WO2023085292A1 - 測定対象物質の測定方法、消毒剤による測定への影響の抑制方法、抑制剤、発光試薬及び試薬キット - Google Patents

測定対象物質の測定方法、消毒剤による測定への影響の抑制方法、抑制剤、発光試薬及び試薬キット Download PDF

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WO2023085292A1
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acid
reaction
reagent
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藍子 加藤
匠子 土屋
貴洋 村上
有美 齋藤
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富士フイルム株式会社
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals

Definitions

  • the present invention relates to a method of measuring a substance to be measured that suppresses the influence of a disinfectant on measurement, and a method of suppressing the influence of a disinfectant on measurement.
  • the present invention further relates to agents for suppressing the influence of disinfectants on measurements.
  • the present invention further relates to luminescence reagents and reagent kits containing the inhibitors.
  • Methods for measuring substances to be measured that utilize binding by specific binding partners are highly specific to the substance to be measured, and the binding affinity of the binding partner to the substance to be measured is also high. It is highly sensitive, rapid, and easy to measure. Therefore, measurement methods using specific binding partners are used in clinical chemistry tests to test measurement items such as hormones, tumor markers, viruses/bacteria, autoantibodies, and blood coagulation and fibrinolysis systems, and to detect harmful substances contained in food. It is also applied to inspections such as the detection of substances, the investigation of endocrine disruptors, and the screening of drugs of abuse.
  • Patent Document 2 describes Bicine, TES, HEPES, HEPPSO, DIPSO, POPSO, EPPS, glycyl It describes adding at least one treatment selected from the group consisting of glycine, Tris, TAPSO, PIPES, TAPS, Tricine, MOPSO, ACES, MOPS, ADA, BES and phosphate to the sample.
  • hypochlorous acid At medical sites such as hospitals and testing companies, disinfectants such as hypochlorous acid are sometimes sprayed into the space for the purpose of detoxifying or reducing the number of bacteria and viruses.
  • the present inventors have found that spraying hypochlorous acid may affect the luminescent substrate used in measuring the substance to be measured, thereby affecting the measurement of the substance to be measured.
  • the present inventors have found that the existence of a disinfectant or its decomposition product can be detected by performing a luminescence reaction using a luminescent substrate dissolved in a predetermined buffer solution defined in the present invention. It was found that the influence of the disinfectant on the measurement can be suppressed even at low temperatures.
  • the present invention has been completed based on the above findings.
  • a method for measuring a substance to be measured comprising performing a luminescence reaction in ⁇ 2> The method according to ⁇ 1>, wherein the disinfectant is a chlorine-containing compound.
  • ⁇ 3> The method according to ⁇ 1> or ⁇ 2>, wherein the disinfectant is hypochlorous acid or chlorine dioxide.
  • the luminescent reaction is an enzymatic reaction.
  • ⁇ 5> The method according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 4>, wherein the enzymatic reaction is a peroxidase reaction performed in the presence of hydrogen peroxide.
  • ⁇ 6> The method according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, wherein the luminescent substrate is a nitrogen-containing heterocyclic compound having an amino group.
  • ⁇ 7> The method according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 6>, wherein the substance to be measured is an antigen or antibody, and the substance to be measured is measured by antigen-antibody reaction and subsequent luminescence reaction.
  • ⁇ 9> The method according to ⁇ 8>, wherein the disinfectant is a chlorine-containing compound.
  • the luminescent reaction is an enzymatic reaction.
  • the enzymatic reaction is a peroxidase reaction performed in the presence of hydrogen peroxide.
  • the luminescent substrate is a nitrogen-containing heterocyclic compound having an amino group.
  • ⁇ 14> The method according to any one of ⁇ 8> to ⁇ 13>, wherein the substance to be measured is an antigen or an antibody, and the substance to be measured is measured by antigen-antibody reaction and subsequent luminescence reaction.
  • ⁇ 16> The inhibitor according to ⁇ 15> for use in the method according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 14>.
  • ⁇ 17> A luminescent reagent comprising the inhibitor of ⁇ 15> or ⁇ 16> and a luminescent substrate.
  • ⁇ 18> A reagent kit for measuring a substance to be measured, comprising the inhibitor according to ⁇ 15> or ⁇ 16>, or the luminescent reagent according to ⁇ 17>.
  • ⁇ 19> The reagent kit according to ⁇ 18>, further comprising a luminescence reaction reagent.
  • the present invention it is possible to suppress the influence of the disinfectant on the measurement.
  • the agent for suppressing the influence of the disinfectant on the measurement the luminescent reagent, and the reagent kit according to the present invention, it is possible to measure the substance to be measured while suppressing the influence of the disinfectant on the measurement.
  • FIG. 1 shows the result of verifying the influence of sodium hypochlorite on the chemiluminescence reaction.
  • FIG. 2 shows the results of verifying the inhibitory effects of various buffers on the effects of sodium hypochlorite.
  • FIG. 3 shows the results of verifying the inhibitory effects of various buffers on the effects of sodium hypochlorite.
  • mM indicates mmol/L.
  • the method for measuring a substance to be measured according to the present invention and the method for suppressing the influence of a disinfectant on measurement according to the present invention include 2-hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid (also denoted as TAPSO) ), tricine (also abbreviated as Tricine), trishydroxymethylaminomethane (also abbreviated as Tris), boric acid, N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid (also abbreviated as TAPS), N- (2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid (also denoted as ACES), 2-cyclohexylaminoethanesulfonic acid (also denoted as CHES), or a luminescent substrate dissolved in a buffer solution selected from salts thereof , and performing a luminescence reaction in the presence of
  • the salt examples include sodium, potassium, calcium and the like.
  • the method for measuring a substance to be measured according to the present invention and the method for suppressing the influence of a disinfectant on measurement according to the present invention include 2-hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid, tricine , trishydroxymethylaminomethane, boric acid, N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid, or salts thereof, using a luminescent substrate dissolved in a buffer solution, a disinfectant or a degradation product thereof It is also one of the preferred embodiments of the present invention to include conducting a light-emitting reaction in the presence of.
  • the luminescent substrate is 2-hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid, tricine, trishydroxymethylaminomethane, boric acid, N-tris(hydroxymethyl)methyl-3- Disinfectants or It is possible to suppress an increase in the amount of luminescence in the blank due to the presence of the decomposed product.
  • 2-hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid tricine, trishydroxymethylaminomethane, N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfone acid, N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid, 2-cyclohexylaminoethanesulfonic acid, or salts thereof, comply with the European REACH Regulation (Registration, Evaluation, Authorization and It is more useful because it is a buffer solution that is not subject to the regulations on restrictions).
  • the disinfectant in the present invention is preferably a chlorine-containing compound.
  • the disinfectant is particularly preferably hypochlorous acid or its salts, or chlorine dioxide.
  • the salt of hypochlorous acid is preferably sodium hypochlorite.
  • Decomposition products of the disinfectant include, for example, hypochlorous acid ions, which are the decomposition products when the disinfectant is hypochlorous acid.
  • a substance to be measured for example, a substance to be measured, a substance analogous to the substance to be measured, or a substance binding to a substance to be measured that specifically binds to the substance to be measured is immobilized on the surface of a solid phase carrier such as magnetic silica particles.
  • a substance to be measured in a sample can be measured using a solid phase carrier.
  • the substance to be measured in the present invention is not particularly limited as long as it is usually measured in this field. Typical examples include proteins, lipoproteins, nucleic acids, immunoglobulins, blood coagulation-related factors, antibodies, enzymes, hormones, cancer markers, heart disease markers, and various drugs contained in the sample.
  • proteins such as albumin, hemoglobin, myoglobin, transferrin, protein A, C-reactive protein (CRP), high-density lipoprotein (HDL), low-density lipoprotein (LDL), ultra-low-density lipoprotein Lipoproteins such as proteins, nucleic acids such as deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA), such as alkaline phosphatase, amylase, acid phosphatase, ⁇ -glutamyltransferase ( ⁇ -GTP), lipase, creatine kinase (CK), lactic acid Enzymes such as dehydrogenase (LDH), glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT), renin, protein kinase (PK), tyrosine kinase, immunity such as IgG, IgM, IgA, I
  • anti-human hepatitis B virus surface antigen antibody anti-HBs antigen antibody
  • anti-HBc antigen antibody anti-human hepatitis B core antigen antibody
  • anti-human hepatitis C virus antibody anti-rheumatoid factor antibody
  • HBsAg Hepatitis B virus surface antigen
  • Nucleocapside proteins such as SARS-CoV-2 (COVID-19, 2019-nCoV) Nucleocapsid protein, e.g.
  • thyroid stimulating hormone TSH
  • thyroid hormones FT3, FT4, T3, T4
  • parathyroid hormone PTH
  • procalcitonin PCT
  • ACTH adrenocorticotropic hormone
  • hCG human chorionic gonadotropin
  • estradiol E2
  • cortisol hormones such as aldosterone, such as ⁇ -fetoprotein (AFP ), cancer markers such as carcinoembryonic antigen (CEA), CA19-9, prostate specific antigen (PSA); Disease markers, such as antiepileptic drugs, antibiotics, drugs such as theophylline, and the like.
  • antigens in particular, viral antigens such as Nucleocapside protein
  • antibodies antibodies, hormones, cancer markers, heart disease markers and the like are preferred.
  • a substance analogous to a substance to be measured analog
  • a substance that specifically binds to the substance to be measured hereinafter also referred to as a "substance that binds to the substance to be measured”
  • Anything that competes with the substance may be used.
  • the similar substance may be any substance as long as it binds to the binding site for the target substance of the target substance-binding substance.
  • the analogous substance may have the same site as the binding site of the substance to be measured that binds to the substance to be measured.
  • Substances that specifically bind to the substance to be measured in the present invention include, for example, reaction between “antigen” - “antibody”, reaction between “sugar chain” - “protein”, reaction between “sugar chain” - Reaction between “lectin”, reaction between “enzyme” - “inhibitor”, reaction between “protein” - “peptide chain”, reaction between “protein” - “protein”, reaction between “chromosome or nucleotide chain” - “nucleotide chain” , ⁇ nucleotide chain'' - ⁇ protein' or the like, which binds to the substance to be measured or its analogous substance by interaction such as reaction.
  • the other one is the substance that binds to the substance to be measured.
  • the analyte or its analogue is an "antigen”
  • the analyte-binding substance is an "antibody”
  • the analyte-binding substance is It is an "antigen” (hereinafter, the same applies to each of the other combinations described above).
  • a substance that binds to a substance to be measured binds to the substance to be measured or a similar substance through reaction between "antigen” - "antibody”, reaction between "sugar chain” - “lectin”, or reaction between “sugar chain” - “protein”. things are preferred. Specifically, an antibody against the substance to be measured or its analogue, an antigen to which the substance to be measured or its analogue binds, or a protein that binds to the substance to be measured or its analogue is preferable, and the substance to be measured or its analogue Antibodies against or proteins that bind to the substance to be measured or analogues thereof are more preferable.
  • the substance to be measured is particularly preferably an antigen or an antibody, and the substance to be measured is measured by antigen-antibody reaction and subsequent luminescence reaction.
  • the method for measuring a substance to be measured of the present invention includes the sandwich method, the competitive method and the Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 2001-1982 described in the literature [for example, Enzyme Immunoassay 2nd Edition (Eiji Ishikawa et al. It may be carried out according to the measuring method described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 06-130063.
  • an analyte-binding substance is immobilized on the surface of a solid-phase carrier such as magnetic silica particles, and a sample, a solid-phase carrier, and an analyte-binding substance labeled with a labeling substance are combined. are mixed, and the immobilized analyte-binding substance, the analyte in the sample, and the labeled analyte-binding substance are brought into contact with each other.
  • a solid-phase carrier such as magnetic silica particles
  • a labeled complex which is a complex of the immobilized analyte-binding substance, the analyte in the sample, and the labeled analyte-binding substance, is formed.
  • the solid-phase carrier carrying the labeled complex is subjected to B/F separation, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the substance to be measured in the sample is measured based on the amount of the labeled substance in the labeled complex. measure the amount of
  • any support in particular, insoluble support used in ordinary immunoassays can be used.
  • inorganic substances such as glass, silicon oxide, diatom, porous glass, frosted glass, alumina, silica gel, and metal oxides; magnetic substances such as iron, cobalt, nickel, magnetite, and chromite; and alloys of these magnetic substances as a material.
  • Immobilization can be performed on a solid phase (eg, any surface such as beads, magnetic beads, membranes, plates, etc.).
  • a solid phase eg, any surface such as beads, magnetic beads, membranes, plates, etc.
  • Various commercially available magnetic beads can be used.
  • magnetic beads for example, beads disclosed in WO 2012/173002 may be used.
  • sandwich assays the immobilized analyte-binding substance and the labeled analyte-binding substance generally do not compete with each other for binding to the analyte, but simultaneously bind to the target component.
  • the substance to be measured in the sample and the substance to be measured immobilized on the surface of the solid phase carrier such as magnetic silica particles are brought into contact with each other to immobilize the substance on the surface of the solid phase carrier.
  • a complex is formed between the analyte-binding substance and the analyte in the sample.
  • the complex is further brought into contact with the labeled analyte-binding substance, resulting in a complex of the analyte-binding substance immobilized on the solid-phase carrier, the analyte in the sample, and the labeled analyte-binding substance.
  • labeled complex is formed.
  • the labeled complex is B/F separated, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the amount of the substance to be measured in the sample is measured based on the amount of the labeled substance in the labeled complex.
  • the analyte binding substance in the sample is reacted with the immobilized analyte binding substance, and then the labeled analyte binding substance is allowed to react.
  • the immobilized binding substance to be measured may be reacted, or these three may be reacted at the same time.
  • the B/F separation (Bond/Free separation) in the above sandwich method means the separation of a substance supported on a solid phase carrier and other substances.
  • the binding substance to be measured immobilized on a solid-phase carrier the complex of the binding substance to be measured immobilized on the solid-phase carrier and the substance to be measured in the sample, the above-mentioned labeled complex, and others components (components other than the analyte in the sample, labeled analyte-binding substances that did not participate in the formation of the labeled complex, etc.).
  • the B/F separation step is an essential step after the formation of the labeled complex. It may also be carried out after forming the body.
  • the sandwich method can also be performed by microfluidic chips (micro-total analysis systems; ⁇ TAS).
  • the microfluidic chip has a channel, and the channel has a sample introduction port.
  • the target substance is brought into contact with the target substance to form a complex of the target substance-binding substance and the target substance, an electric field is applied to move the complex, and the labeled target substance-binding substance existing in the flow path is removed.
  • the complex comes into contact with B/F After being separated, it reaches the detection part on the channel, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the amount of the substance to be measured in the sample is measured based on the amount of the labeled substance in the labeled complex. .
  • lectin electrophoresis may be used.
  • Lectin electrophoresis is electrophoresis using a gel containing lectins, and molecules that interact with lectins during electrophoresis migrate slower than molecules that do not interact. is the separation method of A lectin, which is a binding substance to be measured, is either free in the gel or immobilized on the gel. Since lectins hardly migrate by electrophoresis, the migration speed of the substance to be measured can be reduced by simply mixing them with gel materials to prepare a gel. Alternatively, the lectin is non-covalently or covalently linked to the gel.
  • the biological sample can be separated by lectin electrophoresis using the lectin.
  • a molecule having a lectin-binding sugar chain repeatedly interacts with the lectin immobilized on the gel during electrophoresis, resulting in delayed electrophoresis.
  • lectin non-binding molecules do not interact with the lectin immobilized on the gel and migrate quickly.
  • electrophoresis can separate molecules having lectin-binding sugar chains from molecules that do not bind to lectin. Lectin electrophoresis can be appropriately carried out by those skilled in the art.
  • a substance to be measured or a substance analogous thereto is immobilized on the surface of a solid phase carrier, and a sample, a solid phase carrier, and a substance that binds to the substance to be measured labeled with a labeling substance.
  • the substance to be measured in the sample and the immobilized substance to be measured or its analogous substance are brought into contact with the labeled substance-binding substance to compete with the immobilized substance to be measured or its analogous substance.
  • the labeled analyte-binding substance to form a labeled complex.
  • the solid-phase carrier carrying the labeled complex is subjected to B/F separation, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the substance to be measured in the sample is measured based on the amount of the labeled substance in the labeled complex. can be measured.
  • the substance to be measured in the sample is allowed to compete with the immobilized substance to be measured or a substance analogous thereto, brought into contact with the labeled substance-binding substance, and immobilized on the surface of the solid-phase carrier.
  • a labeled complex is formed that includes the labeled analyte or its analogue and the labeled analyte-binding substance.
  • the solid-phase carrier carrying the labeled complex is subjected to B/F separation, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the measurement target in the sample is It is sufficient to measure the amount of substance.
  • the target substance in the sample, the labeled target substance-binding substance, and the immobilized target target substance or its analogue are allowed to undergo a competitive reaction at the same time.
  • a labeled analyte-binding substance may be added after mixing with the labeled analyte or its analogous substance to allow a competitive reaction.
  • a solid-phase carrier on which the immobilized analyte or its analogue is immobilized may be added for competitive reaction.
  • the B/F separation in the above competitive method means the separation of the substance supported on the solid phase carrier and other substances. That is, it means separation of the labeled complex, the labeled analyte-binding substance that did not participate in the formation of the labeled complex, and the complex of the labeled analyte-binding substance and the analyte.
  • a solid-phase carrier on which a substance to be measured or a substance analogous thereto is immobilized and a complex of a solid-phase carrier on which a substance to be measured or a substance analogous thereto is immobilized, a labeled substance-binding substance, and other components It means separation from (a component other than the substance to be measured in the sample, a substance bound to the substance to be measured, a complex of the substance to be measured, etc.).
  • an analyte-binding substance is immobilized on the surface of a solid phase carrier, and a sample, a solid phase carrier, and an analyte labeled with a labeling substance or its A labeled target substance or its analogue, which is a similar substance, is mixed, and the target substance in the sample is allowed to compete with the labeled target substance or its analogue, and is brought into contact with the immobilized target substance-binding substance. to form a labeled complex, which is a complex containing the immobilized analyte-binding substance and the labeled analyte or its analogous substance.
  • the solid-phase carrier carrying the labeled complex is subjected to B/F separation, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the substance to be measured in the sample is measured based on the amount of the labeled substance in the labeled complex. can be measured.
  • the analyte in the sample, the labeled analyte or its analogue, and the immobilized analyte-binding substance are brought into contact with each other to obtain the immobilized analyte-binding substance.
  • the solid-phase carrier carrying the labeled complex is subjected to B/F separation, the amount of the labeled substance in the labeled complex is measured, and the measurement target in the sample is All you have to do is measure the substance.
  • the substance to be measured in the sample, the labeled substance to be measured or its analogue, and the immobilized substance-binding substance to be measured are subjected to a competitive reaction at the same time.
  • a labeled substance to be measured or a substance analogous thereto may be added to cause a competitive reaction.
  • a solid phase carrier on which the substance binding to the substance to be measured is immobilized may be added to cause a competitive reaction.
  • the B/F separation in the above competitive method means the separation of the substance supported on the solid phase carrier and other substances.
  • it means the separation of the labeled complex from the labeled substance to be measured or analogue thereof that did not participate in the formation of the labeled complex.
  • the solid-phase carrier on which the analyte-binding substance is immobilized, the complex of the solid-phase carrier on which the analyte-binding substance is immobilized and the analyte in the sample, and the analyte-binding substance are immobilized a complex of the solid-phase carrier and the labeled analyte or its analogue, and other components (components other than the analyte in the sample, the labeled analyte or its analogue that did not participate in the formation of the labeled complex) substance, etc.).
  • the B/F separation step is an essential step after the labeled complex is formed. It may also be implemented in
  • the amount of the enzyme when the substance to be measured is an enzyme, the amount of the enzyme, which is the substance to be measured, may be measured by a method using an enzyme activity method other than the sandwich method or the competitive method.
  • a sample containing an analyte is brought into contact with an analyte-binding substance immobilized on the surface of a solid-phase carrier (for example, a substance capable of binding to an enzyme such as an antibody), and After forming a complex between an enzyme and an immobilized substance-binding substance to be measured, and performing B/F separation on the solid-phase carrier carrying the complex, a substrate corresponding to the type of enzyme, or
  • a method of adding a substrate and a chromogenic (light) agent, optionally a conjugated enzyme, and measuring the amount of the enzyme in the sample based on the change in the substrate or the chromogenic (light) result of the chromogenic (light) agent can be measured.
  • Substrates, color-developing (light) agents, and coupling enzymes may be known ones.
  • the enzyme that is the substance to be measured is peroxidase
  • hydrogen peroxide is used as the substrate
  • a luminol luminescence reagent or the like is used as the luminescent agent. should be used. The amount of these used may also be within the range usually used in this field.
  • the B/F separation in the above method includes a complex of the target substance in the sample and the solid-phase carrier on which the target substance-binding substance is immobilized, and other components (components other than the target substance in the sample, etc.) means separation from
  • an analyte in a sample an immobilizing substance immobilized on the surface of a solid-phase carrier, a labeled analyte-binding substance, a labeled analyte or a similar substance, etc.
  • a treatment such as agitation or mixing that is usually performed.
  • the reaction time may be appropriately set depending on the substance to be measured, the substance that binds to the substance to be measured, the sandwich method, the competitive method, etc., but is usually 1 minute to 24 hours, preferably 1 minute to 1 hour, More preferably 1 to 10 minutes, particularly preferably 1 to 5 minutes.
  • the B/F separation in the method for measuring a substance to be measured of the present invention utilizes the magnetism of the solid phase carrier, collects the solid phase carrier from the outside of the reaction vessel with a magnet or the like, discharges the reaction solution, and removes the washing solution. is added, the magnet is removed, the solid phase carrier is mixed and dispersed, and washed. The above operation may be repeated 1 to 3 times.
  • the cleaning liquid is not particularly limited as long as it is commonly used in this field.
  • an enzyme used in, for example, enzyme immunoassay (EIA) is preferable.
  • Enzymes include alkaline phosphatase, ⁇ -galactosidase, horseradish peroxidase (HRP), peroxidase such as microperoxidase, glucose oxidase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, malate dehydrogenase, luciferase, tyrosinase, acid phosphatase, and the like. can be mentioned.
  • alkaline phosphatase, peroxidase and glucose oxidase are more preferred, and peroxidase is particularly preferred.
  • an enzyme is used as the labeling substance and the luminescence reaction is an enzymatic reaction.
  • a preferred example of the enzymatic reaction is a reaction with peroxidase in the presence of hydrogen peroxide.
  • the amount of the labeling substance to be used varies depending on the type of labeling substance used, so it cannot be generalized. It is preferred to have a molar ratio of ⁇ 20, preferably a molar ratio of 1:1-10, more preferably a molar ratio of 1:1-2.
  • the peroxidase-labeled analyte-binding substance is Tris buffer, phosphate buffer, Veronal buffer, borate buffer, Good's buffer (e.g., MES (2-morpholinoethanesulfonic acid) buffer, etc.). ), etc., which are usually used in this field.
  • the pH of the buffer solution may be within a range that does not suppress the antigen-antibody reaction, and is usually 5 to 9.
  • buffers may contain stabilizers such as albumin, globulin, water-soluble gelatin, polyethylene glycol, surfactants, sugars, etc., as long as they do not inhibit the desired antigen-antibody reaction. You can leave it.
  • pH means a numerical value measured (at a measurement temperature of 25° C.) according to JISK0400-12-10:2000.
  • Methods for measuring labeled substances or their activity include chemiluminescence immunoassays (CLIA and CLEIA), and CLEIA is preferable from the viewpoint of sensitivity in immunoassays in a short time.
  • the luminescent substrate used in the present invention is preferably a nitrogen-containing heterocyclic compound having an amino group or a salt thereof, such as a 2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione compound having an amino group, and 8-amino-5-chloro-7-phenylpyrido[3,4-d]pyridazine-1,4(2H,3H)-dione (L-012) or salts thereof.
  • a nitrogen-containing heterocyclic compound having an amino group or a salt thereof such as a 2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione compound having an amino group, and 8-amino-5-chloro-7-phenylpyrido[3,4-d]pyridazine-1,4(2H,3H)-dione (L-012) or salts thereof.
  • 2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione compounds examples include known 2, 3-dihydro-1,4-phthalazinedione compounds and mixtures thereof and the like can be used.
  • luminol, isoluminol, N-aminohexyl-N-ethylisoluminol (AHEI), N-aminobutyl-N-ethylisoluminol (ABEI) and metal salts thereof (such as alkali metal salts) are preferred, More preferred are luminol and its metal salts, particularly preferred is the sodium salt of luminol.
  • L-012 The structure of L-012 is shown below.
  • the luminescent substrate is 2-hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid, tricine, trishydroxymethylaminomethane, boric acid, N-tris(hydroxymethyl)
  • a buffer solution selected from methyl-3-aminopropanesulfonic acid, N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid, 2-cyclohexylaminoethanesulfonic acid, or salts thereof .
  • An inhibitor of the influence of a disinfectant on measurement comprising a buffer solution selected from aminopropanesulfonic acid, N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid, 2-cyclohexylaminoethanesulfonic acid, and salts thereof.
  • the inhibitor described above can be used in the method for measuring a substance to be measured according to the present invention and the method for suppressing the influence of a disinfectant on measurement according to the present invention.
  • the inhibitor is 2-hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid, tricine, trishydroxymethylaminomethane, boric acid, N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-amino It is also one of preferred embodiments of the present invention to include a buffer solution selected from propanesulfonic acid or salts thereof.
  • Luminescent substrates are as described herein above.
  • the content of the luminescent substrate in the luminescent reagent is appropriately set depending on the type, the applied measurement method, the measurement conditions, etc., but is preferably 0.1 to 80 mM from the viewpoint of the chemiluminescence enhancing effect and storage stability. It is preferably 0.2 to 40 mM, particularly preferably 0.3 to 10 mM.
  • the content of the inhibitor (predetermined buffer) in the luminescence reagent is preferably 1 to 500 mM, more preferably 5 to 300 mM, and particularly preferably 10 to 200 mM, from the viewpoint of enhancing the chemiluminescence effect and storage stability. .
  • a reagent kit for measuring a substance to be measured which contains the inhibitor of the present invention or the luminescent reagent of the present invention.
  • the above reagent kit can contain luminescence reaction reagents.
  • luminescence reaction reagents for example, an oxidizing agent and water can be used as the luminescent reaction reagent.
  • oxidizing agent in the luminescence reaction reagent examples include, for example, known oxidizing agents described in JP-A-08-261943 and JP-A-2000-279196 [inorganic peroxides (hydrogen peroxide, sodium perborate, and potassium perborate, etc.), organic peroxides (dialkyl peroxide, acyl peroxide, etc.), peroxoacid compounds (peroxosulfuric acid, peroxophosphoric acid, etc.), etc.].
  • aqueous hydrogen peroxide solution, aqueous sodium perborate solution, and aqueous potassium perborate solution are preferred from the viewpoint of storage stability and the like, and aqueous hydrogen peroxide solution is more preferred.
  • the concentration of the oxidizing agent is appropriately set according to its type, the applied measurement method and measurement conditions, etc., but from the viewpoint of enhancing the chemiluminescence effect, etc., it is preferably 0.1 to 40 mM, more preferably 1 to 20 mM, and particularly preferably 1 to 20 mM. is 2-10 mM.
  • the reagent kit of the present invention includes a solid phase carrier, a substance-binding substance-to-be-measured labeled with a labeling substance, or a reagent containing a substance-to-be-measured or a similar substance labeled with a labeling substance (hereinafter referred to as , also referred to as a labeling reagent).
  • the labeling reagent can contain a buffer solution or the like in addition to the measurement target substance-binding substance labeled with a labeling substance, or the measurement target substance labeled with a labeling substance or a similar substance.
  • a buffer solution or the like in addition to the measurement target substance-binding substance labeled with a labeling substance, or the measurement target substance labeled with a labeling substance or a similar substance.
  • a buffer commonly used in immunoassays is preferred.
  • MES 2-morpholinoethanesulfonic acid, manufactured by Dojindo Laboratories
  • sodium chloride manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • BSA manufactured by Sigma-Aldrich Japan Co., Ltd.
  • EPPS manufactured by Dojindo Laboratories
  • L- 012 manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • luminol sodium salt manufactured by Sigma-Aldrich Japan Co., Ltd.
  • phosphoric acid manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • hydrogen peroxide manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • First reagent antibody-immobilized magnetic particle reagent
  • ⁇ -Aminopropyltriethoxysilane manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.
  • succinic anhydride manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • magnetic silica particles product name: Magrapid, manufactured by Sanyo Chemical Industries, Ltd.
  • an anti-Nucleocapside antibody (recognizes SARS-CoV-2 Nucleocapside A mouse monoclonal antibody) was reacted at 26° C. for 12 to 16 hours, magnetically collected with a neodymium magnet, and the supernatant was removed to prepare antibody-immobilized magnetic particles, and a first reagent having the following composition was prepared.
  • ⁇ Anti-Nucleocapside antibody solid-phase magnetic particles 1mg/mL ⁇ 50mM MES (pH5.5) ⁇ 500mM sodium chloride
  • Second reagent (reaction buffer) A buffer solution having the following composition was prepared. ⁇ 50mM MES (pH6.0) ⁇ 500mM sodium chloride
  • the amount of luminescence was measured by the method shown below, and the influence of sodium hypochlorite in the atmosphere was evaluated.
  • Buffering agents used for evaluation EPPS (manufactured by Dojindo Laboratories, Comparative Example 1), BES (manufactured by Dojindo Laboratories, Comparative Example 2), BICINE (manufactured by Dojindo Laboratories, Comparative Example 3), HEPPSO (Dojindo Laboratories, Comparative Example 3) (manufactured by Dojindo Laboratories, Comparative Example 4), HEPES (manufactured by Dojindo Laboratories, Comparative Example 5), TAPSO (manufactured by Dojindo Laboratories, Example 1), Tricine (manufactured by Dojindo Laboratories, Example 2), trishydroxymethyl Aminomethane (hereinafter referred to as "Tris") (manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Example 3), boric acid (manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd
  • reagents (1) First reagent (antibody solid-phase magnetic particle reagent) Using an anti-thyroid stimulating hormone (hereinafter referred to as "TSH") antibody (mouse monoclonal antibody), antibody solid-phase particles were prepared by the method described in Example 1, and a first reagent having the following composition was prepared. .
  • TSH anti-thyroid stimulating hormone
  • Second reagent (reaction buffer) A buffer solution having the following composition was prepared. ⁇ 50mM MES (pH6.0) ⁇ 500mM sodium chloride
  • Fourth Reagent A having the following composition was prepared.
  • the amount of luminescence was measured by the method shown below.

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Abstract

２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含む、測定対象物質の測定方法。

Description

測定対象物質の測定方法、消毒剤による測定への影響の抑制方法、抑制剤、発光試薬及び試薬キット
　本発明は、消毒剤による測定への影響を抑制した測定対象物質の測定方法、並びに消毒剤による測定への影響の抑制方法に関する。本発明はさらに、消毒剤による測定への影響の抑制剤に関する。本発明はさらに、上記抑制剤を含む発光試薬、及び試薬キットに関する。
　抗原抗体反応などの特異的な結合パートナーによる結合を利用した測定対象物質の測定方法は、結合パートナーの測定対象物質への特異性が高く、結合の親和性も高いことから、測定対象物質を特異的かつ高感度で、迅速かつ簡便に測定することが可能である。そのため、特異的な結合パートナーを用いた測定法は、臨床化学検査においてホルモン、腫瘍マーカー、ウイルス・細菌、自己抗体、血液凝固線溶系などの測定項目の検査に利用されたり、食品に含まれる有害物質の検出、環境ホルモンの調査、乱用薬物のスクリーニングなどの検査にも応用されている。
　一方、測定対象物質の測定方法においては、様々な原因により測定感度が低下するという問題もある。測定感度の低下を抑制する方法としては、例えば、特許文献１には、酸化還元発色試薬のカップラーとしてアミノアンチピリン系化合物を用いる生体成分測定法において、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸）、トリス（ヒドロキシメチル） アミノメタン、及びそれらの塩からなる群より選択される少なくとも１種の緩衝剤を使用することが記載されている。
　また、特許文献２には、試料中の還元物質の作用を消去するために添加した酸化剤による影響を排除するための方法として、Ｂｉｃｉｎｅ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＤＩＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＥＰＰＳ、グリシルグリシン、トリス、ＴＡＰＳＯ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、ＭＯＰＳＯ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳ、ＡＤＡ、ＢＥＳ及びリン酸塩からなる群から選択された少なくとも一つの処理剤を試料に添加することが記載されている。
国際公開第２０１９／２１６４０８号 特開２０００－０９７９２７号公報
　病院や検査会社などの医療の現場においては、菌やウイルスを無毒化したり、数を減らしたりすること等を目的に次亜塩素酸などの消毒剤を空間に噴霧している場合がある。本発明者は、次亜塩素酸の噴霧により、測定対象物質を測定する際に使用する発光基質に影響が生じ、測定対象物質の測定に影響が生じることがあることを見出した。
　本発明は、消毒剤による測定への影響を抑制できるような測定対象物質の測定方法、並びに消毒剤による測定への影響の抑制方法を提供することを解決すべき課題とする。本発明はさらに、消毒剤による測定への影響の抑制剤、及び上記抑制剤を含む発光試薬、及び試薬キットを提供することを解決すべき課題とする。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、本発明において規定する所定の緩衝液に溶解した発光基質を用いて発光反応を行うことによって、消毒剤又はその分解物の存在下であっても消毒剤による測定への影響を抑制できることを見出した。本発明は上記知見に基づいて完成したものである。
　即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
＜１＞　２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含む、測定対象物質の測定方法。
＜２＞　消毒剤が、塩素を含有する化合物である、＜１＞に記載の方法。
＜３＞　消毒剤が、次亜塩素酸又は二酸化塩素である、＜１＞又は＜２＞に記載の方法。
＜４＞　発光反応が酵素反応である、＜１＞～＜３＞の何れか一に記載の方法。
＜５＞　酵素反応が、過酸化水素の存在下で行われるペルオキシダーゼによる反応である、＜１＞～＜４＞の何れか一に記載の方法。
＜６＞　発光基質が、アミノ基を有する窒素含有複素環式化合物である、＜１＞～＜５＞の何れか一に記載の方法。
＜７＞　測定対象物質が抗原又は抗体であり、抗原抗体反応及びその後の発光反応により、測定対象物質を測定する、＜１＞～＜６＞の何れか一に記載の方法。
＜８＞　２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含む、消毒剤又はその分解物による測定対象物質の測定への影響を抑制する方法。
＜９＞　消毒剤が、塩素を含有する化合物である、＜８＞に記載の方法。
＜１０＞　消毒剤が、次亜塩素酸又は二酸化塩素である、＜８＞又は＜９＞に記載の方法。
＜１１＞　発光反応が酵素反応である、＜８＞～＜１０＞の何れか一に記載の方法。
＜１２＞　酵素反応が、過酸化水素の存在下で行われるペルオキシダーゼによる反応である、＜８＞～＜１１＞の何れか一に記載の方法。
＜１３＞　発光基質が、アミノ基を有する窒素含有複素環式化合物である、＜８＞～＜１２＞の何れか一に記載の方法。
＜１４＞　測定対象物質が抗原又は抗体であり、抗原抗体反応及びその後の発光反応により、測定対象物質を測定する、＜８＞～＜１３＞の何れか一に記載の方法。
＜１５＞　２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液を含む、消毒剤又はその分解物による測定対象物質の測定への影響の抑制剤。
＜１６＞　＜１＞から＜１４＞の何れか一に記載の方法において使用するための、＜１５＞に記載の抑制剤。
＜１７＞　＜１５＞又は＜１６＞に記載の抑制剤と、発光基質とを含む、発光試薬。
＜１８＞　＜１５＞又は＜１６＞に記載の抑制剤、又は＜１７＞に記載の発光試薬を含む、測定対象物質の測定のための試薬キット。
＜１９＞　さらに発光反応試薬を含む、＜１８＞に記載の試薬キット。
　本発明によれば、消毒剤による測定への影響を抑制することができる。本発明による消毒剤による測定への影響の抑制剤、発光試薬及び試薬キットによれば、消毒剤による測定への影響を抑制しつつ測定対象物質の測定を行うことが可能になる。
図１は、次亜塩素酸ナトリウムが化学発光反応に及ぼす影響を検証した結果を示す。 図２は、次亜塩素酸ナトリウムの影響に対する各種緩衝液の抑制効果を検証した結果を示す。 図３は、次亜塩素酸ナトリウムの影響に対する各種緩衝液の抑制効果を検証した結果を示す。
　以下において、本発明について詳細に説明する。本明細書においてｍＭは、ｍｍｏｌ／Ｌを示す。
[測定対象物質の測定方法、及び消毒剤による測定への影響を抑制する方法]
　本発明による測定対象物質の測定方法、及び本発明による消毒剤による測定への影響を抑制する方法は、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（TAPSOとも表記する）、トリシン（Tricineとも表記する）、トリスヒドロキシメチルアミノメタン（Trisとも表記する）、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（TAPSとも表記する）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ACESとも表記する）、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（CHESとも表記する）又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含む。上記塩としては、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム等が挙げられる。
　また、本発明による測定対象物質の測定方法、及び本発明による消毒剤による測定への影響を抑制する方法が、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含むことも、本発明の好ましい態様の一つである。
　本発明においては、発光基質を２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した状態において使用することによって、消毒剤又はその分解物の存在に起因するブランクでの発光量の増大を抑制することができる。また、上記緩衝液のうち、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液は、欧州のＲＥＡＣＨ規則（化学品の登録、評価、認可及び制限に関する規則）の対象外の緩衝液であることからより有用である。
　本発明における消毒剤は、好ましくは、塩素を含有する化合物である。消毒剤は、特に好ましくは、次亜塩素酸又はその塩、或いは二酸化塩素である。次亜塩素酸の塩としては、好ましくは次亜塩素酸ナトリウムである。消毒剤の分解物としては、例えば、消毒剤が次亜塩素酸である場合には、その分解物である、次亜塩素酸イオンなどが挙げられる。
　本発明においては、例えば、磁性シリカ粒子などの固相担体の表面に測定対象物質、測定対象物質の類似物質、又は、測定対象物質と特異的に結合する測定対象物質結合物質が固定化された固相担体を用いて試料中の測定対象物質を測定することができる。
　本発明における測定対象物質としては、通常この分野で測定されるものであれば特に限定はされず、例えば血清、血液、血漿、尿等の生体体液、リンパ液、血球、各種細胞類等の生体由来の試料中に含まれるタンパク質、脂質タンパク質、核酸、免疫グロブリン、血液凝固関連因子、抗体、酵素、ホルモン、癌マーカー、心疾患マーカー及び各種薬物等が代表的なものとして挙げられる。更に具体的には、例えばアルブミン、ヘモグロビン、ミオグロビン、トランスフェリン、プロテインＡ、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）等のタンパク質、例えば高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比重リポ蛋白質等の脂質蛋白質、例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）等の核酸、例えばアルカリ性ホスファターゼ、アミラーゼ、酸性ホスファターゼ、γ－グルタミルトランスフェラーゼ（γ－ＧＴＰ）、リパーゼ、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）、レニン、プロテインキナーゼ（ＰＫ）、チロシンキナーゼ等の酵素、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等の免疫グロブリン（或いはこれらの、例えばＦｃ部、Ｆａｂ部、Ｆ（ａｂ）２部等の断片）、例えばフィブリノーゲン、フィブリン分解産物（ＦＤＰ）、プロトロンビン、トロンビン等の血液凝固関連因子、例えば抗ストレプトリジンＯ抗体、抗ヒトＨ．ピロリ抗体、抗ヒトＢ型肝炎ウイルス表面抗原抗体（抗ＨＢｓ抗原抗体）、抗ヒトＢ型肝炎コア抗原抗体（抗ＨＢｃ抗原抗体）、抗ヒトＣ型肝炎ウイルス抗体、抗リュウマチ因子等の抗体、例えばＢ型肝炎ウィルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、例えば、SARS-CoV-2（COVID-19，2019-nCoV）Nucleocapsidタンパク質などのNucleocapsideタンパク質、例えば甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、甲状腺ホルモン（ＦＴ３、ＦＴ４、Ｔ３、Ｔ４）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、エストラジオール（Ｅ２）、コルチゾール、アルドステロン等のホルモン、例えばα－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９－９、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）等の癌マーカー、例えばトロポニンＴ（ＴｎＴ）、ヒト脳性ナトリウム利尿ペプチド前駆体Ｎ端フラグメント（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）等の心疾患マーカー、例えば抗てんかん薬、抗生物質、テオフィリン等の薬物等が挙げられる。上記したものの中でも、抗原（なかでも、Nucleocapsideタンパク質等のウイルス抗原）、抗体、ホルモン、癌マーカー、心疾患マーカー等が好ましい。
　本発明における測定対象物質の類似物質（アナログ）は、測定対象物質と測定対象物質と特異的に結合する物質（以下、「測定対象物質結合物質」ともいう）との反応時に存在すると、測定対象物質と競合するものであれば何れでもよい。
　例えば、類似物質は、測定対象物質結合物質が有する測定対象物質との結合部位と結合するものであれば何れでもよい。更に、類似物質は、測定対象物質が有する測定対象物質結合物質との結合部位と同じ部位を有していてもよい。
　本発明における測定対象物質と特異的に結合する物質（測定対象物質結合物質）としては、例えば「抗原」－「抗体」間反応、「糖鎖」－「タンパク質」間反応、「糖鎖」－「レクチン」間反応、「酵素」－「インヒビター」間反応、「タンパク質」－「ペプチド鎖」間反応、「タンパク質」－「タンパク質」間反応、「染色体又はヌクレオチド鎖」－「ヌクレオチド鎖」間反応、「ヌクレオチド鎖」－「タンパク質」間反応等の相互反応によって測定対象物質又はその類似物質と結合するもの等が挙げられる。上記各組合せに於いて何れか一方が測定対象物質又はその類似物質である場合、他の一方がこの測定対象物質結合物質である。例えば、測定対象物質又はその類似物質が「抗原」であるときは測定対象物質結合物質は「抗体」であり、測定対象物質又はその類似物質が「抗体」であるときは測定対象物質結合物質は「抗原」である（以下、その他の上記各組合せにおいても同様である）。
　測定対象物質結合物質としては、「抗原」－「抗体」間反応、「糖鎖」－「レクチン」間反応或いは「糖鎖」－「タンパク質」間反応によって測定対象物質又はその類似物質と結合するものが好ましい。具体的には、測定対象物質又はその類似物質に対する抗体、測定対象物質又はその類似物質が結合する抗原、又は、測定対象物質又はその類似物質に結合するタンパク質が好ましく、測定対象物質又はその類似物質に対する抗体、或いは測定対象物質又はその類似物質に結合するタンパク質が更に好ましい。
　本発明においては、特に好ましくは、測定対象物質が抗原又は抗体であり、抗原抗体反応及びその後の発光反応により、測定対象物質を測定する。
　本発明の測定対象物質測定方法は、当分野で通常行われる、文献［例えば、酵素免疫測定法第２版（石川栄治ら編集、医学書院）１９８２年］記載のサンドイッチ法、競合法及び特開平０６－１３００６３号公報に記載の測定法に準じて行えばよい。
　まず、サンドイッチ法について説明する。
　サンドイッチ法においては、例えば、磁性シリカ粒子などの固相担体の表面に、測定対象物結合物質が固定化されており、試料と、固相担体と、標識物質により標識された測定対象物質結合物質である標識測定対象物質結合物質とを混合し、固定化された測定対象物質結合物質と、試料中の測定対象物質と、標識測定対象物質結合物質とを接触させる。これにより、固定化された測定対象物質結合物質と、試料中の測定対象物質と、標識測定対象物質結合物質との複合体である標識複合体を形成させる。次いで、標識複合体を担持した固相担体をＢ／Ｆ分離して、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質の量を測定する。固相担体としては、通常の免疫学的測定法で用いられる支持体（特に、不溶性の支持体）であれば何れも使用可能であるが、例えば、ポリスチレン、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリルアミド、ポリグリシジルメタクリレート、ポリプロピレン、ポリオレフィン、ポリイミド、ポリウレタン、ポリエステル、ポリ塩化ビニール、ポリエチレン、ポリクロロカーボネート、シリコーン樹脂、シリコーンラバー、アガロース、デキストラン、エチレン－無水マレイン酸共重合物等の有機物；ガラス、酸化ケイ素、ケイソウ、多孔性ガラス、スリガラス、アルミナ、シリカゲル、金属酸化物等の無機物質；鉄、コバルト、ニッケル、マグネタイト、クロマイト等の磁性体等；及びこれらの磁性体の合金を材料として調製されたものが挙げられる。固相化は、固相（例えば、ビーズ、磁気ビーズ、メンブレン、プレートなどのあらゆる表面）に対してなされ得る。磁気ビーズは、市販の様々なものを用いることができる。磁気ビーズとしては、例えば、国際公開第２０１２／１７３００２号に開示されるビーズを用いてもよい。サンドイッチアッセイでは、通常、固定化される測定対象物質結合物質と標識測定対象物質結合物質とは、測定対象物質との結合に関して互いに競合せず、同時に目的成分に結合する。
　具体的には、例えば、試料中の測定対象物質と磁性シリカ粒子などの固相担体の表面に固定化された測定対象物質結合物質とを接触させて、固相担体の表面に固定化された測定対象物質結合物質と試料中の測定対象物質との複合体を形成させる。次に、更に複合体に、標識測定対象物質結合物質を接触させて、固相担体に固定化された測定対象物質結合物質と試料中の測定対象物質と標識測定対象物質結合物質との複合体（標識複合体）を形成させる。標識複合体をＢ／Ｆ分離して、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質の量を測定すればよい。
　上記の方法においては、試料中の測定対象物質と固定化された測定対象結合物質とを反応させた後、標識測定対象物質結合物質を反応させているが、標識測定対象物質結合物質と試料中の測定対象物質とを反応させた後に固定化された測定対象合結合物質を反応させてもよく、これら３つを同時に反応させても構わない。
　上記サンドイッチ法におけるＢ／Ｆ分離（Ｂｏｎｄ／Ｆｒｅｅ分離）とは、固相担体に担持された物質とそれ以外の物質との分離を意味する。
　すなわち、標識複合体と、標識複合体の形成に関与しなかった標識測定対象物質結合物質との分離を意味する。具体的には、固相担体に固定化された測定対象結合物質、固相担体に固定化された測定対象結合物質と試料中の測定対象物質との複合体及び上記の標識複合体と、他の成分（試料中の測定対象物質以外の成分、標識複合体の形成に関与しなかった標識測定対象物質結合物質等）との分離を意味する。
　また、Ｂ／Ｆ分離工程は標識複合体の形成後には必須の工程であるが、その実施時期としては、固相担体の表面に固定化された測定対象物質結合物質と測定対象物質との複合体を形成させた後においても実施してもよい。
　サンドイッチ法は、マイクロ流体チップ（ｍｉｃｒｏ－ｔｏｔａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍｓ；μＴＡＳ）によって行うこともできる。マイクロ流体チップは、流路を備え、流路はサンプル導入口を有し、例えば、試料導入口において、ポリカチオン又はポリアニオン（例えば、ＤＮＡ）を結合した測定対象物質結合物質と、試料中の測定対象物質とを接触させて測定対象物質結合物質と測定対象物質との複合体を形成させ、電場をかけて複合体を移動させ、流路の途中に存在する標識された標識測定対象物質結合物質と複合体が接触すると、測定対象物質結合物質と測定対象物質と標識測定対象物質結合物質の複合体が形成され、更に電場により複合体は、流路を移動して標識複合体をＢ／Ｆ分離されて流路上の検出部に到達し、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質の量を測定すればよい。
　また、レクチン電気泳動法を用いてもよい。レクチン電気泳動法は、レクチンを含むゲルを用いた電気泳動であり、電気泳動中にレクチンと相互作用する分子は、移動速度が、相互作用しない分子よりも遅くなることを利用した、レクチン結合分子の分離方法である。測定対象結合性物質であるレクチンは、ゲル中に遊離しているか、又は、ゲル上に固相化されている。レクチンは、電気泳動によってほとんど移動しないため、単にゲルの材料と混合してゲルを作製することによって、測定対象物質の泳動速度を低下させることができる。或いは、レクチンは、ゲルに対して非共有結合又は共有結合で連結されている。測定対象物質を、レクチンに対して非結合性の分子と分離する場合には、レクチンを用いたレクチン電気泳動により、生体サンプルを分離することができる。レクチン結合性の糖鎖を有する分子は、泳動中にゲル上に固相化されたレクチンと相互作用を繰り返すために、泳動が遅延する。他方で、レクチン非結合性の分子は、ゲル上に固相化されたレクチンとの相互作用がなく、泳動が早い。この原理を用いると、電気泳動によって、レクチン結合性の糖鎖を有する分子と、レクチン非結合性との分子を分離することができる。レクチン電気泳動は、当業者であれば適宜実施することができる。
　次に、競合法について説明する。
　競合法とは、例えば、測定対象物質と特異的に結合する測定対象物質結合物質に対して測定対象物質及び測定対象物質と同じ物質を競合させる或いは測定対象物質及び測定対象物質と同じ物質の類似物質を競合させる反応を利用して、試料中の測定対象物質の量を測定する方法や、測定対象物質に対して２種の測定対象物質結合物質を競合させる反応を利用して、試料中の測定対象物質の量を測定する方法等のことをいう。
　競合法の一例においては、固相担体の表面には、測定対象物質又はその類似物質が固定化されており、試料と、固相担体と、標識物質により標識された測定対象物質結合物質である標識測定対象物質結合物質とを混合する。これにより、試料中の測定対象物質と、固定化された測定対象物質又はその類似物質とを競合させて標識測定対象物質結合物質に接触させて、固定化された測定対象物質又はその類似物質と、標識測定対象物質結合物質とを含む複合体である標識複合体を形成させる。次いで、標識複合体を担持した固相担体をＢ／Ｆ分離して、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質の量を測定することができる。
　具体的には例えば、まず、試料中の測定対象物質と、固定化された測定対象物質又はその類似物質とを競合させて標識測定対象物質結合物質に接触させて、固相担体の表面に固定化された測定対象物質又はその類似物質と、標識測定対象物質結合物質とを含む標識複合体を形成させる。次に、標識複合体を担持した固相担体をＢ／Ｆ分離して、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質の量を測定すればよい。
　この方法においては、試料中の測定対象物質、標識測定対象物質結合物質、及び、固定化された測定対象物質又はその類似物質を同時に競合反応させているが、試料中の測定対象物質と、固定化された測定対象物質又はその類似物質とを混合した後に、標識測定対象物質結合物質を加えて競合反応させてもよい。更に、試料中の測定対象物質と標識測定対象物質結合物質を接触させた後に、固定化された測定対象物質又はその類似物質が固定化された固相担体を加えて競合反応させてもよい。
　上記競合法におけるＢ／Ｆ分離とは、固相担体に担持された物質とそれ以外の物質との分離を意味する。すなわち、標識複合体と、標識複合体の形成に関与しなかった、標識測定対象物質結合物質、及び、標識測定対象物質結合物質と測定対象物質の複合体の分離を意味する。具体的には、測定対象物質又はその類似物質を固定化した固相担体、及び測定対象物質又はその類似物質を固定化した固相担体と標識測定対象物質結合物質との複合体と他の成分（試料中の測定対象物質以外の成分、標識測定対象物質結合物質、測定対象物質の複合体等）との分離を意味する。
　また、競合法の別の態様においては、固相担体の表面には、測定対象物質結合物質が固定化されており、試料と、固相担体と、標識物質により標識された測定対象物質又はその類似物質である標識測定対象物質又はその類似物質とを混合し、試料中の測定対象物質と、標識測定対象物質又はその類似物質とを競合させて固定化された測定対象物質結合物質に接触させて、固定化された測定対象物質結合物質と標識測定対象物質又はその類似物質とを含む複合体である標識複合体を形成させる。次いで、標識複合体を担持した固相担体をＢ／Ｆ分離して、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質を測定することができる。
　具体的には例えば、まず、試料中の測定対象物質と、標識測定対象物質又はその類似物質と、固定化された測定対象物質結合物質とを接触させて、固定化された測定対象物質結合物質に、試料中の測定対象物質と標識測定対象物質又はその類似物質とを競合反応させて、固相担体表面に固定化された測定対象物質結合物質と標識測定対象物質又はその類似物質との標識複合体とを形成させる。次に、標識複合体を担持した固相担体をＢ／Ｆ分離して、標識複合体中の標識物質の量を測定し、標識複合体中の標識物質の量に基づいて試料中の測定対象物質を測定すればよい。
　この競合法においては、試料中の測定対象物質、標識測定対象物質又はその類似物質、及び固定化された測定対象物質結合物質を同時に競合反応させているが、試料中の測定対象物質と固定化された測定対象物質結合物質とを接触させた後に、標識測定対象物質又はその類似物質を加えて競合反応させてもよい。また、試料中の測定対象物質と標識測定対象物質又はその類似物質とを混合した後に、測定対象物質結合物質を固定化した固相担体を加えて競合反応させてもよい。
　上記競合法におけるＢ／Ｆ分離とは、固相担体に担持された物質とそれ以外の物質との分離を意味する。すなわち、標識複合体と、標識複合体の形成に関与しなかった標識測定対象物質又はその類似物質との分離を意味する。具体的には、測定対象物質結合物質を固定化した固相担体、測定対象物質結合物質を固定化した固相担体と試料中の測定対象物質との複合体、及び測定対象物質結合物質を固定化した固相担体と標識測定対象物質又はその類似物質の複合体と、他の成分（試料中の測定対象物質以外の成分、標識複合体の形成に関与しなかった標識測定対象物質又はその類似物質等）との分離を意味する。
　また、Ｂ／Ｆ分離工程は標識複合体の形成後には必須の工程であるが、その実施時期としては、試料中の測定対象物質と固定化された測定対象物質結合物質とを接触させた後においても実施してもよい。
　また、測定対象物質が酵素の場合には、上記サンドイッチ法や競合法以外の酵素活性方法を用いる方法により測定対象物質である酵素の量を測定してもよい。
　例えば、測定対象物質を含む試料と、固相担体の表面に固定化された測定対象物質結合物質（例えば、抗体等の酵素と結合し得る物質）とを接触させて、固相担体の表面に酵素と、固定化された測定対象物質結合物質との複合体を形成させ、複合体を担持した固相担体をＢ／Ｆ分離した後、酵素の種類に応じた基質、又は酵素の種類に応じた基質及び発色（光）剤、要すれば更に共役酵素を添加し、その基質の変化又は発色（光）剤の発色（光）結果に基づいて試料中の酵素の量を測定する方法により、測定することができる。尚、基質、発色（光）剤、共役酵素は、公知のものを用いればよく、例えば測定対象物質である酵素がペルオキシダーゼの場合には、基質として過酸化水素と、発光剤としてルミノール発光試薬等を用いればよい。これらの使用量も通常この分野で用いられる範囲の量であればよい。上記方法におけるＢ／Ｆ分離とは、試料中の測定対象物質と測定対象物質結合物質を固定化した固相担体との複合体と、その他の成分（試料中の測定対象物質以外の成分等）との分離を意味する。
　本発明の測定対象物質測定方法において、試料中の測定対象物質、固相担体の表面に固定化された固定化用物質、標識された測定対象物質結合物質、標識測定対象物質又はその類似物質等を接触させる方法としては、通常なされる撹拌、混合等の処理により、接触さればよい。反応時間は、測定対象物質、用いられる測定対象物質結合物質、サンドイッチ法、競合法等の違いに応じて適宜設定されればよいが、通常１分～２４時間、好ましくは１分～１時間、より好ましくは１～１０分、特に好ましくは１～５分である。
　本発明の測定対象物質の測定方法におけるＢ／Ｆ分離は、例えば、固相担体の磁性を利用し、反応槽の外側等から磁石等により固相担体を集めて、反応液を排出し、洗浄液を加えた後、磁石を取り除き、固相担体を混合して分散させ、洗浄することによりなされる。上記操作を１～３回繰り返してもよい。洗浄液としては、通常この分野で用いられるものであれば特に限定はされない。
　測定対象物質結合物質、測定対象物質又はその類似物質等を標識するために用いられる標識物質としては、例えば酵素免疫測定法（ＥＩＡ）に於いて用いられる酵素であることが好ましい。酵素としては、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、マイクロペルオキシダーゼ等のペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース－６－リン酸脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、ルシフェラーゼ、チロシナーゼ、酸性ホスファターゼ等を挙げることができる。上記の中でもさらに好ましいのはアルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ及びグルコースオキシダーゼであり、特に好ましいのはペルオキシダーゼである。
　本発明においては、上記の通り標識物質として酵素を使用し、発光反応が酵素反応であることが好ましい。酵素反応の好ましい一例としては、過酸化水素の存在下で行われるペルオキシダーゼによる反応である。
　上記した標識物質を測定対象物質結合物質、測定対象物質又はその類似物質等に結合させるには、通常この分野で用いられる方法、例えば公知のＥＩＡにおいて一般に行われている公知の標識方法［例えば、医化学実験講座、第８巻、山村雄一監修、第１版、中山書店、１９７１；図説蛍光抗体、川生明著、第１版、（株）ソフトサイエンス社、１９８３；酵素免疫測定法、石川栄治、河合忠、宮井潔編、第２版、医学書院、１９８２等］等を利用すればよい。
　標識物質の使用量は、用いる標識物質の種類により異なるため一概には言えないが、例えばペルオキシダーゼを標識物質として使用する場合には、測定対象物質結合物質と標識物質とを、例えば通常１：１～２０のモル比、好ましくは１：１～１０のモル比、更に好ましくは１：１～２のモル比となるようにすることが好ましい。また、ペルオキシターゼにより標識された測定対象物質結合物質は、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、グッド緩衝液（例えば、ＭＥＳ（2-モルホリノエタンスルホン酸）緩衝液等）等の通常この分野で用いられている緩衝液中に含有させて用いればよい。
　また、測定対象物質結合物質として、抗原又は抗体を用いる場合には、上記緩衝液のｐＨは、抗原抗体反応を抑制しない範囲であればよく、通常５～９である。また、このような緩衝液中には、目的の抗原抗体反応を阻害しないものであれば、例えばアルブミン、グロブリン、水溶性ゼラチン、ポリエチレングリコール等の安定化剤、界面活性剤、糖類等を含有させておいてもよい。尚、本明細書においてｐＨは、ＪＩＳＫ０４００－１２－１０：２０００に準拠して測定される（測定温度２５℃）数値のことを意味する。
　標識物質又はその活性の測定方法としては、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ及びＣＬＥＩＡ）が挙げられ、短時間での免疫測定における感度の観点から好ましいのはＣＬＥＩＡである。
　本発明において使用する発光基質は、アミノ基を有する窒素含有複素環式化合物又はその塩であることが好ましく、例えば、アミノ基を有する２，３－ジヒドロ－１，４－フタラジンジオン化合物、及び８-アミノ-５-クロロ-７-フェニルピリド［３，４-ｄ］ピリダジン-１，４（２Ｈ，３Ｈ）-ジオン（L-012）又はその塩などが挙げられる。
　２，３－ジヒドロ－１，４－フタラジンジオン化合物としては、例えば、特開平０２－２９１２９９号公報、特開平１０－３１９０１５号公報及び特開２０００－２７９１９６号公報等に記載の公知の２，３－ジヒドロ－１，４－フタラジンジオン化合物及びこれらの混合物等が使用できる。これらの内、ルミノール、イソルミノール、Ｎ－アミノヘキシル－Ｎ－エチルイソルミノール（ＡＨＥＩ）、Ｎ－アミノブチル－Ｎ－エチルイソルミノール（ＡＢＥＩ）及びこれらの金属塩（アルカリ金属塩等）が好ましく、更に好ましいのはルミノール及びその金属塩、特に好ましいのはルミノールのナトリウム塩である。
　L-012の構造を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
［消毒剤による測定への影響の抑制剤、発光試薬、及び試薬キット］
　上記した通り、本発明においては、発光基質を２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した状態において使用することによって、消毒剤又はその分解物の存在に起因するブランクでの発光量の増大を抑制することができる。即ち、本発明によれば、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液を含む、消毒剤による測定への影響の抑制剤が提供される。上記した抑制剤は、本発明による測定対象物質の測定方法、及び本発明による消毒剤による測定への影響の抑制方法において使用することができる。
　また、上記抑制剤が、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液を含むことも、本発明の好ましい態様の一つである。
　本発明においては、上記の抑制剤と発光基質とを含む、発光試薬を提供することができる。発光基質は、本明細書において上記した通りである。
　発光試薬における発光基質の含有量は、その種類及び適用する測定方法や測定条件等によって適宜設定されるが、化学発光増強効果及び保存安定性等の観点から、０．１～８０ｍＭが好ましく、更に好ましくは０．２～４０ｍＭ、特に好ましくは０．３～１０ｍＭである。
　発光試薬における抑制剤（所定の緩衝剤）の含有量は、化学発光増強効果及び保存安定性等の観点から、１～５００ｍＭが好ましく、更に好ましくは５～３００ｍＭ、特に好ましくは１０～２００ｍＭである。
　さらに本発明によれば、上記した本発明の抑制剤、又は本発明の発光試薬を含む、測定対象物質の測定のための試薬キットが提供される。
　上記の試薬キットには、発光反応試薬を含めることができる。発光反応試薬としては、例えば、酸化剤及び水を使用することができる。
　発光反応試薬における酸化剤としては、例えば、特開平０８－２６１９４３号公報及び特開２０００－２７９１９６号公報等に記載の公知の酸化剤等［無機の過酸化物（過酸化水素、過ホウ酸ナトリウム及び過ホウ酸カリウム等）、有機過酸化物（過酸化ジアルキル及び過酸化アシル等）、ペルオクソ酸化合物（ペルオクソ硫酸及びペルオクソリン酸等）等］の水溶液が挙げられる。これらの内、保存安定性等の観点から、過酸化水素水溶液、過ホウ酸ナトリウム水溶液及び過ホウ酸カリウム水溶液が好ましく、更に好ましいのは過酸化水素水溶液である。
　酸化剤の濃度は、その種類及び適用する測定方法や測定条件等によって適宜設定されるが、化学発光増強効果等の観点から、０．１～４０ｍＭが好ましく、更に好ましくは１～２０ｍＭ、特に好ましくは２～１０ｍＭである。
　本発明の試薬キットは、上記以外にも、固相担体、標識物質により標識された測定対象物質結合物質、或いは、標識物質により標識された、測定対象物質又はその類似物質を含有する試薬（以下、標識試薬ともいう）を含んでいてもよい。
　標識試薬には、標識物質により標識された測定対象物質結合物質、或いは、標識物質により標識された測定対象物質又はその類似物質以外に緩衝液等を含むことができる。標識試薬に含まれる緩衝液としては、免疫測定法に通常用いられる緩衝液が好ましい。
　以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
＜参考例＞　次亜塩素酸ナトリウムが化学発光反応に及ぼす影響の検証
＜１＞試薬の調製
　以下の試薬原料を用いて測定に必要な構成試薬を調製した。MES（2-モルホリノエタンスルホン酸、同仁化学研究所製）、塩化ナトリウム（富士フイルム和光純薬株式会社製）、BSA（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）、EPPS（同仁化学研究所製)、L-012（富士フイルム和光純薬株式会社製）、ルミノールナトリウム塩（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）、りん酸（富士フイルム和光純薬株式会社製）、過酸化水素（富士フイルム和光純薬株式会社製）
（１）第一試薬（抗体固相磁性粒子試薬）
　磁性シリカ粒子（商品名：マグラピッド、三洋化成工業株式会社製）にγ-アミノプロピルトリエトキシシラン（信越化学工業株式会社製）、無水こはく酸（富士フイルム和光純薬株式会社製）を次々反応させ、ネオジウム磁石により集磁し上清を除き、カルボキシル基を有する磁性粒子を得た。続いて、N-ヒドロキシこはく酸イミド（富士フイルム和光純薬工業株式会社製）及びWSC（水溶性カルボジイミド、同仁化学研究所製）を用いて、抗Nucleocapside抗体（SARS-CoV-2 Nucleocapsideを認識するマウスモノクローナル抗体)を26℃、12～16時間反応させ、ネオジウム磁石で集磁、上清除去により、抗体固相磁性粒子を調製し、以下の組成からなる第一試薬を調製した。
・抗Nucleocapside抗体固相磁性粒子 1mg/mL
・50mM MES (pH5.5)
・500mM 塩化ナトリウム
（２）第二試薬（反応緩衝液）
　以下の組成の緩衝液を調製した。
・50mM MES (pH6.0)
・500mM 塩化ナトリウム
（３）第三試薬（検出用抗体試薬）
　抗Nucleocapside抗体（マウスモノクローナル抗体）、西洋ワサビ由来ペルオキシダーゼ（以下、「ＰＯＤ」と表記する）を用い、文献（S. YOSHITAKE, M. IMAGAWA, E. ISHIKAWA, H. OGAWA; J Biochem (1982) Vol. 92, (5): 1413-1424）に記載の方法に準じて、ＰＯＤ標識抗Nucleocapside抗体（マウスモノクローナル抗体）を調製した。これを用いて、以下の組成からなら第三試薬を調製した。
・20nM ＰＯＤ標識抗Nucleocapside抗体
・50mM MES (pH5.5)
・150mM 塩化ナトリウム
・2.0% BSA
（４）第四試薬
　以下の組成からなる第四試薬を調製した。
・50mM EPPS (pH8.00)
・0.5mM L-012
（５）第五試薬
　以下の組成からなる第五試薬を調製した。
・68μL/L りん酸
・5.90mM 過酸化水素
　（１）～（５）で得られた各試薬及び溶液を用いて、以下に示す方法により、発光量（平均値）を測定し、大気中の次亜塩素酸ナトリウムの影響を評価した。
＜２＞化学発光反応による発光量の測定
　反応キュベットに添加した第一試薬50μLをネオジウム磁石を用いて集磁し、上清を除き、続いて第二試薬50μL、精製水25μLを加えて撹拌し、37℃で3分間加温した。加温終了後、ネオジウム磁石を用いて集磁し、磁性粒子以外の試薬を除去し、洗浄液で3回洗浄した。続いて、第三試薬50μLを加え、37℃で3分間加温し、加温終了後、ネオジウム磁石を用いて集磁し、磁性粒子以外の試薬を除去し、洗浄液で3回洗浄した。洗浄終了後、加湿器を用いて次亜塩素酸ナトリウム(富士フイルム和光純薬株式会社製) 水溶液1.00ppmを反応槽から約10cmの距離から噴霧するもしくは噴霧していない状態で、第四試薬100μL及び第五試薬100μLを添加し、37℃で20秒反応後、発光量を測定した。結果を図１にそれぞれ示す。図１より、次亜塩素酸ナトリウムが噴霧された環境下において化学発光反応を行うとブランクの発光量が異常な高値を示すことが明らかとなった。
＜実施例１～７及び比較例１～５＞　次亜塩素酸ナトリウムの影響に対する各種緩衝液の抑制効果の検証
　参考例１に記載の第四試薬におけるEPPSを以下に記載の緩衝剤に変更した試薬をそれぞれ調製し、参考例１と同様の方法により、次亜塩素酸ナトリウムを噴霧したときの発光量と次亜塩素酸ナトリウムを噴霧しないときの発光量をそれぞれ測定し、発光量の比を算出した。結果を図２にそれぞれ示す。
評価に用いた緩衝剤
　EPPS（同仁化学研究所製、比較例１)、BES（同仁化学研究所製、比較例２）、BICINE（同仁化学研究所製、比較例３）、HEPPSO（同仁化学研究所製、比較例４）、HEPES（同仁化学研究所製、比較例５）、TAPSO（同仁化学研究所製、実施例１）、Tricine（同仁化学研究所製、実施例２）、トリスヒドロキシメチルアミノメタン(以下、「Tris」と表記する) （富士フイルム和光純薬株式会社製、実施例３）、ホウ酸（富士フイルム和光純薬株式会社製、実施例４）、TAPS（同仁化学研究所製、実施例５）、ACES（同仁化学研究所製、実施例６）、CHES（同仁化学研究所製、実施例７）
　図２より、EPPS、BES、BICINE、HEPPSO、又はHEPESを用いたとしても次亜塩素酸ナトリウムによる化学発光反応への影響を抑制することはできなかった。他方、TAPSO、Tricine、Tris、ホウ酸、TAPS、ACES、又は、CHESによれば、次亜塩素酸ナトリウムによる化学発光反応に及ぼす影響を抑制できることが判った。
＜実施例８及び比較例６＞　次亜塩素酸ナトリウムの影響に対する各種緩衝液の抑制効果の検証
＜１＞試薬の調製
（１）第一試薬（抗体固相磁性粒子試薬）
　抗甲状腺刺激ホルモン(以下、「TSH」と表記する)抗体（マウスモノクローナル抗体）を用いて、実施例１記載の方法で抗体固相粒子を調製し、以下の組成からなる第一試薬を調製した。
・抗TSH抗体固相磁性粒子 1mg/mL
・50mM MES (pH5.5)
・500mM 塩化ナトリウム
（２）第二試薬（反応緩衝液）
　以下の組成の緩衝液を調製した。
・50mM MES (pH6.0)
・500mM 塩化ナトリウム
（３）第三試薬（検出用抗体試薬）
　抗TSH抗体（マウスモノクローナル抗体）、ＰＯＤを用い、文献（S. YOSHITAKE, M. IMAGAWA, E. ISHIKAWA, H. OGAWA; J Biochem (1982) Vol. 92, (5): 1413-1424）に記載の方法に準じて、ＰＯＤ標識抗TSH抗体（マウスモノクローナル抗体）を調製した。これを用いて、以下の組成からなら第三試薬を調製した。
・20nM ＰＯＤ標識抗TSH抗体
・50mM MES (pH5.5)
・150mM 塩化ナトリウム
・2.0% BSA
（４）第四試薬
　以下の組成からなる第四試薬を調製した。
（第四試薬Ａ）
・150mM EPPS (pH8.55)
・0.4g/L ルミノールナトリウム塩
（第四試薬Ｂ）
・150mM Tris (pH8.55)
・0.4g/L ルミノールナトリウム塩
（５）第五試薬
　以下の組成からなる第五試薬を調製した。
・68μL/L りん酸
・2.96mM 過酸化水素
　（１）～（５）で得られた各試薬及び溶液を用いて、以下に示す方法により、発光量（平均値）を測定した。
＜２＞化学発光反応による発光量の測定
　反応キュベットに添加した第一試薬50μLをネオジウム磁石を用いて集磁し、上清を除き、続いて第二試薬50μL、精製水25μLを加えて撹拌し、37℃で3分間加温した。加温終了後、ネオジウム磁石を用いて集磁し、磁性粒子以外の試薬を除去し、洗浄液で3回洗浄した。続いて、第三試薬50μLを加え、37℃で3分間加温し、加温終了後、ネオジウム磁石を用いて集磁し、磁性粒子以外の試薬を除去し、洗浄液で3回洗浄した。洗浄終了後、加湿器を用いて次亜塩素酸ナトリウム(富士フイルム和光純薬株式会社製) 1.00ppmを反応槽から約10cmの距離から噴霧するもしくは噴霧していない状態で、第四試薬（Ａ）(比較例６)もしくは第四試薬（Ｂ）（実施例８）100μL及び第五試薬100μLを添加し、37℃で20秒反応後、発光量を測定し、次亜塩素酸ナトリウム噴霧したときの発光量と次亜塩素酸ナトリウムを噴霧しないときの発光量の比を算出した。結果を図３にそれぞれ示す。図３より、測定対象によらずTris等の特定の緩衝剤によれば、次亜塩素酸ナトリウムによる化学発光反応に及ぼす影響を抑制できることが判った。

Claims (19)

  1. ２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含む、測定対象物質の測定方法。
  2. 消毒剤が、塩素を含有する化合物である、請求項１に記載の方法。
  3. 消毒剤が、次亜塩素酸又は二酸化塩素である、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 発光反応が酵素反応である、請求項１～３の何れか一項に記載の方法。
  5. 酵素反応が、過酸化水素の存在下で行われるペルオキシダーゼによる反応である、請求項１～４の何れか一項に記載の方法。
  6. 発光基質が、アミノ基を有する窒素含有複素環式化合物である、請求項１～５の何れか一項に記載の方法。
  7. 測定対象物質が抗原又は抗体であり、抗原抗体反応及びその後の発光反応により、測定対象物質を測定する、請求項１～６の何れか一項に記載の方法。
  8. ２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液に溶解した発光基質を用いて、消毒剤又はその分解物の存在下において発光反応を行うことを含む、消毒剤又はその分解物による測定対象物質の測定への影響を抑制する方法。
  9. 消毒剤が、塩素を含有する化合物である、請求項８に記載の方法。
  10. 消毒剤が、次亜塩素酸又は二酸化塩素である、請求項８又は９に記載の方法。
  11. 発光反応が酵素反応である、請求項８～１０の何れか一項に記載の方法。
  12. 酵素反応が、過酸化水素の存在下で行われるペルオキシダーゼによる反応である、請求項８～１１の何れか一項に記載の方法。
  13. 発光基質が、アミノ基を有する窒素含有複素環式化合物である、請求項８～１２の何れか一項に記載の方法。
  14. 測定対象物質が抗原又は抗体であり、抗原抗体反応及びその後の発光反応により、測定対象物質を測定する、請求項８～１３の何れか一項に記載の方法。
  15. ２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、トリシン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、２－シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸又はそれらの塩から選択される緩衝液を含む、消毒剤又はその分解物による測定対象物質の測定への影響の抑制剤。
  16. 請求項１から１４の何れか一項に記載の方法において使用するための、請求項１５に記載の抑制剤。
  17. 請求項１５又は１６に記載の抑制剤と、発光基質とを含む、発光試薬。
  18. 請求項１５又は１６に記載の抑制剤、又は請求項１７に記載の発光試薬を含む、測定対象物質の測定のための試薬キット。
  19. さらに発光反応試薬を含む、請求項１８に記載の試薬キット。
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