WO2024106821A1 - 피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 Download PDF

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WO2024106821A1
WO2024106821A1 PCT/KR2023/017503 KR2023017503W WO2024106821A1 WO 2024106821 A1 WO2024106821 A1 WO 2024106821A1 KR 2023017503 W KR2023017503 W KR 2023017503W WO 2024106821 A1 WO2024106821 A1 WO 2024106821A1
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peptide
skin
melanosomes
present
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PCT/KR2023/017503
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정용지
김은미
이응지
정민경
정다원
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(주)케어젠
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    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic

Definitions

  • melanin The synthesis process of melanin is ultimately synthesized from L-tyrosine through DOPA, DOPAquinone, DOPAchrome, and DHI (5,6-dihydroxyindole).
  • DOPA DOPAquinone
  • DOPAchrome DOPAchrome
  • DHI 5,6-dihydroxyindole
  • Patent Document 1 WO 2020/153819
  • Patent Document 2 Republic of Korea Patent No. 10-1869783
  • the purpose of the present invention is to provide a novel peptide with skin whitening activity.
  • Another object of the present invention is to provide a composition for skin whitening containing the peptide having the above-described activity as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of hyperpigmentation disease containing the peptide having the above-described activity as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for skin whitening containing the peptide having the above-described activity as an active ingredient.
  • One aspect of the present invention provides a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • Another aspect of the present invention provides a composition for skin whitening containing the above peptide as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating hyperpigmentation disease, comprising the peptide as an active ingredient.
  • a peptide containing the amino acid sequence disclosed in SEQ ID NO: 1 is provided.
  • peptide refers to a linear molecule formed by linking amino acid residues together through peptide bonds.
  • the peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention can be used without modification, but within the range that does not affect the original activity of the peptide, such as skin whitening activity, amino acid residue deletion, insertion, substitution, etc. Alternatively, variants or fragments of amino acids having different sequences can be used through a combination thereof.
  • the peptide of the present invention can be modified by phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, farnesylation, etc., to the extent that its activity is not changed. .
  • the peptide of the present invention includes a peptide containing an amino acid sequence substantially identical to the peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, and a variant or active fragment thereof.
  • the substantially identical amino acid sequence refers to an amino acid sequence having sequence identity of at least 75%, for example, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, and at least 97%, respectively, with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the peptide may additionally include a targeting sequence, a tag, a labeled residue, and an amino acid sequence prepared for the specific purpose of increasing half-life or peptide stability.
  • the peptide of the present invention may have N-terminal and/or C-terminal modifications induced to select a portion of the amino acid sequence and increase its activity. Through these N-terminal and/or C-terminal modifications, the stability of the peptide of the present invention can be significantly improved, for example, the half-life of the peptide can be increased when administered in vivo.
  • the term “stability” is meant to include not only in vivo stability, which protects the peptide of the present invention from attack by protein-cleaving enzymes in vivo, but also storage stability (e.g., storage stability at room temperature).
  • the N-terminal modification includes an acetyl group, a fluoreonylmethoxycarbonyl group, a formyl group, a palmitoyl group, and a myristyl group at the N-terminus of the peptide. ), a stearyl group, and polyethylene glycol (PEG).
  • the C-terminal modification may be the binding of a hydroxyl group (-OH), amino group (-NH2), azide (-NHNH2), etc. to the C-terminus of the peptide, but is not limited thereto. .
  • Pheptide of the present invention can be produced by various methods widely known in the technical field to which the present invention pertains.
  • the peptides of the present invention can be synthesized using chemical synthesis methods known in the art, particularly solid-phase synthesis techniques (Merryfield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54 (1963); Stewart, et al. , Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem Co.: Rockford, 111 (1984)) or liquid phase synthesis technology (US Patent No. 5,516,891).
  • the peptide of the present invention has skin whitening activity.
  • the peptide of the present invention has the activity of inhibiting the incorporation of melanosomes in keratinocytes or promoting the decomposition of melanosomes.
  • Melanosomes produced in melanocytes move from melanocytes to keratinocytes.
  • the movement of melanosomes to keratinocytes involves the process of release of melanosomes from melanocytes and the process of incorporation of melanosomes into keratinocytes. Includes.
  • the incorporation process of melanosomes can be expressed differently as uptake of melanosomes by keratinocytes or phagocytosis of melanosomes by keratinocytes.
  • PAR2 prote activated receptor 2
  • TLR3 Toll-like receptors 3
  • KGFR keratinocyte growth factor receptors
  • the peptide of the present invention is selected from the group consisting of PAR2 (protease activated receptor 2) gene, TLR3 (Toll-like receptors 3) gene, and KGFR (keratinocyte growth factor receptors) gene in keratinocytes. Inhibits the expression of one or more genes.
  • the PAR2 is a receptor protein present in the cell membrane and is known to regulate inflammatory responses, obesity, metabolism, and cancer, and to act as a sensor for proteolytic enzymes during infection.
  • PAR2 protein is present in the membrane of keratinocytes and is involved in the absorption (invagination) of melanosomes by keratinocytes. It is known that inhibiting the activity of the PAR2 protein inhibits the absorption of melanosomes by keratinocytes. (Exp Cell Res. 2000 Jan 10;254(1):25-32; Pigment Cell Res. 2001 Aug;14(4):236-42; Exp Dermatol. 2003;12 Suppl 2:5-12.).
  • the TLR3 protein is known to be a receptor protein that recognizes pathogens and plays an important role in activating innate immunity. It is known that stimulation of TRR 3 protein in keratinocytes leads to improved absorption of melanosomes (J Dermatol Sci. 2019 Dec;96(3):168-177), and in melanocytes, TRR3 protein promotes keratin formation of melanosomes. It is also known to promote migration into cells (Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9769).
  • the KGFR is a tyrosine kinase receptor, expressed in many types of epithelial cells, activated by four known ligands, FGF-1, FGF-3, FGF-7, and FGF-10, and is involved in epithelial cell proliferation, differentiation, and wound recovery. It is known to be involved in In addition, KGFR is also known to promote the movement of melanosomes into keratinocytes (J Invest Dermatol. 2005 Dec;125(6):1190-9., Journal of Investigative Dermatology Vol 128, Issue 3, March 2008 , p. 558-567).
  • the peptide of the present invention can exert skin whitening activity and the prevention or treatment effect of hyperpigmentation disease through melanosome incorporation inhibitory activity and melanosome decomposition activity.
  • composition for skin whitening containing a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient is provided.
  • the peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention has skin whitening activity through the mechanism as described above.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating hyperpigmentation disease, comprising a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition containing the peptide as an active ingredient inhibits the incorporation of melanosomes into keratinocytes or promotes the decomposition of melanosomes.
  • hyperpigmentation disease refers to a disease caused by an excessive increase in the amount of melanin in the skin. In this way, the skin color becomes darker due to an excessive increase in the amount of melanin in the skin.
  • causes of hyperpigmentation disease may be, but are not limited to, for example, exposure to sunlight, inflammation of the skin such as acne (post-inflammatory pigmentation), trauma, hormonal imbalance, or medication.
  • the hyperpigmentation disease may be freckles, freckles, age-related pigment spots, solar lentigo, or hyperpigmentation that occurs after inflammation of the skin.
  • Hyperpigmentation that occurs after inflammation of the skin may be hyperpigmentation that occurs after trauma, ultraviolet rays, or cutaneous inflammatory disease such as acne.
  • terapéuticaally effective amount refers to an amount sufficient for the peptide, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, to achieve its activity or efficacy, for example, for the treatment or prevention of hyperpigmentation disease. It refers to an amount sufficient to achieve efficacy.
  • treatment means alleviating a disease or disorder, and includes all actions that improve or beneficially change the symptoms of a disease by arresting or reducing the progression of the disease or one or more clinical symptoms thereof.
  • prevention or treatment of hyperpigmentation disease may include removing the cause of hyperpigmentation in the skin or inhibiting the progression of hyperpigmentation, and specifically, inhibiting the incorporation of melanosomes into keratinocytes or melanosomes. This may promote the decomposition of .
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutically acceptable carriers are commonly used in formulations and include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, Includes, but is not limited to, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include, but is not limited to, lubricants, wetting agents, sweeteners, flavoring agents, emulsifiers, suspending agents, preservatives, etc.
  • Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations are described in detail in Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (19th ed., 1995, Williams & Wilkins).
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by any route suitable for treating hyperpigmentation disease, for example, it can be administered orally or parenterally, and in the case of parenteral administration, intravenous injection, subcutaneous injection, It can be administered by intramuscular injection, intraperitoneal injection, topical administration, or transdermal administration. Since the pharmaceutical composition of the present invention has preventive or therapeutic activity for skin hyperpigmentation disease, it is preferably applied topically, such as applied to the skin.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is prepared in unit dosage form by formulating it using a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient according to a method that can be easily performed by those skilled in the art. Alternatively, it can be manufactured by placing it in a multi-capacity container. At this time, the formulation may be in the form of a solution, suspension, or emulsion in an oil or aqueous medium, or may be in the form of an extract, powder, granule, tablet, or capsule, and may additionally contain a dispersant or stabilizer.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be an external skin preparation.
  • the external skin preparation is a preparation that can be used by applying it to the outside of the skin. When the pharmaceutical composition of the present invention is used as an external skin preparation, it may be applied to the skin, specifically to the skin area where hyperpigmentation has occurred.
  • the external skin preparation may be a cream, gel, ointment, skin emulsifier, skin suspension, transdermal delivery patch, drug-containing bandage, lotion, or a combination thereof.
  • the skin external preparation includes ingredients commonly used in skin external preparations such as cosmetics and medicines, such as aqueous ingredients, oil-based ingredients, powder ingredients, alcohols, moisturizers, thickening agents, ultraviolet ray absorbers, whitening agents, preservatives, antioxidants, surfactants, Fragrances, colorants, various skin nutrients, or combinations thereof may be appropriately mixed according to need.
  • the skin external preparations include metal sequestrants such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid, caffeine, tannin, belafamil, licorice extract, glablidin, and calin.
  • Hot water extract of fruit, various herbal medicines, medicines such as tocopherol acetate, glythylitic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, ascorbate glucoside, arbutin, kojic acid, glucose, fructose, Sugars such as trehalose can also be appropriately mixed.
  • the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening containing a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • a cosmetic composition containing the peptide of the present invention as an active ingredient inhibits the incorporation of melanosomes into keratinocytes or promotes the decomposition of melanosomes.
  • the cosmetic composition containing the peptide of the present invention as an active ingredient is a PAR2 (protease activated receptor 2) gene, a TLR3 (Toll-like receptors 3) gene, and a KGFR (keratinocyte growth factor receptors) gene in keratinocytes. Inhibits the expression of one or more genes selected from the group consisting of.
  • the cosmetic composition may be prepared in any formulation commonly manufactured in the technical field to which the present invention pertains, and may be an external skin preparation.
  • it can be formulated as a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, and spray. It is not limited.
  • the cosmetic composition includes softening lotion, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray, powder, hair tonic, hair cream, hair lotion, hair shampoo, and hair rinse. , hair conditioner, hair spray, hair aerosol, pomade, solution such as gel, brush gel, emulsion, oil, wax, aerosol, etc., but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition of the present invention may contain other additives such as excipients and carriers, and it is possible to apply and mix the usual ingredients mixed in general skin cosmetics as necessary.
  • the formulation of the cosmetic composition is paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or oxidized carrier ingredient. Zinc, etc. may be used.
  • the formulation of the cosmetic composition is powder or spray
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, or polyamide powder may be used as the carrier ingredient.
  • chlorofluorohydrocarbon may be additionally used.
  • propane/butane, or dimethyl ether may be included, but are not limited thereto.
  • a solvent, solubilizing agent, or emulsifying agent may be used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, and benzyl.
  • Benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol, or sorbitan fatty acid ester may be used.
  • the carrier component includes water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, and a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethyl sorbitol ester, and polyoxyethylene sorbitan ester.
  • a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethyl sorbitol ester, and polyoxyethylene sorbitan ester.
  • microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, or tracant, etc. can be used.
  • the carrier ingredients include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, and fatty acid.
  • Amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester can be used.
  • the peptide of the present invention may be mixed with base ingredients for forming a shampoo, such as a thickener, surfactant, viscosity modifier, moisturizer, pH adjuster, preservative, essential oil, etc.
  • CDE may be used as the thickener
  • LES an anionic surfactant, and coco betaine
  • an amphoteric surfactant may be used as the surfactant
  • polyquarter may be used as the viscosity modifier
  • the moisturizer may include Glycerin may be used
  • citric acid and sodium hydroxide may be used as the pH adjuster.
  • Grapefruit extract, etc. may be used as the preservative, and in addition, essential oils such as cedarwood, peppermint, and rosemary, silk amino acids, pentaol, or vitamin E may be added.
  • ingredients included in the cosmetic composition include, in addition to the peptide and carrier component of the present invention as active ingredients, components commonly used in cosmetic compositions, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and fragrances. Additional auxiliaries may be included, but are not limited thereto.
  • the peptide of the present invention may be included in the above-mentioned composition, pharmaceutical composition, or cosmetic composition at a concentration of 0.01 ⁇ M to 1000 ⁇ M.
  • the peptide of the present invention may be contained in a concentration of 0.01 ⁇ M to 1000 ⁇ M; 0.05 ⁇ M to 800 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 700 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 600 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 500 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 300 ⁇ M, 0.05 ⁇ M to 200 ⁇ M; 0.1 ⁇ M to 800 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 700 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 600 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 500 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 300 ⁇ M, 0.1 ⁇ M to 200 ⁇ M; 1 ⁇ M to 800 ⁇ M, 1 ⁇ M to 700 ⁇ M, 1 ⁇ M to 600 ⁇ M, 1 ⁇ M to 500 ⁇ M, 1 ⁇ M to 300 ⁇ M,
  • a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is provided for use in skin whitening or for preventing, treating, or improving hyperpigmentation disease.
  • a skin whitening method comprising administering a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or a composition containing the peptide to a subject in need of skin whitening.
  • hyperpigmentation comprising the step of administering a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or a composition containing the peptide to a subject in need of prevention or treatment of hyperpigmentation disease.
  • a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or a composition containing the peptide to a subject in need of prevention or treatment of hyperpigmentation disease.
  • a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is provided for the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of hyperpigmentation disease.
  • the use of a peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is provided for the production of cosmetics for skin whitening.
  • the peptide of the present invention exhibits skin whitening activity by inhibiting the incorporation of melanosomes into keratinocytes and promoting the decomposition of melanosomes. Therefore, the peptide of the present invention can be used as an active ingredient in a drug for the treatment or prevention of hyperpigmentation disease caused by excessive deposition of melanosomes or as an active ingredient in cosmetics for skin whitening.
  • Figure 1 is a melanin content analysis result showing that the peptide of the present invention inhibits the incorporation of melanosomes in HaCaT cells.
  • Figure 2a is a PCR analysis result showing that the peptide of the present invention reduces the mRNA level of PAR2, a receptor related to melanosome incorporation, in a concentration-dependent manner in HaCaT cells.
  • Figure 2b is a graph showing the measured band density of the electrophoresis of Figure 2a.
  • Figure 3a is a PCR analysis result showing that the peptide of the present invention reduces the mRNA level of TLR3, a receptor related to melanosome incorporation, in HaCaT cells.
  • Figure 3b is a graph showing the measured band density of the electrophoresis of Figure 3a.
  • Figure 4a is a PCR analysis result showing that the peptide of the present invention reduces the mRNA level of KGFR, a receptor related to melanosome incorporation, in HaCaT cells.
  • Figure 4b is a graph showing the measured band density of the electrophoresis of Figure 4a.
  • Figure 5 is a melanosome content analysis result showing that the peptide of the present invention induces the decomposition of melanosomes in HaCaT cells.
  • a peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 shown in Table 1 below was synthesized using an automatic peptide synthesizer (Milligen 9050, Millipore, USA), and C18 reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) (Waters Associates, USA) was used. These synthesized peptides were then purified. The column used was ACQUITY UPLC BEH300 C18 (2.1 mm ⁇ 100 mm, 1.7 ⁇ m, Waters Co, USA).
  • HaCaT cells Human keratinocyte cell line
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • FBS 10% FBS
  • the cells were washed once with serum-free DMEM medium, and then the peptide of SEQ ID NO: 1 of Preparation Example 1 was added to 3 mL of serum-free DMEM to prepare peptide solutions at concentrations of 50 ⁇ M, 100 ⁇ M, and 200 ⁇ M, which were Added to cultured cells.
  • the negative control group (CON, (+)) was an untreated group, and the positive control group was treated with 500 nM of ENMD-1068 (6-Amino-1-[4-(3-methyl-1-oxobutyl)-1-piperazinyl]. -1-hexanone hydrochloride, Sigma-Aldrich) was used. Subsequently, after culturing in a CO2 incubator at 37°C for 24 hours, melanosomes (10 ⁇ g/ml) isolated from HEM-DP (Human Epidermal Melanocyte, darkly pigmented donor) were added to the cultured cells excluding the negative control (CON) group. It was further added to.
  • HEM-DP Human Epidermal Melanocyte, darkly pigmented donor
  • the cells were cultured in a CO2 incubator at 37°C for 48 hours, washed three times with PBS, and then treated with 1X TE for 10 minutes to collect HaCaT cells.
  • HaCaT was recovered using a centrifuge, dissolved in 1M NaOH, and dispensed into a 96-well plate. The melanin content was measured by absorbance at 490 nm using an ELISA reader.
  • HaCaT cells were seeded in a 6-well plate at a density of 3 x 10 5 cells/well and cultured in DMEM medium containing 10% FBS for 24 hours. Next, the cells were washed once with serum-free DMEM medium, and then the peptide of SEQ ID NO. 1 of Preparation Example 1 was added to 3 mL of serum-free DMEM to prepare peptide solutions at concentrations of 10 ⁇ M, 50 ⁇ M, and 100 ⁇ M, and this solution was added to the cells. It was busy.
  • the negative control group (CON, (+)) was an untreated group, and the positive control group was treated with 0.02X and 0.05X protease inhibitor (PI) (cOmplete TM Protease Inhibitor Cocktail, Roche, CH). .
  • PI protease inhibitor
  • the cells were cultured in a CO2 incubator at 37°C for 16 hours, washed twice with PBS, and RNA was isolated using easy blue (iNtRON, Cat. No.: 17061, Korea).
  • RNA was dispensed per tube and cDNA was synthesized using a cDNA synthesis kit (enzynomics, Cat. No.: RT200, Korea). PCR was performed using primers targeting the PAR2 gene in Table 2 and a PCR kit (enzynomics, Cat. No.: P581T, Korea). Next, the PCR product was subjected to electrophoresis on a 1.2% agarose gel, and the band was detected and analyzed using the Bio-Rad gel image system.
  • HaCaT cells were seeded in a 6-well plate at a density of 3 x 10 5 cells/well and cultured in DMEM medium containing 10% FBS for 24 hours. Next, the cells were washed once with serum-free DMEM medium, and then 2 mL of serum-free DMEM medium was added to the cells. The cells were then cultured in a CO2 incubator at 37°C for 24 hours.
  • the peptide of SEQ ID NO: 1 of Preparation Example 1 was added to 3 mL of DMEM medium containing 2% serum to prepare peptide solutions with concentrations of 10 ⁇ M, 50 ⁇ M, 100 ⁇ M, and 200 ⁇ M, and this solution was added to the cells.
  • HaCaT cells were seeded in a 6-well plate at a density of 3 x 10 5 cells/well and cultured in DMEM medium containing 10% FBS for 24 hours. Next, the cells were washed once with serum-free DMEM medium, and then 2 mL of serum-free DMEM medium was added to the cells and cultured in a CO2 incubator at 37°C for 24 hours. Next, the peptide of SEQ ID NO: 1 of Preparation Example 1 was added to 3 mL of DMEM medium containing 2% serum to prepare peptide solutions with concentrations of 10 ⁇ M, 50 ⁇ M, 100 ⁇ M, and 200 ⁇ M, which were added to the cells and incubated at 37°C, CO2 for 6 hours.
  • RNA was isolated using easy blue (iNtRON, Cat. No.: 17061, Korea). After quantifying the amount of isolated RNA, 2000 ng of RNA was dispensed per tube and cDNA was synthesized using a cDNA synthesis kit (enzynomics, Cat. No.: RT200, Korea). PCR was performed using primers targeting the KGFR gene in Table 4 and a PCR kit (enzynomics, Cat. No.: P581T, Korea). Next, the PCR product was subjected to electrophoresis on a 1.2% agarose gel, and the band was detected and analyzed using the Bio-Rad gel image system.
  • HaCaT cells were seeded in a 6-well plate at a density of 3 x 10 5 cells/well and cultured in DMEM medium containing 10% FBS for 24 hours.
  • melanosomes isolated from HEM-DP Human Epidermal Melanocyte, darkly pigmented donor
  • HEM-DP Human Epidermal Melanocyte, darkly pigmented donor
  • melanosomes isolated from HEM-DP were added to 3 mL of DMEM medium containing 2% serum to prepare a melanosome solution with a concentration of 10 ⁇ g/ml, and the melanosome solution of SEQ ID NO: 1 of Preparation Example 1 was added to 3 mL of DMEM medium containing 2% serum.
  • Peptide solutions were prepared at concentrations of 10 ⁇ M, 50 ⁇ M, 100 ⁇ M, and 200 ⁇ M by adding peptides, and the melanosome solution and peptide solution were further dispensed into the cells.
  • the negative control group (CON) was an untreated group
  • the negative control group (+) was a group treated only with melanosome solution
  • the positive control group was a group treated with melanosome solution and 100 nM and 200 nM rapamycin (Rapa) and A group (RSV) was treated with melanosome solution and 200 ⁇ M and 500 ⁇ M Resveratrol.
  • the cells were cultured in a 37°C CO2 incubator for 72 hours, washed three times with PBS, and then treated with 1XTE for 10 minutes to collect HaCaT cells.
  • HaCaT was recovered using a centrifuge, dissolved in 1M NaOH, and dispensed into a 96-well plate. The amount of melanin was measured by absorbance at 490 nm using an ELISA reader.
  • an ointment was prepared by containing the above ingredients in the indicated amounts.
  • tablets were manufactured by tableting according to a conventional tablet manufacturing method.
  • a capsule was prepared by filling a gelatin capsule according to a typical capsule manufacturing method.
  • Methylparaben 0.05 parts by weight
  • Carboxyvinyl polymer 18.0% by weight
  • composition ratio is a mixture of suitable ingredients in a preferred embodiment, but the ingredients or mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional or ethnic preferences such as demand class, country of demand, and intended use.

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Abstract

본 발명의 펩타이드는 각질형성세포에서 멜라노좀의 함입을 억제하고, 멜라노좀의 분해를 촉진함으로써, 피부 미백활성을 갖는다. 본 발명의 펩타이드는 과도한 멜라노좀의 침착으로 인해 발생한 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약물의 활성성분 또는 피부미백용 화장료의 유효성분으로 사용될 수 있다.

Description

피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
[관련출원과의 상호인용]
본 출원은 2022년 11월 18일에 출원된 한국특허출원 제10-2022-0155229호에 기초한 우선권의 이익을 주장하며, 해당 한국특허출원 문헌에 개시된 모든 내용은 본 명세서의 일부로서 포함된다.
[기술분야]
본 발명은 피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다.
피부 멜라닌(cutaneous melanin)은 피부, 모낭, 눈 등에 존재하여 자외선으로부터 피부를 보호하는 중요한 기능을 한다. 그러나, 과도한 멜라닌의 형성은 기미, 주근깨, 검버섯 등과 같은 과색소침착 질환을 유발하여 정신적 스트레스나 삶의 질의 저하를 유발한다. 멜라닌은 주로 표피의 기저층(basal layer) 사이나 기저층의 아래 및 모낭(hair follicle)에 위치하고 있는 멜라닌 세포(melanocyte)에서 합성되며, 멜라닌 세포내의 세포소기관인 멜라노좀(melanosome) 에서 합성이 이루어지고, 이 멜라노좀은 수상돌기를 통해 부근의 인접되어 존재하는 각질형성세포(keratinocyte)로 이동하고, 각질형성세포가 외피로 부상하면서 피부색을 나타내게 된다. 멜라노좀이 멜라닌 세포로부터 각질형성세포로 이동하는 기전은 정확하게 규명되어 있지 않으나, 멜라노좀이 멜라닌 세포의 수상돌기로 이동한 후 이로부터 세포외로 방출된 후에, 멜라노좀과 각질형성세포과의 막 융합 및 식작용(phagocytosis)이 관여하는 것으로 알려져 있다.
멜라닌의 합성과정은 L-티로신으로부터 DOPA, DOPAquinone, DOPAchrome, DHI(5,6-dihydroxyindole)을 거쳐 최종적으로 합성되며, 전통적으로 멜라닌의 합성의 억제는 멜라닌 합성 경로의 속도 조절 단계를 촉매하는 효소인 티로시나아제(tyrosinase)의 활성을 억제하는 인자에 초점을 두었다.
PCT 국제공개특허 WO2020/153819에는 멜라닌 합성 경로의 중요 효소인 티로시나아제의 활성을 억제하는 활성을 갖는 폴리펩타이드 및 이의 피부 미백 용도가 개시되어 있다. 또한, 한국등록특허 제10-1869783호에는 멜라닌 생성 및 티로시나아제의 활성을 억제하는 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 미백용도가 기재되어 있다.
지금까지의 피부 미백제의 개발은 멜라닌 합성의 중요 효소인 티로시나아제의 활성 억제에 초점이 맞추어져 왔다. 그러나, 피부미백에 대해 다양한 작용점을 통해 상승적 효과를 달성하고자 하는 측면에서, 작용기전이나 작용점이 서로 다른 피부 미백제의 개발이 필요하다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
특허문헌 1. WO 2020/153819
특허문헌 2. 대한민국 등록특허 제10-1869783호
본 발명자들은 피부 미백 활성을 갖는 보다 개선된 활성의 펩타이드를 개발하기 위해 연구 노력한 결과, 본 발명자들이 개발한 신규 펩타이드가 멜라노좀의 각질형성세포로의 함입을 억제하고 각질형성세포내에서 멜라노좀을 분해하는 활성이 매우 뛰어난 것을 실험적으로 증명하여 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 피부미백 활성을 갖는 신규 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상술한 활성을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상술한 활성을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상술한 활성을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여,
본 발명의 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
이하에서 본 발명을 상세하게 설명한다.
1. 펩타이드 및 이의 활성
본 발명의 일 측면에 따르면, 서열번호 1에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 제공한다.
본 명세서에서 용어 "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 변형 없이 사용될 수 있으나, 상기 펩타이드가 가지는 본래의 활성, 예컨대 피부미백 활성에 영향을 미치지 않는 범위 내에서, 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 치환, 또는 이들의 조합에 의해서 상이한 서열을 가지는 아미노산의 변이체 또는 단편을 사용할 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 그 활성을 변화시키지 않는 범위내에서 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation) 등으로 변형될 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 및 이의 변이체 또는 이의 활성 단편을 포함한다. 상기 실질적으로 동일한 아미노산 서열이란 상기 서열번호 1의 아미노산 서열과 각각 75% 이상, 예컨대 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 의미한다. 또한, 상기 펩타이드에는 표적화 서열, 태그(tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 아미노산 서열의 일부 부위를 선정하고 그 활성을 증가시키기 위해 N-말단 및/또는 C-말단 변형이 유도된 것일 수 있다. 이러한 N-말단 및/또는 C-말단 변형을 통해 본 발명의 펩타이드의 안정성을 현저하게 향상시킬 수 있으며, 예를 들어, 펩타이드의 생체 내 투여 시 반감기를 증가시킬 수 있다. 상기 용어 "안정성"은 생체 내 단백질 절단 효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 인 비보에서의 안정성 뿐만 아니라, 저장안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 포함하는 의미이다.
상기 N-말단 변형은 펩타이드의 N-말단에 아세틸기(acetyl group), 플루오레닐메톡시카르보닐기(fluoreonylmethoxycarbonyl group), 포르밀기(formyl group), 팔미토일기(palmitoyl group), 미리스틸기(myristyl group), 스테아릴기(stearyl group) 및 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol; PEG)로 이루어진 군으로부터 선택된 보호기가 결합한 것일 수 있다. 상기 C-말단 변형은 펩타이드의 C-말단에 히드록시기(hydroxyl group, -OH), 아미노기(amino group, -NH2), 아자이드(azide, -NHNH2) 등이 결합한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 폡타이드는 본 발명이 속하는 기술분야에서 널리 알려진 다양한 방법으로 제조할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phasesynthesis techniques; Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)) 또는 액상 합성 기술(US 등록특허 제5,516,891호)에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 피부 미백활성을 갖는다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 각질형성세포(keratinocyte)에서 멜라노좀의 함입을 억제하거나, 또는 멜라노좀의 분해를 촉진하는 활성을 갖는다.
멜라닌 세포에서 생성된 멜라노좀은 멜라닌 세포로부터 각질형성세포로 이동하며, 이때 멜라노좀의 각질형성세포로의 이동은 멜라닌 세포로부터 멜라노좀의 방출 과정과, 각질형성세포로의 멜라노좀의 함입 과정을 포함한다. 상기 멜라노좀의 함입 과정은 각질형성세포에 의한 멜라노좀의 흡수(uptake) 또는 각질형성세포가 멜라노좀을 식작용(phagocytosis)하는 것으로도 다르게 표현될 수 있다.
멜라닌 세포로부터 방출된 멜라노좀이 각질형성세포의 식작용에 의한 흡수 과정에는 PAR2 (protease activated receptor 2), TLR3 (Toll-like receptors 3) 및 KGFR (keratinocyte growth factor receptors)가 관여한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 각질형성세포(keratinocyte)에서 PAR2 (protease activated receptor 2) 유전자, TLR3 (Toll-like receptors 3) 유전자, 및 KGFR (keratinocyte growth factor receptors) 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현을 억제한다.
상기 PAR2은 세포막에 존재하는 수용체 단백질로서 염증반응, 비만, 대사, 암을 조절하고, 감염 동안의 단백질 분해효소의 센서로 역할한다고 알려져 있다. PAR2 단백질은 각질형성세포의 막에 존재하여, 각질형성세포가 멜라노좀을 흡수(함입)하는 작용에 관여하고, 상기 PAR2 단백질의 활성을 억제하면 각질세포의 멜라노좀의 흡수가 억제되는 것으로 알려져 있다(Exp Cell Res. 2000 Jan 10;254(1):25-32; Pigment Cell Res. 2001 Aug;14(4):236-42; Exp Dermatol. 2003;12 Suppl 2:5-12.).
상기 TLR3 단백질은 병원체를 인지하고 선천면역의 활성화에 중요한 역할을 하는 수용체 단백질로 알려져 있다. 각질형성세포에서 TRR 3 단백질을 자극하면 멜라노좀의 흡수의 향상이 유도된다고 알려져 있고(J Dermatol Sci. 2019 Dec;96(3):168-177), 멜라닌 세포에서 TRR3 단백질이 멜라노좀의 각질형성세포로의 이동을 촉진한다고도 알려져 있다(Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9769).
상기 KGFR은 티로신 키나아제 수용체로서, 많은 종류의 상피세포에서 발현되고, 4개의 공지된 리간드인 FGF-1, FGF-3, FGF-7 FGF-10에 의해 활성화되며 상피세포의 증식, 분화, 상처회복 등에 관여하는 것으로 알려져 있다. 또한, KGFR은 멜라노좀의 각질형성세포로의 이동을 촉진하는 것으로도 알려져 있다(J Invest Dermatol. 2005 Dec;125(6):1190-9., Journal of Investigative Dermatology Vol 128, Issue 3, March 2008, p. 558-567).
상술한 바와 같이 본 발명의 펩타이드는 멜라노좀의 함입 억제 활성 및 멜라노좀의 분해 활성을 통해 피부 미백활성 및 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료 효능을 발휘할 수 있다.
2. 피부 미백, 과다색소침착 질환의 예방, 치료 또는 개선용 조성물
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 상술한 바와 같이 기작을 통해 피부 미백 활성을 갖는다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 각질형성세포에서 멜라노좀의 함입을 억제하거나, 또는 멜라노좀의 분해를 촉진한다.
일 구현예에서, 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 각질형성세포에서 PAR2 (protease activated receptor 2) 유전자, TLR3 (Toll-like receptors 3) 유전자, 및 KGFR (keratinocyte growth factor receptors) 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현을 억제한다.
본 명세서에서 용어 "과다색소침착 질환"은 피부에서 멜라닌의 양이 과도하게 증가되어 발생하는 질환을 의미한다. 이와 같이, 피부에서 멜라닌 양의 과도한 증가에 의해 피부의 색이 짙어지게 된다. 과다색소침착 질환을 일으키는 원인은 예를 들어, 일광에의 노출, 여드름과 같은 피부의 염증(염증 후 색소 침착), 외상, 호르몬 불균형 또는 약물 복용에 의한 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
일 구현예에서, 상기 과다색소침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 일광흑색점(solar lentigo), 또는 피부의 염증후 발생하는 과다색소침착증일 수 있다. 상기 피부의 염증후 발생하는 과다색소침착증은 외상, 자외선 또는 여드름의 피주 염증성 질환 후 발생하는 과다색소침착증일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 서열번호 1의 아미노산을 포함하는 펩타이드의 치료적 유효량을 포함할 수 있다.
상기 용어 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 본 발명의 약학적 조성물의 유효성분인 펩타이드가 그 활성 또는 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미하고, 예컨대, 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방의 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "예방"은 질환 또는 장애에 걸릴 위험을 감소시키는 것을 의미하며, 질환 또는 이의 하나 이상의 임상적 증후가 진행되지 않도록 하여 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서 용어 "치료"는 질환 또는 장애를 경감시키는 것을 의미하며, 질환 또는 이의 하나 이상의 임상적 증후의 진행을 저지 또는 감소시켜 질환의 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 포함한다.
본 발명에서 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료는 피부에서 과다색소침착의 원인을 제거하거나 과다색소침착으로의 진행을 억제하는 것일 수 있고, 구체적으로 각질형성세포에서 멜라노좀의 함입을 억제하거나 멜라노좀의 분해를 촉진하는 것일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (19th ed., 1995, Williams & Wilkins)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 과다색소침착질환을 치료하기 위한 적합한 모든 경로로 투여될 수 있으며, 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육내 주입, 복강내 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 피부의 과다색소침작 질환의 예방 또는 치료 활성을 갖는 것이므로, 피부에 적용하는 것과 같은 국소 투여로 적용되는 것이 바람직하다.
상기 약학적 조성물의 투여량은 1일당 0.0001 μg 내지 100 mg, 0.001 μg 내지 100 mg, 0.01 μg 내지 100 mg, 0.1 μg 내지 100 mg, 또는 1.0 μg 내지 1000 mg 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 피부 외용제일 수 있다. 상기 피부 외용제는 피부의 외부에 도포되어 이용될 수 있는 형태의 제제로, 본 발명의 약학적 조성물이 피부 외용제로 이용될 경우 이는 피부, 구체적으로 과다색소침착이 발생한 피부 부위에 적용되는 것일 수 있다. 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있고. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들어 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 중점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산 인산 마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부미백용 화장료 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 각질형성세포에서 멜라노좀의 함입을 억제하거나, 또는 멜라노좀의 분해를 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 각질형성세포에서 PAR2 (protease activated receptor 2) 유전자, TLR3 (Toll-like receptors 3) 유전자, 및 KGFR (keratinocyte growth factor receptors) 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현을 억제한다.
상기 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 제조되는 임의의 제형으로 제조될 수 있고, 피부 외용제일 수 있다. 예를 들면, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어 에어졸, 포마드, 젤 등과 같은 용액, 솔젤, 에멀젼, 오일, 왁스, 에어졸 등의 다양한 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 부형제, 담체 등 기타 첨가제를 포함할 수 있으며 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀루로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 사용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체가 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예를 들면 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등과 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 헤어샴푸인 경우에는 본 발명의 펩타이드에 증점제, 계면활성제, 점도 조절제, 보습제, pH 조절제, 방부제, 에센셜 오일 등과 같이 샴푸를 조성하기 위한 베이스 성분들이 혼합될 수 있다. 상기 증점제로는 CDE가 사용될 수 있고, 상기 계면활성제로는 음이온 계면활성제인 LES와, 양쪽성 계면활성제인 코코 베타인이 사용될 수 있고, 상기 점도조절제로는 폴리 쿼터가 사용될 수 있으며, 상기 보습제로는 글리세린이 사용될 수 있고, 상기 pH 조절제로는 구연산, 수산화나트륨이 사용될 수 있다. 상기 방부제로는 자몽 추출물 등이 사용될 수 있고, 이 외에도 시더우드, 페퍼민트, 로즈마리 등의 에센셜 오일과 실크 아미노산, 펜타올 또는 비타민 E가 첨가될 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 본 발명의 펩타이드와 담체 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들, 예를 들면 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 등을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 펩타이드는 상술한 조성물, 약학적 조성물 또는 화장료 조성물내에 0.01 μM 내지 1000 μM의 농도로 포함될 수 있으며, 구체적으로, 본 발명의 펩타이드는 0.01 μM 내지 1000 μM; 0.05 μM 내지 800 μM, 0.05 μM 내지 700 μM, 0.05 μM 내지 600 μM, 0.05 μM 내지 500 μM, 0.05 μM 내지 300 μM, 0.05 μM 내지 200 μM; 0.1 μM 내지 800 μM, 0.1 μM 내지 700 μM, 0.1 μM 내지 600 μM, 0.1 μM 내지 500 μM, 0.1 μM 내지 300 μM, 0.1 μM 내지 200 μM; 1 μM 내지 800 μM, 1 μM 내지 700 μM, 1 μM 내지 600 μM, 1 μM 내지 500 μM, 1 μM 내지 300 μM, 1 μM 내지 200 μM; 5 μM 내지 800 μM, 5 μM 내지 700 μM, 5 μM 내지 600 μM, 5 μM 내지 500 μM, 5 μM 내지 300 μM, 또는 5 μM 내지 200 μM의 농도로 포함되는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
3. 본 발명의 펩타이드의 용도
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 피부미백의 용도, 또는 과다색소침착 질환의 예방, 치료 또는 개선하기 위해 사용하는 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 조성물을 피부미백이 필요한 대상체(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 피부미백 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 조성물을 과다색소침착 질환의 예방, 또는 치료가 필요한 대상체(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료를 위한 의약(medicament)의 제조를 위한 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 피부미백용 화장품(cosmetics)의 제조를 위한 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 용도를 제공한다.
본 발명의 펩타이드는 각질형성세포에서 멜라노좀의 함입을 억제하고, 멜라노좀의 분해를 촉진하는 활성을 가짐으로써, 피부 미백활성을 발휘한다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는 과도한 멜라노좀의 침착으로 인해 발생한 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약물의 활성성분 또는 피부미백용 화장료의 유효성분으로 사용될 수 있다.
다만, 본 발명의 효과는 상기에서 언급한 효과로 제한되지 아니하며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 하기의 기재로부터 당업자에게 명확히 이해될 수 있을 것이다.
도 1은 본 발명의 펩타이드가 HaCaT 세포에서 멜라노좀의 함입을 억제하는 것을 보여주는 멜라닌 함량 분석 결과이다.
도 2a는 본 발명의 펩타이드가 HaCaT 세포에서 멜라노좀 함입과 관련된 수용체인 PAR2의 mRNA 수준을 농도의존적으로 감소시키는 것을 보여주는 PCR 분석 결과이다.
도 2b는 도 2a의 전기영동의 밴드 밀도를 측정한 수치를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3a는 본 발명의 펩타이드가 HaCaT 세포에서 멜라노좀 함입과 관련된 수용체인 TLR3의 mRNA 수준을 감소시키는 것을 보여주는 PCR 분석 결과이다.
도 3b는 도 3a의 전기영동의 밴드 밀도를 측정한 수치를 그래프로 나타낸 것이다.
도 4a는 본 발명의 펩타이드가 HaCaT 세포에서 멜라노좀 함입과 관련된 수용체인 KGFR의 mRNA 수준을 감소시키는 것을 보여주는 PCR 분석 결과이다.
도 4b는 도 4a의 전기영동의 밴드 밀도를 측정한 수치를 그래프로 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 펩타이드가 HaCaT 세포에서 멜라노좀의 분해를 유도하는 것을 보여주는 멜라노좀 함량 분석 결과이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되지 아니한다.
제조예 1: 펩타이드의 제조
자동 펩타이드 합성기(Milligen 9050, Millipore, 미국)를 이용하여 하기의 표 1에 기재된 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 합성하고, C18 역상 고성능액체크로마토그래피(HPLC)(Waters Associates, 미국)를 이용하여 이들 합성된 펩타이드를 순수 분리하였다. 컬럼은 ACQUITY UPLC BEH300 C18 (2.1 ㎜ Х 100 ㎜, 1.7 ㎛, Waters Co, 미국)을 이용하였다.
서열번호 펩타이드의 아미노산 서열
1 RTLE (Arg-Thr-Leu-Glu)
상기 제조한 서열번호 1의 펩타이드에 대해 다음의 실험을 통해 그 효능을 평가하였다.
실험예 1: 멜라노좀 식작용(phagocytosis)에 의한 함입 분석
상기 제조예 1에서 제조한 서열번호 1의 펩타이드가 각질형성세포에서 멜라노좀의 식작용(phagocytosis)에 의한 함입을 억제하는지 여부를 확인하였다.
HaCaT 세포(Human keratinocyte cell line)를 3 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 10% FBS를 포함하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 무혈청(serum free) DMEM 배지로 1회 세척한 후, 무혈청 DMEM 3mL에 제조예 1의 서열번호 1의 펩타이드를 첨가하여 50μM, 100μM, 200μM 농도의 펩타이드 용액을 제조하고, 이를 배양 세포에 첨가하였다. 이때 음성대조군(CON, (+)))은 무처리군으로 하였고, 양성대조군으로서 500nM의 ENMD-1068(6-Amino-1-[4-(3-methyl-1-oxobutyl)-1-piperazinyl]-1-hexanone hydrochloride, Sigma-Aldrich)를 사용하였다. 이어서, 24시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양 한 후, HEM-DP(Human Epidermal Melanocyte, darkly pigmented donor)로 부터 분리한 멜라노좀(10 μg/ml )을 음성대조군(CON)군을 제외한 배양세포에 추가로 첨가하였다. 이어서, 48시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양하고, PBS로 3회 세척한 후, 1X TE를 10분간 처리하여 HaCaT 세포를 수거하였다. 원심분리기를 이용하여 HaCaT을 회수한 다음, 1M NaOH로 용해시킨 후, 96-웰 플레이트에 분주하였다. 멜라닌의 함량을 ELISA 리더(reader)을 이용하여 490nm에서의 흡광도로 측정하였다.
실험결과, 도 1의 멜라닌 함량 분석 결과에 의해 알 수 있는 바와 같이, 서열번호 1의 펩타이드에 의해 HaCaT 세포에서 멜라노좀의 함입이 억제됨을 확인하였다.
실험예 2: 멜라노좀 식작용 관련 PAR2 유전자의 발현 분석
상기 제조예 1에서 제조한 서열번호 1의 펩타이드가 각질형성세포에서 라노좀 식작용(phagocytosis) 관련 유전자 PAR2 (protease activated receptor 2) 발현에 미치는 영향에 대해 실험하였다.
HaCaT 세포를 3 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종하여 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 무혈청 DMEM 배지로 1회 세척한 후, 무혈청 DMEM 3mL에 제조예 1의 서열번호 1의 펩타이드를 첨가하여 10μM, 50μM, 100μM 농도의 펩타이드 용액을 제조하고, 이 용액을 세포에 분주하였다. 이때 음성대조군(CON, (+))은 무처리군으로 하였고, 양성대조군은 0.02X, 0.05X의 프로테아제 억제제(protease inhibitor, PI) (cOmpleteTM Protease Inhibitor Cocktail, Roche, CH)를 처리군으로 하였다. 이어서, 24시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양한 후, 트립신(trypsin) 4 유닛(unit)을 음성대조군(CON)군을 제외한 배양세포에 첨가하였다. 이어서, 16시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양하고, PBS로 2회 세척한 후, easy blue (iNtRON, Cat. No.: 17061, Korea)를 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA의 양을 정량한 후, 튜브당 2000ng의 RNA를 분주하여 cDNA 합성 키트(enzynomics, Cat. No.: RT200, Korea)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 표 2의 PAR2 유전자를 타겟으로 하는 프라이머와 PCR 키트 (enzynomics, Cat. No.: P581T, Korea)를 이용하여 PCR을 진행하였다. 이어서, PCR 산물에 대해 1.2% 아가로스젤에 전기영동하고, Bio-Rad gel image system을 사용하여 밴드를 검출 및 분석하였다.
프라이머 명칭 서열 (5'->3') 서열번호
PAR2 Forward (5') TGC TAG CAG CCT CTC TCT CC (3') 2
PAR2 Reverse (5') CTT CAA GGG GAA CCA GAT GA (3') 3
GAPDH Forward (5') GGA GCC AAA AGG GTC ATC AT (3') 4
GAPDH Reverse (5') GTG ATG GCA TGG ACT GTG GT (3') 5
실험결과, 도 2a 및 도 2b에서 보여지는 바와 같이, HaCaT 세포에서 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀 식작용(함입) 관련 수용체인 PAR2 유전자의 mRNA 수준을 농도의존적으로 감소시킴을 확인하였다. 이 결과에 의해 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀의 함입을 억제함을 확인하였다.
실험예 3: 멜라노좀 식작용 관련 TLR3 유전자의 발현 분석
상기 제조예 1에서 제조한 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀 식작용(phagocytosis) 관련 유전자 TLR3(Toll-like receptors 3) 발현에 미치는 영향에 대해 실험하였다.
HaCaT 세포를 3 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종하여 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 무혈청 DMEM 배지로 1회 세척한 후, 무혈청 DMEM 배지 2mL를 세포에 첨가하였다. 이어서, 세포를 24시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 2% 혈청 포함 DMEM 배지 3mL에 제조예 1의 서열번호 1의 펩타이드를 첨가하여 10μM, 50μM, 100μM, 200μM 농도의 펩타이드 용액을 제조하고, 이 용액을 세포에 첨가하였다. 30분 후에, 30μg/mL의 poly(I:C)를 추가로 첨가하였다. 이어서, 24시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양한 후, PBS로 2회 세척한 후, easy blue (iNtRON, Cat. No.: 17061, Korea)를 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA의 양을 정량한 후, 튜브당 2000ng의 RNA를 분주하여 cDNA 합성 키트(enzynomics, Cat. No.: RT200, Korea)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 표 3의 TLR3 유전자를 타겟으로 하는 프라이머와 PCR 키트 (enzynomics, Cat. No.: P581T, Korea)를 이용하여 PCR을 진행하였다. 이어서, PCR 산물에 대해 1.2% 아가로스젤에 전기영동하고, Bio-Rad gel image system을 사용하여 밴드를 검출 및 분석하였다.
프라이머 명칭 서열 (5'->3') 서열번호
TLR3 Forward (5') GCC GTC TAT TTG CCA CAC AC (3') 6
TLR3 Reverse (5') GCA GTC AGC AAC TTC ATG GC (3') 7
GAPDH Forward (5') GGA GCC AAA AGG GTC ATC AT (3') 4
GAPDH Reverse (5') GTG ATG GCA TGG ACT GTG GT (3') 5
실험결과, 도 3a 및 도 3b에서 보여지는 바와 같이, HaCaT 세포에서 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀 식작용(함입) 관련 수용체인 TLR3 유전자의 mRNA 수준을 대조군 대비 감소시킴을 확인하였다. 이 결과에 의해 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀의 함입을 억제함을 확인하였다.
실험예 4: 멜라노좀 식작용 관련 KGFR 유전자의 발현 분석
상기 제조예 1에서 제조한 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀 식작용(phagocytosis) 관련 유전자 KGFR (keratinocyte growth factor receptors) 발현에 미치는 영향에 대해 실험하였다.
HaCaT 세포를 3 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종하여 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 무혈청 DMEM 배지로 1회 세척한 후, 무혈청 DMEM 배지 2mL을 세포에 첨가하고, 24시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 이어서, 2% 혈청 포함 DMEM 배지 3mL에 제조예 1의 서열번호 1의 펩타이드를 첨가하여 10μM, 50μM, 100μM, 200μM 농도의 펩타이드 용액을 제조하고, 이를 세포에 첨가하고, 6시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 이어서, PBS로 2회 세척한 후, easy blue (iNtRON, Cat. No.: 17061, Korea)를 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA의 양을 정량한 후, 튜브당 2000ng의 RNA를 분주하여 cDNA 합성 키트(enzynomics, Cat. No.: RT200, Korea)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 표 4의 KGFR 유전자를 타겟으로 하는 프라이머와 PCR 키트 (enzynomics, Cat. No.: P581T, Korea)를 이용하여 PCR을 진행하였다. 이어서, PCR 산물에 대해 1.2% 아가로스젤에 전기영동하고, Bio-Rad gel image system을 사용하여 밴드를 검출 및 분석하였다.
프라이머 명칭 서열 (5'->3') 서열번호
KGFR Forward (5') TGA CCA AAC GTA TCC CCC TG (3') 8
KGFR Reverse (5') GGT GTC TGC CGT TGA AGA GA (3') 9
GAPDH Forward (5') GGA GCC AAA AGG GTC ATC AT (3') 4
GAPDH Reverse (5') GTG ATG GCA TGG ACT GTG GT (3') 5
실험결과, 도 4a 및 도 4b에서 보여지는 바와 같이, HaCaT 세포에서 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀 식작용 관련 수용체인 KGFR 유전자의 mRNA 수준을 대조군 대비 감소시킴을 확인하였다. 이 결과에 의해 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀의 함입을 억제함을 확인하였다.
실험예 5: 멜라노좀 분해 분석
상기 제조예 1에서 제조한 서열번호 1의 펩타이드가 멜라노좀을 분해하는지에 대해 분석하였다.
HaCaT 세포를 3 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종하여 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 2% 혈청 포함 DMEM 배지 2mL에 HEM-DP(Human Epidermal Melanocyte, darkly pigmented donor)로부터 분리한 멜라노좀을 첨가하여 10 μg/ml의 농도로 멜라노좀 용액을 제조하고, 이를 세포에 분주하고, 48시간 동안 37℃, CO2 인큐베이터에서 배양하였다.
이어서, 2% 혈청 포함 DMEM 배지 3mL에 HEM-DP로부터 분리한 멜라노좀을 첨가하여 10μg/ml의 농도의 멜라노좀 용액을 제조하고, 2% 혈청 포함 DMEM 배지 3mL에 제조예 1의 서열번호 1의 펩타이드를 첨가하여 10μM, 50μM, 100μM, 200μM 농도의 펩타이드 용액을 제조하고, 상기 멜라노좀 용액과 펩타이드 용액을 세포에 추가 분주하였다. 이때 음성대조군(CON)은 무처리군으로 하였고, 음성대조군(+)은 오직 멜라노좀 용액 처리군으로 하였고, 양성대조군은 멜라노좀 용액과 100nM, 200nM의 라파마이신(Rapamycin) 처리군(Rapa) 및 멜라노좀 용액과 200μM, 500μM의 레스베라트롤(Resveratrol) 처리군(RSV)으로 하였다. 이어서, 72시간 동안 37℃ CO2 인큐베이터에서 배양하고, PBS로 3회 세척한 후, 1XTE를 10분간 처리하여 HaCaT 세포를 수거하였다. 원심분리기를 이용하여 HaCaT을 회수한 다음, 1M NaOH에 녹인 후, 96-웰 플레이트에 분주하였다. 멜라닌 양을 ELISA 리더(reader)을 이용하여 490nm에서의 흡광도로 측정하였다.
실험결과, 도 5에서 멜라노좀 함량 변화로 알 수 있는 바와 같이, 서열번호 1의 펩타이드 처리에 의해 HaCaT 세포에서 멜라노좀의 분해가 유도됨을 확인하였다.
제조예 2: 약학적 조성물의 제조
2-1. 연고제의 제조
본 발명의 펩티이드 5 g
세틸팔미테이트 20 g
세탄올 40 g
스테아릴알콜 40 g
미리스탄이소프로필 80 g
폴리솔베이트 60 g
파라옥시안식향산 프로필 1 g
파라옥시안식향산 메틸 1 g
인산 및 정제수 적당량
통상적인 연고제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 연고제를 제조하였다.
2-2. 산제의 제조
본 발명의 펩타이드 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2-3. 정제의 제조
본 발명의 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
2-4. 캡슐제의 제조
본 발명의 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
2-5. 환의 제조
본 발명의 펩타이드 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4g이 되도록 제조하였다.
제조예 3: 화장료 조성물의 제조
3-1. 크림의 제조
본 발명의 펩타이드 4.6 중량부
세토스테아릴알코올 2.8 중량부
밀납 2.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부
피이지-100 스테아레이트 1 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부
호호바오일 4 중량부
스쿠알란 3.8 중량부
폴리소르베이트 60 1.1 중량부
마카다이아오일 2 중량부
초산토코페롤 0.2 중량부
메칠폴리실록산 0.4 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
Euxyl K-400 0.1 중량부
1,3-부칠렌글리콜 7 중량부
메칠파라벤 0.05 중량부
글리세린 6 중량부
d-판데놀 0.2 중량부
트리에탄올아민 0.2 중량부
pt 41891 0.2 중량부
p-H2O 46.05 중량부
3-2. 로션의 제조
본 발명의 펩타이드 3.5 중량부
세토스테아릴알코올 1.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부
피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부
스쿠알렌 4.8 중량부
마카다이아오일 2 중량부
호호바오일 2 중량부
초산토코페롤 0.4 중량부
메칠폴리실록산 0.2 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
1,3-부칠렌글리콜 4 중량부
메칠파라벤 0.1 중량부
산탄검 0.1 중량부
글리세린 4 중량부
d-판데놀 0.15 중량부
알란토인 0.1 중량부
카르보내(2% aq. Sol) 4 중량부
트리에탄올아민 0.15 중량부
에탄올 3 중량부
pt 41891 0.1 중량부
p-H20 48.3 중량부
3-3. 유연 화장수의 제조
본 발명의 펩타이드 0.2 중량%
에탄올 10.0 중량%
폴리라우린산폴리옥시에틸렌소르비탄 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.2 중량%
글리세린 5.0 중량%
1,3-부틸글리콜 6.0 중량%
향 적량
색소 적량
정제수 적량
총 100
3-4. 영양 화장수의 제조
본 발명의 펩타이드 0.1 중량%
와셀린 2.0 중량%
세스퀴올레인산소르비탄 0.8 중량%
폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.2 중량%
파라옥시안식향산메틸 적량
프로필렌글리콜 5.0 중량%
에탄올 3.2 중량%
카르복시비닐폴리머 18.0 중량%
색소 적량
향 적량
정제수 적량
총 100
3-5. 에센스의 제조
본 발명의 펩타이드 5.0 중량%
프로필렌글리콜 10.0 중량%
글리세린 10.0 중량%
히알루론산나트륨수용액(1%) 5.0 중량%
에탄올 3.2 중량%
폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.1 중량%
향 적량
정제수 적량
총 100
3-6. 팩의 제조
본 발명의 펩타이드 0.5 중량%
글리세린 5.0 중량%
프로필렌글리콜 4.0 중량%
폴리비닐알코올 15.0 중량%
에탄올 8.0 중량%
폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.2 중량%
향 적량
색소 적량
정제수 적량
총 100
상기 조성비는 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 성분 또는 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
상기에서는 본 출원의 대표적인 실시예를 예시적으로 설명하였으나, 본 출원의 범위는 상기와 같은 특정 실시예만 한정되지 아니하며, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 출원의 청구범위에 기재된 범주 내에서 적절하게 변경이 가능할 것이다.

Claims (13)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드.
  2. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
  3. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서,
    상기 펩타이드는 각질형성세포에서 (i) 멜라노좀의 함입을 억제하거나, 또는 (ii) 멜라노좀의 분해를 촉진하는 것인, 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 펩타이드는 각질형성세포에서 PAR2 (protease activated receptor 2) 유전자, TLR3 (Toll-like receptors 3) 유전자, 및 KGFR (keratinocyte growth factor receptors) 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하는 것인, 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 청구항 3에 있어서,
    상기 과다색소침착 질환은 피부의 멜라닌의 양이 과도하게 증가되어 발생하는 질환인 것인, 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 청구항 3에 있어서,
    상기 과다색소침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 일광흑색점(solar lentigo), 또는 피부의 염증후 발생하는 과다색소침착증인 것인, 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 청구항 3에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 피부 외용제인 것인, 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 펩타이드는 각질형성세포에서 (i) 멜라노좀의 함입을 억제하거나, 또는 (ii) 멜라노좀의 분해를 촉진하는 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
  11. 청구항 10에 있어서,
    상기 펩타이드는 각질형성세포에서 PAR2 (protease activated receptor 2) 유전자, TLR3 (Toll-like receptors 3) 유전자, 및 KGFR (keratinocyte growth factor receptors) 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하는 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
  12. 청구항 9에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 피부 외용제인 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
  13. 청구항 12에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 제형인 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
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