WO2023096177A1 - 에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카 및 그의 피부상태 개선 용도 - Google Patents

에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카 및 그의 피부상태 개선 용도 Download PDF

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WO2023096177A1
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WO
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porous silica
skin
extract
epidermidibacterium
keratini
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PCT/KR2022/016368
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허영목
이동걸
김민지
김미선
강승현
박명삼
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코스맥스 주식회사
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Definitions

  • It relates to a porous silica impregnated with a microorganism extract, a cosmetic composition containing the same, and a skin condition improvement use thereof.
  • Microbial cultures fermented products, extracts, etc. are widely used as effective ingredients in the recent cosmetic market.
  • water-insoluble extracts or water-insoluble substances derived from microorganisms there is a problem in that they have high reactivity, low stability, and often have negative feelings such as slippery or sticky when applied to the skin. Therefore, it has been difficult to apply microbial-derived water-insoluble ingredients as cosmetics.
  • the present inventors have studied to overcome the problems of the prior art, and as a result, in the case of porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratini extract, not only can the above problems be solved, but also excellent skin functionality confirmed, and the present invention was completed.
  • One aspect is to provide a porous silica impregnated with an extract of an Epidermidibacterium keratini strain.
  • Another aspect is to provide a cosmetic composition containing the porous silica according to one aspect.
  • Another aspect is to provide a use of a cosmetic composition containing porous silica according to one aspect.
  • Another aspect is to provide a method for preparing the cosmetic composition according to one aspect.
  • One aspect provides a porous silica impregnated with an extract of a strain of Epidermidibacterium keratini.
  • the strain is not limited to the type as long as it belongs to the species Epidermidibacterium keratini.
  • the strain may be an Epidermidibacterium keratini strain described in Korean Patent Registration Publication No. KR 10-1910791, but is not limited thereto.
  • the strain may be a strain deposited with accession number KCCM11843P.
  • the strain deposited with the accession number may be Epidermidibacterium keratini EPI-7 strain.
  • the strain is about 95% or more, about 96% or more, about 97% or more, about 98% or more, about 16S rRNA sequence of Epidermidibacterium keratini EPI-7 strain (accession number: KCCM11843P) It may comprise 16S rRNA having at least 99%, at least about 99.5%, or at least about 99.9% sequence identity.
  • the strain may include the 16S rRNA sequence of Epidermidibacterium keratini EPI-7 strain (Accession No. KCCM11843P).
  • sequence identity refers to the degree of identity of amino acid residues or bases between sequences after aligning both sequences to maximize matching in a specific comparison region. Sequence identity can be confirmed according to methods known in the art. The percent of sequence identity can be determined using a known sequence comparison program, examples of which include BLASTN (NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM (DNASTAR Inc), and the like.
  • the extract may be a lysate, a culture medium, a fermented product, or an extract of cells of Epidermidibacterium keratini strain.
  • lysate may be used interchangeably with “lysate” and may refer to a product obtained by disrupting the cell wall of a strain by chemical or physical force.
  • the homogenate may include the homogenate itself, a concentrate or a lyophilized product thereof.
  • culture may be used interchangeably with “culture supernatant”, “conditioned culture” or “conditioned medium”, a medium capable of supplying nutrients to allow the strain to grow and survive in vitro. It may mean the entire medium including the strain obtained by culturing for a certain period of time, its metabolites, extra nutrients, and the like.
  • the culture solution may mean a culture solution obtained by removing the cells from the cell culture solution obtained by culturing the strain.
  • the liquid from which the cells are removed from the culture solution is also called “supernatant", and the culture solution is left still for a certain period of time to take only the liquid of the upper layer except for the part sunk in the lower layer, remove the cells through filtration, or centrifuge the culture solution to It can be obtained by removing the precipitate and taking only the upper liquid.
  • a culture medium and culture conditions for culturing the Epidermidibacterium keratini strain can be appropriately selected or modified by those skilled in the art.
  • the culture medium may be obtained by culturing in a medium (eg, R2A medium or TSB medium) at a temperature above 10 ° C or below 40 ° C for a certain period of time, for example, 4 to 120 hours. .
  • the culture solution may include the culture solution itself obtained by culturing the strain, its concentrate or lyophilisate, or the culture supernatant obtained by removing the strain from the culture solution, its concentrate or lyophilisate.
  • the term "fermented product” may mean any substance obtained through a metabolic process in which chemical changes occur in organic matter by the action of microorganisms.
  • the fermented product may refer to a fermentation broth obtained through fermentation metabolism of the strain or a component included therein.
  • the fermented product may include the fermented product itself, a concentrate or a lyophilisate thereof.
  • cell refers to the strain itself of the present invention, and includes the strain itself isolated and selected from a sample or the strain isolated from the culture medium by culturing the strain.
  • the cells can be obtained by centrifuging the culture solution and taking the part that has sunk to the lower layer, or it can be obtained by leaving it for a certain period of time and then removing the upper liquid because it sinks to the lower layer of the culture medium by gravity.
  • extract includes all materials obtained by extracting components of a strain, regardless of extraction method, extraction solvent, extraction conditions, extracted components or extract form, and is processed or treated by other methods after extracting components of the strain. It also includes materials that can be obtained by
  • the processing or treatment may include dilution, concentration, drying, purification, fractionation, filtration, fermentation, enzymatic treatment, and the like. Therefore, the extract may include an extract, a dilution or concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude or purified product thereof, or a fraction obtained by fractionating the same.
  • the extraction method is not limited to a specific extraction method, but may be, for example, stirring extraction.
  • the extraction solvent may be an oil. Water-insoluble components can be extracted from the strain by using oil as the extraction solvent.
  • the oil is rice bran oil, medium chain triglycerides (MCT) oil, soybean oil, sunflower seed oil, jojoba oil, mineral oil, squalane, caprylic/capric triglyceride, cetylethylhexanoate, dodecane, It may be one or more selected from the group consisting of isododecane and hydrogenated polydecene, but is not limited thereto.
  • MCT oil is also referred to as liquid coconut oil.
  • the oil may be rice bran oil.
  • the extract may be an oil extract of a strain culture medium.
  • Oil as the extraction solvent is 0.01 to 100 times, 0.01 to 50 times, 0.01 to 20 times, 0.01 to 10 times, 0.01 to 5 times, 0.1 to 100 times, 0.1 times based on the total volume of the culture medium. to 50 times, 0.1 times to 20 times, 0.1 times to 10 times, 0.1 times to 5 times, 0.1 times to 1 times, 0.5 times to 100 times, 0.5 times to 50 times, 0.5 times to 20 times, 0.5 times to 10 times It may be used in an amount of 2x, 0.5x to 5x, or 0.5x to 1x, but is not limited thereto.
  • the extraction conditions refer to conditions for extracting components of the strain, such as extraction time and extraction temperature.
  • the extraction time is 30 minutes to 120 hours, 30 minutes to 100 hours, 30 minutes to 80 hours, 30 minutes to 60 hours, 2 hours to 120 hours, 2 hours to 100 hours, 2 hours to 80 hours, 2 hours to 60 hours time, 10 hours to 120 hours, 10 hours to 100 hours, 10 hours to 80 hours, or 10 hours to 60 hours, but may be appropriately selected according to other conditions such as extraction solvent and extraction temperature.
  • the extraction temperature may be 10 to 100 ° C, 10 to 80 ° C, 20 to 100 ° C, 20 to 80 ° C, 20 to 60 ° C, 20 to 40 ° C, or room temperature, but depending on other conditions such as extraction solvent and extraction time can be selected appropriately.
  • the strain, a lysate thereof, a culture medium, a fermented product, and an extract thereof may be biologically pure.
  • the strain may be obtained by pure culture.
  • the porous silica may be characterized by a small particle size, a large specific surface area, and microporosity.
  • the porous silica may be prepared using an appropriate method known to those skilled in the art, or a commercially available one may be used.
  • the porous silica may be silicon dioxide.
  • the porous silica may be composed of silicon dioxide.
  • the porous silica has a particle diameter of 0.1 to 100 ⁇ m, 0.1 to 50 ⁇ m, 0.1 to 20 ⁇ m, 0.2 to 100 ⁇ m, 0.2 to 50 ⁇ m, 0.2 to 20 ⁇ m, 0.5 to 100 ⁇ m, 0.5 to 50 ⁇ m, and 0.5 to 50 ⁇ m. It may be 20 ⁇ m, 1 to 100 ⁇ m, 1 to 50 ⁇ m, 1 to 20 ⁇ m, 3 to 100 ⁇ m, 3 to 50 ⁇ m, or 3 to 20 ⁇ m, but is not limited thereto.
  • the porous silica may have a specific surface area of 100 to 1000 m 2 /g, 200 to 1000 m 2 /g, or 500 to 1000 m 2 /g, but is not limited thereto.
  • the porous silica has a pore volume of 0.5 to 5 cm 3 /g, 0.5 to 3 cm 3 /g, 0.5 to 2 cm 3 /g, 1 to 5 cm 3 /g, 1 to 3 cm 3 /g, or 1 to 3 cm 3 /g. It may be 2 cm 3 /g, but is not limited thereto.
  • the porous silica may have a pore size of 1 to 100 nm, 1 to 50 nm, 1 to 30 nm, 1 to 20 nm, 2 to 100 nm, 2 to 50 nm, 2 to 30 nm, or 2 to 20 nm, , but not limited thereto.
  • the porous silica may have a homogeneous particle size.
  • the porous silica may have excellent pore uniformity.
  • a surface of the porous silica may be coated with a hydrophobic coating.
  • the porous silica may include an organic coating imparting hydrophobicity to the surface.
  • the organic coating may be applied to the inorganic coating, if present, or may be applied directly to the silica.
  • the hydrophobically coated porous silica can effectively penetrate the water-insoluble component into the inner and outer surfaces of the porous silica, thereby impregnating the water-insoluble component.
  • the porous silica is coated with a water soluble polymer it may be impossible to impregnate the water insoluble component.
  • the hydrophobic coating agent for the porous silica may be, for example, silicone, silane, metal soap, titanate, organic wax, and mixtures thereof.
  • the hydrophobic coating agent may alternatively include a fatty acid, for example, a fatty acid containing 10 to 20 carbon atoms, such as lauric acid, stearic acid, isostearic acid, and salts of these fatty acids.
  • the fatty acid may be isopropyl titanium triisostearate.
  • the silicone hydrophobic coating agent for the porous silica may be methicone, dimethicone, or a copolymer or mixture thereof.
  • the silicone may also be an organosilicon compound, for example, dimethylpolysiloxane having a backbone of repeating -Me 2 SiO units ("Me” is methyl, CH3), methyl hydrogen polysiloxane having a backbone of repeating -MeHSiO units, and formula RnOSiH (4-n) (“R” is alkyl and “n” is an integer of 1, 2 or 3).
  • the silane hydrophobic coating agent for the porous silica may be an alkoxysilane.
  • the alkoxysilane may be triethoxycaprylylsilane or perfluoroalkylethyl triethoxysilane having a linear or branched C3 to C12 alkyl group.
  • the metal soap hydrophobic coating agent for the porous silica may be metal myristate, metal stearate, metal palmitate, metal laurate or other fatty acid derivatives known to those skilled in the art.
  • the metal may be, for example, magnesium or aluminum.
  • the organic wax hydrophobic coating agent for the porous silica may be a synthetic wax such as polyethylene or a natural wax such as carnauba wax.
  • the surface of the porous silica may be coated with methicone, dimethicone, or a copolymer or mixture thereof.
  • a surface of the porous silica may be coated with methicone.
  • the material forming the coating or treatment is about 0.1% to 35%, about 0.1% to 30%, about 0.1% to 20% by weight of the silica. % by weight, about 0.1% to 10%, about 0.1% to 5%, or about 0.1% to 1% by weight, but is not limited thereto.
  • the Epidermidibacterium keratini extract is 10 to 500 ml / 100 g, 10 to 400 ml / 100 g, 10 to 300 ml / 100 g, 20 to 500 ml / 100 g, 20 to 400 ml / 100 g, 20 to 300 mL / 100 g, 50 to 500 mL / 100 g, 50 to 400 mL / 100 g, 50 to 300 mL / 100 g, or 60 to 270 mL / 100 g of oil absorption in porous silica It may be impregnated, but is not limited thereto.
  • the hydrophobic coated silica particles can effectively and stably store active ingredients with high skin absorption, such as essential fatty acids and lipids, due to their microporous structure.
  • active ingredients with high skin absorption, such as essential fatty acids and lipids, due to their microporous structure.
  • the water-insoluble component is impregnated into the porous silica particles, it is less affected by other compositions during storage and can be formulated stably.
  • the porous silica impregnated with it eliminates the sticky or slippery feeling peculiar to water-insoluble ingredients to provide a refreshing and light feeling, so freshness, moistness, and close fit It was confirmed that the feeling of use on the back skin was excellent.
  • the porous silica may have additional effects due to the characteristics of the silica particles themselves.
  • silica particles can be easily disintegrated when applied to the skin, filling fine wrinkles and pores to provide a moisturizing and close-fitting skin feel.
  • due to the low refractive index of the silica particles themselves it is possible to provide a translucent appearance while covering the curves.
  • the porous silica regains its oil absorption ability, so it can absorb excess sebum and prevent shine and stickiness.
  • Another aspect provides a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising porous silica impregnated with an extract of an Epidermidibacterium keratini strain according to one aspect.
  • the cosmetic composition has a skin improving effect.
  • the skin improvement may include skin condition improvement, skin beauty improvement, and prevention, improvement, or treatment of skin diseases.
  • the skin improvement may be any one or more of anti-aging of the skin, improvement of skin wrinkles, strengthening of the skin barrier, skin moisturizing, enhancement of skin elasticity, improvement of dead skin cells, improvement of skin gloss, improvement of skin transparency, and improvement of skin tone. Therefore, the cosmetic composition may be used for preventing skin aging, improving skin wrinkles, strengthening skin barrier, moisturizing skin, enhancing skin elasticity, improving skin keratin, improving skin gloss, improving skin transparency, or improving skin tone.
  • skin aging refers to both tangible and intangible changes that appear in the skin with age, such as thinning of the epidermis, number of cells or blood vessels in the dermis, ability to repair DNA damage, cell replacement cycle, wound healing, It refers to a decrease in skin barrier function, epidermal moisture retention, sweat secretion, sebum secretion, vitamin D production, physical damage defense, chemical elimination ability, immune response, sensory function, and thermoregulation.
  • the composition may be used for preventing or anti-aging skin caused by exogenous factors or endogenous factors.
  • the extrinsic factor refers to various external factors, such as ultraviolet rays (light), and the endogenous factor is also referred to as a chronological factor and refers to a factor mainly caused by the passage of time. That is, the skin aging is not only premature aging symptoms induced by external stimuli such as ultraviolet rays, pollution, cigarette smoke, chemicals, etc., but also a natural aging phenomenon that occurs as the proliferation of skin cells decreases with age. It is a concept that includes wrinkles, loss of elasticity, skin sagging and dryness. In addition, wrinkles include stimulation caused by changes in internal and external factors that cause wrinkles by changing components constituting skin tissue.
  • the aging may be photoaging.
  • photoaging is a phenomenon caused by external environmental factors, and the most representative factor is ultraviolet rays.
  • UVB ultraviolet B
  • improvement of skin wrinkles is interpreted to mean not only an action of reducing the number or depth of wrinkles on the skin, but also includes suppression of skin aging through wrinkle improvement.
  • stressening the skin barrier may refer to any action that enhances the function of the skin barrier, which is located at the outermost layer of the skin and prevents loss of moisture and nutrients.
  • moistureturizing the skin can refer to any action that maintains skin moisture or prevents moisture loss.
  • the skin moisturizing effect can help improve skin wrinkles and increase elasticity.
  • skin elasticity enhancement may refer to any action of increasing skin elasticity reduced by causes such as aging or preventing a decrease in skin elasticity.
  • skin dead skin refers to a foreign substance generated in the process of dying and falling off old cells in the epidermal layer of the skin or the like.
  • exfoliation of the skin is used interchangeably with “exfoliation of the skin” and can mean the removal or reduction of dead skin cells.
  • the term "improvement of skin radiance" may refer to any action that increases the radiance of the skin or restores the reduced radiance.
  • the skin gloss can be measured using a skin gloss value evaluation device such as a glossymeter.
  • the term “improving skin transparency” may refer to any action that increases skin transparency or restores reduced transparency.
  • the skin transparency may be measured using a skin transparency evaluation device such as a translucency meter.
  • skin tone improvement may refer to any action that increases skin brightness or darkens skin tone.
  • the skin tone may be measured using a skin brightness evaluation device such as a chromameter.
  • skin disease may be a disease caused by skin aging or impaired skin barrier function.
  • prevention includes inhibiting the development of a disease.
  • treatment includes inhibition of the development of, alleviation of, or elimination of a disease.
  • improvement can mean any action that at least reduces a parameter associated with alleviation or treatment of a condition, eg, the severity of a symptom.
  • the composition according to one aspect may increase collagen biosynthesis or decrease collagen degrading enzyme biosynthesis.
  • the composition may increase the expression of COL1A1 or decrease the expression of MMP-1. Accordingly, the composition may have effects of preventing skin aging and improving wrinkles.
  • the composition according to one aspect may increase hyaluronic acid synthesis or increase filaggrin synthesis.
  • the composition can increase the expression of HAS and filaggrin.
  • the composition can reduce transepidermal water loss or increase skin water content. Therefore, the composition may have skin barrier strengthening and skin moisturizing effects.
  • composition according to one aspect was confirmed to increase epidermal elasticity as a result of evaluating epidermal elasticity using a cutometer after use. Therefore, the composition may have a skin elasticity enhancing effect.
  • the composition according to one aspect reduced the skin keratin index as a result of keratin index evaluation using Corneofix and Visioscan after use. Therefore, the composition may have an effect of improving skin keratin.
  • composition according to one aspect was confirmed to increase the skin gloss index as a result of evaluation of the skin gloss index using a glossymeter after use. Therefore, the composition may have an effect of improving skin radiance.
  • the composition according to one aspect was confirmed to reduce the rate of decrease in the amount of transmitted light. Therefore, the composition may have an effect of improving skin transparency.
  • the composition according to one aspect increases skin brightness as a result of skin brightness evaluation using a chromameter after use.
  • the composition may have a skin tone improving effect.
  • the composition contains 0.001 to 90% by weight, 0.001 to 80% by weight, 0.001 to 70% by weight, 0.001 to 60% by weight, 0.001 to 50% by weight, 0.001 to 40% by weight of the porous silica according to one aspect with respect to the total weight of the composition. , 0.001 to 30% by weight, 0.001 to 20% by weight, 0.001 to 10% by weight, 0.01 to 50% by weight, 0.01 to 40% by weight, 0.01 to 30% by weight, 0.01 to 20% by weight, 0.01 to 10% by weight, 0.01 to 5% by weight, 0.01 to 3% by weight, or 0.01 to 1% by weight.
  • porous silica of the present specification is added to an extent capable of exhibiting the above-mentioned effects.
  • this may include formulation in various forms by adding various components as subcomponents for drug delivery and stabilization.
  • the cosmetic composition may be prepared in any formulation that is conventionally prepared.
  • the cosmetic composition may be cosmetic water, cream, essence, cleansing foam, cleansing water, pack, ampoule, body lotion, body oil, body gel, shampoo, rinse, hair conditioner, hair gel, foundation, lipstick, mascara, makeup It may have a base or a skin-adhesive cosmetic formulation.
  • Ingredients included in the cosmetic composition may include ingredients commonly used in cosmetic compositions other than the composition as active ingredients, for example, preservatives, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and fragrances. Conventional adjuvants and carriers may be included.
  • the cosmetic composition may contain an effective amount of an additive sufficient to reduce deterioration.
  • the additive may be, for example, a binder, but is not limited thereto.
  • the composition may be a composition for external application for skin.
  • the external skin preparation may be a cream, gel, ointment, skin emulsifier, skin suspension, transdermal delivery patch, drug-containing bandage, lotion, or a combination thereof.
  • the external skin preparation is a component usually used in external preparations for skin such as cosmetics or pharmaceuticals, for example, water-based components, oil-based components, powder components, alcohols, moisturizers, thickeners, ultraviolet absorbers, whitening agents, preservatives, antioxidants, surfactants, and fragrances. , colorants, various skin nutrients, or combinations thereof and may be suitably blended as needed.
  • the external skin preparations include metal sequestering agents such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid, caffeine, tannin, bellapamil, licorice extract, glabridin, and calin.
  • Hot-water extracts of fruits, various herbal medicines, tocopherol acetate, glycyrrhizic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts and other drugs, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, ascorbic acid glucoside, arbutin, kojic acid, glucose, fructose, Sugars, such as trehalose, etc. can also be mix
  • Another aspect provides a method for preparing the cosmetic composition according to one aspect.
  • the method includes preparing an extract of an Epidermidibacterium keratini strain using oil as an extraction solvent;
  • the extract of the Epidermidibacterium keratini strain may be an extract of a culture solution of the strain.
  • the impregnation can be used without limiting the type as long as the porous silica can be impregnated with the extract.
  • the porous silica may be coated with a hydrophobic coating.
  • Redundant content is omitted in consideration of the complexity of the present specification, and terms not defined otherwise in the present specification have meanings commonly used in the technical field to which the present invention belongs.
  • the porous silica according to one aspect is impregnated with the water-insoluble component Epidermidibacterium keratini strain extract, it can improve the negative feeling of use peculiar to the water-insoluble component and be formulated stably.
  • the porous silica has effects of preventing skin aging, improving wrinkles, strengthening skin barrier, moisturizing, enhancing skin elasticity, improving dead skin cells, improving gloss, improving transparency, and improving skin tone, it can be used as a cosmetic composition.
  • Example 1 is a result showing the relative expression level of collagen synthase (COL1A1) in fibroblasts after the addition of porous silica in Example 2 or a control group.
  • MMP-1 collagen degrading enzyme
  • HAS3 hyaluronic acid synthase
  • Example 4 is a result showing the relative expression level of filaggrin in keratinocytes after the addition of porous silica in Example 2 or the control group.
  • TEWL transepidermal water loss
  • Example 6 is a skin moisture content evaluation result after using the porous silica of Example 2.
  • Example 8 is a skin keratin index evaluation result after using the porous silica of Example 2.
  • Example 11 is a skin brightness evaluation result after using the porous silica of Example 2.
  • rice bran oil of half the volume of the culture medium was added and vigorously stirred. After standing at room temperature for 24 hours, the rice bran oil layer was recovered to obtain a rice bran oil extract of Epidermidibacterium keratini strain.
  • the rice bran oil extract of the Epidermidibacterium keratini strain obtained in Example 1 was impregnated into the porous silica.
  • the porous silica methicone-coated silicon dioxide was used.
  • the extract was impregnated into porous silica at an oil absorption of 100 ml/100 g.
  • the porous silica impregnated with the obtained Epidermidibacterium keratini extract was used in the following experimental examples.
  • Example 2 the same porous silica as in Example 2 was used as a control, except that the Epidermidibacterium keratini extract was not impregnated.
  • a cosmetic composition in a cushion formulation containing porous silica impregnated with the Epidermidibacterium keratini extract of Example 2 was exemplarily prepared. Components and contents (wt%) of the cosmetic composition are shown in Table 1 below.
  • Example 1 (Epidermidibacterium keratini Rice Bran Oil Extract) 0 0 2 2 One 2.2 Control (untreated porous silica) 3 One One 0 0 4.4
  • Example 2 (Porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract) 2 2 One 0 0 4.2
  • the porous silica of Example 2 impregnated with the Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract of Example 1 showed a better feeling of use.
  • the feeling of use of the untreated porous silica was similar to Example 2. This means that the negative feeling of use of the Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract was offset by the positive feeling of use of the porous silica. Therefore, the porous silica impregnated with the Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract of Example 2 eliminates the sticky or slippery feeling peculiar to water-insoluble ingredients derived from microorganisms and provides a refreshing and light feeling. Excellent was confirmed.
  • a human dermal fibroblast (Hs68) cell line (Human dermal fibroblast, Hs68) was dispensed in 3.5 ⁇ 10 5 in a 6-well plate, and then cultured for 24 hours in an incubator at 37° C. and 5% CO 2 conditions. Thereafter, the medium was removed, DPBS was added, and 12 mJ/cm 2 of UVB was irradiated or not irradiated. Immediately after UVB irradiation, DPBS was removed and replaced with FBS-free medium, followed by treatment with 1% (w/v) of the porous silica of Example 2 or untreated porous silica (control) and further incubation for 24 hours.
  • Hs68 human dermal fibroblast
  • cDNA was synthesized (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, USA).
  • cybergreen SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA
  • Real-time polymerase chain reaction was performed in a PCR machine (Step One Plus, Applied Biosystems, USA). The expression level of the gene was finally analyzed through correction for the ⁇ -actin gene.
  • Example 1 is a result showing the relative expression level of collagen synthase (COL1A1) in fibroblasts after the addition of porous silica in Example 2 or a control group.
  • MMP-1 collagen degrading enzyme
  • the porous silica impregnated with the Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract of Example 2 significantly increased the expression of COL1A1 reduced by UV light and increased MMP by UV light. It was confirmed that the expression of -1 was significantly reduced.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract has anti-aging (e.g., photo-aging) and anti-wrinkle effects.
  • human keratinocyte HaCaT cells were cultured in DMEM medium (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovin serum (FBS). All cultures were performed in a 37°C, 5% CO 2 incubator. The cultured cell line was treated with 1% (w/v) of the porous silica of Example 2 or untreated porous silica (control) and further cultured for 24 hours.
  • the expression levels of HAS3 and filaggrin were measured in the same manner as in Experimental Example 2, except that primers for HAS3 (hyaluronic acid synthase) and filaggrin, which are factors related to skin barrier reinforcement and moisturizing, were used. measured.
  • HAS3 hyaluronic acid synthase
  • Example 4 is a result showing the relative expression level of filaggrin in keratinocytes after the addition of porous silica in Example 2 or the control group.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract has skin barrier strengthening and skin moisturizing effects.
  • test was performed according to the following information.
  • TEWL transepidermal water loss
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract can help strengthen the skin barrier.
  • test was performed according to the following information.
  • Example 6 is a skin moisture content evaluation result after using the porous silica of Example 2.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract can help improve skin moisture content (moisturizing power).
  • test was performed according to the following information.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract can help improve skin elasticity.
  • test was performed according to the following information.
  • Example 8 is a skin keratin index evaluation result after using the porous silica of Example 2.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratinii rice bran oil extract can help improve dead skin cells.
  • test was performed according to the following information.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract can help improve skin gloss.
  • test was performed according to the following information.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract can help improve skin transparency.
  • test was performed according to the following information.
  • Example 11 is a skin brightness evaluation result after using the porous silica of Example 2.
  • porous silica impregnated with Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract can help improve skin tone.
  • the porous silica impregnated with rice bran oil extract of Epidermidibacterium keratini is excellent in improving skin feeling by eliminating the sticky or slippery feeling peculiar to water-insoluble ingredients derived from microorganisms; Skin anti-aging and anti-wrinkle effect (e.g. COL1A1 expression increase and MMP-1 expression decrease), skin barrier strengthening and skin moisturizing effect (e.g. HAS and filaggrin expression increase, transepidermal water loss decrease, skin moisture content increase), skin It was confirmed that there was an effect of increasing elasticity, improving skin keratin, improving skin gloss, improving skin transparency, and improving skin tone. Therefore, the porous silica impregnated with the Epidermidibacterium keratini rice bran oil extract can be applied to a functional cosmetic composition.
  • Skin anti-aging and anti-wrinkle effect e.g. COL1A1 expression increase and MMP-1 expression decrease
  • skin barrier strengthening and skin moisturizing effect e.g. HAS and filaggrin expression increase, transe

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Abstract

에피더미디박테리움 케라티니 균주의 추출물이 함침된 다공성 실리카, 이를 포함하는 화장료 조성물 및 이를 제조하는 방법을 제공한다. 일 양상에 따른 다공성 실리카는 수불용성 성분인 에피더미디박테리움 케라티니 균주 추출물이 함침되어 있으므로, 수불용성 성분 특유의 부정적인 사용감을 개선하고, 안정적으로 제형화될 수 있다. 또한, 상기 다공성 실리카는 피부 개선 효과가 우수하므로, 화장료 조성물로서 사용될 수 있다.

Description

에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카 및 그의 피부상태 개선 용도
본 출원은 2021년 11월 26일 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2021-0166108호를 우선권으로 주장하고, 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다.
미생물 추출물이 함침된 다공성 실리카, 이를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 피부상태 개선 용도에 관한 것이다.
미생물의 배양액, 발효물, 추출물 등은 최근 화장품 시장에서 효능 성분으로 폭넓게 이용되고 있다. 그 중 미생물로부터 유래한 수불용성 추출물 혹은 수불용성 물질의 경우, 반응성이 높아 안정성이 떨어지고 피부에 적용 시 미끌거리거나 끈적이는 등 부정적인 느낌을 갖는 경우가 많다는 문제가 있다. 따라서, 미생물 유래 수불용성 성분을 화장품으로 응용하기가 어려웠다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래 기술의 문제점들을 극복하기 위하여 연구한 결과, 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 추출물이 함침된 다공성 실리카의 경우, 상기 문제를 해결할 수 있을 뿐만 아니라 피부 기능성이 우수함을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
일 양상은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 추출물이 함침된 다공성 실리카를 제공하는 것이다.
다른 양상은 일 양상에 따른 다공성 실리카를 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일 양상에 따른 다공성 실리카를 포함하는 화장료 조성물의 용도를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일 양상에 따른 화장료 조성물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 추출물이 함침된 다공성 실리카를 제공한다.
상기 균주는 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 종에 속하는 균주라면 그 종류를 제한하지 않는다. 예를 들어, 상기 균주는 대한민국 등록특허공보 KR 10-1910791에 기재된 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 균주는 기탁번호 KCCM11843P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 기탁번호로 기탁된 균주는 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) EPI-7 균주일 수 있다.
상기 균주는 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) EPI-7 균주(기탁번호: KCCM11843P)의 16S rRNA 서열과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 균주는 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) EPI-7 균주(기탁번호: KCCM11843P)의 16S rRNA 서열을 포함하는 것일 수 있다.
용어 "서열 동일성(sequence identity)"은 특정 비교 영역에서 양 서열을 최대한 일치되도록 얼라인시킨 후 서열간의 아미노산 잔기 또는 염기의 동일한 정도를 의미한다. 서열 동일성은 당업계에 공지된 방법에 따라 확인될 수 있다. 상기 서열 동일성의 퍼센트는 공지의 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며, 일례로 BLASTN(NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM(DNASTAR Inc) 등을 들 수 있다.
상기 추출물은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 파쇄액, 배양액, 발효물, 또는 균체의 추출물일 수 있다.
용어 "파쇄액"은 "용해물"과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다. 상기 파쇄액은 파쇄액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
용어 "배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 상호교환적으로 사용될 수 있고, 상기 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며, 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다.
상기 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다. 예를 들어, 상기 배양액은 배지(예를 들면, R2A 배지 또는 TSB 배지)에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 120시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물, 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
용어 "발효물"은 미생물의 작용에 의해 유기물에서 화학적 변화가 일어나는 대사 과정을 통해 얻어지는 모든 물질을 의미할 수 있다. 상기 발효물은 상기 균주의 발효 대사를 통해 얻은 발효액 또는 이에 포함된 성분을 의미할 수 있다. 상기 발효물은 발효물 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
용어 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로, 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간 동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.
용어 "추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출 조건, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 균주의 성분을 추출함으로써 얻어진 물질을 모두 포함하며, 균주의 성분을 추출한 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질도 포함한다. 예를 들어, 상기 가공 또는 처리는 희석, 농축, 건조, 정제, 분획, 여과, 발효, 효소 처리 등을 포함할 수 있다. 따라서, 상기 추출물은 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
상기 추출 방법은 특정 추출 방법에 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 교반 추출일 수 있다.
상기 추출 용매는 오일일 수 있다. 상기 추출 용매로서 오일을 사용함으로써 균주로부터 수불용성 성분을 추출할 수 있다.
일 구체예에서, 상기 오일은 미강유, MCT(Medium chain triglycerides) 오일, 대두유, 해바라기씨유, 호호바오일, 미네랄오일, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 세틸에틸헥사노에이트, 도데칸, 이소도데칸, 및 하이드로제네이티드폴리데센으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 MCT 오일은 액상 코코넛오일이라고도 한다. 상기 오일은 미강유일 수 있다.
상기 추출물은 균주 배양액의 오일 추출물일 수 있다. 상기 추출 용매로서 오일은 배양액 전체 부피를 기준으로 0.01배 내지 100배, 0.01배 내지 50배, 0.01배 내지 20배, 0.01배 내지 10배, 0.01배 내지 5배, 0.1배 내지 100배, 0.1배 내지 50배, 0.1배 내지 20배, 0.1배 내지 10배, 0.1배 내지 5배, 0.1배 내지 1배, 0.5배 내지 100배, 0.5배 내지 50배, 0.5배 내지 20배, 0.5배 내지 10배, 0.5배 내지 5배, 또는 0.5배 내지 1배의 양으로 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 추출 조건은 추출 시간, 추출 온도 등 균주의 성분을 추출하기 위한 조건을 의미한다. 상기 추출 시간은 30분 내지 120시간, 30분 내지 100시간, 30분 내지 80시간, 30분 내지 60시간, 2시간 내지 120시간, 2시간 내지 100시간, 2시간 내지 80시간, 2시간 내지 60시간, 10시간 내지 120시간, 10시간 내지 100시간, 10시간 내지 80시간, 또는 10시간 내지 60시간일 수 있으나, 추출 용매, 추출 온도 등 다른 조건에 따라 적절히 선택할 수 있다. 상기 추출 온도는 10 내지 100℃, 10 내지 80℃, 20 내지 100℃, 20 내지 80℃, 20 내지 60℃, 20 내지 40℃, 또는 상온일 수 있으나, 추출 용매, 추출 시간 등 다른 조건에 따라 적절히 선택할 수 있다.
상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 발효물, 이들의 추출물은 생물학적으로 순수한 것일 수 있다. 상기 균주는 순수배양(pure culture)에 의해 얻은 것일 수 있다.
상기 다공성 실리카(Porous silica)는 작은 입도, 큰 비표면적, 미세다공성 등을 특징으로 할 수 있다. 상기 다공성 실리카는 당업자가 공지된 적절한 방법을 사용하여 제조할 수 있고, 시판되는 것을 사용할 수도 있다.
상기 다공성 실리카는 실리콘디옥사이드(Silicon dioxide)일 수 있다. 상기 다공성 실리카는 실리콘디옥사이드로 구성될 수 있다.
상기 다공성 실리카는 입자의 직경이 0.1 내지 100 ㎛, 0.1 내지 50 ㎛, 0.1 내지 20 ㎛, 0.2 내지 100 ㎛, 0.2 내지 50 ㎛, 0.2 내지 20 ㎛, 0.5 내지 100 ㎛, 0.5 내지 50 ㎛, 0.5 내지 20 ㎛, 1 내지 100 ㎛, 1 내지 50 ㎛, 1 내지 20 ㎛, 3 내지 100 ㎛, 3 내지 50 ㎛, 또는 3 내지 20 ㎛일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 다공성 실리카는 비표면적이 100 내지 1000 m2/g, 200 내지 1000 m2/g, 또는 500 내지 1000 m2/g일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 다공성 실리카는 기공 부피가 0.5 내지 5 cm3/g, 0.5 내지 3 cm3/g, 0.5 내지 2 cm3/g, 1 내지 5 cm3/g, 1 내지 3 cm3/g, 또는 1 내지 2 cm3/g일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 다공성 실리카는 기공 크기가 1 내지 100 nm, 1 내지 50 nm, 1 내지 30 nm, 1 내지 20 nm, 2 내지 100 nm, 2 내지 50 nm, 2 내지 30 nm, 또는 2 내지 20 nm일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 다공성 실리카는 입자의 크기가 균질한 것일 수 있다. 상기 다공성 실리카는 기공의 균일성이 우수한 것일 수 있다.
상기 다공성 실리카의 표면은 소수성 코팅될 수 있다. 상기 다공성 실리카는 표면에 소수성을 부여하는 유기 코팅을 포함할 수 있다. 상기 유기 코팅은, 존재한다면 무기 코팅에 적용되거나, 또는 실리카에 직접 적용될 수 있다.
상기 소수성 코팅된 다공성 실리카는 수불용성 성분을 다공성 실리카의 내·외부 표면에 효과적으로 침투시켜, 수불용성 성분을 함침시킬 수 있다. 다공성 실리카가 수용성 폴리머로 코팅된 경우 수불용성 성분을 함침시키는 것이 불가능할 수 있다.
상기 다공성 실리카의 소수성 코팅제는, 예를 들어, 실리콘, 실란, 금속 비누, 티타네이트, 유기 왁스, 및 이들의 혼합물일 수 있다. 상기 소수성 코팅제는, 대안적으로, 지방산, 예를 들어, 라우르산, 스테아르산, 이소스테아르산, 및 이들 지방산의 염과 같은 10 내지 20 탄소 원자를 포함하는 지방산을 포함할 수 있다. 상기 지방산은 이소프로필 티타늄 트리이소스테아레이트일 수 있다.
상기 다공성 실리카의 실리콘 소수성 코팅제는 메티콘(Methicone), 디메티콘(Dimethicone), 또는 이들의 코폴리머 또는 혼합물일 수 있다. 상기 실리콘은 또한 오르가노실리콘 화합물, 예를 들어, 반복 -Me2SiO 단위("Me"는 메틸, CH3)의 백본을 가지는 디메틸폴리실록산, 반복 -MeHSiO 단위의 백본을 가지는 메틸 하이드로전 폴리실록산, 및 식 RnOSiH(4-n) ("R"은 알킬이고 "n"은 1, 2 또는 3의 정수임)의 알콕시실란일 수 있다.
상기 다공성 실리카의 실란 소수성 코팅제는 알콕시실란일 수 있다. 상기 알콕시실란은 트리에톡시카프릴릴실란 또는 직쇄 또는 분지쇄인 C3 내지 C12 알킬기를 가지는 퍼플루오로알킬에틸 트리에톡시실란일 수 있다.
상기 다공성 실리카의 금속 비누 소수성 코팅제는 금속 미리스테이트, 금속 스테아레이트, 금속 팔미테이트, 금속 라우레이트 또는 당업자에게 공지된 기타 지방산 유도체일 수 있다. 상기 금속은, 예를 들어, 마그네슘 또는 알루미늄일 수 있다.
상기 다공성 실리카의 유기 왁스 소수성 코팅제는 폴리에틸렌과 같은 합성 왁스 또는 카르나우바 왁스와 같은 천연 왁스일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 다공성 실리카의 표면은 메티콘, 디메티콘, 또는 이들의 코폴리머 또는 혼합물로 코팅된 것일 수 있다. 상기 다공성 실리카의 표면은 메티콘으로 코팅된 것일 수 있다.
상기 실리카 입자가 코팅되거나 또는 "표면 처리"되는 경우, 상기 코팅 또는 처리를 형성하는 물질은 상기 실리카의 약 0.1 중량% 내지 35 중량%, 약 0.1 중량% 내지 30 중량%, 약 0.1 중량% 내지 20 중량%, 약 0.1 중량% 내지 10 중량%, 약 0.1 중량% 내지 5 중량%, 또는 약 0.1 중량% 내지 1 중량%의 양으로 존재할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 추출물은 10 내지 500 ㎖/100 g, 10 내지 400 ㎖/100 g, 10 내지 300 ㎖/100 g, 20 내지 500 ㎖/100 g, 20 내지 400 ㎖/100 g, 20 내지 300 ㎖/100 g, 50 내지 500 ㎖/100 g, 50 내지 400 ㎖/100 g, 50 내지 300 ㎖/100 g, 또는 60 내지 270 ㎖/100 g의 흡유량으로 다공성 실리카에 함침될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 소수성 코팅된 실리카 입자는 미세다공성 구조로 인해 필수 지방산과 지질 등 피부 흡수율이 높은 유효성분을 효과적, 안정적으로 보관할 수 있다. 수불용성 성분이 다공성 실리카 입자의 내부에 함침되면, 보관 중 타 조성물에 영향을 덜 미치기 되어 안정하게 제형화 할 수 있다. 또한, 수불용성 성분 특유의 끈적거리거나 미끈거리는 느낌을 없애주어 상쾌하고 가벼운 느낌을 제공할 수 있다.
일 실시예에서, 에피더미디박테리움 케라티니 오일 추출물에 비해, 이를 함침시킨 다공성 실리카가 수불용성 성분 특유의 끈적거리거나 미끈거리는 느낌을 없애주어 상쾌하고 가벼운 느낌을 제공하므로, 산뜻함, 촉촉함, 밀착감 등 피부 사용감이 우수함을 확인하였다.
또한, 상기 다공성 실리카는 실리카 입자 자체의 특성으로 인한 부가적인 효과를 가질 수 있다. 예를 들어, 실리카는 피부에 도포 시 입자가 쉽게 붕해되면서 잔주름 및 모공을 채워 보습 밀착된 피부 느낌을 제공할 수 있다. 또한, 실리카 입자 자체의 낮은 굴절률로 인해 굴곡을 커버하면서 반투명한 외관을 제공할 수 있다. 추가적으로, 다공성 실리카에 함침되었던 수불용성 성분이 피부에 흡수되면, 다공성 실리카는 흡유력이 되살아나므로, 과다 생성된 피지를 흡수하여 번들거림과 끈적임을 방지해줄 수 있다.
다른 양상은 일 양상에 따른 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 추출물이 함침된 다공성 실리카를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물은 피부 개선 효과를 갖는다. 구체적으로, 상기 피부 개선은 피부 상태 개선, 피부 미용 개선, 피부 질환의 예방, 개선 또는 치료를 포함할 수 있다. 상기 피부 개선은 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 탄력 증진, 피부 각질 개선, 피부 윤기 개선, 피부 투명도 개선, 및 피부 톤 개선 중 어느 하나 이상일 수 있다. 따라서, 상기 화장료 조성물은 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 탄력 증진, 피부 각질 개선, 피부 윤기 개선, 피부 투명도 개선, 또는 피부 톤 개선용일 수 있다.
용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부 장벽 기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다.
상기 조성물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 방지용 또는 항노화용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고, 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며, 주름, 탄력 감소, 피부 처짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부 노화를 초래하게 된다. 따라서, 상기 조성물은 자외선B(ultraviolet B, UVB)에 의한 광노화 예방 또는 개선용일 수 있다.
용어 "피부 주름 개선"은 피부의 주름의 수를 감소시키거나 깊이를 감소시키는 작용을 의미할 뿐만 아니라, 주름 개선을 통하여 피부 노화를 억제하는 것도 포함하는 것으로 해석된다.
용어 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.
용어 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다. 피부　보습　효과는 피부의 주름 개선, 탄력도 증가에 도움을 줄 수 있다.
용어 "피부 탄력 증진"은 노화 등의 원인에 의해 저하된 피부 탄력이 증가하거나 피부 탄력의 저하를 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.
용어 "피부 각질"은 피부 등의 표피층에서 늙은 세포가 죽어 떨어져 나가는 과정에서 생기는 이물을 의미한다.
용어 "피부 각질 개선"은 "피부 각질 제거"와 상호교환적으로 사용하며, 피부 각질을 제거하거나 감소시키는 것을 의미할 수 있다.
용어 "피부 윤기 개선"은 피부의 윤기를 증가시키거나, 감소된 윤기를 회복시키는 모든 작용을 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 윤기는 Glossymeter와 같은 피부 윤기 지수(Gloss Value) 평가 장치를 사용하여 측정할 수 있다.
용어 "피부 투명도 개선"은 피부의 투명도를 증가시키거나, 감소된 투명도를 회복시키는 모든 작용을 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 투명도는 Translucency meter와 같은 피부 투명도 평가 장치를 사용하여 측정할 수 있다.
용어 "피부 톤 개선"은 피부 밝기를 증가시키거나, 어두워진 피부 톤을 높이는 모든 작용을 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 톤은 Chromameter와 같은 피부 밝기 평가 장치를 사용하여 측정할 수 있다
용어 "피부 질환"은 피부 노화, 또는 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환일 수 있다. 용어 "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다. 용어 "개선"은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 콜라겐 생합성을 증가시키거나, 콜라겐 분해효소 생합성을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 COL1A1의 발현을 증가시키거나, MMP-1의 발현을 감소시킬 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 피부 노화 방지 및 주름 개선 효과를 가질 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 히알루론산 합성을 증가시키거나, 필라그린 합성을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 HAS 및 필라그린의 발현을 증가시킬 수 있다. 또한, 상기 조성물은 경피수분손실량을 감소시키거나, 피부 수분 함량을 증가시킬 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 피부 장벽 강화 및 피부 보습 효과를 가질 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 사용 후 Cutometer를 이용한 표피 탄력 평가 결과, 표피 탄력을 증가시킴을 확인하였다. 따라서, 상기 조성물은 피부 탄력 증진 효과를 가질 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 사용 후 Corneofix 및 Visioscan을 이용한 각질 지수 평가 결과, 피부 각질 지수를 감소시킴을 확인하였다. 따라서, 상기 조성물은 피부 각질 개선 효과를 가질 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 사용 후 Glossymeter를 이용한 피부 윤기 지수 평가 결과, 피부 윤기 지수를 증가시킴을 확인하였다. 따라서, 상기 조성물은 피부 윤기 개선 효과를 가질 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 사용 후 Translucency meter를 이용한 피부 투명도 평가 결과, 투과광량 감소율을 감소시킴을 확인하였다. 따라서, 상기 조성물은 피부 투명도 개선 효과를 가질 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 사용 후 Chromameter를 이용한 피부 밝기 평가 결과, 피부 밝기를 증가시킴을 확인하였다. 따라서, 상기 조성물은 피부 톤 개선 효과를 가질 수 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대해 일 양상에 따른 다공성 실리카를 0.001 내지 90 중량%, 0.001 내지 80 중량%, 0.001 내지 70 중량%, 0.001 내지 60 중량%, 0.001 내지 50 중량%, 0.001 내지 40 중량%, 0.001 내지 30 중량%, 0.001 내지 20 중량%, 0.001 내지 10 중량%, 0.01 내지 50 중량%, 0.01 내지 40 중량%, 0.01 내지 30 중량%, 0.01 내지 20 중량%, 0.01 내지 10 중량%, 0.01 내지 5 중량%, 0.01 내지 3 중량%, 또는 0.01 내지 1 중량%로 포함할 수 있다.
용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 다공성 실리카가 첨가되는 것을 의미한다. 또한, 이는 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)되는 것을 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 화장료 조성물은 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 앰플, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스, 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 보존제, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다. 상기 화장료 조성물은 열화(deterioration)를 감소시키기에 충분한 유효량의 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 결합제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
대안적으로, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
또 다른 양상은 일 양상에 따른 화장료 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 방법은, 추출 용매로서 오일을 사용하여 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 추출물을 제조하는 단계;
상기 추출물을 다공성 실리카에 함침시키는 단계; 및
상기 추출물이 함침된 다공성 실리카를 포함하는 화장료 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.
상기 추출 용매, 균주, 추출물, 다공성 실리카, 및 화장료 조성물에 관한 상세는 전술한 바와 같다.
상기 에피더미디박테리움 케라티니 균주의 추출물은 상기 균주의 배양액의 추출물일 수 있다.
상기 함침은 다공성 실리카에 상기 추출물을 함침시킬 수 있는 방법이라면 그 종류를 제한하지 않고 사용할 수 있다.
상기 다공성 실리카는 소수성 코팅된 것일 수 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
일 양상에 따른 다공성 실리카는 수불용성 성분인 에피더미디박테리움 케라티니 균주 추출물이 함침되어 있으므로, 수불용성 성분 특유의 부정적인 사용감을 개선하고, 안정적으로 제형화될 수 있다. 또한, 상기 다공성 실리카는 피부 노화 방지, 주름 개선, 피부 장벽 강화, 보습, 피부 탄력 증진, 각질 개선, 윤기 개선, 투명도 개선, 피부 톤 개선 효과가 있으므로, 화장료 조성물로서 사용될 수 있다.
도 1은 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 섬유아세포에서 콜라겐 합성 효소(COL1A1)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 2는 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 섬유아세포에서 콜라겐 분해 효소(MMP-1)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 3은 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 각질형성세포에서 히알루론산 합성 효소(HAS3)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 4는 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 각질형성세포에서 필라그린(filaggrin)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 5는 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 경피수분손실량 (TEWL) 평가 결과이다.
도 6은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 수분 함량 평가 결과이다.
도 7은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 표피 탄력 평가 결과이다.
도 8은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 각질 지수 평가 결과이다.
도 9는 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 윤기 지수 평가 결과이다.
도 10은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 투명도 평가 결과이다.
도 11은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 밝기 평가 결과이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 에피더미디박테리움 케라티니 균주의 오일 추출물의 제조
에피더미디박테리움 케라티니 균주의 추출물을 제조하기 위하여, 추출 용매로서 오일을 사용하였다.
구체적으로, 에피더미디박테리움 케라티니 균주를 TSB 배지에서 배양한 후, 배양액 절반 부피의 미강유를 첨가하여 강하게 교반하였다. 상온에서 24시간 동안 방치한 후, 미강유 층을 회수하여, 에피더미디박테리움 케라티니 균주의 미강유 추출물을 얻었다.
실시예 2. 에피더미디박테리움 케라티니 균주 추출물이 함침된 다공성 실리카의 제조
실시예 1에서 얻은 에피더미디박테리움 케라티니 균주의 미강유 추출물을 다공성 실리카에 함침시켰다. 상기 다공성 실리카로서 메티콘(Methicone) 코팅된 실리콘디옥사이드(silicone dioxide)를 사용하였다. 상기 추출물은 다공성 실리카에 100 ㎖/100 g의 흡유량으로 함침시켰다. 수득된 에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카를 이하 실험예에서 사용하였다.
한편, 이하 실험예에서, 에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침되지 않은 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 다공성 실리카를 대조군으로 사용하였다.
제조예 1. 화장료 조성물의 제조
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카를 포함하는 쿠션 제형의 화장료 조성물을 예시적으로 제조하였다. 화장료 조성물의 성분 및 함량(중량%)은 하기 표 1에 나타내었다.
성분 함량 (%, w/w)
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카 1.000000000
병풀추출물 30.251485000
티타늄디옥사이드 (CI 77891) 13.683181000
사이클로펜타실록세인 8.300000000
에칠헥실메톡시신나메이트 6.700000000
다이페닐실록시페닐트라이메티콘 4.000000000
에칠헥실살리실레이트 4.000000000
프로필렌글라이콜다이벤조에이트 3.500000000
트라이메틸실록시실리케이트 3.000000000
라우릴피이지-9폴리다이메틸실록시
에틸다이메티콘		 2.999400000
글리세린 2.345544000
다이아이소스테아릴말레이트 2.000000000
아이소도데케인 2.000000000
나이아신아마이드 2.000000000
부틸렌글라이콜 1.700100000
1,2-헥산다이올 1.510090000
정제수 1.503155203
합성플루오르플로고파이트 1.283500000
아크릴레이트/스테아릴아크릴레이트/
다이메티콘메타크릴레이트코폴리머		 1.000000000
세틸피이지/피피지-10/1다이메티콘 1.000000000
다이스테아다이모늄헥토라이트 0.900000000
황색산화철 (CI 77492) 0.783020000
마그네슘설페이트 0.700000000
브이피/헥사데센코폴리머 0.500000000
비스머스옥시클로라이드 (CI 77163) 0.350000000
적색산화철 (CI 77491) 0.288218000
스테아릭애씨드 0.259022200
알루미나 0.231019800
클로렐라 불가리스추출물 0.200000000
글루코오스 0.200000000
알루미늄하이드록사이드 0.187765000
트라이에톡시카프릴릴실레인 0.174318000
다이메티콘 0.150000000
다이메티콘/비닐다이메티콘크로스폴리머 0.150000000
에틸헥실하이드록시스테아레이트 0.150000000
흑색산화철 (CI 77499) 0.109956000
펜틸렌글라이콜 0.106060500
에틸헥실글리세린 0.100501000
마트리카리아꽃추출물 0.100000000
프룩토올리고사카라이드 0.100000000
프룩토오스 0.100000000
글리세릴카프릴레이트 0.100000000
비닐다이메티콘/메티콘실세스퀴옥세인
크로스폴리머		 0.100000000
향료 0.050000000
옥탄다이올 0.045454500
아데노신 0.040000000
트라이소듐에틸렌다이아민다이석시네이트 0.037000000
팔미토일트라이펩타이드-5 0.005500000
마그네슘클로라이드 0.002500000
테트라데실아미노부티로일발릴아미노
부티릭우레아트라이플루오로아세테이트		 0.002500000
토코페롤 0.000600000
에필로비움 플레이스케리추출물 0.000075000
소듐하이알루로네이트 0.000010000
카프릴릴글라이콜 0.000005000
시트릭애씨드 0.000005000
카퍼트라이펩타이드-1 0.000005000
헵타소듐헥사카복시메틸다이펩타이드-12 0.000005000
헥사펩타이드-2 0.000001600
하이드록시프로필트라이모늄
하이알루로네이트		 0.000001000
포타슘솔베이트 0.000001000
아세틸헥사펩타이드-8 0.000000500
바이오틴 0.000000400
하이드롤라이즈드하이알루로닉애씨드 0.000000100
소듐아세틸레이티드하이알루로네이트 0.000000100
팔미토일펜타펩타이드-4 0.000000050
하이알루로닉애씨드 0.000000025
하이드롤라이즈드소듐하이알루로네이트 0.000000010
소듐하이알루로네이트크로스폴리머 0.000000010
포타슘하이알루로네이트 0.000000002
합계 100
실험예 1. 피부 사용감 개선에 대한 관능평가
미생물로부터 유래한 수불용성 추출물 또는 수불용성 물질의 경우, 피부에 적용 시 미끌거리거나 끈적이는 등 부정적인 느낌을 갖는 경우가 많다는 문제가 있다. 따라서, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 추출물이 함침된 다공성 실리카의 피부 사용감을 평가하기 위하여, 관능평가를 수행하였다.
구체적으로, 총 5명의 평가자가 5점 척도법을 사용하여 각 시료의 산뜻함, 촉촉함, 밀착감을 평가하였다. 각 시료의 피부 사용감에 대해 1점부터 5점으로 점수를 매긴 후, 3점 이상으로 응답한 자의 인원 비율을 계산하였다(1점: 매우 나쁘다, 2점: 나쁘다, 3점: 보통, 4점: 좋다, 5점: 매우 좋다). 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
시료 평가점수 (명) 평균점수
(점)
5점 4점 3점 2점 1점
실시예 1 (에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물) 0 0 2 2 1 2.2
대조군 (무처리 다공성 실리카) 3 1 1 0 0 4.4
실시예 2 (에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카) 2 2 1 0 0 4.2
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물보다, 이를 함침시킨 실시예 2의 다공성 실리카가 사용감이 더 우수한 것으로 나타났다. 또한, 무처리 다공성 실리카의 사용감은 실시예 2와 유사하게 나타났다. 이는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물의 부정적인 사용감이 다공성 실리카의 긍정적 사용감으로 상쇄되었음을 의미한다. 따라서, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 미생물 유래 수불용성 성분 특유의 끈적거리거나 미끈거리는 느낌을 없애주어 상쾌하고 가벼운 느낌을 제공하므로, 피부 사용감 개선 효과가 우수함을 확인하였다.
실험예 2. 항노화 및 주름 개선 효능 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 자외선(UV) 조사에 의한 피부 노화 및 주름 생성과 관련된 인자에 미치는 영향을 분석하였다.
구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 6-웰 플레이트에 3.5x105로 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣은 후 12 mJ/cm2의 UVB를 조사하거나 조사하지 않았다. UVB 조사 직후 DPBS를 제거하고 FBS가 없는 배지로 갈아준 후, 실시예 2의 다공성 실리카 또는 무처리 다공성 실리카(대조군)를 1%(w/v) 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭(nanodrop)으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 콜라겐 합성 효소(COL1A1)과 콜라겐 분해 효소(MMP-1)에 대하여 사이버그린(SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 프라이머 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
도 1은 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 섬유아세포에서 콜라겐 합성 효소(COL1A1)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 2는 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 섬유아세포에서 콜라겐 분해 효소(MMP-1)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 자외선에 의해 감소된 COL1A1의 발현을 유의적으로 증가시키고, 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 유의하게 감소시킴을 확인하였다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 노화(예: 광노화) 방지 및 주름 개선 효과가 있음을 의미한다.
실험예 3. 피부 장벽 강화 및 피부 보습 효능 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 장벽 강화 및 피부 보습 활성에 미치는 영향을 분석하였다.
구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovin serum, FBS)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였다. 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 실시예 2의 다공성 실리카 또는 무처리 다공성 실리카(대조군)를 1%(w/v) 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 피부 장벽 강화 및 보습과 관련된 인자인 HAS3(히알루론산 합성 효소) 및 필라그린(filaggrin)에 대한 프라이머를 사용한 것만을 제외하고는 상기 실험예 2와 동일한 방법으로 HAS3 및 필라그린(filaggrin)의 발현량을 측정하였다.
도 3은 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 각질형성세포에서 히알루론산 합성 효소(HAS3)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 4는 실시예 2 또는 대조군의 다공성 실리카 첨가 후, 각질형성세포에서 필라그린(filaggrin)의 상대적 발현 정도를 나타낸 결과이다.
도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 HAS3 및 필라그린의 발현량을 모두 유의적으로 증가시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 장벽 강화 및 피부 보습 효과가 있음을 의미한다.
실험예 4. 피부 장벽 강화 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 장벽에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 눈꼬리(lateral canthus)로부터 수평 외측으로 1 cm 떨어진 지점
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Tewameter를 이용한 경피수분손실량 (TEWL) 평가
도 5는 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 경피수분손실량 (TEWL) 평가 결과이다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 경피수분손실량(TEWL)을 감소시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 장벽 강화에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
실험예 5. 피부 보습 개선 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 보습에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 비익(alare)에서의 수평선과 동측 동공중심선(mid pupillary line)의 교차 지점
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Corneometer®를 이용한 피부 수분 함량 평가
도 6은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 수분 함량 평가 결과이다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 피부 수분 함량을 증가시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 수분 함량(보습력) 개선에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
실험예 6. 피부 탄력 개선 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 표피 탄력에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 입꼬리와 동측 이주(tragus)를 연결한 가상선의 1/2 지점
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Cutometer® MPA 580 (2mm probe)를 이용한 표피 탄력 평가
도 7은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 표피 탄력 평가 결과이다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 표피 탄력을 증가시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 탄력 증진에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
실험예 7. 각질 개선 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 각질에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 비익(alare)에서의 수평선과 동측 동공중심선(mid pupillary line)의 교차 지점
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Corneofix 및 Visioscan을 이용한 각질 지수 평가
도 8은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 각질 지수 평가 결과이다.
도 8에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 각질 지수를 감소시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 각질 개선에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
실험예 8. 피부 윤기 개선 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 윤기 개선에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 눈꼬리(lateral canthus)를 지나는 가상 수직선과 광대뼈(Zygomatic bone)의 최첨단 지점(most prominent point)
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Glossymeter를 이용한 피부 윤기 지수 평가
도 9는 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 윤기 지수 평가 결과이다.
도 9에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 피부 총 윤기 지수(Gloss Value)를 증가시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 윤기 개선에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
실험예 9. 피부 투명도 개선 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 투명도에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 입꼬리(lip commissure)와 동측 이주(tragus)를 연결한 가상선의 1/2 지점
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Translucency meter를 이용한 피부 투명도 평가
도 10은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 투명도 평가 결과이다.
도 10에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 투과광량 감소율(alpha value)을 감소시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 투명도 개선에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
실험예 10. 피부 톤 개선 효능 임상 평가
실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 톤에 미치는 영향을 분석하였다. 실험은 대한피부과학연구소에서 진행하였다.
구체적으로, 아래 내용에 따라 시험을 수행하였다.
1) 연구 대상자 선정
: 선정기준에 부합하고 제외기준에 해당되지 않는 연구대상자 21명 선정
2) 시험 부위
: 비익(alare)에서의 수평선과 동측 동공중심선(mid pupillary line)의 교차 지점
3) 사용 방법
: 3주 간 아침, 저녁 1일 2회씩 안면부에 연구 대상자 자가 사용
4) 평가
: Chromameter를 이용한 피부 밝기 평가
도 11은 실시예 2의 다공성 실리카를 사용한 후의 피부 밝기 평가 결과이다.
도 11에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 피부 밝기(L-value)를 증가시킴을 알 수 있었다.
이러한 결과는 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카가 피부 톤 개선에 도움을 줄 수 있음을 의미한다.
종합하면, 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 미생물 유래 수불용성 성분 특유의 끈적거리거나 미끈거리는 느낌을 없애주어 피부 사용감 개선 효과가 우수하며; 피부 노화 방지 및 주름 개선 효과(예: COL1A1 발현 증가 및 MMP-1 발현 감소), 피부 장벽 강화 및 피부 보습 효과(예: HAS 및 필라그린 발현 증가, 경피수분손실량 감소, 피부 수분 함량 증가), 피부 탄력 증진 효과, 피부 각질 개선 효과, 피부 윤기 개선 효과, 피부 투명도 개선 효과, 피부 톤 개선 효과가 있음을 확인하였다. 따라서, 상기 에피더미디박테리움 케라티니 미강유 추출물이 함침된 다공성 실리카는 기능성 화장료 조성물에 응용될 수 있다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다.

Claims (10)

  1. 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 추출물이 함침된 다공성 실리카.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 추출물의 추출 용매는 오일인 것인 다공성 실리카.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 오일은 미강유, MCT 오일, 대두유, 해바라기씨유, 호호바오일, 미네랄오일, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 세틸에틸헥사노에이트, 도데칸, 이소도데칸, 및 하이드로제네이티드폴리데센으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인 다공성 실리카.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 다공성 실리카는 실리콘디옥사이드(silicon dioxide)로 구성되는 것인 다공성 실리카.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 다공성 실리카의 표면은 소수성 코팅된 것인 다공성 실리카.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 다공성 실리카의 표면은 메티콘(Methicone), 디메티콘(Dimethicone), 또는 이들의 코폴리머 또는 혼합물로 코팅된 것인 다공성 실리카.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 따른 다공성 실리카를 포함하는 화장료 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 탄력 증진, 피부 각질 개선, 피부 윤기 개선, 피부 투명도 개선, 또는 피부 톤 개선용인 것인 화장료 조성물.
  9. 추출 용매로서 오일을 사용하여 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini) 균주의 추출물을 제조하는 단계;
    상기 추출물을 다공성 실리카에 함침시키는 단계; 및
    상기 추출물이 함침된 다공성 실리카를 포함하는 화장료 조성물을 제조하는 단계를 포함하는, 청구항 7의 화장료 조성물을 제조하는 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 다공성 실리카는 소수성 코팅된 것인 방법.
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