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PROCEDE POUR L'OBTENTION D'UNE SUBSTANCE ACTIVE PURE ET NOUVEAUX PRODUITS AINSI OBTENUS.
La présente ibvention est relative à l'obtention d'une substance active sous forme pure, à partir de plantes du genre Rauwolfia, en particulier à partir des racines de ces plantes, de préférence à partir de Rauwolfia serpentina Bentho, ainsi qu'à partir de Rauwolfia vomitoria Afz.ou de Rauwolfia inebrians.
A partir de Rauwolfia serpentina Benth., on a déjà isolé divers alcaloïdes, tels que l'ajmaline, l'ajmalinine, l'ajmalicine, la serpentine, la serpentinine l'isoajmaline, la néoajmaline et la rauwolfinineo
Il est en outre connu que l'on peut obtenir, à partir de plantes du genre Rauwolfia, en particulier à partir de racines de Rauwolfia serpentina Benth., des produits possédant un effet sédatif et hypotensif , qui peuvent être utilisés comme médicaments. Lorsqu'on sépare les alcalol- des de plantes du genre Rauwolfia, on obtient également des résines neutres que l'on appelle oléorésines, ayant une action sédative. Une substance active pure présentant ces propriétés n'a cependant pas pu être isolée jusqu'à présent.
La présente invention concerne un procédé permettant d'obtenir une substance active sous forme pure, exerçant un effet sédatif et hyonotique et abaissant la pression sanguine, caractérisé par le fait qu'à partir d'extraits de plantes du genre Rauwolfia qui exercent une action sédative et qu'on peut obtenir en utilisant des solvants faiblement ou non polaires miscibles à l'eau en partie seulement, l'on isole l'alcaloïde fondant à environ 263 (avec décomposition) et dont le pouvoir rotatoire spécifique [a]23D est de - 1180 (dans le chloroforme absolu). Cet alcaloïde peut être recristallisé dans l'acétone, dans un mélange de chloroforme et d'éther ou, de préférence, dans le méthanol .
Il est insoluble dans l'eau
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et dans l'éther de pétrole, moyennement soluble dans le benzène et dans l'éther ainsi que dans l'alcool et l'acétobe froids, et facilement soluble, par exemple, dans le chloroforme, l'acétate d'éthyle, l'acide acétique à 10% et l'acide phosphorique.
L'analyse élémentaire fournit les valeurs suivantes : C- 65,07; 65,04; H = 6,62; 6,65; N = 4,64, 4,49% Son spectre d'absorption dans 1-'ultra-violet (dans l'éthanol) possède un maximum aplati à 215 mu (log ¼ environ 4,8), un maximum bien marqué à 269 mu (log . = 4,2 environ) et un épaulement s'y raccordant k 295 mu (logé, = 4,0 environ). Ce spectre présente un minimum à 246 mu (log . = 4,0 environ).
La partie des faibles longueurs d'ondes du spectre infra-roue se caractérise par les fortes bandes suivantes 2.92 ' 5,76 ; 5,83 ; 6,13 ; 6,28 ; 6,67 (dans le nujol) Sur la base des essais qui ont été faits, le composé examiné répond à la formule C33H40O9N2
Ce nouvel alcaloïde est une base faible qui forme des sels, par exemple un chlorhydrate difficilement soluble dans l'eau, d'un point de fusion approximatif de 2210 (avec décomposition), un nitrate d'un point de fusion approximatif de 2350 (avec décomposition) et un picrate d'un point de fusion approximatif de 186 . Il se dissout dans un excès d'acide acétique dilué avec formation de l'acétate.
L'alcaloïde ainsi caractérisé sera désigné dans ce qui va suivre par l'expression "réserpine". Il sera introduit dans le commerce sous la marque déposée "Serpasil". Ce produit peut être utilisé tel quel comme médicament ou peut être employé comme produit intermédiaire pour la préparation d'autres produits précieux.
Son efficacité pharmacologique est complexe. Il est essentiellement caractérisé par une action sédative et hypnotique forte et durable et provoque également un abaissement de la pression sanguine. De faibles doses suffisent pour plonger pour plusieurs heures les animaux dans un sommeil paisible, duquel ils peuvent être momentanément retirés. La réserpine stimule en outre les mouvements péristaltiques.
L'effet sédatif hypnotique et abaissant la pression sanguine font défaut aux alcaloïdes des plantes du genre Rauwolfia connus et isolés jusqu'à présent, par exemple à l'ajmaline, à la serpentine et à la serpen- tinine.
Par rapport aux préparations non unitaires utilisées jusqu'à présent, obtenues à partir de plantes du genre Rauwolfia, l'invention présente le grand avantage qu'avec la réserpine on peut indiquer la dose exactement nécessaire pour exercer une action déterminée. De plus, les préparations obtenues à partir du nouvel alcaloïde possèdent une action unitaire, tandis qu'il est connu, par exemple, que les plantes du genre Rauwolfia renferment aussi des substances ayant pour effet d'augmenter la pression sanguine.
Pour isoler la réserpine, on peut procéder de diverses manières, Il est avantageux de séparer les composants de l'extrait à utiliser conformément à l'invention au moyen d'un agent d'adsorption, de préférence par chromatographie sur un agent d'adsorption de force moyenne, par exemple sur un oxyde d'aluminium modérément actif, sur de l'acide silicique, sur un produit dénommé "Hyflo" (terre de diatomées), ou sur un autre silicate. La réserpine est éluée à l'aide de benzène, de mélanges d'éther de pétrole et de benzène ou de mélanges de benzène et d'acétone.
Elle cristallise spontanément en présence de peu d'acétone ou de méthanol et peut, par exem- ple, être davantage purifiée par recristallisation dans l'acétone chaude, dans l'éthanol, dans un mélange de chloroforme et d'éther ou,de préférence, dans le méthanol. Il est cependant également possible d'obtenir la réserpine sous forme pure en faisant cristalliser les extraits indiqués directement dans des solvants comme les alcools ou les cétones.. par exemple dans l'éthanol ou l'acétone, en premier lieu dans le méthanol.
Conformément à l'invention, on part en particulier d'extraits qui ont été obtenus à partir de racines de Rauwolfia serpentina Benth.,
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ainsi que de Rauwolfia vomitoria Afz ou de Rauwolfia inebrians. Comme sol- vants faiblement ou non polaires qui ne sont qu'en partie miscibles à l'eau, on utilise pour leur obtention de préférence des hydrocarbures halogènes, comme le chloroforme, le chlorure d'éthylène, le chlorure de méthylène ou le trichloréthylène, le benzène ou l'acétate d'éthyle, ainsi que leurs mélan- ges. On obtient des extraits précieux en opérant suivant les modes opéra- toires particuliers, décrits ci-après.
L'un de ces modes opératoires est caractérisé par le fait que l'on traite avec un mélange d'un solvant polaire et d'un solvant faiblement ou non polaire qui n'est que partiellement miscible à l'eau, au besoin en ajoutant de l'eau, des matériaux provenant de plantes du genre Rauwolfia ou un extrait obtenu à partir de ces plantes ayant une action sédative, de préférence une fraction résineuse (oléorésine) traitée de manière connue avec un solvant des lipoïdes comme l'éther, de pétrole, et avec un alcool.
On peut également ajouter à l'eau des bases, des acides ou des sels, comme l'ammoniaque, des acides inorganiques ou orgaiques comme l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique ou l'acide acétique, le carbo- nate de sodium, le bicarbonate de sodium, le biphosphate de potassium ou le bisulfate de potassiumo Des solvants polaires sont, par exemple, des alcools comme le méthanol, l'éthanol ou des alcools aliphatiqes supérieurs.
De préférence, on procède en extrayant avec le mélange indiqué, puis en séparant la solution obtenue en deux phases, par addition d'eau. Il est cependant également possible de répartir la substance de départ entre d'une part un mélange d'eau et d'un solvant polaire et d'autre part un solvant faiblement ou non polaire qui n'est miscible qu'en partie avec le mélange employé. De préférence, cette répartition a lieu en plusieurs stades de séparation, au moins en six stades de séparation. Des fractions obtenues avec des solvants faiblement ou non polaires on peut évaporer le solvant, et traiter directement le résidu conformément au procédé pour'obtenir de la réserpine ou le soumettre de nouveau aux opérations ci-dessus.
Pour ce mode opératoire, comme pour ceux qui seront indiqués ci-après, on utilise par exemple des matériaux finement broyés provenant de plantes du genre Rauwolfia, en particulier de racines de Rauwolfia serpentina Benth., ainsi que de Rauwolfia vomitoria Afz ou de Rauwolfia inebrians,ou de l'un de leurs extraits alcooliques bruts évaporés à sec, par exemple d'extraits méthanoliques, ayant été avantageusemert malaxés avec del l'eau qui est ensuite éliminée ou bien encore on utilise un extrait qui n'est que partiellement évaporé, mélangé le cas échéant avec un solvant des lipoïdes, comme 1-'éther, l'éther de pétrole ou l'hexane. Les fractions dites résineuses ("oléorésines")
peuvent être obtenues par exemple de la façon suivante
On évapore à sec un extrait alcoolique brut de matériaux finement broyés de plantes du genre Rauwolfia, puis on malaxe avatageuseement le résidu avec de l'eau; le produit insoluble ainsi obtenu est ensuite traité avec de l'acide chlorhydrique binormal, séché, puis extrait en continu avec un solvant des lipoïdes comme l'éther de pétrole;
le produit brun qui reste est traité avec de l'éthanol à 95%, et la solution brune obtenue par essorage est évaporée à seco
Un autre mode opératoire particulier pour l'obtention d'un extrait à utiliser conformément à l'invention consiste à traiter des maté- riaux de plantes du genre Rauwolfia, ou un extrait à action sédative obtenu à partir de ceux-ci, avec un agent acide aqueux, ce qui donne lieu à la formation d'une solution ayant une action sédative, puis à extraire cette dernière avec un solvant faiblement ou non polaire, qui n'est que partiellement miscible à l'eau.
Suivant ce mode opératoire, on extrait donc la matière de départ avec un agent acide aqueux, en patticulier avec la solution aqueuse d'un acide gras inférieur tel que l'acide formique, l'acide acétique, l'acide propionique, ou un acide phosphorique ou la solution aqueuse d'un sel acide d'un acide polybasique. La solution acide ainsi obtenue ayant une
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action sédative peut, en vue du traitement ultérieur, soit être concentrée à un petit volume ou être diluée à l'eau, ou bien être conservée telle quelle.
Cet extrait est ensuite soumis à plusieurs reprises à une extraction avec un solvant faiblement ou non polaire qui n'est qu'en partie miscible à l'eau, de préférence avec un hydrocarbure halogéné, comme le chloroforme, le chlorure d'éthylène, le chlorure de méthylène ou le trichloréthylène, ou d'autre part avec du benzène ou de l'acétate d'éthyleo L'extrait ainsi obtenu à l'aide du solvant faiblement ou non polaire peut être lavé jusqu'à neutralité et être évaporé à sec. A partir du résidu, on peut alors, conformément au procédé, isoler la réserpine.
Pour la préparation d'un bon extrait, on peut également, à n'importe quel stade du mode opératoire par lequel il a été obtenu, par exemple suivant les modes opératoires décrits ci-dessus, mélanger un extrait débarrassé du solvant, par exemple un extrait obtenu avec du méthanol à partir de racines, avec une substance de supports par exemple avec les produits connus dans le commerce sous le nom de "Hyflo" ou de "Clarcel DIC" (terre de diatomées) ou avec un autre silicate, ou en adsorbant la réserpine sur une substance de support, à partir d'une solution, par exemple à partir d'un extrait acide obtenu suivant le mode opératoire indiqué ci-dessus, par exemple à partir d'un extrait acétique, de préférence après la formation de ses sels difficilement solubles, par exemple après formation du chlorhydrate ou de l'azotate de réserpine,
puis en exécutant les stades du procédé qui restent encore à effectuer. La substance active peut être ainsi extraite de la substance de support, par exemple avec l'un des agents acides aqueux mentionnés ou alors à l'aide d'un mélange d'un solvant polaire et d'un solvant faiblement ou non polaire.
Suivant le mode opératoire employé, on obtient la réserpine spas forme de base ou sous forme de ses sels. A partir de la base on peut former des sels thérapeutiquement utilisables, comme ceux des hydracides halogénés, des acides sulfurique, azotique, perchlorique, phosphoriques, formique, acétique, propionique, lactique, oxalique, succinique, malique, tartrique, citrique, ascorbique, méthane=sulfonique, éthanesulfonique, hydroxy-éthane-sulfonique, benzoique salicylique, para-amino-salicylique ou toluène-sulfonique, en faisant réagir la réserpine avec de tels acides, en présence ou en l'absence d'agents de dilution. Ces sels peuvent aussi être obtenus par double décomposition.
C'est ainsi, par exemple, qu'à partir d'une solution d'acétate de réserpine, ses sels plus difficilement solubles, par exemple ceux des hydracides halogènes,, précipitent lorsqu'on ajoute les acides correspondants.
L'invention concerne également, à titre de produits industriels nouveaux, les composés obtenus par la mise en oeuvre du procédé ci-dessus défini. Ils peuvent aussi être utilisés comme produits intermédiaires.
L'invention sera décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent. Entre chaque partie en poids et chaque partie en volume il y a le même rapport que celui existant entre le gramme et le centimètre cube. Les températures sont indiquées en degrés centigrades,*
Exemple 1.
On soumet 200 parties en poids "d'oléorésine" préalablement purifiée à une répartition suivant le principe du contre-courant, entre un mélange de 50% de méthanol et 50% d'eau comme phase supériere en équilibre avec du chloroforme comme phase inférieure. On a trouvé qu'il se pro- diaisait une séparation suffisante pour des buts pratiques en répartissant 200 parties en poids de l'oléorésine, dans 6 entonnoirs à séparation, entre chaque fois 2000. parties en volume de la phase supérieure et 2000 parties en volume de la phase inférieure. Les 12 phases (pH.) résultant de la répartition dans les 6 entonnoirs à séparation (e.s.
I à VI) peuvent être rassemblées en 6 fractions présentant les propriétés données au tableau ci-dessous
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EMI5.1
<tb>
<tb> Poids <SEP> en <SEP> Action
<tb> Fractions <SEP> moyenne <SEP> en <SEP> Couleur <SEP> sédative
<tb> parties
<tb> en <SEP> poids
<tb> 1 <SEP> (phosupérieure, <SEP> 75 <SEP> à <SEP> 80 <SEP> brun-noir <SEP> très <SEP> faible
<tb> e:s. <SEP> I)
<tb> 2 <SEP> (phosupérieure <SEP> 45 <SEP> à <SEP> 50 <SEP> brun <SEP> faible
<tb> e.s. <SEP> II <SEP> et <SEP> III)
<tb> 3 <SEP> (ph.inférieure;
,
<tb> e.s.I,II <SEP> et <SEP> III) <SEP> 10 <SEP> brun-clair <SEP> faible
<tb> 4 <SEP> (phosupérieure <SEP> et
<tb> inférieure, <SEP> e.s.IV) <SEP> 15 <SEP> à <SEP> 20 <SEP> brun-clair <SEP> faible
<tb> 5 <SEP> (phosupérieure
<tb> e.s. <SEP> V <SEP> et <SEP> VI) <SEP> 15 <SEP> brun-clair <SEP> faible
<tb> 6 <SEP> (ph.inférieure,
<tb> e.s. <SEP> V <SEP> et <SEP> VI <SEP> ) <SEP> 35 <SEP> à <SEP> 40 <SEP> brun-vert <SEP> forte
<tb> 200 <SEP> parties
<tb> en <SEP> poids.
<tb>
La fraction 6 trouvée active est purifiée davantage par chromatographie sur de l'oxyde d'aluminium. On utilise avantageusement, à cet effet, de l'oxyde neutre d'aluminium d'un degré d'activité de II - III (selon Brockmann). On dissout 34 parties en poids de la fraction 6 dans 400 parties en volume de benzène, ajoute 100 parties en volume d'éther de pétrole, ce qui fait qu'une partie de la substance flocule, et fait passer le tout sur une colonne de 800 parties en poids d'oxyde d'aluminium.
On élue ensuite avec un mélange d'éther de pétrole et de benzène dans un rapport volumétrique de l:4, le cas échéant sous pression, ce qui produit tout d'abord l'élution d'une huile jaune-clair inactive, puis celle de 0,6 parties en poids d'une fraction cristalline inactive d'un point de fusion de 238 à 239 , et finalement celle d'une substance présentant une action sédative, accompagnée d'un colorant rouge;, On remplace alors le premier mélange de solvants successivement par du benzène et par un mélange de benzène et d'acétone dans le rapport volumétrique de 2:1; ce qui fait que le dernier reste de la matière active est éliminé de la colonne. Les fractions d'éluats sont, après concentration, additionnées d'un peu d'acétone et donnent en général au bout de peu de temps un produit cristallin.
Par essorage et lavage avec un mélange de parties égales en volume d'acétone et d'éther, et avec de l'acétone, on peut facilement isoler la substance cristallisée. On obtient de 4,5 à 5 parties en poids d'un cristallisât brut d'un point de fusion d'environ 250 . La purification qui suit consiste à recristalliser le produit dans de l'acétone chaude ou dans un mélange de chloroforme et d'éther; on obtient ainsi une réserpine presque incolore, d'un point de fusion de 262 à 2630 (avec décomposition); [[alpha]]23D = -118 (dans le chloroforme ).
L'obtention de la réserpine cristallisée à partir de la fraction 6 peut aussi avoir lieu par une nouvelle répartition à contre-courant.
On peut ainsi répartir à contre-courant par exemple 29,7 parties en poids du résidu obtenu à partir de la fraction 6, dans huit entonnoirs à séparation, entre chaque fois 500 parties en volume d'un mélange de 60% de benzène et de 40% d'hexane comme phase supérieure, en équilibre avec chaque fois 500 parties en volume d'un mélange de 80% d'éthanol et de 20% d'eau comme phase inférieure. A partir de la fraction obtenue par réunion des phases supérieures des entonnoirs à séparation No. 2,3 et 4. on peut isoler la réserpine cristallisée, en opérant d'une manière analogue à celle donnée ci-dessus.
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On obtient la matière de départ de la façon suivante
Avec 20000 parties en volume environ de méthanol ou d'éthanol, on percole 4000 parties en poids d'écorce de racines finement broyée de Rauwolfia serpentina Benth. Jusqu'à ce que le réactif de Mayer pour les alcaloïdes ne fournisse plus qu'une indication faiblement positive. L'extrait méthanolique est alors évaporé à sec sous vide et le résidu pesant de 500 à 600 parties en poids est malaxé à plusieurs reprises avec de l'eau, pour éliminer les fractions solubles dans l'eau.
Le résidu insoluble est ensuite malaxé à plusieurs reprises avec de l'acide chlorhydrique dilué pour éliminer les fractions basiques résiduelles, puis lavé à l'eau et séchéo La fraction insoluble qui reste, dénommée "oléorésine", est ensuite, en vue d'une purification préalable, extraite avec de l'éther de pétrole Jusqu'à épuisement puis la poudre brune qui reste est agitée pendant plusieurs heures avec 2000 parties en volume environ d'éthanol à 95% 80 à 90% de la matière passent en solution. Après essorage, la solution brunfoncé est évaporée à sec et l'on obtient environ 200 parties d'oléorésine préalablement purifiée.
Exemple 20
On extrait à trois'reprises 1000 parties en poids de racines broyées de Rauwolfia serpentina Benth. avec 3000 parties en volume d'un mélange de 2100 parties en volume de chloroforme et de 900 parties en volume de méthanol, en agitant (et à la. troisième reprise en chauffant à 60 ), et sépare chaque fois la solution d'extraction de la poudre de racines par essorage et lavage du résidu avec 500 parties en volume du mélange indiqué ci-dessus.
Les solutions d'extraction sont ensuite traitées séparément ou en combinaison. On ajoute, à cet effet, à 1000 parties en volume de solution d'extraction, 600 parties en volume d'eau et une quantité suffisante d'une solution saturée de bicarbonate de sodium pour que le pH soit de 8,5 à 9, puis agite le tout soigneusement. On sépare les deux phases dans l'entonnoir à séparation. Les phases inférieures réunies (chloroforme) sont lavées avec 300 à 400 parties en volume d'une solution à 2 - 3% de chlorure de sodium. Les phases supérieures réunies (eau/méthanol) sont encore extraites avec 200 parties en volume de chloroforme, cette seconde solution chloroformique d'extraction étant traitée par la solution à 2 - 3% de chlorure de sodium mentionnée ci-dessus.
Les solutions chloroformiques d'extraction réunies sont séchées sur du sulfate de sodium et évaporées sous vide à sec.
On dissout à chaud, dans 100 parties en volume de méthanol sec, le produit obtenu par extraction au chloroforme, pesant de 25 à 30 parties en poids, laisse reposer quelque temps, essore le produit cristallin qui s'est séparé et lave avec un peu de méthanol le gâteau cristallin.
Les filtrats méthanoliques réunis sont concentrés à un volume de 50 à 60 parties. S'il s'est séparé un peu d'un produit visqueux, on le remet en solution en chauffant légèrement, puis on laisse reposer plusieurs jours en vue de la cristallisation.
On essore ensuite le cristallisât et le lave avec du méthanol.
En vue de sa purification, on extrait à plusieurs reprises le cristallisât avec chaque fois 10 à 20 parties en volume d'acide acétique binormal. Après avoir refroidi avec de la glace à environ 5 les solutions d'extraction réunies, claires, on précipite le chlorhydrate, en ajoutant un dixième du volume d'acide chlorhydrique concentré que l'on introduit lentement dans la solution, en agitant vigoureusement. On continue à agiter pendant 30 à 40 minutes environ, essore, lave avec de l'eau et élimine le liquide aussi complètement que possible, en faisant passer de l'air.
On met le résidu en suspension dans 15 parties en volume d'acétone, essore, lave avec peu d'acétone puis avec de l'éther et sèche en faisant passer de l'air; on obtient le chlorhydrate de la réserpine presque incolore sous une forme très fine.
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Pour libérer la base, on dissout le chlorhydrate dans la quantité minimum d'un mélange de 7 parties- en volume de chloroforme et de 3 parties en volu- me de méthanol. A la solution, on ajoute 6 parties en volume d'eau et une solution de bicarbonate jusqu'à ce que le pH soit de 9 environ, agite, sé- pare les phases, lave ensuite de la manière décrite ci-dessus, sèche et évapore. Le résidu amorphe d'évaporation est dissout par chauffage dans une quantiré égale à double de méthanol, la réserpine cristallisant alors presque instantanémento Après avoir laissé reposer pendant plusieurs heures, on sépare la base pure par essorage.
EXEMPLE 3.
Avec environ 35000 parties en volume de méthanol, on percole
7000 parties en poids de poudre d'écorce de racines de Rauwolfia serpentina
Bentho Après évaporation de l'extrait méthanolique, on obtient environ 1050 parties en poids d'un produit pulvérulent foncé que l'on traite à plusieurs reprises avec de l'eau pour éliminer les fractions solubles. Le résidu insoluble est malaxé à cinq reprises avec chaque fois 1500 parties en volu- me d'une solution aqueuse à 10% d'acide acétàque, la solution étant séparée du résidu visqueux avantageusement par centrifugation. La solution acéti- que brune qui, pour son traitement ultérieur, peut être réduite à basse température à un volume plus petit ou bien être diluée avec la moitié de son volume d'eau, possède un pH d'environ, 3,9.
Cette solution est agitée avec 3500 à 4000 parties en volume de chloroforme, divisées en 3 à 4 portionso Les extraits chloroformiques sont lavés une fois avec une solution de carbonate de potassium et deux fois avec de l'eau, séchés sur du sulfate de sodium et évaporés à sec sous vide. Le résidu pesant de 70 à 80 parties en poids est une poudre colorée en brun verto Pour purifier se produit davantage il est dissous dans du benzène et la solution est daromatographiée sur 1000 à 1200 parties en poids d'oxyde neutre d'aluminium (activité IIIII selon Brockmann). Lors de l'élution avec du benzène, on obtient tout d'abord une petite quantité d'une huile jaune et 0,9 partie en poids d'un produit cristallin inactif, d'un point de fusion de 238 à 239 ; la substance ayant une action sédative est séparée ensuite.
Après avoir élue la quantité principale de la substance active, on continue d'éluer avec un mélange de 2 parties en volume de benzène et de 1 partie en volume d'acétone. De cette manière on obtient encore le reste du principe sédatif, puis un autre cristallisât inactif, d'un point de fusion de 141 à 143 . Les fractions d'éluat renfermant la substance à action sédative sont évaporées à sec.
En faisant recristalliser le résidu dans de l'acétone chaude ou dans unmmélange de chloroforme et d'éther, on obtient 6,5 à 7 parties en poids de réserpine sous la forme de cristaux presque incolores, d'un point de fusion de 262 à 2630 (avec décomposition); [a] 23=- 1180 (chloroforme)
Dans l'exemple ci-dessus, l'acide acétique à 10% peut être remplacé par exemple par de l'acide phosphorique à 2%.
EXEMPLE 4.
On percole avec du méthanol, comme il a été décrit à l'exemple 1, 7000 parties en poids de poudre d'écorce de racines de Rauwolfia serpentina Benth, évapore la solution à sec et malaxe le résidu avec de l'eauo Le produit qui reste alors est malaxé à trois reprises avec chaque fois 1100 parties en volume d'une solution aqueuse à 15% d'acide acétique, puis on sépare la solution du produit visqueux insoluble, par centrifugation ou filtration. Les extraits acétiques réunis sont ensuite dilués avec la moitié de leur volume d'eau et agités avec 3000 à 3500 parties en volume de chloroforme divisées en 3 à 4 fractionso Les extraits chloroformiques sont ensuite traités comme indiqué à l'exemple 1. On obtient ainsi environ 7à 7,5 parties en poids de réserpine cristallisée.
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EXEMPLE 5.
Dans 12000 parties en volume d'acide acétique à 15%, on met en suspension 2000 parties en poids de poudre d'écorce de racines de Rauwolfia serpentina Benth et agite intensément pendant 15 heures. On sépare ensuite la solution acide d'extraction du résidu,, avantageusement au moyen d'une centrifuge appropriée. On obtient de cette façon environ, 8000 parties en volume d'une solution brun-foncé (extrait A). On répète encore deux fois l'extraction de la même manière, en utilisant chaque fois 9000 parties en volume d'une solution aqueuse à 15% d'acide acétique, ce qui donne chaque fois 8000 à 9000 parties en volume de solution d'extrait (extrait B et C).
Chacune des trois solutions d'extrait de 8000 parties en volume environ est diluée avec 4000 parties d'eau et avantageusement agitée séparément avec environ 8000 parties en volume de chloroforme, divisées en 3 à 4 fractions. La quantité de chloroforme utilisée pour l'extraction peut être notablement diminuée si par exemple le second extrait chloroformique de l'extrait A est encore utilisé pour la première extraction de l'extrait B, ou bien si le troisième extrait chloroformique de l'extrait A est utilisé pour la seconde extraction de l'extrait B et ensuite pour la première extraction de l'extrait C. Les extraits chlorofôrmiques sont lavés avec du carbonate de potassium ou avec une solution de carbonate de sodium et avec de l'eau, séchés sur du sulfate de sodium et évaporés à sec sous vide.
Le résidu pesant de 45 à 50 parties en poids est, en vue d'une nouvelle purification et comme décrit à l'exemple 1, chromatographié sur 700 à 800 parties en poids d'oxyde d'aluminium. On obtient ainsi environ 2,5 parties en poids de réserpine cristallisée.
EXEMPLE 6.
On humecte avec 1000 parties en volumede méthanol 1000 parties en poids de racines broyées de :Rauwolfia serpentina Benth et on procède à trois ou quatre reprises à leur extraction avec chaque fois 2000 parties en volume de méthanol, en agitant pendant 10 à 16 heures,, et en essorant chaque fois. A partir de la seconde extraction, on chauffe avantageusement à une température d'environ 65 .
On mélange 100 parties en poids de l'extrait méthanolique éva- poré avec 70 parties en poids d" "Hyflo" Super Cel et humidifie avec 100 parties en volume d'acide acétique à 15%. On extrait ensuite le mélange, à trois ou quatre reprises;, avec chaque fois 150 parties en volume d'acide acétique à 15%, en triturant, en essorant et en lavant le résidl avec 100 parties en volume diacide acétique à 15%. Les extraits acétiques réunis sont extraits avec au total 750 parties en volume de chlorofome, la solution d'extraction est lavée à l'eau, séchée sur du sulfate de sodium et évaporée à sec sous vide; on obtient ainsi 20 parties en poids de résidu. Le résidu chloroformique ci-dessus est dissous à 30 à 40 dans 200 parties en volume de benzène, et le résidu insoluble est séparé par filtration.
Le filtrat est directement chromatographié comme on l'a indiqué dans les exemples 1 et 3, ou il est évaporé à sec sous vide et le résidu (5,2 parties en poids) est cristallisé dans une quantité égale à double de méthanol, en laissant reposer la solution chaude assez longtemps, pour que la cristallisation se produise complètement. On obtient ainsi la réserpine sous forme pure.
EXEMPLE 7.
On extrait, en remuant, 100 parties en poids de l'extrait méthanolique sec décrit à l'exemple 6 avec un mélange de 210 parties en volume de chloroforme et de 90 parties en volume de méthanol. On extrait ensuite une seconde fois en triturant avec la moitié du volume du mélange indiqué ci-=dessus. Les solutions d'extraction réunies sont agitées avec 270 parties en volume d'eau et une quantité suffisante d'une solution saturée de bicarbonate de sodium pour que le pH soit de 8,5 à 9; le mélange se sépare en deux phases. Si l'on continue à procéder de la manière décrite à l'exem-
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ple 2, on obtient à partir de la solution chloroformique 28 parties en poids d'extrait sec. 'On fait cristalliser ce dernier dans le méthanol et obtient ainsi la réserpine sous forme pure.
EXEMPLE 80
On extrait de la manière indiquée à l'exemple 5, 1000 parties en poids de racines broyées de Rauwolfia serpentina Benth. avec 10000 par- ties en volume d'acide acétique à 15%. A 8500 parties en volume de la solution acétique d'extraction, on ajoute en agitant bien, tout d'abord 60 parties en poids d' "Hyflo" Super Cel et ensuite successivement 70 parties en poids de nitrate de sodium et 700 parties en poids de chocrure de sodium.
On éteint 160 parties en poids de chaux vive et ajoute la chaux éteinte par petites portions à la solution. Finalement on continue d'agiter pendant une heure, puis on essore le mélange à travers un tissu à filtrer. Le gâ- teau de filtration essoré est lavé avec 200 à 300 parties en volume d'une solution saturée de chlorure de sodium et avec 100 parties en volume d'eau, puis séché sous vide sur du pentoxyde de phosphore.
On extrait, en remuant, 160 parties en poids du résidu sec avec un mélange de 350 parties en volume de chloroforme et de 150 parties en volume de méthanol, essore et lave le résidu avec 400 parties en volume du même mélange. Le résidu est ensuite extrait une seconde fois avec 400 parties en volume du mélange et lavé avec 100 parties en volume de ce mélan- geo A chaque portion de 500 parties en volume de la solution d'extraction, on ajoute chaque fois 300 parties en volume d'eau et une quantité suffisante d'une solution saturée de bicarbonate de sodium pour que le pH soit de 8, 5 à 9, agite et sépare les deux phases. Les phases inférieures réunies (chloroforme) sont encore lavées avec 200 parties en volume d'une solution à 2-3% de chlorure de sodium.
Les phases supérieures réunies (eau/méthanol) sont ensuite extraites avec 100 parties en volume de chlorofame, cette se- conde phase chloroformique étant ensuite également traitée par la solution précitée à 2-3% de chlorure de sodium. Les extraits chlorofarmiques réunis sont sèches sur du sulfate de sodium et évaporés à sec sous vide. On fait cristalliser le résidu dans le méthanolde la manière décrite à l'exemple 2 ou 60 La réserpine brute peut être transformée en base pure en passant par le chlorhydrate.
EXEMPLE 9.
On percole 20000 parties en poids d'écorce broyée de racines de Rauwolfia inebrians avec 1000000 parties en volume de méthanol. Après évaporation de l'agent d'extraction, on obtient une poudre brune que l'on malaxe à plusieurs reprises avec de l'eau pour éliminer les fractions solubles dans l'eau. On malaxe ensuite le résidu insoluble avec de l'acide chlorhydrique dilué, pour éliminer les fractions basiques, lave à l'eau et sèche. La fraction insoluble qui reste, finement broyée, est tout d'abord purifiée par extraction avec de l'éther de pétrole jusqdà épuisement, puis on agite la poudre brune qui reste pendant plusieurs heures avec environ 3000 parties en volume d'alcool à 95%. Dans cette opération, 80 à 90% de la matière passent en solution.
Après essorage, la solution brun-foncé est évaporée à sec et l'on obtient 710 parties en poids d'un extrait préalablement purifié. Cet extrait est soumis à une réparation entre un mélange de 50% de méthanol et de 50% d'eau comme phase supérieure, en équilibre avec du chlorforme comme phase inférieure. On obtient une séparation satisfaisant à des buts pratiques lorsqu'on répartit 200 parties en poids de l'extrait en 6 entonnoirs à séparation, entre chaque fois 2000 parties en volume de la phase supérieure et 2000 parties en volume de la phase inférieure. Les phases obtenues de cette manière sont, conformément au schéma indiqué à l'exemple 1, rassemblées en 6 fractions.
La fraction 6 trouvée active est encore purifiée par chromatographie sur de l'oxyde d'aluminiumo A cet effet, on en dissout 91 parties en poids dans du benzène et chromatographie la solution sur une colonne de 1500 parties en poids d'oxyde d'aluminiumo On élue alors avec du benzène et des
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mélanges de benzène et d'acétone, évapore les éluats et cristallise les réaidus dans de 19 acétone La base ainsi obtenue est identique à la résêr- pine isolée à partir'de Rauwolfia serpentina Benth. Les chiffres d'analy- se par combustion sont les suivants :
C = 65,00 H = 6,82 N = 4,63%
EXEMPLE 10
On percole avec 70000 parties en volume de méthanol 9500 parties en poids de racines broyées de Rauwolfia vomitoria Afz.
Ares distillation de l'agent d'extraction, on obtient 800 parties en poids d'une poudre brune, que l'on mélange intimement avec 600 parties en poids d'"Hyflo" (Super Cel) et que l'on extrait à plusieurs reprises à l'eau pour éliminer les fractions solubles dans l'eauo Le résidu insoluble est alors humidifié avec 1000 parties en volume d'acide acétique à. 15% et extrait à trois reprises avec chaque fois 1500 parties en volume diacide acétique à 15%.
Dans cette opération, on essore chaque fois et lave ensuite le résidu avec 500 parties en volume d'acide acétique à 15% On réunit les solutions acétiques puis on traite le tout une fois avec 2500 parties en volume de chlorure d'éthylène et à deux autres reprises avec chaque fois 1500 parties en volume de chlorure d'éthylène)) puis on lave les solutions d'extaction réunies avec une solution de carbonate de potassium et deux fois avec de l'eauo On sèche ensuite sur du sulfate de sodium et évapore à sec sous vide; le résidu ainsi obtenu est de 45 parties en poids.
A partir de ce dernier,, en opérant comme on l'a indiqué à l'exemple 4, on obtient, par chromatographie sur de l'oxyde d'aluminium et par cristallisation dans le méthanol, une base qui s'avère identique à la réserpine obtenue à partir de Rauwolfia serpentina Benth. Les valeurs de l'analyse par combustion sont les suivantes C = 65,24 ; H = 6,55; N=4,66%.
EXEMPLE 11.
On extrait 1000 parties en poids de racines broyées de Rauwolfia serpentina Benth, comme on l'a décrit à l'exemple 1,avec 7000 parties en volume d9éthanol à 95%, traite avec de l'eau et de l'acide chlorhydrique dilué, sèche, extrait dans un appareil Soxhlet avec de l'éther de pétrole et reprend finalement dans 400 à 500 parties en volume d'éthanol chaud à 95% A la fraction soluble dans l'alcool, on ajoute 5 partie en .-'poids de sciure de bois, concentre le mélange sous vide et finalement le sèche sous un vide poussé pendant assez longtemps.
Dans un appareil de Saxhlet, on extrait pendant 8 heures, avec de l'éther, 12 parties en poids du produit sec obtenu-ci-dessus (jusqu'à ce que la solution soit incolore). On évapore la solution d'extraction ce quifournit 0,5 Dartie en poids d'un résidu qui cristallise dans 33 méthanol et présente un point de fusion de 81 à 83 , c'est-à-dire n'est pas identi- que à la réserpine. Le résidu de ce qui reste après cette première extraction est ensuite extrait au chloroforme pendant 38 heures, dans le même appareil (jusqu'à ce que la solution soit incolore), le solvant étant renouvelé deux fois. Après évaporation de la solution d'extraction, on obtient un résidu de 3,3 parties en poids.
Ce résidu est chromatographié, comme décrit dans l'exemple 3, sur de l'oxyde d'aluminium. A partir des éluats (mélanges de benzène et d'acétone), on obtient alors une faible quantité de réserpine. Le résidu d'extraction est ensuite extrait, de la même manière, pendant 38 heures, avec de l'acétate d'éthyle, le solvant étant renouvelé deux foiso Après évaporation de la solution d'extraction, on obtient un résidu de 1,2 partie en poids. Ce résidu est chromatographie, d'une manière analogue, sur de l'oxyde d'aluminium, de sorte qu'à partir des éluats on isole de la réserpine.
EXEMPLE 12.
Avec 8500 parties en volume de méthanol, on percole 1750 par-
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ties en poids d'écorce de racines de Rauwolfia serpentina Benth. Après é- vaporation de la solution d'extraction, on obtient 264 parties en poids d'une résine brun-foncé que 1'on malaxe à plusieurs reprises avec de l'eau pour éliminer la fraction soluble. Le résidu ainsi obtenu est alors-- malaxé à cinq reprises avec chaque fois 350 parties en volume d'acide phosphori- que demi=normal et les extraits acides réunis sont extraits 4 fois avec chaque fois 400 parties en volume de chloroforme. La solution chloroformi- que est lavée avec une solution de carbonate de potassium et avec de l'eau, séchée sur du sulfate de sodium et évaporée sous vide jusqu'à dessication.
Le résidu de 8 parties en poids est chromatographié sur 100 parties en poids d'oxyde d'aluminium et l'on fait cristalliser la réserpine obtenue à partir des éluats, dans de l'acétone.
EXEMPLE 13.
On extrait pendant 24 heures, à reflux,, 1000 parties en poids de racine broyées de Rauwàlfia serpentina Benth avec 4000 parties en volume de chlorure d'éthylèneo On réduit la solution d'extraction à un volume de 500 parties, sous pression réduite, et y ajoute 100 parties en poids d'"Hyflo" (Super Cel) et 300 parties en volume d'eauo On élimine ensuite complètement, sous vide, le chlorure d'éthylène, essore le mélange résiduel et le lave encore à l'eauo Le résidu insoluble est à nouveau malaxé avec de l'acide acétique binormal et les solutions acétiques réunies sont extrai- tes avec du chloroforme à trois reprises.
Les extraits chloroformiques réu- nis sont lavés avec une solution de bicarbonate de sodium étalée de l'eau, séchés sur du sulfate de sodium et évaporée à sec sous vide. On fait cristalliser dans le méthanol les 6,9 parties en poids du résidu que l'on obtient ainsi, purifie la base en passant par le chlorhydrate, et obtient ainsi la réserpine sous forme pure.
EXEMPLE 14
On chauffe pendant 20 heures@à reflux 1000 parties en poids de racines broyées de Rauwolfia serpentina Benth avec 2000 parties en volume d'un mélange azéotropique bouillant à 61 formé de 57,1% en volume de chlorure d'éthylène et de 42,9% en volume de méthanol. On ajoute à la solutioh d'extraction 1600 parties en volume d'eau et une quantité suffisante d'une solution saturée de bicarbonate de sodium pour que le pH soit de 8 environ. On sépare les deux phases qui se forment et les lave ensuite comme on l'a décrit à l'exemple 2. On sèche alors la phase chlorure d'éthylè- ne sur du sulfate de sodium et l'évapore sous vide jusqu'à dessicationo On fait cristalliser le résidu , 29,8 parties en poids, dans 45 parties en volume de méthanol.
On peut transformer le cristallisât brut en la base pure en passant par le chlorhydrate.
A partir de la réserpine obtenue suivant ce mode opératoire, on peut préparer ses sels, par exemple le nitrate, de la façon suivante
On dissout 1 partie en poids de réserpine dans 80 à 100 parties en volume d'acide acétique binormal, et, tout en refroidissant à la glace et en agitant bien, on ajoute par portions 8 à 10 partis en volume d'acide azotique à 30% On agite encore un certain temps à froid, puis on essore le cristallisât. Le résidu de filtration est lavé tout d'abord à l'eau, puis avec de l'acétone, et séché dans un dessicateur à vide sur de l'hydroxyde de potassiumo En dissolvant le produit sec dans beaucoup de méthanol chaud et en ajoutant une quantité triple à quinbaple d'éther, on peut faire recristalliser l'azotate de réserpine.
Il se présente sous la forme d'aiguilles incolores et fond en se décomposant, à environ 235 .
On peut cependant parvenir également au même sel en partant directement de la base, en dissolvant par exemple 1 partie en poids de réserpine dans 5 à 7 parties en volume de chloroforme exempt d'acide et en préparant une fine écume de réserpine en évaporant aussitôt sous vide.
Si 1'on ajoute à cette écume une quantité d'acide azotique correspondant
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à la quantité calculée ou un excès, par exemple en solution alcoolique, et que l'on chauffe brièvement le mélanges, on obtient alors l'azotate de réserpine sous forme cristalline.
De la même façon, on peut obtenir aussi les sels de l'acide chlorhydrique (fondant à 2210 environ, avec décomposition), de l'acide sulfurique (fondant à 244 environ, avec décomposition), de l'acide perchlorique (fondant à 239 environ, avec décomposition) de l'acide méthane-sulfonique (d'un point de fusion peu net commengant à 190 ), de l'acide picrique (fondant à 1860 environ) et de l'acide oxalique (fondant à 2060 environ, avec décomposition)o
Les sels d'acides faibles, par exemple de l'acide salicylique, de l'acide ascorbique, de l'acide citrique, de l'acide maliqu de l'acide succinique ou de l'acide tartrique sont obtenus par exemple en dissolvant des quantités équimoléculaires de la base et de l'acide, séparément, dans un solvant faiblement polaire, comme le chloroforme ou l'acétone,
en réunissant les solutions et en évaporant à sec. On fait cristalliser les sels dans un mélange d'éther avec un peu d'acétate d'éthyleo
La réserpine obtenue suivant les exemples ci-dessus ainsi que ses sels peuvent être traités de manière usuelle pour obtenir des préparations pharmaceutiques pour applications buccales ou parentérales. C'est ainsi qu'on peut préparer, par exemple, une tablette de la composition suivante g
EMI12.1
<tb>
<tb> 1. <SEP> réserpine <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> 2. <SEP> lactose <SEP> 53,0 <SEP> mg
<tb> 3. <SEP> gélatine <SEP> 1,0 <SEP> mg
<tb> 40 <SEP> amidon <SEP> 40,0 <SEP> mg
<tb> 5. <SEP> stéarate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 0,3 <SEP> mg
<tb> 6. <SEP> talc., <SEP> 5,2 <SEP> mg
<tb> 100,0mg
<tb>
A cet effet, on forme un mélange homogène avec les produits indiqués sous 1 et 2.
Avec une partie du produit indiqué sous 4 et avec le produit indiqué sous 3, on prépare un empois d'amidono On mélange ce dernier avec le mélange de 1 et de 2 et avec le reste de 4 pour obtenir une masse homogène humide, la granule et la sèche. Ensuite on ajoute les produits 4 et 6 et fabrique des tablettes avec le mélange ainsi obtenu.
REVENDICATIONS.
1) Un procédé pour l'obtention d'une substance active pure, caractérisé par le fait qu'à partir d'extraits exerçant une action sédati- ve, obtenus à partir de plantes du genre Rauwolfia en utilisant des solvants faiblement ou non polaires qui ne sont qu'en partie miscibles à. l'eau, on isole l'alcaloïde d'un point de fusion approximatif de 263 (avec décomposition) et d'un pouvoir rotatoire spécifique [[alpha]]23D= -118 environ (dans le chloroforme absolu).
1 ) On isole l'alcaloïde en utilisant un agent d'adsorption.
2 ) On isole l'alcaloïde par cristallisation.
3 ) On isole l'alcaloïde en utilisant un agent dadsorption et en procédant à une cristallisation ultérieure.
4 ) On isole l'alcaloïde par chromatographie, en particulier sur de l'oxyde d'aluminium, puis en procédant à une cristallisation ultérieure.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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PROCESS FOR OBTAINING A PURE ACTIVE SUBSTANCE AND NEW PRODUCTS THUS OBTAINED.
The present ibvention relates to obtaining an active substance in pure form, from plants of the genus Rauwolfia, in particular from the roots of these plants, preferably from Rauwolfia serpentina Bentho, as well as from of Rauwolfia vomitoria Afz. or of Rauwolfia inebrians.
From Rauwolfia serpentina Benth., Various alkaloids have already been isolated, such as ajmaline, ajmalinine, ajmalicine, serpentine, serpentinine isoajmaline, neoajmaline and rauwolfinineo
It is further known that it is possible to obtain from plants of the genus Rauwolfia, in particular from roots of Rauwolfia serpentina Benth., Products having a sedative and hypotensive effect, which can be used as medicaments. When the alkaloids of plants of the genus Rauwolfia are separated, neutral resins, called oleoresins, which have sedative action are also obtained. A pure active substance exhibiting these properties has, however, not been able to be isolated so far.
The present invention relates to a process for obtaining an active substance in pure form, exerting a sedative and hyonotic effect and lowering blood pressure, characterized in that from extracts of plants of the genus Rauwolfia which exert a sedative action and which can be obtained by using weakly or nonpolar solvents which are only partially miscible with water, the alkaloid melting at about 263 (with decomposition) and whose specific optical rotation [a] 23D is isolated is isolated. - 1180 (in absolute chloroform). This alkaloid can be recrystallized from acetone, from a mixture of chloroform and ether or, preferably, from methanol.
It is insoluble in water
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and in petroleum ether, sparingly soluble in benzene and in ether as well as in cold alcohol and acetobe, and readily soluble, for example, in chloroform, ethyl acetate, 10% acetic acid and phosphoric acid.
Elemental analysis provides the following values: C- 65.07; 65.04; H = 6.62; 6.65; N = 4.64, 4.49% Its absorption spectrum in 1-ultraviolet (in ethanol) has a flattened maximum at 215 mu (log ¼ approximately 4.8), a well-marked maximum at 269 mu (log. = approx. 4.2) and a shoulder connected to it k 295 mu (housed, = approx. 4.0). This spectrum shows a minimum at 246 mu (log = 4.0 approximately).
The low wavelength part of the infra-wheel spectrum is characterized by the following strong bands 2.92 ′ 5.76; 5.83; 6.13; 6.28; 6.67 (in nujol) On the basis of the tests which have been carried out, the examined compound corresponds to the formula C33H40O9N2
This new alkaloid is a weak base which forms salts, for example a hydrochloride sparingly soluble in water, with an approximate melting point of 2210 (with decomposition), a nitrate with an approximate melting point of 2350 (with decomposition) and a picrate with an approximate melting point of 186. It dissolves in an excess of dilute acetic acid with formation of acetate.
The alkaloid thus characterized will be designated in what follows by the expression “reserpine”. It will be marketed under the registered trademark "Serpasil". This product can be used as such as a medicament or can be used as an intermediate for the preparation of other valuable products.
Its pharmacological efficacy is complex. It is essentially characterized by a strong and long-lasting sedative and hypnotic action and also causes a lowering of blood pressure. Small doses are sufficient to immerse the animals for several hours in a peaceful sleep, from which they can be momentarily withdrawn. Reserpine also stimulates peristaltic movements.
The sedative hypnotic and blood pressure lowering effect of the plant alkaloids of the genus Rauwolfia known and isolated so far, for example ajmaline, serpentine and serpentinine, is lacking.
Compared to the non-unit preparations used up to now, obtained from plants of the genus Rauwolfia, the invention has the great advantage that with reserpine it is possible to indicate the exact dose necessary to exert a determined action. In addition, the preparations obtained from the new alkaloid have a unitary action, while it is known, for example, that plants of the genus Rauwolfia also contain substances having the effect of increasing blood pressure.
In order to isolate reserpine, one can proceed in various ways. It is advantageous to separate the components of the extract to be used according to the invention by means of an adsorption agent, preferably by chromatography on an adsorption agent. of medium strength, for example on a moderately active aluminum oxide, on silicic acid, on a product called "Hyflo" (diatomaceous earth), or on another silicate. The reserpine is eluted using benzene, mixtures of petroleum ether and benzene or mixtures of benzene and acetone.
It crystallizes spontaneously in the presence of little acetone or methanol and can, for example, be further purified by recrystallization from hot acetone, from ethanol, from a mixture of chloroform and ether or, preferably. , in methanol. However, it is also possible to obtain reserpine in pure form by crystallizing the extracts indicated directly in solvents such as alcohols or ketones, for example in ethanol or acetone, first of all in methanol.
In accordance with the invention, the starting point in particular is extracts which have been obtained from the roots of Rauwolfia serpentina Benth.,
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as well as Rauwolfia vomitoria Afz or Rauwolfia inebrians. As weakly or non-polar solvents which are only partly miscible with water, halogenated hydrocarbons, such as chloroform, ethylene chloride, methylene chloride or trichlorethylene, are preferably used for their production, benzene or ethyl acetate, as well as their mixtures. Valuable extracts are obtained by working according to the particular procedures described below.
One of these procedures is characterized by the fact that one treats with a mixture of a polar solvent and a weakly or non-polar solvent which is only partially miscible with water, if necessary by adding water, materials from plants of the genus Rauwolfia or an extract obtained from these plants having a sedative action, preferably a resinous fraction (oleoresin) treated in a known manner with a solvent for lipoids such as ether, of petroleum, and with an alcohol.
It is also possible to add to the water bases, acids or salts, such as ammonia, inorganic or organic acids such as hydrochloric acid, phosphoric acid or acetic acid, sodium carbonate, sodium bicarbonate, potassium biphosphate or potassium bisulfate. Polar solvents are, for example, alcohols such as methanol, ethanol or higher aliphatic alcohols.
Preferably, the procedure is carried out by extracting with the mixture indicated, then by separating the solution obtained into two phases, by adding water. However, it is also possible to distribute the starting substance between on the one hand a mixture of water and a polar solvent and on the other hand a weakly or non-polar solvent which is only partially miscible with the mixture. employee. Preferably, this distribution takes place in several stages of separation, at least in six stages of separation. From the fractions obtained with weakly or non-polar solvents, the solvent can be evaporated, and the residue directly treated according to the method to obtain reserpine or subject it again to the above operations.
For this procedure, as for those which will be indicated below, for example, finely ground materials originating from plants of the genus Rauwolfia, in particular from roots of Rauwolfia serpentina Benth., As well as from Rauwolfia vomitoria Afz or from Rauwolfia inebrians are used. , or one of their crude alcoholic extracts evaporated to dryness, for example methanolic extracts, which have been advantageously mixed with water which is then removed, or else an extract which is only partially evaporated is used, mixed if necessary with a solvent for lipoids, such as 1-ether, petroleum ether or hexane. The so-called resinous fractions ("oleoresins")
can be obtained, for example, as follows
A crude alcoholic extract of finely ground materials from plants of the genus Rauwolfia is evaporated to dryness, then the residue is mixed avatageuseement with water; the insoluble product thus obtained is then treated with binormal hydrochloric acid, dried, then continuously extracted with a solvent for lipoids such as petroleum ether;
the brown product which remains is treated with 95% ethanol, and the brown solution obtained by draining is evaporated to dryness
Another particular procedure for obtaining an extract to be used in accordance with the invention consists of treating materials from plants of the genus Rauwolfia, or a sedating extract obtained therefrom, with an agent. aqueous acid, which results in the formation of a solution having a sedative action, and then to extract the latter with a weak or nonpolar solvent, which is only partially miscible with water.
According to this procedure, the starting material is therefore extracted with an aqueous acidic agent, in particular with the aqueous solution of a lower fatty acid such as formic acid, acetic acid, propionic acid, or an acid. phosphoric acid or the aqueous solution of an acidic salt of a polybasic acid. The acid solution thus obtained having a
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The sedative action may, for further processing, either be concentrated to a small volume or be diluted with water, or be stored as such.
This extract is then subjected several times to extraction with a weakly or non-polar solvent which is only partially miscible with water, preferably with a halogenated hydrocarbon, such as chloroform, ethylene chloride, methylene chloride or trichlorethylene, or on the other hand with benzene or ethyl acetate o The extract thus obtained using the weakly or non-polar solvent can be washed until neutral and evaporated to dryness . From the residue, the reserpine can then be isolated in accordance with the method.
For the preparation of a good extract, it is also possible, at any stage of the procedure by which it was obtained, for example according to the procedures described above, to mix an extract freed from the solvent, for example a extract obtained with methanol from roots, with a carrier substance, for example with the products known commercially under the name of "Hyflo" or of "Clarcel DIC" (diatomaceous earth) or with another silicate, or in adsorbing reserpine on a carrier substance, from a solution, for example from an acid extract obtained according to the procedure given above, for example from an acetic extract, preferably after formation of its hardly soluble salts, for example after formation of the hydrochloride or the azotate of reserpine,
then by carrying out the stages of the process which still remain to be carried out. The active substance can thus be extracted from the carrier substance, for example with one of the aqueous acidic agents mentioned or alternatively with the aid of a mixture of a polar solvent and a weak or non-polar solvent.
Depending on the procedure used, reserpine spas is obtained in the base form or in the form of its salts. From the base, therapeutically usable salts can be formed, such as those of halogenated hydracids, sulfuric, nitrogen, perchloric, phosphoric, formic, acetic, propionic, lactic, oxalic, succinic, malic, tartaric, citric, ascorbic, methane acids. = sulfonic, ethanesulfonic, hydroxy-ethanesulfonic, benzoic salicylic, para-amino-salicylic or toluenesulfonic, by reacting reserpine with such acids, in the presence or absence of diluting agents. These salts can also be obtained by double decomposition.
Thus, for example, from a solution of reserpine acetate, its more hardly soluble salts, for example those of halogenated hydracids, precipitate when the corresponding acids are added.
The invention also relates, as new industrial products, to the compounds obtained by carrying out the process defined above. They can also be used as intermediates.
The invention will be described in more detail in the non-limiting examples which follow. Between each part by weight and each part by volume there is the same ratio as that existing between the gram and the cubic centimeter. The temperatures are indicated in degrees centigrade, *
Example 1.
200 parts by weight of "oleoresin" purified beforehand are subjected to a distribution according to the principle of the countercurrent, between a mixture of 50% of methanol and 50% of water as upper phase in equilibrium with chloroform as lower phase. Sufficient separation for practical purposes has been found to occur by distributing 200 parts by weight of the oleoresin in 6 separatory funnels between 2000 parts by volume of the upper phase and 2000 parts by volume each time. volume of the lower phase. The 12 phases (pH.) Resulting from the distribution in the 6 separation funnels (e.s.
I to VI) can be combined into 6 fractions exhibiting the properties given in the table below
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EMI5.1
<tb>
<tb> Weight <SEP> in <SEP> Action
<tb> Average <SEP> fractions <SEP> in <SEP> Sedative <SEP> color
<tb> parties
<tb> in <SEP> weight
<tb> 1 <SEP> (phosuperior, <SEP> 75 <SEP> to <SEP> 80 <SEP> brown-black <SEP> very <SEP> low
<tb> e: s. <SEP> I)
<tb> 2 <SEP> (phosuperior <SEP> 45 <SEP> to <SEP> 50 <SEP> brown <SEP> low
<tb> e.s. <SEP> II <SEP> and <SEP> III)
<tb> 3 <SEP> (lower ph;
,
<tb> e.s.I, II <SEP> and <SEP> III) <SEP> 10 <SEP> light brown <SEP> low
<tb> 4 <SEP> (upper level <SEP> and
<tb> lower, <SEP> e.s.IV) <SEP> 15 <SEP> to <SEP> 20 <SEP> light brown <SEP> low
<tb> 5 <SEP> (phosuperior
<tb> e.s. <SEP> V <SEP> and <SEP> VI) <SEP> 15 <SEP> light brown <SEP> low
<tb> 6 <SEP> (lower ph,
<tb> e.s. <SEP> V <SEP> and <SEP> VI <SEP>) <SEP> 35 <SEP> to <SEP> 40 <SEP> brown-green <SEP> strong
<tb> 200 <SEP> games
<tb> in <SEP> weight.
<tb>
Fraction 6 found to be active is further purified by chromatography on aluminum oxide. Neutral aluminum oxide with a degree of activity of II - III (according to Brockmann) is advantageously used for this purpose. 34 parts by weight of fraction 6 are dissolved in 400 parts by volume of benzene, 100 parts by volume of petroleum ether are added, which causes part of the substance to flocculate, and the whole is passed through a column of 800 parts by weight of aluminum oxide.
The mixture is then eluted with a mixture of petroleum ether and benzene in a volumetric ratio of 1: 4, optionally under pressure, which first produces the elution of an inactive light yellow oil, then that 0.6 parts by weight of an inactive crystalline fraction with a melting point of 238 to 239, and finally that of a substance exhibiting a sedative action, accompanied by a red dye ;, The first mixture is then replaced of solvents successively with benzene and with a mixture of benzene and acetone in the volumetric ratio of 2: 1; so that the last remainder of the active material is removed from the column. The eluate fractions are, after concentration, added with a little acetone and generally give a crystalline product after a short time.
By draining and washing with a mixture of equal parts by volume of acetone and ether, and with acetone, the crystalline substance can easily be isolated. 4.5 to 5 parts by weight of a crude crystalline product with a melting point of about 250 are obtained. The purification which follows consists in recrystallizing the product in hot acetone or in a mixture of chloroform and ether; an almost colorless reserpine is thus obtained, with a melting point of 262 to 2630 (with decomposition); [[alpha]] 23D = -118 (in chloroform).
Obtaining the crystallized reserpine from fraction 6 can also take place by a new distribution against the current.
It is thus possible to distribute against the current, for example, 29.7 parts by weight of the residue obtained from fraction 6, in eight separating funnels, between each 500 parts by volume of a mixture of 60% of benzene and of 40% hexane as upper phase, in equilibrium with each time 500 parts by volume of a mixture of 80% ethanol and 20% water as lower phase. From the fraction obtained by combining the upper phases of separating funnels No. 2, 3 and 4, the crystallized reserpine can be isolated, by operating in a manner analogous to that given above.
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The starting material is obtained as follows
With approximately 20,000 parts by volume of methanol or ethanol, 4,000 parts by weight of finely ground root bark of Rauwolfia serpentina Benth are percolated. Until Mayer's reagent for alkaloids gave only a weak positive indication. The methanolic extract is then evaporated to dryness under vacuum and the residue weighing 500 to 600 parts by weight is kneaded several times with water, to remove the water-soluble fractions.
The insoluble residue is then mixed several times with dilute hydrochloric acid to remove the residual basic fractions, then washed with water and dried. The insoluble fraction which remains, called "oleoresin", is then, with a view to a prior purification, extracted with petroleum ether until exhaustion, then the brown powder which remains is stirred for several hours with approximately 2000 parts by volume of 95% ethanol 80 to 90% of the material goes into solution. After filtering, the dark brown solution is evaporated to dryness and approximately 200 parts of oleoresin purified beforehand are obtained.
Example 20
1000 parts by weight of ground roots of Rauwolfia serpentina Benth are extracted three times. with 3000 parts by volume of a mixture of 2100 parts by volume of chloroform and 900 parts by volume of methanol, with stirring (and for the third time heating to 60), and each time separating the extraction solution from the root powder by draining and washing the residue with 500 parts by volume of the mixture indicated above.
The extraction solutions are then processed separately or in combination. To this end, is added to 1000 parts by volume of extraction solution, 600 parts by volume of water and a sufficient quantity of a saturated solution of sodium bicarbonate so that the pH is from 8.5 to 9, then shake everything carefully. The two phases are separated in the separation funnel. The combined lower phases (chloroform) are washed with 300 to 400 parts by volume of a 2-3% solution of sodium chloride. The combined upper phases (water / methanol) are further extracted with 200 parts by volume of chloroform, this second chloroform extraction solution being treated with the 2 - 3% solution of sodium chloride mentioned above.
The combined chloroform extraction solutions are dried over sodium sulfate and evaporated to dryness under vacuum.
The product obtained by extraction with chloroform, weighing 25 to 30 parts by weight, is dissolved hot in 100 parts by volume of dry methanol, is left to stand for some time, the crystalline product which has separated is filtered off and washed with a little. methanol the crystalline cake.
The combined methanolic filtrates are concentrated to a volume of 50 to 60 parts. If a little of a viscous product has separated, it is put back into solution by heating slightly, and then left to stand for several days for crystallization.
The crystallized product is then filtered off and washed with methanol.
With a view to its purification, the crystallized product is extracted several times with 10 to 20 parts by volume of binormal acetic acid each time. After cooling with ice to about 5 the combined, clear extraction solutions, the hydrochloride is precipitated, adding one tenth of the volume of concentrated hydrochloric acid which is slowly introduced into the solution, with vigorous stirring. Stirring is continued for about 30 to 40 minutes, drained, washed with water and the liquid removed as completely as possible, passing air.
The residue is suspended in 15 parts by volume of acetone, filtered off, washed with little acetone and then with ether and dried by passing air; the almost colorless hydrochloride of reserpine is obtained in a very fine form.
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To liberate the base, the hydrochloride is dissolved in the minimum amount of a mixture of 7 parts by volume of chloroform and 3 parts by volume of methanol. To the solution are added 6 parts by volume of water and a bicarbonate solution until the pH is approximately 9, stir, separate the phases, then wash as described above, dry and evaporates. The amorphous evaporation residue is dissolved by heating in a quantity equal to twice of methanol, the reserpine then crystallizing almost instantaneously. After having left to stand for several hours, the pure base is separated by suction.
EXAMPLE 3.
With approximately 35,000 parts by volume of methanol, one percolates
7000 parts by weight of powdered root bark of Rauwolfia serpentina
Bentho After evaporation of the methanolic extract, approximately 1050 parts by weight of a dark pulverulent product are obtained which is treated several times with water to remove the soluble fractions. The insoluble residue is kneaded five times with 1500 parts by volume of a 10% aqueous solution of acetac acid each time, the solution being separated from the viscous residue, advantageously by centrifugation. The brown acetate solution, which for further processing can be reduced at low temperature to a smaller volume or diluted with half its volume of water, has a pH of about 3.9.
This solution is stirred with 3500-4000 parts by volume of chloroform, divided into 3 to 4 portions o The chloroform extracts are washed once with potassium carbonate solution and twice with water, dried over sodium sulfate and evaporated to dryness under vacuum. The residue weighing 70 to 80 parts by weight is a powder colored in verto brown.To further purification occurs it is dissolved in benzene and the solution is aromatographed on 1000 to 1200 parts by weight of neutral aluminum oxide (activity IIIII according to Brockmann). On elution with benzene, first a small amount of a yellow oil is obtained and 0.9 part by weight of an inactive crystalline product, melting point 238 to 239; the substance having a sedative action is then separated.
After having eluted the main quantity of the active substance, the elution is continued with a mixture of 2 parts by volume of benzene and 1 part by volume of acetone. In this way, the rest of the sedative principle is still obtained, followed by another inactive crystallization, with a melting point of 141 to 143. The eluate fractions containing the substance with sedative action are evaporated to dryness.
By recrystallizing the residue from hot acetone or from a mixture of chloroform and ether, 6.5 to 7 parts by weight of reserpine are obtained as nearly colorless crystals, with a melting point of 262 to 2630 (with decomposition); [a] 23 = - 1180 (chloroform)
In the example above, 10% acetic acid can be replaced, for example, by 2% phosphoric acid.
EXAMPLE 4.
As described in Example 1, 7000 parts by weight of powdered root bark of Rauwolfia serpentina Benth are percolated with methanol, the solution is evaporated to dryness and the residue is kneaded with water. The remainder is then mixed three times with each time 1100 parts by volume of a 15% aqueous solution of acetic acid, then the solution is separated from the viscous insoluble product by centrifugation or filtration. The combined acetic extracts are then diluted with half their volume of water and stirred with 3000 to 3500 parts by volume of chloroform divided into 3 to 4 fractions o The chloroform extracts are then treated as indicated in Example 1. This gives rise to about 7 to 7.5 parts by weight of crystallized reserpine.
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EXAMPLE 5.
In 12000 parts by volume of 15% acetic acid, 2000 parts by weight of powdered root bark of Rauwolfia serpentina Benth are suspended and stirred intensively for 15 hours. The acid extract solution is then separated from the residue, advantageously by means of a suitable centrifuge. In this way approximately 8000 parts by volume of a dark brown solution are obtained (extract A). The extraction is repeated two more times in the same manner, each time using 9000 parts by volume of a 15% aqueous solution of acetic acid, which gives each time 8000 to 9000 parts by volume of the extract solution. (extract B and C).
Each of the three extract solutions of approximately 8000 parts by volume is diluted with 4000 parts of water and advantageously stirred separately with approximately 8000 parts by volume of chloroform, divided into 3 to 4 fractions. The amount of chloroform used for the extraction can be significantly reduced if, for example, the second chloroform extract of extract A is still used for the first extraction of extract B, or if the third chloroform extract of extract A is used for the second extraction of extract B and then for the first extraction of extract C. The chloroform extracts are washed with potassium carbonate or with sodium carbonate solution and with water, dried over sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo.
The residue weighing 45 to 50 parts by weight is, with a view to further purification and as described in Example 1, chromatographed on 700 to 800 parts by weight of aluminum oxide. In this way approximately 2.5 parts by weight of crystalline reserpine are obtained.
EXAMPLE 6.
1000 parts by volume of methanol are moistened with 1000 parts by weight of crushed roots of: Rauwolfia serpentina Benth and their extraction is carried out three or four times with 2000 parts by volume of methanol each time, with stirring for 10 to 16 hours ,, and wringing out each time. From the second extraction, it is advantageously heated to a temperature of about 65.
100 parts by weight of the evaporated methanolic extract are mixed with 70 parts by weight of "Hyflo" Super Cel and moistened with 100 parts by volume of 15% acetic acid. The mixture is then extracted, three or more times. four times ;, each time with 150 parts by volume of 15% acetic acid, triturating, filtering off and washing the residue with 100 parts by volume of 15% acetic acid. The combined acetic extracts are extracted with a total of 750 parts by volume of chlorofom, the extraction solution is washed with water, dried over sodium sulphate and evaporated to dryness in vacuo, thereby obtaining 20 parts by weight of residue. The above chloroform residue is dissolved in 30 to 40 in 200 parts by volume of benzene, and the insoluble residue is filtered off.
The filtrate is directly chromatographed as indicated in Examples 1 and 3, or it is evaporated to dryness in vacuo and the residue (5.2 parts by weight) is crystallized in an amount equal to twice of methanol, leaving stand the hot solution long enough for crystallization to take place completely. This gives reserpine in pure form.
EXAMPLE 7.
100 parts by weight of the dry methanolic extract described in Example 6 are extracted, while stirring, with a mixture of 210 parts by volume of chloroform and 90 parts by volume of methanol. Then extracted a second time by triturating with half the volume of the mixture indicated above. The combined extraction solutions are stirred with 270 parts by volume of water and a sufficient quantity of a saturated sodium bicarbonate solution so that the pH is 8.5 to 9; the mixture separates into two phases. If we continue to proceed as described in the example
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Ple 2, 28 parts by weight of dry extract are obtained from the chloroform solution. The latter is crystallized from methanol and thus the reserpine is obtained in pure form.
EXAMPLE 80
1000 parts by weight of ground roots of Rauwolfia serpentina Benth are extracted as indicated in Example 5. with 10,000 parts by volume of 15% acetic acid. To 8500 parts by volume of the acetic extraction solution is added, with good stirring, firstly 60 parts by weight of "Hyflo" Super Cel and then successively 70 parts by weight of sodium nitrate and 700 parts by weight of sodium chloride.
160 parts by weight of quicklime are slaked and the slaked lime is added in small portions to the solution. Finally, stirring is continued for one hour, then the mixture is filtered off through a filter cloth. The drained filter cake is washed with 200 to 300 parts by volume of a saturated solution of sodium chloride and with 100 parts by volume of water, then dried under vacuum over phosphorus pentoxide.
160 parts by weight of the dry residue are extracted, while stirring, with a mixture of 350 parts by volume of chloroform and 150 parts by volume of methanol, the residue is filtered off and washed with 400 parts by volume of the same mixture. The residue is then extracted a second time with 400 parts by volume of the mixture and washed with 100 parts by volume of this mixture. To each portion of 500 parts by volume of the extraction solution, 300 parts by volume are added each time. of water and a sufficient quantity of a saturated solution of sodium bicarbonate so that the pH is 8.5 to 9, stir and separate the two phases. The combined lower phases (chloroform) are further washed with 200 parts by volume of a 2-3% solution of sodium chloride.
The combined upper phases (water / methanol) are then extracted with 100 parts by volume of chlorofam, this second chloroform phase then also being treated with the aforementioned 2-3% solution of sodium chloride. The combined chlorofarmic extracts are dried over sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. The residue is crystallized from methanol as described in Example 2 or 60 The crude reserpine can be converted to the pure base by passing through the hydrochloride.
EXAMPLE 9.
20,000 parts by weight of ground bark of Rauwolfia inebrians roots are percolated with 1,000,000 parts by volume of methanol. After evaporation of the extractant, a brown powder is obtained which is kneaded several times with water to remove the water-soluble fractions. The insoluble residue is then kneaded with dilute hydrochloric acid, to remove the basic fractions, washed with water and dried. The insoluble fraction which remains, finely ground, is first purified by extraction with petroleum ether until exhaustion, then the brown powder which remains for several hours is stirred with about 3000 parts by volume of 95% alcohol. . In this operation, 80 to 90% of the material goes into solution.
After draining, the dark brown solution is evaporated to dryness and 710 parts by weight of a previously purified extract are obtained. This extract is subjected to repair between a mixture of 50% methanol and 50% water as the upper phase, in equilibrium with chlorform as the lower phase. A separation satisfactory for practical purposes is obtained when 200 parts by weight of the extract are distributed in 6 separating funnels, in each case between 2000 parts by volume of the upper phase and 2000 parts by volume of the lower phase. The phases obtained in this way are, in accordance with the scheme indicated in Example 1, combined into 6 fractions.
Fraction 6 found to be active is further purified by chromatography on aluminum oxide. For this purpose, 91 parts by weight are dissolved in benzene and the solution is chromatographed on a column of 1,500 parts by weight of aluminum oxide. It is then eluted with benzene and
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mixtures of benzene and acetone, evaporates the eluates and crystallizes the reactants in acetone. The base thus obtained is identical to the resin isolated from Rauwolfia serpentina Benth. The combustion analysis figures are as follows:
C = 65.00 H = 6.82 N = 4.63%
EXAMPLE 10
It is percolated with 70,000 parts by volume of methanol 9500 parts by weight of ground roots of Rauwolfia vomitoria Afz.
After distillation of the extractant, 800 parts by weight of a brown powder are obtained, which is intimately mixed with 600 parts by weight of "Hyflo" (Super Cel) and which is extracted several times. taken up in water to remove the water-soluble fractions. The insoluble residue is then moistened with 1000 parts by volume of acetic acid. 15% and extracted three times with 1500 parts by volume of 15% acetic acid each time.
In this operation, each time is filtered off and the residue is then washed with 500 parts by volume of 15% acetic acid. The acetic solutions are combined and then the whole is treated once with 2500 parts by volume of ethylene chloride and two other times each time with 1500 parts by volume of ethylene chloride)) then the combined extracting solutions are washed with a solution of potassium carbonate and twice with water o Then dried over sodium sulfate and evaporated dry under vacuum; the residue thus obtained is 45 parts by weight.
From the latter, by operating as indicated in Example 4, one obtains, by chromatography on aluminum oxide and by crystallization from methanol, a base which turns out to be identical to reserpine obtained from Rauwolfia serpentina Benth. The values of the combustion analysis are as follows: C = 65.24; H = 6.55; N, 4.66%.
EXAMPLE 11.
1000 parts by weight of ground roots of Rauwolfia serpentina Benth are extracted, as described in Example 1, with 7000 parts by volume of 95% ethanol, treated with water and dilute hydrochloric acid, dried, extracted in a Soxhlet apparatus with petroleum ether and finally taken up in 400 to 500 parts by volume of hot 95% ethanol. To the fraction soluble in alcohol, 5 parts by weight of sawdust, concentrate the mixture under vacuum and finally dry it under high vacuum for quite a long time.
In a Saxhlet apparatus, 12 parts by weight of the dry product obtained above are extracted for 8 hours with ether (until the solution is colorless). The extraction solution is evaporated to provide 0.5% by weight of a residue which crystallizes from methanol and has a melting point of 81 to 83, i.e. is not identical to reserpine. The residue of what remains after this first extraction is then extracted with chloroform for 38 hours, in the same apparatus (until the solution is colorless), the solvent being renewed twice. After evaporation of the extraction solution, a residue of 3.3 parts by weight is obtained.
This residue is chromatographed, as described in Example 3, on aluminum oxide. From the eluates (mixtures of benzene and acetone), a small amount of reserpine is then obtained. The extraction residue is then extracted, in the same way, for 38 hours, with ethyl acetate, the solvent being renewed twice. After evaporation of the extraction solution, a residue of 1.2 is obtained. part by weight. This residue is chromatographed, in an analogous manner, on aluminum oxide, so that from the eluates reserpine is isolated.
EXAMPLE 12.
With 8500 parts by volume of methanol, 1750 per-
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ties by weight of root bark of Rauwolfia serpentina Benth. After the extraction solution has evaporated, 264 parts by weight of a dark brown resin are obtained, which are kneaded several times with water to remove the soluble fraction. The residue thus obtained is then mixed five times with 350 parts by volume of half = normal phosphoric acid each time and the combined acid extracts are extracted 4 times with 400 parts by volume of chloroform each time. The chloroform solution is washed with potassium carbonate solution and with water, dried over sodium sulphate and evaporated in vacuo until drying.
The residue of 8 parts by weight is chromatographed on 100 parts by weight of aluminum oxide and the reserpine obtained from the eluates is crystallized in acetone.
EXAMPLE 13.
1000 parts by weight of ground root of Rauwàlfia serpentina Benth are extracted for 24 hours at reflux with 4000 parts by volume of ethylene chloride The extraction solution is reduced to a volume of 500 parts under reduced pressure and 100 parts by weight of "Hyflo" (Super Cel) and 300 parts by volume of water are added thereto. The ethylene chloride is then completely removed under vacuum, the residual mixture is filtered off and washed again with water. Insoluble residue is kneaded again with binormal acetic acid and the combined acetic solutions are extracted with chloroform three times.
The combined chloroform extracts are washed with sodium bicarbonate solution spread over water, dried over sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. The 6.9 parts by weight of the residue obtained in this way are crystallized from methanol, the base is purified by passing through the hydrochloride, and the reserpine is thus obtained in pure form.
EXAMPLE 14
1000 parts by weight of ground roots of Rauwolfia serpentina Benth are heated for 20 hours @ under reflux with 2000 parts by volume of an azeotropic mixture boiling at 61 formed from 57.1% by volume of ethylene chloride and 42.9. % by volume of methanol. 1600 parts by volume of water and a sufficient quantity of a saturated sodium bicarbonate solution are added to the extraction solution so that the pH is about 8. The two phases which form are separated and then washed as described in Example 2. The ethylene chloride phase is then dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo until desiccation. The residue, 29.8 parts by weight, is crystallized from 45 parts by volume of methanol.
The crude crystallized product can be converted to the pure base by passing through the hydrochloride.
From the reserpine obtained according to this procedure, its salts, for example the nitrate, can be prepared as follows
1 part by weight of reserpine is dissolved in 80 to 100 parts by volume of binormal acetic acid, and, while cooling in ice and stirring well, 8 to 10 parts by volume of nitrogenous acid at 30 are added in portions. The mixture is stirred for a while in the cold, then the crystallized product is filtered off. The filter residue is washed first with water, then with acetone, and dried in a vacuum desiccator over potassium hydroxide o Dissolving the dry product in plenty of hot methanol and adding a triple to quinbaple of ether, the reserpine nitrogen can be recrystallized.
It comes in the form of colorless needles and melts as it decomposes, at around 235.
However, the same salt can also be obtained by starting directly from the base, for example by dissolving 1 part by weight of reserpine in 5 to 7 parts by volume of acid-free chloroform and by preparing a fine reserpine foam by immediately evaporating under empty.
If a quantity of nitrogen acid corresponding to this foam is added
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to the calculated amount or an excess, for example in alcoholic solution, and the mixture is heated briefly, then the reserpine nitrogenate is obtained in crystalline form.
In the same way, one can also obtain the salts of hydrochloric acid (melting at approximately 2210, with decomposition), sulfuric acid (melting at approximately 244, with decomposition), perchloric acid (melting at 239 approximately, with decomposition) of methanesulphonic acid (with an inconspicuous melting point starting at 190), picric acid (melting at approximately 1860) and oxalic acid (melting at approximately 2060, with decomposition) o
Salts of weak acids, for example salicylic acid, ascorbic acid, citric acid, maliqu acid, succinic acid or tartaric acid are obtained for example by dissolving equimolecular amounts of the base and the acid, separately, in a weakly polar solvent, such as chloroform or acetone,
by combining the solutions and evaporating to dryness. The salts are crystallized in a mixture of ether with a little ethyl acetate
The reserpine obtained according to the above examples as well as its salts can be treated in the usual manner to obtain pharmaceutical preparations for oral or parenteral applications. This is how one can prepare, for example, a tablet of the following composition g
EMI12.1
<tb>
<tb> 1. <SEP> reserpine <SEP> 0.5 <SEP> mg
<tb> 2. <SEP> lactose <SEP> 53.0 <SEP> mg
<tb> 3. <SEP> gelatin <SEP> 1.0 <SEP> mg
<tb> 40 <SEP> starch <SEP> 40.0 <SEP> mg
<tb> 5. <SEP> magnesium <SEP> stearate <SEP> 0.3 <SEP> mg
<tb> 6. <SEP> talc., <SEP> 5,2 <SEP> mg
<tb> 100.0mg
<tb>
For this purpose, a homogeneous mixture is formed with the products indicated under 1 and 2.
With part of the product indicated under 4 and with the product indicated under 3, a starch paste is prepared o It is mixed with the mixture of 1 and 2 and with the remainder of 4 to obtain a homogeneous wet mass, the granule and dry it. Then products 4 and 6 are added and tablets are produced with the mixture thus obtained.
CLAIMS.
1) A process for obtaining a pure active substance, characterized by the fact that from extracts exerting a sedative action, obtained from plants of the genus Rauwolfia using weakly or non-polar solvents which are only partially miscible with. water, the alkaloid is isolated with an approximate melting point of 263 (with decomposition) and a specific optical rotation [[alpha]] 23D = -118 approximately (in absolute chloroform).
1) The alkaloid is isolated using an adsorption agent.
2) The alkaloid is isolated by crystallization.
3) The alkaloid is isolated using an adsorber and subsequent crystallization.
4) The alkaloid is isolated by chromatography, in particular on aluminum oxide, followed by subsequent crystallization.
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