WO2020096486A1 - Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний - Google Patents

Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний Download PDF

Info

Publication number
WO2020096486A1
WO2020096486A1 PCT/RU2019/000650 RU2019000650W WO2020096486A1 WO 2020096486 A1 WO2020096486 A1 WO 2020096486A1 RU 2019000650 W RU2019000650 W RU 2019000650W WO 2020096486 A1 WO2020096486 A1 WO 2020096486A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
drug
group
vcp
animals
tumor
Prior art date
Application number
PCT/RU2019/000650
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Шамиль Сионович ИЛЬЯСОВ
Александр Григорьевич Шавва
Светлана Николаевна Морозкина
Original Assignee
Шамиль Сионович ИЛЬЯСОВ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Шамиль Сионович ИЛЬЯСОВ filed Critical Шамиль Сионович ИЛЬЯСОВ
Priority to US17/292,688 priority Critical patent/US20220105058A1/en
Priority to EP19882497.1A priority patent/EP3878454A4/en
Priority to EA202191323A priority patent/EA202191323A1/ru
Priority to CN201980088362.1A priority patent/CN113507932A/zh
Publication of WO2020096486A1 publication Critical patent/WO2020096486A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/18—Sulfonamides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/138—Aryloxyalkylamines, e.g. propranolol, tamoxifen, phenoxybenzamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/566—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol having an oxo group in position 17, e.g. estrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the invention relates to the field of medicine and the pharmaceutical industry and relates to agents for treating cancer, including breast cancer.
  • Estrogens circulate in the blood and accumulate in the tumor in the form of sulfates, which are not able to bind to estrogen receptors, but after turning into free hormones, they activate tumor growth. Therefore, the strategic treatment line, based on the use of inhibitors that block the formation of this group of free hormones in the tumor, is promising.
  • Tamoxifen belongs to drugs from the group of selective modulators of estrogen receptors that block the effects of estrogen on hormone-dependent tissues, including breast tissue. Tamoxifen is the standard hormone replacement therapy for premenopausal and postmenopausal women. The most common side effects associated with the use of tamoxifen are: an increased risk of vein thrombosis, an aggravation of the course of diseases of the cardiovascular system (including angina attacks), as well as the appearance of endometrial neoplasms (polyps, and endometrial cancer), as well as uterine fibroma. Tamoxifen also has hepatotoxicity. According to the biopharmaceutical classification system (BCS) developed by Gordon Amidon et al in 1995, Tamoxifen is assigned to the second class - a drug that has low solubility and high permeability.
  • BCS biopharmaceutical classification system
  • Aromatase inhibitors have shown greater efficacy than tamoxifen.
  • such aromatase inhibitors as letrozole and anastrazole have been used in this area, which are classified as first class in the BCS system - drugs that have high solubility and high permeability.
  • the side effects of aromatase inhibitors are osteoporosis, hot flashes, headaches.
  • steroid sulfatase is attracting attention in connection with the local interstitial formation of estrogen from an abundant pool of circulating estrone sulfate.
  • Steroid sulfatase catalyzes the hydrolysis of estrone sulfate to estrone and DHEA sulfate to DHEA (Dibbelt 1., Biol. Chem., Hoppe-Seyler, 1991, 372, 173-185; Stein C., J. Biol. Chem., 1989, 264, 13865-13872).
  • estrone sulfamate inhibits estrone sulfatase, however the release of free hormone leads to the appearance of strong uterotropic activity [Shields-Botella J. et al., J Steroid Biochem. Mol. Biol., 2003, vol. 84, p. 327-335].
  • Equilenine compounds are part of therapeutic agents (Premarin®) used in hormone replacement therapy. The presence of these properties is desirable, since the use of steroid estrogen metabolism inhibitors implies their long-term use. Disclosure of invention
  • the objective of the present invention is the search and development of effective synthesis of compounds that can be used as anti-oncological agents in the mono- and adjuvant therapy of cancer, such as hepatocarcinoma, gastric carcinoma, lung cancer, chronic myelogenous leukemia, breast cancer, including its deadliest form is thrice negative (ER- / PR- / HER-2-).
  • cancer such as hepatocarcinoma, gastric carcinoma, lung cancer, chronic myelogenous leukemia, breast cancer, including its deadliest form is thrice negative (ER- / PR- / HER-2-).
  • the problem is solved using the compound 3-0-sulfamate-16.1 b-dimethyl-O-homoequilenin (3), which inhibits estrone sulfatase.
  • Sulfamate 3 was obtained by a known method [Morozkina S.N., Gluzdikov I.A., Drozdov A.S., Selivanov S.I., Kovalev R.A., Filatov M.V., Shavva A.G. ZhORKh, 2015, v. 51, No. 3, p. 425-430].
  • the results of modeling steroid binding have shown that the structure of this steroid is poorly compatible with the geometry of the ligand binding receptor pocket.
  • the distance between the oxygen of the keto group of the steroid and NH His524 is 4.9 A, which eliminates the formation of a hydrogen bond.
  • the distance between the hydroxyl group at C3 and the oxygen of the Glu353 carboxyl group, according to calculated data, is about 3.9 A, which is much greater than in combination with the natural hormone estradiol (2.34 A).
  • the compound completely inhibits the proliferation of tumor cells MCF-7.
  • the drug belongs to hazard class 4 (LD 5 o> 300-2000 mg / kg).
  • the data obtained allow us to evaluate the dose for the study of antitumor activity as safe.
  • the claimed drug is more effective than used in in clinical practice, tamoxifen and an aromatase inhibitor letrozole.
  • the scope of the compound is the treatment of breast cancer, including a triple-negative form.
  • the drug and the reference drug were administered repeatedly intragastrically at doses of 30 mg / kg and 10 mg / kg daily for 21 days.
  • the placebo group was administered a 1% starch solution intragastrically in equivalent volumes and in a similar regimen. Measurement of tumor nodes was performed 2 times a week. The antitumor activity was judged by a standard indicator of inhibition of tumor growth (SRW). After treatment, the last measurement of the tumor was performed, the animals were weighed and euthanized.
  • SRW standard indicator of inhibition of tumor growth
  • mice All necessary manipulations with animals (tests, weighing, measurement, opening of animals) were carried out from 9 to 12 noon. The animals were weighed on the first day of the experiment, and then 2 times a week throughout the experiment, according to the time protocol.
  • the measurement of the tumor node was carried out after the introduction of the tumor 2 times a week throughout the experiment.
  • the volume of the tumor node was determined by the formula:
  • V / 6 * L * W * H, where L, W, H are the linear dimensions of the tumor.
  • SRW tumor growth
  • V k and 1 are the average tumor volume (mm3) in the control and experimental groups, respectively.
  • the animals were euthanized by cervical dislocation of the cervical vertebrae.
  • adenocarcinomas which are characterized by a low content of estrogen receptors (ER) (Fig. 1) and the absence of progesterone receptors (PR).
  • ER estrogen receptors
  • PR progesterone receptors
  • Two subtypes can be distinguished, namely ER +, PR-, and ER-, PR- [2].
  • An immunohistochemical study of ERa in breast tumors revealed only 10 positively stained nuclei in only 10 samples out of 45 (Fig. 1).
  • the model is sensitive to the CAF regimen (cyclophosphamide, adriamycin, 5-fluorouracil), and inhibition of tumor growth is observed, leading to stabilization of the average tumor volume (Fig. 2). Inhibition of tumor growth was 63% on day 14 and 46% on day 21 of the experiment.
  • Tamoxifen Hexal (Hexal AG, Germany, 83607 Holzmaschinen, HA1575 series from 01/17), which is a tablet coated with a white or slightly yellowish shell, round, biconvex, with a uniform smooth surface, containing 20 mg active substance.
  • the animals had unlimited access to the combined, full-grain, granulated food for laboratory rodents.
  • Drinking water was given ad libitum in standard 190 ml drinking bowls manufactured by TECNIPLAST from high-temperature polysulfone with a silicone ring and a metal cap made of AISI 316 stainless steel.
  • the temperature in the room was maintained at the level of 20-26 ° ⁇ , relative humidity - 50-70%.
  • the photoperiod is set 12 hours a night - 12 hours a day under artificial lighting with fluorescent lamps.
  • An identification card was installed on the cage, on which the card / cage number, experimental group number, individual animal numbers, their number and gender, study number, surname, name, patronymic of the study leader were indicated.
  • Each animal was mounted on the auricle with a metal tap for small laboratory rodents made of nickel alloy Kent-Scientific, USA (three-digit numbers stamped by the manufacturer on the taps).
  • the mice were euthanized with carbon dioxide. All animal corpses were autopsied with a macroscopic description.
  • the LD50 of the preparation was determined in FVB mice of the HER-2 / neu transgenic line according to the OECD 423 test (OECD guideline for testing of chemicals. Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method).
  • the first step 300 mg / kg of the drug was administered to 3 mice.
  • the studied drug was injected intramuscularly intramuscularly (iv) using a metal atraumatic probe (in accordance with the oral route of use in the clinic).
  • a metal atraumatic probe in accordance with the oral route of use in the clinic.
  • the substance of the preparation was mixed with olive oil to obtain a suspension of the required concentration for administration at the rate of 0.1 ml of suspension per 10 g of animal body weight.
  • a dosage form for administration was prepared ex tempore.
  • the body weight of animals was recorded using attorneys of high-speed electronic laboratory scales Ohaus Scout Pro (USA), with a maximum load of 2000 g, measuring step 0.1 g.
  • Pathomorphological study was subject to all experimental animals at the end of the study. After euthanasia, the animals were carefully examined for external pathological signs. A study of the state of the thoracic and abdominal cavities and a macroscopic examination of the internal organs. Microscopic analysis of organs and tissues of laboratory animals was not performed, since the death of animals was not recorded during the entire observation period, in addition, a macroscopic analysis of internal organs did not reveal pathological changes. Table 1.
  • the test drug was administered intravenously using a metal atraumatic probe (in accordance with the proposed oral route of use in the clinic).
  • the drug was administered in a single daily dose (20 mg / kg body weight) and a 5-fold daily dose of 100 mg / kg body weight.
  • a solution of preparations in olive oil was prepared (refined olive oil with the addition of Global Village Clasico unrefined Extra Village brand L series: 183351116, shelf life until 04/26/2020, BAIEO, Spain).
  • the volume of administration was OD ml per 10 g of mouse body weight (0.2 ml of the finished form for a mouse weighing 20 g). Beginning of drug administration 24 hours after randomization. The course of administration was 27-28 days.
  • Comparison drug - tamoxifen - was also administered using a metal atraumatic probe (in accordance with the oral route of use in the clinic), the daily dose was 4 mg / kg and was determined by recounting the clinical doses [5]. This dose corresponds to a daily dose for a person of 20 mg / kg.
  • a tamoxifen tablet was crushed in a mortar, a suspension of 40 ml of olive oil was prepared from the obtained powder, the volume of administration was 0.08 ml per 10 g of body weight of the mouse, the duration of administration corresponded to the duration of administration of experimental preparations and was 27-28 days.
  • the evaluation criteria were clinical observation data, animal body weight, death periods (if any), tumor growth in dynamics, pathomorphological study data (verification of neoplasm during autopsy, assessment of toxic effects by a macroscopic picture of changes in internal organs).
  • the body mass of the animals was recorded before the first injection of the preparations and then twice a week using attorneys of high-speed electronic laboratory scales Ohaus Scout Pro (USA), with a maximum load of 2000 g, measuring step 0.1 g.
  • tumor volume was calculated by the formula:
  • V (axb) 2/2
  • TPO (VK-VO) / VKx 100 (%)
  • VK is the average tumor volume in the control group
  • VO is the average tumor volume in the experimental group
  • the animals were continuously monitored for the first 60 minutes, then they were examined hourly for 3 hours, then after 24 hours. On the second day, observation was carried out twice a day. Then the observations were carried out once a day. A clinical examination of each animal was carried out after administration of the substance, in a day, then weekly. A detailed examination of the animal was carried out in the cage, in the hands. The general condition of the animals was noted: the features of their behavior, motor activity, and the condition of the hair and skin integument. With the introduction of the drug at a dose of 300 mg / kg during the experiment, the death of animals was not recorded. Visually, no signs of intoxication were observed over the entire observation period in any animal. The appearance and behavior of animals were common. When picked up, the reaction was standard low. Vocalization in animals was not observed, including directly during and immediately after administration.
  • the average body weight increased uniformly during the period of observation of animals that received the drug at a dose of 300 mg / kg. Since the death of animals with the introduction of a dose of 300 mg / kg was absent, proceeded to the introduction of the drug at a dose of 2000 mg / kg The drug was administered in 2 divided doses with an interval of 3 hours, in a volume of 0.1 ml per 10 g of body weight per dose at a concentration of 100 mg / ml since suspension in oil at a higher concentration is thick, which does not allow the drug to be administered through a probe. With the introduction of a dose of 2000 mg / kg, a clinical picture of intoxication was not observed.
  • the hair of the animals had a neat appearance, was shiny, without foci of baldness.
  • the fatness of the animals was satisfactory.
  • the submandibular lymph nodes had a rounded shape, pale pink color and moderate density.
  • the salivary glands are of normal shape, pale yellow in color, of moderate density.
  • the peritoneum is smooth, shiny, there is no free fluid in the cavity.
  • the spleen is not enlarged, dense, the capsule is smooth and shiny.
  • the pancreas is pale pink, lobed.
  • the size and shape of the liver are not changed, the capsule of the liver is shiny.
  • the liver tissue was brownish in color and moderately dense.
  • the kidneys are dense, the capsule is smooth, shiny, around the kidneys moderate growth of fatty tissue.
  • the ovaries are not enlarged with a shiny surface.
  • the pleura is smooth, shiny, there is no free fluid in the chest cavity.
  • the thymus is triangular in shape, whitish in color. Light pink light, airy.
  • the drug in accordance with the OECD 423 test, can be assigned to the 5th or unclassified category with an LD50 of equal to or more than 5000 mg / kg, which corresponds to the class of low-hazard substances.
  • the body weight of animals increased during the entire observation period in all groups the increase in body weight may be associated with an increase in the volume of tumor nodes in mice (Table 4).
  • mice The dynamics of the average body weight of mice (g) when evaluating the antitumor activity of the drug
  • M is the average value
  • w is the arithmetic mean error
  • N is the number of tumors at the beginning of treatment and included in the analysis.
  • # - comparison drug group is given from the third series of experiments. * - p ⁇ 0.05, compared with the control group, and p ⁇ 0.05, compared with the comparison drug group.
  • % stabilization of the disease an indicator similar to the RECIST criterion, reflecting the frequency of tumors, the volume of which did not increase by more than 20% by the end of observation in relation to the beginning of treatment. * - p ⁇ 0.05, compared with the control group. # - comparison drug group is given from the third series of experiments. The average total tumor volume in mice with the introduction of the drug in doses of 20 mg / kg and 100 mg / kg was significantly less than in the control group from 14 to 28 days. And for a dose of 100 mg / kg on day 28 of the experiment, this indicator was statistically significantly less than in the comparison drug group (Table 7, Fig. 6).
  • mice The average total tumor volume (cm) in mice when evaluating the antitumor activity of the drug.
  • # - comparison drug group is given from the third series of experiments. * - p ⁇ 0.05, compared with the control group a - p ⁇ 0.05, compared with the comparison drug group.
  • the drug can be assigned to the 5th or unclassified category with an LD50 of equal to or more than 5000 mg / kg, which corresponds to the class of low-hazard substances according to the accepted GOST.
  • FIG. 1 Staining with antibodies to ERa of a breast tumor.
  • FIG. 2 Dynamics of the average volume of tumors that were available at the beginning of the experiment in mice with CAF therapy.
  • FIG. 3 Dynamics of the average total volume of tumors that were available at the beginning of the experiment, in mice treated with CAF.
  • Fig 4 Relative change in the average total volume of tumors that were available at the beginning of the experiment, in mice during therapy with CAF.
  • FIG. 5 Dynamics of the average tumor volume in mice when evaluating the antitumor activity of the drug
  • FIG. 6 The average total tumor volume in mice when evaluating the antitumor activity of the drug.
  • FIG. 7 Relative change in the average total tumor volume in mice when evaluating the antitumor activity of the drug.
  • MCF-7 mammary adenocarcinoma
  • CPFs normal human skin fibroblasts
  • Cells were plated on Carrel vials of 50 x 10 4 cells per vial.
  • the culture medium was replaced by a medium containing sulfatase inhibitors to a final concentration of 50 ⁇ g / ml, after which these tumor cell lines were incubated for various periods of time (from 24 to 72 hours) .
  • the inhibitor is dissolved in DMSO.
  • the final concentration of DMSO in the culture medium did not exceed 0.5%.
  • a control was placed with the addition of DMSO without inhibitors of sulfatases.
  • mice of the FVB line transgenic for HER-2 / neu ER- / PR- / HER2 +
  • the steroid inhibits tumor growth comparable to that used in clinical practice of tamoxifen, which suggests their joint use for the treatment of breast cancer glands.
  • the compound inhibits cell growth by 83%, which is comparable to the etoposide chemotherapeutic drug used in clinical practice.
  • mice 10 tumors.
  • Vcp l, 5 ⁇ 0.4 mm.
  • the number of fallen mice in the group before the end of the observation period is 2 out of 10.
  • Group drug 10 mg / kg.
  • 7 mice 7 tumors.
  • Vcp l, 0 ⁇ 0.4 mm without significant differences from the control group.
  • the number of dead mice in the group before the end of the observation period was 5 out of 7.
  • Vcp 266.5 ⁇ 91.3 mm in the control, p ⁇ 0.106).
  • the number of dead mice in the group before the end of the observation period was 6 out of 7.
  • mice 12 tumors.
  • Vcp 3.8 ⁇ 1.0 mm 3 .
  • the number of fallen mice in the group before the end of the observation period was 6 out of 12.
  • the maximum unreliable SRW was observed, equal to 83.1%
  • Tamoxifen group 30 mg / kg.
  • the group of 10 mice 10 tumors.
  • Vcp 4, l ⁇ l, 2 mm 3 without significant differences from the control group.
  • the number of fallen mice in the group before the end of the observation period was 4 out of 10.
  • Tamoxifen at a dose of 10 mg / kg was not effective: the biologically significant value of SRW was not reached during the entire observation period; on the contrary, stimulation of tumor growth was recorded from the 10-17th day after the start of treatment.
  • a repeated study of the antitumor activity of the drug on the same SKBR3 model compared to Tamoxifen (substance) showed that the drug at a dose of 10 mg / kg has a high antitumor effect with a maximum reliable TPO on the 14th (94.3%, p ⁇ 0.03 ) and on the 24th (86.3%, p ⁇ 0.04) day, which reproduced the result obtained in the first experiment.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и касается средств для лечения рака. 3-О-сульфамат-16,16-диметил-D-гомоэквиленина предложен в качестве противоонкологического агента при моно- и адъювантной терапии при онкологических заболеваний, таких как гепатокарцинома, карцинома желудка, рак легкого, хроническая миелогенная лейкемия, рак молочной железы, включая трижды негативную форму рака молочной железы.

Description

ПРИМЕНЕНИЕ 3-О-СУЛЬФАМАТА 16,16- ДИМЕТИЛ-О-ГОМОЭКВИЛЕНИНА ДЛЯ
ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Область техники
Изобретение относится к области медицины и химико- фармацевтической промышленности и касается средств для лечения рака, в том числе рака молочной железы.
Предшествующий уровень техники
Рак молочной железы является ведущим онкологическим заболеванием у женщин [Parkin D.M., Bray F., Ferlay J., Pisani P., CA Cancer J. Clin., 2005, vol. 55, p. 74-108]. По данным ВОЗ, в мире 2.09 миллионов больных, а ежегодно умирают от рака молочной железы 627 тыс. женщин [htp://www.who.int/news- room/fact-sheets/detail/cancer] .
Значительная часть опухолей этой локализации прогрессирует под действием эстрогенов [Yue W., Yager J.D., Wang J.-P., Jupe E.R., Santen R.J., Steroids , 2013, vol. 78, p. 161- 170]. При иммуногистохимическом исследовании рака молочной железы определяются рецепторы эстрогенов (ER), прогестерона (PR) и her2neu («чувствительность к герцептину»). Значительная часть опухолей содержат рецепторы эстрогенов, прогестерона и/или HER2NEU 3+. Если опухоль не имеет рецепторов и не чувствительна к герцептину (ER0, PRO, HER2NEU 0-1) её рассматривают как трижды негативную (ER-/PR-/HER-2-). Это одна из самых смертоносных форм рака молочной железы по причине отсутствия мишеней для подавления её роста. На сегодняшний день в мире нет лекарственных препаратов для лечения этой формы рака.
Эстрогены циркулируют в крови и накапливаются в опухоли в виде сульфатов, не способных связываться с рецепторами эстрогенов, однако после превращения в свободные гормоны они активируют рост опухоли. Поэтому перспективной является стратегическая линия лечения, в основе которой лежит применение ингибиторов, блокирующих образование этой группы свободных гормонов в опухоли.
К препаратам из группы селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов, которые блокируют эффекты эстрогена на гормонозависимые ткани, в том числе - на ткани молочной железы, относится тамоксифен. Тамоксифен является стандартом гормональной терапии для женщин в пременопаузе и постменопаузе. Наиболее характерными побочными эффектами, возникающими на фоне применения тамоксифена, являются: повышение риска развития тромбоза вен, усугубление течения заболеваний сердечно-сосудистой системы (включая приступы стенокардии), а также появление новообразований эндометрия (полипы, и рак эндометрия), а также фиброма матки. Также тамоксифен обладает гепатотоксичностью. По биофармацевтической классификационной системе (БКС), разработанной Gordon Amidon с соавторами в 1995 году, тамоксифен отнесён ко второму классу - препарат, который имеет низкую растворимость и высокую проницаемость.
Большую эффективность по сравнению с тамоксифеном показали ингибиторы ароматазы. В настоящее время нашли применение в данной области такие ингибиторы ароматазы как летрозол и анастразол, которые по системе БКС отнесены к первому классу - препараты, которые имеют высокую растворимость и высокую проницаемость. К побочным эффектам ингибиторов ароматазы является остеопороз, приливы, головные боли.
Кроме того, привлекает внимание стероидная сульфатаза в связи с локальным межтканевым образованием эстрогенов из обильного пула циркулирующего сульфата эстрона. Стероидная сульфатаза катализирует гидролиз сульфата эстрона до эстрона и сульфата DHEA до DHEA (Dibbelt 1., Biol. Chem., Hoppe-Seyler, 1991, 372, 173-185; Stein C., J. Biol. Chem., 1989, 264, 13865- 13872).
Самым известным ингибитором стероидной сульфатазы является ЕМАТЕ- сульфамат эстрона (Ahmed S., Сшт. Med. Chem., 2002, vol. 9, no. 2, p. 263-273). Однако он обладает существенным недостатком. Под действием ингибиторов сульфатазы эстрона, имеющих в своем составе сульфаматную группу, происходит необратимая дезактивация фермента с высвобождением свободного лиганда [Howarth N.M., Purohit А., Reed M.J. J. Med. Chem., 1994, vol. 37, p. 219-221]. В частности, сульфамат эстрона ингибирует сульфатазу эстрона, однако высвобождение свободного гормона приводит к появлению сильной утеротропной активности [Shields-Botella J. et al., J Steroid Biochem. Mol. Biol., 2003, vol. 84, p. 327-335].
Таким образом, при поиске новых противоонкологических агентов исследователи должны учесть, что носитель сульфаматной группы ингибитора сульфатазы эстрона не должен обладать гормональной (утеротропной) активностью.
В качестве средства профилактики карциномы молочной железы известно применение d-эквиленина, который не обладает канцерогенными свойствами. На основе производных эквиленина получены препараты с гипохолестеринемическим действием, лишенные утеротропной и гипертриглицеридемической активности [Урусова Е.А., Глуздиков И.А., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Николаев С.В., Шавва А.Г. // Синтез и исследование производных эквиленина и его модифицированных аналогов. ЖОрХ. 2004. Т. 40. Вып. 4. С. 506-512].
Соединения эквиленинового ряда входят в состав терапевтических средств (Premarin®), используемых в гормонозаместительной терапии. Наличие указанных свойств желательно, так как использование ингибиторов метаболизма стероидных эстрогенов подразумевает их длительное применение. Раскрытие изобретения
Задачей настоящего изобретения является поиск и разработка эффективного синтеза соединений, которые могут быть использованы в качестве противоонкологических агентов при моно- и адъювантной терапии онкологических заболеваний, таких как гепатокарцинома, карцинома желудка, рак легкого, хроническая миелогенная лейкемии, рак молочной железы, в том числе при его самой смертоносной форме- трижды негативной (ER-/PR-/HER-2-).
Задача решается использованием соединения 3-0- сульфамат- 16,1 б-диметил-О-гомоэквиленина (3), который ингибирует сульфатазу эстрона.
Figure imgf000007_0001
Схема синтеза целевого соединения (3) представлена ниже.
Отличительной особенностью, в отличие от опубликованных данных, отработанная схема позволяет масштабировать получение целевого соединения в промышленных масштабах.
Figure imgf000008_0001
Реакция известной изотиурониевой соли [Аль Сафар, Захарычев А.В., Ананченко С.Н., Торгов И.В. // Синтез некоторых 16,16-диметил-0-гомостероидов. Изв. АН СССР. Сер. Хим. 1968. No 10. С. 2326-2332] с 2,4,4-триметилциклопентан-1,3- дионом приводит к образованию секостероида, циклодегидратация которого позволяет получить эстрапентаен (1). После обработки последнего Ni/Ra в условиях, предложенных ранее для синтеза близкого по структуре D- гомоаналога [Gluzdikov I.A., Egorov M.S., Selivanov S.I., Starova G.L., Shavva A.G. New analogues of D-homoequilenene with substitutents in the D ring. Russian J. Org. Chem., 2006, vol. 42, no. 11, pp. 1675-1682], выделили метиловый эфир 16,1 б-диметил-D- гомоэквиленин (2) [Глуздиков И. А. Дисс. на соискание степени канд. наук, 2007, Санкт-Петербург]. Сульфамат 3 получали по известной методике [Морозкина С.Н., Глуздиков И.А., Дроздов А.С., Селиванов С.И., Ковалев Р.А., Филатов М.В., Шавва А.Г. ЖОрХ, 2015, т. 51, N 3, с. 425-430]. Результаты моделирования связывания стероида показали, что структура этого стероида плохо совместима с геометрией лигандсвязывающего кармана рецептора. Расстояние между кислородом кетогруппы стероида и NH His524 составляет 4.9 А, что исключает образование водородной связи. Расстояние между гидроксильной группой при СЗ и кислородом карбоксильной группы Glu353, по расчетным данным, около 3.9 А, что намного больше, чем в комплексе с природным гормоном эстрадиолом (2.34 А).
Несоответствие между геометрией стероида и областью рецептора, ответственной за связывание лиганда, будет причиной низкого сродства рассматриваемого соединения к рецептору, в результате чего данный стероид практически не обладает утеротропной активностью.
Соединение полностью ингибирует пролиферацию опухолевых клеток MCF-7.
Препарат относится к 4 классу опасности (LD5o>300-2000 мг/кг). Полученные данные позволяют оценить дозы для исследования противоопухолевой активности как безопасные.
При изучении связывания с рецепторами эстрогенами, показано, что сульфамат не обладает гормональным действием в концентрациях -0.001 и 0.01, 0.1 и 1.0 микромоль.
На животных моделях, с привитой человеческой опухолью трижды негативного рака молочной железы заявленный препарат более эффективен по сравнению с использующимися в клинической практике тамоксифеном и ингибитором ароматазы летрозолом.
Таким образом, область применения соединения - лечение рака молочной железы, включая трижды-негативную форму.
Проведены доклинические исследования специфической активности на моделях РМЖ выполнены в параллельном сравнении с противоопухолевым препаратом ТФ (препарат сравнения). Сравнительное исследование препаратов in vivo выполнено на мышах-самках Balb/c Nude с п/к трансплантированными опухолевыми клетками. Длительность исследования составила 29 суток после первого введения препарата (введение препаратов начинали на 5-е сутки после трансплантации опухолевого штамма).
Препарат и препарат сравнения вводили многократно внутрижелудочно в дозах 30 мг/кг и 10 мг/кг ежедневно в течение 21 дня.
Группе плацебо вводили 1% раствор крахмала внутрижелудочно в эквивалентных объемах и аналогичном режиме. Измерение опухолевых узлов проводили 2 раза в неделю. О противоопухолевой активности судили по стандартному показателю торможения роста опухоли (ТРО). После окончания лечения проводили последнее измерение опухоли, животных взвешивали и подвергали эвтаназии.
Все необходимые манипуляции с животными (тесты, взвешивание, измерение, вскрытие животных) выполнялись с 9 до 12 часов дня. Взвешивание животных проводили на первые сутки эксперимента, и затем 2 раза в неделю в течение всего эксперимента, согласно временному протоколу.
Измерение опухолевого узла проводили после введения опухоли 2 раза в неделю в течение всего эксперимента. Объем опухолевого узла определяли по формуле:
V = /6*L* W*H, где L,W,H— линейные размеры опухоли.
Определение противоопухолевой активности
Критерием эффективности исследуемого препарата служил показатель торможения роста опухоли (ТРО), который вычисляли по формулам:
Figure imgf000011_0001
где Vk и 1 - средний объем опухоли (мм3) в контрольной и опытной группах соответственно.
После курса лечения животным проводили эвтаназию путем цервикальной дислокации шейных позвонков.
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета SPSS 21 (лицензия JN 20130626-3). В качестве описательных статистик в работе приведены: среднее арифметическое, стандартное отклонение (SD), ошибка среднего (SE), медиана, квартили, межквартильный размах. Для сравнения количественных признаков в группах применяли критерий Манна-Уитни-Вилкоксона без поправок на множественные сравнения. Результаты считали статистически значимыми при р<0,05.
Опухоли молочной железы (МЖ) у мышей самок линии FBV/N, трансгенных по HER-2/neu представляют собой аденокарциномы, которые характеризуются низким содержанием рецепторов эстрогена (ЭР) (Рис. 1) и отсутствием рецепторов прогестерона (ПР). Можно выделить два подтипа, а именно ЭР+, PR-, и ЭР-, ПР- [2]. При иммуногистохимическом исследовании ERa в опухолях МЖ только в 10 образцах из 45 обнаружены единичные позитивно окрашенные ядра (Фиг. 1).
Модель чувствительна к схеме CAF (циклофосфамид, адриамицин, 5-фторурацил), при этом отмечается торможение роста опухоли, приводящее к стабилизации среднего объема опухолей (Фиг. 2). Торможение роста опухоли составило 63% на 14 сутки и 46% на 21 сутки опыта.
Поскольку у животных возможно развитие множественных опухолей, то представляется целесообразным анализ среднего суммарного объема опухолей у мышей (Фиг. 3) и его относительное изменение к началу опыта (Фиг. 4). На графике относительного прироста объема опухоли видно, что происходит линейное изменение этого показателя в контрольной группе, что свидетельствует о целесообразности использования данного показателя для оценки биологического ответа опухоли на лечение. Так при воздействии схемы CAF наблюдается отсутствие изменения этого показателя на протяжении почти 3-х недель, свидетельствующее о стабилизации заболевания. Частота стабилизаций отдельных опухолей составляет около 60% к 21 суткам.
Исследование проведено на мышах-самках линии FVB трансгенных по HER-2/neu конвенциональной категории, линия получена из питомника Charles River Laboratories (Италия). Возраст животных к началу исследования составлял 21-41 неделю, вес - 25-30 г.
Для исследования была использована лекарственная форма препарата Тамоксифен Гексал (Гексал АГ, Германия, 83607 Хольцкирхен, серия НА1575 от 01/17), представляющая собой таблетки, покрытые оболочкой белого или слегка желтоватого цвета, круглые, двояковыпуклые, с однородной гладкой поверхностью, содержащие 20 мг действующего вещества.
Условия содержания соответствуют стандартам, указанным в руководстве The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (ILAR publication, 1996, National Academy Press, 1996).
Животных содержали в отдельном помещении группами (не более 5 особей) в индивидуальных клетках для лабораторных грызунов типа Т2. Размеры 268 х 215 х 141 мм (площадь основания 370 см ). Ванна из поликарбоната, крышка из нержавеющей стали с бункером для корма, разделителем для поилки.
Подстил - стружка древесная обеспыленная.
Животные имели неограниченный доступ к комбинированному полнорационному гранулированному корму для лабораторных грызунов.
Вода питьевая, давалась ad libitum в стандартных поилках объемом 190 мл, производства TECNIPLAST из высокотемпературного полисульфона с силиконовым кольцом и металлической крышкой из нержавеющей стали AISI 316.
Температура в помещении поддерживалась на уровне 20- 26°С, относительная влажность - 50-70%. Фотопериод установлен 12 часов ночь - 12 часов день при искусственном освещении лампами дневного света.
На клетке содержания устанавливали идентификационную карточку, на которой указывали номер карточки/клетки, номер опытной группы, индивидуальные номера животных, их количество и пол, номер исследования, фамилия, имя, отчество руководителя исследования. Каждому животному проводили установку на ушную раковину металлического метчика для мелких лабораторных грызунов из никелевого сплава Kent- Scientific, США (на метчиках имеются проштампованные производителем трехзначные номера). В конце опыта мышей подвергли эвтаназии углекислым газом. Все трупы животных подвергали аутопсии с макроскопическим описанием.
Проведено определение LD50 препарата у мышей линии FVB трансгенных по HER-2/neu по тесту OECD 423 (OECD guideline for testing of chemicals. Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method).
Использованы 12 мышей-самок.
На первом шаге 3 мышам вводили препарат в дозе 300 мг/кг. Исследуемый препарат вводили внутриже луд очно (в/ж) с помощью металлического атравматического зонда (в соответствии с пероральным путем применения в клинике). Для в/ж введения субстанцию препарата смешивали с оливковым маслом для получения суспензии необходимой концентрации для введения из расчета 0,1 мл суспензии на 10 г массы тела животного. Лекарственная форма для введения готовилась ех tempore.
В связи с отсутствием гибели животных при введении препарата в дозе 300 мг/кг, этот же уровень дозы препарата был использован для введения еще 3 животным. Гибель животных также отсутствовала, поэтому далее препараты вводили в дозе 2000 мг/кг в 2 шага по 3 животных на каждом шаге.
Вели клиническое наблюдение и регистрацию массы тела в соответствие с Таблицей 1. Животных осматривали ежедневно 2 раза в день, клинически обследовали индивидуально после введения дозы первые 60 минут, с особым вниманием в течение первых 4 часов, периодически в течение первых 24 часов, на 2 сутки и еженедельно до 14 дней. Выполняли подробный осмотр животного в клетке содержания, в руках. Фиксировали общее состояние животных: особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, состояние волосяного и кожного покрова.
Регистрировали массу тела животных с помощью поверенных быстродействующих электронных лабораторных весов Ohaus Scout Pro (США), с максимально нагрузкой 2000 г, шагом измерения 0,1 г.
На 15 сутки выполняли эвтаназию и аутопсию с регистрацией макроскопических изменений. Данные заносили в специальный индивидуальный бланк вскрытия.
Патоморфологическому исследованию подлежали все экспериментальные животные в конце исследования. После эвтаназии животные были тщательно обследованы на предмет внешних патологических признаков. Проведено исследование состояния грудной и брюшной полостей и макроскопическое исследование внутренних органов. Микроскопический анализ органов и тканей лабораторных животных не проводился, так как гибель животных не зафиксирована в течение всего периода наблюдения, кроме того, макроскопический анализ внутренних органов не выявил патологических изменений. Таблица 1.
Схема наблюдения и взвешивания животных при оценке острой токсичности
Figure imgf000017_0001
Исследуемый препарат вводили в/ж с помощью металлического атравматического зонда (в соответствии с предполагаемым пероральным путем применения в клинике). Препарат вводили в однократной суточной дозе (20 мг/кг массы тела) и 5-ти кратной суточной дозе - 100 мг/кг массы тела. Для введения ex tempore готовили раствор препаратов в оливковом масле (рафинированное оливковое масло с добавлением нерафинированного Extra Virgen марки Global Village «Clasico» серия L: 183351116, срок годности до 26.04.2020, BAIEO, Испания). Объем введения составил ОД мл на 10 г массы тела мыши (0,2 мл готовой формы для мыши массой 20 г). Начало введения препарата через 24 часа после рандомизации. Курс введения составил 27-28 дней.
Препарат сравнения - тамоксифен - вводили также с помощью металлического атравматического зонда (в соответствии с пероральным путем применения в клинике), суточная доза составила 4 мг/кг и была определена при пересчете клинических доз [5]. Эта доза соответствует суточной дозе для человека 20 мг/кг. Таблетку тамоксифена измельчали в ступке, из полученного порошка готовили суспензию в 40 мл оливкового масла, объем введения составил 0,08 мл на 10 г массы тела мыши, длительность введения соответствовала длительности введения опытных препаратов и составила 27-28 дней.
В контрольных группах вводили оливковое масло (плацебо).
Критериями оценки были данные клинического наблюдения, масса тела животных, сроки гибели (в случае таковой), рост опухоли в динамике, данные патоморфологического исследования (верификация новообразования при аутопсии, оценка токсического действия по макроскопической картине изменений внутренних органов).
Массу тела животных регистрировали перед первым введением препаратов и далее два раза в неделю с помощью поверенных быстродействующих электронных лабораторных весов Ohaus Scout Pro (США), с максимально нагрузкой 2000 г, шагом измерения 0,1 г.
Один раз в неделю во время взвешивания у животных измеряли макроскопически определяемые опухолевые узлы. Для каждого узла измеряли два линейных размера: наибольший и больший перпендикулярный к нему. Наибольший размер принимали за длину (а) и второй размер за ширину (Ь) опухолевых узлов. Объем опухоли рассчитывали по формуле:
V=(axb)2/2, Эффективность терапии оценивали по изменению среднего объемы опухолей, торможению роста опухоли (ТРО), динамике среднего суммарного объема опухолей у каждой мыши и его относительного изменения.
Процент торможения роста опухоли рассчитывали по формуле:
ТРО = (VK-VO)/VKx 100 (%),
где VK - средний объем опухоли в контрольной группе, а VO - средний объем опухоли в опытной группе.
Первичные данные с индивидуальных бланков перенесены в книги программы Microsoft Excel 2007. Для всех количественных данных вычислены групповое среднее арифметическое (М) и среднеквадратическое отклонение (т). Статистический анализ проведен с использованием статистической программы GraphPad Prism 6.0. Отличия между группами оценены с помощью регрессионного анализа ANOVA и точного критерия Фишера.
При оценке острой токсичности животные находились под непрерывным наблюдением первые 60 минут, затем осматривались ежечасно 3 часа, далее через 24 часа. На вторые сутки наблюдение осуществляли два раза в день. Затем наблюдения проводили раз в день. Клинический осмотр каждого животного проводили после введения субстанции, через сутки, далее еженедельно. Выполняли подробный осмотр животного в клетке содержания, в руках. Отмечали общее состояние животных: особенности их поведения, двигательной активности, состояние волосяного и кожного покрова. При введении препарата в дозе 300 мг/кг в ходе эксперимента не была зафиксирована гибель животных. Визуально, признаков интоксикации за весь период наблюдения отмечено не было ни у одного животного. Внешний вид и поведение животных были обычными. При взятии в руки реакция была стандартная низкая. Вокализация у животных не отмечена, в том числе непосредственно во время и сразу после введения.
Ежедневное наблюдение за общим состоянием животных, поведенческими реакциями показали, что однократное пероральное введение тестируемого объекта не оказало влияния на общее состояние и активность подвергнутых интоксикации экспериментальных животных.
Данные о массе тела приведены в Таблицах 2 и 3.
Таблица 2.
Динамика массы тела животных при введении препарата в стартовой дозе 300 мг/кг
Figure imgf000020_0002
Дегалмш; эффект (тазо/всего) _ j
Figure imgf000020_0001
Как следует из данных Таблицы 2, средняя массы тела равномерно увеличивалась в периоде наблюдения за животными, которые получали препарат в дозе 300 мг/кг. Поскольку гибель животных при введении дозы 300 мг/кг отсутствовала, перешли к введению препарата в дозе 2000 мг/кг. Препарат вводили в 2 приема с интервалом 3 часа, в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела на прием при концентрации 100 мг/мл т.к. суспензия в масле при большей концентрации густая, что не позволяет ввести препарат через зонд. При введении дозы 2000 мг/кг клиническая картина интоксикации не наблюдалась. Ширина глазной щели животных, независимо от группы, практически не менялись в течение всего периода наблюдения. Патологических выделений из глаз не отмечалось. Нос розовый, умеренно влажный, патологические выделения отсутствовали. Шерсть у всех мышей была опрятной, блестящей, без очагов облысения. Отмечено снижение средней массы тела у животных на 1% на 2 сутки и на 2% на 7 сутки от исходной (Таблица 3). К концу периода наблюдения средняя масса тела была на 3% больше исходного значения.
Таблица 3.
Динамика массы тела животных при введении препарата в дозе 2000 мг/кг
Figure imgf000022_0001
Аутопсии подвергались все животные, подвергнутые запланированной эвтаназии на 15-е сутки опыта. При макроскопическом исследовании отклонений в состоянии внутренних органов не обнаружено.
Данные аутопсии были следующее:
Шерсть животных имела опрятный вид, была блестящей, без очагов облысения. Упитанность животных была удовлетворительной.
Патологических выделений из естественных отверстий не было.
Подчелюстные лимфатические узлы имели округлую форму, бледно-розовую окраску и умеренную плотность. Слюнные железы обычной формы, бледно-желтого цвета, умеренной плотности.
Брюшина гладкая, блестящая, свободной жидкости в полости нет. Селезенка не увеличена, плотная, капсула гладкая и блестящая. Поджелудочная железа бледно-розовая, дольчатой структуры.
Величина и форма печени не изменены, капсула печени блестящая. Ткань печени имела коричневатый цвет и умеренно плотную консистенцию.
Почки плотные, капсула гладкая, блестящая, вокруг почек умеренное разрастание жировой клетчатки.
Яичники не увеличены с блестящей поверхностью.
Желудок со складчатой блестящей слизистой оболочкой, небольшим количеством слизи и пищевого содержимого в просвете.
Плевра гладкая, блестящая, свободной жидкости в грудной полости нет. Тимус треугольной формы, беловатого цвета. Легкие светло-розового цвета, воздушные.
Таким образом, в соответствие с проведенным тестом ОЭСР 423 препарат может быть отнесен к 5-й или не классифицируемой категории с LD50 равной или более 5000 мг/кг, что соответствует классу малоопасных веществ.
Животные удовлетворительно переносили введение препарата, клинических признаков токсичности не наблюдалось. При этом шерсть животных, получавших препарат, была блестящей, в отличие от животных контрольной группы, у которых она была несколько взъерошенной. Также в контрольной группе были более выражены опухолевые узлы. При аутопсии в конце опыта специфических признаков токсического поражения внутренних органов не выявлено. Объем опухолевого поражения был значительно меньшим при введении препарата в дозе 20 мг/кг и особенно в дозе 100 мг/кг, чем у животных контрольной группы.
Масса тела животных увеличивалась в течение всего периода наблюдений во всех группах, прибавка массы тела может быть связана с увеличением объема опухолевых узлов у мышей (Таблица 4).
Таблица 4.
Динамика средней массы тела мышей (г) при оценке противоопухолевой активности препарата
Figure imgf000024_0001
При анализе динамики среднего объема опухолей было выявлено, что введение препарата в дозе 20 мг/кг и 100 мг/кг обладает статистически значимым противоопухолевым эффектом, так к 28 суткам опыта ТРО составил 27% для дозы 20 мг/кг и 42% для дозы 100 мг/кг, эффект был пропорционален дозе препарата. Следует отметить, что при введении 100 мг/кг средний объем опухоли за 28 дней наблюдения увеличился всего на 60% от исходного, а в контрольной группе - на 155% (Фиг. 5)·
Таблица 5.
Динамика среднего объема опухолей (см3), имевшихся к началу опыта, при оценке противоопухолевой активности препарата в дозе 20 мг/кг и 100 мг/кг
Figure imgf000025_0001
М - среднее значение, ш - ошибка средней арифметической, N - число опухолей на начало лечения и включенных в анализ. # - группа препарата сравнения приведена из третьей серии опытов. * - р<0,05, по сравнению с контрольной группой, а - р<0,05, по сравнению с группой препарата сравнения.
Следует отметить, что торможение роста опухоли при введении препарата в обеих дозах увеличивалось к концу срока наблюдения, а при введении препарата сравнения было максимальным на 21 сутки опыта. Таким образом, можно ожидать что эффект препарата при увеличении продолжительности введения может быть выше.
При анализе частоты стабилизаций выявлено, что введение 100 мг/кг значительно увеличивает этот показатель, с 8% в контрольной группе до 27%. При этом средний объем новых опухолей, которые развились за период наблюдения и их количество были меньше, чем эти показатели в контрольной группе (Таблица 6). Таблица 6.
Частота стабилизаций опухолей, число и средний объем новых опухолей, развившихся к концу исследования, при оценке противоопухолевой активности препарата
Figure imgf000026_0001
% стабилизаций заболевания - показатель аналогичный критерию RECIST, отражающий частоту опухолей, объем которых не увеличился более чем на 20% к концунаблюдения по отношению к началу лечения. * - р<0,05, по сравнению с контрольной группой. # - группа препарата сравнения приведена из третьей серии опытов. Средний суммарный объем опухолей у мышей при введении препарата в дозах 20 мг/кг и 100 мг/кг был достоверно меньше, чем в контрольной группе с 14 по 28 сутки. А для в дозе 100 мг/кг на 28 сутки опыта этот показатель был статистически значимо меньше, чем в группе препарата сравнения (Таблица 7, Фиг. 6).
Таблица 7.
Средний суммарный объем опухолей (см ) у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата.
Figure imgf000027_0001
# - группа препарата сравнения приведена из третьей серии опытов. * - р<0,05, по сравнению с контрольной группой а - р<0,05, по сравнению с группой препарата сравнения.
При оценке относительного изменения среднего суммарного объема опухолей также было показано, что эффект препарата зависел от его дозы и превосходил эффективность тамоксифена (Фиг. 7, Таблица 8). Таблица 8.
Относительное изменение среднего суммарного объем опухолей к 1 суткам (%) у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата
Figure imgf000028_0001
Для оценки гормонального воздействия препарата была оценена масса тела матки без рогов на 28 сутки наблюдения (Таблица 9). Достоверных отличий этого показателя выявлено не было.
Таблица 9. Вес тела матки и масса тела мышей с опухолями молочной железы при изучении противоопухолевой активности препарата
Figure imgf000029_0001
* - включая 1 животное в фазе метаэструса; Э - эструс; Д - диэструс. Препарат в дозах 20 мг/кг и 100 мг/кг обладает выраженным противоопухолевым эффектом, так к 28 суткам опыта ТРО составил 27% для дозы 20 мг/кг и 42% для дозы 100 мг/кг, эффект был пропорционален дозе препарата (различия статистически значимы). Введение в дозе 100 мг/кг значительно увеличивает частоту стабилизаций опухолей, с 8% в контрольной группе до 27%. Препарат в дозе 100 мг/кг по эффективности к концу периода наблюдения на 28 сутки статистически значимо превосходит по эффективности препарат сравнения тамоксифен (4 мг/кг).
Исследования показали, что у препарата отсутствует утеротропная активность.
В соответствие с проведенным тестом ОЭСР 423 препарат может быть отнесен к 5-й или не классифицируемой категории с LD50 равной или более 5000 мг/кг, что соответствует классу малоопасных веществ согласно принятому ГОСТ. Краткое описание фигур чертежей
Изобретение иллюстрируется следующими фигурами:
Фиг. 1 - Окрашивание антителами к ERa опухоли молочной железы.
Визуализация пероксидаза хрена + диаминобензидин, ув. хЮО (А). Специфическое окрашивание ядер клеток протока молочной железы и ядер единичных опухолевых клеток (Б), ув. х400.
Фиг. 2 - Динамика среднего объема опухолей, имевшихся к началу опыта, у мышей при терапии схемой CAF.
Фиг. 3 - Динамика среднего суммарного объема опухолей, имевшихся к началу опыта, у мышей при терапии схемой CAF.
Фиг 4 - Относительное изменение среднего суммарного объема опухолей, имевшихся к началу опыта, у мышей при терапии схемой CAF.
Фиг. 5 - Динамика среднего объема опухолей у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата
Фиг. 6 - Средний суммарный объем опухолей у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата.
Фиг. 7 - Относительное изменение среднего суммарного объем опухолей у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата. Лучший пример осуществления изобретения
Пример 1.
Работа проведена на перевиваемой культуре клеток человека MCF-7 (аденокарцинома молочной железы). В качестве отрицательного контроля использовали нормальные кожные фибробласты человека (КФЧ) ранних пассажей. Клетки культивировали во флаконах Карреля в среде DMEM/F12 (Биолот) с добавлением 1% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота (Биолот), без антибиотиков, в 5% С02 атмосфере, при 37°С.
Клетки высаживались на флаконы Карреля по 50 х 104 клеток на флакон. Для изучения пролиферативной активности клеток в условиях подавления сульфатазы через 24 часа после посева культуральную среду заменяли на среду, содержащую ингибиторы сульфатаз до конечной концентрации 50 мкг/мл, после чего инкубировали данные опухолевые клеточные линии в течение различных промежутков времени (от 24 до 72 ч). Ингибитор растворяют в ДМСО. Конечная концентрация ДМСО в культуральной среде не превышала 0.5%. Для исключения цитотоксического действия ДМСО ставили контроль с добавлением ДМСО без ингибиторасульфатаз. Для исключения неспецифического губительного действия веществ использовали нормальные кожные фибробласты человека. Далее клетки снимали раствором версена-трипсина (Биолот), рассеивали на флаконы Карреля, содержащие новую полную культуральную среду. Подсчет клеток проводили в момент достижения необработанными контрольными клетками максимальной плотности клеток на единицу площади поверхности культурального флакона (монослой), при этом их количество определялось как 100%. Пролиферативную активность всех исследованных клеточных культур при воздействии ингибиторов сульфатаз определяли не менее трех раз.
Исследование влияние полученного сульфамата на рост перевиваемой культуры клеток человека MCF-7 (аденокарцинома молочной железы) показало, что стероид (3) полностью блокирует рост опухолевых клеток при концентрации 20 мкг/мл, при этом он не влияет на рост кожных фибробластов человека, не имеющих рецепторов эстрогенов. Рост опухолевых клеток ингибируется в той же степени, что и под действием тамоксифена, применяемого в медицинской практике более 30 лет. Это весьма важно, поскольку сульфаматы и тамоксифен имеют разные механизмы действия, и есть перспективы их совместного применения.
В экспериментах на мышах линии FVB, трансгенной по HER-2/neu (ER-/PR-/HER2+), с опухолями молочных желез, стероид ингибирует рост опухолей сравнимо с применяемым в клинической практике тамоксифеном, что предполагает их совместное использование для лечения рака молочной железы.
На клеточной линии трижды негативного рака молочной железы MDA-MB-231 соединение ингибирует рост клеток на 83%, что сравнимо с применяющимся в клинической практике химиотерапевтическим препаратом этопозидом.
Препарат показал активность против клеток гепатокарциномы SK-Hep-1 (IC50 = 53.4 mM), рака легких А549 (IC50 = 29.6 mM), аденокарцинома желудка SNU638 (IC50 = 22.8 mM), а также против клеток хронической миелогенной лейкемии (К562).
Пример 2.
Группа Контроль. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=l,5±0,4 мм . Без специфического лечения размеры опухоли к 33-м суткам после трансплантации достигли Vcp=233,2±86,5 мм3. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 2 из 10.
Группа препарат, 10 мг/кг. В группе 7 мышей, 7 опухолей.
На момент начала терапии Vcp=l,0±0,4 мм без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки после начала лечения зафиксировано недостоверное ТРО=74,3% (Vcp=5,l±2,3 мм3 против Vcp=20,0±6,0 мм3 в контроле, р<0,220). На 10-е сутки после начала лечения ТРО=68,0% (Vcp=24,8±12,2 мм3 против Vcp=77,3±32,0 мм3 в контроле, р<0,181). На 14-е сутки после начала лечения наблюдали максимальное достоверное ТРО, равное 94,3% (Vcp=6,9±2,2 мм3 против Vcp=120,6±44,4 мм3 в контроле, р<0,03), которое сохранялось примерно на том же уровне и составило 90,6% (Vcp=17,6±0,7 мм3 против
Vcp=186,4±65,0 мм3 в контроле, р<0,061) и 90,2% (Vcp=26,l±12,l мм3 против Vcp=266,5±91,3 мм3 в контроле, р<0,061) к 17-м суткам и 21 суткам, соответственно. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 5 из 7.
Группа Тамоксифен, 30 мг/кг. В группе 7 мышей, 7 опухолей. На момент начала терапии Vcp=0,9±0,2 мм без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки ТРО составило 12,6% (Vcp=18,8±7,4 мм3 против Vcp=20,0±6, мм3 в контроле, р<0,962) и до конца периода наблюдения не превышало этих значений. На 17-е и 21-е сутки после начала лечения отмечали отрицательное ТРО с максимальным значением на 21-е сутки ТРО=-44,2 (Vcp=384,8±103,2 мм3 против
Vcp=266,5±91,3 мм в контроле, р<0,106). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 6 из 7.
Группа Тамоксифен, 10 мг/кг. В группе 7 мышей, 7 опухолей. На момент начала терапии Vcp=0,7±0,l мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7 -е сутки после начала лечения зафиксировано недостоверное ТРО=63,9% (Vcp=7,2±3,9 мм3 против Vcp=20,2±6,0 мм3 в контроле, р<0,364). На 10-е сутки после начала лечения зафиксировано ТРО=56,9% (Vcp=33,4±16,l мм3 против Vcp=77,3±32,0 мм3 в контроле, р<0,315). С 14-е по 17-е сутки наблюдали увеличение ТРО до 60,6% (Vcp=47,5±16,8 мм3 против Vcp=120,6±44,4 мм3 в контроле, р<0,193) и 68,9% (Vcp=58,0±18,2 мм3 против Vcp=186,4±65,0 мм в контроле, р<0,070), соответственно. На 21- е сутки после начала лечения и до конца периода наблюдения ТРО ниже биологически значимых значений (<50%). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 2 из 7.
Сводные результаты измерений и статистическая значимость отличий межгрупповых измерений приведены в Таблицах 10 и 11.
Таблица 10.
Объемы опухолей у мышей в группах среднее и его ошибка
(М±ш)
Figure imgf000035_0001
Таблица 11.
Влияние Препарата и Тамоксифена на торможение роста SKBR-3 за весь период наблюдения, ТРО%
Figure imgf000035_0002
Пример 3.
Группа Контроль. В группе 12 мышей, 12 опухолей. На момент начала терапии Vcp=3,8± 1,0 мм3. Без специфического лечения размеры опухоли к 30-м суткам после трансплантации достигли Vcp=299,l±100,5 мм . Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 6 из 12.
Группа Препарат, 10 мг/кг. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=l,6±0,4 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки после начала лечения зафиксировано достоверное ТРО=66,1% (Vcp=27,0±5,l мм против Vcp=79,6±14,2 мм в контроле, р<0,002). На 10-е сутки после начала лечения наблюдали ТРО=78,7% (Vcp=21,6±4,9 мм3 против Vcp=101,2±22,5 мм3 в контроле, р<0,007). На 14-е сутки после начала лечения наблюдали максимальное недостоверное ТРО, равное 83,1%
(Vcp=27,6±2,6 мм против Vcp=163,3±31,0 мм в контроле, р<0,06). На 17-е сутки после начала лечения ТРО снижалось до 76,1% (Vcp=46,3±5,3 мм3 против Vcp=193,6±39,6 мм3 в контроле, р<0,04). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 10 из 10.
Группа Тамоксифен, 30 мг/кг. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=4,l±l,2 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки и до конца периода наблюдения ТРО было ниже биологически значимого порога и не превышало 44,5% (Vcp=44,l±8,8 мм3 против Vcp=79,6±14,2 мм3 в контроле, р<0,10). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 4 из 10.
Группа Тамоксифен, 10 мг/кг. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=2,3±0,8 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. В этой группе не выявлено ингибирование роста опухоли в течение всего периода наблюдения. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 6 из 9.
Сводные результаты измерений и статистическая значимость отличий межгрупповых измерений приведены в Таблицах 12 и 13.
Таблица 12.
Объемы опухолей у мышей в группах среднее и его ошибка
(М±ш)
Figure imgf000037_0001
Таблица 13.
Влияние Препарата и Тамоксифена на торможение роста TNBC_Kad за весь период наблюдения, ТРО%
Figure imgf000038_0001
Проведенные сравнительные исследования противоопухолевой активности препарата при многократном введении бестимусным иммунодефицитным мышам Balb/c Nude на двух моделях подкожных ксенографтов рака молочной железы человека SKBR-3 и TNBC-Kad, отличающихся по фенотипу.
Пилотное исследование противоопухолевой активности препарата на модели SKBR3 в сравнении с Тамоксифеном (лекарственная форма) показало, что терапия препаратом в дозе 10 мг/кг была наиболее эффективной среди всех изученных режимов лечения: на 10-е сутки после начала терапии выявлен достоверный противоопухолевый эффект - максимальное ТРО=91,2% (Vcp=2,2±2,0 мм3 против Vcp=24,9±12,5 мм3 в контроле, р<0,018) на фоне относительно хорошей переносимости препарата. Тамоксифен в дозе 10 мг/кг был не эффективен: биологически значимое значение ТРО на протяжении всего периода наблюдения не достигнуто, напротив, с 10-17-е сутки после начала лечения зафиксирована стимуляция роста опухоли. Повторное исследование противоопухолевой активности препарата на той же модели SKBR3 в сравнении с Тамоксифеном (субстанция) показало, что препарат в дозе 10 мг/кг оказывает высокий противоопухолевый эффект с максимальным достоверным ТРО на 14-е (94,3%, р<0,03) и на 24-е (86,3%, р<0,04) сутки, что воспроизвело полученный в первом опыте результат.
Исследование противоопухолевой активности препарат на модели TNBC_Kad в сравнении с Тамоксифеном (субстанция) показало, что препарат в дозе 10 мг/кг на 7 и 10 сутки после начала лечения вызывает торможение роста опухоли на 66,1 и 78,7% (достоверные отличия от контрольной группы и группы с тамоксифеном 30 мг/кг). Эффект сохраняется в течение 10 дней примерно на том же уровне. Тамоксифен в дозе 30 мг/кг вызывает слабое недостоверное торможение роста опухоли на 44,5% на 7 сутки, которое уменьшается к концу наблюдения. Тамоксифен в дозе 10 мг/кг не эффективен на этой модели.
Промышленная применимость
Проведенные исследования показали, что заявленное применение соединения характеризуется:
- отсутствием утеротропного действия,
- широким спектром противоонкологической активности, включая активность против трижды негативного рака молочной железы,
- отсутствием токсичности, - гипохолестеринемическим действием и отсутствием влияния на содержание триглицеридов в сыворотке крови,
- отсутствием негативного влияния на эндометрий. Изобретение может быть применено при:
- моно- и адъювантной терапии раннего гормоноположительного рака молочной железы у женщин в постменопаузе.
- моно- и адъювантной терапии раннего гормоноположительного рака молочной железы у женщин в постменопаузе после 2-3 летнего применения тамоксифена.
- лечении распространенного рака молочной железы на поздних стадиях.
- лечении трижды негативного рака молочной железы.
- моно- и адьювантной терапии гепатокарциномы.
- моно- и адьювантной терапии карциномы желудка.
- моно- и адьювантной терапии рака легкого.
- моно- и адьювантной терапии хронической миелогенной лейкемии.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение 3 -О-Сульфамат- 16,1 б-диметил-О-гомоэквиленина формулы
Figure imgf000041_0001
в качестве противоонкологического агента при моно- и адъювантной терапии онкологических заболеваний, таких как: гепатокарцинома, карцинома желудка, рак легкого, хроническая миелогенная лейкемия, рак молочной железы, включая трижды негативную форму рака молочной железы.
PCT/RU2019/000650 2018-11-08 2019-09-19 Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний WO2020096486A1 (ru)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17/292,688 US20220105058A1 (en) 2018-11-08 2019-09-19 Use of 3-o-sulfamate-16,16-dimethyl-d-homoequilenin to treat oncological diseases
EP19882497.1A EP3878454A4 (en) 2018-11-08 2019-09-19 USE OF 3-O-SULFAMATE-16,16-DIMETHYL-D-HOMOEQUILENIN IN THE TREATMENT OF ONCOLOGICAL DISEASES
EA202191323A EA202191323A1 (ru) 2018-11-08 2019-09-19 Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний
CN201980088362.1A CN113507932A (zh) 2018-11-08 2019-09-19 3-o-氨基磺酸-16,16-二甲基-d-高马萘雌甾酮在治疗肿瘤疾病中的用途

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018139336A RU2680603C1 (ru) 2018-11-08 2018-11-08 Применение 3-о-сульфамата-16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний
RU2018139336 2018-11-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020096486A1 true WO2020096486A1 (ru) 2020-05-14

Family

ID=65479433

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/000650 WO2020096486A1 (ru) 2018-11-08 2019-09-19 Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20220105058A1 (ru)
EP (1) EP3878454A4 (ru)
CN (1) CN113507932A (ru)
EA (1) EA202191323A1 (ru)
RU (1) RU2680603C1 (ru)
WO (1) WO2020096486A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2752064C1 (ru) * 2021-02-02 2021-07-22 Ильясова Наталья Эдуардовна Новый способ синтеза 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2755250C1 (ru) * 2021-01-21 2021-09-14 Ильясова Наталья Эдуардовна Препарат на основе стероидных эстрогенов для лечения эндометриоза

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004074309A1 (de) * 2003-02-19 2004-09-02 Schering Aktiengesellschaft Antitumor wirksame 2-substituierte d-homoestra-1,3,5(10)-trien-3-yl sulfamate

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1200107B1 (en) * 1999-07-15 2005-09-07 Kobenhavns Universitet Composition having steroidal estrogen effect without increasing the risk of breast cancer
CN101129353B (zh) * 2007-09-17 2010-04-14 北京珅奥基医药科技有限公司 7-羟基-3-[(4-羟基)-3-(3-甲基-丁基-2-烯基)苯基]-4h-1-苯并吡喃-4-酮的用途
CN101199509B (zh) * 2007-10-31 2010-11-03 北京珅奥基医药科技有限公司 2",2"-二甲基-2"h,4h-3,6"-二苯并吡喃-4-酮在制备抗肿瘤药物中的用途
JP2016522188A (ja) * 2013-05-03 2016-07-28 シンダックス ファーマシューティカルズ，インク． 癌の処置方法
KR101819544B1 (ko) * 2016-11-25 2018-01-17 애니젠 주식회사 5'-하이드록시-5-니트로-인디루빈-3'-옥심을 유효 성분으로 함유하는 유방암 치료제

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004074309A1 (de) * 2003-02-19 2004-09-02 Schering Aktiengesellschaft Antitumor wirksame 2-substituierte d-homoestra-1,3,5(10)-trien-3-yl sulfamate

Non-Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"The Guide for Care and Use of Laboratory Animals", 1996, ILAR
AHMED S., CURR. MED. CHEM., vol. 9, no. 2, 2002, pages 263 - 273
AL SAFARZAKHARYCHEV A.V.ANANCHENKO S.N.TORGOV I.V.: "Synthesis of some 16,16-dimethyl-D-homosteroids", REPORTS OF ACADEMY OF SCIENCES OF THE USSR. SER. CHEM., 1968, pages 2326 - 2332
DIBBELT I.: "Biol. Chem.", vol. 372, 1991, pages: 173 - 185
GLUZDIKOV I A : "New Analogs of D-Homoequilenine with Substituents inthe D Ring / Novye analogi D-gomoekvilenina, soderzhaschie zamestiteli v koltse D", ZHURNAL ORGANICHESKOI KHIMII, vol. 42, no. 11, 2006, pages 41687 - 1694, XP009528110, ISSN: 1070-4280 *
GLUZDIKOV I A : "Sintez ingibitorov sulfatazy estrona", AVTOREFERAT: DISSERTATSII NA SOISKANIYE UCHENOY STEPENI KANDIDATA KHIMICHESKIKH NAUK [AUTHOR'S ABSTRACT: DISSERTATIONS FOR THE DEGREE OF CANDIDATE OF CHEMICAL SCIENCES], 2007, Sankt-Peterburg, pages 1 - 17, XP009528266 *
GLUZDIKOV I.A., PHD THESIS IN CHEMISTRY, 2007
GLUZDIKOV I.A.EGOROV M.S.SELIVANOV S.I.STAROVA G.L.SHAVVA A.G.: "New analogues of D-homoequilenene with substituents in the D ring", RUS. J. ORG. CHEM., vol. 42, no. 11, 2006, pages 1675 - 1682
HOWARTH N.M.PUROHIT A.REED M.J., J. MED. CHEM., vol. 37, 1994, pages 219 - 221
MOROZKINA S N : "Syntehsis and Sone Biological Properties of Sulfamates Derived from 8alpha-Analogs of Steroidal Estrogens / Sintez i issledovanie nekotorykh biologicheskikh svoistv sulfamatov 8 a- analogov steroidnykh estrogenov", ZHURNAL ORGANICHESKOI KHIMII, vol. 51, no. 3, 2015, pages 425 - 430, XP009528111, ISSN: 1070-4280 *
MOROZKINA S.N.GLUZDIKOV I.A.DROZDOV A.S.SELIVANOV S.I.KOVALEV R.A.FILATOV M.V.SHAVVA A.G., RUSS. J. ORG. CHEM., vol. 51, no. 3, 2015, pages 425 - 430
PARKIN D.M.BRAY F.FERLAY J.PISANI P., CA CANCER J. CLIN., vol. 55, 2005, pages 74 - 108
See also references of EP3878454A4
SHIELDS-BOTELLA J. ET AL., J. STEROIDBIOCHEM. MOL. BIOL., vol. 84, 2003, pages 327 - 335
STEIN C., J. BIOL. CHEM., vol. 264, 1989, pages 13865 - 13872
URUSOVA E.A.GLUZDIKOV I.A.SELIVANOV S.I.STAROVA G.L.NIKOLAEV S.V.SHAVVA A.G.: "Synthesis and study of equilenin derivatives and its modified analogs", RUSS. J. ORG. CHEM., vol. 40, no. 4, pages 506 - 512
YUE W.YAGER J.D.WANG J.-P.JUPE E.R.SANTEN R.J., STEROIDS, vol. 78, 2013, pages 161 - 170

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2752064C1 (ru) * 2021-02-02 2021-07-22 Ильясова Наталья Эдуардовна Новый способ синтеза 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина

Also Published As

Publication number Publication date
US20220105058A1 (en) 2022-04-07
EP3878454A4 (en) 2022-08-24
CN113507932A (zh) 2021-10-15
RU2680603C1 (ru) 2019-02-25
EA202191323A1 (ru) 2021-08-06
EP3878454A1 (en) 2021-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Li et al. Berberine improves pressure overload-induced cardiac hypertrophy and dysfunction through enhanced autophagy
US20040258772A1 (en) Methods of treating angiogenesis, tumor growth, and metastasis
US20110190244A1 (en) Method of treatment of egfr inhibitor toxicity
WO2020096486A1 (ru) Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний
Bloom et al. Sex hormones and renal neoplasia. Inhibition of tumor of hamster kidney by an estrogen antagonist, an agent of possible therapeutic value in man
Young et al. Phase I and clinical pharmacologic evaluation of lonidamine in patients with advanced cancer
Bhattacherjee et al. A comparison of the inhibitory activity of compounds on ocular prostaglandin biosynthesis
EA044450B1 (ru) Применение 3-о-сульфамата-16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний
EA042485B1 (ru) Лечение рака молочной железы, включая трижды негативную форму
JPWO2004035089A1 (ja) ホルモン依存性癌の治療剤
WO2020096485A1 (ru) Лечение рака молочной железы, включая трижды-негативную форму
KR20130051361A (ko) 황금 찰수수 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 질환 예방 및 치료용 조성물
WO2020096487A1 (ru) ПРИМЕНЕНИЕ 3-О-СУЛЬФАМОИЛОКСИ-7β-МЕТИЛ-D-ГОМО-6-ОКСАЭСТРА-1,3,5(10),8(9)-ТЕТРАЕН-17а-ОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
EP3323417A1 (en) Estrogen receptor beta partial agonist having estrogen receptor alpha inhibitory effect, and therapeutic agent for gynecological disorders using same
CA2573060A1 (en) Asymmetric disulfides and methods of using same
CN112546056A (zh) 一种用于治疗化疗诱发的外周神经病变的组合物及其应用
EA042238B1 (ru) ПРИМЕНЕНИЕ 3-О-СУЛЬФАМОИЛОКСИ-7β-МЕТИЛ-D-ГОМО-6-ОКСАЭСТРА-1,3,5(10),8(9)-ТЕТРАЕН-17а-ОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
RU2812129C1 (ru) Гормональное средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных
RU2283112C1 (ru) Противовоспалительное лекарственное средство
JPH04211013A (ja) スティグマスタ−４−エン−３−オンを含む薬剤およびその用途
WO2024017316A1 (zh) 药物组合产品以及组合疗法
ES2256243T3 (es) Metodo para tratar la criptorquidia.
Roigas et al. Estramustine phosphate enhances the effects of hyperthermia and induces the small heat shock protein HSP27 in the human prostate carcinoma cell line PC-3
RU2159122C1 (ru) Средство, улучшающее качество спермы, и способ улучшения качества спермы
KR101342992B1 (ko) Ｍｓｍ을 유효성분으로 포함하는 암 질환 예방 및 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19882497

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202147025345

Country of ref document: IN

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019882497

Country of ref document: EP

Effective date: 20210608