AT500850B1 - Rekombinante dna-vektoren zur expression von somatotropinen - Google Patents

Rekombinante dna-vektoren zur expression von somatotropinen Download PDF

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli

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Description

2 AT 500 850 B1
Querverweis auf verwandte Anmeldungen
Diese Anmeldung beansprucht die Priorität gemäß 35 U.S.C. 119(e) der Anmeldung Nr. 60/258,291, die am 26. Dezember 2000 eingereicht wurde, deren Gesamtheit hierin durch Bezugnahme mit eingeschlossen ist.
Hintergrund der Erfindung
Bei Säugern werden Wachstumshormone (Somatotropine) anfänglich in einer Vor-Hormon-Form exprimiert, die eine Leader-Sequenz umfasst, welche während der Sezernierung des reifen, biologisch aktiven Hormons aus Hypophysenzellen entfernt wird. Wie hierin verwendet, bedeutet „reifes“ Somatotropin („ST“), dass es eine Aminosäurenlänge im Wesentlichen wie jene des in den Blutstrom des Tieres sezernierten ST hat, z.B. N-Ala-Phe-Pro- oder N-Phe-Pro-bovines ST, N-Phe-Pro-humanes, -Schweine-(identisch mit Hunde-) oder -Pferde-ST, usw.
Die Bemühungen, humane und bovine STs in Nicht-Sekretionssystemen unter Verwendung von Strukturgenen mit den Sequenzen ihrer cDNAs bakteriell zu exprimieren waren zuerst erfolglos. Ein Erfolg war den Forschern beschieden, nachdem sie stille Mutationen in das vordere Ende des Struktur-Gens eingeführt hatten. P.H. Seeburg et al. führten die ursprünglichen Schwierigkeiten darauf zurück, dass die Translation durch eine Sekundärstruktur der mRNA, die der cDNA entsprach, behindert wurde, und lehrten eine Verringerung einer solchen Sekundärstruktur, um eine signifikante Expression zu ermöglichen. DNA, Bd. 2, Nr. 1, 1983, s. 37-45; U.S.-Patente 5,254,463 und 5,260,201.
Es war möglich, kommerziell tragbare ST-Expressionsmengen zu erhalten, indem man DNA verwendete, die bestimmte stille Mutationen enthielt. Der Bedarf an neuen Vektoren, die hoch produktiv und weniger teuer in der Verwendung sind, war jedoch schwer zu decken, weil man die Beziehungen zwischen den Konfigurationen und Expressionsmengen von „reifen“ Soma-totropin-Vektoren noch immer nicht genau versteht und diese schwer vorauszusagen sind.
Zusammenfassung der Erfindung
Es wird hier eine Familie von ST-Vektoren beschrieben, mit welchen Mikroorganismen, vorzugsweise Bakterien wie beispielsweise - jedoch nicht ausschließlich - E. coli, transformiert werden können, um die Expression von bovinem ST („bST“) in großen Mengen unter Verwendung herkömmlicher Fermentations- und Induktionsbedingungen zu ermöglichen. Für diese Familie dienen die 44 in Tabelle I angeführten Vektoren mit den SEQ. ID Nr. 1 bis 44 als Beispiel. Jede Sequenz erstreckt sich von einer EcoRI-Stelle (GAATTC) vor der Promotor-Region über den Promotor, die Ribosomen-Bindungssstelle („RBS“) und das gesamte bST-Struktur-Gen und endet mit dem Translations-Stop-Codon für das Struktur-Gen.
Kurze Beschreibung der Zeichnung
Fig. 1: DNA Sequenzvergleich von Fragmenten der Expressionsvektoren pXT674 (SEQ. ID Nr. 49) und pXT709 (SEQ. ID Nr. 50).
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Jeder der Vektoren mit Seq. Nr. 1-44 inkludiert einen synthetischen Promotor, hierin mit „cpex-20“ bezeichnet, welcher in der am 31. März 2000 eingereichten PCT-Anmeldung PCT/US00/40014, die die Priorität von der am 1. April 1999 eingereichten provisorischen U.S. Patentanmeldung 60/127,449 beansprucht, geoffenbart ist. Dieser Promotor befindet sich zwischen der EcoRI-Stelle (GAATTC) und der ASCI-Stelle (GGCGCGCC). Verschiedene andere herkömmliche und neue Promotoren können in diesen Vektoren an Stelle von cpex-20 verwendet werden, um gute ST-Expressionsmengen zu erreichen. 3 AT 500 850 B1
Die Seq. ID Nr. 1-17 haben eine identische RBS CATAACATCAAGAGGATATGAAATT (SEQ. ID Nr. 45), hierin mit „dps“ bezeichnet, die für E. coli nativ ist. Die Seq. ID Nr. 18-29 haben eine neue synthetische RBS GTACAAATCATAGAGGGTATTTAAT (SEQ. ID Nr. 46) gemeinsam, die hierin mit „L49“ bezeichnet ist. Die Seq. ID Nr. 30-42 haben eine zweite neue synthetische RBS AGACACTAAATAGAGGGTATTTAATT (SEQ. ID Nr. 47) gemeinsam, die hierin mit „L437“ bezeichnet ist. Die Seq. ID Nr. 43-44 haben eine dritte neue synthetische RBS TAAAAGAGAC-TAGGAGGAGATTAGA (SEQ. ID Nr. 48) gemeinsam, die hierin mit „R806“ bezeichnet ist. Jede RBS befindet sich zwischen der Ascl-Stelle und dem ATG-Translations-Start-Codon des bST-Struktur-Gens. Die Ascl-Stelle beginnt an der Koordinate 76 jeder Sequenz. Das ATG-Start-Codon beginnt etwa an der Koordinate 109; dies kann geringfügig variieren, weil die verwendeten RBS in der Länge etwas verschieden sind.
Alle Vektoren mit den SEQ. ID Nr. 1-44 weisen Struktur-Gene auf, die sich von der für „reifes“ bST codierenden cDNA dadurch unterscheiden, dass sie verschiedene Anordnungen stiller Veränderungen innerhalb der für die ersten 16 Codons von bST codierenden Nukleotide enthalten. Wie in Fig. I gezeigt, unterscheidet sich der Vektor pXT709 (SEQ. ID Nr. 16) von pXT674 (SEQ. ID Nr. 8) dadurch, dass er zusätzliche 12 Codons innerhalb des Struktur-Gens gegenüber jenen der cDNA verändert hat, 11 zu von E-coli bevorzugten Codons, und ein zwölftes, um eine unerwünschte Restriktions-Stelle zu eliminieren, indem das Translations-Stop-Codon gegen zwei Tandem-Stop-Codons getauscht wird, und indem ein anderer Terminator substituiert wird, der zwei lacllV5-Promotoren im Tandem aufweist. pXT703 (SEQ. ID Nr. 15) und pXT747 (SEQ. ID Nr. 17) unterscheiden sich von pXT601 (SEQ. ID Nr. 2) bzw. pXT686 (SEQ. ID Nr. 13) auf dieselbe Weise.
Jeder der Vektoren mit den SEQ. ID Nr. 1 bis 44 exprimierten reifes bST in nicht optimierten Mengen von mindestens etwa 3,5 Gramm/Liter (g/l), die meisten davon über 4,5 g/l, und einige mit 7 g/l oder darüber, wobei die in Bogosian et al., J. Biol. Chem., Bd. 264, S.531-39, 5. Jänner 1989, beschriebenen Fermentationsbedingungen verwendet wurden, außer dass 50 ppm Nali-dixinsäure an Stelle von Indolacrylsäure als Inducer verwendet wurden.
Die Expressionsmengen der reifen ST-Vektoren sind aus den veröffentlichten Lehren, z.B. P.H.Seeburg et al., sehr schwer vorauszusagen. Tatsächlich fand man unter Verwendung von Berechnungen, wie sie in Seeburg et al. empfohlen werden, dass die Vektoren mit den SEQ. ID Nr. 1 bis 17, 30 bis 35 und 37 bis 42 statt einer geringeren eine größere mRNA-Sekundär-Struktur aufweisen als jene der bST-cDNA.
Sequenzprotokoll < 110> MONSANTO TECHNOLOGY LLC Bogosian, Gregg O'Neil, Julia P.
Aardema, Noelle D. <120> RECOMBINANTE DNA-VEKTOREN ZUR EXPRESSION VON SOMATOTROPINEN <130> R 41503 <150> US 60/258,291; PCT/US01/49977 <151 > 2000-12-26;2001-12-21 <160> 50 <170> Patentin Version 3.1 <210> 1 4 AT 500 850 B1 <211> <212> <213> 684
DNA
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<211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 682 <400> 11 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gttcccagcc 120 atgtcattgt ccggactgtt tgcgaacgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210> 12 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220 <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 683 <400> 12 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gttcccagcc 120 atgtcattgt ccggactctt tgcaaatgct gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 13
<211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 686 <400 13 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gttcccagcc 120 atgtcattgt ccggactctt tgcgaacgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 AT 500 850 B1 9 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 14
<211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 689 <400> 14 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gtttccagcc 120 atgtcattgt ccggactgtt tgcaaacgct gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 15
<211> 687 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 703 <400> 15 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gtttccagcc 120 atgtcattgt ccggactgtt tgcgaacgct gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gcgttactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc gacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 agctggcttg ggccgctgca gttcctcagc cgtgtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 accagcgacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgtgagctgg aagatggcac cccgcgtgct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccgtaagg acctgcataa gacggagacg tacctgcgtg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcga gctgcgcctt ctaatag 687 <210> 16 1 0 AT 500 850 B1 <211> <212> <213> 687
DNA
Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 709 <400> 16 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gtttccagcc 120 atgagcttgt ccggactctt tgccaatgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gcgttactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc gacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 agctggcttg ggccgctgca gttcctcagc cgtgtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 accagcgacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgtgagctgg aagatggcac cccgcgtgct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccgtaagg acctgcataa gacggagacg tacctgcgtg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcga gctgcgcctt ctaatag 687 <210> 17
<211> 687 <212> DNA <213> Artifizielle Seq uenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 747 <400> 17 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gttcccagcc 120 atgtcattgt ccggactctt tgcgaacgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gcgttactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc gacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 agctggcttg ggccgctgca gttcctcagc cgtgtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 accagcgacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgtgagctgg aagatggcac cccgcgtgct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccgtaagg acctgcataa gacggagacg tacctgcgtg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcga gctgcgcctt ctaatag 687
<210> 18 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 487 <400> 18 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttcctgcg 120 atgtcattgt ccggattgtt tgcgaatgcg gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 AT 500 850 B1 gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ctag 684 1 1 gctgctgaca ccttcaaaga atccagaaca cccaggttgc aatgaggccc agcagaaatc tcgtggcttg ggcccctgca acctcggacc gtgtctatga cgggagctgg aagatggcac tttgacacaa acatgcgcag ttccggaagg acctgcataa ggggaggcca gctgcgcctt <210 19 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220 <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 536 <400 19 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggattgtt tgcaaatgcc gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210 20 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 541 <400 20 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggattgtt tgcgaacgcc gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 21 1 2 AT 500 850 B1
<211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220 <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 542 <400 21 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttcctgca 120 atgtcattgt ccggactttt tgccaacgca gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210> 22 <211> 684 <212> DNA <213> Artifiziel le Seq uenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 548 <400> 22 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggactctt tgcaaacgcc gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210> 23 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 549 <400> 23 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttcctgca 120 atgtccttgt ccggactttt tgccaatgca gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 1 3 AT 500 850 B1 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210> 24 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 562 <400> 24 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagcc 120 atgtcattgt ccggactttt tgccaacgca gtcctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210> 25 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 576 <400> 25 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggactgtt tgcgaacgcg gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 26 14 AT 500 850 B1 <211> <212> <213> 684
DNA
Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 579 <400> 26 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggactttt tgccaacgcg gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210 27
<211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220 <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 580 <400> 27 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggactgtt tgccaacgcc gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684
<210> 28 <211> 684 <212> DNA <213> Artifiziel le Seq uenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 581 <400> 28 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagcc 120 atgtccttgt ccggactttt tgccaacgca gtcctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 1 5 AT 500 850 B1 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 29 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Seq uenz <220 <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 584 <400 29 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccgtacaaa tcatagaggg tatttaatat gtttccagca 120 atgtcattgt ccggactttt tgcgaatgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 30 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 491 <400> 30 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 catgtccttg tccggattgt ttgcgaatgc ggtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 31 16 AT 500 850 B1 685
DNA
Artifizielle Sequenz <211> <212> <213> <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 529 <400> 31 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 aatgagcttg tccggattgt ttgcgaatgc ggtgctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 32 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 530 <400> 32 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttccagc 120 catgtcattg tccggactct ttgcgaatgc ggtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 33 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Seq uenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 619 <400> 33 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 gatgagcttg tccggattgt ttgcgaatgc agtgctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 1 7 AT 500 850 B1 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 34
<211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 605 <400> 34 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttccagc 120 aatgtccttg tccggactgt ttgcgaacgc agtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685
<210> 35 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 606 <400> 35 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 aatgtccttg tccggattgt ttgcgaacgc ggtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 36 1 8 AT 500 850 B1 685
DNA
Artifizielle Sequenz <211> <212> <213> <220 <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 607 <400> 36 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 catgtccttg tccggactct ttgccaacgc tgtgctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 37 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 620 <400> 37 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 aatgagcttg tccggacttt ttgcgaatgc tgtactccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210 38 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 631 <400> 38 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 catgagcttg tccggattgt ttgcaaacgc cgtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 1 9 AT 500 850 B1 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685
<210> 39 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 632 <400> 39 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttccagc 120 catgtcattg tccggattgt ttgcaaacgc tgtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685
<210> 40 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 633 <400> 40 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttccagc 120 catgtcattg tccggacttt ttgcgaacgc tgtgctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 41 20 AT 500 850 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 635 <400> 41 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgtttcctgc 120 catgtcattg tccggacttt ttgccaatgc ggtcctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 42 <211> 685 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 681 <400> 42 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gccagacact aaatagaggg tatttaatta tgttcccagc 120 catgtcattg tccggacttt ttgccaacgc ggtgctccgg gctcagcacc tgcatcagct 180 ggctgctgac accttcaaag agtttgagcg cacctacatc ccggagggac agagatactc 240 catccagaac acccaggttg ccttctgctt ctctgaaacc atcccggccc ccacgggcaa 300 gaatgaggcc cagcagaaat cagacttgga gctgcttcgc atctcactgc tcctcatcca 360 gtcgtggctt gggcccctgc agttcctcag cagagtcttc accaacagct tggtgtttgg 420 cacctcggac cgtgtctatg agaagctgaa ggacctggag gaaggcatcc tggccctgat 480 gcgggagctg gaagatggca ccccccgggc tgggcagatc ctcaagcaga cctatgacaa 540 atttgacaca aacatgcgca gtgacgacgc gctgctcaag aactacggtc tgctctcctg 600 cttccggaag gacctgcata agacggagac gtacctgagg gtcatgaagt gccgccgctt 660 cggggaggcc agctgcgcct tctag 685 <210> 43 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 483 <400> 43 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcctaaaaga gactaggagg agattagaat gttcccagca 120 atgagtttgt ccggactgtt tgcgaacgcc gtgctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 21 AT 500 850 B1 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 44 <211> 684 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Somatropin-Expressionsvektor pXT 564 <400> 44 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcctaaaaga gactaggagg agattagaat gttcccagca 120 atgtcattgt ccggactgtt tgccaatgcg gtcctccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctag 684 <210> 45 <211> 25 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Synthetisches Oligonukleotid <400> 45 cataacatca agaggatatg aaatt 25 <210> 46 <211> 25 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220 <223> Synthetisches Oligonukleotid <400 46 gtacaaatca tagagggtat ttaat 25 <210> 47 22 AT 500 850 B1 <211> <212> <213> 26
DNA
Artifizielle Sequenz <220> <223> Synthetisches Oligonukleotid <400> 47 agacactaaa tagagggtat ttaatt 26
<210> 48 <211> 25 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Synthetisches Oligonukleotid <400> 48 taaaagagac taggaggaga ttaga 25
<210> 49 <211> 983 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Synthetischer Konstrukt für die Expression von bovinem Somatotropin <400> 49 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gtttccagcc 120 atgagcttgt ccggactctt tgccaatgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gagatactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc cacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 tcgtggcttg ggcccctgca gttcctcagc agagtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 acctcggacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgggagctgg aagatggcac cccccgggct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccggaagg acctgcataa gacggagacg tacctgaggg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcca gctgcgcctt ctagaagctt aattctcact cattaggcac cccaggcttt 720 acactttatg cttccggctc gtataatgtg tggaattgtg agcggataac aatttcacac 780 aggaaacagc tgattgccct tcaccgcctg gcctccgttg agccatctgg atcggcagcg 840 ttgtcttcat caaccggaac gagcatgccg gagagcagct cactcattag gcaccccagg 900 ctttacactt tatgcttccg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc 960 acacaggaaa cagaattaag ctt 983 <210> 50
<211> 977 <212> DNA <213> Artifizielle Sequenz <220> <223> Synthetischer Konstrukt für die Expression von bovinem Somatotropin

Claims (6)

  1. 23 AT 500 850 B1 <400> 50 gaattctact gtatgagcat acagttaagg gttgacaacc gatatttatt cacttaatat 60 ataaatatca actgaggcgc gcccataaca tcaagaggat atgaaattat gtttccagcc 120 atgagcttgt ccggactctt tgccaatgct gtactccggg ctcagcacct gcatcagctg 180 gctgctgaca ccttcaaaga gtttgagcgc acctacatcc cggagggaca gcgttactcc 240 atccagaaca cccaggttgc cttctgcttc tctgaaacca tcccggcccc gacgggcaag 300 aatgaggccc agcagaaatc agacttggag ctgcttcgca tctcactgct cctcatccag 360 agctggcttg ggccgctgca gttcctcagc cgtgtcttca ccaacagctt ggtgtttggc 420 accagcgacc gtgtctatga gaagctgaag gacctggagg aaggcatcct ggccctgatg 480 cgtgagctgg aagatggcac cccgcgtgct gggcagatcc tcaagcagac ctatgacaaa 540 tttgacacaa acatgcgcag tgacgacgcg ctgctcaaga actacggtct gctctcctgc 600 ttccgtaagg acctgcataa gacggagacg tacctgcgtg tcatgaagtg ccgccgcttc 660 ggggaggcga gctgcgcctt ctaatagctc gagtctagac tcactcatta ggcaccccag 720 gctttacact ttatgcttcc ggctcgtata atgtgtggaa ttgtgagcgg ataacaattt 780 cacacaggaa aaagctgatt gcccttcacc gcctggcctc cgttgagcca tctggatcgg 840 cagcgttgtc ttcatcaacc ggaacgagca tgccggagag cagctcactc attaggcacc 900 ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca 960 atttcacaca gaagctt 977 Patentansprüche: 1. Vektor zur Expression von reifem bovinem Somatotropin in E. coli, dadurch gekennzeichnet, dass er eine DNA-Sequenz, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ. ID Nr. 1 bis 44, umfasst.
  2. 2. Vektor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass er eine DNA-Sequenz, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ. ID Nr. 1 bis 17, SEQ. ID Nr. 30 bis 35 und SEQ. ID Nr. 37 bis 42, aufweist.
  3. 3. Vektor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass er die DNA-Sequenz SEQ. ID Nr. 16 aufweist.
  4. 4. E. coli, transformiert mit einem Vektor nach Anspruch 1, 2 oder 3.
  5. 5. Verfahren zur Herstellung von reifem bovinem Somatotropin, umfassend die Fermentierung einer E. coli nach Anspruch 4 und die Induktion der Expression des Somatotropins.
  6. 6. DNA, die als E. coli-Ribosomen-Bindungsstelle fungiert, umfassend die Sequenzen SEQ. ID Nr. 46, SEQ. ID Nr. 47 oder SEQ, ID Nr. 48. Hiezu 2 Blatt Zeichnungen
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