WO2021060632A1 - 단일 라멜라 리포좀에 포집된 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 세포외막단백질 용액을 이용한 효과적인 피부 침투 및 미용 효과 증대 방법 - Google Patents

단일 라멜라 리포좀에 포집된 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 세포외막단백질 용액을 이용한 효과적인 피부 침투 및 미용 효과 증대 방법 Download PDF

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WO2021060632A1
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liposome
protein solution
extracellular membrane
present
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PCT/KR2020/002723
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신관우
김창호
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서강대학교산학협력단
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    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention was made by the project number 2019018055 (2018R1A6A1A03024940) under the support of the Ministry of Education, and the research management institution for the project is the Korea Research Foundation, the name of the research project is the University Research Center Support Project in the field of science and engineering, and the name of the research project is a molecular self-assembly-based functional artificial.
  • the leading institution is the Sogang University Industry-Academic Cooperation Foundation
  • the research period is 2018.06.01 ⁇ 2027.02.28.
  • the present invention relates to an effective method for preventing skin aging or improving wrinkles using an extracellular membrane protein solution collected in a single lamella liposome.
  • Collagen is a protein found in most animals, and is the most common protein as a structural support for the body that makes up the flesh and connective tissues of mammals.
  • the basic component unit of collagen is the tropocollagen protein.
  • Tropocollagen is composed of three polypeptide chains of the same size. Each of these chains is wound around each other to form a superhelical cable or triple-helix structure. In tropocollagen, each of the three chains consists of a conjugate of about 1,000 amino acids. Different types of collagen are classified according to the types of polypeptide chains that make up tropocollagen, the basic unit of collagen fibers.
  • collagen types I, II, III and IV among about 20 types of various types known so far. Some of these types of collagen have the most common form of regular fibril. In addition, more than 90% of collagen protein is used in the human body to form the structure of our body's tissues, skin, bones, tendons, and ligaments.
  • collagen I type is the most common collagen in the human body.
  • the structure of type I collagen was first known by Wyckoff via X-rays.
  • the correlation between the molecular structure and mechanical properties of fibrous tissues was confirmed by Parry.
  • an electron density map of a specific molecular structure composed of a triple helical structure of tropocollagen constituting collagen was collected in a hexagonal shape was confirmed by Orgel.
  • the present inventors have tried to uniformly manufacture fibrils of an extracellular matrix protein that is self-assembled in various tissues of an organism and has a unique structure. As a result, it was found that when the extracellular membrane protein fibrils are prepared by applying an electric field to the extracellular membrane protein solution, the finest fibrils that have not been previously reported can be produced.
  • the skin has a multi-layered structure and can be largely divided into epidermis, dermis and subcutaneous fat layers.
  • the skin barrier known as Stratum Corneum is present at the outermost part of the epidermis. This stratum corneum only prevents the evaporation of water from the skin by forming a high-dimensional arrangement of the lipid bilayer (intercellular lipids). Rather, it plays an important role in protecting the skin and body from external stimuli.
  • stratum corneum skin barrier
  • the present inventors have made intensive research efforts to develop a method capable of improving the low absorption rate of extracellular matrix proteins.
  • the extracellular membrane protein solution is collected and used in a single lamella liposome, it can be more simply and easily absorbed into the living body, as well as protecting the skin from the acidic extracellular membrane protein solution, and in vivo.
  • the present invention was completed by finding that it can promote the production of extracellular membrane protein (raw) fibers having anti-aging or wrinkle-improving activity in the skin dermis.
  • a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising a solution of extracellular membrane protein collected in a single lamella liposome.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing skin aging or improving wrinkles using a single lamella liposome in which an extracellular membrane protein solution is collected.
  • the present invention relates to a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising a solution of extracellular matrix protein collected in a single lamella liposome, and a method for preventing skin aging or improving wrinkles using the same.
  • One aspect of the present invention relates to a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles, comprising an extracellular membrane protein solution collected in a single lamella liposome.
  • liposome means having a form of liposome used to stably deliver physiologically active ingredients and maximize the penetration effect in the fields of pharmaceuticals, cosmetics and food.
  • Lamella means having a double-layer structure made of two unit layers.
  • single lamellar liposome in the present specification means having a liposome form of a single membrane structure.
  • the single lamella liposomes are small unilamellar liposomes (SUVs) having a diameter of 10 to 100 nm, and large single lamella liposomes having a diameter of 100 to 1,000 nm, depending on the size (diameter).
  • SUVs small unilamellar liposomes
  • LUVs large single lamella liposomes
  • GUVs giant unilamellar liposomes
  • the single lamellar liposome of the present invention may be obtained by collecting an extracellular membrane protein solution, which will be described below.
  • the diameter of a single lamella liposome should be such that it can collect an appropriate amount of an extracellular membrane protein solution that can effectively act on skin penetration and skin aging prevention/wrinkle improvement.
  • the diameter of the single lamellar liposome of the present invention is 10 to 500 nm, 10 to 400 nm, 10 to 300 nm, 10 to 200 nm, 10 to 100 nm, 20 to 500 nm, 20 to 400 nm, 20 to 300 nm , 20 to 200 nm, 20 to 100 nm, 30 to 500 nm, 30 to 400 nm, 30 to 300 nm, 30 to 200 nm, 30 to 100 nm, 40 to 500 nm, 40 to 400 nm, 40 to 300 nm , 40 to 200 nm or 40 to 100 nm.
  • a single lamella liposome may be prepared by a mixture containing phospholipids and cholesterol.
  • the extracellular membrane protein solution may be prepared by dissolving the extracellular membrane protein.
  • the extracellular membrane protein solution can be prepared by dissolving the extracellular membrane protein in an acidic solution (eg, hydrochloric acid or acetic acid) and adjusting the pH by adding an alkaline solution (eg, an aqueous sodium hydroxide solution).
  • an alkaline solution eg, an aqueous sodium hydroxide solution.
  • the extracellular membrane protein is collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, heparin, keratin and/or fibrin. It may be, for example, may be collagen, but is not limited thereto.
  • the extracellular membrane protein can be obtained experimentally or commercially from various tissues of various mammals.
  • the mammal may be a human, cow, horse, sheep, pig, rabbit, goat, mouse, hamster, or rat, and may be, for example, a bovine or a rat, but is not limited thereto. .
  • the tissue may be tendon, ligament, skin (or dermis), cornea, cartilage, bone, blood vessel, visceral or intervertebral disc, and may be, for example, the dermis inside the skin.
  • the pH of the extracellular membrane protein solution may be 1 to 4.
  • an extracellular membrane protein eg, collagen
  • fibril/fibers having a size of several hundred nm or more are generally produced at a high pH (pH 6 to 8)
  • the skin absorption rate is inevitably low.
  • an acidified extracellular membrane protein solution is used to increase the skin absorption rate, it cannot penetrate deep into the skin because it is neutralized and easily forms fibrils/fibers when passing through the epidermis or epidermis. It also has an important factor.
  • the extracellular membrane protein solution of pH 1 to 4 is trapped in a single lamella liposome, it can protect the skin when it penetrates even though it shows acidity, and the phospholipids constituting the liposome are neutralized when fibril is generated inside the skin. It has the advantage of being able to play a role.
  • the extracellular membrane protein solution can be obtained by the method described above, and since there is no side effect even if an excessive amount is administered, the weight ratio can be selected and carried out within an appropriate range to achieve efficacy or activity.
  • the weight may be determined according to the diameter (size) of the single lamella liposome in which the extracellular membrane protein solution is collected.
  • encapsulation refers to encapsulating a delivery material in order to encapsulate it efficiently in vivo.
  • the single lamellar liposome of the present invention has the advantage of maximizing the skin penetration effect by dissolving several types of poorly soluble substances and stabilizing unstable substances.
  • the extracellular membrane protein solution collected in the single lamella liposome of the present invention The extracellular membrane protein solution is included in a single lamella liposome to further improve the skin penetration effect of the extracellular membrane protein solution, so that it can be effectively used for preventing skin aging or improving wrinkles.
  • the cosmetic composition according to the present invention may include ingredients commonly used in cosmetic compositions, for example, sequestering agents, active ingredients (eg, Sodium Hyaluronate and Tocopheryl Acetate), preservatives, thickeners, and It may include a conventional adjuvant, such as a fragrance, and/or a carrier, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition according to the present invention may be prepared in the form of a formulation common in the art, for example, an emulsified formulation or a solubilized formulation.
  • a formulation common in the art for example, an emulsified formulation or a solubilized formulation.
  • the emulsified formulation include nutrient lotion, cream, and essence.
  • the solubilized formulation include softening lotion.
  • the cosmetic composition of the present invention may be prepared in the form of an adjuvant that can be applied topically or systemically used in the field of dermatology by containing a dermatologically acceptable medium or base in addition to cosmetics.
  • Suitable cosmetic formulations include, for example, solutions, gels, solid or paste anhydrous products, emulsions obtained by dispersing the oil phase in an aqueous phase, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes), nonionic It may be provided in the form of a vesicle dispersant, cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or conceal stick. In addition, it may be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
  • the cosmetic composition of the present invention may further include fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softeners, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, Cosmetics or skin such as fillers, sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or any other ingredients commonly used in cosmetics It may contain adjuvants commonly used in the scientific field. In addition, the above components may be introduced in an amount generally used in the field of dermatology.
  • Products to which the cosmetic composition of the present invention can be added include, for example, astringent lotion, softening lotion, nutrient lotion, various creams, essences, packs, and cosmetics such as foundations, and cleansing, face wash, soap, treatments, and beauty liquids. Etc.
  • Another aspect of the present invention relates to a method for preventing skin aging or improving wrinkles, comprising the following steps:
  • the step of applying an electric field by applying an electric field is a step of applying an electric field by applying an electric field.
  • the preparation of a single lamella liposome in which the extracellular membrane protein solution of the present invention is collected can be made through various methods, for example, by stirring a mixture containing phospholipid and cholesterol together, drying, and then extruding. However, it is not limited thereto.
  • the preparation of a single lamella liposome has an advantage that can be carried out under various conditions (eg, pressure, number of times, etc.) depending on the desired particle size.
  • the contacting step is a process of contacting a single lamella liposome in which the object and the extracellular membrane protein solution are collected.
  • the contact may be to contact a single lamella liposome in which the extracellular membrane protein solution is collected with the skin of a subject. Accordingly, a single lamella liposome in which the extracellular membrane protein solution is collected deep into the skin of the subject may be absorbed (permeated).
  • the electric field application step is a process of promoting the production of extracellular membrane protein fibrils or fibers by applying an electric field to the extracellular membrane protein solution collected in a single lamellar liposome.
  • the step of applying the electric field may be to apply the electric field to the solution of the extracellular membrane protein collected in a single lamella liposome absorbed subcutaneously.
  • the present invention can provide a method for preventing skin aging or improving wrinkles with high efficiency by the above steps.
  • the term "electric field” refers to a time-varying magnetic field surrounded by electrically charged particles.
  • the electric field is a force applied to an electrically charged object surrounding an electrically charged particle. Its qualitative definition is a vector field with SI units of Newtons per coulomb (NC -1 ) or volts per meter (Vm -1 ).
  • the SI unit in the electric field is kgms -3 A -1 .
  • the strength or magnitude of the field at the known point is the value applied to the positive test charge of 1 coolum for the direction of the field given by the direction of the force. That is, the electric field includes all of the forces having an electric charge applied to the extracellular membrane protein solution of the present invention.
  • the electric field may be a DC electric field, an AC electric field, or a mixed electric field thereof.
  • the extracellular membrane protein fibrils whose production is promoted by the application of an electric field may be tropocollagen.
  • tropocollagen is a basic unit of a collagen fibrous structure, and three polypeptide strands of a left-helix structure form a triple-helix or superhelical cable structure.
  • the extracellular membrane protein fibrils are arranged in different combinations and concentrations in various tissues to provide different organizational characteristics, and form a bundle between fibrils to have a thickness of several hundred nanometers to several micrometers. It is made of fiber.
  • the fibrils or fibers may have a diameter of 1 to 10 nm.
  • the method may include the following steps:
  • the method for preventing skin aging or improving wrinkles of the present invention uses the above-described cosmetic composition and components in common, descriptions of the common contents in relation to the composition are omitted in order to avoid undue complexity in the present specification.
  • the present invention relates to a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles, including a solution of extracellular membrane proteins collected in a single lamella liposome, and a method for preventing skin aging or improving wrinkles using the same.
  • a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles including a solution of extracellular membrane proteins collected in a single lamella liposome, and a method for preventing skin aging or improving wrinkles using the same.
  • the present invention by collecting and using the extracellular membrane protein solution as a single lamella liposome, it is possible to increase the skin absorption rate and control the production of extracellular membrane protein fibrils in the skin dermis in vivo, so that it can be effectively used for preventing skin aging or improving wrinkles. There is an advantage to be able to.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing a method of promoting the generation of collagen fibril by an electric field according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 is a diagram illustrating whether or not collagen fibrils are produced according to a pH condition for an extracellular membrane protein solution prepared according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 3 is a schematic diagram showing a method of preparing a single lamella liposome according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 4 is a diagram illustrating the effect of promoting collagen fibril/fiber generation according to pH conditions when an electric field is applied to a single lamella liposome in which an extracellular membrane protein solution prepared according to an embodiment of the present invention is collected.
  • FIG. 5 is a diagram illustrating the permeability of a single lamella liposome prepared according to an embodiment of the present invention into a tissue.
  • a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising a solution of extracellular matrix protein collected in a single lamella liposome.
  • a collagen type I (from Fisher Scientific, Rat Tail, 8-11mg/ml) solution extracted by dissolving in 0.02M acetic acid was dissolved in 0.01M hydrochloric acid (HCl) and adjusted to the desired concentration (1 mg/ml). , 0.1M NaOH was added to raise the pH from 1 to 8.
  • ITO Indium Tin Oxide
  • Lamella liposomes prepared in Preparation Example 2 were filled in the spacer inner space of the Example, and 2.5 V/cm AC was applied to the opposite electrode for 1 hour (2.5 V/cm DC 5 minutes). Approved. In order to confirm the state of the collagen, the image was confirmed using a transmission electron microscope, and the results are shown in FIGS. 4A and 4B.
  • a single lamella liposome in which the extracellular membrane protein solution of the present invention is collected a single lamella liposome in which the extracellular membrane protein solution is collected in a pH condition in which the extracellular membrane protein fibrils are not generated is applied to the skin, thereby improving skin penetration efficiency. Not only can it be increased further, but also the generation of extracellular membrane protein fibrils/fibers can be controlled through the application of an electric field (AC, DC, and a mixed electric field thereof) after penetration of the skin, so it can be effectively used for preventing skin aging or improving wrinkles. Means.
  • AC electric field
  • the single lamella liposome of the present invention it was confirmed whether the single lamella liposome can penetrate the skin by observing whether or not the internal penetration into the bottom tissue (transwell assay) through the penetration of endothelial cells (transwell assay). .
  • endothelial cells and primary tissue cells are cultured in the inner and outer containers of a transwell culture plate (Corning), and separately prepared below.
  • Primary tissue cells cultured cells obtained from animals or human tissues such as mice
  • a single lamellar liposome to which the fluorescently expressed ECM was attached was added to the inner container to check whether it penetrated the closely cultured endothelial cells, and the results are shown in FIG. 5B.
  • a general buffer solution (MES buffer or Tris buffer) not containing the extracellular membrane protein solution was used instead of the buffer solution containing the extracellular membrane protein solution of Preparation Example 2, and
  • Preparation Example 2 Phospholipids (DOPS(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)) that give negative (-) charges outside of single lamella liposomes instead of (DOPC(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)) It was prepared in the same manner as in Preparation Example 2, except that phospho-L-serine) (sodium salt)) was used.
  • DOPS 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
  • the prepared lamella liposome was collected with a wide-bore pipette tip and redispersed in a buffer solution.
  • the types of the buffer solution for redistribution are as follows, and in the case of collagen-liposomes (COL-vesicles), collagen fibrils/fiber fluorescence expression dye in a single lamella liposome dispersion having a negative (-) charge dispersed in the MES buffer.
  • a collagen type I solution containing was added, and each liposome was incubated for 24 hours at 37°C so that the fluorescent-expressing ECM could adhere well (pH increased from 4.2 to 7.5):
  • MES buffer 0.3 M glucose, 2mM MES, pH 4.2
  • Tris buffer 0.3 M glucose, 2mM Trsi-HCl, pH 7.4
  • collagen-liposome (COL-vesicles) showed high fluorescence expression, fibronectin-liposome (FN-vesicles) and laminin (laminin)-liposome (LN- vesicles) in the order of decreasing fluorescence intensity.
  • the present invention relates to an effective method for preventing skin aging or improving wrinkles using an extracellular membrane protein solution collected in a single lamella liposome.

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Abstract

본 발명은 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이를 이용한 피부 노화 방지 또는 주름 개선방법에 관한 것이다. 본 발명은 세포외막단백질 용액을 단일 라멜라 리포좀으로 포집하여 사용함으로써, 피부 흡수율을 높이고 생체 내 피부 진피에서 세포외막단백질 원섬유의 생성을 조절할 수 있는바, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 용도를 위하여 효과적으로 사용될 수 있는 장점이 있다.

Description

단일 라멜라 리포좀에 포집된 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 세포외막단백질 용액을 이용한 효과적인 피부 침투 및 미용 효과 증대 방법
본 발명은 교육부의 지원 하에서 과제번호 2019018055 (2018R1A6A1A03024940)에 의해 이루어진 것으로서, 상기 과제의 연구관리전문기관은 한국연구재단, 연구사업명은 이공분야 대학중점연구소지원사업, 연구과제명은 분자 자가 조립 기반 기능성 인공세포 구현, 주관기관은 서강대학교 산학협력단, 연구기간은 2018.06.01 ~ 2027.02.28이다.
본 특허출원은 2019년 09월 27일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제10-2019-0119856호에 대하여 우선권을 주장하며, 상기 특허출원의 개시 사항은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
본 특허출원은 2019년 12월 11일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제10-2019-0164939호에 대하여 우선권을 주장하며, 상기 특허출원의 개시 사항은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
본 발명은 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액을 이용한 효과적인 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법에 관한 것이다.
콜라겐은 대부분 동물에서 발견되는 단백질로, 특히 포유동물의 살과 결합조직을 구성하는 몸의 구조적 지지체로 가장 일반적인 단백질이다. 콜라겐의 기본 성분 단위는 트로포콜라겐 (tropocollagen) 단백질이다.
트로포콜라겐은 동일한 크기의 세 가지 폴리펩티드 사슬로 구성되어있다. 이 같은 사슬들은 각각 서로 주위로 감겨서 초나선형 (superhelical) 케이블 또는 삼중 나선형 (triple-helix) 구조를 형성한다. 트로포콜라겐에서 세 가지 사슬 각각이 약 1,000 개의 아미노산의 결합체로 이루어져 있다. 콜라겐 섬유상의 기본 단위인 트로포콜라겐을 이루는 폴리펩타이드 사슬의 종류에 따라 각각 다른 종류의 콜라겐으로 구분된다.
가장 많이 발견되는 콜라겐의 종류로는, 지금까지 알려진 약 20여 가지의 다양한 종류 중에서 콜라겐 타입 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ 및 Ⅳ 등이 있다. 이와 같은 몇 가지 타입의 콜라겐이 가장 일반적인 형태인 규칙적인 원섬유 (fibril)의 형태를 갖는다. 또한, 우리 몸의 조직과 피부, 뼈, 힘줄, 인대 등의 구조를 이루는데 콜라겐 단백질의 90% 이상이 인체 내에서 사용하고 있다.
콜라겐 중에서 인체 내에서 가장 많이 존재하는 콜라겐은 콜라겐 I 타입이다. 1935년에 콜라겐 I 타입의 구조가 Wyckoff에 의하여 X-선을 통해 처음 알려졌다. 1988년에 조직에 따른 섬유상의 분자구조와 기계적인 특성의 상관관계는 Parry에 의해 확인되었다. 2001년에는 콜라겐을 구성하는 트로포콜라겐의 삼중 나선형의 구조가 육각형 (hexagonal) 형태로 모여서 구성된 구체적인 분자구조형태의 전자밀도 지도가 Orgel에 의해 확인되었다.
이러한 콜라겐에 대한 논문들의 대부분은 동물이나 인체 조직에서 주어지는 각각의 다른 환경조건을 갖도록 하여 최종적인 콜라겐의 섬유구조로서 성장을 확인하거나, 결합되는 섬유구조체 내부의 단백질의 미세한 변화들을 관찰하는 미시적인 연구에 한정되어 있으며, 실제 산업화에 활용될 수 있는 결정적인 변화 조건인 섬유 콜라겐 원섬유 혹은 원섬유가 패킹된 섬유의 결합 두께의 조절, 특히 균일한 크기로 제어 할 수 있는 방법은 제시하지 못하였다.
이에, 본 발명자들은 생물체의 다양한 조직에서 자기조립되어 고유한 구조를 갖는 세포외막단백질 (Extracellular Matrix Protein)의 원섬유를 균일하게 제조하고자 노력하였다. 그 결과, 세포외막단백질 용액에 전기장 (electric field)을 인가하여 세포외막단백질 원섬유를 제조하는 경우, 종래에 보고되지 않은 가장 미세한 원섬유를 제조할 수 있음을 규명하였다.
한편, 피부는 다층구조를 가지며 크게 표피, 진피 및 피하지방층으로 나눌 수 있다. 이 중 표피의 가장 바깥쪽에는 각질층 (Stratum Corneum)으로 알려진 피부 장벽이 존재하는데, 이러한 각질층은 세포들이 지질 이중층 (세포 간 지질)의 고차원적인 배열로 이루어짐으로써, 피부로부터 수분이 증발하는 것을 막을 뿐 아니라, 외부의 자극으로부터 피부 및 신체를 보호하는 중요한 역할을 한다.
하지만, 이러한 각질층 (피부 장벽)은 피부에 적용되는 활성 성분들의 피부 흡수율을 감소시키고, 활성 성분들이 면역세포가 있는 진피층까지 도달하지 못하도록 하기 때문에, 활성 성분들을 실제 피부 치료제로 사용하였을 때, 그 효능이 제대로 발휘되지 못하는 문제가 있다.
이에, 피부 흡수율을 증가 시키기 위해서 나노 사이즈 입자를 통한 피부 침투 및 흡수율을 증대시키는 노력이 많이 이뤄지고 있다. 구체적으로, 피부의 진피는 대부분의 무기 물질로 이루어진 나노 사이즈 입자들을 효과적으로 차단하는 피부 장벽으로 작용한다. 때문에, 무기 물질로 이루어진 나노 입자로는 피부 침투율을 높일 수 없는데, 40 nm의 직경을 가지는 나노 입자나 그보다 작은 나노 입자의 경우는 피부 침투가 가능했다는 논문 결과들이 보고되고 있다.
2006년 Annika는 피부를 통과 후 세포실험에서의 검출 실험을 통해서 40 nm 사이즈의 나노 입자는 피부 투과하여 확인되었으나, 750 nm 또는 1,500 nm 사이즈의 나노 입자는 투과하지 못했다고 보고하였다. 또한, 2008년 Kimiko 그룹은 골드 나노 입자 (GoldNP)을 통한 피부 투과성 실험을 통하여, Jessica 그룹은 퀀텀 닷 (Quantum Dots)을 통한 피부투과성 실험을 통하여, 금속/무기 물질의 나노 입자를 통한 피부투과성 정도를 확인하였다. 그 결과, 골드 나노 입자의 경우는 15 nm 사이즈의 경우는 쉽게 피부를 투과하였으나 대략 200 nm 사이즈의 경우는 현저히 투과율이 떨어졌다. 퀀텀 닷의 경우도 40 nm 사이즈 이하의 경우에서만 피부 투과를 보여주었다.
본 발명자들은 세포외막단백질 (extracellular matrix protein)이 갖는 낮은 흡수율을 개선할 수 있는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 세포외막단백질 용액을 단일 라멜라 (Unilamella) 리포좀에 포집하여 사용하는 경우, 보다 간편하고 용이하게 생체 내로 흡수시킬 수 있을 뿐만 아니라, 산성을 가지는 세포외막단백질 용액으로부터 피부를 보호하며, 생체 내 피부 진피에서 피부 노화 방지 또는 주름 개선 활성을 갖는 세포외막단백질 (원)섬유의 생성을 촉진시킬 수 있음을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀을 이용한 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 단일 라멜라 (Unilamella) 리포좀에 포집된 세포외막단백질 (extracellular matrix protein) 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이를 이용한 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 양태는 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에서 용어 "리포좀"은 제약, 화장품 및 식품 분야에서 생리활성 성분을 안정하게 전달하고, 침투 효과를 극대화하는 데에 사용되는 리포좀의 형태를 갖는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "라멜라 (Lamella)"는 2 매의 단위막에 의해 만들어진 이중막구조를 갖는 것을 의미한다.
따라서, 본 명세서에서 용어 "단일 라멜라 리포좀"은 단일막구조의 리포좀 형태를 갖는 것을 의미한다.
본 발명에 있어서 단일 라멜라 리포좀은 사이즈 (직경)에 따라, 10 내지 100 nm의 직경을 갖는 소형 단일 라멜라 리포좀 (small unilamellar liposomes; SUVs), 100 내지 1,000 nm의 직경을 갖는 대형 단일 라멜라 리포좀 (large unilamellar liposomes; LUVs), 1 내지 200 um의 직경을 갖는 거대 단일 라멜라 리포좀 (giant unilamellar liposomes; GUVs)으로 분류될 수 있다.
본 발명의 단일 라멜라 리포좀은 하기에서 설명할 세포외막단백질 용액을 포집한 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 단일 라멜라 리포좀의 직경은 피부 투과 및 피부 노화 방지/주름 개선에 효과적으로 작용할 수 있는 적정량의 세포외막단백질 용액을 포집할 수 있는 정도의 크기여야 할 것이다.
따라서, 본 발명의 단일 라멜라 리포좀의 직경은 10 내지 500 nm, 10 내지 400 nm, 10 내지 300 nm, 10 내지 200 nm, 10 내지 100 nm, 20 내지 500 nm, 20 내지 400 nm, 20 내지 300 nm, 20 내지 200 nm, 20 내지 100 nm, 30 내지 500 nm, 30 내지 400 nm, 30 내지 300 nm, 30 내지 200 nm, 30 내지 100 nm, 40 내지 500 nm, 40 내지 400 nm, 40 내지 300 nm, 40 내지 200 nm 또는 40 내지 100 nm인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 단일 라멜라 리포좀은 인지질 및 콜레스테롤을 포함하는 혼합물에 의해 제조될 수 있다.
본 발명에 있어서 세포외막단백질 용액은 세포외막단백질을 용해하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 세포외막단백질 용액은 산성 용액 (예를 들어, 염산 또는 아세트산)에 세포외막단백질을 용해하고, 알칼리 용액 (예를 들어, 수산화 나트륨 수용액)을 첨가함으로써 pH를 조절하여 제조될 수 있다. 알칼리 용액의 첨가에 따라 세포외막단백질은 반응 가능한 상태가 되며, 이는 부분적으로 단백질 간의 자기조립 (self-assembly) 반응이 상태가 된 것을 의미한다.
본 발명에 있어서 세포외막단백질은 콜라겐 (collagen), 엘라스틴 (elastin), 라미닌 (laminin), 피브로넥틴 (fibronectin), 비트로넥틴 (vitronectin), 헤파린 (heparin), 케라틴 (keratin) 및/또는 피브린 (fibrin)인 것일 수 있으며, 예를 들어, 콜라겐인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 세포외막단백질은 다양한 포유동물의 다양한 조직으로부터 실험적으로 또는 상업적으로 수득할 수 있다.
본 발명에 있어서 포유동물은 인간, 소, 말, 양, 돼지, 토끼, 염소, 마우스, 햄스터 또는 랫트일 수 있으며, 예를 들어, 소(bovine) 또는 랫트인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 조직은 힘줄, 인대, 피부 (또는 진피), 각막, 연골, 뼈, 혈관, 내장 또는 추간판인 것일 수 있으며, 예를 들어, 피부내부의 진피인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 세포외막단백질 용액의 pH는 1 내지 4인 것일 수 있다. 세포외막단백질 (예를 들어, 콜라겐)의 경우 일반적으로 높은 pH (pH 6 내지 8)에서 수백 ㎚ 크기 이상의 원섬유(fibril)/섬유(fiber)를 생성하기 때문에, 피부 흡수율이 낮을 수 밖에 없다. 피부 흡수율을 높이기 위하여 산성화 된 세포외막단백질 용액을 사용하는 경우라도 표피 혹은 표피 통과 시에 중화되어 쉽게 원섬유/섬유가 형성되기 때문에 피부 깊숙이 침투할 수 없고, 또한, 강산성 용액은 피부를 손상시키는 위험적인 요인도 가지고 있다. 따라서, pH 1 내지 4의 세포외막단백질 용액은 단일 라멜라 리포좀에 포집되어 있기 때문에 산성을 나타냄에도 불구하고 침투 시 피부를 보호할 수 있고, 상기 리포좀을 구성하는 인지질은 피부 내부에서 원섬유 생성 시 중화 역할을 할 수 있는 장점이 있다.
본 발명에 있어서 세포외막단백질 용액은 앞서 기술한 방법으로 수득할 수 있으며, 과량 투여하여도 부작용이 없으므로, 그 중량비는 효능 또는 활성을 달성하기 위해 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다. 바람직하게는 세포외막단백질 용액이 포집된 상기 단일 라멜라 리포좀의 직경 (사이즈)에 맞게 중량이 결정될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "포집 (encapsulation)"은 전달물질을 둘러싸서 효율적으로 생체 내로 함입시키기 위해 캡슐화하는 것을 말한다.
따라서, 본 발명의 단일 라멜라 리포좀은 여러 종류의 난용성 물질을 녹임과 동시에 불안정한 물질을 안정화시켜 피부 침투 효과를 극대화하는 장점을 가지고 있는바, 본 발명의 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액은 단일 라멜라 리포좀에 세포외막단백질 용액이 포함되어 세포외막단백질 용액의 피부 침투 효과를 보다 개선시킴으로써, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 용도를 위하여 효과적으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 금속이온봉쇄제, 활성성분 (예를 들어, Sodium Hyaluronate 및 Tocopheryl Acetate 등), 방부제, 점증제 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및/또는 담체를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 당 업계에서 일반적인 제형, 예를 들어, 유화 제형이나 가용화 제형 등의 형태로 제조될 수 있다. 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등을 예로 들 수 있다. 가용화 제형으로는 유연화장수를 예로 들 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.
적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들어, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형 (리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱 (conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.
본 발명의 다른 일 양태는 다음의 단계를 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법에 관한 것이다:
세포외막단백질 (extracellular matrix protein) 용액이 포집된 단일 라멜라 (Unilamellar) 리포좀을 대상과 접촉시키는 접촉 단계; 및
전기장 (electric field)을 인가하여 전기장 인가 단계.
본 발명의 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀의 제조는 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으며, 예를 들어, 인지질 및 콜레스테롤을 포함하는 혼합물을 함께 교반하고, 건조 후 압출 (extrusion)하여 제조하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 단일 라멜라 리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건(예를 들어, 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있는 이점이 있다.
본 발명을 각 단계별로 구체적으로 설명하도록 한다.
본 발명에 있어서 접촉 단계는 대상과 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀을 접촉시키는 과정이다.
본 발명에 있어서 접촉은 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀을 대상의 피부에 접촉시키는 것일 수 있다. 이에 따라, 대상의 피부 깊숙이 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀이 흡수 (침투)될 수 있다.
본 발명에 있어서 전기장 인가 단계는 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액에 전기장을 인가하여 세포외막단백질 원섬유 또는 섬유의 생성을 촉진시키는 과정이다.
본 발명에 있어서 전기장 인가 단계는 피하로 흡수된 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액에 전기장을 인가하는 것일 수 있다.
본 발명은 상기 단계에 의해 효율성 높은 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법을 제공할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "전기장"은 전기적으로 전하된 입자가 둘러싸여 있는 시가변적 (time-varying) 자기장을 의미한다. 전기장은 전기적으로 전하된 물체에 전기적으로 전하된 입자를 둘러싼 힘 (force)이 가해지는 것이다. 이의 정성적 (qualitative) 정의는 쿨룸 (coulomb, NC-1) 당 뉴턴의 SI 유닛을 갖는 벡터장 (vector field) 또는 미터 (metre) 당 볼트 (volts)(Vm-1)이다. 전기장에서의 SI 유닛은 ㎏ms-3A-1이다. 기지점에서의 장 (field)의 세기 (strength) 또는 규모 (magnitude)는 힘의 방향에 의해 주어지는 장의 방향에 대한 1 쿨룸의 양성 시험전하 (test charge)에 가해지는 값이다. 즉, 상기 전기장은 본 발명의 세포외막단백질 용액에 가해지는 전기적인 전하를 갖는 힘을 모두 포함한다.
본 발명에 있어서 전기장은 직류 전기장, 교류 전기장 또는 이의 혼합 전기장일 수 있다.
본 발명에 있어서 전기장 인가에 의해 생성이 촉진되는 세포외막단백질 원섬유는 트로포콜라겐 (tropocollagen)일 수 있다.
본 발명에 있어서 트로포콜라겐은 콜라겐 섬유구조체 (fibrous structure)의 기본 단위이며, 왼쪽-나선형 구조의 3개 폴리펩타이드 가닥이 3중 오른쪽-나선형 구조 (triple-helix) 또는 초나선형 (superhelical) 케이블 구조를 갖는다.
본 발명에 있어서 세포외막단백질 원섬유는 다양한 조직에서 다른 조합 및 농도로 배열되어 (arranged) 다른 조직적 특성을 제공하며, 원섬유 간의 번들 (bundle)을 구성하여 수백 나노미터에서 수 마이크로미터의 두께인 파이버 (fiber)로 만들어진다.
본 발명에 있어서 원섬유 또는 섬유는 1 내지 10 ㎚의 직경을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 있어서 상기 방법은 다음의 단계를 포함하는 것일 수 있다:
세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀을 대상의 피부에 도포하는 단계;
전기장을 인가하여 세포외막단백질 원섬유 또는 섬유의 생성을 촉진시키는 단계.
본 발명의 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법은 상술한 화장료 조성물과 구성성분을 공통으로 하기 때문에, 상기 조성물의 관계에서 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명은 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이를 이용한 피부 노화 방지 또는 주름 개선방법에 관한 것이다. 본 발명은 세포외막단백질 용액을 단일 라멜라 리포좀으로 포집하여 사용함으로써, 피부 흡수율을 높이고 생체 내 피부 진피에서 세포외막단백질 원섬유의 생성을 조절할 수 있는바, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 용도를 위하여 효과적으로 사용될 수 있는 장점이 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 전기장에 의한 콜라겐 원섬유 (fibril)의 생성 촉진 방법을 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 세포외막단백질 용액에 대하여, pH 조건에 따른 콜라겐 원섬유 생성 여부를 확인한 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 단일 라멜라 리포좀을 제조하는 방법을 나타낸 모식도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀에 대하여, 전기장 인가 시 pH 조건에 따른 콜라겐 원섬유/섬유 생성 촉진 효과를 확인한 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 단일 라멜라 리포좀에 대하여, 조직 내부 침투성을 확인한 도이다.
단일 라멜라 (Unilamellar) 리포좀에 포집된 세포외막단백질 (extracellular matrix protein) 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
제조예 1. 세포외막단백질 용액의 제조
0.02M 아세트산 (Acetic Acid)에 용해하여 추출한 콜라겐 타입 I (Fisher Scientific, Rat Tail 유래, 8 내지 11mg/ml) 용액을 0.01M 염산 (HCl)에 용해하여 원하는 농도 (1 mg/ml)로 조절하고, 0.1M NaOH를 첨가하여 pH 1에서 pH 8까지 올려주었다.
실험예 1. pH 조건에 따른 원섬유/섬유 생성 여부 확인
제조예 1에서 제조된 pH 1에서 pH 8까지의 세포외막단백질 용액에 대하여, 투과 전자현미경 (Transmission Electron Microscope; TEM)을 이용하여 원섬유 (fibril) 및 섬유 (fiber)의 생성여부를 확인하여, 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 확인할 수 있듯이, pH 1에서 pH 4 범위에서는 원섬유(fibril)/섬유(fiber)가 생성되지 않는 것을 알 수 있었다. 즉, 상기 pH 조건에서 세포외막단백질 (콜라겐)이 반응 가능한 (대기) 상태가 되는 것으로, 부분적으로 단백질 간에 자기조립 (self-assembly) 반응이 진행된 것을 의미한다.
제조예 2. 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀의 제조
실험예 1의 결과를 기초로, 제조예 1에서 제조된 원섬유가 생성되지 않는 pH 1 내지 pH 4 의 세포외막단백질 용액을 버퍼용액으로 사용하여 미니-사출기 (Mini-Extruder, Avanti)를 이용한 압출법 (Extrusion)으로 단일 라멜라 리포좀을 제조하였다 (구체적인 방법은 도 3 참조). 구체적인 조성은 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.
성분 함량(중량%)
인지질 (Phospholipid) 85.88
콜레스테롤 (Cholesterol) 14.12
제조예 3. 전기장 제어 장치
ITO (Indium Tin Oxide)가 코팅된 2장의 유리판을 2 ㎝ X 2 ㎝로 절단한 후, 구리테이프를 이용하여 각각의 ITO 유리판 끝에 전원을 연결시킬 부분을 제작하였다. ITO가 코팅된 부분을 마주보게 하여 리포좀을 담지할 공간을 제공할 스페이서 (spacer)를 삽입하였다. 이때, 스페이서는 절연소재를 이용하였다.
실험예 2. pH 조건에 따른 콜라겐 원섬유/섬유 생성 촉진 효과 확인
제조예 2에서 준비된 라멜라 리포좀 (각 pH 1, 2, 3 및 4)을 실시예의 스페이서 내부 공간에 채워 넣고, 마주 본 전극에 2.5 V/㎝ AC를 1시간 (2.5 V/㎝ DC 5분) 동안 인가해주었다. 콜라겐의 상태를 확인하기 위해 투과 전자현미경을 이용해 이미지를 확인하여, 그 결과를 도 4a 및 도 4b에 나타내었다.
도 4a 및 도 4b에서 확인할 수 있듯이, pH 3 조건에서 전기장이 인가되지 않은 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀 (Control)에서는 콜라겐 원섬유가 여전히 생성되지 않고 단일 라멜라 리포좀만 존재함을 알 수 있으나, pH 1 내지 3 조건에서 전기장이 인가된 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀 (본 발명의 방법)에서는 리포좀은 사라지고 콜라겐 원섬유/섬유 구조를 얻을 수 있음을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명의 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀을 사용하는 경우 세포외막단백질 원섬유가 생성되지 않은 pH 조건의 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀을 피부에 도포, 피부 침투 효율을 더욱 증대시킬 수 있을 뿐만 아니라 피부 침투 후 전기장 인가 (AC, DC, 이의 혼합 전기장)를 통하여 세포외막단백질 원섬유/섬유의 생성을 조절할 수 있으므로, 이를 피부 노화 방지 또는 주름 개선 용도로 효과적으로 사용할 수 있음을 의미한다.
실험예 3. 본 발명의 단일 라멜라 리포좀의 조직 내부 침투성 확인
본 발명의 단일 라멜라 리포좀에 대하여, 내피세포 (endothelial cell) 투과를 통한 바닥 조직 (Tissue)으로의 내부 침투 여부를 관찰 (트랜스웰 분석; transwell assay)함으로써 단일 라멜라 리포좀의 피부 침투 가능 여부를 확인하였다.
구체적으로, 트랜스웰 배양 플레이트 (Corning 사)의 내부 및 외부 용기에 내피세포 및 프라이머리 조직 셀 (Primary tissue cell, 마우스와 같은 동물 혹은 사람 조직으로부터 얻어진 cell을 배양)을 배양하고, 하기에서 별도로 제조된 형광 발현된 ECM이 부착된 단일 라멜라 리포좀을 내부 용기에 첨가하여 촘촘히 배양된 내피세포에 대한 투과 여부를 확인하여, 그 결과를 도 5b에 나타내었다.
형광 발현된 ECM이 부착된 단일 라멜라 리포좀은 제조예 2의 세포외막단백질 용액을 포함하는 버퍼용액 대신 세포외막단백질 용액을 포함하지 않는 일반 버퍼용액 (MES 버퍼 혹은 트리스 버퍼)을 사용하고, 제조예 2의 인지질 (DOPC(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine))대신 단일 라멜라 리포좀 외부에 마이너스(-) 전하를 가지게 하는 인지질 (DOPS(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine)(sodium salt))을 사용한 것을 제외하고, 제조예 2와 동일한 방법으로 제조하였다.
제조된 라멜라 리포좀은 와이드-보오 피펫 팁 (wide-bore pipette tip)으로 수집하여 버퍼용액에 재 분산시켰다. 이때, 재 분산용 버퍼용액의 종류는 하기와 같으며, 콜라겐-리포좀 (COL-vesicles)의 경우 MES 버퍼에 분산된 마이너스(-) 전하를 가지는 단일 라멜라 리포좀 분산액에 콜라겐 원섬유/섬유 형광 발현 염료를 포함하는 콜라겐 타입 I 용액을 추가하였고, 각 리포좀은 형광 발현 ECM이 잘 부착될 수 있도록 37℃에서 24 시간 동안 인큐베이션하였다 (pH는 4.2에서 7.5로 증가시킴):
- 콜라켄 (collagen)-리포좀 (COL-vesicles): MES 버퍼 (0.3 M glucose, 2mM MES, pH 4.2)
- 라미닌 (laminin)-리포좀 (LN-vesicles) 및 피브로넥틴 (fibronectin)-리포좀 (FN-vesicles): 트리스 버퍼 (0.3 M glucose, 2mM Trsi-HCl, pH 7.4)
도 5b에서 확인할 수 있듯이, 특히 콜라켄 (collagen)-리포좀 (COL-vesicles)의 경우 높은 형광 발현을 나타내었으며, 피브로넥틴 (fibronectin)-리포좀 (FN-vesicles) 및 라미닌 (laminin)-리포좀 (LN-vesicles) 순으로 형광 세기가 약해지는 것을 알 수 있었다.
이러한 결과는 단일 라멜라 리포좀이 내피세포를 투과함으로써 효과적으로 내부 침투할 수 있음을 의미하며, 이에 따라, 본 발명의 세포외막단백질 용액이 포집된 단일 라멜라 리포좀 또한 효과적으로 피부 내부로 침투할 수 있을 것으로 기대된다.
본 발명은 단일 라멜라 리포좀에 포집된 세포외막단백질 용액을 이용한 효과적인 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법에 관한 것이다.

Claims (10)

  1. 단일 라멜라 (Unilamellar) 리포좀에 포집된 세포외막단백질 (extracellular matrix protein) 용액을 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 세포외막단백질은 콜라겐 (collagen), 엘라스틴 (elastin), 라미닌 (laminin), 피브로넥틴 (fibronectin), 비트로넥틴 (vitronectin), 헤파린 (heparin), 케라틴 (keratin) 및 피브린 (fibrin)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 세포외막단백질은 콜라겐인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 세포외막단백질 용액의 pH는 1 내지 4인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 단일 라멜라 리포좀의 직경은 10 내지 400 nm인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
  6. 다음의 단계를 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법:
    세포외막단백질 (extracellular matrix protein) 용액이 포집된 단일 라멜라 (Unilamellar) 리포좀을 대상과 접촉시키는 접촉 단계; 및
    전기장 (electric field)을 인가하여 전기장 인가 단계.
  7. 제6항에 있어서, 상기 전기장은 직류 전기장, 교류 전기장 또는 이의 혼합 전기장인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 세포외막단백질은 콜라겐 (collagen), 엘라스틴 (elastin), 라미닌 (laminin), 피브로넥틴 (fibronectin), 비트로넥틴 (vitronectin), 헤파린 (heparin), 케라틴 (keratin) 및 피브린 (fibrin)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법.
  9. 제6항에 있어서, 상기 세포외막단백질 용액의 pH는 1 내지 4인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법.
  10. 제6항에 있어서, 상기 원섬유 또는 섬유의 직경은 1 내지 10 ㎚인 것인, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법.
PCT/KR2020/002723 2019-09-27 2020-02-26 단일 라멜라 리포좀에 포집된 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 세포외막단백질 용액을 이용한 효과적인 피부 침투 및 미용 효과 증대 방법 WO2021060632A1 (ko)

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