WO2021154019A1 - (3s)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 품질 평가 방법 - Google Patents

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황정운
이규환
김은영
최수경
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주식회사 현대약품
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Definitions

  • the present invention is (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid of related substances and (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4 using the same - It relates to the quality evaluation method of Innoicsan.
  • a compound of formula 1 below namely (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex- 4-inoic acid is a drug developed as a therapeutic agent for metabolic diseases (Patent Document 1, Korean Patent No. 10-1569522; Patent Document 2, Korean Patent No. 10-1728900).
  • the active pharmaceutical ingredient (“API”) be prepared in high purity, in the course of the preparation of an active pharmaceutical ingredient, it is very rare for a mixture of reaction products to be a pure single compound, and mixtures of reaction products include It contains impurities such as by-products and reagents used in the reaction.
  • the active pharmaceutical ingredient may undergo transformation during formulation or storage of the preparation, some of the active pharmaceutical ingredient may be degraded or modified to become impurities. Therefore, it is necessary to measure the content of the active pharmaceutical ingredient present in the drug product during the manufacture, storage, and use of the drug substance or drug product, and it is usually high-performance liquid chromatography (HPLC) or gas chromatography (GC). The purity of the active pharmaceutical ingredient is analyzed by chromatography). Impurities contained in pharmaceuticals are also called related impurity or related substances, and it is also essential for quality control of pharmaceuticals to analyze the presence or absence of related substances with a content higher than the standard (eg, 0.1% or higher).
  • Impurities are related to peak positions in chromatograms (spots on thin-layer chromatography (TLC) plates) (Strobel p. 953) (Strobel, HA; Heineman, WR, Chemical Instrumentation: A Systematic approach, 3Rd) dd. (Wiley & Sons: New York 1989)).
  • an impurity can be identified by its location in the chromatogram, which is usually measured within the time of minutes between injection of the sample on the column and elution of a particular component through the detector, known as the "retention time” .
  • the time period changes daily depending on the condition of the equipment and many other factors.
  • RRT relative retention time
  • the RRT of an impurity is The retention time of impurities divided by the retention time of any reference standard.
  • the active pharmaceutical ingredient itself can be used as a reference standard, but as a practical substance it tends to saturate the column by being present in excessive proportions in the mixture. This results in non-reproducible retention times.
  • select alternative compounds that are added or present in the mixture in sufficiently significant amounts to be detectable, or low enough to not saturate the column, and use these compounds as reference standards. It is sometimes desirable to use
  • a reference standard compound can also be used to quantify the amount of another compound in a mixture if a "response factor" that compensates for the difference in the sensitivity of the reactor to the two compounds has already been determined (Strobel p.894).
  • a reference standard compound can be added directly to the mixture, in which case it is referred to as an "internal standard” (Strobel p. 925, Snyder p.552).
  • a reference standard compound may also be used as an internal standard when the unknown mixture contains some reference standard compound using a technique called "standard addition", wherein two or more samples are mixed with different amounts of the internal standard (Strobel pp.391-393, Snyder pp.571,572).
  • standard addition wherein two or more samples are mixed with different amounts of the internal standard (Strobel pp.391-393, Snyder pp.571,572).
  • the proportion of the detector response due to the reference standard compound originally present in the mixture can be determined via extrapolation of a plot of the detector response versus the amount of reference standard compound added to each sample up to zero (e.g. Strobel , Fig. 11.4 p.392)
  • Patent Document 1 Korean Patent Registration No. 10-1569522
  • Patent Document 2 Korean Patent Registration No. 10-1728900
  • Non-Patent Document 1 Strobel, H.A.; Heineman, W. R., Chemical Instrumentation: A Systematic approach, 3Rd dd. (Wiley & Sons: New York 1989)
  • Non-Patent Document 2 Snyder, L.R.; Kirkland, J. J. Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd Edition (John Wiley & Sons: New York 1979)
  • the present invention is (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid of related substances and (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4 using the same - We would like to provide a quality evaluation method of Innoicsan.
  • the present invention is (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid It provides a compound of Formula 2 or a salt thereof, which is an analog of
  • the term “reference standard” refers to a compound that can be used for both quantitative and qualitative analysis of an active pharmaceutical ingredient.
  • the retention times of compounds in HPLC allow the establishment of relative retention times, allowing for qualitative analysis.
  • the concentration of compound in solution prior to injection into the HPLC column allows comparison of the area under the peak in the HPLC chromatogram, allowing for quantitative analysis.
  • the detector reaction is eluent in HPLC, for example by UV (Ultra Violet) or refractive index detection. ), or from the eluate of the GC by, for example, flame ionization detection or thermal conductivity detection, or from the eluate of a spot on a fluorescent TLC plate by other detector reactions, for example UV absorption, the peak height or integrated It is understood that it may be a peak area.
  • the position of the reference standard is (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4- It can be used to calculate the relative residence time for innoic acid and other impurities.
  • (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid when exposed to stress conditions using acid, temperature, humidity, etc., (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-)
  • An analog of yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid is obtained, which can be used as a reference standard.
  • the compound of Formula 2 may be prepared through chemical synthesis for use as a reference standard. Although not limited thereto, the compound of Formula 2 may be obtained, for example, through the process of Scheme 1 below.
  • a specific synthetic method includes the following steps.
  • the compound of Formula 2 may be used in the form of a salt.
  • (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid is a pharmaceutical It may be included in pharmaceuticals in the form of an acceptable salt.
  • metal salts include sodium, potassium or calcium salts
  • amino acid salts include, for example, natural amino acid salts such as glycine, alanine, phenylalanine, valine, lysine, and glutamic acid salt.
  • the present invention provides (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-) comprising a compound of Formula 2 or a salt thereof It provides a composition for evaluation of pharmaceuticals containing en-8-yl) benzyloxy) phenyl) hex-4-inoic acid.
  • the compound of Formula 2 or a salt thereof is (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyl) It can be used as a reference standard for evaluating the quality of drug substance or finished drug containing oxy)phenyl)hex-4-inoic acid.
  • (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4- in pharmaceuticals By analyzing the content of inoic acid or its related substances, it can be used as a reference standard for evaluating the purity or storage stability of drugs in the pharmaceutical manufacturing process.
  • the present invention also provides (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7) in pharmaceuticals using a compound of Formula 2 or a salt thereof as a reference standard.
  • -en-8-yl) benzyloxy) phenyl) (3S) -3- (4- (3- (1,4-dioxaspiro [4, Provided is a method for evaluating the quality of a drug containing 5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid.
  • a method for analyzing the content of 8-yl) benzyloxy) phenyl) hex-4-inoic acid is not particularly limited, and a known method for analyzing a substance in the composition may be used.
  • HPLC may be used for the analysis method.
  • the method may further comprise qualitatively analyzing the material by one or more of Liquid Chromatography/Mass Spectrometry (LC/MS), Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry (LC/MS/MS), Nuclear Magnetic Resonance (NMR), or one or more of these.
  • LC/MS Liquid Chromatography/Mass Spectrometry
  • LC/MS/MS Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry
  • NMR Nuclear Magnetic Resonance
  • the peak is drawn with the X-axis as time and the Y-axis as the magnitude of the signal by the electrical signal from the detector.
  • a relative result with respect to concentration can be obtained from the peak height and area of the separated material.
  • the time on the X-axis (RT: retention time) becomes a qualitative factor in comparison with the known standard standard, and the peak area (peak area, peak height) with the Y-axis as the height and the X-axis as the base of the peak is quantitative. become a factor Calculate the purity (Area%) as the area value of each peak in the total sum of the detected peak areas.
  • the subject of content evaluation is not necessarily limited to the active active ingredient.
  • the content of other related substances included in addition to the active active ingredient may also be analyzed using the compound of Formula 2 or a salt thereof as a reference standard.
  • the present invention also provides (3S)-3-(4-(3-(1,4-) which includes evaluating the content of related substances in pharmaceuticals using the compound of Formula 2 or a salt thereof as a reference standard.
  • a method for evaluating the quality of a drug containing dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid is provided.
  • the quality standards are suitable if the amount of related substances is less than 0.5% when stored for 36 months under long-term storage conditions of the drug product (5°C ⁇ 3°C).
  • the amount of related substances is less than 0.5% when stored for 36 months under long-term storage conditions (25°C ⁇ 2°C ⁇ 5%RH) of the drug, it is judged to meet the quality standards.
  • the amount of related substances is less than 0.5% when stored for 24 months under accelerated storage conditions (40° C. ⁇ 2° C. ⁇ 5% RH) of the drug, it is judged to meet the quality standards.
  • the present invention provides
  • the method for example, the method
  • (3S)-3-(4-(3-(1,4-dioxaspiro[4,5]des-) using the compound of Formula 2 or a salt thereof as a reference standard The quality and stability of a pharmaceutical composition comprising 7-en-8-yl)benzyloxy)phenyl)hex-4-inoic acid can be evaluated.
  • Figure 2 shows the DSC-TGA data of the compound of formula (2).
  • Figure 3 shows the XRD data of the compound of formula (2).
  • FIG. 4 shows the comparison of HPLC analysis results of control and harsh samples.
  • blue represents the control and green represents the harsh sample.
  • the substances containing the related substances analyzed by HPLC were qualitatively analyzed by MS scan and product ion scan using Q-TOF-LC/MS system.
  • the LC-MS/MS system was qualitatively analyzed using an Agilent 1290 Infinity HPLC system and an Agilent 6550 Q-TOF mass spectrometer. The analysis conditions are as follows.
  • Sheath gas temperature 400°C
  • the analyte separated from the detection step was set to flow into the mass spectrometer, and the characteristic ion [M+Na] of the mass spectrum was selected for the detection ion of the related substance for qualitative analysis.
  • a compound of Formula 2 was synthesized as follows according to Scheme 1 below.
  • MCPBA meta-chloroperoxybenzoic acid
  • ethyl acetate 450 ml
  • DS-PMA 3-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-yl)phenyl)methanol
  • the mesylation (Mesylation) material was calculated as a yield of 100%, and S N 2 reaction was carried out at 5.51 g.
  • the aqueous layer was washed twice with ethyl acetate. After cooling the internal temperature to 0-5°C, the organic layer was extracted by acidification with a 2N aqueous hydrochloric acid solution. The organic layer was washed twice with 5% aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous magnesium sulfate, and then concentrated under reduced pressure to obtain a compound.
  • the synthesized material was confirmed through HPLC and mass spectrometry, and it was confirmed that it had the structure of Chemical Formula 2.
  • the NMR and IR spectra of this material were analyzed. 1H NMR, 13C NMR and IR (FIG. 1) analysis results are shown below.
  • XRD and DSC/TGA were analyzed, and the results are shown in FIGS. 2 and 3, respectively.
  • XRD, DSC/TGA analysis conditions are as follows. The synthesized material was found to be amorphous.
  • Example 1 The harsh sample was left at room temperature, and after 24 hours, related substances were analyzed using HPLC (Agilent Technologies 1200 Series). Analysis was performed under the same conditions as in Example 1. As a result, it was confirmed that related substances were generated in the harsh sample (RRT 0.93, Area 3.83%). Using the sample of Example 1 as a control, the HPLC data of the two samples were compared and shown in FIG. 4 (blue: control, green: harsh sample). It was confirmed that the production of the related substance of Chemical Formula 2 increased in the harsh sample as compared to the control.

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Abstract

본 발명은 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 유연물질 및 이를 이용한 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 품질 평가 방법을 제공한다. 본 발명에 따르면 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물(reference standard)로서 이용하여 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약 조성물의 품질 및 안정성 등을 평가할 수 있다.

Description

(3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 품질 평가 방법
본 발명은 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 유연물질 및 이를 이용한 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 품질 평가 방법에 관한 것이다.
하기 화학식 1의 화합물, 즉 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산은 대사성 질환 치료제로서 개발된 약물이다(특허문헌 1, 한국 등록특허 제10-1569522호; 특허문헌 2, 한국 등록특허 제10-1728900호).
[화학식 1]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000001
활성 약학 성분(Active Pharmaceutical Ingredient, "API")은 높은 순도로 제조되는 것이 바람직하겠지만, 활성 약학 성분의 제조 과정에서 반응 생성물의 혼합물이 순수한 단일 화합물인 경우는 매우 드물며, 반응 생성물의 혼합물에는 반응의 부산물 및 반응에서 사용되는 시약 등의 불순물이 포함되어 있다. 또한, 활성 약학 성분은 제제화 과정 또는 제제의 보관 과정에서도 변형을 겪을 수 있기 때문에 활성 약학 성분 중 일부는 분해되거나 변형되어 불순물이 되기도 한다. 따라서, 원료 의약품 또는 완제 의약품의 제조, 보관, 사용시 의약품 내에 존재하는 활성 약학 성분의 함량을 측정할 필요가 있으며, 보통 HPLC(High-Performance Liquid Chromatography, 고성능 액체 크로마토그래피) 또는 GC(Gas Chromatography, 기체 크로마토그래피) 분석에 의해 활성 약학 성분의 순도를 분석하고 있다. 의약품 내에 포함된 불순물은 유연물질(related impurity 또는 related substance)이라고도 부르며, 기준치 이상의 함량(예컨대, 0.1% 이상)을 갖는 유연물질의 존재 여부를 분석하는 것 또한 의약품의 품질관리를 위해 필수적이다.
불순물은 크로마토그램(TLC(Thin-Layer Chromatography, 박층크로마토그래피) 플레이트 상의 스폿) 중의 피크 위치와 관련이 있다 (Strobel p.953) (Strobel, H.A.; Heineman, W.R., Chemical Instrumentation: A Systematic approach, 3Rd dd. (Wiley & Sons: New York 1989)).
따라서, 불순물은 크로마토그램 중에 이의 위치에 의해 확인될 수 있으며, 이는 "체류 시간(retention time)"이라 알려진 컬럼 상의 샘플의 주입과 검출기를 통해 특정 성분의 용출 사이의 수분의 시간 내에 통상적으로 측정된다. 상기 시간 주기는 장비의 상태 및 많은 다른 요인에 의해 매일 변화한다. 불순물의 정확한 확인에 대해 이러한 변화들이 가지는 효과를 경감시키기 위해, 당업자들은 "상대 체류 시간 (relative retention time, "RRT")”을 사용하여 불순물을 확인한다 (Strobel p.922). 불순물의 RRT는 임의의 기준 표준물의 체류 시간에 의해 나누어진 불순물의 체류 시간이다. 이론상, 활성 약학 성분 그 자체는 기준 표준물로서 이용될 수는 있지만, 실질적인 물질로서 혼합물 내에 과도한 비율로 존재하여 컬럼을 포화시키는 경향이 있어, 재현불가능한 체류 시간을 초래한다. 따라서, 검출가능하도록 충분히 현저한 양으로 혼합물 내에 첨가 또는 존재하거나, 컬럼을 포화시키지 않을 정도로 충분히 낮은 함량의 대안적인 화합물을 선택하고 이러한 화합물을 기준 표준물로서 사용하는 것이 때로는 바람직하다.
약물 제조의 연구자들 및 개발자들은 비공지된 혼합물에서 화합물의 양을 정량하기 위해 상대적으로 순수한 상태의 화합물이 "기준 표준물(reference standard)"로서 사용될 수 있다고 이해하고 있다. 화합물이 "외부 표준"으로 사용되는 경우, 공지된 농도의 화합물의 용액은 비공지된 혼합물과 같이 동일한 기술에 의해 분석된다 (Strobel p.924, Snyder p.549) (Snyder, L.R.; Kirkland, J.J. Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2판 (John Wiley &Sons: New York 1979)). 혼합물 내에 화합물의 양은 검출기 반응의 등급을 비교하여 측정될 수 있다.
기준 표준물 화합물은 또한 두 화합물에 대한 반응기의 민감도 차이를 보상하는 "반응 요인"이 이미 결정된 경우 혼합물 내에 다른 화합물의 양을 정량하는데 사용될 수 있다 (Strobel p.894). 상기 목적을 위해, 기준 표준물 화합물이 혼합물에 직접 첨가될 수 있는데, 이 경우 이를 "내부 표준" (Strobel p. 925, Snyder p.552)이라 칭한다.
기준 표준물 화합물은 비공지된 혼합물이 "표준 첨가"로 불리는 기법을 이용하여 일부 기준 표준물 화합물을 포함하는 경우에 내부 표준으로서 사용될 수도 있는데, 여기에서 2 이상의 샘플은 공지된 다른 양의 내부 표준을 첨가하여 제조된다 (Strobel pp.391-393, Snyder pp.571,572). 혼합물 내에 본래 존재하는 기준 표준물 화합물에 기인한 검출기 반응의 비율은 각 샘플들에 0까지 첨가되는 기준 표준물 화합물의 양에 대한 검출기 반응의 플롯의 외삽을 통해 측정될 수 있다 (예를 들어 Strobel, 도 11.4 p.392)
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) 한국 등록특허 제10-1569522호
(특허문헌 2) 한국 등록특허 제10-1728900호
[비특허문헌]
(비특허문헌 1) Strobel, H.A.; Heineman, W.R., Chemical Instrumentation: A Systematic approach, 3Rd dd. (Wiley & Sons: New York 1989)
(비특허문헌 2) Snyder, L.R.; Kirkland, J.J. Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2판 (John Wiley &Sons: New York 1979)
[이 발명을 지원한 국가연구개발사업]
[과제고유번호] HI17C2529
[부처명] 보건복지부
[연구관리 전문기관] 한국보건산업진흥원
[연구사업명] 첨단의료기술개발
[연구과제명] (임상1상)획기적 혈당강하 효과(HbA1c〉1%)를 가지는 저혈당 부작용 없는 potent(EC50〈1nM)한 당뇨병 치료제 HD-6277개발
[기여율] 1/1
[주관기관] 현대약품(주)
[연구기간]20171212 ~ 20200630
본 발명은 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 유연물질 및 이를 이용한 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 품질 평가 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 유연물질인 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000002
본 명세서에서 사용된 용어 "기준 표준물(reference standard)"은 활성 약학 성분의 정량 및 정성 분석 모두에 사용될 수 있는 화합물을 지칭한다. 예를 들어, HPLC 에서 화합물의 체류 시간은 상대적인 체류 시간의 설정을 허용하여, 정성 분석을 가능하게 한다. HPLC 컬럼에 주입되기 전에 용액 중 화합물의 농도는 HPLC 크로마토그램의 피크 하의 면적 비교를 허용하여, 정량 분석을 가능하게 한다.
기준 표준물에 관해 당업계의 일부의 지식은 이 점과 관련하여 일반적으로 기술하고 있지만, 당업자라면 검출기 반응이, 예를 들어, UV(Ultra Violet, 자외선) 또는 굴절률 검출에 의해 HPLC의 용리액(eluent)으로부터, 또는 예를 들어 불꽃 이온화 검출 또는 열 전도성 검출에 의해 GC의 용리액으로부터, 또는 기타 검출기 반응, 예를 들어 UV 흡광에 의해 형광 TLC 플레이트 상의 스폿의 용리액으로부터 얻어진 크로마토그램의 피크 높이 또는 통합된 피크 면적일 수 있다는 것을 이해할 수 있다. 기준 표준물의 위치는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산 및 기타 불순물에 대한 상대체류 시간을 계산하는데 사용될 수 있다.
(3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 광이나, 산, 온도, 습도 등을 이용한 스트레스 조건에 노출시키는 경우, (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 유연물질이 수득되며, 이는 기준 표준물로서 사용될 수 있다.
본 발명자들은 하기 실시예 1을 통해 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산 합성과정에서 스트레스를 가하여 이의 유연물질을 수득하였고, HPLC 및 질량 분석 결과 그 유연물질이 하기 화학식 2의 화합물임을 확인하였다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000003
상기 화학식 2의 화합물은 기준 표준물로서 사용하기 위해 화학적 합성을 통해 제조될 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 화학식 2의 화합물은 예를 들어 하기 반응식 1의 과정을 통해 수득될 수 있다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000004
구체적인 합성 방법은 다음 단계를 포함한다.
<단계 1> (3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]디옥솔론]-6-일)페닐)메탄올의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000005
(3-(1,4-다이옥사스파이로[4.5]데스-7-엔-8-일)페닐)메탄올을 에폭시화하여 (3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)페닐)메탄올을 합성한다.
<단계 2> 3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]dioxolan]-6-yl)벤질 메탄설포네이트의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000006
(3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)페닐)메탄올을 메실화시켜 3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질 메탄설포네이트를 합성한다.
<단계 3> (3S)-에틸 3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노에이트의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000007
3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질 메탄설포네이트를 (S)-에틸 3-(4-하이드록시페닐)헥스-4-이노에이트와 반응시켜 (3S)-에틸 3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노에이트를 얻는다.
<단계 4> (3S)-3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000008
(3S)-에틸 3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노에이트를 가수분해하여 (3S)-3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 얻는다.
화학식 2의 화합물은 염의 형태로 사용할 수 있다. (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 의약품 내에 포함될 수 있다. 따라서, (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 유연물질인 화학식 2의 화합물 또한 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 약학적으로 허용하는 염(특허문헌 1, 한국 등록특허 제10-1569522호 참조)에 상응하는 염의 형태로 사용가능하다. 예를 들어, 화학식 2의 화합물은 기준 표준물로 사용될 때 약학적으로 허용가능한 금속염 또는 아미노산 염의 형태로 사용 가능하다. 예를 들어, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염, 아미노산 염으로는 예를 들면, 글라이신, 알라닌, 페닐알라닌, 발린, 라이신, 글루타믹산염 등의 천연 아미노산 염을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 포함하는, (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약품의 평가용 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000009
앞서 설명한 바와 같이, 화학식 2의 화합물 또는 이의 염은 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 원료 의약품 또는 완제 의약품의 품질을 평가하기 위한 기준 표준물로서 사용될 수 있다. 다시 말해, 의약품 내 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산 또는 이의 유연물질의 함량을 분석하여 의약품 제조 과정에서의 의약품의 순도나 저장 안정성 등을 평가하기 위한 기준 표준물로 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물로 이용하여 의약품 내 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 함량을 평가하는 것을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약품의 품질 평가 방법을 제공한다.
화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물로 하여 의약품 또는 원료 의약품 내의 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 함량을 분석하는 방법은 특별히 제한되지 않으며, 조성물 내 물질 분석을 위한 공지의 방법을 이용할 수 있다.
예를 들어, 상기 분석 방법에는 HPLC가 사용될 수 있다. 또한, 물질을 LC/MS(Liquid Chromatography/Mass Spectrometry), LC/MS/MS(Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry), NMR(Nuclear Magnetic Resonance) 또는 이들 중 하나 이상으로 정성 분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
예를 들어, HPLC를 이용하여 샘플을 분석하는 경우, 검출기에서 나오는 전기적 신호에 의해 X축을 시간으로, Y축을 신호의 크기로 하여 피크로 그려낸다. 분리된 물질의 피크 높이 및 면적 등으로 농도에 대한 상대적 결과를 얻을 수 있다. X축의 시간 (RT: retention time)은 기존에 알고 있는 기준 표준물과 비교로 정성적 요인이 되며,　Y축을 높이로 피크의 X축을 밑변으로 한 피크의 면적 (peak area, peak height)이 정량성의 요인이 된다. 검출된 피크 면적의 전체 합 분의 각 피크의 면적 값으로 순도 (Area%)를 계산한다.
상기 의약품의 품질 평가 방법에 있어서, 함량 평가의 대상이 반드시 활성 유효 성분으로 국한될 필요는 없다. 예를 들어, 활성 유효 성분 외에 포함되어 있는 다른 유연물질 또한 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물로 하여 이들의 함량을 분석할 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물로 이용하여 의약품 내 유연물질의 함량을 평가하는 것을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약품의 품질 평가 방법을 제공한다.
한 구체예에서, 의약품의 장기 보관조건(5℃±3℃하에서 36개월 보관 시 유연물질이 0.5% 미만이면 품질 기준에 적합한 것으로 판정한다.
다른 구체예에서, 의약품의 장기 보관조건(25℃±2℃±5%RH) 하에서 36개월 보관 시 유연물질이 0.5% 미만이면 품질 기준에 적합한 것으로 판정한다.
또다른 구체예에서, 의약품의 가속 보관조건(40℃±2℃±5%RH) 하에서 24개월 보관시 유연물질이 0.5% 미만이면 적으면 품질 기준에 적합한 것으로 판정한다.
한 구체예에서, 본 발명은
a) 샘플 상에서 크로마토그래피를 수행하여 데이터를 수득하는 단계; 및
b) 상기 데이터를 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염의 크로마토그래피 데이터와 비교하는 단계를 포함하는
(3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 샘플을 분석하는 방법을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000010
예를 들어, 상기 방법은
(a) 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 용액을 고성능 액체 크로마토그래피로 처리하여 크로마토그램을 수득하는 단계; 및
(b) 크로마토그램에서 수득된 피크를 화학식 2의 화합물 또는 이의 염으로부터 생성된 피크와 비교하는 단계를 포함할 수 있다.
다르게는, 상기 방법은
(a) 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 용액을 박층 크로마토그래피로 처리하여 크로마토그램을 수득하는 단계; 및
(b) 크로마토그램에서 수득된 스폿을 화학식 2의 화합물 또는 이의 염에서 생성된 스폿과 비교하는 단계를 포함할 수 있다.
또한 본 발명은
(3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산에 대한 크로마토그래피 컬럼의 체류 시간을 측정하는 방법으로서, 기준 표준물로서 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 이용하여 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는 것인 방법을 제공한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000011
본 발명에 따르면 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물(reference standard)로서 이용하여 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약 조성물의 품질 및 안정성 등을 평가할 수 있다.
도 1은 화학식 2의 화합물의 IR 데이터를 도시한 것이다.
도 2는 화학식 2의 화합물의 DSC-TGA 데이터를 도시한 것이다.
도 3은 화학식 2의 화합물의 XRD 데이터를 도시한 것이다.
도 4는 대조군과 가혹 샘플의 HPLC 분석 결과를 비교하여 도시한 것이다. 도면에서 파란색은 대조군을, 초록색은 가혹 샘플을 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 이는 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 범위가 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 유연물질의 분리
냉장 조건(5℃±3℃)에서 약 2년 정도 보관된 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산 함유 물질 약 35mg을 정확히 달아 50ml 용량의 플라스크에 넣은 뒤, 희석액(diluent)을 2/3 가량 넣고 잘 섞어주었다. 그 후, HPLC(Agilent Technologies 1200 Series)를 이용하여 유연물질을 분석하였다.
<HPLC 조건>Operation Parameters
Column : Kinetex EVO C18 , 5um, 4.6 x 250 mm
Column temperature : 25℃
Flow rate : 1.0ml/min
Injection volume: 5μl
Sample concentration: 0.7mg/ml
Wavelength : 220nm
Mobile Phase A : 0.01M K 2HPO 4 (pH 7)
Mobile Phase B : AN
Diluent : H 2O/AN(80/20)
Gradient :
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000012
분석 결과를 아래에 나타내었다.
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000013
HPLC 분석한 유연물질(RRT: 0.93, Area% 0.26%)이 함유된 물질을 Q-TOF-LC/MS system 으로 MS scan 및 product ion scan으로 정성분석하였다. LC-MS/MS system는 Agilent 1290 Infinity HPLC system과 Agilent 6550 Q-TOF 질량 분석기를 사용하여 정성분석하였다. 분석 조건은 다음과 같다.
<HPLC 조건>
Column : Phenomenex SecurityGuard C18 guard column (4 × 20mm)를 갖춘 YMC-Pack Pro C18 column (4.6 × 150mm, 5μm)
Mobile Phase A: of 0.1% formic acid in H2O/MeOH=60/40
Mobile Phase B: 0.1% formic acid in acetonitrile/MeOH=60/40
Flow rate : 1ml/min(over 34min)
Injection volume : 10 μl
Diluent : H 2O/ACN = 10/90
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000014
Wavelength : 220 (or 260 nm)
<질량 분석기 조건>
Capillary voltage : 3500V
Ionization: Electrospray Ionization, Positive (ESI+)
Drying gas : 14
Nebulizer gas : 50
Sheath gas : 12
Sheath gas temperature : 400℃
Drying gas temperature : 250℃
Full scan MS, MS/MS mode : (m/z 100-1000)
검출단계에서 분리되어 나오는 분석물질은 질량 분석기로 유입되도록 설정되었으며, 이 때 유연물질의 검출이온은 질량 스펙트럼의 특성이온[M+Na]을 선정하여 정성분석을 실시하였다.
분석 결과, 3가지 예상 화합물이 도출되었으며, 각각의 예상 화합물을 합성하여 MS 분석하였다. 그 결과, RRT 0.93으로 나타나는 유연물질의 화학 구조가 하기 화학식 2의 구조를 갖는다는 점을 확인하였다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000015
(3S)-3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2’-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노익산 ((3S)-3-(4-((3-(7-oxaspiro[bicyclo[4.1.0]heptane-3,2'-[1,3]dioxolan]-6-yl)benzyl)oxy)phenyl)hex-4-ynoic acid)
실시예 2: 화학식 2의 화합물의 합성
화학식 2의 화합물을 하기 반응식 1에 따라 아래와 같이 합성하였다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000016
<단계 1> (3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)페닐)메탄올의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000017
플라스크에 메타-클로로페록시벤조익산(MCPBA)(365.40mmol)을 첨가하고 에틸 아세테이트(450ml)로 용해시켰다. 교반하면서 내부온도를 0℃로 냉각하였다. (3-(1,4-디옥사스파이로[4.5]데스-7-엔-8-일)페닐)메탄올 (DS-PMA)(30g, 121.80mmol)을 에틸 아세테이트(150ml)에 녹여 0℃에서 첨가하였다. 첨가 후 상온으로 교반 후, TLC로 체크하여 반응이 종결된 것을 확인하였다. 반응물을 1N 수산화나트륨 수용액(300ml x3), 정제수(300ml x2)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조한 후 여과하여 감압 농축하였다. 실리카 컬럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 : n-헥산 = 1:2 → 에틸 아세테이트 : n-헥산 = 1:1)를 통해 분리하고 감압 농축하여 고체화합물을 얻었다.
<단계 2> 3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질 메탄설포네이트의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000018
(3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)페닐)메탄올(4.25g, 16.20mmol)을 에틸 아세테이트(42.5ml)에 용해시킨 후, 상온에서 트리에틸아민(3.38ml, 24.30mmol)을 가하였다. 30분 동안 교반 하면서 온도를 낮추고, 0℃에서 메실 클로라이드(1.63ml, 21.06mmol)를 천천히 적가하였다. 5℃에서 교반하였다. 반응종결을 TLC로 확인하였다. 5℃에서 정제수(42.5ml)를 넣고 교반하였다. 유기층을 추출한 후, 정제수(42.5ml)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘(50g)으로 건조 여과하여 농축없이 다음 반응을 진행하였다.
<단계 3> (3S)-에틸 3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노에이트의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000019
메실화(Mesylation)한 물질을 수득률 100%로 계산하여 5.51g로 S N2반응을 진행하였다.
3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질 메탄설포네이트(5.51g, 16.20mmol), (S)-에틸 3-(4-하이드록시페닐)헥스-4-이노에이트(3.57g, 15.39mmol)를 플라스크에 넣고, 아세토니트릴(64ml)에 용해시켰다. 상온에서 제삼인산칼륨(212.27g, 32.405mmol)을 첨가한 후 1시간 30분 동안 74-76℃로 가열하면서 교반하였다. 반응 종결을 TLC로 확인한 후, 온도를 상온으로 낮추었다. 정제수(30ml), 에틸 아세테이트(30ml)를 넣고 교반한 후, 유기층과 수층을 분리하였다. 유기층을 5% 염화나트륨 수용액으로 2번 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조하여 여과하였다. 여과한 유기층을 감압 농축하여 고체화합물을 얻었다.
<단계 4> (3S)-3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 합성
Figure PCTKR2021001191-appb-img-000020
S N2 반응 단계에서 수득률을 100%로 계산하여 7.11g로 가수분해 반응을 진행하였다.
(3S)-에틸 3-(4-((3-(7-옥사스파이로[바이사이클로[4.1.0]헵탄-3,2'-[1,3]다이옥솔란]-6-일)벤질)옥시)페닐)헥스-4-이노에이트(7.11g, 14.92mmol)에 테트라하이드로퓨란(36ml), 메탄올(36ml)을 넣고 교반하였다. 수산화칼륨(4.92g, 74.59mmol)을 정제수(36ml)에 용해하여 첨가하고, 30℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 종결을 TLC로 확인한 후,고감압 농축하였다. 정제수를 넣고 교반한 후, 수층을 에틸 아세테이트로 2번 세척하였다. 내부온도를 0-5℃로 냉각한 후 2N 염산 수용액으로 산성화하여 유기층을 추출하였다. 유기층을 5% 염화나트륨 수용액으로 2번 세척하고 무수 황산마그네슘을 이용하여 건조 후 감압농축하여 화합물을 얻었다.
합성된 물질을 HPLC와 질량분석을 통해 확인하였고, 화학식 2의 구조를 갖는다는 것을 확인하였다. 또한 이 물질의 NMR 및 IR 스펙트럼을 분석하였다. 1H NMR, 13C NMR 및 IR(도 1) 분석결과를 아래에 나타내었다.
1H NMR(300 MHz, DMSO-d6) : 12.27 (br, 1H), 7.43 (1H), 7.37 (1H), 7.32 - 7.27 (m, 3H), 6.96 (d, 2H), 5.09 (s, 1H), 3.95 - 3.81 (m, 5H), 3.12 (d, 1H), 2.61 - 2.51 (m, 3H), 2.16 (t, 2H), 2.01 (d, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.68 - 1.56 (m, 2H)
13C NMR (DMSO d6 ) 171.85, 157.18, 141.11, 137.27, 133.48, 128.45, 128.29, 126.73, 124.68, 124.39, 114.64, 105.44, 80.58, 78.16, 69.14, 63.84, 63.52, 59.88, 59.27, 42.81, 34.72, 32.70, 27.91, 25.45, 3.14ppm
흡수 스펙트럼(FT-IR, KBr) : 2912 cm -1, 1706.14 cm -1, 1508.03 cm -1, 1111.62 cm -1
또한, XRD 및 DSC/TGA를 분석하였으며, 그 결과는 각각 도 2 및 도 3에 나타내었다. XRD, DSC/TGA 분석 조건은 아래와 같다. 합성된 물질은 무정형으로 확인되었다.
<XRD 조건>
Model : D8 Advance (Bruker)
Power : 40mA, 40kV,
Time range : 3 min - 45 min(6deg/min*3)
<DSC/TGA 조건>
Model : TGA Q5000 IR / SDT Q600 (TA)
Temperature range : 40℃~ 600℃
Rate : 20℃
실시예 3: 유연물질로서의 화학식 2의 화합물의 확인
유연물질의 생성을 확인하기 위하여 산화제를 이용하여 스트레스를 가한 가혹 샘플을 제조하였다. 냉장 조건(5℃±3℃)에서 약 2년 정도 보관된 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산 함유 물질을 약 35mg을 정확히 달아 50ml 용량의 플라스크에 넣었다. 희석액(diluent)을 2/3 가량을 넣고 잘 섞어주었다. 여기에 3% 과산화수소 용액 2ml을 넣은 뒤 잘 섞어주고, 희석액으로 표선하였다. 가혹 샘플을 실온에 방치하고, 24시간 후 HPLC(Agilent Technologies 1200 Series)를 이용하여 유연물질을 분석하였다. 실시예 1에서와 동일한 조건에서 분석하였다. 그 결과, 가혹 샘플에서 유연물질이 생성됨을 확인하였다(RRT 0.93, Area 3.83%). 실시예 1의 샘플을 대조군으로 하여 두 샘플의 HPLC 데이터를 비교하여 도 4에 나타내었다(파란색: 대조군, 초록색: 가혹 샘플). 대조군과 비교하여 가혹 샘플에서 화학식 2의 유연물질의 생성이 증가하는 것을 확인하였다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 포함하는, (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약품의 평가용 조성물.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021001191-appb-img-000021
  2. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물로 이용하여 의약품 내 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 함량을 평가하는 것을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약품의 품질 평가 방법.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021001191-appb-img-000022
  3. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 기준 표준물로 이용하여 의약품 내 유연물질의 함량을 평가하는 것을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 의약품의 품질 평가 방법.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021001191-appb-img-000023
  4. a) 샘플 상에서 크로마토그래피를 수행하여 데이터를 수득하는 단계; 및
    b) 상기 데이터를 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염의 크로마토그래피 데이터와 비교하는 단계를 포함하는
    (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산을 포함하는 샘플을 분석하는 방법.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021001191-appb-img-000024
  5. 제4항에 있어서, 상기 방법은
    (a) 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 용액을 고성능 액체 크로마토그래피로 처리하여 크로마토그램을 수득하는 단계; 및
    (b) 크로마토그램에서 수득된 피크를 화학식 2의 화합물 또는 이의 염에서 생성된 피크와 비교하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  6. 제4항에 있어서, 상기 방법은
    (a) 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산의 용액을 박층 크로마토그래피로 처리하여 크로마토그램을 수득하는 단계; 및
    (b) 크로마토그램에서 수득된 스폿을 화학식 2의 화합물 또는 이의 염에서 생성된 스폿과 비교하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  7. (3S)-3-(4-(3-(1,4-다이옥사스파이로[4,5]데스-7-엔-8-일)벤질옥시)페닐)헥스-4-이노익산에 대한 크로마토그래피 컬럼의 체류 시간을 측정하는 방법으로서, 기준 표준물로서 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염을 이용하여 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는 것인 방법.
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021001191-appb-img-000025
  8. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 염:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021001191-appb-img-000026
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