WO2023008108A1 - 容器、及び細胞輸送装置 - Google Patents

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WO2023008108A1
WO2023008108A1 PCT/JP2022/026658 JP2022026658W WO2023008108A1 WO 2023008108 A1 WO2023008108 A1 WO 2023008108A1 JP 2022026658 W JP2022026658 W JP 2022026658W WO 2023008108 A1 WO2023008108 A1 WO 2023008108A1
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WO
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reference line
culture dish
container
cells
observation
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Application number
PCT/JP2022/026658
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French (fr)
Inventor
俊明 竹澤
Original Assignee
国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/14—Apparatus for enzymology or microbiology with means providing thin layers or with multi-level trays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus

Definitions

  • the present invention relates to a container and a cell transportation device.
  • This application claims priority based on Japanese Patent Application No. 2021-122553 filed in Japan on July 27, 2021, the content of which is incorporated herein.
  • Patent Literature 1 and Patent Literature 2 describe a vessel having a shape generally known as a “T-flask”.
  • the present invention has been made in view of the above circumstances, and provides a container, a method for producing cultured cells, and a cell transportation device that can easily observe cells in the same field of view with a simple configuration.
  • a container for cell observation comprising a bottom wall and a side wall, wherein an observation surface is formed on the bottom wall, and a reference line and an indicator indicating a specific region in the vicinity of the reference line are displayed on the observation surface.
  • container [2] The container according to [1], wherein the specific region is an observation target region for observing temporal changes in cells within the same field of view. [3] In [1] or [2], wherein the reference line and the indicator are positioned within the focal depth of an objective lens of a microscope for cell observation with respect to the observation surface in a direction perpendicular to the observation surface. container as described.
  • the reference line is a line extending from one side of the viewing surface to the other along one direction.
  • the indicator includes a first indicator that indicates a first area arranged at one end of the reference line, a second indicator that indicates a second area arranged at the center of the reference line, and the The container according to [5], including a third indicating portion indicating a third area arranged between the first area and the second area.
  • a method for producing cultured cells comprising the steps of: placing cells and a culture solution in the container according to any one of [1] to [10]; and culturing the cells in the container.
  • a cell transport device having a first culture dish and a second culture dish, wherein the first culture dish has a bottom wall, and the second culture dish has a porous membrane on the bottom wherein the second culture dish is attached to the top of the first culture dish with a gap surrounded by the first culture dish and the porous membrane, and the first A cell transport device, wherein an observation surface is formed on the bottom wall of the culture dish, and a reference line and an indicator indicating a specific region in the vicinity of the reference line are displayed on the observation surface.
  • the present invention it is possible to provide a container, a method for producing cultured cells, and a cell transportation device that can easily observe cells in the same field of view with a simple configuration.
  • FIG. 3 is a cross-sectional view of the container of the present embodiment taken along line AA of FIG. 2;
  • FIG. 3 is a cross-sectional view of another embodiment container along line AA of FIG. 2;
  • FIG. 4 is a top view of another embodiment container;
  • (a) It is a perspective view of the cell transportation apparatus of this embodiment.
  • (b) is a side view of the cell transportation device of the present embodiment;
  • e A top view of the first culture dish.
  • (f) A cross-sectional view of the first culture dish along line BB of FIG. 6(e).
  • FIG. 4 is a microphotograph of the vicinity of the “edge” in Example 1.
  • FIG. 4 is a micrograph of the vicinity of the “between” in Example 1.
  • FIG. 4 is a micrograph of the vicinity of the “center” in Example 1.
  • FIG. 10 is a microscope photograph of the vicinity of the “edge” in Example 2.
  • FIG. 10 is a micrograph taken in the vicinity of “between” in Example 2.
  • FIG. 10 is a micrograph taken near the “center” in Example 2.
  • FIG. 11 is a microscope photograph of the vicinity of the “edge” in Example 3.
  • FIG. 11 is a micrograph taken in the vicinity of “between” in Example 3.
  • FIG. 10 is a micrograph taken near the “center” in Example 3.
  • FIG. Fig. 10 is a microphotograph of each culture dish before seeding and the vicinity of the "edge", “interval”, and "center” of each culture dish containing only the culture solution in Example 4; Fig.
  • Example 10 is a microphotograph of each culture dish before seeding and the vicinity of the "edge", “interval”, and "center” of each culture dish containing only the culture solution in Example 4; “End” and “Between” of the first culture dish A on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 , are micrographs taken in the vicinity of the "center”. “End” and “Between” of the first culture dish A on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 , are micrographs taken in the vicinity of the "center”.
  • “End” and “Between” of the first culture dish B on day 0 (2 hours after culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 are micrographs taken in the vicinity of the "center”.
  • “End” and “Between” of the first culture dish B on day 0 (2 hours after culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 are micrographs taken in the vicinity of the "center”.
  • “End” and “Between” of the first culture dish C on day 0 (2 hours after culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 are micrographs taken in the vicinity of the "center”.
  • “End” and “Between” of the first culture dish C on day 0 (2 hours after culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 are micrographs taken in the vicinity of the "center”. “End” and “Between” of the first culture dish A on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 , and shows the measurement method of the "central” cells and shows the measured values. “End” and “Between” of the first culture dish A on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 , and shows the measurement method of the "central” cells and shows the measured values.
  • “End” and “Between” of the first culture dish C on day 0 (2 hours after culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10 in Example 4 and shows the measurement method of the "central” cells and shows the measured values.
  • Example 4 shows the measurement method of the "central” cells and shows the measured values.
  • the measurement results of the number of cells in circular traces with a diameter of 1 mm in the “ends”, “between”, and “center” of culture dishes A to C and the average cells of “ends”, “between”, and “center” is a number.
  • the number of cells per 1 cm 2 in the “edges”, “between” and “center” of the culture dishes A to C and the average number of cells per 1 cm 2 in the “ends”, “between” and “center” is a number.
  • Graph of the number of cells per 1 cm 2 at the “ends”, “between” and “center” of the culture dishes A to C in Example 4 and the average number of cells per 1 cm 2 at the “ends”, “between” and “center” is.
  • the present invention is a container for cell observation comprising a bottom wall and a side wall, wherein an observation surface is formed on the bottom wall, and a reference line and a specific region in the vicinity of the reference line are formed on the observation surface.
  • a container that is displayed with an indicator showing.
  • FIG. 1 is a perspective view of the container 1 of this embodiment.
  • FIG. 2 is a top view of the container 1 of this embodiment.
  • FIG. 3 is a cross-sectional view of the container 1 of this embodiment along line AA in FIG.
  • container 1 comprises body 10 and cap 20 .
  • the main body 10 includes a storage portion 12 that stores the cultured cells C and the culture solution M, and a neck portion 14 that has a supply port for supplying the cells C and the culture solution M (see FIG. 3) to the storage portion 12. have.
  • a cap 20 seals the body 10 by being attached to the supply port of the neck portion 14 .
  • the housing portion 12 of the main body 10 has a substantially constant width, and the width of the neck portion 14 becomes smaller as it approaches the tip where the cap 20 is provided.
  • the neck portion 14 is slanted upward toward the tip.
  • the body 10 has a bottom wall 30 , side walls 32 and a top wall 34 .
  • the bottom wall 30 and the top wall 34 have substantially the same shape when viewed from above, and as shown in FIG.
  • a side wall 32 connects the bottom wall 30 and the top wall 34 in the height direction.
  • sidewall 32 has six faces along the contours of bottom wall 30 and top wall 34 .
  • the main body 10 is at least partially made of a material that is transparent or translucent to visible light.
  • top wall 34 is made of a material that is transparent to visible light so that the interior of body 10 can be viewed from above.
  • the entire body 10 is made of a material transparent to visible light.
  • Materials for the main body 10 include glass materials such as soda lime glass, Pyrex (registered trademark) glass, Vycor (registered trademark) glass, and quartz glass; urethane rubber, nitrile rubber, silicone rubber, and silicone resin (for example, polydimethylsiloxane).
  • fluororubber acrylic rubber, isoprene rubber, ethylene propylene rubber, chlorosulfonated polyethylene rubber, epichlorohydrin rubber, chloroprene rubber, styrene-butadiene rubber, butadiene rubber, polyisobutylene rubber; poly(vinyl chloride), poly( vinyl alcohol), poly(methyl methacrylate), poly(vinyl acetate-co-maleic anhydride), poly(dimethylsiloxane) monomethacrylate, cyclic olefin polymer, fluorocarbon polymer, polystyrene, polypropylene, polyethyleneimine, polyethylene terephthalate (PET) plastics containing polymers such as; poly(vinyl acetate-co-maleic anhydride), poly(styrene-co-maleic anhydride), poly(ethylene-co-acrylic acid), or copolymers such as derivatives thereof; plastics are preferred, especially transparent plastics. Such plastics are preferred
  • the method for manufacturing the container 1 includes, but is not limited to, compression molding, injection molding, extrusion molding, and the like.
  • the cells C supplied to the storage section 12 through the neck section 14 are cultured in the culture medium M in the storage section 12 as shown in FIG.
  • Cells C in the container 12 can be observed from above through the top wall 34 .
  • An observation surface S is formed on the upper surface of the bottom wall 30 . That is, the cells C on the observation surface S can be observed by focusing the microscope on the observation surface S (here, the upper surface of the bottom wall 30) or its vicinity.
  • the bottom wall 30 is formed with a reference line 40 and an indicator 42 for assisting observation of the cells C on the observation surface S.
  • the reference line 40 is a line extending from one side of the viewing surface S to the other side along one direction.
  • the “line” in this specification includes not only a solid line but also an abstract “line” such as a dotted line or a dashed line that can be recognized as a linear configuration as a whole.
  • the thickness of the “line” is also not particularly limited.
  • the reference line 40 is a straight line extending along the longitudinal direction of the main body 10 from one end (the tip of the neck portion 14) of the top surface of the bottom wall 30 to the other end (the end of the housing portion 12).
  • the reference line 40 is a line that bisects the area of the top surface of the bottom wall 30 (ie, the bottom area of the container 1).
  • the top surface of the bottom wall 30 has a line-symmetrical shape with respect to the reference line 40 .
  • the reference line 40 is not limited to the above example, and may be a line divided into two or more line segments, may be a curved line of any shape, and may be two or more lines parallel or non-parallel to each other. lines, a plurality of straight lines arranged in a mesh, or any other form.
  • the number of reference lines 40 is not particularly limited, and is, for example, one, two, three, or four or more.
  • the indication part 42 indicates a specific area located near the reference line 40 on the viewing plane S.
  • “A is located near B” means that both A and B can be at least partially included in a microscope field of normal magnification in cell observation using a general optical microscope. This includes cases where A and B have common parts, such as cases where A and B touch or cross each other. Therefore, when referring to "a specific area located in the vicinity of the reference line", not only a specific area away from the reference line but also a specific area located on the reference line is included.
  • the indication part 42 is a frame surrounding the specific area.
  • the instruction section 42 includes a first instruction section 42a, a second instruction section 42b, a third instruction section 42c, a fourth instruction section 42d, and a fifth instruction section 42e.
  • the first indicating portion 42a, the second indicating portion 42b, and the third indicating portion 42c are square frame lines, and the fourth indicating portion 42d and the fifth indicating portion 42e are circular frame lines.
  • a first indication portion 42a indicates a first region arranged at one end of the reference line 40
  • a second indication portion 42b indicates a second region arranged at the center portion of the reference line 40
  • a third indication portion 42c indicates a third area arranged between the first area and the second area.
  • the shape of the instruction part 42 is not particularly limited.
  • the indicator 42 can have a circular, elliptical, polygonal, or any other closed curve shape surrounding a specific area.
  • the pointing part 42 does not necessarily have to have a closed curve shape as long as the specific area can be indicated.
  • the indicator 42 may be points indicating four vertices, a dotted line, a dashed line, or the like, or a recess in the shape of the specific region. It may be in any other form.
  • a specific area on the observation surface S specified by the instruction unit 42 is an observation target area for observing temporal changes in the cells C within the same field of view.
  • the indicator 42 is not provided, when the cell C in the container 12 is observed a plurality of times, it is not possible to easily identify the visual field at the time of the previous observation. Difficult to observe.
  • the container 1 according to the present embodiment when used, the change over time of the cells C within the same field of view can be observed by observing the same specific region specified by the predetermined indicator 42 each time. can.
  • the indicator 42 is arranged near the reference line 40, the desired indicator 42 can be easily found by first finding the reference line 40 and moving the visual field along the reference line 40. can.
  • the instruction unit 42 may have an identification unit for identifying each specific area.
  • the identification part includes arbitrary identification codes such as numbers, letters, and symbols.
  • the identifying section may be adjacent to a portion (such as a frame line) indicating the position of the specific region, or may be integrated with the portion indicating the position of the specific region. For example, when each of the indication portions 42 is a different type of frame line such as a solid line, a dotted line, or a dashed line, the portion indicating the position of the specific area also functions as the identification portion.
  • the reference line 40 and the indicator 42 are recesses formed in the bottom wall 30 .
  • the reference line 40 and the indicator 42 are formed as grooves on the top or bottom surface of the bottom wall 30 .
  • the concave portions corresponding to the reference line 40 and the indicating portion 42 can be formed by any method such as a physical method or a chemical method.
  • the reference line 40 and the indicator 42 may be formed as an imprint, such as a scribe line, by applying force to the top or bottom surface of the bottom wall 30 by any means such as a knife, punch, needle, or the like.
  • the pointing portion 42 may be formed by a punch-like blade having a tip shape corresponding to the pointing portion 42 .
  • Such a reference line 40 and indicating portion 42 can be very easily formed in a general commercially available culture vessel, and thus are convenient.
  • the reference line 40 and the indicator 42 may be formed by irradiating the bottom wall 30 made of a photosensitive material with light to deform or modify the irradiated portion.
  • the bottom wall 30 may be molded so as to have recesses corresponding to the reference line 40 and the indicator 42 .
  • the reference line 40 and the indicating portion 42 may be formed on the upper surface of the bottom wall 30 as convex portions.
  • the bottom wall 30 may be molded to have projections corresponding to the reference line 40 and the indicator 42 .
  • the reference line 40 and the indicating portion 42 formed on the bottom wall 30 are not limited to the above example, and may be any visible characteristic portion formed on a portion of the bottom wall 30 by any method.
  • the reference line 40 and the indicating portion 42 may be formed as discolored portions by discoloring a portion of the bottom wall 30 by irradiating the bottom wall 30 with light or the like.
  • the reference line 40 and the indicator 42 may be printed on the upper or lower surface of the bottom wall 30, or may be drawn with a pen, pencil, or the like. preferably not.
  • the reference line 40 and the indicator 42 may be drawn on the top surface of the bottom wall 30 and a protective film formed thereon.
  • Another member such as an elongated rod-shaped member or a mesh member is arranged on the upper surface of the bottom wall 30, and part or all of this another member (for example, the whole rod-shaped member or part of the mesh member) is aligned with the reference line 40 or the It may be used as the instruction section 42 .
  • a cylindrical container having no bottom wall may be prepared, and a plate member or film member having the reference line 40 and the indicator 42 formed on the bottom of the container may be attached as the bottom wall.
  • the "bottom wall” may be a thick wall or a thin film regardless of the thickness.
  • FIG. 4 is a cross-sectional view of another embodiment container 1 along line AA in FIG.
  • the reference line 40 and the indicator 42 are formed on the membrane member 50 arranged on the bottom wall 30 .
  • the film member 50 has at least one of the reference line 40 and the indicating portion 42 on one surface 50 a and is arranged on the bottom wall 30 so that the one surface 50 a faces the bottom wall 30 .
  • the reference line 40 and the indicator 42 may be printed on the lower surface 50a of the film member 50, or may be drawn with a pen, pencil, or the like. If the lower surface 50 a on which the reference line 40 and the indicator 42 are printed or drawn faces the bottom wall 30 , the printed or drawn components do not come into contact with the cells C in the container 12 .
  • reference line 40 and the indicator 42 formed on the film member 50 are not limited to the above examples.
  • the reference line 40 and the indicating portion 42 may be any visible features such as concave portions, convex portions, folds, cuts, perforations, perforations, openings, discolored portions, etc. formed on the film member 50 .
  • the material of the membrane member 50 may be the same as or different from that of the main body 10 .
  • Examples include polystyrene, polyphosphazene, poly(vinyl alcohol), polyamide (e.g., nylon), polyesteramide, poly(amino acid), polyanhydride, polysulfone, polycarbonate, polyacrylate (acrylic resin), polyalkylene (e.g., polyethylene).
  • polypropylene, etc. polyacrylamide, polyalkylene glycol (e.g., polyethylene glycol, etc.), polyalkylene oxide (e.g., polyethylene oxide, etc.), polyalkylene terephthalate (e.g., polyethylene terephthalate, etc.), polyorthoester, polyvinyl ether, polyvinyl ester , polyvinyl halide (e.g., poly(vinyl chloride), etc.), fluorocarbon polymer (e.g., polytetrafluoroethylene, etc.), cyclic olefin polymer, polyvinylpyrrolidone, polyester, polysiloxane, polyurethane, polyhydroxy acid (e.g., polylactide, polyglycolide etc.), poly(hydroxybutyric acid), poly(hydroxyvaleric acid), poly[lactide-co-( ⁇ -caprolactone)], poly[glycolide-co-( ⁇ -caprolactone)] poly
  • polyacrylates include, for example, poly(methyl methacrylate), poly(ethyl methacrylate), poly(butyl methacrylate), poly(isobutyl methacrylate), poly(hexyl methacrylate), Poly(isodecyl methacrylate), poly(lauryl methacrylate), poly(phenyl methacrylate), poly(methyl acrylate), poly(isopropyl acrylate), poly(isobutyl acrylate), poly(octadecyl acrylate), etc. mentioned.
  • the film member 50 may be a film such as commercially available wrap.
  • the film member 50 in this embodiment may be made of one kind of the materials exemplified above, or may be made of two or more kinds.
  • the material of the membrane member 50 is not limited to the above examples, and may be composed of natural polymer compounds in addition to synthetic polymer compounds other than those described above. may be configured.
  • the membrane member 50 can be arranged on the bottom wall 30 by any method.
  • the membrane member 50 may be attached to the top surface of the bottom wall 30 by Van der Waals force, electrostatic force, vacuum adsorption, or the like, and may be attached to the top surface of the bottom wall 30 or the inner surface of the side wall 32 with any adhesive. may be
  • the reference line 40 and the indicator 42 are located within the depth of focus of the objective lens of the microscope for cell observation with the observation plane S as a reference in the direction orthogonal to the observation plane S.
  • the reference line 40 and the indicating portion 42 are formed as recesses on the top surface of the bottom wall 30
  • the depth of the recesses from the viewing surface S that is, the top surface of the bottom wall 30
  • the height of the convex portions from the viewing surface S is preferably the focal point of the objective lens.
  • Within depth As shown in FIG.
  • the reference line 40 and the indicating portion 42 when the reference line 40 and the indicating portion 42 are formed on the film member 50 arranged on the bottom wall 30, it is printed or drawn on the lower surface 50a of the film member 50 from the viewing surface S.
  • the distance to the reference line 40 and indicator 42 is preferably within the depth of focus of the objective lens.
  • the bottom wall 30 is arranged such that the observation surface S, the reference line 40 and the pointing portion 42 are both within the depth of focus of the objective lens. is preferably sufficiently thin.
  • the focal depth D of the objective lens is generally obtained by the following Berek's formula.
  • n is the refractive index of the medium between the sample and the objective lens
  • ⁇ is the resolution of the observer's eye
  • M is the total magnification of the objective lens and eyepiece lens
  • NA is the numerical aperture of the objective lens
  • ⁇ is the light intensity. is the wavelength.
  • D n ⁇ [(250000 ⁇ )/(M ⁇ NA)+ ⁇ /2NA 2 ] ( ⁇ m)
  • the distance between the observation surface S and the reference line 40 and the indicator 42 in the direction orthogonal to the observation surface S is 100 ⁇ m or less, 90 ⁇ m or less, 80 ⁇ m or less, 70 ⁇ m or less, 60 ⁇ m or less, 50 ⁇ m or less, 40 ⁇ m or less, 30 ⁇ m or less, 20 ⁇ m or less, or 10 ⁇ m or less.
  • both the reference line 40 and the indicator 42 and the cell C to be observed are preferably included within the depth of focus of the objective lens. In the example shown in FIG.
  • the depth of the concave portion forming the reference line 40 and the indicating portion 42 is, for example, 100 ⁇ m or less, 90 ⁇ m or less, 80 ⁇ m or less, 70 ⁇ m or less, 60 ⁇ m or less, 50 ⁇ m or less, 40 ⁇ m or less, 30 ⁇ m or less, or 20 ⁇ m. or less, or 10 ⁇ m or less.
  • the thickness of the film member 50 on which the reference line 40 and the indicator 42 are formed is, for example, 100 ⁇ m or less, 90 ⁇ m or less, 80 ⁇ m or less, 70 ⁇ m or less, 60 ⁇ m or less, 50 ⁇ m or less, 40 ⁇ m or less, or 30 ⁇ m. 20 ⁇ m or less, or 10 ⁇ m or less.
  • the size of the specific region indicated by the indicator 42 is preferably set so that the entire specific region can be observed with a microscope and the number of cells C contained in the specific region is not too large.
  • the area of the specific region is 5 mm 2 or less, 4 mm 2 or less, 3 mm 2 or less, 2 mm 2 or less, 1 mm 2 or less, 0.5 mm 2 or less, 0.3 mm 2 or less, 0.2 mm 2 or less, or 0.1 mm. 2 or less.
  • the specific area is a 1 mm square, a 0.5 mm square, or a 0.25 mm square.
  • the specified area is a circle with a diameter of 1 mm, 0.5 mm, or 0.25 mm. If the specific area is a 0.25 mm square, it functions as a hemocytometer.
  • both the reference line 40 and the indicator 42 are formed by the same method in the above example, the reference line 40 and the indicator 42 may be formed by different methods.
  • the indicator 42 includes a plurality of indicators, one or more indicators may be formed by the same method or by different methods.
  • FIG. 5 is a top view of container 2 of another embodiment.
  • the container 2 is a round culture dish with an open top.
  • the container 2 comprises a body 60 .
  • Body 60 includes a circular bottom wall 70 and side walls 72 extending upwardly from the periphery of bottom wall 70 .
  • the container 2 may be a culture dish having other shapes such as a polygonal shape and an elliptical shape.
  • a viewing surface S is formed on the bottom wall 70 , and a reference line 80 and an indicator 82 indicating a specific area are displayed on the viewing surface S in the vicinity of the reference line 80 .
  • the indication portion 82 includes a first indication portion 82a which is a square frame line indicating the first region, a second indication portion 82b which is a square frame line indicating the second region, and a square frame line indicating the third region. It includes a third indication portion 82c, a fourth indication portion 82d that is a circular frame line indicating the fourth area, and a fifth indication portion 82e that is a circular frame line indicating the fifth area.
  • the arrangement configuration and formation method of the reference line 80 and the indicator 82 are the same as those of the reference line 40 and the indicator 42 .
  • the container may be a culture container of any shape such as a vial, dish, bottle, flask, or the like, or may be a multi-well plate having a large number of wells.
  • a reference line 80 and an indicator 82 indicating a specific region are displayed on the observation surface S on which the cultured cells C are positioned.
  • the present invention provides a cell observation system comprising a microscope having an objective lens, and a container for cell observation having a bottom wall and side walls and containing cells to be observed by the microscope, An observation surface for the microscope is formed on the bottom wall, a reference line and an indication portion indicating a specific region in the vicinity of the reference line are displayed on the observation surface, and the reference line and the indication portion are provided on the observation surface.
  • a cell observation system is provided that is positioned within the focal depth of the objective lens with respect to the observation plane in an orthogonal direction.
  • a microscope can be any type of microscope, such as an optical microscope, a fluorescence microscope, a phase contrast microscope, and the like.
  • the objective lens may be any form of lens.
  • the present invention comprises the steps of: preparing a cell observation container having a bottom wall and a side wall; and forming a reference line on the bottom wall and an indicator that indicates a specific region in the vicinity of the reference line. and a method of manufacturing a container.
  • the step of forming the reference line and the indicator can be performed by any method, such as the various methods described above.
  • the reference line and the indicator can be formed on the upper surface of the bottom wall of the container as deformed parts such as recesses and protrusions, or as deformed parts such as discolored parts, by physical or chemical methods.
  • the reference lines and indicators may be added to the bottom wall of the container in visible material, such as by printing or drawing on the bottom wall of the container.
  • the reference line and the indicating portion may be formed by a member other than the container, such as a membrane member (see FIG. 4), a rod-shaped member, or a mesh member.
  • the present invention provides a method for using the container described above, comprising: step 1 of supplying cells to be observed into the container; step 2 of identifying the reference line under a microscope; a step 3 of searching for a predetermined pointing portion along the reference line; a step 4 of identifying the predetermined pointing portion under a microscope; and step 5, observed below, in that order.
  • Step 1 Cells C to be observed are supplied together with the culture solution M from the supply port of the container into the container. Cells C are cultured in the vessel as required.
  • Step 2 The container containing cells C is then placed on the stage of the microscope. Observe the inside of the container with a microscope. First, the reference line displayed on the viewing surface S is identified. As shown in FIGS. 1 and 2, since the reference line extends from one side of the viewing plane S to the other, it is relatively easy to identify the reference line even under a microscope.
  • Step 3> After finding the reference line under the microscope, the stage or the container itself on the stage is moved in one direction along the reference line. Since the pointing part is arranged near the reference line, it is possible to search for the pointing part indicating the desired specific area by the above operation.
  • the pointing portion corresponding to the specific region to be observed is specified under the microscope.
  • a specific region suitable for observation of cells C can be selected based on the number, arrangement, state, etc. of cells C from among a plurality of specific regions indicated by each indicator.
  • the position of the stage or the container on the stage and the magnification of the microscope are adjusted so that the entire selected specific region is included in the field of view of the microscope.
  • Step 5 the cells C contained in the specified region indicated by the specified indicator are observed under a microscope.
  • the cell image and the number of cells contained in a specific region are inspected.
  • the same specific region can be observed again, and changes over time in the cell image and the number of cells can be examined.
  • the container may be temporarily removed from the stage of the microscope after the first observation, or the position of the container on the stage may be changed.
  • the pointing portion identified in step 4 can be found, and the same specific region as the previous observation can be observed.
  • the same field of view can be obtained by using the reference line and the indicator.
  • a comparative observation of the cell C can be easily performed. By measuring the number of cells in a specific region and observing the cell morphology before and after transportation in this manner, the quality of the cells C to be transported can be guaranteed.
  • Each of the above steps may be performed by a user or at least partially under computer control.
  • the present invention is a cell transport device comprising a first culture dish and a second culture dish, wherein the first culture dish comprises a bottom wall and the second culture dish comprises and the second culture dish is attached to the top of the first culture dish with a gap surrounded by the first culture dish and the porous membrane. and an observation surface is formed on the bottom wall of the first culture dish, and a reference line and an indicator indicating a specific region in the vicinity of the reference line are displayed on the observation surface.
  • porous membrane means a membrane having a large number of pores, and includes membranes having voids and membranes having both pores and voids.
  • the porous membrane may be a semipermeable membrane having liquid tightness in the gas phase and semipermeability in the liquid phase.
  • porous membranes include, but are not limited to, filter paper, semipermeable membranes (eg, ultrafiltration membranes, etc.), non-woven fabrics, gauze-like meshes, various membrane filters, and the like.
  • the pore size of the porous membrane may be, for example, 0.01 ⁇ m or more and 1,500 ⁇ m or less, for example, 0.01 ⁇ m or more and 1.0 ⁇ m or less, for example, 0.01 ⁇ m or more and 0.45 ⁇ m or less. I wish I had.
  • the porous membrane of the second culture dish includes, for example, a sterile filter.
  • the sterilizing filter is not particularly limited as long as it has pores to such an extent that bacteria contaminating the second culture dish do not permeate into the culture space of the first culture dish.
  • FIGS. 6A and 6B are schematic diagrams illustrating the structure of an example of the cell transport device 100 of this embodiment.
  • FIG. 6(a) is a perspective view of the cell transportation device 100 of this embodiment
  • FIG. 6(b) is a side view of FIG. 6(a).
  • the second culture dish 120 is mounted above the first culture dish 110 with the height of the gap 130 being adjustable. It is Preferably, as shown in FIG.
  • FIG. 6(c) shows a state in which the second culture dish 120 is positioned at the lowest position in the cell transport device 100 to a state in which the second culture dish 120 is lifted from the first culture dish 110.
  • FIG. 6C shows the second culture dish 120 is pulled up from the first culture dish 110, thereby increasing the height of the gap 130.
  • the gap 130 is defined by being surrounded by the bottom and inner side surfaces of the first culture dish 110 and the bottom surface of the second culture dish 120 .
  • the height of the gap 130 can be adjusted by adjusting the distance between the first culture dish 110 and the second culture dish 120, and is preferably 0 cm to 1 cm, more preferably 0 cm to 0.5 cm.
  • the height of the gap 130 can be adjusted according to the application of the cell transport device 100, for example, according to the volume of cells to be encapsulated.
  • FIG. 6(d) is a side view of the first culture dish 110.
  • the first culture dish 110 has a female thread on its inner peripheral surface and has a female thread structure.
  • FIG. 6(e) is a top view of the first culture dish 110.
  • the first culture dish 110 has a membrane member 112 as a "bottom wall" on its bottom surface.
  • a reference line 114 and an indicating portion 116 are formed on the film member 112 in the same manner as the containers 1 and 2 described above. That is, the bottom wall of the first culture dish 110 is the membrane member 112 on which the reference line 114 and the indicator 116 are formed.
  • FIG. 6(f) is a cross-sectional view of the first culture dish 110 along line BB in FIG. 6(e). Similar to the container 1 shown in FIG. 3, the reference line 114 and the indicator 116 are formed as recesses on the upper surface of the film member 112 .
  • FIG. 6(g) is a side view of the second culture dish 120.
  • the second culture dish 120 has a male-threaded structure with a male-threaded outer peripheral surface.
  • FIG. 6(h) is a top view of the second culture dish 120.
  • the second culture dish 120 has a sterile filter 122 on the bottom.
  • the gap 130 is surrounded by the inner surface of the side wall of the first culture dish 110, the membrane member 112 on the bottom surface of the first culture dish 110, and the sterile filter 122 on the bottom surface of the second culture dish 120.
  • the gap 130 can be used as a culture space for the first culture dish 110 .
  • the gap 130 is sealed from the outside of the cell transport device 100 except for the sterile filter 122, and can communicate with the outside (eg, the internal space of the second culture dish 120) only through the sterile filter 122.
  • a silicon O-ring, a metal washer, or an annular nylon membrane is attached to the base of the male screw structure, and then the female screw is inserted. can be screwed together.
  • the gap 130 is adjustable in height, or the gap 130 has a constant height.
  • the second culture dish 120 having a short male screw distance to the bottom surface may be used so as to be attached in a state, and is preferably attached by engagement or fitting.
  • a gap 130 having a constant height is formed when the male screw of the first culture dish 110 and the female screw of the second culture dish 120 are closed.
  • the first culture dish 110 and the second culture dish 120 are attached by screwing. may be
  • the cell transport device 100 further includes a first lid 140 (see FIGS. 7(a), 7(c), and 7(d)) and a second lid 150 (see FIG. 7(b)).
  • the first lid 140 can cover the top surface of the first culture dish 110 or the second culture dish 120 .
  • the first lid 140 is not particularly limited as long as it can cover the upper surfaces of the culture dishes 110 and 120, and may have any configuration.
  • the first lid 140 may not necessarily be able to seal the top surface of the culture dishes 110,120. For example, as shown in FIGS.
  • the first lid 140 when the first lid 140 is attached to the culture dishes 110 and 120, the outer surface of the upper end of the culture dishes 110 and 120 It may be of a size such that a gap is formed between it and the inner surface of the lid 140 of one. From the viewpoint of microscopic observation of the cells C through the first lid 140, the first lid 140 is preferably made of a transparent or translucent material.
  • the second lid 150 can cover and seal the top surface of the second culture dish 120 .
  • the second lid 150 is not particularly limited as long as it can seal the upper surface of the second culture dish 120, and may have any configuration.
  • the outer surface of the upper end of the second culture dish 120 and the first lid 140 may be sized to provide intimate contact with the inner surface of the
  • the second lid 150 may be constructed of a transparent or translucent material, or may be constructed of an opaque material.
  • the outer diameters of the first culture dish 110 and the second culture dish 120 are preferably substantially the same.
  • the outer diameter is preferably 6 mm to 150 mm, more preferably 10 mm to 100 mm, even more preferably 14 mm to 60 mm.
  • the inner diameter of the first culture dish 110 is preferably 2 mm to 146 mm, more preferably 6 mm to 96 mm, even more preferably 10 mm to 56 mm.
  • the inner diameter of the second culture dish 120 is preferably 1 mm to 140 mm, more preferably 2 mm to 90 mm, even more preferably 3 mm to 50 mm.
  • the height of the cell transport device 100 is preferably 0.5 cm to 10 cm, more preferably 1 cm to 5 cm.
  • the film member 112 of the first culture dish 110 for example, a plastic film can be used.
  • the reference line 114 and the indicator 116 are formed as recesses on the upper surface of the film member 112, but at least one of the reference line 114 and the indicator 116 is formed on the lower surface of the film member 112. good too.
  • the distance between the observation surface S (in this embodiment, the upper surface of the film member 112), the reference line 114, and the indicator 116 is preferably less than or equal to the depth of focus of the objective lens of the microscope. .
  • the reference line 114 and the indicator 116 are not limited to the above example, and may be formed by any method.
  • the reference line 114 and the indicator 116 may be printed or drawn with a pen or pencil on the membrane member 112 .
  • the reference line 114 and the indicator 116 are preferably formed on the lower surface of the membrane member 112 from the viewpoint of suppressing adverse effects on the cultured cells.
  • the membrane member 112 may be formed integrally with the first culture dish 110 .
  • the first culture dish 110 may have a thick bottom wall instead of the membrane member 112 .
  • the configuration of the bottom wall of the first culture dish 110 may be the same as that of the container 2 .
  • Examples of the material of the film member 112 include the materials described above as the material of the film member 50 .
  • the film member 112 in this embodiment may be made of one of the materials exemplified above, or may be made of two or more.
  • the material of the membrane member 112 is not limited to the above examples, and may be composed of natural polymer compounds in addition to synthetic polymer compounds other than those described above. may be configured.
  • the thickness of the membrane member 112 in this embodiment is not particularly limited, it is preferably 1 ⁇ m to 1000 ⁇ m, more preferably 1 ⁇ m to 500 ⁇ m, even more preferably 5 ⁇ m to 300 ⁇ m, and particularly preferably 10 ⁇ m to 200 ⁇ m.
  • the pore size of the sterilization filter 122 in this embodiment is preferably 0.01 ⁇ m to 1.0 ⁇ m, for example, preferably 0.01 ⁇ m to 0.5 ⁇ m, for example, 0.01 ⁇ m to 0.5 ⁇ m. 01 ⁇ m to 0.2 ⁇ m is preferred, for example 0.01 ⁇ m to 0.1 ⁇ m is preferred.
  • the thickness of the sterile filter 122 in this embodiment is not particularly limited, it is preferably 1 ⁇ m to 1000 ⁇ m, more preferably 1 ⁇ m to 500 ⁇ m, even more preferably 5 ⁇ m to 300 ⁇ m, and particularly preferably 10 ⁇ m to 200 ⁇ m.
  • Materials for the cell transport device 100 other than the sterilizing filter 122 include the materials described above as the material for the container 1, and plastic is preferable.
  • the color of the cell transport device 100 is not particularly limited, but it is preferable to appropriately select a transparent color or an opaque (light shielding) color from the viewpoint of observing cells using various microscopes.
  • the cell transport device 100 may be devised (for example, coloring, printing, etc.) for identifying individual cells to be cultured.
  • Methods for manufacturing the cell transport device 100 other than the sterile filter 122 include, but are not limited to, compression molding, injection molding, extrusion molding, and the like.
  • the materials of the first culture dish 110 and the membrane member 112 are the same, the two may be regarded as being integrated.
  • the material of the first culture dish 110 and the film member 112 is a plastic resin such as PET, it is included in the scope of the present invention without applying a separate plastic film such as PET.
  • the first culture dish 110 can be manufactured by any method.
  • the first culture dish 110 is formed by forming parts other than the membrane member 112 by an arbitrary method such as compression molding, injection molding, or extrusion molding, and separately manufacturing the membrane member 112 by an arbitrary method. It is manufactured by bonding the member 112 to a portion other than the membrane member 112 .
  • the first culture dish 110 may be integrally molded including the membrane member 112 .
  • the second culture dish 120 can be manufactured by any method.
  • the second culture dish 120 is formed by any method such as compression molding, injection molding, or extrusion forming the part other than the sterilizing filter 122, separately manufacturing the sterilizing filter 122 by any method, and sterilizing it. It is manufactured by bonding the filter 122 to parts other than the sterile filter 122 .
  • the second culture dish 120 may be integrally molded including the sterile filter 122 .
  • the cell transport device 100 of this embodiment can be used for cell culture, cell transport, and the like.
  • the cell transport device 100 can be used as a container or as a cell culture device.
  • the cell transport method of this embodiment is a method using the cell transport device 100 described above. According to the transportation method of the present embodiment, cells can be safely, reliably and easily transported, the quality of the transported cells can be guaranteed, and yeasts and molds with a high risk of contamination of cultured cells can be used. and bacteria (general size: about 0.5 ⁇ m to 5 ⁇ m) contamination can be prevented, and long-term transportation can be handled.
  • the transportation method of this embodiment will be described in detail below with reference to FIGS. 7(a) to 7(d).
  • FIG. 7(a) to (d) are cross-sectional views showing a cell transportation method by the cell transportation device 100 of this embodiment.
  • a culture medium M in which cells C are suspended is prepared.
  • the culture medium M in which the cells C are suspended is injected into the first culture dish 110 described above.
  • the top surface of the first culture dish 110 is covered with the first lid 140 and the cells C are cultured in the first culture dish 110 .
  • the cells C in the first culture dish 110 are observed with a microscope through the first lid 140 .
  • a specific area to be observed is selected under a microscope by searching for the indicator 116 along the reference line 114, and the indicator 116 corresponding to the specific area is selected. can be specified.
  • Cells C contained in the specific region are observed under a microscope, and, for example, the cell image and the number of cells contained in the specific region are examined.
  • the first lid 140 is removed and the second culture dish 120 is attached to the first culture dish 110.
  • the female screw of the first culture dish 110 and the second culture dish 120 are screwed together until the lower surface of the flange formed on the top of the second culture dish 120 is in close contact with the upper end surface of the side wall of the first culture dish 110 . Tighten the external threads of the The culture medium M in the first culture dish 110 passes through the sterile filter 122 and enters the inside of the second culture dish 120 . Cells C cannot pass through the small holes in sterile filter 122 and therefore remain in first culture dish 110 .
  • the second culture dish 120 is filled with the culture solution M to the upper end of the second culture dish 120 .
  • the second culture dish 120 is then sealed with the second lid 150 .
  • the culture space inside the culture dishes 110 and 120 is completely filled with the culture medium M, so that there are no air bubbles in the culture space, and the cells C are not affected by vibrations or the like applied to the cell transport device 100 during transportation. impact is suppressed.
  • the culture space of the first culture dish 110 in which the cells C are present and the culture space of the second culture dish 120 are separated by the sterilization filter 122, even if the second lid 150 is attached during the mounting operation, etc. Even if contamination with bacteria or other microorganisms enters the second culture dish 120, contamination of the culture space of the first culture dish 110 where the cells C are present is prevented.
  • the cell transport device 100 is transported in the state of FIG. 7(b).
  • the method of transportation is non-freezing transportation.
  • the transportation of the cell transportation device 100 is carried out by screwing the first culture dish 110 and the second culture dish 120 together, as shown in FIG. 2(b). is preferably performed in a hermetically sealed state.
  • the second lid 150 for sealing is removed, about half of the culture medium M is removed, and then the first lid 140 is attached to the second culture dish 120. do. Even when performing this operation, the sterilizing filter 122 prevents contamination of the culture space in the first culture dish 110 where the cells C are present.
  • the cells C in the first culture dish 110 are observed with a microscope through the first lid 140 .
  • the desired indicated portion 116 can be easily found. can be observed. That is, cells can be easily observed in the same field of view before and after transportation.
  • Cells C contained in the specific region are observed under a microscope, and, for example, the cell image and the number of cells contained in the specific region are examined. This makes it possible to easily compare cell images and cell counts in the same specific region before and after transportation.
  • the cells C may be cultured in the state shown in FIG. 7(c), and in the state shown in FIG. Cultivation of cells C may be performed.
  • the temperature during transportation may be, for example, 4° C. or higher and 37° C. or lower, or 18° C. or higher and 37° C. or lower.
  • the transportation time can be appropriately selected depending on the type of cells C, the number of cells, etc., and may be, for example, 1 hour or more and 14 days or less, or may be, for example, 12 hours or more and 7 days or less, for example, 1 day. It may be longer than 3 days or shorter.
  • the present invention provides a cylindrical container for cell observation having a top surface, a bottom surface, and side surfaces, wherein at least the top surface is provided with a porous membrane, and the bottom surface is formed with an observation surface.
  • a container in which a reference line and an indicator indicating a specific area in the vicinity of the reference line are displayed on an observation surface.
  • FIG. 8 is a perspective view illustrating the structure of an example of the container of this embodiment.
  • the container 200 of this embodiment is a columnar container for cell observation, having a top surface 203, a bottom surface 201, and side surfaces 202.
  • the bottom surface 201 is made of a plastic film
  • the top surface 203 is made of a porous film.
  • the porous membrane is removable from side 202 .
  • Porous membranes include, for example, sterile filters.
  • the sterilizing filter is not particularly limited as long as it has pores to the extent that bacteria do not permeate into the container.
  • an observation surface is formed on the bottom surface 201, and a reference line and an indicator indicating a specific area in the vicinity of the reference line are displayed on the observation surface.
  • the bottom surface is a film member on which the reference line and the indicating portion are formed, and the reference line and the indicating portion are formed as concave portions on the upper surface of the bottom surface.
  • the reference line and the indicator are not limited to the above example, and may be formed by any method.
  • the reference lines and indicators may be printed or drawn with a pen or pencil on the bottom surface. In this case, from the viewpoint of suppressing adverse effects on cultured cells, the reference line and the indicator are preferably formed on the lower surface of the bottom surface.
  • the inner diameter of the container 200 of the present embodiment is preferably 1 mm or more and 60 mm or less, more preferably 3 mm or more and 35 mm or less, and even more preferably 5 mm or more and 26 mm or less.
  • the outer diameter of the container 200 of the present embodiment is preferably 3 mm or more and 68 mm or less, more preferably 5 mm or more and 43 mm or less, and even more preferably 7 mm or more and 34 mm or less.
  • the thickness (height of the cylinder) of the container 200 of the present embodiment is 5 ⁇ m or more, preferably 50 ⁇ m or more and 15 mm or less, more preferably 100 ⁇ m or more and 10 mm or less, and 200 ⁇ m or more and 2.5 mm. More preferably: The “height of the cylinder” means the distance from the outer edge of the top surface of the container 200 to the outer edge of the bottom surface.
  • the internal volume of the container 200 of the present embodiment is such that multicells suspended in a culture medium can be injected, and a multicellular structure used in an in vitro test system such as a test for assaying cell activity can be constructed.
  • Small scale is fine. Specifically, for example, it is preferably 10 mL or less, more preferably 10 ⁇ L or more and 5 mL or less, further preferably 15 ⁇ L or more and 2 mL or less, and particularly preferably 20 ⁇ L or more and 1 mL or less.
  • the internal volume is equal to or less than the above upper limit, sufficient oxygen and nutrients of the culture solution are supplied, and cells can be efficiently cultured for a long period of time.
  • the internal volume is equal to or higher than the above lower limit, it is possible to obtain cells with sufficient cell numbers and cell densities for use in an in vitro test system.
  • the container 200 of this embodiment can be easily handled with tweezers or the like.
  • the container 200 in which the cells are enclosed can be enclosed in an openable and closable sealed container containing the culture solution and transported.
  • the sealed container in the transportation method is not particularly limited as long as it can be opened and closed.
  • Examples of the sealed container include, but are not limited to, conical tubes with screw caps, flasks for cell culture with screw caps, and the like. According to the container 200 of this embodiment, it is possible to easily compare cell images and cell counts in the same specific region before and after transportation.
  • Example 1 A 60 mm ⁇ 15 mm cell culture dish (Falcon (registered trademark), product number 353002, manufactured by Corning) was prepared, and a piece of paper with a scale was placed under the ⁇ 60 mm dish. Next, a stainless steel single-edged trimming razor (Cat No. T586, 38 mm ⁇ 19 mm ⁇ 0.23 (thickness) mm, manufactured by GEM) is applied from above to one end of the bottom of the dish, and the razor is applied to the bottom of the dish. While pressing the scale, the razor was moved from one end of the bottom surface of the dish to the other so as to trace from above so as to pass through approximately the center of the bottom surface of the dish.
  • a stainless steel single-edged trimming razor Cat No. T586, 38 mm ⁇ 19 mm ⁇ 0.23 (thickness) mm, manufactured by GEM
  • the line mark (corresponding to the reference line 80 in FIG. 5) made with a razor was aligned with the scale, and a ⁇ 1 mm biopsy trepan (REF: BPP-10F, LOT: 19D49, in the circle) was placed at about 3 mm from one end of the dish. Area: 0.00785 cm 2 , manufactured by Kai Industries, Ltd.) was pressed. At this time, the circular blade of the trepan was not rotated, but pressed against the bottom surface of the dish, and the force was applied one or two times. The resulting circle was tangent or as close to the razor reference line as possible. Circular marks were then made in the same way along the scale at about 13 mm and about 25 mm from one end of the dish.
  • the circular trace at about 3 mm from the end is “end” (equivalent to the first indicator 82a in FIG. 5), and the circular trace at about 13 mm is “interval” (third indicator 82c in FIG. 5). ), and the circular trace at about 25 mm is called the “center” (corresponding to the second indicator 82b in FIG. 5).
  • a cell culture dish of ⁇ 60 mm was prepared by marking a reference line with a razor and marking a circular frame line for an indicator with a trepan, and used it as a culture substrate.
  • normal human dermal fibroblasts NHDFs cells
  • NHDFs cells normal human dermal fibroblasts
  • Fig. 9 is a photomicrograph of the vicinity of the "edge” before seeding, at the stage where only the culture medium was added, and 2 hours after seeding in Example 1.
  • 10A and 10B are micrographs taken in the vicinity of the “between” at the above three timings in Example 1.
  • FIG. 11A and 11B are phase-contrast photomicrographs taken in the vicinity of the “center” at the three timings described above in Example 1.
  • FIG. Microscopic photographs taken with objective lenses of 4 ⁇ , 10 ⁇ , and 20 ⁇ magnification are shown (the right side of FIG. 9 is a phase-contrast microscopic photograph taken with each objective lens at a scale of 1.00 mm in total length).
  • the photograph before seeding was described as “before seeding”
  • the photograph of the culture solution only was described as “culture solution only”
  • the photograph 2 hours after seeding was described as “2 hours after seeding”. It was confirmed that the area to be observed can be uniquely specified by the circular trace, and the cell image and cell count can be examined.
  • the number of cells within the circular frame 2 hours after seeding was 30 cells at the "edge", 44 cells at the "interval", and 81 cells at the "center”. Since these average values of 51.7 cells do not greatly deviate from the theoretical value of 78.5 cells calculated from the seeding density and the area of the circle, it is considered that the cells are appropriately seeded and cultured.
  • Example 2 Cell culture and observation were performed in the same manner as in Example 1, except that the seeding density was 0.5 ⁇ 10 4 cells/cm 2 .
  • Fig. 12 is a photomicrograph of the vicinity of the "edge” before seeding, at the stage where only the culture medium was added, and 2 hours after seeding in Example 2.
  • 13A and 13B are micrographs taken in the vicinity of “between” at the above three timings in Example 2.
  • FIG. 14A and 14B are microphotographs of the vicinity of the “center” taken at the above three timings in Example 2.
  • FIG. Micrographs at three different magnifications of 4x, 10x and 20x are shown. It was confirmed that the area to be observed can be uniquely specified by the circular trace, and the cell image and cell count can be examined.
  • the number of cells within the circular frame 2 hours after seeding was 32 cells at the "edge", 31 cells at the "interval", and 90 cells at the "center”. Since these average values of 51.0 cells do not greatly deviate from the theoretical value of 39.25 cells calculated from the seeding density and the area of the circle, it is considered that the cells are properly seeded and cultured.
  • Example 3 Cell culture and observation were performed in the same manner as in Example 1, except that the seeding density was 0.1 ⁇ 10 4 cells/cm 2 .
  • Fig. 15 is a photomicrograph of the vicinity of the "edge” before seeding, at the stage where only the culture medium was added, and 2 hours after seeding in Example 3.
  • 16A and 16B are micrographs taken in the vicinity of “between” at the above three timings in Example 3.
  • FIG. 17A and 17B are microphotographs of the vicinity of the “center” taken at the above three timings in Example 3.
  • FIG. Micrographs at three different magnifications of 4x, 10x and 20x are shown. It was confirmed that the area to be observed can be uniquely specified by the circular trace, and the cell image and cell count can be examined.
  • Example 4 Cell culture and observation were performed in the same manner as in Example 1, except that the marks made with a razor were aligned with the scale, and circular marks were made at about 5.5 mm, about 15 mm, and about 25 mm from one end of the dish. gone.
  • the circular trace at about 5.5 mm from the edge is called “edge”
  • the circular trace at about 15 mm is called “interval”
  • the circular trace at about 25 mm is called "center”.
  • the vicinity of the “edge”, “interval”, and “center” of each culture plate was measured on day 0 (second hour of culture) and day 1.
  • Figures 18 and 19 are microphotographs taken near the "ends", “intervals”, and “centers” of each culture dish before seeding and each culture dish containing only the culture solution.
  • Figures 20 and 21 show the "end” of the first culture dish A on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10, It is a microphotograph taken in the vicinity of "Between” and "Center”.
  • Figures 22 and 23 show the "edge" of the second culture dish B on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10, It is a microphotograph taken in the vicinity of "Between” and "Center”.
  • Figures 24 and 25 show the "edge" of the third culture dish C on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10, It is a microphotograph taken in the vicinity of "Between” and "Center”.
  • Figures 26 and 27 show the "end” of the first culture dish A on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10, It is a figure which shows the measuring method of the cell of a "interval" and a "center", and filled in the measured value.
  • Figures 28 and 29 show the "end" of the second culture dish B on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10, It is a figure which shows the measuring method of the cell of a "interval” and a "center", and filled in the measured value.
  • Figures 30 and 31 show the "edge" of the third culture dish C on day 0 (2 hours of culture), day 1, day 2, day 4, day 7, and day 10; It is a figure which shows the measuring method of the cell of a "interval” and a "center”, and filled in the measured value.
  • FIG. 32 shows the measurement results of the number of cells in circular traces with a diameter of 1 mm in the “ends”, “between”, and “center” of the culture dishes A to C, and the average cells of the “ends”, “between”, and “center”. is a number.
  • FIG. 33 shows the number of cells per 1 cm 2 at the “edges”, “between” and “center” of culture dishes A to C and the average number of cells per 1 cm 2 at the “ends”, “between” and “center”.
  • FIG. 34 is a graph showing the number of cells per 1 cm 2 at the “ends”, “between” and “center” of culture dishes A to C and the average number of cells per 1 cm 2 at the “ends”, “between” and “center”. is.
  • FIG. 35 shows the cell number per 1 cm 2 obtained by averaging the cell numbers at the “edges”, “between” and “center” of the culture dishes A to C and the average cell number per 1 cm 2 for the culture dishes A to C.
  • FIG. 36 is a graph showing the number of cells per 1 cm 2 , averaging the cell numbers at the “ends”, “intervals”, and “centers” of culture dishes A to C and the average number of cells per 1 cm 2 of culture dishes A to C. be.
  • a container a method for producing cultured cells, and a cell transportation device that can easily observe cells in the same field of view with a simple configuration.
  • a culture vessel having a bottom surface that facilitates microscopic observation of the same field of view can be applied to existing culture vessels, and is therefore expected to be of public interest.
  • culture vessels that allow easy confirmation of the number of cells and cell morphology before and after transportation are thought to contribute to the transportation of iPS cells and other cells for which quality assurance is important. It can be expected to be used in fields such as law.

Abstract

底壁及び側壁を備える細胞観察用の容器であって、前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器。

Description

容器、及び細胞輸送装置
　本発明は、容器、及び細胞輸送装置に関する。本願は、２０２１年７月２７日に、日本に出願された特願２０２１－１２２５５３号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　細胞培養には、様々な培養容器が使用されている。培養容器の一例として、特許文献１や特許文献２には一般に「Ｔフラスコ」の名称で知られる形状の容器が記載されている。
　培養容器内の細胞の数や状態の経時変化を顕微鏡下で観察することにより、細胞培養の様子を確認することができる。経時変化を観察するためには同一領域を異なるタイミングで観察する必要があるが、一回観察した後に一旦顕微鏡の視野を移動させた場合や顕微鏡の観察ステージから培養容器を取り外した場合には、次の観察で前回観察した領域を再び特定することは容易ではない。
　同一視野の顕微鏡観察を行う方法として、培養容器の観察領域の周囲にマジックインキ等で印を付ける方法、穴の小さい多穴プレートを用いて培養を行う方法、底面に碁盤の目のような格子模様を有する培養容器を使用する方法等がある。
特許第２６８３７３２号公報 特許第６５７２２４０号公報
　しかしながら、これらの方法には、マジックインキが細胞に接触すると細胞への悪影響が懸念される点、容器底壁の裏面にマジックインキで印を付けた場合には観察面と裏面の印とが焦点深度内に収まらない点、多穴プレートにおいて観察対象の穴を特定するのは容易でない点、周期的な格子模様において観察領域を特定するのは容易でない点といった課題が存在する。
　また、高価な顕微鏡には、ステージ駆動機構や画像認識技術等を利用して前回の観察領域と同じ領域を特定できるものも存在するが、そのような技術が採用されていない簡便な構成の顕微鏡を使用する場合、同一視野内の細胞観察を行うことは容易ではない。
　本発明は、上記事情を鑑みてなされたものであり、簡便な構成で容易に同一視野内の細胞観察を行うことができる容器、培養細胞の製造方法、及び細胞輸送装置を提供する。
　本発明は以下の態様を含む。
［１］底壁及び側壁を備える細胞観察用の容器であって、前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器。
［２］前記特定領域は、同一視野内の細胞の経時変化を観察するための観察対象領域である、［１］に記載の容器。
［３］前記基準線及び前記指示部は、前記観察面に直交する方向において前記観察面を基準として細胞観察用の顕微鏡の対物レンズの焦点深度内に位置する、［１］又は［２］に記載の容器。
［４］前記指示部は、前記特定領域を取り囲む枠線である、［１］～［３］のいずれか１つに記載の容器。
［５］前記基準線は、一方向に沿って前記観察面の一側から他側へ延在する線である、［１］～［４］のいずれか１つに記載の容器。
［６］前記指示部は、前記基準線の一端部に配置された第１領域を示す第１指示部、前記基準線の中央部に配置された第２領域を示す第２指示部、及び前記第１領域と前記第２領域との間に配置された第３領域を示す第３指示部を含む、［５］に記載の容器。
［７］前記基準線及び前記指示部のうち少なくとも一方は、前記底壁に形成された凹部である、［１］～［６］のいずれか１つに記載の容器。
［８］前記基準線及び前記指示部のうち少なくとも一方は、前記底壁上又は前記底壁下に配置された膜部材に形成されている、［１］～［６］のいずれか１つに記載の容器。
［９］前記膜部材は、一方の面に前記基準線及び前記指示部のうち少なくとも一方を有し、前記一方の面が前記底壁に向くように前記底壁上又は前記底壁下に配置される、［８］に記載の容器。
［１０］前記特定領域の面積は、５ｍｍ２以下である、［１］～［９］のいずれか１つに記載の容器。
［１１］［１］～［１０］のいずれか１つに記載の容器に細胞及び培養液を入れる工程と、前記容器内で前記細胞を培養する工程と、を含む、培養細胞の製造方法。
［１２］第１の培養皿と第２の培養皿とを有する細胞輸送装置であって、前記第１の培養皿は、底壁を備え、前記第２の培養皿は、底面に多孔質膜を備え、前記第２の培養皿は、前記第１の培養皿と前記多孔質膜とに囲まれた隙間を有した状態で、前記第１の培養皿の上部に装着され、前記第１の培養皿の前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、細胞輸送装置。
［１３］前記多孔質膜は、滅菌フィルタである、［１２］に記載の細胞輸送装置。
［１４］前記第１の培養皿の前記底壁は、前記基準線及び前記指示部が形成された膜部材である、［１２］又は［１３］に記載の細胞輸送装置。
［１５］天面、底面、及び側面を備えた、細胞観察用の円柱状容器であって、
　多孔質膜を少なくとも天面に備え、底面に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器。
［１６］前記多孔質膜は、滅菌フィルタである、［１５］に記載の細胞輸送装置。
［１７］前記底面は、前記基準線及び前記指示部が形成された膜部材である、［１５］又は［１６］に記載の細胞輸送装置。
　本発明によれば、簡便な構成で容易に同一視野内の細胞観察を行うことができる容器、培養細胞の製造方法、及び細胞輸送装置を提供することができる。
本実施形態の容器の斜視図である。 本実施形態の容器の上面図である。 図２の線Ａ－Ａに沿った本実施形態の容器の断面図である。 図２の線Ａ－Ａに沿った別の実施形態の容器の断面図である。 別の実施形態の容器の上面図である。 （ａ）本実施形態の細胞輸送装置の斜視図である。（ｂ）本実施形態の細胞輸送装置の側面図である。（ｃ）本実施形態の細胞輸送装置の側面図である。（ｄ）第１の培養皿の側面図である。（ｅ）第１の培養皿の上面図である。（ｆ）図６（ｅ）の線Ｂ－Ｂに沿った第１の培養皿の断面図である。（ｇ）第２の培養皿の側面図である。（ｈ）第２の培養皿の上面図である。 （ａ）～（ｄ）本実施形態の細胞輸送装置による細胞輸送方法を示す断面図である。 本実施形態の容器の一例の構造を説明する斜視図である。 実施例１において「端」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例１において「間」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例１において「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例２においての「端」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例２において「間」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例２において「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例３において「端」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例３において「間」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例３において「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において播種前の各培養皿、培養液のみを入れた各培養皿の「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において播種前の各培養皿、培養液のみを入れた各培養皿の「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ａの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ａの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｂの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｂの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｃの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｃの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ａの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ａの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｂの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｂの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。 実施例４において０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。 実施例４において培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」における直径１ｍｍの円形線跡中の細胞数の計測結果と「端」、「間」、「中心」の平均細胞数である。 実施例４において培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」における１ｃｍ２当たりの細胞数と「端」、「間」、「中心」の１ｃｍ２当たりの平均細胞数である。 実施例４において培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」における１ｃｍ２当たりの細胞数と「端」、「間」、「中心」の１ｃｍ２当たりの平均細胞数のグラフである。 実施例４において培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞数を平均した１ｃｍ２当たりの細胞数と培養皿Ａ～Ｃの１ｃｍ２当たりの平均細胞数である。 実施例４において培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞数を平均した１ｃｍ２当たりの細胞数と培養皿Ａ～Ｃの１ｃｍ２当たりの平均細胞数のグラフである。
　以下、場合により図面を参照しつつ、本発明の実施形態について詳細に説明する。なお、図面中、同一又は相当部分には同一又は対応する符号を付し、重複する説明は省略する。なお、各図における寸法比は、説明のため誇張している部分があり、必ずしも実際の寸法比とは一致しない。
［容器］
　１実施形態において、本発明は、底壁及び側壁を備える細胞観察用の容器であって、前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器を提供する。
　図１は、本実施形態の容器１の斜視図である。図２は、本実施形態の容器１の上面図である。図３は、図２の線Ａ－Ａに沿った本実施形態の容器１の断面図である。
　図１に示すように、容器１は、本体１０及びキャップ２０を備える。本体１０は、培養細胞Ｃや培養液Ｍを収容する収容部１２と、収容部１２に細胞Ｃや培養液Ｍ（図３参照。）を供給するための供給口を有するネック部１４と、を有する。キャップ２０は、ネック部１４の供給口に取り付けられることにより本体１０を密封する。
　図１及び図２に示すように、本体１０の収容部１２は横幅が略一定であり、ネック部１４の横幅はキャップ２０が設けられた先端に近づくほど小さくなる。ネック部１４は、先端に向かって上方に傾いている。
　本体１０は、底壁３０、側壁３２、及び頂壁３４を有する。底壁３０及び頂壁３４は、上面視で略同じ形状を有し、図２に示すように、収容部１２に対応する長方形とネック部１４に対応する台形とが結合した形状を有する。側壁３２は、底壁３０と頂壁３４とを高さ方向に接続する。図１に示すように、側壁３２は、底壁３０及び頂壁３４の形状に沿って、６つの面を有する。
　本体１０は、少なくとも部分的に、可視光に対して透明又は半透明な材料からなる。好ましくは、頂壁３４は、本体１０の内部が上方から視認できるように、可視光に対して透明な材料からなる。好ましくは、本体１０の全体が、可視光に対して透明な材料からなる。
　本体１０の材質としては、ソーダ石灰ガラス、パイレックス（登録商標）ガラス、バイコール（登録商標）ガラス、石英ガラス等のガラス材料；ウレタンゴム、ニトリルゴム、シリコーンゴム、シリコーン樹脂（例えば、ポリジメチルシロキサン）、フッ素ゴム、アクリルゴム、イソプレンゴム、エチレンプロピレンゴム、クロロスルホン化ポリエチレンゴム、エピクロルヒドリンゴム、クロロプレンゴム、スチレン・ブタジエンゴム、ブタジエンゴム、ポリイソブチレンゴム等のエラストマー材料；ポリ（塩化ビニル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（酢酸ビニル－共－無水マレイン酸）、ポリ（ジメチルシロキサン）モノメタクリレート、環状オレフィンポリマー、フルオロカーボンポリマー、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンイミン、ポリエチレンテレフタレート（PET）等のポリマーを含むプラスチック；ポリ（酢酸ビニル－共－無水マレイン酸）、ポリ（スチレン－共－無水マレイン酸）、ポリ（エチレン－共－アクリル酸）、又はこれらの誘導体等のコポリマー等が挙げられ、プラスチックが好ましく、特に透明なプラスチックが好ましい。また、かかるプラスチックはシリコンコートが施されていてもよい。
　容器１の製造方法としては、圧縮成形法、射出成形法、押出成形法等が挙げられるが、これらに限定されない。
　ネック部１４を通して収容部１２に供給された細胞Ｃは、図３に示すように、収容部１２において培養液Ｍ中で培養される。収容部１２内の細胞Ｃは、頂壁３４を通して上方から観察することができる。底壁３０の上面には、観察面Ｓが形成される。すなわち、顕微鏡の焦点を観察面Ｓ（ここでは底壁３０の上面）又はその近傍に合わせて、観察面Ｓ上の細胞Ｃを観察することができる。
　図１～図３に示すように、底壁３０には、観察面Ｓ上の細胞Ｃの観察を補助する基準線４０及び指示部４２が形成される。
　例えば、基準線４０は、一方向に沿って観察面Ｓの一側から他側へ延在する線である。ここで、本明細書における「線」には、実線だけでなく点線や破線等の全体として線状の構成と認識可能な抽象的な「線」も含まれる。「線」の太さも特に限定されない。
　本実施形態では、基準線４０は、本体１０の長手方向に沿って底壁３０の上面の一端（ネック部１４の先端）から他端（収容部１２の末端）まで延在する直線である。例えば、基準線４０は、底壁３０の上面の面積（すなわち、容器１の底面積）を二等分する線である。例えば、底壁３０の上面は、基準線４０を基準として線対称な形状を有する。なお、基準線４０は上記例に限定されず、２以上の線分に分断された線であってもよく、任意の形状の曲線であってもよく、互いに平行又は非平行である２本以上の線を含んでもよく、メッシュ状に配置された複数の直線を含んでもよく、その他の任意の形態であってよい。基準線４０の数は特に限定されず、例えば、１本、２本、３本、又は４本以上である。
　指示部４２は、観察面Ｓ上で基準線４０の近傍に位置する特定領域を示す。ここで「ＡがＢの近傍に位置する」とは、一般的な光学顕微鏡を用いた細胞観察において、通常の倍率の顕微鏡視野内にＡ及びＢの両方が少なくとも部分的に含まれ得ることを意味し、ＡとＢとが互いに接する場合や交わる場合等、共通部分を有する場合を含む。したがって、「基準線の近傍に位置する特定領域」と言う場合、基準線から離間した特定領域だけでなく、基準線上に位置する特定領域も含まれる。
　例えば、指示部４２は、特定領域を取り囲む枠線である。図１及び図２の例では、指示部４２は、第１指示部４２ａ、第２指示部４２ｂ、第３指示部４２ｃ、第４指示部４２ｄ、及び第５指示部４２ｅを含む。第１指示部４２ａ、第２指示部４２ｂ、及び第３指示部４２ｃは、正方形の枠線であり、第４指示部４２ｄ及び第５指示部４２ｅは、円形の枠線である。第１指示部４２ａは、基準線４０の一端部に配置された第１領域を示し、第２指示部４２ｂは、基準線４０の中央部に配置された第２領域を示し、第３指示部４２ｃは、第１領域と第２領域との間に配置された第３領域を示す。このように、少なくとも観察面Ｓの端部、中心部、及びその中間部の３点に観察対象の特定領域を設定することにより、観察面Ｓ上の細胞の分布を概観的に把握することができる。
　指示部４２の形状は特に限定されない。例えば、指示部４２は、特定領域を取り囲む円形、楕円形、多角形その他の任意の閉曲線形状を有することができる。また、特定領域を示すことができれば、指示部４２は必ずしも閉曲線形状でなくてもよい。例えば、指示部４２は、特定領域が正方形である場合には４つの頂点を示す点であってもよく、点線や破線等であってもよく、特定領域の形状の窪みであってもよく、その他の任意の形態であってよい。
　指示部４２によって特定される観察面Ｓ上の特定領域は、同一視野内の細胞Ｃの経時変化を観察するための観察対象領域である。指示部４２が設けられていない場合には、収容部１２内の細胞Ｃを複数回観察する場合において、前回の観察時の視野を容易に特定できないため、同一視野内の細胞Ｃの経時変化を観察することが困難である。これに対し、本実施形態に係る容器１を使用した場合、毎回、所定の指示部４２によって特定される同じ特定領域を観察することによって、同一視野内の細胞Ｃの経時変化を観察することができる。また、指示部４２が基準線４０の近傍に配置されているので、まず基準線４０を見つけ、基準線４０に沿って視野を移動させることにより、所望の指示部４２を容易に発見することができる。
　指示部４２は、各特定領域を識別するための識別部を有してもよい。識別部は、数字、文字、記号等の任意の識別符号を含む。識別部は、特定領域の位置を示す部分（枠線等）に隣接してもよく、特定領域の位置を示す部分と一体であってもよい。例えば、指示部４２の各々が実線、点線、破線等の異なる種類の枠線である場合には、特定領域の位置を示す部分が識別部としても機能する。
　図３に示すように、基準線４０及び指示部４２は、底壁３０に形成された凹部である。例えば、基準線４０及び指示部４２は、底壁３０の上面又は下面に溝部として形成される。基準線４０及び指示部４２に相当する凹部は、物理的手法や化学的手法等の任意の方法で形成され得る。例えば、基準線４０及び指示部４２は、底壁３０の上面又は下面に対してナイフ、パンチ、針等の任意の手段で力を加えることにより、ケガキ線のような刻印として形成され得る。例えば、指示部４２は、指示部４２に対応する先端形状を有するパンチ状のブレードによって形成され得る。このような基準線４０及び指示部４２は、一般的な市販の培養容器に極めて容易に形成することができるので、簡便である。あるいは、基準線４０及び指示部４２は、感光性材料から形成された底壁３０に対して光を照射して照射部分を変形又は変性させることにより形成されてもよい。また、底壁３０を含む本体１０の成形時に、底壁３０が基準線４０及び指示部４２に相当する凹部を有するように成形されてもよい。なお、逆に基準線４０及び指示部４２が底壁３０の上面に凸部として形成されてもよい。例えば、本体１０の成形時に、底壁３０が基準線４０及び指示部４２に相当する凸部を有するように成形されてもよい。
　なお、底壁３０に形成される基準線４０及び指示部４２は、上記例に限定されず、任意の方法により底壁３０の一部に形成された視認可能な任意の特徴部であってよい。例えば、基準線４０及び指示部４２は、底壁３０に対する光照射等によって底壁３０の一部を変色させることにより、変色部として形成されてもよい。基準線４０及び指示部４２は、底壁３０の上面又は下面に印刷されてもよく、ペンや鉛筆等で描画されてもよいが、細胞毒性を有する成分が収容部１２内の細胞Ｃに接触しないことが望ましい。例えば、基準線４０及び指示部４２が、底壁３０の上面に描画され、その上に保護膜が形成されてもよい。また、細長い棒状部材やメッシュ部材等の別の部材を底壁３０の上面に配置し、この別の部材の一部又は全部（例えば棒状部材の全体やメッシュ部材の一部）を基準線４０や指示部４２として利用してもよい。また、底壁を有しない筒状の容器を用意して、容器の底に基準線４０及び指示部４２が形成された板部材や膜部材を底壁として取り付けてもよい。なお、本明細書において「底壁」は厚さを問わず、肉厚の壁であってもよく、薄膜であってもよい。
　図４は、図２の線Ａ－Ａに沿った別の実施形態の容器１の断面図である。本実施形態では、基準線４０及び指示部４２は、底壁３０上に配置された膜部材５０に形成されている。膜部材５０は、一方の面５０ａに基準線４０及び指示部４２のうち少なくとも一方を有し、一方の面５０ａが底壁３０に向くように底壁３０上に配置される。例えば、基準線４０及び指示部４２は、膜部材５０の下面５０ａに印刷されてもよく、ペンや鉛筆等で描画されてもよい。基準線４０及び指示部４２が印刷又は描画された下面５０ａが底壁３０を向くように配置すると、印刷又は描画された成分が収容部１２内の細胞Ｃに接触しない点で好ましい。
　なお、膜部材５０に形成される基準線４０及び指示部４２は上記例に限定されない。例えば、基準線４０及び指示部４２は、膜部材５０に形成された凹部、凸部、折り目、切れ目、ミシン目、穿孔、開口、変色部等、視認可能な任意の特徴部であってよい。
　膜部材５０の材質は、本体１０と同じ材質であっても異なる材質であってもよい。例えば、ポリスチレン、ポリホスファゼン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアミド（例えば、ナイロン等）、ポリエステルアミド、ポリ（アミノ酸）、ポリ無水物、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリアクリレート（アクリル樹脂）、ポリアルキレン（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン等）、ポリアクリルアミド、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール等）、ポリアルキレンオキシド（例えば、ポリエチレンオキシド等）、ポリアルキレンテレフタレート（例えば、ポリエチレンテレフタレート等）、ポリオルトエステル、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド（例えば、ポリ（塩化ビニル）等）、フルオロカーボンポリマー（例えば、ポリテトラフルオロエチレン等）、環状オレフィンポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリエステル、ポリシロキサン、ポリウレタン、ポリヒドロキシ酸（例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド等）、ポリ（ヒドロキシ酪酸）、ポリ（ヒドロキシ吉草酸）、ポリ［ラクチド－ｃｏ－（ε－カプロラクトン）］、ポリ［グリコリド－ｃｏ－（ε－カプロラクトン）］等）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート）、及びこれらのコポリマー等が挙げられ、これらに限定されない。
　ポリアクリレート（アクリル樹脂）としてより具体的には、例えば、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、ポリ（アクリル酸オクタデシル）等が挙げられる。
　中でも、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル等の透明なプラスチック材料が好ましい。例えば、膜部材５０は、市販のラップ等のフィルムであってよい。
　本実施形態における膜部材５０は、上記に例示された材料のうち１種類から構成されていてもよく、２種類以上から構成されていてもよい。また、膜部材５０の材料は、上記例に限定されず、上記以外の合成高分子化合物の他、天然高分子化合物で構成されていてもよく、天然高分子化合物及び合成高分子化合物の両方から構成されていてもよい。
　膜部材５０は、任意の方法により底壁３０上に配置され得る。例えば、膜部材５０は、ファンデルワールス力、静電気力、減圧吸着作用等によって底壁３０の上面に張り付いてもよく、任意の接着剤により底壁３０の上面又は側壁３２の内面に貼り付けられてもよい。
　基準線４０及び指示部４２は、観察面Ｓに直交する方向において観察面Ｓを基準として細胞観察用の顕微鏡の対物レンズの焦点深度内に位置する。例えば、図３に示すように、基準線４０及び指示部４２が底壁３０の上面に凹部として形成される場合には、観察面Ｓ（すなわち底壁３０の上面）からの凹部の深さは、好ましくは対物レンズの焦点深度以内である。基準線４０及び指示部４２が底壁３０の上面に凸部として形成される場合には、観察面Ｓ（すなわち底壁３０の上面）からの凸部の高さは、好ましくは対物レンズの焦点深度以内である。図４に示すように、基準線４０及び指示部４２が底壁３０上に配置された膜部材５０に形成される場合には、観察面Ｓから膜部材５０の下面５０ａに印刷又は描画された基準線４０及び指示部４２までの距離は、好ましくは対物レンズの焦点深度以内である。
　底壁３０の下面に基準線４０及び指示部４２が形成される場合には、観察面Ｓと基準線４０及び指示部４２とがともに対物レンズの焦点深度内に含まれるように、底壁３０の厚さは十分に薄いことが好ましい。
　対物レンズの焦点深度Ｄは、一般に以下のＢｅｒｅｋの式で求められる。ここで、ｎはサンプルと対物レンズとの間の媒質の屈折率、ωは観察者の眼の分解能、Ｍは対物レンズ及び接眼レンズの総合倍率、ＮＡは対物レンズの開口数、λは光の波長である。
　　Ｄ＝ｎ×［（２５００００×ω）／（Ｍ・ＮＡ）＋λ／２ＮＡ２］（μｍ）
　上記式によれば、ｎ＝１、ω＝０．００１４、λ＝０．５５μｍ（可視光）、ＮＡ＝０．９０とすると、総合倍率Ｍ＝５倍の場合には焦点深度Ｄ＝７８μｍ、総合倍率Ｍ＝１０倍の場合には焦点深度Ｄ＝３９μｍ、総合倍率Ｍ＝２０倍の場合には焦点深度Ｄ＝２０μｍ、総合倍率Ｍ＝５０倍の場合には焦点深度Ｄ＝８．１μｍ、総合倍率Ｍ＝１００倍の場合には焦点深度Ｄ＝４μｍである。
　例えば、観察面Ｓに直交する方向における観察面Ｓと基準線４０及び指示部４２との距離は、１００μｍ以下、９０μｍ以下、８０μｍ以下、７０μｍ以下、６０μｍ以下、５０μｍ以下、４０μｍ以下、３０μｍ以下、２０μｍ以下、又は１０μｍ以下である。この場合、基準線４０及び指示部４２と観察対象の細胞Ｃとがともに対物レンズの焦点深度内に含まれ得る点で好ましい。図３に示す例において、基準線４０及び指示部４２を形成する凹部の深さは、例えば、１００μｍ以下、９０μｍ以下、８０μｍ以下、７０μｍ以下、６０μｍ以下、５０μｍ以下、４０μｍ以下、３０μｍ以下、２０μｍ以下、又は１０μｍ以下である。図４に示す例において、基準線４０及び指示部４２が形成された膜部材５０の厚さは、例えば、１００μｍ以下、９０μｍ以下、８０μｍ以下、７０μｍ以下、６０μｍ以下、５０μｍ以下、４０μｍ以下、３０μｍ以下、２０μｍ以下、又は１０μｍ以下である。
　指示部４２によって示される特定領域の大きさは、特定領域の全体が顕微鏡で観察できるように、かつ特定領域に含まれる細胞Ｃの数が多すぎないように設定されることが好ましい。例えば、特定領域の面積は、５ｍｍ２以下、４ｍｍ２以下、３ｍｍ２以下、２ｍｍ２以下、１ｍｍ２以下、０．５ｍｍ２以下、０．３ｍｍ２以下、０．２ｍｍ２以下、又は０．１ｍｍ２以下である。例えば、特定領域は、１ｍｍ四方、０．５ｍｍ四方、又は０．２５ｍｍ四方の正方形である。あるいは、特定領域は、直径１ｍｍ、直径０．５ｍｍ、又は直径０．２５ｍｍの円である。特定領域が、０．２５ｍｍ四方の正方形である場合、血球計算盤として機能する。
　上記例では、基準線４０及び指示部４２がともに同一の方法で形成されているが、基準線４０及び指示部４２は、異なる方法で形成されてもよい。指示部４２が複数の指示部を含む場合には、１以上の指示部は、同一の手法で形成されてもよく、異なる方法で形成されてもよい。
　図５は、別の実施形態の容器２の上面図である。図５に示すように、容器２は、上面が開放された丸形の培養皿である。容器２は、本体６０を備える。本体６０は、円形の底壁７０と、底壁７０の周縁から上方に延在する側壁７２と、を備える。なお、容器２は、多角形や楕円形等の他の形状の培養皿であってもよい。
　底壁７０に観察面Ｓが形成され、観察面Ｓに基準線８０及び基準線８０の近傍において、特定領域を示す指示部８２が表示される。指示部８２は、第１領域を示す正方形の枠線である第１指示部８２ａ、第２領域を示す正方形の枠線である第２指示部８２ｂ、第３領域を示す正方形の枠線である第３指示部８２ｃ、第４領域を示す円形の枠線である第４指示部８２ｄ、及び第５領域を示す円形の枠線である第５指示部８２ｅを含む。基準線８０及び指示部８２の配置構成や形成方法は、基準線４０及び指示部４２と同様である。
　容器の形態は、上記例に限定されない。例えば、容器は、バイアル、ディッシュ、ボトル、フラスコ等の任意の形状の培養容器であってもよく、多数のウェルが形成された多穴プレートであってもよい。各種容器において、培養細胞Ｃが位置する観察面Ｓに基準線８０及び特定領域を示す指示部８２が表示される。
［細胞観察システム］
　１実施形態において、本発明は、対物レンズを有する顕微鏡と、前記顕微鏡により観察される細胞を収容する、底壁及び側壁を備える細胞観察用の容器と、を備える細胞観察システムであって、前記底壁に前記顕微鏡のための観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示され、前記基準線及び前記指示部は、前記観察面に直交する方向において前記観察面を基準として前記対物レンズの焦点深度内に位置する、細胞観察システムを提供する。
　顕微鏡は、任意の種類の顕微鏡であってよく、例えば光学顕微鏡、蛍光顕微鏡、位相差顕微鏡等である。対物レンズは、任意の形態のレンズであってよい。
［容器の製造方法］
　１実施形態において、本発明は、底壁及び側壁を備える細胞観察用の容器を用意する工程と、前記底壁上に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部を形成する工程と、を含む容器の製造方法を提供する。
　基準線及び指示部を形成する工程は、任意の方法により実行可能であり、例えば上述した種々の方法により実行可能である。例えば、基準線及び指示部は、物理的手法や化学的手法により、容器の底壁の上面に凹部、凸部等の変形部として、又は変色部等の変性部として形成され得る。あるいは、基準線及び指示部は、例えば容器の底壁への印刷や描画等により、視認可能な材料が容器の底壁に添加されてもよい。また、基準線及び指示部は、膜部材（図４参照）、棒状部材、メッシュ部材等、容器とは別の部材によって形成されてもよい。
［容器の使用方法］
　１実施形態において、本発明は、上述の容器の使用方法であって、前記容器内に観察対象の細胞を供給する工程１と、顕微鏡下で前記基準線を特定する工程２と、顕微鏡下で前記基準線に沿って所定の指示部を探索する工程３と、顕微鏡下で前記所定の指示部を特定する工程４と、前記特定された指示部により示される前記特定領域に含まれる細胞を顕微鏡下で観察する工程５と、をこの順に含む、容器の使用方法を提供する。
＜工程１＞
　観察対象の細胞Ｃを、培養液Ｍとともに、容器の供給口から収容部内に供給する。必要に応じて、容器内で細胞Ｃの培養が行われる。
＜工程２＞
　次いで、細胞Ｃを含む容器を顕微鏡のステージ上に配置する。収容部内を顕微鏡で観察する。まず、観察面Ｓに表示された基準線を特定する。図１及び図２に示すように、基準線が観察面Ｓの一側から他側へ延在していることにより、基準線の特定は顕微鏡下であっても比較的容易である。
＜工程３＞
　顕微鏡下で基準線を発見した後、基準線に沿ってステージ又はステージ上の容器自体を一方向に移動させる。指示部は基準線の近傍に配置されているので、上記操作によって所望の特定領域を示す指示部を探索することができる。
＜工程４＞
　次いで、観察対象とする特定領域に対応する指示部を顕微鏡下で特定する。例えば、各指示部により示された複数の特定領域のうち、細胞Ｃの数、配置、状態等に基づき、細胞Ｃの観察に適した特定領域を選定することができる。好ましくは、選定した特定領域の全体が顕微鏡の視野に含まれるようにステージ又はステージ上の容器の位置や顕微鏡の倍率を調節する。
＜工程５＞
　次いで、特定した指示部により示される特定領域に含まれる細胞Ｃを顕微鏡下で観察する。例えば、特定領域に含まれる細胞像や細胞数を検査する。一定時間の経過後、再び同じ特定領域を観察し、細胞像や細胞数の経時変化を調べることができる。ここで、最初の観察後に容器が一旦顕微鏡のステージから回収されたり、ステージ上の容器の位置が変更されたりすることがある。しかしながら、そのような場合でも、再び工程２～工程４を実行することにより、工程４で特定した指示部を発見し、前回の観察と同じ特定領域を観察することができる。
　培養細胞Ｃが容器に保存されて輸送される場合においても、ユーザが輸送前後で細胞Ｃを観察してサンプルの同一性を確認する際に、基準線及び指示部を利用することによって、同一視野の細胞Ｃの比較観察を容易に行うことができる。このように輸送前後で特定領域内の細胞数の計測や細胞形態の観察を行うことにより、輸送される細胞Ｃの品質を保証することができる。
　上記の各工程は、ユーザによって実行されてもよく、少なくとも部分的にコンピュータ制御によって実行されてもよい。
［細胞輸送装置］
　次いで、上記の技術的思想を応用した細胞輸送装置１００について、図６及び図７を参照して説明する。細胞輸送装置１００は、「容器」の一形態でもある。
　１実施形態において、本発明は、第１の培養皿と第２の培養皿とを有する細胞輸送装置であって、前記第１の培養皿は、底壁を備え、前記第２の培養皿は、底面に多孔質膜を備え、前記第２の培養皿は、前記第１の培養皿と前記多孔質膜とに囲まれた隙間を有した状態で、前記第１の培養皿の上部に装着され、前記第１の培養皿の前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、細胞輸送装置を提供する。
　本明細書において、「多孔質膜」とは、細孔を多数有する膜を意味し、空隙を有する膜、細孔と空隙とを有する膜も包含する。多孔質膜が気相中で液密性を有し、液相中で半透性を有する半透膜であってもよい。多孔質膜としては、例えば、濾紙、半透膜（例えば、限外濾過膜等）、不織布、ガーゼ様メッシュ、各種メンブレンフィルタ等が挙げられ、これらに限定されない。
　多孔質膜の細孔の大きさとしては、例えば０．０１μｍ以上１，５００μｍ以下であればよく、例えば０．０１μｍ以上１．０μｍ以下であればよく、例えば０．０１μｍ以上０．４５μｍ以下があればよい。
　第２の培養皿の多孔質膜としては、例えば、滅菌フィルタが挙げられる。滅菌フィルタとしては、第２の培養皿に混入した細菌が第１の培養皿の培養空間へ透過しない程度の孔を有する膜であればよく、特別な限定はない。
　図６（ａ）～（ｂ）は、本実施形態の細胞輸送装置１００の一例の構造を説明する模式図である。図６（ａ）は、本実施形態の細胞輸送装置１００の斜視図であり、図６（ｂ）は、図６（ａ）の側面図である。
　図６（ｂ）～（ｃ）に示すように、細胞輸送装置１００において、第２の培養皿１２０が、隙間１３０の高さを調節可能な状態で、第１の培養皿１１０の上部に装着されている。好ましくは、図１（ｂ）に示すように、第２の培養皿１２０の上部に形成されたフランジの下面が第１の培養皿１１０の側壁の上端面に密着した状態（すなわち、第１の培養皿１１０に対する第２の培養皿１２０の高さ方向の位置を最も低くした状態）において、一定の高さの隙間１３０が形成される。図６（ｃ）は、細胞輸送装置１００において、第２の培養皿１２０が、最も下方に位置する状態から、第２の培養皿１２０が第１の培養皿１１０から引き上げられた状態へ変化させたときの側面図である。図６（ｃ）に示すように、第２の培養皿１２０が第１の培養皿１１０から引き上げられることにより、隙間１３０の高さが増加する。隙間１３０は、第１の培養皿１１０の底面及び内側面と第２の培養皿１２０の底面とに囲まれて画成される。隙間１３０の高さは、第１の培養皿１１０と第２の培養皿１２０との距離を調節することにより調節可能であり、例えば０ｃｍ～１ｃｍが好ましく、０ｃｍ～０．５ｃｍがより好ましい。隙間１３０の高さは、細胞輸送装置１００の用途に応じて、例えば、封入する細胞の体積に応じて調節可能である。
　図６（ｄ）は、第１の培養皿１１０の側面図である。図６（ｄ）において、第１の培養皿１１０は、内周面に雌ねじが切られており、雌ねじ構造を有している。図６（ｅ）は、第１の培養皿１１０の上面図である。図６（ｅ）において、第１の培養皿１１０は、底面に「底壁」として膜部材１１２を有している。膜部材１１２には、上述の容器１、２と同様に、基準線１１４及び指示部１１６が形成されている。すなわち、第１の培養皿１１０の底壁は、基準線１１４及び指示部１１６が形成された膜部材１１２である。図６（ｆ）は、図６（ｅ）の線Ｂ－Ｂに沿った第１の培養皿１１０の断面図である。図３に示す容器１と同様に、基準線１１４及び指示部１１６は、膜部材１１２の上面に凹部として形成されている。
　図６（ｇ）は、第２の培養皿１２０の側面図である。図６（ｇ）において、第２の培養皿１２０は、外周面に雄ねじが切られており、雄ねじ構造を有している。図６（ｈ）は、第２の培養皿１２０の上面図である。図６（ｈ）において、第２の培養皿１２０は、底面に滅菌フィルタ１２２を有している。
　本実施形態では、隙間１３０は、第１の培養皿１１０の側壁の内側面、第１の培養皿１１０の底面の膜部材１１２、及び第２の培養皿１２０の底面の滅菌フィルタ１２２によって囲まれて画成される。隙間１３０は、第１の培養皿１１０の培養空間として利用可能である。好ましくは、隙間１３０は、滅菌フィルタ１２２を除いて細胞輸送装置１００の外部から密閉され、滅菌フィルタ１２２を通じてのみ外部（例えば第２の培養皿１２０の内部空間）と連通することができる。
　第１の培養皿１１０と第２の培養皿１２０の間に生じる隙間の高さを調節する手段として、雄ねじ構造の根元にシリコンＯ-リング、金属ワッシャー、又は環状ナイロン膜等を装着した後に雌ねじと螺着してもよい。
　第１の培養皿１１０と第２の培養皿１２０との間は、高さを調節可能な隙間１３０を有した状態で装着されていればよく、あるいは、一定の高さの隙間１３０を有した状態で装着されるように底面までの雄ねじ距離を短くした第２の培養皿１２０を用いて装着されていればよく、係合又は嵌合により装着されていることが好ましい。本実施形態においては、第１の培養皿１１０の雄ねじと第２の培養皿１２０の雌ねじとの締め切った状態において、一定の高さを有する隙間１３０が形成されることが好ましい。
　図６（ａ）及び図６（ｂ）では、第１の培養皿１１０と第２の培養皿１２０が、螺着により装着されているが、装着機構は問わず、テーパー構造を介して装着されていてもよい。
　細胞輸送装置１００は、第１の蓋１４０（図７（ａ）、図７（ｃ）、及び図７（ｄ）参照）及び第２の蓋１５０（図７（ｂ）参照）をさらに備える。
　第１の蓋１４０は、第１の培養皿１１０又は第２の培養皿１２０の上面を被覆することができる。第１の蓋１４０は培養皿１１０、１２０の上面を覆うことができれば特に限定されず、任意の構成であってよい。第１の蓋１４０は、必ずしも培養皿１１０、１２０の上面を密封できなくてもよい。例えば、図７（ａ）及び図７（ｃ）に示すように、第１の蓋１４０は、培養皿１１０、１２０に装着された場合に、培養皿１１０、１２０の上端部の外側面と第１の蓋１４０の内側面との間に隙間が形成されるような大きさであってよい。第１の蓋１４０を通して細胞Ｃを顕微鏡で観察する観点から、第１の蓋１４０は、透明又は半透明な材料で構成されることが好ましい。
　第２の蓋１５０は、第２の培養皿１２０の上面を被覆及び密封することができる。第２の蓋１５０は第２の培養皿１２０の上面を密封することができれば特に限定されず、任意の構成であってよい。例えば、図７（ｂ）に示すように、第２の蓋１５０は、第２の培養皿１２０に装着された場合に、第２の培養皿１２０の上端部の外側面と第１の蓋１４０の内側面とが緊密に接触するような大きさであってよい。第２の蓋１５０は、透明又は半透明な材料で構成されてもよく、不透明な材料で構成されてもよい。
　第１の培養皿１１０及び第２の培養皿１２０の外径は、略同一が好ましい。外径は、６ｍｍ～１５０ｍｍが好ましく、１０ｍｍ～１００ｍｍがより好ましく、１４ｍｍ～６０ｍｍがさらに好ましい。第１の培養皿１１０の内径は、２ｍｍ～１４６ｍｍが好ましく、６ｍｍ～９６ｍｍがより好ましく、１０ｍｍ～５６ｍｍがさらに好ましい。第２の培養皿１２０の内径は、１ｍｍ～１４０ｍｍが好ましく、２ｍｍ～９０ｍｍがより好ましく、３ｍｍ～５０ｍｍがさらに好ましい。
　また、細胞輸送装置１００の高さは、０．５ｃｍ～１０ｃｍが好ましく、１ｃｍ～５ｃｍがより好ましい。
　第１の培養皿１１０の膜部材１１２としては、例えば、プラスチック製の膜が挙げられる。
　図６に示す例では、基準線１１４及び指示部１１６が膜部材１１２の上面に凹部として形成されているが、基準線１１４及び指示部１１６のうち少なくとも一方が膜部材１１２の下面に形成されてもよい。ただし、容器１、２と同様に、観察面Ｓ（本実施形態では膜部材１１２の上面）と基準線１１４及び指示部１１６との距離は、顕微鏡の対物レンズの焦点深度以下であることが好ましい。
　基準線１１４及び指示部１１６は、上記例に限定されず、任意の方法で形成されてよい。例えば、基準線１１４及び指示部１１６は、膜部材１１２に印刷又はペンや鉛筆で描画されてもよい。この場合、培養細胞への悪影響を抑制する観点から、基準線１１４及び指示部１１６は、膜部材１１２の下面に形成されるのが好ましい。
　膜部材１１２は、第１の培養皿１１０と一体に形成されてもよい。あるいは、第１の培養皿１１０は、膜部材１１２に代えて肉厚の底壁を備えてもよい。この場合、第１の培養皿１１０の底壁の構成は、容器２の底壁と同様であってよい。
　膜部材１１２の材質としては、例えば、膜部材５０の材料として上述した各材料が挙げられる。
　中でも、ポリスチレン、ポリヒドロキシ酸（例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド等）、ポリエチレンテレフタレート、ポリ（ヒドロキシ酪酸）、ポリ（ヒドロキシ吉草酸）、ポリ［ラクチド－ｃｏ－（ε－カプロラクトン）］、ポリ［グリコリド－ｃｏ－（ε－カプロラクトン）］等）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート）、ポリオルトエステル、又はこれらのコポリマーが好ましい。
　本実施形態における膜部材１１２は、上記に例示された材料のうち１種類から構成されていてもよく、２種類以上から構成されていてもよい。また、膜部材１１２の材料は、上記例に限定されず、上記以外の合成高分子化合物の他、天然高分子化合物で構成されていてもよく、天然高分子化合物及び合成高分子化合物の両方から構成されていてもよい。
　本実施形態における膜部材１１２の厚さは特に制限されないが、１μｍ～１０００μｍが好ましく、１μｍ～５００μｍがより好ましく、５μｍ～３００μｍがさらに好ましく、１０μｍ～２００μｍが特に好ましい。
　本実施形態における滅菌フィルタ１２２の細孔の大きさとしては、細菌の大きさを考慮して、例えば０．０１μｍ～１．０μｍが好ましく、例えば０．０１μｍ～０．５μｍが好ましく、例えば０．０１μｍ～０．２μｍが好ましく、例えば０．０１μｍ～０．１μｍが好ましい。
　本実施形態における滅菌フィルタ１２２の厚さは特に制限されないが、１μｍ～１０００μｍが好ましく、１μｍ～５００μｍがより好ましく、５μｍ～３００μｍがさらに好ましく、１０μｍ～２００μｍが特に好ましい。
　滅菌フィルタ１２２以外の細胞輸送装置１００の材質としては、容器１の材料として上述した各材料が挙げられ、プラスチックが好ましい。
　細胞輸送装置１００の色としては、特に限定されないが、各種顕微鏡を用いて細胞を観察する等の観点から透明色および不透明（遮光）色を適宜選択することが好ましい。また、細胞輸送装置１００には、培養する個々の細胞を識別するための工夫（例えば、着色、印字等）が施されていてもよい。
　滅菌フィルタ１２２以外の細胞輸送装置１００の製造方法としては、圧縮成形法、射出成形法、押出成形法等が挙げられるが、これらに限定されない。
　第１の培養皿１１０と膜部材１１２の材質が同じ場合には、両者が一体化したものとして捉えてもよい。例えば、第１の培養皿１１０と膜部材１１２の材質がＰＥＴ等プラスチック樹脂である場合、別途ＰＥＴ等プラスチック膜を張らずとも、本発明の範囲内に含まれる。
［培養皿の製造方法］
　第１の培養皿１１０は、任意の方法で製造することができる。例えば、第１の培養皿１１０は、圧縮成形法、射出成形法、押出成形法等の任意の方法で膜部材１１２以外の部分を形成し、別途任意の方法で膜部材１１２を製造し、膜部材１１２を膜部材１１２以外の部分に結合することにより製造される。あるいは、第１の培養皿１１０は膜部材１１２を含めて一体成型されてもよい。
　第２の培養皿１２０は、任意の方法で製造することができる。例えば、第２の培養皿１２０は、圧縮成形法、射出成形法、押出成形法等の任意の方法で滅菌フィルタ１２２以外の部分を形成し、別途任意の方法で滅菌フィルタ１２２を製造し、滅菌フィルタ１２２を滅菌フィルタ１２２以外の部分に結合することにより製造される。あるいは、第２の培養皿１２０は滅菌フィルタ１２２を含めて一体成型されてもよい。
［細胞輸送装置の使用方法］
　本実施形態の細胞輸送装置１００は、細胞の培養、細胞の輸送等に使用することができる。細胞輸送装置１００は、容器として又は細胞培養装置として利用可能である。
［細胞輸送装置による細胞の輸送方法］
　本実施形態の細胞の輸送方法は、上述の細胞輸送装置１００を用いる方法である。本実施形態の輸送方法によれば、細胞を安全かつ確実に容易に輸送することができ、輸送される細胞の品質を保証することができ、培養細胞へのコンタミネーションのリスクの高い酵母、カビおよび細菌などの微生物（一般的な大きさ：約０．５μｍ～５μｍ）のコンタミネーションを防止することができ、長期間の輸送にも対応することができる。
　本実施形態の輸送方法について、図７（ａ）～（ｄ）を参照して、以下に詳細に説明する。
　図７（ａ）～（ｄ）は、本実施形態の細胞輸送装置１００による細胞輸送方法を示す断面図である。
　まず、細胞Ｃを懸濁した培養液Ｍを準備する。次いで、上述の第１の培養皿１１０内に細胞Ｃを懸濁した培養液Ｍを注入する。次いで、図７（ａ）に示すように、第１の培養皿１１０の上面を第１の蓋１４０で被覆し、第１の培養皿１１０内で細胞Ｃの培養を行う。
　次いで、細胞Ｃを輸送する前に、第１の蓋１４０を通して、第１の培養皿１１０内の細胞Ｃを顕微鏡で観察する。上述の［容器の使用方法］と同様にして、基準線１１４に沿って指示部１１６を探索することにより、観察対象とする特定領域を顕微鏡下で選定し、その特定領域に対応する指示部１１６を特定することができる。特定領域に含まれる細胞Ｃを顕微鏡下で観察し、例えば、特定領域に含まれる細胞像や細胞数を検査する。
　次いで、図７（ｂ）に示すように、第１の蓋１４０を取り外して第２の培養皿１２０を第１の培養皿１１０に装着する。好ましくは、第２の培養皿１２０の上部に形成されたフランジの下面が第１の培養皿１１０の側壁の上端面と密着するまで、第１の培養皿１１０の雌ねじと第２の培養皿１２０の雄ねじとを締め切る。第１の培養皿１１０内の培養液Ｍは、滅菌フィルタ１２２を通って第２の培養皿１２０の内部に進入する。細胞Ｃは滅菌フィルタ１２２の小さい穴を通れないので、引き続き第１の培養皿１１０内に位置する。次いで、第２の培養皿１２０に培養液Ｍをさらに注入し、第２の培養皿１２０の上端まで培養液Ｍで満たす。次いで、第２の蓋１５０で第２の培養皿１２０を密封する。これにより、培養皿１１０、１２０の内部の培養空間が完全に培養液Ｍで満たされるので、培養空間内に気泡が存在せず、輸送中に細胞輸送装置１００に加わる振動等の細胞Ｃへの影響が抑制される。また、細胞Ｃが存在する第１の培養皿１１０の培養空間と、第２の培養皿１２０の培養空間とが滅菌フィルタ１２２で仕切られているので、万一第２の蓋１５０の装着操作中等に細菌その他の微生物のコンタミネーションが第２の培養皿１２０内に混入した場合でも、細胞Ｃが存在する第１の培養皿１１０の培養空間へのコンタミネーションは防止される。
　次いで、図７（ｂ）の状態で細胞輸送装置１００を輸送する。輸送方法は非凍結輸送で行われる。また、細胞輸送装置１００の輸送は、内部の培養液Ｍの漏れを防ぐ観点から、図２（b）に示すように、ねじを締め切って第１の培養皿１１０と第２の培養皿１２０とを密封した状態で行われるのが好ましい。輸送後は、図７（ｃ）に示すように、密封用の第２の蓋１５０を取り外し、培養液Ｍの約半量を除去した後、第１の蓋１４０を第２の培養皿１２０に装着する。この操作を行う際にも、滅菌フィルタ１２２により、細胞Ｃが存在する第１の培養皿１１０内の培養空間へのコンタミネーションが防止される。
　次いで、第１の蓋１４０を通して、第１の培養皿１１０内の細胞Ｃを顕微鏡で観察する。基準線１１４に沿って輸送前に特定した指示部１１６を探索することにより、所望の指示部１１６を容易に発見することができるので、輸送前に観察した特定領域と同一の領域を特定し、観察することができる。すなわち、輸送前後における同一視野での細胞観察を容易に行うことができる。特定領域に含まれる細胞Ｃを顕微鏡下で観察し、例えば、特定領域に含まれる細胞像や細胞数を検査する。これにより、輸送前後における同一の特定領域における細胞像や細胞数を容易に比較することができる。
　その後、図７（ｃ）に示すような状態で細胞Ｃの培養を行ってもよく、第２の培養皿１２０を第１の培養皿１１０から取り外した図７（ｄ）に示すような状態で細胞Ｃの培養を行ってもよい。
　輸送時の温度としては、例えば４℃以上３７℃以下であってもよく、１８℃以上３７℃以下であってもよい。
　輸送時間としては、細胞Ｃの種類、細胞数等により適宜選択することができ、例えば１時間以上１４日以下であってもよく、例えば１２時間以上７日以下であってもよく、例えば１日以上３日以下であってもよい。
［容器］
　１実施形態において、本発明は、天面、底面、及び側面を備えた、細胞観察用の円柱状容器であって、多孔質膜を少なくとも天面に備え、底面に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器を提供する。
　図８は、本実施形態の容器の一例の構造を説明する斜視図である。
　図８に示す様に、本実施形態の容器２００は、天面２０３、底面２０１、及び側面２０２を備えた、細胞観察用の円柱状容器である。本実施形態においては、底面２０１はプラスチック膜からなり、天面２０３は、多孔質膜からなる。好ましくは、多孔質膜は側面２０２から脱着可能である。多孔質膜としては、例えば、滅菌フィルタが挙げられる。滅菌フィルタとしては、細菌が容器内へ透過しない程度の孔を有する膜であればよく、特別な限定はない。
　本実施形態において、底面２０１に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される。図３に示す容器１と同様に、底面は、前記基準線及び前記指示部が形成された膜部材であり、基準線及び指示部は、底面の上面に凹部として形成されている。
　基準線及び指示部は、上記例に限定されず、任意の方法で形成されてよい。例えば、基準線及び指示部は、底面に印刷又はペンや鉛筆で描画されてもよい。この場合、培養細胞への悪影響を抑制する観点から、基準線及び指示部は、底面の下面に形成されるのが好ましい。
　本実施形態の容器２００の内径は、１ｍｍ以上６０ｍｍ以下であることが好ましく、３ｍｍ以上３５ｍｍ以下であることがより好ましく、５ｍｍ以上２６ｍｍ以下であることがさらに好ましい。
　また、本実施形態の容器２００の外径は、３ｍｍ以上６８ｍｍ以下であることが好ましく、５ｍｍ以上４３ｍｍ以下であることがより好ましく、７ｍｍ以上３４ｍｍ以下であることがさらに好ましい。
　また、本実施形態の容器２００の厚み（円柱の高さ）は、５μｍ以上であって、５０μｍ以上１５ｍｍ以下であることが好ましく、１００μｍ以上１０ｍｍ以下であることがより好ましく、２００μｍ以上２．５ｍｍ以下であることがさらに好ましい。
　なお、「円柱の高さ」は、容器２００の天面の外側の縁部から、底面の外側の縁部までの距離を意味する。
　本実施形態の容器２００の内部容積は、培養液に懸濁した多細胞を注入でき、細胞の活性をアッセイする試験等のインビトロ試験系で用いられる多細胞構造体を構築することができる程度のスモールスケールであればよい。具体的には、例えば、１０ｍＬ以下であることが好ましく、１０μＬ以上５ｍＬ以下であることがより好ましく、１５μＬ以上２ｍＬ以下であることがさらに好ましく、２０μＬ以上１ｍＬ以下であることが特に好ましい。
　内部容積が上記上限値以下であることにより、十分に酸素及び培養液の栄養分が供給され、細胞を効率よく長期間に渡り培養することができる。また、内部容積が上記下限値以上であることにより、インビトロ試験系で用いるのに十分な細胞数及び細胞密度の細胞を得ることができる。
　本実施形態の容器２００は、ピンセット等で容易に取り扱うことができる。
　細胞を輸送する際には、細胞が封入された容器２００を、培養液を含む開閉可能な密封容器に封入し、運搬することができる。運搬方法における密封容器は、開閉可能なものであればよく、特別な限定はない。密封容器としては、例えば、スクリューキャップ付のコニカルチューブ、スクリューキャップ付の細胞培養用フラスコ等が挙げられ、これらに限定されない。本実施形態の容器２００によれば、輸送前後における同一の特定領域における細胞像や細胞数を容易に比較することができる。
　以下、図９～図３５を参照して実施例１～４について説明する。本実施例は、発明を限定するものではない。
［実施例１］
　６０ｍｍ×１５ｍｍの細胞培養用ディッシュ（Ｆａｌｃｏｎ（登録商標）、製品番号３５３００２、コーニング社製）を用意し、このφ６０ｍｍディッシュの下に目盛りが付いた紙を置いた。次いで、ステンレス鋼製の片刃トリミング用カミソリ（Ｃａｔ　Ｎｏ．Ｔ５８６、３８ｍｍ×１９ｍｍ×０．２３（厚さ）ｍｍ、ＧＥＭ社製）をディッシュの底面の一端に上からあてがい、カミソリをディッシュの底面に押し当てながら、目盛りを基準にして、ディッシュの底面の略中心を通るようにしてディッシュの底面の一端から他端へ、上からなぞるようにカミソリを移動させた。
　次いで、カミソリで付けた線跡（図５の基準線８０に相当）を目盛りに合わせ、ディッシュの一端から約３ｍｍのところに、φ１ｍｍ生検トレパン（ＲＥＦ：ＢＰＰ－１０Ｆ、ＬＯＴ：１９Ｄ４９、円内面積：０．００７８５ｃｍ２、カイ　インダストリーズ株式会社製）を押し当てた。このとき、トレパンの円形の刃は回転させず、ディッシュの底面に押し当てたまま、力を１～２周させた。形成する円は、できるだけカミソリの基準線に接するか又は近接するようにした。次いで、目盛りに沿って、ディッシュの一端から約１３ｍｍ及び約２５ｍｍのところにも、同様にして円形の跡を付けた。以下、端から約３ｍｍのところの円形線跡を「端」（図５の第１指示部８２ａに相当）、約１３ｍｍのところの円形線跡を「間」（図５の第３指示部８２ｃに相当）、約２５ｍｍのところの円形線跡を「中心」（図５の第２指示部８２ｂに相当）と呼ぶ。
　このようにして、φ６０ｍｍ細胞培養ディッシュにカミソリで基準線を付け、トレパンで指示部の円形枠線を付けたものを用意し、培養基材とした。
　上記培養基材を使用して、正常ヒト真皮由来線維芽細胞（ＮＨＤＦｓ細胞）を１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２で播種し、５ｍＬの培養液中で培養した。播種前（基準線及び円形枠線を付けた後）、培養液のみを入れた段階、播種から２時間後、１日後、４日後、及び７日後の各タイミングで、各サンプルについてディッシュの「端」、「間」、及び「中心」の３点の近傍を観察した。
　図９は、実施例１において、播種前、培養液のみを入れた段階、及び播種から２時間後の「端」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図１０は、実施例１において上記３つのタイミングで「間」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図１１は、実施例１において上記３つのタイミングで「中心」の近傍を撮影した位相差顕微鏡写真である。対物レンズ４倍、１０倍、２０倍の３種類の倍率による顕微鏡写真を示す（図９の右側は、それぞれの対物レンズで全長１．００ｍｍの目盛りを撮影した位相差顕微鏡写真である）。播種前の写真を「播種前」、培養液のみの写真を「培養液のみ」、播種から２時間後の写真を「播種２時間後」と記載した。円形の線跡によって観察対象の領域を一意に特定でき、細胞像や細胞数を調べることができることが確認された。
　播種から２時間後の円形枠線内の細胞数は、「端」で３０ｃｅｌｌｓ、「間」で４４ｃｅｌｌｓ、「中心」で８１ｃｅｌｌｓであった。これらの平均値５１．７ｃｅｌｌｓは、播種密度及び円の面積から計算した理論値７８．５ｃｅｌｌｓから大きく外れていないので、細胞が適切に播種培養されていると考えられる。
［実施例２］
　播種密度を０．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２とした点を除き、実施例１と同様にして細胞培養及び観察を行った。
　図１２は、実施例２において、播種前、培養液のみを入れた段階、及び播種から２時間後の「端」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図１３は、実施例２において上記３つのタイミングで「間」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図１４は、実施例２において上記３つのタイミングで「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。４倍、１０倍、２０倍の３種類の倍率による顕微鏡写真を示す。円形の線跡によって観察対象の領域を一意に特定でき、細胞像や細胞数を調べることができることが確認された。
　播種から２時間後の円形枠線内の細胞数は、「端」で３２ｃｅｌｌｓ、「間」で３１ｃｅｌｌｓ、「中心」で９０ｃｅｌｌｓであった。これらの平均値５１．０ｃｅｌｌｓは、播種密度及び円の面積から計算した理論値３９．２５ｃｅｌｌｓから大きく外れていないので、細胞が適切に播種培養されていると考えられる。
［実施例３］
　播種密度を０．１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２とした点を除き、実施例１と同様にして細胞培養及び観察を行った。
　図１５は、実施例３において、播種前、培養液のみを入れた段階、及び播種から２時間後の「端」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図１６は、実施例３において上記３つのタイミングで「間」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図１７は、実施例３において上記３つのタイミングで「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。４倍、１０倍、２０倍の３種類の倍率による顕微鏡写真を示す。円形の線跡によって観察対象の領域を一意に特定でき、細胞像や細胞数を調べることができることが確認された。
　播種から２時間後の円形枠線内の細胞数は、「端」で１ｃｅｌｌｓ、「間」で５ｃｅｌｌｓ、「中心」で１８ｃｅｌｌｓであった。これらの平均値８．０ｃｅｌｌｓは、播種密度及び円の面積から計算した理論値７．８５ｃｅｌｌｓから大きく外れていないので、細胞が適切に播種培養されていると考えられる。
［実施例４］
　カミソリで付けた線跡を目盛りに合わせ、ディッシュの一端から約５．５ｍｍ、約１５ｍｍ、及び約２５ｍｍのところに円形の跡を付けた以外は、実施例１と同様にして細胞培養及び観察を行った。以下、端から約５．５ｍｍのところの円形線跡を「端」、約１５ｍｍのところの円形線跡を「間」、約２５ｍｍのところの円形線跡を「中心」と呼ぶ。
　初期播種密度１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の培養皿３枚について、各培養皿の「端」、「間」、「中心」付近を、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目に位相差顕微鏡で同一視野を観察することで、細胞像と細胞数の経時変化を解析した。
　１枚目の培養皿Ａから順番に１（端）、２（間）、３（中心）と番号を付した。同様に培養皿の２枚目Ｂに４（端）、５（間）、６（中心）、及び３枚目Ｃに７（端）、８（間）、９（中心）と番号を付した。
　図１８及び図１９は、播種前の各培養皿、培養液のみを入れた各培養皿の「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図２０及び図２１は、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ａの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図２２及び図２３は、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の２枚目の培養皿Ｂの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図２４及び図２５は、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の３枚目の培養皿Ｃの「端」、「間」、「中心」の近傍を撮影した顕微鏡写真である。図２６及び図２７は、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の１枚目の培養皿Ａの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。図２８及び図２９は、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の２枚目の培養皿Ｂの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。図３０及び図３１は、０日目（培養２時間目）、１日目、２日目、４日目、７日目、及び１０日目の３枚目の培養皿Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞の計測方法を示すとともに計測値を記入した図である。
　図３２は、培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」における直径１ｍｍの円形線跡中の細胞数の計測結果と「端」、「間」、「中心」の平均細胞数である。図３３は、培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」における１ｃｍ２当たりの細胞数と「端」、「間」、「中心」の１ｃｍ２当たりの平均細胞数である。図３４は、培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」における１ｃｍ２当たりの細胞数と「端」、「間」、「中心」の１ｃｍ２当たりの平均細胞数のグラフである。図３５は、培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞数を平均した１ｃｍ２当たりの細胞数と培養皿Ａ～Ｃの１ｃｍ２当たりの平均細胞数である。図３６は、培養皿Ａ～Ｃの「端」、「間」、「中心」の細胞数を平均した１ｃｍ２当たりの細胞数と培養皿Ａ～Ｃの１ｃｍ２当たりの平均細胞数のグラフである。
　結果として、播種した細胞は、いずれの培養皿でも「端」、「間」、「中心」の順に多く存在することが分かった。また、培養２時間目の平均細胞数は１．２５ ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２であり、大半は球状形態を呈する細胞であったが、培養１日目の平均細胞数は１．１２ ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２であり、大半は紡錘形態を呈する細胞であった。
　その後、培養２日目より、いずれの培養皿のいずれの部域でも紡錘形態を呈する細胞が経時的に増殖したが、各日とも細胞は、「端」、「間」、「中心」の順に多く存在し、いずれの培養皿でも間の細胞密度は培養皿のほぼ平均であった。
　以上の結果は、実際に播種した細胞数は理論値から大きく外れていないが、複数の培養皿を用いて位相差顕微鏡の観察像を比較する際には、「端」は端同士、「中心」は中心同士など同じ部域で実施することが重要であること、また、培養皿の平均細胞密度は、「端」と「中心」の間に相当する部域の細胞密度が反映していることが示唆された。
　本発明によれば、簡便な構成で容易に同一視野内の細胞観察を行うことができる容器、培養細胞の製造方法、及び細胞輸送装置を提供することができる。このような同一視野の顕微鏡観察を容易に行える底面を備えた培養容器は、既存の培養容器への適用が可能であるため、公益性が期待できる。また、輸送前後の細胞数及び細胞形態を容易に確認できる培養容器は、ｉＰＳ細胞をはじめ品質保証が重要な様々な細胞の輸送に貢献すると考えられるので、再生医療、創薬、及び動物実験代替法等の分野での利用が期待できる。
　１、２…容器、１０、６０…本体、１２…収容部、１４…ネック部、２０…キャップ、３０、７０…底壁、３２、７２…側壁、３４…頂壁、４０、８０…基準線、４２、８２…指示部、５０…膜部材、１００…細胞輸送装置、１１０…第１の培養皿、１１２…膜部材、１１４…基準線、１１６…指示部、１２０…第２の培養皿、１２２…滅菌フィルタ、１３０…隙間、１４０…第１の蓋、１５０…第２の蓋、Ｓ…観察面、Ｃ…細胞、Ｍ…培養液。

Claims (15)

  1. 　底壁及び側壁を備える細胞観察用の容器であって、
    　前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器。
  2. 　前記特定領域は、同一視野内の細胞の経時変化を観察するための観察対象領域である、請求項１に記載の容器。
  3. 　前記基準線及び前記指示部は、前記観察面に直交する方向において前記観察面を基準として細胞観察用の顕微鏡の対物レンズの焦点深度内に位置する、請求項１又は２に記載の容器。
  4. 　前記指示部は、前記特定領域を取り囲む枠線である、請求項１～３のいずれか一項に記載の容器。
  5. 　前記基準線は、一方向に沿って前記観察面の一側から他側へ延在する線である、請求項１～４のいずれか一項に記載の容器。
  6. 　前記指示部は、前記基準線の一端部に配置された第１領域を示す第１指示部、前記基準線の中央部に配置された第２領域を示す第２指示部、及び前記第１領域と前記第２領域との間に配置された第３領域を示す第３指示部を含む、請求項５に記載の容器。
  7. 　前記基準線及び前記指示部のうち少なくとも一方は、前記底壁に形成された凹部である、請求項１～６のいずれか一項に記載の容器。
  8. 　前記基準線及び前記指示部のうち少なくとも一方は、前記底壁上又は前記底壁下に配置された膜部材に形成されている、請求項１～６のいずれか一項に記載の容器。
  9. 　前記膜部材は、一方の面に前記基準線及び前記指示部のうち少なくとも一方を有し、前記一方の面が前記底壁に向くように前記底壁上又は前記底壁下に配置される、請求項８に記載の容器。
  10. 　第１の培養皿と第２の培養皿とを有する細胞輸送装置であって、
    　前記第１の培養皿は、底壁を備え、
    　前記第２の培養皿は、底面に多孔質膜を備え、
    　前記第２の培養皿は、前記第１の培養皿と前記多孔質膜とに囲まれた隙間を有した状態で、前記第１の培養皿の上部に装着され、
    　前記第１の培養皿の前記底壁に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、細胞輸送装置。
  11. 　前記多孔質膜は、滅菌フィルタである、請求項１０に記載の細胞輸送装置。
  12. 　前記第１の培養皿の前記底壁は、前記基準線及び前記指示部が形成された膜部材である、請求項１０又は１１に記載の細胞輸送装置。
  13. 　天面、底面、及び側面を備えた、細胞観察用の円柱状容器であって、
    　脱着可能な多孔質膜を少なくとも天面に備え、底面に観察面が形成され、前記観察面に基準線及び前記基準線の近傍において特定領域を示す指示部が表示される、容器。
  14. 　前記膜は、滅菌フィルタである、請求項１３に記載の容器。
  15. 　前記底面は、前記基準線及び前記指示部が形成された膜部材である、請求項１３又は１４に記載の容器。
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