<Desc/Clms Page number 1>
*nouveaux polypeptides et procédé pour les préparer" L'invention a pour objet de nouvelle substances théra-
EMI1.1
pentiquement utiles du type des polypeptides ainsi que leur procède de préparation.
Plus particulièrement, 1'invention a pour objet une classe de polypeptides doués d'une grande
EMI1.2
activité Yalodilatatrice et hypotensive, qui sont l'hendéca- peptide L-pyrogXttam.prolyl-L-séryl-L-ly.yl.L-MpartylLl* -alan11-L-pén11.11-L-1801euc11-gl1c11-L-leuc11-L-.éth1onin- aalde (!)# l'htndécapept1de L-gluttuainyl.-L-prolyl-L'-eeryl-I' .lyar,-IF-aa,ekrtyl.le.any.-L-phényle7 anyl-L.eolaucyl-glycyl -leucylw-abt.osx3aamt.da (II) et leurs dérives (III), le tétrapeptide L-glutIJl1n1-L-pl'Ol;rl-L-.é171-L-1181nt (IV) et
<Desc/Clms Page number 2>
EMI2.1
ses dérivés (V), l'heptapeptide L-sspartyl-L-alanyl-L-phanyl- alanyl-L-:
Lsoleucyl-glyoyl-L-leucyl-L-méthioninam1de (VI) et ses dérivés (VII), l'hexapeptide L-alanyl-'L-phénylalanyl-L" .isoleucy3.-glycyl L-3.eucyl.- L-rnéthioninamide (VIII) et ses les dérivés (IX), les compositions pharmaceutiques qui/contiennent et leur procédé de préparation. Les hendécapeptides 1 et II et Ilhexapeptide VIII ont un grand pouvoir vasodilatateur périphé
EMI2.2
rique, bien décelable spécialement chez le chien et Ithomme, de sorte que leur usage peut être recommandé dans le traite- ment des attaques'chez les hypertendus
Les polypeptides III, IV, V, VI, VII, IX sent utiles comme intermédiaires et certains d'entre eux pour leur activité hypotensive et vasodilatatrice.
Les polypeptides de l'invention peuvent être appelées
EMI2.3
de façon générale R-L-alanyl-L-phênylalanyl-L-looleucyl-glycyl-L- -leucyl-méthioninamide8, R étant un atome d'hydrogène ou un groupement L-aspartyle, L-giutaminyl*'L-.prolyt#L'Béryl'-L-'lysyl' -L-aspartyle, ou L-pyroglatamyl..L pxo.yl-T.raéryl-Lr.3.ysyl -aspartyle. Leur procédé de préparation est basé sur les réactions générales suivantes On condense un dérivé (X) du nouveau tripeptide L- alanyl-L-phénylalanyl-L-isoleucine (XI) contenant un groupe pro- tecteur du groupe mine avec le nouveau tripeptide glycyl-L-
EMI2.4
3.eucy..T,..,méth.oninaznide (XII) pour obtenir llhexapept1de IX dont on élimine le groupe protecteur du groupe amine pour obte- nir l'hexapeptide L alanyl L-phényZa.lany. G3so.rucyilray ' -Z.-leucyl.L.m6thionïnamîde (VIII).
On fait alors réagir cet
<Desc/Clms Page number 3>
EMI3.1
eapep,àr 11 sur un dérivé d'acide aspartique portant yn groupe protecteur du groupe amine et un groupe p-earboxyle pour obtenir l'heptapeptide que l'on transforme en hepta- peptide VI après avoir élimine les groupes protecteurs,
On condense le dérivé du nouveau tétrapeptide L-glute-
EMI3.2
m3,y iPxo.y,l.séry,.,L .ysine *) dont le groupe aminé est protège avec l'heptapeptide VU pour obtenir lhendcapeptide 11 que l'On convertit, par élimination du groupe protecteur, On.bend4capeptide lip à partir duquel on obtient Ithendéoppep- tide 1 par élimination d'ammoniac.
Pour obtenir le nouveau tétrapeptide L.-gutaenylffllo. al.ï.aécy,L.,ys.ne (IV), on fait réagir la Iglutaminyï- pxo.,na dont le groupe amine est protégé, sur la séry3..
-L-lysine dans laquelle le groupe aminé en epsilon et le groupe carboxyle de la lysine sont tous deux protégés, et on élimine les groupes protecteurs du tétrapeptide obtenu.
Pour protéger les groupes aminé (substituant R2),
EMI3.3
on peut utiliser les groupes toluenesulfonyle, carbobenaxyr caxbo taxobutoxyle, txi,u4xaoétyl,e triphénylm4thylop etc*, habituellement utilisés dans la chimie des polypeptides.
Pour protéger le groupe carboxylo (substituant R3),on peut utiliser les groupes méthyle, éthyle, butyle tertiaire,
EMI3.4
benzyle, p-nitrobenzylee etc., habituellement utilisés à cet effet.
Les dérivés d'acide propres à réagir sur les groupes aminé sont le chlorure, l'azide, l'ester de p-nitrophényle etc,, qui servent habituellement pour ce enre de réaction ; on peut aussi faire réagir l'acide en présence d'une dicyclo-
EMI3.5
he xyl-çarbodliznlde
<Desc/Clms Page number 4>
EMI4.1
Pour éliminer les groupes protecteurs ainsi fiil tt Indiqué en détail aux exemple? suivants, on peut procéder suj-
EMI4.2
vent les procédés connus dans!la littérature, par exemple
EMI4.3
traiter le composé par un hydroxydo alcalin 04 par le .Qd1 dans l'ammoniac liquide, çu par Z'4cteq chorhydriue w r<cn<hydrj..que, ou bien opérer une tyirognation ,t8vtie,
EMI4.4
suivant les cas.
EMI4.5
Pour séparer et purifier le? ,oyptPtldè. suivant l'invention, en particulier les tutn<:t4Ifapeptldes, on peut aussi procéder suivant des techniques bien connues de çhro matographiep soit sur de l'alumine basique, soit sur des résines échangeuses d'ions ou par dotrtbution b contre-
EMI4.6
-courante En particulier, on exécute de préférence le procède de l'invention comme suit.
EMI4.7
On condense le chlorure de lu"es9onYl.pyr glutamyle avec la proline et en convertit le dipeptide obtenu en toluonesulf onyllglutamirylwV-pro/Wn pa* réaction sur . 1 ammoniac concentré.. On condense encore ou dipoptlde avec le chlorhydrate de L-.86ryl-('!to3rUneeulfonyl)-'îlyainate d'éthyle (que l'on obtient en condensant le c rbofc n ôxy*&N ##séryl-fazlde avec It "-N...tolune8\.1;
Lf9nY1..LM3,y.1nate d'éthyle et en éliminant ensuite le groupe carbobenzoxylo, pour < obtenir le N-tolunesulfonYllutamtnyl.prQ1Y .*e6ryl.( 6- -N-toluène8ulfonyl)...LooIy'inat. d'éthyle (formule V dans laquelle R2 m toluenesulfonyj-e, R4 Jill C+éthyle) dont on élimine alors le groupe éthyle pour obtenir le tétra-i peptide V (R2 m toluènesulfonylet R4 pH), En éliminant les groupes toluène sglfonyle on obtient le tetrapeptide 3W '
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
On pout aussi obtenir le 1;
<tr<ptide IV <V60 de bons rendement* en condensant la N-4tUbobenzoxy-t,...glutamI.nYt,.. proline (obtenue par réaction do laproline sur le chloruré de N-aaxbobenzoxy-8r.pYroglutamyxe, puis par réaction du pro- duit sur l'ammoniac) avec le Lsryl.. t> #l-carbobenaûxy-t *
EMI5.2
-lysinate dé méthyle (que l'on obtient en faisant réagir la
EMI5.3
N-triphênylm6thyl-L..à 6rine sur 1' t f, -N-carbobenzoxy-L-ly*1ne,
EMI5.4
puis en hydrolysant par l'acide acétique aqueux) et en élimi- nant ensuite les groupes protecteurs.
EMI5.5
On condense le chlorhydrate de L-ph4nylalanyl-L-isG-
EMI5.6
leucinate de Méthyle (que l'on a obtenu en condensant la
EMI5.7
carbobenzoxy-t,ph4hylalanine avec le L-isoleucinate de
EMI5.8
méthyle, puis en éliminant le groupe carbobenzoxyle du dipeptide obtenu) avec la carbobonzoxy-L-alanine pour obtenir
EMI5.9
le carbobenzoxy-L-alanyl-L-ph6nylalanyl-L-isoloucinatë de
EMI5.10
méthyle dont on élimine le groupe méthyle pour le convertir
EMI5.11
en carbobonzoxy-L-alanyl-L-phénylalanyl-L-1s01euc1ne (X).
On condense ce tripeptide avec la 91ycyl-L-leucyl-éth1onifi amide (XII) (que l'on a obtenue en condensant la carbobonzoxy- -glycyl-L-leuclno avec le mdthioninate de méthyle,, puis en
EMI5.12
faisant réagit le tripeptide obtenu sur une solution saturée
EMI5.13
d'ammoniac dans le méthanol pour obtenir la carbobenzoxy- -qlycyl-L-leucYl-méth1oninamide dont on élimine le groupe aarbaban.axyxQ), afin d'obtenir la aarbobenzoxy-L.alahylLr. -ph'nylalanyl-L-1so1eucyl-glycyl-L-leucyl-L-méth1on1namide (IX)
EMI5.14
dont on élimine le groupe carbobenzoxyle pour obtenir
EMI5.15
l'hexapeptide VIII.
<Desc/Clms Page number 6>
EMI6.1
Quand on fait réagir llhexapept1de VIII sur le carbobcnxoxy-'p-aspartate de benzyle, il donne llheptepept1dè correspondant dont on élimine le groupe carbobonzoxyle pour obtenir la ..benxyl L.aspartyJ. L-aZnyl-L-ph;nylalanyl. L- -isolucyl-glycyl-L-leucyl-L-méthioninamide ("tÏII). On
EMI6.2
obtient l'heptapcptide VI en éliminant le groupe benzyle.
EMI6.3
En condensant l'heptapeptida VII avec le tétrapep-' tide V, on obtient l'hondécapeptide III ; par exemple, en condensant la benzyl-L-aspartyl-L-alanyl-L-ph6nylalanyl-L- -1so1eucyl-glycyl-L-leucyl-L-méth1on1nam1do avec la N-toluène- sulfonyl-L-glutam1nyl-L-prolyl-L-aé:y1-( #. -N-toluènesulf onyl)- -J>-lysine, on obtient Ilhendécapept1de N-toluénesulfonyl-L4- <-glutaminyl-L-prolyl-L-.seryl( e. N..tolunesuxfonyl)-L..lysya- .(benzyl)-L-aspartyl-L-alanyl-t-phénylalanYl-L-1so1eucYl- -glycyl-L-lcucyl-L-méth1on1na1de (III).
Une autre méthode consiste à condenser l'azlde de N-carbobonzoxy.L-qlutam1nyl-L- -prolyl-L-séry11 t -N-carbobehzOXy-lY81ne avec la L-aspartylL.r -alanyl-L-phénylaanyl-L-isoleucyl-Olycyl-L-leucyl-L-méthlon1n- amide pour obtenir la N-carbobenzoxy-t-glutamlnyl-L-prôlyl-L- #séryl- ± -N-carbobenzoxy-L-1Y$yl.B$Pàrtyl-L-alanyl-L- -phénylalanyl-L-isoleucyl-qlycyl-L-leucyl-L-méth1on1namido (It).
On obtient l'hendécapeptide II en éliminant les groupe$
EMI6.4
protecteurs de III.
EMI6.5
En soumettv.-it l'hendécapeptlde Il à un milieu qui favo-
EMI6.6
rise le déplacement d'ammoniac, par exemple par chromât graphie sur des résines échangeuse$ carboxylées ou par chauffai avec
EMI6.7
de l'eau, on obtient l'hendécapeptide 1.
<Desc/Clms Page number 7>
Les polypqptdes de l'invention, en particule:!? les polypeptides I, II et VIII, ont une forte action vesodiletatrice périphérique qui est bien décelable principalement chez le chien et l'homme. Les doses actives pour le chien sont de 0,001 à 0,005 @g/kg de polype ptide administré par voie intraveineuse par infection dans l'artère fémorale, on observe dans le membre du chien des vasodilatations jusque des doses de 0,001 g. Sur des muscles lisses intestinal isoles de lapin, de chien et de cobaye, l'hexapeptide est actif jusqu'à des doses de 0,001 à 0,002 g.
Les polypeptides de l'invention ou leurs sels non toxiques sont utilisa pratiquement et avantageusement en clinique pour les attaques des hypertendus, ou en tout cas dans la thérapeutique d'urgence de l'hypertension très grave; dans les syndromes spastiques vasculaires, spécialement ceux des régions musculc-cutanées (particulièrement dans les eas de syndrome de Burger, de syndrome de Raynaud, d'ulcères latents), des vaisseaux rétiniens (amaurose provenant d'un spasme de l'action centrale de la rétine), des vaisseaux ménin- gés (céphalée et migraine provenant de spasme vesculeige) et des vaisseaux coronaires (angine de poitrine).
On peut administrer ces polypeptides par voie parentéra- le : sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse (une seule injection ou par perfusion lente) ou intraartérielle.
Les solvants les plus appropriés sont l'eau ou les solutés physiologiques non alcalins.
Par voie sous-cutanée ou intramusculaire, on peu$ leur ajouter des substances retardatrices d'absorption.
Les pourcentages d'ingrédient actif peuvent varier suivant les formes pharmaceutiques particulières et suivant l'effet d'hypotension désiré, mais généralement ils sont très faibles, L'administration journalière d'ingrédient sctif peut varier de 0,005 à 5 mg chez l'homme. L'usage des polypep tides de l'invention ne cause pas de manifestations de toxicité aiguë, n chronique,
<Desc/Clms Page number 8>
Les exemples suivants servent à illustrer l'invention, sans la limiter* Exemple 1.
EMI8.1
ToLuènesulPonyx-.pyx'ogxaamy.-L-pxo.ia.' .
On dissout 5,04 g de L-proline dans 40 cm3 d'eau, on ajoute 4 g d'oxyde de magnésium et on refroidit le mélange au moyen d'un mélange de glace et de sel. On ajoute en l'espace de 20 minutes, en agitant vigoureusement, 12 g de chlorure de
EMI8.2
toluènosulfonyl-pyroglutamyle {Cp.., 0 Chem. Comm..12, 1954, 365). On agite à nouveau le mélange rationnel à la température ambiante pendant 1,5 heure, puis on l'acidifie au moyen d'acide Chlorhydrique concentré.
On laisse décanter le précipite pendant 30 minutes, puis on le filtre. Rendement 10,5 g ; point de fusion
EMI8.3
250-252oc (après recristallisation par lf6thanol) ; r ,fD 0 M -800 (à 0,5 % dans l'ethanol).
Exemple 2.
TOluènasulfonyl-L-glutam1nyl-L-proline.
On dissout 8 g de tolubnçèsulfpnyl-L-pyroglutamyl-L- '"proline dans 40 cm3 d'ammoniac concentré et on laisse reposer la solution 60 minutes. On chasse sous vide la majeure partie de l'ammoniac et on acidifie la solution restante au moyen d'acide chlorhydrique. On recristallise le produit-par un mélange d'éthanol et d'eau.
Rendement 7,6 g ; point de fusion 216 - 218 C ;
EMI8.4
cdë5 la ¯'8 Cà 1 % dans l'éthanol).
,Exemple 3.
Carbobenzoxy-L-séry( #N-toluenesulf onyl)-L- -lysinate d'éthyle.
On ajoute une solution de aatboberxaxy-L-séxy.laz3de dans l'acétate d'ethyle, préparée à partir de 5,06 g de carbobenzoxy- -8érylhydraz:Lde (J. biol. Chem. 146. 1942, page.463) à une solution d' 6< .l,.taLuènesuiany,i.1',rlysinats d'éthyle dans
<Desc/Clms Page number 9>
EMI9.1
l'acétate d'dthyle (J* Hrn. Cham. Socs Les 1956, page '5866) que l'on a préparée à partir do 8,6 g de chlorhydrate* Au bout de 24 heures à la température ambiante, on extrait le
EMI9.2
mélange réactionnel par l'acide chlorhydrique 1N, le b3.dsxw bonate de sodium 1M, puis par l'eau, et on sèche sur du sulfate de sodium anhydre.
On évapore lo solvant sous vide et on obtient 8 g d'un résidu huileux.
Exemple 4,
EMI9.3
Chlorhydrate de L-séryl-( S. -N-toluènesulfonyl)- lY8inata d'éthyle.
On dissout 8 g de carbobenzoxy-L-séryl-( & .tolune- sulfonyl)-L-lysinate d'éthyle dans 100 em3 d'éthanol et on ajoute à la solution 2,5 g de palladium à 10 % sur charbon de bois, puis on hydrogène le mélange pendant 4 heures à la pression atmosphérique.
Après filtration du catalyseur, on concentre la solu- tion jusqu'à un faible volume, puis on ajoute 200 cm 3 d'éther anhydre et on acidifie la solution par l'acide chlorhydrique gazeux$ On décante le solvant, on triture le résidu à plusieurs reprises avec de l'éther anhydre et finalement on le sèche sous vide.
EMI9.4
Rendement 6,6 c ; point de fusion 6â6?'pC (avec d'com- position ) ; 5. '-7,5" (a 3 % dans l'éthanol). pxernRlo 5.
N-toluènesulfonyl-glutam1nyl-L-prolyl-L-séryl- ..( t..t3..toluènesuxfonyl) L. .ysinate d'éthyle (formule V ; R2 m toluênesulfonylep R4 a C6-éthylo).
On dissout 6,4 g de chlorhydrate de L*séryl *( 6 1w Mtolunesulfonyl).L-1Y$1nate d'éthyle dans 80 cm3 d'aeetonltrlle et on ajoute 201 cm 3 de triéthylamine. Puis on ajoute bzz g de
<Desc/Clms Page number 10>
EMI10.1
a,unasu.cnyJ.. .rtarn.ny.xo,3ri dissoute dans 40 cm3 de d1mâthylformamide et z g de dicyciohexylcarbodiiMide et on agite le mélange pondant 24 heures à la température ambiante.
On filtre la d3.cycxahacyJ.uxct on évapore le solvant sous vidé, on triture le résidu à plusieurs reprises avec de l'éther de
EMI10.2
pétrole, on lo dissout dans toto oma d'acétate d'éthyle et on extrait la solution par l'acide chlorhydrique 1N, par le bicarbonate de sodium 1M et par l'eau. Après avoir séché 'la solution sur du sulfate de sodium, on chasse le solvant sous vide pour obtenir 5,6 g de solution visqueuse.
EMI10.3
xQn la 6..
N.t.o.unesuieny. Lwg,utaminy. t.pxoJ.y. Lâxy1 . ,.N.tasunesu.fcnyi) L l.ys3,ne (formule V t R2 m toluànesiilfohyiôi R4 m OH).
On dissout 4,7 g de N-tolune8ultonyl-L-glutaminyl-t. o,y3.-..sdxyl.( .aNtolunssu,Foriylj.L.lyinate d'éthyle dans 15 cm3 de méthanol et on ajoute 9 cm3 de soude 2N. On laisse reposer la solution 30 minutes à la température ambiante? on évapore le méthanol sous vide à la température ambiante, on dilue le résidu par l'eau et on 1* acidifie .On dissout le précipite dans de l'alcool éthylique et de l'acétate d'éthyle et on sèche la solution sur du sulfate de sodium anhydre.
Après élimination du solvant. on obtient 4 g de la substance
EMI10.4
tous forme de mousse. r6....4 z 5 % dons l'éthanol).
En éliminant les groupes protecteurs toluènosulfonyle, on obtient le tétrapeptide IV.
Exemple 7.
EMI10.5
Carbobenzoxy.phénylalnnyl-L-1so1eucinàte de méthyle* On dissout 29,2 g de carbobonïoxy-L¯ph<5nylaianine (beur. il, 1958, page 462) et 16 q de t-i8cleucinte de méthyle (Helv. Chim. Acta , 1 5, page 1500) dans 250 cm de tétera- hydrofurane anhydre. Puis on ajoute, en agitant et en refroi-
<Desc/Clms Page number 11>
EMI11.1
èi$ant,24.7 e. diÇyqlXY1"carbodi1mide.
On egite 9 m4aQEt pendant î6 heures 'o"'pf,,. ambiante. Aprbe OVOE flt;6 a àicyc.ahcxy,ux le solvant sous vide, dissout le résidu dans 3 d'cétate '6thy"o' on . par l'acide ChOry;ie 1. par le b3axbR'1 do $d1um 1 M et enfin par bzz la solution sur du 8ijfte de sodium anhydre, ' on dvap9ve 19 a4,van. r6sidg par mél4ngQ 414144* On t",'t.I' 10 ésidu par un #### 4.,4"'
EMI11.2
dtlthyle et d'6tOf o pétrole. o Rendt","t 6 (1 po1nt QG fusion 106-1070(; , /!Vo ..10,1i(h . 1." dans l'MMl). 9mletTa. Ç9hyd;ate de hénylalaYlt-So.on't de htYlalany^""xer,n'' m4thyle.
On A''1: 't3 9 ...rb..en..P. so,aua,nlwo 0 i,Yy dsns 0 cm de méthn9 .t ÇA ajoute le solution B '1 . p.J.l3um à 10 % sur chayb boise on da3n 10 '0 pendant 5 heure. pression .. uo. Apa fs,ltr:att" oetalyseurt on 6vapoge le 'ONfl\, disa0u $.du dan ox anhydxo, 4n aer,d, a'' ' obtenue au my'0 .d! a3de ch.oxlydx3ta gazeux et 0 l'va jusqu'à oiçctd point fusion Rendement 115 9 point de fusion 74-76 , cg> Io ,r( % dans 11 éthanol).
'' #b0b0roxY "alanyx-Phny..anl""""a0t c1n4t, de méthyle (fotmul X , R2 . ab0bl'Cs xylc t R4 . C.m6thyle)- t7ri s' 11 Pl 9 ee carbobenZOy¯alnn1e ie Sl01. h0m. 19r Pa'0 4) ,5 . tphdnya,0ny.s0ru Chom. W, 19$8, page 702) et 1,5 g libre) d.n. .1ell. ' c3,nae dd 1 h ,r ($OU$ libre) dane , t>O 1JIt3 r,I, . J tdtrahydtoeUr4ng et on ajoute 12e3 g de d.cyaa.hxyaaac.
<Desc/Clms Page number 12>
mide en refroidissant et en agitant ; on laisse reposer le mélange 16 heures à la température ambiant, puis on le filtre, on évapore le solvant et on dissout le résidu dane 400 cm3 d'acétate d'éthyle. On agite la solution avec de l'acide chlorhydrique 1N, du bicarbonate de sodium 1m et de l'eau.
On sèche la solution sur du sulfate de sodium, on évapore le solvant et on recristallise le résidu par un mélange d'acétate d'éthyle et d'éthor de pétrole.
EMI12.1
Rendement 21 g ; point rfe fusion 154-156OC .
/"<7µ8 -44,6" (à 2,5 % dans l'éthanol), temple, 10.
Carbobenzoxy-t.alany.L-Ph6ylalanyl-L-i801eucine (formule V t R2 8* çarbpbenzoxylo R4 a OR).
On dissout 4,9 g de carbobenzoxyL-alanyl-t-phénYlalany1 .L.1so1euc1nate de méthyle dans 90 em3 d'éthanol et on ajoute 20 cm3 de soude 1N. Au bout de 90 minutes à 20 C, on évapore l'éthanol sous vide à la température ambiante, on reprend le résidu par l'eau, on acidifie la solution par l'acide chlor- hydrique et on extrait le précipita par l'acétate d'éthyle.
Après séchage sur du sulfate de sodium, on évapore le sol- vante,
EMI12.2
Rendement 4,4 g ; point dp fusion 183-186 (après recristallisation par l'acétate d'éthyle).
Exemple 11.
EMI12.3
CarbobenzoxY"91yeyl-leucyl-thion1nate de méthyle* On dissout 10 g de aaxbabanQsy glycy3-..,eucine (J. Amer. Chem. Soc. 78p 1956, page 2130) et 5 g de m<5thioninate de méthyle (Helv. Chem. Acta 24p 195tj page 2091) dans 90 cam 3 de tétrahydrofurane. Puis on ajoute 72 g de d1cyolohexyl- ¯<5arbodiinilde et on agite le mélange pendant 16 heures à la température ambiante. On filtre la dicyolohexylureo, on évapore e solvant sous vide et on dissout le résidu dans 250 cm3
<Desc/Clms Page number 13>
EMI13.1
d'acétate d'ethyle. On extrait là solution par l'ecide chl0thy* . drique 1N, par le bicarbonate de sodium 1M et par l'eau.
Apres séchage sur du sulfate de Sodium. on évapore la solution sous'Vide* On triture le résidu huileux avec de l'éther dû parole pour obtenir un produit cristallin que l'on purifie par un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole*
EMI13.2
Rendement 12 g ; point de fusion 11a.119 ; /*7 " -43.1 (h 3 % dans l'éthanol).
Exemple 12 <3arbobenzoxyglycyl-'L-leueyl'*L-*Mëthionihamidet On dissout 10 g de cârboben2oxy-glycyl -L leU6yl*± - -méthioniftste dé thethylo dans 200 cm3 de méthanol anhydre saturé d"ar)Mt)onia6 0"C. Au bout de 4 Jourar a la température . ambiante, on évapore la solution jusqu'à siccité, on triture
EMI13.3
le résidu à plusieurs reprises avec de l'acétate d"@thyl6'e on le sèche Rendement 6 g ; point de fusion 177-11900 (6>Jtô recristallisation pat l'acétate d'éthyle) j /* <l7d ** 7<' (à 5 % dans la méthanol).
Exemple ,13
EMI13.4
dyiSyi-Ïleucyl'-L-'methioninanddo (Xïï)* On dissout ,5 g de carbobenzoxY-91ycylL-leéY1 -méth1oninnm1dt dans 250 cm3 de méthanol, on ajouta le tout à 3 g de palladium a ;0 % sur charbon de bois et on hydrogène la pression atmosphérique. Au bout de 3 heures, on ajoute à nouveau 3 g de catalyseur et on fait réagir à nouveau le mélange pondant 4 heures. Après filtration du catalyseur, on évapol@ la solution jusqu'à siccité, on triture le résidu avec de l'eau et on évapore le filtrat sous vide.
Rendement de produit brut : 2 g ; point de fusion 120 C.
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
Éitemftle,,,,!.
Ca*bobôh*oxy*t* àî.6ftyi*Uph4nyaalanyi *L-lôoleiioyl'- -glycyl.1.uoylêthlon1namldé (formule IX t R2 catbbbèfi.Óy1e).
On dissout 2,1 0 dë 6ajPb6bônz6}tY'.L-alanyl'-t'phnyl Alanyl-L-isoloucine et le$ 9 de 6iyûyl*Uleucyl¯I>md*hlôrtinàifriide dans 50 ema de dîméthylfoïlffiàffiidoi puis on ajoute 1,4 g de dicyelohexyl'-carbodilmido et on 4ito le mélange pendant 20 heures à la tempéràtuafe émb1a\é. Apet fiitration (1.' 9 de dicyclohexylurde)o on Vap6 là béÏUtion sous vide jusqu'à siccité et on triture Î4 résidu av*c de l'éther anhydre oh dissout à nouveau le pioÉipHe dirtl 14 quantité minimale do oimdthylformamide et on piédipito'à nouveau par 1'6thor.
Rendement 3 9 t poLrtt dà fuôiôn 235 238<SC (après recristallisatlon par lt4thnb1).
EMI14.2
temple.15.
EMI14.3
Brotnhydfëto do ainylL*'phenylalanyl't'isoleu*' eyl'lyeyi*'Mueyi*'ïmothioninamide (vm)< A 1,4 cm3 de solution atui?4Q dtacide bromhydrique 9aeux dans l'acide acétique, ôrt ajoute 1,1 cm 3 de phosplid de diéthyle et 0#5 CM3 did<t.a6eti<et Dans ce mdlahlo# on . dissout 0,4 g de earbobeftiîô tai#rtyl-t*phéttylalanv'i-t-'i8ô* leucyl"'"91ycyl..L-l0ucyl.t..tnthiÓf\thatn1de. Au bout de 7 4ftUtot h 20 C, on ajoute à la aolution 50 tffl3.d.êthe anhydres On lava à plusieurs reprisée la précipite obtenu avec de l'ether et on le sèche sous vide sur de la potatob et de l'anhydride phospho**
EMI14.4
tique,
EMI14.5
Rendoment 0,36 <
<Desc/Clms Page number 15>
Exemple 16.
EMI15.1
N-carbobenzoxy-.(p-benzyl)-L-aspartyX-L-aXanyl-3-¯ p hénylalany3,-L-.s ol.eucyl-glycyl.L,.-leucyl.-L -nêthion3.nam.ide, On dissout 0,36 g de bromhydrate de L-alanyl-I-phënyï- 3 alanyl--3.soJ.eucy, g.ycyl-L-leucyiL.-méthi.oninamide dans 7 cm de diméthylformamide et on fait réagir la solution sur 0,071 cinq de triéthylamine. Puis on ajoute 0 178 g de carbobenzoxy-p- -aspartato de benzyle (J. Chem. Soc. 1959, page 3870) et 0,123 g de dicyclohexyl-carbodiimide. Au bout de 2 jours à la température ambiante, on filtre la solution, on la concentre jusqu'à un petit volume et on précipite l'heptapeptide au moyen d'éther.
Rendement 0,5 g. exemple 1*7.
EMI15.2
Bromhydrate de P-benzyl-L-aspartyl-L-alanyl-L- wphnyla.anyl.-L..is oleucyl-glycyl-.L-xeucyl.-L..
..méthioninamide (formule VII R3 = benzyle).
On dissout 0,5 g de carbobenzoxy--benzyl Laspartyl-L..
-alanyl-L-phényl-alanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-méthi0- ninamide dans un mélange de 2,8 cm3 d'acide acétique et 1,2 cm3 de phosphite de diéthyle saturé d'acide bromhydrique gazeux.
Au bout de 15 minutes, on ajoute 100 cm3 d'éther anhydre, on lave le précipité à plusieurs reprises avec de l'éther et finalement on le' sèche sous vide sur de la potasse et de l'anhydride phosphorique.
Rendement 0,42 g.
En éliminant le groupe benzyle protecteur, on obtient l'heptapeptide VI.
<Desc/Clms Page number 16>
EMI16.1
Exemple, J18 , N-toluen9sulfonylL-glutamyl-I.rprolyl"!Neryl'- -( #. -d3-to.uènesulfanyl)rlrlysyl.benxy.,-L- aspartyl-I,..a.anyhT.-ph6ny,axany3,.L..soW tCY.
-glycyl-leucyl-L-méth1oninam1d& (formule III s R2 toluène suif ony le, R3 : benzyle).
On dissout 0,42 g de bromhydrate de P"rJ?en2yl" îr*a8P?rtyl- -L-alanyl-L-phénylalanyl-L-:Lsoleucyl-L-leucyl-méthlon1namide dans 4 ern3 de diméthylformamide et on traite par 0,063 cm 3 de tri6thylamine. A cette solution, on ajoute 0,35 g de N-toluène# sulfonyl'-L-g.Lutatnlnyl-L-proJ.yl-!.ceryl'*( #. .touènesulfonyl)- .J,-lysine et opel g de dicyclohexyl-carbod:Lim1de. On laisse le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 2 jours* Après filtration de la dicyclohexyluréop on contentre la solu- tion jusqu'à un petit volume et on précipite le peptide protégé par addition d'éther.
Rendement 0,66 g.
EMI16.2
E4,ZM21.2. -U. lutam1nyl-L-prolylL-séryl-L-1YBY1-a8partyl- -L-alanyl-L.vhénYlalanyl-L-1so1eucyl-glycylt- leucyl-L-mdthloninamide (formule II).
On dissout 0,68 g de l'hendécapeptide protégé dans 20
EMI16.3
com d'ammoniac liquide, puis on ajoute en agitant 0, t'3 g de sodium métallique. Au mélange réactionnel, on ajoute 0,45 cm3 d'acide acétique. Après évaporât ion de l'ammoniac, on sèche, le résidu sous vide sur de l'anhydride phosphorique.
Rendement 0,6 g.
On peut aussi obtenir le polypeptide II à partir du polypeptide III dans lequel R2 peut être un groupe carboben- zyle, carbobutoxyle tertiaire, etc., et R3 peut être un'groupe
EMI16.4
p-nitrobenzyle, butyle tertiaire, etc...
<Desc/Clms Page number 17>
EMI17.1
Exemple 20. x.-pyroglutamyl-t,..p::olyl...L-t':yl..t-lysy1-r...-a,pa:r:- tyl-L-alanyl-L-phénylalanyl1so1eueyl.glycyl- -leucyl-L-méth10n1namide (formule 1).
On dissout Ilhenddeapaptide II dans de lteau et on le fait passer à travers une colonne de résine échangeuse d'anions (par exemple de marque commerciale "Amberlite IRC 50") puis on élue par l'eau. Après avoir purifié de façon connue l'hendécs- peptide obtenu, on obtient lthendécapeptide I sous forme pure.
Exemple 21.
EMI17.2
N-carbobenzoxy-L-pyroglutamyl L..proline.
On dissout 2,5 g de L-proline dans 40 cm3 d'eau ; à cette solution glacée on ajoute 2 g d'oxyde de magnésium et
EMI17.3
5,6 g de chlorure de N-carbobQnzoxy-L-pyroglutamyle (Annalen 640, 1961, page 151) finement pulvérisé. On agite le mélange pendant 1 heure à 0 C et pendant une heure de plus à 20 C.
Après avoir acidifié par l'acide chlorhydrique, on filtre le
EMI17.4
précipité, on le lave à l'eau et on her recristallise par un mélange d'eaj et d'alcool.
EMI17.5
Rendement 5 g ; point de fusion 177 - 1?8 C ; /"OL'' $49 (4 2 % dans l'éthanol) ; r4 III -1060 (à 2 % dans l'acide acétique à 95 %).
Exemple 22.
EMI17.6
N-carbobenzoxy-L-glutaminyl-L-proline On dissout 4$8 g de N-carbobenzoxy* L-glutanjlnyl-L¯pro- line dans 30 cm3 d'ammoniac aqueux concentré et on laisse reposer la solution une nuit.
On chassd la majeure partie de l'ammoniac sous vide et on acidifie la solution restante au moyen d'acide chlorhy- drique* On extrait l'huile séparée par l'acétate d'éthyle ; après séchage sur du sulfate de sodium, on évapore le solvant sous vide. On triture le résidu avec de l'éther de pétrole et on le sèche sur de l'anhydride phosphorique.
<Desc/Clms Page number 18>
Rendement : 4,5 g de produit amorphe
EMI18.1
JT*Jq0 * bzz" ( 4 % dans Itéthanol).
Exemple ;|23> N-tlphénylmÓthyl-8ÓrlnatG de méthyle.
On dissout 15,5 g de chlorhydrate de t.-,..ér1$t. de méthyle (Helv. Chim. Acta 4J., 195$p page 1858) dans 150 cm3 de chloroforme anhydre et à cette solution glacée, on ajoute, en agitant, 28 cm3 de triethylamine et 2T, 8 g de chlorure de triphénylméthyle. Au bout de 6 heures 4 la température ambiante, on lave la solution à trois reprises avec de l'eau et on la sèche sur du sulfate do sodium ;on évapore le solvant sous vide et on recristallise le résidu par un mélange de benzène et d'éther de pétrole.
Rendement 29 g ;point de fusion 145 C.
Exemple 24.
EMI18.2
N.tr3phényimâthy...l;.z,ne.
,On dissout 25 g de N...tr1phénylméthyJ.-t,..eérinate de méthyle dans un mélange chaud de 40 cm d'éthanol et 80 om 3 de potasse alcoolique 1N. Au bout d'une heure à la température ambiante, on dilue la solution avec 250 cm3 d'eau.. on refroidit à la glace et on acidifie par l'acide acétique ;on filtre le précipité, on le lave et on le recristallise par un mélange de méthyl-éthylcétone et d'éther de pétrole.
EMI18.3
Rendement 15 g ; point de fusion 154-1 57 C ? -4. +240 (à e % dans l'éthanol). temple 25.
N triphny3,méthy,L-sél N.arbobenzoxy-1" lysinate de méthyle.
On dissout 13pl g de chlorhydrate d' 6 vnogarbobenzoxy- -L-lysinate de méthyle (Helv. schim. Acta 4J., 1958, page 1878) dans 100 cm3 de diméthylformamide et 100 cam 3 d'acétonitrlle puis on ajoute 5,6 cm3 de triéthylamine, 13,2 g de N-triphényl- méthyl-L-sérine et, en refroidissant, 8,4 g de dicyelbhekyi- ' # ' ' carbodiimide. @ .,
<Desc/Clms Page number 19>
Au bout de 20 heures à la température ambiante on fil-
EMI19.1
tre la dicyclohexylurée et on évapore le solvant sous vide.
On dissout le résidu dans 350 cm3 d'acétate d'éthyle et on lave la solution avec do l'acide chlorhydrique 1N (à 0 C), avec du bicarbonate de sodium 1M et avec de l'eau. Après séchage sur du sulfate de sodium, on chasse -acétate d'éthyle par distil- lation et on recristallise le résidu à deux reprises par un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole.
Rendement 15 g ; point de fusion 128 C ;
EMI19.2
3 . -380 (a 5 % dans .éthanoJ.7.
Exemple,, 26.
L-sêryl- -N-carboben%oxy.-L-ly.1nate de méthyle.
On dissout 8>4 g de N-tr1phénylmêthyl-L-"ryl- & i #carbobenzoxy-L-lyslnate de méthyle dans 50 om d'acide acétique, puis on ajoute 50 cm3 d'eau et on chauffe le mélange au bain- -.tarie pendant 30 minutes. On ajoute à nouveau 50 cm3 d'eau et on refroidit le tout à 0 C. Après filtration.. on évapore la solution limpide sous vide jusqu'à siccité. On reprend le résidu par 80 cm3 d'ammoniac aqueux à 2 % et on extrait le mélange par le chloroforme. On sèche les extraits sur du sulfate de sodium et on distille sous vide pour obtenir un résidu sirupeux.
Rendement 4,2 g.
Le produit apparaît homogène à la chromatographie sur papier.
Exemple 27.
EMI19.3
N-carbobanzoxy-L-gltitantinyl-L-prolyl-L-Séxyl- L - -N-carbobenzoxy-L-lysinate de méthyle (formule Vs R2 carbobenzoxyle, R4 - Méthyle).
On dissout 4,1 g de N-carbobenzoxy-L-glutaminyl-L-proline
EMI19.4
et 4,2 g de i.séxyl.. #. -N-carbobenzoxy-L-lysinate de méthyle dans 70 cm3 de chlorure de méthylène et à la solution, refroidie à 0 C, on ajoute 2,5 g de dicyclohexyl-carbodiimide. Au bout de 16 heures à 20 C, on filtre le mélange et on lave le filtrat
<Desc/Clms Page number 20>
avec de lucide chlorhydrique 1N, du bicarbonate de sodium 1M et de l'eau. On sèche la solution sur du sulfate do sodium, on chasse le solvant par distillation sous vide et on recristallise le résidu par un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pé- trole.
EMI20.1
Rendement 5 g ; point de fusion 58-6Q G ; J 5 . -.5t?a (à 2 % dans l'éthanol).
Exemple, 28.
EMI20.2
Hydrazide de N-earbobenzaxy. L cl.utam3,ny.-L-praly, -.L-sëryl-' & -N-carboben%oxy-L-lys1na (formule Vt R2 a carbobenzoxyle, R4 - -NI3 - NH).
On dissout 3 g de N-carbobenzoxy-L-glutam1nyl-L-prolyl-L- eéxy.t -N-carbobonzoxy-L-lysinate de méthyle dans 30 cm3 de méthanol, puis on ajoute 7 cm3 d'hydrate d'hydrazine* On main-
EMI20.3
tient la solution une nuit à 20 C, puis on 1'évapore sou. vide jusqu'à siccité et on triture le résidu à plusieurs reprises avec de l'éther éthylique anhydre. On recristallise le produit par l'éthanol.
EMI20.4
Rendement 2 point de fusion 1ô316 C 5 . .30 {à 2 % dans la dimdthylformamide).
Exemple 29.
N-tr1phnylméthyl-glycylleuc1nate de méthyle.
On dissout 31,7 g de N-triphénylméthyl-glycine (J.A.C.S.
78, 1956, page 1359 et 15,9 g de L-leucinate de méthyle (Helv.
Chim. Acta 29, 1946, page 784) dans 300 cm3 de tétrahydrofurane,
EMI20.5
puis on ajoute 22,6 g de d3cycl.ohaxyl-aarbod,imide. On agite le mélange une nuit à la température ambiante, puis on filtre la dicyclohexylurée et on chasse le solvant par distillation sous vide. On dissout le résidu dans 300 cm3 d'acétate d'éthyle et on lave la solution avec de l'acide chlorhydrique 1N (à 0 C), de l'ammoniaque 1N et de l'eau. Après avoir séché sur du sulfate de sodium, on chasse le solvant sous vide.
Rendement : 35 g de produit sirupeux.
<Desc/Clms Page number 21>
EMI21.1
Bxemole 30r Ntiphnylméthyl.gl.jrcyl-lrrZeuaine.
On dissout par chauffage 35 ruz de N-triphenylmethyl-gly-. cyl-L-leucinate de méthyle dans 90 cm3 de potassium alcoolique 1N
EMI21.2
et 50 cm3 d'éthanol. On maintient la solution à la température ambiante pendant 1,5 heure, puis on la dilue avec 300 cm3 d'eau et on la filtre. On refroidit le filtrat limpide, on l'acidifie avec de l'acide acétique, on filtre le précipité et on le lave à l'eau.
Rendement 20 g ; point de fusion 75-85 C.
Exemple 31
EMI21.3
...mcthion,nam3de.
On dissout 38,5 g de x.-méth.an,nate de méthyle (Helv.
Chim. Acta 3., 1951, page 2091 ) dans 250 em3 de méthanol anhydre et on sature la solution d'ammoniac gazeux à 5 C.
Au bout.de 4 jours à 45 C, on évapore la solution sous vide jusqu'à siccité et on triture à plusieurs reprises le résidu avec de l'éther éthylique anhydre.
.Rendement 33 g ; point de fusion 50-51 C ;
EMI21.4
/" L7]37 * "2' (b 5 % dans l'éthanol).
.Exemple ,32,.
N-triphénylméthyl-91Yèyl-L-leucyl-Óthion!n- amide.
On dissout 11 te g de N..tr1phény1méthyl-g1ycyl-L-leuc1n4 ..t,, 0 g de L,.tméthlon1Mmidt dans 180 ami de chlorure de méthy- lène, puis on ajoute *- en refroidissant" 8,6 g de dicyclohéxyl- carbodllraide. Au bout d'une nuit à la température ambiante, on filtre le mélange ractionnel et on lave le filtrat avec de
EMI21.5
.1tacide chlorhydrique 1N (à 0 C), du bicarbonate de sodium 1M et de l'eau. Après séchage sur du sulfate de sodium, on chasse le solvant par distillation sous vide et on recristallise le résidu par l'acétate d'éthyle.
<Desc/Clms Page number 22>
EMI22.1
Rendement 15 g ; point de fusion 214-21 6 C ? /"<C7 " -'20" (à 1*6 % dans l'éthanol).
Exemple- 33t GlycyJ.-L-.eucy.-Tr...mdthiori3,nam,de (XII ) .
On dissout 9,5 g de N-triph6nylmdthyl-glycyl-L-leucyl- -méthloninamide dans 50 cm d'acide acétique, puis on ajoute 50 cm3 d'eau et on chauffe le mélange 30 minutes au bain-marié.
Après avoir ajouté à nouveau 50 cm3 d'eau, on refroidit le mélan-
EMI22.2
ge à OOC et on filtre la triphdnylcarbinol, On concentre sous vide jusqu'à siccité la solution limpide ainsi obtenue. On recristallise par l'éthanol le résidu d'acétate de glycyl-L- -leucyl-L-méthioninamide ; point de fusion 134-136 C.
On fait passer la solution aqueuse d'acétate de tri- peptide sur une colonne de résine de marque commerciale "Dowex 2" sous la forme basique et on concentre le produit d'élution sous vide jusqu'à siccité.
EMI22.3
Rendement i 4,6 g ; point de fusion 956i58 ; /"OL7D*= -500 (à 2. dans l'eau).
Exemple 34.
N..caxbobenzoxy-L-ciutaminyl.-L-pxaJ.yi-Irsxyl.
-I-carbabenxoxyLLysyl-L aspartyl-ir-alryl-.
-phênylalanyl-L-isoloucyl-glycyl-L-leucyl-L- -méthioninamide (formule III t R7 catboben. zoxyle, R 3 m H)t On dissout 0,60 g d'hydrazide de N'-oarbobenzoxy!' lutaminyl-'L-proiyl-s oryl- dans .,.
12 com de diméthylformamide, puis on ajoute 0,81 cl diacide chlorhydrique 4N et on refroidit le mélange a -50C.
Après avoir ajouté 0,22 cm3 de nitrite de sodium 4N, on agite la solution à -5 C pendant 5 minutes avec 0,34 cm3 de triéthylamine et on sèche à de nombreuses reprises sur du sulfate de sodium. @
<Desc/Clms Page number 23>
On filtre ± mélange et on lave le sulfate de sodium
EMI23.1
avec 5 com de dimthylformamide ; on ajoute au filtrat 0,70 g de L-aspartyl-l,-alanyl-f,-phénylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-le- -leucyl-t..-méthion:Lnamide et 0,34 cm3 de triéthylamine.
Au bout de;3 jours à 5 C, on évapore le solvant sous vide et on triture le résidu avec de l'eau, puis avec de l'éther éthylique anhydre.
EMI23.2
On dissout le produit dans de la dimdthyltormamide et on le précipite à nouveau en ajoutant de l'éther éthylique anhydre ; on le lave à l'éther à deux reprises et on le sèche sous vide.
Rendement : 1,1 g. @ Exemple 35.
L-glutaminyl-L-prolyl-L-séryl-L-lysyl-L-aspartyl-
EMI23.3
.L-alanyl..Lphënylalany.L-i.s oleucr,I-glycy7.-L- -leucyl-L-méthioninamide (II).
On dissout ,1 g de N-carbobenzoxy-L-glutamlnyl-L-prolyl- -L-séryl- ± Loarbobenzoxy-L-3.ysyl-L-aspaxtyl-L.-a.anyl-1G.
-phénylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-méthion1namide dans 11 cm3 d'acide trifluoracétique, puis on ajoute 4,7 cm3 de sulfure de méthyl-éthyle. On sature la solution d'acide bromhy- drique gazeux et on maintient à la température ambiante pendant 6 heures. On évapore le solvant sous vide, on triture le résidu avec de l'éther anhydre et on le sèche sous vide sur de la potasse et de l'anhydride phosphorique.
On purifie le produit brut par distribution à contre-
EMI23.4
-courant t 200 transferts dans le système butanol-n/acide acétique aqueux 0,5 N. Les fractions contenues dans les tubes 55 à 70 présentent la plus grande activité biologique. Le produit isolé donne, par hydrolyse acide (16 heures à 11 C dans l'acide chlorhydrique 6N), les aminoacides suivants acide glutamique, proline, serine, lysine, acide aspartique, alanine, phénylalanine, isoleucine, leucine, glycine et méthionine.
<Desc/Clms Page number 24>
EMI24.1
on purifie encore 30 z- d 'het)dÓoapept1de par ctomatra: phie sur papier Whatman 3 M/M en utilisant le mélange de
EMI24.2
butanol-n, diacide acétique et dteau 4ti tâj. produit ainsi obtenu (10 mg) est homogène tant à la chromatogaRhe qu â Ilélectrophorbse ;
aprls1hYdOlYSe en milieu acide, il donne les onze aminoacides cités plus haut.
EMI24.3
<Desc/Clms Page number 25>
EMI25.1
<Desc/Clms Page number 26>
(IX) t R2 = groupe protecteur de groupe aminé.
EMI26.1
(X) t R2 = groupe protecteur de groupe amine ;
R4 = -OH ou groupe protecteur de groupe carboxyle.
EMI26.2