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La présente invention a pour objet l'obtention sous forme pure de deux substances actives qui seront dénommées dans ce qui va suivre substance active 21548/A et substance active 21548/C, ainsi que de leurs dérivés acides et des sels de ces composés. Les nouvelles substances actives peuvent être obtenues à partir de plantes de la famille des mélianthacées, en premier lieu à partir de l'écorce de ces plantes, comme le Melianthus major, le Melianthus comosus, la Bersama paullinioides, la Bersama lucens, la Bersama swinnyi, la Bersama tyso- niana, la Bersama abyssinica, la Bersama kivùensis, de préférence à partir de la Bersama cf. hebecalyx.
Les plantes de la famille des mélianthacées, notamment de la catégorie de la Bersama, sont des arbres, des arbrisseaux ou des arbustes de l'Afrique tropicale qu'on peut trouver de l'Abyssinie à l'Angola et en Afrique du Sud.
Du point de vue chimique, ces plantes n'ont pas encore été examinées. Jusqu'à présent, on n'a pas non plus isolé de substance active pure à partir de ces plantes.
A partir des plantes indiquées, on peut maintenant isoler deux nouvelles substances actives, notamment une substance incolore à faiblement jaunâtre qui cristallise en aiguilles et fond à 320-323 C. On peut la recristal- liser dans un mélange de méthylcellosolve et d'eau ou dans un mélange de chloro- forme et de méthanol, et elle est dénommée substance active 21548/C. L'analyse élémentaire de la substance, qui est exempte d'azote, fournit les valeurs sui- vantes : C = 60,38/60,28 %, H = 3,27/3,38 % et 0 = 35,96/35,76 %.
Son spectre ultra-violet dans le méthanol présente des maxima à 250 mu (El = 1490), 360 mu (E1 = 350) et 375 mu (E1 = 375), ainsi qu'un minimum prononcé à 324 mu (El = 90). Le spectre infra-rouge dans le chlorure de méthylène présente des bandes d'absorption à 5,73; 6,07; 6,16; 8,97; 9,13; 9,48 et 9,77 p.
Dans le nujol, les maxima se situent à 3,24; 5,76; 6,06; 6,15; 6,54; 6,60; 6,76 ; 7,13; 7,42; 8,11; 8,27; 8,40; 8,63, 8,79; 8,96; 9,08; 9,42; 9,78; 9,99; 10,16; 10,46; 10,77; 10,97; Il,32; 13,15; 13,75 et 14,08 p. La nouvelle substance se comporte comme un acide et est bien soluble dans une solution méthanolique d'hydroxyde de sodium. En ce qui concerne la seconde substance active que l'on peut isoler, il s'agit d'une substance faiblement jaunâtre cirstallisant en de petites aiguilles, et elle est dénommée substance active 21548/A,d'un point de fusion approximatif de 267 à 268 (décomposition). L'analyse élémentaire du composé exempt d'azote fournit les valeurs suivantes C = 53,96; H = 4,68 et 0 = 40,64 %.
Son spectre ultra-violet dans le méthanol présente des maxima à 241 mu (E1 =750), 258 mu (E1 = 800), 315 mu (E1 = 390) et 365 mu $(E1 = 345).
Les bandes les plus fortes du spectre infra-rouge dans le nujol (huile hydrocar- bonée) se situent à 2,98 u; 6,05 u; 6,16 p; 6,70 p; 7,72 p; 7,99 p; 8,36 u; 9,14 p et 12,07 p. On peut bien cristalliser ce composé dans un mélange de méthylcellosolve et de méthanol; il se comporte comme un acide organique et est relativement bien soluble dans une solution aqueuse d'un alcali, telle que des solutions de carbonate de sodium ou de bicarbonate de sodium, dans la pyridine et dans un mélange de méthylcellosolve et d'eau.
Il est peu soluble à chaud dans les solvants organiques comme le méthanol, l'acétone, les hydrocarbures halogénés et pratiquement insoluble à froid dans les solvants organiques tels que le métha- nol, l'acétone ou les hydrocarbures halogénés, l'éther, l'hexane ou l'eau.
Les nouvelles substances actives, leurs dérivés d'acide, de préfé- rence leurs esters, et les sels de ces composés sont actifs contre des infections dues à des virus. Cela a pu, par exemple, être montré dans des essais avec 1' Ectromelia. Des souris inoculées avec le virus de la variole de la souris (un virus qui est proche parent du virus de la variole humaine) sont protégées par une administration quotidienne des nouvelles préparations. L'effet thérapeutique
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est atteint avec des doses qui sont bien supportées par les animaux traités.
Les nouvelles préparations peuvent être utilisées dans les cas d'infections intéressant la peau, les viscères et les nerfs et dues à des virus, par exemple la variole, la pneumonie dues à des virus et l'encéphalomyélite.
Les nouvelles substances actives sont obtenues en extrayant des plan- tes de la famille des mélianthacées, notamment de Bersama cf. hebecalyx, de préférence les écorces de ces plantes, comme l'écorce de la tige ou l'écorce des racines, en isolant les nouvelles substances actives indiquées à partir des ex- traits obtenus et, si on le désire, en transformant les composés obtenus en leurs dérivés d'acide et/ou en préparant les sels de ces dérivés et/ou 'en transformant les sels obtenus en composés libres.
L'extraction, de même que l'isolement des nouveaux composés, peuvent être effectués de différentes manières, suivant des méthodes connues en elles- mêmes. C'est ainsi qu'il est avantageux d'extraire les plantes indiquées, no- tamment l'écorce de ces plantes, en premier lien l'écorce des racines de Bersama cf. hebecalyx, avec des alcools comme le méthanol, l'éthanol, le propanol, ou avec des hydrocarbures halogénés comme le chloroforme, le chlorure d'éthylène, le chlorure de méthylène ou le trichloréthylène, avec le benzène ou le dioxane ou leurs mélanges, le cas échéant en présence d'eau,d'acides aqueux comme l'acide acétique aqueux, ou bien avec des agents alcalins tels que des bases inorganiques ou organiques, par exemple avec du carbonate ou du bicarbonate de sodium.
Pour isoler les nouveaux composés, on peut alors décomposer l'extrait obtenu en pro- cédant à une cristallisation fractionnée. C'est ainsi qu'on peut le reprendre dans des mélanges de méthylcellosolve et d'eau et isoler les nouveaux composés par évaporation, cristallisation et recristallisation. En outre, les nouveaux composés peuvent aussi être séparas des extraits indiqués ci-dessus*par réparti- tion à contr.e-courant ou par chromatographie, par exemple sur de l'oxyde d'alu- minium de force moyenne par exemple sur de l'alumine modérément active, sur de l'acide silicique, sur de l'Hyflo (terre de diatomées), ou sur un autre silicate.
Une méthode opératoire préférée consiste à mettre en pâte les écorces des racines ou des tiges avec du méthanol aqueux, à extraire ensuite à reflux pendant plusieurs heures avec du méthanol technique et à concentrer la solution sous vide jusqu'à environ 10 % de son volume. On laisse alors cristalliser pendant une nuit, essore le cristallisat obtenu et le reprend dans un mélange de méthylcellosolve et d'eau (2: 1) à 40 . Le cristallisât obtenu après refroi- dissement est séparé par filtration et il constitue la substance active 21548/C.
Les lessives-mères sont évaporées jusqu'à la moitié ou le tiers de leur volume, puis additionnées de deux volumes de méthanol après quoi on sépare la substance active 21548/A après refroidissement et repos. Le filtrat obtenu est à nouveau additionné de deux volumes de méthanol environ, ce qui fait qu'après avoir laissé reposer et avoir laissé refroidir, on obtient à nouveau des cristaux de la sub- stance active A 21548/A.
Suivant le mode opératoire choisi, on obtient les nouveaux composés sous la forme des acides ou sous la forme de leurs sels. A partir des acides, on peut former des sels utilisables en thérapeutique, comme ceux des métaux alcalins ou alcalino-terreux, comme le sodium, le potassium, le magnésium ou le calcium, en faisant réagir les nouveaux composés sur les hydroxydes ou les car- bonates de ces métaux, en présence ou en l'absence d'agents de dilution. Ces composés peuvent aussi, d'une manière connue en elle-même, par exemple par estérification avec des alcools, être transformés en leurs dérivés fonctionnels d'acides.
Les nouvelles substances actives, leurs dérivés d'acides et leurs sels peuvent être utilisés comme médicaments, par exemple sous la forme de pré- parations pharmaceutiques les renfermant en mélange avec une matière de support pharmaceutique, organique ou inorganique, appropriée pour une application enté- rale, parentérale ou topique. Pour la formation de cette matière de support,
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on envisage les substances ne réagissant pas sur les nouveaux composés, comme par exemple l'eau, la gélatine,le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, des huiles végétales, des gommes, des polyalcoylèneglycols, la vaseline, la cholestérine ou d'autres excipients connus.
Les préparations pharmaceutiques peuvent se présenter, par exemple, à l'état de comprimés, de dragées, d'onguents, de crèmes ou sous forme liquide à l'état de solutions, de suspensions ou d'émul- sions. Le cas échéant, elle sont stérilisées et/ou renferment des substances auxiliaires telles que des agents de conservation, de stabilisation, des agents mouillants ou émulsifiants, des sels servant à faire varier la pression osmotique, ou des tampons. Elles peuvent aussi renfermer encore d'autres substances thérapeu- tiquement précieuses.
La présente invention concerne également, à titre de produits indus- triels nouveaux, les produits conformes à ceux définis ci-dessus.
L'invention est dévrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigrades.
EXEMPLE 1
Avec 3 litres d'un mélange à parties égales de méthanol et d'eau, on met en pâte 4,23 kg d'écorce finement broyée de tiges de Bersama cf. hebecalyx, puis extrait pendant 2 heures à reflux avec 6 litres de méthanol. La solution d'extrait est ensuite concentrée sous pression réduite jusqu'à un volume d'environ 1/2 litre, ce qui fait que des cristaux se séparent sur la paroi du ballon. On laisse reposer pendant une nuit, filtre et lave le résidu de filtration avec du méthanol. On obtient ainsi 29,5 g d'un cristallisat brut qui présente un point de fusion d'environ 250 .
Le résidu de drogue restant dans l'extracteur est à nouveau extrait pendant 4 heures avec 6 litres de méthanol. Après avoir été concentrée sous vide à un volume de 0,2 à 0,3 litre, la solution d'extrait fournit encore 8,8 g de cristallisat brut. En soumettant le résidu de la drogue à une troisième extrac- tion à reflux pendant 6 heures avec 5 litres de méthanol, on n'obtient plus que des traces de matière cristalilisée.
Le cristallisat brut est soumis en deux portions à une cristallisa- tion fractionnée. Dans un mélange de deux parties en volume de méthylcellulosolve et d'une partie en volume d'eau, on dissout en majeure partie 18,7 g de substance brute, en chauffant à 35-40 et en agitant fortement. On sépare alors, par fil- tration à travers un filtre en verre fritté FG 4, les fins cristaux qui sont encore en suspension dans la solution, et l'on obtient 6,3 g de cristallisat brut de la substance active 21548/C. On peut recristalliser ce cristallisât brut dans un grand volume d'un mélange de méthylcellosolve et d'eau (2:1), et il forme alors de petites aiguilles incolores qui fondent à 320 environ.
La lessive-mère de ces cristaux est concentrée sous vide jusqu'à un volume de 150 cm3 ce qui fait qu'il commence à se séparer des cristaux sur les parois; on ajoute alors à la solution 400 cm3 de méthanol et laisse le mélange reposer pendant une nuit à 4 . On filtre et obtient 9,06 g de cristallisat brut de la substance active 21548/A qui fond à 262-264 en se décomposant et qui, par une autre recristàllisation dans le mélange solvant décrit ci-dessus et par une cristallisation subséquente dans le méthanol, peut être purifié davantage et fournit des aiguilles jaune-pâle qui fondent à 267-268 en se décomposant.
La lessive-mère du cristallisat brut est concentrée sous vide jusqu'à un volume de 30 cm3 environ et on la laisse reposer pendant une nuit après y avoir ajouté 60 cm3 de méthanol. Dans ce cas, il cristallise encore à l'état impur 2,1 g de la substance 21548/A, qu'od peut isoler par filtration.
EXEMPLE 2
On extrait pendant 4 heures à reflux avec 750 cm3 de méthanol,
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100 g d'écorce de racines finement broyée de Bersama cf. hebecalyx. Le résidu renfermant la drogue est extrait une seconde fois pendant trois heures avec 300 cm3 de méthanol. Après avoir réuni les solutions d'extrait, on les concentre sous vide jusqu'à un volume de 80 cm3 environ, puis laisse reposer pendant plusieurs semaines à 4 . Il se forme alors sur le fond du ballon une quantité de fines petites aiguilles microscopiques des substances actives A1548/A et 21548/C et de gros prismes de sucre de canne mesurant jusqu'à 6 mm d'arête.
Les cristaux obtenus après filtration sont repris dans de l'eau, la fraction insoluble est séparée par filtration et lavée ensuite à l'eau. Après séchage, le résidu finement cristallin pèse 2,76 g ; peut, comme décrit dans l'exemple 1, par dissolution dans un mélange de méthylcellosolve et d'eau (2:1), le séparer facilement en les substances actives 21548/A et 21548/C.
EXEMPLE 3
Avec 0,5 litre d'un mélange de 90 parties de méthanol et de 10 parties d'eau, on humidifie 500 g d'écorce de racines finement broyée de Bersama cf. hebecalyx,puis percole avec 4,5 litres de méthanol. En concentrant la solu- tion d'extrait sous vide jusqu'à 0,5 litre environ, on peut obtenir 5,26 g de cristallisat brut. Pour isoler la substance active 21548/A que l'extrait renferme en plus grande quantité, on fait bouillir le mélange cristallin à reflux dans un grand volume de méthanol jusqu'à ce qu'il soit presque complètement passé en solution. On filtre alors à chaud. Le résidu de filtration est constitué en majeu- re partie par la substance 21548/C et peut être purifié comme dans l'exemple 1.
On concentre le filtrat sous vide jusqu'à cristallisation commençante, puis laisse reposer à 0 pendant une nuit. Le cristallisat de la substance active 21548/A qui se sépare alors peut être purifié davantage par des cristallisations répétées dans du méthanol chaud.
EREMFLE 4
On soumet à une répartition à contre-courant, dans un système solvant constitué par du butanol secondaire (saturé d'eau) comme couche supérieure et par de l'eau (saturée de butanol secondaire) comme couche inférieure, 400 mg d'un cristallisat brut de la substance active 21548/A, obtenu de la manière décrite dans l'exemple 3 par recristallisation à une reprise dans du méthanol bouillant. La substance est dissoute dans les cinq premiers tubes d'un appareil- lage en verre (suivant Craig) dans chaque fois 25 cm3 de la couche supérieure et inférieure, puis répartie en 50 stades. Le contenu des tubes N 30 à 33 qui renferment les fractions de pointe, est réuni et fournit, à l'état pur, par cristallisation dans le méthanol, 125 mg de la substance active 21548/A, d'un point de fusion de 267-268 .
EXEMPLE 5
On broie finement 11 kg d'écorce de racines de Bersama cf. hebecalyx, divise en deux parties égales et extrait comme suit. On humecte chaque fois 5,5 kg de matière avec 550 cm3 d'une solution aqueuse binormale d'acide acétique, mélange bien, place dans un extracteur à reflux et extrait pendant 5 heures après avoir ajouté 10 litres de benzène. On enlève alors la solution d'extrait,place 5 litres de benzène frais et extrait pendant 5 heures de plus à reflux. On répète la même opération à deux reprises pendant 3 à 4 heures avec chaque fois 3 litres de benzène.
On réunit les solutions d'extrait et les concentre sous vide jusqu'à ce qu'il reste un résidu résineux. On reprend ce dernier dans un litre de chloroforme, la majeure partie passant en solution par secouage. Les particules adhérant à la paroi du ballon et celles en suspension dans la solution forment un cristallisat qui est relativement difficilement soluble dans le chloroforme froid et qu'on peut séparer par filtration. Le rendement en cristallisat brut de couleur brun-clair obtenu à partir des deux charges (11 kg de racines) est au total de 8 g environ.
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La purification a lieu en passant par le sel de sodium, en malaxant le cristallisat brut avec 200 cm3 d'une solùtion méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium, en filtrant la suspension à travers un entonnoir filtrant à filtre de verre (G 3) et en acidifiant le filtrat avec une solution méthanolique concentrée d'acide chlorhydrique, ce qui fait que la substance précipite sous la forme d'un cristallisat faiblement jaunâtre. En extrayant ensuite à plusieurs reprises le résidu d'essorage et en acidifiant ensuite, on obtient finalement à l'état pur un total de 3,9 g de cristaux jaune-pâle fondant à 315-321 .
Pour purifier davantage la substance, on la dissout dans du chlores- forme chaud, filtre la solution et, après avoir ajouté 1/lOème du volume de métha- nol, on concentre sous pression légèrement réduite jusqu'à un petit volume. Si l'on répète cette opération, on obtient la substance pure sous la forme de petites aiguilles de couleur faiblement jaunâtre, qui fondent à 320-323 (Koflerblock).
Lorsqu'on augmente lentement la température, la substance commence déjà à se sublimer lentement à partir de 260 environ.
REVENDICATIONS.
I. Un procédé de préparation de deux substances actives, de leurs esters et des sels de ces composés, ledit procédé étant caractérisé par le fait qu'on obtient les substances actives 21548/C et 21548/A à partir de plantes de la famille des mélianthacées et, si on le désire, qu'on transforme les compo- sés obtenus en leurs dérivés d'acide et/ou qu'on prépare les sels de ces composés et/ou qu'on transforme les sels obtenus en les composés libres.
Les présent procédé peut encore être caractérisé par les points suivants :
1) On extrait des plantes de la famille des mélianthacées, et, à partir des extraits obtenus, on obtient les substances actives 21548/C et 21548/A.
2) On part d'écorces de mélianthacées.
3) On part de la Bersama cf. hebecalyx.
4) On extrait les plantes avec des alcools.
5) On extrait les plantes avec du méthanol.
6) On extrait les plantes avec du méthanol aqueux.
7) On extrait les plantes avec du benzène.
8) On extrait les plantes avec du benzène en présence d'un acide aqueux.
9) On isole les substances actives 21548/C et 21548/A par cristal- lisation fractionnée.
10) On effectue la cristallisation fractionnée dans un mélange de méthylcellosolve et d'eau.
Il) On effectue la cristallisation fractionné dans un mélange de 2 parties en volume de méthylcellosolve et d'une partie en volume d'eau.
12) On isole les substances actives 21548/0 et 21548/A par une ré- partition à contre-courant.
13) La répartition à contre-courant est effectuée dans un mélange de butanol et d'eau.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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The object of the present invention is to obtain, in pure form, two active substances which will be referred to in what follows as active substance 21548 / A and active substance 21548 / C, as well as their acid derivatives and salts of these compounds. The new active substances can be obtained from plants of the Melianthaceae family, primarily from the bark of these plants, such as Melianthus major, Melianthus comosus, Bersama paullinioides, Bersama lucens, Bersama swinnyi , Bersama tyso- niana, Bersama abyssinica, Bersama kivùensis, preferably from Bersama cf. hebecalyx.
The plants of the Melianthaceae family, in particular the Bersama category, are trees, shrubs or shrubs of tropical Africa that can be found from Abyssinia to Angola and South Africa.
From a chemical point of view, these plants have not yet been examined. So far, no pure active substance has been isolated from these plants either.
From the plants indicated, two new active substances can now be isolated, in particular a colorless to slightly yellowish substance which crystallizes in needles and melts at 320-323 C. It can be recrystallized from a mixture of methylcellosolve and water or in a mixture of chloroform and methanol, and it is called active substance 21548 / C. Elemental analysis of the substance, which is free of nitrogen, yields the following values: C = 60.38 / 60.28%, H = 3.27 / 3.38% and 0 = 35.96 / 35.76%.
Its ultra-violet spectrum in methanol shows maxima at 250 mu (E1 = 1490), 360 mu (E1 = 350) and 375 mu (E1 = 375), as well as a pronounced minimum at 324 mu (E1 = 90). . The infrared spectrum in methylene chloride shows absorption bands at 5.73; 6.07; 6.16; 8.97; 9.13; 9.48 and 9.77 p.
In the nujol, the maxima are located at 3.24; 5.76; 6.06; 6.15; 6.54; 6.60; 6.76; 7.13; 7.42; 8.11; 8.27; 8.40; 8.63, 8.79; 8.96; 9.08; 9.42; 9.78; 9.99; 10.16; 10.46; 10.77; 10.97; He, 32; 13.15; 13.75 and 14.08 p. The new substance behaves like an acid and is well soluble in methanolic sodium hydroxide solution. As regards the second active substance that can be isolated, it is a weak yellowish substance that crystallizes in small needles, and is called active substance 21548 / A, with an approximate melting point of 267 to 268 (decomposition). Elemental analysis of the nitrogen-free compound gives the following values C = 53.96; H = 4.68 and 0 = 40.64%.
Its ultra-violet spectrum in methanol shows maxima at 241 mu (E1 = 750), 258 mu (E1 = 800), 315 mu (E1 = 390) and 365 mu $ (E1 = 345).
The strongest bands of the infrared spectrum in nujol (hydrocarbon oil) lie at 2.98 µ; 6.05 u; 6.16 p; 6.70 p; 7.72 p; 7.99 p; 8.36 u; 9.14 p and 12.07 p. This compound can well crystallize from a mixture of methylcellosolve and methanol; it behaves like an organic acid and is relatively well soluble in an aqueous solution of an alkali, such as solutions of sodium carbonate or sodium bicarbonate, in pyridine and in a mixture of methylcellosolve and water.
It is sparingly soluble when hot in organic solvents such as methanol, acetone, halogenated hydrocarbons and practically insoluble when cold in organic solvents such as methanol, acetone or halogenated hydrocarbons, ether, l hexane or water.
The new active substances, their acid derivatives, preferably their esters, and the salts of these compounds are active against infections due to viruses. This could, for example, be shown in tests with Ectromelia. Mice inoculated with mouse pox virus (a virus which is closely related to human smallpox virus) are protected by daily administration of the new preparations. The therapeutic effect
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is achieved with doses which are well tolerated by the treated animals.
The new preparations can be used in cases of infections involving the skin, viscera and nerves and caused by viruses, for example smallpox, pneumonia caused by viruses and encephalomyelitis.
The new active substances are obtained by extracting plants from the Melianthaceae family, in particular from Bersama cf. hebecalyx, preferably the bark of these plants, such as the bark of the stem or the bark of the roots, isolating the new active substances indicated from the extracts obtained and, if desired, transforming the compounds obtained into their acid derivatives and / or by preparing the salts of these derivatives and / or 'by converting the salts obtained into free compounds.
The extraction, as well as the isolation of the new compounds, can be carried out in various ways, according to methods known per se. Thus it is advantageous to extract the plants indicated, in particular the bark of these plants, primarily the bark of the roots of Bersama cf. hebecalyx, with alcohols such as methanol, ethanol, propanol, or with halogenated hydrocarbons such as chloroform, ethylene chloride, methylene chloride or trichlorethylene, with benzene or dioxane or their mixtures, where appropriate in the presence of water, aqueous acids such as aqueous acetic acid, or else with alkaline agents such as inorganic or organic bases, for example with sodium carbonate or bicarbonate.
To isolate the new compounds, the extract obtained can then be decomposed by carrying out fractional crystallization. Thus it is possible to take it up in mixtures of methylcellosolve and water and to isolate the new compounds by evaporation, crystallization and recrystallization. In addition, the new compounds can also be separated from the extracts indicated above * by countercurrent partitioning or by chromatography, for example on medium strength aluminum oxide, for example on medium strength aluminum oxide. moderately active alumina, on silicic acid, on Hyflo (diatomaceous earth), or on another silicate.
A preferred operating method consists of pulping the bark of the roots or stems with aqueous methanol, then extracting at reflux for several hours with technical methanol and concentrating the solution in vacuo to about 10% of its volume. Then left to crystallize overnight, the crystallizate obtained is filtered off and taken up in a mixture of methylcellosolve and water (2: 1) at 40. The crystallize obtained after cooling is separated by filtration and constitutes the active substance 21548 / C.
The mother liquors are evaporated to half or one third of their volume, then added with two volumes of methanol after which the active substance 21548 / A is separated after cooling and standing. About two volumes of methanol are again added to the filtrate obtained, so that, after leaving to stand and allowing to cool, crystals of the active substance A 21548 / A are again obtained.
Depending on the procedure chosen, the new compounds are obtained in the form of acids or in the form of their salts. From acids, one can form salts which can be used in therapy, such as those of alkali metals or alkaline earth metals, such as sodium, potassium, magnesium or calcium, by reacting the new compounds with hydroxides or carbons. bonates of these metals, in the presence or absence of diluting agents. These compounds can also, in a manner known per se, for example by esterification with alcohols, be converted into their functional acid derivatives.
The new active substances, their acid derivatives and their salts can be used as medicaments, for example in the form of pharmaceutical preparations containing them in admixture with a pharmaceutical carrier material, organic or inorganic, suitable for enteric application. rale, parenteral or topical. For the formation of this support material,
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substances which do not react with the new compounds are considered, such as for example water, gelatin, lactose, starch, magnesium stearate, talc, vegetable oils, gums, polyalkylene glycols, petroleum jelly, cholesterin or other known excipients.
The pharmaceutical preparations can be presented, for example, in the form of tablets, dragees, ointments, creams or in liquid form in the form of solutions, suspensions or emulsions. Where appropriate, they are sterilized and / or contain auxiliary substances such as preservatives, stabilizers, wetting or emulsifying agents, salts used to vary the osmotic pressure, or buffers. They may also contain still other therapeutically valuable substances.
The present invention also relates, as new industrial products, to products conforming to those defined above.
The invention is described in more detail in the non-limiting examples which follow, in which the temperatures are indicated in degrees centigrade.
EXAMPLE 1
With 3 liters of a mixture of equal parts of methanol and water, 4.23 kg of finely ground bark of Bersama stems are put into a paste, cf. hebecalyx, then extracted for 2 hours at reflux with 6 liters of methanol. The extract solution is then concentrated under reduced pressure to a volume of about 1/2 liter, which causes crystals to separate on the wall of the flask. It is left to stand overnight, filtered and the filter residue washed with methanol. In this way 29.5 g of a crude crystallizate is obtained which has a melting point of approximately 250.
The drug residue remaining in the extractor is again extracted for 4 hours with 6 liters of methanol. After being concentrated in vacuo to a volume of 0.2 to 0.3 liters, the extract solution provides a further 8.8 g of crude crystallize. By subjecting the drug residue to a third reflux extraction for 6 hours with 5 liters of methanol, only traces of crystallized material are obtained.
The crude crystallize is subjected in two portions to fractional crystallization. In a mixture of two parts by volume of methylcellulosolve and one part by volume of water, the major part is dissolved 18.7 g of crude substance, heating to 35-40 and stirring vigorously. The fine crystals which are still in suspension in the solution are then separated by filtration through a sintered glass filter FG 4, and 6.3 g of crude crystallizate of the active substance 21548 / C is obtained. This crude crystallize can be recrystallized from a large volume of a mixture of methylcellosolve and water (2: 1), and it then forms small, colorless needles which melt at about 320.
The mother liquor of these crystals is concentrated in vacuo to a volume of 150 cm3 which causes it to begin to separate from the crystals on the walls; 400 cm3 of methanol is then added to the solution and the mixture is left to stand overnight at 4. Is filtered to obtain 9.06 g of crude crystallizate of the active substance 21548 / A which melts at 262-264 by decomposing and which, by another recrystallization in the solvent mixture described above and by a subsequent crystallization in methanol , can be further purified and yields pale yellow needles which melt at 267-268 on decomposition.
The mother liquor of the crude crystallizate is concentrated in vacuo to a volume of about 30 cm3 and left to stand overnight after adding 60 cm3 of methanol thereto. In this case, 2.1 g of substance 21548 / A still crystallize in the impure state, which can be isolated by filtration.
EXAMPLE 2
Extracted for 4 hours at reflux with 750 cm3 of methanol,
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100 g of finely ground root bark of Bersama cf. hebecalyx. The drug-containing residue is extracted a second time for three hours with 300 cm3 of methanol. After combining the extract solutions, they are concentrated in vacuo to a volume of about 80 cm3, then left to stand for several weeks at 4. A quantity of fine microscopic needles of the active substances A1548 / A and 21548 / C and large prisms of cane sugar measuring up to 6 mm edge are then formed on the bottom of the flask.
The crystals obtained after filtration are taken up in water, the insoluble fraction is separated by filtration and then washed with water. After drying, the finely crystalline residue weighs 2.76 g; can, as described in example 1, by dissolving in a mixture of methylcellosolve and water (2: 1), easily separate it into the active substances 21548 / A and 21548 / C.
EXAMPLE 3
With 0.5 liter of a mixture of 90 parts of methanol and 10 parts of water, 500 g of finely ground root bark of Bersama cf. hebecalyx, then percolates with 4.5 liters of methanol. By concentrating the extract solution in vacuo to about 0.5 liter, 5.26 g of crude crystallize can be obtained. To isolate the active substance 21548 / A which the extract contains in greater quantity, the crystalline mixture is boiled under reflux in a large volume of methanol until it has almost completely gone into solution. It is then filtered hot. The majority of the filter residue is substance 21548 / C and can be purified as in Example 1.
The filtrate is concentrated in vacuo until crystallization begins, then left to stand at 0 overnight. The crystallizate of the active substance 21548 / A which then separates can be further purified by repeated crystallizations from hot methanol.
EREMFLE 4
Is subjected to a distribution against the current, in a solvent system consisting of secondary butanol (saturated with water) as the upper layer and by water (saturated with secondary butanol) as the lower layer, 400 mg of a crystallizate crude of the active substance 21548 / A, obtained as described in Example 3 by recrystallization once in boiling methanol. The substance is dissolved in the first five tubes of a glass apparatus (according to Craig) in each time 25 cm3 of the upper and lower layer, then divided into 50 stages. The contents of tubes N 30 to 33, which contain the peak fractions, are combined and give, in the pure state, by crystallization from methanol, 125 mg of the active substance 21548 / A, with a melting point of 267 -268.
EXAMPLE 5
11 kg of Bersama root bark are finely ground, cf. hebecalyx, divide into two equal parts and extract as follows. Each time 5.5 kg of material is moistened with 550 cm3 of a binormal aqueous solution of acetic acid, mixed well, placed in a reflux extractor and extracted for 5 hours after adding 10 liters of benzene. The extract solution is then removed, 5 liters of fresh benzene in place and extracted for 5 more hours at reflux. The same operation is repeated twice for 3 to 4 hours, each time with 3 liters of benzene.
The extract solutions are combined and concentrated in vacuo until a resinous residue remains. The latter is taken up in one liter of chloroform, the major part passing into solution by shaking. The particles adhering to the wall of the flask and those suspended in the solution form a crystallizate which is relatively sparingly soluble in cold chloroform and which can be separated by filtration. The yield of crude crystallizate of light brown color obtained from the two charges (11 kg of roots) is in total about 8 g.
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The purification takes place by passing through the sodium salt, by mixing the crude crystallizate with 200 cm3 of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide, by filtering the suspension through a filter funnel with a glass filter (G 3) and by acidifying the filtrate with a concentrated methanolic solution of hydrochloric acid, whereby the substance precipitates as a weak yellowish crystallizate. Then by repeatedly extracting the filter residue and then acidifying, a total of 3.9 g of pale yellow crystals, melting point 315-321, is finally obtained in the pure state.
To further purify the substance, it is dissolved in hot chloroform, filtered the solution and, after adding 1/10 of the volume of methanol, concentrate under slightly reduced pressure to a small volume. If this operation is repeated, the pure substance is obtained in the form of small needles of a weak yellowish color, which melt at 320-323 (Koflerblock).
When the temperature is slowly increased, the substance already begins to slowly sublimate from around 260.
CLAIMS.
I. A process for preparing two active substances, their esters and salts of these compounds, said process being characterized in that the active substances 21548 / C and 21548 / A are obtained from plants of the family of melianthaceae and, if desired, converting the compounds obtained into their acid derivatives and / or preparing the salts of these compounds and / or converting the salts obtained into the free compounds.
The present process can be further characterized by the following points:
1) Plants of the Melianthaceae family are extracted, and from the extracts obtained, the active substances 21548 / C and 21548 / A are obtained.
2) We start with the bark of melianthaceae.
3) We start from Bersama cf. hebecalyx.
4) The plants are extracted with alcohols.
5) The plants are extracted with methanol.
6) The plants are extracted with aqueous methanol.
7) The plants are extracted with benzene.
8) The plants are extracted with benzene in the presence of an aqueous acid.
9) The active substances 21548 / C and 21548 / A are isolated by fractional crystallization.
10) Fractional crystallization is carried out from a mixture of methylcellosolve and water.
II) The fractional crystallization is carried out in a mixture of 2 parts by volume of methylcellosolve and one part by volume of water.
12) The active substances 21548/0 and 21548 / A are isolated by countercurrent distribution.
13) The distribution against the current is carried out in a mixture of butanol and water.
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