WO2020080589A1 - 물질 p를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물 - Google Patents

물질 p를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물 Download PDF

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WO2020080589A1
WO2020080589A1 PCT/KR2018/013805 KR2018013805W WO2020080589A1 WO 2020080589 A1 WO2020080589 A1 WO 2020080589A1 KR 2018013805 W KR2018013805 W KR 2018013805W WO 2020080589 A1 WO2020080589 A1 WO 2020080589A1
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substance
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ulcers
wound
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김다정
이정선
장송선
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주식회사 바이오솔루션
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    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like

Definitions

  • the present invention relates to a composition for treating refractory ulcers comprising substance P (substance P), antioxidant, surfactant, and thickener as an active ingredient, and exhibits excellent epithelial tissue thickness reduction and collagen synthesis promoting effect by the combination. It relates to a composition that can be used for the treatment of intractable ulcers.
  • Intractable ulcers are chronic wounds, and the natural healing mechanism is out of balance, so full healing is impossible.
  • natural healing is possible with a wound healing mechanism of inflammation, proliferation, and remodeling, whereas in case of such intractable ulcers, spontaneous healing is difficult due to problems in one or more of the above three processes, and long-term repeated treatment As it is required, it is a great social burden in terms of productivity reduction and health care burden.
  • Diabetic ulcer is one of the main complications in diabetic patients. Diabetes patients have about 25% chance of developing diabetes ulcer, which is the most common complication that occurs in 1 out of 4 patients. (Lancet. # 2005; 366: 1719-1724). Diabetic ulcers are caused by significantly slowing the rate of movement of cytokines and growth factors that help wound healing due to blood flow restriction to the wound site and inducing a chronic inflammatory response (Korea Diabetes J, 2009, 33: 83- 90). Diabetic ulcers easily cause infection, leading to body amputation, which is one of the serious causes that accounts for 25-90% of the total number of amputations.
  • Compressed ulcers and venous ulcers are also intractable wounds that have problems with blood flow, like diabetic ulcers.
  • Compressed ulcers are diseases caused by problems with the supply of oxygen and nutrients by restricting blood flow in specific areas, and venous ulcers In the case of calf muscle, it is a representative disease that occurs due to a decrease in the blood flow pump function, which prevents blood flow from circulating and accumulates in the legs.
  • Treatment of intractable ulcers is basically controlled by blood sugar control, wound area load removal, dead tissue removal, and treatment management for disinfection and infection.
  • Active therapies have been developed that contain growth factors that promote wound healing.
  • Regranex ® a topical coating agent containing platelet-derived growth factor (PDGF), is used for diabetic ulcers approved by the US Food and Drug Administration and epidermal growth factor approved by Daewoong Pharm in Korea.
  • factor: EGF) -containing external solution is also used for diabetic ulcers.
  • the growth factor contained in such a therapeutic agent is easily degraded in an ulcer environment, so the effect of the drug is not sufficiently delivered to the wound site, and the molecular weight is large, so it is 50 times the amount required for recovery due to the disadvantage that it is not easily absorbed by the skin. There is a problem that the amount should be administered. Therefore, there is an urgent need to develop a therapeutic agent that exerts a sufficient effect in an appropriate amount by improving delivery to a wound site and skin absorption.
  • the present inventors tried to develop a composition having excellent treatment efficacy for refractory ulcers, and as a composition using substance P, a neuropeptide composed of 11 amino acids, as an antioxidant, surfactant, and thickener in substance P By mixing to confirm that it is possible to maximize the treatment effect of refractory ulcer of substance P and completed the present invention.
  • An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the treatment of refractory ulcers comprising a substance P consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an antioxidant, a surfactant, and a thickener.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for the treatment of refractory ulcers comprising the substance P, antioxidant, surfactant and thickener.
  • Another object of the present invention is to provide a method for treating intractable ulcer comprising administering the pharmaceutical composition to an individual in need thereof.
  • composition of the present invention increases the stability of the substance P by synergistic action by mixing the substance P with an antioxidant, a surfactant, and a thickener, thereby exhibiting an excellent therapeutic effect on intractable ulcers. Therefore, the composition of the present invention can be usefully used as a therapeutic use for intractable ulcers such as diabetic ulcers.
  • FIG. 1 is a graph quantifying (a) wound size reduction and (b) wound size reduction in skin wound models of normal and diabetic-induced mice.
  • FIG. 2 shows the substance P (Only SP), the composition containing the substance P (SP gel), Easyy topical solu., And the intrasite gel in the skin wound model of a mouse induced with diabetes.
  • a photograph showing the reduction in wound size after 4, 7 and 14 days (b) a graph quantifying the extent of wound size reduction after 4, 7 and 14 days, (c) A graph quantifying the extent of wound size reduction after 4 days, (d) a graph quantifying the extent of wound size reduction after 7 days, and (e) a graph quantifying the extent of wound size reduction after 14 days.
  • FIG. 3 shows the substance P (Only SP), the composition containing the substance P (SP gel), Easyy topical solu., And the intrasite gel in the skin wound model of diabetes-induced mice.
  • (c) wound after 14 days This graph quantifies the extent of area reduction.
  • FIG. 4 shows the substance P (Only SP), the composition containing the substance P (SP gel), Easyy topical solu., And the intrasite gel in the skin wound model of the diabetic-induced mouse.
  • One aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment of refractory ulcers comprising the substance P, antioxidant, surfactant and thickener.
  • the present inventors not only used a conventional commercialized therapeutic agent, but also effectively reduced the wound size of refractory ulcers than using the substance P alone when using the substance P in combination with an antioxidant, a surfactant, and a thickener, It was confirmed that it has an effect of further promoting collagen production.
  • the present invention uses an antioxidant, a surfactant and a thickener, specifically sodium thiosulfate, polysorbate 80 and hydroxyethylcellulose as an additional component in substance P, thereby improving the effect of treating refractory ulcers compared to the concentration of substance P. It is based on the idea of being able to enhance, which was first identified in the present invention.
  • “substance P (substance P)” is SEQ ID NO: 1 consisting of 11 amino acids (Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH 2 ) Means a neuropeptide. It is widely distributed in the central and peripheral nervous systems and is known to perform various functions such as pain induction and vasodilation by secreting rapidly when a specific stimulus reaches the sensory nervous system. However, there is no known composition using the effect of treating the refractory ulcer of the substance P, in particular, the composition P to improve the therapeutic effect compared to the concentration by mixing an antioxidant, a surfactant, and a thickener.
  • the concentration of the substance P contained in the pharmaceutical composition of the present invention may be 0.1 to 100 ⁇ g / ml, and specifically 5 ⁇ g / ml, but is not limited thereto. At this time, when the concentration of substance P contained in the pharmaceutical composition of the present invention is 0.1 to 100 ⁇ g / ml, the cell proliferation effect of substance P is excellent.
  • the "antioxidant” acts on free radicals or peroxides generated during oxidation of the active ingredient by oxygen in the air to stop the chain reaction of oxidation, prevent the progress of oxidation, and prevent the deterioration of the active ingredient Refers to the substance added.
  • the antioxidant can be used as an active ingredient of the pharmaceutical composition containing the substance P to prevent the deterioration of the therapeutic effect of refractory ulcers of the pharmaceutical composition.
  • Antioxidants can use conventional antioxidants that can be used in the art without limitation, specifically, sodium thiosulfate, beta-mercaptoethanol ( ⁇ -ME), glutathione (GSH) , Ascorbic acid, vitamin E, beta-carotene, lycopene, coenzyme Q-10, selenium, chromium, magnesium, taurine, hypotaurine, trehalose or these Combination of can be used, but is not limited thereto.
  • the antioxidant may be sodium thiosulfate.
  • the content of the antioxidant may be 0.01 to 1% by weight relative to the total weight of the composition of the present invention, specifically 0.1% by weight, but is not limited thereto.
  • the content of the antioxidant is not particularly limited as long as it can prevent deterioration of the therapeutic effect of refractory ulcers in the pharmaceutical composition, and an appropriate dose can be used by those skilled in the art.
  • surfactant means a substance that maintains a uniform liquid composition using a lipophilic oil component, and the surfactant in the present invention is an interface commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions in the art.
  • Pharmaceutically acceptable anionic, cationic, nonionic or amphoteric surfactants can be used without limitation.
  • polysorbate 80 polysorbate 80
  • polysorbate 60 polysorbate 60
  • polysorbate 20 polysorbate 20
  • poloxamer poloxamine
  • polyvinylpyrrolidone polyvinyl pyrrolidone
  • Polyvinyl alcohol polyvinyl alcohol
  • polyethylene glycol polyethylene glycol
  • the surfactant may be polysorbate 80.
  • the content of the surfactant may be 0.001 to 0.02% by weight relative to the total weight of the composition of the present invention, specifically 0.006% by weight.
  • the content of the surfactant is less than 0.001% by weight, the emulsifying power of the composition of the present invention is lowered, and thus the precipitation stability of the formulation may be lowered. If it is more than 1.0% by weight, the viscosity of the composition of the present invention is too high or phase inversion, etc. Problems may arise.
  • thickener means an additive added to impart viscosity, and is also referred to as a thickener or thickener.
  • the thickener may be used without limitation, a thickener generally used in the preparation of pharmaceutical compositions in the art.
  • hydroxyethylcellulose, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, or a combination thereof may be used, but is not limited thereto.
  • the thickener may be hydroxyethyl cellulose.
  • the content of the thickener may be 1 to 20% by weight based on the total weight of the composition of the present invention, specifically 15% by weight. If the content of the thickener is less than 1% by weight, the stability of the pharmaceutical composition may occur, and if it exceeds 20% by weight, the viscosity of the pharmaceutical composition may be too high, resulting in an unsuitable composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may have different therapeutic effects of refractory ulcers depending on the type of antioxidant, surfactant, and / or thickener, in particular sodium thiosulfate as an antioxidant, polysorbate 80 as a surfactant, and hydration as a thickener
  • sodium thiosulfate as an antioxidant
  • polysorbate 80 as a surfactant
  • hydration as a thickener
  • a pharmaceutical composition comprising sodium thiosulfate as an antioxidant along with substance P, polysorbate 80 as a surfactant, and hydroxyethylcellulose as a thickener was prepared and used in the treatment of refractory ulcers. It was confirmed that the treatment effect of refractory ulcer was remarkably superior to the use of substance P alone and the commercialized treatment.
  • intractable ulcer is a chronic wound or ulcer that does not heal even after a certain period of time has passed through a normal healing process. Specifically, normal wound management and treatment have been performed for a period of 4 weeks to 3 months. It may mean an ulcer whose recovery rate is less than 20%.
  • the normal wound healing mechanism goes through the hemostasis stage after tissue damage and goes through four stages: the inflammatory stage, the proliferation stage, and the maturation stage. In general, the hemostasis stage of several hours to several hours, the inflammatory stage for 2-3 days thereafter, and the proliferative stage for tissue regeneration build up from 2-3 days, and proceeds from about 2 to 6 weeks, and the stabilization process of the wound is then performed.
  • the incurable ulcer of the present invention has a different pathogenesis depending on the nature of the disease, but may ultimately be caused by a decrease or deficiency of a factor that induces a normal wound healing mechanism, which is hypoxia, infection, abnormality of cells, and sensory effects due to neuropathy.
  • the reduction may be caused by repeated trauma, reduced blood circulation due to compression, and ischemic conditions, but is not limited thereto.
  • the refractory ulcer of the present invention may include diabetic ulcer and ischemic ulcer.
  • Ischemic ulcers may include, but are not limited to, compression ulcers, venous ulcers, and arterial ulcers. If a chronic wound does not heal even after a certain period of time has passed, it can be applied to the present invention without being limited to the cause of the onset.
  • Diabetic ulcer is a disease that occurs in diabetic patients.
  • various risk factors are associated with each other to cause ulcers, as well as to develop a chronic skin ulcer because of slow wound healing compared to the general public.
  • Diabetes patients may not be able to supply blood flow to the skin because the arteries are stuck during the progression of large vessel disease, atherosclerosis, and so-called microvascular disease, thereby impairing the control of the microcirculatory.
  • microvascular disease thereby impairing the control of the microcirculatory.
  • a wound occurs in a specific area, blood flow becomes faster to promote healing of the wound in normal patients, whereas in patients with microvascular disease and ischemic disorder, this reaction is markedly dull, so the general wound treatment method does not have a healing effect. I can't. Therefore, a substance capable of exhibiting a therapeutic effect even in a hyperglycemic state in which diabetes is induced should be used.
  • Compressed ulcer is a disease commonly referred to as pressure sore, which is generally defined as a region of repetitive pressure over a defined area over the bulge of the bone, resulting in ischemia, cell death and tissue necrosis. It may be caused by conditions such as age or being tied to a wheelchair, but is not limited thereto.
  • Venous ulcer may mean chronic lower extremity ulcer leading to destruction of tissue and ulcer due to chronic venous dysfunction, but is not limited thereto.
  • Arterial ulcers may mean ulcers caused by arterial diseases such as arteriosclerosis, arterial dysfunction, and arterial occlusive disease, but are not limited thereto.
  • composition of the present invention can be used to treat intractable ulcers that are not cured by general wound treatment methods, including diabetic ulcers and the like.
  • the general wound treatment technique in the case of an ulcer developed in a patient with diabetes, the general wound treatment technique has a slow treatment effect, whereas when the pharmaceutical composition of the present invention is used, an excellent wound treatment effect is exhibited even in individuals with diabetes.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can effectively treat intractable ulcers that cannot be treated with a general wound treatment technique, and in particular, has the advantage of exhibiting a significant wound treatment effect even in a hyperglycemic environment of an individual with diabetes.
  • treatment can mean any action that causes or improves the symptoms of ulcers in individuals with intractable ulcers. Specifically, for the purpose of the present invention, it may mean an act of preventing, healing, reversing, weakening, alleviating, minimizing, suppressing, or stopping the harmful effects of ischemic disorders such as increasing perfusion, but is not limited thereto.
  • the composition of the present invention may be to promote collagen synthesis.
  • a step of decomposing the extracellular matrix is necessary, and this decomposition is performed through matrix metalloproteinase (MMP).
  • MMP matrix metalloproteinase
  • the stage of the recovery process is regulated by the balance between different MMPs.
  • Excessive MMP activity is the cause of refractory ulcers, which are characterized by long-term inflammation, decreased collagen synthesis, and high content of MMPs. That is, the treatment effect of intractable ulcer can be obtained by reducing the wound size (length and volume) of the intractable ulcer site, increasing the synthesis and deposition of extracellular matrix such as collagen, and increasing the re-epithelialization of the chronic wound.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can effectively treat a refractory ulcer through reduction of epithelial tissue thickness and promoting collagen synthesis.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be used as a single agent, and can be prepared and used as a combination preparation by further including a drug known to have a recognized wound healing effect, and is formulated by using a pharmaceutically acceptable carrier or excipient It can be produced in a dosage form or incorporated into a multi-dose container.
  • the "pharmaceutically acceptable carrier” may mean a carrier, excipient, or diluent that does not stimulate the organism and does not inhibit the biological activity and properties of the compound to be injected. Specifically, non-naturally (non-naturally occuring carrier).
  • the type of the carrier that can be used in the present invention is not particularly limited, and any carrier that is commonly used in the art and is pharmaceutically acceptable can be used.
  • Non-limiting examples of the carrier include saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, and the like. These may be used alone or in combination of two or more.
  • composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier may be various formulations, oral or parenteral.
  • formulation it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, etc., which are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations include at least one excipient in the compound, such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc. It can be prepared by mixing. In addition, lubricants such as magnesium stearate and talc may be used in addition to simple excipients.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, intravenous solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used diluents, various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, can be included. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations and suppositories.
  • Non-aqueous solvents, suspending agents may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
  • injectable esters such as ethyl oleate.
  • As a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerogelatin may be used.
  • the pharmaceutical composition may be prepared in any formulation according to conventional methods.
  • the composition can be formulated, for example, in oral dosage forms (eg, powders, tablets, capsules, syrups, pills, or granules), or parenteral dosage forms (eg, injections).
  • the composition may be prepared in a systemic formulation or a topical formulation.
  • the pharmaceutical composition may be used as an external preparation for skin and applied to the skin.
  • the pharmaceutical composition may be a formulation of a liquid, suspension, emulsion, cream, hydrogel, lotion, ointment, spray, patch, or aerosol, but is not limited thereto.
  • fatty substances When used as an external preparation for skin, fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic Emulsifiers, fillers, metal ion blockers and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or any other ingredients commonly used in external preparations for the skin It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology.
  • the ingredients may be introduced in an amount generally used in the field of skin science.
  • the pharmaceutical composition may further include an agent that increases percutaneous absorption, for example, dimethyl sulfoxide, dimethyl acetamide, dimethyl formamide, surfactant, azone, alcohol, acetone, and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain substances P, antioxidants, surfactants and thickeners in effective amounts.
  • the "effective amount” refers to an amount sufficient to exhibit the effect of treatment when administered to an individual in need of treatment for intractable ulcer.
  • the effective amount can be appropriately selected depending on the cell or individual selected by those skilled in the art. Severity of refractory ulcer disease, patient's age, weight, health, sex, patient's sensitivity to drugs, time of administration, route of administration and rate of discharge, duration of treatment, factors including drugs used in combination or coincidental with the composition used, and others It can be determined by factors well known in the medical field.
  • the recommended dosage may be administered once a day, or may be divided into several times.
  • Another aspect of the present invention provides a quasi-drug composition for the treatment of refractory ulcer comprising the substance P, antioxidant, surfactant and thickener.
  • quadsi-drug is a fiber, rubber product or the like used for the purpose of treating, alleviating, treating or preventing a disease of a person or animal, has a weak effect on the human body or does not directly act on the human body, and is a device Or it means something other than a machine and something similar.
  • an article corresponding to one of the agents used for sterilization, pesticide, and similar purposes for the prevention of infection, utensils and machinery among articles used for the purpose of diagnosing, treating, reducing, treating or preventing human or animal diseases may mean a product that is not a device and is used for the purpose of having a pharmacological effect on the structure and function of a person or animal, except for a device, a machine, or a device.
  • the quasi-drug may include personal hygiene products.
  • the personal hygiene product may be, but is not limited to, a disinfecting cleaner, shower foam, gagreen, wipes, detergent soap, hand wash, or ointment.
  • the quasi-drug may be an external preparation for skin.
  • the external preparation for skin may be formulated for topical application to the skin by containing a cosmetic or dermatologically acceptable medium or base.
  • a cosmetic or dermatologically acceptable medium or base for example solutions, gels, solids, dough anhydrous products, emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes) and ratios obtained by dispersing an oil phase in an aqueous phase.
  • It can be provided in the form of an ionic vesicle dispersant, or in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray, or consylstick.
  • It can also be used in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
  • the external preparation for skin of the present invention is a fatty substance, an organic solvent, a solubilizer, a thickening agent, a gelling agent, an emollient, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizing agent, a foaming agent, a fragrance, a surfactant, water, an ionic type or a ratio.
  • ionic emulsifiers fillers, metal ion blocking agents, chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or any other ingredients commonly used in cosmetics It may contain adjuvants commonly used in the same cosmetic or dermatological field.
  • the amount of the adjuvant may be used in a suitable amount generally used in the cosmetic or dermatological field depending on the purpose of use.
  • composition according to the present invention when used as a quasi-drug additive, the composition may be added as it is or used with other quasi-drugs or quasi-drug components, and may be suitably used according to a conventional method.
  • Another aspect of the present invention provides a method of treating intractable ulcer comprising administering the pharmaceutical composition to an individual in need thereof.
  • the pharmaceutical composition may include a substance P consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, antioxidant, surfactant, and thickener.
  • Another aspect of the present invention provides a therapeutic use of the pharmaceutical composition for intractable ulcer.
  • “individual” may mean any animal, including humans, who have or are likely to develop refractory ulcers.
  • the animal may be, but is not limited to, humans, mammals such as cattle, horses, sheep, pigs, goats, camels, antelopes, dogs, and cats, which require treatment for similar symptoms.
  • administration means introducing the pharmaceutical composition of the present invention to a patient in any suitable way, and the route of administration of the composition can be administered through any general route as long as it can reach the target tissue.
  • Intraperitoneal administration intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, topical administration, intranasal administration, but are not limited thereto.
  • the administration may be applied to the skin, specifically, the surface of the body, that is, the skin, scalp, hair, nails, damaged tissue (eg, skin), Or it may mean applying or spreading the composition of the present invention on the wound surface of a refractory ulcer.
  • the pharmaceutical composition for treating refractory ulcers containing the substance P, antioxidant, surfactant, and thickener may be administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the "pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat the disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level depends on the individual type and severity, age, sex, drug activity, and drug. Sensitivity to administration, time of administration, route of administration and rate of excretion, duration of treatment, factors including co-drugs, and other factors well known in the medical field.
  • composition of the present invention may be administered daily or intermittently, and the number of administrations per day can be administered once or divided into 2-3 times.
  • the number of administrations may be the same or may be different.
  • the composition of the present invention can be used alone or in combination with other drug treatments for the treatment of intractable ulcers. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect in a minimal amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.
  • Example 1 Preparation of a composition for treating refractory ulcers containing substance P (hereinafter referred to as SP gel)
  • a new formulation containing substance P was prepared by including substance P in sodium thiosulfate as an antioxidant, polysorbate 80 as a surfactant, and hydroxyethylcellulose as a thickener in the amounts shown in Table 1 below.
  • Substance P was synthesized through a solid / solution phase using peptide synthesis technology Fmoc-chemistry, and purified by high performance liquid chromatography to finally use a purity of 85% or more.
  • Example 2 Comparison of wound healing effects of normal mice and mice induced with diabetes
  • mice 8-week-old male C57BL / 6 mice (Dooyeol Biotech) were adapted for a week, then dissolved STZ (streptozotocin) 250 mg / kg in physiological saline and administered once intraperitoneally to induce diabetes.
  • STZ streptozotocin
  • mice with diabetes were selected and skin wound models using the same were prepared.
  • a skin wound model using normal mice without STZ administration was also prepared.
  • ketamine and rompun were administered to the abdominal cavity of the mouse, followed by anesthesia, and then the electric shaver and hair removal cream (Veet) were used to remove the hair on the back.
  • the part to remove the epidermis was sterilized using povidin and 70% ethanol, and a full-thickness wound was applied using a 5-mm biopsis punch on both sides of the lower gluteal region avoiding the spine of the mouse.
  • the wound size was reduced to 50% compared to the initial level in normal mice, while the wound size was confirmed to remain at about 75% in diabetic-induced mice. Did. Furthermore, on the 17th day after the wound was induced, it was confirmed that the wound size was about 5% and about 60% in normal mice and mice induced with diabetes, respectively.
  • a diabetic skin wound mouse model was prepared.
  • EZF external solution Daewoong Pharmaceutical
  • intrasite gel Smith & Nephew
  • mice Dooyeol Biotech
  • STZ 250 mg / kg was dissolved in physiological saline and administered once intraperitoneally to induce diabetes.
  • the standard of diabetes was set to 350 mg / dl or more without fasting, and only the mice in which diabetes was induced were selected to conduct the experiment.
  • a mixture of ketamine and rompun was administered to the abdominal cavity and anesthetized, followed by removal of the hair on the back using an electric shaver and hair removal cream (Veet).
  • the part to remove the epidermis was sterilized using povidin and 70% ethanol, and a full-thickness wound was applied using a 5-mm biopsis punch on both sides of the lower gluteal region avoiding the spine of the mouse.
  • a silicone ring with an outer diameter of 15-mm and an inner diameter of 8-mm was attached around the wound using a surgical thread.
  • a phosphate buffer solution (posphate buffered saline: PBS) was administered as a negative control to the wound site, and EZF external solution and intrasite gel were administered as a positive control, and substances P and 5 at a concentration of 5 g / ml were used as the experimental group.
  • SP gel at a concentration of g / ml was administered.
  • the positive control, substance P and SP gel, were administered to the entire wound once every 3 to 4 days at 14 days.
  • Example 3-2 SP gel's wound size reduction effect in diabetic ulcer model
  • the wounds were photographed and observed on the 0th, 4th, 7th and 14th days after administration of the substance P and SP gel.
  • the size of the wound area was quantified using Photoshop to evaluate the degree of wound reduction.
  • FIGS. 2 (a) and 2 (b) As a result of visually confirming the size of the wound, as shown in FIGS. 2 (a) and 2 (b), it was confirmed that the effect of reducing the wound size of the SP gel was superior to that of the single administration of the substance P. Specifically, at the time of 7 days after administration of SP gel, the wound size was significantly reduced compared to the treatment with substance P alone, and it was confirmed that the wound reduction effect was superior to that of the conventional commercial product, EZF external solution and intrasite gel. .
  • the wound size of the SP gel administration group was only about 40%, whereas the substance P alone treatment group In the case of about 80% of the wounds remained, it was confirmed that the EZF external solution treatment group was about 70% and the intrasite gel treatment group was about 80%.
  • the wound size of the SP gel administration group was 20% or less, while the substance P alone treatment group was about 40%, the easy F external solution was about 30%, intra Sight gel was about 70%, and it was confirmed that there were still a lot of wounds compared to SP gel.
  • the SP gel has a roughly twice the effect of reducing the size of the wound compared to the treatment of the substance P alone, and furthermore, the SP gel is a conventional diabetic wound treatment agent compared to the external solution and intrasite gel commercially available. It was also found that there is a better effect.
  • Example 3-3 Effect of SP gel on wound tissue length and area reduction in diabetic ulcer model
  • the tissue was biopsied 14 days later to confirm the effect of reducing the wound tissue length and wound area. Specifically, the skin tissue of the wound was biopsied and fixed in 10% formalin, and then hematoxylin and eosin (H & E) staining was performed. After staining, the extent of tissue length and area reduction in the remaining wound site was quantified.
  • H & E hematoxylin and eosin
  • SP gel administration was the best, specifically, when SP gel administration, wound tissue length and area decreased to 0.6 mm and 20 mm 2 . That is, it showed a wound healing effect that is 2 times superior to the material P alone treatment and about 1.5 times superior to the easy F external solution treatment.
  • Example 3-4 Effect of SP gel to reduce epithelial thickness and promote collagen synthesis in diabetic ulcer model
  • the tissue was biopsied 14 days later to confirm the effect of reducing epithelial tissue thickness and promoting collagen synthesis.
  • the tissue that has been cured has a thin epithelial shape like the epithelial tissue of normal skin, whereas the wounded tissue has a thicker epithelial shape than the normal epithelial tissue (Experimental & Molecular Medicine (2016) 50:68).
  • hematoxylin-eosin staining was performed to confirm the thickness of the epithelial tissue, and further, the biopsy skin tissue was stained with Masson's Trichrome to synthesize collagen. The degree of palpation was confirmed.
  • the negative control group showed an epithelial tissue condition of about 300% thicker than that of normal skin tissue, and in the case of the intrasite gel-treated group, the initial wound was not formed properly in the epithelial tissue itself. Showed the steps.
  • the EGF external solution and the substance P alone were treated, they showed epithelial tissue states of about 220% and 150%, respectively.
  • SP gel showed a thickness of about 100% of epithelial tissue similar to that of normal skin tissue, showing the most excellent wound healing effect among treatment groups.
  • the degree of staining was stronger than that of the substance P alone treatment group and the easy F external solution treatment group, thereby confirming that the collagen increase effect was much better.
  • SP gel is to demonstrate a significantly superior wound healing effect, compared to the material P alone and commercial products, EZF external solution and intrasite gel.

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Abstract

본 발명은 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 유효성분으로 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 조합에 의해 우수한 상피 조직 두께 감소 및 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타내어 다양한 난치성 궤양의 치료에 사용할 수 있는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 물질 P를 포함하는 조성물은 물질 P와 기본 특성에 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 혼합함으로써, 이들의 시너지 작용으로 물질 P의 안정성이 증가하여 난치성 궤양에 대한 우수한 치료 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 조성물은 당뇨성 궤양과 같은 난치성 궤양의 치료 용도로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

물질 P를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물
본 발명은 물질 P(substance P), 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 유효성분으로 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 조합에 의해 우수한 상피 조직 두께 감소 및 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타내어 다양한 난치성 궤양의 치료에 사용할 수 있는 조성물에 관한 것이다.
난치성 궤양은 만성적인 창상으로서 자연적인 치유 메커니즘의 균형이 무너져 완전한 치유가 불가능하다. 일반적인 상처의 경우 염증, 증식 및 재형성의 상처 치유 메커니즘으로 자연적인 치유가 가능한 반면, 이 같은 난치성 궤양의 경우 상기 3가지 과정 중 하나 이상에 문제가 발생하여 자발적인 치유가 어렵고, 장기간 반복적인 치료가 요구되므로 생산성 감소 및 건강관리 부담 측면에서 사회적으로 큰 부담이 된다.
난치성 궤양의 종류로는 당뇨성 궤양, 욕창으로 불리는 압박 궤양, 정맥성 궤양 등이 있다. 당뇨성 궤양의 경우 당뇨병을 앓고 있는 환자들에게서 발생하는 주된 합병증 중 하나로서, 당뇨병 환자에서 당뇨성 궤양의 발병 확률은 대략 25% 수준이며 4명 중 1명 꼴로 발생하는 가장 흔한 합병증이라 할 수 있다(Lancet.　2005; 366: 1719-1724). 당뇨성 궤양은 혈류 제한으로 상처 치유에 도움을 주는 사이토카인 및 성장인자들이 상처부위로 이동하는 속도가 현저히 느려지고, 만성적인 염증 반응을 유도시켜 발생하게 된다(Korea Diabetes J, 2009, 33: 83-90). 당뇨성 궤양은 쉽게 감염을 유발시켜 급기야는 신체 절단에 이르게 하며, 이는 실제 당뇨 환자의 절단 건수 중 25-90%에 육박하는 심각한 원인 중 하나이다. 압박 궤양 및 정맥성 궤양 또한 당뇨성 궤양과 마찬가지로 혈류의 흐름에 문제가 발생하는 난치성 상처로서, 압박 궤양은 특정 부위의 혈류 제한으로 산소와 영양분의 공급에 문제가 생겨 발생하는 질환이며, 정맥성 궤양의 경우 종아리 근육의 혈류 펌프 기능 저하로 혈류가 순환하지 못하고 다리에 고여 발생하는 대표적인 질환이다.
난치성 궤양의 치료는 기본적으로 혈당 조절과 상처 부위 부하 제거, 죽은 조직 제거 및 소독·감염에 대한 치료 관리가 원칙이나, 최근 난치성 궤양에 대한 상처 병인의 이해가 높아지면서 기존의 수동적인 치료에서 벗어나, 상처 치유를 촉진시키는 성장 인자들을 함유한 능동적인 치료법들이 개발되어 왔다. 대표적으로 혈소판 유래 성장인자(platelet-derived growth factor: PDGF)를 함유한 국소 도포제인 Regranex®는 미국 식약청의 승인을 받아 당뇨성 궤양에 사용되고 있고, 국내 대웅제약에서 승인 받은 상피세포성장인자(epidermal growth factor:EGF)가 함유된 이지에프 외용액 역시 당뇨성 궤양에 사용되고 있다. 하지만, 이 같은 치료제 내에 함유된 성장인자는 궤양 환경에서 쉽게 분해되기에 상처 부위에 약제의 효과가 충분히 전달되지 못하고, 분자량이 커 쉽게 피부에 흡수되지 못한다는 단점으로 인해 회복에 필요한 양의 50배 가량을 투여해야만 한다는 문제점이 있다. 따라서, 상처 부위로의 전달 및 피부 흡수력이 향상되어 적정량으로 충분한 효과를 발휘하는 치료제의 개발이 시급하다.
상기와 같은 배경 하에, 본 발명자들은 난치성 궤양의 치료 효능이 우수한 조성물을 개발하고자 예의 노력한 결과, 11개의 아미노산으로 이루어진 뉴로 펩티드인 물질 P를 이용한 조성물로서, 물질 P에 항산화제, 계면 활성제, 점증제를 혼합함으로써 물질 P의 난치성 궤양 치료 효과를 극대화시킬 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 난치성 궤양의 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 조성물은 물질 P와 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 혼합함으로써 이들의 시너지 작용으로 물질 P의 안정성이 증가하여 난치성 궤양에 대한 우수한 치료 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 조성물은 당뇨성 궤양과 같은 난치성 궤양의 치료 용도로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 정상 마우스와 당뇨가 유발된 마우스의 피부 상처 모델에서, (a) 상처 크기 감소를 나타낸 사진, (b) 상처 크기 감소 정도를 정량화한 그래프이다.
도 2는 당뇨가 유발된 마우스의 피부 상처 모델에 물질 P(Only SP), 물질 P를 포함하는 조성물(SP gel), 이지에프 외용액(Easyef topical solu.) 및 인트라사이트 겔(Intrasite gel)을 각각 처리한 후, (a) 4일, 7일 및 14일 경과 후 상처 크기 감소를 나타낸 사진, (b) 4일, 7일 및 14일 경과 후 상처 크기 감소 정도를 정량화한 그래프, (c) 4일 경과 후 상처 크기 감소 정도를 정량화한 그래프, (d) 7일 경과 후 상처 크기 감소 정도를 정량화한 그래프, (e) 14일 경과 후 상처 크기 감소 정도를 정량화한 그래프이다.
도 3은 당뇨가 유발된 마우스의 피부 상처 모델에 물질 P(Only SP), 물질 P를 포함하는 조성물(SP gel), 이지에프 외용액(Easyef topical solu.) 및 인트라사이트 겔(Intrasite gel)을 각각 처리한 후, (a) 14일 경과 후 상처 면적(연한 노란색 표기)을 조직학적으로 나타낸 사진, (b) 14일 경과 후 상처 길이 감소 정도를 정량화한 그래프, (c) 14일 경과 후 상처 면적 감소 정도를 정량화한 그래프이다.
도 4는 당뇨가 유발된 마우스의 피부 상처 모델에 물질 P(Only SP), 물질 P를 포함하는 조성물(SP gel), 이지에프 외용액(Easyef topical solu.) 및 인트라사이트 겔(Intrasite gel)을 각각 처리한 후, (a) 14일 경과 후 상피 세포 두께 감소 및 콜라겐 합성 정도를 조직 염색을 통해 나타낸 사진, (b) 14일 경과 후 상피 세포 두께를 정량화한 그래프이다.
본 발명의 하나의 양태는 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 물질 P에 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 혼합하여 사용할 경우, 종래의 상용화된 치료제를 사용한 것 뿐만 아니라, 물질 P를 단독으로 사용한 것보다 난치성 궤양의 상처 크기를 효율적으로 감소시키고, 콜라겐 생성을 보다 촉진시키는 효과가 있음을 확인하였다.
즉, 본 발명은 물질 P에 항산화제, 계면 활성제 및 점증제, 구체적으로 티오황산나트륨, 폴리소르베이트 80 및 하이드록시에틸셀룰로오스를 추가 구성성분으로 혼합하여 이용함으로써 물질 P의 농도 대비 난치성 궤양 치료 효과를 증진시킬 수 있다는 기술사상에 기초하며, 이는 본 발명에서 최초로 규명되었다.
본 발명에 있어서, "물질 P(substance P)"는 11개의 아미노산(Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2)으로 구성되어 있는 서열번호 1의 신경펩티드를 의미한다. 중추 및 말초 신경계에 널리 분포하며 감각 신경계에 특정 자극이 도달하면 빠르게 분비되어 통증 유도, 혈관 확장 등의 다양한 기능을 수행하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 물질 P의 난치성 궤양 치료 효과를 이용한 조성물, 특히 물질 P에 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 혼합하여 농도 대비 치료 효과를 향상시킨 조성물은 알려진 바 없다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 물질 P의 농도는 0.1 내지 100 ㎍/㎖일 수 있고, 구체적으로 5 ㎍/㎖일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이 때, 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 물질 P의 농도가 0.1 내지 100 ㎍/㎖일 경우, 물질 P의 세포 증식 효과가 우수하다.
본 발명에 있어서, "항산화제"는 공기 중의 산소에 의한 활성성분의 산화과정에서 생기는 유리기나 과산화물에 작용하여 산화의 연쇄반응을 중단하고 산화의 진행을 방지하며, 활성성분의 변질을 방지할 목적으로 첨가되는 물질을 의미한다. 상기 항산화제는 물질 P를 포함하는 약학적 조성물의 유효성분으로 사용되어 약학적 조성물의 난치성 궤양 치료 효과의 변질을 방지할 수 있다.
항산화제는 당업계에서 사용될 수 있는 통상적인 항산화제를 제한없이 사용할 수 있는데, 구체적으로 티오황산나트륨(sodium thiosulfate), 베타-머캅토에탄올(β-mercaptoethanol, β-ME), 글루타치온(glutathione, GSH), 아스코르브산(ascorbic acid), 비타민 E, 베타카로틴, 라이코펜, 코엔자임 Q-10(coenzyme Q-10), 셀레늄, 크롬, 마그네슘, 타우린(taurine), 하이포타우린(hypotaurine), 트레할로스(trehalose) 또는 이들의 조합을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 목적상 항산화제는 티오황산나트륨일 수 있다.
상기 항산화제의 함량은 본 발명의 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 1 중량%일 수 있고, 구체적으로 0.1 중량%일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 항산화제의 함량은 약학적 조성물의 난치성 궤양 치료 효과의 변질을 방지할 수 있는 한 특별히 제한되지 않으며 당업자가 적절한 용량을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, "계면 활성제"는 친유성의 오일 성분을 사용하여 균일한 액 조성을 유지하게 하는 물질을 의미하며, 본 발명에서 계면 활성제는 당업계에서 약학적 조성물의 제조시 일반적으로 사용하는 계면 활성제로서 약학적으로 허용되는 음이온계, 양이온계, 비이온계 또는 양쪽성 계면 활성제 등을 제한없이 사용할 수 있다.
구체적으로, 폴리소르베이트 80(polysorbate　80), 폴리소르베이트 60(polysorbate　60), 폴리소르베이트 20(polysorbate　20), 폴록사머(poloxamer), 폴록사민(poloxamine), 폴리비닐피롤리돈(polyvinyl pyrrolidone), 폴리비닐알코올(polyvinyl　alcohol), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol) 또는 이들의 조합을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 목적상 계면 활성제는 폴리소르베이트 80일 수 있다.
상기 계면 활성제의 함량은 본 발명의 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 0.02 중량%일 수 있고, 구체적으로 0.006 중량%일 수 있다. 계면 활성제의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우 본 발명의 조성물의 유화력이 떨어져 제형의 석출 안정성이 낮아질 수 있고, 1.0 중량% 초과인 경우 본 발명의 조성물의 점도가 너무 높아지거나 전상(phase inversion)등의 문제가 발생할 수 있다.
본 발명에 있어서, "점증제"는 점성을 부여하기 위하여 첨가되는 첨가제를 의미하는 것으로, 증점제 또는 증점 안정제라고도 한다. 본 발명에서 점증제는 당업계에서 약학적 조성물의 제조시 일반적으로 사용하는 점증제를 제한 없이 사용할 수 있다.
구체적으로, 하이드록시에틸셀룰로오스(hydroxyethylcellulose), 하이드록시프로필셀룰로오스(hydroxypropylcellulose), 메틸셀룰로오스(methyl　cellulose), 카복시메틸셀룰로오스나트륨 또는 이들의 조합을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 목적상 점증제는 하이드록시에틸셀룰로오스일 수 있다.
상기 점증제의 함량은 본 발명의 조성물 총 중량에 대하여 1 내지 20 중량% 일 수 있고, 구체적으로 15 중량%일 수 있다. 점증제의 함량이 1 중량% 미만인 경우 약학적 조성물의 안정성에 문제가 생길 수 있고, 20 중량% 초과인 경우 약학적 조성물의 점성이 너무 높아져 도포에 적합하지 않은 조성물이 될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 항산화제, 계면 활성제 및/또는 점증제의 종류에 따라 난치성 궤양의 치료 효과가 달라질 수 있고, 특히 항산화제로서 티오황산나트륨, 계면 활성제로서 폴리소르베이트 80, 점증제로서 하이드록시에틸셀룰로오스를 포함하는 경우 농도 대비 물질 P의 난치성 궤양 치료 효과를 최대화시킬 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 물질 P와 함께 항산화제로서 티오황산나트륨, 계면 활성제로서 폴리소르베이트 80, 점증제로서 하이드록시에틸셀룰로오스를 포함하는 약학적 조성물을 제조하여 난치성 궤양 치료에 사용하였으며, 그 결과 물질 P의 단독 사용 및 상용화된 치료제에 비해 난치성 궤양의 치료 효과가 현저히 우수하다는 것을 확인하였다.
본 발명에 있어서, "난치성 궤양"은 정상적인 치유 과정을 거쳐 일정기간이 경과한 후에도 치유되지 않는 만성적인 창상 또는 궤양으로서, 구체적으로 4주 내지 3개월의 기간동안 정상적인 상처 관리 및 치료를 수행하였으나 상처 회복율이 20% 미만에 그치는 궤양을 의미할 수 있다. 정상적인 창상 치유 기전은 조직 손상 후 지혈단계를 거쳐 염증단계, 증식단계, 성숙단계의 네 단계를 거친다. 일반적으로 수분에서 수시간의 지혈단계와 이후 2-3일 간의 염증 단계와 조직재생 구축을 위한 증식단계가 2-3일 후부터 시작되어 약 2주에서 6주까지 진행되고, 이후 창상의 안정화 과정을 거치는데 이 때 각 단계별로 여러가지 성장인자와 세포들이 출현하며 손상된 부위를 복구하게 된다. 정상적인 치유 과정은 증식단계가 끝나는 시기에 치유되는 것이 일반적이며 어느 한 단계에서 지연이 되어 일정기간 내에 창상이 치유되지 않으면 난치성 궤양으로 진행되며, 이는 주로 피부와 피하조직 이상 깊이의 궤양 형태로 발현된다.
본 발명의 난치성 궤양은 질환의 특성에 따라 발병 기전이 다르지만 궁극적으로 정상적인 창상 치유기전 과정을 유도하는 요소의 저하 또는 결핍에 의해 발생할 수 있으며, 이는 저산소증, 감염, 세포의 이상, 신경병변에 의한 감각저하로 반복적인 외상, 압박으로 인한 혈행 감소 및 허혈 상태 등으로 인해 초래될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, 본 발명의 난치성 궤양은 당뇨성 궤양(diabetic ulcer)과 허혈성 궤양(ischemic ulcer)을 포함할 수 있으며. 허혈성 궤양으로는 압박 궤양, 정맥성 궤양, 동맥성 궤양 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일정기간이 경과한 후에도 치유되지 않는 만성적인 창상이라면 발병 원인에 제한되지 않고 본 발명에 적용될 수 있다.
　당뇨성　궤양은 당뇨병 환자에게 발생하는 질환으로서, 당뇨병 환자에서는 여러가지 위험 인자들이 서로 복합적으로 관여하여 궤양을 발생하게 할 뿐만 아니라 일반인에 비해 상처 치료 속도가 늦기 때문에 만성적인 피부 궤양으로 발전한다. 당뇨병 환자들은 대혈관(large vessel) 질환, 죽상동맥 경화증의 진행 중 동맥이 붙어버려 피부로의 혈류 공급이 안될 수 있고, 소위 미세혈관질환을 앓기 때문에 미세순환계(microcirculatory) 제어능이 손상된다. 특정 부위에 상처가 생기면 정상적인 환자에서는 상처의 치유를 촉진시키기 위해 혈류가 더욱 빨라지게 되는 반면, 미세혈관질환 및 허혈 장애가 있는 환자에서는 이러한 반응이 현저히 둔해지기 때문에 일반적인 상처 치료방법으로는 치유 효과를 보지 못하게 된다. 따라서, 당뇨병이 유발된 고혈당 상태에서도 치료 효과를 나타낼 수 있는 물질을 이용하여야 한다.
압박 궤양은 일반적으로 욕창으로 불리는 질환으로서, 일반적으로 뼈의 돌출부 위에 한정된 영역에 걸쳐 반복적인 압력의 영역으로서 정의되어 허혈, 세포 사멸 및 조직 괴사를 초래한다. 노쇠하거나 휠체어에 묶여 있는 것과 같은 조건에 의해 유발될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
정맥성 궤양은 만성 정맥 기능부전 등으로 인해 조직 및　궤양의 파괴로 이어지는 만성 하지　궤양을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
동맥성 궤양은 동맥경화, 동맥성 기능부전, 동맥성 폐색성 질환증과 같은 동맥 질환으로 인해 유발되는 궤양을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
난치성 궤양의 경우, 고혈당 환경, 혈액순환의 저하, 궤양 치유에 필요한 물질의 상처로의 운반 어려움, 감염의 동반 등으로 인해, 일반적인 피부 상처와 비교하여 동일 약물에 의한 치료 효과가 현저히 낮고, 치료 속도도 매우 더디다. 본 발명의 조성물은 당뇨성 궤양 등을 포함하는, 일반적인 상처 치료방법으로 치유되지 않는 난치성 궤양을 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는, 당뇨병에 걸린 환자에서 발병한 궤양의 경우 일반적인 상처 치료 기법으로는 치료 효과가 더딘 반면, 본 발명의 약학적 조성물을 사용하면 당뇨병에 걸린 개체에서도 우수한 상처 치료 효과가 나타남을 확인하였다. 즉, 본 발명의 약학적 조성물은 일반적인 상처 치료 기법으로는 치료 불가한 난치성 궤양을 효과적으로 치료할 수 있으며, 특히 당뇨병이 발병한 개체의 고혈당 환경에서도 유의적인 상처 치료 효과를 나타내는 이점이 있다.
본 발명에 있어서, "치료"는 난치성 궤양을 가진 개체에서 궤양의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 목적상 관류를 증가시키는 등 허혈 장애의 유해 효과를 예방, 치유, 역전, 약화, 완화, 최소화, 억제 또는 중단시키는 행위를 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 콜라겐 합성을 촉진시키는 것일 수 있다. 상처 부위에서 세포가 증식하고 재생되기 위해서는 세포외 기질이 분해되는 단계가 반드시 필요하며, 이러한 분해는 MMP(matrix metalloproteinase)를 통해 이루어진다. 회복 과정 단계는 서로 다른 MMP사이의 밸런스에 의해 조절되는데 MMP 활성의 과다는 난치성 궤양의 원인으로서, 난치성 궤양은 장기간의 염증, 콜라겐 합성 감소 및 고함량 MMP가 특징이다. 즉, 난치성 궤양 부위의 상처 크기(길이 및 부피)의 감소, 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성 및 침착의 증가, 만성적 상처의 재상피화 증가 등에 의하여 난치성 궤양의 치료 효과를 얻을 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는, 본 발명의 약학적 조성물을 난치성 궤양 부위에 투여한 결과, 상처 조직의 길이 및 면적을 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다. 또한, 난치성 궤양의 치유가 완료된 조직은 정상 피부의 상피 조직과 같이 얇은 상피 형태를 보이므로, 상피 조직의 두께는 치료 정도를 확인할 수 있는 척도가 된다. 본 발명의 약학적 조성물은 난치성 궤양에 도포시 상피 조직 두께 감소 및 콜라겐 합성 촉진 효과를 통해, 난치성 궤양을 효과적으로 치료할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 단일제제로도 사용할 수 있고, 공인된 상처 치료 효과를 가진다고 알려진 약물을 추가로 포함하여 복합제제로 제조하여 사용할 수 있으며, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
상기 "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체, 부형제 또는 희석제를 의미할 수 있으며, 구체적으로, 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)일 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 임의의 제형으로 준비될 수 있다. 상기 조성물은 예를 들면, 경구 투여 제형(예를 들면, 분말, 정제, 캡슐, 시럽, 알약, 또는 과립), 또는 비경구 제형(예를 들면, 주사제)으로 제형화될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 전신 제형, 또는 국부 제형으로 제조될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 피부 외용제로 사용되어 피부에 도포될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 액제, 현탁제, 에멀젼, 크림제, 하이드로겔제, 로션제, 연고제, 스프레이제, 패치제 또는 에어로졸제의 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면 활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 경피 흡수를 증가시키는 제제, 예를 들어 디메틸술폭시드, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 계면 활성제, 아존, 알콜, 아세톤 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 유효한 양으로 포함할 수 있다. 상기"유효한 양"은 난치성 궤양의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여되는 경우 치료의 효과를 나타내기에 충분한 양을 말한다. 상기 유효한 양은 당업자가 선택되는 세포 또는 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 난치성 궤양 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 사용된 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 다른 양태는 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "물질 P", "항산화제", "계면 활성제", "점증제", "난치성 궤양"은 전술한 바와 같다.
본 발명에 있어서, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적을 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것을 의미한다. 또한, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미할 수 있다. 또한 상기 의약외품은 개인위생용품을 포함할 수 있다. 상기 개인위생용품은 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
구체적으로, 본 발명에서 상기 의약외품은 피부 외용제일 수 있다. 피부 외용제는 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 피부 국소 도포용으로 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 폼(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 피부 외용제는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면 활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상 적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제의 혼합량은 사용 목적에 따라 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 적합한 양으로 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용 할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 하나의 양태는, 상기 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 난치성 궤양의 치료 방법을 제공한다.
상기 약학적 조성물은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 물질 P(substance P), 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는, 상기 약학적 조성물의 난치성 궤양의 치료 용도를 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "물질 P", "항산화제", "계면 활성제", "점증제", "난치성 궤양"은 전술한 바와 같다.
본 발명에 있어서, "개체"란 난치성 궤양이 발병하거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라, 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 및 고양이등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
난치성 궤양의 치료에 효과가 있는 본 발명의 특성상, 상기 투여는 피부에 도포하는 것일 수 있고, 구체적으로 신체의 표면, 즉, 피부, 두피, 모발, 손발톱, 손상된 조직(예를 들면, 피부), 또는 난치성 궤양의 상처 표면에 본 발명의 조성물을 적용하거나 퍼뜨리는 것을 의미할 수 있다.
물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 상기 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물을 매일 투여 또는 간헐적으로 투여해도 좋고, 1일당 투여 횟수는 1회 또는 2~3회로 나누어 투여하는 것이 가능하다. 두 유효성분이 각각 단제인 경우의 투여횟수는 같은 횟수여도 좋고, 다른 횟수로 해도 된다. 또한, 본 발명의 조성물은 난치성 궤양의 치료를 위하여 단독으로, 또는 다른 약물 치료와 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 물질 P를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물(이하, SP gel)의 제조
물질 P에 항산화제로서 티오황산나트륨, 계면 활성제로서 폴리소르베이트 80, 및 점증제로서 하이드록시에틸셀룰로오스를 하기 표 1과 같은 함량으로 포함하여, 물질 P를 포함하는 신규한 제형을 제조하였다. 물질 P는 펩타이드 합성 기술인 프목-케미스트리(Fmoc-chemistry)를 이용한 솔리드/솔루션 단계(Solid/Solution phase)를 통해 합성하였고, 고성능 액체 크로마토그래피를 통해 정제하여 최종적으로 순도 85% 이상의 것을 사용하였다.
SP gel
조성물의 구성 함량
물질 P 5 ㎍/㎖
티오황산나트륨 0.1%
폴리소르베이트 80 0.006%
하이드록시에틸셀룰로오스 15%
실시예 2: 정상 마우스 및 당뇨가 유발된 마우스의 상처 치료 효과 비교
당뇨성 궤양과 같은 난치성 궤양의 경우, 자연적인 상처 치유 메커니즘이 제대로 작동하지 않아 정상 상처에 비해 상처 치유 정도가 확연히 느리다. 당뇨병에 걸리지 않은 정상적인 마우스에서의 피부 상처와 비교하여, 치료 효과가 더딘 당뇨성 궤양 모델이 올바르게 확립되었는지를 확인하는 스크리닝 실험을 진행하였다.
당뇨성 궤양을 유도하기 위해, 8주령의 C57BL/6 마우스 수컷(두열바이오텍)을 일주일 동안 적응시킨 후 STZ(streptozotocin) 250 mg/kg을 생리 식염수에 용해하고 1회 복강 투여를 실시하여 당뇨를 유발하였다. 금식 하지 않은 상태에서 350 mg/dl 이상으로 당뇨의 기준을 정하고, 당뇨가 유발된 마우스를 선별하고 이를 이용한 피부 상처 모델을 제조하였다. 동시에, STZ 투여 없이 정상 마우스를 이용한 피부 상처 모델도 제조하였다.
구체적으로, 케타민(ketamine)과 럼푼(rompun)의 혼합액을 마우스의 복강에 투여하여 마취시킨 다음, 전기 면도기 및 제모크림(Veet)을 사용하여 등 부분의 털을 제거하였다. 포비딘과 70% 에탄올을 사용하여 표피를 제거할 부분을 소독하고, 마우스의 척추를 피하여 아래쪽 둔부 부위의 양쪽에 5-mm 바이옵시 펀치를 이용하여 전층 상처를 가하였다. 상처 부위가 마우스의 표피 근육에 의해 저절로 오므라드는 것을 방지하기 위해 수술용 실을 이용하여 바깥지름 15-mm, 안지름 8-mm의 실리콘 링을 상처 주변으로 부착시킨 후, 상처 사진을 0일-17일 간 촬영하고 상처 크기 감소 정도를 정량화하였다.
도 1에서 볼 수 있듯이, 상처를 유발하고 10일이 경과한 시점에서, 정상 마우스에서는 상처 크기가 초기 대비 50%로 감소한 반면, 당뇨가 유발된 마우스에서는 상처 크기가 약 75%로 남아있음을 확인하였다. 나아가, 상처가 유발된 후 17일 째에, 정상 마우스와 당뇨가 유발된 마우스에서 상처 크기는 각각 약 5%, 약 60%인 것을 확인하였다.
이러한 결과를 통해, 난치성 궤양을 대표하는 모델로서 당뇨성 궤양이 유발된 마우스 모델을 확립하였으며, 이는 난치성 궤양이 아닌 단순 상처와는 확연히 다른 특성을 가진다는 것을 확인하였다.
실시예 3: 당뇨성 궤양 모델에서 SP gel의 상처 치료 효과
실시예 3-1. 당뇨성 궤양 모델에서 SP gel의 투여
물질 P와 SP gel의 난치성 궤양 치유 효과를 비교하기 위해, 당뇨 피부 상처 마우스 모델을 제조하였다. 양성 대조군으로는 당뇨성 궤양 치료에 상용화된 상처 치료제로서 이지에프 외용액(대웅제약) 및 인트라사이트 겔(스미스 앤 네퓨)을 사용하였다.
8주령 된 C57BL/6 마우스 수컷(두열바이오텍)을 일주일 동안 적응시킨 후, STZ 250 mg/kg을 생리 식염수에 용해하고 1회 복강 투여를 실시하여 당뇨를 유발하였다. 금식 하지 않은 상태에서 350 mg/dl 이상으로 당뇨의 기준을 정하고, 당뇨가 유발된 마우스 만을 선별하여 실험을 진행하였다.
케타민(ketamine)과 럼푼 (rompun)의 혼합액을 복강에 투여하여 마취시킨 다음, 전기 면도기 및 제모크림(Veet)을 사용하여 등 부분의 털을 제거하였다. 포비딘과 70% 에탄올을 사용하여 표피를 제거할 부분을 소독하고, 마우스의 척추를 피하여 아래쪽 둔부 부위의 양쪽에 5-mm 바이옵시 펀치를 이용하여 전층 상처를 가하였다. 상처 부위가 마우스의 표피 근육에 의해 저절로 오므라드는 것을 방지하기 위해 수술용 실을 이용하여 바깥지름 15-mm, 안지름 8-mm의 실리콘 링을 상처 주변으로 부착시켰다.
그 후, 상처 부위에 음성 대조군으로 인산 완충 용액(posphate buffered saline: PBS)을 투여하였고, 양성 대조군으로 이지에프 외용액 및 인트라사이트 겔을 투여하였으며, 실험군으로 5 g/ml 농도의 물질 P 및 5 g/ml 농도의 SP gel을 투여하였다. 양성 대조군, 물질 P 및 SP gel을 14일간 3~4일 간격으로 1회씩 전층 상처에 투여하였다.
실시예 3-2. 당뇨성 궤양 모델에서 SP gel의 상처 크기 감소 효과
상기 실시예 3-1과 같이 당뇨성 궤양 모델에 물질 P 및 SP gel을 투여한 후, 상처 크기의 감소 효과를 비교하였다.
구체적으로, 물질 P 및 SP gel의 투여 후 0일, 4일, 7일 및 14일에 각각 상처 사진을 찍고 이를 관찰하였다. 또한, 포토샵을 이용해 상처 면적의 크기를 정량화하여, 상처 감소 정도를 평가하였다.
상처의 크기를 육안으로 확인한 결과, 도 2(a) 및 (b)에 나타낸 바와 같이, 물질 P의 단독 투여에 비해 SP gel의 상처 크기 감소 효과가 뛰어남을 확인하였다. 구체적으로, SP gel 투여 후 7일이 경과한 시점에, 상처 크기는 물질 P 단독 처리에 비해 확연히 감소하였으며, 기존의 상용 제품인 이지에프 외용액 및 인트라사이트 겔에 비해서도 상처 감소 효과가 뛰어난 것을 확인하였다.
시간 경과에 따른 상처 크기를 정량화한 결과, 도 2(c) 및 (d)에 나타낸 바와 같이, 물질 투여 7일 후에, SP gel 투여군의 상처 크기는 약 40%에 불과한 반면, 물질 P 단독 처리군의 경우 약 80%의 상처가 남아있었으며, 이지에프 외용액 처리군은 약 70%, 인트라사이트 겔 처리군은 약 80%인 것을 확인하였다.
또한, 도 2(e)에서 알 수 있듯, 투여 14일 째, SP gel 투여군의 상처 크기는 20% 이하인 반면, 물질 P 단독 처리군의 경우 약 40%, 이지에프 외용액은 약 30%, 인트라사이트 겔은 약 70%로서, 모두 SP gel에 비하여 여전히 상처가 많이 남아있는 것을 확인하였다.
이와 같은 결과를 통해, SP gel이 물질 P 단독 처리에 비해 상처 크기 감소 효과가 약 2배 우수한 것을 확인하였으며, 나아가 SP gel은 종래 당뇨 상처 치료제로서 상용화된 이지에프 외용액 및 인트라사이트 겔과 비교하여도 더 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다.
실시예 3-3. 당뇨성 궤양 모델에서 SP gel의 상처 조직 길이 및 면적 감소 효과
상기 실시예 3-2와 같이 당뇨 피부 상처 마우스 모델에 SP gel을 투여한 뒤, 14일 후 조직을 생검하여 상처 조직 길이 및 상처 면적 감소 효과를 확인하였다. 구체적으로, 상처 부위의 피부조직을 생검하여 10% 포르말린에서 고정한 후, 헤마톡실린-에오신(hematoxylin and eosin: H&E) 염색을 실시하였다. 염색 후, 남아있는 상처 부위의 조직 길이 및 면적 감소 정도를 정량화하였다.
도 3(b) 및 (c)와 같이, 물질 P를 비롯한 대부분의 투여군에서 음성 대조군에 비해 상처 부위 조직의 길이 및 면적이 감소한 것을 확인하였다. 구체적으로, 투여 후 14일 째, 음성대조군의 상처 길이 및 면적이 각각 1.5 mm 및 45 mm2인 반면, 물질 P 단독 투여군에서는 각각 1.2 mm 및 40 mm2로 감소하였고, 이지에프 외용액 사용한 경우에는 각각 0.9 mm 및 30 mm2로 감소하였다. 인트라사이트 겔의 경우, 음성 대조군보다도 낮은 상처 치유 효과를 보였다.
그 중에서도 SP gel 투여시 가장 우수하였으며, 구체적으로, SP gel 투여시 상처 조직 길이 및 면적이 0.6 mm 및 20 mm2으로 감소하였다. 즉, 물질 P 단독 처리에 비해 2배 우수하고, 이지에프 외용액 처리에 비해 약 1.5배 정도 우수한 상처치유 효과를 보인 것이다.
실시예 3-4. 당뇨성 궤양 모델에서 SP gel의 상피 두께 감소 및 콜라겐 합성 촉진 효과
상기 실시예 3-3와 같이 당뇨 피부 상처 마우스 모델에 SP gel을 투여한 뒤, 14일 후 조직을 생검하여 상피 조직 두께 감소 및 콜라겐 합성 촉진 효과를 확인하였다. 일반적으로 치유가 완료된 조직은 정상 피부의 상피 조직처럼 얇은 상피 형태를 보이는 반면, 치유 중인 상처 조직은 정상 상피 조직보다 두꺼운 상피 형태를 보인다(Experimental & Molecular Medicine (2018) 50:68).
구체적으로, 상처 부위의 피부조직을 생검하여 고정한 후, 헤마톡실린-에오신 염색을 실시하여 상피 조직 두께 정도를 확인하였고, 나아가 생검된 피부 조직을 메이슨스 트라이크롬(Masson's Trichrome)으로 염색하여 콜라겐 합성 촉진 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 4(b)에 나타낸 바와 같이, 음성 대조군이 정상 피부 조직의 상피 조직 대비 약 300% 두꺼운 상피 조직 상태를 보였고, 인트라사이트 겔 처리군의 경우 상피 조직 자체가 제대로 형성되지 않은 초기 상처 단계를 보였다. 또한, 이지에프 외용액 및 물질 P 단독 처리시, 각각 약 220% 및 150%의 상피 조직 상태를 보였다.
반면, SP gel의 경우 정상 피부 조직과 유사한 약 100%의 상피 조직 두께를 보임으로써, 처리군 중 가장 뛰어난 상처 치유 효과를 보이는 것으로 나타났다. 또한, 도 4(a)에 나타낸 바와 같이, SP gel 투여 시 염색 정도가 물질 P 단독 처리 및 이지에프 외용액 처리군에 비해 강하게 나타나는 것을 통해, 콜라겐 증가 효과가 훨씬 우수함을 확인하였다.
따라서, SP gel은 물질 P 단독과 상용화 제품인 이지에프 외용액 및 인트라사이트 겔과 비교하여, 현저히 우수한 상처 치유 효과를 보임을 입증하는 것이다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (11)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 물질 P(substance P), 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항산화제는 티오황산나트륨(sodium thiosulfate)인, 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 계면 활성제는 폴리소르베이트 80(polysorbate 80)인, 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 점증제는 하이드록시에틸셀룰로오스(hydroxylethyl-cellulose)인, 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 난치성 궤양은 당뇨성 궤양, 압력성 궤양, 정맥성 궤양, 동맥성 궤양을 포함하는 것인, 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 합성을 촉진하는 것인, 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 액제, 현탁제, 에멀젼, 크림제, 하이드로겔제, 로션제, 연고제, 스프레이제, 패치제 또는 에어로졸제의 제형을 갖는 것인, 난치성 궤양 치료용 약학적 조성물.
  8. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 물질 P, 항산화제, 계면 활성제 및 점증제를 포함하는 난치성 궤양 치료용 의약외품 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 물질 P, 티오황산나트륨, 폴리소르베이트 80 및 하이드록시에틸셀룰로오스를 포함하는 것인, 난치성 궤양 치료용 의약외품 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 난치성 궤양은 당뇨성 궤양, 압력성 궤양, 정맥성 궤양, 동맥성 궤양을 포함하는 것인, 난치성 궤양 치료용 의약외품 조성물.
  11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 난치성 궤양의 치료 방법.
PCT/KR2018/013805 2018-10-19 2018-11-13 물질 p를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물 WO2020080589A1 (ko)

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