-1 xano , .
L'cxytétraoyoline cet séparée"de la phase organique avec de l'aoicte sulfurique 0.1N.
Ensuite toute l'oxytétraoyc.3.ne est séparée de la phase organique, et on ajoute 5 gm de ohhrbon actif aux extraits aqueux .réunis.
Aprbs agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution et on ajoute 4 gm de Versens.
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10 filtrat est réglé à un pH de 6,8 à ' 0 avec du NaOH à 10%.
Après agitation pendant 12 heures, on filtre les cristaux
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d' oxytétracyc11:l:.le base brute , on le slave avec de l'eau e t on le s concentre sous vide à 60 C .
On obtient 24 gm dtoxytétracyolirie base brute, titrant 902 gamma/mgm,
Exemple 20.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium
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,et contenant 31 gm d'oxytétracyaline chlorhydrate, sont ao.d3,ég à un pFi 1,5 avec de l'acide sulfurique. On règle le pH a uns
<Desc/Clms Page number 28>
valeur de 2 avec du NaOH à 10%.
On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation,
820 cm de lauryleulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée et est dissous dans 500 cm3 d'alcool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 250 cm3 de solution à 10% de Versens,acidifiée à un pH= 2,1 avec de l'acide chlorhydrique à 37%.
On agite les deux phases pendant 2 ou 3 heures.
On ajoute une quantité de chlorure de sodium suffisante pour saturer l'eau dans le mélange,
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool butylique, et l'alcool, âpres séparation, e at réuni avec le premier extrait.
Les extraits organiques réunis sont lavés avec 200 cm3 d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium.
La phase organique est concentrée sous vide pour obtenir un sirop dense.
La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C. ,
La concentré est dissous dans 200 cm3 d'alcool méthylique, et est ajouté à la solution d'alcool méthylique, et à la solution d'alcool méthylique on ajoute lentement, avec refroidissement,
25 cm3 d'acide chlorhydrique concentré.
Apres refroidissement pendant 12 heures, on filtre les cristaux et on les lave avec méthylisobutylcétone et éther.
Après concentration sous vide à 60 C. on obtient 25 gm de 5-oxytétracycline chlorhydrate, titrant 925 gamma/mgm.
<Desc/Clms Page number 29>
Exemple 21.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et oontenant 31 gm d'oxytétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique. Ensuite on règle le pH à uns valeur égale à 2 avec du NaOH à 10%.
- , On ajoute 105 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 820 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
L'agitation est continuée pendant 30 minutes. le précipité est séparé de la bouillie épuisée par filtration et est dissous dans 500 cm3 d'alcool isoamylique.
A la solution d'alcool isoamylique on ajoute 250 cm3 d'acide nitrilotri/cétique à 8%.
On agité les deux phases perdant trois heures.
La phase organique, est séparée de la phase aqueuse.
. La phase aqueuse est séparée avec 200 cm3 d'alcool isoamylique, et l'alcool, après séparation, est réuni avec le premier extraits
Les deux extraits organiques réunis sont lavés avec 200 cm3 d'une'solution aqueuse saturée de chlorure de sodium.
La 'phase aqueuse est concentrée sous vide pour obtenir un sirop dense.
Pendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 3000,
Le concentré est dissous dans 220 on? d'alcool méthylique et à la solution d'alcool méthylique on ajoute lentement, avec refroidissement, 25 cm3 d'acide chlorhydrique concentré; après refroidissement pendant 12 heures on filtre les cristaux et on les lave avec méthylisobutyloétone et éther.
On obtient 25,8 gm d'oxytétracycline chlorhydrate brut, titrant 918 gamma/mgm.
<Desc/Clms Page number 30>
Exemple 22.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 17 gm de 7-chlorotétraoycline chlorhydrate, sont acidifies à un pH=1,5 aveo de l'acide sulfurique. On règle ensuite le pH à 0,5 avec de. l'acide sulfurique à 25%.
On ajoute 55 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Apres quelques minutes, on ajoute sous agitation 410 cm3 de laurylsulfate de sodium à 5%.
On continue l'agitation pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant 132 gamma/cm3,et est dissous dans 250 cm3 d'alcool butylique, A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 cm3 d'une solution à 10% de Verssne, acidifiée à pH 2,1 avec de l'acide sulfurique.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée avec 100 cm3 d'alcool butylique.
Ensuite les deux extraits organiques sont réunie, on sépare les dernières-traces de cuivre en lavant la phase organique avec 50 cm3 d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
La phase organique est concentrée sous vide.
La température pendant la concentration ne d@oit pas être supérieure à 30 C.
Le concentré est dilué avec 150 cm3 d'alcool méthylique et à la solution d'alcool méthylique on ajoute lentement, sous refroidissement, 13 cm3 d'acide chlorhydrique concentré.
Apres refroidissement pendant plusieurs heures, on filtre les cristaux de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, on les lave avec de l'éther et on les conce ntre sous vide à 40 C.
On obtient .11,7 gm de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, titrant 927 gamma/mgm.
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Exemple 23.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique.On règle ensuite le pH à 2 avec du NaOH à 25%.
On ajoute 55 cm3 d'une solution à 20% de CuS04.5H20.
Apres quelques minutes on ajoute, avec agitation, 410 cm3 d'una soultion à 5% de laurylsulfate de sodium.
On continue l'agitation pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant 53 gamma/cm3,par filtration et est dissous dans 250 cm3 d'aloool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée. pH 2,1 avec de l'acide sulfurique.
On agite les deux phases pendant trois heures.
La phase organique est séparée de la phase aqueuse .
, La phase aqueuse est séparée avec 100 cm3 d'alcool butylique.
Ensuite les deux extraits organiques sont réunis, on sépare les dernières traces de' cuivre en lavant la phase organique avec 50 cm3 d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
La phase organique est concentrée sous vide.
La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
Le concentré est dilué avec 150 cm3 d'alcool méthylique et è, la solution d'alcool méthylique on ajoute lentement, en refroidissement, 13 cm3 d'acide chlorhydrique concentré.
Après refroidissement pendant plusieurs heures on filtre les cristaux de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, on les lave aveo éther et on les concentre sous vide à 40 C.
On obtient 12 gm de 7-chlorotétracyoline chlorhydrate, titrant 940 gamma/mgm.
<Desc/Clms Page number 32>
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Exem-ple 2à* 10. lt de 'bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-ohlorotétraoycline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique. Ensuite on régle le pH à une valeur de 3 avec du NaOH à 10%.
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On ajoute 55 om3 cllum solution à in% de (3uS0.5H0.
Apres quelques minutes on ajoute, sous agitation, 410 ont d'une solution 4 z de laurylsulfate' de sodium.
On continue l'agitation pendant 30 minutes.
La précipité est séparé de la bouillie épuisée, titrant
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74 gamyna/OM3 et est dissous dans 250 om3 d'alcool butylique, à la solution d'alcool butylique 'on ajoute 125 ons d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à pH 2tl avec de l'acide sulfurique.
Après agitation pendant trois heures, la phase organique est séparée de la phase *aqueuse,
La phase aqueuse est séparée avec 100 cm3 d'alcool 'butylique .
Ensuite les deux extraits organiques sont réunis, on sépare les dernièrds traces de cuivre en lavant la phase organique avec 50 cm3 d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
On concentre la phase organique sous vide .
La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
La concentré est dilué avec 150 cm3 d'alcool méthylique et à la solution on ajoute lentement, en refroidissant t, 13 cm3 d'acide chlorhydrique concentré, Apres refroidissement pendant plusieurs heures, on filtre
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-les cristaux de 7-ohlorotétracycline chlorhydrate et on les lave avec éther et on les concentre sous vide à 40 C.
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On obtient 12,1 gra de 7-ohlorot6tracycline chlorhydrate, titrant 890 gamma/mgm.
<Desc/Clms Page number 33>
Exemple 25, 10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium
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et contenant 15 ga de 7-ohlorotéµbraayelino chlorhydrate, sont acidifiée à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique. On règle le
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pH à 2 avec du NaOH à 25% On ajoute 55 ens d'une solution à 20% de ouS04.5H20.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 550 om3 d'une solution à 5 de laurylsulfonate de sodium.
On continue l'agitation pendant 30 minutes. le précipite est sépara de la bouillie épuisée, titrant
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68 a/cm3, par filtration, et est dissous dans 250 ont d'alcool butylique .
A la solution d'aloogpbu%ylique on ajoute 125 em3 d'une solution t,*10 de Verse:#, 9 acidifiée à pli 2,1 avec de l'acide sulfurique'.
Après agitation pendant trois heures, on sépare la phase organique de la phase aqueuse.
, La phas@ aqueuse est séparée avec 100 cm3 d'alcool butylique.
Ensuite desdeux extraits organiques sont réunis, on sépare les dernières traces de cuivre en lavant la phase organique avec 50 cm3 d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
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La phase organique est concentrée sous vide à environ 75 cm3.
Bandant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
On ajoute 25 en? d'une solution saturée aqueuse de chlorure de sodium et 25 cm3 de Cellosolve.
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On agite le mélange en re fr01dissamlt fortement,
Lorsque le mélange est à 0 C, on ajoute de l'acide ohlorhydrique concentré jusque un pH=0,3.
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on continue l'agitation pendant la heures, en reiroi" 1.\ dissant forte msntt Ensuite on filtre les cristaux de 7-chlorotétraoyc11ne 'chlorhydrate, on les lave avec de l'éther et on les concentre sous vide a. 40 "C." On obtient 12,8 gm de 7-ohlorotétraoyolina chlorhydrate, titrant 872 gamma/mgm.
:Exemple 26.
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10 lut de bouillie de fermntationg dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-ohlorotétraoyolioe ohlorhydrate, sont aciditide à pH R5 avec de l'acide ohlorhydrique. Ensuite on ajuste le pE à 2 avec du NaOH à 25%.
On ajoute 55 on? d'une solution à 205 de ouso4o5E2o* Après quelques minutes, on ajoute avec agitation 410 cm5 d'une solution à 5% de lauryl,sulfate de sodium.
On continue l'agitation pendant 30 minutes. Le précipité est séparé de la bouillie épuisée par filtration et est dissous
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dans 250 om5 d'alcool isoamylique.
A la solution isoamylique on ajoute 125 cm3 d'une solution à 10% de Verse ne , acidifiée à pH 2,1 avec de l'acide sulfurique.
Apres agitation pendant trois heures, la phase organique est séparée de la phase aqueuse,
On sépare la phase aqueuse avec 100 cm3 d'alcool isoamylique .
Ensuite les deux extraits organiques sont réunis, on sépare les dernières traces de ouivre en lavant la phase organique.,
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avec 50 cm" 5 d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
On concentre la phase organique sous vide.
Tendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
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Le concentré est ensuite dilué avec 150 cm3 d'alcool méthylique.
On a joute à la soultion d'alcool méthylique, lenement avec refroidissement, 18 on? d'acide chlorhydrique concentré.
Après refroidissament rendant plusieurs heures, on filtre les cristaux de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, on les lave avec de l'éther et on les concentre sous vide à 40 C.
On obtient 11,9 gm de 7-ohlorotétraoyoline chlorhydrate, titrant 912 gamma/mgm.
Exemple 27.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-ohlorotétracycline ohlorhydrate, sont acidifiés à un pH=1,5 avec de l'acide. sulfurique. Ensuite on règle le pH à 2 avec du NaOH à 25%,
On ajoute 55 cm3 d'une solution à 20% de CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute,sous agitation,
410 cm3 d'une solution à 5% de laurylsulfate de sodium.
On continue 1'agitation pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée par filtration et est dissous dans 250 cm3 d'alcool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 cm3 d'acide nitrilotriacétique à 8%, acidifié à pH 2,1 avec de l'acide aulfurique.
Apres agitation pendant trois heures, on sépare la phase .organique de la phase aqueuse.
La phase aqueuse est séparée de la phase organique avec
100 cm3 d'alcool butylique. Ensuite les deux extraits organiques sont réunis, on sépare les dernières traces de cuivre en lavant la phase organique avec 50 en? d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
La phase organique est concentrée sous vide.
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La température pendant la 90HMnt:Elône doit pas
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tftre supérieure à 30 O.
Le concentré est ensuite dilué avsc 150 cm3 d'alcool méthylique.
A la solution d'alcool méthylique' on ajoute lentement, avec refroidissement, 13 cm3 d'acide chlorhydrique concentré,
Après refroidissement pendant plusieurs heures, on
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filtre les cristaux de 7-chloxotétraoycl.ne ohlorhydrate, on f les lave avec de l'éther et on le concentre, sous vide, à 40"0.
On obtient 12,1 gm de 7Çahlorotétraeyo1ine chlorhydrate, titrant 930 gamma/mgm.
Exemple 28.
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10 lt de bouillie de farmentation, dépourvue de mycélium . et contenant 15 gm de 7-ohlorotétraoyoline chlorhydrate, sont
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acidifies à un pH=.,5 avec de 11 acide sulfurique. Ensuite on règle le pH à 2 avec du 1JOH à 53..
On ajoute 55 oms d'une solution à 20jÉ de GuS0,.5E0a ,
Après quelques minutes on ajoute, soue agitation, 410 cm3 d'une solution à 5% de laurylsulfate de sodium.
On continue l'agitation pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée par
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filtration et est dissous dans 250 am5, d' a.oa o. butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 am' d'ulfl solution à 10% de Vorsene, acidifiée à pH 2,1 avec de .l'acide sulfurique.
Après agitation pendant trois heures, la phase organique est séparée de la phase aqueuse,
La phase aqueuse est séparée avec 100 cm3 d'alcool butylique.
Ensuite les deux extraits organiques'sont réunis, et on sépare les dernières traces de cuivre en lavant la phase
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organique avec 50 cm3 d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium.
La phase organique est concentrée sous vide.
Pendant la concentration la température ne doit pas être supérieure à 30 C.
Le concentre est ensuite dilué avec 150 cm3 d'alcool éthylique.
On ajoute à la solution d'alcool éthylique, lentement avec refroidissement, 13 cm3 d'acide chlordhydrique concentré.
Après refroidissement pendant plusieurs heures, on filtre lescristaux de 7-ohlorotétraoyoline chlorhydrate, on les lave avec de l'éther et on lesconcentre sou@ vide à 40 0
On obtient 12 gm de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, titrant 930 gamma/mgm.
Exemple 29.
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-chlorotétracycline chlorhydrate, sont acidifiés à un @H=1,5 avec de l'acide Sulfurique Ensuite on règla le pH à 2 avec du NaOH à 25%.
On ajoute 55 cm3 d'une solution à 20% do CuSO4.5H2O.
Après quelques minutes on ajoute, sous agitation, 410 cm3 d'une solution à 5% de laurylsulfate de sodium.
On continue l'agitation pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée par filtration et est dissous dans 250 cm3 d'alcool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à pH 2,1 avec de l'acide sulfurique.
Apres agitation pendant trois heures, la phase organique est séparée de la phase aqueuse.
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La phase aqueuse est'séparée avec 100 cm 3 de butanol.
Ensuite les deux extraits organiques sont réunis, et . on les concentre Boue vide à environ 150 cm3. pendant la concentration la température ne doit pas
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être supérieure à â0 û .
On ajoute au concentré une quantité d'Arquad 16/50 correspondant au lauryleulfate de sodium utilisé.
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Le mélange est dilué avec 150 OM3 de n-hexane, Ensuite on sépare la 7-ohiorotétraoyolioe de la phase ' aqueuse avec de l'acide sulfurique 0,1 N.
Apres séparation de la phase organique, on ajoute 5 gm de charbon actif aux deux extraits aqueux réunis. '
On agite la solution pendant 30 minutes, on filtre et on ajoute 2 gm de Versene.
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La filtrat est réglé à un pH 7 avec du Naos à 10%.
Après agitation pendant 12 heures on filtre les cristaux de 7-ohlorotétracycline base et on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C.
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On obtient 10,1 gm de 7-ohlorotétracyoline base brute, titrant 980 gamma/mgm.
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Exsm'ple 30 10 It de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-chlorotétraoyoline chlorhydrate, sont acidifiés à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique. on règle ensuite
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le pH à 2 avec du ha0E à 25%.
On ajoute 55 cm 3 d'une solution à bzz de uSQ.5H20, Apres quelques minutes on ajoute, avec agitation, 410 em3 de 7.aurylat7.fate de sodium 4 5%.
On continue l'agitation pendant 30 minutes,
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée par filtration et est dissous dans 250 cm3 d'alcool butylique.
<Desc/Clms Page number 39>
A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 cm3 d'une solution à 10% de Ve rse ne , acidifiée à. pH 2,1 avec de l'acide sulfurique.
Après agitation pendant trois heures, on sépare la phase organique de la phase aqueuse. la phase aqueuse est séparée avec 100 cm3 d'alcool butylique,
Les extraits organiques réunis sont oonoentrés, sous vide, environ 150 cm3.
La température pendant la concentration ne doit pas être supérieure à 30 C.
On ajoute au concentré une quantité de oléylamine
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correspondant au lauryleultate de 1]flium utilisé.
Le mélange est dilué avec 150 cm 3 de n-hexane. ensuite on sépare la 7-chlorotétraoyeline de la phase organique avec de l'acide sulfurique 0,1 N.
La phase organique est alors épuisée, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Après, agitation pendant 1/2 heure on filtre la solution,
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on ajoute 2 gm de Arsène et on règle ta pis à 7 avec du NaOH" à 10%.
Apres agitation pendant 12 heures, on filtreles cristaux
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de 7-chlorotétraoycline base, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous vide à 60 C .
On obtient 10 t 3 gm de 7-ehlorotè trac yo lino base brute , titrant 967 gamma/mgm.
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Lcemle 3..
10 lt de bouillie de fermentation, dépourvue de mycélium et contenant 15 gm de 7-olTlorotétraoyclina'chlorhydrate, sont acidifiés à un pH=1,5 avec de l'acide sulfurique, On règle alors
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le pH à 2 avec du NaOH à 25%.
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On ajoute 55 an3 d'une solution à 20% de OuS04,5H20.
Après quelques minutes on ajoute, avec agitation, 410 cm5 de laurylaulfate de.aodiw# à 5.
On continue l'agitation pendant 30 minutes.
Le précipité est séparé de la bouillie épuisée par filtration et est dissous dans 250 cm3 d'alcool butylique.
A la solution d'alcool butylique on ajoute 125 cm3 d'une solution à 10% de Versene, acidifiée à pH 2,1 avec de l'acide sulfurique,
Après agitation pendant 3 heures, la phase organique est séparée, de la phase aqueuse,
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La phase aqueuse est séparée avec 500 om3 de, butanol,
Les extraits organiques réunis sont concentrés Doua vide, à environ 150 cm3.
Pendant la concentration la température ne doit pas
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8'txe supérieure , 30C.
11 Au concentré on ajoute une quantité de chlorure de alaoy7.(OICl)-di.benzylammonium, correspondant au laurylsulfate de sodium utilisé.
Le mélange est dilué avec 150 cm3 de n-hexane.
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On sépare alors la 7-ohlorotétraoyoline de 7.$ phase organique avec de l'acide sulfurique 0,1 N.
Ensuite la phase organique est épuisée, et on ajoute 5 gm de charbon actif aux extraits aqueux réunis.
Après agitation pendant 1/2 heure, on filtre la solution,' on ajoute 2 gm de Versene,et on règle le pH à une valeur de
7 avec du NaOH à 10%.
Apres agitation, pendant 12 heures, on filtre les cristaux
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de 7..ahlorotétxacycli base, on les lave avec de l'eau et on les concentre sous'vide à 0 C .
On obtient 10,3 gm de 7-ohlorotétraoyclina base brute, titrant 980 gamma/..Iném.