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La présente invention concerne de nouveaux composés égnadiéniques de formule :
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dans laquelle R1p ft2 et R3 représentent de l'hydrogène ou des hydroxyles libres ou estérifiés, R4 de l'hydrogène ou un groupe méthyle, Y deux atomes d'hydrogène, un groupe oxo ou de l'hydrogène et un groupe hydroxy libre ou es térifié en orientation a ou ss, X1 de l'hydrogène, un atome de chlore ou de fluor et X2 un atome de chlore ou de fluor.
Les restes esters Indiques sont, par exemple, ceux d'acides carboxyliques
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aliphatiques ou cyclo-allphatlques saturée ou non saturés, diacides carboxyliques aromatiques ou hétérocycliques, par
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exemple des acides formique, acétique, propionlque, des acides butyriques, des acides valériques comme l'acide n-valérîque ou l'acide trlméthylaodtlque, des acides oaproiquee, comme l'acide -tr1méthyl-proplonlque, des acides oenanthique, caprylique, pélargonique, caprique, des acides undécyllques.,
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par exemple de l'acide undécylénlqueo des acides laurique, myristique, palmitique, ou des acides stéariques, par exemple de l'acide oléique, des acides ayclopentyl-, cyclohexyl- ou
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phényl-acétiquesou -propioniques, des acides benzoques, des phenoxy-alcanoïques,
comme l'acide phénoxy-acétlque, l'acide p-chloro-phénoxy-acétique, luaelde 2,4-dichloro-phénoxyacétique, l'acide 4-tertio-butyl-phénoxy-acétique, l'acide 3-phénoxy-propionlque, l'acide 4-phénoxy-butyrique, de l'acide furannc-2-aarboxyl3que, de l'acide 5-tertlo-butyl-turanne-2carboxylique, de l'acide 5-bromo-furanne-2-carboxylique, des acides nlootlniques, ainsi que d'acides dicarboxyliques comme
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les acides oxalique, succinique et glutarique, d'acides carboxyliques substitués, comme les acides 5-céto-carboxyliques par exemple des acides acétylacétlquep propionylacétique, butyrylacét1que ou opin4u, d'acides aminés etc.
Au lieu de restes d'acides carboxyliques, les restes esters peuvent aussi être les restes décides sulfoniques, ainsi que d'acides phosphoriques ou sulfuriques.
Les produits du posent procède se caractérisent par une activité biologique élevée. Il y a lieu de citer parti-
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culièrement les 6a-chloro- et 6a-fluoro-dérivés de la prednisolone, de la prodnisone, des 9a-fluoro- et o-oloroprodnisolone et -prdniona, des 9a-fluoro- et ga-chaoro-16ahydroxy-prednleolone et - prednisone, ainsi que les 21-esters correspondants comme les 21-trîméthylacétates, les 21-cyclopentylproplonateze les 21-phénylprop1onatea et les 21-esters d'acides dioarboxyliques, par exemple de l'acide aucolnique qui présentent une activité élevée dans le test glycogénique du foie et le test granulométrique.
A l'enconre de nombreux corticostéroïde@ non-halogénés em position 6a, les composas
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prégnadlénlques indiqués ne montrent pas ou du moins ne montrent que dans une mesure très faible l'effet secondaire de la rétention du sodium.
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Ces nouveaux composés prégnadiéniques sont obtenus en déshydrogénant des 6-chloro- ou des 6-fluoro-A -prégnene- 3,20-diones en position 1,2. L'introduction de la double liai-
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son en 1,2 dans les substances de départ peut être obtenue par traitement avec des composés du sélénium ayant une action déshydrogénante ou en faisant agir des cultures aérobies de microorganismes 1,2-déshydrogénants.
Comme composés du sélénium exerçant un effet déshydrogénant, entrent surtout en ligne de compte le dioxyde de sélénium, par exemple sous forme sublimée, ou l'acide sélénieux. La réaction suivant le procédé a lieu dans un solvant aqueux ou non aqueux. Comme solvants organiques, on utilise surtout ceux qui, à la température choisie, ne réagissent pas ou du moins ne réagissent que dans une faible mesure sur le composé de sélénium exerçant un effet déshydrogénant.
Comme solvants, se sont montrés favorables notamment des alcools tertiaires comme le butanol tertiaire ou l'alcool amylique tertiaire, en présence de bases comme les amines organiques tertiaires, telles que la pyridine ou la collidine. On chauffe le mélange réactionnel éventuellement sous pression ou on le fait bouillir à reflux. Lorsque la réaction est terminée, on filtre le sélénium formé et isole le produit réactionnel du filtrat suivant des méthodes connues.
Pour introduira la double liaison en 1,2 par voie microbiologique, on utilise des cultures aérobies de Fusarium solani, de Fusarium caucasicum, de Calonectria deeora, d'Alternaria passifiorae, d'Ophlobolus heterostrophus, d'Ophiobolus Miyabeanus, de Didymella lycopersici ou de
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CoynebatGr1um simplexe Poue la mise en oeuvre du proeddé micobiolog1Que, on peut Incuber les substances de ddpurt avec des cultures des iaicroorganismos indiqués, dans des conditions aérobies connues en flleB-mllme#. ki croissance a lieu en culture de surface ou, ce qui est tehniquesïent avantageux, en culture is!S!@pgë@p en secouant ou oa agitant.
Les cultures renferment du carbone Qs1mil&ble not&wlment des hydrates de carbone, ainsi que, le cas échéant clos substances
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de arolosance, par exemple de 'eau de gonflement du mais ou du moût de bière, et des sels inorganiques. On peut, par suite, utiliser des. solutions nutritives naturelles, synthétiques ou
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seml-synthdtlqueo. Un procédé pratiquement très simple est dderlt CI-aprèsv sans que l'invention soit pour autant limitée par ces Indications : On cultive les organismes dans des appareils et dans des conditions Identiques à ce qui est connu pour la fabrication des antibiotiques suivant le procédé dit de culture immergée.
Lorsque les cultures se sont dévelop- pées,on ajoute les substances de départ indiquées sous la
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forme d'une fine dlsperalon ou d'une aolutlon, par oxenple dans le méthanol, l'acétone ou làéth.yléne.élycol, et pouroult l'incubation. Finalement, on sépare le mycélium, extrait le filtrat et/ou la masse de mycélium, et isole de l'extrait les
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composas du A -pgnad1n d'une man1ea en elle-m8me connue, par exc-mple par le procédé de répartition -entre solvants ou mélanges de solvants non miscibles les uns avec
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les autres, par adsorption, chromatographie, cristallisation, transformation en dérives fonctionnels par exemple en esters et analogues.
On peut aussi effectuer ces marnes réactions en séparant tout d'abord les enzymes actives des cultures aérobies des organismes indiqués et en les utilisant à l'exclusion des cultures en croissance. C'est ainsi qu'on peut, par exemple, séparer le mycélium formé de cultures aérobies des organismes indiqués, le mettre en suspension dans de l'eau ou dans des solutions tampons, ajouter à ces suspensions les substances de départ indiquées et incuber.
Les produits du procédé qui comportent des hydroxyle libres peuvent, d'une manière connue en elle-même, être transformés en leurs esters, notamment en leurs 21-esters. Dans ces esters, les restes acides sont ceux des acides Indiquée au début.
Dans les composés indiqués comportant des hydroxyles estérifiés, ceux-ci peuvent, par hydrolyse chimique ou enzymatique, par exemple en utilisant des agents acides ou basiques ou par alcoolyse, être transformés en hydroxyles libres.
Pour la transformation des lla- et 11ss-hydroxycomposés en les 11-oxo-composés correspondants, on utilise les agents usuels de déshydrogénation, par exemple le trioxyde de chrome dans l'acide acétique glacial ou le complexe de trioxyde de chrome et de pyridine.
Comme substances de départ pour le présent procédé,
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on utilise des 6-chlopo- et 6-fluor-A4 de formule
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dans laquelle Rl, R2 et R3 représentent de l'hydrogène ou des hydroxyles libres ou estérifiés, R4 de l'hydrogène ou un groupe méthyle,X1 de l'hydrogène ou un atome de chlore ou de fluor X2 un atome de chics* ou de fluor et Y deux atomes d'hydrogène, un groupe oxo ou de l'hydrogène et un hydroxyle libre ou estérifié en orientation a ou ss.
Comme substances de départ spécifiques, on citera les
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6a-chloro- et 6ot-fluoFO-dës'ivë8 de la ps'og@µt4ron@,, de la 17a hy6 oxy progesté one, de la désoxycortleostérone, de la 17ahydoxJ-désoxYcort1costérone, de la cortlconce de l"hyd2'ocortlaone, des ga-chloro- et 9a-fluo+o-aortisone et -hydrocort1$one, de la 2a-méthyl-cortisone et de la 2a-méthylhydrocortisone, des 9a-chloro- et 9a-fluoro-2a-méthyl-cortlsoà-ie et hydroao1soneD des 9s-ehloFO-' et 9a-riuo o-x6a-hy4 oxycortisone et -hydrocortloone, ainsi que leurs estero, notwwîent leurs 21-mono-estors et leurs 17a,21-àiester .
Les substances de départ indiquées sont nouvelles; elles peuvent être préparées
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suivant le procédé décrit dans la demande de brevet BELGIQUE déposée le 8 mars 1958, sous le N 447.028, pour : "Nieuive verbindingen van de pregaanreeks en werkwijze ter bereiding daarvan", ,
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par exemple en partant des 5a.,6a-oxldo-3.,20-dîoxo-prégnanes dans lesquels au moins le groupe oxo en position 3 est cétalisé, par traitement avec de l'acide chlorhydrique ou de l'acide fluorhydrique ou avec des substances qui donnent des
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acides de ce genre, les composés 5a-hyd oxy-6fi-chlo és ou -6ss-fluorés qui peuvent se former comme produits intermédiaires étant traités avec des acides forts.
Les substances de départ pour ce procédé qui comportent des hydroxyles libres peuvent être transformés en leurs esters, notamment en leur 21-esters, de manière en elle-même connue. Dans les composés de ce genre qui comportent des hydroxyles estérifiés, ceux-ci peuveat être transformés en hydroxyles libres par hydrolyse chimique ou enzymatique.
La présente invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigrades.
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Exemple l.
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, une suspension de 500 mg du 21-acétate de la
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6a-chloro-A 4 -prégnène-17a,21-diol-,,11,20-tr1one dans 25 cm 3 de butanol tert. anhydre150 mg de dioxyde de sélénium et 0,05 cm3 de pyridine. On dilue le mélange refroidi avec 50 cm' d'acétate d'éthyle, filtre à travers de la célite lave bien avec de l'acétate d'éthyle On évapore à sec sous vide la solution d'acétate d'éthyle et on toiture le résidu avec de l'eau et filtre.
On chromatographie le précipité sec sur une colonne de 25 g d'alumine lavée et on élue avec un mélange de benzène et d'éther, et avec de l'éther, réunit les éluats, évapore à sec et cristallise le résidu à l'aide d'un mélange d'acétone et d'hexane; on obtient ainsi 105 mg du 21-acétate
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de la a-chloro-A' -prgnadine-17a,21-d101-,,1120-tr1one d'un point de fusion de 217-19 C. y max. 238 mg, loglm 4,18.
On refroidit à la glace à O C une solution de 100 mg de l'acétate ci-dessus dans 20 cm3 de méthanol et, sous atmosphère d'azote, on la mélange avec 12,5 mg (1 équivalent molaire) de méthoxyde de sodium. Après l'avoir laissé reposer pendant 15 minutes à 0 C, on nautralis la solution avec de l'acide acétique, concentre jusqu'au voisinage de la siccité et dilue avec de l'eau. On sépare le précipiter le cristallise
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dans de luacétonc, et obtient ainsi la 6a-chio+o-à'-p+ésnad1ène-17a,21-diol-"l20tr1one.
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Au lieu d'utiliser du méthoxyde de sodium pour la saponification décrite ci-dessus, on peut aussi utiliser un poids égal d'hydroxyde de sodium ou de potassium..
.Exemple 2.
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On dissout 500 mg de 6o-ehloro-l'-gsgrae.d.nc- 17a.21-diol-3,11,20-trione, dans 5 en,3 de pyridine, et mélange avec 0,5 em3 d'anhydride prop1on1quso On maintient le mélange' à la température ambiante pendant 4 heures, le verse dans de l'eau, et extrait le précipité avec du dichlorure de méthylène, lave la solution avec de l'acide chlorhydrique dilué, de l'eau, une solution de bicarbonate de sodium, puis de l'eau, la sèche sur du sulfate de sodium et évapore jusqu'à siccité. La cristallisation du résidu dans un mélange d'acétone et d'hexane
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donne le 21-propionate de lq 6c-ch.oro-l'-prgnadànc-lqs, 21-dlol-3ell#20-trione.
, Exemple,.
On chauffe pendant 70 heures à reflux, sous atmos- phère d'azote, un mélange de 500 mg du 21-acétate de la 6a-
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ohloro-A -prégnene-ll,17a,21-triol-320-dlone, de 25 em3 de , butanol tert. anhydre, de 150 mg de dioxyde de sélénium et de 0,05 cm3 de pyridine. On dilue le mélange refroidi avec 50 cm3 d'acétate d'éthyle, filtre à travers de la célite et lave bien avec de l'acétate d'éthyle. On évapore à sec, sous vide, la solution d'acétate d'éthyle et on triturele résidu avec de l'eau et filtre.
On chromatographie le précipité sec sur une
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colonne de 25 g d'alumine lavée, et on élue avec un mélange
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de benzène et d'éther et avec de Ildther, on réunit les êluats, les évapore et recristallise à l'aide d'un Mélange d'acétone et d'hexane; on obtient ainsi le 21-acétate de la 6a-chloro-
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Al,4¯pnad1ène-llD17a,21-tr101-,20-d10ne d'un point de fusion de 204-205 C.
On refroidit à la glace, à 0 C, en atmosphère d'azote, une solution de 100 mg de l'acétate ci-dessus dans
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20 " cm" ' de méthanol, puis on mélange cette-solutlon avec 12,5 mg (approximativement un équivalent molaire) de m6thoxyde de sodium. Après l'avoir laissé reposer pendant 15 minutes à 0 C, on neutralise la solution avec de l'acide acétique, l'évapore sous vide à sec, puis on triture avec de l'eau. On sépare le précipité et le cristallisa dans de l'acétone;
on obtient
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ainsi la 6a-chlOO-Al,4¯prégnad1àne-l1117a,21-trlo1-,,20- dione libre, fondant à 195 - 1960 C
D'une manière analogue on déshydrogène le 20-éthylène. cétal de la matième de départ ci-dessus et on obtient le
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21-acétate du 20 ëthylen@-cétal de la 6a-ChlorO-Al,4¯prégnad1ène -11,11a,21-tiol-3,20-d1one.
Exemp)1.@ 4.
On dissout 500 mg de la 6a-chloro- ' prégnndiène- 11,l7a,21-triol-,,20-dion dans 5 cm' de pyridine et on mélange -avec 0,5 cn#3 d'anhydride propîonlque. Après avoir maintenu le mélange pendant 4 heures à température ordinaire, on le verse
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dans de l'eau glacée et l'extrait avec du diahlorure de méthylène. On lave l'extrait avec de l'acide chlorhydrique dilué, avec de l'eau, avec une solution de bicarbonate de sodium et à nouveau avec de l'eau, le sèche sur du sulfate de sodium et élimine le solvant par distillation. On cristallise le résidu dans un mélange d'acétone et d'hexane, ce qui fournit
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le 21-propionate de la fa-ahloro-l'-prégn.d3n-11,17a-,21- triol-3,20 dione.
Si, dans l'exemple ci-dessus, on remplace l'anhydride de l'acide propioniuqe par l'anhydride des acides triméthyl-
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acétique, cyclopentylpropionique, phénylpropionique ou sucolnlque, on obtient, respectivement, le 21tridthylactat, le 21-cyclopentylpropionatee le 21-phénylpropionate ou le 21hemisuccinate de la fsx-ahioro-l'-prgnadins-11,17ac,21- triol-3,20-dione.
¯ temple 5.,
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, un mélange de 500 mg du 21-acétate de la 6afluoro-cortisone, de 25 cm3 de butanol tertiaire anhydre, de 150 mg de dioxyde de sélénium et de 0,05 cm3 de pyridine.
Après refroidissement, on dilue le mélange avec 50 cm3 d'acétate d'éthyle, filtre à travers de la célite et lave bien avec de l'acétate d'éthyle. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et lave la solution à l'eau, la sèche sur du sulfate de sodium anhydre, la filtre et l'évapore à sec sous
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pression rédulte. On tritus'e le résidu avec de Ileaue filtrs le précipite, le sech et le chromatographie sur 25 g dualumîne lavée. On élue aveo un mélange de bens@n@ et dqéthoe et avec de 1#éthe>;, réunit lez éluatu, évapore et cr1t&111 0 a l'aide d'un mélange d" acétone et d'hezance on obtient t-iliiol le 21-acétate de la 6a-fluo?o-pyedKis<Mia d'un point de fusion de 235 - 2,8 o C.
De manière analogue on convertit le 2X-acétate de la 6afluor-â4¯prégn#n-11a11a,21-trlo1-3,20 diane, par oxydation avec du dioxyde de sélénium, en 21-acet&te de la 6a-rluo Al,4¯prégnadiène-ll,17a 21-triol'D20-dione d'un point de fusion de 235 - 2'7 o C. Par due ce composé en le traitant avec une solution méthanollque d'une base, cosme par exemple leéthylate de aodlune, lhydE'osy<3@ de sodium ou l'hydroxyde de potas1um selon les ozemplou 1 et µ, on obtient la 6a-riuor-à"-prégnadién-lip,17a,z1-trioi-3,zo-dione. nnon ie 6.
On maintient à température ordinaire, pendant 4 heures, un mélange de 500 mg do 6a-fluoro-prodnlsolone, 5 em de pyridine et 0,5 em3 d'anhydride acétique, puis le verao.. dans de l'eau glacée et extrait avec du d1chloure de méthy16e.
On lave lGextra1t avec de l'acide chlorhY9#1que dilué, du sulfate de sodium, filtre et évapore à sac. La c1ta1liatton. du résidu dans un mélange d'acdtone et d'hexane donne le 21acétate de la 6a-fluoro-prednlcolone, fondant à 235 - 2'10 C.
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De même, par réaction avec des anhydrides ou des chlorures d'acides présentant de 2 à 12 atomes de carbone, on peut préparer les 21-esters correspondants des dérivés 6a-fluorés de prednisone et de prednisolone.
Exemple 7.
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, un mdlange de 3 g de l'acétate de la 6a-chloro-
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9g-fluoro-héd oaortispne, 150 em3 de butanol tertiaire anhydre, 900 mg de dioxyde de sélénium et 0,3 cm3 de pyridine, le refroidit et le dilue avec de l'acétate d'éthyle. On filtre le mélange à travers de la célite, lave ce qui reste sur le filtre avec de l'acétate d'éthyle et évapore à sec, sous vide, le filtrat réuni aux eaux de lavage. On triture le résidu avec de l'eau, sépare le précipité, le sèche et le chromatographie sur 150 g d'alumine lavée.
Les fractions éluées de la colonne avec un mélange de benzène et d'éther et avec de l'éther, sont réunies, évaporées et le résidu est recristallisé à l'aide d'un mélange d'acétone et d'hexane; on obtient ainsi
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le 21-acétate de la 6a-chioro-9a-fluoro-p ednisoione d'un point de fusion de 150 C, après agglomération à 110 C.
On peut effectuer l'oxydation du groupe 11@-hydroxy comme suit :
A une solution de 1 g de 21-acétate de 6a-chloro- ga-fluoro-prednisolone dans 30 cm3 d'acide acétique, on ajoute goutte à goutte une solution de 150 mg de trioxyde de chrome
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dans 5 car d'acide acétique à 80%, tout en secouant et en prenant soin que la température du mélange ne dépasse pas 20 C.
Après l'avoir maintenu pendant 2 heures à température ordinaire, on verse le mélange dans de l'eau glacée, sépare le précipité, le lave à l'eau, le sèche et le recristallise dans un mélange d'aoétone et d'hexane. On obtient ainsi le
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SI-acétate due la 6a-chloro-9a-tluoro-prodnlsone doun point de fusion de 227-229 C.
Exemple 8.
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On rotroldlt a 0 0$ et traite sous atmoph@re d'azote avec 120 g de mêthoxyde de sodium, une solution de 1 g du 21-acétate de la 6a-chloro-9a-fluoro-prednlsolone dans 200 cm3 de méthanol. Apres l'avoir laissé reposer pendant 15 minutes à o C, on neutralise le mélange avec de l'acide acétique, l'évapore presque complètement à aec et dilue avec de l'eau. On sépare le précipité et le recistallise dans
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1" a,c#tone on obtient ainsi la 6a-chloro-9a-tluoro-prednisolone libre.
De même, on peut saponifier les groupes acétoxy
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d'autres composée 6a-cnloX'o-9a.-h$.logénétS, tels que les dérivée 6a-chloro-9a-rluorés, 6a-chloro-ga-bromés et 6e,9a-dichlorés de prednisone et de prednisolone.
Exemple 9.
On laisse reposer pendant une nuit, à température
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ordinaire, un mélange de 1 g de 6a-chioro-9a fiuo o-p etlniBy-
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lone obtenue suivant la méthode décrite dans l'exemple
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précédent avec 20 em3 de pyridine et 1 em3 d"anhydride été l'acide propionique, puis verse dans de l'eau. On extrait le produit avec de l'acétante d'éthyle, lave la solution avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique dilué, de l'eau, une solution de bicarbonate de sodium et de l'eau, la sèche sur du sulfate de sodium anhydre, filtre et évapore à sec. La cristallisation
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du résidu dans du pàthanoi donne le 21-proplonate de 6a- ohloro-9a-fluoro-prednisolone.
De même, par réaction avec des anhydrides ou des chlorures d'acides, renfermant de préférence de 2 à 12 atomes de carbone, on peut préparer les Si-esters de tous les composé?
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6a-ohloro-ga-halogénëe obtenus suivant les méthodes décrites dans les exemples précédents.
Exemple 10.
On chauffe à reflux pendant 70 heures., ..ou@ atmosphère d'azote., un mélange de 500 mg du 21-acétate de la 6a-
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tluoro16a-hydroxw-cort1sone, de 25 em3 de butanol tertiaire anhydre, de 150 mg de dioxyde de sélénium et de 0,05 cm3 de pyridine, puis refroidit, dilue avec 50 cm3 d'acétate d'éthyle, filtre à travers de la célite, lave ce qui reste sur le filtre avec de 1'acétate d'éthyle chaud, et réunit les eaux de lavage et le filtrat.
On élimine le solvant sous pression réduite, triture le résidu avec de l'eau, le sèche et purifie par chromatographie sur 25 g d'alumine lavée. L'élution avec un
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mélange de bensène et d'éther et de l'éther, suivie de recristallisation du produit obtenu par évaporation des
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solvants, donne le 21-acétate de la 6ct-fluox'o-l6K-hyd?cxy- prednisons.
La. matière de départ ci-dessus peut être préparée comme suit :
On refroidit à 0 C une solution de g du 21-acétate
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u"cycloéthylène-b1s-oétal de dans 50 cm3 de pyridine, ajoute, em3 de oh2.02.uro de thlonyle et osogue IÇ mélange à 0 C pendant une heure. On le verso aloses dans de l'eau glacée, extrait avec du chlorure de ,éthylène. lave l'extrait à l'eau, le sèche sur du sulfate de sodium anhydre
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et l'évapore a sec.
On oh onabog aphle le ra1du, et l'on obtient le 21-acétate de la 6a-tluoro-,,20-bis-éthylnedioX1- â5,16prégnad1ène-21-o1-11-oneo r
On secoue pendant une heure, sous atmosphère d'azote, un mélange de 5 g de ce composé et de 50 cm3 d'une solution méthanolique à 1% d'hydroxyde de potassium, neutralise avec de
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10aolde acêtlque, dilue avec de l'eau, sépare par f1ltation le prdolplté, la lave à leau, le sèche et le purifie par reoistallisst1on dans un mélange d'acétone et d'havane pour obtenir la'6a-fluoro-,,20-bi-thYlène-d10xy-5,16¯pégnad1ène 21-01-11-one.
On chauffe à reflux, pendant 40 minutes, un mélange de 4 g de ce composé, de 700 cm3 d'éthanol et de 100 cm3
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d'acide sulfurique dilué (8% en volume), on refroidit, neutralise avec du bicarbonate de sodium solide, concentre à un faible volume (dans le vide), dilue avec de 1 eau, filtre sèche le produit solide et le recristallise à l'aide d'un mélange d'acétone et d'hexane, pour obtenir la 6a-fluoro- ¯4,16-prégnadiène-21-ol-3,11,20-trions.
Une solution de 3 g du composé précité, de 60 cm3 de.benzène sec et de 2,8 cm3 de pyridine est traitée avec 3 g de tétroxyde d'osmium, à température ordinaire, en maintenant pendant 4 jours à l'obscurité. On hydrolyse l'ester osmique en ajoutant 150 cm3 d'eau, 60 cm3 de benzène, 1110 cm3 de méthanol et 10 g de bisulfite de sodium, puis on ajoute 18 g de bicarbonate de sodium et continue de secouer à la température ambiante pendant 4 heures. On ajoute 200 cm3 de chloroforme, élimine le précipité noir par filtration, puis le lave avec 800 cm3 de chloroforme chaud. On réunit le filtrat et les eaux de lavage, sépare la couche organique et la lave avec une solution saturée de chlorure de sodium.
On sèche @ ensuite la solution chloroformique sur du sulfate de sodium anhydre et l'évapore finalement sous pression réduite. On triture le résidu avec de 1 acétone pour obtenir la 6a-fluoro-16a-hydroxy-cortisone brute. Par concentration des liqueurs-mères on obtient une fraction de cristaux additionnelle. L'échantillon analytique est préparé par recristallisation répétée à l'aide d'un mélange d'acétone
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et dehozane.
On refroidît à 10 0 C une solution de i g de la 6afluo o-16a-hyd oxy-eozstl*one brute dans 10 OM3 de pwrid1n8 ajoute approximatlvoment Oe3 OM3 (1,1 mol) d8&nhydw1d acétique, puis laisse le Mëlaage ropocer pendant 3 heures à température ordinaire. On le verse alors dans de 19ea>a, extrait avec de Ilacdtate dodthyle, lave 1getait avec de l'acide chlorhy41que diluât une solution de blearbonate de sodium, puis de l'eau, le oécho sur du aulfaie de sodium anhydre et évapore à sec.
La reo 1s%allisation dans de l'acétate doéthyle fournit le 21-acétate de la 6a-fiuoro-16a-hyàroxy-oo tisonee
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Exemple 11
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, un mélange de 1 g du 21-acétate de la 6a, 9a-difluoro-hydrocortisone, de 50 cm3 de butanol tertiaire anhydre, de 300 mg de dioxyde de sélénium et de 0,1 cm3 de pyridine, on refroidit et filtre à travers de la célite après dilution avec de l'acétate d'éthyle. On lave bien le précipité sur le filtre avec de l'acétate d'éthyle, réunit le filtrat et les eaux de lavage et évapore à sec sous pression réduite.
On triture le résidu avec de l'eau, sépare le précipité, le sèche et le purifie par chromatographie; on obtient ainsi le 21-acétate de la 6a, ' 9-difluoro-prednisolone
D'une manière analogue on introduit une double liaison additionnelle entre l'atome de carbone 1 et l'atome de carbone 2 dans les dérivés 6a-fluoro-9a-bromés et 6a- fluoro-9a-chlorés de l'acétate d'hydrocortisone de façon à produire, respectivement, les 21-acétates de 6a-fluoro- 9a-bromo-prednisolone et de 6a-fluoro-9a-chloro-prednisolon.
On déshydrogène de la même façon les dérivés 6a-chlorés des acétates de 9a-chloro- et 9a-fluoro-cortisone et-hydro- cortisone en dérivés 6a-chlorés des acétates de 9a-ohloro- et 9a-fluoro-prednisone et prednisolone respectivement.
Tout en agitant, on traite à une température inférieure à 20 C, une solution de 1 g du 21-acétate de
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la 6a-fluoro-9a-bromo-prednisoioné dans 300 cm' d'acide acétique, en ajoutant goutte à goutte une solution de 150 mg de trioxyde de chrome dans 6 cm3 d'acide acétique à 80%. On laisse le mélange reposer pendant 2 heures à température ordinaire puis le verse dans de l'eau glacée.
On sépare le précipite par filtration; le lave à l'eau, le seche et le recristallise dans un mélange d'acétone et d!hexane; on obtient ainsi le 21-acétate de 6a-fluoro-9a- bromo-prednisone.
Par la même méthode d'oxydation que celle décrite ci-dessus,on convertit les 21-acétates des dérivés
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&a, 9a-dihalogénés de prednisolone en ceux de prednisone, à savoir en 21-acétate de 6a-fluoro-9a-bromo-prednis?ne, en 21-acétate de 6a-fluoro-ga-chloro-prednîsone et en 21-acétate de 6a, 9-diiuoro-prednisone, respectivement.
Les matières de départ de l'exemplé ci-dessus peuvent être préparées comme suit:
On refroidit à 0 C une solution de 5 g du 21-acétate de la 6a-fluoro-hydrocortisone dans 50 cm3 de pyridine et, tout en agitant, ajoute goutte à goutte, en remuant, 5 cm3 de chlorure de thionyle, en prenant soin que la température du mélange ne s'élève pas au-dessus de 0 C On agite le mélange à 0 C pendant encore 24 heures, puis le verse dans de l'eau glacée et extrait avec de l'acétate d'éthyle. On lave l'extrait à l'eau, à l'acide
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chlorhydrique dilué, avec une solution à 5% de carbonate de sodium et de nouveau à l'eau, le sèche sur du sulfate de sodium anhydre et l'évapore à sec sous pression réduite.
La cristallisation du résidu dans un mélange d'acétone et d'hexane fournit le 21-acétate de la 6a-fluoro-¯4,9(11)¯ prégnadiène-17a,21-diol-3,20-dione.
On traite à température ordinaire et à l'obscurité une solution de 2,5 g de cette diène-dione, dans 25 cm3 de dioxanne pur contenant 4 cm3 d'acide perchlorique 0,4 normal, par 1,2 g de N-bromoacétamide que l'on ajoute en une heure tout en agitant. On agite le mélange pendant encore une heure et le traite avec une solution à 10% de sulfite de sodium jusqu'à ce qu'un essai sur papier à l'amidon et au iodure de potassium ne donne plus de coloration bleue. On ajoute alors 30 cm3 de chloroforme, sépare la couche organique et la lave, l'un aprèsj l'autre, à l'eau, avec une solution de bicarbonate de sodium, puis de nouveau à l'eau. On évapore l'extrait à sec sous vide dans un bain d'une température inférieure à 25 C.
La trituration du résidu avec 10 cm3 environ d'acétone et refroidissement donne le 21-acétate de la 6a-fluoro-9abromo-hydrocortisone à l'état cristallin. La concentration des liqueurs-mères donne une autre fraction de cristaux du même composé.
On ajoute lentement une solution de 2,5 g du
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21-acétate de 6a-f.uoro-a-bror,o--hrdrocorà.soxe, dans 10 cas de dioxanne, à un mélange de .,6 g d'acétate de potassium anhydre et 20 cm3 d'éthanol absolu qui a été auparavant
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chauffé au point d3uï,,'clon. On chauffe le mélange à reflux pendant 45 minuteset,tout en agitant, le refroidit et le dilue avec 50 cm3 d'eau glacée. On sépare le précipite par filtration, le lave à l'eau et le sèche, ce qui donne
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le 2l-acétate de la 6a-fluoro-9p.llp-oxido-A 4¯prégn%ene-17a, 23.-d.ol-3, 24-dione .
On dissout 2 g de cet époxyde dans 20 cm3 de chloroforme pur, refroidit à 0 C et mélange tout en agitant avec 4 em3 d'une solution 0,5 normale d'acide chlorhydrique sec dans le chloroforme, en maintenant le mélange à0 C. On agite le mélange pendant une heure à cette température, puis le verse dans de l'eau. On sépare la couche chloroformique, la lave à l'eau, avec une solution à 5% de carbonate de sodium, puis de nouveau à l'eau, la sèche sur du sulfate de sodium anhydre et l'évapore à sec sous pression réduite.
La cristallisation du résidu dans de l'acétone
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fournit le 21-acétate de la 6a-fluoro-9a-chloro-hydro- cortisone
Dans un récipient en polyéthylène, muni d'un agitateur mécanique, on dissout 2,5 g du 21-acétate de
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6a-fluoro-9,11-oXldo4¯prégnène-l7a,2l-diOl-3,20-dione, obtenu comme décrit ci-dessus, dans 40 cm3 de chloroforme
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pur. On refroidit la solution à 0 C et la mélange en 20 minutes, tout en agitant, avec 0,4 g d'acide fluor- hydrique anhydre. On agite le mélange pendant 2 heures à 0 C, puis neutralise en ajoutant avec précaution du bi- carbonate de sodium aqueux. On transfère le mélange réaction- nel dans un entonnoir à robinet, le lave à l'eau et con- centre sous pression réduite jusqu'à ce qu'il se sépare un précipité volumineux.
On refroidit le mélange, sépare le précipité et le redissout dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle chaud. On débarrasse par filtration la solution d'une petite quantité de matière insoluble, puis la refroidit; on obtient ainsi le 21-acétate de la 6a,9a-difluoro-hydro- cortisone.
Exemple 12
On refroidit à 0 C une solution de 1 g du 21-acétate de la 6a,9a-difluoro-prednisone dans 200 cm3 de méthanol et on la mélange avec 120 mg de méthoxyde de sodium, sous atmosphère dfazote, en prenant soin que la température soit maintenue à 0 C. Au bout de 15 minutes à 0 C, on neutralise le mélange avec de l'acide acétique, l'évapore à sec sous vide et triture le résidu avec de l'eau. On sépare le précipité et le recristallise dans l'acétone; on obtient ainsi la 6a,9a-difluoro-prednisone.
Par une méthode similaire, on saponifie lea groupes 21-acétoxy de tous les composés 5a-flucor-9a-
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halogénés obtenus suivant les exemples précédents, pour former les composés 21-hydroxylés correspondants.
On laisse reposer pendant une nuit à la température ambiante un mélange de 1 g de la 6a-fluoro-9- chloro-prednisolone, de 20 cm3 de pyridine et de 1 cm3 d'anhydride de l'acide propionique, puis le verse dans de l'eau glacée. On extrait le produit à l'acétate d'éthyle et on lave l'extrait successivement à l'eau, avec de ' l'acide chlorhydrique dilué, avec de l'eau, avec une solution di bicarbonate de sodium et avec de l'eau, le sèche sur du sulfate de sodium anhydre et l'évapore à sec. Le résidu cristallise dans un mélange d'acétone et d'hexane on obtient ainsi le 21-propionate de 6a-fluoro-9a-chloro- prednisolone.
De même,la réaction avec des anhydrides ou des chlorures d'acides renfermant de 2 à 12 atomes de carbone, par exemple avec l'acide triméthylacétique, l'acide cyclopentyl-propioniuqe., l'acide phénylpropionique ou l'acide succinique, fournit les 21-esters correspondants de tous les composés 6a-pluoro-9a-halogéné préparés suivant la méthode décrite dans les exemples précédents.
Exemple 13
On prépare un milieu constitue par un extrait de levure à 0,1% dans de l'eau distillée, qu'on divise en
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portions de 30 cm3 dans des flacons d'Erlenmeyer de 125 cm3, on inocule chacune de ces portions avec une culture de 24 heures de Corynebacterium simplex ATCC 6946 dans le même milieu, et on incube à 28 C pendant 24 heures.
On ajoute ensuite à chaque culture 1 cm3 d'une solution éthanolique du 21-acétate de la 6a-chloro-cortisone contenant 10 mg de stéroïde; on prépare cette solution peu avant de l'utiliser, dans de l'éthanol distillé et sans chauffer. On prolonge l'incubation pendant 48 heures tout en agitant et en maintenant la température à 28 C. Dans d'autres essais la période d'incubation a été de 72 heures, mais le résultat final obtenu est le même.
On réunit le contenu des flacons/, divise le tout en trois portions et les extrait chacune à 5 reprises avec des portions de 500 cm3 de dichlorure de méthylène.
On réunifies extraits, les lave avec de l'eau, les sèche sur du sulfate de sodium anhydre, les filtre et les évapore à sec sous pression réduite et à basse température. Le produit brut total ainsi obtenu contient la 6a-chloro- prednisone.
On dissout le produit brut dans 3 cm3 de pyridine et traite par 3 cm3 d'anhydride acétique. On maintient le mélange pendant 20 heures à la température ambiante, le verse dans de l'eau et l'extrait avec du dichlorure de méthylène. On lave l'extrait avec de l'acide
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chlorhydrique dilué, avec une solution à 5% de carbonate de sodium et avec de l'eau, le sèche sur du sulfate de sodium anhydre, le filtre et l'évapore à seo. On chromatographie le résidu sur une colonne de 15 g d'alumine lavée.
L'élution avec un mélange de benzène et d'éther (80: 20) fournit 70 mg du 21-acétate de la 6a-chloro-prednisone, d'un point de fusion de 212-214 C.
Si l'on n'effectue pas l'acétylation du produit brut de la déshydrogénation microbiologique, et si l'on purifie directement le produit brut par chromatographie sur une colonne de 15 g de silice, l'élution de la colonne avec un mélange d'éther et de chloroforme donne la 6a-chloroprednisone. ,
Par une méthode analogue, on convertit la 6a-fluoro-cortisone en 21-acétate de la 6a-fluoro-prednisone, la 6a-chloro-cortisone en 21-acétate de la 6a-chloro-prednisone, la 6a-ohloro-hydrocortisone en 21-acétate de la 6a-chloro-prednosolone et le 6a-fluor-hydrocortisone en 21-acétate de la 6a-fluoro-prednisolone.
En opérant d'une manière analogue, mais en utilisant des cultures de Dydymella lycopersici, on peut déshydrogéner en 1,2 les substances de départ mentionnées ci-dessus.
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Exemple 14 ------------
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, un mélange de 5 g du diacétate de la
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6a-luoro-d-prégnéne-17a,21-diol-3,20-dione, de 250 eme de butanol tertiaire anhydre, de 1,5 g de dioxyde de sélénium et de 0,5 cm3 de pyridine, puis refroidit, dilue avec de l'acétate d'éthyle et filtre à travers de la célit; on lave le produit qui reste sur le filtre avec de l'acétate d'éthyle chaud et on évapore à sec, sous pression réduite, le filtrat auquel on a ajouté les eaux de lavage. On triture le résidu avec de l'eau, sépare le précipité, le sèche et le purifie par chromatographie sur 250 g d'alumine lavée.
Une élution de la colonne avec un mélange de benzène et d'éther et avec de l'éther, et une évaporation à sec des fractions fournit des produits cristallins que l'on réunit et recristallise dans un mélange d'acétone et d'hexane; on
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obtient ainsi le diacétate de la 6n-fluoro-A '-prégnadiène- 17a,21-diol-3,20-dione.
On mélange une suspension de 2 g du diacétate
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de la 6a-fluoro-Al,4¯prégnad1ène-17a,2l-diOl-3,20-d1one dans 20 cm3 d'éthanol absolut avec une solution de méthoxyde de sodium dans du méthanol, préparée en dissolvant 120 mg de sodium dans 5 cm3 de méthanol absolu; on effectue l'addition en agitant, sous atmosphère d'azote, à 0 C, On continue à agiter sous atmosphère d'azote pendant 2 heures
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à 0 C, puis on verse le mélange dans 50 cm3 d'eau contenant 1 cm3 d'acide acétique. On filtre ensuite le précipité,'. le lave à l'eau, le sèche et le recristallise dans un mélange d'acétone et d'hexane ce qui fournit la 6a-fluoro-
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A1'-prégnadlne-17a,21-dïol-3,20-dione.
On maintient pendant 4 heures à température ordinaire un mélange de 1 g de &a-fluoro-A1'-prëgnadine- 17a,21-diol-3,20-dione, de 10 cm3 de pyridine et de l cm3 d'anhydride acétique, puis verse le mélange dans de l'eau glacée. On sépare le précipité, le lave à l'eau, le sèche et le recristallise dans un mélange d'acétone et d'hexane,
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ce qui fournit le 21-acétate de la 6a-fluoro-A"' -prégna- àiène-17a,21-àiol-J,20 dione
Lorsqu'on remplace l'anhydride acétique par de l'anhydride propionique dans le procédé décrit ci-dessus,
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on obtient le 21-propionate de la 6a-fluoro-A1'-prégnadiéne-17a,21-àiol-3,20-àione.
Exemple 15
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, un mélange de 1,5 g de 16,21-diacétate
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de la 6a-ehloro-9a-fluoro-d-prégnne-11,16a,17a,21-tetrol- 3,20-dione, de 75 cm3 de butanol tertiaire, de 450 mg de dioxyde de sélénium et de 0,3 cm3 de pyridine. On refroidit le mélange réactionnel, le dilue avec de l'acétate d'éthyle,
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le filtre à travers de la célite, lave le produit qui reste sur le filtre avec de l'acétate d'éthyle chaud, réunit le filtrat avec les eaux de lavage, évapore le solvant sous pression réduite et triture le résidu avec de l'eau.
On sépare le produit solide par filtration, le sèche et le purifie par chromatographie sur de l'alumine neutres on
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obtient ainsi le l6,2l-diacstate de la 6a-chloro-9a-fluoro- 1,4¯prégnadi%ene-11P.16a,17 ,21-tetrol-3,20-dîone.
Exemple 16 -----------On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous
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atmosphère d'azote, un mélange de 1,5 g de l6,21-diacétate de la 6a-ahloro-9a-iuoro- -prégnne-16a,17a,21-triol-3,1,20- trione de 75 cm3 de butanol tertiaire anhydre, de 450 cm3 de dioxyde de sélénium et de 0,2 cm3 de pyridine. On re- froidit le mélange réactionnel, le dilue avec de l'acétate d'éthyle, filtre à travers de la célite, on lave le produit solide qui reste sur le filtre avec de l'acétate d'éthyle chaud, réunit le filtrat avec les eaux de lavage, évapore le solvant sous pression réduite et triture le résidu avec de l'eau.
On sépare le produit solide par filtration, le sèche et le purifie par chromatographie sur de l'alumine neutres on obtient ainsi le 16,21-diacétate de la 6a-chloro-
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9a-fluoro-GZ'-prgnadiéne-6a,17a,21-triol-3,11,20-trione.
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Exemple 17
On ohauffe à reflux pendant 70 heures,sous atmosphère d'azote, un mélange de 5 g du 21-acétate de la
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6a-chloro-11-epi-hydrooortisone, de 2y ï5 g de dioxyde de s6lénIum, de 250 ce de butanol tertiaire et de 0,6 om de pyridine, on filtre le mélange réactionnel à travers de la célite, lave le produit qui reste sur le filtre avec du butanol tertiaire chaud, réunit le filtrat et les eaux de lavage et concentre jusqu'à 50 cm3 environ, sous pression résulte.
On refroidit le résidu, le dilue avec de l'acétate d'éthyle, lave à plusieurs reprises la solution avec de l'eau et réextrait les eaux de lavage avec de l'acétate d'éthyle. On évapore à sec les solutions dans l'acétate d'éthyle réunies, dissout le résidu dans 600 oins d'acétonn,e ajoute 5 g de charbon décolorant, et chauffe le mélange à reflux pendant une demi-heure. On élimine le charbon- par filtration et concentre le filtrat, le refroidit jusqu'à
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ce que le 21-acétate de la 6a-chloro-li-épi-prednisolone se sépare à l'état cristallin.
Exemple 18
On prépare, dans un milieu aqueux de levure
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(0,1), 30 cultures de corynebaaterium simplex ATCC 6946, chaque culture (30 cm3) étant placée dans des flacons
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d'Erlenmeyer de 125 cm3; pour l'Inoculation, on utilise une culture obtenue en 24 heures, dans un milieu identique.
On incube à 28 C le contenu inoculé des flacons d'Erlenmeyer, en agitant pendant 24 heures.
A chacune de ces cultures, on ajoute 1 m3 d'éthanol contenant 10 mg de la 6a-chloro-ll-épi-hydrocor- tisone on prépare la solution éthanolique du stéroide peu avant de l'utiliser, dans de l'éthanol distillé et sans chauffer. On prolonge l'incubation pendant 48 heures en agitant continuellement et en maintenant la température à 28 C. Dans d'autres essais, le temps d'incubation a été prolongé Jusqu'à 72 heures, sans que le résultat final soit modifié.
On réunit ensuite le contenu des flacons et divise le tout en trois portions, extrait chacune d'elles à cinq reprises avec du chlorure de méthylène, en utilisant 500 cm3 de ce solvant pour chaque extraction. Les extraits réunis sont lavés à l'eau, sèches sur du sulfate de sodium anhydre et le chlorure de méthylène est évaporé à sec sous pression réduite, à basse température. Le résidu contient la 6a-chloro-11-épi-prednisolone brute.
Pour préparer le 21-acétate de la 6a-chloro- 11-épi-prednisolone, on traite ce résidu avec 1,1 équivalent moléculaire d'anhydride acétique en solution de la pyridine à 0 C, pendant une nuit, on verse le mélange réactionnel
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dans de'l'eau, sépare le précipité par filtration, le lave à l'eau, le sèche et le recristallise dans de l'acétate d'éthyle. On obtient ainsi le 21-acétate de la 6a-chloro- 11-épi-prednisoloen,
On incube, exactement comme décrit ci-dessus, le 21-acétate de la 6a-chloro-11-épi-hydrocortsion, pour obtenir, avec saponification simultanée du groupe acétoxy, la 6a-chloro-11-épi-prednisolone brute identique au produit obtenu par incubation du composé libre.
Exemple 19
On chauffe à reflux pendant 72 heures, sous atmosphère d'azote, un mélange de 2 g de la 6a-chloro- ' progestérone, de 100 cm3 de butanol tertiaire, de 0,8 g de dioxyde de sélénium et de 0,5 cm3 de pyridine, refroidit, filtre à travers de la célite, puis lave le produit qui reste sur le filtre avec du butanol tertiaire chaud et réunit le filtrat et les eaux de lavage. On évapore le solvant sous pression réduite, dissout le résidu dans de l'acétone, décolore la solution avec du charbon décolorant, la sèche sur du sulfate de sodium anhydre et l'évapore à sec. Par chromatographie sur de l'alumine neutre, on obtient la 6a- chloro-¯1,4-prégnadiène-3,20-dione.
D'une manière analogue, on convertit la 6a-chloro-17a-acétoxy-pr9ogestérone en 17-acétate de 6a-
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ehloro-L's -rrégna9iâne-.'a-o'i - 9 20-dione ..
D'une manière analogue, on convertit aussi la 6a-fluoro-progestérone en a-f,uoro-a1'-prégad.zae- 3,20-dione, et la a-'.uoro-.7a-actov:y-progestrone en 17-acétate de la 6a-fluoro-A i,4¯prégnadiéne-17a-ol-3,20- dione.
Exemple 20
On chauffe à reflux pendant 70 heures, sous atmosphère d'azote, un mélange de 1 g du 21-acétate de la 6a-chloro-2a-méthyl-hydrocortisone, de 50 cm3 de butanol tertiaire anhydre, de 300 mg de dioxyde de sélénium et de 0,1 cm3 de pyridine, refroidit, dilue avec de l'acétate d'éthyle et filtre à travers de la célite; on réunit ensuite le filtrat et les eaux de lavage, et évapore à sec sous pression réduite. On triture le résidu avec de l'eau, sépare le précipité, le sèche et le purifie par chromatographie, ce qui fournit le 21-acétate de la 6a-chloro-2a-méthyl- prednisolone.
D'une manière analogue, on convertit le
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21-acétate de la 6a-ahloro-2a-méthyl-cortisone en le 21acétate de la 6a-chloro-2a-mthyl-prednieone.
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The present invention relates to novel egnadienic compounds of the formula:
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in which R1p ft2 and R3 represent hydrogen or free or esterified hydroxyls, R4 hydrogen or a methyl group, Y two hydrogen atoms, an oxo group or hydrogen and a free hydroxy group or es terified in a or ss orientation, X1 is hydrogen, a chlorine or fluorine atom and X2 is a chlorine or fluorine atom.
Indicated ester residues are, for example, those of carboxylic acids
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saturated or unsaturated aliphatic or cyclo-allphatic, aromatic or heterocyclic dicarboxylic acids, for
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example of formic, acetic, propionic acids, butyric acids, valeric acids such as n-valeric acid or trlmethylaodtlque acid, oaproic acids, such as -tr1methyl-proplonlque acid, oenanthic, caprylic, pelargonic acids, capric, undecyllic acids.,
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for example undecylenic acid, lauric, myristic, palmitic, or stearic acids, for example oleic acid, ayclopentyl-, cyclohexyl- or
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phenyl-acetic or propionic acids, benzoic acids, phenoxy-alkanoics,
such as phenoxy-acetic acid, p-chloro-phenoxy-acetic acid, 2,4-dichloro-phenoxyacetic acid, 4-tertio-butyl-phenoxy-acetic acid, 3-phenoxy-propionic acid, 4-phenoxy-butyric acid, furan-2-aarboxyl3ic acid, 5-tertlo-butyl-turan-2carboxylic acid, 5-bromo-furan-2-carboxylic acid, nlootlnic acids , as well as dicarboxylic acids such as
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oxalic, succinic and glutaric acids, substituted carboxylic acids, such as 5-keto-carboxylic acids, for example acetylacétlquep propionylacétique, butyrylacét1que or opin4u, amino acids etc.
Instead of carboxylic acid residues, the ester residues can also be sulfonic acid residues, as well as phosphoric or sulfuric acids.
The products of the process are characterized by high biological activity. It is appropriate to quote parti-
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particularly 6a-chloro- and 6a-fluoro-derivatives of prednisolone, prodnisone, 9a-fluoro- and o-oloroprodnisolone and -prdniona, 9a-fluoro- and ga-chaoro-16ahydroxy-prednleolone and - prednisone, as well as the corresponding 21-esters such as 21-tri-methylacetates, 21-cyclopentylproplonateze, 21-phenylproponatea and 21-esters of dioarboxylic acids, for example, aucolnic acid which show high activity in the liver glycogenic test and the particle size test.
Against many non-halogenated corticosteroids at position 6a, the compounds
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The pregnancies indicated do not show, or at least show only a very small extent, the side effect of sodium retention.
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These new pregnadienic compounds are obtained by dehydrogenating 6-chloro- or 6-fluoro-A -prégnene-3,20-diones in position 1,2. The introduction of the double bond
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1,2-bran in the starting materials can be obtained by treatment with selenium compounds having dehydrogenating action or by causing aerobic cultures of 1,2-dehydrogenating microorganisms to act.
Examples of selenium compounds which exert a dehydrogenating effect are mainly selenium dioxide, for example in sublimated form, or selenious acid. The reaction according to the process takes place in an aqueous or non-aqueous solvent. The organic solvents used above all are those which, at the temperature chosen, do not react or at least react only to a small extent with the selenium compound exerting a dehydrogenating effect.
As solvents, tertiary alcohols such as tertiary butanol or tertiary amyl alcohol have been shown to be favorable in particular, in the presence of bases such as tertiary organic amines, such as pyridine or collidine. The reaction mixture is optionally heated under pressure or it is boiled under reflux. When the reaction is complete, the selenium formed is filtered off and the reaction product is isolated from the filtrate according to known methods.
To introduce the 1,2-double bond microbiologically, aerobic cultures of Fusarium solani, Fusarium caucasicum, Calonectria deeora, Alternaria passiveiorae, Ophlobolus heterostrophus, Ophiobolus Miyabeanus, Didymella lycopersici or
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CoynebatGr1um simplexe For the implementation of the micobiological process, the substances of ddpurt can be incubated with cultures of the microorganisms indicated, under aerobic conditions known in FlleB-Mllme #. Growth takes place in surface culture or, which is technically advantageous, in is! S! @ pgë @ p culture by shaking or shaking.
Crops contain rich carbon, notably carbohydrates, as well as, where appropriate, closed substances.
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flavoring, for example corn swelling water or beer wort, and inorganic salts. We can, therefore, use. natural, synthetic or
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seml-synthdtlqueo. A practically very simple process is deduced hereinafter without the invention being however limited by these indications: The organisms are cultivated in apparatus and under conditions identical to what is known for the manufacture of antibiotics according to the process known as submerged culture.
When the cultures have developed, the starting substances indicated under the heading are added.
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in the form of a fine dlsperalon or an aolutlon, by oxenple in methanol, acetone or éth.yléne.élycol, and pouroult the incubation. Finally, the mycelium is separated, the filtrate and / or the mass of mycelium are extracted, and the extracts are isolated.
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compounds of A -pgnad1n of a man1ea in itself known, for example by the method of distribution -between solvents or mixtures of solvents immiscible with each other
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the others, by adsorption, chromatography, crystallization, transformation into functional derivatives, for example into esters and the like.
These reactions can also be carried out by first separating the active enzymes from the aerobic cultures of the organisms indicated and using them to the exclusion of the growing cultures. It is thus possible, for example, to separate the mycelium formed from aerobic cultures of the indicated organisms, to suspend it in water or in buffer solutions, to add the indicated starting substances to these suspensions and to incubate.
The products of the process which contain free hydroxyls can, in a manner known per se, be converted into their esters, in particular their 21-esters. In these esters, the acid residues are those of the acids indicated at the beginning.
In the compounds indicated comprising esterified hydroxyls, these can, by chemical or enzymatic hydrolysis, for example using acidic or basic agents or by alcoholysis, be converted into free hydroxyls.
The usual dehydrogenation agents, for example chromium trioxide in glacial acetic acid or the complex of chromium trioxide and pyridine, are used for the conversion of the 11a- and 11ss-hydroxycompounds into the corresponding 11-oxo-compounds.
As starting materials for the present process,
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6-chlopo- and 6-fluor-A4 of formula
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in which Rl, R2 and R3 represent hydrogen or free or esterified hydroxyls, R4 hydrogen or a methyl group, X1 hydrogen or a chlorine or fluorine atom X2 a chics * or fluorine and Y two hydrogen atoms, an oxo group or hydrogen and a free or esterified hydroxyl in a or ss orientation.
As specific starting substances, mention will be made of
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6a-chloro- and 6ot-fluoFO-dës'ivë8 of ps'og @ µt4ron @ ,, of 17a hy6 oxy progesterone, deoxycortleosterone, 17ahydoxJ-deoxYcort1costerone, cortlconce of hyd2'ocortlaone, ga-chloro- and 9a-fluo + o-aortisone and -hydrocort1 $ one, 2a-methyl-cortisone and 2a-methylhydrocortisone, 9a-chloro- and 9a-fluoro-2a-methyl-cortlsoà-ie and hydroao1soneD of 9s-ehloFO- 'and 9a-riuo o-x6a-hy4 oxycortisone and -hydrocortloone, as well as their esters, include their 21-mono-estors and their 17a, 21-esters.
The starting substances indicated are new; they can be prepared
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according to the process described in the BELGIUM patent application filed on March 8, 1958, under N 447.028, for: "Nieuive verbindingen van de pregaanreeks en werkwijze ter bereiding daarvan",,
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for example starting from 5a., 6a-oxldo-3., 20-dîoxo-pregnanes in which at least the oxo group in position 3 is ketalized, by treatment with hydrochloric acid or hydrofluoric acid or with substances that give
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acids of this kind, the 5a-hyd oxy-6fi-chlorinated or -6ss-fluorinated compounds which can form as intermediates being treated with strong acids.
The starting substances for this process which contain free hydroxyls can be converted into their esters, in particular their 21-esters, in a manner known per se. In such compounds which have esterified hydroxyls, these can be converted into free hydroxyls by chemical or enzymatic hydrolysis.
The present invention is described in more detail in the non-limiting examples which follow in which the temperatures are indicated in degrees centigrade.
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Example l.
A suspension of 500 mg of 21-acetate from the mixture is heated under reflux for 70 hours under a nitrogen atmosphere.
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6a-chloro-A 4-prregnene-17a, 21-diol - ,, 11,20-tr1one in 25 cm 3 of tert-butanol. anhydrous 150 mg of selenium dioxide and 0.05 cm3 of pyridine. The cooled mixture is diluted with 50 cm 3 of ethyl acetate, filtered through celite washed well with ethyl acetate The ethyl acetate solution is evaporated to dryness in vacuo and the ethyl acetate solution is covered. residue with water and filter.
The dry precipitate is chromatographed on a column of 25 g of washed alumina and eluted with a mixture of benzene and ether, and with ether, the eluates are combined, evaporated to dryness and the residue crystallized using a mixture of acetone and hexane; this gives 105 mg of 21-acetate
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α-chloro-A '-prgnadine-17a, 21-d101 - ,, 1120-tr1one with a melting point of 217-19 C. y max. 238 mg, loglm 4.18.
A solution of 100 mg of the above acetate in 20 cm3 of methanol is cooled with ice at 0 C and, under a nitrogen atmosphere, it is mixed with 12.5 mg (1 molar equivalent) of sodium methoxide. After having left it to stand for 15 minutes at 0 ° C., the solution is nautralised with acetic acid, concentrated to close to dryness and diluted with water. We separate the precipitate it crystallizes
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in acetonc, and thus obtains 6a-chio + o-à'-p + esnad1ene-17a, 21-diol- "120tr1one.
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Instead of using sodium methoxide for the saponification described above, one can also use an equal weight of sodium or potassium hydroxide.
Example 2.
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500 mg of 6o-ehloro-l'-gsgrae.d.nc-17a.21-diol-3,11,20-trione are dissolved in 5 in, 3 of pyridine, and mixed with 0.5 em3 of anhydride. The mixture is kept at room temperature for 4 hours, poured into water, and the precipitate is extracted with methylene dichloride, the solution washed with dilute hydrochloric acid, water, solution. of sodium bicarbonate, then water, dry it over sodium sulfate and evaporate to dryness. Crystallization of the residue from a mixture of acetone and hexane
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gives lq 6c-ch.oro-l'-prgnadànc-lqs 21-propionate, 21-dlol-3ell # 20-trione.
, Example ,.
A mixture of 500 mg of 6α-21-acetate is heated for 70 hours at reflux under a nitrogen atmosphere.
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ohloro-A-prregnene-11, 17a, 21-triol-320-dlone, 25 em3 of, tert-butanol. anhydrous, 150 mg of selenium dioxide and 0.05 cm3 of pyridine. The cooled mixture is diluted with 50 cm3 of ethyl acetate, filtered through celite and washed well with ethyl acetate. The ethyl acetate solution is evaporated to dryness in vacuo and the residue is triturated with water and filtered.
The dry precipitate is chromatographed on a
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column of 25 g of washed alumina, and elution is carried out with a mixture
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of benzene and ether and with Ildther, the eluates are combined, evaporated and recrystallized using a mixture of acetone and hexane; we thus obtain the 21-acetate of 6a-chloro-
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Al, 4¯pnad1ene-11D17a, 21-tr101-, 20-d10ne mp 204-205 C.
Cooled with ice, at 0 C, in a nitrogen atmosphere, a solution of 100 mg of the above acetate in
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20 "cm" of methanol, then this solution was mixed with 12.5 mg (approximately one molar equivalent) of sodium methoxide. After allowing it to stand for 15 minutes at 0 ° C., the solution is neutralized with acetic acid, evaporated under vacuum to dryness, then triturated with water. The precipitate is separated and crystallized from acetone;
we obtain
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thus the 6a-chlOO-Al, 4¯prégnad1àne-1117a, 21-trlo1 - ,, 20- dione free, melting at 195 - 1960 C
In an analogous manner, 20-ethylene is dehydrogenated. ketal of the starting material above and we get the
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6a-ChlorO-Al, 4¯Pregnad1ene -11,11a, 21-tiol-3,20-d1one 21-acetate.
Example) 1. @ 4.
500 mg of the 6α-chloro-pregnndiene-11,17a, 21-triol - ,, 20-dion are dissolved in 5 cm 3 of pyridine and mixed with 0.5 cc of propionic anhydride. After keeping the mixture for 4 hours at room temperature, it is poured
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in ice water and extract with methylene diahloride. The extract is washed with dilute hydrochloric acid, with water, with sodium bicarbonate solution and again with water, dried over sodium sulfate and the solvent removed by distillation. The residue is crystallized from a mixture of acetone and hexane, which gives
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fa-ahloro-l'-Pregn.d3n-11,17a-, 21-triol-3,20 dione 21-propionate.
If, in the example above, one replaces the anhydride of the acid propioniuqe by the anhydride of trimethyl-
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acetic, cyclopentylpropionic, phenylpropionic or sucolnlque, one obtains, respectively, 21tridthylactat, 21-cyclopentylpropionatee, 21-phenylpropionate or 21hemisuccinate of fsx-ahioro-l'-prgnadins-11,17ac, 21-triol-3,20- dione.
¯ temple 5.,
A mixture of 500 mg of 6afluoro-cortisone 21-acetate, 25 cm3 of anhydrous tertiary butanol, 150 mg of selenium dioxide and 0.05 cm3 is refluxed for 70 hours, under a nitrogen atmosphere. of pyridine.
After cooling, the mixture is diluted with 50 cm3 of ethyl acetate, filtered through celite and washed well with ethyl acetate. The filtrate and the washings are combined and the solution washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated to dryness under
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reduced pressure. The residue is triturated with filtered water, the precipitate, dried and chromatographed on 25 g of washed dualumine. Elution is carried out with a mixture of bens @ n @ and dqéthoe and with 1 # ethe> ;, the eluate is combined, evaporated and cr1t & 111 0 using a mixture of acetone and hezance, the iliiol le is obtained. 6α-fluo? O-pyedKis 21-acetate <Mia with a melting point of 235 - 2.8 o C.
Analogously, the 2X-acetate of 6afluor-â4¯pregn # n-11a11a, 21-trlo1-3,20 diane, by oxidation with selenium dioxide, is converted into 21-acetate of 6a-rluo Al, 4 ¯Pregnadiene-11, 17a 21-triol'D20-dione with a melting point of 235 - 2'7 o C. Due to this compound by treating it with a methanol solution of a base, such as almond ethylate , sodium hydE'osy <3 @ or potassium hydroxide according to ozemplou 1 and µ, we obtain 6a-riuor-à "-prégnadien-lip, 17a, z1-trioi-3, zo-dione. nnon ie 6.
A mixture of 500 mg of 6α-fluoro-prodnlsolone, 5 em of pyridine and 0.5 em3 of acetic anhydride is maintained at room temperature for 4 hours, then the verao in ice water and extracted with methy16e d1chloure.
The extra is washed with dilute hydrochloride # 1 acid, sodium sulfate, filtered and evaporated in a bag. The c1ta1liatton. of the residue in a mixture of acetone and hexane gives 6α-fluoro-prednlcolone acetate, melting point 235 - 2'10 C.
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Likewise, by reaction with anhydrides or acid chlorides having 2 to 12 carbon atoms, the corresponding 21-esters of the 6α-fluorinated derivatives of prednisone and prednisolone can be prepared.
Example 7.
A mixture of 3 g of 6α-chloro-acetate is heated at reflux for 70 hours under a nitrogen atmosphere.
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9g-fluoro-hédoaortispne, 150 em3 of anhydrous tertiary butanol, 900 mg of selenium dioxide and 0.3 cm3 of pyridine, cooled and diluted with ethyl acetate. The mixture is filtered through celite, washed what remains on the filter with ethyl acetate and the filtrate is evaporated to dryness in vacuo, the filtrate combined with the washing waters. The residue is triturated with water, the precipitate is separated, dried and chromatographed on 150 g of washed alumina.
The fractions eluted from the column with a mixture of benzene and ether and with ether are combined, evaporated and the residue is recrystallized using a mixture of acetone and hexane; we thus obtain
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6a-chioro-9a-fluoro-p ednisoione 21-acetate with a melting point of 150 C, after agglomeration at 110 C.
The oxidation of the 11 @ -hydroxy group can be carried out as follows:
To a solution of 1 g of 6a-chloro-ga-fluoro-prednisolone 21-acetate in 30 cm3 of acetic acid is added dropwise a solution of 150 mg of chromium trioxide.
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in 5 char of 80% acetic acid, while shaking and taking care that the temperature of the mixture does not exceed 20 C.
After having kept it for 2 hours at room temperature, the mixture is poured into ice-cold water, the precipitate is separated, washed with water, dried and recrystallized from a mixture of aoetone and hexane. We thus obtain the
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SI-acetate due to 6a-chloro-9a-tluoro-prodnlsone with a melting point of 227-229 C.
Example 8.
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Rotroldlt at 0 0 $ and treated under a nitrogen atmosphere with 120 g of sodium methoxide, a solution of 1 g of 6a-chloro-9a-fluoro-prednlsolone 21-acetate in 200 cm3 of methanol. After allowing it to stand for 15 minutes at o C, the mixture is neutralized with acetic acid, evaporated almost completely to aec and diluted with water. The precipitate is separated and recistallized in
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1 "a, c # tone is thus obtained free 6a-chloro-9a-tluoro-prednisolone.
Likewise, acetoxy groups can be saponified.
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others composed of 6a-cnloX'o-9a.-h $ .logenets, such as the 6a-chloro-9a-rluorinated, 6a-chloro-ga-brominated and 6e, 9a-dichlorinated derivatives of prednisone and prednisolone.
Example 9.
We let it stand overnight, at temperature
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ordinary, a mixture of 1 g of 6a-chioro-9a fiuo o-p etlniBy-
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lone obtained according to the method described in the example
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previous with 20 em3 of pyridine and 1 em3 of anhydride was propionic acid, then poured into water. The product is extracted with ethyl acetant, the solution washed with water, dilute hydrochloric acid, water, sodium bicarbonate solution and water, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated to dryness.
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of the residue in pàthanol gives 6a-ohloro-9a-fluoro-prednisolone 21-proplonate.
Likewise, by reaction with anhydrides or acid chlorides, preferably containing 2 to 12 carbon atoms, the Si-esters of all compounds can be prepared.
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6a-ohloro-ga-halogenated obtained according to the methods described in the preceding examples.
Example 10.
A mixture of 500 mg of 6α-21-acetate is heated under reflux for 70 hours. Or @ an atmosphere of nitrogen.
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tluoro16a-hydroxw-cort1sone, 25 em3 of anhydrous tertiary butanol, 150 mg of selenium dioxide and 0.05 cm3 of pyridine, then cooled, diluted with 50 cm3 of ethyl acetate, filtered through celite , wash what remains on the filter with hot ethyl acetate, and combine the washings and the filtrate.
The solvent is removed under reduced pressure, the residue triturated with water, dried and purified by chromatography on 25 g of washed alumina. Elution with a
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mixture of bensene and ether and ether, followed by recrystallization of the product obtained by evaporation of the
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solvents, gives 6ct-fluox'o-16K-hyd? cxy-prednisons 21-acetate.
The above starting material can be prepared as follows:
A solution of g of 21-acetate is cooled to 0 C
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u "cycloethylene-b1s-oetal in 50 cm3 of pyridine, add em3 of thlonyl oh2.02.uro and osogue IÇ mix at 0 C for one hour. The shad back is in ice water, extracted with ethylene chloride.wash the extract with water, dry over anhydrous sodium sulfate
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and evaporates it to dryness.
We abog the ra1du, and we obtain the 21-acetate of 6a-tluoro - ,, 20-bis-ethylnedioX1- â5,16pregnad1ene-21-o1-11-oneo r
Shaken for one hour, under a nitrogen atmosphere, a mixture of 5 g of this compound and 50 cm3 of a 1% methanolic solution of potassium hydroxide, neutralized with
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Acetic acid salt, diluted with water, separates by filtration, washed with water, dried and purified by reoistallization in a mixture of acetone and havana to obtain 6α-fluoro - ,, 20- bi-thYlene-d10xy-5,16¯pégnad1ene 21-01-11-one.
A mixture of 4 g of this compound, 700 cm3 of ethanol and 100 cm3 is refluxed for 40 minutes.
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of dilute sulfuric acid (8% by volume), cooled, neutralized with solid sodium bicarbonate, concentrated to a small volume (in vacuo), diluted with 1 water, filter, dry the solid product and recrystallize it at l using a mixture of acetone and hexane, to obtain 6a-fluoro-¯4,16-pregnadiene-21-ol-3,11,20-trions.
A solution of 3 g of the aforementioned compound, 60 cm3 of dry benzene and 2.8 cm3 of pyridine is treated with 3 g of osmium tetroxide, at room temperature, keeping for 4 days in the dark. The osmic ester is hydrolyzed by adding 150 cm3 of water, 60 cm3 of benzene, 1110 cm3 of methanol and 10 g of sodium bisulfite, then 18 g of sodium bicarbonate is added and continues to shake at room temperature for 4 hours. 200 cm3 of chloroform are added, the black precipitate is removed by filtration, then washed with 800 cm3 of hot chloroform. The filtrate and the washing waters are combined, the organic layer is separated and washed with a saturated solution of sodium chloride.
The chloroform solution is then dried over anhydrous sodium sulfate and finally evaporated under reduced pressure. The residue is triturated with acetone to afford crude 6α-fluoro-16a-hydroxy-cortisone. By concentrating the mother liquors, an additional crystal fraction is obtained. The analytical sample is prepared by repeated recrystallization using a mixture of acetone
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and dehozane.
A solution of ig of crude 6afluo o-16a-hyd oxy-eozstl * one in 10 OM3 of pwrid1n8 is cooled to 10 ° C., approximatlvoment Oe3 OM3 (1.1 mol) d8 & nhydw1d is allowed to be ropoced for 3 hours at room temperature. It is then poured into 19ea> a, extracted with dodthyl acetate, washed with hydrochloride acid dilute a solution of sodium blearbonate, then water, the echo on anhydrous sodium sulphate and evaporated to dryness. .
The reo 1s% allization in ethyl acetate provides the 21-acetate of 6a-fiuoro-16a-hyàroxy-oo tisonee
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Example 11
A mixture of 1 g of 6a, 9a-difluoro-hydrocortisone 21-acetate, 50 cm3 of anhydrous tertiary butanol, 300 mg of selenium dioxide and sodium is refluxed for 70 hours under a nitrogen atmosphere. 0.1 cm3 of pyridine, cooled and filtered through celite after dilution with ethyl acetate. The precipitate is washed well on the filter with ethyl acetate, the filtrate and the washings are combined and evaporated to dryness under reduced pressure.
The residue is triturated with water, the precipitate is separated, dried and purified by chromatography; this gives the 21-acetate of 6a, '9-difluoro-prednisolone
In an analogous manner, an additional double bond is introduced between the carbon atom 1 and the carbon atom 2 in the 6a-fluoro-9a-brominated and 6a-fluoro-9a-chlorinated derivatives of hydrocortisone acetate so as to produce, respectively, the 21-acetates of 6a-fluoro-9a-bromo-prednisolone and 6a-fluoro-9a-chloro-prednisolon.
The 6a-chlorinated derivatives of 9a-chloro- and 9a-fluoro-cortisone and-hydro-cortisone acetates are dehydrogenated in the same way to 6a-chlorinated derivatives of 9a-ohloro- and 9a-fluoro-prednisone and prednisolone acetates, respectively. .
While stirring, treated at a temperature below 20 C, a solution of 1 g of 21-acetate
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6a-fluoro-9a-bromo-prednisoioné in 300 cm 3 of acetic acid, by adding dropwise a solution of 150 mg of chromium trioxide in 6 cm 3 of 80% acetic acid. The mixture is left to stand for 2 hours at room temperature and then poured into ice water.
The precipitate is separated by filtration; washing it with water, drying it and recrystallizing it from a mixture of acetone and hexane; 6α-fluoro-9a-bromo-prednisone 21-acetate is thus obtained.
By the same oxidation method as that described above, the 21-acetates of the derivatives are converted
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& a, 9a-dihalogens of prednisolone to those of prednisone, namely 6a-fluoro-9a-bromo-prednisone 21-acetate, 6a-fluoro-ga-chloro-prednisone 21-acetate and 21-acetate of 6a, 9-diiuoro-prednisone, respectively.
The starting materials of the above example can be prepared as follows:
Cooled to 0 C a solution of 5 g of 6a-fluoro-hydrocortisone 21-acetate in 50 cm3 of pyridine and, while stirring, added dropwise, with stirring, 5 cm3 of thionyl chloride, taking care that the temperature of the mixture does not rise above 0 ° C. The mixture is stirred at 0 ° C. for a further 24 hours, then poured into ice-cold water and extracted with ethyl acetate. The extract is washed with water, with acid
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Dilute hydrochloric acid, with 5% sodium carbonate solution and again with water, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure.
Crystallization of the residue from a mixture of acetone and hexane affords the 21-acetate of 6a-fluoro-¯4.9 (11) ¯ pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione.
A solution of 2.5 g of this diene-dione in 25 cm3 of pure dioxane containing 4 cm3 of normal 0.4 perchloric acid is treated at room temperature and in the dark, with 1.2 g of N-bromoacetamide. which is added over an hour while stirring. The mixture was stirred for an additional hour and treated with 10% sodium sulfite solution until a starch potassium iodide paper test no longer gave a blue color. 30 cm3 of chloroform are then added, the organic layer is separated and washed, one after the other, with water, with a solution of sodium bicarbonate, then again with water. The extract is evaporated to dryness under vacuum in a bath with a temperature below 25 ° C.
Trituration of the residue with about 10 cm3 of acetone and cooling gives crystalline 6α-fluoro-9abromo-hydrocortisone 21-acetate. Concentration of the mother liquors gives another fraction of crystals of the same compound.
A solution of 2.5 g of the
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21-acetate of 6a-f.uoro-a-bror, o - hrdrocorà.soxe, in 10 cases of dioxane, to a mixture of., 6 g of anhydrous potassium acetate and 20 cm3 of absolute ethanol which has been before
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heated to the point of clon. The mixture is heated under reflux for 45 minutes and, while stirring, cooled and diluted with 50 cm3 of ice water. The precipitate is separated by filtration, washed with water and dried, which gives
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6α-fluoro-9p.llp-oxido-A 4¯pregn% ene-17a, 23-d.ol-3, 24-dione 2l-acetate.
2 g of this epoxide are dissolved in 20 cm3 of pure chloroform, cooled to 0 C and mixed while stirring with 4 em3 of a 0.5 normal solution of dry hydrochloric acid in chloroform, keeping the mixture at 0 C. The mixture is stirred for one hour at this temperature, then poured into water. The chloroform layer is separated, washed with water, with a 5% solution of sodium carbonate, then again with water, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure.
Crystallization of the residue from acetone
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provides 6a-fluoro-9a-chloro-hydrocortisone 21-acetate
2.5 g of 21-acetate are dissolved in a polyethylene container fitted with a mechanical stirrer.
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6a-fluoro-9,11-oXldo4¯pregnene-17a, 2l-diOl-3,20-dione, obtained as described above, in 40 cm3 of chloroform
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pure. The solution was cooled to 0 C and mixed over 20 minutes, while stirring, with 0.4 g of anhydrous hydrofluoric acid. The mixture is stirred for 2 hours at 0 C, then neutralized by carefully adding aqueous sodium bicarbonate. The reaction mixture is transferred to a funnel with a tap, washed with water and concentrated under reduced pressure until a bulky precipitate separates out.
The mixture is cooled, the precipitate is separated and redissolved in 100 cm3 of hot ethyl acetate. The solution is freed by filtration of a small amount of insoluble matter, then cooled; 6a, 9a-difluoro-hydrocortisone 21-acetate is thus obtained.
Example 12
A solution of 1 g of the 21-acetate of 6a, 9a-difluoro-prednisone in 200 cm3 of methanol is cooled to 0 ° C. and mixed with 120 mg of sodium methoxide, under a nitrogen atmosphere, taking care that the temperature or maintained at 0 ° C. After 15 minutes at 0 ° C., the mixture is neutralized with acetic acid, evaporated to dryness under vacuum and the residue is triturated with water. The precipitate is separated and recrystallized from acetone; thus obtaining 6a, 9a-difluoro-prednisone.
By a similar method, the 21-acetoxy groups of all 5α-flucor-9a- compounds are saponified.
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halogenated compounds obtained according to the preceding examples, to form the corresponding 21-hydroxy compounds.
A mixture of 1 g of 6α-fluoro-9-chloro-prednisolone, 20 cm3 of pyridine and 1 cm3 of propionic acid anhydride is left to stand overnight at room temperature, then poured into ice water. The product is extracted with ethyl acetate and the extract is washed successively with water, with dilute hydrochloric acid, with water, with sodium bicarbonate solution and with sodium bicarbonate. water, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness. The residue crystallizes from a mixture of acetone and hexane, thereby obtaining 6a-fluoro-9a-chloro-prednisolone 21-propionate.
Likewise, reaction with anhydrides or chlorides of acids containing from 2 to 12 carbon atoms, for example with trimethylacetic acid, cyclopentyl-propionic acid, phenylpropionic acid or succinic acid, provides the corresponding 21-esters of all the 6a-pluoro-9a-halogen compounds prepared according to the method described in the preceding examples.
Example 13
A medium is prepared consisting of a 0.1% yeast extract in distilled water, which is divided into
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30 cc portions in 125 cc Erlenmeyer flasks, each of these portions is inoculated with a 24 hour culture of Corynebacterium simplex ATCC 6946 in the same medium, and incubated at 28 ° C for 24 hours.
Then added to each culture 1 cm3 of an ethanolic solution of 21-acetate of 6α-chloro-cortisone containing 10 mg of steroid; this solution is prepared shortly before use, in distilled ethanol and without heating. The incubation is continued for 48 hours while stirring and maintaining the temperature at 28 ° C. In other tests the incubation period was 72 hours, but the final result obtained is the same.
The contents of the vials are combined, the whole is divided into three portions and each extracted 5 times with portions of 500 cm 3 of methylene dichloride.
The extracts are reunified, washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated to dryness under reduced pressure and at low temperature. The total crude product thus obtained contains 6α-chloro-prednisone.
The crude product is dissolved in 3 cm3 of pyridine and treated with 3 cm3 of acetic anhydride. The mixture is kept for 20 hours at room temperature, poured into water and extracted with methylene dichloride. The extract is washed with acid
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dilute hydrochloric acid, with 5% sodium carbonate solution and with water, dry it over anhydrous sodium sulfate, filter and evaporate to seo. The residue is chromatographed on a column of 15 g of washed alumina.
Elution with a mixture of benzene and ether (80:20) provides 70 mg of the 21-acetate of 6α-chloro-prednisone, mp 212-214 C.
If the crude product of the microbiological dehydrogenation is not acetylated, and if the crude product is purified directly by chromatography on a 15 g silica column, elution from the column with a mixture of ether and chloroform gives 6a-chloroprednisone. ,
By an analogous method, 6a-fluoro-cortisone is converted to 6a-fluoro-prednisone 21-acetate, 6a-chloro-cortisone to 6a-chloro-prednisone 21-acetate, 6a-ohloro-hydrocortisone to 6a-chloro-prednosolone 21-acetate and 6a-fluor-hydrocortisone to 6a-fluoro-prednisolone 21-acetate.
By operating in an analogous manner, but using cultures of Dydymella lycopersici, the starting substances mentioned above can be dehydrogenated to 1,2.
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Example 14 ------------
A mixture of 5 g of the diacetate of the mixture is heated at reflux for 70 hours under a nitrogen atmosphere.
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6a-luoro-d-prégnéne-17a, 21-diol-3,20-dione, 250 th of anhydrous tertiary butanol, 1.5 g of selenium dioxide and 0.5 cm3 of pyridine, then cooled, diluted with ethyl acetate and filter through celite; the product which remains on the filter is washed with hot ethyl acetate and the filtrate is evaporated to dryness under reduced pressure, to which the washing waters have been added. The residue is triturated with water, the precipitate is separated, dried and purified by chromatography on 250 g of washed alumina.
Elution from the column with a mixture of benzene and ether and with ether, and evaporation to dryness of the fractions gives crystalline products which are combined and recrystallized from a mixture of acetone and hexane; we
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thus obtains the diacetate of 6n-fluoro-A '-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione.
A suspension of 2 g of the diacetate is mixed
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6a-fluoro-Al, 4¯pregnad1ene-17a, 2l-diOl-3,20-d1one in 20 cm3 of absolute ethanol with a solution of sodium methoxide in methanol, prepared by dissolving 120 mg of sodium in 5 cm3 of absolute methanol; the addition is carried out while stirring, under a nitrogen atmosphere, at 0 ° C., stirring is continued under a nitrogen atmosphere for 2 hours
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at 0 C, then the mixture is poured into 50 cm3 of water containing 1 cm3 of acetic acid. The precipitate is then filtered off. washing it with water, drying it and recrystallizing it from a mixture of acetone and hexane, which provides 6a-fluoro-
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A1'-Pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione.
A mixture of 1 g of α-fluoro-A1'-prenadine-17a, 21-diol-3,20-dione, 10 cm3 of pyridine and 1 cm3 of acetic anhydride is maintained for 4 hours at room temperature, then pour the mixture into ice water. The precipitate is separated, washed with water, dried and recrystallized from a mixture of acetone and hexane,
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which provides the 21-acetate of 6α-fluoro-A "'-pregna-eniene-17a, 21-aiiol-J, 20 dione
When replacing acetic anhydride with propionic anhydride in the process described above,
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the 21-propionate of 6a-fluoro-A1'-pregnadiene-17a, 21-aiol-3,20-aione is obtained.
Example 15
A mixture of 1.5 g of 16,21-diacetate is heated at reflux for 70 hours under a nitrogen atmosphere.
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6a-ehloro-9a-fluoro-d-pregnne-11,16a, 17a, 21-tetrol-3,20-dione, 75 cm3 of tertiary butanol, 450 mg of selenium dioxide and 0.3 cm3 of pyridine. The reaction mixture is cooled, diluted with ethyl acetate,
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the filter through celite, wash the product which remains on the filter with hot ethyl acetate, combine the filtrate with the washings, evaporate the solvent under reduced pressure and triturate the residue with water .
The solid product is separated by filtration, dried and purified by chromatography on neutral alumina.
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thus obtains the 16,2l-diacstate of 6α-chloro-9a-fluoropregnadi% ene-11P.16a, 17, 21-tetrol-3,20-dîone.
Example 16 ----------- The mixture is heated at reflux for 70 hours, under
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nitrogen atmosphere, a mixture of 1.5 g of 16,21-diacetate of 6a-ahloro-9a-iuoro- -pregn-16a, 17a, 21-triol-3,1,20-trione of 75 cm3 of anhydrous tertiary butanol, 450 cm3 of selenium dioxide and 0.2 cm3 of pyridine. The reaction mixture is cooled, diluted with ethyl acetate, filtered through celite, the solid product which remains on the filter is washed with hot ethyl acetate, the filtrate is combined with the washing water, evaporates the solvent under reduced pressure and triturates the residue with water.
The solid product is separated by filtration, dried and purified by chromatography on neutral alumina, in this way the 16,21-diacetate of 6a-chloro is obtained.
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9a-fluoro-GZ'-prgnadiene-6a, 17a, 21-triol-3,11,20-trione.
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Example 17
A mixture of 5 g of the 21-acetate of the gas is heated under reflux for 70 hours under a nitrogen atmosphere.
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6α-chloro-11-epi-hydrooortisone, 21.5 g of selenium dioxide, 250 cc of tertiary butanol and 0.6 μm of pyridine, the reaction mixture is filtered through celite, the remaining product washed. on the filter with hot tertiary butanol, combines the filtrate and the washing water and concentrates up to approximately 50 cm3, under pressure results.
The residue is cooled, diluted with ethyl acetate, the solution washed several times with water and the washings re-extracted with ethyl acetate. The combined ethyl acetate solutions are evaporated to dryness, the residue is dissolved in 600 tons of acetone, 5 g of decolorizing charcoal is added, and the mixture is refluxed for half an hour. The carbon is removed by filtration and the filtrate is concentrated, cooled to
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that the 21-acetate of 6α-chloro-li-epi-prednisolone separates out in the crystalline state.
Example 18
Is prepared, in an aqueous yeast medium
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(0.1), 30 cultures of Corynebaaterium simplex ATCC 6946, each culture (30 cm3) being placed in flasks
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125cc Erlenmeyer flask; for inoculation, a culture obtained in 24 hours, in an identical medium is used.
The inoculated contents of the Erlenmeyer flasks are incubated at 28 ° C., with shaking for 24 hours.
To each of these cultures is added 1 m 3 of ethanol containing 10 mg of 6a-chloro-ll-epi-hydrocortisone, the ethanolic solution of the steroid is prepared shortly before use, in distilled ethanol and without heating. The incubation was extended for 48 hours by continuously shaking and maintaining the temperature at 28 ° C. In other tests, the incubation time was extended to 72 hours, without changing the final result.
The contents of the vials are then combined and the whole is divided into three portions, each of which is extracted five times with methylene chloride, using 500 cm 3 of this solvent for each extraction. The combined extracts are washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate and the methylene chloride is evaporated to dryness under reduced pressure, at low temperature. The residue contains crude 6α-chloro-11-epi-prednisolone.
To prepare the 21-acetate of 6a-chloro-11-epi-prednisolone, this residue is treated with 1.1 molecular equivalents of acetic anhydride in solution of pyridine at 0 C, overnight, the reaction mixture is poured.
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in water, the precipitate is separated by filtration, washed with water, dried and recrystallized from ethyl acetate. This gives the 21-acetate of 6a-chloro-11-epi-prednisoloen,
The 21-acetate of 6a-chloro-11-epi-hydrocortsion is incubated, exactly as described above, to obtain, with simultaneous saponification of the acetoxy group, the crude 6a-chloro-11-epi-prednisolone identical to the product. obtained by incubation of the free compound.
Example 19
A mixture of 2 g of 6α-chloro-progesterone, 100 cm3 of tertiary butanol, 0.8 g of selenium dioxide and 0.5 cm3 is refluxed for 72 hours under a nitrogen atmosphere. of pyridine, cool, filter through celite, then wash the product which remains on the filter with hot tertiary butanol and combine the filtrate and the washings. The solvent is evaporated off under reduced pressure, the residue dissolved in acetone, the solution decolorized with decolorizing charcoal, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness. By chromatography on neutral alumina, 6a-chloro-¯1,4-pregnadiene-3,20-dione is obtained.
In an analogous manner, 6α-chloro-17a-acetoxy-pr9ogesterone is converted to 6α-17-acetate.
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ehloro-L's -rrégna9iâne -. 'a-o'i - 9 20-dione ..
Similarly, 6α-fluoro-progesterone is also converted to af, uoro-a1'-prégad.zae-3,20-dione, and α -. Uoro-.7a-actov: γ-progestrone to 6a-fluoro-A i, 4¯pregnadiene-17a-ol-3,20-dione 17-acetate.
Example 20
A mixture of 1 g of 6a-chloro-2a-methyl-hydrocortisone 21-acetate, 50 cm3 of anhydrous tertiary butanol, 300 mg of selenium dioxide is refluxed for 70 hours, under a nitrogen atmosphere. and 0.1 cm3 of pyridine, cooled, diluted with ethyl acetate and filtered through celite; the filtrate and the washing water are then combined, and evaporated to dryness under reduced pressure. The residue is triturated with water, the precipitate is separated, dried and purified by chromatography to give the 21-acetate of 6a-chloro-2a-methyl-prednisolone.
In an analogous way, we convert the
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6a-ahloro-2a-methyl-cortisone 21-acetate to 6a-chloro-2a-methyl-prednieone 21 acetate.