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PROCEDE POUR LA PREPARATION DE NOUVEAUX POLYESTERS SULFURIQUES ET DE
LEURS SELS.
L'invention présente a trait à la préparation de nouveaux polyes- ters sulfuriques et de leurs sels, qui possèdent une action inhibitrice sur la coagulation du sango
Le procédé suivant l'invention est caractérisé par le fait que l'on fait réagir l'acide chlorosulfonique avec le méthylglucoside de l'acide polygalacturonique ou le méthylester de ce corps, et que, si on le désire, l'on transforme le composé obtenu en un de ses sels, en particulier le sel sodiqueo En choisissant des conditions réactionnelles appropriées, on peut faire en sorte que les esters sulfuriques formés contiennent au moins Il $ en poids, de préférence 14 - 16 % en poids, de soufre (calculé par rapport au sel sodique), car c'est avec cette teneur en soufre, où presque tous les groupes hydres du méthylglucoside d'acide galacturonique (ou de son métyl- ester)
sont sulfurés;, que les nouveaux composés sont le plus actif.Il est recommandable d'effectuer la réaction avec l'acide chlorosulfonique en pré- sence d'une substance neutralisante d'acide. Comme telle,la pyridine est particulièrement indiquéeo Quand on utilise comme substance de départ le méthylester-méthylaglucoside de l'acide galacturonique, on obtient par sul- furation le méthylester de l'exter polysulfurique obtenu ;
de préférence après avoir transformé l'ester polysulfurique en son sel sodique, on peut hydrolyser le groupe méthylester complètement ou partiellement, par exemple .par action plus ou meins forte d'hydroxyde de sodium, pour obtenir de cette manière des produits actifs, dont les groupes carboxyliques sont ou bien tous libres ou bien partiellement estérifiés.
Pour l'usage pratique il est bon de transformer les esters po- lysulfuriques nouveaux en leurs sels; on utilise de préférence le sel so- diqueo A partir de ce dernier, on peut préparer à volonté, et ce de manière
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connue en soi, d'autres sels, par exemple avec d'autres métaux alcalins (tel que le potassium ou le lithium), avec des métaux alcalins terreux (tel que le calcium ou le magnésium), ou avec de l'ammoniaque, ou aussi avec des ba- ses organiques, telles que des amines primaires, secondaires, ou tertiaires (p. ex. l'éthylamine, la diéthylamine, la diéthanolamine, la pyridine, la triéthylamine ou la 2-diméthylamino-méthyl-dibenzofuranne), des diamines a- liphatiques (par exemple la décaméthylènediamine) ou aromatiques.
Un bon nom- bre de ces sels sont solubles dans l'eau, d'autres sont solubles dans une solution salée, d'autres sont insolubles et'peuvent être utilisés pour la préparation de substances injectables.
La méthylglucoside-méthylester de l'acide polygalacturonique, utilisé comme substance de départ, peut être obtenu à partir de pectine sui- vant les procédés décrits par Jansen et ses collaborateurs (Archives of Biochemistry, volume 21[1949], pages 149-157) et Morell et ses collabora- teurs (Journal of Biological Chemistry, volume 105 [1934], pages 1-13). Le méthylester est purifié de préférence suivant le procédé de Jansen et de ses collaborateurs, par exemple par dialyse contre l'eau. L'acide carboxylique libre correspondant peut être obtenu par saponification du méthylester.
Les nouveaux composés possèdent une action inhibitrice puissan- te sur la coagulation sanguine; par exemple celle du composé contenant 15,6 % de soufre correspond, dans l'ordre de grandeur, à celle de l'héparine. En même temps les nouvelles préparations s'avèrent pratiquement non toxiques aux doses entrant en ligne de compte pour des fins thérapeutiques; l'injec- tion en particulier ne provoque aucun symptôme d'irritation locale. Les nou- veaux composés peuvent être utilisés de ce fait aussi bien en thérapie que pour des travaux de laboratoire.
Exemple 1
Un mélange d'acide chlorosulfonique et de pyridine est préparé en ajoutant 280 ccm d'acide chlorosulfonique, entre 0 et 5 C, à 1400 ccm de pyridine sèche. La solution est ensuite chauffée à 70-75 C., et on y ajoute rapidement 40 gr de méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalac- turonique. Le mélange réactionnel est remué pendant 3 heures à 70 - 75 C., puis en agitant constamment, il est versé dans 6 litres de méthanol. Un sel de pyridine brut se sépare, on le lave deux fois par suspension et décanta- tion dans du méthanol, finalement il est centrifugé. Le sel est séché dans le vide sur du chlorure de calcium anhydre; on obtient environ 97 gr de sel de pyridine brut, blanc et hygroscopique.
Ce sel est purifié par dissolu- tion dans 380 ccm d'eau à 25 C.; on élimine une petite quantité d'un rési- du résineux par centrifugation. Le sel de pyridine pur est ensuite isolé par l'adjonction de la solution aqueuse à 5 litres d'éthanol. Le sel de py- ridine purifié peut être transformé en le sel de sodium en le dissolvant dans l'eau, en amenantn le pH de la solution à une valeur correspondant à 9,5 - 10 % d'hydroxyde de sodium, et en le versant rapidement, en remuant, dans cinq fois son volume de méthanol. Le produit précipité est centrifugé et lavé plusieurs fois dans la cuvette de centrifugation avec du méthanol puis de l'acétone. Il est ensuite séché dans le vide sur du chlorure de calcium anhydre.
Ce produit représente l'ester sulfurique du méthylester-méthylglu- coside de l'acide polygalacturonique sous forme du sel sodique. L'analyse de la substance sèche révèle une teneur d'environ 15,4 % de soufre et Il,3% de sodium.
Le sel de pyridine peut aussi être employé pour la préparation d'autres sels du méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré, tel que le sel de potassium ou de lithium, simplement en usant de la base appropriée et en utilisant le procédé mentionné'pour la préparation du sel de sodium.
Le sel de sodium est particulièrement approprié à la prépara- tion de ceux des sels du méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalactu- ronique sulfuré, qui ne sont que peu ou difficilement solubles dans l'eau.
Le sel de décaméthylènediamine, par exemple, peut être obtenu par l'adjonc- tion d'une solution d'acétate de décaméthylène-diamine dans du méthanol
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aqueux à une solution méthanolique aqueuse du sel sodique du méthylester- méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré; le sel de décaméthylè- nediamine obtenu ainsi ne se dissout que très difficilement dans l'eau, tan- dis qu'il est très aisément soluble dans une solution de sel physiologique ; le sel de 2-diméthylaminométhyl-dibenzofuranne peut être obtenu par mélange d'une solution sodique aqueuse du méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré avec une solution aqueuse de l'hydrochlorure de 2-diméthylaminométhyl-dibenzofuranne;
ce sel se sépare immédiatement sous forme d'un précipité blanc qui n'est soluble ni dans l'eau, ni dans une so- lution de sel à 1 %.
Exemple 2,
55 ccm d'hydroxyde de sodium 6 N sont ajoutés à une solution de 22,5 gr de méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalacturonique dans 400 ccm d'eau, et on laisse reposer le mélange réactionnel pendant 1 1/2 heu- re à la température ambiante, en remuant occasionnellement. Le pH du mélan- ge est amenéà 1 à l'aide d'acide chlorhydrique en excès et la solution est diluée avec de l'eau dans une proportion de 1:4. Après avoir laissé repo- ser pendant 1 heure à la température ambiante, la solution est versée dans un volume égal d'éthanol, puis le précipité laiteux est centrifugé.
Pour le purifier, le précipité obtenu est recristallisé dans 2400 ccm d'eau, 'filtré sur de la terre à infusoires et ajouté en remuant à un volume égal d'étha- nol (qui a été préalablement additionné d'une goutte d'acide chlorhydrique concentré). Le précipité blanc est réuni par centrifugation et séché dans le vide. Le produit, c'est-à-dire le méthylglucoside de l'acide polygalac- turonique, est obtenu sous forme d'une poudre fine, blanche et sèche. Le traitement de ce produit est poursuivi par la préparation à 0 C. d'un mé- lange composé de 105 ccm d'acide chlorosulfonique et de 525 ccm de pyridine sèche, qui est chauffé à 75 C., 13,5 gr du méthylglucoside de l'acide poly- galacturonique sont ensuite ajoutés à cette solution en remuant bien.
La température du mélange réactionnel est maintenue à 70 - 75 C. pendant 3 heures, puis, pendant qu'il est encore chaud, on le verse dans 2,5 litres de méthanol. Le sel de pyridine du méthylglucoside de l'acide polygalacturo- nique sulfuré, qui s'est séparé, est centrifugé, lavé dans la cuvette de centrifugation deux fois avec du méthanol et une fois avec de l'acétone, et finalement séché dans le vide. On obtient de cette manière un sel de pyri- dine brut du méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré, qui est purifié suivant le procédé décrit à l'exemple 1. Le sel de pyridine pu- rifié peut être transformé en le sel sodique, comme à l'exemple 1, par trai- tement avec de l'hydroxyde de sodium.
Le sel sodique du méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré est une poudre de couleur jaune-brune, qui contient 15,6 % de sodium et 14,1 % de soufre. Les autres sels du mé- thylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré peuvent être obtenus de manière semblable à celle décrite à l'exemple 1.
Exemple 3
10 gr du sel sodique du méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré sont dissous dans 250 ccm d'eau et additionnés de 25 ccm d'hydroxyde de sodium 5 N. Ensuite, on laisse reposer la solution pendant 3 heures à la température ambiante, puis elle est versée dans cinq fois son volume de méthanol. Le sel qui s'est séparé est centrifugé, lavé deux fois avec du méthanol et finalement séché dans le vide sur du chlorure de calcium anhydre ; obtient 10 gr du composé hydrolysé. Le sel hydrolysé contient 14% de soufre et 15,5 % de sodium. Ce produit correspond à celui de l'exemple 2.
Exemple
10 gr du sel sodique du méthylester-méthylglucoside de l'acide polygalacturonique sulfuré sont dissous dans 250 ccm d'hydroxyde de sodium 0,5 N ; on laisse reposer la solution pendant 30 minutes à la température ambiante (25 C), puis'on la verse ensuite en remuant dans cinq fois son volume de méthanol. Lé sel qui s'est séparé est centrifugé, lavé deux fois
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avec du méthanol et une fois avec de l'acétone, et finalement séché sur du chlorure de calcium anhydre; on obtient ainsi environ 10 gr d'un produit hydrolysé. Le sel obtenu contient 12,5 % de sodium et 14,1 % de soufre et consiste en un sulfate mixte de méthylglucoside d'acide polygalacturonique et de méthylester-méthylglucoside d'acide polygalacturonique.
On peut ob- tenir divers mélanges de méthylglucoside d'acide polygalacturonique sulfuré et de méthylester-méthylglucoside d'acide polygalacturonique sulfuré, en mo- difiant le pH, la température de la réaction, et la durée du traitement al- calin.
REVENDICATIONS.
1) Procédé pour la préparation de nouveaux polyesters sulfuri- ques et de leurs sels, caractérisé par le fait que l'on fait réagir le mé- thylglucoside de l'acide polygalacturonique ou son méthylester avec l'aci- de chlorosulfonique, et que le composé obtenu est transformé en un sel, de préférence en le sel sodique.
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PROCESS FOR THE PREPARATION OF NEW SULFURIC POLYESTERS AND
THEIR SALTS.
The present invention relates to the preparation of novel sulfuric polyesters and their salts, which have an inhibitory action on the coagulation of sango.
The process according to the invention is characterized in that the chlorosulfonic acid is reacted with the methylglucoside of polygalacturonic acid or the methyl ester of this body, and that, if desired, the compound is converted. obtained in one of its salts, in particular the sodium salt o By choosing suitable reaction conditions, it is possible to ensure that the sulfuric esters formed contain at least 11% by weight, preferably 14 - 16% by weight, of sulfur (calculated compared to sodium salt), because it is with this sulfur content, where almost all the hydra groups of the methylglucoside of galacturonic acid (or its methyl ester)
are sulphurous ;, that the new compounds are the most active. It is advisable to carry out the reaction with chlorosulphonic acid in the presence of an acid neutralizing substance. As such, pyridine is particularly suitable. When the methyl ester-methylaglucoside of galacturonic acid is used as starting substance, the methyl ester of the polysulphuric acid obtained is obtained by sulphurization;
preferably after having converted the polysulfuric ester into its sodium salt, the methyl ester group can be completely or partially hydrolyzed, for example by more or less strong action of sodium hydroxide, in order to obtain in this way active products, including carboxylic groups are either all free or partially esterified.
For practical use it is good to convert the new polysulphuric esters into their salts; the sodium salt is preferably used. From the latter, one can prepare at will, and this in a
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known per se, other salts, for example with other alkali metals (such as potassium or lithium), with alkali earth metals (such as calcium or magnesium), or with ammonia, or also with organic bases, such as primary, secondary, or tertiary amines (eg ethylamine, diethylamine, diethanolamine, pyridine, triethylamine or 2-dimethylamino-methyl-dibenzofuran), α-liphatic diamines (for example decamethylenediamine) or aromatic.
Many of these salts are soluble in water, others are soluble in saline solution, others are insoluble and can be used for the preparation of injectables.
Polygalacturonic acid methylglucoside-methyl ester, used as a starting material, can be obtained from pectin by the methods described by Jansen et al (Archives of Biochemistry, volume 21 [1949], pages 149-157). and Morell et al. (Journal of Biological Chemistry, volume 105 [1934], pages 1-13). The methyl ester is preferably purified according to the method of Jansen et al, for example by dialysis against water. The corresponding free carboxylic acid can be obtained by saponification of the methyl ester.
The new compounds have a potent inhibitory action on blood coagulation; for example that of the compound containing 15.6% sulfur corresponds, in order of magnitude, to that of heparin. At the same time the new preparations are found to be practically non-toxic at the doses which are taken into account for therapeutic purposes; the injection in particular does not cause any symptoms of local irritation. The new compounds can therefore be used both in therapy and for laboratory work.
Example 1
A mixture of chlorosulfonic acid and pyridine is prepared by adding 280 ccm of chlorosulfonic acid, between 0 and 5 C, to 1400 ccm of dry pyridine. The solution is then heated to 70-75 ° C., and 40 g of polygalacturonic acid methyl ester-methylglucoside are quickly added thereto. The reaction mixture is stirred for 3 hours at 70-75 C., then, with constant stirring, it is poured into 6 liters of methanol. A crude pyridine salt separates, it is washed twice by suspension and decantation in methanol, finally it is centrifuged. The salt is dried in vacuum over anhydrous calcium chloride; approximately 97 g of crude, white and hygroscopic pyridine salt are obtained.
This salt is purified by dissolving in 380 cc of water at 25 C .; a small amount of a resinous residue is removed by centrifugation. The pure pyridine salt is then isolated by adding the aqueous solution to 5 liters of ethanol. The purified pyridine salt can be converted into the sodium salt by dissolving it in water, bringing the pH of the solution to a value corresponding to 9.5 - 10% sodium hydroxide, and making it. quickly pouring, stirring, in five times its volume of methanol. The precipitated product is centrifuged and washed several times in the centrifugation cuvette with methanol and then acetone. It is then dried in vacuum over anhydrous calcium chloride.
This product represents the sulfuric ester of the methyl ester-methylglucoside of polygalacturonic acid as the sodium salt. Analysis of the dry substance revealed a content of approximately 15.4% sulfur and 11.3% sodium.
The pyridine salt can also be employed for the preparation of other salts of the sulfided polygalacturonic acid methyl ester-methylglucoside, such as the potassium or lithium salt, simply by using the appropriate base and using the method mentioned. for the preparation of sodium salt.
The sodium salt is particularly suitable for the preparation of those of the methyl ester-methylglucoside salts of sulfurized polygalacturonic acid which are only slightly or hardly soluble in water.
The decamethylenediamine salt, for example, can be obtained by adding a solution of decamethylenediamine acetate in methanol.
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aqueous to an aqueous methanolic solution of the sodium salt of the methyl ester-methylglucoside of sulfurized polygalacturonic acid; the decamethylenediamine salt thus obtained dissolves only with great difficulty in water, while it is very easily soluble in a physiological salt solution; the 2-dimethylaminomethyl-dibenzofuran salt can be obtained by mixing an aqueous sodium solution of the methyl ester-methylglucoside of polygalacturonic acid sulfur with an aqueous solution of 2-dimethylaminomethyl-dibenzofuran hydrochloride;
this salt immediately separates out as a white precipitate which is neither soluble in water nor in a 1% salt solution.
Example 2,
55 ccm of 6 N sodium hydroxide are added to a solution of 22.5 g of methyl ester-methylglucoside of polygalacturonic acid in 400 ccm of water, and the reaction mixture is left to stand for 1 1/2 hours. at room temperature, stirring occasionally. The pH of the mixture is brought to 1 using excess hydrochloric acid and the solution is diluted with water in a proportion of 1: 4. After allowing to stand for 1 hour at room temperature, the solution is poured into an equal volume of ethanol, then the milky precipitate is centrifuged.
To purify it, the precipitate obtained is recrystallized from 2400 ccm of water, filtered through infusoria earth and added with stirring to an equal volume of ethanol (which has previously been added with a drop of acid. hydrochloric acid concentrate). The white precipitate is combined by centrifugation and dried in vacuo. The product, i.e. polygalacturonic acid methylglucoside, is obtained as a fine, white and dry powder. The treatment of this product is continued by preparing at 0 C. of a mixture composed of 105 ccm of chlorosulfonic acid and 525 ccm of dry pyridine, which is heated to 75 C., 13.5 g of methylglucoside polygalacturonic acid is then added to this solution, stirring well.
The temperature of the reaction mixture is maintained at 70-75 ° C. for 3 hours, then, while still hot, it is poured into 2.5 liters of methanol. The pyridine salt of the sulfurized polygalacturonic acid methylglucoside, which separated, is centrifuged, washed in the centrifuge cup twice with methanol and once with acetone, and finally dried in vacuum. . In this way, a crude pyridine salt of the methylglucoside of sulfided polygalacturonic acid is obtained, which is purified according to the method described in Example 1. The purified pyridine salt can be converted into the sodium salt, as in Example 1, by treatment with sodium hydroxide.
Polygalacturonic acid sulfide methylglucoside sodium salt is a yellow-brown powder, which contains 15.6% sodium and 14.1% sulfur. The other salts of sulfide polygalacturonic acid methylglucoside can be obtained in a manner similar to that described in Example 1.
Example 3
10 g of the sodium salt of the methyl ester-methylglucoside of sulfurized polygalacturonic acid are dissolved in 250 ccm of water and added with 25 ccm of 5N sodium hydroxide. Then, the solution is left to stand for 3 hours at room temperature. , then it is poured into five times its volume of methanol. The salt which separated out is centrifuged, washed twice with methanol and finally dried in vacuum over anhydrous calcium chloride; obtains 10 g of the hydrolyzed compound. Hydrolyzed salt contains 14% sulfur and 15.5% sodium. This product corresponds to that of example 2.
Example
10 g of the sodium salt of the methyl ester-methylglucoside of sulfurized polygalacturonic acid are dissolved in 250 cc of 0.5 N sodium hydroxide; the solution is left to stand for 30 minutes at room temperature (25 ° C.), then it is poured with stirring into five times its volume of methanol. The salt which has separated is centrifuged, washed twice
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with methanol and once with acetone, and finally dried over anhydrous calcium chloride; approximately 10 g of a hydrolyzed product are thus obtained. The resulting salt contains 12.5% sodium and 14.1% sulfur and consists of a mixed sulfate of polygalacturonic acid methylglucoside and polygalacturonic acid methyl ester-methylglucoside.
Various mixtures of sulfurized polygalacturonic acid methylglucoside and sulfurized polygalacturonic acid methyl ester-methylglucoside can be obtained by varying the pH, reaction temperature, and duration of alkaline treatment.
CLAIMS.
1) Process for the preparation of novel sulfuric polyesters and their salts, characterized in that the methylglucoside of polygalacturonic acid or its methyl ester is reacted with chlorosulfonic acid, and that the compound obtained is converted into a salt, preferably into the sodium salt.