WO2020105883A1 - 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법 - Google Patents

로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법

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WO2020105883A1
WO2020105883A1 PCT/KR2019/014361 KR2019014361W WO2020105883A1 WO 2020105883 A1 WO2020105883 A1 WO 2020105883A1 KR 2019014361 W KR2019014361 W KR 2019014361W WO 2020105883 A1 WO2020105883 A1 WO 2020105883A1
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WO
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rotigotine
organic solvent
fine particles
polymer
halogen organic
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PCT/KR2019/014361
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사홍기
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주식회사 씨트리
이화여자대학교 산학협력단
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    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing rotigotine-containing polymer fine particles, and more specifically, rotigotine content is remarkably high, and it shows excellent compatibility with the polymer even at a high drug content, and prevents the formation of rotigotine crystals on the surface of the water phase or fine particles.
  • the present invention relates to a method for manufacturing rotigotine-containing polymer fine particles, which inhibits aggregation of the fine particles during the drying process, the residual organic solvent is remarkably lowered, and is easily redispersed after drying.
  • Rotigotine, (-)-5,6,7,8-tetrahydro-6- [propyl- [2- (2-thienyl) ethyl] amino] -1naphthalenol is a dopamine agonist (non -ergoline dopamine agonist, used in the treatment of Parkinson's disease and restless leg syndrome.
  • transdermal drug delivery systems As an example, a transdermal absorbent comprising a styrene-based adhesive comprising a hydrocarbon resin and a rotigotine-containing adhesive layer composed of a fatty acid, a support layer and a release layer (registration patent No. 10-1686987) and an adhesive matrix contain a hot melt adhesive.
  • transdermal absorbents (Registration No. 10-1041512) in which the active substance rotigotine is dispersed or partially or completely dissolved.
  • it was often difficult to maintain the intended plasma concentration of rotigotine because the percutaneous absorbents attached by the carelessness of patients with dopamine-related diseases were easily detached or detached. Accordingly, there is a need to develop an injection-type preparation of rotigotine.
  • Rotigotine injectable formulations developed to date include microsphere compositions containing rotigotine prepared by a solvent evaporation method using methylene chloride, a halogen solvent (US Patent 9265835, Korean Patent 10-1481643).
  • the methylene chloride used in the preparation of the composition has excellent ability to dissolve the hydrophobic polymer material that forms the fine particles, and can easily make an emulsion by not mixing with water, and has a low boiling point (boiling point is about 40 ° C) to produce fine particles It has been widely used for easy removal of solvents, but it is known as a carcinogen as an ICH class 2 halogen organic solvent.
  • the object of the present invention is to use a non-halogen organic solvent and based on a solvent extraction method, while the content of rotigotine is remarkably high, the formation of rotigotine crystals on the surface of the water phase or the particle is prevented, and the aggregation of the fine particles during the drying process is suppressed. It is to provide a method for producing rotigotine-containing polymer fine particles in which residual organic solvent is remarkably lowered and is easily redispersed after drying.
  • Another object of the present invention is that the content of rotigotine is remarkably high, the formation of rotigotine crystals on the surface of the aqueous phase or fine particles is prevented, the aggregation of fine particles is suppressed during the drying process, residual organic solvents are significantly lowered and redispersed after drying. It is easy to provide rotigotine-containing polymer fine particles produced by the above-described manufacturing method.
  • a method for producing polymer particles containing rotigotine comprising the steps of secondary extraction of a non-halogen organic solvent to obtain polymer particles.
  • the manufacturing method of the present invention further comprises, after step iv), if necessary, v) redispersing the polymer fine particles in an aqueous phase to further cure the fine particles, and / or vi) recovering and drying the polymer fine particles. can do.
  • Rotigotine or a pharmaceutically acceptable salt and polymer thereof is dissolved in a non-halogen organic solvent to form a dispersed phase.
  • rotigotine or a pharmaceutically acceptable salt thereof is used as a drug.
  • rotigotine is a concept comprising rotigotine (in free base form) and rotigotine derivatives.
  • the pharmaceutically acceptable salt of rotigotine is formed between the free base of rotigotine and hydrochloric acid, acetic acid, phosphoric acid, sulfuric acid, lactic acid, or citric acid.
  • Preferred derivatives and pharmaceutically acceptable salts of rotigotine are rotigotine acetate, rotigotine benzoate, rotigotine propionate, rotigotine butyrate, and rotigotine iso-butyrate, and their hydrochloride salts.
  • the polymer is not particularly limited as long as it is a polymer compound capable of forming rotigotine and fine particles, but is preferably a biodegradable polymer, and more preferably a hydrophobic polyester polymer.
  • the polymer include polylactic acid (PLA), poly (lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), polylactide, polylactide-co-glycolide, polyglycolic acid, polyphosphazine, polyiminocarbonate, poly Phosphoester, polyanhydride, polyorthoester, copolymer of lactic acid / glycolic acid and caprolactone, polycaprolactone, polyhydroxyvalate, polyhydroxybutyrate, polyamino acid, lactic acid It can be selected from the group consisting of copolymers of amino acids and mixtures thereof.
  • non-halogen organic solvents belonging to ICH class 3 are used as the dispersion solvent. They are much more preferred solvents in GMP due to their relatively lower toxicity compared to the ICH class 2 solvent group, and are also suitable for human injection formulations such as particulates with a residual limit of less than 0.5%.
  • non-halogen organic solvents include ethyl acetate, methyl acetate, methyl formate, ethyl formate, isopropyl formate, propyl formate ( propyl formate), methyl propionate, ethyl propionate, and the like.
  • ethyl acetate, ethyl formate or methyl propionate can be used.
  • non-halogen organic solvents having a water solubility of 5 to 15%, and most preferably, it is selected alone or in combination from ethyl acetate, ethyl formate, and methyl propionate. Can be used.
  • the added weight ratio (w / w) of the polymer and rotigotine is preferably used at 1: 0.05 to 1: 1.
  • the dispersed phase from step i) is added to the aqueous phase to form an o / w emulsion.
  • the aqueous phase (continuous phase) is an aqueous solution prepared by mixing water and an emulsifier.
  • the emulsifier is polyvinyl alcohol (PVA), polysorbate 20, polysorbate 60, polysorbate 65, polysorbate 80, polysorbate 85, lecithin, sorbitan stearate, monoglyceride, diglyceride It may be a ride or sodium lauryl sulfate. Most preferably, it is polyvinyl alcohol (PVA).
  • PVA polyvinyl alcohol
  • the emulsifier can be used at a concentration of 0.05% to 5% (w / v), preferably 0.1% to 2.2% (w / v).
  • the production method of the present invention may include dissolving the aqueous phase by adding a dispersing solvent (non-halogen organic solvent) at a capacity below the saturation concentration. Dispersing the dispersion solvent in the aqueous phase below the saturation concentration before mixing the dispersed phase with the aqueous phase prevents the organic solvent present in the dispersed phase from rapidly spreading to the aqueous phase when mixing the dispersed phase and the aqueous phase to form a temporarily stable emulsion. There is an advantage that the particle size distribution of the droplets is uniform.
  • a dispersing solvent non-halogen organic solvent
  • the step of forming the emulsion may be performed by adding the dispersed phase to the aqueous phase, mixing and stirring.
  • the stirring may be a low energy mixer, a rotar / stator mixer and a static mixer and a high energy mixer, a homogenizer membrane emulsifier or a microfluidizer.
  • the mixing ratio (volume ratio) of the dispersed phase and the aqueous phase can be adjusted as much as possible depending on the emulsification method of mixing the dispersed phase and the aqueous phase.
  • the volume ratio of the dispersed phase and the aqueous phase is 1: 1 to 1: 100, and when preparing a high energy mixer or individual dispersed phase droplets, A water phase of 100 times or more of the dispersed phase volume may be used.
  • the emulsion is manufactured in an oil-in-water (O / W) form because rotigotine is a hydrophobic drug.
  • the non-halogen organic solvent which is a dispersion solvent, is first extracted from the oil-in-water emulsion to form embryonic semi-solid fine particles.
  • the primary extraction of the non-halogen organic solvent is performed by mixing the emulsion formed in step ii) with the aqueous phase in which the emulsifier is dissolved and stirring for 2 to 30 minutes. Due to this process, a part of the organic solvent is extracted into the water phase, and the emulsion droplets are cured in a semi-solid state to form embryonic semisolid microspheres.
  • the capacity of the water phase added to the emulsion in this step can be used in a water solubility of 0.5 to 5 times the water solubility of the non-halogen organic solvent used, and is preferably about 1 times or so.
  • 'water solubility' means the amount of water when a certain amount of an organic solvent is dissolved in water at a saturated concentration.
  • the emulsifier can be used at a concentration of 0.05% to 1% (w / v), and is preferably used at a concentration of 0.1% to 0.5% (w / v).
  • the non-halogen organic solvent is extracted to obtain rotigotine-containing polymer fine particles.
  • Secondary extraction of the non-halogen organic solvent is performed by adding the suspension containing embryonic semi-solid fines from step iii) to the aqueous phase in which the emulsifier is dissolved and stirring at room temperature to 40 ° C. for 1 hour or more. Due to this process, the organic solvent is extracted into the aqueous phase, and the embryo semi-solid fine particles are cured to form rotigotine-containing polymer fine particles.
  • the capacity of the aqueous phase in this step can be used at a water solubility of 3 times or more preferably in the non-halogen organic solvent used.
  • the emulsifier concentration and stirring in this step is as defined in step iii) above.
  • the present invention may further include, if necessary, redispersing rotigotine-containing polymer fine particles into an aqueous phase to further harden the fine particles.
  • This step is performed by re-dispersing by stirring the rotigotine-containing polymer fine particles from step iv) to collect the fine particles and then adding the pre-warmed emulsifier to the dissolved aqueous phase and stirring for 2.5 to 5 hours. . Due to such a process, the polymer fine particles can obtain fully cured fine particles in which agglomeration is minimized in a drying process.
  • the pre-heating means that the temperature of the aqueous phase is preliminarily prepared at a temperature below the boiling point of the organic solvent at room temperature, and is preferably 30 to 35 ° C. If the temperature is further increased, the stirring time can be reduced, but it is preferable to adjust the temperature and the stirring time in consideration of the effect on the glass transition temperature of the particulate-forming material used or the content of the enclosed drug.
  • the emulsifier concentration and stirring in this step is as defined in step iii) above.
  • the present invention may further include, if necessary, recovering and drying the polymer fine particles from step iv) or step v).
  • This step may be performed by vacuum drying the particulate suspension by collecting the particulate through filtration or centrifugation, or by redispersing it in an aqueous solution containing a cryoprotectant.
  • a method for producing polymer particles containing rotigotine comprising the steps of extracting a non-halogen organic solvent to obtain polymer particles.
  • the manufacturing method of the present invention further comprises, after step c), if necessary, d) redispersing the polymer fine particles in an aqueous phase to further cure the fine particles, and / or e) recovering and drying the polymer fine particles. can do.
  • Steps a), c), d) and e) are as defined in steps i), iv), v) and vi), respectively.
  • step b it is carried out in the same manner as in step ii) except that an organic solvent is essentially added to the aqueous phase.
  • the rotigotine-containing polymer microparticles produced according to the production method of the present invention have a very high content of enclosed rotigotine of 30% or more, and the formation of drug crystals on the surface of the aqueous phase or microparticles is prevented, and the microparticles are uniform in a smooth spherical shape. It is formed, and the aggregation of the fine particles is prevented, and the concentration of the residual organic solvent is less than 0.5%, which is significantly less than the limit required for drug regulatory approval, and can be used as a human injection form (Examples 1 to 7).
  • the present invention is prepared according to the above manufacturing method, the content of rotigotine is remarkably high, rotigotine crystals are prevented from forming on the surface of the aqueous phase or fine particles, and the fine particles have a perfect spherical shape, , The aggregation of the fine particles is prevented, and the residual organic solvent is remarkably lowered.
  • the present invention also provides an injection formulation comprising the rotigotine-containing polymer.
  • the rotigotine-containing polymer microparticles according to the present invention are sealed with a high content of rotigotine, and rotigotine is dispersed in a polymer microparticle matrix at a molecular level and has a suitability to completely dissolve.
  • the rotigotine-containing polymer microparticles according to the present invention can prevent the phenomenon of drug crystal formation on the water phase or the deposition of drug crystals on the surface of the microparticles, thereby minimizing the initial drug burst effect, and residual organic solvents are subject to permission regulations. It is a significantly lower concentration that is met.
  • the polymer fine particles containing a hydrophobic drug are prepared according to the solvent extraction method, a large amount of water (quenching liquid) is used to extract the organic solvent.
  • quenching liquid water
  • the particles are made of particles or wrinkles / groves are formed on the surface of the particles, according to the manufacturing method according to the present invention, the effect of producing uniform particles having a smooth and complete spherical shape is obtained. have.
  • the polymer microparticles according to the present invention have an advantage of easily redispersing in water after drying by minimizing aggregation between the microparticles during the drying process even if it contains a high content of rotigotine.
  • the manufacturing method according to the present invention can use a very simple low-energy mixing device / equipment (mixer) as well as a high-energy mixing device for agitation when forming an emulsion and extracting a solvent, which is a great advantage in terms of commercialization / practicability in the pharmaceutical industry
  • FIG. 1 is an optical microscope photograph of an oil-in-water emulsion (o / w emulsion) during a process for manufacturing rotigotine-containing polymer fine particles by a conventional solvent evaporation method.
  • (a) is 2.5 hours of emulsion agitation
  • (b) is an optical microscope photograph of 5 hours of emulsion agitation (the size of the picture bar is 100 ⁇ m).
  • FIG. 2 is an enlarged optical microscope photograph of a particulate suspension prepared by another conventional solvent evaporation method. Black arrows indicate particulates, and white arrows indicate rotigotine crystals in the aqueous phase (picture bar size 20 ⁇ m).
  • Figure 3 is a schematic diagram showing the manufacturing principle of rotigotine-containing polymer fine particles by a conventional solvent removal method.
  • FIG. 4 is an optical microscope photograph of ethyl acetate as a dispersed organic solvent and observing the emulsion during the manufacturing process of rotigotine-containing polymer microspheres by a conventional solvent removal method.
  • (a) is the result of observing the emulsion with an optical microscope 10 minutes after adding NaOH
  • (b) is (a) enlarged the size of the picture to observe the drug crystals.
  • (a) and (b) The sizes of the bars shown in the photographs indicate 100 ⁇ m and 20 ⁇ m, respectively.
  • FIG. 5 is an optical microscope photograph of methyl propionate used as a dispersing organic solvent and observing the emulsion during the manufacturing process of rotigotine-containing polymer microspheres by a conventional solvent removal method.
  • (a) is the result of observing the emulsion with an optical microscope 10 minutes after adding NaOH
  • (b) is (a) enlarged the size of the picture to observe the drug crystals.
  • (a) and (b) The sizes of the bars shown in the photographs indicate 100 ⁇ m and 20 ⁇ m, respectively.
  • FIG. 6 is a photograph showing the results of observing redispersibility in water of rotigotine-containing polymer microparticles prepared by using an optical microscope when the initial load of rotigotine of Example 1 is 150 mg.
  • (a) is 8% mannitol aqueous solution
  • FIG. 7 is a photograph showing the results of observing redispersibility in water of rotigotine-containing polymer fine particles prepared in the case where the initial load of rotigotine of Example 1 is 180 mg with an optical microscope.
  • (a) is 8% mannitol aqueous solution
  • Example 8 is an electron micrograph of rotigotine-containing polymer microparticles prepared using 8% mannitol + 1% low molecular weight CMC aqueous solution of Example 1. a) and b) are rotigotine initial loads of 150 mg, c) and d) are rotigotine initial loads of 180 mg.
  • Example 10 is a DSC result showing the thermal behavior of the fine particles of Example 1.
  • FIG. 11 is a thermogram showing the results of thermal mass spectrometry of fine particles having an rotigotine content of 31.2% (when using 8% mannitol aqueous solution) of Example 1.
  • FIG. 12 is a photograph showing the results of observing redispersibility in water of rotigotine-containing polymer fine particles prepared in the case where the initial load of rotigotine of Example 3 is 200 mg by an optical microscope.
  • (a) is 8% mannitol aqueous solution
  • FIG. 13 is an electron microscope photograph of rotigotine-containing polymer microparticles prepared using 8% mannitol + 1% low molecular weight CMC aqueous solution of Example 3 (initial loading of rotigotine is 200 mg).
  • Example 14 is a DSC result showing the thermal behavior of the rotigotine-containing polymer fine particles of Example 3.
  • the initial loading of rotigotine is the result of 200 mg PLGA particulate.
  • FIG. 15 is a thermogram showing the results of thermal mass spectrometry of Example 3 rotigotine-containing polymer fine particles (when rotigotine content is 35.9%).
  • Figure 16 is an optical microscope photograph of the oil-in-water emulsion (o / w emulsion) during the manufacturing process of rotigotine-containing polymer fine particles of Example 4 (the size of the picture bar is 100 ⁇ m).
  • Example 17 is an electron micrograph of the rotigotine-containing fine particles prepared in Example 4 (the size of the picture bar is 10 ⁇ m).
  • thermogram 18 is a thermogram showing the results of thermal mass spectrometry of rotigotine-containing polymer fine particles of Example 4.
  • Figure 19 is an electron micrograph of the rotigotine-containing polymer fine particles prepared in Example 5 (the size of the picture bar is 100 ⁇ m).
  • Example 20 is an electron micrograph of the rotigotine-containing polymer fine particles prepared in Example 6 (the size of the picture bar is 10 ⁇ m).
  • 21 is a result of measuring the particle size distribution of rotigotine-containing polymer fine particles prepared using three non-halogen organic solvents ethyl acetate (a), ethyl formate (b), and methyl propionate (c) as a dispersed organic solvent. .
  • Figure 22 is a non-halogen organic solvent ethyl acetate (a), ethyl formate (b), methyl propionate (c) using three species as a dispersing organic solvent, rotigotine-containing polymer microspheres during the process of manufacturing the emulsion observed optical microscope It is a photograph (the size of the rod is 100 ⁇ m).
  • Rotigotine was used by Rotigotine from Olon Spa, and three non-halogen organic solvents as dispersion phase solvents were Sigma Aldrich's ethyl formate, Avantor Performance Materials 'ethyl acetate, and Glentham Life Sciences' methyl pro. Methyl propionate was used.
  • Polyvinyl alcohol (PVA, 88 mol% hydrolyzed; molecular weight, 25,000 g / mol) was purchased from Polysciences, Inc. and used.
  • Comparative Example 1 Preparation of rotigotine-containing polymer (PLGA) fine particles based on a solvent evaporation method
  • a disperse phase was prepared by dissolving 250 mg of PLGA and 100 mg of rotigotine in 4 ml of a dispersing organic solvent, methylene chloride.
  • the dispersed phase was added dropwise to 40 ml of 0.5% aqueous solution of polyvinyl alcohol (PVA) at 420 rpm to prepare an oil-in-water emulsion (o / w emulsion).
  • PVA polyvinyl alcohol
  • This emulsion was stirred at room temperature for 5 hours, and during stirring, the state of the emulsion was observed using an optical microscope at 2.5 and 5 hours, and the results are shown in FIG. 1.
  • FIG. 1 As shown in FIG. 1, after 2.5 hours, emulsion droplets were seen, and the emulsion droplets were not constant and had very various sizes (heterogeneous) (FIG. 1 (a)). When the emulsion was stirred for 5 hours, numerous rotigotine crystals were observed in the water phase / continuous phase (indicated by arrows in FIG. 1 (b)).
  • rotigotine is not encapsulated inside the polymer fine particles (indicated by black arrows) and is determined in an aqueous phase / continuous phase (in a white arrow) Indicated).
  • the solvent removal method quickly dissolves the organic solvent dissolved in the water phase by injecting an alkali such as NaOH into the oil-in-water (o / w) emulsion to induce a sink condition, so that the organic solvent present in the oil-in-water droplets continues as the water phase.
  • an alkali such as NaOH
  • o / w oil-in-water
  • the solvent removal method quickly dissolves the organic solvent dissolved in the water phase by injecting an alkali such as NaOH into the oil-in-water (o / w) emulsion to induce a sink condition, so that the organic solvent present in the oil-in-water droplets continues as the water phase.
  • an alkali such as NaOH
  • rotigotine PLGA microparticles were prepared by using ethyl acetate and methyl propionate as PLGA dispersion organic solvents and hydrolyzing the organic solvent by adding NaOH.
  • a disperse phase was prepared by dissolving 250 mg of PLGA and 120 mg of rotigotine in 4 ml of ethyl acetate and methyl propionate, respectively, and then dropwise added to 40 ml of 0.5% PVA stirred at 400 rpm to prepare an oil-in-water emulsion. After stirring for 3 minutes, 4 ml of 10N-NaOH was added dropwise to observe the emulsion state over time using an optical microscope, and the results are shown in FIGS. 4 and 5, respectively.
  • Example 1 Polymer fine particles containing rotigotine using ethyl acetate (1)
  • a dispersed phase was prepared by dissolving PLGA 250 mg and rotigotine 150 mg or 180 mg in 4 ml of ethyl acetate. This dispersion phase was added to 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution (water phase / continuous phase) being stirred at 450 rpm, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • the embryo containing semi-solid microparticles was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at a speed of 550 rpm, stirred at room temperature (RT) for 2 hours, and then filtered with Whatman filter paper (grade 1). PLGA particulates were collected.
  • the collected fine particles were redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 30 ° C for 5 hours at 350 rpm, and then filtered and filtered with filter paper to collect 8% mannitol aqueous solution, 8% mannitol and 1% low.
  • aqueous solution containing molecular weight CMC (sodium carboxymethyl cellulose; CMC, molecular weight 90,000) or an aqueous solution containing 8% mannitol and 1% high molecular weight CMC (molecular weight 250,000)
  • CMC sodium carboxymethyl cellulose
  • the rotigotine content and drug encapsulation efficiency (%, EE%) encapsulated in the prepared microparticles were measured as follows:
  • the particulates are collected and vacuum dried, and then 20-30 mg of the particulate sample is placed in a 5 ml glass vial, and 4 ml of tetrahydrofuran is added thereto. The mixture was shaken for 30 minutes to dissolve rotigotine and PLGA. This solution was mixed with 16 ml of rotigotine HPLC analysis mobile phase (2% aqueous phosphoric acid solution: acetonitrile, 6: 4 (v / v)). At this time, the PLGA is precipitated to form a cloudy colloidal dispersion, and the rotigotine remains dissolved.
  • the rotigotine contents enclosed in the PLGA microparticles were 31.2% (at 150 mg rotigotine load) and 34.7% (at 180 mg rotigotine load), respectively.
  • microparticle dose 100 ⁇ drug dose (mg) present in microparticles / microparticle dose (mg) used to measure load
  • Drug encapsulation rate% 100 ⁇ actual load / theoretical load
  • the drug encapsulation rates calculated according to the above formula were 83.1 ⁇ 1.5% (at 150 mg rotigotine load) and 82.9 ⁇ 1.3% (at 180 mg rotigotine load), respectively.
  • the shape of the dried fine particles was observed using an electron microscope (SEM; model JSM-5200; Jeol Inc., Tokyo, Japan).
  • a double-sided carbon tape is attached on a specimen mount, and a lyophilized cake of rotigotine-containing polymer fine particles prepared using 8% mannitol + 1% low molecular weight CMC aqueous solution is redispersed in water and dried. After the particles were uniformly distributed and fixed, the particles were coated with gold in an argon atmosphere using an SC7620 sputter coater (VG Microtech, West Wales, UK), and the shapes of the particles were examined using an electron microscope. 8 is shown.
  • the rotigotine-containing PLGA microparticles prepared according to the production method of the present invention have a completely spherical shape.
  • no precipitates / contaminants suspected of rotigotine crystals were found on the surface of the PLGA microparticles.
  • DSC Differential scanning calorimetry
  • Each DSC sample was taken in the range of about 5-10 mg, placed in a Tzero aluminum pan, sealed with a Tzero hermetic lid, and the DSC sample was exposed to 25-160 ° C. At this time, the rate of temperature rise was set to 10 ° C / min. Nitrogen gas was used in the balance chamber and the sample cell chamber to purge at a rate of 40 and 60 ml / min, respectively. DSC results are shown in FIGS. 9 and 10, respectively.
  • the PLGA powder used as a particulate forming material is an amorphous polymer showing a glass transition temperature (Tg) between about 40 and 42 ° C (a), and the rotigotine powder before encapsulation is about 100 It showed a thermal behavior showing a melting point in the vicinity of °C (b).
  • thermogravimetric analyzer TA Instruments DE, USA
  • the particulates are collected, vacuum-dried, and then TGA samples of dried particles of about 10 mg are placed in a platinum pan, and then maintained in an equilibrium state at 25 ° C. for 5 minutes. It was then heated to 550 ° C at a rate of 20 ° C / min.
  • the mass spectrometry of the TGA sample according to the temperature change was carried out automatically using the TA Universal Analysis 2000 software program, and the result was shown in Table 2 (after freeze-drying), indicating the decrease in solvent observed until reaching 100 ° C. It is shown in the residual solvent amount (%) in the observed PLGA microparticles.
  • FIG. 11 shows the results in which the mass that decreases when the PLGA particulate containing rotigotine lyophilized using an 8% mannitol aqueous solution is heated to 100 ° C. is expressed as a percentage of the sample.
  • the particulate organic solvent (ethyl acetate) content prepared according to the production method of the present invention were all less than 0.33%.
  • One of the important issues in the PLGA particulate drug application is the amount of residual solvent used in the manufacture of the particulate.
  • the manufacturing method of the present invention has an advantage that a separate drying device or a special treatment is not required to satisfy the residual organic solvent standard.
  • aqueous / continuous phase prepared by dissolving 1 ml of ethyl acetate in 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution in advance, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • the embryonic semi-solid particulate-containing suspension (embryonic microsphere suspension) was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at a speed of 550 rpm, stirred at room temperature (RT) for 2 hours, and then filtered with filter paper to collect PLGA fine particles. .
  • the collected particulates are redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 30 ° C for 5 hours at 350 rpm, and then filtered and filtered with filter paper to redistribute the collected PLGA particulates with 8% mannitol aqueous solution, followed by particulate suspension in liquid nitrogen.
  • the particulates collected through filtration were vacuum dried and the encapsulation rate of the dried particulates was calculated in the same manner as in 1-2 of Example 1 above.
  • the drug (rotigotine) encapsulation rate was also high at 79.3 ⁇ 1.2%.
  • a dispersed phase was prepared by dissolving PLGA 250 mg and rotigotine 180 mg or 200 mg in 4 ml of ethyl formate.
  • the dispersion phase was added to 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution being stirred at 450 rpm, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • the embryo containing semi-solid microparticles was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at a speed of 550 rpm, stirred at room temperature (RT) for 2 hours, and then filtered with filter paper to collect PLGA microparticles. .
  • the collected fine particles were redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 30 ° C for 5 hours at 350 rpm, and then filtered and filtered with filter paper to collect 8% mannitol aqueous solution, 8% mannitol and 1% low. After redispersing with an aqueous solution containing a molecular weight CMC or an aqueous solution containing 8% mannitol and 1% high molecular weight CMC, the suspension of particles was lyophilized in liquid nitrogen to obtain final rotigotine-containing polymer (PLGA) particles.
  • PLGA final rotigotine-containing polymer
  • the content of rotigotine encapsulated in the PLGA microparticles was 32.4% (initial loading of rotigotine 180 mg) and 35.9% (in the initial loading of rotigotine 200 mg), respectively.
  • the drug encapsulation rate calculated according to the above formula was 77.5 ⁇ 2.2% (at the initial loading of rotigotine 180mg) and 80.8 ⁇ 1.8% (at the initial loading of rotigotine 200mg), respectively.
  • the rotigotine-containing PLGA fine particles were redispersed in water without shaking without using a device such as a sonicator, and no free rotigotine crystals encapsulated in the PLGA fine particles were found. From these results, it can be seen that even in the case of the rotigotine PLGA microparticles produced by Example 3, it is possible to overcome the coagulation phenomenon between the microparticles, which often occurs during drying. Therefore, when there is no fine particle aggregation when injecting the fine particles to the patient, there is an advantage that can be administered to the patient.
  • Example 3 shows that rotigotine is well dispersed at the molecular level in the PLGA particulate matrix and has good compatibility with PLGA.
  • the particulate residual organic solvent (ethyl formate) content prepared in Example 3 was 0.16%. As a result of this, it can be confirmed that the fine particles of Example 3 have a very low residual organic solvent content of 0.5% or less, which is the limit of the permitted concentration.
  • a dispersed phase 250 mg of PLGA and 180 mg of rotigotine were dissolved in 4 ml of ethyl formate to prepare a dispersed phase.
  • the dispersed phase was added to an aqueous solution prepared by dissolving 1 ml of ethyl formate being stirred at 550 rpm in 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution in advance and stirring for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • the embryo containing semi-solid microparticles was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at a speed of 500 rpm, stirred at room temperature (RT) for 2 hours, and then filtered with filter paper to collect PLGA microparticles. .
  • the collected particulates are redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 30 ° C for 5 hours at 350 rpm, and then filtered and filtered with filter paper to redistribute the collected PLGA particulates with 8% mannitol aqueous solution, followed by particulate suspension in liquid nitrogen.
  • PLGA rotigotine-containing polymer
  • the particulates collected through filtration were vacuum dried and the drug content and encapsulation rate of the dried particulates were calculated in the same manner as in 1-2 of Example 1 above.
  • the drug (rotigotine) content was 35.4% and the encapsulation rate was also high at 82.3%.
  • a dispersed phase was prepared by dissolving 250 mg of PLGA and 120 mg of rotigotine in 4 ml of methyl propionate. This dispersion phase was added to an aqueous solution prepared by dissolving 1 ml of methyl propionate being stirred at 550 rpm in 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution in advance and stirring for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • embryonic semi-solid particulate-containing suspension (embryonic microsphere suspension) was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at a speed of 550 rpm, stirred at 30 ° C. for 2 hours, and filtered with filter paper to collect PLGA fine particles.
  • the collected particulates are redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 30 ° C for 350 hours at 350 rpm, and then filtered with filter paper to vacuum collected PLGA particulates to obtain the final rotigotine polymer (PLGA) particulates.
  • PLGA rotigotine polymer
  • a dispersed phase was prepared by dissolving PLGA 250 mg and rotigotine 150 mg in 4 ml of methyl propionate.
  • the dispersed phase was added to 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution being stirred at 450 rpm, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • 50 ml of 0.1% PVA aqueous solution was added to the oil-in-water emulsion and stirred for 5 minutes at a stirring speed of 450 rpm to extract methylpropionate present in the emulsion droplet into the water phase, and the emulsion droplets were embryonic semisolid microspheres.
  • the dispersed phase was added to 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution being stirred at 450 rpm, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • 50 ml of 0.1% PVA aqueous solution was added to the oil-in-water emul
  • embryonic semi-solid particulate-containing suspension (embryonic microsphere suspension) was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at a speed of 500 rpm, stirred at 35 ° C. for 2 hours, and filtered with filter paper to collect PLGA fine particles.
  • the collected fine particles are redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 35 ° C for 350 hours at 350 rpm, filtered by filter paper, and redispersed of the collected PLGA fine particles with 8% mannitol aqueous solution, then lyophilized cake was redispersed using 50 ml of distilled water, filtered and collected to collect PLGA fine particles containing rotigotine, followed by vacuum drying to obtain final polymer particles containing rotigotine.
  • the state of the emulsion was observed using an optical microscope, and no rotigotine crystals were observed in the fine particle suspension.
  • the dispersed phase prepared above was added to 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution prepared as above, which is being stirred at 450 rpm, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • the particle size and particle size distribution can be adjusted to a desired size by changing the composition of the fine particles, the composition of the dispersed phase and the aqueous phase, and the emulsification conditions.
  • Example 8 Observation of emulsion during production of rotigotine-containing polymer fine particles using three non-halogen solvents
  • a dispersed phase was prepared by dissolving PLGA 250 mg and rotigotine 120 mg in 3 ml of three non-halogen organic solvents, ethyl acetate, ethyl formate, and methyl propionate, respectively.
  • the dispersed phase was added to 30 ml of 0.5% PVA aqueous solution in which 1 ml of each non-halogen organic solvent was stirred at 550 rpm in advance, and stirred for 5 minutes to prepare an oil-in-water emulsion.
  • the emulsion was added to 200 ml of 0.1% PVA aqueous solution being stirred at 500 rpm, stirred at 30 ° C. for 2 hours, and then filtered with filter paper to collect PLGA particulates.
  • the collected microparticles were redispersed in 100 ml of 0.1% PVA aqueous solution again, stirred at 30 ° C at 350 rpm for 2.5 hours, and then filtered and filtered with filter paper to vacuum-collect the collected rotigotine-containing PLGA microparticles to obtain final rotigotine-containing polymer microparticles.

Abstract

본 발명에서는 로티고틴 함량이 현저히 높고, 높은 약물함량에서도 고분자와 훌륭한 적합성을 보여주며, 수상이나 미립자 표면에 로티고틴 결정이 형성이 방지되고, 건조과정 중 미립자의 응집을 억제할 수 있으며, 잔류 유기용매가 현저히 저하되고 건조 후 재분산이 용이한 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법 및 이로부터 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자가 개시된다.

Description

로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법
본 발명은 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법에 관한 것으로, 더 상세하게는 로티고틴 함량이 현저히 높고, 높은 약물함량에서도 고분자와 우수한 적합성을 보여주며, 수상이나 미립자 표면에 로티고틴 결정의 형성이 방지되고, 건조과정 중 미립자의 응집을 억제하고, 잔류 유기용매가 현저히 저하되고 건조 후 재분산이 용이한 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법 및 이로부터 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자에 관한 것이다.
로티고틴(rotigotine), (-)-5,6,7,8-테트라하이드로-6-[프로필-[2-(2-티에닐)에틸]아미노]-1나프탈레놀인은 도파민 작용제(non-ergoline dopamine agonist)로서 파킨슨병(Parkinson's disease)과 흔들다리증후군(restless legs syndrome)의 치료에 사용된다.
로티고틴의 투여는 주로 경피 약물전달 시스템 (TDS)을 통하여 이루어져 왔다. 그 일예로는 탄화수소 수지를 포함하는 스티렌계 점착제 및 지방산으로 구성된 로티고틴 함유 점착제층, 지지층 및 박리층을 포함하는 경피흡수제제 (등록특허 10-1686987호) 및 접착제 매트릭스가 핫 멜트형 접착제를 함유하며, 그 중에서 작용물질 로티고틴이 분산되어 있거나, 부분적으로 또는 완전히 용해되어 있는 경피흡수제제 (등록특허 10-1041512호) 등이 있다. 그런데 도파민 연관 질환자들의 부주의로 부착된 경피흡수제제가 떨어지거나 떼어내기 쉬워서 의도된 로티고틴의 혈장 농도를 유지하기 어려운 경우가 종종 발생하였다. 이에 로티고틴의 주사형 제제의 개발 필요성이 대두되고 있다.
현재까지 개발된 로티고틴의 주사형 제제로는 할로겐 용매인 메틸렌 클로라이드를 사용하여 용매증발법으로 제조한 로티고틴을 함유하는 미소구체 조성물이 있다(미국특허 9265835호, 한국특허 10-1481643호). 상기 조성물 제조에 사용된 메틸렌 클로라이드는 미립자를 형성하는 소수성 고분자 소재를 용해하는 능력이 탁월하고, 물과 섞이지 않아 유제를 쉽게 만들 수 있으며, 낮은 끓는점 (boiling point는 약 40℃)을 가지고 있어 미립자 제조 도중 용매 제거가 쉬워 많이 사용되어 왔으나, ICH class 2 할로겐 유기용매로서 발암성물질(carcinogen)로 알려져 있으며 대기 중의 오존층을 파괴하는 환경 유해 물질에 속하여 산업체 및 환경규제 행정기관에서는 메틸렌 클로라이드의 사용을 엄격히 통제하고 있으며, 의약품 제품에 잔류하는 메틸렌클로라이드에 대해 엄격히 규제되고 있다. 또한 용매증발법을 기반으로 하는 로티고틴과 같은 소수성 약물의 미립자의 제조공정은 소수성 약물이 미립자 제조공정 도중 수상에 결정으로 석출되거나 미립자 표면에 결정이 침착(deposit)되어 봉입되는 약물의 함량이 감소되는 현상이 발생하였고 미립구 품질에 악영향을 미쳤다 (Birnbaum DT et al., J Control Release 64 (2000) 375-387; Benelli P et al., J Microencapsul 15 (1998) 431-443).
따라서 본 발명의 목적은 비할로겐 유기용매를 사용하고 용매추출법 기반으로 하면서도 로티고틴의 함량이 현저히 높고, 수상이나 미립자 표면에 로티고틴 결정의 형성이 방지되고, 건조과정 중 미립자의 응집을 억제하고, 잔류 유기용매가 현저히 저하되고 건조 후 재분산이 용이한 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 로티고틴의 함량이 현저히 높고, 수상이나 미립자 표면에 로티고틴 결정의 형성이 방지되고, 건조과정 중 미립자의 응집을 억제하고, 잔류 유기용매가 현저히 저하되고 건조 후 재분산이 용이한, 상기 제조방법으로 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은
i) 로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염과 고분자를 비할로겐 유기용매에 용해하여 분산상을 형성하는 단계;
ii) 분산상을 수상에 첨가하여 수중유형 유제를 형성하는 단계;
iii) 비할로겐 유기용매를 1차 추출하여 배아 반고체 미립자를 형성하는 단계; 및
iv) 비할로겐 유기용매를 2차 추출하여 고분자 미립자를 얻는 단계를 포함하는 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법은, 필요에 따라서, 단계 iv) 후에, v) 고분자 미립자를 수상에 재분산하여 미립자를 추가 경화하는 단계, 및/또는 vi) 고분자 미립자를 회수하여 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
단계 i): 분산상 형성
로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염과 고분자를 비할로겐 유기용매에 용해하여 분산상을 형성한다.
본 발명에서 로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이 약물로 사용된다.
본 발명에서 로티고틴은 로티고틴 (유리 염기 형태의) 및 로티고틴 유도체를 포함하는 개념이다. 로티고틴의 약제학적으로 허용가능한 염은 로티고틴의 유리 염기 및 염산, 아세트산, 인산, 황산, 락트산, 또는 시트르산 간에 형성된다. 바람직한 로티고틴의 유도체 및 약제학적으로 허용가능한 염은 로티고틴 아세테이트, 로티고틴 벤조에이트, 로티고틴 프로피오네이트, 로티고틴 부티레이트, 및 로티고틴 이소-부티레이트, 그리고 이들의 염산염이다.
본 발명에서 고분자는 로티고틴과 미립자를 형성가능한 고분자 화합물이면 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 생분해성 고분자이며, 더 바람직하게는 소수성 폴리에스테르계 고분자이다. 상기 고분자의 예로는 폴리락트산(PLA), 폴리(락트산-코-글리콜산)(PLGA), 폴리락타이드, 폴리락타이드-코-글리콜리드, 폴리글리콜산, 폴리포스파진, 폴리이미노카보네이트, 폴리포스포에스테르, 폴리언하이드라이드 (polyanhydride), 폴리오르소에스테르(polyorthoester), 락트산/글리콜산과 카프로락톤의 공중합체, 폴리카프로락톤, 폴리하이드록시발레이트, 폴리하이드록시부티레이트, 폴리아미노산, 락트산과 아미노산의 공중합체 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 가장 바람직하게는 폴리락트산(PLA), 폴리(락트산-코-글리콜산)(PLGA), 폴리락타이드, 폴리락타이드-코-글리콜리드 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.
본 발명에서 분산용매는 ICH class 3에 속하는 비할로겐 유기용매들이 사용된다. 이들은 ICH class 2 용매군에 비하여 상대적으로 훨씬 낮은 독성을 가져서 GMP에서 훨씬 더 선호되는 용매이며, 또한 잔류허가농도 한계가 0.5% 이하로 미립자와 같은 인체 주사 제형에 적합하다. 비할로겐 유기용매의 예로는 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸아세테이트(methyl acetate), 메틸포르메이트(methyl formate), 에틸포르메이트(ethyl formate), 아이소프로필포르메이트(isopropyl formate), 프로필포르메이트(propyl formate), 메틸프로피오네이트(methyl propionate), 에틸프로피오네이트(ethyl propionate) 등이 있다. 바람직하게는 에틸아세테이트, 에틸포르메이트 또는 메틸프로피오네이트를 사용할 수 있다. 바람직하게는 5 내지 15%의 수용해도를 갖는 비할로겐 유기용매 중에서 단독 또는 조합으로 선택하여 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 에틸아세테이트, 에틸포르메이트, 및 메틸프로피오네이트 중에서 단독 또는 조합으로 선택하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 고분자와 로티고틴의 첨가 중량비(w/w)는 1:0.05 ~ 1:1으로 사용하는 것이 바람직하다.
단계 ii): 유제 형성
단계 i)로부터의 분산상을 수상에 첨가하여 수중유형 유제(o/w emulsion)를 형성한다.
본 발명에서 수상(연속상)은 물과 유화제를 혼합하여 제조한 수용액이다.
본 발명에서 유화제는 폴리비닐알코올(PVA), 폴리소베이트 20, 폴리소베이트 60, 폴리소베이트 65, 폴리소베이트 80, 폴리소베이트 85, 레시틴, 소르비탄스테아레이트, 모노글리세라이드, 디글리세라이드 또는 로릴황산나트륨일 수 있다. 가장 바람직하게는 폴리비닐알코올(PVA)이다.
본 단계에서 유화제는 0.05% 내지 5% (w/v) 농도로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 0.1% 내지 2.2% (w/v) 농도로 사용한다.
필요에 따라서, 본 발명의 제조방법은 상기 수상에 분산용매(비할로겐 유기용매)를 포화 농도 이하의 용량으로 첨가하여 용해하는 단계를 포함할 수 있다. 분산상을 수상에 혼화하기 전에 분산용매를 포화농도 이하로 수상에 미리 용해시켜 놓으면 분산상과 수상의 혼합시 분산상에 존재하는 유기용매가 수상으로 급속히 확산되는 것을 방지하여 일시적으로 안정한 유제를 형성하며 또한 유제 방울의 입도 분포가 균일하게 해주는 이점이 있다.
본 유제를 형성하는 단계는 분산상을 수상에 첨가하여 혼합하고 교반하여 수행할 수 있다. 교반에는 저에너지 믹서(low energy mixer), rotar/stator 믹서 및 static 믹서와 고에너지 믹서, 균질기(homogenizer) 막 유화기(Shrasu porous glass membrane emulsifier) 또는 마이크로 플루다이저(microfluidizer)일 수 있다.
본 단계에서 분산상과 수상의 혼합비(부피비)는 분산상과 수상을 혼화시키는 유화방법에 따라 얼마든지 조정이 가능하다. 예를 들어 저에너지 믹서(low energy mixer), rotar/stator 믹서, 또는 static 믹서를 사용하는 경우는 분산상과 수상의 용적비는 1:1 내지 1:100, 고에너지 믹서나 개별적인 분산상 방울을 제조하는 경우는 분산상 용적의 100배 이상의 수상을 사용할 수도 있다.
상기 유제는 로티고틴이 소수성 약물이므로 수중유형(O/W) 형태로 제조된다.
단계 iii): 배아 반고체 미립자 형성 (유기용매 1차 추출)
상기 수중유형 유제에서 분산용매인 비할로겐 유기용매를 1차 추출하여 배아 반고체 미립자를 형성한다.
비할로겐 유기용매의 1차 추출은 단계 ii)에서 형성된 유제를 유화제가 용해된 수상과 혼합하여 2~30분 동안 교반하는 공정으로 수행한다. 이와 같은 공정으로 인하여 유기용매 일부가 수상으로 추출되어 유제 방울들은 반고체 상태로 경화되어 배아 반고체 미립자 (embryonic semisolid microspheres)로 형성된다.
본 단계에서 유제에 첨가하는 수상의 용량은 사용한 비할로겐 유기용매의 물 용해도 0.5배 내지 5배로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1배 내외가 되도록 한다.
본 발명에서 '물 용해도'는 일정량의 유기용매가 물에 포화농도로 용해될 때의 물의 양을 의미한다.
본 단계에서 유화제는 0.05% 내지 1% (w/v) 농도로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 0.1% 내지 0.5% (w/v) 농도로 사용한다.
본 단계에서 교반은 단계 ii)에서 정의된 바와 같다.
단계 iv): 로티고틴 함유 고분자 미립자 형성 (2차 유기용매 추출)
비할로겐 유기용매를 2차 추출하여 로티고틴 함유 고분자 미립자를 얻는다.
비할로겐 유기용매의 2차 추출은 단계 iii)으로부터의 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액을 유화제가 용해된 수상에 첨가하여(dumping) 실온 ~ 40℃ 온도에서 1시간 이상 교반하는 공정으로 수행한다. 이와 같은 공정으로 인하여 유기용매가 수상으로 추출되어 배아 반고체 미립자가 경화되어 로티고틴 함유 고분자 미립자를 형성하게 된다.
본 단계에서 수상의 용량은 바람직하게 사용한 비할로겐 유기용매의 물 용해도 3배 이상으로 사용할 수 있다.
본 단계에서 유화제 농도 및 교반은 상기 단계 iii)에서 정의된 바와 같다.
단계 v): 추가 미립자 경화
본 발명은, 필요에 따라서, 로티고틴 함유 고분자 미립자를 수상에 재분산하여 미립자를 추가 경화하는 단계를 포함할 수 있다.
본 단계는 단계 iv)로부터의 로티고틴 함유 고분자 미립자를 여과하여 미립자를 수거한 후 예온된(pre-warmed) 유화제가 용해된 수상에 첨가하여 2.5 ~ 5시간 동안 교반하는 재분산하는 공정으로 수행한다. 이와 같은 공정으로 인하여 고분자 미립자는 건조 공정에서 응집 현상이 극소화되는 완전히 경화된 미립자를 얻을 수 있다.
상기 예온은 수상의 온도를 실온에서 유기용매의 끓는점 이하의 온도로 미리 준비하는 것을 의미하며, 바람직하게는 30 ~ 35 ℃이다. 온도를 더 상승시키면 교반 시간을 줄일 수 있지만 온도와 교반 시간은 사용하는 미립자 형성 소재의 유리 전이 온도나 봉입되는 약물 함량에 영향 등을 고려하여 조정하는 것이 바람직하다.
본 단계에서 유화제 농도 및 교반은 상기 단계 iii)에서 정의된 바와 같다.
단계 vi): 고분자 미립자 회수 및 건조
본 발명은, 필요에 따라서, 단계 iv) 또는 단계 v)로부터의 고분자 미립자를 회수하여 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 단계는 미립자 현탁액을 여과 또는 원심분리를 통해 미립자를 수거하여 진공 건조하거나, 또는 동결보존제(cryoprotectant)를 함유하는 수용액에 재분산하여 동결건조하는 것으로 수행될 수 있다.
본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은
a) 로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염과 고분자를 비할로겐 유기용매에 용해하여 분산상을 형성하는 단계;
b) 분산상을 비할로겐 유기용매가 용해된 수상에 첨가하여 수중유형 유제를 형성하는 단계; 및
c) 비할로겐 유기용매를 추출하여 고분자 미립자를 얻는 단계를 포함하는 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법은, 필요에 따라서, 단계 c) 후에, d) 고분자 미립자를 수상에 재분산하여 미립자를 추가 경화하는 단계, 및/또는 e) 고분자 미립자를 회수하여 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 단계 a), c), d) 및 e)는 각각 상기 단계 i), iv), v) 및 vi)에서 정의된 바와 같다.
단계 b)에서는, 상기 단계 ii)와는 수상에 유기용매가 필수적으로 첨가되는 것을 제외하고는 동일한 방식으로 수행된다.
본 발명의 제조방법에 따라 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자는 봉입되는 로티고틴의 함량이 30% 이상으로 매우 높으며, 수상이나 미립자 표면에 약물 결정의 형성이 방지되고, 미립자가 매끈한 구형의 형태로 균일하게 형성되고, 미립자의 응집이 방지되고, 잔류 유기용매의 농도가 0.5% 미만으로 의약품 규제 허가시 요구되는 한계량 보다 현저히 적어, 인체 주사제형으로서 사용될 수 있다 (실시예 1 ~ 실시예 7).
본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은 상기 제조방법에 따라 제조되고, 로티고틴의 함량이 현저히 높고, 수상이나 미립자 표면에 로티고틴 결정이 형성이 방지되고, 미립자가 완벽한 구형의 형상을 지니고, 미립자의 응집이 방지되고, 잔류 유기용매가 현저히 저하되는, 상기 제조방법으로 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 로티고틴 함유 고분자를 포함하는 주사제형을 제공한다.
본 발명에 따른 제조방법에 의하면, 종래 용매증발법에 의해 제조되는 로티고틴 함유 고분자 미립자에 비하여 (비교예 1), 현저히 우수한 성상을 가진 로티고틴 함유 고분자 미립자를 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 로티고틴 함유 고분자 미립자는 로티고틴이 고함량으로 봉입되며 로티고틴이 분자수준으로 고분자 미립자 매트릭스에 분산되어 완전히 녹는 적합성을 갖는다.
또한 본 발명에 따른 로티고틴 함유 고분자 미립자는 수상에 약물 결정현상 또는 미립자 표면에 약물 결정이 침착되는 현상이 방지되어 초기 약물방출 효과 (burst effect)를 극소화할 수 있고, 잔류유기용매가 허가 규제에 충족되는 현저히 낮은 농도이다.
용매추출법에 따라 소수성 약물을 함유하는 고분자 미립자를 제조하는 경우 대량의 물(quenching liquid)을 사용하여 유기용매를 추출하는데, 이때 용매추출을 급격하게 시행함으로서 미립자 형상이 구형을 벗어나 불규칙적인 형상을 지닌 입자로 만들어지거나 또는 미립자 표면에 주름(wrinkles/groves) 등이 형성되는 경우가 빈번하게 발생하는데, 본 발명에 따른 제조방법에 의하면, 매끈하며 완전한 구형을 지닌 균일한 미립자를 제조할 수 있는 효과가 있다.
또한 본 발명에 따른 고분자 미립자는 고함량의 로티고틴을 함유하여도 건조 과정 중에 미립자 간의 응집을 극소화하여 건조 후 물에 재분산시키기가 용이한 장점을 가진다.
또한 본 발명에 따른 제조방법은 유제 형성 및 용매추출시 교반에 고에너지 혼합장치뿐만 아니라 아주 단순한 저에너지 혼합장치/기기(믹서)를 사용하여 할 수 있어서 제약산업에서의 기술 상용화/실용성 측면에서 큰 이점을 갖는다.
도 1은 종래 용매증발법으로 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조공정 중에 수중유형 유제(o/w emulsion)를 관찰한 광학현미경 사진이다. (a)는 유제 교반 2.5시간, (b)는 유제 교반 5시간의 광학현미경 사진이다 (그림 막대의 크기는 100 ㎛).
도 2는 종래의 다른 용매증발법으로 제조한 미립자 현탁액을 촬영하여 확대한 광학현미경 사진이다. 검은 화살표는 미립자를 나타내고, 흰 화살표는 수상에서 로티고틴 결정을 나타낸다 (그림 막대의 크기는 20 ㎛)이다.
도 3은 종래 용매제거법으로 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조 원리를 보여주는 모식도이다.
도 4는 에틸 아세테이트를 분산 유기용매로 사용하고 종래 용매제거법에 의해 로티고틴 함유 고분자 미립구 제조공정 중에 유제를 관찰한 광학현미경 사진이다. (a)는 NaOH 첨가한 후 10분 경과시 유제를 광학현미경으로 관찰한 결과이고, (b)는 약물 결정을 관찰하기 위해 (a)사진 크기를 확대한 것이다. (a)와 (b) 사진에 표시된 막대의 크기는 각각 100 ㎛과 20 ㎛을 나타낸다.
도 5는 메틸 프로피오네이트를 분산 유기용매로 사용하고 종래 용매제거법에 의해 로티고틴 함유 고분자 미립구 제조공정 중에 유제를 관찰한 광학현미경 사진이다. (a)는 NaOH 첨가한 후 10분 경과시 유제를 광학현미경으로 관찰한 결과이고, (b)는 약물 결정을 관찰하기 위해 (a)사진 크기를 확대한 것이다. (a)와 (b) 사진에 표시된 막대의 크기는 각각 100 ㎛과 20 ㎛을 나타낸다.
도 6은 실시예 1의 로티고틴 초기 부하량이 150mg인 경우 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자의 물에 재분산성을 광학현미경으로 관찰한 결과 사진이다. (a)는 8% 만니톨 수용액, (b)는 8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액, 및 (c)는 8% 만니톨 + 1% 고분자량 CMC 수용액을 사용한 경우의 사진이다.
도 7은 실시예 1의 로티고틴 초기 부하량이 180mg인 경우 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자의 물에 재분산성을 광학현미경으로 관찰한 결과 사진이다. (a)는 8% 만니톨 수용액, (b)는 8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액, 및 (c)는 8% 만니톨 + 1% 고분자량 CMC 수용액을 사용한 경우의 사진이다.
도 8은 실시예 1의 8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액을 사용하여 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자들의 전자현미경 사진이다. a) 및 b)는 로티고틴 초기 부하량이 150mg인 경우, c) 및 d)는 로티고틴 초기 부하량이 180mg인 경우의 사진이다.
도 9는 PLGA 분말 (a)과 로티고틴 분말 (b)의 열적 거동을 보여주는 DSC 결과이다.
도 10은 실시예 1의 미립자의 열적 거동을 보여주는 DSC 결과이다. 로티고틴의 초기 부하량이 각각 150mg (함량 31.2% (a)) 및 180 mg (함량 34.7% (b))인 PLGA 미립자의 결과이다.
도 11은 실시예 1의 로티고틴 함량이 31.2%인 미립자(8% 만니톨 수용액을 사용 경우)의 열질량분석결과를 보여주는 thermogram 이다.
도 12는 실시예 3의 로티고틴 초기 부하량이 200mg인 경우 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자의 물에 재분산성을 광학현미경으로 관찰한 결과 사진이다. (a)는 8% 만니톨 수용액, (b)는 8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액, 및 (c)는 8% 만니톨 + 1% 고분자량 CMC 수용액을 사용한 경우의 사진이다.
도 13은 실시예 3의 8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액을 사용하여 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자들의 전자현미경 사진이다 (로티고틴 초기 부하량은 200mg).
도 14는 실시예 3의 로티고틴 함유 고분자 미립자의 열적 거동을 보여주는 DSC 결과이다. 로티고틴의 초기 부하량이 200mg PLGA 미립자의 결과이다.
도 15는 실시예 3의 로티고틴 함유 고분자 미립자(로티고틴 함량이 35.9%의 경우)의 열질량분석결과를 보여주는 thermogram 이다.
도 16은 실시예 4의 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조공정 중에 수중유형 유제(o/w emulsion)를 관찰한 광학현미경 사진이다 (그림 막대의 크기는 100 ㎛).
도 17은 실시예 4에서 제조된 로티고틴 함유 미립자들의 전자현미경 사진이다 (그림 막대의 크기는 10 ㎛).
도 18은 실시예 4의 로티고틴 함유 고분자 미립자의 열질량분석결과를 보여주는 thermogram 이다.
도 19는 실시예 5에서 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자들의 전자현미경 사진이다 (그림 막대의 크기는 100 ㎛).
도 20은 실시예 6에서 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자들의 전자현미경 사진이다 (그림 막대의 크기는 10 ㎛).
도 21은 비할로겐 유기용매 에틸아세테이트(a), 에틸포르메이트(b), 메틸프로피오네이트(c) 3종을 분산 유기용매로 하여 제조한 로티고틴 함유 고분자 미립자의 입도분포를 측정한 결과이다.
도 22는 비할로겐 유기용매 에틸아세테이트(a), 에틸포르메이트(b), 메틸프로피오네이트(c) 3종을 분산 유기용매로 사용하여 로티고틴 함유 고분자 미립구 제조공정 중에 유제를 관찰한 광학현미경 사진이다(막대의 크기는 100 ㎛).
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 제조예 및 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실험 소재
고분자로는 Evonik Industries사의 PLGA (Poly(d,l-lactic-co-glycolic acid); 상품명: Resomer 75:25 DLG 3A, Lactide:glycolide ratio = 75:25, Inherent viscosity (0.1% CHCl 3)=0.28dL/g, Mw(GPC)/Mn(GPC) = 28,800/15,000, Tg = 45 ℃, End group: Free carboxyl end groups)을 사용하였다.
로티고틴은 Olon Spa사의 Rotigotine을 사용하였고, 분산상 용매로는 3가지 비할로겐 유기용매는 Sigma Aldrich사의 에틸포르메이트(Ethyl formate), Avantor Performance Materials사의 에틸아세테이트(Ethyl acetate), Glentham Life Sciences사의 메틸프로피오네이트(Methyl propionate)를 사용하였다. 폴리비닐 알코올(Polyvinyl alcohol; PVA, 88 mol% hydrolyzed; 분자량, 25,000 g/mol)은 Polysciences, Inc사로부터 구입하여 사용하였다.
비교예 1: 용매증발법에 기반한 로티고틴 함유 고분자(PLGA) 미립자 제조
분산 유기용매인 메틸렌 클로라이드 4 ml에 PLGA 250 mg과 로티고틴 100 mg을 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 420 rpm으로 교반되고 있는 0.5% PVA(polyvinyl alcohol) 수용액 40 ml에 적가하여 수중유형 유제 (o/w emulsion)을 제조하였다. 이 유제를 실온에서 5시간 교반하였고, 교반하는 도중에 2.5 및 5 시간 시점에서 유제의 상태를 광학현미경을 사용하여 관찰하였고, 그 결과를 도 1에 나타냈다.
도 1에 도시된 바와 같이, 2.5시간 경과시 유제방울 (emulsion droplets)들이 보였으며 유제방울은 일정하지 않고 매우 다양한 크기를 지니고(heterogeneous) 있었다 (도 1의 (a)). 유제를 5시간 교반시 수많은 로티고틴 결정들이 수상/연속상에서 관측되었다 (도 1의 (b)에서 화살표로 표시됨).
도 2에 나타낸 바와 같이, 종래의 다른 용매증발법을 활용한 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조공정 도중에는 로티고틴이 고분자 미립자 (검은 화살표로 표시됨)의 내부로 봉입되지 않고 수상/연속상에서 결정(흰 화살표로 표시됨)으로 석출되는 경향을 나타낸다.
상기와 같은 결과로부터 종래의 메틸렌 클로라이드를 분산용매로 사용한 용매증발법으로 로티고틴 함유 고분자 미립자의 제조시 로티고틴은 수상에서 결정화되어 고분자 미립자 내로 제대로 봉입되지 못하고, 수상/연속상에서 결정으로 석출되어 봉입률 감소 현상이 발생함을 확인할 수 있다. 이와 같은 약물의 결정화 현상은 최종 생산되는 미립자 품질에 악영향을 미친다. 예를 들어 미립자 경화단계가 끝난 후, 미립자를 수거할 목적으로 미립자 분산액(microsphere suspension)을 여과하면 미립자와 약물 결정들이 같이 회수되어져 미립자 표면에서 약물 결정을 볼 수 있으며, 이와 같은 미립자를 대상으로 입자 크기 또는 입도분포, 약물 봉입률 등의 품질평가를 실시하면 필연적으로 잘못된 정보를 얻게 된다.
비교예 2. 용매제거법에 기반한 로티고틴 함유 고분자(PLGA) 미립자 제조
용매제거법은 수중유형 (o/w) 유제에 NaOH와 같은 알칼리를 넣어주어 수상에 녹아 있는 유기용매를 재빨리 분해하여 싱크 상태 (sink condition)를 유도하여 수중 유제 방울에 존재하는 유기용매가 수상으로 계속 확산될 수 있는 환경을 제공하는 방법으로, 유제 방울이 매우 빠르게 미립자로 경화되도록 하는 동력을 제공해 준다 (도 3).
도 3에 도시된 바와 같이, 유기용매로 에틸아세테이트를 사용한 수중유형 유제에 NaOH를 첨가하면 수상에 녹아있는 에틸아세테이트는 에탄올과 소듐아세테이트로 가수분해된다. 이로 인해 수상은 싱크 상태가 되어 유제 방울에 있는 에틸아세테이트가 수상으로 계속 확산되며, 에틸아세테이트에 대한 NaOH 촉매 가수분해가 계속 진행되면서 용매 제거가 이루어지고 그에 따라 유제 방울이 효과적으로 미립자로 고형화된다.
이와 같은 용매제거법에 기반하여 에틸아세테이트 및 메틸프로피오네이트를 각각 PLGA 분산 유기용매로 사용하고 NaOH 첨가로 유기용매를 가수분해하는 방식으로 로티고틴 PLGA 미립자를 제조하였다.
구체적으로는 에틸아세테이트 및 메틸프로피오네이트 각각 4 ml에 PLGA 250 mg과 로티고틴 120 mg을 녹여 분산상을 제조한 후, 400 rpm 속도로 교반되고 있는 0.5% PVA 40 ml에 적가하여 수중유형 유제를 제조하여 3분 교반한 후 10N-NaOH 4 ml을 적가하여 시간의 경과에 따른 유제 상태를 광학현미경을 사용하여 관찰하고, 그 결과를 각각 도 4 및 도 5에 나타냈다.
도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, NaOH 첨가한 후 10분 경과하였을 때 유제의 상태를 광학현미경 사진으로 관찰한 결과, 20~150 ㎛ 크기의 미립자와 다수의 작은 막대 모양의 로티고틴 결정들이 동시에 관찰되었다.
상기와 같은 결과로부터 기존의 유기용매 가수분해 원리를 활용한 용매제거법은 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조에 적합하지 않음을 알 수 있다.
실시예 1. 에틸아세테이트를 이용한 로티고틴 함유 고분자 미립자(1)
1-1. 에틸아세테이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자 제조(1)
PLGA 250 mg과 로티고틴 150mg 또는 180 mg을 4 ml의 에틸아세테이트에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 450 rpm으로 교반되고 있는 30 ml의 0.5% PVA 수용액(수상/연속상)에 첨가하여 5분 동안 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다.
그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 450 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 에틸아세테이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 하였다.
상기 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액(embryonic microsphere suspension)를 550 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 실온(RT)에서 2시간 교반한 후 Whatman 여과지 (등급 1)로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다.
수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 30 ℃에서 350 rpm 속도로 5시간 교반시킨후, 여과지로 여과하여 수거된 PLGA 미립자를 8% 만니톨 수용액, 8% 만니톨과 1% 저분자량 CMC (sodium carboxymethyl cellulose; CMC, 분자량 90,000)을 함유하는 수용액, 또는 8% 만니톨과 1% 고분자량 CMC (분자량 250,000)을 함유하는 수용액 각각으로 재분산시킨 후 액체질소에서 미립자 현탁액를 동결건조(lyophilization)하여 최종 로티고틴 고분자(PLGA) 미립자를 얻었다.
1-2. 미립자 주요 성상 평가
상기에서 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자에 대하여 하기와 같은 주요 성상을 평가하였다.
<고분자 미립자에 봉입된 로티고틴 함량 분석>
제조된 미립자 내에 봉입된 로티고틴 함량과 약물 봉입률 (drug encapsulation efficiency %, EE %)을 다음과 같이 측정하였다:
봉입된 로티고틴 함량 분석
동결건조한 PLGA 미립자 케이크를 물에 재분산한 후 미립자를 수거하여 진공건조시킨 후 미립자 시료를 20~30 mg을 5 ml 크기의 유리 바이알에 담은 후, 여기에 4 ml의 테트라하이드로푸란(tetrahydrofuran)을 첨가하여 30분간 진탕하여 로티고틴과 PLGA를 녹였다. 이 용액을 16 ml의 로티고틴 HPLC 분석용 이동상 (2% 인산 수용액 : acetonitrile, 6:4(v/v))과 혼합하였다. 이 때 PLGA는 침전되어져 뿌연 상태의 콜로이드상의 분산액이 형성되고, 로티고틴은 녹은 상태로 유지된다.
HPLC 주입 전에 PLGA를 제거하기 위하여 콜로이드상의 분산액 700 내지 800 ㎕를 취해 Costar ⓡ Spin-X 마이크로센트리퓨즈 튜브 필터(0.22 ㎛ 나일론 필터가 폴리프로필렌 튜브에 장착되어 있는)에 넣어준 후, mini centrifuge를 사용하여 10,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 얻어진 맑은 여과액(clear, PLGA-free filtrate)을 HPLC 분석용 시료로 사용하였다.
로티고틴 함량 분석을 위한 HPLC 분석조건을 하기 표 1과 같이 하였다:
Column Luna 5 mm C18 column (100 Å, 150×4.6 mm)
Rotigotine 표준원액 제조 용매 이동상
이동상 0.2% 인산 수용액:acetonitrile (6:4 (v/v))
Total Analysis Time 5 min
Flow rate 1.0 ml/min
Detection 230 nm, UV
Injection Volume 10 ㎕
분석 결과 PLGA 미립자에 봉입된 로티고틴 함량은 각각 31.2% (로티고틴 150mg 부하량에서) 및 34.7% (로티고틴 180mg 부하량에서)으로 고함량이었다.
약물(로티고틴) 봉입률
하기 식들에 따라, 약물의 이론부하량(%) 및 실제부하량(%)을 구하여 그 백분율을 약물의 봉입률(%)로 정의하였다.
이론 부하량 % =
100 × 사용된 약물용량(mg)/(사용한 PLGA용량(mg)+사용한 약물용량(mg))
실제 부하량 % =
100 × 미립자에 존재하는 약물용량(mg)/부하량 측정위해 사용한 미립자용량(mg)
약물봉입률 % = 100 × 실제 부하량/이론 부하량
상기 식에 따라 산출된 약물 봉입률은 각각 83.1 ± 1.5% (로티고틴 150mg 부하량에서)와 82.9 ± 1.3% (로티고틴 180mg 부하량에서)이었다.
<미립자 응집 현상 분석>
동결건조후 형성된 케이크(cake)에 물을 넣고, (sonication 처리없이) 진탕 (gentle vortexing)시킨 후 미립자의 재분산 용이성을 광학현미경으로 관찰하였고, 그 결과를 도 6 및 도 7에 각각 나타냈다.
도 6 및 도 7에 나타낸바에 의하면, 상기와 같이 고함량의 로티고틴 함유 PLGA 미립자들이 sonicator와 같은 기기 사용없이도 응집(aggregation) 현상없이 물에 잘 분산되어졌으며, 또한 PLGA 미립자에 봉입되지 않은 유리 로티고틴 결정들도 보이지 않았다. 이와 같은 결과로부터 본 발명에 따른 제조방법에 의해 제조한 로티고틴 PLGA 미립자의 경우는 건조과정 중에 흔히 발생하는 미립자간의 응집 현상을 극복할 수 있음을 알 수 있다.
또한 물에 쉽게 재분산시킬 수 있어 주사제형으로서 활용성이 크다는 것을 알 수 있다.
<전자현미경을 사용한 미립자 형상 조사>
전자현미경 (SEM; model JSM-5200; Jeol Inc., Tokyo, Japan)을 사용하여 건조된 미립자들의 형상을 관찰하였다.
구체적으로는 견본 마운트(Specimen mount) 위에 양면 탄소 테이프를 붙이고, 그 위에 8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액을 사용하여 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자의 동결건조한 케이크를 물에 재분산시킨 후 건조한 미립자 시료를 고르게 분포하여 고정시킨 후, SC7620 sputter coater (VG Microtech, West Sussex, UK)를 이용하여 아르곤 대기(argon atmosphere)에서 금으로 코팅한 후 전자현미경을 사용해 미립자들의 형상을 조사하였고, 그 결과를 도 8에 나타냈다.
도 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 제조방법에 따라 제조된 로티고틴 함유 PLGA 미립자는 완전한 구형 형태를 띄고 있다. 또한 PLGA 미립자 표면에 로티고틴 결정으로 추정되는 침전체/오염체(precipitates/contaminants)가 보이지 않았다. 이와 같은 SEM 결과는 본 발명의 제조방법은 미립자 제조 중에 (wet-sieving 등의) 약물 결정 제거 공정을 사용하지 않았음에도 불구하고 로티고틴 결정이 형성되지 않음을 증명해 주고 있다.
<미립자 열적 거동 분석>
시차주사열량분석기 (DSC; model Q2000 Differential Scanning Calorimeter, TA Instruments, DL, USA)를 사용하여 미립자 제조 전의 PLGA 분말, 로티고틴 분말 및 여러 종류의 로티고틴 PLGA 미립자들의 열적 거동을 분석하였다.
약 5~10 mg 범위로 각각의 DSC 시료를 취해 Tzero aluminum pan에 넣어 Tzero hermetic lid로 밀봉한 후, DSC 시료를 25~160 ℃까지 노출시켰다. 이때 온도 상승속도는 10 ℃/min로 설정하였다. 발란스 챔버(Balance chamber)와 시료 셀 (sample cell) 챔버에 질소 가스를 사용하여 각각 40, 60 ml/min의 속도로 퍼지(purge)하였다. DSC 결과를 각각 도 9 및 도 10에 나타냈다.
도 9에 도시된 바와 같이, 미립자 형성 소재로 사용된 PLGA 분말은 약 40과 42 ℃사이에서 유리전이 온도 (Tg)를 보여주는 무정형 고분자임을 알 수 있고 (a), 봉입 전의 로티고틴 분말은 약 100 ℃ 부근에서 융점 (melting point)을 보이는 열적 거동을 나타냈다 (b).
도 10에 도시된 바와 같이, 로티고틴의 초기 부하량이 각각 150mg (함량 31.2% (a)) 및 180 mg (함량 34.7% (b))인 PLGA 미립자는 DSC 열적거동 분석결과, 로티고틴의 융점이 관찰되지 않았다. 이와 같은 결과로부터 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자에는 30% 이상의 고농도의 로티고틴이 분자수준으로 고분자 매트릭스(matrix)에 잘 분산되어져 (molecularly dispersed) 로티고틴 융점이 사라지고, 또한 PLGA의 특이적인 Tg 역시 없어진 것으로 판단된다. 즉, 로티고틴이 PLGA 미립자 매트릭스에 특이적인 결정 상태로 존재하는 것이 아니라 분자 수준으로 잘 분산되어져 있으며, PLGA와 우수한 적합성 (compatibility)를 보여주고 있음을 알 수 있다.
＜미립자 열질량분석 (thermogravimetric analysis)>
제조된 로티고틴 PLGA 미립자에 잔류용매 양(%)을 분석하기 위하여 열질량분석기(TGA; model Q50 thermogravimetric analyzer; TA Instruments DE, USA)를 사용하였다.
구체적으로는 동결건조한 PLGA 미립자 케이크를 물에 재분산한 후 미립자를 수거하여 진공건조 후 10 mg 내외의 건조된 미립자의 TGA 시료를 백금 팬에 넣은 후, 25 ℃에서 5분동안 평형상태를 유지한 후에 550 ℃까지 20 ℃/min의 속도로 가열시켰다. 온도변화에 따른 TGA 시료의 질량 분석은 TA Universal Analysis 2000 software program을 사용하여 자동적으로 실시하였고, 100 ℃에 도달할 때까지 관측된 용매의 감소량을 %로 표시하여 그 결과를 표 2 (동결건조 후 관측한 PLGA 미립자 내 잔류용매량(%))에 나타냈다.
동결건조용 수용액 조성 로티고틴 초기 부하량
150 ㎎ 180 ㎎
8% 만니톨 수용액 사용 0.31 0.18
8% 만니톨 + 1% 저분자량 CMC 수용액 사용 0.33 0.20
8% 만니톨 + 1% 고분자량 CMC 수용액 사용 0.11 0.13
표 2의 예시로서 8% 만니톨 수용액을 사용하여 동결건조시킨 로티고틴 함유 PLGA 미립자를 100 ℃까지 승온하였을때 감소하는 질량을 검체의 백분율로 표시한 결과를 도 11에 나타냈다. 표 2와 도 11에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 제조방법에 따라 제조된 미립자 잔류 유기용매(에틸아세테이트) 함량은 모두 0.33% 이하였다. PLGA 미립자 의약품 허가신청에서 중요한 이슈 중의 하나가 미립자 제조에 사용된 잔류용매의 양이다. 에틸아세테이트의 경우는 ICH class 3에 속하는 용매이기 때문에 잔류허가농도 한계는 0.5% 이하인데, 본 발명에 따라 제조된 미립자들은 한계값보다 훨씬 낮은 정도였음을 알 수 있다. 게다가 본 발명의 제조방법은 잔류 유기용매 기준을 충족하기 위한 별도의 건조 장치나 특별한 처리가 필요하지 않다는 장점이 있다 .
실시예 2. 에틸아세테이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자(2)
<에틸아세테이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자 제조(2)>
30 ml의 0.5% PVA 수용액에 1 ml의 에틸아세테이트를 미리 녹여서 만든 수상을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방식으로 제조하였다.
구체적으로는 PLGA 250 mg과 로티고틴 150mg을 4 ml의 에틸아세테이트에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을, 450 rpm으로 교반되고 있는, 1 ml의 에틸아세테이트를 미리 30 ml의 0.5% PVA 수용액에 녹여 만든 수용액(수상/연속상)에 첨가하여 5분 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다. 그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 450 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 에틸아세테이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 하였다.
상기 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액 (embryonic microsphere suspension)를 550 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 실온(RT)에서 2시간 교반한 후 여과지로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다. 수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 30 ℃에서 350 rpm 속도로 5시간 교반시킨후, 여과지로 여과하여 수거된 PLGA 미립자를 8% 만니톨 수용액으로 재분산후 액체질소에서 미립자 현탁액을 동결건조(lyophilization)하여 최종 로티고틴 함유 고분자 미립자를 얻었다.
제조된 미립자 케이크를 물로 재분산시킨 후 여과를 통해 수거한 미립자를 진공 건조한 후 건조된 미립자의 봉입률을 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로 산출하였다. 그 결과 약물(로티고틴) 봉입률은 79.3 ± 1.2% 로 또한 높았다.
실시예 3. 에틸포르메이트를 이용한 로티고틴 함유 고분자 미립자(1)
3-1. 에틸포르메이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자 제조(1)
PLGA 250 mg과 로티고틴 180mg 또는 200 mg을 4 ml의 에틸포르메이트에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 450 rpm으로 교반되고 있는 30 ml의 0.5% PVA 수용액에 첨가하여 5분 동안 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다.
그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 450 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 에틸포르메이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 하였다.
상기 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액(embryonic microsphere suspension)를 550 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 실온(RT)에서 2시간 교반한 후 여과지로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다.
수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 30 ℃에서 350 rpm 속도로 5시간 교반시킨후, 여과지로 여과하여 수거된 PLGA 미립자를 8% 만니톨 수용액, 8% 만니톨과 1% 저분자량 CMC를 함유하는 수용액, 또는 8% 만니톨과 1% 고분자량 CMC를 함유하는 수용액 각각으로 재분산후 액체질소에서 미립자 현탁액를 동결건조(lyophilization)하여 최종 로티고틴 함유 고분자(PLGA) 미립자를 얻었다.
3-2. 미립자 주요 성상 평가
상기에서 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자에 대하여 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로 주요 성상을 평가하였고 그 결과는 다음과 같다.
<고분자 미립자에 봉입된 로티고틴 함량 분석>
분석 결과 PLGA 미립자에 봉입된 로티고틴 함량은 각각 32.4% (로티고틴 초기 부하량 180mg) 및 35.9% (로티고틴 200mg 초기 부하량에서)으로 고함량이었다. 또한 상기 식에 따라 산출된 약물 봉입률은 각각 77.5 ± 2.2% (로티고틴 180mg 초기 부하량에서)와 80.8 ± 1.8% (로티고틴 200mg 초기 부하량에서)이었다.
<미립자 응집 현상 분석>
로티고틴 200mg 초기 부하량을 사용한 미립자에 대해서 분석 결과를 도 12에 나타냈다.
도 12에 나타낸 바에 의하면, 로티고틴 함유 PLGA 미립자들이 sonicator와 같은 기기 사용없이도 진탕만으로도 물에 재분산되었으며, PLGA 미립자에 봉입되지 않은 유리 로티고틴 결정들도 보이지 않았다. 이와 같은 결과로부터 실시예 3에 의해 제조된 로티고틴 PLGA 미립자의 경우도 건조과정 중에 흔히 발생하는 미립자간의 응집 현상을 극복할 수 있음을 알 수 있다. 따라서 환자에게 미립자를 주사할 때 미립자 응집이 없기 때문에 환자에게 투여할 수 있는 장점이 있다.
<전자현미경을 사용한 미립자 형상 조사>
로티고틴 200mg 부하량(함량이 35.9%)을 사용한 미립자에 대해서 SEM 결과를 도 13에 나타냈다.
도 13에 나타낸 바와 같이, 실시예　3에서 제조된 로티고틴 함유 PLGA 미립자도 완전한 구형 형상을 지니고 있음을 확인할 수 있다.
<미립자 열적 거동 분석>
로티고틴 PLGA 미립자 (로티고틴의 부하량이 200mg (함량 35.9%)에 대한 DSC 결과를 각각 도 14에 나타냈다.
도 14에 도시된 바와 같이, 로티고틴의 융점이 관찰되지 않았다. 이와 같은 결과로부터 실시예 3의 미립자의 경우도 로티고틴이 PLGA 미립자 매트릭스에 분자 수준으로 잘 분산되어져 있으며 PLGA와 우수한 적합성이 있음을 보여준다.
＜미립자 열질량(thermogravimetric) 분석>
제조된 로티고틴 PLGA 미립자에 잔류하는 용매 수준(%)을 분석하기 위하여 TGA 분석결과로서 미립자에 100 ℃까지 승온하였을때 감소하는 질량을 검체의 백분율로 thermogram에 표시하여 그 결과를 도 15에 나타냈다.
도 15에 나타낸 바와 같이, 실시예 3에서 제조된 미립자 잔류 유기용매(에틸포르메이트) 함량은 0.16% 이였다. 이와 같은 결과는 실시예 3의 미립자도 잔류 유기용매의 함량이 허가농도 한계인 0.5% 이하로 매우 낮음을 확인할 수 있다.
실시예 4. 에틸포르메이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자(2)
<에틸포르메이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자 제조(2)>
30 ml의 0.5% PVA 수용액에 1 ml의 에틸포르메이트를 미리 녹여서 만든 수상을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 3과 동일한 방식으로 제조하였다.
구체적으로는 PLGA 250 mg과 로티고틴 180mg을 4 ml의 에틸포르메이트에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 550 rpm으로 교반되고 있는 1 ml의 에틸포르메이트를 미리 30 ml의 0.5% PVA 수용액에 녹여 만든 수용액에 첨가하여 5분 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다. 그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 550 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 에틸포르메이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 하였다.
상기 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액 (embryonic microsphere suspension)를 500 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 실온(RT)에서 2시간 교반한 후 여과지로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다. 수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 30 ℃에서 350 rpm 속도로 5시간 교반시킨후, 여과지로 여과하여 수거된 PLGA 미립자를 8% 만니톨 수용액으로 재분산후 액체질소에서 미립자 현탁액을 동결건조(lyophilization)하여 최종 로티고틴 함유 고분자(PLGA) 미립자를 얻었다.
제조공정 도중 미립자 현탁액을 실온에서 2시간 교반한 후 유제의 상태를 광학현미경을 사용하여 관찰하였고, 그 결과를 도 16에 나타냈다.
도 16에 나타낸 바와 같이, 미립자 현탁액에 로티고틴 결정이 관찰되지 않았다.
도 17에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로 SEM 분석 결과, 미립자의 표면에서 로티고틴 결정이 존재하지 않음을 확인할 수 있었다.
제조된 미립자 케이크를 50 ml의 증류수로 재분산시킨 후 여과를 통해 수거한 미립자를 진공 건조한 후 건조된 미립자의 약물 함량 및 봉입률을 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로 산출하였다. 그 결과 약물(로티고틴) 함량은 35.4%이고 봉입률은 82.3%로 또한 높았다.
도 18에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로 열질량 분석 결과 미립자에 잔존하는 용매용량은 0.22%로 0.5% 이하의 수준까지 제조할 수 있었음이 확인된다.
실시예 5. 메틸프로피오네이트를 이용한 로티고틴 함유 고분자 미립자(1)
5-1. 메틸프로피오네이트를 사용한 로티고틴 PLGA 미립자 제조(1)
PLGA 250 mg과 로티고틴 120mg을 4 ml의 메틸프로피오네이트에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 550 rpm으로 교반되고 있는 1 ml의 메틸프로피오네이트를 미리 30 ml의 0.5% PVA 수용액에 녹여 만든 수용액에 첨가하여 5분 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다
그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 550 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 메틸프로피오네이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 하였다.
상기 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액(embryonic microsphere suspension)를 550 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 30 ℃에서 2시간 교반한 후 여과지로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다.
수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 30 ℃에서 350 rpm 속도로 2.5시간 교반시킨후, 여과지로 여과하여 수거된 PLGA 미립자를 진공건조하여 최종 로티고틴 고분자(PLGA) 미립자를 얻었다.
5-2. 미립자 주요 성상 평가
상기에서 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자에 대하여 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로 주요 성상을 평가하였고 그 결과는 다음과 같다.
상기 제조예에 따랐을 때, 수월한 상태의 PLGA 미립자를 만들 수 있었으며, 미립자 수득율은 68.2% 이었다.
또한 제조공정 도중 수상에서 로티고틴 결정은 관측되지 않았고, 로티고틴 봉입률은 90.2%로 관측되었으며, 이 결과에 따라 PLGA 미립자의 로티고틴 함량은 29.2%로 판명되었다.
도 19에 나타낸 바와 같이, SEM 분석결과 실시예 5에서 제조된 로티고틴 함유 PLGA 미립자도 구형 형상을 지니고 있음을 확인할 수 있고, 미립자 표면에는 로티고틴 결정이 관찰되지 않았다. 이와 같은 결과는 실시예 5에 따라 미립자 제조시 로티고틴이 PLGA 미립자 내부로 잘 봉입되며 상기의 높은 약물 봉입률 결과를 뒷받침해 준다.
실시예 6. 메틸프로피오네이트를 사용한 로티고틴 함유 PLGA 미립자(2)
<메틸프로피오네이트를 사용한 로티고틴 함유 PLGA 미립자 제조(2)>
PLGA 250 mg과 로티고틴 150mg을 4 ml의 메틸프로피오네이트에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 450 rpm으로 교반되고 있는 30 ml의 0.5% PVA 수용액에 첨가하여 5분 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다. 그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 450 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 메틸프로피오네이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 하였다.
상기 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액 (embryonic microsphere suspension)를 500 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 35 ℃에서 2시간 교반한 후 여과지로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다. 수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 35 ℃에서 350 rpm 속도로 2.5시간 교반시킨후, 여과지로 여과하여 수거된 PLGA 미립자를 8% 만니톨 수용액으로 재분산후 동결건조시켜 만든 케이크를 50 ml의 증류수를 사용해 재분산하고 여과 처리하여 로티고틴 함유 PLGA 미립자를 수거한 후 진공건조시켜 최종 로티고틴 함유 고분자 미립자를 얻었다.
미립자 제조 도중에 유제의 상태를 광학현미경을 사용하여 관찰한바, 미립자 현탁액에 로티고틴 결정이 관찰되지 않았다.
도 20에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1의 1-2에서와 동일한 방식으로SEM 분석 결과, 미립자는 완벽한 구형 형상을 나타내고 있으며, 미립자의 표면에서 로티고틴 결정이 존재하지 않음을 확인할 수 있었다.
실시예 6에 따라 메틸프로피오네이트를 분산용매로 하여 PLGA 미립자를 제조한 경우, 로티고틴 봉입률은 83.8%이었으며 실제 PLGA 미립자의 약물 함량은 31.4%로 측정되었다.
실시예 7. 미립자 입도 분포 분석
비할로겐 유기용매 에틸아세테이트(a), 에틸포르메이트(b), 메틸프로피오네이트(c) 3종을 분산 유기용매로 하여 제조한 로티고틴 고분자 미립자의 제조 중 경화단계 종결 후 미립자 현탁액의 입도분포를 측정하였다.
구체적으로는 PLGA 250 mg과 로티고틴 120 mg을 4 ml의 각각의 분산 유기용매에 녹여 분산상을 제조하였다.
수상으로 30 ml의 0.5% PVA 수용액을 사용하였고, 에틸포르메이트를 분산 유기용매로 사용하는 경우는 미리 1 ml의 에틸포르메이트를 상기 수상에 첨가하여 완전히 섞어주고(pre-dissolving 단계), 에틸아세테이트나 메틸프로피오네이트를 사용한 경우에는 이러한 pre-dissolving 단계를 생략하였다.
위에서 제조한 분산상을 450 rpm으로 교반되고 있는 상기와 같이 준비한 30 ml의 0.5% PVA 수용액에 첨가하여 5분 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다.
그리고 나서 0.1% PVA 수용액 50 ml을 상기 수중유형 유제에 첨가하고 500 rpm의 교반속도로 5분간 교반시켜 유제 방울에 존재하는 메틸프로피오네이트를 수상으로 추출하여 유제 방울이 배아 반고체 미립자(embryonic semisolid microspheres)로 변화되도록 한 후, 전체 미립자 현탁액을 500 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 30 ℃에서 1시간 교반한 후 미립자 현탁액의 입자 크기 및 입도 분포를 Mastersizer 3000E (Malvern Instruments Ltd, Worcestershire, UK)를 사용하여 측정하였고, 그 결과를 도 21에 나타냈다.
도 21에 의하면, D 50%는 모두 100 ~ 137 ㎛에 존재하였다. 이와 같은 결과는 아주 간단한 저에너지 혼합장치(low energy mixing device)를 사용하여 손쉽게 근육 또는 피하 주사에 적합한 크기를 가진 미립자를 제조할 수 있음을 보여주는 것이다.
또한 입자 크기 및 입도 분포는 미립자 조성, 분산상과 수상의 조성, 그리고 유화조건 등을 변화하여 원하는 크기로 조절 가능하다.
실시예 8. 비할로겐 용매 3종을 사용한 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조 중의 유제 관찰
PLGA 250 mg과 로티고틴 120mg을 3 ml의 3종의 비할로겐 유기용매인 에틸아세테이트, 에틸포르메이트, 메틸프로피오네이트 각각에 녹여 분산상을 제조하였다. 이 분산상을 550 rpm으로 교반되고 있는 각각의 비할로겐 유기용매 1ml를 미리 용해시켜준 30ml의 0.5% PVA 수용액에 첨가하여 5분 동안 교반시켜 수중유형 유제를 제조하였다.
그리고 나서 유제를 500 rpm 속도로 교반되고 있는 200 ml의 0.1% PVA 수용액에 첨가하여 30 ℃에서 2시간동안 교반한 후 여과지로 여과하여 PLGA 미립자를 수거하였다. 수거한 미립자를 다시 100 ml의 0.1% PVA 수용액에 재분산시켜 30 ℃에서 350 rpm 속도로 2.5시간 교반한 후, 여과지로 여과하여 수거된 로티고틴 함유 PLGA 미립자를 진공건조하여 최종 로티고틴 함유 고분자 미립자를 얻었다.
도 22에 위의 제조공정 도중 30 ℃에서 2시간 교반한 후 유제 상태를 광학현미경으로 관찰한 결과를 나타냈다.
도 22에 나타낸 바와 같이, 3종의 비할로겐 유기용매를 사용한 경우 모두 미립자 현탁액의 수상 및 미립자 표면에서 로티고틴 결정이 관찰되지 않고, 미립구도 매끈한 구형으로 미립자들의 품질 성상이 우수하였다. 이러한 결과는 종래의 미립자 제조공정 도중 흔히 발생하는 약물 결정화 현상을 극복할 수 있음을 보여준다.

Claims (20)

  1. i) 로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염과 고분자를 비할로겐 유기용매에 용해하여 분산상을 형성하는 단계;
    ii) 분산상을 수상에 첨가하여 수중유형 유제를 형성하는 단계;
    iii) 비할로겐 유기용매를 1차 추출하여 배아 반고체 미립자 (embryonic semisolid microspheres)를 형성하는 단계; 및
    iv) 비할로겐 유기용매를 2차 추출하여 고분자 미립자를 얻는 단계를 포함하는 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서, 단계 iii)에서 비할로겐 유기용매의 1차 추출은 유제를 유화제가 용해된 수상과 혼합하여 2 ~ 30분 교반하여 수행하는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  3. 제 2항에 있어서, 단계 iii)에서 유제에 첨가하는 수상의 용량은 사용된 비할로겐 유기용매의 물 용해도의 0.5배 내지 5배로 사용하는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  4. 제 1항에 있어서, 단계 iv)에서 비할로겐 유기용매의 2차 추출은 배아 반고체 미립자가 포함된 현탁액을 유화제가 용해된 수상에 첨가하여 실온 ~ 40 ℃에서 1시간 이상 교반하여 수행하는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  5. 제 4항에 있어서, 단계 iv)에서 용매 추출용으로 사용하는 수상의 용량은 사용된 비할로겐 유기용매의 물 용해도의 3배 이상으로 사용하는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 비할로겐 유기용매는 5 내지 15%의 수용해도를 갖는 비할로겐 유기용매인 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 비할로겐 유기용매는 에틸아세테이트, 에틸포르메이트 및 메틸프로피오네이트로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상인 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 고분자는 소수성 폴리에스테르계 고분자인 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 고분자는 폴리락트산(PLA), 폴리(락트산-코-글리콜산)(PLGA), 및 폴리락타이드로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  10. 제 1항에 있어서, 고분자와 로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 중량비(w/w)는 1:0.05 ~ 1:1 인 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  11. 제 1항에 있어서, 단계 ii)에서 수상에 미리 비할로겐 유기용매를 용해시켜주는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  12. 제 1항에 있어서, 수상은 유화제를 포함하고 있는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  13. 제 12항에 있어서, 상기 유화제는 폴리비닐알코올(PVA), 폴리소베이트 20, 폴리소베이트 60, 폴리소베이트 65, 폴리소베이트 80, 폴리소베이트 85, 레시틴, 소르비탄스테아레이트, 모노글리세라이드, 디글리세라이드 및 로릴황산나트륨으로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상인 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  14. 제 1항에 있어서, 단계 iv)로부터의 고분자 미립자를 실온에서 유기용매의 끓는점 이하의 온도로 예온된 수상에 재분산하여 미립자를 경화하는 단계를 추가로 포함하는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  15. 제 1항에 있어서, 단계 iv)로부터의 고분자 미립자를 회수하여 건조하는 포함하는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 건조는 진공 건조 또는 동결보존제(cryoprotectant)를 함유하는 수용액에 재분산하여 동결건조로 수행되는 것인 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  17. 제 1항 내지 제 16항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자.
  18. 제 17항에 따른 로티고틴 함유 고분자를 포함하는 주사제형.
  19. a) 로티고틴 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염과 고분자를 비할로겐 유기용매에 용해하여 분산상을 형성하는 단계;
    b) 분산상을 비할로겐 유기용매가 용해된 수상에 첨가하여 수중유형 유제를 형성하는 단계; 및
    c) 비할로겐 유기용매를 추출하여 고분자 미립자를 얻는 단계를 포함하는 로티고틴 함유 고분자 미립자 제조방법.
  20. 제 19항의 제조방법으로 제조된 로티고틴 함유 고분자 미립자.
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