WO2024025278A1

WO2024025278A1 - 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법

Info

Publication number: WO2024025278A1
Application number: PCT/KR2023/010640
Authority: WO
Inventors: 김백길; 조남훈; 장연수; 강숙희
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2022-07-25
Filing date: 2023-07-24
Publication date: 2024-02-01
Also published as: KR20240014246A

Abstract

본 발명에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법은, 다수의 세포층으로 구성되는 3차원 세포배양체를 형성하는 다층 3차원 세포배양체 형성유닛으로서, 상기 세포배양체의 스페로이드를 형성하기 위한 제1 주사액이 이동되는 경로부, 상기 제1 주사액이 상기 경로부를 따라 이동되며 상기 세포배양체를 형성하기 위한 행잉드롭이 형성되는 형성부 및 상기 형성부의 둘레와 기 설정된 간격만큼 이격되도록 배치되고, 제2 주사액이 주입되며 상기 제1 행잉드롭을 표면장력에 의해 상기 제1 행잉드롭을 확장시키는 확장부를 포함하는 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법을 제공한다.

Description

다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법

본 발명은 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 3차원 세포배양체를 형성하되, 일반적인 조직층을 효과적으로 표현 가능하도록 다층으로 구성된 3차원 세포배양체를 형성하고, 동일한 경로를 따라 서로 다른 주사액을 통해 용액이 접종되며 자연스럽게 다층 3차원 세포배양체를 형성하는 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법에 관한 것이다.

최근에는 다양한 세포를 배양하여 생명의 현상의 해석과 독극물의 실험 또는 약물을 적용하기에 앞서 세포에 우선적으로 적용하여 체내에서 일어날 수 있는 변화를 예측할 수 있도록 활용되고 있다.

상술한 바와 같은 다양한 세포를 체외에서 배양시키기 위해서 세포가 성장할 수 있는 영양분이 포함된 액체나 젤 상태의 영양원인 배지를 이용하여 세포를 성장시키고, 성장한 세포에 약물을 주입하여 세포를 관찰하고 있다.

다만, 이와 같은 과정을 수행하기 위해서는 스페로이드를 배양하는 과정 이전에 스페로이드와 같은 세포배양체를 형성하기 위한 3차원 세포배양체를 형성하는 과정이 우선적으로 수행되어야하며, 이는 종래의 기술에 따라 제작되는 3차원 세포배양체의 다양함을 확인할 수 있다.

이와 같이 일반적으로 3차원 세포배양체를 형성하는 것은 약물의 주입이나 세포의 생장과정을 관찰하는 것에 아주 중요한 역할을 수행하며, 시행하고자 하는 목적에 따라 3차원 세포배양체의 종류를 서로 다르게 형성할 수도 있다.

다만, 이와 같이 3차원 세포배양체를 형성하는 것은 종래의 기술에 따라 가능할 수도 있지만, 문제는 약물이나 화학적 반응을 실험하기 위한 3차원 세포배양체의 경우, 인체에 적용되는 상태를 확인하기 위한 목적이 대부분이기 때문에 인체와 유사한 3차원 세포배양체를 형성해야 한다는 문제점이 있을 수 있었다.

이는 일반적인 인체의 세포들이 적어도 둘 이상의 세포층으로 형성되어 있다는 점에서 단순하게 단일막으로 형성되는 3차원 세포배양체에 적용되는 약물의 효과와 다층막으로 형성되는 3차원 세포배양체에 적용되는 효과에는 차이가 발생할 수밖에 없다는 문제점이 있을 수 있었다.

그렇기 때문에 3차원 세포배양체를 형성하면서도 다층 3차원 세포배양체를 형성하기 위한 다양한 방법들이 고안되고 있으며, 이를 해결하기 위한 수단이 필요하다.

본 발명은 상술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 안출된 발명으로서, 3차원 세포배양체를 형성하되, 일반적인 조직층을 효과적으로 표현 가능하도록 다층으로 구성된 3차원 세포배양체를 형성하고, 동일한 경로를 따라 서로 다른 주사액을 통해 용액이 접종되며 자연스럽게 다층 3차원 세포배양체를 형성하는 것을 과제로 한다.

본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상술한 목적을 달성하기 위한 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법은, 다수의 세포층으로 구성되는 3차원 세포배양체를 형성하는 다층 3차원 세포배양체 형성유닛으로서, 상기 세포배양체의 스페로이드를 형성하기 위한 제1 주사액이 이동되는 경로부, 상기 제1 주사액이 상기 경로부를 따라 이동되며 상기 세포배양체를 형성하기 위한 제1 행잉드롭이 형성되는 형성부 및 상기 형성부의 둘레와 기 설정된 간격만큼 이격되도록 배치되고, 제2 주사액이 주입되며 상기 제1 행잉드롭을 표면장력에 의해 상기 제1 행잉드롭을 확장시키는 확장부를 포함한다.

여기서 상기 경로부는, 상기 제1 주사액 및 상기 제2 주사액이 동일한 경로를 따라 이동되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 경로부는, 상기 제1 주사액 및 상기 제2 주사액이 경로를 따라 이동되어 일단부에 형성되는 상기 형성부에 도달되고, 상기 형성부와 동일한 직경의 상기 제1 행잉드롭이 형성되는 것을 특징으로 한다.

아울러 상기 형성부는, 상기 경로부를 따라 이동되는 상기 제1 주사액 및 상기 제2 주사액에 따라 형성되는 상기 제1 행잉드롭의 직경과 상기 형성부의 외경이 동일한 것을 특징으로 한다.

이 때, 상기 형성부는, 상기 제1 행잉드롭이 상기 제2 주사액이 주입되면서 포면장력에 의해 확장되도록 상기 확장부보다 상대적으로 낮은 높이를 갖도록 형성되는 것을 특징으로 한다.

한편, 상기 확장부는, 상기 제2 주사액이 주입되어 상기 경로부를 따라 상기 형성부에 형성되는 상기 제1 행잉드롭으로 이동되고, 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액이 투입되면서 표면장력에 의해 상기 기 설정된 간격만큼 확장된 제2 행잉드롭을 형성하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 확장부는, 상기 형성부의 둘레부와 내측 둘레부가 상기 기 설정된 간격만큼 이격된 틈새를 형성하여 상기 제1 행잉드롭이 상기 제2 주사액에 의해 상기 제2 행잉드롭의 직경이 상기 확장부의 외경과 동일하도록 상기 제2 행잉드롭으로 확장되는 것을 특징으로 한다.

아울러 상기 확장부는, 상기 경로부의 일단부에 탈착 가능하게 형성되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 확장부는, 형성하고자 하는 상기 세포배양체의 세포층에 비례하도록 다수개가 구비되고, 각각이 서로 이격된 틈새를 형성하는 것을 특징으로 한다.

이 때, 상기 확장부는, 다수의 세포층으로 형성되는 상기 세포배양체에 대응되는 다수개의 상기 확장부가 서로 상기 기 설정된 간격만큼 동일한 거리의 상기 틈새를 형성하는 것을 특징으로 한다.

한편, 다수의 세포층을 형성하는 3차원 세포배양체를 형성하고, 상기 세포배양체를 배양하기 위한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템으로서, 앞서 상술한 다층 3차원 세포배양체 형성유닛, 다수의 상기 형성유닛이 위치되는 랙유닛 및 상부를 향해 개방되도록 형성되고, 개방된 상부에 상기 랙유닛이 결합되어 상기 랙유닛에 의해 형성된 상기 세포배양체가 배양되는 배양 플레이트를 포함한다.

여기서 상기 랙유닛은, 내부에 다수의 상기 형성유닛이 배치되되, 둘레부가 상부를 향해 돌출되어 내부가 상대적으로 둘레부에 비해 함몰되는 함몰부가 형성되는 것을 특징으로 한다.

아울러 상기 함몰부는, 상기 형성유닛을 통해 형성되는 행잉드롭이 건조해지는 것을 방지하기 위해 수분이 수용되는 것을 특징으로 한다.

한편, 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 통해 다수의 세포층을 형성하는 3차원 세포배양체를 형성하는 다층 3차원 세포배양체 형성방법으로서, 형성하고자 하는 상기 세포배양체의 세포층 수에 대응되는 주사액을 준비하는 준비단계, 경로유부를 통해 제1 주사액을 투입하여, 제1 행잉드롭을 형성하는 제1 형성단계, 상기 경로부를 통해 추가적으로 주사액을 투입하여 상기 제1 행잉드롭을 확장시켜 다수의 세포층을 갖는 3차원 세포배양체를 형성하는 제2 형성단계 및 확장부 및 형성부를 통해 형성되는 상기 세포배양체를 회수 혹은 관찰, 시험하는 연구단계를 포함한다.

여기서 상기 제2 형성단계는, 상기 제1 형성단계 이후 기 설정된 시간 이상 대기하고 수행되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 제2 형성단계는, 추가적으로 주사액을 투입하되, 다수의 주사액이 추가적으로 투입되는 경우, 각각 상기 기 설정된 시간 이상 대기하고 수행되는 것을 특징으로 한다.

아울러 상기 제2 형성단계는, 제1 주사액과 제2 주사액이 구비되는 경우라고 정의하면, 상기 제1 형성단계를 통해 형성되는 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액이 투입되며 확장되어 둘레부가 상기 확장부로 이동되는 것을 특징으로 한다.

아래에서 설명하는 본 출원의 바람직한 실시예의 상세한 설명뿐만 아니라 위에서 설명한 요약은 첨부된 도면과 관련해서 읽을 때에 더 잘 이해될 수 있을 것이다.

본 발명을 예시하기 위한 목적으로 도면에는 바람직한 실시예들이 도시되어 있다.

그러나, 본 출원은 도시된 정확한 배치와 수단에 한정되는 것이 아님을 이해해야 한다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성유닛 설명을 위해 도시한 도면;

도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성시스템의 전반적인 설명을 위해 도시한 도면;

도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성방법에 대한 전반적인 설명을 위해 도시한 도면;

도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 경로부에 대해 설명하기 위해 도시한 도면;

도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성부 및 제1 행잉드롭을 설명하기 위해 도시한 도면;

도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 제2 주사액을 주입하는 상황을 설명하기 위해 도시한 도면;

도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 다층 세포배양체를 형성하는 과정을 설명하기 위해 도시한 도면;

도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성시스템의 구성 간의 결합을 설명하기 위해 도시한 도면;

도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성유닛과 배양 플레이트의 관계를 설명하기 위해 도시한 도면;

도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 랙유닛에 대해 설명하기 위해 도시한 도면;

도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 랙유닛과 형성유닛의 관계를 설명하기 위해 도시한 도면;

도 12는 본 발명의 변형예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 확장부를 설명하기 위해 도시한 도면;

도 13은 본 발명의 변형예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 확장부와 형성부의 결합관계를 설명하기 위해 도시한 도면; 및

도 14는 본 발명의 변형예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 확장부가 다수인 경우를 설명하기 위해 도시한 도면이다.

이하 본 발명의 목적이 구체적으로 실현될 수 있는 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면을 참조하여 설명한다.

본 실시예를 설명함에 있어서, 동일 구성에 대해서는 동일 명칭 및 동일 부호가 사용되며 이에 따른 부가적인 설명은 생략하기로 한다.

먼저 도 1 내지 도 3을 통해 본 발명의 전반적인 설명을 수행할 수 있다.

구체적으로, 도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성유닛 설명을 위해 도시한 도면, 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성시스템의 전반적인 설명을 위해 도시한 도면, 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성방법에 대한 전반적인 설명을 위해 도시한 도면이다.

먼저 도 1에 도시된 바와 같이 본 발명의 형성유닛(10)은 다수의 세포층으로 구성되는 3차우너 세포배양체(C)를 형성하기 위해 상기 세포배양체(C)를 형성하기 위한 제1 주사액(S1)이 이동되는 경로부(120), 상기 제1 주사액(S1)이 상기 경로부(120)를 따라 이동되며 상기 세포배양체(C)를 형성하기 위한 제1 행잉드롭이 형성되는 형성부(140) 및 상기 형성부(140)의 둘레와 기 설정된 간격(L)만큼 이격되도록 배치되고, 제2 주사액(S2)이 주입되며 상기 제1 행잉드롭을 표면장력에 의해 상기 제1 행잉드롭을 확장시키는 확장부(160)를 포함할 수 있다.

여기서 상기 경로부(120)는 추후 상술할 도면을 통해 보다 상세하게 설명하겠지만, 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)이 이동되는 경로를 형성하며, 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)이 상기 경로부(120)를 따라 동일한 경로로 이동되도록 할 수 있다.

이는 다층막으로 형성되는 상기 세포배양체(C)를 형성하기 위해 종래의 기술에 따라 다양한 방법을 시도하고, 고도의 기술력이 필요했던 것과는 다르게 동일한 경로를 따라 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)이 이동하면서 자연스럽게 다층막으로 형성되는 상기 세포배양체(C)를 형성하므로 빠른 상기 세포배양체(C)의 형성과 고도의 기술력을 필요로 하지 않으므로 보다 효과적일 수 있다.

한편, 상기 형성부(140)는 상기 경로부(120)의 일단부에 형성되며, 상기 제1 주사액(S1)이 이동되어 상기 형성부(140)에 도달되면, 상기 세포배양체(C)를 형성하기 위한 상기 제1 행잉드롭이 형성되는 위치일 수 있다.

즉, 상기 형성부(140)에서는 상기 제1 행잉드롭이 형성될 수 있는 것이며, 이에 따라 상기 제1 행잉드롭의 내부에서는 단일막으로 형성되는 상기 세포배양체(C)를 형성할 수 있다.

한편, 상기 확장부(160)는 상기 제1 주사액(S1)에 의해 상기 제1 행잉드롭이 형성되고, 기 설정된 시간이 경과된 이후, 상기 제2 주사액(S2)을 상기 경로부(120)로 주입하면, 상기 제1 주사액(S1)이 이동되었던 경로를 따라 동일하게 이동하여 상기 제1 행잉드롭과 섞이게 되고, 상기 제1 행잉드롭의 부피가 늘어나며 표면장력에 의해 둘레부가 이동되는 위치를 형성할 수 있다.

즉, 상기 확장부(160)에 의해 상기 제2 주사액(S2)이 주입되면서 상기 제1 행잉드롭은 둘레부가 확장되어 상기 확장부(160)의 둘레부에 위치하게 되고, 제2 행잉드롭을 형성할 수 있으며, 이 때, 상기 제2 행잉드롭의 내부에서는 상기 제1 주사액(S1)에 의해 투입되는 세포에 의한 단일막과 상기 제2 주사액(S2)에 의해 형성되는 외층막으로 이루어지는 다층막의 상기 세포배양체(C)가 자연스럽게 형성될 수 있다.

이와 같이 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)을 동일한 경로로 투입하는 것만으로도 다층막으로 형성되는 상기 세포배양체(C)를 형성할 수 있기 때문에 고도의 기술력을 필요로 하지 않을 수 있는 것이다.

한편, 앞서 상술한 상기 형성유닛(10)을 포함하는 형성시스템은 도 2에 도시된 바와 같이 상기 경로부(120), 상기 형성부(140), 상기 확장부(160)를 포함하는 상기 형성유닛(10)과, 상기 형성유닛(10)이 위치되는 공간을 제공하는 랙유닛(20), 상기 랙유닛(20)과 결합되어 상기 형성유닛(10)이 내측으로 삽입되어 상기 형성유닛(10)이 형성하는 상기 세포배양체(C)가 드롭되는 배양 플레이트(30) 및 상기 랙유닛(20)의 상부에 결합되어 상기 형성유닛(10)의 내부에 주입되는 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)이 건조해지는 것을 방지하는 커버유닛(40)을 포함할 수 있다.

여기서 상기 형성유닛(10)은 앞서 상술한 바와 같이 다층막으로 형성되는 상기 세포배양체(C)를 형성할 수 있으며, 다수의 상기 형성유닛(10)이 구비되는 경우, 상기 형성유닛(10)이 상기 랙유닛(20)의 내부에 구비되도록 할 수 있다.

아울러 상기 랙유닛(20)의 내부에 상기 형성유닛(10)은 탈착이 가능하도록 구비되거나 상기 랙유닛(20)과 결합된 상태로 구비될 수 있으며, 반드시 이에 제한되지는 않을 수 있다.

또한, 상기 배양 플레이트(30)는 상기 랙유닛(20)과 결합되되, 내측으로 상기 형성유닛(10)의 하부가 삽입될 수 있으며, 상기 형성유닛(10)에 의해 형성되는 상기 세포배양체(C)가 드롭되어 상기 배양 플레이트(30)의 내측에 위치될 수 있고, 목적에 따라 상기 배양 플레이트(30) 내측에 위치되는 상기 세포배양체(C)를 다양한 방법으로 활용할 수 있다.

아울러 상기 배양 플레이트(30)의 상부는 상기 형성유닛(10)의 하부와 대응되는 크기로 형성될 수 있다.

한편, 상기 커버유닛(40)은 앞서 상술한 바와 같이 상기 형성유닛(10)에 주입되는 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)의 건조를 방지하여 상기 제1 행잉드롭 및 상기 제2 행잉드롭이 건조되어 상기 세포배양체(C)가 다층막으로 형성되기 이전에 드롭되는 것을 방지하기 위함일 수 있다.

여기서 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)의 경우, 일부 배지가 포함되고, 상기 세포배양체(C)의 내부와 외부를 구성하는 세포들이 포함되는 용액을 의미할 수 있으며, 상기 제1 행잉드롭은 상기 제1 주사액(S1)에 의해서만 형성되는 행잉드롭을 의미할 수 있고, 상기 제2 행잉드롭은 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액(S2)이 투입되어 확장되며 부피가 늘어나 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)이 혼합된 상태의 행잉드롭을 의미할 수 있다.

한편, 앞서 상술한 구성을 바탕으로 간단하게 본 발명의 형성방법을 설명하자면, 도 3에 도시된 바와 같이 형성하고자 하는 상기 세포배양체(C)의 세포층 수에 대응되는 주사액을 준비하는 준비단계(S10), 상기 경로부(120)를 통해 상기 제1 주사액(S1)을 투입하여, 상기 제1 행잉드롭을 형성하는 제1 형성단계(S20), 상기 경로부(120)를 통해 추가적으로 주사액을 투입하여 상기 제1 행잉드롭을 확장시켜 다수의 세포층을 갖는 3차원 상기 세포배양체(C)를 형성하는 제2 형성단계(S30) 및 상기 확장부(160) 및 상기 형성부(140)를 통해 형성되는 상기 세포배양체(C)를 회수 혹은 관찰, 시험하는 연구단계(S40)를 포함할 수 있다.

아울러 상기 제1 형성단계(S20)와 상기 제2 형성단계(S30)의 사이, 상기 제2 형성단계(S30)와 상기 연구단계(S40) 사이에는 대기단계(S50)가 수행될 수 있으며, 상기 제1 행잉드롭이 형성되고 기 설정된 시간을 대기하고, 상기 제2 행잉드롭이 형성되고 상기 기 설정된 시간을 대기하며, 추가적으로 다수의 층을 형성하는 경우, 다수의 층에 대응되는 만큼 상기 기 설정된 시간을 회수마다 대기하여 수행하도록 할 수 있다.

여기서 상기 준비단계(S10)는 앞서 상술한 바와 같이 일반적인 세포는 다층막으로 형성되며 이는 이중막 외에도 삼중막 혹은 사중막 등 다양한 막을 형성할 수 있음은 물론이고, 필요에 따라 약물의 효과나 화학적 반응을 관찰하기 위해 보다 다수의 층을 확보해야 하는 경우를 대비하여 주사액을 형성하고자 하는 상기 세포배양체(C)의 세포막의 수에 대응하여 구비하는 단계를 의미할 수 있다.

또한, 상기 제1 형성단계(S20)는 상기 제1 주사액(S1)을 통해 상기 제1 행잉드롭을 형성하는 단계를 의미할 수 있으며, 상기 제2 형성단계(S30)는 상기 제1 형성단계(S20)와는 다르게 앞서 상술한 상기 준비단계(S10)에서 준비한 주사액에 수에 비례하여 주사액을 투입하는 과정을 반복해서 수행하는 과정일 수 있다.

즉, 이중막인 경우는 상기 제2 형성단계(S30)는 상기 제2 주사액(S2)을 주입하여 상기 제2 행잉드롭을 형성하는 과정으로 종료되지만, 다수의 막인 경우, 상기 제2 행잉드롭을 형성하고, 상기 대기단계(S50)를 통해 상기 기 설정된 시간만큼 대기한 이후 추가적으로 주사액을 투입하여 행잉드롭을 지속적으로 확장시킬 수 있는 것이다.

한편, 상기 연구단계(S40)는 상기 제2 형성단계(S30)를 통해 형성되는 다층막의 상기 세포배양체(C)를 회수 및 연구하는 단계를 의미할 수 있으며, 상기 준비단계(S10)는 상기 연구단계(S40)에서 수행하고자 하는 목적에 맞추어 주사액을 종류별로 구비할 수 있다.

앞서 상술한 전반적인 설명을 바탕으로 도 4 내지 도 7을 통해 행잉드롭을 통해 상기 세포배양체(C)를 형성하는 과정을 설명할 수 있다.

구체적으로, 도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 경로부에 대해 설명하기 위해 도시한 도면, 도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성부 및 제1 행잉드롭을 설명하기 위해 도시한 도면, 도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 제2 주사액을 주입하는 상황을 설명하기 위해 도시한 도면, 도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 다층 세포배양체를 형성하는 과정을 설명하기 위해 도시한 도면이다.

먼저 도 4에 도시된 바와 같이 상기 경로부(120)에 상기 제1 주사액(S1)을 투입할 수 있으며, 상기 경로부(120)는 상기 제1 주사액(S1)이 주입되는 주입로(122)와 상기 제1 주사액(S1)이 상기 형성부(140)로 이동하는 이동로(124)로 구분될 수 있다.

여기서 상기 주입로(122)는 상기 제1 주사액(S1)이 상기 이동로(124)의 직경에 따라 많은 양이 이동할 수 없어 넘치는 것을 방지하기 위해 상기 이동로(124)보다 상대적으로 넓은 직경을 갖도록 형성되되, 상기 제1 주사액(S1)이 자연스럽게 상기 이동로(124)로 이동되도록 경사를 갖도록 형성될 수 있다.

즉, 상기 이동로(124)에서 상기 형성유닛(10)의 상부를 향해 직경이 점차 넓어지도록 경사를 갖을 수 있는 것이다.

이에 따라, 상기 제1 주사액(S1)은 상기 주입로(122)에 많은 양이 위치되더라도 넘치지 않고 상기 이동로(124)로 이동될 수 있다.

한편, 상기 이동로(124)를 따라 이동된 상기 제1 주사액(S1)은 도 5에 도시된 바와 같이 상기 형성부(140)에서 상기 제1 행잉드롭을 형성할 수 있다.

이 때, 상기 제1 행잉드롭이 형성되는 것은 상기 제1 주사액(S1)의 점성에 따라 다를 수 있지만, 일반적으로 극소량으로 상기 제1 행잉드롭을 형성하기 때문에 일반적인 표면장력으로도 상기 제1 행잉드롭이 형성될 수 있다.

아울러 상기 형성부(140)는 상기 이동로(124)측의 내측부(142)와 상기 형성부(140)의 둘레부에 해당하는 외측부(144)로 구성될 수 있으며, 상기 제1 행잉드롭의 직경은 상기 외측부(144)가 형성하는 직경과 동일하도록 상기 외측부(144)를 기준으로 상기 제1 행잉드롭을 형성할 수 있다.

즉, 상기 제1 주사액(S1)에 의해 단일막의 상기 세포배양체(C)가 형성되고 상기 제1 행잉드롭은 상기 외측부(144)를 기준으로 형성될 수 있는 것이다.

한편, 이와 같이 상기 제1 행잉드롭을 형성하고 나면, 앞서 상술한 바와 같이 상기 대기단계(S50)를 수행하여 상기 기 설정된 시간만큼 대기할 수 있으며, 이는 상기 제1 행잉드롭의 내부에 위치된 상기 세포배양체(C)가 올바른 형태로 자리잡는 것을 기다리기 위함일 수 있다.

아울러 상기 제1 행잉드롭을 형성하고 난 후에 상기 제2 주사액(S2)을 투입하는 상기 제2 형성단계(S30)를 수행할 수 있으며, 상기 제2 주사액(S2)은 앞선 상기 제1 주사액(S1)과 동일하게 상기 이동로(124)를 따라 상기 형성부(140)로 이동되도록 할 수 있다.

다만, 이와 같이 상기 제2 주사액(S2)이 주입되는 경우에는 상기 제1 행잉드롭과 상기 제2 주사액(S2) 사이에 공기가 차올라 상기 제1 행잉드롭이 상기 배양 플레이트(30)로 드랍될 수 있으나, 상기 제2 주사액(S2)을 상기 주입로(122)의 경사를 따라 주사한다면 상기 제1 행잉드롭에 영향을 주지 않고 상기 제2 주사액(S2)을 주입할 수 있다.

이는 당업자에게는 자명한 사항일 수 있으며, 이와 같은 과정을 반드시 수행할 필요는 없으나, 이와 같은 방법을 수행하는 것이 가장 바람직하다고 할 수 있으며, 상기 제2 주사액(S2)은 상기 주입로(122)에 분사하더라도 경사를 따라 상기 이동로(124)를 따라 이동되기 때문에 문제가 발생되지 않을 수 있는 효과가 있을 수 있다.

한편, 상기 제2 주사액(S2)을 주입하고 나면, 상기 제2 주사액(S2)은 상기 이동로(124)를 따라 상기 형성부(140)로 이동되며, 상기 제1 행잉드롭과 섞일 수 있다.

즉, 도 7에 도시된 바와 같이 상기 제1 주사액(S1)에 의해 형성되는 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액(S2)이 혼합되면서 상기 제2 행잉드롭을 형성하게 되고, 상기 제2 행잉드롭은 상기 제1 행잉드롭의 둘레부가 확장되어 상기 확장부(160)에 위치된 상태의 행잉드롭을 의미할 수 있다.

여기서 상기 확장부(160)는 상기 외측부(144)와 유사하게 상기 확장부(160)의 외측 둘레부를 따라 형성되어 상기 제2 행잉드롭을 형성하는 드롭형성부(140)재, 상기 확장부(160)의 내측에 위치되어 상기 형성부(140)와 소정간격이 이격된 상태로 틈새를 형성하는 간격형성부(140)재를 포함할 수 있다.

이 때, 상기 드롭형성부(140)재의 경우는 앞선 상기 외측부(144)와 동일하게 상기 제2 행잉드롭의 직경과 동일한 직경을 갖도록 형성될 수 있으며, 상기 간격형성부(140)재는 상기 형성부(140)와 소정간격을 형성하되, 도 1에 기재된 기 설정된 간격(L)만큼 이격되어 있을 수 있다.

아울러 상기 형성부(140)는 상기 확장부(160)보다 상대적으로 내측방향으로 함몰되도록 형성될 수 있는데, 이는 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액(S2)이 혼합되는 과정에서 부피가 증가하여 상기 제2 행잉드롭이 형성되기 이전에 드롭되는 것을 방지하기 위함일 수 있다.

또한, 상기 기 설정된 간격(L)은 상기 외측부(144)와 상기 간격형성부(140)재 사이의 간격을 의미할 수도 있으며, 이는 상기 외측부(144)와 상기 간격형성부(140)재 사이에 형성되는 상기 기 설정된 간격(L)에 의해 상기 제2 주사액(S2)이 주입되면서 상기 제1 행잉드롭이 표면장력에 의해 둘레부가 팽창되면서 자연스럽게 상기 드롭형성부(140)재로 이동되도록 할 수 있는 효과가 있을 수 있다.

즉, 보다 쉽게 표현하자면, 상기 기 설정된 간격(L)이 지나치게 길어지게 되면, 표면장력이 제대로 형성되지 않아 상기 제1 행잉드롭이 상기 제2 행잉드롭으로 형성되기 이전에 드롭될 수 있는 것이며, 이는 일반적으로 잘 알려진 바와 같이 모세관 효과를 통해 확인할 수 있는 바와 같이 좁은 틈새에서는 표면장력에 의해 둘레부가 확장될 수 있다는 사실이 증명될 수 있다.

한편, 상기 제2 행잉드롭이 형성되고 앞서 상술한 바와 같이 상기 대기단계(S50)를 수행하여 상기 기 설정된 시간이 지나면 상기 세포배양체(C)는 도 7에 도시된 바와 같이 제1 층(F1)과 제2 층(F2)(F2)으로 구성되는 이중막 구성이 될 수 있다.

이는 상기 제1 층(F1)이 상기 제2 주사액(S2)에 의해 형성되는 부분이며, 상기 제2 층(F2)(F2)이 상기 제1 주사액(S1)에 의해 형성되는 부분임을 확인할 수 있다.

한편, 도 8 내지 도 11을 통해 드롭을 형성하는 모든 과정을 상세하게 설명할 수 있다.

구체적으로, 도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성시스템의 구성 간의 결합을 설명하기 위해 도시한 도면, 도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 형성유닛과 배양 플레이트의 관계를 설명하기 위해 도시한 도면, 도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 랙유닛에 대해 설명하기 위해 도시한 도면, 도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 랙유닛과 형성유닛의 관계를 설명하기 위해 도시한 도면이다.

먼저 도 8에 도시된 바와 같이 본 발명은 상기 형성유닛(10)이 상기 랙유닛(20) 내부에 위치되고, 상기 랙유닛(20)이 상기 배양 플레이트(30)의 상부에 위치되어 결합될 수 있고, 상기 랙유닛(20)의 상부에는 상기 커버유닛(40)이 결합될 수 있다.

아울러 도 9에 도시된 바와 같이 상기 랙유닛(20)이 상기 배양 플레이트(30)의 상부에 결합되면서 상기 형성유닛(10)이 상기 배양 플레이트(30)의 내측으로 삽입될 수 있으며, 이와 같은 형태를 갖춘 상태에서 상기 제1 형성단계(S20), 상기 제2 형성단계(S30)를 수행하여 다수의 층으로 구비되는 상기 세포배양체(C)를 형성할 수 있다.

한편, 도 10에 도시된 바와 같이 상기 랙유닛(20)의 내측에는 상기 형성유닛(10)이 규칙을 갖고 배열될 수 있으며, 상기 형성유닛(10)의 둘레, 상기 랙유닛(20)의 내측에는 별도의 수분(W)이 마련될 수 있다.

이를 보다 상세하게 표현하자면 도 11에 도시된 바와 같이 상기 랙유닛(20)의 내측에는 함몰되는 함몰부가 형성되고, 상기 형성유닛(10)의 상부와 상기 랙유닛(20)의 상부는 소정의 간격을 갖도록 형성될 수 있다.

또한, 상기 형성유닛(10)의 상부보다는 낮게 상기 수분(W)이 구비될 수 있으며, 이는 상기 제1 주사액(S1)과 상기 제2 주사액(S2)이 마르는 것을 방지하는 것이며, 이는 상기 제1 행잉드롭과 상기 제2 행잉드롭이 마르는 것을 방지하는 것이므로 상기 세포배양체(C)가 다층막으로 형성되기 이전에 드롭되는 것을 방지하는 효과가 있을 수 있다.

한편, 본 발명은 앞서 상술한 내용에 따르면 이중막을 형성하는 것으로 예시를 들었으나, 변형예에 따라 다수의 막으로 형성되는 다층막의 상기 세포배양체(C)를 형성할 수 있으며 이는 도 12 내지 도 14를 참조하여 설명할 수 있다.

구체적으로, 도 12는 본 발명의 변형예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 확장부를 설명하기 위해 도시한 도면, 도 13은 본 발명의 변형예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 확장부와 형성부의 결합관계를 설명하기 위해 도시한 도면 및 도 14는 본 발명의 변형예에 따른 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법의 확장부가 다수인 경우를 설명하기 위해 도시한 도면이다.

먼저 도 12에 도시된 바와 같이 상기 확장부(160)는 앞서 설명한 바와 같이 상기 드롭형성부(140)재 및 상기 간격형성부(140)재를 형성할 수 있으며, 추가적으로 내측에 상기 형성부(140)가 위치되도록 상기 외측부(144)와 결합되는 결합부재(166)를 더 포함할 수 있다.

여기서 상기 결합부재(166)는 별도로 표시하지는 않았지만 상기 외측부(144)의 둘레와 상기 결합부재(166)에 각각 돌기와 홈이 형성되어 서로 결합될 수도 있고, 서로 대응되는 나사산이 형성되어 나사산을 통해 결합되는 등 다양한 방식으로 시도될 수 있으며, 이와 같은 결합방식은 일반적인 기준이므로 본 발명의 상세한 설명에서 자세한 형상에 대한 설명을 생략하고, 앞서 상술한 바에만 제한되지 않을 수 있다.

이와 같이 설명한 바에 따르면 도 13에 도시된 바와 같이 상기 형성부(140)가 내측에 위치되도록 상기 형성부(140)가 결합되도록 형성될 수 있으며, 이와 같은 형태로 구비되는 경우에는 상기 제1 행잉드롭만 형성하고자 하는 경우를 편리하게 선택할 수 있다는 장점이 있을 수 있다.

한편, 앞서 상술한 바와 같이 이중막이 아닌 다층막으로 형성하기 위해서는 상기 확장부(160)가 다수개 구비되어야 하며, 이는 도 14에 도시된 바와 같이 상기 형성부(140)를 내측에 두고 외측으로 다수의 상기 확장부(160)가 상기 결합부재(166)에 의해 결합되며 다층막의 상기 세포배양체(C)를 형성하도록 할 수 있다.

또한, 앞서 상술한 바와 같이 상기 결합부재(166)의 폭은 상기 기 설정된 간격(L)만큼일 수 있으며, 이는 앞서 상술한 바와 같이 표면장력을 효과적으로 유지하기 위해 상기 기 설정된 간격(L)을 유지하는 것일 수 있다.

일반적으로 상기 제1 행잉드롭에서 상기 제2 행잉드롭을 형성하기 위한 상기 형성부(140)와 상기 확장부(160) 사이의 거리는 5mm일 수 있으며, 상기 형성부(140)와 상기 확장부(160) 사이의 함몰정도 차이 역시 5mm일 수 있으며, 앞서 상술한 바와 같이 상기 확장부(160)가 다수개가 구비되는 경우, 상기 확장부(160) 사이의 간격 역시 5mm로 구비될 수 있으며, 상기 확장부(160)와 인접한 상기 확장부(160) 사이의 높이 차이 역시 5mm로 동일하게 상기 기 설정된 간격(L)만큼 거리를 유지할 수 있다.

따라서, 본 발명의 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 이용한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템 및 다층 3차원 세포배양체 형성방법은, 3차원 세포배양체를 형성하되, 일반적인 조직층을 효과적으로 표현 가능하도록 다층으로 구성된 3차원 세포배양체를 형성하고, 동일한 경로를 따라 서로 다른 주사액을 통해 용액이 접종되며 자연스럽게 다층 3차원 세포배양체를 형성하는 효과가 있을 수 있다.

발명에 따른 바람직한 실시예를 살펴보았으며, 앞서 설명된 실시예 이외에도 본 발명이 그 취지나 범주에서 벗어남이 없이 다른 특정 형태로 구체화될 수 있다는 사실은 해당 기술에 통상의 지식을 가진 이들에게는 자명한 것이다.

그러므로, 상술된 실시예는 제한적인 것이 아니라 예시적인 것으로 여겨져야 하고, 이에 따라 본 발명은 상술한 설명에 한정되지 않고 첨부된 청구항의 범주 및 그 동등 범위 내에서 변경될 수도 있다.

*부호의 설명*

C: 세포배양체

F1: 제1 층

F2: 제2 층

L: 기 설정된 간격

S1: 제1 주사액

S2: 제2 주사액

S10: 준비단계

S20: 제1 형성단계

S30: 제2 형성단계

S40: 연구단계

S50: 대기단계

W: 수분

10: 형성유닛

20: 랙유닛

30: 배양 플레이트

40: 커버유닛

120: 경로부

122: 주입로

124: 이동로

140: 형성부

142: 내측부

144: 외측부

160: 확장부

162: 드롭형성부재

164: 간격형성부재

166: 결합부재

Claims

다수의 세포층으로 구성되는 3차원 세포배양체를 형성하는 다층 3차원 세포배양체 형성유닛으로서,

상기 세포배양체의 스페로이드를 형성하기 위한 제1 주사액이 이동되는 경로부;

상기 제1 주사액이 상기 경로부를 따라 이동되며 상기 세포배양체를 형성하기 위한 제1 행잉드롭이 형성되는 형성부; 및

상기 형성부의 둘레와 기 설정된 간격만큼 이격되도록 배치되고, 제2 주사액이 주입되며 상기 제1 행잉드롭을 표면장력에 의해 상기 제1 행잉드롭을 확장시키는 확장부를 포함하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제1항에 있어서,

상기 경로부는,

상기 제1 주사액 및 상기 제2 주사액이 동일한 경로를 따라 이동되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제2항에 있어서,

상기 경로부는,

상기 제1 주사액 및 상기 제2 주사액이 경로를 따라 이동되어 일단부에 형성되는 상기 형성부에 도달되고, 상기 형성부와 동일한 직경의 상기 제1 행잉드롭이 형성되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제3항에 있어서,

상기 형성부는,

상기 경로부를 따라 이동되는 상기 제1 주사액 및 상기 제2 주사액에 따라 형성되는 상기 제1 행잉드롭의 직경과 상기 형성부의 외경이 동일한 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제4항에 있어서,

상기 형성부는,

상기 제1 행잉드롭이 상기 제2 주사액이 주입되면서 포면장력에 의해 확장되도록 상기 확장부보다 상대적으로 낮은 높이를 갖도록 형성되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제2항에 있어서,

상기 확장부는,

상기 제2 주사액이 주입되어 상기 경로부를 따라 상기 형성부에 형성되는 상기 제1 행잉드롭으로 이동되고, 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액이 투입되면서 표면장력에 의해 상기 기 설정된 간격만큼 확장된 제2 행잉드롭을 형성하는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제6항에 있어서,

상기 확장부는,

내측 둘레부가 상기 형성부의 외측 둘레부와 상기 기 설정된 간격만큼 이격된 틈새를 형성하여 상기 제1 행잉드롭이 상기 제2 주사액에 의해 상기 제2 행잉드롭의 직경이 상기 확장부의 외경과 동일하도록 상기 제2 행잉드롭으로 확장되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제2항에 있어서,

상기 확장부는,

상기 경로부의 일단부에 탈착 가능하게 형성되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제8항에 있어서,

상기 확장부는,

형성하고자 하는 상기 세포배양체의 세포층에 비례하도록 다수개가 구비되고, 각각이 서로 이격된 틈새를 형성하는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
제8항에 있어서,

상기 확장부는,

다수의 세포층으로 형성되는 상기 세포배양체에 대응되는 다수개의 상기 확장부가 서로 상기 기 설정된 간격만큼 동일한 거리의 틈새를 형성하는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성유닛.
다수의 세포층을 형성하는 3차원 세포배양체를 형성하고, 상기 세포배양체를 배양하기 위한 다층 3차원 세포배양체 형성시스템으로서,

제1항 내지 제10항의 중 어느 한 항의 다층 3차원 세포배양체 형성유닛;

다수의 상기 형성유닛이 위치되는 랙유닛; 및

상부를 향해 개방되도록 형성되고, 개방된 상부에 상기 랙유닛이 결합되어 상기 랙유닛에 의해 형성된 상기 세포배양체가 배양되는 배양 플레이트를 포함하는,

다층 3차원 세포배양체 형성시스템.
제11항에 있어서,

상기 랙유닛은,

내부에 다수의 상기 형성유닛이 배치되되, 둘레부가 상부를 향해 돌출되어 내부가 상대적으로 둘레부에 비해 함몰되는 함몰부가 형성되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성시스템.
제12항에 있어서,

상기 함몰부는,

상기 형성유닛을 통해 형성되는 행잉드롭이 건조해지는 것을 방지하기 위해 수분이 수용되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성시스템.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 다층 3차원 세포배양체 형성유닛을 통해 다수의 세포층을 형성하는 3차원 세포배양체를 형성하는 다층 3차원 세포배양체 형성방법으로서,

형성하고자 하는 상기 세포배양체의 세포층 수에 대응되는 주사액을 준비하는 준비단계;

경로부를 통해 제1 주사액을 투입하여, 제1 행잉드롭을 형성하는 제1 형성단계;

상기 경로부를 통해 추가적으로 주사액을 투입하여 상기 제1 행잉드롭을 확장시켜 다수의 세포층을 갖는 3차원 세포배양체를 형성하는 제2 형성단계; 및

확장부 및 형성부를 통해 형성되는 상기 세포배양체를 회수 혹은 관찰, 시험하는 연구단계를 포함하는,

다층 3차원 세포배양체 형성방법.
제14항에 있어서,

상기 제2 형성단계는,

상기 제1 형성단계 이후 기 설정된 시간 이상 대기하고 수행되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성방법.
제15항에 있어서,

상기 제2 형성단계는,

추가적으로 주사액을 투입하되, 다수의 주사액이 추가적으로 투입되는 경우, 각각 상기 기 설정된 시간 이상 대기하고 수행되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성방법.
제16항에 있어서,

상기 제2 형성단계는,

제1 주사액과 제2 주사액이 구비되는 경우라고 정의하면, 상기 제1 형성단계를 통해 형성되는 상기 제1 행잉드롭에 상기 제2 주사액이 투입되며 확장되어 둘레부가 상기 확장부로 이동되는 것을 특징으로 하는,

다층 3차원 세포배양체 형성방법.