EA044450B1 - Применение 3-о-сульфамата-16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний - Google Patents
Применение 3-о-сульфамата-16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний Download PDFInfo
- Publication number
- EA044450B1 EA044450B1 EA202191323 EA044450B1 EA 044450 B1 EA044450 B1 EA 044450B1 EA 202191323 EA202191323 EA 202191323 EA 044450 B1 EA044450 B1 EA 044450B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- drug
- group
- day
- vcp
- treatment
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 34
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 5
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 title description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 73
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 claims description 70
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 claims description 35
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 11
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 claims description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 claims description 8
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 83
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 81
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 54
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 24
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 20
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 8
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 8
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 8
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 102100038021 Steryl-sulfatase Human genes 0.000 description 6
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 6
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000001836 utereotrophic effect Effects 0.000 description 6
- XJXNQKUJADHQNU-GAJHUODUSA-N (7s,9s)-7-[(2r,4s,5s,6s)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-4-methoxy-8,10-dihydro-7h-tetracene-5,12-dione;n,n-bis(2-chloroethyl)-2-oxo-1,3,2$l^{5}-oxazaphosphinan-2-amine;5-fluoro-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O.ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 XJXNQKUJADHQNU-GAJHUODUSA-N 0.000 description 5
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 5
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 5
- 231100000322 OECD 423 Acute Oral toxicity - Acute Toxic Class Method Toxicity 0.000 description 4
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 description 4
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 108010005041 estrone sulfatase Proteins 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 4
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 4
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 description 4
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 description 4
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- JKKFKPJIXZFSSB-UHFFFAOYSA-N 1,3,5(10)-estratrien-17-one 3-sulfate Natural products OS(=O)(=O)OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 JKKFKPJIXZFSSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 3
- 238000011771 FVB mouse Methods 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- RVKFQAJIXCZXQY-CBZIJGRNSA-N [(8r,9s,13s,14s)-13-methyl-17-oxo-7,8,9,11,12,14,15,16-octahydro-6h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] sulfamate Chemical group NS(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RVKFQAJIXCZXQY-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 3
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- PDRGHUMCVRDZLQ-WMZOPIPTSA-N equilenin Chemical class OC1=CC=C2C(CC[C@]3([C@H]4CCC3=O)C)=C4C=CC2=C1 PDRGHUMCVRDZLQ-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 3
- JKKFKPJIXZFSSB-CBZIJGRNSA-N estrone 3-sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JKKFKPJIXZFSSB-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 3
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 3
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-N sulfamic acid Chemical group NS(O)(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 108010087999 Steryl-Sulfatase Proteins 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 2
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 2
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 2
- 231100000508 hormonal effect Toxicity 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000871 hypocholesterolemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 2
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNAGNEGTPJZPAO-DAYGRLMNSA-N (9R,10R,13R)-13-methyl-1,2,9,10,11,12-hexahydrocyclopenta[a]phenanthrene Chemical compound C([C@@H]12)CC=CC1=CC=C1[C@@H]2CC[C@@]2(C)C1=CC=C2 YNAGNEGTPJZPAO-DAYGRLMNSA-N 0.000 description 1
- RKXRGRSVQIUIGZ-UHFFFAOYSA-N 2,4,4-trimethylcyclopentane-1,3-dione Chemical compound CC1C(=O)CC(C)(C)C1=O RKXRGRSVQIUIGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000619 316 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 229940122815 Aromatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 208000033830 Hot Flashes Diseases 0.000 description 1
- 206010060800 Hot flush Diseases 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 101000985214 Mus musculus 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 229910000990 Ni alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- CZWCKYRVOZZJNM-UHFFFAOYSA-N Prasterone sodium sulfate Natural products C1C(OS(O)(=O)=O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229940123142 Steroid sulfatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000006210 cyclodehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone sulfate Chemical compound C1[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000027046 diestrus Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 208000023965 endometrium neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 1
- 230000001158 estrous effect Effects 0.000 description 1
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001227 hypertriglyceridemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940063238 premarin Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000010464 refined olive oil Substances 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 150000003338 secosteroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000333 selective estrogen receptor modulator Substances 0.000 description 1
- 229940095743 selective estrogen receptor modulator Drugs 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229940005186 tamoxifen 10 mg Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical class NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Description
Область техники
Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и касается средств для лечения рака, в том числе рака молочной железы.
Предшествующий уровень техники
Рак молочной железы является ведущим онкологическим заболеванием у женщин (Parkin D.M., Bray F., Ferlay J., Pisani P., CA Cancer J. Clin., 2005, vol. 55, p. 74-108). По данным ВОЗ, в мире 2.09 миллионов больных, а ежегодно умирают от рака молочной железы 627 тыс. женщин (http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cancer).
Значительная часть опухолей этой локализации прогрессирует под действием эстрогенов (Yue W., Yager J.D., Wang J.-P., Jupe E.R., Santen R.J., Steroids, 2013, vol. 78, p. 161-170). При иммуногистохимическом исследовании рака молочной железы определяются рецепторы эстрогенов (ER), прогестерона (PR) и her2neu (чувствительность к герцептину). Значительная часть опухолей содержат рецепторы эстрогенов, прогестерона и/или HER2NEU 3+. Если опухоль не имеет рецепторов и не чувствительна к герцептину (ER0, PR0, HER2NEU 0-1) ее рассматривают как трижды негативную (ER-/PR-/HER-2-). Это одна из самых смертоносных форм рака молочной железы по причине отсутствия мишеней для подавления ее роста. На сегодняшний день в мире нет лекарственных препаратов для лечения этой формы рака.
Эстрогены циркулируют в крови и накапливаются в опухоли в виде сульфатов, не способных связываться с рецепторами эстрогенов, однако после превращения в свободные гормоны они активируют рост опухоли. Поэтому перспективной является стратегическая линия лечения, в основе которой лежит применение ингибиторов, блокирующих образование этой группы свободных гормонов в опухоли.
К препаратам из группы селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов, которые блокируют эффекты эстрогена на гормонозависимые ткани, в том числе - на ткани молочной железы, относится тамоксифен. Тамоксифен является стандартом гормональной терапии для женщин в пременопаузе и постменопаузе. Наиболее характерными побочными эффектами, возникающими на фоне применения тамоксифена, являются: повышение риска развития тромбоза вен, усугубление течения заболеваний сердечно-сосудистой системы (включая приступы стенокардии), а также появление новообразований эндометрия (полипы, и рак эндометрия), а также фиброма матки. Также тамоксифен обладает гепатотоксичностью. По биофармацевтической классификационной системе (БКС), разработанной Gordon Amidon с соавторами в 1995 году, тамоксифен отнесен ко второму классу - препарат, который имеет низкую растворимость и высокую проницаемость.
Большую эффективность по сравнению с тамоксифеном показали ингибиторы ароматазы. В настоящее время нашли применение в данной области такие ингибиторы ароматазы как летрозол и анастразол, которые по системе БКС отнесены к первому классу - препараты, которые имеют высокую растворимость и высокую проницаемость. К побочным эффектам ингибиторов ароматазы является остеопороз, приливы, головные боли.
Кроме того, привлекает внимание стероидная сульфатаза в связи с локальным межтканевым образованием эстрогенов из обильного пула циркулирующего сульфата эстрона. Стероидная сульфатаза катализирует гидролиз сульфата эстрона до эстрона и сульфата DHEA до DHEA (Dibbelt 1., Biol. Chem., Hoppe-Seyler, 1991, 372, 173-185; Stein С, J. Biol. Chem., 1989, 264, 13865-13872).
Самым известным ингибитором стероидной сульфатазы является ЕМАТЕ- сульфамат эстрона (Ahmed S., Curr. Med. Chem., 2002, vol. 9, no. 2, p. 263-273). Однако он обладает существенным недостатком. Под действием ингибиторов сульфатазы эстрона, имеющих в своем составе сульфаматную группу, происходит необратимая дезактивация фермента с высвобождением свободного лиганда (Howarm N.M., Purohit A., Reed M.J. J. Med. Chem., 1994, vol. 37, p. 219-221). В частности, сульфамат эстрона ингибирует сульфатазу эстрона, однако высвобождение свободного гормона приводит к появлению сильной утеротропной активности (Shields-Botella J. et al., J. Steroid Biochem. Mol Biol., 2003, vol. 84, p. 327-335).
Таким образом, при поиске новых противоонкологических агентов исследователи должны учесть, что носитель сульфаматной группы ингибитора сульфатазы эстрона не должен обладать гормональной (утеротропной) активностью.
В качестве средства профилактики карциномы молочной железы известно применение dэквиленина, который не обладает канцерогенными свойствами. На основе производных эквиленина получены препараты с гипохолестеринемическим действием, лишенные утеротропной и гипертриглицеридемической активности (Урусова Е.А., Глуздиков И.А., Селиванов СИ., Старова Г.Л., Николаев СВ., Шавва А.Г.//Синтез и исследование производных эквиленина и его модифицированных аналогов. ЖОрХ. 2004. Т. 40. Вып.4. С 506-512).
Соединения эквиленинового ряда входят в состав терапевтических средств (Premarin®), используемых в гормонозаместительной терапии. Наличие указанных свойств желательно, так как использование ингибиторов метаболизма стероидных эстрогенов подразумевает их длительное применение.
Раскрытие изобретения
Задачей настоящего изобретения является поиск и разработка эффективного синтеза соединений, которые могут быть использованы в качестве противоонкологических агентов при моно- и адъювантной терапии онкологических заболеваний, таких как гепатокарцинома, карцинома желудка, рак легкого, хро
- 1 044450 ническая миелогенная лейкемии, рак молочной железы, в том числе при его самой смертоносной форметрижды негативной (ER-/PR-/HER-2-).
Задача решается использованием соединения 3-О-сульфамат-16,16-диметил-О-гомоэквиленина (3), который ингибирует сульфатазу эстрона.
О
Схема синтеза целевого соединения (3) представлена ниже. Отличительной особенностью, в отличие от опубликованных данных, отработанная схема позволяет масштабировать получение целевого соединения в промышленных масштабах.
Реакция известной изотиурониевой соли (Аль Сафар, Захарычев А.В., Ананченко С.Н., Торгов И.В.//Синтез некоторых 16,16-диметил-О-гомостероидов. Изв. АН СССР. Сер. Хим. 1968. № 10. С. 23262332) с 2,4,4-триметилциклопентан-1,3-дионом приводит к образованию секостероида, циклодегидратация которого позволяет получить эстрапентаен (1). После обработки последнего Ni/Ra в условиях, предложенных ранее для синтеза близкого по структуре D-гомоаналога (Gluzdikov LA., Egorov M.S., Selivanov S.I., Starova G.L., Shavva A.G. New analogues of D-homoequilenene with substitutents in the D ring. Russian J. Org. Chem., 2006, vol. 42, no. 11, pp. 1675-1682), выделили метиловый эфир 16,16-диметил-Огомоэквиленин (2) (Глуздиков И.А. Дисс. на соискание степени канд. наук, 2007, Санкт-Петербург). Сульфамат 3 получали по известной методике (Морозкина С.Н., Глуздиков И.А., Дроздов А.С., Селиванов СИ., Ковалев Р.А., Филатов М.В., Шавва А.Г. ЖОрХ, 2015, т. 51, N 3, с. 425-430).
Результаты моделирования связывания стероида показали, что структура этого стероида плохо совместима с геометрией лигандсвязывающего кармана рецептора. Расстояние между кислородом кетогруппы стероида и NH His524 составляет 4.9 А, что исключает образование водородной связи. Расстояние между гидроксильной группой при С3 и кислородом карбоксильной группы Glu353, по расчетным данным, около 3.9 А, что намного больше, чем в комплексе с природным гормоном эстрадиолом (2.34 А).
Несоответствие между геометрией стероида и областью рецептора, ответственной за связывание лиганда, будет причиной низкого сродства рассматриваемого соединения к рецептору, в результате чего данный стероид практически не обладает утеротропной активностью.
Соединение полностью ингибирует пролиферацию опухолевых клеток MCF-7.
Препарат относится к 4 классу опасности (LD50>300-2000 мг/кг). Полученные данные позволяют оценить дозы для исследования противоопухолевой активности как безопасные.
При изучении связывания с рецепторами эстрогенами, показано, что сульфамат не обладает гормональным действием в концентрациях -0.001 и 0.01, 0.1 и 1.0 мкмоль.
На животных моделях, с привитой человеческой опухолью трижды негативного рака молочной железы заявленный препарат более эффективен по сравнению с использующимися в клинической практике тамоксифеном и ингибитором ароматазы летрозолом.
Таким образом, область применения соединения - лечение рака молочной железы, включая триждынегативную форму.
Проведены доклинические исследования специфической активности на моделях РМЖ выполнены в параллельном сравнении с противоопухолевым препаратом ТФ (препарат сравнения). Сравнительное исследование препаратов in vivo выполнено на мышах-самках Balb/c Nude с п/к трансплантированными опухолевыми клетками. Длительность исследования составила 29 суток после первого введения препарата (введение препаратов начинали на 5-е сутки после трансплантации опухолевого штамма).
Препарат и препарат сравнения вводили многократно внутрижелудочно в дозах 30 мг/кг и 10 мг/кг ежедневно в течение 21 дня.
- 2 044450
Группе плацебо вводили 1% раствор крахмала внутрижелудочно в эквивалентных объемах и аналогичном режиме. Измерение опухолевых узлов проводили 2 раза в неделю. О противоопухолевой активности судили по стандартному показателю торможения роста опухоли (ТРО). После окончания лечения проводили последнее измерение опухоли, животных взвешивали и подвергали эвтаназии.
Все необходимые манипуляции с животными (тесты, взвешивание, измерение, вскрытие животных) выполнялись с 9 до 12 ч дня.
Взвешивание животных проводили на первые сутки эксперимента, и затем 2 раза в неделю в течение всего эксперимента, согласно временному протоколу.
Измерение опухолевого узла проводили после введения опухоли 2 раза в неделю в течение всего эксперимента. Объем опухолевого узла определяли по формуле:
V=n/6*L* W*H, где L,W,H - линейные размеры опухоли.
Определение противоопухолевой активности.
Критерием эффективности исследуемого препарата служил показатель торможения роста опухоли (ТРО), который вычисляли по формулам:
ТРО(%) = где Vk и Vo - средний объем опухоли (мм3) в контрольной и опытной группах соответственно.
После курса лечения животным проводили эвтаназию путем цервикальной дислокации шейных позвонков.
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета SPSS 21 (лицензия №20130626-3). В качестве описательных статистик в работе приведены: среднее арифметическое, стандартное отклонение (SD), ошибка среднего (SE), медиана, квартили, межквартильный размах. Для сравнения количественных признаков в группах применяли критерий Манна-Уитни-Вилкоксона без поправок на множественные сравнения. Результаты считали статистически значимыми при р<0,05.
Опухоли молочной железы (МЖ) у мышей самок линии FBV/N, трансгенных по HER-2/neu представляют собой аденокарциномы, которые характеризуются низким содержанием рецепторов эстрогена (ЭР) (фиг. 1) и отсутствием рецепторов прогестерона (ПР). Можно выделить два подтипа, а именно ЭР+, ПР-, и ЭР-, ПР- [2]. При иммуногистохимическом исследовании ERa в опухолях МЖ только в 10 образцах из 45 обнаружены единичные позитивно окрашенные ядра (фиг. 1).
Модель чувствительна к схеме CAF (циклофосфамид, адриамицин, 5-фторурацил), при этом отмечается торможение роста опухоли, приводящее к стабилизации среднего объема опухолей (фиг. 2). Торможение роста опухоли составило 63% на 14 сутки и 46% на 21 сутки опыта.
Поскольку у животных возможно развитие множественных опухолей, то представляется целесообразным анализ среднего суммарного объема опухолей у мышей (фиг. 3) и его относительное изменение к началу опыта (фиг. 4). На графике относительного прироста объема опухоли видно, что происходит линейное изменение этого показателя в контрольной группе, что свидетельствует о целесообразности использования данного показателя для оценки биологического ответа опухоли на лечение. Так при воздействии схемы CAF наблюдается отсутствие изменения этого показателя на протяжении почти 3-х недель, свидетельствующее о стабилизации заболевания. Частота стабилизации отдельных опухолей составляет около 60% к 21 суткам.
Исследование проведено на мышах-самках линии FVB трансгенных по HER-2/neu конвенциональной категории, линия получена из питомника Charles River Laboratories (Италия). Возраст животных к началу исследования составлял 21-41 неделю, вес - 25-30 г.
Для исследования была использована лекарственная форма препарата Тамоксифен Гексал (Гексал АГ, Германия, 83607 Хольцкирхен, серия НА1575 от 01/17), представляющая собой таблетки, покрытые оболочкой белого или слегка желтоватого цвета, круглые, двояковыпуклые, с однородной гладкой поверхностью, содержащие 20 мг действующего вещества.
Условия содержания соответствуют стандартам, указанным в руководстве The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (ILAR publication, 1996, National Academy Press, 1996).
Животных содержали в отдельном помещении группами (не более 5 особей) в индивидуальных клетках для лабораторных грызунов типа Т2. Размеры 268x215x141 мм (площадь основания 370 см2). Ванна из поликарбоната, крышка из нержавеющей стали с бункером для корма, разделителем для поилки.
Подстил - стружка древесная обеспыленная.
Животные имели неограниченный доступ к комбинированному полнорационному гранулированному корму для лабораторных грызунов.
Вода питьевая, давалась ad libitum в стандартных поилках объемом 190 мл, производства TECNIPLAST из высокотемпературного полисульфона с силиконовым кольцом и металлической крышкой из нержавеющей стали AISI 316.
Температура в помещении поддерживалась на уровне 20-26°С, относительная влажность - 50-70%. Фотопериод установлен 12 ч ночь - 12 ч день при искусственном освещении лампами дневного света.
- 3 044450
На клетке содержания устанавливали идентификационную карточку, на которой указывали номер карточки/клетки, номер опытной группы, индивидуальные номера животных, их количество и пол, номер исследования, фамилия, имя, отчество руководителя исследования. Каждому животному проводили установку на ушную раковину металлического метчика для мелких лабораторных грызунов из никелевого сплава KentScientific, США (на метчиках имеются проштампованные производителем трехзначные номера).
В конце опыта мышей подвергли эвтаназии углекислым газом. Все трупы животных подвергали аутопсии с макроскопическим описанием.
Проведено определение LD50 препарата у мышей линии FVB трансгенных по HER-2/neu по тесту OECD 423 (OECD guideline for testing of chemicals. Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method).
Использованы 12 мышей-самок.
На первом шаге 3 мышам вводили препарат в дозе 300 мг/кг. Исследуемый препарат вводили внутрижелудочно (в/ж) с помощью металлического атравматического зонда (в соответствии с пероральным путем применения в клинике). Для в/ж введения субстанцию препарата смешивали с оливковым маслом для получения суспензии необходимой концентрации для введения из расчета 0,1 мл суспензии на 10 г массы тела животного. Лекарственная форма для введения готовилась ех tempore.
В связи с отсутствием гибели животных при введении препарата в дозе 300 мг/кг, этот же уровень дозы препарата был использован для введения еще 3 животным. Гибель животных также отсутствовала, поэтому далее препараты вводили в дозе 2000 мг/кг в 2 шага по 3 животных на каждом шаге.
Вели клиническое наблюдение и регистрацию массы тела в соответствие с табл. 1. Животных осматривали ежедневно 2 раза в день, клинически обследовали индивидуально после введения дозы первые 60 минут, с особым вниманием в течение первых 4 ч, периодически в течение первых 24 ч, на 2 сутки и еженедельно до 14 дней. Выполняли подробный осмотр животного в клетке содержания, в руках. Фиксировали общее состояние животных: особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, состояние волосяного и кожного покрова.
Регистрировали массу тела животных с помощью поверенных быстродействующих электронных лабораторных весов Ohaus Scout Pro (США), с максимально нагрузкой 2000 г, шагом измерения 0,1 г.
На 15 сутки выполняли эвтаназию и аутопсию с регистрацией макроскопических изменений. Данные заносили в специальный индивидуальный бланк вскрытия.
Патоморфологическому исследованию подлежали все экспериментальные животные в конце исследования. После эвтаназии животные были тщательно обследованы на предмет внешних патологических признаков. Проведено исследование состояния грудной и брюшной полостей и макроскопическое исследование внутренних органов. Микроскопический анализ органов и тканей лабораторных животных не проводился, так как гибель животных не зафиксирована в течение всего периода наблюдения, кроме того, макроскопический анализ внутренних органов не выявил патологических изменений.
Таблица 1
Схема наблюдения и взвешивания животных при оценке острой токсичности
ствии с предполагаемым пероральным путем применения в клинике). Препарат вводили в однократной суточной дозе (20 мг/кг массы тела) и 5-ти кратной суточной дозе - 100 мг/кг массы тела. Для введения ex tempore готовили раствор препаратов в оливковом масле (рафинированное оливковое масло с добавлением нерафинированного Extra Virgen марки Global Village Clasico серия L:183351116, срок годности до 26.04.2020, BAIEO, Испания). Объем введения составил 0,1 мл на 10 г массы тела мыши (0,2 мл готовой формы для мыши массой 20 г). Начало введения препарата через 24 ч после рандомизации. Курс введения составил 27-28 дней.
Препарат сравнения - тамоксифен - вводили также с помощью металлического атравматического зонда (в соответствии с пероральным путем применения в клинике), суточная доза составила 4 мг/кг и была определена при пересчете клинических доз [5]. Эта доза соответствует суточной дозе для человека 20 мг/кг. Таблетку тамоксифена измельчали в ступке, из полученного порошка готовили суспензию в 40 мл оливкового масла, объем введения составил 0,08 мл на 10 г массы тела мыши, длительность введения соответствовала длительности введения опытных препаратов и составила 27-28 дней.
- 4 044450
В контрольных группах вводили оливковое масло (плацебо).
Критериями оценки были данные клинического наблюдения, масса тела животных, сроки гибели (в случае таковой), рост опухоли в динамике, данные патоморфологического исследования (верификация новообразования при аутопсии, оценка токсического действия по макроскопической картине изменений внутренних органов).
Массу тела животных регистрировали перед первым введением препаратов и далее два раза в неделю с помощью поверенных быстродействующих электронных лабораторных весов Ohaus Scout Pro (США), с максимально нагрузкой 2000 г, шагом измерения 0,1 г.
Один раз в неделю во время взвешивания у животных измеряли макроскопически определяемые опухолевые узлы. Для каждого узла измеряли два линейных размера: наибольший и больший перпендикулярный к нему. Наибольший размер принимали за длину (а) и второй размер за ширину (b) опухолевых узлов. Объем опухоли рассчитывали по формуле:
V=(axb)2/2
Эффективность терапии оценивали по изменению среднего объемы опухолей, торможению роста опухоли (ТРО), динамике среднего суммарного объема опухолей у каждой мыши и его относительного изменения.
Процент торможения роста опухоли рассчитывали по формуле:
TPO=(VK-VO)/VKx100 (%), где VK - средний объем опухоли в контрольной группе, а VO - средний объем опухоли в опытной группе.
Первичные данные с индивидуальных бланков перенесены в книги программы Microsoft Excel 2007. Для всех количественных данных вычислены групповое среднее арифметическое (М) и среднеквадратическое отклонение (m). Статистический анализ проведен с использованием статистической программы GraphPad Prism 6.0. Отличия между группами оценены с помощью регрессионного анализа ANOVA и точного критерия Фишера.
При оценке острой токсичности животные находились под непрерывным наблюдением первые 60 минут, затем осматривались ежечасно 3 часа, далее через 24 ч. На вторые сутки наблюдение осуществляли два раза в день. Затем наблюдения проводили раз в день. Клинический осмотр каждого животного проводили после введения субстанции, через сутки, далее еженедельно. Выполняли подробный осмотр животного в клетке содержания, в руках. Отмечали общее состояние животных: особенности их поведения, двигательной активности, состояние волосяного и кожного покрова.
При введении препарата в дозе 300 мг/кг в ходе эксперимента не была зафиксирована гибель животных. Визуально, признаков интоксикации за весь период наблюдения отмечено не было ни у одного животного. Внешний вид и поведение животных были обычными. При взятии в руки реакция была стандартная низкая. Вокализация у животных не отмечена, в том числе непосредственно во время и сразу после введения.
Ежедневное наблюдение за общим состоянием животных, поведенческими реакциями показали, что однократное пероральное введение тестируемого объекта не оказало влияния на общее состояние и активность подвергнутых интоксикации экспериментальных животных.
Данные о массе тела приведены в табл. 2 и 3.
Таблица 2
Динамика массы тела животных при введении препарата в стартовой дозе 300 мг/кг
| дала 300 МГ’КГ | Сутки опыта | |||
| 1 | 2 | 7 | 14 | |
| 1 серия | 03.05.2018 | 04.05.2018 | 09.05.2018 | 16.05.2018 |
| мышь№1 | 26.4 | 26.8 | 27.2 | 27.6 |
| мышь №2 | 29.6 | 292 | 29.6 | 30.2 |
| мышь №3 | 27.8 | 27.4 | 28,2 | 29.0 |
| 2 серия | 15.05.2018 | 16.05.2018 | 21.05.2018 | 28.05.2018 |
| мышь №4 | 28,0 | 27.8 | 292 | 30,6 |
| мышь №5 | 30.0 | 30.4 | 31.2 | 31.1 |
| мышь | 27.0 | 27.2 | 28.4 | 28.6 |
| Среднее (% исходной) | 28.1 | 28.1 ¢0) | 29.1 (3) | 215(5) |
| Легальные эффекты (пало/всего) | 0/6 |
Как следует из данных табл. 2, средняя массы тела равномерно увеличивалась в периоде наблюдения за животными, которые получали препарат в дозе 300 мг/кг.
Поскольку гибель животных при введении дозы 300 мг/кг отсутствовала, перешли к введению препарата в дозе 2000 мг/кг. Препарат вводили в 2 приема с интервалом 3 часа, в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела на прием при концентрации 100 мг/мл т.к. суспензия в масле при большей концентрации густая, что не позволяет ввести препарат через зонд. При введении дозы 2000 мг/кг клиническая картина интоксикации не наблюдалась. Ширина глазной щели животных, независимо от группы, практически не менялись в течение всего периода наблюдения. Патологических выделений из глаз не отмечалось. Нос розо
- 5 044450 вый, умеренно влажный, патологические выделения отсутствовали. Шерсть у всех мышей была опрятной, блестящей, без очагов облысения. Отмечено снижение средней массы тела у животных на 1% на 2 сутки и на 2% на 7 сутки от исходной (табл. 3). К концу периода наблюдения средняя масса тела была на 3% больше исходного значения.
Таблица 3
Динамика массы тела животных при введении препарата в дозе 2000 мг/кг
| . дота 20(Ю 1 .......................... мАг [ 1 | ___ _ Сутки опыта ...... ................... [ 2 Г 7 ] 14 | |
| 1 серия 30 05 201X мышь№1 J 27.2 | . 4 052018 ( 05062018 ' 12Оо2О18 ( 26.4 I 26.3 27.0 5 |
| 1 серия ___ _ ______17.09 18___ мышь №2 1 28.4 | _ 18 09 18 } 23O9J8__ 3009.18 J 28.0 , 26.8 , 26.9 |
| диышь№.з ...... ,27.5 ....... 2 серия i 30.09.18 | 26.8, , 24.9 1 26.0 ; *01 10 18 * 06 102018 ’ 13 10^118 ’ |
| мышь Ж ______257 _ мышь №5 | 24.2 , мышьЖ> __ д 24Л> исуманюйД ] _ _ 26.2 Летальные эффекты (пало всего) | 25.3 1 2У0 1 266 ί 24.4 1 25.9 ~ Г 28.7 ! 218 · 25.4 , 26,9 ' 2^8(-1) ' -V(-2) * 27.ЩЗ) > _______...............:...:..............................J |
Аутопсии подвергались все животные, подвергнутые запланированной эвтаназии на 15-е сутки опыта. При макроскопическом исследовании отклонений в состоянии внутренних органов не обнаружено.
Данные аутопсии были следующее.
Шерсть животных имела опрятный вид, была блестящей, без очагов облысения. Упитанность животных была удовлетворительной.
Патологических выделений из естественных отверстий не было.
Подчелюстные лимфатические узлы имели округлую форму, бледно-розовую окраску и умеренную плотность. Слюнные железы обычной формы, бледно-желтого цвета, умеренной плотности.
Брюшина гладкая, блестящая, свободной жидкости в полости нет.
Селезенка не увеличена, плотная, капсула гладкая и блестящая. Поджелудочная железа бледнорозовая, дольчатой структуры.
Величина и форма печени не изменены, капсула печени блестящая. Ткань печени имела коричневатый цвет и умеренно плотную консистенцию.
Почки плотные, капсула гладкая, блестящая, вокруг почек умеренное разрастание жировой клетчатки.
Яичники не увеличены с блестящей поверхностью.
Желудок со складчатой блестящей слизистой оболочкой, небольшим количеством слизи и пищевого содержимого в просвете.
Плевра гладкая, блестящая, свободной жидкости в грудной полости нет. Тимус треугольной формы, беловатого цвета. Легкие светло-розового цвета, воздушные.
Таким образом, в соответствие с проведенным тестом ОЭСР 423 препарат может быть отнесен к 5-й или не классифицируемой категории с LD50 равной или более 5000 мг/кг, что соответствует классу малоопасных веществ.
Животные удовлетворительно переносили введение препарата, клинических признаков токсичности не наблюдалось. При этом шерсть животных, получавших препарат, была блестящей, в отличие от животных контрольной группы, у которых она была несколько взъерошенной. Также в контрольной группе были более выражены опухолевые узлы.
При аутопсии в конце опыта специфических признаков токсического поражения внутренних органов не выявлено. Объем опухолевого поражения был значительно меньшим при введении препарата в дозе 20 мг/кг и особенно в дозе 100 мг/кг, чем у животных контрольной группы.
Масса тела животных увеличивалась в течение всего периода наблюдений во всех группах, прибавка массы тела может быть связана с увеличением объема опухолевых узлов у мышей (табл. 4).
- 6 044450
Таблица 4
Динамика средней массы тела мышей (г) при оценке противоопухолевой активности препарата
| Группа | Поизягеяь | 18.0948(1) | 24,09.18(7) | 01.10.18 (14) | 08.10.18 (21) | 15.10.18 (28) |
| Кмтроть-З | М | 51,4 | 31.8 | 33,7 | 35,8 | 36.7 |
| m | 0,9 | 1.1 | 1.2 | 1.4 | 1,5 | |
| 20 мг/кг | м | 31,9 | 31.8 | 33.5 | 35,2 | 36.7 |
| m | U | 1.2 | 1.4 | 1.5 | 1.5 | |
| 100 мг/кг | м | 31.4 | 31.7 | 32,0 | 33.7 | 34,4 |
| m | 14 | 1.5 | 1.3 | 1.5 | 1.5 | |
| Там<жсифся-2. 4 мг/кг* | Дата | 20.08.18(0) | 27.07.18(7) | 03.09.18 (14) | 10.09.18 (21) | 17.09.18 (28) |
| М | 31.0 | 32.0 | 32,9 | 32,8 | 34,2 | |
| m | 1.1 | 1,2 | 1.3 | 1.4 |
При анализе динамики среднего объема опухолей было выявлено, что введение препарата в дозе 20 мг/кг и 100 мг/кг обладает статистически значимым противоопухолевым эффектом, так к 28 суткам опыта ТРО составил 27% для дозы 20 мг/кг и 42% для дозы 100 мг/кг, эффект был пропорционален дозе препарата. Следует отметить, что при введении 100 мг/кг средний объем опухоли за 28 дней наблюдения увеличился всего на 60% от исходного, а в контрольной группе - на 155% (фиг. 5).
Таблица 5 Динамика среднего объема опухолей (см3), имевшихся к началу опыта, при оценке противоопухолевой активности препарата в дозе 20 мг/кг и 100 мг/кг
| Группа | Показатель | 17.09.18 «>» | 24.09.18 (7) | 01.10.18 (14) | 08.10.18 (21) | 15.10.18 (28) | % юмеяемк ОТ ЙСХ. |
| Коитрачь-З (№60) | М | .....0,38 | О.5 | 0.7 | 0.85 | ......0,97 | 155 |
| m | 0.05 | 0.06 | 0,08 | 0.1 | 0,11 | ||
| 20 «Ло* (№49) | м | 0,35 | 0,39 | 0.55 | 0.64 | 0.71· | 103 |
| m | 0,06 | 0,07 | 0.1 | 0,12 | 0.14 | ||
| ТРО.% | 8 | 22 | 21 | 25 | 27 | ||
| 100 МГ/КГ (№48) | м | 0.35 | 0.37 | 0.48 | 0.57 ♦ | 0.56 ♦* · | 60 |
| m | 0.04 | 0.03 | 0,04 | 0.05 | 0,05 | ||
| ТРО.% | 8 | 26 | 31 | 33 | 42 | ||
| Тамоксифен-2, 4мгкг* (N=39) | Дата | 20.08.18 (О) | 27.07.18 (7) | 03.09.18 (14) | 10.09.18 (21) | 17.09.18 (28) | ж |
| М | 0.29 | 0.46 0 0’ $ —- | 0.65 | 0.75 | 1.27 * | 338 | |
| m | 0.04 | 0,08 | 0.09 | 0 16 | |||
| ТРО.% | 24 | 7 | 12 | -31 |
М - среднее значение, m - ошибка средней арифметической, N - число опухолей на начало лечения и включенных в анализ. # - группа препарата сравнения приведена из третьей серии опытов. * - р<0,05, по сравнению с контрольной группой, а -р<0,05, по сравнению с группой препарата сравнения.
Следует отметить, что торможение роста опухоли при введении препарата в обеих дозах увеличивалось к концу срока наблюдения, а при введении препарата сравнения было максимальным на 21 сутки опыта. Таким образом, можно ожидать что эффект препарата при увеличении продолжительности введения может быть выше.
При анализе частоты стабилизации выявлено, что введение 100 мг/кг значительно увеличивает этот показатель, с 8% в контрольной группе до 27%. При этом средний объем новых опухолей, которые развились за период наблюдения и их количество были меньше, чем эти показатели в контрольной группе (табл. 6).
Таблица 6
Частота стабилизации опухолей, число и средний объем новых опухолей, развившихся к концу исследования, при оценке противоопухолевой активности препарата
| Группа | Число опухолей на начало лечения и частота их стабатшадай | Абсолютное число новых опухолей | Средний объем новых опухолей к концу наблюдения, (см3) | ||
| Контрачь-З | 60 | 8% | 25 | М | 0,23 |
| m | 0,04 | ||||
| 20 мгкг | 49 | 22% | 23 | м | 0.15 |
| m | 0.04 | ||||
| 100 мг/кг | 48 | 27% | 15 | м | 0.12* |
| ш | 0.02 | ||||
| Тамоксифея-2.4 мг/кг * | 39 | 3% | 32 | м | 0,20 |
| m | 0,05 |
% стабилизации заболевания - показатель аналогичный критерию RECIST, отражающий частоту опухолей, объем которых не увеличился более чем на 20% к концу наблюдения по отношению к началу
- 7 044450 лечения. * - р<0,05, по сравнению с контрольной группой. # - группа препарата сравнения приведена из третьей серии опытов.
Средний суммарный объем опухолей у мышей при введении препарата в дозах 20 мг/кг и 100 мг/кг был достоверно меньше, чем в контрольной группе с 14 по 28 сутки. А для в дозе 100 мг/кг на 28 сутки опыта этот показатель был статистически значимо меньше, чем в группе препарата сравнения (табл. 7, фиг. 6).
Таблица 7
Средний суммарный объем опухолей (см3) у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата.
| Группа | Показатель | 17.09.18 (0) | 24.09.18 (7) | 01.10.18 (14) | 08.10.18 (21) | 15.10.18 (28) | % изменения шшх |
| Йитрвль-З (№10) | М | 2.26 | 3.02 | 4.17 | 5.07 | 5,80 | 157 |
| ш | 0.36 | 0.46 | 0,58 | 0.70 | 0.73 | ||
| 20 мг/кг (№10) | м | мг | 1.93 | 2.67 ♦ | 3.15 ** | 3.48 ·“ | 106 |
| m | 0.30 | 0.33 | 0,47 | 0.56 | 0.65 | ||
| 25 | 36 | 36 | 38 | 40 | |||
| 100 μι кг (№10) | м | 1,70 | 1.79 | 2,30* | 2.75 *♦ | 2.71 ♦♦· | 59 |
| m | 0,31 | 0.34 | 0.41 | 0,45 | 0.42 | ||
| ТРО. % | 25 | 41 | 45 | 46 | 53 | ||
| Тамокенфея-З, 4 мг κι * (№9) | Дата | 20.08.18 (0) | 27.07.18 (7) | 03.09.18 (14) | 10.09.18 (21) | 17.09.18 (28) | |
| М | Мб_ .. | 2.01 | 2.84 | 3.23 | 5.52 | 338 | |
| m | 0.23 | 0.35 | 0.52 | 0.58 | 1,11 | ||
| ТРО,% | 44 | 33 | 32 | 36 | 5 |
# - группа препарата сравнения приведена из третьей серии опытов. * - р<0,05, по сравнению с контрольной группой, а -р<0,05, по сравнению с группой препарата сравнения.
При оценке относительного изменения среднего суммарного объема опухолей также было показано, что эффект препарата зависел от его дозы и превосходил эффективность тамоксифена (фиг. 7, табл. 8).
Таблица 8
Относительное изменение среднего суммарного объем опухолей к 1 суткам (%) у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата
| Группа | Показатель | 17.09.18 } 24.09.18 (0) (?) | 01.10.18 (14) | 08.10.18 (21) | 15.10.18 (28) | |
| Контраль-3 (№10) | М | 0 ‘ 34 | 88 | 131 | 175’ | |
| m | 0 | 6 | 14 | 22 | 25 | ||
| 20 мг/кг (№10) | м | 0 | 19 | 64» | 91 ·· | 107·“ |
| m | 0 .6 | 16 | 17 | 20 | ||
| 100 мг/кг (№10) | М | о ] О | 38’ | 75 | 69 | |
| m | 0 | 7 | 10 | 16 | 16 | |
| Тамоксифен-!. 4 мг/кг * (№9) | Дата | 20.08.18 (0) | 27.07.18 (7) | 03.09.18 (14) | 10.09.18 (21) | 17,09.18 (28) |
| М | 0 | 67 | 134 | 178 | 363 * | |
| m | 0 \ 15 | 21 | 41 | 66 |
Для оценки гормонального воздействия препарата была оценена масса тела матки без рогов на 28 сутки наблюдения (табл. 9). Достоверных отличий этого показателя выявлено не было.
Таблица 9
Вес тела матки и масса тела мышей с опухолями молочной железы при изучении противоопухолевой активности препарата
| Групиа | Вес тела матки • (мг) | Фаза эстрального никла (число мышей) | Масса тела W |
| Контрсиь-З | 27 | Э- 1 | 28,6 |
| Д-8. . | 37Д±1.5 | ||
| 17±2 | Все | 36,7±1.5 | |
| Тамоксифен-2, 4 мг/кг | 28±1 | 3-9 | 34,2±1,4 |
| — | Д-0 | ||
| 28±1 | Вее | 34.2±1.4 | |
| 20 мг/кг | 45±7 | 3-3 | 35,5±1,6 |
| 19±3 | Д-7 | 37,1±Х2 | |
| 27±5 | Все | 36,7*1.5 | |
| 100 МГ/КГ | 50±10 | Э-2 | 31.5*5,4 |
| 19*4 | ............................1-8........................................ | 35,1*1.7 | |
| 26±6 | Все | 34,4±1Л |
* - включая 1 животное в фазе метаэструса; Э - эструс; Д -диэструс.
Препарат в дозах 20 мг/кг и 100 мг/кг обладает выраженным противоопухолевым эффектом, так к 28 суткам опыта ТРО составил 27% для дозы 20 мг/кг и 42% для дозы 100 мг/кг, эффект был пропорцио- 8 044450 нален дозе препарата (различия статистически значимы). Введение в дозе 100 мг/кг значительно увеличивает частоту стабилизации опухолей, с 8% в контрольной группе до 27%. Препарат в дозе 100 мг/кг по эффективности к концу периода наблюдения на 28 сутки статистически значимо превосходит по эффективности препарат сравнения тамоксифен (4 мг/кг).
Исследования показали, что у препарата отсутствует утеротропная активность.
В соответствие с проведенным тестом ОЭСР 423 препарат может быть отнесен к 5-й или не классифицируемой категории с LD50 равной или более 5000 мг/кг, что соответствует классу малоопасных веществ согласно принятому ГОСТ.
Краткое описание чертежей
Изобретение иллюстрируется следующими фигурами.
Фиг. 1 - окрашивание антителами к ERa опухоли молочной железы.
Визуализация пероксидаза хрена + диаминобензидин, ув. х100 (А). Специфическое окрашивание ядер клеток протока молочной железы и ядер единичных опухолевых клеток (Б), ув. х400.
Фиг. 2 - динамика среднего объема опухолей, имевшихся к началу опыта, у мышей при терапии схемой CAF.
Фиг. 3 - динамика среднего суммарного объема опухолей, имевшихся к началу опыта, у мышей при терапии схемой CAF.
Фиг. 4 - относительное изменение среднего суммарного объема опухолей, имевшихся к началу опыта, у мышей при терапии схемой CAF.
Фиг. 5 - динамика среднего объема опухолей у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата
Фиг. 6 - средний суммарный объем опухолей у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата.
Фиг. 7 - относительное изменение среднего суммарного объем опухолей у мышей при оценке противоопухолевой активности препарата.
Лучший пример осуществления изобретения.
Пример 1.
Работа проведена на перевиваемой культуре клеток человека MCF-7 (аденокарцинома молочной железы). В качестве отрицательного контроля использовали нормальные кожные фибробласты человека (КФЧ) ранних пассажей. Клетки культивировали во флаконах Карреля в среде DMEM/F12 (Биолот) с добавлением 1% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота (Биолот), без антибиотиков, в 5% СО2 атмосфере, при 37°С.
Клетки высаживались на флаконы Карреля по 50 х 104 клеток на флакон. Для изучения пролиферативной активности клеток в условиях подавления сульфатазы через 24 ч после посева культуральную среду заменяли на среду, содержащую ингибиторы сульфатаз до конечной концентрации 50 мкг/мл, после чего инкубировали данные опухолевые клеточные линии в течение различных промежутков времени (от 24 до 72 ч). Ингибитор растворяют в ДМСО. Конечная концентрация ДМСО в культуральной среде не превышала 0.5%. Для исключения цитотоксического действия ДМСО ставили контроль с добавлением ДМСО без ингибиторасульфатаз. Для исключения неспецифического губительного действия веществ использовали нормальные кожные фибробласты человека. Далее клетки снимали раствором версенатрипсина (Биолот), рассеивали на флаконы Карреля, содержащие новую полную культуральную среду. Подсчет клеток проводили в момент достижения необработанными контрольными клетками максимальной плотности клеток на единицу площади поверхности культурального флакона (монослой), при этом их количество определялось как 100%. Пролиферативную активность всех исследованных клеточных культур при воздействии ингибиторов сульфатаз определяли не менее трех раз.
Исследование влияние полученного сульфамата на рост перевиваемой культуры клеток человека MCF-7 (аденокарцинома молочной железы) показало, что стероид (3) полностью блокирует рост опухолевых клеток при концентрации 20 мкг/мл, при этом он не влияет на рост кожных фибробластов человека, не имеющих рецепторов эстрогенов. Рост опухолевых клеток ингибируется в той же степени, что и под действием тамоксифена, применяемого в медицинской практике более 30 лет. Это весьма важно, поскольку сульфаматы и тамоксифен имеют разные механизмы действия, и есть перспективы их совместного применения.
В экспериментах на мышах линии FVB, трансгенной по HER-2/neu (ER-/PR-/HER2+), с опухолями молочных желез, стероид ингибирует рост опухолей сравнимо с применяемым в клинической практике тамоксифеном, что предполагает их совместное использование для лечения рака молочной железы.
На клеточной линии трижды негативного рака молочной железы MDA-MB-231 соединение ингибирует рост клеток на 83%, что сравнимо с применяющимся в клинической практике химиотерапевтическим препаратом этопозидом.
Препарат показал активность против клеток гепатокарциномы SK-Hep-1 (IC50 = 53.4 μM), рака легких А549 (IC50 = 29.6 μМ), аденокарцинома желудка SNU638 (IC50 = 22.8 μМ), а также против клеток хронической миелогенной лейкемии (К562).
- 9 044450
Пример 2.
Группа Контроль. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=1,5±0,4 мм3. Без специфического лечения размеры опухоли к 33-м суткам после трансплантации достигли Vcp=233,2±86,5 мм3. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 2 из 10.
Группа препарат, 10 мг/кг. В группе 7 мышей, 7 опухолей. На момент начала терапии Vcp=1,0±0,4 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки после начала лечения зафиксировано недостоверное ТРО=74,3% (Vcp=5,1±2,3 мм3 против Vcp=20,0±6,0 мм3 в контроле, р<0,220). На 10-е сутки после начала лечения ТРО=68,0% (Vcp=24,8±12,2 мм3 против Vcp=77,3±32,0 мм3 в контроле, р<0,181). На 14-е сутки после начала лечения наблюдали максимальное достоверное ТРО, равное 94,3% (Vcp=6,9±2,2 мм3 против Vcp=120,6±44,4 мм3 в контроле, р<0,03), которое сохранялось примерно на том же уровне и составило 90,6% (Vcp=17,6±0,7 мм3 против Vcp=186,4±65,0 мм3 в контроле, р<0,061) и 90,2% (Vcp=26,1±12,1 мм3 против Vcp=266,5±91,3 мм3 в контроле, р<0,061) к 17-м суткам и 21 суткам, соответственно. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 5 из 7.
Группа Тамоксифен, 30 мг/кг. В группе 7 мышей, 7 опухолей. На момент начала терапии Vcp=0,9±0,2 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки ТРО составило 12,6% (Vcp=18,8±7,4 мм3 против Vcp=20,0±6, мм3 в контроле, р<0,962) и до конца периода наблюдения не превышало этих значений. На 17-е и 21-е сутки после начала лечения отмечали отрицательное ТРО с максимальным значением на 21-е сутки ТРО=-44,2 (Vcp=384,8±103,2 мм3 против Vcp=266,5±91,3 мм3 в контроле, р<0,106). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 6 из 7.
Группа Тамоксифен, 10 мг/кг. В группе 7 мышей, 7 опухолей. На момент начала терапии Vcp=0,7±0,1 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7 -е сутки после начала лечения зафиксировано недостоверное ТРО=63,9% (Vcp=7,2±3,9 мм3 против Vcp=20,2±6,0 мм3 в контроле, р<0,364). На 10-е сутки после начала лечения зафиксировано ТРО=56,9% (Vcp=33,4±16,l мм3 против Vcp=77,3±32,0 мм3 в контроле, р<0,315). С 14-е по 17-е сутки наблюдали увеличение ТРО до 60,6% (Vcp=47,5±16,8 мм3 против Vcp=120,6±44,4 мм3 в контроле, р<0,193) и 68,9% (Vcp=58,0±18,2 мм3 против Vcp=186,4±65,0 мм3 в контроле, р<0,070), соответственно. На 21-е сутки после начала лечения и до конца периода наблюдения ТРО ниже биологически значимых значений (<50%). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 2 из 7.
Сводные результаты измерений и статистическая значимость отличий межгрупповых измерений приведены в табл. 10 и 11.
Таблица 10
Объемы опухолей у мышей в группах среднее и его ошибка (М±m)
| Группы | Сутки от начала лечения | |||||||
| 0 | 1ВШЛ | iiii | шкш | 14 | ||Ц | 24 | ||
| Стероид, 10 мг/кг | 1,0+0, 4 | 1,2+0, 4 | 5,1+2, 3 | 24,8±12 ,2 | 6,9±2,2 | 17,6±0,7 | 26,2+12,1 | 32,0±6,9 |
| Тамоксиф ен 30 мг/кг | 0,9+0, 2 | 2,0+0, 4 | 18,8+7 ,4 | 67,6±21 ,1 | 117,1±41 ,7 | 218,3±63 ,6 | 384,8+103, 2 | 392,1 |
| Тамоксиф ен 10 мг/кг | 0,7±0, 1 | 1,0+0, 3 | 7,2±3, 9 | 33,4±16 ,1 | 47,5±16, 8 | 58,0±18, 2 | 145,5+70,9 | 211,1±9 4,0 |
| Контроль | 1,5±0, 4 | 2,2+0, 5 | 20,0+6 ,0 | 77,3±32 ,0 | 120,6+44 ,4 | 186,4+65 ,0 | 266,5+91,3 | 233,2+8 6,5 |
Таблица 11
Влияние препарата и тамоксифена на торможение роста SKBR-3 за весь период наблюдения, ТРО%
| Группа | Сутки от начала лечения | ||||||
| 7 | 10 | 14 | 17 | 21 | 24 | ||
| 1 | Препарат, 10 мг/кг | 74,3 | 68,0 | 94,3 | 90,6 | 90,2 | 86,3 |
| 2 | Тамоксифен, 30 мг/кг | 6,2 | 12,6 | 2,9 | -17,1 | -44,4 | -68,1 |
| 3 | Тамоксифен, 10 мг/кг | 63,9 | 56,9 | 60,6 | 68,9 | 45,4 | 9,5 |
Пример 3.
Группа Контроль. В группе 12 мышей, 12 опухолей. На момент начала терапии Vcp=3,8±1,0 мм3. Без специфического лечения размеры опухоли к 30-м суткам после трансплантации достигли Vcp=299,1±100,5 мм3. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 6 из 12.
Группа Препарат, 10 мг/кг. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=1,6±0,4 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки после начала лечения зафиксировано достоверное ТРО=66,1% (Vcp=27,0±5,1 мм3 против Vcp=79,6±14,2 мм3 в контроле,
- 10 044450 р<0,002). На 10-е сутки после начала лечения наблюдали ТРО=78,7% (Vcp=21,6±4,9 мм3 против Vcp=101,2±22,5 мм3 в контроле, р<0,007). На 14-е сутки после начала лечения наблюдали максимальное недостоверное ТРО, равное 83,1% (Vcp=27,6±2,6 мм3 против Vcp=163,3±31,0 мм3 в контроле, р<0,06). На 17-е сутки после начала лечения ТРО снижалось до 76,1% (Vcp=46,3±5,3 мм3 против Vcp=193,6±39,6 мм3 в контроле, р<0,04). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 10 из 10.
Группа Тамоксифен, 30 мг/кг. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=4,1±1,2 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. На 7-е сутки и до конца периода наблюдения ТРО было ниже биологически значимого порога и не превышало 44,5% (Vcp=44,1±8,8 мм3 против Vcp=79,6±14,2 мм3 в контроле, р<0,10). Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 4 из 10.
Группа Тамоксифен, 10 мг/кг. В группе 10 мышей, 10 опухолей. На момент начала терапии Vcp=2,3±0,8 мм3 без достоверных отличий от контрольной группы. В этой группе не выявлено ингибирование роста опухоли в течение всего периода наблюдения. Число павших мышей в группе до окончания периода наблюдения - 6 из 9.
Сводные результаты измерений и статистическая значимость отличий межгрупповых измерений приведены в таблицах 12 и 13.
Таблица 12
Объемы опухолей у мышей в группах среднее и его ошибка (М±m)
| Группы | Сутки от начала лечения | ||||||
| 0 | 3 | % 7? ' | 10 | 14 | 17 | 21 | |
| Препарат, в/жЮ мг/кг (1) | 1,57+0,3 5 | 5,6511,6 4 | 26,98±5,1 2 | 21,59+4,8 8 | 27,59+2,57 | 46,25+5,3 1 | |
| Тамоксифен 30 мг/кг (2) | 4,1411,2 2 | 17,12±4, 12 | 44,13±8,8 1 | 61,37+12, 03 | 119,53118, 54 | 141,85+3 5,07 | 199,54±43, 55 |
| Тамоксифен 10 мг/кг (3) | 2,33+0,7 6 | 25,61+5, 56 | 79,17+18, 80 | 122,09+2 7,84 | 193,24+54, 10 | 237,32+7 7,07 | 322,76+88, 25 |
| Контроль (4) | 3,84+1,0 4 | 28,52±6, 27 | 79,57114, 20 | 101,1912 2,51 | 163,25+31, 00 | 193,58+3 9,56 | 299,051100 ,50 |
Таблица 13
Влияние препарата и тамоксифена на торможение роста TNBC_Kad за весь период наблюдения, ТРО%
| Г руппа | Сутки от начала лечения | |||||
| 7 | 10 | 14 | 17 | 21 | ||
| 1 | Препарат, 10 мг/кг | 66,1 | 78,7 | 83,1 | 76,1 | - |
| 2 | Тамоксифен, 30 мг/кг | 44,5 | 39,4 | 26,8 | 26,7 | 33,3 |
| 3 | Тамоксифен, 10 мг/кг | 0,5 | -20,7 | -18,4 | -22,6 | -7,9 |
Проведенные сравнительные исследования противоопухолевой активности препарата при многократном введении бестимусным иммунодефицитным мышам Balb/c Nude на двух моделях подкожных ксенографтов рака молочной железы человека SKBR-3 и TNBC-Kad, отличающихся по фенотипу.
Пилотное исследование противоопухолевой активности препарата на модели SKBR3 в сравнении с Тамоксифеном (лекарственная форма) показало, что терапия препаратом в дозе 10 мг/кг была наиболее эффективной среди всех изученных режимов лечения: на 10-е сутки после начала терапии выявлен достоверный противоопухолевый эффект - максимальное ТРО=91,2% (Vcp=2,2±2,0 мм3 против Vcp=24,9±12,5 мм3 в контроле, р<0,018) на фоне относительно хорошей переносимости препарата. Тамоксифен в дозе 10 мг/кг был не эффективен: биологически значимое значение ТРО на протяжении всего периода наблюдения не достигнуто, напротив, с 10-17-е сутки после начала лечения зафиксирована стимуляция роста опухоли.
Повторное исследование противоопухолевой активности препарата на той же модели SKBR3 в сравнении с Тамоксифеном (субстанция) показало, что препарат в дозе 10 мг/кг оказывает высокий противоопухолевый эффект с максимальным достоверным ТРО на 14-е (94,3%, р<0,03) и на 24-е (86,3%, р<0,04) сутки, что воспроизвело полученный в первом опыте результат.
Исследование противоопухолевой активности препарат на модели TNBCKad в сравнении с Тамоксифеном (субстанция) показало, что препарат в дозе 10 мг/кг на 7 и 10 сутки после начала лечения вызывает торможение роста опухоли на 66,1 и 78,7% (достоверные отличия от контрольной группы и группы с тамоксифеном 30 мг/кг). Эффект сохраняется в течение 10 дней примерно на том же уровне. Тамоксифен в дозе 30 мг/кг вызывает слабое недостоверное торможение роста опухоли на 44,5% на 7 сутки, которое уменьшается к концу наблюдения. Тамоксифен в дозе 10 мг/кг не эффективен на этой
- 11 044450 модели.
Промышленная применимость
Проведенные исследования показали, что заявленное применение соединения характеризуется: отсутствием утеротропного действия, широким спектром противоонкологической активности, включая активность против трижды негативного рака молочной железы, отсутствием токсичности, гипохолестеринемическим действием и отсутствием влияния на содержание триглицеридов в сыворотке крови, отсутствием негативного влияния на эндометрий.
Изобретение может быть применено при:
моно- и адьювантной терапии раннего гормоноположительного рака молочной железы у женщин в постменопаузе, моно- и адьювантной терапии раннего гормоноположительного рака молочной железы у женщин в постменопаузе после 2-3 летнего применения тамоксифена, лечении распространенного рака молочной железы на поздних стадиях, лечении трижды негативного рака молочной железы, моно- и адьювантной терапии гепатокарциномы, моно- и адьювантной терапии карциномы желудка, моно- и адьювантной терапии рака легкого, моно- и адьювантной терапии хронической миелогенной лейкемии.
Claims (6)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение 3-О-сульфамат-16,16-диметил-О-гомоэквиленина формулыОз для лечения онкологического заболевания у нуждающегося в этом пациента, выбранного из группы, включающей гепатокарциному, карциному желудка, рак легкого, хроническую миелогенную лейкемию, трижды негативную форму рака молочной железы.
- 2. Применение по п.1, где лечение представляет собой монотерапию или адъювантную терапию.
- 3. Применение по любому из пп.1, 2, где соединение формулы (3) вводят пациенту перорально.
- 4. Применение по любому из пп.1-3, где онкологическое заболевание представляет собой трижды негативную форму рака молочной железы.
- 5. Применение по п.4, где пациент представляет собой женщину в постменопаузе.
- 6. Применение по п.5, при котором пациент ранее получал тамоксифен.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018139336 | 2018-11-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA044450B1 true EA044450B1 (ru) | 2023-08-29 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101926320B1 (ko) | 전립선 암종의 치료를 위한 병용 요법 | |
| KR100785359B1 (ko) | 치료 용도 | |
| EA016653B1 (ru) | Способы и композиции для ингибирования ангиогенеза | |
| CA2755789C (en) | Treatment regimen utilizing neratinib for breast cancer | |
| Bloom et al. | Sex hormones and renal neoplasia. Inhibition of tumor of hamster kidney by an estrogen antagonist, an agent of possible therapeutic value in man | |
| US20230119759A1 (en) | Pharmaceutical combination comprising pyridino[1,2-a]pyrimidinone compound | |
| WO2020096486A1 (ru) | Применение 3-о-сульфамата 16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний | |
| WO2006110299A1 (en) | 3,3'-diindolylmethane compositions inhibit angiogenesis | |
| EA044450B1 (ru) | Применение 3-о-сульфамата-16,16-диметил-d-гомоэквиленина для лечения онкологических заболеваний | |
| CN112546056B (zh) | 一种用于治疗化疗诱发的外周神经病变的组合物及其应用 | |
| EA042485B1 (ru) | Лечение рака молочной железы, включая трижды негативную форму | |
| De Ryck et al. | 8-prenylnaringenin and tamoxifen inhibit the shedding of irradiated epithelial cells and increase the latency period of radiation-induced oral mucositis: cell culture and murine model | |
| US20220106282A1 (en) | Treatment for breast cancer, including triple-negative breast cancer | |
| EA042238B1 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ 3-О-СУЛЬФАМОИЛОКСИ-7β-МЕТИЛ-D-ГОМО-6-ОКСАЭСТРА-1,3,5(10),8(9)-ТЕТРАЕН-17а-ОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ | |
| WO2020096487A1 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ 3-О-СУЛЬФАМОИЛОКСИ-7β-МЕТИЛ-D-ГОМО-6-ОКСАЭСТРА-1,3,5(10),8(9)-ТЕТРАЕН-17а-ОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ | |
| RU2283112C1 (ru) | Противовоспалительное лекарственное средство | |
| BRPI0721539A2 (pt) | mÉtodo para melhorar a qualidade da carne ao reduzir o odor de cachaÇo | |
| JP4522261B2 (ja) | ブドウ膜黒色腫の処置 | |
| Zhao | Estrogen activates its receptors to improve lymphatic contractility through suppression of endoplasmic reticulum stress induced by hemorrhagic shock | |
| Jelinek et al. | Gynaecomastia in a tom-cat caused by cyproterone acetate: a case report | |
| ES2256243T3 (es) | Metodo para tratar la criptorquidia. | |
| TW202241415A (zh) | 通路調節劑、含其的醫藥組成物、其用途和採用其的治療方法 | |
| GAYATHRI et al. | ANTI TUMOUR POTENTIAL OF MELATONIN CO-ADMINISTRATION WITH PROGESTERONE ON MCF-7 CELL LINES TO REDUCE BREAST CANCER RISK | |
| KR101342992B1 (ko) | Ｍｓｍ을 유효성분으로 포함하는 암 질환 예방 및 치료용 조성물 | |
| AU2019226235A1 (en) | Method for preventing triple negative breast cancer in predisposed subjects |