JP3133786B2 - 顕微鏡観察する方法 - Google Patents
顕微鏡観察する方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、メニスカス制御用平板
に関するものである。更に詳しくは、本発明は、生物体
組織や細胞などの検体を培養した後、これら検体を顕微
鏡観察する際に用いられるメニスカス制御用平板に関す
るものである。
に関するものである。更に詳しくは、本発明は、生物体
組織や細胞などの検体を培養した後、これら検体を顕微
鏡観察する際に用いられるメニスカス制御用平板に関す
るものである。
【０００２】
【従来の技術】細胞培養は、医学や生物の分野で幅広く
行われている。また、培養用の容器も数々のサイズの容
器が販売され、目的に合った容器を用い細胞培養を行う
ことができるようになった。
行われている。また、培養用の容器も数々のサイズの容
器が販売され、目的に合った容器を用い細胞培養を行う
ことができるようになった。
【０００３】しかし、容器の内径φ１６．５ｍｍ以下、
つまり、２４穴以上の細胞培養容器（例えばベクソン・
テキンソン社製、マイクロテストプレート３０７０・９
６穴、マルチウェルプレート３０４７・２４穴コスター
社製、クラスターディシュ３５４８・４８穴など）で培
養した細胞を光学顕微鏡で観察しようとすると容器中の
培養液の液面が表面張力で湾曲し、それによるレンズ効
果で、像が劣化してしまう。特に、位相差顕微鏡で観察
しようとすると図１のように照明光中にあるリング開口
８１が対物レンズ８３中の位相差変調板８４のリングコ
ート上に投影されなければならないが、液面のレンズ効
果によってリングコート上と異なる位置、倍率で結像す
る為、適正な位相差変調を行うこうができず、かなり像
が劣化し、視野中心部しか像を見ることが出来ない。ま
た、細胞を測光しようとすると液面の湾曲によって測定
精度が低下してしまう。
つまり、２４穴以上の細胞培養容器（例えばベクソン・
テキンソン社製、マイクロテストプレート３０７０・９
６穴、マルチウェルプレート３０４７・２４穴コスター
社製、クラスターディシュ３５４８・４８穴など）で培
養した細胞を光学顕微鏡で観察しようとすると容器中の
培養液の液面が表面張力で湾曲し、それによるレンズ効
果で、像が劣化してしまう。特に、位相差顕微鏡で観察
しようとすると図１のように照明光中にあるリング開口
８１が対物レンズ８３中の位相差変調板８４のリングコ
ート上に投影されなければならないが、液面のレンズ効
果によってリングコート上と異なる位置、倍率で結像す
る為、適正な位相差変調を行うこうができず、かなり像
が劣化し、視野中心部しか像を見ることが出来ない。ま
た、細胞を測光しようとすると液面の湾曲によって測定
精度が低下してしまう。
【０００４】
【発明の目的】そこで、このような問題を解決する方法
として特公平２−３０４６９号に示された光学部材を溶
液に浸漬させる方法が知られている。しかし、この場
合、光学部材はレンズなどは高価な部材でできている
為、繰り返し使用しなければならない。その結果、光学
部材を溶液の入った多数の穴に挿入すると培養液中に異
物が混入（コンタミネーション）する危険性がある。
又、光学部材の洗浄も容易ではない。
として特公平２−３０４６９号に示された光学部材を溶
液に浸漬させる方法が知られている。しかし、この場
合、光学部材はレンズなどは高価な部材でできている
為、繰り返し使用しなければならない。その結果、光学
部材を溶液の入った多数の穴に挿入すると培養液中に異
物が混入（コンタミネーション）する危険性がある。
又、光学部材の洗浄も容易ではない。
【０００５】これとは別に、細胞培養プレートのウエル
中に疎水性円筒を挿入する方法が知られている（特開昭
６２−６９９７９）。しかし、この方法では円筒によっ
て観察できる視野を狭めてしまい、又、液量が少ないと
きには取扱いが難しい。さらに、前記円筒を培養液中に
挿入する場合、培養液液面の上昇が生じ、液全体が相当
激しく流動攪拌される。その結果、培養容器底面などに
培養されている生体組織または細胞などの検体が過大の
刺激を受け培養が阻害されたり、容器底面から離れ、培
養液中に混ざってしまったりする恐れもある。それゆ
え、前記円筒を使用して正常な培養状態の検体を正確に
観察することは困難である。
中に疎水性円筒を挿入する方法が知られている（特開昭
６２−６９９７９）。しかし、この方法では円筒によっ
て観察できる視野を狭めてしまい、又、液量が少ないと
きには取扱いが難しい。さらに、前記円筒を培養液中に
挿入する場合、培養液液面の上昇が生じ、液全体が相当
激しく流動攪拌される。その結果、培養容器底面などに
培養されている生体組織または細胞などの検体が過大の
刺激を受け培養が阻害されたり、容器底面から離れ、培
養液中に混ざってしまったりする恐れもある。それゆ
え、前記円筒を使用して正常な培養状態の検体を正確に
観察することは困難である。
【０００６】そこで本発明の目的は、培養容器中の培養
液を広い視野で、精度良く、培養液への異物の混入を容
易に防止でき、かつ培養液内を攪乱することなしに、顕
微鏡観察することを可能にする培養液等の液面のメニス
カスを制御する器具を提供することである。
液を広い視野で、精度良く、培養液への異物の混入を容
易に防止でき、かつ培養液内を攪乱することなしに、顕
微鏡観察することを可能にする培養液等の液面のメニス
カスを制御する器具を提供することである。
【０００７】
【発明の構成】本発明は、容器中の溶液上に浮かせる透
明な平板であって、上記溶液のメニスカスの少なくとも
一部を平坦化するに十分な平面積を有することを特徴と
するメニスカス制御用平板に関する。以下、本発明につ
いて説明する。
明な平板であって、上記溶液のメニスカスの少なくとも
一部を平坦化するに十分な平面積を有することを特徴と
するメニスカス制御用平板に関する。以下、本発明につ
いて説明する。
【０００８】本発明において容器とは、例えば細胞培養
容器である。具体的には２４、４８又は９６孔の円筒形
ウェルを有するマルチウェルを挙げることができる。但
し、容器内をそのまま顕微鏡観察するものであればとく
に限定はない。本発明の容器は、より具体的には、内径
約５〜２５ｍｍの生体組織や細胞培養用のプレートのウ
ェルである。容器内径の小さいものほど、メニスカスの
顕微鏡観察に与える悪影響が大きく、本発明の平板の使
用が有効である。
容器である。具体的には２４、４８又は９６孔の円筒形
ウェルを有するマルチウェルを挙げることができる。但
し、容器内をそのまま顕微鏡観察するものであればとく
に限定はない。本発明の容器は、より具体的には、内径
約５〜２５ｍｍの生体組織や細胞培養用のプレートのウ
ェルである。容器内径の小さいものほど、メニスカスの
顕微鏡観察に与える悪影響が大きく、本発明の平板の使
用が有効である。
【０００９】本発明の平板は、例えばプラスチック、ガ
ラス又はセラミックス製であることができる。但し、透
明な平板であれば特に材質についての制限はない。尚、
透明性が高く、比重が小さくて溶液に浮かせる操作が簡
単なプラスチックが好ましい。プラスチックの例として
は、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）（比重：
１．０８〜１．２０）、ポリスチレン（比重：１．０４
〜１．１１）、ポリエチレン（比重：０．９１０〜０．
９６５）、ポリカーボネート（比重：１．２０）、ポリ
エステル（比重：１．０１〜１．４６）、塩化ビニル
（比重：１．３５〜１．４５）等を挙げることができ
る。
ラス又はセラミックス製であることができる。但し、透
明な平板であれば特に材質についての制限はない。尚、
透明性が高く、比重が小さくて溶液に浮かせる操作が簡
単なプラスチックが好ましい。プラスチックの例として
は、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）（比重：
１．０８〜１．２０）、ポリスチレン（比重：１．０４
〜１．１１）、ポリエチレン（比重：０．９１０〜０．
９６５）、ポリカーボネート（比重：１．２０）、ポリ
エステル（比重：１．０１〜１．４６）、塩化ビニル
（比重：１．３５〜１．４５）等を挙げることができ
る。
【００１０】上記平板の表面の一部又は全部は疎水性で
あることが、平板を溶液に浮かせることが容易になると
いう観点から好ましい。又、表面が疎水性であることに
より、平面の上面に溶液が回り込み、上面を濡らすこと
を防止できる。平板を疎水化する方法としては、例えば
平板に疎水性物質（高分子）を塗布して被膜を形成する
方法、疎水性化合物を化学反応、プラズマ反応、電子
線、放射線又は紫外線を用いた反応で平板上に結合させ
る方法、ＣＶＤ（化学蒸着）法等を挙げることができ
る。
あることが、平板を溶液に浮かせることが容易になると
いう観点から好ましい。又、表面が疎水性であることに
より、平面の上面に溶液が回り込み、上面を濡らすこと
を防止できる。平板を疎水化する方法としては、例えば
平板に疎水性物質（高分子）を塗布して被膜を形成する
方法、疎水性化合物を化学反応、プラズマ反応、電子
線、放射線又は紫外線を用いた反応で平板上に結合させ
る方法、ＣＶＤ（化学蒸着）法等を挙げることができ
る。
【００１１】平板表面を疎水化処理する以外に、表面エ
ネルギーが低く、水や溶液に濡れにくい物質（例えばテ
フロン）で平板を作成することもできる。疎水性の程度
は、平板上に水滴をたらして接触角を読み取る液滴法、
水中で空気の泡を付着させる気泡法、平板を吊り下げる
吊板法等を用いることができる。接触角としては、例え
ば液滴法の場合３０°以上が好ましく、６０°以上がよ
り好ましい。例えば、ＰＭＭＡの場合では６４°であ
る。
ネルギーが低く、水や溶液に濡れにくい物質（例えばテ
フロン）で平板を作成することもできる。疎水性の程度
は、平板上に水滴をたらして接触角を読み取る液滴法、
水中で空気の泡を付着させる気泡法、平板を吊り下げる
吊板法等を用いることができる。接触角としては、例え
ば液滴法の場合３０°以上が好ましく、６０°以上がよ
り好ましい。例えば、ＰＭＭＡの場合では６４°であ
る。
【００１２】平板表面は滅菌されていることが、培養液
中へのコンタミネーションを防止する観点から好まし
い。滅菌法は、平板の材質にもよるが、オートクレーブ
中で熱処理する方法、エチレンオキサイド（ＥＯ）ガス
で滅菌する方法、紫外線等の放射線を照射する方法を例
示することができる。
中へのコンタミネーションを防止する観点から好まし
い。滅菌法は、平板の材質にもよるが、オートクレーブ
中で熱処理する方法、エチレンオキサイド（ＥＯ）ガス
で滅菌する方法、紫外線等の放射線を照射する方法を例
示することができる。
【００１３】本発明の平板１は、図２に示すように容器
７２中の培養液等の溶液７１の表面に形成されるメニス
カス７０の少なくとも一部を図３に示すように平坦化す
るものである。尚、メニスカス７０は溶液７１の表面エ
ネルギーと容器７２の内壁７３の表面エネルギーによっ
て図２に示すように凹状になる以外に、凸状にもなるこ
ともある。本発明の平板は凹状凸状どちらのメニスカス
に対しても有効である。平板によって平坦化される溶液
の液面の面積（即ち平板の平面積にほぼ相当する）は、
広ければ広いほど、顕微鏡観察の視野が広がることから
好ましい。容器（培養プレートのウェル）の内径が小さ
いものであれば、平板の平面積は容器内の水平断面積に
ほぼ等しく溶液の表面をほとんど覆うものであることが
好ましい。一方、比較的内径の大きい容器にあっては、
溶液表面の全面を覆う必要がない場合もある。一般に
は、平板の表面積は、容器内の水平断面積の５０％以上
であることが広い視野を確保するという観点から適当で
ある。
７２中の培養液等の溶液７１の表面に形成されるメニス
カス７０の少なくとも一部を図３に示すように平坦化す
るものである。尚、メニスカス７０は溶液７１の表面エ
ネルギーと容器７２の内壁７３の表面エネルギーによっ
て図２に示すように凹状になる以外に、凸状にもなるこ
ともある。本発明の平板は凹状凸状どちらのメニスカス
に対しても有効である。平板によって平坦化される溶液
の液面の面積（即ち平板の平面積にほぼ相当する）は、
広ければ広いほど、顕微鏡観察の視野が広がることから
好ましい。容器（培養プレートのウェル）の内径が小さ
いものであれば、平板の平面積は容器内の水平断面積に
ほぼ等しく溶液の表面をほとんど覆うものであることが
好ましい。一方、比較的内径の大きい容器にあっては、
溶液表面の全面を覆う必要がない場合もある。一般に
は、平板の表面積は、容器内の水平断面積の５０％以上
であることが広い視野を確保するという観点から適当で
ある。
【００１４】平板の平面形状及び寸法（厚み）について
は、特に限定はない。平面形状としては、円形（真円
形、楕円形）が一般的であるが、多角形であることもで
きる。又、厚みについては、平板の機械的強度、加工
性、さらには、溶液に浮くものであること等を考慮する
と、例えば０．３〜２ｍｍ、好ましくは０．５〜１ｍｍ
とすることが適当である。
は、特に限定はない。平面形状としては、円形（真円
形、楕円形）が一般的であるが、多角形であることもで
きる。又、厚みについては、平板の機械的強度、加工
性、さらには、溶液に浮くものであること等を考慮する
と、例えば０．３〜２ｍｍ、好ましくは０．５〜１ｍｍ
とすることが適当である。
【００１５】本発明の平板を図５〜図１０に基づいて説
明する。本発明のメニスカス制御用平板１の斜視図を図
５に示す。メニスカス制御用平板１は、ポリメチルメタ
クリレート（以下、ＰＰＭという。比重：１．１８８
〔２５℃〕）からなる円板であり、その上面１１と下面
１２とは平行平面である。この平板１の厚さは、０．５
ｍｍで上面１１及び下面１２の直径は、１０．５ｍｍで
あって、内径１１ｍｍの培養容器に対して用いて好適で
ある。
明する。本発明のメニスカス制御用平板１の斜視図を図
５に示す。メニスカス制御用平板１は、ポリメチルメタ
クリレート（以下、ＰＰＭという。比重：１．１８８
〔２５℃〕）からなる円板であり、その上面１１と下面
１２とは平行平面である。この平板１の厚さは、０．５
ｍｍで上面１１及び下面１２の直径は、１０．５ｍｍで
あって、内径１１ｍｍの培養容器に対して用いて好適で
ある。
【００１６】図６に示すメニスカス制御用平板２は、図
５の円板の側周縁２１に平板を把持具により把持するた
めの把持部を形成したものであり、本例２の把持部２
２、２２' は、平板２の側周縁２１より平板中心２３方
向に向かう平面視半円状の直径１．５ｍｍ切込みとして
形成されている。この半円状の切り込みは、平板中心２
３に対して対称的に形成され、２２及び２２' の１対の
切り込みを把持具を用いて把持した場合、それらが連働
して使用者の意のままに取り扱えるようになる。この半
円状の切り込みの直径は、把持が可能であれば、検鏡視
野を広くするためにできる限り小さい方が好ましい。
５の円板の側周縁２１に平板を把持具により把持するた
めの把持部を形成したものであり、本例２の把持部２
２、２２' は、平板２の側周縁２１より平板中心２３方
向に向かう平面視半円状の直径１．５ｍｍ切込みとして
形成されている。この半円状の切り込みは、平板中心２
３に対して対称的に形成され、２２及び２２' の１対の
切り込みを把持具を用いて把持した場合、それらが連働
して使用者の意のままに取り扱えるようになる。この半
円状の切り込みの直径は、把持が可能であれば、検鏡視
野を広くするためにできる限り小さい方が好ましい。
【００１７】なお、本例の平面視半円状の切り込みは、
半円のみならず、平面視円弧の長い方の円弧（長円弧）
状であっても、短い方の円弧（短円弧）状であってもよ
い。
半円のみならず、平面視円弧の長い方の円弧（長円弧）
状であっても、短い方の円弧（短円弧）状であってもよ
い。
【００１８】図７に示すメニスカス制御用平板３は、平
板３の側周縁３１に平面視四角形の３辺によって切り取
られた形状に把持部３２、３２' を形成したものであ
り、図６の切り込みの形状を変えたものである。切り込
み部分の四角形の１辺の長さは１ｍｍとして形成されて
いる。
板３の側周縁３１に平面視四角形の３辺によって切り取
られた形状に把持部３２、３２' を形成したものであ
り、図６の切り込みの形状を変えたものである。切り込
み部分の四角形の１辺の長さは１ｍｍとして形成されて
いる。
【００１９】図８に示すメニスカス制御用平板４は、平
板４の側周縁４１に、平面視三角形の２辺によって切り
取られた形状に把持部４２、４２' を形成したものであ
り、図７の切り込みの形状を変えたものである。切り込
み部分の三角形の１辺の長さは１ｍｍとして形成されて
いる。
板４の側周縁４１に、平面視三角形の２辺によって切り
取られた形状に把持部４２、４２' を形成したものであ
り、図７の切り込みの形状を変えたものである。切り込
み部分の三角形の１辺の長さは１ｍｍとして形成されて
いる。
【００２０】図９に示すメニスカス制御用平板５は、円
板側周縁５１における円板の中心５３に関して対称な位
置を、平行な２平面により、円板の上面及び下面と垂直
な方向へ平面視弦状に切り取られた形状の把持部５２、
５２' を形成したものである。前記の側周縁を切り取る
平面は、平面視円板側周縁から１ｍｍ円板中心方向の位
置とされている。
板側周縁５１における円板の中心５３に関して対称な位
置を、平行な２平面により、円板の上面及び下面と垂直
な方向へ平面視弦状に切り取られた形状の把持部５２、
５２' を形成したものである。前記の側周縁を切り取る
平面は、平面視円板側周縁から１ｍｍ円板中心方向の位
置とされている。
【００２１】図１０にはメニスカス制御用平板６の側面
図を示す。平板６は、一方の面に、平板６の移動の際に
把持するための突起６２を有する。突起６２は、平板６
の平面の中心部よりは周辺に近い所に設けることが、視
野を妨げることがないという観点から好ましい。
図を示す。平板６は、一方の面に、平板６の移動の際に
把持するための突起６２を有する。突起６２は、平板６
の平面の中心部よりは周辺に近い所に設けることが、視
野を妨げることがないという観点から好ましい。
【００２２】本発明の平板は、予め製造した丸棒を所定
の厚みに切断する方法、原料（溶液）を型に入れて成型
する方法あるいはさらにこれらの方法で得られた平板の
表面を研磨する方法等により得ることができる。
の厚みに切断する方法、原料（溶液）を型に入れて成型
する方法あるいはさらにこれらの方法で得られた平板の
表面を研磨する方法等により得ることができる。
【００２３】平板は、吸引スポイトを用いるか、又はピ
ンセットを用いて溶液面に浮かせる。尚、ピンセットを
用いて操作する場合には切り欠きを入れた平板が（例え
ば図６〜９参照）好ましい。
ンセットを用いて溶液面に浮かせる。尚、ピンセットを
用いて操作する場合には切り欠きを入れた平板が（例え
ば図６〜９参照）好ましい。
【００２４】また、培養用のウェルで用いる観点から、
使用前に予めオートクレーブやエチレンオキサイドガス
による処理あるいは放射線照射による処理で滅菌をして
おくことが好ましい。その場合、これらいずれかの処理
に耐える材質を用いて平板を作成する。
使用前に予めオートクレーブやエチレンオキサイドガス
による処理あるいは放射線照射による処理で滅菌をして
おくことが好ましい。その場合、これらいずれかの処理
に耐える材質を用いて平板を作成する。
【００２５】以下本発明のメニスカス制御用平板の作用
について説明する。通常、図２に示すように容器７２に
入れた溶液７１の表面は、平坦にならずメニスカス７０
を形成する。倒立位相差顕微鏡で溶液中を観察する場
合、図１に示すようにメニスカス７０が存在すると、コ
ンデンサー側の位相差リング開口８１からコンデンサー
レンズ８２を介して溶液７１中を透過した光９０は、対
物レンズ８３を介しても適正な位相差変調を行うことが
できず、位相差変調板８４上に結像せず、変調板８４か
らずれた位置にコンデンサー開口像９１が結像してしま
う。その結果、像がかなり劣化して観察が困難になる。
について説明する。通常、図２に示すように容器７２に
入れた溶液７１の表面は、平坦にならずメニスカス７０
を形成する。倒立位相差顕微鏡で溶液中を観察する場
合、図１に示すようにメニスカス７０が存在すると、コ
ンデンサー側の位相差リング開口８１からコンデンサー
レンズ８２を介して溶液７１中を透過した光９０は、対
物レンズ８３を介しても適正な位相差変調を行うことが
できず、位相差変調板８４上に結像せず、変調板８４か
らずれた位置にコンデンサー開口像９１が結像してしま
う。その結果、像がかなり劣化して観察が困難になる。
【００２６】一方、本発明の平板を用いると、図３に示
すように容器７２中の溶液７１のメニスカス７０は平板
１によって、平板１と容器内壁７３間の限られた部分を
除いて平坦化される。その結果、図４に示すように、コ
ンデンサー開口像９２は、位相差変調板８４上に結像す
る。
すように容器７２中の溶液７１のメニスカス７０は平板
１によって、平板１と容器内壁７３間の限られた部分を
除いて平坦化される。その結果、図４に示すように、コ
ンデンサー開口像９２は、位相差変調板８４上に結像す
る。
【００２７】通常例えば、内径１５ｍｍの円筒状ウェル
中では、本発明の平板を使用しないと円筒断面積の約３
０％しか視野が得られないのに対して、例えば直径１３
ｍｍ（円筒断面積に対する平板平面積は９５％）の平板
を用いた場合は、約８５％以上の視野を得ることができ
る。
中では、本発明の平板を使用しないと円筒断面積の約３
０％しか視野が得られないのに対して、例えば直径１３
ｍｍ（円筒断面積に対する平板平面積は９５％）の平板
を用いた場合は、約８５％以上の視野を得ることができ
る。
【００２８】
【発明の効果】本発明のメニスカス制御用平板によれ
ば、培養プレートのウェル内で培養されている生体組織
や細胞を顕微鏡観察する際にウェル中の培養液表面に形
成されるメニスカスに起因する検鏡視野の狭窄を改善す
ることの出来るとともに、正常な培養状態の生体組織や
細胞を正確に視察することが出来るため、きわめて有用
である。
ば、培養プレートのウェル内で培養されている生体組織
や細胞を顕微鏡観察する際にウェル中の培養液表面に形
成されるメニスカスに起因する検鏡視野の狭窄を改善す
ることの出来るとともに、正常な培養状態の生体組織や
細胞を正確に視察することが出来るため、きわめて有用
である。
【００２９】さらに、従来技術の特開昭６２−６９９７
９号公報の器具の場合、水溶液中に出し入れする際、液
面の上昇下降が生じ、それにともなって水溶液全体が相
当厳しく流動攪拌される。これに対し、本発明のメニス
カス制御用平板は、ほとんど液面の変化はなく、液全体
は静置状態とほとんど変わりない状態に保たれるため、
培養細胞に何ら悪影響を与えないという利点もある。
９号公報の器具の場合、水溶液中に出し入れする際、液
面の上昇下降が生じ、それにともなって水溶液全体が相
当厳しく流動攪拌される。これに対し、本発明のメニス
カス制御用平板は、ほとんど液面の変化はなく、液全体
は静置状態とほとんど変わりない状態に保たれるため、
培養細胞に何ら悪影響を与えないという利点もある。
【００３０】また、本発明のメニスカス制御用平板は安
価であり、特にウェル孔全てを使わずたとえ１孔しか用
いない観察においても１枚で対応することが出来、きわ
めて経済的である。さらに、ディスポーザブル平板とし
て使用することが出来るため、使用者にとってきわめて
有用である。
価であり、特にウェル孔全てを使わずたとえ１孔しか用
いない観察においても１枚で対応することが出来、きわ
めて経済的である。さらに、ディスポーザブル平板とし
て使用することが出来るため、使用者にとってきわめて
有用である。
【００３１】
【実施例】以下本発明を実施例により説明する。 実施例１ ポリメチルメタクリレート製の平板を切削及び研磨し
て、厚さ０．５ｍｍ、平面の直径が１０．５ｍｍの本発
明のメニスカス制御用平板を得、これをＥＯ滅菌した。
て、厚さ０．５ｍｍ、平面の直径が１０．５ｍｍの本発
明のメニスカス制御用平板を得、これをＥＯ滅菌した。
【００３２】これとは別に細胞培養用４８孔マルチウェ
ルを用い白内障手術時に得られた前嚢片付きヒト水晶体
上皮細胞を、１０％牛胎児血清添加ＭＥＭ溶液０．５ｍ
ｌをウェルに加えて３７度Ｃ、５％炭酸ガスと９５％空
気の雰囲気で３週間静置培養した。常法に従って倒立位
相差顕微鏡（オリンパスＩＭＴ−２）で観察を行った。
その結果を図１２の写真に示す。中心部のみ（全視野の
約２５％）が写り、視野全体を観察することができな
い。その培養液にウェルの内径１１ｍｍより僅かに小さ
い前述のＰＭＭＡ製平板を浮かせ同一部分の観察を行っ
た。その結果を図１３の写真に示す。両方の写真におけ
る特徴的細胞に注目すれば図１３の写真は全視野（ほぼ
１００％）で明瞭な映像を撮らえられた。
ルを用い白内障手術時に得られた前嚢片付きヒト水晶体
上皮細胞を、１０％牛胎児血清添加ＭＥＭ溶液０．５ｍ
ｌをウェルに加えて３７度Ｃ、５％炭酸ガスと９５％空
気の雰囲気で３週間静置培養した。常法に従って倒立位
相差顕微鏡（オリンパスＩＭＴ−２）で観察を行った。
その結果を図１２の写真に示す。中心部のみ（全視野の
約２５％）が写り、視野全体を観察することができな
い。その培養液にウェルの内径１１ｍｍより僅かに小さ
い前述のＰＭＭＡ製平板を浮かせ同一部分の観察を行っ
た。その結果を図１３の写真に示す。両方の写真におけ
る特徴的細胞に注目すれば図１３の写真は全視野（ほぼ
１００％）で明瞭な映像を撮らえられた。
【００３３】実施例２ 実施例１と同様の操作を直径１０．５ｍｍの代わりに７
ｍｍの平板を作成し、これを用いたときの結果を図１４
の写真に示す。平板の下では明瞭に細胞が観察されるが
平板外ではほとんど観察することができず、平板を用い
ることにより明瞭な観察ができることがわかる。
ｍｍの平板を作成し、これを用いたときの結果を図１４
の写真に示す。平板の下では明瞭に細胞が観察されるが
平板外ではほとんど観察することができず、平板を用い
ることにより明瞭な観察ができることがわかる。
【００３４】実施例３ 実施例１と同様の１０．５ｍｍの平板を用い、同様の操
作を行って、２０倍対物レンズによる観察を行った。そ
の結果を図１５の写真に示す。きわめて明瞭な映像が得
られ、細胞の詳細な形態観察が可能となった。この写真
から細胞は前嚢片上、前嚢下及びウェル底上に存在しそ
れぞれ特徴的形態を示すことが見いだされた。
作を行って、２０倍対物レンズによる観察を行った。そ
の結果を図１５の写真に示す。きわめて明瞭な映像が得
られ、細胞の詳細な形態観察が可能となった。この写真
から細胞は前嚢片上、前嚢下及びウェル底上に存在しそ
れぞれ特徴的形態を示すことが見いだされた。
【００３５】実施例４ 実施例１と同様の操作により１５．５ｍｍ、厚さ１ｍｍ
の平板を作成し、これを２４孔マルチウェル（内径１
６．５ｍｍ）に浮かせた。これにより実施例１と同様に
明瞭な視野を得ることができた。
の平板を作成し、これを２４孔マルチウェル（内径１
６．５ｍｍ）に浮かせた。これにより実施例１と同様に
明瞭な視野を得ることができた。
【００３６】実施例５ 倒立位相差顕微鏡の代りに正立型顕微鏡を用いた他は実
施例１と同様にして観察を行った。
施例１と同様にして観察を行った。
【００３７】従来、培養容器を下部から照明し、容器上
部から観察できる正立型顕微鏡で観察する場合、培養液
面の湾曲によって観察が不可能であった。しかし、本発
明の平板を用いて、培養容器中の溶液のメニスカスを平
板化することで、正立型顕微鏡による明視野、位相差、
ノマルスキー等についても観察が可能になった。図１１
に示すように、本発明の平板１を溶液７１に浮かべるこ
とで、コンデンサー開口像９２は、位相差変調板８４上
に結像させることができる。
部から観察できる正立型顕微鏡で観察する場合、培養液
面の湾曲によって観察が不可能であった。しかし、本発
明の平板を用いて、培養容器中の溶液のメニスカスを平
板化することで、正立型顕微鏡による明視野、位相差、
ノマルスキー等についても観察が可能になった。図１１
に示すように、本発明の平板１を溶液７１に浮かべるこ
とで、コンデンサー開口像９２は、位相差変調板８４上
に結像させることができる。
【図１】倒立位相差顕微鏡で容器中の溶液を観察する場
合の説明図である。
合の説明図である。
【図２】容器中の溶液のメニスカスを示す断面図であ
る。
る。
【図３】容器中の溶液に本発明の平板１を浮かべて平坦
化したところを示す断面図である。
化したところを示す断面図である。
【図４】倒立位相差顕微鏡で本発明の平板１を浮かべた
溶液を観察する場合の説明図である。
溶液を観察する場合の説明図である。
【図５】本発明の平板１の斜視図である。
【図６】本発明の平板２の平面図である。
【図７】本発明の平板３の平面図である。
【図８】本発明の平板４の平面図である。
【図９】本発明の平板５の平面図である。
【図１０】本発明の平板６の側面図である。
【図１１】正立型顕微鏡で、本発明の平板１を浮かべた
溶液を観察する場合の説明図である。
溶液を観察する場合の説明図である。
【図１２】生物の形態を示す図面に代る写真である。
【図１３】生物の形態を示す図面に代る写真である。
【図１４】生物の形態を示す図面に代る写真である。
【図１５】生物の形態を示す図面に代る写真である。
１、２、３、４、５、６：本発明のメニスカス制御用平
板 ７０：メニスカス
板 ７０：メニスカス
フロントページの続き (72)発明者 河野 芳弘 東京都渋谷区幡ケ谷２丁目43番２号 オ リンパス光学工業株式会社内 (56)参考文献 特開 昭62−69979（ＪＰ，Ａ) 田中克巳著 顕微鏡の使い方 第９版 昭和43年５月15日裳華房発行 第219 頁及び第221頁 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G02B 21/00 - 21/36 G01N 1/28
Claims (3)
- 【請求項１】容器中の細胞培養溶液に含まれる生物体組
織又は細胞を顕微鏡観察する方法であって、前記溶液表
面に、透明で、かつ把持部を有する平板を、前記把持部
を把持しながら置き、浮かせた平板により前記溶液表面
のメニスカスの少なくとも一部を平坦化し、視野を確保
することを特徴とする前記方法。 - 【請求項２】生物体組織又は細胞が容器の底面で培養さ
れたものであり、溶液内の生物体組織又は細胞を攪乱す
ることなしに顕微鏡観察する請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】観察用の光を、前記平板を介して前記溶液
に照射し、前記溶液を透過した光を位相差顕微鏡で観察
する請求項１又は２に記載の方法。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP03232161A JP3133786B2 (ja) | 1991-08-20 | 1991-08-20 | 顕微鏡観察する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03232161A JP3133786B2 (ja) | 1991-08-20 | 1991-08-20 | 顕微鏡観察する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05181068A JPH05181068A (ja) | 1993-07-23 |
| JP3133786B2 true JP3133786B2 (ja) | 2001-02-13 |
Family
ID=16934955
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03232161A Expired - Fee Related JP3133786B2 (ja) | 1991-08-20 | 1991-08-20 | 顕微鏡観察する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3133786B2 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000004871A (ja) | 1998-06-29 | 2000-01-11 | Olympus Optical Co Ltd | 培養容器、及び培養容器内の試料を観察する顕微鏡 |
| US7643146B2 (en) * | 2006-01-20 | 2010-01-05 | Blueshift Biotechnologies, Inc. | Methods and apparatus for reducing noise in scatterometry measurements |
| JP5200888B2 (ja) * | 2008-11-21 | 2013-06-05 | 大日本印刷株式会社 | パターン細胞培養用器具 |
| JP5731421B2 (ja) * | 2012-02-15 | 2015-06-10 | 株式会社島津製作所 | 細胞培養デバイス |
| JP5768174B1 (ja) | 2014-06-24 | 2015-08-26 | 日本写真印刷株式会社 | 培養容器 |
| TW201623604A (zh) * | 2014-09-25 | 2016-07-01 | 住友電木股份有限公司 | 培養容器 |
| DE102015111426B3 (de) * | 2015-07-14 | 2016-10-20 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren zur Phasenkontrastmikroskopie sowie Phasenkontrastmikroskop |
| WO2017030196A1 (ja) | 2015-08-20 | 2017-02-23 | 東京エレクトロン株式会社 | 培養容器並びに該培養容器を使用した細胞培養方法及び細胞観察方法 |
| JP2018009968A (ja) | 2016-06-30 | 2018-01-18 | 株式会社Ｓｃｒｅｅｎホールディングス | ウェルプレート及びその使用方法 |
-
1991
- 1991-08-20 JP JP03232161A patent/JP3133786B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 田中克巳著 顕微鏡の使い方 第９版 昭和４３年５月１５日裳華房発行 第２１９頁及び第２２１頁 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05181068A (ja) | 1993-07-23 |
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