WO2020101218A1 - 효소 처리한 배초향, 석류 및 로즈힙을 포함하는 피부 미백 조성물 - Google Patents

효소 처리한 배초향, 석류 및 로즈힙을 포함하는 피부 미백 조성물 Download PDF

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WO2020101218A1
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skin whitening
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skin
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유진희
최수영
김진학
김상우
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Definitions

  • the present invention relates to a skin whitening composition containing plant extracts.
  • the present invention relates to a method for preparing the composition.
  • Skin blackening such as pigmentation, is known to be responsible for the synthesis of melanin present in the skin.
  • Melanin is formed by melanosomes located in melanin-forming cells, and the formed melanin migrates to keratinocytes and accumulates in the skin epithelial layer to show pigmentation.
  • Melanin synthesis converts tyrosine, one of amino acids, into substrate, and converts it into DOPA quinone through 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) by tyrosinase. It is formed by the process in which melanin is produced through DOPA chromium as a reaction Lee et al., Kor. J. Pharmacogn. 34 (1) 33-39, 2003). At this time, since the melanin produced darkens the color of the skin, experiments that effectively inhibit the activity of tyrosinase and experiments that measure the content of melanin are evaluated as research methods to find the whitening effect.
  • An object of the present invention is to provide a skin lightening composition.
  • the present invention to solve the above problems,
  • Enzyme treatment step of reacting by adding an enzyme to the extract
  • It provides a method for producing a skin whitening composition comprising the step of obtaining a composition by concentration after the enzyme treatment step.
  • the drying step may include a lyophilization or spray drying step.
  • the weight ratio of the pear, pomegranate, and rose hip may be 2: 2: 1.
  • the enzyme may include one or more selected from the group consisting of glucoamylase (glucoamylase), Peclyve CP and ⁇ -glucosidase ( ⁇ -glucosidase).
  • the step of preparing the extract may include adding water of 1 to 100 times the weight of the mixture.
  • the enzyme treatment step may include agitating for 2 to 10 hours at 30 to 70 °C.
  • a skin whitening composition prepared according to the above method.
  • composition can inhibit the production of melanin, the activity of tyrosinase, or a combination thereof.
  • the skin whitening composition and its manufacturing method of the present invention it is possible to provide a composition that enhances the whitening effect while minimizing chemical additives that can irritate the skin.
  • 1 is a graph showing the concentration of melanin.
  • 2 is a graph showing the activity of tyrosinase.
  • the expression “to” is used as an expression including the corresponding numerical value. Specifically, for example, the expression “1 to 2” means not only to include 1 and 2, but also to include both numerical values between 1 and 2.
  • Enzyme treatment step of reacting by adding an enzyme to the extract
  • It provides a method for producing a skin whitening composition comprising the step of obtaining a composition by concentration after the enzyme treatment step.
  • Agastache rugosa is a perennial herb of the family Lamiaceae, and is a plant with a unique aroma.
  • Baechohyang contains fructose, glucose, sucrose and maltose as free sugar components, and amino acids include glutamic acid, aspartic acid, and leucine. leucine), and potassium, calcium, sodium, and magnesium as minerals, ascorbic acid, polyphenols, and the like.
  • Baechohyanghyang water is also used as an external agent for scabies and ringworm in the body.
  • Pomegranate (Punica granatum ) contains ingredients such as niacin, sodium, retinol, beta-carotene, vitamins, potassium, phosphorus, and can be eaten raw or boiled as tea. In particular, it contains antioxidants and can help prevent aging.
  • Rose hips ( Rosa canina ) contains more than 20 times the vitamin C of lemon and contains vitamins B, E, and unsaturated fatty acids, so you can drink it as a tea or extract the oil and apply it to your skin and help with skin health. .
  • the method may include drying the concentrated composition according to the above-described method.
  • the drying may include lyophilization or spray drying. Freeze-drying is to sublimate the solidified solvent contained in the drying object into water vapor by reducing the pressure in a frozen state by rapidly reducing the temperature.
  • Spray drying is to spray the object to be dried in hot air and dry it in an air stream in a fine water droplet state.
  • an additive such as dextrin may be used to increase the strength of drying.
  • the weight ratio of the pear, pomegranate, and rose hip may be 2: 2: 1. It is possible to increase the whitening effect of the composition in the above weight ratio.
  • the enzyme may include one or more selected from the group consisting of glucoamylase (glucoamylase), Peclyve CP and ⁇ -glucosidase ( ⁇ -glucosidase).
  • glucoamylase is an enzyme that liberates glucose.
  • Peclyve CP is a type of fruit degrading enzyme.
  • ⁇ -glucosidase is an enzyme that hydrolyzes glucosides.
  • the step of preparing the extract may include adding 1 to 100 times the sample weight, for example, 10 to 30 times water;
  • the enzyme treatment step may include a step of agitating for 2 to 10 hours, for example, 2 to 4 hours at 30 to 70 ° C, for example, 40 to 60 ° C. If the enzyme treatment temperature is too high, the enzyme may be destroyed and the reaction efficiency may be lowered. On the contrary, when the temperature is too low, the activity of the enzyme may be lowered and the reaction may not proceed sufficiently.
  • the skin whitening composition prepared by the above method can suppress the production of melanin.
  • melanin In the synthesis of melanin, tyrosin is used as a substrate by tyrosinase, and is converted to DOPA quinone via dihydroxyphenylalanine (DOPA) and converted into DOPA chromium by enzymatic reaction. chrome) to form a mechanism through which melanin is finally produced.
  • DOPA dihydroxyphenylalanine
  • chrome dihydroxyphenylalanine
  • the composition according to the present invention can prevent the production of melanin by inhibiting the activity of tyrosinase, which is a major substance involved in the synthesis process of melanin.
  • the cosmetic composition may include additional additives within a range not affected by the object of the present invention.
  • additive substances include vitamin C, vitamin B, kojic acid, isoflavones, amino acids, peptides, adenosine, protease and enzymes, arbutin, hyaluronic acid, hydroquinone, ceramide, coenzyme Q10, tetrahydroker It may include cuminoids, anthocyanins, collagen, retinol, bee-box extract, gardenia extract, turmeric extract, centella extract.
  • the cosmetic composition of the present invention is conventionally prepared in the art, and can be prepared in any formulation that can be applied dermatologically.
  • Being able to be applied dermatologically is a composition that can have a relatively non-toxic and harmless effect on the target of application, and may include an external agent that can be applied to the skin, and the side effects resulting from the composition indicate the efficacy of the active ingredient. It can mean that it does not degrade and does not impair the activity and properties of the active ingredients without causing serious irritation to the target.
  • Dermatologically applicable cosmetic compositions of the present invention include, for example, solutions, suspensions, emulsions, emulsions, pastes, gels, packs, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations , Emulsion foundation, wax foundation, spray and hair cosmetics, etc., but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, gel, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, ampule, nutrition Essence, Pack, Soap, Hair Shampoo, Foot Shampoo, Cleansing Foam, Cleansing Lotion, Cleansing Cream, Body Lotion, Body Cleanser, etc.
  • a functional food composition comprising the composition as described above.
  • the composition according to the present invention may be added as it is or may be contained together with other food ingredients, and may be appropriately included according to a conventional method.
  • the form of a food or functional food composition may be prepared in the form of powders, granules, pills, tablets, capsules, and the like, and is not particularly limited as long as it is a general food or drink form.
  • the type of food composition may include all foods in a conventional sense, for example, meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice creams Products, various soups, beverages, teas, drinks, alcoholic beverages, vitamin complexes, etc. may be included, but are not limited thereto.
  • the beverages and beverages may include general flavoring agents or natural carbohydrates, etc., as additional components, like ordinary beverages.
  • the natural carbohydrate may include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • Sweeteners may include natural sweeteners such as taumatine and stevia extracts, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame.
  • the food composition of the present invention includes general nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, It may include one or more types of carbonic acid used in carbonated beverages, and may include the flesh contained in natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks.
  • Comparative Example 1 Preparation of pear vinegar, pomegranate and rose hip hot water extract
  • a mixture was prepared by mixing pear scent, pomegranate, and rose hips at a 2: 2: 1 solids ratio, and then adding 20 times the water of the mixture weight to obtain an extract while stirring at 95 ° C for 240 minutes.
  • the extract was filtered under reduced pressure with Whatman No. 4 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to prepare a composition.
  • a mixture was prepared by mixing pear scent, pomegranate, and rose hips at a 2: 2: 1 solids ratio, and then adding 20 times the water of the mixture weight to obtain an extract while stirring at 95 ° C for 240 minutes.
  • Viscozyme L was added to the extract to be 0.2% (w / w) by mass.
  • the extract to which the enzyme was added was maintained at 40 ° C, and the hydrolysis reaction was performed while stirring for 3 hours.
  • the enzyme-treated complex extract was filtered under reduced pressure with Whatman No. 4 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to prepare a composition.
  • Example 1 glucoamylase treatment composition
  • a mixture was prepared by mixing pear scent, pomegranate, and rose hips at a 2: 2: 1 solids ratio, and then adding 20 times the water of the mixture weight to obtain an extract while stirring at 95 ° C for 240 minutes.
  • Glucoamylase (glucoamylase) was added to the extract to be 0.2% (w / w) by mass.
  • the extract to which the enzyme was added was maintained at 60 ° C., and the hydrolysis reaction was performed while stirring for 3 hours.
  • the enzyme-treated complex extract was filtered under reduced pressure with Whatman No. 4 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to prepare a skin whitening composition.
  • a mixture was prepared by mixing pear scent, pomegranate, and rose hips at a 2: 2: 1 solids ratio, and then adding 20 times the water of the mixture weight to obtain an extract while stirring at 95 ° C for 240 minutes.
  • Peclyve CP was added to the extract to be 0.2% (w / w) by mass.
  • the extract to which the enzyme was added was maintained at 45 ° C., and the hydrolysis reaction was performed while stirring for 3 hours.
  • the enzyme-treated complex extract was filtered under reduced pressure with Whatman No. 4 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to prepare a skin whitening composition.
  • Example 3 ⁇ -glucosidase treatment composition
  • a mixture was prepared by mixing pear scent, pomegranate, and rose hips at a 2: 2: 1 solids ratio, and then adding 20 times the water of the mixture weight to obtain an extract while stirring at 95 ° C for 240 minutes.
  • ⁇ -glucosidase ( ⁇ -glucosidase) was added to the extract to be 0.2% (w / w) by mass.
  • the extract to which the enzyme was added was maintained at 50 ° C, and the hydrolysis reaction was performed while stirring for 3 hours.
  • the enzyme-treated complex extract was filtered under reduced pressure with Whatman No. 4 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to prepare a skin whitening composition.
  • the cultured B16F10 cells were 5 ⁇ 10 4 cell / using Dulbeco's Modified Eagle Media (DMEM) containing 100 IU / ml penicillin and 100 ⁇ g / ml streptomycin and 10% fetal bovine serum (FBS). After adjusting to the concentration of ml, inoculated into a 12 well plate, and pre-incubated at 5% CO 2 and 37 ° C. Cells were treated with the composition according to each Example and Comparative Example at a plate treated with a concentration of 50 ug / ml, and the control was used as the composition without treatment. Each well was cultured by treatment with ⁇ -melanocyte-stimulating hormone ( ⁇ -MSH).
  • DMEM Dulbeco's Modified Eagle Media
  • FBS fetal bovine serum
  • Example 1 After 72 hours, the medium was removed and 1N NaOH was added to dissolve melanin.
  • the content of melanin was analyzed by measuring absorbance at 405 nm using an Elisa microplate reader, and the results are shown in FIG. 1.
  • FIG. 1 in the case of Comparative Example 1, which is a mixed extract without treatment with enzymes, the rate of melanin content decrease was very small, while it was confirmed that the melanin inhibitory effect of the composition of the Example was excellent. In particular, in Example 3, it can be seen that the melanin production inhibitory effect is excellent.
  • B16F10 cells cultured as in Experimental Example 1 were used.
  • the cells were treated with the compositions according to the respective Examples and Comparative Examples at a concentration of 50 ug / ml on the plate treated with the cells, and the untreated composition was used as a control.
  • Each well was cultured by treatment with ⁇ -melanocyte-stimulating hormone ( ⁇ -MSH). After 72 hours, cells were destroyed using a RIPA buffer and centrifuged at 14,000 rpm for 20 minutes to obtain a supernatant. 0.1% L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) was added to the supernatant, followed by incubation at 37 ° C for 3 hours.
  • ⁇ -MSH ⁇ -melanocyte-stimulating hormone
  • the activity of tyrosinase was analyzed by measuring absorbance at 475 nm with an Elisa microplate reader, and the results are shown in FIG. 2. As shown in FIG. 2, when Comparative Examples 1 and 2 were used, the activity reduction rate of tyrosinase was very small, whereas when the composition according to the Example was used, it was confirmed that the activity of tyrosinase was greatly reduced. In particular, it can be seen that the effect of inhibiting tyrosinase activity in the case of treating Example 3 is excellent.
  • the present invention can reduce the production of melanin.
  • it since it can reduce the activity of tyrosinase involved in melanin formation, it was confirmed that the production of melanin can be prevented to increase skin whitening efficacy.

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Abstract

본 발명은 피부 미백 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로 피부에 자극을 줄 수 있는 화학 첨가물을 최소화하면서 미백 효과를 증대시킬 수 있다. 또한, 멜라닌의 생성 및 멜라닌의 합성에 관여하는 물질을 저해시킴으로써 피부의 흑화를 효과적으로 예방 및 개선시킬 수 있으므로, 다양한 제품에 세포 독성 없이 유용하게 적용할 수 있다.

Description

효소 처리한 배초향, 석류 및 로즈힙을 포함하는 피부 미백 조성물
본 발명은 식물 추출물을 함유하는 피부 미백 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
색소침착과 같은 피부 흑화는 피부에 존재하는 멜라닌 (melanin)의 합성이 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 멜라닌은 멜라닌 형성 세포 내에 위치하는 멜라노좀(melanosome)에 의해 형성되며 형성된 멜라닌은 각질 형성 세포로 이동하여 피부 상피층에 축적되어 색소 침착 현상을 나타낸다. 멜라닌 합성은 아미노산의 하나인 티로신(tyrosin)을 기질로 티로시나아제(tyrosinase)에 의하여 3,4-디히드록시페닐알라닌(3,4-dihydroxyphenylalanine, DOPA)를 거쳐 DOPA 퀴논(quinone)으로 전환되고 효소반응으로 DOPA 크롬(chrome)을 거쳐 멜라닌이 생성되는 과정으로 형성된다 Lee et al., Kor. J. Pharmacogn. 34(1) 33-39, 2003). 이때 생성된 멜라닌은 피부의 색을 검게 하므로 티로시나아제의 활성을 효과적으로 저해하는 실험과 멜라닌 함량을 측정하는 실험이 미백효과를 찾아내려는 연구방법으로 평가 받고 있다.
피부의 심미적 기능을 중요시하는 현대에는 밝고 투명한 피부를 위하여 레이저, 박피 등의 의학 기술을 이용하거나, 미백 성분이 포함된 화장품 등을 이용하고 있다.
따라서, 환한 피부를 원하는 소비자들의 기대에 따라 천연 미백 성분을 포함하는 제품 등의 개발이 이루어지고 있으며, 더욱 효과적인 천연 미백 조성물의 연구가 요구된다.
본 발명의 목적은 피부 미백 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 상기 피부 미백 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은,
배초향, 석류 및 로즈힙을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
상기 혼합물을 열수 추출하여 추출물을 제조하는 단계;
상기 추출물에 효소를 첨가하여 반응시키는 효소 처리 단계; 및
상기 효소 처리 단계 후 농축하여 조성물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백 조성물 제조방법을 제공한다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물을 건조시키는 단계를 포함할 수 있다. 또한, 상기 건조시키는 단계는 동결건조 또는 분무건조 단계를 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 배초향, 석류 및 로즈힙의 중량비는 2:2:1일 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 효소는 글루코아밀라아제(glucoamylase), Peclyve CP 및 β-글루코시다아제(β-glucosidase)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 추출물을 제조하는 단계는 상기 혼합물 중량의 1 내지 100배수의 물을 첨가하는 단계; 및
50 내지 120℃에서 100 내지 300분 동안 교반시키는 단계를 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 효소 처리 단계는 30 내지 70℃에서 2 내지 10시간 동안 교반시키는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 방법에 따라 제조되는 피부 미백 조성물을 제공한다.
또한, 상기 조성물은 멜라닌의 생성, 티로시나아제의 활성 또는 이들의 조합을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 조성물을 포함하는 식품 조성물 또는 화장품 조성물을 제공할 수 있다.
기타 본 발명의 구현예들의 구체적인 사항은 이하의 상세한 설명에 포함되어 있다.
본 발명의 피부 미백 조성물 및 그 제조방법에 따르면, 피부에 자극을 줄 수 있는 화학 첨가물을 최소화하면서 미백 효과를 증대시킨 조성물을 제공할 수 있다. 또한, 멜라닌의 생성 및 멜라닌의 합성에 관여하는 물질을 저해함으로써 피부의 흑화를 효과적으로 예방 및 개선시킬 수 있다. 그러므로, 다양한 제품에 세포 독성 없이 유용하게 적용할 수 있다.
도 1은 멜라닌의 농도를 나타낸 그래프이다.
도 2는 티로시나아제의 활성을 나타낸 그래프이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예를 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 명세서 내에서 특별한 언급이 없는 한, "내지"라는 표현은 해당 수치를 포함하는 표현으로 사용된다. 구체적으로 예를 들면, "1 내지 2"라는 표현은 1 및 2를 포함할 뿐만 아니라 1과 2 사이의 수치를 모두 포함하는 것을 의미한다.
이하, 본 발명의 구현예에 따른 피부 미백 조성물 및 그 제조방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
구체적으로 본 발명은,
배초향, 석류 및 로즈힙을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
상기 혼합물을 열수 추출하여 추출물을 제조하는 단계;
상기 추출물에 효소를 첨가하여 반응시키는 효소 처리 단계; 및
상기 효소 처리 단계 후 농축하여 조성물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백 조성물 제조방법을 제공한다.
배초향( Agastache rugosa)은 꿀풀과의 다년생 초본으로, 독특한 향을 가지고 있는 식물이다. 배초향은 유리당 성분으로 프룩토스(fructose), 글루코스(glucose), 수크로스(sucrose), 말토스(maltose) 등을 포함하고, 아미노산으로 글루탐산(glutamic acid), 아스파트산(aspartic acid), 류신(leucine) 등을 포함하고, 무기질로 칼륨, 칼슘, 나트륨, 마그네슘 등을 포함하고, 아스코르브산(ascorbic acid), 폴리페놀류 등을 포함한다. 배초향을 달인 물은 신체의 옴이나 버짐에 외용제로서 사용되기도 한다.
석류( Punica granatum)는 나이아신(niacin), 나트륨, 레티놀, 베타카로틴, 비타민, 칼륨, 인 등의 성분을 포함하고, 과육을 생으로 먹거나 차로 끓여 마실 수 있다. 특히, 항산화 성분을 함유하고 있어 노화 예방에 도움을 줄 수 있다.
로즈힙( Rosa canina)은 레몬의 20배 이상의 비타민 C를 함유하고, 비타민 B, E 및 불포화지방산을 포함하고 있어 차로 음용하거나 오일을 추출하여 피부에 도포할 수 있고, 피부 건강에 도움을 줄 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기한 방법에 따라 농축된 조성물을 건조시키는 단계를 포함할 수 있다. 상기 건조시키는 단계는 동결건조 또는 분무건조 단계를 포함할 수 있다. 동결건조는 온도를 급격하게 감소시켜 건조 대상을 얼린 상태에서 압력을 감소시켜 건조 대상이 포함하고 있는 고체화된 용매를 수증기로 승화시키는 것이다. 분무건조는 건조 대상을 열풍 속에 분무시켜 미세한 물방울 상태로 기류에 건조시키는 것이다. 예를 들면, 덱스트린(dectrin)과 같은 첨가제를 사용하여 건조의 강도를 증가시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 배초향, 석류 및 로즈힙의 중량비는 2:2:1일 수 있다. 상기와 같은 중량비에서 조성물의 미백 효과를 증대시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 효소는 글루코아밀라아제(glucoamylase), Peclyve CP 및 β-글루코시다아제(β-glucosidase)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다. 글루코아밀라아제는 글루코스를 유리시키는 효소이다. Peclyve CP는 과일 분해효소의 한 종류이다. β-글루코시다아제는 글루코시드를 가수분해하는 효소이다.
일구현예에 따르면, 상기 추출물을 제조하는 단계는 시료 중량의 1 내지 100배수, 예를 들면 10 내지 30배수의 물을 첨가하는 단계; 및
50 내지 120℃, 예를 들면 80 내지 110℃에서 100 내지 300분, 예를 들면 200 내지 300분 동안 교반시키는 단계를 포함할 수 있다. 온도가 지나치게 상승하면 혼합물 내에 함유된 피부 미백 효과를 나타내는 유효성분들이 손상될 수 있고, 온도가 지나치게 낮으면 추출이 비효율적일 수 있다. 추출 용매로는 물을 사용할 수 있고, 이외에 알콜, 예를 들면 주정과 같은 에탄올(ethanol)을 사용할 수도 있다.
일구현예에 따르면, 상기 효소 처리 단계는 30 내지 70℃, 예를 들면 40 내지 60℃에서 2 내지 10시간, 예를 들면 2 내지 4시간 동안 교반시키는 단계를 포함할 수 있다. 효소 처리 온도가 지나치게 높으면 효소가 파괴되어 반응 효율이 저하될 수 있고, 반대로 온도가 지나치게 낮을 경우 효소의 활성이 저하되어 반응이 충분히 진행되지 않을 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기와 같은 방법으로 제조되는 피부 미백 조성물은 멜라닌의 생성을 억제시킬 수 있다. 멜라닌의 합성은 티로시나아제(tyrosinase)에 의하여 티로신(tyrosin)을 기질로 하여, 디히드록시페닐알라닌(3,4-dihydroxyphenylalanine, DOPA)을 거쳐 DOPA 퀴논(quinone)으로 전환되고 효소반응으로 DOPA 크롬(chrome)을 거쳐 최종적으로 멜라닌이 생성되는 기전으로 형성된다. 본 발명에 따른 조성물은 멜라닌의 합성 과정에 관여하는 주요 물질인 티로시나아제의 활성을 억제시킴으로써 멜라닌의 생성을 예방할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 조성물을 포함하는 화장품 조성물을 제공할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 화장품 조성물은 본 발명의 목적에 영향을 받지 않는 범위 내에서 추가의 첨가 물질을 포함할 수 있다. 첨가 물질로는 예를 들면, 비타민C, 비타민B, 코직산, 이소플라본, 아미노산류, 펩타이드류, 아데노신, 단백질 분해효소 및 효소류, 알부틴, 히알루론산, 하이드로퀴논, 세라마이드, 코엔자임Q10, 테트라하이드로커큐미노이드, 안토시아닌, 콜라겐, 레티놀, 벌사상자추출물, 치자추출물, 강황추출물, 병풀추출물 등을 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되며, 피부학적으로 적용이 가능한 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 피부학적으로 적용이 가능하다는 것은 적용 대상에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 할 수 있는 조성물로서, 피부에 적용할 수 있는 외용제를 포함할 수 있으며, 상기 조성물로부터 기인하는 부작용이 유효 성분의 효능을 저하시키기 않고, 적용 대상에 심각한 자극을 유발하지 않으면서 유효성분들의 활성 및 물성을 손상시키지 않는다는 것을 의미할 수 있다. 본 발명의 피부학적으로 적용이 가능한 화장품 조성물로는 예를 들어, 용액, 현탁액, 유액, 유탁액, 페이스트, 겔, 팩, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 모발 화장품 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 구체적으로, 상기 화장품 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 겔, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 엠플, 영양에센스, 팩, 비누, 헤어샴푸, 풋샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클린저 등의 제형 등으로 제조될 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 조성물을 포함하는 기능성 식품 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물이 기능성 식품 조성물에 함유되는 경우 그대로 첨가되거나 다른 식품 성분과 함께 함유될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 포함될 수 있다.
일구현예에 따르면, 식품 또는 기능성 식품 조성물의 형태는 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태 등으로 제조될 수 있고, 일반적인 식품 또는 음료의 형태라면 특별히 제한되지 않는다. 식품 조성물의 종류로는 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 예를 들면, 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료, 비타민 복합제 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
상기 음료수 및 음료는 통상의 음료와 같이 일반적인 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 포함할 수 있다. 감미제로는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 일반적인 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 1종 이상 포함할 수 있고, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료에 함유되는 과육을 포함할 수 있다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
비교예 1: 배초향, 석류 및 로즈힙 열수 추출물 제조
배초향, 석류, 로즈힙을 고형분 비율 2:2:1로 혼합하여 혼합물을 제조한 다음, 상기 혼합물 중량의 20배수의 물을 넣고 95℃에서 240분간 교반하면서 추출물을 수득하였다. 상기 추출물을 와트만(Whatman) 4번 여과지로 감압 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거하여 조성물을 제조하였다.
비교예 2: 비스코자임(Viscozyme L) 처리 조성물
배초향, 석류, 로즈힙을 고형분 비율 2:2:1로 혼합하여 혼합물을 제조한 다음, 상기 혼합물 중량의 20배수의 물을 넣고 95℃에서 240분간 교반하면서 추출물을 수득하였다. 상기 추출물에 비스코자임(Viscozyme L)을 질량 대비, 0.2%(w/w)가 되도록 첨가하였다. 상기 효소를 첨가한 추출물을 40℃가 되도록 유지시키고, 3시간 동안 교반하면서 가수분해 반응을 진행시켰다. 효소 처리된 복합 추출물은 와트만(Whatman) 4번 여과지로 감압 여과시키고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거하여 조성물을 제조하였다.
실시예 1: 글루코아밀라아제(glucoamylase) 처리 조성물
배초향, 석류, 로즈힙을 고형분 비율 2:2:1로 혼합하여 혼합물을 제조한 다음, 상기 혼합물 중량의 20배수의 물을 넣고 95℃에서 240분간 교반하면서 추출물을 수득하였다. 상기 추출물에 글루코아밀라아제(glucoamylase)를 질량 대비, 0.2%(w/w)가 되도록 첨가하였다. 상기 효소를 첨가한 추출물을 60℃가 되도록 유지시키고, 3시간 동안 교반하면서 가수분해 반응을 진행시켰다. 효소 처리된 복합 추출물은 와트만(Whatman) 4번 여과지로 감압 여과시키고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거하여 피부 미백 조성물을 제조하였다.
실시예 2: Peclyve CP 처리 조성물
배초향, 석류, 로즈힙을 고형분 비율 2:2:1로 혼합하여 혼합물을 제조한 다음, 상기 혼합물 중량의 20배수의 물을 넣고 95℃에서 240분간 교반하면서 추출물을 수득하였다. 상기 추출물에 Peclyve CP를 질량 대비, 0.2%(w/w)가 되도록 첨가하였다. 상기 효소를 첨가한 추출물을 45℃가 되도록 유지시키고, 3시간 동안 교반하면서 가수분해 반응을 진행시켰다. 효소 처리된 복합 추출물은 와트만(Whatman) 4번 여과지로 감압 여과시키고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거하여 피부 미백 조성물을 제조하였다.
실시예 3: β글루코시다아제(β-glucosidase) 처리 조성물
배초향, 석류, 로즈힙을 고형분 비율 2:2:1로 혼합하여 혼합물을 제조한 다음, 상기 혼합물 중량의 20배수의 물을 넣고 95℃에서 240분간 교반하면서 추출물을 수득하였다. 상기 추출물에 β글루코시다아제(β-glucosidase)를 질량 대비, 0.2%(w/w)가 되도록 첨가하였다. 상기 효소를 첨가한 추출물을 50℃가 되도록 유지시키고, 3시간 동안 교반하면서 가수분해 반응을 진행시켰다. 효소 처리된 복합 추출물은 와트만(Whatman) 4번 여과지로 감압 여과시키고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거하여 피부 미백 조성물을 제조하였다.
실험예 1: 멜라닌 농도 측정
멜라닌 농도 측정에 사용할 세포로, 마우스 흑색종 세포주인 B16F10 세포를 페니실린(penicillin) 100 IU/ml 및 스트렙토마이신(streptomycin) 100 μg/ml과 10%의 소 태아 혈청(FBS)을 함유하는 Dulbeco's Modified Eagle Media(DMEM)를 이용하여 100mm 세포 배양 접시(cell culture dish)에 70 내지 80%의 밀도로 배양하였다.
배양시킨 B16F10 세포를 페니실린(penicillin) 100 IU/ml 및 스트렙토마이신(streptomycin) 100 μg/ml과 10%의 소 태아 혈청(FBS)을 함유하는 Dulbeco's Modified Eagle Media(DMEM)를 이용하여 5Х10 4 cell/ml의 농도로 조절한 후, 12 웰 플레이트(well plate)에 접종하고, 5% CO 2 및 37℃에서 전 배양하였다. 세포가 처리된 플레이트에 각각의 실시예 및 비교예에 따른 조성물을 50ug/ml 농도로 처리하였고, 대조군으로 조성물을 무처리한 것을 사용하였다. 각각의 웰에 α-멜라노사이트 자극 호르몬(α-melanocyte-stimulating hormone, α-MSH)을 처리하여 배양시켰다. 72시간 후 배지를 제거하고 멜라닌의 용해를 위하여 1N NaOH를 첨가하였다. 멜라닌의 함량은 Elisa microplate reader를 사용하여 405nm에서 흡광도를 측정함으로써 분석하였고, 그 결과는 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타난 바와 같이, 효소를 처리하지 않은 혼합 추출물인 비교예 1의 경우 멜라닌의 함량 감소율이 매우 적게 나타난 반면, 실시예의 조성물의 멜라닌 억제 효과가 우수한 것을 확인할 수 있다. 특히, 실시예 3의 경우 멜라닌 생성 억제 효과가 뛰어난 것을 알 수 있다.
실험예 2: 티로시나아제(tyrosinase) 활성 측정
실험예 1과 같이 배양시킨 B16F10 세포를 사용하였다. 상기의 세포가 처리된 플레이트에 각각의 실시예 및 비교예에 따른 조성물을 50ug/ml 농도로 처리하였고, 대조군으로 조성물을 무처리한 것을 사용하였다. 각각의 웰에 α-멜라노사이트 자극 호르몬(α-melanocyte-stimulating hormone, α-MSH)을 처리하여 배양시켰다. 72시간 후, RIPA 버퍼(buffer)를 이용하여 세포를 파괴시킨 후 14,000rpm에서 20분 동안 원심분리하여 상등액을 얻었다. 상등액에 0.1% L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)를 첨가한 후 37℃에서 3시간 동안 배양하였다. 티로시나아제의 활성은 Elisa microplate reader로 475nm에서 흡광도를 측정함으로써 분석하였으며, 그 결과는 도 2에 나타내었다. 도 2에 나타난 바와 같이, 비교예 1 및 2를 사용한 경우 티로시나아제의 활성 감소율이 매우 적게 나타난 반면, 실시예예 따른 조성물을 사용한 경우 티로시나아제의 활성이 크게 감소하는 것을 확인할 수 있다. 특히, 실시예 3을 처리한 경우의 티로시나아제 활성 억제 효과가 뛰어난 것을 알 수 있다.
상기와 같은 결과로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명은 멜라닌의 생성을 감소시킬 수 있다. 또한, 멜라닌 형성에 관여하는 티로시나아제의 활성을 감소시킬 수 있으므로 멜라닌의 생성을 예방하여 피부 미백 효능을 증대시킬 수 있음을 확인하였다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 또한, 본 발명에 개시된 실시 예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시 예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (12)

  1. 배초향, 석류 및 로즈힙을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
    상기 혼합물을 열수 추출하여 추출물을 제조하는 단계;
    상기 추출물에 효소를 첨가하여 반응시키는 효소 처리 단계; 및
    상기 효소 처리 단계 후 농축하여 조성물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백 조성물 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물을 건조시키는 단계를 포함하는 것인, 조성물 제조방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 건조시키는 단계가 동결건조 또는 분무건조 단계를 포함하는 것인, 조성물 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 배초향, 석류 및 로즈힙의 중량비가 2:2:1인 것인, 피부 미백 조성물 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 효소가 글루코아밀라아제(glucoamylase), Peclyve CP 및 β-글루코시다아제(β-glucosidase)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것인, 피부 미백 조성물 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 추출물을 제조하는 단계가 상기 혼합물 중량의 1 내지 100배수의 물을 첨가하는 단계; 및
    50 내지 120℃에서 100 내지 300분 동안 교반시키는 단계를 포함하는 것인, 피부 미백 조성물 제조방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 효소 처리 단계가 30 내지 70℃에서 2 내지 10시간 동안 교반시키는 단계를 포함하는 것인, 피부 미백 조성물 제조방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따라 제조되는 피부 미백 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 조성물이 멜라닌의 생성을 억제하는 것인, 피부 미백 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 조성물이 티로시나아제의 활성을 억제하는 것인, 피부 미백 조성물.
  11. 제8항에 따른 조성물을 포함하는 식품 조성물.
  12. 제8항에 따른 조성물을 포함하는 화장품 조성물.
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