WO2021132178A1 - 生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法 - Google Patents

生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2021132178A1
WO2021132178A1 PCT/JP2020/047735 JP2020047735W WO2021132178A1 WO 2021132178 A1 WO2021132178 A1 WO 2021132178A1 JP 2020047735 W JP2020047735 W JP 2020047735W WO 2021132178 A1 WO2021132178 A1 WO 2021132178A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
porous carbon
biological sample
weight substance
molecular weight
low molecular
Prior art date
Application number
PCT/JP2020/047735
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
良幸 古賀
Original Assignee
株式会社Ｔａｓプロジェクト
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 株式会社Ｔａｓプロジェクト filed Critical 株式会社Ｔａｓプロジェクト
Priority to JP2021567453A priority Critical patent/JPWO2021132178A1/ja
Priority to CN202080089803.2A priority patent/CN114868016B/zh
Priority to US17/789,445 priority patent/US20230029620A1/en
Publication of WO2021132178A1 publication Critical patent/WO2021132178A1/ja

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/20—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising free carbon; comprising carbon obtained by carbonising processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/283—Porous sorbents based on silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B01J20/288—Polar phases
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/34—Regenerating or reactivating
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/02—Devices for withdrawing samples
    • G01N1/10—Devices for withdrawing samples in the liquid or fluent state
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/52—Physical parameters
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/52—Physical parameters
    • G01N2030/524—Physical parameters structural properties
    • G01N2030/525—Physical parameters structural properties surface properties, e.g. porosity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials

Definitions

  • the present invention relates to a method for extracting a low molecular weight substance present in a biological sample.
  • a method using activated carbon is known as a method for adsorbing and removing low molecular weight substances existing in a biological sample.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 59-176215
  • Patent Document 2 International Publication No. 2011 / Pamphlet No. 114470
  • Patent Document 2 describes a method for efficiently separating and removing impurities from a hyaluronic acid-containing liquid using activated carbon.
  • Patent Document 3 describes a method for purifying L-phenylalanine, which comprises adsorbing L-phenylalanine on activated carbon and then eluting L-phenylalanine from activated carbon. ..
  • Patent Document 3 although L-phenylalanine is adsorbed and eluted using activated carbon, it is generally not easy to efficiently release and recover the low molecular weight substance adsorbed on the activated carbon. Absent.
  • An object of the present invention is to provide a method capable of easily extracting a low molecular weight substance existing in a biological sample.
  • porous carbon having a mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores of a larger size as a hierarchical structure in the biological sample.
  • the present invention has been completed by finding that the adsorbed low-molecular-weight substance can be easily released by contacting with an aqueous solution containing the above, thereby recovering the low-molecular-weight substance with a high recovery rate.
  • the present invention [1] A method for extracting a low molecular weight substance present in a biological sample from the biological sample. 1) Whether to mix the biological sample with porous carbon having mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores of a larger size as a hierarchical structure, and then recover the porous carbon from the obtained mixture. Alternatively, the biological sample is brought into contact with a filtration filter on which a porous carbon having a mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores having a larger size as a hierarchical structure is arranged or carried, thereby causing the low molecular weight substance.
  • porous carbon adsorbed with the low molecular weight substance obtained after the adsorption step, and 0.1 to 1 mass of true spherical silica having an average particle size of 10 to 100 nm. Free to liberate low molecular weight material from porous carbon by mixing with an aqueous solution containing% and 10-12% acetonitrile, or by contacting and passing a filtration filter obtained after the adsorption step through the aqueous solution.
  • Method including steps, [2] The method according to the above [1], further comprising a regeneration step of regenerating the porous carbon after the release step for use in the adsorption step again.
  • the present invention it is possible to provide a method capable of easily extracting a low molecular weight substance present in a biological sample.
  • the method of the present invention can continuously extract low molecular weight substances from a large number of biological samples by adding a step of regenerating the porous carbon after the liberation step.
  • the method of the present invention makes it possible to extract a low molecular weight substance from various different biological samples such as serum by adding a pretreatment step of a biological sample before the adsorption step.
  • HPLC chart It is an HPLC chart when a simulated biological sample (8-oxo-dG: 250 ng / mL) containing standard 8-oxo-dG was subjected to HPLC analysis before filtering with a cartridge of a millipore filter holding porous carbon.
  • .. 6 is an HPLC chart obtained by HPLC analysis of a filtrate obtained after filtering a simulated biological sample containing standard 8-oxo-dG with a cartridge of a millipore filter holding porous carbon.
  • Four consecutive series obtained by injecting a free liquid (10% acetonitrile solution in which 0.1% by mass of true spherical silica is suspended: 1 mL) into a cartridge holding porous carbon adsorbing 8-oxo-dG.
  • HPLC chart when the fraction (0.25 mL each) was analyzed by HPLC
  • (A) in FIG. 3 shows the HPLC chart of the fraction of 0 to 0.25 mL
  • (B) is 0.25.
  • the HPLC chart of the fraction of ⁇ 0.5 mL is shown
  • (C) shows the HPLC chart of the fraction of 0.5 to 0.75 mL
  • (D) shows the HPLC chart of the fraction of 0.75 to 1.0 mL. Is shown.
  • the method for extracting a low molecular weight substance present in a biological sample of the present invention is 1) Whether to mix the biological sample with porous carbon having mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores of a larger size as a hierarchical structure, and then recover the porous carbon from the obtained mixture.
  • the biological sample is brought into contact with a filtration filter on which a porous carbon having a mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores having a larger size as a hierarchical structure is arranged or carried, thereby causing the low molecular weight substance.
  • porous carbon adsorbed with the low molecular weight substance obtained after the adsorption step, and 0.1 to 1 mass of true spherical silica having an average particle size of 10 to 100 nm. Free to liberate low molecular weight material from porous carbon by mixing with an aqueous solution containing% and 10-12% acetonitrile, or by contacting and passing a filtration filter obtained after the adsorption step through the aqueous solution. It is characterized by including a process.
  • biological samples examples include urine, serum, extracts from tissues, extracts from cells, and the like, and biological samples in which no precipitate is present are preferable.
  • Preferred biological samples include urine, serum and the like, with urine being preferred.
  • Examples of the low molecular weight substance to be the subject of the present invention include nucleic acids or derivatives thereof (nucleotides, nucleosides and / or bases, etc.), peptides, amines, steroids, fatty acids, vitamins, other low molecular weight compounds, and the like, preferably having a molecular weight. Compounds having a value of 5000 or less can be mentioned.
  • Preferred low molecular weight substances include nucleic acid derivatives such as dG (deoxyguanosine), 8-oxo-dG, various mononucleosides, peptides, drugs (including drugs, doping agents, etc.), amines, steroids, fatty acids, vitamins, and creatinine.
  • nucleic acid derivatives such as dG (deoxyguanosine), 8-oxo-dG, various mononucleosides, peptides, drugs (including drugs, doping agents, etc.), amines, steroids, fatty acids, vitamins, and creatinine.
  • nucleic acid derivatives such as dG (deoxyguanosine) and 8-oxo-dG are preferable.
  • porous carbon having 3.5 to 150 nm mesopores and micropores having a larger size as a hierarchical structure that can be used in the present invention a metal oxide having a specific size, for example, MgO, is used as a template.
  • Pore-controlled mesoporous carbon or the like obtained by controlling the size of mesopores is preferable.
  • the average particle size of the porous carbon that can be used in the present invention include 1 ⁇ m to 100 ⁇ m, and 1 ⁇ m to 10 ⁇ m is preferable.
  • Specific porous carbons that can be used in the present invention include CNovell (registered trademark) MJ (4) 010 (design meso pore size: 10 nm) and MJ (4) 030 (design meso) available from Toyo Tanso Co., Ltd. Hole diameter: 30 nm), MJ (4) 110 (design meso hole diameter: 110 nm), MJ (4) 150 (design meso hole diameter: 150 nm) and the like, and MJ (4) 110 is preferable.
  • the filtration filter that can be used in the present invention is not particularly limited as long as it includes a filtration film having a pore size that does not leak the porous carbon, and examples thereof include a millipore filter, and specifically, Advantech Toyo.
  • DISMIC 13HP045AN Teflon® (PTFE) filter membrane (pore size 0.45 ⁇ m), membrane diameter: 13 mm)
  • DISMIC 03JP050AN Teflon® (PTFE) filter membrane
  • the spherical silica having an average particle diameter of 10 to 100 nm that can be used in the present invention is not particularly limited as long as it is a spherical silica having an average particle diameter of 10 to 100 nm, but a spherical silica having an average particle diameter of 10 to 50 nm, Spherical silica having an average particle size of 10 to 30 nm is preferable.
  • the spherical silica is preferably surface-treated in order to increase the affinity with hydrophilic substances, and as a specific surface treatment, the silanol group on the surface of the spherical silica is phenyl group, vinyl group or Those substituted with a methacryloyloxy group and the like are preferable, and those in which the silanol group is substituted with a vinyl group are particularly preferable.
  • Specific spherical silicas that can be used in the present invention include Admanano YA010C (average particle size 10 nm), Admanano YA010C-SV1 (average particle size 10 nm, surface treatment: vinylization), which can be obtained from Admatex Co., Ltd.
  • Admanano YA030C average particle size 30 nm
  • Admanano YC100C average particle size 100 nm
  • Admanano YA010C-SV1 average particle size 10 nm, surface treatment: vinylization
  • the average particle size is intended to be the value of the particle size D50 (median diameter) of the particle size distribution (volume basis) obtained by the laser diffraction scattering method, and the true sphere silica has a true sphere fluctuation coefficient ( ⁇ /).
  • D (%), ⁇ : standard deviation of particle size, D: average particle size) is intended to be silica particles of 20% or less, preferably 15% or less.
  • the biological sample is mixed with a porous carbon having a mesopore of 3.5 to 150 nm and a micropore having a larger size as a hierarchical structure, and then from the obtained mixture.
  • the porous carbon is recovered, or the biological sample is brought into contact with a filtration filter in which porous carbon having a mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores of a larger size as a hierarchical structure is arranged or carried. This is characterized in that the low molecular weight substance is adsorbed on the porous carbon.
  • the adsorption step that can be used in the method of the present invention is particularly long as it is a step of mixing a biological sample with a porous carbon having mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores having a larger size as a hierarchical structure.
  • a porous carbon having mesopores of 3.5 to 150 nm and micropores having a larger size as a hierarchical structure.
  • the filtration filter in which the porous carbon is arranged it can be used as an embodiment of a cartridge in which the porous carbon is filled between the two filters.
  • the inner surface of the cartridge and the surface of the porous carbon are covered with water molecules so that air bubbles are not mixed.
  • Examples of the operation when the above cartridge is used include injecting a biological sample into a cartridge filled with porous carbon using a syringe and filtering the sample. At the time of injection, it is preferable to inject at the same pressure as possible.
  • examples of the filtration filter supporting the porous carbon include a filtration filter in which the porous carbon is immobilized by a known method.
  • the liberation step in the method of the present invention contains 0.1 to 1% by mass of true spherical silica having an average particle size of 10 to 100 nm and 10 to 1% by mass of the porous carbon adsorbed with the low molecular weight substance obtained after the adsorption step. It is characterized by liberating low molecular weight substances from porous carbon by mixing with an aqueous solution containing 12% acetonitrile or by contacting and passing a filtration filter obtained after the adsorption step through the aqueous solution.
  • the aqueous acetonitrile solution containing true spherical silica comes into contact with the porous carbon adsorbed with the low molecular weight substance, so that the water-soluble substance trapped in the pores of the porous carbon has an affinity with the porous carbon. It replaces the sexual spheric silica, which liberates the water-soluble material into the solution.
  • the filtration filter obtained after the adsorption step is brought into contact with and passed through the aqueous solution, it is preferable to inject the acetonitrile aqueous solution containing true spherical silica into the filtration filter using a syringe, so that the pressure is as equal as possible. It is preferable to inject.
  • the method of the present invention also relates to the invention of a method further comprising a regeneration step of regenerating the porous carbon after the liberation step for use in the adsorption step again.
  • the regeneration step may include a washing step and a drying step.
  • Specific cleaning steps include, for example, washing the porous carbon after the liberation step with 100% acetonitrile, then washing with a 10% aqueous acetonitrile solution, and finally washing with ultrapure water. Be done.
  • examples of the drying step include heating and drying the porous carbon after the washing step at a temperature of 120 to 180 ° C. for 1 to 8 hours.
  • low-molecular-weight substances can be continuously extracted from a large number of biological samples by, for example, automatic operation during the night.
  • the above-mentioned continuous extraction method can be advantageously used not only as an extraction method but also as an analysis method.
  • the method of the present invention also relates to a method further comprising a pretreatment step of a biological sample before the adsorption step.
  • a known pretreatment method can be used, and examples thereof include separation by a precolumn, centrifugation, dialysis membrane separation, denatured precipitation, and enzyme treatment.
  • the above treatment enables extraction of low molecular weight substances from various biological samples.
  • Test Example 1 Extraction of 8-oxo-dG from artificial urine ⁇ Preparation of simulated biological sample containing 8-oxo-dG> A simulated biological sample was prepared by dissolving standard 8-oxo-dG in artificial urine (JIS code T3214: 2011) to a concentration of 250 ng / mL.
  • 1 mL of the porous carbon suspension prepared above is subjected to a millipore filter (DISMIC 13HP045AN, Teflon® (PTFE) filtration membrane (pore size 0.45 ⁇ m), membrane diameter: 13 mm, Advantech Toyo Co., Ltd. using a syringe. ) was filtered, and the anterior cavity of the filtration membrane was uniformly replenished with porous carbon.
  • a millipore filter DISMIC 13HP045AN, Teflon® (PTFE) filtration membrane (pore size 0.45 ⁇ m), membrane diameter: 13 mm, Advantech Toyo Co., Ltd. using a syringe.
  • a second millipore filter (DISMIC 13HP045AN, Teflon® (PTFE) filtration membrane (pore size 0.45 ⁇ m), membrane diameter: 13 mm,
  • DISMIC 13HP045AN, Teflon® (PTFE) filtration membrane pore size 0.45 ⁇ m
  • membrane diameter 13 mm
  • Advantech Toyo Co., Ltd. By connecting Advantech Toyo Co., Ltd. and slowly passing 1 mL of ultrapure water through it, porous carbon was reliably retained between the two front and rear filtration membranes. Care was taken to prevent air bubbles from entering the space of the cartridge formed by connecting the two millipore filters, so that the inner surface of the cartridge and the surface of the carbon atom in the porous carbon were covered with water molecules.
  • Hydrophilic spherical silica (Admanano YA010C-SV1, average particle size 10 nm, surface treatment: vinylized, manufactured by Admatex Co., Ltd.) was mixed and suspended in 100% acetonitrile at a ratio of 1% by mass (1% by mass). Free stock solution). For the purpose of homogenizing and degassing the solution, ultrasonic waves of 100 KHz were applied, and the solution was stored at room temperature. The free stock solution was diluted 10-fold with ultrapure water at the time of use to obtain a free solution (10% acetonitrile solution in which 0.1% by mass of true spherical silica was suspended).
  • ⁇ Filtration of simulated biological sample filter adsorption of 8-oxo-dG in the sample> 1 mL of the simulated biological sample containing the standard 8-oxo-dG prepared above, using the cartridge of the millipore filter holding the porous carbon prepared above, and using a syringe, 1 mL / min as a guide. , Filtered at the same pressure as possible.
  • Samples before and after filtration were analyzed by HPLC. The HPLC chart before filtration is shown in FIG. 1, and the HPLC chart after filtration is shown in FIG. The analysis conditions for HPLC are shown below.

Abstract

【課題】生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法を提供する。 【解決手段】生体試料から該試料中に存在する低分子物質を抽出する方法であって、 １）前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素と混合し、その後、得られた混合物から多孔質炭素を回収するか、或いは、前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素を配置又は担持した濾過フィルターに接触させることにより、前記低分子物質を前記多孔質炭素に吸着させる吸着工程、及び ２）前記吸着工程後に得られた前記低分子物質を吸着した多孔質炭素を、平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカを０．１乃至１質量％含み且つ１０乃至１２％のアセトニトリルを含む水溶液と混合するか、或いは、前記吸着工程後に得られた濾過フィルターを前記水溶液に接触及び通過させることにより、多孔質炭素から低分子物質を遊離させる遊離工程 を含む方法。

Description

生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法
　本発明は生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法に関するものである。
　生体試料中に存在する低分子物質を吸着・除去するための方法として活性炭を用いる方法が知られている。
　例えば、特開昭５９－１７６２１５公報（特許文献１）には、活性炭を用いて透析後のＩｇＧ－分画から低分子量の部分を除去する方法が記載されており、また、国際公開第２０１１／１１４４７０号パンフレット（特許文献２）には、活性炭を用いてヒアルロン酸類含有液から不純物を効率よく分離除去する方法が記載されている。
　また、特開昭６１－１４８１４７号公報（特許文献３）は、Ｌ－フェニルアラニンを活性炭に吸着させ、その後、Ｌ－フェニルアラニンを活性炭から溶出させることを含むＬ－フェニルアラニンの精製法を記載している。
　特許文献３は、Ｌ－フェニルアラニンの吸着及び溶出を、活性炭を用いて行っているものの、活性炭に吸着させた低分子物質を効率的に遊離させて回収することは、一般的には、容易ではない。
特開昭５９－１７６２１５公報 国際公開第２０１１／１１４４７０号パンフレット 特開昭６１－１４８１４７号公報
　本発明は、生体試料中に存在する低分子物質を容易に抽出できる方法の提供を課題とする。
　本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素が、生体試料中に存在する低分子物質を効率的に吸着できること、及び、低分子物質を吸着した多孔質炭素は、平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカを０．１乃至１質量％含む、１０乃至１２％のアセトニトリルを含む水溶液と接触させることで、吸着した低分子物質を容易に遊離し、それにより高い回収率で低分子物質を回収できることを見出し、本発明を完成した。
　即ち、本発明は、
［１］生体試料から該試料中に存在する低分子物質を抽出する方法であって、
１）前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素と混合し、その後、得られた混合物から多孔質炭素を回収するか、或いは、前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素を配置又は担持した濾過フィルターに接触させることにより、前記低分子物質を前記多孔質炭素に吸着させる吸着工程、及び
２）前記吸着工程後に得られた前記低分子物質を吸着した多孔質炭素を、平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカを０．１乃至１質量％含み且つ１０乃至１２％のアセトニトリルを含む水溶液と混合するか、或いは、前記吸着工程後に得られた濾過フィルターを前記水溶液に接触及び通過させることにより、多孔質炭素から低分子物質を遊離させる遊離工程
を含む方法、
［２］前記遊離工程後の多孔質炭素を再び吸着工程に使用するために再生する再生工程を更に含む前記［１］に記載の方法、
［３］前記吸着工程の前に、生体試料の前処理工程を更に含む前記［１］又は前記［２］に記載の方法、
［４］前記真球シリカは、表面処理真球シリカである前記［１］乃至前記［３］の何れか１つに記載の方法、及び
［５］前記表面処理真球シリカは、真球シリカ表面のシラノール基を、フェニル基、ビニル基又はメタクリロイルオキシ基に置換する処理がなされたものである前記［４］に記載の方法
に関する。
　本発明により、生体試料中に存在する低分子物質を容易に抽出できる方法を提供することができる。
　また、本発明の方法は、遊離工程後の多孔質炭素を再生する工程を追加することにより、多数の生体試料から、連続的に低分子物質を抽出することができる。
　また、本発明の方法は、吸着工程の前に、生体試料の前処理工程を追加することにより、血清等の種々の異なる生体試料から、低分子物質を抽出することを可能とする。
多孔質炭素を保持したミリポアフィルターのカートリッジで濾過する前に、標準８－ｏｘｏ－ｄＧを含有する模擬生体試料（８－ｏｘｏ－ｄＧ：２５０ｎｇ／ｍＬ）を、ＨＰＬＣ分析した際のＨＰＬＣチャートである。 標準８－ｏｘｏ－ｄＧを含有する模擬生体試料を、多孔質炭素を保持したミリポアフィルターのカートリッジで濾過した後に得られた濾液をＨＰＬＣ分析した際のＨＰＬＣチャートである。 ８－ｏｘｏ－ｄＧを吸着した多孔質炭素が保持されたカートリッジに、遊離液（０．１質量％の真球シリカが浮遊する１０％アセトニトリル溶液：１ｍＬ）を注入して得た連続する４つの画分（各０．２５ｍＬ）を、ＨＰＬＣ分析した際のＨＰＬＣチャートであって、図３中の（Ａ）は０～０．２５ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを示し、（Ｂ）は０．２５～０．５ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを示し、（Ｃ）は０．５～０．７５ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを示し、（Ｄ）は０．７５～１．０ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを示す。
　更に詳細に本発明を説明する。
　本発明の生体試料から該試料中に存在する低分子物質を抽出する方法は、
１）前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素と混合し、その後、得られた混合物から多孔質炭素を回収するか、或いは、前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素を配置又は担持した濾過フィルターに接触させることにより、前記低分子物質を前記多孔質炭素に吸着させる吸着工程、及び
２）前記吸着工程後に得られた前記低分子物質を吸着した多孔質炭素を、平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカを０．１乃至１質量％含み且つ１０乃至１２％のアセトニトリルを含む水溶液と混合するか、或いは、前記吸着工程後に得られた濾過フィルターを前記水溶液に接触及び通過させることにより、多孔質炭素から低分子物質を遊離させる遊離工程
を含むことを特徴とする。
　本発明に使用し得る生体試料としては、尿、血清、組織からの抽出液、細胞からの抽出液等が挙げられ、沈殿物の存在していない生体試料が好ましい。
　好ましい生体試料としては、尿、血清等が挙げられ、尿が好ましい。
　本発明の対象となる低分子物質としては、核酸又はその誘導体（ヌクレオチド、ヌクレオシド及び／又は塩基等）、ペプチド、アミン、ステロイド、脂肪酸、ビタミン、その他の低分子化合物等が挙げられ、好ましくは分子量が５０００以下の化合物が挙げられる。
　好ましい低分子物質としては、ｄＧ（デオキシグアノシン）、８－ｏｘｏ－ｄＧ、各種のモノヌクレオシド等の核酸誘導体、ペプチド、薬物（麻薬、ドーピング剤等を含む）、アミン、ステロイド、脂肪酸、ビタミン、クレアチニン等の低分子化合物等が挙げられ、ｄＧ（デオキシグアノシン）、８－ｏｘｏ－ｄＧ等の核酸誘導体が好ましい。
　本発明に使用し得る３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素としては、鋳型として特定の大きさの金属酸化物、例えば、ＭｇＯを用いてメソ孔の大きさを制御することにより得られる細孔制御メソポーラスカーボン等が好ましい。
　本発明に使用し得る多孔質炭素の平均粒径としては、１μｍ乃至１００μｍが挙げられ、１μｍ乃至１０μｍが好ましい。
　本発明に使用し得る具体的な多孔質炭素としては、東洋炭素株式会社から入手可能な、ＣＮｏｖｅｌ（登録商標）ＭＪ（４）０１０（設計メソ孔径：１０ｎｍ）、ＭＪ（４）０３０（設計メソ孔径：３０ｎｍ）、ＭＪ（４）１１０（設計メソ孔径：１１０ｎｍ）、ＭＪ（４）１５０（設計メソ孔径：１５０ｎｍ）等が挙げられ、ＭＪ（４）１１０が好ましい。
　本発明に使用し得る濾過フィルターとしては、上記多孔質炭素が漏洩しないポアサイズを有する濾過膜を備えるものであれば特に限定されないが、例えば、ミリポアフィルター等が挙げられ、具体的には、アドバンテック東洋株式会社から入手可能な、ＤＩＳＭＩＣ　１３ＨＰ０４５ＡＮ（テフロン（登録商標）（ＰＴＦＥ）製濾過膜（ポアサイズ０．４５μｍ）、膜の径：１３ｍｍ）、ＤＩＳＭＩＣ　０３ＪＰ０５０ＡＮ（テフロン（登録商標）（ＰＴＦＥ）製濾過膜（ポアサイズ０．５０μｍ）、膜の径：３ｍｍ）等が挙げられる。
　本発明に使用し得る平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカとしては、平均粒径１０乃至１００ｎｍとなる真球状のシリカであれば特に限定されないが、平均粒径１０乃至５０ｎｍの真球シリカ、平均粒径１０乃至３０ｎｍの真球シリカが好ましい。
　また、真球シリカは、親水物との親和性を増すために表面処理がなされているものが好ましく、具体的な表面処理としては、真球シリカ表面のシラノール基を、フェニル基、ビニル基又はメタクリロイルオキシ基に置換したもの等が好ましく、特に、シラノール基を、ビニル基に置換したものが好ましい。
　本発明に使用し得る具体的な真球シリカとしては、株式会社アドマテックスから入手可能な、アドマナノ　ＹＡ０１０Ｃ（平均粒径１０ｎｍ）、アドマナノ　ＹＡ０１０Ｃ－ＳＶ１（平均粒径１０ｎｍ、表面処理：ビニル化）、アドマナノ　ＹＡ０３０Ｃ（平均粒径３０ｎｍ）、アドマナノ　ＹＣ１００Ｃ（平均粒径１００ｎｍ）等が挙げられ、アドマナノ　ＹＡ０１０Ｃ－ＳＶ１（平均粒径１０ｎｍ、表面処理：ビニル化）が好ましい。
　本明細書において、平均粒径は、レーザー回折散乱法によって得られた粒度分布（体積基準）の粒子径Ｄ５０（メジアン径）の値を意図し、真球シリカは、真球変動係数（σ／Ｄ（％），σ：粒子径の標準偏差，Ｄ：平均粒径)が、２０％以下、好ましくは１５％以下のシリカ粒子を意図する。
　本発明の方法における吸着工程は、前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素と混合し、その後、得られた混合物から多孔質炭素を回収するか、或いは、前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素を配置又は担持した濾過フィルターに接触させることにより、前記低分子物質を前記多孔質炭素に吸着させることを特徴とする。
　本発明の方法において使用し得る吸着工程は、生体試料と、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素とを混合する工程であれば特に限定されないが、空気の泡が多孔質炭素表面の細孔を塞がないように、静かに混和し、超音波等で充分に脱気するのが好ましい。
　また、多孔質炭素を配置した濾過フィルターとしては、二つのフィルター間に多孔質炭素を充填したカートリッジの態様として用いることができる。
　上記のカートリッジを用いる場合、カートリッジ内面及び多孔質炭素の表面が水分子で被われた状態とし、空気泡が混入しないように配慮することが好ましい。
　上記のカートリッジを用いる場合の操作としては、シリンジを用いて生体試料を多孔質炭素が充填されたカートリッジに注入して濾過すること等が挙げられる。
　注入の際は、できるだけ等圧となるように注入することが好ましい。
　また、多孔質炭素を担持した濾過フィルターとしては、多孔質炭素が既知の方法によって固定化された濾過フィルター等が挙げられる。
　本発明の方法における遊離工程は、前記吸着工程後に得られた前記低分子物質を吸着した多孔質炭素を、平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカを０．１乃至１質量％含み且つ１０乃至１２％のアセトニトリルを含む水溶液と混合するか、或いは、前記吸着工程後に得られた濾過フィルターを前記水溶液に接触及び通過させることにより、多孔質炭素から低分子物質を遊離させることを特徴とする。
　遊離工程において、真球シリカを含むアセトニトリル水溶液が、低分子物質を吸着した多孔質炭素と接触することにより、多孔質炭素の細孔内に捕捉されている水溶性物質が、多孔質炭素と親和性を有する真球シリカと置き換わり、これにより、水溶性物質は溶液中に遊離する。
　真球シリカを含むアセトニトリル水溶液を調製する際、溶液の均一化と脱気を目的として、超音波処理を行うことが好ましい。
　また、吸着工程後に得られた濾過フィルターを水溶液に接触及び通過させる場合、シリンジを用いて真球シリカを含むアセトニトリル水溶液を濾過フィルターに注入するのが好ましく、その際、できるだけ等圧となるように注入することが好ましい。
　本発明の方法は、遊離工程後の多孔質炭素を再び吸着工程に使用するために再生する再生工程を更に含む方法の発明にも関する。
　再生工程には、洗浄工程と乾燥工程とが含まれ得る。
　具体的な洗浄工程としては、例えば、遊離工程後の多孔質炭素を、１００％アセトニトリルで洗浄し、次に、１０％アセトニトリル水溶液で洗浄し、最後に、超純水で洗浄すること等が挙げられる。
　また、乾燥工程としては、例えば、洗浄工程後の多孔質炭素を、１２０乃至１８０℃の温度で１乃至８時間加熱乾燥すること等が挙げられる。
　上記の再生工程を含むことにより、多数の生体試料から、例えば、通夜の自動操作等により、連続的に低分子物質を抽出することができる。
　また、上記の連続的な抽出方法は、抽出方法としてだけでなく、分析方法としても有利に使用し得る。
　本発明の方法は、吸着工程の前に、生体試料の前処理工程を更に含む方法にも関する。
　生体試料の前処理工程としては、既知の前処理方法を用いることができ、プレカラムによる分離、遠心分離、透析膜分離、変性沈殿、酵素処理等が挙げられる。
　上記の処理により、種々の生体試料からの低分子物質の抽出が可能となる。
試験例１：人工尿からの８－ｏｘｏ－ｄＧの抽出
＜８－ｏｘｏ－ｄＧを含有する模擬生体試料の調製＞
　人工尿（ＪＩＳコード　Ｔ３２１４：２０１１）に、標準８－ｏｘｏ－ｄＧを、２５０ｎｇ／ｍＬの濃度となるように溶解して、模擬生体試料を調整した。
＜多孔質炭素を保持したミリポアフィルターのカートリッジの作製＞
　多孔質炭素（ＣＮｏｖｅｌ（登録商標）ＭＪ（４）１１０（設計メソ孔径：１１０ｎｍ）を立体構造中に高密度に持つ機能性活性炭、粒径：約５μｍ以下、親水性、東洋炭素（株）社製）を、１ｍｇ／ｍＬの量となるように超純水中に静かに（泡立たないように）混和し、空気の泡が細孔を塞がないように、１００ＫＨｚの超音波を５分間付与し充分に脱気して、多孔質炭素浮遊液を調製した。
　上記で調製した多孔質炭素浮遊液１ｍＬを、シリンジを使ってミリポアフィルター（ＤＩＳＭＩＣ　１３ＨＰ０４５ＡＮ、テフロン（登録商標）（ＰＴＦＥ）製濾過膜（ポアサイズ０．４５μｍ）、膜の径：１３ｍｍ、アドバンテック東洋（株）社製）で濾過して、濾過膜の前腔に多孔質炭素を均一に補充した。
　次に、上記の多孔質炭素が補充されたミリポアフィルターに、二つ目のミリポアフィルター（ＤＩＳＭＩＣ　１３ＨＰ０４５ＡＮ、テフロン（登録商標）（ＰＴＦＥ）製濾過膜（ポアサイズ０．４５μｍ）、膜の径：１３ｍｍ、アドバンテック東洋（株）社製）を連結し、超純水１ｍＬをゆっくり通水する事で、前後２つの濾過膜の間に多孔質炭素を確実に保持した。二つのミリポアフィルターを連結して構成したカートリッジの空間に空気泡が混入しないように配慮し、これにより、カートリッジ内面及び多孔質炭素における炭素原子の表面を水分子で被われた状態とした。
＜遊離液の調製＞
　１００％アセトニトリル中に、親水性の真球シリカ（アドマナノ　ＹＡ０１０Ｃ－ＳＶ１、平均粒径１０ｎｍ、表面処理：ビニル化、（株）アドマテックス社製）を１質量％の割合で混和し浮遊させた（遊離原液）。溶液の均一化と脱気を目的として、１００ＫＨｚの超音波を付与し、保存は常温保存とした。
　遊離原液は、使用時に超純水で１０倍に希釈することで、遊離液（０．１質量％の真球シリカが浮遊する１０％アセトニトリル溶液）とした。
＜模擬生体試料の濾過（試料中の８－ｏｘｏ－ｄＧの濾過吸着）＞
　前記で調製した、標準８－ｏｘｏ－ｄＧを含有する模擬生体試料の１ｍＬを、前記で作製した多孔質炭素を保持したミリポアフィルターのカートリッジを用い、シリンジを使って、１ｍＬ／分を目安にして、できるだけ等圧で濾過した。
　濾過する前及び後の試料をＨＰＬＣで分析した。
　濾過する前のＨＰＬＣチャートを図１に示し、濾過した後のＨＰＬＣチャートを図２に示した。
　ＨＰＬＣの分析条件を以下に示した。
ＨＰＬＣ分析条件
　機器：ＨＴＥＣ－５００（（株）エイコム社製）（８－ｏｘｏ－ｄＧは電気化学的に検出）
　ＯＤＳカラム：ＣＡ－５ＯＤＳ，カラムサイズ：２．１φ×１５０ｍｍ（（株）エイコム社製）
　移動相：リン酸緩衝液（ｐＨ６．５－６．８）、メタノール２％、ＳＤＳ　９０ｍｇ／Ｌ
　８－ｏｘｏ－ｄＧ標準溶液（２５０ｎｇ／ｍＬ）のＨＰＬＣ測定値のピーク面積を１００とした場合の比率％として算出した結果、多孔質炭素に吸着された８－ｏｘｏ－ｄＧの量は、模擬生体試料中に含まれる８－ｏｘｏ－ｄＧの量の９８．２％となった。
＜８－ｏｘｏ－ｄＧの多孔質炭素からの回収＞
　８－ｏｘｏ－ｄＧを吸着した多孔質炭素が保持されたカートリッジに、シリンジを用い、上記で調製した遊離液の１ｍＬを、１ｍＬ／分を目安にして、等圧となるように注入し、０．２５ｍＬの４つの画分として回収した。
　０～０．２５ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを図３の（Ａ）に示し、０．２５～０．５ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを図３の（Ｂ）に示し、０．５～０．７５ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを図３の（Ｃ）に示し、０．７５～１．０ｍＬの画分のＨＰＬＣチャートを図３の（Ｄ）に示した。
　８－ｏｘｏ－ｄＧ標準溶液（２５０ｎｇ／ｍＬ）のＨＰＬＣ測定値のピーク面積を１００とした場合の比率％として算出した結果、遊離液１ｍＬで回収された８－ｏｘｏ－ｄＧの量は、９０．９％となった。

Claims (5)

  1. 生体試料から該試料中に存在する低分子物質を抽出する方法であって、
    １）前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素と混合し、その後、得られた混合物から多孔質炭素を回収するか、或いは、前記生体試料を、３．５乃至１５０ｎｍのメソ孔と、それより大きなサイズのミクロ孔を階層構造として有する多孔質炭素を配置又は担持した濾過フィルターに接触させることにより、前記低分子物質を前記多孔質炭素に吸着させる吸着工程、及び
    ２）前記吸着工程後に得られた前記低分子物質を吸着した多孔質炭素を、平均粒径１０乃至１００ｎｍの真球シリカを０．１乃至１質量％含み且つ１０乃至１２％のアセトニトリルを含む水溶液と混合するか、或いは、前記吸着工程後に得られた濾過フィルターを前記水溶液に接触及び通過させることにより、多孔質炭素から低分子物質を遊離させる遊離工程
    を含む方法。
  2. 前記遊離工程後の多孔質炭素を再び吸着工程に使用するために再生する再生工程を更に含む請求項１に記載の方法。
  3. 前記吸着工程の前に、生体試料の前処理工程を更に含む請求項１又は請求項２に記載の方法。
  4. 前記真球シリカは、表面処理真球シリカである請求項１乃至請求項３の何れか１項に記載の方法。
  5. 前記表面処理真球シリカは、真球シリカ表面のシラノール基を、フェニル基、ビニル基又はメタクリロイルオキシ基に置換する処理がなされたものである請求項４に記載の方法。
PCT/JP2020/047735 2019-12-26 2020-12-21 生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法 WO2021132178A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021567453A JPWO2021132178A1 (ja) 2019-12-26 2020-12-21
CN202080089803.2A CN114868016B (zh) 2019-12-26 2020-12-21 在生物体试样中存在的低分子物质的提取方法
US17/789,445 US20230029620A1 (en) 2019-12-26 2020-12-21 Method for extracting low-molecular-weight substance existing in biological sample

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019-236585 2019-12-26
JP2019236585 2019-12-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021132178A1 true WO2021132178A1 (ja) 2021-07-01

Family

ID=76574678

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2020/047735 WO2021132178A1 (ja) 2019-12-26 2020-12-21 生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230029620A1 (ja)
JP (1) JPWO2021132178A1 (ja)
CN (1) CN114868016B (ja)
WO (1) WO2021132178A1 (ja)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006206397A (ja) * 2005-01-28 2006-08-10 National Institute For Materials Science 炭素多孔体、炭素多孔体を製造する方法、吸着剤および生体分子素子
JP2007205927A (ja) * 2006-02-02 2007-08-16 Showa Denko Kk シリカ系充填剤の製造方法
JP2008120633A (ja) * 2006-11-13 2008-05-29 Shiseido Co Ltd 球状多孔質シリカ、その製造方法及びカラム充填剤
JP2009132607A (ja) * 2007-11-28 2009-06-18 Samsung Sdi Co Ltd 中空のカプセル構造体およびその製造方法
WO2010100914A1 (ja) * 2009-03-04 2010-09-10 株式会社日立ハイテクノロジーズ 液体クロマトグラフ及び分析方法
JP2011168484A (ja) * 2000-08-09 2011-09-01 British American Tobacco (Investments) Ltd 多孔性炭素
JP2011525468A (ja) * 2008-06-10 2011-09-22 ナショナル・リサーチ・カウンシル・オブ・カナダ 多孔質炭素球の制御可能な合成及びその電気化学的用途
JP2013003065A (ja) * 2011-06-20 2013-01-07 Gl Sciences Inc 多孔質体およびその製造方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9316167D0 (en) * 1992-08-07 1993-09-22 British Petroleum Co Plc Silica product and processes
WO1999012624A1 (en) * 1997-09-08 1999-03-18 Dionex Corporation Bifunctional resin composition for the simultaneous separation of carbohydrates and organic acids in liquid chromatography
JP4196459B2 (ja) * 1997-12-25 2008-12-17 東ソー株式会社 磁性担体、その製造方法及びこれを用いた核酸抽出方法
JP4488191B2 (ja) * 2004-07-21 2010-06-23 株式会社豊田中央研究所 球状シリカ系メソ多孔体の製造方法
JP2007057526A (ja) * 2005-07-26 2007-03-08 Showa Denko Kk 水溶性高分子と低分子化合物を含む試料中の低分子化合物の分析方法
CN102198929B (zh) * 2010-03-22 2013-05-01 中国科学院理化技术研究所 具有纳米级贵金属和二氧化硅内核的中空二氧化硅亚微米球及其制备方法
US20120152845A1 (en) * 2010-05-27 2012-06-21 Vanderbilt University Porous silica-metal organic composite adsorbents and methods of making and using the same
CN105617979B (zh) * 2016-03-09 2019-01-18 清华大学 一种改性介孔二氧化硅吸附剂及其制备方法与应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011168484A (ja) * 2000-08-09 2011-09-01 British American Tobacco (Investments) Ltd 多孔性炭素
JP2006206397A (ja) * 2005-01-28 2006-08-10 National Institute For Materials Science 炭素多孔体、炭素多孔体を製造する方法、吸着剤および生体分子素子
JP2007205927A (ja) * 2006-02-02 2007-08-16 Showa Denko Kk シリカ系充填剤の製造方法
JP2008120633A (ja) * 2006-11-13 2008-05-29 Shiseido Co Ltd 球状多孔質シリカ、その製造方法及びカラム充填剤
JP2009132607A (ja) * 2007-11-28 2009-06-18 Samsung Sdi Co Ltd 中空のカプセル構造体およびその製造方法
JP2011525468A (ja) * 2008-06-10 2011-09-22 ナショナル・リサーチ・カウンシル・オブ・カナダ 多孔質炭素球の制御可能な合成及びその電気化学的用途
WO2010100914A1 (ja) * 2009-03-04 2010-09-10 株式会社日立ハイテクノロジーズ 液体クロマトグラフ及び分析方法
JP2013003065A (ja) * 2011-06-20 2013-01-07 Gl Sciences Inc 多孔質体およびその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20230029620A1 (en) 2023-02-02
CN114868016B (zh) 2023-11-28
JPWO2021132178A1 (ja) 2021-07-01
CN114868016A (zh) 2022-08-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4117403B2 (ja) 生体高分子の単離及び精製方法
JPH07501223A (ja) 核酸を単離する装置及び方法
US6465640B1 (en) Method and device for purifying nucleic acids
WO1995021177A1 (de) Verfahren zur herstellung endotoxinfreier oder an endotoxin abgereicherter nucleinsäuren und/oder oligonucleotide für die gentherapie
EP1578526A1 (de) Adsorbermaterial für blut-, blutplasma- und albuminreinigungsverfahren
WO2017174016A1 (zh) 血液灌流器医用高分子微球吸附剂及其制备方法
WO2002034374A1 (fr) Membrane hydrophylisee et procede d'hydrophylisation
EP3286313A1 (de) Vorrichtung und verfahren zur automatisierten extraktion von nukleinsäuren
DE10344820B4 (de) Adsorptionsmembranen, Verfahren zur Herstellung derselben und Verwendung der Adsorptionsmembranen in Vorrichtungen
JPH01503689A (ja) 親水性ポリマによって変性された無機限外濾過または微孔性濾過膜およびその製造方法
JP4297148B2 (ja) 核酸回収装置及び核酸回収方法
WO2021132178A1 (ja) 生体試料中に存在する低分子物質の抽出方法
JP2007244375A (ja) リボ核酸の分離精製方法
Köse et al. PolyGuanine methacrylate cryogels for ribonucleic acid purification
DE60300356T2 (de) Ein Verfahren zur Trennung und Reinigung von RNA
DE10147463B4 (de) Verfahren zur Herstellung eines Absorbers, Absorber und dessen Verwendung
DE102017007808A1 (de) Proteinreinigungsvorrichtung
WO2001038516A1 (en) Method for purifying plasmid dna by anion-exchange chromatography
CN113244901B (zh) 一种吸附树脂-聚合物多孔膜及其制备方法和应用
WO2002089975A1 (de) Adsorbentien zur perfusion von blut und deren herstellungsverfahren
JP4904973B2 (ja) 核酸回収方法、核酸回収装置、並びに核酸供給装置
CA2514981A1 (en) Use of recombinant albumin in dialysis after liver failure
JP2009042074A (ja) 吸着担体及び吸着担体の製造方法
DE2601930A1 (de) Verfahren und mittel zum abtrennen von molekuelen
US20240116026A1 (en) Vacuum driven gel filtration method

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20907326

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2021567453

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20907326

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1