WO2020050406A1 - 新規環状ジヌクレオチド誘導体及びその抗体薬物コンジュゲート - Google Patents
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- A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
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- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
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- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
Definitions
- the present invention provides a cyclic dinucleotide derivative having a novel structure having STING agonist activity, an antibody drug conjugate obtained by binding the novel cyclic dinucleotide derivative to an antibody against a target cell via a linker, and the antibody drug conjugate.
- the present invention relates to a pharmaceutical composition and the like contained therein.
- STING Stimulator of Interferon Genes
- STING is a transmembrane adapter protein located in the endoplasmic reticulum (Non-Patent Document 1).
- STING functions as a central molecule of innate immunity activation in mammals and plays the forefront of defense against invasion of pathogens such as bacteria and viruses. It is known that activation of STING is triggered by signals when multiple cytoplasmic DNA sensors sense exogenous and endogenous DNA.
- cGAS Cyclic @ GMP-AMP @ Synthase
- Non-Patent Document 2 When cGAS senses DNA, a cyclic dinucleotide (2 ', 3'-cGAMP) is produced, and this 2', 3'-cGAMP directly binds to STING and activates STING (Non-Patent Document 2).
- the activated STING translocates to the Golgi apparatus where it promotes autophosphorylation of TBK1 (Tank-binding ⁇ kinase ⁇ 1).
- TBK-1 activated by autophosphorylation activates both the IRF3 (Interferon regulatory factor 3) transcription pathway (Non-patent document 3) and the NF ⁇ B transcription pathway (Non-patent document 4), and activates interferon and cytokines (type I).
- IFN Interferon
- IL-6 Interleukin-6
- TNF- ⁇ Tumor @ Necrosis @ Factor- ⁇
- STING promotes antitumor immunity as well as host defense against microorganisms.
- an immunogenic tumor is transplanted to a STING-deficient mouse
- the tumor is more rapidly generated than a wild-type mouse or a TRIF (Toll / Interleukin-1 (IL-1) receptor domain containing adapter-inducing interferon- ⁇ ) -deficient mouse.
- TRIF Toll / Interleukin-1 (IL-1) receptor domain containing adapter-inducing interferon- ⁇
- TLR Toll-like receptor
- MyD88 Myeloid differentiation primary response 88
- MAVS Mitochondrial antiviral-signaling protein
- Non-Patent Document 5 Non-Patent Document 5
- Other studies have also shown that STING is required for the anti-tumor effect of radiation therapy [6] or anti-CD47 antibody therapy [7].
- DNA from dead tumor cells migrates into the cytoplasm of dendritic cells to activate the cGAS-STING pathway and then induces IFN production to acquire innate immunity Bridging immunity.
- This study suggests that dendritic cell-mediated cross-priming activated by the STING pathway is important for triggering adaptive immunity against tumors.
- DMXAA a flavonoid-based low molecular weight compound known as a vascular disrupting agent
- DMXAA was shown to have potent antitumor activity in a mouse tumor model because it induces macrophage type I IFN (Non-Patent Document 8).
- DMXAA was expected as an immunotherapeutic agent for non-small cell lung cancer due to its excellent preclinical antitumor effect, but failed in human clinical trials (Non-Patent Document 9).
- Recent studies have shown that DMXAA is a specific agonist for mouse STING, and cannot bind because human STING has no species crossing properties (Non-Patent Document 10).
- DMXAA was consequently ineffective in humans, studies in mouse models suggest that small molecule drugs can mediate STING and effectively prime CD8 + T cells and enhance antitumor immunity Was.
- cyclic dinucleotide enhances STING-mediated antitumor immune response when administered to tumor-bearing mice, significantly inhibits tumor growth, and improves mouse survival (Non-Patent Document 11).
- the CDN is composed of a bacterial-derived CDN (cyclic-di-GMP, cyclic-di-AMP, 3 ′, 3′-cGAMP) having two 3′-5 ′ phosphate bonds, and a mammalian cGAS. It is classified as a mixed-binding CDN (2 ', 3'-cGAMP) having a non-standard 2'-5' phosphate bond produced. Recent studies have shown that mixed-binding CDNs can universally activate a variety of STINGs over standard CDNs [12].
- STING agonist MIW-815 as an anti-tumor agent
- the drug can be administered only to a limited area within the tumor, and it is difficult to administer the drug directly to all of a plurality of distant metastatic tumors. There is a problem of being limited.
- Non-Patent Document 13 describes that the antitumor effect was shown by administration of ML RR-S2 CDA, but only intratumoral administration, and the antitumor effect by systemic administration (eg, intravenous administration) was shown. It has not been.
- Non-Patent Document 14 describes that when a STING agonist SB11285 was intravenously administered to a mouse tumor model, an antitumor effect was shown. However, it is apparent that SB11285 has a specific structure. It has not been.
- Patent Document 14 describes a conjugate containing an immunostimulatory compound, an antibody construct, and a linker, but does not describe a specific example of a conjugate using a STING agonist as the immunostimulatory compound.
- Patent Document 26 describes a conjugate in which a CDN having a specific structure and an antibody are bound via a linker, but there is no description of an example in which the conjugate was administered in vivo, and the conjugate was not described. No antitumor effect has been confirmed.
- CDN derivatives having a novel skeleton and diseases associated with STING agonist activity using the novel CDN derivatives, For example, development of therapeutic agents and / or treatments for diseases (eg, cancer) that can be treated by immunostimulation has been desired.
- the novel CDN derivative capable of systemic administration and capable of specifically delivering a STING agonist to a target cell or organ (for example, a tumor site) and an antibody against a target cell are linked via a linker.
- Therapeutic agent and / or therapeutic method for a conjugated antibody drug conjugate and a disease associated with STING agonist activity using the antibody drug conjugate for example, a disease (eg, cancer) that can be treated by immunostimulation. Development is desired.
- the present inventors have found a novel CDN derivative characterized by having a fused tricyclic substituent, in order to solve the above-mentioned problems, and the novel CDN derivative has a strong STING agonist activity and a strong antitumor activity. It was found to show activity.
- the present inventors have also found an antibody drug conjugate in which the novel CDN derivative of the present invention and an antibody are bound via a linker, and when the antibody drug conjugate is systemically administered, anti-tumor activity is observed in tumors in which antigen is expressed. The present inventors have found that a tumor effect is exhibited, and completed the present invention.
- L is bonded to any —NH 2 or a hydroxy group contained in L 1 or L 2
- L 1 is at any position by 1 to 3 groups selected from the group consisting of a hydroxy group, —NH 2 , 2-hydroxyacetylaminomethyl group and 2-[(2-hydroxyacetyl) amino] ethyl group.
- R 6 and R 6 ′ each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 , a C1-C6 alkyl group, a C2-C6 alkenyl group or a C2-C6 alkynyl group;
- R 7 and R 7 ′ each independently represent a hydrogen atom or a C1-C6 alkyl group, wherein the C1-C6 alkyl group is one or two substituted groups selected from the group consisting of a halogen atom and an oxo group.
- R 8 and R 8 ′ each independently represent a hydrogen atom or a halogen atom
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- a group selected from the group consisting of L 2 is the following (i) or (ii): (I) When bonded to L, L 2 represents —NHR ′, a hydroxy C1-C6 alkyl group or an amino C1-C6 alkyl group, wherein R ′ is a hydrogen atom, a C1-C6 alkyl group, a C2 -C6 alkenyl group, C2-C6 alkynyl group or C3-C6 cycloalkyl group, wherein the C1-C6 alkyl group, C2-C6 alkenyl group or C2-C6 alkynyl group is substituted with 1 to 6 halogen atoms.
- L 2 represents a hydrogen atom or a halogen atom;
- Q 2 and Q 2 ′ each independently represent an oxygen atom or a sulfur atom,
- X 1 and X 2 each independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or —CH 2 —,
- Y 1 and Y 2 represent an oxygen atom or —CH 2 —,
- X 3 and X 4 are the following (iii) or (iv):
- W 1 represents a nitrogen atom, an oxygen atom, a sulfur atom or —CH—
- R 4 represents a hydrogen atom, a halogen atom or —NH 2
- R 5 represents the following (vii) to (x): (Vii) when W 1 is a nitrogen atom, R 5 represents a hydrogen atom, a C1-C6 alkyl group, a hydroxy C1-C6 alkyl group or an amino C1-C6 alkyl group; (Viii) when W 1 is an oxygen atom, R 5 is not present; (Ix) when W 1 is a sulfur atom, no R 5 is present; or (x) when W 1 is —CH—, R 5 is a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 or C 1 -C 6 Represents an alkyl group, Represents a group selected from Z 1 -
- R 9 and R 9 ′ represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group or —NH 2
- R 11 and R 11 ′ each independently represent a hydrogen atom, a fluorine atom or a methyl group, or R 11 and R 11 ′ bind to each other to represent cyclopropane
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- L 1 is a group selected from the group consisting of:
- R 13 and R 13 ′ each independently represent a hydrogen atom, a hydroxy group or —NH 2 ;
- Z 4 is as previously defined
- L 1 is a group selected from the group consisting of:
- R 14 represents a hydrogen atom or —NH 2
- R 16 represents a hydroxy group, —NH 2 , —CH 2 OH, —CH 2 CH 2 OH, —CH 2 NH 2 or —CH 2 CH 2 NH 2.
- L 1 is the following four formulas:
- L 1 is the following four formulas:
- Lp is any one of -GGFG-, -GGPI-, -GGVA-, -GGFM-, -GGVCit-, -GGGFit-, -GGICit-, -GGPL-, -GGAQ-, or -GGPP-
- Lb is-(succinimid-3-yl-N)-,
- succinimido-3-yl-N)- has the following structural formula:
- an asterisk indicates binding to La
- a wavy line indicates binding to a side chain of a cysteine residue of an antibody to form a thioether, and may be any one of [41] to [48].
- L 1 is at any position by 1 to 3 groups selected from the group consisting of a hydroxy group, —NH 2 , 2-hydroxyacetylaminomethyl group and 2-[(2-hydroxyacetyl) amino] ethyl group.
- R 6 and R 6 ′ each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 , a C1-C6 alkyl group, a C2-C6 alkenyl group or a C2-C6 alkynyl group;
- R 7 and R 7 ′ each independently represent a hydrogen atom or a C1-C6 alkyl group, wherein the C1-C6 alkyl group is one or two substituted groups selected from the group consisting of a halogen atom and an oxo group.
- R 8 and R 8 ′ each independently represent a hydrogen atom or a halogen atom
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- a group selected from the group consisting of L 3 represents a hydrogen atom, a halogen atom, —NH 2 , a hydroxy C1-C3 alkyl group or an amino C1-C3 alkyl group
- Q 1 and Q 1 ′ each independently represent a hydroxy group, a thiol group or a borano group (BH 3 ⁇ )
- Q 2 and Q 2 ′ each independently represent an oxygen atom or a sulfur atom
- X 1 and X 2 each independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or —CH 2 —
- Y 1 and Y 2 represent an oxygen atom or —CH 2 —
- X 3 and X 4 are the following (iii) or (iv): (I
- W 1 represents a nitrogen atom, an oxygen atom, a sulfur atom or —CH—
- R 4 represents a hydrogen atom, a halogen atom or —NH 2
- R 5 represents the following (vii) to (x): (Vii) when W 1 is a nitrogen atom, R 5 represents a hydrogen atom, a C1-C6 alkyl group, a hydroxy C1-C6 alkyl group or an amino C1-C6 alkyl group; (Viii) when W 1 is an oxygen atom, R 5 is not present; (Ix) when W 1 is a sulfur atom, no R 5 is present; or (x) when W 1 is —CH—, R 5 is a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 or C 1 -C 6 Represents an alkyl group, Represents a group selected from Z 1 -Z 2 -Z 3
- R 9 and R 9 ′ represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group or —NH 2
- R 11 and R 11 ′ each independently represent a hydrogen atom, a fluorine atom or a methyl group, or R 11 and R 11 ′ bind to each other to represent cyclopropane
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- L 1 is a group selected from the group consisting of:
- R 13 and R 13 ′ each independently represent a hydrogen atom, a hydroxy group or —NH 2 ;
- L 1 is a group selected from the group consisting of:
- R 14 represents a hydrogen atom or —NH 2
- R 16 represents a hydroxy group, —NH 2 , —CH 2 OH, —CH 2 CH 2 OH, —CH 2 NH 2 or —CH 2 CH 2 NH 2.
- L 3 represents a hydrogen atom, a fluorine atom, —NH 2 , —CH 2 OH or —CH 2 NH 2 , or a pharmacologically thereof.
- R 19 , R 19 ′ , R 20 and R 20 ′ each independently represent a hydrogen atom or a fluorine atom
- L 1 is selected from the group consisting of:
- [93] The compound according to any one of [93], [94], [96] or [97], or a pharmacologically acceptable salt thereof, wherein [101] containing the antibody drug conjugate of [1] to [61] and any one selected from the group consisting of the compound of [62] to [100] or a pharmaceutically acceptable salt thereof, A STING agonist; [102] containing any one selected from the group consisting of the antibody drug conjugate according to [1] to [61] and the compound or a pharmacologically acceptable salt thereof according to [62] to [100], A pharmaceutical composition; [103] containing any one selected from the group consisting of the antibody drug conjugate of [1] to [61] and the compound of [62] to [100] or a pharmaceutically acceptable salt thereof, Antitumor agent; [104]
- the tumor is lung cancer, kidney cancer, urothelial cancer, colon cancer, prostate cancer, glioblastoma multiforme, ovarian cancer, pancreatic cancer, breast cancer, melanoma
- Tumor agents [105] the antibody-drug conjugate of [1] to [61], the compound of [62] to [100] or a pharmacologically acceptable salt thereof, the STING agonist of [101], [102] And a method for treating cancer, which comprises administering the pharmaceutical composition according to any one of the above, and any one selected from the group consisting of the antitumor agent according to [103] or [104];
- Cancer is lung cancer, kidney cancer, urothelial cancer, colon cancer, prostate cancer, glioblastoma multiforme, ovarian cancer, pancreatic cancer, breast cancer, melanoma, liver cancer, Bladder cancer, gastric cancer, esophageal cancer, endometrial cancer, testicular cancer, cervical cancer, placental choriocarcinoma, glioblastoma multiforme, brain tumor, head and neck cancer, thyroid cancer, mesothelioma
- GIST gastrointestinal stromal tumor
- gallbladder cancer bile
- a novel CDN derivative is provided.
- the novel CDN derivatives of the present invention have strong STING agonist activity and show high antitumor activity.
- the present invention provides a novel antibody CDN derivative conjugate that can be administered systemically and has an antitumor effect on a tumor in which an antigen is expressed.
- the drug conjugate (molecule (II)) of the present invention which is a drug conjugate (molecule (II) in FIG. 1A) obtained from an SG-type sugar chain remodeling antibody, and an MSG-type sugar chain
- FIG. 3 schematically shows a drug conjugate (molecule (II) in FIG. 1B) obtained from a remodeling antibody.
- A) is a drug D
- (b) is a linker L
- (c) is a PEG linker (L (PEG)
- (d) is an N297 sugar chain (here, white circles are NeuAc (Sia), white hexagons).
- the square represents Man
- the black hexagon represents GlcNAc
- the white diamond represents Gal
- the white inverted triangle represents Fuc).
- the white pentagon represents a triazole ring formed by the reaction of an alkyne derived from the linker L and an azide group derived from the PEG linker.
- the Y-shape represents the antibody Ab.
- the PEG linker is linked via an amide bond to the carboxyl group at the 2-position of sialic acid located at the non-reducing end. ⁇
- Such a display method is applied throughout this specification unless otherwise specified.
- FIG. 3 is a schematic diagram showing the structure of an MSG-type sugar chain remodeling antibody (molecule (IV) in FIG. 2C).
- the Y-shape represents the antibody Ab as in FIG.
- FIG. 2A shows an N297 sugar chain consisting of a disaccharide having an ⁇ -glycosidic bond at position 1 of Fuc and position 6 of GlcNAc. 2B and 2C, (d) represents an N297 sugar chain similar to that of FIG. 1,
- (f) is a PEG linker having an azide group, and has an azide group provided for binding to the linker L at the terminal. Represent.
- the bonding mode of the PEG linker having an azide group is the same as the PEG linker of FIG.
- FIG. 3A shows a process in which the heterogeneous N297 sugar chain in (V) is treated with a hydrolase such as EndoS to produce a uniform (Fuc ⁇ 1,6) GlcNAc-antibody (III).
- FIG. 3B shows that GlcNAc of the N297 sugar chain of the antibody (III) is glycosylated with an SG-type sugar chain donor molecule using a glycosyltransferase such as an EndoS ⁇ D233Q / Q303L mutant to obtain (IV 2) shows the step of producing an SG-type sugar chain remodeling antibody.
- FIG. 3C shows a step in which an MSG-type sugar chain remodeling antibody (IV) is prepared by transglycosylating an MSG-type sugar chain donor molecule with respect to the antibody (III), as in FIG. 3B.
- the SG-type sugar chain donor molecule and the MSG-type sugar chain donor molecule used here are those in which the sialic acid at each non-reducing end is modified with a PEG linker having an azide group, and the SG-type N297 sugar chain produced is In the remodeling antibody and the MSG-type N297 sugar chain remodeling antibody, the sialic acid at the non-reducing end is similarly modified as shown in FIGS. 2B and 2C.
- 1 shows the amino acid sequence of the light chain of trastuzumab (SEQ ID NO: 1) and the amino acid sequence of the heavy chain (SEQ ID NO: 2).
- 2 shows the amino acid sequence of the light chain (SEQ ID NO: 1) and the heavy chain (SEQ ID NO: 3) of the modified anti-HER2 antibody.
- 3 shows the antitumor effect of intratumoral administration of a CDN derivative.
- the black square line indicates the vehicle group
- the white square line indicates the compound No. 6a administration group
- the white inverted triangle line indicates the compound No. 8b administration group
- the white circle line indicates the compound No. 9b administration group.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 )
- the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- a black square line represents a vehicle group
- a white triangle line represents an anti-HER2 antibody-CDN conjugate (1) administration group in which the compound of Example 8b was conjugated to the modified anti-HER2 antibody prepared in Reference Example 1
- black The triangular line indicates the group administered with the anti-LPS antibody-CDN conjugate (1) in which the compound of Example 8b was conjugated to the modified anti-LPS antibody prepared in Reference Example 2.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- a black square line indicates a vehicle group
- a white square line indicates an anti-HER2 antibody-CDN conjugate (2) administration group
- a white triangle line indicates an anti-HER2 antibody-CDN conjugate (3) administration group.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- the antitumor effect by intravenous administration of the anti-HER2 antibody-CDN conjugate (19) is shown.
- a black square line indicates a vehicle group
- a white triangle line indicates an anti-HER2 antibody-CDN conjugate (19) administration group.
- the anti-HER2 antibody-CDN conjugate (19) has a drug linker attached to the antibody by cysteine conjugation.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- the antitumor effect by intravenous administration of the anti-HER2 antibody-CDN conjugates (1) and (9) to (12) is shown.
- the black square line is the vehicle group
- the white triangle line is the group administered with the anti-HER2 antibody-CDN conjugate (9)
- the white inverted triangle line is the group administered with the anti-HER2 antibody-CDN conjugate (10)
- the white diamond is the anti-HER2 antibody-CDN conjugate.
- the HER2 antibody-CDN conjugate (11) administration group the open circle line indicates the anti-HER2 antibody-CDN conjugate (12) administration group, and the open square line indicates the anti-HER2 antibody-CDN conjugate (1) administration group.
- the compound of Example 8b was conjugated using different linkers.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- the antitumor effect by intravenous administration of anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (1), anti-HER2 antibody 2 and compound No. 8b is shown.
- the black square line is the vehicle group
- the white triangle line is the 60 ⁇ g administration group of the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (1)
- the black inverted triangle line is the 59 ⁇ g administration group of the anti-HER2 antibody 2
- the black circle is the compound number 8b. 2 shows a group administered with 1.2 ⁇ g.
- the dosage of the anti-HER2 antibody 2 and the compound No. 8b is the equivalent of each component constituting the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (1).
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- A Antitumor effect of intravenous administration of anti-HER2 antibody 2-CDN conjugates (2) and (3).
- the black square line indicates the vehicle group, and each white symbol line indicates the evaluated anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (2) to (8) administration group.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- the anti-tumor effect by intravenous administration of the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugates (9) and (10) is shown.
- the black square line indicates the vehicle group
- the white triangle line indicates the group administered with the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (9)
- the white circle line indicates the group administered with the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (10).
- the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugates (9) and (10) are antibody-CDN conjugates using an MSG-type sugar chain remodeling antibody having an average drug binding number of about 2.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation. 3 shows the antitumor effect of intravenous administration of an anti-EphA2 antibody and an anti-EphA2 antibody-CDN conjugate (1).
- the black square line indicates the vehicle group
- the white circle line indicates the anti-EphA2 antibody administration group
- the white triangle line indicates the anti-EphA2 antibody-CDN conjugate (1) administration group.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation. 3 shows the antitumor effect of intravenous administration of an anti-CD33 antibody and an anti-CD33 antibody-CDN conjugate (1).
- a black square line indicates a vehicle group
- an open circle line indicates an anti-CD33 antibody administration group
- an open triangle line indicates an anti-CD33 antibody-CDN conjugate (1) administration group.
- the vertical axis indicates the tumor volume (mm 3 ), and the horizontal axis indicates the number of days after tumor implantation.
- the amino acid sequence of the light chain of pertuzumab (SEQ ID NO: 28) and the amino acid sequence of the heavy chain (SEQ ID NO: 29) are shown.
- the amino acid sequence of the light chain (SEQ ID NO: 28) and the amino acid sequence of the heavy chain (SEQ ID NO: 30) of the modified anti-HER2 antibody 2 are shown.
- Fig. 3 shows the amino acid sequence of a light chain (SEQ ID NO: 31) and the amino acid sequence of a heavy chain (SEQ ID NO: 32) of an anti-CD33 antibody.
- FIG. 33 shows the amino acid sequence of the light chain (SEQ ID NO: 33) and the amino acid sequence of the heavy chain (SEQ ID NO: 34) of the anti-EphA2 antibody.
- FIG. 36 shows the amino acid sequence of the light chain (SEQ ID NO: 35) and the amino acid sequence of the heavy chain (SEQ ID NO: 36) of the anti-CDH6 antibody.
- the anti-tumor effect by intravenous administration of the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugates (11) and (12) is shown.
- the black square line indicates the vehicle group
- the white triangle line indicates the group administered with the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (11)
- the white circle line indicates the group administered with the anti-HER2 antibody 2-CDN conjugate (12).
- the present invention relates to a novel CDN derivative having STING agonist activity, its antibody drug conjugate, and use thereof.
- the novel CDN derivative of the present invention has STING agonist activity, activates immune cells, and induces the production of interferons and cytokines. Further, the novel CDN derivative of the present invention exerts an antitumor effect by activating the immune cells.
- the novel CDN derivative may be administered directly to the tissue of interest in which one wishes to activate immune function, or may be linked via any linker to an antibody that can recognize and bind to target cells (eg, tumor cells or immune cells). And may be administered systemically.
- STING Stimulator of Interferon Genes
- STING mutants include R232H mutation in which the 232nd amino acid is mutated from arginine (R) to histidine (H), 71st arginine (R) in histidine (H), and 230th glycine (G).
- R232H mutation in which the 232nd amino acid is mutated from arginine (R) to histidine (H), 71st arginine (R) in histidine (H), and 230th glycine (G).
- A alanine
- HAQ HAQ mutation in which the 293th arginine (R) is mutated to glutamine (Q).
- STING polymorphisms differ in the response strength such as the amount of cytokine production induced by STING agonist stimulation (Genes @ and ⁇ Immunity, 2011, 12, 263-269). Therefore, in order for a STING agonist to act stably in humans, it is desirable to have activity for each STING type.
- cancer ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
- tumor ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
- immunosuppressive activity refers to an activity of an immune cell involved in antitumor immunity such as monocytes, macrophages, dendritic cells, T cells, B cells, NK cells, and neutrophils. It refers to the production of cytokines and chemokines, increased expression of immune activation markers, decreased expression of immunosuppressive markers, changes in phosphorylation of intracellular signal transduction system, changes in gene expression, etc. Causes changes in cell structure or function. In addition, it also includes causing tumor cells to induce changes that induce antitumor immunity, such as production of cytokines and chemokines that activate or migrate immune cells, and induce hypersensitivity to immune cells.
- anti-tumor effect refers to inducing or reducing tumor regression by directly or indirectly affecting a tumor cell by a drug.
- a drug directly injures a tumor cell, the tumor cell activates antitumor immunity by stimulating the drug, and a drug delivered to the tumor cell is released outside the cell, etc.
- Activation of tumor immunity, etc. causes reduction and damage of the number of tumor cells, or causes tumor regression to be called an antitumor effect.
- cytotoxic activity refers to causing a pathological change in cells in some way, and is not limited to direct trauma, but also includes DNA cleavage, base dimer formation, and chromosomal formation. Causes damage to all cell structures and functions, such as cleavage, damage to cell division devices, and decreased activity of various enzymes.
- cells include cells in animal individuals and cultured cells.
- halogen atom means a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
- C1-C6 alkyl group means a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
- the “C1-C6 alkyl group” may have cyclopropane on the alkyl group as long as the total number of carbon atoms does not exceed 6.
- the “C1-C6 alkyl group” includes, for example, the following structures:
- C2-C6 alkenyl group means a linear or branched alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms.
- C2-C6 alkynyl group means a straight-chain or branched-chain alkynyl group having 2 to 6 carbon atoms.
- C3-C6 cycloalkyl group means a saturated cyclic hydrocarbon group having 3 to 6 carbon atoms.
- the “C3-C6 cycloalkyl group” may be substituted with a plurality of alkyl groups as long as the total number of carbon atoms does not exceed 6.
- the “C3-C6 cycloalkyl group” includes, for example, the following structures:
- hydroxy C1-C6 alkyl group refers to an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in which a linear or branched alkyl group is substituted with one or two hydroxy groups at any position. means.
- the “hydroxy C1-C6 alkyl group” may have cyclopropane on the alkyl group as long as the total number of carbon atoms does not exceed 6.
- the “hydroxy C1-C6 alkyl group” includes, for example, the following structures:
- amino C1-C6 alkyl group means an alkyl group in which one or two amino groups are substituted at any position of a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. I do.
- the “amino C1-C6 alkyl group” may have cyclopropane on the alkyl group as long as the total carbon number does not exceed 6.
- the “amino C1-C6 alkyl group” includes, for example, the following structures:
- the novel CDN derivative of the present invention has the following formula (Ia):
- L 1 is at any position by 1 to 3 groups selected from the group consisting of a hydroxy group, —NH 2 , 2-hydroxyacetylaminomethyl group and 2-[(2-hydroxyacetyl) amino] ethyl group.
- R 6 and R 6 ′ each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 , a C1-C6 alkyl group, a C2-C6 alkenyl group or a C2-C6 alkynyl group;
- R 7 and R 7 ′ each independently represent a hydrogen atom or a C1-C6 alkyl group, wherein the C1-C6 alkyl group is one or two substituted groups selected from the group consisting of a halogen atom and an oxo group.
- R 8 and R 8 ′ each independently represent a hydrogen atom or a halogen atom
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- L 1 is an arbitrary group represented by 1 to 3 groups selected from the group consisting of a hydroxy group, —NH 2 , 2-hydroxyacetylaminomethyl group and 2-[(2-hydroxyacetyl) amino] ethyl group.
- R 6 and R 6 ′ each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 , a C1-C6 alkyl group, a C2-C6 alkenyl group or a C2-C6 alkynyl group;
- R 7 and R 7 ′ each independently represent a hydrogen atom or a C1-C6 alkyl group, wherein the C1-C6 alkyl group is one or two substituted groups selected from the group consisting of a halogen atom and an oxo group.
- R 8 and R 8 ′ each independently represent a hydrogen atom or a halogen atom
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- L 1 is preferably a group selected from the group consisting of:
- R 9 and R 9 ′ represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group or —NH 2
- R 11 and R 11 ′ each independently represent a hydrogen atom, a fluorine atom or a methyl group, or R 11 and R 11 ′ bind to each other to represent cyclopropane
- Z 4 represents —CH 2 —, —NH— or an oxygen atom
- L 1 is preferably a group selected from the group consisting of:
- R 13 and R 13 ′ each independently represent a hydrogen atom, a hydroxy group or —NH 2 ;
- L 1 is preferably a group selected from the group consisting of:
- R 14 represents a hydrogen atom or —NH 2
- R 16 represents a hydroxy group, —NH 2 , —CH 2 OH, —CH 2 CH 2 OH, —CH 2 NH 2 or —CH 2 CH 2 NH 2. It is.
- L 1 is more preferably a group selected from the group consisting of:
- L 3 is selected from a hydrogen atom, a halogen atom, —NH 2 , a hydroxy C1-C3 alkyl group or an amino C1-C3 alkyl group.
- Q 1 and Q 1 ′ each independently represent a hydroxy group, a thiol group or a borano group (BH 3 ⁇ ).
- Q 1 is preferably a hydroxy group or a thiol group.
- Q 1 ′ is preferably a hydroxy group or a thiol group. More preferably, Q 1 and Q 1 'combinations are, Q 1 and Q 1' or is a thiol group, or a, Q 1 and Q 1 'is a hydroxy group.
- Q 2 and Q 2 ′ each independently represent an oxygen atom or a sulfur atom.
- Q 2 and Q 2 ′ are both oxygen atoms or both are sulfur atoms.
- Q 1 and Q 2 are preferably such that Q 1 is a thiol group and Q 2 is an oxygen atom, or that Q 1 is a thiol group and Q 2 is a sulfur atom.
- Q 1 ' and Q 2' is preferably such that Q 1 ' is a thiol group and Q 2' is an oxygen atom, or Q 1 ' is a hydroxy group and Q 2' is an oxygen atom Alternatively, Q 1 ′ is a thiol group and Q 2 ′ is a sulfur atom.
- X 1 and X 2 each independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or —CH 2 —.
- X 1 is preferably an oxygen atom.
- X 2 is preferably an oxygen atom. More preferably, X 1 and X 2 are oxygen atoms.
- Y 1 and Y 2 represent an oxygen atom or —CH 2 —.
- Y 1 is preferably an oxygen atom.
- Y 2 is preferably an oxygen atom. More preferably, Y 1 and Y 2 are oxygen atoms.
- X 3 and X 4 are the following (iii) or (iv): (Iii) when Y 1 is an oxygen atom, X 3 -X 4 is, -CH 2 -O -, - CH 2 -S -, - CH 2 -CH 2 - or -CH 2 -CF 2 - shows a; Or (iv) when Y 1 is —CH 2 —, X 3 —X 4 represents —O—CH 2 —; Represents a group selected from X 3 and X 4 are preferably —CH 2 —O— of the above (iii).
- X 5 and X 6 are the following (v) or (vi): (V) when Y 2 is an oxygen atom, X 5 -X 6 is, -CH 2 -O -, - CH 2 -S -, - CH 2 -CH 2 - or -CH 2 -CF 2 - shows a; Or (vi) when Y 2 is —CH 2 —, X 5 —X 6 represents —O—CH 2 —; Represents a group selected from X 5 and X 6 are preferably —CH 2 —O— of the above (v).
- the group, C2-C6 alkenyl group or C2-C6 alkynyl group may be substituted by 1 to 6 halogen atoms
- R '' is a C1-C6 alkyl group, a C2-C6 alkenyl group, a C2-C6 alkynyl Or a C3-C6 cycloalkyl group).
- R 1 is preferably a hydrogen atom, a hydroxy group or a fluorine atom.
- R 2 is preferably a hydrogen atom, a hydroxy group or a fluorine atom.
- R 3 is preferably a hydrogen atom, a hydroxy group or a fluorine atom.
- W 1 represents a nitrogen atom, an oxygen atom, a sulfur atom or —CH—.
- R 5 represents the following (vii) to (x): (Vii) when W 1 is a nitrogen atom, R 5 represents a hydrogen atom, a C1-C6 alkyl group, a hydroxy C1-C6 alkyl group or an amino C1-C6 alkyl group; (Viii) when W 1 is an oxygen atom, R 5 is not present; (Ix) when W 1 is a sulfur atom, no R 5 is present; or (x) when W 1 is —CH—, R 5 is a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, —NH 2 or C 1 -C 6 Represents an alkyl group, Represents a group selected from When W 1 is a nitrogen atom, R 5 is preferably a hydrogen atom. When W 1 is —CH—, R 5 is preferably a hydrogen atom.
- R 4 represents a hydrogen atom, a halogen atom or —NH 2 .
- R 4 is preferably a hydrogen atom.
- novel CDN derivative of the present invention preferably has the following formula:
- L 1 is as previously defined.
- Q 3 and Q 3 ′ each independently represent a hydroxy group or a thiol group.
- Q 3 and Q 3 ′ are both thiol groups.
- R 21 and R 22 each independently represent a hydroxy group or a fluorine atom.
- R 21 is preferably a hydroxy group.
- R 22 is preferably a fluorine atom.
- W 5 represents —NH— or a sulfur atom.
- novel CDN derivatives of the present invention may be administered directly to the tissue of interest (eg, intratumorally), or any linker to an antibody that can recognize and bind to target cells (eg, tumor cells or immune cells). May be administered as an antibody drug conjugate linked via
- the antibody drug conjugate of the present invention has the following formula (II):
- m 1 indicates the number of drug bonds per antibody molecule in the antibody drug conjugate
- Ab indicates an antibody or a functional fragment of the antibody
- L indicates a linker connecting Ab and D
- D indicates the above.
- a novel CDN derivative (herein when the novel CDN derivative is used as part of an antibody drug conjugate, is also simply referred to as “drug”).
- Drug D is a compound having an activity of activating immune cells, specifically, a STING agonist activity.
- a target cell for example, a tumor cell or an immune cell
- the drug D is released in its original structure and exerts an immunostimulatory effect.
- the target function is exerted by increasing the sensitivity of the target cell to the immune cell or activating the immune cell through the target cell.
- the target function is not particularly limited as long as it is a function related to the STING agonist activity, but is preferably an antitumor activity.
- the drug D linked to an antibody targeting a tumor eg, an anti-HER2 antibody
- an arbitrary linker is delivered to a target cell or tissue, and a part or all of the linker is cleaved
- the immune cell Exerts an antitumor effect through enhancement of the sensitivity of target cells to or activation of immune cells via target cells (for example, production of interferons and cytokines).
- the drug D bound to the antibody drug conjugate of the present invention has the following formula (I):
- L 2 is the following (i) or (ii): (I) When bonded to L, L 2 represents -NHR ', a hydroxy C1-C6 alkyl group or an amino C1-C6 alkyl group, wherein R' is a hydrogen atom, a C1-C6 alkyl group, a C2 —C6 alkenyl group, C2-C6 alkynyl group or C3-C6 cycloalkyl group, wherein the C1-C6 alkyl group, C2-C6 alkenyl group or C2-C6 alkynyl group is substituted with 1 to 6 halogen atoms.
- L 2 when not bonded to L, L 2 represents a hydrogen atom or a halogen atom; Represents a group selected from Q 1 , Q 1 ′ , Q 2 , Q 2 ′ , X 1 , X 2 , X 3 , X 4 , X 5 , X 6 , Y 1 , Y 2 , R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , W 1 , W 2 , Z 1 , Z 2 and Z 3 are as defined above for ⁇ 1.
- Novel CDN derivative >.
- L 2 When L 2 is bonded to L, it is preferably —NH 2 , —CH 2 NH 2 or —CH 2 OH. When L 2 is not bonded to L, L 2 is preferably a hydrogen atom or a fluorine atom.
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention is preferably the following two formulas:
- R 17 , R 17 ′ , R 18 and R 18 ′ each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group or —NH 2 ;
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following two formulas:
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following formula (8):
- R 19 , R 19 ′ , R 20 and R 20 ′ each independently represent a hydrogen atom or a fluorine atom
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following four formulas:
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following four formulas:
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following four formulas:
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following formula:
- L 1 is preferably:
- L 1 is preferably represented by the following 4 formula:
- the drug D used in the novel CDN derivative of the present invention or the antibody drug conjugate of the present invention preferably has the following four formulas:
- the linker structure for binding a drug to an antibody in the antibody drug conjugate of the present invention will be described.
- the linker used in the antibody drug conjugate of the present invention is not particularly limited as long as it is understood by those skilled in the art as a linker connecting the antibody and the drug.
- Examples of the linker used in the antibody drug conjugate of the present invention include, for example, Protein Cell, 2018, 9 (1): 33-46, Pharm Res, 2015, 32: 3526-3540, or Int. J. Mol. Sci. , 2016, 17, 561, but are not limited thereto.
- the linker may be a linker that is cleaved in vivo or a linker that is not cleaved in vivo, but is preferably a linker that is cleaved in vivo.
- linker used in the antibody drug conjugate of the present invention for example, a drug is bound to a sugar chain of the Fc portion of the antibody or a remodeled sugar chain (in the present specification, "sugar chain conjugation"
- a linker for example, described in WO2018 / 003983
- a linker that binds a drug to any amino acid residue for example, a cysteine or lysine residue
- any amino acid residue for example, a cysteine or lysine residue
- the linker that binds the drug to any amino acid residue of the antibody is preferably a thioether bond with the sulfhydryl group (SH group) of cysteine of Ab (this may be referred to as “cysteine conjugation” in this specification).
- SH group sulfhydryl group
- cysteine conjugation a case where the amide bond is formed with the amino group (NH 2 group) of the lysine of Ab (this may be referred to as “lysine conjugation” in this specification) is preferable, and cysteine conjugation is preferable.
- a preferred linker L of the present invention is represented by the following formula. -Lb-La-Lp-Lc- * (Where asterisk indicates that attached to any amino group or hydroxy group contained in L 1 or L 2 of the drug D.) Represented by.
- Lp represents a linker consisting of an amino acid sequence that can be cleaved in vivo or in a target cell (hereinafter, also referred to as a peptide linker in the present specification) or does not exist.
- Lp is cleaved by the action of enzymes such as peptidase and esterase.
- Lp is a peptide composed of 2 to 7 (preferably 2 to 4) amino acids.
- Lp forms an amide bond at the N-terminus with the carbonyl group at the right end of La described later, and forms an amide bond at the C-terminus with the amino group (—NH—) of Lc.
- the amide bond at the C-terminal side of Lp is cleaved by the enzyme such as the peptidase.
- the amino acid constituting Lp is not particularly limited, but is, for example, an L- or D-amino acid, preferably an L-amino acid.
- amino acids having structures such as ⁇ -alanine, ⁇ -aminocaproic acid, and ⁇ -aminobutyric acid may be used.
- non-natural amino acids such as N-methylated amino acids may be used. It may be an amino acid.
- the amino acid sequence of Lp is not particularly limited, but glycine (Gly; G), valine (Val; V), alanine (Ala; A), phenylalanine (Phe; F), and glutamic acid (Glu; E) are constituent amino acids.
- Isoleucine Ile; I
- proline Pro; P
- citrulline Cit
- leucine Leu; L
- methionine Metal; M
- serine S
- lysine L
- aspartic acid Asp; D
- glycine Gly; G
- valine Val; V
- alanine Al
- phenylalanine Phe: F
- citrulline Cit
- amino acids may overlap and have an amino acid sequence that includes arbitrarily selected amino acids. The pattern of drug release can be controlled by the type of amino acid.
- Lp include, for example, -GGVA-, -VA-, -GGFG-, -FG-, -GGPI-, -PI-, -GGVCit-, -VCit-, -GGVK-, -VK-,- GGCit-, -FCit-, -GGFM-, -FM-, -GGLM-, -LM-, -GGICit-, -ICit-.
- the linker Lp is preferably -GGVA-, -VA-, -GGFG-, -FG-, -GGVCit-, -VCit-, -GGFCit-, -FCit-.
- the linker Lp is more preferably -GGVA-, -GGFG, -GGVCit-. Further, the linker Lp is preferably -GGFG- or -GGPI-.
- Lb is a spacer used in a sugar chain conjugation linker (also referred to herein as a “sugar chain conjugation linker spacer”) or a spacer used in cysteine conjugation (in the present specification, "Cysteine conjugation linker spacer”).
- Lb is “sugar chain conjugation linker spacer”>
- Lb is not particularly limited, and examples thereof include a spacer represented by the following formula.
- the triazole ring moiety has a geometric isomer structure, and one of Lb has one of two types of structures. Or a mixture thereof.
- the antibody drug conjugate of the present invention can bind a plurality of drugs to one antibody molecule. When a plurality of drugs are bound to one molecule of the antibody, a plurality of Lb will be present (for example, see the schematic diagram (1e) of the antibody drug conjugate shown in Method E of ⁇ 3. thing).
- Lb is selected from any of Lb-1, Lb-2 or Lb-3, if the Lb presence of a plurality of relative antibody molecule (e.g., the case of m 2 is 1 or 2 to be described later), each of Lb ,
- the triazole ring moiety has a geometric isomer structure, and one of Lb contains either one of the two structures or a mixture thereof.
- Lb is “linker spacer of cysteine conjugation”>
- Lb is not particularly limited, and examples include-(succinimid-3-yl-N)-.
- “-(succinimido-3-yl-N)-” has the following formula:
- the phenyl group is preferably a 1,4-phenyl group
- the heteroaryl group is preferably a 2,5-pyridyl group, a 3,6-pyridyl group, a 2,5-pyrimidyl group or a 2,5-pyridyl group.
- Lc is preferably -NH-CH 2 -or absent.
- the term "gene” refers to a nucleotide or nucleotide sequence containing a nucleotide sequence encoding an amino acid of a protein, or a complementary chain thereof, for example, a nucleotide sequence containing a nucleotide sequence encoding an amino acid of a protein
- polynucleotides, oligonucleotides, DNAs, mRNAs, cDNAs, RNAs, and the like, which are complementary chains thereof, are included in the meaning of "gene”.
- nucleotide “polynucleotide” or “nucleotide sequence” and “nucleic acid” are synonymous.
- DNA, RNA, probe, oligonucleotide, polynucleotide, primer and the like are also referred to as “nucleotide” or “nucleotide”. It is included in the meaning of "array”.
- polypeptide peptide
- protein protein
- the “functional fragment of an antibody” is also referred to as an “antigen-binding fragment of an antibody”, and refers to a partial fragment of an antibody having an antigen-binding activity, and includes Fab, F (ab ′) 2, including Fv, scFv, diabody, linear antibodies, multispecific antibodies formed from antibody fragments, and the like.
- Fab ' which is a monovalent fragment of the variable region of an antibody obtained by treating F (ab') 2 under reducing conditions is also included in the antigen-binding fragment of the antibody.
- these antigen-binding fragments include not only those obtained by treating the full-length molecule of an antibody protein with an appropriate enzyme, but also those produced in an appropriate host cell using an antibody gene modified by genetic engineering. It is.
- the functional fragment of the present invention retains asparagine (Asn297) which is modified by an N-linked sugar chain which is well conserved in the Fc region of an IgG heavy chain and its surrounding amino acids, and has an antigen-binding ability. Functional fragments.
- the antibody used in the antibody-drug conjugate of the present invention means an immunoglobulin, and is a molecule containing an antigen-binding site that immunospecifically binds to an antigen.
- the antibody of the present invention may be any of IgG, IgE, IgM, IgD, IgA and IgY, but IgG is preferred.
- IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2 may be used, but IgG1, IgG2 or IgG4 is preferable (an antibody having a mutation in the Fc region of an IgG heavy chain that affects ADCC and ADCP activity). including).
- the effector function can be adjusted by substituting a part of the amino acid residues in the constant region (WO88 / 07089, WO94 / 28027, WO94 / 29351). reference).
- Examples of the IgG1 mutant include an IgG1ILALA mutation (IgG1-L234A, L235A).
- the above-mentioned L234A and L235A are EU index (Proceedings of the National Academy of Sciences of the the United States of America, Vol. 4 shows substitution of leucine at position 1 with alanine.
- the antibody may be derived from any species, but preferably includes human, rat, mouse and rabbit. When it is derived from a species other than human, it is preferable to use a well-known technique to perform chimerization or humanization.
- the antibody of the present invention may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody, but a monoclonal antibody is preferred.
- the monoclonal antibody includes a monoclonal antibody derived from a non-human animal such as a rat antibody, a mouse antibody, and a rabbit antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, a human antibody, a functional fragment thereof, or a modified form thereof.
- the antibody is preferably, but not limited to, an antibody targeting a tumor cell or an immune cell.
- the antibodies are more preferably antibodies that target tumor cells.
- the antibody When an antibody that targets tumor cells is used, the antibody may have the property of recognizing tumor cells, the property of binding to tumor cells, the property of being taken up and internalized by tumor cells, and even damaging tumor cells. Preferably, it has one or more characteristics.
- a drug bound to the antibody of the present invention via a linker has STING agonist activity.
- the drug of the present invention activates a signal of interferon regulatory factor 3 (IRF3) to induce interferon. Therefore, when an antibody targeting a tumor cell is used in the antibody drug conjugate of the present invention, the antibody drug conjugate is administered to the body, then delivered to the tumor site, and then taken up by the peptidase.
- the linker moiety is cleaved to release the drug moiety. It is considered that the released drug moiety activates antitumor immunity through STING agonist activity and exerts an antitumor effect.
- the binding of the antibody to the tumor cells can be confirmed using flow cytometry.
- the incorporation of the antibody into the tumor cells can be performed by (1) an assay in which the antibody incorporated into the cells is visualized with a fluorescent microscope using a secondary antibody (fluorescent label) that binds to the therapeutic antibody (Cell Death and Differentiation (2008)). 15,751-761), (2) Assay for measuring the amount of fluorescence taken into cells using a secondary antibody (fluorescent label) that binds to the therapeutic antibody (Molecular Biology of the Cell, Vol. 15, 5268-5282).
- Mab-ZAP assay (Bio ⁇ Techniques ⁇ 28: 162-165, using immunotoxin that binds to a therapeutic antibody to release toxins and suppress cell proliferation when taken up into cells) January 000) can be confirmed using.
- the immunotoxin a recombinant complex protein of the catalytic region of diphtheria toxin and protein G can be used.
- “high internalization ability” refers to the survival rate of target antigen-expressing cells (for example, HER2-expressing cells when an anti-HER2 antibody is used) to which the antibody and a saporin-labeled anti-mouse or rat IgG antibody are added. (Represented by a relative ratio with the cell viability without antibody addition being 100%) is preferably 70% or less, more preferably 60% or less.
- an antibody targeting tumor cells is used for the antibody drug conjugate of the present invention
- the antibodies used in the antibody drug conjugates of the present invention preferably have the property of internalization that migrates into tumor cells.
- the antitumor activity of a drug or an antibody-drug conjugate refers to cytotoxic activity on tumor cells, anticellular effect, and reduction of tumor volume.
- the antitumor activity can be confirmed using a known in-vitro or in-vivo evaluation system.
- the immunostimulatory activity of a drug or an antibody-drug conjugate refers to enhancement of sensitivity of tumor cells to immune cells or activation of immune cells through tumor cells.
- the immunostimulatory activity can be confirmed using a known in-vitro or in-vivo evaluation system.
- Antibodies used in the present invention include, for example, anti-HER2 antibody, anti-HER3 antibody, anti-DLL3 antibody, anti-FAP antibody, anti-CDH11 antibody, anti-CDH6 antibody, anti-A33 antibody, anti-CanAg antibody, anti-CD19 antibody, anti-CD20 Antibody, anti-CD22 antibody, anti-CD30 antibody, anti-CD33 antibody, anti-CD56 antibody, anti-CD70 antibody, anti-CD98 antibody, anti-TROP2 antibody, anti-CEA antibody, anti-Cripto antibody, anti-EphA2 antibody, anti-G250 antibody, anti-MUC1 antibody, Anti-GPNMB antibody, anti-Integrin antibody, anti-PSMA antibody, anti-Tenascin-C antibody, anti-SLC44A4 antibody, anti-Mesothelin antibody, anti-ENPP3 antibody, anti-CD47 antibody, anti-EGFR antibody, anti-GPR20 antibody or anti-DR5 antibody, It is not limited to these.
- the antibody of the present invention is preferably an anti-HER2 antibody (for example, trastuzumab or pertuzumab), an anti-CDH6 antibody, an anti-CD33 antibody or an anti-EphA2 antibody, and more preferably an anti-HER2 antibody.
- an anti-HER2 antibody for example, trastuzumab or pertuzumab
- an anti-CDH6 antibody for example, trastuzumab or pertuzumab
- an anti-CD33 antibody for example, an anti-CD33 antibody or an anti-EphA2 antibody
- an anti-HER2 antibody for example, trastuzumab or pertuzumab
- the antibody of the present invention can be obtained by immunizing an animal with a polypeptide serving as an antigen, collecting and purifying an antibody produced in a living body, using a method usually used in this field.
- the origin of the antigen is not limited to humans, and animals can be immunized with antigens derived from non-human animals such as mice and rats.
- antibodies that can be applied to human diseases can be selected by testing the cross-reactivity between the obtained antibody that binds to the heterologous antigen and the human antigen.
- a hybridoma can be established by fusing an antibody-producing cell producing an antibody against an antigen with a myeloma cell to obtain a monoclonal antibody.
- the antigen can be obtained by causing a host cell to produce a gene encoding an antigen protein by genetic manipulation.
- the humanized antibody of the present invention can be prepared by known methods (for example, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 6851-6855, (1984), Nature (1986) 321, p. 522-525, (WO90 / 07861).
- anti-HER2 antibody US5821337, WO2004 / 008099, etc.
- anti-CD33 antibody WO2014 / 057687, etc.
- anti-CD70 antibody WO2004 / 073656, etc.
- anti-EphA2 antibody WO2009 / 028639, etc.
- anti-CDH6 antibody WO2018 / 212136
- the anti-HER2 antibody of the present invention is not particularly limited, but preferably has, for example, the following properties.
- (B) has an activity of being internalized in HER2-expressing cells by binding to HER2; (2) The antibody according to (1), which binds to an extracellular domain of HER2. (3) The antibody according to the above (1) or (2), wherein the antibody is a monoclonal antibody. (4) The antibody according to any one of the above (1) to (3), which has an antibody-dependent cytotoxicity (ADCC) activity and / or a complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity. (5) The antibody according to any of (1) to (4) above, which is a mouse monoclonal antibody, a chimeric monoclonal antibody or a humanized monoclonal antibody.
- ADCC antibody-dependent cytotoxicity
- CDC complement-dependent cytotoxicity
- the heavy chain constant region is a heavy chain constant region of human IgG1 and contains a mutation that causes a reduction in ADCC and ADCP activity.
- any of the above (1) to (4), which is a humanized monoclonal antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 The described antibody.
- the antibody according to the above (8) which is a humanized monoclonal antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
- the antibody according to any of the above (1) to (4) which is a humanized monoclonal antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 .
- (11) The antibody according to any of (1) to (4), which is a humanized monoclonal antibody comprising a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 .
- the heterogeneous sugar chains added to the protein are first excised using a hydrolase, leaving only the terminal GlcNAc, to prepare a uniform protein portion with GlcNAc added. (Hereinafter, “acceptor”).
- acceptor an arbitrary sugar chain prepared separately is prepared (hereinafter, referred to as “donor”), and the acceptor and the donor are linked using a glycosyltransferase. Thereby, a uniform glycoprotein having an arbitrary sugar chain structure can be synthesized.
- “sugar chain” means a structural unit in which two or more monosaccharides are linked by glycosidic bonds.
- Specific monosaccharides and sugar chains may be referred to as abbreviations such as "GlcNAc-" and "SG-”.
- abbreviations such as "GlcNAc-" and "SG-”.
- the oxygen atom or nitrogen atom belonging to the glycosidic bond with another structural unit at the reducing end is, unless otherwise specified, an abbreviation representing the sugar chain. Appears as not included.
- a monosaccharide that is a basic unit of a sugar chain is attached to an oxygen atom constituting a ring in a ring structure thereof and is assigned to a hydroxy group (or a glycosidic bond) for convenience unless otherwise specified.
- the carbon atom directly bonded to the oxygen atom is represented as the 1-position (2 position only in sialic acid).
- the names of the example compounds are given as the whole chemical structure, and this rule is not always applied.
- the antibody drug conjugate of the present invention has the following formula
- the antibody Ab or a functional fragment thereof binds directly to L from the side chain of its amino acid residue (eg, cysteine, lysine, etc.), or binds to the L from the sugar chain of the Ab or the remodeled sugar chain.
- amino acid residue eg, cysteine, lysine, etc.
- the sugar chain of Ab in the present invention is an N-linked sugar chain or an O-linked sugar chain, and is preferably an N-linked sugar chain.
- N-linked sugar chains are linked to amino acid side chains of antibodies by N-glycosidic bonds and O-linked sugar chains by O-glycosidic bonds.
- the Ab of the present invention is an IgG, preferably an IgG1, IgG2 or IgG4.
- IgG has an N-linked sugar chain that is well conserved at the 297th asparagine residue (hereinafter, referred to as “Asn297 or N297”) in the Fc region of its heavy chain, and has an effect on the activity and dynamics of the antibody molecule. It is known to contribute (Eon-Duval, A. et al, Biotechnol. Prog. 2012, 28, 608-622, Sanglier-Cianferani, S., Anal. Chem. 2013, 85, 715-736).
- the amino acid sequence in the constant region of IgG is well conserved. According to a report by Edelman et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 63, 78-85, (1969)), It is specified by the EU number (EU @ INDEX). For example, Asn297 to which an N-linked sugar chain is added in the Fc region corresponds to position 297 in the EU number, and even when the actual amino acid position is changed due to fragmentation of the molecule or deletion of the region, the EU number The amino acid is uniquely identified by displaying with.
- the lower figure shows the case where the antibody drug conjugate of the present invention binds to L from the aforementioned N297 sugar chain of an antibody or a functional fragment thereof.
- the antibody having the remodeled sugar chain is called a sugar chain remodeling antibody.
- SGP ( ⁇ 2,6-SGP) is an abbreviation for Silylglycopeptide, and is a typical N-linked glycopeptide.
- SGP can be isolated and purified from egg yolk of chicken eggs, for example, according to the method described in WO2011 / 027868.
- purified SGP products are sold by Tokyo Chemical Industry and Fushimi Pharmaceutical.
- the sugar chain portion of SGP is described as SG, and the sugar chain lacking one GlcNAc at the reducing end of SG is described as SG (10).
- SG (10) can be prepared, for example, by enzymatic hydrolysis of SGP with reference to the report of Umekawa et al. (Biochim. Biophys. Acta @ 2010, 1800, 1203-1209).
- SG (10) can also be purchased from Tokyo Chemical Industry and Fushimi Pharmaceutical.
- the sugar chain structure in which the sialic acid at the non-reducing end is deleted in only one of the ⁇ -Man branched chains of SG (10) is referred to as MSG (9), and the branched chain 1-3 Those having sialic acid only in the sugar chain are referred to as MSG1, and those having sialic acid only in the branched 1-6 sugar chain are referred to as MSG2.
- the remodeled sugar chain of the present invention is N297- (Fuc) SG, N297- (Fuc) MSG1, N297- (Fuc) MSG2, or a mixture of N297- (Fuc) MSG1 and N297- (Fuc) MSG2.
- N297- (Fuc) SG, N297- (Fuc) MSG1 or N297- (Fuc) MSG2 more preferably N297- (Fuc) SG or N297- (Fuc) MSG1.
- N297- (Fuc) SG is represented by the following structural formula or sequence formula.
- L (PEG) represents — (CH 2 —CH 2 —O) n 5 —CH 2 —CH 2 —NH—
- the amino group at the right end is a 1-3 chain of ⁇ -Man branched chain of N297 sugar chain.
- n 5 is an integer from 2 to 10, preferably, an integer of 2 to 5.
- N297- (Fuc) MSG1 is represented by the following structural formula or sequence formula.
- the wavy line indicates that the antibody is bound to Asn297 of the antibody
- L (PEG) represents — (CH 2 —CH 2 —O) n 5 —CH 2 —CH 2 —NH—
- the amino group at the right end is a 1-3 chain of ⁇ -Man branched chain of N297 sugar chain.
- the asterisk indicates that the linker L is bonded to the 1- or 3-position nitrogen atom on the 1,2,3-triazole ring of the linker L, particularly Lb in the linker L
- n 5 is an integer from 2 to 10, preferably, an integer of 2 to 5.
- N297- (Fuc) MSG2 is represented by the following structural formula or sequence formula.
- the wavy line indicates that the antibody is bound to Asn297 of the antibody
- L (PEG) represents — (CH 2 —CH 2 —O) n 5 —CH 2 —CH 2 —NH—
- the amino group on the right end is a 1-6 chain of ⁇ -Man branched chain of N297 sugar chain.
- the asterisk is the 1-position on the 1,2,3-triazole ring of the linker L, particularly Lb in the linker L. Indicating that it is bonded to the nitrogen atom at position 3,
- n 5 is an integer from 2 to 10, preferably, an integer of 2 to 5.
- the N297 sugar chain of the antibody in the antibody drug conjugate of the present invention is N297- (Fuc) MSG1 or N297- (Fuc) MSG2 or a mixture thereof, the antibody is a dimer.
- the N297 sugar chain is preferably N297- (Fuc) SG or N297- (Fuc) MSG1 or N297- (Fuc) MSG2, more preferably N297- (Fuc) SG.
- N297 sugar chain of the antibody in the antibody-drug conjugate of the present invention is N297- (Fuc) SG or N297- (Fuc) MSG1 or N297- (Fuc) MSG2, a highly uniform ADC can be obtained.
- the substituents R 1 to R 5 , L 1 , L 2 , W 1 , W 2 , and Z 1 to Z 3 have the same meanings as described above.
- the substituents R a , R c , Re and R g indicate the side chains of the natural ⁇ -amino acid.
- PRO 1 represents a protecting group for a primary alcohol.
- it is a 4,4'-dimethoxytrityl group, a 4-methoxytrityl group or the like.
- PRO 2 , PRO 3 , PRO 7 , and PRO 8 represent protecting groups for secondary alcohols. Preferred are a tert-butyldimethylsilyl group, a triisopropylsilyloxymethyl group, a benzoyl group, a 2-nitrobenzyl group, a 4-methoxytetrahydropyran-4-yl group and the like.
- PRO 6 represents a carboxylic acid protecting group. Preferably, it is a tert-butyl group, a benzyl group or the like.
- PRO 5 and PRO 9 represent a protecting group for an amine.
- PRO 5 is preferably a tert-butyloxycarbonyl group, a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group, or the like.
- 9 is preferably a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group or a 2- (trimethylsilyl) ethoxycarbonyl group.
- PRO 4 represents a protecting group for an alcohol or an amine.
- a tert-butyldimethylsilyl group, a benzoyl group or the like is preferable, and in the case of an amine, a 2- (trimethylsilyl) ethoxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a tert-butyloxycarbonyl group, or the like is preferable.
- Q a represents an oxygen atom or a sulfur atom
- Q b represents a hydroxy group or a thiol group
- Q a ′ and Q b ′ each independently represent a negatively charged oxygen atom (O ⁇ ) or sulfur atom (S ⁇ ).
- R x and R y each independently represent a halogen atom or —O-PRO 2 .
- n represents an integer of 1 to 3.
- CDN derivative represented by (1) of the present invention can be produced according to Method A described below.
- This production method is a method for producing the compound represented by the general formula (1).
- a one-pot synthesis is possible from step A-1 to step A-5 of the present production method, which can be performed by referring to the report of Gaffney et al. (Org. Lett. 2010, 12, 3269-3271). Can be.
- Step A-1 This step is a step of producing a compound of the formula (2a) by continuously performing a hydrolysis reaction and removal of a cyanoethyl group on the compound of the formula (1a) using a known organic chemical technique. .
- Compound (1a) is dissolved in a solvent (acetonitrile, tetrahydrofuran, N, N-dimethylformamide or a mixed solvent thereof) at -10 ° C to the boiling point of the solvent used for the reaction, preferably at 15 ° C to 35 ° C.
- the hydrolysis reaction was carried out by treatment with water and an acid (pyridine trifluoroacetate, 4,5-dicyanoimidazole, 1H-tetrazole, etc.). Water was used in an amount of 2 mol to excess mol, preferably 2 mol to 10 mol, and the acid was used in an amount of 1 mol to excess mol, preferably 1 mol to 5 mol, per 1 mol of compound (1a).
- the reaction time is 1 minute to 3 hours, preferably 5 minutes to 30 minutes.
- a base tert-butylamine or the like
- the base was used in an excess mole, preferably 30 to 50 moles, relative to 1 mole of compound (1a).
- the reaction time is 5 minutes to 6 hours, preferably 15 minutes to 1 hour.
- the reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain a crude compound (2a).
- the crude compound (2a) can proceed to the next step without purification.
- Step A-2 This step is a step of producing a compound of the formula (3a) by removing the protecting group for the hydroxy group from the compound of the formula (2a) using a known organic chemical technique. Before starting the reaction of this step, azeotropic distillation was performed once to three times with acetonitrile, if necessary, to dry the crude product of the formula (2a).
- PRO 1 is a 4,4′-dimethoxytrityl group
- compound (2a) is dissolved in a solvent (dichloromethane, chloroform, dichloroethane, or the like) from ⁇ 10 ° C. to the boiling point of the solvent used in the reaction, preferably from 15 ° C. to 35 ° C.
- a solvent diichloromethane, chloroform, dichloroethane, or the like
- the 4,4′-dimethoxytrityl group was removed by treatment with water and an acid (dichloroacetic acid, trifluoroacetic acid, etc.). Water is used in excess, preferably 10 to 20 mol, per 1 mol of compound (2a), and the acid is used in an amount of 1% to 50% (v / v), preferably 5% to 10% in the solvent used for the reaction.
- Step A-3 In this step, the coupling reaction of the compound of the formula (3a) with the compound of the formula (4a) and the sulfidation reaction of the obtained coupling compound are continuously performed using a known organic chemical technique. And the step of producing a compound of the formula (5a). Before starting the reaction of this step, the compound (4a) was azeotroped three to five times with dehydrated acetonitrile. Acetonitrile was left at the last azeotropic distillation to prepare a 0.01 M to 1 M acetonitrile solution of the compound (4a). A desiccant (molecular sieves 3A or molecular sieves 4A in powder or pellet form) was added to the solution, and the solution was stored under a nitrogen or argon atmosphere until use.
- a desiccant mo sieves 3A or molecular sieves 4A in powder or pellet form
- the coupling reaction was carried out by adding an acetonitrile solution of the compound (4a) dried by azeotropic distillation to an acetonitrile solution of the compound (3a) at 5 ° C. to 35 ° C.
- the reaction time is 1 minute to 24 hours, preferably 5 minutes to 6 hours.
- a sulfurizing agent N, N-dimethyl-N ′-(3-sulfanilidene-3H-1,2,4-dithiazol-5-yl) methanimidamide, 3H-1,2-benzodithiol-
- the sulfurizing agent was used in an amount of 1 mol to 5 mol, preferably 1 mol to 2 mol, per 1 mol of compound (3a).
- the reaction time is 5 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 6 hours.
- the reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain a crude compound (5a).
- the obtained crude product of the compound (5a) was directly subjected to the next step.
- Step A-4 This step is a step of producing a compound of the formula (6a) by removing the protecting group of the hydroxy group from the compound of the formula (5a) using a known organic chemical technique.
- PRO 1 is a 4,4′-dimethoxytrityl group
- the compound (5a) is dissolved in a solvent (dichloromethane, chloroform, dichloroethane, or the like) from ⁇ 10 ° C. to the boiling point of the solvent used in the reaction, preferably from 15 ° C.
- a solvent diichloromethane, chloroform, dichloroethane, or the like
- an acid diichloroacetic acid, trifluoroacetic acid, etc.
- Water is used in an excess mole, preferably 10 to 20 moles, and the acid is used in an amount of 1% to 50% (v / v), preferably 5% to 10% in the solvent used for the reaction, based on 1 mole of the compound (5a).
- (V / v) and the diluted solution was used in excess molar, preferably 5 to 15 molar.
- the reaction time is 1 minute to 3 hours, preferably 5 minutes to 30 minutes.
- the reaction was terminated by adding pyridine to the reaction solution. Pyridine was used in an amount sufficient to neutralize the acid used, preferably 10 to 200 mol per 1 mol of the acid.
- the reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain a crude compound (6a). The obtained crude product of the compound (6a) was directly advanced to the next step.
- Step A-5 This step is a step of continuously performing a cyclization reaction and a sulfurization reaction on the compound of the formula (6a) using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (7a). After dissolving the compound (6a) in pyridine, it was concentrated under reduced pressure to prepare a 0.01 M to 0.5 M pyridine solution. Adding a dehydrating condensing agent (such as 2-chloro-5,5-dimethyl-1,3,2 ⁇ 5 -dioxaphosphinan-2-one) to the pyridine solution at 5 ° C. to 35 ° C. A cyclization reaction was carried out.
- a dehydrating condensing agent such as 2-chloro-5,5-dimethyl-1,3,2 ⁇ 5 -dioxaphosphinan-2-one
- the dehydrating condensing agent was used in an amount of 1 mol to excess mol, preferably 3 mol to 5 mol, per 1 mol of compound (6a).
- the reaction time is 1 minute to 6 hours, preferably 5 minutes to 1 hour.
- water and a sulfurizing agent (3H-1,2-benzodithiol-3-one, N, N-dimethyl-N ′-(3-sulfanilidene-3H-1,2,4-dithiazole-5-) were added to the reaction solution.
- Yl) methane imido amide, etc.
- the drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
- two diastereomers are obtained in many cases, but one or two diastereomers may be further obtained depending on the raw materials (1a) and (4a). Even if the obtained compound (7a) is a mixture of a plurality of diastereomers, it can be advanced to the next step without further purification.
- Step A-6 This step is a step for producing a compound of the formula (8a) by simultaneously removing a cyanoethyl group and all acyl protecting groups from the compound of the formula (7a) using a known organic chemical technique. This step was performed in an autoclave or a shield tube as needed.
- the compound (7a) is treated with a solvent (methanol, ethanol, tetrahydrofuran or a mixed solvent thereof) in a solvent (methanol, ethanol, tetrahydrofuran or a mixed solvent thereof) at a concentration of 28% (v / v) from 5 ° C. to the boiling point of the solvent used for the reaction.
- aqueous ammonia removed cyanoethyl and benzoyl groups. Ammonia was used in an excess mole, preferably 300 to 3000 moles, relative to 1 mole of compound (7a).
- the reaction time is 30 minutes to 96 hours, preferably 2 hours to 48 hours.
- reaction solution is concentrated, and the residue is subjected to preparative HPLC [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.], C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.] or a combination thereof.
- preparative HPLC buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.
- C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.] or a combination thereof.
- compound (8a) was obtained. Even if the obtained compound (8a) is a diastereomer mixture, it can proceed to the next step without further purification. In this step, it is also possible to proceed to the next step without purification.
- Step A-7 This step is a step of simultaneously removing all silyl protecting groups from the compound of the formula (8a) using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (9a).
- compound (8a) is directly treated with triethylamine trihydrofluoride at 5 ° C. to 100 ° C., preferably at 35 ° C. to 60 ° C. By doing so, the tert-butyldimethylsilyl group was removed.
- Triethylamine trihydrofluoride was used in an excess mole, preferably 100 to 200 moles, relative to 1 mole of compound (8a).
- the reaction time is 30 minutes to 24 hours, preferably 2 hours to 12 hours.
- the reaction was stopped by gradually adding a mixture of ice-cooled 1M aqueous triethylammonium hydrogen carbonate solution and triethylamine in a ratio of 3: 1 to 10: 1 (v / v). If necessary, the reaction solution may be poured into an ice-cooled mixed solution of a 1 M aqueous solution of triethylammonium hydrogencarbonate and triethylamine. In this case, the reaction vessel was washed with acetonitrile and water.
- Triethylamine is used in an amount sufficient to change the liquid property of the reaction solution to weak basicity, preferably about 2 mol of triethylamine per 1 mol of triethylamine trihydrofluoride.
- the remaining aqueous solution was subjected to preparative HPLC [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.], C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile, buffer / methanol] Or a combination thereof to give Compound (9a) as a single diastereomer.
- Step A-8 This step is a step of subjecting the compound of the formula (9a) to ion exchange using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (1).
- a cation exchange resin (BT AG (registered trademark) 50W-X2 resin, 100-200 mesh, hydrogen type) was suspended in pure water and filled in an empty column cartridge. The cation exchange resin was used in a weight ratio of 10 to 50 times that of the compound (9a). After allowing excess pure water to flow naturally, a 1 M aqueous sodium hydroxide solution was allowed to flow naturally in three column volumes, and then six column volumes of pure water were allowed to flow naturally. Compound (9a) was dissolved in about 3 column volumes of pure water and charged into the column.
- This production method is a method for producing a compound represented by the general formula (1 ′) by partially modifying the method A.
- the compound of the general formula (1 ′) can be produced by changing step A-5 of method A to step A′-5 shown below. Further, when the substituents R x and R y are both halogen atoms, the step A-7 can be omitted.
- Step A'-5 This step is a step of continuously performing a cyclization reaction and an oxidation reaction on the compound of the formula (6a ') using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (7a'). After dissolving the compound (6a ') in pyridine, it was concentrated under reduced pressure to prepare a 0.01 M to 0.5 M pyridine solution. A dehydrating condensing agent (such as 2-chloro-5,5-dimethyl-1,3,2 ⁇ 5 -dioxaphosphinan-2-one) is added to the pyridine solution at 5 ° C. to 35 ° C. A cyclization reaction was performed.
- a dehydrating condensing agent such as 2-chloro-5,5-dimethyl-1,3,2 ⁇ 5 -dioxaphosphinan-2-one
- the dehydrating condensing agent was used in an amount of 1 mol to excess mol, preferably 3 mol to 5 mol, per 1 mol of compound (6a ').
- the reaction time is 1 minute to 6 hours, preferably 5 minutes to 1 hour.
- water and an oxidizing agent such as iodine
- Water was used in an amount of 0 mol to an excess, preferably 30 mol to 50 mol
- the oxidizing agent was used in an amount of 2 mol to 10 mol, preferably 3 mol to 5 mol, per 1 mol of compound (6a ').
- the reaction time is 5 minutes to 12 hours, preferably 30 minutes to 3 hours.
- the reaction solution was added to an aqueous solution of sodium hydrogen carbonate (from 0.1 M to 1 M), and stirred for 15 minutes to 24 hours to terminate the reaction.
- the reaction solution was extracted once to five times with an organic solvent (ethyl acetate, diethyl ether, toluene or a mixed solvent thereof), and the combined extracts were dried over anhydrous salts (anhydrous sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate).
- the drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
- the obtained residue is purified by silica gel column chromatography [dichloromethane / methanol, ethyl acetate / methanol, hexane / ethyl acetate, etc.], C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile] or a combination thereof to obtain compound (7a ') Got.
- This production method is a method for producing a compound represented by the general formula (1 ′′) by partially changing the method A.
- the compound of the general formula (1 ′′) can be produced by changing step A-3 of method A to step A ′′ -3 shown below.
- the step A-7 can be omitted.
- Step A ''-3 In this step, the coupling reaction of the compound of the formula (3a ′′) with the compound of the formula (4a ′′) and the oxidation reaction of the obtained coupling product are continuously performed using a known organic chemical technique.
- a compound of the formula (5a ′′) Before starting the reaction of this step, the compound (4a ′′) was azeotroped three to five times with dehydrated acetonitrile. Acetonitrile was left at the time of the last azeotropic distillation to prepare a 0.01 M to 1 M acetonitrile solution of the compound (4a ′′).
- a desiccant mo sieves 3A or molecular sieves 4A in powder or pellet form
- the coupling reaction was carried out by adding an acetonitrile solution of the compound (4a '') dried by azeotropic distillation at 5 ° C. to 35 ° C. to an acetonitrile solution of the compound (3a ′′).
- the reaction time is 1 minute to 24 hours, preferably 5 minutes to 6 hours.
- an oxidizing agent such as tert-butyl hydroperoxide
- the oxidizing agent was used in an amount of 1 mol to 5 mol, preferably 2 mol to 3 mol, per 1 mol of compound (3a ′′).
- the reaction time is 5 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 6 hours.
- a saturated sodium thiosulfate aqueous solution was added to the reaction solution, and the reaction was stopped by stirring for 10 minutes to 12 hours.
- the reaction solution was extracted once to five times with an organic solvent (such as a mixed solvent of dichloromethane and methanol), and the combined extracts were dried over anhydrous salts (anhydrous sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate).
- the drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude compound (5a '').
- the obtained crude product of the compound (5a ′′) was directly used in the next step.
- This production method is a method for producing a compound represented by the general formula (1 ′′ ′) by partially modifying the method A. Specifically, the compound of the general formula (1 ′′ ′) is prepared by changing step A-3 of method A to step A ′′ -3 and step A-5 to step A′-5. Can be. Further, when the substituents R x and R y are both halogen atoms, the step A-7 can be omitted.
- Method B Conjugation precursor (sugar chain conjugation)
- the conjugation precursor represented by (2) of the present invention can be produced according to Method B described below.
- This production method is a method for producing a conjugation precursor (2) in which -NH 2 is substituted at an arbitrary position of L 1 .
- Step B-1 This step is a step of producing a compound of the formula (2b) by removing the protecting group from the compound of the formula (1b) using a known organic chemical technique.
- reaction solution was concentrated under reduced pressure, suspended in toluene, and concentrated again under reduced pressure. This operation was repeated two to five times.
- a solvent diethyl ether, diisopropyl ether, hexane, dichloromethane, ethyl acetate or a mixed solvent thereof
- the solid was collected by filtration to obtain a crude compound (2b).
- the crude product of compound (2b) was advanced to the next step without further purification.
- Step B-2 This step is a step of producing a compound of the formula (4b) by amidating the compound of the formula (2b) with the compound of the formula (3b) using a known organic chemistry technique.
- Compound (2b) was dissolved in a solvent (N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, N, N-dimethylacetamide, acetonitrile, etc.) at 5 ° C. to 35 ° C. in a base (triethylamine, N, N- Amidation was carried out by reacting with diisopropylethylamine and the compound (3b).
- the base was used in an amount of 1 mol to 5 mol
- the compound (3b) was used in an amount of 0.5 mol to 1.5 mol with respect to 1 mol of the compound (2b).
- the reaction time is 10 minutes to 72 hours, preferably 1 hour to 24 hours.
- the reaction solution is poured into two layers of an organic solvent (dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, methanol or a mixed solvent thereof) and water or an acidic aqueous solution (0.1 to 1 M hydrochloric acid, citric acid aqueous solution, etc.), and the organic solvent is used once. Extracted 5 times.
- the extracts were combined, washed with a saturated saline solution, and dried over anhydrous salts (anhydrous sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate).
- the drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
- the liquid separation operation can be omitted, and the reaction solution can be directly concentrated under reduced pressure to proceed to the next silica gel column purification.
- the obtained residue was purified by silica gel column chromatography [dichloromethane / methanol, ethyl acetate / methanol, etc.] to obtain compound (4b). If necessary, the obtained compound (4b) is dissolved in a good solvent (ethyl acetate, acetonitrile, dichloromethane, methanol or a mixed solvent thereof), and a poor solvent (diethyl ether, diisopropyl ether, hexane, etc.) is added. The purity can be increased by reprecipitating and collecting the solid by filtration.
- a good solvent ethyl acetate, acetonitrile, dichloromethane, methanol or a mixed solvent thereof
- a poor solvent diethyl ether, diisopropyl ether, hexane, etc.
- Step B-3 This step is a step of producing a compound of the formula (5b) by subjecting the compound of the formula (4b) to esterification using a known organic chemical technique.
- Compound (4b) is reacted with N-hydroxysuccinimide and a condensing agent in a solvent (N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, acetonitrile, etc.) at 5 ° C. to 35 ° C.
- Esterification was carried out by reacting with (1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride or the like).
- the N-hydroxysuccinimide and the condensing agent were each used in an amount of 1 to 3 mol based on 1 mol of the compound (4b).
- the reaction time is 30 minutes to 72 hours, preferably 2 hours to 24 hours.
- the reaction solution was diluted with an organic solvent (dichloromethane, chloroform, ethyl acetate or a mixed solvent thereof), and then washed three to five times with ice water.
- the organic layer was dried using an anhydrous salt (anhydrous sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate). After the desiccant was removed by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude compound (5b).
- the obtained compound (5b) may be purified by C18 silica gel column chromatography [only acetonitrile]. After dissolving the obtained compound (5b) in a good solvent (ethyl acetate, acetonitrile, dichloromethane or a mixed solvent thereof), re-precipitate by adding a poor solvent (diethyl ether, diisopropyl ether, hexane, etc.) to obtain a solid. Can be filtered to increase the purity.
- a good solvent ethyl acetate, acetonitrile, dichloromethane or a mixed solvent thereof
- a poor solvent diethyl ether, diisopropyl ether, hexane, etc.
- Step B-4 This step is a step of producing a compound of the formula (2) by subjecting the compound of the formula (5b) to a condensation reaction with a compound of the formula (6b) using a known organic chemical technique. .
- Compound (6b) is dissolved in a solvent (N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, acetonitrile, etc.) at -10 ° C to 100 ° C, preferably at 15 ° C to 35 ° C. Then, a condensation reaction was carried out by reacting with a base (triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, etc.) and the compound (5b). The base was used in an amount of 2 to 5 mol, and the compound (5b) was used in an amount of 1 to 2 mol per 1 mol of the compound (6b). The reaction time is 5 minutes to 24 hours, preferably 1 hour to 6 hours.
- a solvent N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, acetonitrile, etc.
- reaction solution was quenched by adding benzylamine.
- Benzylamine was used in an amount of 4 to 10 mol per 1 mol of compound (6b). If necessary, the reaction solution was partially concentrated under reduced pressure, and the remaining solution was subjected to preparative HPLC [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.], C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile, buffer / Methanol or the like] or a combination thereof to obtain Compound (2).
- Method B ′ Conjugation precursor (cysteine conjugation) Method B ′
- the conjugation precursor represented by (2 ′) of the present invention can be produced according to the method B ′ described below.
- This production method is a method for producing a conjugation precursor (2 ′) in which —NH 2 is substituted at an arbitrary position of L 1 .
- Step B-5 This step is a step of producing a compound of the formula (8b) by amidating the compound of the formula (2b ') with the compound of the formula (7b) using a known organic chemistry technique. .
- Compound (8b) was obtained according to the procedure described in Method B, Step B-2 except that no base was used.
- Step B-6 This step is a step of producing a compound of the formula (9b) by removing the protecting group from the compound of the formula (8b) using a known organic chemical technique.
- PRO 6 is a tert-butyl group
- compound (9b) was obtained according to the procedure described in Method B, Step B-1, except that silica gel column chromatography [dichloromethane / methanol] was used for the purification operation.
- Step B-7 This step is a step of producing a compound of the formula (10b) by subjecting the compound of the formula (9b) to esterification using a known organic chemical technique.
- Compound (10b) was obtained according to the method described in Method B, Step B-3.
- Step B-8 This step is a step of producing a compound of the formula (2 ′) by subjecting the compound of the formula (6b) to a condensation reaction with a compound of the formula (10b) using a known organic chemical technique. is there.
- Compound (2 ′) was obtained according to the method described in Method B, Step B-4.
- Method C The conjugation precursor represented by (3) of the present invention can be produced according to the method C described below.
- This production method is a method for producing conjugated precursor when the hydroxy group is substituted at any position of L 1 a (3).
- Step C-1 This step is a step of producing a compound of the formula (3c) by amidating the compound of the formula (1c) with a compound of the formula (2c) using a known organic chemical technique.
- Compound (3c) was obtained according to the method described in Method B, Step B-2.
- Step C-2 This step is a step of producing a compound of the formula (4c) by subjecting the compound of the formula (3c) to esterification using a known organic chemical technique.
- Compound (4c) was obtained according to the method described in Method B, Step B-3.
- Step C-3 the compound of the formula (5c) is subjected to a coupling reaction (aminomethyleneation) with the compound of the formula (6c) using a known organic chemical technique and the deprotection of the obtained coupling compound is continuously performed.
- This is a step of producing a compound of the formula (7c).
- compound (5c) is combined with compound (6c) and an acid (such as p-toluenesulfonic acid) in tetrahydrofuran at 5 ° C to 35 ° C. Aminomethylenation was performed by reaction.
- the compound (6c) is used in an amount of 1 mol to 20 mol, preferably 2 mol to 10 mol, and the acid is used in an amount of 0.05 mol to an excess mol, preferably 0.1 mol to 3 mol, per 1 mol of the compound (5c).
- the reaction time is 30 minutes to 72 hours, preferably 2 hours to 24 hours.
- a base (1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene or the like) was added to the reaction solution to carry out deprotection.
- the reaction solution is suspended, the reaction can be carried out after additional solvent (N, N-dimethylformamide or the like) is added and dissolved as needed.
- the base was used in an excess mole, preferably 5 to 20 moles, per 1 mole of compound (5c).
- the reaction time is 10 minutes to 24 hours, preferably 2 hours to 12 hours. Water was added to the reaction solution, and the mixture was purified by a C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile or the like] to obtain a compound (7c).
- Step C-4 This step is a step of producing a compound of the formula (8c) by removing the protecting group from the compound of the formula (7c) using a known organic chemical technique.
- PRO 7 and PRO 8 were tert-butyldimethylsilyl groups, compound (8c) was obtained according to the procedure described in Method A, step A-7.
- Step C-5 This step is a step of producing a compound of the formula (3) by subjecting the compound of the formula (8c) to a condensation reaction with a compound of the formula (4c) using a known organic chemical technique. .
- Compound (3) was obtained according to the method described in Method B, Step B-4.
- This production method is a method for producing conjugated precursor when the hydroxy group is substituted at any position of L 1 a (3 ').
- Step C'-1 This step is a step of producing a compound of the formula (2c ′) by continuously performing a hydrolysis reaction and removal of a cyanoethyl group on the compound of the formula (1c ′) using a known organic chemical technique. It is. Compound (2c ′) was obtained according to the procedure described in Method A, step A-1.
- Step C'-2 This step is a step of removing the protecting group for the hydroxy group from the compound of the formula (2c ') using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (3c').
- Compound (3c ′) was obtained according to the method described in Method A, step A-2.
- Step C'-3 In this step, a coupling reaction with a compound of the formula (4c ′) and a sulfidation reaction or an oxidation reaction of the obtained coupling compound are continuously performed on the compound of the formula (3c ′) using a known organic chemical technique.
- This is a step of producing a compound of the formula (5c ′).
- Compound (5c ′) was obtained according to the method described in Method A, Step A-3 or Method A ′′ Step A ′′ -3.
- Step C'-4 In this step, the protecting group for the hydroxy group is removed from the compound of the formula (5c ′) using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (6c ′).
- Compound (6c ′) was obtained according to the procedure described in Method A, step A-4.
- Step C'-5 In this step, a cyclization reaction and a sulfurization reaction or an oxidation reaction are continuously performed on the compound of the formula (6c ′) using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (7c ′). is there.
- Compound (7c ′) was obtained according to the method described in Method A, Step A-5 or Method A ′, Step A′-5.
- Step C'-6 This step is a step of producing a compound of the formula (8c ') by simultaneously removing the cyanoethyl group and all acyl protecting groups from the compound of the formula (7c') using a known organic chemical technique. .
- Compound (8c ′) was obtained according to the method described in Method A, step A-6.
- Step C'-7 This step is a step of simultaneously removing all silyl-based protecting groups from the compound of the formula (8c ') using a known organic chemical technique to produce a compound of the formula (9c').
- PRO 9 is 2- (trimethylsilyl) ethoxycarbonyl group
- compound (8c ′) is treated with tetrabutylammonium fluoride solution in tetrahydrofuran at 5 ° C. to 100 ° C., preferably at 35 ° C. to 60 ° C. This removed the 2- (trimethylsilyl) ethoxycarbonyl group.
- Tetrabutylammonium fluoride was used in an excess mole, preferably 10 to 30 moles, relative to 1 mole of compound (8c ').
- the reaction time is 1 hour to 48 hours, preferably 4 hours to 24 hours.
- the organic solvent component was distilled off under reduced pressure as necessary.
- the residue was purified by preparative HPLC [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.], C18 silica gel column chromatography [buffer / acetonitrile, buffer / methanol, etc.] or a combination thereof to obtain compound (9c ′).
- Step C'-8 This step is a step of producing a compound of the formula (3 ') by subjecting the compound of the formula (9c') to a condensation reaction with a compound of the formula (4c) using a known organic chemistry technique. It is. Compound (3 ′) was obtained according to the method described in Method B, Step B-4.
- Method D Production of sugar chain remodeling antibody
- the sugar chain remodeling antibody can be produced by the method shown in the following formula, for example, according to the method described in WO2018 / 003983.
- Step D-1 In this step, a GlcNAc ⁇ 1-4GlcNAc having a reducing end chitobiose structure of an N-linked sugar chain (N297-linked sugar chain) that binds to an asparagine at amino acid sequence 297 of the antibody using a known enzyme reaction with a target antibody
- This is a step of producing a sugar chain-cleaved antibody by cleaving the glycosidic bond of the above by hydrolysis.
- GlcNAc ⁇ 1 having a chitobiose structure at the reducing end of a target antibody (1d) (10 mg / mL) in a buffer (phosphate buffer or the like) at 0 ° C. to 40 ° C.
- a hydrolase such as a wild-type EndoS enzyme.
- a hydrolysis reaction of the glycosidic bond between the and 4GlcNAc was performed.
- the reaction time is 10 minutes to 72 hours, preferably 1 hour to 6 hours.
- the wild-type EndoS enzyme was used in an amount of 0.1 mg to 10 mg, preferably 0.1 mg to 3 mg, per 100 mg of the antibody (1d).
- Step D-2 the (Fuc ⁇ 1,6) GlcNAc antibody (2d) obtained in the step D-1 is subjected to a known enzyme reaction to form an SG type or MSG (MSG1, MSG2) type having a PEG linker containing an azide group.
- an oxazoline sugar chain (hereinafter referred to as an “oxazoline azido sugar chain”) is bound to produce a sugar chain remodeling antibody (3d).
- the antibody (2d) is reacted with an oxazoline azido sugar chain in a buffer (phosphate buffer or the like) at 0 ° C. to 40 ° C. in the presence of a glycosyltransferase such as EndoS (D233Q / Q303L).
- a chain transfer reaction was performed. The reaction time is 10 minutes to 72 hours, preferably 1 hour to 6 hours.
- EndoS enzyme (D233Q / Q303L) was used in an amount of 1 mg to 10 mg, preferably 1 mg to 3 mg, and an azido sugar chain oxazoline compound was used in an amount of 2 equivalents to an excess equivalent, preferably 4 equivalents to 20 equivalents based on 100 mg of the antibody.
- concentration, concentration measurement, and buffer exchange of the antibody aqueous solution can be performed according to common operations A to C described later.
- the SG-type oxazoline azido sugar chain was synthesized according to the method described in WO2018 / 003983.
- the following formula shows a method for synthesizing [N 3 -PEG (3)] 2 -SG (10) -Ox (compound 1-10 described in WO2018 / 003983).
- MSG-type azido sugar chain oxazoline was also synthesized according to the method described in WO2018 / 003983.
- the following formula shows a method for synthesizing [N 3 -PEG (3)]-MSG1 (9) -Ox (Compound 1-11 described in WO2018 / 003983).
- the two asterisks (*) on the left side of the antibody drug conjugate (1e) indicate the drug linker portion indicated by the asterisk on the right side.
- the sugar chain remodeling antibody (3d) obtained in Step D-2 of Method D and the conjugation precursor (2) obtained in Step B-4 of Method B are combined with SPAAC (strain-promoted azide-alkyne). Cyclodition: J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 15046-15047) to produce an antibody drug conjugate (1e).
- Step E-1 A buffer solution of a sugar chain remodeling antibody (3d) (phosphate buffer, acetate buffer, borate buffer, etc.) and a conjugation precursor (2) are mixed with a suitable solvent (dimethyl sulfoxide, N, N-dimethylformamide). , N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, propylene glycol or a mixed solvent thereof), to carry out the SPAAC reaction.
- the conjugation precursor (2) is used in an amount of 2 mol to excess mol, preferably 4 mol to 30 mol, relative to 1 mol of the sugar chain remodeling antibody (3d). On the other hand, 1% to 200% (v / v) is preferable.
- the reaction temperature is 0 ° C to 37 ° C, preferably 15 ° C to 25 ° C, and the reaction time is 1 hour to 150 hours, preferably 6 hours to 72 hours.
- the pH of the reaction solution is preferably 5 to 9.
- the reaction solution was purified according to the method described in the common operation D described below to obtain an antibody drug conjugate (1e).
- Method E ' Conjugation of antibody and drug (cysteine conjugation)
- the antibody-drug conjugate of the present invention having cysteine conjugation is obtained by using the target antibody prepared according to Reference Example 1 and the like and the maleimide group-containing conjugation precursor (2 ′) obtained in step B-8 of method B ′.
- Method E '' Conjugation of antibody and drug (sugar chain conjugation 2)
- the conjugation precursor (2) is changed to the conjugation precursor (3 ′) obtained in step C′-8 of method C ′, whereby an antibody drug conjugate (1e ′′) represented by the following formula is obtained.
- the antibody-drug conjugate can be identified by performing buffer exchange, purification, measurement of the antibody concentration, and measurement of the average number of drugs per antibody molecule by the common operations D to G described below to identify the antibody-drug conjugate.
- Antibody Concentration Measurement Antibody concentration was measured using a UV meter (Nanodrop 1000, Thermo Fisher Scientific, Inc.) according to the method specified by the manufacturer. At that time, a different 280 nm extinction coefficient (1.3 mLmg -1 cm -1 to 1.8 mL mg -1 cm -1 ) was used for each antibody.
- Common procedure C Buffer exchange of antibody A buffer solution (phosphate buffered saline (pH 6.0), phosphate buffer solution (pH 6.0), etc.) was added to the antibody aqueous solution, and concentrated according to the method described in Common procedure A. . After performing this operation several times, the antibody concentration was measured according to the method described in Common Operation B. To this antibody buffer solution, a buffer solution (phosphate buffered saline (pH 6.0), phosphate buffer solution (pH 6.0), etc.) is appropriately added to obtain a desired concentration (for example, about 10 mg / mL) of the antibody. A buffer solution was prepared.
- a buffer solution phosphate buffered saline (pH 6.0), phosphate buffer solution (pH 6.0), etc.
- This operation was repeated a total of two to three times to obtain an antibody drug conjugate excluding the unbound drug linker, dimethyl sulfoxide, and propylene glycol. If necessary, the concentration of the antibody drug conjugate solution was adjusted by common procedures A and C.
- a formula (II) A 280 indicates the absorbance of the aqueous solution of the antibody drug conjugate at 280 nm
- a 260 indicates the absorbance of the aqueous solution of the antibody drug conjugate at 260 nm
- a A , 280 indicates the absorbance of the antibody at 280 nm
- a A , 260 Indicates the absorbance of the antibody at 260 nm
- AD , 280 indicates the absorbance of the conjugate precursor at 280 nm
- AD , 260 indicates the absorbance of the conjugate precursor at 260 nm
- ⁇ A , 280 indicates the absorbance of the absorbance of the conjugate precursor at 260 nm
- ⁇ a, 260 represents a molar extinction coefficient of the antibody in the 260nm
- ⁇ D, 280 indicates a molar absorption coefficient of the conjugate precursor in 280nm
- ⁇ D, 260 is conjugate precursors in 260nm
- C A indicates the antibody concentration in the antibody drug conjugate
- C D represents the drug concentration in the antibody drug conjugate.
- ⁇ A , 280 can be estimated from the amino acid sequence of the antibody by a known calculation method (Protein Science, 1995, vol. 4, 2411-2423).
- ⁇ A , 260 a value calculated from an actually measured value obtained from the UV measurement of the antibody and an estimated value of ⁇ A , 280 was used.
- the molar extinction coefficient of the conjugate precursor in the examples was obtained by UV measurement each time.
- Measuring the A 280 and A 260 of the antibody drug conjugate solution by solving the simultaneous equations of these values into equation (I) and (II), it is possible to obtain the C A and C D. Furthermore by dividing the C D at C A, it is possible to obtain the drug mean bond number per antibody molecule.
- Common procedure F Measurement of antibody concentration and average number of drugs bound per antibody molecule in antibody drug conjugate (reverse-phase high-performance liquid chromatography: RP-HPLC)
- the antibody concentration and the average number of drugs bound per antibody molecule in the antibody drug conjugate can be determined by high performance liquid chromatography analysis using the following method in addition to the common operation E described above.
- HPLC analysis Representative analysis conditions are as follows. HPLC system: Agilent 1290 HPLC system (Agilent Technologies) Detector: UV absorbance meter (measuring wavelength: 280 nm) Column: Acquity BEH Phenyl (2.1 ⁇ 50 mm, 1.7 ⁇ m, Waters) Column temperature: 75 ° C Flow rate: 0.8 mL / min Sample injection volume: 10 ⁇ L Mobile phase A: 0.1% trifluoroacetic acid (TFA), 15% isopropyl alcohol aqueous solution Mobile phase B: 0.075% TFA, 15% isopropyl alcohol acetonitrile solution gradient program (mobile phase B): 14% -36% ( 0-15 minutes), 36% -80% (15-17 minutes), 80% -14% (17 minutes-17.1 minutes), 14% -14% (17.1 minutes-23 minutes) [F-3.
- HPLC system Agilent 1290 HPLC system (Agilent Technologies) Detector: UV absorbance meter (measuring wavelength: 280 n
- the molar extinction coefficient (280 nm) of the L chain and the H chain in each antibody an estimated value calculated by a known calculation method described in the common operation E was used.
- 26213 was used as the molar extinction coefficient of the L chain
- 81478 was used as the molar extinction coefficient of the H chain.
- 27703 was used as the molar extinction coefficient of the L chain
- 85948 was used as the molar extinction coefficient of the H chain.
- the actual value of the conjugation precursor is used for conjugation in the SPAAC reaction, and for cysteine conjugation, each conjugation precursor is used as mercaptoethanol or N-acetyl.
- the measured value of a compound in which a maleimide group was converted to succinimide thioether by reacting with cysteine was used.
- the absorbance (280 nm) of the antibody-drug conjugate an actually measured value of the aqueous solution of the antibody-drug conjugate was used.
- the dilution factor indicates how many times the antibody drug conjugate aqueous solution was diluted when measuring the absorbance, and is usually 4-fold dilution.
- the molar extinction coefficient (280 nm) of the antibody an estimated value calculated by a known calculation method described in common operation E was used. The average number of drugs used was the value obtained in [F-3-4].
- the molar extinction coefficient (280 nm) of the drug linker is determined by using the actually measured value of the conjugation precursor in the case of conjugation in the SPAAC reaction, and using mercaptoethanol or N-acetylcysteine in the case of cysteine conjugation. The measured value of the compound in which the maleimide group was converted to succinimide thioether after the reaction was used.
- HPLC analysis Representative analysis conditions are as follows. HPLC system: SHIMADZU CBM-20A (Shimadzu Corporation) Detector: UV absorbance meter (measuring wavelength: 280 nm) Column: TSK-gel Butyl-NPR (4.6 ⁇ 100 mm, 2.5 ⁇ m, manufactured by TOSOH) Column temperature: constant temperature around 25 ° C.
- HPLC system SHIMADZU CBM-20A (Shimadzu Corporation)
- Detector UV absorbance meter (measuring wavelength: 280 nm)
- the molar extinction coefficient (280 nm) of the antibody an estimated value calculated by a known calculation method described in the common operation E was used.
- the molar extinction coefficient (280 nm) of the drug linker the actually measured value of the conjugation precursor was used.
- novel CDN derivatives, antibody drug conjugates or intermediates for the production thereof according to the present invention include stereoisomers or optical isomers derived from asymmetric carbon atoms, geometric isomers, tautomers or d-forms, l-forms, atropes
- optical isomers such as isomers may be present, any of these isomers, optical isomers and mixtures thereof are included in the present invention.
- the number of drugs bound to one antibody molecule is an important factor affecting its efficacy and safety.
- the production of antibody drug conjugates is carried out by defining reaction conditions such as the amounts of raw materials and reagents to be reacted so that the number of drug bonds is constant, but unlike the chemical reaction of low molecular weight compounds. Is usually obtained as a mixture in which different numbers of drugs are combined.
- the number of drugs bound to one antibody molecule can be specified as an average value, that is, the average number of drugs bound (DAR).
- the number of cyclic dinucleotide derivatives bonded to the antibody molecule can be controlled, and the average number of drug bonds per antibody can range from 1 to 10 cyclic dinucleotide derivatives, preferably from 1 to 8 And more preferably 1 to 5.
- the number m 2 of drug bonds per antibody molecule in the antibody drug conjugate is 1 or 2 Is an integer.
- m 2 is 2 and DAR is in the range of 3 to 5 (preferably in the range of 3.2 to 4.8). And more preferably in the range of 3.5 to 4.2).
- N297 sugar chain N297- (Fuc) MSG1 if the N297- (Fuc) MSG2 or N297- (Fuc) MSG1 and N297- (Fuc) MSG2 mixtures, m 2 is 1, DAR in the range of 1-3 (Preferably in the range of 1.0 to 2.5, more preferably in the range of 1.2 to 2.2).
- a person skilled in the art can design a reaction for binding a required number of drugs to an antibody from the description in Examples of the present application, and obtain an antibody in which the number of cyclic dinucleotide derivatives bound is controlled.
- the CDN derivatives, antibody drug conjugates, and intermediates for producing the same of the present invention absorb moisture when left in the air or recrystallize to form adsorbed water or form hydrates. In some cases, such water-containing compounds and salts are also included in the present invention.
- the CDN derivative, antibody drug conjugate, or intermediate for producing the CDN derivative of the present invention has a basic group such as an amino group, it can be converted into a pharmaceutically acceptable salt if desired.
- salts include hydrohalides such as hydrochloride and hydroiodide; inorganic salts such as nitrate, perchlorate, sulfate and phosphate; methanesulfonate and trifluoromethanesulfone Lower alkane sulfonates such as acid salts and ethane sulfonates; aryl sulfonates such as benzene sulfonates and p-toluene sulfonates; formic acid, acetic acid, malic acid, fumarate salts, succinate salts and citric acid salts Organic acid salts such as acid salts, tartrate salts, oxalate salts, and maleate salts; and amino acid salts such as ornithate, gluta salts
- CDN derivative or antibody drug conjugate of the present invention contains a phosphate group and / or a thiophosphate group in its structure, it is generally possible to form a base addition salt. Also, when those production intermediates have an acidic group such as a carboxy group, it is generally possible to form a base addition salt.
- Pharmaceutically acceptable salts include, for example, alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt; inorganic salts such as ammonium salt; dibenzylamine salt Morpholine salt, phenylglycine alkyl ester salt, ethylenediamine salt, N-methylglucamine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, cyclohexylamine salt, dicyclohexylamine salt, N, N'-dibenzylethylenediamine salt, diethanolamine salt, N-benzyl Organic amine salts such as -N- (2-phenylethoxy) amine salt, piperazine salt, tetramethylammonium salt, tris (hydroxymethyl) aminomethane salt and the like can be mentioned.
- alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt
- alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt
- inorganic salts such as
- CDN derivatives, antibody drug conjugates and intermediates for producing them of the present invention may exist as hydrates by absorbing moisture in the air.
- the solvate of the present invention is not particularly limited as long as it is pharmaceutically acceptable. Specifically, hydrates, ethanol solvates, 2-propanol solvates and the like are preferable.
- the compound When a nitrogen atom is present in the CDN derivative, the antibody drug conjugate of the present invention, or an intermediate in the production thereof, the compound may be in the form of an N-oxide, and these solvates and N-oxides may also be used in the present invention. Included in the scope of the invention.
- the CDN derivative when a sulfur atom is present in the CDN derivative, the antibody drug conjugate of the present invention, or a production intermediate thereof, the CDN derivative may be in a sulfoxide form, and these solvates and sulfoxide forms are also included in the scope of the present invention. included.
- the present invention also encompasses compounds labeled with various radioactive or non-radioactive isotopes.
- One or more of the atoms that make up the CDN derivatives, antibody drug conjugates, and their intermediates in the present invention may also contain unnatural proportions of atomic isotopes.
- the atomic isotope include deuterium (2H), tritium (3H), iodine-125 (125I), carbon-14 (14C), and the like.
- the compounds of the present invention can be radiolabeled with a radioisotope such as, for example, tritium (3H), iodine-125 (125I) or carbon-14 (14C).
- Radiolabeled compounds are useful as therapeutic or prophylactic agents, research reagents, eg, assay reagents, and diagnostic agents, eg, in vivo diagnostic imaging agents. All isotopic variants of the antibody drug conjugates of the present invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the present invention.
- the CDN derivative or antibody drug conjugate of the present invention exhibits antitumor immunity or cytotoxic activity against cancer cells, it is used as a pharmaceutical, particularly a therapeutic and / or prophylactic agent against cancer, or an antitumor agent.
- a pharmaceutical particularly a therapeutic and / or prophylactic agent against cancer, or an antitumor agent.
- the types of cancer to which the CDN derivative or antibody drug conjugate of the present invention is applied include lung cancer (non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, etc.), kidney cancer, urothelial cancer, colon cancer, and prostate. Cancer, glioblastoma multiforme, ovarian cancer (superficial epithelial tumor, stromal tumor, germ cell tumor, etc.), pancreatic cancer, breast cancer, melanoma, liver cancer, bladder cancer, gastric cancer, esophageal cancer , Endometrial cancer, testicular cancer (seminoma, nonseminoma), cervical cancer, placental choriocarcinoma, glioblastoma multiforme, brain tumor, head and neck cancer, thyroid cancer, mesothelioma, gastrointestinal tract Gastrointestinal stromal tumor (GIST), gallbladder cancer, bile duct cancer, adrenal gland cancer, squamous cell carcinoma, leukemia, malignant lymphoma, plasmacytom
- CDN derivative or antibody drug conjugate of the present invention can be suitably administered to mammals, but is more preferably human.
- the dosage and administration concentration can be appropriately selected from formulation additives and the like usually used in this field and applied. Can be.
- the CDN derivatives or antibody drug conjugates of the present invention can be administered as a pharmaceutical composition comprising one or more pharmaceutically compatible ingredients.
- the pharmaceutical compositions typically include one or more pharmaceutical carriers, such as sterile liquids, such as water and oils (oil, oils of petroleum, animal, vegetable, or synthetic origin, such as peanut oil, Soybean oil, mineral oil, sesame oil, etc.))))). Water is a more typical carrier when the pharmaceutical composition is administered intravenously. Saline solutions and aqueous dextrose and glycerol solutions can also be employed as liquid carriers, particularly for injectable solutions. Suitable pharmaceutical excipients are known in the art.
- the compositions may also contain minor amounts of wetting or emulsifying agents, or pH buffering agents, if desired. Examples of suitable pharmaceutical carriers are described in W. Martin, "Remington's Pharmaceutical Sciences". The formulation corresponds to the mode of administration.
- Methods of introduction include, but are not limited to, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, and subcutaneous routes. Administration can be, for example, by infusion or bolus injection. In certain preferred embodiments, administration of the CDN derivative or antibody drug conjugate is by injection. Parenteral administration is a preferred route of administration.
- a pharmaceutical composition comprising the antibody drug conjugate is formulated in accordance with routine procedures as a pharmaceutical composition adapted for intravenous administration to humans.
- compositions for intravenous administration are solutions in sterile isotonic aqueous buffer.
- the medicament may also include a solubilizing agent and a local anesthetic such as lignocaine to ease pain at the site of the injection.
- the components are combined separately or as a dry lyophilized powder or anhydrous concentrate in a hermetically sealed container such as an ampoule or sachet indicating the amount of active agent, or together in unit dosage form. Mix and supply either.
- the pharmaceutical composition is to be administered by infusion, it can be dispensed, for example, with an infusion bottle containing sterile pharmaceutical grade water or saline.
- an ampoule of sterile water for injection or saline can be provided, for example, so that the ingredients can be mixed prior to administration.
- the pharmaceutical composition may be provided as a solution.
- the pharmaceutical composition of the present invention may be a pharmaceutical composition containing only the CDN derivative or antibody drug conjugate of the present application, or a pharmaceutical containing the CDN derivative or antibody drug conjugate and at least one other therapeutic agent for cancer. It may be a composition.
- the CDN derivatives or antibody drug conjugates of the present invention can also be administered with other cancer therapeutics, thereby enhancing anticancer effects.
- the other anticancer agent used for such a purpose may be administered to an individual simultaneously or separately with the CDN derivative or the antibody drug conjugate, or may be administered at different administration intervals. Good.
- cancer therapeutic agent examples include abraxane, carboplatin, cisplatin, gemcitabine, irinotecan (CPT-11), paclitaxel, pemetrexed, sorafenib, vinblastin or WO2003 / 03804H, described in International Publication No. WO2003 / 038043H, analog H-L, and brochure described in Analogue H-L.
- Leuprorelin, goserelin, etc. estramustine phosphate, estrogen antagonists (tamoxifen, raloxifene, etc.), aromatase inhibitors (anastrozole, letrozole, exemestane, etc.), immune checkpoint inhibitors (nivolumab, ipilimumab, etc.) ) And the like, but are not limited as long as they have antitumor activity.
- Such a pharmaceutical composition may be formulated as a lyophilized preparation or a liquid preparation as a preparation having the selected composition and the required purity.
- a lyophilized formulation it may be a formulation containing appropriate formulation additives used in this field.
- liquid preparations can be formulated as liquid preparations containing various preparation additives used in this field.
- the antibody drug conjugate contained in the pharmaceutical composition of the present invention has an affinity for the antibody drug conjugate for the antigen, that is, a dissociation constant (Kd value) for the antigen.
- Kd value dissociation constant
- the higher the affinity (the lower the Kd value) the more the drug effect can be exerted even with a small dose. Therefore, in determining the dose of the antibody drug conjugate, the dose can also be set based on the affinity between the antibody drug conjugate and the antigen.
- the CDN derivative or antibody drug conjugate of the present invention is administered to humans, for example, about 0.001 to 100 mg / kg may be administered once or several times at intervals of 1 to 180 days. Good.
- room temperature indicates 15 ° C. to 35 ° C.
- acetonitrile dehydrated acetonitrile (dehydrated) -Super- sold by Kanto Chemical or acetonitrile (ultra-dehydrated) sold by Wako Pure Chemical Industries was used.
- pyridine pyridine (dehydrated) -Super- sold by Kanto Chemical was used.
- Silica gel chromatography was performed using Biotage SNAP Ultra (manufactured by Biotage), Chromatorex Q-Pack SI (manufactured by Fuji Silysia) or Purif-Pack-Ex SI (manufactured by Shoko Science).
- DIOL silica gel column chromatography was performed using Chromatorex Q-pack DIOL (manufactured by Fuji Silysia).
- C18 silica gel column chromatography was performed using Biotage SNAP Ultra C18 (manufactured by Biotage).
- Amino silica gel column chromatography was performed using Biotage SNAP Isolate NH 2 (manufactured by Biotage).
- Preparative HPLC was carried out using a SHIMADZU SPD-M10A HPLC system (Shimadzu Corporation) or the like.
- the preparative column used was Kinetex (5 ⁇ m, C18, 100 mm, 250 ⁇ 30.0 mm, manufactured by Phenomenex) or Kinetex (5 ⁇ m, C18, 100 mm, 250 ⁇ 21.2 mm, manufactured by Phenomenex).
- the LC / MS measurement was performed under the following conditions [column: Develosil Combi-RP, 5 ⁇ m, 50 ⁇ 2.0 mm (manufactured by Nomura Chemical), mobile phase: 0.1% formic acid in acetonitrile / 0.1% formic acid Aqueous solution, 0.1% acetonitrile formic acid solution: 2% -100% (0-5 minutes or 0-10 minutes)].
- Step 1 7- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5-iodo-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidin-4-amine
- Step 2 7- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5- (3,3-diethoxypropa -1-In-1-yl) -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-amine N, N-dimethylformamide (3.0 mL) -tetrahydrofuran of the compound (910 mg) obtained in Step 1 above (9.0 mL) A propargyl aldehyde dimethyl acetal (1.01 mL), triethylamine (0.392 mL), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) (163 mg), and copper (I) iodide (53.6 mg) were added to the mixed solution.
- Step 3 2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7,8,9-tetrahydro- 2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd]
- azulene 10% palladium on carbon (M) wet 500 mg was added to a solution of the compound (878 mg) obtained in the above step 2 in ethanol (8.8 mL). Under a hydrogen atmosphere, the mixture was stirred at room temperature for 9 hours. After filtering off the catalyst, the mixture was washed with dichloromethane, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
- Step 4 6-benzoyl-2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7,8, 9-Tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene
- a solution of the compound obtained in the above step 3 (2.17 g) in dichloromethane (21.7 mL) at room temperature was treated with pyridine (1.
- Step 5 6-benzoyl-2- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7, 8,9-Tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene
- a mixed solution of hydride-pyridine (0.30 mL) and pyridine (1.88 mL) was added, and the mixture was stirred at 0 ° C.
- Step 6 6-benzoyl-2- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [Di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene N, N-diisopropylethylamine (1.02 mL) and 2-cyanoethyl N, N-diisopropylchlorophosphoramidite (1.07 mL) were added to a dichloromethane (23.9 mL) solution of the compound (1.98 g) obtained in Step 5.
- Step 7 6-benzoyl-2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3-O- [hydroxy (oxo) - ⁇ 5 -phosphanyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7,8, 9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene
- acetonitrile 6.67 mL
- Acetic acid pyridine salt (335 mg) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 15 minutes.
- Step 8 Commercially available (ChemGenes) N-benzoyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2'-O- ⁇ ( 2-Cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ adenosine (1.31 g) was azeotroped three times with dehydrated acetonitrile (10 mL), and the last one was left with about 5 mL of acetonitrile, leaving molecular Sieves 3A, 1/16 (5 pellets) were added.
- Step 10 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-bis ⁇ [Tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene- 2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] Pentaokisajiho Sphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) 28% aqueous ammonia (5 mL) was added to a solution of the compound (507 mg) obtained in the above step 9 in m
- Step 11 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14 (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -Flo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Triethylamine trihydrofluoride (3.84 mL) was added to the compound (301 mg) obtained in the above step 10, and the mixture was stirred at 45 ° C for 3 hours.
- Example 2 Synthesis of CDN2 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10 -Bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 , 8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10-dione (example Diastereomer of compound 1 described in 1) 4)
- Step 1 N-benzoyl-3′-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2′-O- [hydroxy (oxo) - ⁇ 5 -phosphanyl] adenosine N-benzoyl-5′-O— commercially available (ChemGenes) [Bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2'-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propan-2-yl)
- the reaction was carried out using [amino] phosphanyl ⁇ adenosine (962 mg) in the same manner as in Step 1 of Example 1 to obtain a solution of the title compound in acetonitrile. This acetonitrile solution was used for the next reaction as it was.
- Step 2 Using the compound obtained in the above Step 1 and the compound (1.00 g) obtained in Step 6 of Example 1, a reaction was carried out in the same manner as in Step 8 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 4 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-bis ⁇ [Tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene- 2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] Pentaokisajiho Sphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Using the compound (367 mg) obtained in the above Step 3, a reaction was carried out in the same manner as in Step 10 of Example 1 to give diastere
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 958 (M + H) ⁇ +> .
- Diastereomer 4 (high polarity) MS (ESI) m / z: 958 (M + H) ⁇ +> .
- Step 5 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14 (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -Flo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 4 of compound 1) Using the compound (diastereomer 4) (101 mg: containing impurities) obtained in the above step 4, a reaction was carried out in the same manner as in step 11 of Example 1, and then purified under the following [purification conditions].
- Example 3 Synthesis of CDN3 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -2,10,15,16-tetra Hydroxy-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decine-2,10-dione
- Step 1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14 (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (olate)
- Example 1 Triethylamine (0.27 mL) and iodomethane (60 ⁇ L) were added to a solution of the compound (diastereomer 1) (30.0 mg) obtained in Step 11 in acetone (0.5 mL) -water (0.2 m
- Step 1 The reaction of Step 7 was carried out on the following scale (raw material: 1.01 g). Acetonitrile solution of the obtained compound and commercially available (Wuhu Nuwei Chemistry) 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2 As in Step 8 of Example 1 using '-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ -N- (2-methylpropanoyl) guanosine (954 mg) The reaction was performed by the procedure. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 2 N- ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -14- (6-benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6 -Tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -10- (2-cyanoethoxy) -2-oxo-2-sulfanyl-10 - sulfanyl isopropylidene octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] Pentaokisa Diphosphacyclotetradecin-7-yl] -6-oxo-6,9-dihydro-1H-pur
- Step 3 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (2-amino-6-oxo-1,6-dihydro-9H-purine- 9-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5 6 tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9 , 11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Using the compound (357 mg) obtained in the above Step 3, a reaction was carried out in the same
- Step 4 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (2-amino-6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl) -15,16- Dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H 5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis ( Thiolate) Using the compound (241 mg) obtained in the above Step 3, a reaction was carried out in the same manner as in Step 11 of Example 1, and the diastereomer on the phosphorus atom
- the two diastereomers of the compound were each obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile] and preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% -20% (0 min-40 min)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to give diastereomer 1 (56.7 mg) and diastereomer 2 (25) of the title compound.
- Step 1 2 ', 3', 5'-tri-O-acetyl-1- [2-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) ethyl] inosine 2 ', 3', 5'-tri-O-
- 2- (trimethylsilyl) ethyl (2-hydroxyethyl) carbamate (3.12 g) and triphenylphosphine (3.99 g) were added, and then dipropane was added.
- Step 2 5′-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -1- [2-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) ethyl] inosine
- the compound obtained in the above step 1 To a solution of 3.01 g) in tetrahydrofuran (15 mL) -methanol (15 mL) was added potassium carbonate (100 mg), and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Acetic acid (83 ⁇ L) was added to the reaction solution, the mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was azeotroped with pyridine.
- Step 3 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -1- [2-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ Amino) ethyl] inosine Imidazole (811 mg) and tert-butyl (chloro) dimethylsilane (861 mg) were added to a dichloromethane (18 mL) solution of the compound (3.61 g) obtained in the above step 2, and the mixture was stirred at room temperature for 17 hours. Stirred.
- Phenyl) (phenyl) methyl] -2′-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -1- [2-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) ethyl] inosine (1.31 g) was obtained respectively.
- Step 4 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2'-O- ⁇ (2-cyanoethoxy)] di (propane -2-yl) amino] phosphanyl ⁇ -1- [2-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) ethyl] inosine
- Step 5 The same reaction as in Step 7 of Example 1 was performed on the following scale (raw material: 910 mg). Using an acetonitrile solution of the obtained compound and the compound (950 mg) obtained in the above step 4, a reaction was carried out in the same manner as in step 1 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 6 2- (trimethylsilyl) ethyl (2- ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -14- (6-benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H- 2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -10- (2-cyanoethoxy) -2- oxo-2-sulfanyl-10-sulfanyl isopropylidene octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11 [2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecin-7-yl] -6-oxo-6,9-dihydro-1H-
- Step 7 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10 -Dioxo-7- ⁇ 6-oxo-1- [2-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) ethyl] -1,6-dihydro-9H-purin-9-yl ⁇ -14- ( 6,7,8,9-Tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 1146 (M + H) ⁇ +> .
- Diastereomer 2 (high polarity) MS (ESI) m / z: 1146 (M + H) ⁇ +> .
- Step 8-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [1- (2-aminoethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl] -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Triethylamine trihydrofluoride (1.31 mL) was added to the compound
- Step 8-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [1- (2-aminoethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl] -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (diastereomer 2) (133 mg: containing impurities) obtained in
- Example 6 Synthesis of CDN6 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- [1- (2-hydroxyethyl) -6-oxo-1,6 -Dihydro-9H-purin-9-yl] -2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta Oxadiphosphacyclotetradecine-2,10-dione
- Step 1 2 ′, 3 ′, 5′-Tri-O-acetyl-1- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethyl) inosine
- 2 ′, 3 ′, 5′- To a suspension of tri-O-acetylinosine (10.0 g) in tetrahydrofuran (100 mL) was added 2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethane-1-ol (5.37 g) and triphenylphosphine.
- Step 2 5′-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -1- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethyl) inosine
- the compound obtained in the above Step 1 (10.
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 2 of Example 5 to obtain the title compound as a mixture with triphenylphosphine oxide (7.21 g).
- Step 3 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -1- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy (Ethyl) inosine
- a reaction was conducted in the same manner as in Step 3 of Example 5 to give the title compound (2.17 g) and the positional isomer of the title compound.
- Step 4 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -1- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ Ethyl) -2′-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ inosine
- Example 5 was performed using the compound (2.17 g) obtained in the above Step 3. The reaction was carried out in the same manner as in Step 4, to obtain the title compound (2.65 g) as a mixture of diastereomers on a phosphorus atom.
- Step 5 The same reaction as in Step 7 of Example 1 was performed on the following scale (raw material: 935 mg). Using an acetonitrile solution of the obtained compound and the compound (950 mg) obtained in the above step 4, a reaction was carried out in the same manner as in step 1 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 6 3-( ⁇ (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -14- (6-benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetra Azabenzo [cd] azulen-2-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- [1- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ Ethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl] -2-oxo-2-sulfanyl-10-sulfanilideneoctahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano- 2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetrade
- Step 7 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- [ 1- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl] -2,10-dioxo-14- (6, 7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 ⁇ Flow [3,2-1] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 1003 (M-C 6 H 15 Si + 2H) + .
- Diastereomer 2 (high polarity) MS (ESI) m / z: 1003 (M-C 6 H 15 Si + 2H) + .
- Step 8-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- [1- (2-hydroxyethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H- Purin-9-yl] -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (diastereomer 1) (88.5 mg: containing impurities) obtained in the above
- Step 8-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- [1- (2-hydroxyethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H- Purin-9-yl] -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (diastereomer 2) (70.7 mg: containing impurities) obtained in the above
- Example 7 Synthesis of CDN7 N- (2- ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-2,10- Bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 8 methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyn-7-yl] -6-oxo - 6,9-dihydro-1H-purin-1-yldiethyl) -2-hydroxyacetamide
- Step 1-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- ⁇ 1- [2- (2-hydroxyacetamido) ethyl] -6-oxo-1,6 -Dihydro-9H-purin-9-yl ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene-2 - yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1)
- Example 5 To a solution of the compound (10.0 mg)
- the reaction solution is diluted with a 10 mM aqueous solution of triethylammonium acetate, and is subjected to C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous solution of triethylammonium acetate / acetonitrile] and preparative HPLC [10 mM aqueous solution of triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 0% -30% (0 minute- 40 minutes)].
- the obtained compound (triethylamine salt) was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (10.5 mg).
- Step 1-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- ⁇ 1- [2- (2-hydroxyacetamido) ethyl] -6-oxo-1,6 -Dihydro-9H-purin-9-yl ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene-2 - yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2)
- Example 5 Using the compound (30.0 mg) obtained in Step
- Example 8 Synthesis of CDN8 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purine-9- Yl @ -15,16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene-2 - yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecine-2,10-dione
- Step 1 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2 ', 3'-bis-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-chloroadenosine known in the literature (J. Med. Chem., 1989, 32, 1135-1140) and N, N-dimethylformamide (145 mL) of 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-chloroadenosine (29.1 g).
- Step 2 N-acetyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2 ', 3'-bis-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-chloroadenosine Step 1 above Acetic anhydride (140 mL) and 4-dimethylaminopyridine (515 mg) were added to a solution of the compound (34.9 g) obtained in (1) in pyridine (210 mL), and the mixture was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 21 hours.
- Step 3 N-acetyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-chloroadenosine
- tetrahydrofuran 200 mL
- a tetrahydrofuran solution of tetrabutylammonium fluoride (about 1.0 M, 100 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 3 hours.
- a saturated aqueous ammonium chloride solution was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with dichloromethane.
- Step 4 N-acetyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-chloroadenosine
- N-dimethylformamide 178 mL
- imidazole 5.94 g
- tert-butyldimethylchlorosilane 6.44 g
- Step 5 N-acetyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-chloro-2'-O- ⁇ (2 -Cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ adenosine
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 6 of Example 1 to give the title.
- Step 6 N, N-diethylethanaminium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (6-acetamido-2-chloro-9H-purin-9-yl) -14- (6 -Benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl ] oxy ⁇ 10- (2-cyano-ethoxy) -2-oxo-10-sulfanyl isopropylidene octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2-thiolate
- Step 6 N-diethylethana
- Step 7-1) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16- Bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [ cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10 Pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-dione Ethylenediamine (256 ⁇ L) was added to a solution of the compound (diastereomer 1) (49
- Step 7-2 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-aminoethyl) amino] -9H- Purine-9-yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3, 5,6 tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6 , 9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Ethylenediamine (25.8 ⁇ L) was added
- Step 8-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H , 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10 Bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (37.2 mg) obtained in the above Step 7-1, a reaction was carried out in the same manner as in Step 11 of Example
- Step 8-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H , 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10 Bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (23.7 mg) obtained in the above Step 7-2, a reaction was carried out in the same manner as in Step 11 of Example
- Step 1-1 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16- Bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [ cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10 ] Pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-dione To a solution of the compound (diastereomer 1) (50.1 mg) obtained in Step 6 of Example 8 in methanol (1.29)
- Step 1-2 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H- Purine-9-yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3, 5,6 tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6 , 9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Example 8 To a solution of the compound (diastereomer 2) obtained in
- Step 2-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H , 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10 Bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the mixture (39.4 mg) obtained in the above Step 1-1, a reaction was carried out in the same manner as in Step 11 of Example
- Step 2-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H , 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10 Bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (26.1 mg) obtained in the above Step 1-2, a reaction was carried out in the same manner as in Step 11 of Example 1 and
- Example 10 Synthesis of CDN10 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-amino-2-methylpropyl) amino] -9H- Purin-9-yl ⁇ -15,16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd ] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] Pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-dione
- Step 1 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-amino-2-methylpropyl) amino ] -9H-Purin-9-yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H- 2,3,5,6-aza-benzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1 , 3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Example 8 To a solution of the compound (diastereo
- Step 2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[(2-amino-2-methylpropyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decin - 2,10-bis (thiolate) Using the compound obtained in the above step 1 (16.3 mg: containing impurities), a reaction was carried out
- Example 11 Synthesis of CDN11 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [6-Amino-2- (aminomethyl) -9H-purin-9-yl] -15 16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-dione
- Step 1 5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-cyanoadenosine 2-cyanoadenosine (440 mg) known in the literature (J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8502-8504) 4,4′-Dimethoxytrityl chloride (642 mg) was added to a pyridine (8.00 mL) solution, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours under a nitrogen atmosphere. After methanol (10 mL) was added to the reaction solution to stop the reaction, the reaction solution was concentrated under reduced pressure.
- Step 2 5′-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) methyl] adenosine
- a solution of lithium aluminum hydride in tetrahydrofuran (about 2.5 M, 29.0 mL) was added to a solution of 3 g) in tetrahydrofuran (500 mL), and the mixture was stirred at 40 ° C. for 2 hours under a nitrogen atmosphere.
- the reaction solution was cooled on ice, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate (450 mL) was added, and the mixture was stirred for 10 minutes.
- Step 3 N-benzoyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) methyl] adenosine Obtained in Step 2 above
- Chlorotrimethylsilane (15.0 mL) was added to a solution of the compound (10.8 g) in pyridine (70.0 mL), and the mixture was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 2 hours.
- Benzoyl chloride (8.44 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was further stirred for 2 hours.
- reaction solution was cooled to 0 ° C., water (21.0 mL) was added, and the mixture was stirred for 10 minutes. Then, 28% aqueous ammonia (31.4 mL) was added, and the mixture was further stirred at the same temperature for 20 minutes. After the temperature was raised to room temperature and further stirred for 3 hours, the reaction solution was concentrated under reduced pressure. The residue was suspended in ethyl acetate and the solid was filtered off. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography [hexane / ethyl acetate / methanol / 0.1% triethylamine] to obtain the title compound (9.47 g).
- Step 4 N-benzoyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy) ] Carbonyl @ amino) methyl] adenosine
- the title compound (3.13 g) was obtained in the same manner as in Example 4, Step 4, using the compound (9.47 g) obtained in Step 3 above.
- Step 5 N-benzoyl-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2'-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [Di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ -2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) methyl] adenosine
- the compound (1.49 g) obtained in the above Step 4 in dichloromethane ( N, N-diisopropylethylamine (1.58 mL) and 2-cyanoethyl N, N-diisopropylchlorophosphoramidite (1.04 mL) were added to the solution (15.5 mL), and the mixture was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 2 hours.
- Step 6 N, N-diethylethaneaminium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-benzamide-2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) Methyl] -9H-purin-9-yl ⁇ -14- (6-benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl ) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -10- (2-cyanoethoxy) -2-oxo-10-sulfanilideneoctahydro-2H, 10H, 12H-5,8 - methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,
- Step 7-1) Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl) ⁇ Amino) methyl] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9- tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2 l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Step 7-2) Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl) ⁇ Amino) methyl] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9- tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2 l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Step 8-1 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl) ⁇ Amino) methyl] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6- tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11 , 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Triethylamine trihydrofluoride (700 ⁇ L)
- Step 8-2 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-amino-2-[( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl) ⁇ Amino) methyl] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6- tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11 , 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Using the compound (45.2 mg) obtained in the above Step 7-2, a
- Step 9-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [6-Amino-2- (aminomethyl) -9H-purin-9-yl] -15,16-dihydroxy-2 , 10-Dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 8 methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) To a solution of the compound (19.1 mg) obtained in the above step 8-1 in tetrahydrofuran (576 ⁇ L) was added a te
- Step 9-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [6-Amino-2- (aminomethyl) -9H-purin-9-yl] -15,16-dihydroxy-2 , 10-Dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 8 methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (37.1 mg) obtained in the above Step 8-2, a reaction was carried out in the same manner as in the above Step 9-1 to obtain the title compound (12.8
- Example 12 Synthesis of CDN12 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [6-Amino-2- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl] -15 16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-dione
- Step 1 6-chloro-2-iodo-9- ⁇ 2,3,5-tris-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -9H-purine 6-chloro commercially available (Amadis Chemical)
- -2-iodo-9- ⁇ -D-ribofuranosyl-9H-purine 9.65 g
- ethylene glycol dimethyl ether 120 mL
- N, N-diisopropylethylamine (40.7 mL) and tert-butyldimethylamine Silyltrifluoromethanesulfonate 26.9 mL
- reaction solution was cooled to 0 ° C., and the reaction solution was quenched with a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate, and extracted with dichloromethane. After the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the desiccant was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography [hexane / ethyl acetate] to obtain the title compound (13.7 g).
- Step 2 2-[(benzoyloxy) methyl] -6-chloro-9- ⁇ 2,3,5-tris-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -9H-purine Step 1 above
- tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) (2.10 g) and benzyloxymethyl zinc iodide prepared by the following method (About 0.9 M, 30.2 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 20 hours.
- reaction solution was quenched by adding a saturated aqueous solution of ammonium chloride and then extracted with dichloromethane. After the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the desiccant was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography [hexane / ethyl acetate] to obtain the title compound (7.29 g).
- Step 3 2-[(benzoyloxy) methyl] -6-chloro-9- ⁇ -D-ribofuranosyl-9H-purine
- tetrahydrofuran 47.7 mL
- tetrabutylammonium fluoride about 1 M, 38 mL
- the reaction solution was quenched by adding a saturated aqueous solution of ammonium chloride and then extracted with dichloromethane.
- Step 4 2-[(benzoyloxy) methyl] -9- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6-chloro-9H-purine 4,4′-Dimethoxytrityl chloride (2.30 g) was added to a solution of the obtained compound (2.36 g) in pyridine (56 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 17 hours under a nitrogen atmosphere. Ethanol (20 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was further stirred for about 10 minutes, and then concentrated under reduced pressure.
- Step 5 2-[(benzoyloxy) methyl] -9- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6-Chloro-9H-purine N, N-diisopropylethylamine (1.89 mL) and tert-butyldimethylamine were added to a solution of the compound (2.61 g) obtained in the above step 4 in ethylene glycol dimethyl ether (72.0 mL).
- Step 8-1 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- [6-amino-2- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl ] -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetra Azabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11, 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) To a methanol (0.500 mL) solution of the compound (diastereomer 1) (3
- Step 8-2 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- [6-amino-2- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl ] -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetra Azabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11, 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) To a solution of the compound (diastereomer 2) (37.7 mg) obtained in the above step
- Step 9-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [6-Amino-2- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl] -15,16-dihydroxy-2 , 10-Dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 8 methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) Using the compound obtained in the above step 8-1 (22.0 mg: containing impurities), a reaction was carried out in the same manner as in step 11 of Example 1, and purification was carried out under the following [purities
- the compound was obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] Preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 2% -30% (0-30 minutes)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to a sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (8.0 mg).
- Step 9-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [6-Amino-2- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl] -15,16-dihydroxy-2 , 10-Dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 8 methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) Using the compound (19.3 mg) obtained in the above step 8-2, a reaction was carried out in the same manner as in step 11 of Example 1 and then purified under the following [purification conditions] to give the following
- Example 13 Synthesis of CDN13 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 , 16-Dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decin - 2,10-dione
- Step 1 9- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6-chloro-9H-purine Article Known (J. Org. Chem.
- Step 2 9- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-O- ⁇ (2-cyanoethoxy)] di (propane -2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -6-chloro-9H-purine
- step 2 9- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-O- ⁇ (2-cyanoethoxy)] di (propane -2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -6-chloro-9H-purine
- Step 3 Example 1 The same reaction as in step 7 was carried out on the following scale (raw material: 1.84 g). Using an acetonitrile solution of the obtained compound and the compound (1.62 g) obtained in the above step 2, a reaction was carried out in the same manner as in step 8 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 4 3- ⁇ [(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -14- (6-benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetra Azabenzo [cd] azulen-2-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- (6-chloro-9H-purin-9-yl) -2-oxo- 2-sulfanyl-10-sulfanyl isopropylidene octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2 , 10] pentaoxadiphosphacyclotetradecin-10-yl] oxy ⁇ propanenitrile Using the crude product obtained in the above Step 3, a reaction was carried out in the crude
- Step 5 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 6-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purine-9- Yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6- Tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11 , 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Ethylenediamine (0.352 mL) and triethylamine (0.7
- Step 6-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-dihydroxy- 2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 , 8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (diastereomer 1) obtained in the above step 5 (122 mg: containing
- the title compound was obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile] and preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% -30% (0 min-40 min)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to Sodium Salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (29.6 mg).
- Step 6-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 6-[(2-aminoethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-dihydroxy- 2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 , 8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (diastereomer 2) (119 mg: containing impurities) obtained:
- the title compound was obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile] and preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% to 25% (0 to 40 minutes)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to Sodium Salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (15.6 mg).
- Example 14 Synthesis of CDN14 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- ⁇ 6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purine- 9-yl ⁇ -2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decin - 2,10-dione
- Step 1 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7 ⁇ 6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6- tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11 , 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- 2-Aminoethanol (0.330 mL) and triethylamine (0.769 mL)
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 1002 (M + H) ⁇ +> .
- Diastereomer 2 (high polarity) MS (ESI) m / z: 1002 (M + H) ⁇ +> .
- Step 2-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- ⁇ 6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ - 2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 , 8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (diastereomer 1) (111 mg: containing impurities) obtained in the above
- the title compound was obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile] and preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% -30% (0 min-40 min)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to Sodium Salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (47.1 mg).
- Step 2-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- ⁇ 6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ - 2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 , 8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (diastereomer 2) (102 mg: containing impurities) obtained in the above
- the title compound was obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile] and preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% to 25% (0 to 40 minutes)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to Sodium Salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (27.1 mg).
- Example 15 Synthesis of CDN15 N- [2-( ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-2,10 -Bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5 , 8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyn-7-yl]-9H-purine -6-yl ⁇ amino) ethyl] -2-hydroxyacetamide
- Step 1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- (6- ⁇ [2- (2-hydroxyacetamido) ethyl] amino ⁇ -9H-purine- 9-yl) -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2,10 -Bis (thiolate)
- Example 13 Using the compound (10.0 mg) obtained in Step 6-2, a reaction was carried out in the same manner as in Step 1-1 of Example 7,
- the title compound was obtained as the triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile], preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% -35% (0 min-40 min)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (6.6 mg).
- Example 16 Synthesis of CDN16 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 2-amino-6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purine-9- Yl @ -15,16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene-2 - yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecine-2,10-dione
- Step 1 2-acetamido-2 ', 3', 5'-tri-O-acetyl-N- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethyl) adenosine
- Commercially available (Tokyo Kasei Kogyo) 6-chloro- 2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethane-1-amine (3.49 g) was added to a solution of 9- ⁇ -D-ribofuranosyl-9H-purin-2-amine (5.00 g) in ethanol (30 mL).
- Step 2 2-acetamido-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -N- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ ethyl) adenosine Obtained in Step 1 above.
- a methanol solution of sodium methoxide (1.0 M, 6.64 mL) was added to a solution of the compound (4.00 g) in dichloromethane (40 mL), and the mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour.
- Acetic acid (0.413 mL) and pyridine (0.5 mL) were added to the reaction solution to stop the reaction, and the reaction solution was concentrated under reduced pressure.
- Step 3 2-acetamido-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -N- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl ) (Silyl] oxydiethyl) adenosine
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 3 of Example 5 to give the title compound (1.75 g) and the title compound.
- Step 4 2-acetamido-5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -N- (2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl ) Silyl] oxy ⁇ ethyl) -2'-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ adenosine Using the compound (1.75 g) obtained in Step 3 above.
- Step 5 Example 1 The same reaction as in step 7 was carried out on the following scale (raw material: 981 mg). Using an acetonitrile solution of the obtained compound and the compound (1.05 g) obtained in the above Step 4, a reaction was carried out in the same manner as in Step 8 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 7 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- ⁇ 2-amino-6-[(2- ⁇ [tert-butyl (dimethyl) [Silyl] oxy ⁇ ethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-dioxo-14- (6,7,8 , 9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3 , 2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclote
- Step 8-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 2-amino-6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H , 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10 Bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (diastereomer 1) (70.4 mg: containing impurities) obtained in the above step 7, a reaction was carried out in the
- Step 8-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- ⁇ 2-amino-6-[(2-hydroxyethyl) amino] -9H-purin-9-yl ⁇ -15 16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H , 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne 2,10 Bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (diastereomer 2) obtained in the above step 7 (65.1 mg: containing impurities), a reaction was carried out in the compound
- Example 17 Synthesis of CDN17 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- [6- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl]- 2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decine-2,10-dione
- Step 1 6-[(Benzoyloxy) methyl] -9- ⁇ 2,3,5-tris-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -9H-purine
- 6-chloro-9- ⁇ 2,3,5-tris-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -9H-purine (10 0.7 g) to carry out a reaction in the same manner as in Step 2 of Example 12 to obtain the title compound (10.4 g).
- Step 2 6-[(benzoyloxy) methyl] -9- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -9H-purine
- tetrabutylammonium fluoride in tetrahydrofuran (about 1 M, 49.4 mL)
- Acetic acid (2.83 mL) was added to the reaction solution, which was then concentrated under reduced pressure.
- Step 3 6-[(benzoyloxy) methyl] -9- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -9H-purine
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 3 of Example 5 to give the title compound (2.09 g) and the positional isomer of the title compound 6-[(benzoyloxy) methyl] -9- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D -Ribofuranosyl -9H-purine (1.81 g) was obtained.
- Step 4 6-[(benzoyloxy) methyl] -9- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -9H-purine
- Step 5 The same reaction as in Step 7 of Example 1 was performed on the following scale (raw material: 783 mg). Using an acetonitrile solution of the obtained compound and the compound (765 mg) obtained in the above Step 4, a reaction was carried out in the same manner as in Step 8 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 6 ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -14- (6-benzoyl-6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetra Azabenzo [cd] azulen-2-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -10- (2-cyanoethoxy) -2-oxo-2-sulfanyl-10-sul Furnishing isopropylidene octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecin-7-yl] -9H-purin-6-yl ⁇ methyl benzoate Using the crude product obtained in the above Step
- Step 7 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- [ 6- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl] -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd ] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] Pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Using the compound (345 mg) obtained in the above Step 6, a reaction was carried out in the same manner as in Step 10 of Example 1 to give di
- Diastereomer 1 low polarity MS (ESI) m / z: 973 (M + H) ⁇ +> .
- Diastereomer 2 high polarity MS (ESI) m / z: 973 (M + H) ⁇ +> .
- Step 8-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- [6- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl] -2,10-dioxo -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano- 2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (diastereomer 1) (101 mg: containing impurities) obtained in the above step 7, a reaction was carried out in the same manner as in step 11 of Example 1, and then purified under the following [purification conditions
- the title compound was obtained as a triethylamine salt.
- [Purification conditions] C18 silica gel column chromatography [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile], preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 5% -30% (0 min-40 min)].
- the obtained triethylamine salt was subjected to salt exchange in the same manner as in [Conversion to sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to give the title compound (59.2 mg).
- Step 8-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-7- [6- (hydroxymethyl) -9H-purin-9-yl] -2,10-dioxo -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano- 2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (diastereomer 2) (88.5 mg: containing impurities) obtained in the above step 7, a reaction was carried out in the same manner as in step 11 of Example 1, and then purified under the following [purification conditions
- Example 18 Synthesis of CDN18 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [4-amino-5- (3-aminopropyl) -7H-pyrrolo [2,3-d ] Pyrimidin-7-yl] -15,16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [ cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10 ] Pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-dione
- Step 1 4-azido-5-iodo-7- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine Literature known (Synth. Commun. 2012, 42,358-374) of 4-chloro-5-iodo-7- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine (17 .96 g) in N, N-dimethylformamide (90 mL) was added with tetrabutylammonium azide (10.1 g), and the mixture was stirred at 80 ° C.
- reaction solution was returned to room temperature, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate and ethyl acetate were added to the reaction solution, and the mixture was extracted with ethyl acetate.
- the organic layer was washed with saturated saline and dried over anhydrous sodium sulfate. The drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography [hexane / ethyl acetate] to obtain the title compound (17.66 g).
- Step 2 4-azido-7- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -5- [3-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) prop-1-yne -1-yl] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine
- a compound (9.64 g) obtained in the above step 1 was mixed with a mixed solution of N, N-dimethylformamide (30 mL) and tetrahydrofuran (100 mL).
- Step 3 7- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -5- [3-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) propyl] -7H-pyrrolo [2 3-d] Pyrimidin-4-amine
- methanol 70 mL
- tetrahydrofuran 70 mL
- the filtrate was concentrated under reduced pressure.
- Step 4 N, N-dibenzoyl-7- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -5- [3-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) propyl]- 7H-Pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-amine
- dichloromethane 60 mL
- pyridine 1.69 mL
- benzoyl chloride (2 .01 mL)
- Step 5 N-benzoyl-7- ⁇ -D-ribofuranosyl-5- [3-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) propyl] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-amine
- tetrahydrofuran 250 mL
- Acetic acid 1.07 mL was added to the reaction solution at 0 ° C., and the mixture was concentrated under reduced pressure.
- Step 6 N-benzoyl-7- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5- [3-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino ) Propyl] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-amine
- the compound obtained in the above step 5 (3.35 g) was azeotroped with pyridine, and the residue was added to a solution of anhydrous pyridine (50 mL).
- Step 7 N-benzoyl-7- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5- [3 -( ⁇ [2- (Trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) propyl] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-amine (3′-O-TBS)
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 4 of Example 8 to give the title compound (1.51 g) and N, which is a positional isomer of the title compound.
- Step 8 N-benzoyl-7- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [Di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -5- [3-( ⁇ [2- (trimethylsilyl) ethoxy] carbonyl ⁇ amino) propyl] -7H-pyrrolo [2,3 -D] Pyrimidin-4-amine Using the compound (3'-OTBS derivative) (1.51 g) obtained in the above Step 7, a reaction was carried out in the same manner as in Step 6 of Example 1 to carry out a reaction.
- Diastereomer 1 (0.77 g) and diastereomer 2 (0.48 g) of the title compound were obtained as diastereomers.
- Diastereomer 2 (high polarity) 1 H-NMR (CDCl 3 ) ⁇ : 8.36-8.28 (2H, m), 8.05 (1H, brs), 7.57-7.38 (5H, m), 7.36-7 .19 (10H, m), 6.84-6.79 (4H, m), 6.48-6.40 (1H, m), 5.02 (1H, brs), 4.65-4.42 (2H, m), 4.19-4.15 (1H, m), 4.06-3.90 (2H, m), 3.80-3.48 (11H, m), 3.32-3 .24 (1H, m), 3.17-3.03 (2H, m), 2.99-2.86 (1H, m), 2.51-2.40 (2H, m), 1.86 -1.69 (2H, m), 1.18-1.02 (12H, m), 0.85 (9H, s), 0.81-0.71 (2H, m), 0.08 (3H , S), 0.02 (3H, s) -0.01 (9H, s
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 1419 (M + H) ⁇ +> .
- Diastereomer 2 (high polarity) MS (ESI) m / z: 1419 (M + H) ⁇ +> .
- Step 10-1 2- (trimethylsilyl) ethyl (3- ⁇ 4-amino-7-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl]
- Step 10-2 2- (trimethylsilyl) ethyl (3- ⁇ 4-amino-7-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl]
- Example 12 The reaction was carried out in the same manner as in Step 8-1. Purification by preparative HPLC [10 mM aqueous triethylammonium acetate / acetonitrile, acetonitrile: 30% -60% (0 min-35 min)] gave the title compound (15 mg). MS (ESI) m / z: 1158 (M + H) ⁇ +> .
- Step 11-1 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [4-amino-5- (3-aminopropyl) -7H-pyrrolo [2 , 3-d] Pyrimidin-7-yl] -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2, 10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) To a solution of the compound (58 mg) obtained in the above step 10-1 in tetrahydrofuran (1 mL)
- Step 11-2 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [4-amino-5- (3-aminopropyl) -7H-pyrrolo [2 , 3-d] Pyrimidin-7-yl] -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2, 10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Using the compound (15 mg) obtained in the above step 10-2, a reaction was carried out in the same manner as in the above step 11-1
- Step 12-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [4-amino-5- (3-aminopropyl) -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine-7- Yl] -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (25 mg) obtained in the above step 11-1, salt exchange was carried out in
- Step 12-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- [4-amino-5- (3-aminopropyl) -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine-7- Yl] -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (7.2 mg) obtained in the above step 11-2, salt exchange was carried out in
- Example 19 Synthesis of CDN19 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10 -Bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H 5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decine-2,10-dione
- Step 1 3-Bromo-N- (prop-2-en-1-yl) -1H-pyrazolo [3,4-d] pyrimidin-4-amine
- Step 2 3-bromo-4-chloro-1H-pyrazolo [ [3,4-d] pyrimidine (8.50 g) was suspended in dioxane (140 mL), N, N, -diisopropylethylamine (12.5 mL) and allylamine (11 mL) were added at room temperature, and the mixture was stirred at the same temperature for 70 hours. did.
- Step 2 3-bromo-N- (prop-2-en-1-yl) -1- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -1H-pyrazolo [3,4-d] Pyrimidin-4-amine
- the compound (1.00 g) obtained in the above step 1 and commercially available (Ark Pharm) 1-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranose ( 2.58 g) was suspended in nitromethane (50 mL) and then dissolved by heating.
- Step 3 3-ethenyl-N- (prop-2-en-1-yl) -1- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -1H-pyrazolo [3,4-d] Pyrimidin-4-amine
- Step 4 2- (2,3,5-tri-O-benzoyl- ⁇ -D-ribofuranosyl) -6,7-dihydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene Step 3 above was azeotroped twice with benzene. (+)-10-Camphorsulfonic acid (4.2 g) and benzylidene [1,3-bis (2,4,6-trimethylphenyl) imidazolidin-2-ylidene] dichloride (480 ml) in a dichloromethane solution (480 mL) of the residue were used.
- Tricyclohexyl- ⁇ 5 -phosphanyl) ruthenium (second-generation Grubbs catalyst) (360 mg) was added, and the mixture was heated under reflux for 3 hours. A second-generation Grubbs catalyst (360 mg) was added, and the mixture was further heated to reflux for 1 hour.
- the reaction solution was cooled to room temperature, washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and a saturated saline solution in that order, and dried over anhydrous sodium sulfate. The drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography [hexane / ethyl acetate] to obtain the title compound (6.39 g).
- Step 5 2- ⁇ -D-ribofuranosyl-6,7-dihydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene Methanol (10 mL) of the compound (620 mg) obtained in Step 4 above
- a mixed solution of tetrahydrofuran 5.0 mL
- a methanol solution of sodium methoxide 1.0 M, 0.10 mL
- the reaction solution was neutralized with 1N hydrochloric acid and concentrated under reduced pressure.
- the residue was purified by silica gel column chromatography [dichloromethane / methanol] to obtain the title compound (279 mg).
- Step 6 2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7-dihydro-2H-1, 2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 1 of Example 1 to give the title compound ( 4.72 g).
- Step 7 2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7,8,9-tetrahydro- 2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene Acetic acid (3 drops with a Pasteur pipette) was added to a solution of the compound (2.12 g) obtained in the above step 6 in tetrahydrofuran (20 mL), 10% palladium carbon (AD) wet (0.82 g) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours under a hydrogen atmosphere.
- AD palladium carbon
- Step 8 6-benzoyl-2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7,8, 9-Tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene
- Step 7 6-benzoyl-2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7,8, 9-Tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene
- Step 9 6-benzoyl-2- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -6,7, 8,9-Tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene
- the compound (2.23 g) obtained in the above Step 8 the same procedure as in Example 1, Step 5
- the reaction was carried out by a procedure to give the title compound (2.69 g).
- Step 10 6-benzoyl-2- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [Di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulene
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 4 of Example 5 to give the title compound (2.93 g) as a diastereomer mixture (dia) on a phosphorus atom.
- Step 11 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2,10-bis (sulfanyl) -14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -2 , 10-dione Using the compound (1.04 g) obtained in the above step 10, a reaction was carried out in the same manner as in step 7 of Example 1 to give
- Step 12-1 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decine-2,10-bis (Thiolate) To the compound (diastereomer 1) (20 mg) obtained in the above step 11, triethylamine trihydrofluoride (1 mL) was added, and the mixture
- reaction solution was added to an ice-cooled mixed solution of a 1 M aqueous solution of triethylammonium hydrogencarbonate (3 mL) and triethylamine (1 mL) to stop the reaction.
- Purification with Sep-Pak® C18 [0.1% aqueous triethylamine / acetonitrile, acetonitrile: 0% -17%] gave the title compound (15 mg).
- Step 12-2 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decine-2,10-bis (Thiolate) Using the compound (diastereomer 2) (43 mg) obtained in the above step 11, a reaction was carried out in the same manner as in the above step 12-1, to obtain the title
- Step 13-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14 (6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (15 mg) obtained in the above Step 12-1, salt exchange was carried out in the same manner as in [Conversion to a sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to give
- Step 13-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14 (6,7,8,9-tetrahydro-2H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (34 mg) obtained in the above Step 12-2, salt exchange was carried out in the same manner as in [Conversion to a sodium salt] described in Step 11 of Example 1 to
- Example 20 Synthesis of CDN20 (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -14- (8,9-dihydro- 6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene-2 (7H) -yl) -15,16-dihydroxy-2,10-bis (sulfanyl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decine-2,10-dione
- Step 1 7- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -4-chloro-5-iodo-7H- Pyrrolo [2,3-d] pyrimidine 4-Chloro-5-iodo-7- ⁇ -D-ribofuranosyl-7H-pyrrolo [2,3; The reaction was carried out in the same manner as in Step 1 of Example 1 using -d] pyrimidine (3.15 g) to obtain the title compound (2.97 g).
- Step 2 4- (benzyloxy) -7- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5-iodo -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine
- Sodium hydride (mineral) was added to a solution of the compound (4.97 g) obtained in the above step 1 and benzyl alcohol (1.0 mL) in tetrahydrofuran (50 mL) under ice-cooling. (Containing 37% oil) (426 mg), and the mixture was heated to room temperature and stirred overnight.
- Step 3 4- (benzyloxy) -7- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5- ( 3-Hydroxyprop-1-yn-1-yl) -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine
- the compound obtained in the above step 2 (3.38 g) and 2-propyn-1-ol (1.35 mL)
- the reaction temperature was set to room temperature to obtain the title compound (2.22 g).
- Step 4 7- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -5- (3-hydroxypropyl) -3 , 7-Dihydro-4H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-one
- the reaction solvent was methanol (20 mL) -tetrahydrofuran (20 mL). The mixture was used as a mixture, and reacted in the same manner as in Step 7 of Example 19 to obtain the title compound (0.92 g).
- Step 5 2- ⁇ 2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3,5-O- (di-tert-butylsilylidene) - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -2,7,8,9-tetrahydro- 6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene
- triphenylphosphine 0.62 g
- azo Diisopropyl dicarboxylate 0.47 mL
- Step 6 2- ⁇ 5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] - ⁇ -D-ribofuranosyl ⁇ -2,7,8,9- Tetrahydro-6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 5 of Example 1 to give the title compound (1.13 g) was obtained.
- Step 7 2- (5-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -2-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -3-O- ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propane -2-yl) amino] phosphanyl ⁇ - ⁇ -D-ribofuranosyl) -2,7,8,9-tetrahydro-6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene Compound obtained in step 6 above (1.13 g), and the reaction was carried out in the same manner as in Step 4 of Example 5 except that silica gel column chromatography [hexane / ethyl acetate / 0.1% triethylamine] was used for purification.
- Step 8 N- ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -10- (2-cyanoethoxy) -14- (8,9-dihydro-6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene-2 (7H) -yl) -2-oxo-2-sulfanyl-10-sulfanilideneoctahydro- 2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha cyclotetrasiloxane decyne -7 -Yl] -9H-purin-6-yl ⁇ benzamide Using the compound obtained in the above step 7 (1.00 g),
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 1116 (M + H) ⁇ +> .
- Diastereomer 2 (high polarity) MS (ESI) m / z: 1116 (M + H) ⁇ +> .
- Step 9-1 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-bis ⁇ [Tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -14- (8,9-dihydro-6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene-2 (7H) -yl) -2,10- di oxooctahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 10 of Example 1 using the entire amount of the compound (mixture containing diaste
- Step 9-2 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -15,16-bis ⁇ [Tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -14- (8,9-dihydro-6-oxa-2,3,5-triazabenzo [cd] azulene-2 (7H) -yl) -2,10- di oxooctahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] penta-oxa-di-phospha Cyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- a reaction was carried out in the same manner as in Step 10 of Example 1 using the whole amount of the compound (mixture containing diaste
- Step 10-1 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -14- (8,9-dihydro-6-oxa-2 , 3,5-Triazabenzo [cd] azulene-2 (7H) -yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxooctahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 1) Using the compound (68 mg) obtained in the above Step 9-1, a reaction was carried out in the same manner as in Step 12-1 of Example 19, and then [Conversion to sodium salt] described in Step 11 of Example 1 Salt exchange was carried out in the same manner as in the above
- Step 10-2 Disodium (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (6-amino-9H-purin-9-yl) -14- (8,9-dihydro-6-oxa-2 , 3,5-Triazabenzo [cd] azulene-2 (7H) -yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxooctahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) (Diastereomer 2) Using the compound (58 mg) obtained in the above Step 9-2, a reaction was carried out in the same manner as in Step 12-1 of Example 19, and then [Conversion to sodium salt] described in Step 11 of Example 1 Salt exchange was carried out in the same manner as in the above
- Step 1 N- (Azaniumilacetyl) glycyl-L-phenylalanylglycine trifluoroacetate
- BACHEM N- (tert-butoxycarbonyl) glycylglycyl-L-phenylalanylglycine (3.00 g) in dichloromethane (30 mL)
- Trifluoroacetic acid (15 mL) was added to the solution at room temperature, and the mixture was stirred at the same temperature for 3 hours.
- the reaction solution was concentrated under reduced pressure, suspended in toluene, and concentrated again under reduced pressure. This concentration operation was further repeated twice.
- Step 2 N- [4- (11,12-didehydrodibenzo [b, f] azocin-5 (6H) -yl) -4-oxobutanoyl] glycylglycyl-L-phenylalanylglycine Compound obtained in Step 1 above (2.09 g) in a solution of N, N-dimethylformamide (46.4 mL) in triethylamine (0.804 mL) and 1- ⁇ [4- (11,12-didehydrodibenzo [b, f] azocin-5).
- reaction solution was diluted with dichloromethane, washed three times with ice water, and dried over anhydrous sodium sulfate. The drying agent was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. Ethyl acetate was added to the oily residue to precipitate a solid. The solvent was distilled off under reduced pressure, and diethyl ether was added to the obtained solid to form a slurry, followed by filtration to obtain the title compound (2.18 g).
- Step 4 Bis (N, N-diethylethanaminium) N- [4- (11,12-didehydrodibenzo [b, f] azocin-5 (6H) -yl) -4-oxobutanoyl] glycylglycyl-L-phenyl Alanyl-N- (2- ⁇ 9-[(5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-2,10-disulfide-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano-2 ⁇ 5 , 10 ⁇ 5 -furo [3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclo
- Step 1 1- [2- (Benzoyloxy) ethyl] -5′-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] inosine Inosine (10.0 g) in pyridine (50 mL) and N, N-dimethylacetamide ( (50 mL), 4,4′-dimethoxytrityl chloride (15.2 g) was added at 0 ° C., and the mixture was stirred at 4 ° C. for 64 hours. Methanol (2 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred for 10 minutes and concentrated to about 50 mL.
- Step 2 1- [2- (benzoyloxy) ethyl] -5′-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3′-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] inosine Using the obtained compound (3.01 g), a synthesis was carried out in the same manner as in Step 3 of Example 5 to give the title compound (1.20 g) and 1- [2- (benzoyl) which is a positional isomer of the title compound.
- Step 3 1- [2- (benzoyloxy) ethyl] -5'-O- [bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methyl] -3'-O- [tert-butyl (dimethyl) silyl] -2'-O - ⁇ (2-cyanoethoxy) [di (propan-2-yl) amino] phosphanyl ⁇ inosine
- Step 4 Example 1 The same reaction as in step 7 was carried out on the following scale (raw material: 1.40 g). Using the acetonitrile solution of the obtained compound and the compound (1.41 g) obtained in the above Step 3, a reaction was carried out in the same manner as in Step 8 of Example 1. The obtained crude product was directly used for the next reaction.
- Step 6 Bis (N, N-diethylethanaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- [ 1- (2-hydroxyethyl) -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl] -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2 , 3,5,6-tetra-aza-benzo [cd] azulen-2-yl) octahydro-2H, 10H, 12H-5,8-methano 2 [lambda] 5, 10 [lambda] 5 - furo [3,2-l] [1, [3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) Using the compound
- Diastereomer 2 was purified again by preparative HPLC [water / acetonitrile containing 0.2% triethylamine, acetonitrile containing 0.2% triethylamine: 5% -50% (0 min-40 min)] to give the diastereomer of the title compound.
- Mer 2 (94.6 mg) was obtained.
- Diastereomer 1 (low polarity) MS (ESI) m / z: 1003 (M + H) ⁇ +> .
- Step 7-1 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- ( 1- ⁇ 2-[(glycylamino) methoxy] ethyl ⁇ -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl) -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9- tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulene -2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2 l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Step 7-2 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aR, 16R) -15,16-bis ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -7- ( 1- ⁇ 2-[(glycylamino) methoxy] ethyl ⁇ -6-oxo-1,6-dihydro-9H-purin-9-yl) -2,10-dioxo-14- (6,7,8,9- tetrahydro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2 l] [1,3,6,9,11,2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate)
- Step 8-1 Bis (N, N-diethylethaneaminium) (5R, 7R, 8R, 12aR, 14R, 15R, 15aS, 16R) -7- (1- ⁇ 2-[(glycylamino) methoxy] ethyl ⁇ -6-oxo- 1,6-dihydro-9H-purin-9-yl) -15,16-dihydroxy-2,10-dioxo-14- (6,7,8,9-tetrahydro-2H-2,3,5,6- tetraazabenzo [cd] azulen-2-yl) octahydro -2H, 10H, 12H-5,8- methano -2 ⁇ 5, 10 ⁇ 5 - furo [3,2-l] [1,3,6,9,11 , 2,10] pentaoxadiphosphacyclotetradecine-2,10-bis (thiolate) diastereomer 1 Triethylamine trihydrofluoride (2
Abstract
Description
[1] 次式(II):
Abは、抗体又は該抗体の機能性断片を示し、該抗体の糖鎖はリモデリングされていてもよく、
Lは、AbとDを連結するリンカーを示し、
Abはそのアミノ酸残基から直接Lに結合するか、Abの糖鎖又はリモデリングされた糖鎖からLに結合していてもよく、
Dは、次式(I):
Lは、L1又はL2に含まれる任意の-NH2又はヒドロキシ基と結合し、
L1は、ヒドロキシ基、-NH2、2-ヒドロキシアセチルアミノメチル基及び2-[(2-ヒドロキシアセチル)アミノ]エチル基からなる群から選択される1乃至3個の基により任意の位置で置換されていてもよい、次式
R6及びR6’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基を示し、
R7及びR7’は、それぞれ独立して、水素原子又はC1-C6アルキル基を示し、該C1-C6アルキル基は、ハロゲン原子及びオキソ基からなる群から選択される1又は2個の置換基により置換されていてもよく、
R8及びR8’は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示し、
Z5は、窒素原子又は-CH=を示す)
からなる群から選択される基を示し、
L2は、下記(i)又は(ii):
(i)Lと結合するとき、L2は、-NHR’、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示し、ここで、R’は、水素原子、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示し、該C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基は、1乃至6個のハロゲン原子で置換されてもよい;又は
(ii)Lと結合しないとき、L2は、水素原子又はハロゲン原子を示す、
から選択される基を示し、
Q1及びQ1’は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、チオール基又はボラノ基(BH3 -)を示し、
Q2及びQ2’は、それぞれ独立して、酸素原子又は硫黄原子を示し、
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
Y1及びY2は、酸素原子又は-CH2-を示し、
X3及びX4は、下記(iii)又は(iv):
(iii)Y1が酸素原子のとき、X3-X4は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(iv)Y1が-CH2-のとき、X3-X4は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
X5及びX6は、下記(v)又は(vi):
(v)Y2が酸素原子のとき、X5-X6は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(vi)Y2が-CH2-のとき、X5-X6は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
R1,R2及びR3は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、-OR’、-OC(=O)R’、-N3、-NHR’、-NR’R’’又は-NHC(=O)R’(ここで、R’は、前に定義した通りであり、R’’は、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示す)を示し、
W1は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子又は-CH-を示し、
W2は、窒素原子又は-CH=を示し、
R4は、水素原子、ハロゲン原子又は-NH2を示し、
R5は、下記(vii)乃至(x):
(vii)W1が窒素原子のとき、R5は水素原子、C1-C6アルキル基、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示す;
(viii)W1が酸素原子のとき、R5は存在せず;
(ix)W1が硫黄原子のとき、R5は存在せず;又は
(x)W1が-CH-のとき、R5は水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2又はC1-C6アルキル基を示す、
から選択される基を示し、
Z1-Z2-Z3は、一緒になって、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-R’’’-、-CH=CH-CH2-、-CH=CX-CH2-、-CX=CH-CH2-、-CX=CX-CH2-、-C(=O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(=O)-、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示し、Xは、ハロゲン原子を示す)又は下記式のいずれかで表される基
で表される化合物を示す)
で表される抗体薬物コンジュゲート;
[2]W1が窒素原子である、[1]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[3]W1が窒素原子であり、R5が水素原子である、[2]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[4]W1が酸素原子である、[1]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[5]W1が硫黄原子である、[1]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[6]W1が-CH-である、[1]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[7]W1が-CH-であり、R5が水素原子である、[6]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[8]Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-CH2-又は-CH=CH-CH2-である、[1]~[7]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[9]Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-である、[1]~[7]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[10]Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-R’’’-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示す)である、[1]~[7]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[11]W2が-CH=である、[1]~[10]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[12]W2が窒素原子である、[1]~[10]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[13]R4が、水素原子を示す、[1]~[12]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[14]R4が、フッ素原子を示す、[1]~[12]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[15]L1中のR8及びR8’が、それぞれ独立して、水素原子である、[1]~[14]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[16]L1が、次式からなる群から選択される基
R10は、ヒドロキシ基、-NH2、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH、-CH2CH2NHC(=O)CH2OH、ヒドロキシC1-C3アルキル基又はアミノC1-C3アルキル基を示し、
R11及びR11’は、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子若しくはメチル基を示すか、又は、R11及びR11’が結合してシクロプロパンを示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示す)
である、[1]~[15]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[17]L1が、次式からなる群から選択される基
R12は、ヒドロキシ基、-NH2、-CH2OH、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH又は-CH2CH2NHC(=O)CH2OHを示し、
Z4は、前に定義したとおりである)
である、[1]~[15]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[18]L1が、次式からなる群から選択される基
R15は、水素原子又は-C(=O)CH2OHを示し、
R16は、ヒドロキシ基、-NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2NH2又は-CH2CH2NH2を示す)
である、[1]~[15]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[19]L2が、Lと結合し、-NH2、-CH2NH2又は-CH2OHを示す、[1]~[18]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[20]L2が、Lと結合せず、水素原子又はフッ素原子を示す、[1]~[18]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[21]Q1及びQ1’が、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はチオール基を示す、[1]~[20]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[22]X1及びX2が、酸素原子を示す、[1]~[21]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[23]Y1及びY2が、酸素原子を示す、[1]~[22]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[24]X3及びX4が、-CH2-O-を示す、[1]~[23]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[25]X5及びX6が、-CH2-O-を示す、[1]~[24]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[26]R1,R2及びR3が、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基又はフッ素原子である、[1~25のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート
[27]Dが、以下の2式:
R17、R17’、R18及びR18’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基又は-NH2を示し、
W3は、-NH-、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
W4は、-CH=又は窒素原子を示す)
のいずれかで示される、[1]~[26]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[28]Dが、以下の2式:
のいずれかで示される、[27]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[29]Dが、以下の8式:
R19、R19’、R20及びR20’は、それぞれ独立して、水素原子又はフッ素原子を示す)
のいずれかで示される、[27]又は[28]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[30]Dが、以下の4式:
Q3及びQ3‘は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はチオール基を示し、
R21及びR22は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はフッ素原子を示し、
W5は、-NH-又は硫黄原子を示す)
で示される、[1]~[26]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[34]Dが、以下の2式:
のいずれかで示される、[33]、[34]又は[36]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[38]Dが、以下の4式:
のいずれかで示される、[33]、[34]、[36]又は[37]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[41]リンカーLが、-Lb-La-Lp-Lc-*で示され、
式中、アステリスクは、薬物Dと結合していることを示し、
Lpは、標的細胞において切断可能なアミノ酸配列からなるリンカーを示すか又は存在せず、
Laは、以下の群から選択されるいずれか一つを示し、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)n3-CH2-C(=O)-、
-(CH2)n4-O-C(=O)-、及び、
-(CH2)n9-C(=O)-
(ここで、n2は1~3の整数を示し、n3は1~5の整数を示し、n4は0~2の整数を示し、n9は2~7の整数を示す)、
Lbは、LaとAbの糖鎖又はリモデリングされた糖鎖を結合するスペーサー又はLaとAbのシステイン残基を結合するスペーサーを示し、並びに、
Lcは、-NH-CH2-、―NH-フェニル基-CH2-O(C=O)-又は―NH-ヘテロアリール基-CH2-O(C=O)-を示すか又は存在しない
[1]~[40]のいずれか一つに記載の抗体薬物コンジュゲート;
[42]Lcが存在しない、[41]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[43]Lcが-NH-CH2-である、[41]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[44]Lpが、以下:
-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-FG-、-GGPI-、-PI-、-GGVCit-、-VCit-、-GGVK-、-VK-、-GGFCit-、-FCit-、-GGFM-、-FM-、-GGLM-、-LM-、-GGICit-及び-ICit-
からなる群から選択されるいずれか一つを示す、[41]~[43]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[45]Lpが、-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-FG-、-GGVCit-、-VCit-、-GGFCit-又は-FCit-のいずれか一つである、[44]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[46]Lpが、-GGFG-、-GGPI-、-GGVA-、-GGFM-、-GGVCit-、-GGFCit-、-GGICit-、-GGPL-、-GGAQ-又は-GGPP-のいずれか一つである、[41]~[43]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[47]Lpが、-GGFG-又は-GGPI-である、[46]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[48]Laが、以下:
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)3-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)4-CH2-C(=O)-、及び
-(CH2)5-C(=O)-
からなる群から選択されるいずれか一つを示す、[41]~[47]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[49]Lbが、次式
[50]Lbが、-(スクシンイミド-3-イル-N)-であり、
ここで、-(スクシンイミド-3-イル-N)-は、以下の構造式:
ここで、アステリスクはLaと結合していることを示し、波線は抗体のシステイン残基の側鎖とチオエーテルを形成して結合していることを示す、[41]~[48]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[51]リンカーLが、-Lb-La-Lp-Lc-*で示され、
式中、アステリスクは、薬物Dと結合していることを示し、
Lpが、-GGFG-、又は-GGPI-であり、
Laが、-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-を示し、
Lbが、次式
Lcが、-NH-CH2-を示す、[41]、[46]~[49]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[52]抗体薬物コンジュゲートにおける抗体1分子あたりの平均薬物結合数が、1から10個の範囲である、[1]~[51]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[53]抗体薬物コンジュゲートにおける抗体1分子あたりの平均薬物結合数が、1から5個の範囲である、[52]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[54]抗体が、抗体のAsn297に結合する糖鎖(N297糖鎖)からLに結合している、[1]~[53]のいずれか一つに記載の抗体薬物コンジュゲート;
[55]N297糖鎖が、リモデリングされた糖鎖である、[54]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[56]N297糖鎖が、N297-(Fuc)MSG1又はN297-(Fuc)SGである、[54]又は[55]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[57]抗体が、抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗DLL3抗体、抗FAP抗体、抗CDH11抗体、抗CDH6抗体、抗A33抗体、抗CanAg抗体、抗CD19抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD98抗体、抗TROP2抗体、抗CEA抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体、抗Mesothelin抗体、抗ENPP3抗体、抗CD47抗体、抗EGFR抗体、抗GPR20抗体又は抗DR5抗体である、[1]~[56]のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[58]抗体が、抗HER2抗体である、[57]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[59]抗体が、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号2に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、又は、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号3に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体である、[58]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[60]抗体が、配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号29に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、又は、配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号30に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体である、[58]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[61]抗体が、配列番号31に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号32に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、配列番号33に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号34に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、又は、配列番号35に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号36に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体である、[57]に記載の抗体薬物コンジュゲート;
[62]次式(Ia):
L1は、ヒドロキシ基、-NH2、2-ヒドロキシアセチルアミノメチル基及び2-[(2-ヒドロキシアセチル)アミノ]エチル基からなる群から選択される1乃至3個の基により任意の位置で置換されていてもよい、次式
R6及びR6’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基を示し、
R7及びR7’は、それぞれ独立して、水素原子又はC1-C6アルキル基を示し、該C1-C6アルキル基は、ハロゲン原子及びオキソ基からなる群から選択される1又は2個の置換基により置換されていてもよく、
R8及びR8’は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示し、
Z5は、窒素原子又は-CH=を示す)
からなる群から選択される基を示し、
L3は、水素原子、ハロゲン原子、-NH2、ヒドロキシC1-C3アルキル基又はアミノC1-C3アルキル基を示し、
Q1及びQ1’は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、チオール基又はボラノ基(BH3 -)を示し、
Q2及びQ2’は、それぞれ独立して、酸素原子又は硫黄原子を示し、
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
Y1及びY2は、酸素原子又は-CH2-を示し、
X3及びX4は、下記(iii)又は(iv):
(iii)Y1が酸素原子のとき、X3-X4は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(iv)Y1が-CH2-のとき、X3-X4は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
X5及びX6は、下記(v)又は(vi):
(v)Y2が酸素原子のとき、X5-X6は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(vi)Y2が-CH2-のとき、X5-X6は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
R1,R2及びR3は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、-OR’、-OC(=O)R’、-N3、-NHR’、-NR’R’’又は-NHC(=O)R’(ここで、R’は、水素原子、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示し、該C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基は、1乃至6個のハロゲン原子で置換されてもよい、R’’は、C1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示す)を示し、
W1は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子又は-CH-を示し、
W2は、窒素原子又は-CH=を示し、
R4は、水素原子、ハロゲン原子又は-NH2を示し、
R5は、下記(vii)乃至(x):
(vii)W1が窒素原子のとき、R5は水素原子、C1-C6アルキル基、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示す;
(viii)W1が酸素原子のとき、R5は存在せず;
(ix)W1が硫黄原子のとき、R5は存在せず;又は
(x)W1が-CH-のとき、R5は水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2又はC1-C6アルキル基を示す、
から選択される基を示し、
Z1-Z2-Z3は一緒になって、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-R’’’-、-CH=CH-CH2-、-CH=CX-CH2-、-CX=CH-CH2-、-CX=CX-CH2-、-C(=O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(=O)-、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示し、Xは、ハロゲン原子を示す)又は下記式のいずれかで表される基
で示される化合物又はその薬理上許容される塩;
[63]W1が窒素原子である、[62]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[64]W1が窒素原子であり、R5が水素原子である、[63]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[65]W1が酸素原子である、[62]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[66]W1が硫黄原子である、[62]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[67]W1が-CH-である、[62]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[68]W1が-CH-であり、R5が水素原子である、[67]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[69]Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-CH2-又は-CH=CH-CH2-である、[62]~[68]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[70]Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-である、[62]~[68]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[71]Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-R’’’-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示す)である、[62]~[68]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[72]W2が-CH=である、[62]~[71]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[73]W2が窒素原子である、[62]~[71]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[74]R4が、水素原子を示す、[62]~[73]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[75]R4が、フッ素原子を示す、[62]~[73]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[76]L1中のR8及びR8’が、それぞれ独立して、水素原子である、[62]~[75]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[77]L1が、次式からなる群から選択される基
R10は、ヒドロキシ基、-NH2、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH、-CH2CH2NHC(=O)CH2OH、ヒドロキシC1-C3アルキル基又はアミノC1-C3アルキル基を示し、
R11及びR11’は、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子若しくはメチル基を示すか、又は、R11及びR11’が結合してシクロプロパンを示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示す)
である、[62]~[76]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[78]L1が、次式からなる群から選択される基
R12は、ヒドロキシ基、-NH2、-CH2OH、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH又は-CH2CH2NHC(=O)CH2OHを示し、
Z4は、前に定義したとおりである)
である、[62]~[76]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[79]L1が、次式からなる群から選択される基
R15は、水素原子又は-C(=O)CH2OHを示し、
R16は、ヒドロキシ基、-NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2NH2又は-CH2CH2NH2を示す)
である、[62]~[76]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[80]L3が、水素原子、フッ素原子、-NH2、-CH2OH又は-CH2NH2を示す、[62]~[79]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[81]Q1及びQ1’が、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はチオール基を示す、[62]~[80]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[82]X1及びX2が、酸素原子を示す、[62]~[81]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[83]Y1及びY2が、酸素原子を示す、[62]~[82]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[84]X3及びX4が、-CH2-O-を示す、[62]~[83]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[85]X5及びX6が、-CH2-O-を示す、[62]~[84]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[86]R1,R2及びR3が、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基又はフッ素原子である、[62]~[85]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[87]以下の2式:
R17、R17’、R18及びR18’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基又は-NH2を示し、
W3は、-NH-、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
W4は、-CH=又は窒素原子を示す)
のいずれかで示される、[62]~[86]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[88]以下の2式:
のいずれかで示される、[87]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[89]以下の8式:
R19、R19’、R20及びR20’は、それぞれ独立して、水素原子又はフッ素原子を示す)
のいずれかで示される、[87]又は[88]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[90]以下の4式:
Q3及びQ3‘は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はチオール基を示し、
R21及びR22は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はフッ素原子を示し、
W5は、-NH-又は硫黄原子を示す)
で示される、[62]~[86]のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩;
[94]以下の2式:
[101][1]~[61]に記載の抗体薬物コンジュゲート及び[62]~[100]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩からなる群から選択されるいずれかを含有する、STINGアゴニスト;
[102][1]~[61]に記載の抗体薬物コンジュゲート及び[62]~[100]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩からなる群から選択されるいずれかを含有する、医薬組成物;
[103][1]~[61]に記載の抗体薬物コンジュゲート及び[62]~[100]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩からなる群から選択されるいずれかを含有する、抗腫瘍剤;
[104]腫瘍が、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、子宮体がん、精巣がん、子宮頸がん、胎盤絨毛がん、多形神経膠芽腫、脳腫瘍、頭頚部がん、甲状腺がん、中皮腫、消化管間質腫瘍(GIST)、胆のうがん、胆管がん、副腎がん、有棘細胞がん、白血病、悪性リンパ腫、形質細胞腫、骨髄腫又は肉腫である、[103]に記載の抗腫瘍剤;
[105][1]~[61]に記載の抗体薬物コンジュゲート、[62]~[100]に記載の化合物又はその薬理上許容される塩、[101]に記載のSTINGアゴニスト、[102]に記載の医薬組成物、及び[103]又は[104]に記載の抗腫瘍剤からなる群から選択されるいずれかを投与することを含む、がんの治療方法;
[106]がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、子宮体がん、精巣がん、子宮頸がん、胎盤絨毛がん、多形神経膠芽腫、脳腫瘍、頭頚部がん、甲状腺がん、中皮腫、消化管間質腫瘍(GIST)、胆のうがん、胆管がん、副腎がん、有棘細胞がん、白血病、悪性リンパ腫、形質細胞腫、骨髄腫又は肉腫である、[105]に記載の方法、
に関する。
本発明の新規CDN誘導体は、次式(Ia):
R6及びR6’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基を示し、
R7及びR7’は、それぞれ独立して、水素原子又はC1-C6アルキル基を示し、該C1-C6アルキル基は、ハロゲン原子及びオキソ基からなる群から選択される1又は2個の置換基により置換されていてもよく、
R8及びR8’は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示し、
Z5は、窒素原子又は-CH=を示す)
からなる群から選択される基を示す。
R6及びR6’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基を示し、
R7及びR7’は、それぞれ独立して、水素原子又はC1-C6アルキル基を示し、該C1-C6アルキル基は、ハロゲン原子及びオキソ基からなる群から選択される1又は2個の置換基により置換されていてもよく、
R8及びR8’は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示し、
Z5は、窒素原子又は-CH=を示す)
からなる群から選択される基を示す。
R10は、ヒドロキシ基、-NH2、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH、-CH2CH2NHC(=O)CH2OH、ヒドロキシC1-C3アルキル基又はアミノC1-C3アルキル基を示し、
R11及びR11’は、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子若しくはメチル基を示すか、又は、R11及びR11’が結合してシクロプロパンを示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示す)
である。
R12は、ヒドロキシ基、-NH2、-CH2OH、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH又は-CH2CH2NHC(=O)CH2OHを示し、
Z4は、前に定義したとおりである)
である。
R15は、水素原子又は-C(=O)CH2OHを示し、
R16は、ヒドロキシ基、-NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2NH2又は-CH2CH2NH2を示す)
である。
(iii)Y1が酸素原子のとき、X3-X4は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(iv)Y1が-CH2-のとき、X3-X4は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示す。X3及びX4は、好ましくは、上記(iii)の-CH2-O-である。
(v)Y2が酸素原子のとき、X5-X6は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(vi)Y2が-CH2-のとき、X5-X6は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示す。X5及びX6は、好ましくは、上記(v)の-CH2-O-である。
(vii)W1が窒素原子のとき、R5は水素原子、C1-C6アルキル基、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示す;
(viii)W1が酸素原子のとき、R5は存在せず;
(ix)W1が硫黄原子のとき、R5は存在せず;又は
(x)W1が-CH-のとき、R5は水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2又はC1-C6アルキル基を示す、
から選択される基を示す。W1が窒素原子のとき、R5は、好ましくは、水素原子である。W1が-CH-のとき、R5は、好ましくは、水素原子である。
本発明の新規CDN誘導体は、目的の組織に直接投与(例えば、腫瘍内投与)されてもよいし、あるいは、標的細胞(例えば、腫瘍細胞又は免疫細胞)を認識し結合できる抗体に任意のリンカーを介して連結された抗体薬物コンジュゲートとして投与されてもよい。
Lは、L1又はL2に含まれる任意の-NH2又はヒドロキシ基と結合し、
L1は、上記<1.新規CDN誘導体>で規定したとおりであり、
L2は、下記(i)又は(ii):
(i)Lと結合するとき、L2は、-NHR’、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示し、ここで、R’は、水素原子、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示し、該C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基は、1乃至6個のハロゲン原子で置換されてもよい;又は
(ii)Lと結合しないとき、L2は、水素原子又はハロゲン原子を示す、
から選択される基を示し、
Q1、Q1’、Q2、Q2’、X1、X2、X3、X4、X5、X6、Y1、Y2、R1、R2、R3、R4、R5、W1、W2、Z1、Z2及びZ3は、上記<1.新規CDN誘導体>で規定したとおりである。
R17、R17’、R18及びR18’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基又は-NH2を示し、
W3は、-NH-、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
W4は、-CH=又は窒素原子を示す)のいずれかで示される。
R19、R19’、R20及びR20’は、それぞれ独立して、水素原子又はフッ素原子を示す)
のいずれかで示される。
また、本発明の新規CDN誘導体又は本発明の抗体薬物コンジュゲートに使用される薬物Dは、好ましくは、以下の4式:
本発明の抗体薬物コンジュゲートにおいて薬物を抗体に結合させるリンカー構造について説明する。本発明の抗体薬物コンジュゲートに使用されるリンカーは、抗体と薬物とを連結させるリンカーとして当業者が理解するものであれば特に限定されない。本発明の抗体薬物コンジュゲートに使用されるリンカーとしては、例えば、Protein Cell、2018、9(1):33-46、Pharm Res、2015、32:3526-3540、又は、Int.J.Mol.Sci.、2016、17、561に記載されるリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。リンカーは、生体内で切断されるリンカーであっても、生体内で切断されないリンカーであってもよいが、好ましくは、生体内で切断されるリンカーである。
-Lb-La-Lp-Lc-*
(ここで、アステリスクは、薬物DのL1又はL2に含まれる任意のアミノ基又はヒドロキシ基と結合していることを示す。)で示される。
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)n3-CH2-C(=O)-、
-(CH2)n4-O-C(=O)-、及び、
-(CH2)n9-C(=O)-
(ここで、式中、n2は1~3の整数(好ましくは、1又は2)を示し、n3は1~5の整数(好ましくは、2~5の整数、より好ましくは、3又は4)を示し、n4は0~2の整数(好ましくは、0又は1)を示し、n9は2~7の整数(好ましくは、2~5の整数、より好ましくは、2、3又は5)を示す)からなる群から選択されるいずれか一つを示す。
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)3-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)4-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2)2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2)2-CH2-C(=O)-、
-CH2-OC(=O)-、
-OC(=O)-、
-(CH2)5-C(=O)-、及び、
からなる群から選択されるいずれか一つを示す。
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)3-CH2-C(=O)-、
又は
-(CH2)5-C(=O)-
である。
Lbが「糖鎖コンジュゲーションのリンカーのスペーサー」の場合、Lbは、特に限定されないが、例えば、次式で示されるスペーサーが挙げられる。
Lbが、「システインコンジュゲーションのリンカーのスペーサー」の場合、Lbは、特に限定されないが、例えば、-(スクシンイミド-3-イル-N)-が挙げられる。本発明において、「-(スクシンイミド-3-イル-N)-」は、次式:
薬物と抗体の結合様式が「糖鎖コンジュゲーション」である場合、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGVA-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGVCit-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFCit-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGICit-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFM-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGPI-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGLM-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-FG-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-VA-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGVA-NH-CH2-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGVCit-NH-CH2-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFCit-NH-CH2-、
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)3-CH2-C(=O)-、又は
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)4-CH2-C(=O)-、
(ここで、ZL1は、上記Lbの以下で示される構造式:
薬物と抗体の結合様式が「システインコンジュゲーション」である場合、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGFG-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGVA-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGVCit-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGFCit-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGICit-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGFM-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGPI-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGLM-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-FG-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-VA-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGFG-NH-CH2-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGVA-NH-CH2-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGVCit-NH-CH2-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-GGFCit-NH-CH2-、
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-NH-(CH2CH2O)3-CH2-C(=O)-、又は
-ZL2-(CH2)5-C(=O)-NH-(CH2CH2O)4-CH2-C(=O)-、
(ここで、ZL2は、上記Lbの以下で示される構造式:
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-、
又は
-ZL1-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGPI-NH-CH2-、
(ここで、ZL1は、上記Lbの以下で示される構造式:
<2.2.1 抗体>
本明細書において、「遺伝子」とは、蛋白質のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列が含まれるヌクレオチドもしくはヌクレオチド配列、またはその相補鎖を意味し、例えば、蛋白質のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列が含まれるヌクレオチド配列またはその相補鎖であるポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、DNA、mRNA、cDNA、RNA等は「遺伝子」の意味に含まれる。
(1)以下の特性を有することを特徴とする抗HER2抗体;
(a)HER2に特異的に結合する。
(2)HER2の細胞外ドメインに結合する上記(1)に記載の抗体。
(3)前記抗体がモノクローナル抗体である上記(1)又は(2)に記載の抗体。
(4)抗体依存性細胞傷害(ADCC)活性及び/又は補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する上記(1)~(3)のいずれかに記載の抗体。
(5)マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体又はヒト化モノクローナル抗体である、上記(1)~(4)のいずれかに記載の抗体。
(6)重鎖定常領域がヒトIgG1の重鎖定常領域であり、ADCC及びADCP活性の低減をもたらす変異を含む、上記(1)~(3)に記載の抗体。
(7)配列番号2に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなるヒト化モノクローナル抗体である上記(1)~(4)のいずれかに記載の抗体。
(8)重鎖定常領域がヒトIgG1の重鎖定常領域であり、EUインデックスにより示される234位及び235位のロイシンがアラニンに置換されている、上記(5)に記載の抗体。
(9)配列番号3に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなるヒト化モノクローナル抗体である上記(8)に記載の抗体。
(10)配列番号29に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなるヒト化モノクローナル抗体である上記(1)~(4)に記載の抗体。
(11)配列番号30に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなるヒト化モノクローナル抗体である上記(1)~(4)に記載の抗体。
(12)重鎖カルボキシル末端において1又は2つのアミノ酸が欠失している上記(1)~(11)のいずれかに記載の抗体。
(13)上記(1)~(12)のいずれかに記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を培養する工程及び当該工程で得られた培養物から目的の抗体を採取する工程を含む当該抗体の製造方法によって得られる抗体。
近年、不均一な抗体の糖鎖を、酵素反応によってリモデリングし、官能基を有する糖鎖を均一に導入する方法が報告されている(ACS Chem.Biol.2012,7,110-122,ACS Med.Chem.Lett.2016,7,1005-1008)。この糖鎖リモデリング技術を用いて、部位特異的に薬物を導入し、均一なADCを合成する試みもなされている(Bioconjugate Chem.2015,26,2233-2242,Angew.Chem.Int.Ed.2016,55,2361-2367,US2016361436)。
L(PEG)は、-(CH2-CH2-O)n5-CH2-CH2-NH-を示し、右端のアミノ基がN297糖鎖のβ-Manの分岐鎖の1-3鎖側及び1-6鎖側の両方の非還元末端のシアル酸の2位のカルボキシル基とアミド結合していることを示し、アステリスクは、前記リンカーL、特にリンカーLにおけるLbの1,2,3-トリアゾール環上の1位又は3位の窒素原子と結合していることを示し、
ここで、n5は2~10の整数であり、好ましくは、2~5の整数である。
L(PEG)は、-(CH2-CH2-O)n5-CH2-CH2-NH-を示し、右端のアミノ基がN297糖鎖のβ-Manの分岐鎖の1-3鎖側の非還元末端のシアル酸の2位のカルボキシル基とアミド結合していることを示し、
アステリスクは、前記リンカーL、特にリンカーLにおけるLbの1,2,3-トリアゾール環上の1位又は3位の窒素原子と結合していることを示し、
ここで、n5は2~10の整数であり、好ましくは、2~5の整数である。
L(PEG)は、-(CH2-CH2-O)n5-CH2-CH2-NH-を示し、右端のアミノ基がN297糖鎖のβ-Manの分岐鎖の1-6鎖側の非還元末端のシアル酸の2位のカルボキシル基とアミド結合していることを示し、アステリスクは、前記リンカーL、特にリンカーLにおけるLbの1,2,3-トリアゾール環上の1位又は3位の窒素原子と結合していることを示し、
ここで、n5は2~10の整数であり、好ましくは、2~5の整数である。
本発明の抗体薬物コンジュゲートにおける抗体のN297糖鎖が、N297-(Fuc)MSG1もしくはN297-(Fuc)MSG2又はそれらの混合物である場合、抗体は二量体であるため、抗体薬物コンジュゲートは2つのリンカーL及び2つの薬物Dが結合された分子(上記m2=1)となる(図1参照)。
本発明の新規CDN誘導体及びその抗体薬物コンジュゲート又はそれらの製造中間体の代表的な製造方法を説明する。なお、以下において、化合物を示すために、各反応式中に示される化合物の番号を用いる。すなわち、「式(1)の化合物」、「化合物(1)」等と称する。また、これ以外の番号の化合物についても同様に記載する。
本発明の(1)で表されるCDN誘導体は、以下に記載するA法に従って製造することができる。
本工程は、式(1a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて加水分解反応とシアノエチル基の除去を連続して行うことにより、式(2a)の化合物を製造する工程である。
本工程は、式(2a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてヒドロキシ基の保護基を除去し、式(3a)の化合物を製造する工程である。本工程の反応を開始する前に、必要に応じて、アセトニトリルを用いて1回から3回共沸し、式(2a)の粗体を乾燥させた。
本工程は、式(3a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(4a)の化合物とのカップリング反応及び得られたカップリング体の硫化反応を連続して行うことにより、式(5a)の化合物を製造する工程である。
本工程の反応を開始する前に、化合物(4a)を、脱水アセトニトリルを用いて3回から5回共沸した。最後の共沸時にアセトニトリルを残し、化合物(4a)の0.01Mから1Mのアセトニトリル溶液を調製した。この溶液に乾燥剤(粉末状又はペレット状のモレキュラーシーブス3A若しくはモレキュラーシーブス4A)を添加し、溶液を使用するまで窒素又はアルゴン雰囲気下で保存した。
本工程は、式(5a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてヒドロキシ基の保護基を除去し、式(6a)の化合物を製造する工程である。
本工程は、式(6a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて環化反応と硫化反応を連続して行い、式(7a)の化合物を製造する工程である。
化合物(6a)をピリジンに溶解後、減圧下で濃縮して0.01Mから0.5Mのピリジン溶液を調製した。このピリジン溶液に、5℃から35℃までに於いて、脱水縮合剤(2-クロロ-5,5-ジメチル-1,3,2λ5-ジオキサホスフィナン-2-オン等)を添加することにより環化反応を実施した。脱水縮合剤は、化合物(6a)1モルに対して、1モルから過剰モル、好ましくは3モルから5モル用いた。反応時間は1分間から6時間、好ましくは5分間から1時間である。次いで、この反応液に水と硫化剤(3H-1,2-ベンゾジチオール-3-オン、N,N-ジメチル-N’-(3-スルファニリデン-3H-1,2,4-ジチアゾール-5-イル)メタンイミドアミド等)を添加して硫化反応を実施した。化合物(6a)1モルに対して、水は過剰モル、好ましくは30モルから50モル用い、硫化剤は1モルから5モル、好ましくは1モルから2モル用いた。反応時間は5分間から12時間、好ましくは30分間から3時間である。反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液(0.1Mから1Mまで)に加えた後、15分間から24時間攪拌して反応停止処理をした。反応液を有機溶媒(酢酸エチル、ジエチルエーテル、トルエン又はそれらの混合溶媒)で1回から5回抽出した後、抽出液を併せて無水塩(無水硫酸ナトリウム又は無水硫酸マグネシウム)で乾燥した。乾燥剤を濾去し濾液を減圧下で濃縮した。得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール、酢酸エチル/メタノール、ヘキサン/酢酸エチル等]、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[緩衝液/アセトニトリル]又はそれらを組み合わせることにより精製し、化合物(7a)を2種類以上のジアステレオマー混合物又は2種類以上の純粋なジアステレオマーとして得た。本工程では多くの場合、2種類のジアステレオマーが得られるが、原料(1a)及び(4a)に依存して、更に1種類又は2種類のジアステレオマーが得られることもある。得られた化合物(7a)が複数のジアステレオマー混合物であっても、それ以上の精製をせずに次の工程へと進めることができる。
本工程は、式(7a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてシアノエチル基及び全てのアシル系保護基を同時に除去し、式(8a)の化合物を製造する工程である。本工程は、必要に応じてオートクレーブ中、又はシールドチューブ中で実施した。
本工程は、式(8a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて全てのシリル系保護基を同時に除去し、式(9a)の化合物を製造する工程である。
PRO2及びPRO3がtert-ブチルジメチルシリル基の場合、化合物(8a)を、5℃から100℃まで、好ましくは35℃から60℃までに於いて、直接トリエチルアミン三フッ化水素酸塩で処理することによりtert-ブチルジメチルシリル基を除去した。トリエチルアミン三フッ化水素酸塩は、化合物(8a)1モルに対して過剰モル、好ましくは100から200モル用いた。反応時間は30分間から24時間、好ましくは2時間から12時間である。反応液を室温まで冷却後、反応液に氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム水溶液とトリエチルアミンの3:1から10:1(v/v)の混合溶液を少しずつ注いで反応停止処理をした。必要に応じて、反応液を氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム水溶液とトリエチルアミンの混合溶液に注いでもよい。この場合は、反応容器をアセトニトリルと水で洗浄した。トリエチルアミンは反応液の液性を弱塩基性へと変化させられる十分量、好ましくはトリエチルアミン三フッ化水素酸塩1モルに対して、トリエチルアミンを約2モル用いる。反応液の有機溶媒成分を減圧下で留去した後、残留した水溶液を分取HPLC[緩衝液/アセトニトリル、緩衝液/メタノール等]、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[緩衝液/アセトニトリル、緩衝液/メタノール等]又はそれらを組み合わせることにより精製し、化合物(9a)を単一のジアステレオマーとして得た。
本工程は、式(9a)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてイオン交換し、式(1)の化合物を製造する工程である。
陽イオン交換樹脂(BT AG(登録商標) 50W-X2レジン,100-200メッシュ,水素型)を純水に懸濁させ、空のカラムカートリッジに充填した。陽イオン交換樹脂は、重量比で化合物(9a)の10倍から50倍量用いた。過剰の純水を自然流下させた後、1M水酸化ナトリウム水溶液を3カラム体積自然流下させ、次いで、6カラム体積の純水を自然流下させた。化合物(9a)を約3カラム体積の純水に溶解して、カラムにチャージした。化合物が純水に溶解しにくい場合は、少量の有機溶媒(アセトニトリル、メタノール等)との混合液を用いてもよい。自然流下した溶液を分取後、更に6カラム体積の純水等で溶出し、画分を分取した。目的物を含む画分を併せて凍結乾燥し、化合物(1)を単一のジアステレオマーとして得た。
本発明の(1’)で表されるCDN誘導体は、以下に記載するA’法に従って製造することができる。
本工程は、式(6a’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて環化反応と酸化反応を連続して行い、式(7a’)の化合物を製造する工程である。
化合物(6a’)をピリジンに溶解後、減圧下で濃縮して0.01Mから0.5Mのピリジン溶液を調製した。このピリジン溶液に、5℃から35℃までに於いて、脱水縮合剤(2-クロロ-5,5-ジメチル-1,3,2λ5-ジオキサホスフィナン-2-オン等)を添加して環化反応を実施した。脱水縮合剤は、化合物(6a’)1モルに対して、1モルから過剰モル、好ましくは3モルから5モル用いた。反応時間は1分間から6時間、好ましくは5分間から1時間である。次いで、この反応液に水と酸化剤(ヨウ素等)を添加して酸化反応を実施した。化合物(6a’)1モルに対して、水は0モルから過剰モル、好ましくは30モルから50モル用い、酸化剤は2モルから10モル、好ましくは3モルから5モル用いた。反応時間は5分間から12時間、好ましくは30分間から3時間である。反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液(0.1Mから1Mまで)に加え、15分間から24時間攪拌して反応停止処理をした。反応液を有機溶媒(酢酸エチル、ジエチルエーテル、トルエン又はそれらの混合溶媒)で1回から5回抽出した後、抽出液を併せて無水塩(無水硫酸ナトリウム又は無水硫酸マグネシウム)で乾燥した。乾燥剤を濾去し濾液を減圧下で濃縮した。得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール、酢酸エチル/メタノール、ヘキサン/酢酸エチル等]、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[緩衝液/アセトニトリル]又はそれらを組み合わせることにより精製し、化合物(7a’)を得た。
本発明の(1’’)で表されるCDN誘導体は、以下に記載するA’’法に従って製造することができる。
本工程は、式(3a’’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(4a’’)の化合物とのカップリング反応及び得られたカップリング体の酸化反応を連続して行うことにより、式(5a’’)の化合物を製造する工程である。
本工程の反応を開始する前に、化合物(4a’’)を、脱水アセトニトリルを用いて3回から5回共沸した。最後の共沸時にアセトニトリルを残し、化合物(4a’’)の0.01Mから1Mのアセトニトリル溶液を調製した。この溶液に乾燥剤(粉末状又はペレット状のモレキュラーシーブス3A若しくはモレキュラーシーブス4A)を添加し、溶液を使用するまで窒素又はアルゴン雰囲気下で保存した。
本発明の(1’’’)で表されるCDN誘導体は、以下に記載するA’’’法に従って製造することができる。
本発明の(2)で表されるコンジュゲーション前駆体は、以下に記載するB法に従って製造することができる。
本工程は、式(1b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて保護基を除去することにより、式(2b)の化合物を製造する工程である。
本工程は、式(2b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(3b)の化合物とのアミド化を行うことにより、式(4b)の化合物を製造する工程である。
本工程は、式(4b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてエステル化を行うことによって、式(5b)の化合物を製造する工程である。
化合物(4b)を、溶媒(N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、アセトニトリル等)中で、5℃から35℃までに於いて、N-ヒドロキシスクシンイミド及び縮合剤(1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩等)と反応させることによりエステル化を実施した。N-ヒドロキシスクシンイミド及び縮合剤は、化合物(4b)1モルに対して、それぞれ1モルから3モル用いた。反応時間は30分間から72時間、好ましくは2時間から24時間である。反応液を有機溶媒(ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル又はその混合溶媒)で薄めた後、氷水で3回から5回洗浄した。有機層を無水塩(無水硫酸ナトリウム又は無水硫酸マグネシウム)を用いて乾燥した。乾燥剤を濾去した後、濾液を減圧下で濃縮して化合物(5b)の粗体を得た。必要に応じて、得られた化合物(5b)をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[アセトニトリルのみ]で精製してもよい。また、得られた化合物(5b)を良溶媒(酢酸エチル、アセトニトリル、ジクロロメタン又はそれらの混合溶媒)に溶解した後、貧溶媒(ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ヘキサン等)を加えて再沈殿し、固体を濾取することで純度を上げることができる。
本工程は、式(5b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて、式(6b)の化合物との縮合反応を行うことにより、式(2)の化合物を製造する工程である。
B’法
本発明の(2’)で表されるコンジュゲーション前駆体は、以下に記載するB’法に従って製造することができる。
本工程は、式(2b’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(7b)の化合物とのアミド化を行うことにより、式(8b)の化合物を製造する工程である。塩基を使用しないこと以外は、B法B-2工程に記載された手法に従って化合物(8b)を得た。
本工程は、式(8b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて保護基を除去することにより式(9b)の化合物を製造する工程である。PRO6がtert-ブチル基の場合、精製操作にシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]を用いること以外は、B法B-1工程に記載された手法にしたがって化合物(9b)を得た
本工程は、式(9b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてエステル化を行うことにより、式(10b)の化合物を製造する工程である。B法B-3工程に記載された手法に従って化合物(10b)を得た。
本工程は、式(6b)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて、式(10b)の化合物との縮合反応を行うことによって、式(2’)の化合物を製造する工程である。B法B-4工程に記載された手法に従って化合物(2’)を得た。
本発明の(3)で表されるコンジュゲーション前駆体は、以下に記載するC法に従って製造することができる。
本工程は、式(1c)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(2c)の化合物とのアミド化を行うことにより、式(3c)の化合物を製造する工程である。B法B-2工程に記載された手法に従って化合物(3c)を得た。
本工程は、式(3c)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてエステル化を行うことにより、式(4c)の化合物を製造する工程である。B法B-3工程に記載された手法に従って化合物(4c)を得た。
本工程は、式(5c)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(6c)の化合物とのカップリング反応(アミノメチレン化)と得られたカップリング体の脱保護を連続して行うことによって、式(7c)の化合物を製造する工程である。
本工程は、式(7c)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて保護基を除去し、式(8c)の化合物を製造する工程である。PRO7及びPRO8がtert-ブチルジメチルシリル基の場合、A法A-7工程に記載された手法に従って化合物(8c)を得た。
本工程は、式(8c)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて、式(4c)の化合物との縮合反応を行うことによって、式(3)の化合物を製造する工程である。B法B-4工程に記載された手法に従って化合物(3)を得た。
本発明の(3’)で表されるコンジュゲーション前駆体は、以下に記載するC’法に従って製造することができる。
本工程は、式(1c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて加水分解反応とシアノエチル基の除去を連続して行うことにより、式(2c’)の化合物を製造する工程である。A法A-1工程に記載された手法に従って化合物(2c’)を得た。
本工程は、式(2c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてヒドロキシ基の保護基を除去し、式(3c’)の化合物を製造する工程である。A法A-2工程に記載された手法に従って化合物(3c’)を得た。
本工程は、式(3c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて式(4c’)の化合物とのカップリング反応及び得られたカップリング体の硫化反応又は酸化反応を連続して行うことにより、式(5c’)の化合物を製造する工程である。A法A-3工程又はA’’法A’’-3工程に記載された手法に従って化合物(5c’)を得た。
本工程は、式(5c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてヒドロキシ基の保護基を除去し、式(6c’)の化合物を製造する工程である。A法A-4工程に記載された手法に従って化合物(6c’)を得た。
本工程は、式(6c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて環化反応と硫化反応又は酸化反応を連続して行い、式(7c’)の化合物を製造する工程である。A法A-5工程又はA’法A’-5工程に記載された手法に従って化合物(7c’)を得た。
本工程は、式(7c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いてシアノエチル基及び全てのアシル系保護基を同時に除去し、式(8c’)の化合物を製造する工程である。A法A-6工程に記載された手法に従って化合物(8c’)を得た。
本工程は、式(8c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて全てのシリル系保護基を同時に除去し、式(9c’)の化合物を製造する工程である。PRO9が2-(トリメチルシリル)エトキシカルボニル基の場合、化合物(8c’)を、5℃から100℃まで、好ましくは35℃から60℃までに於いて、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液で処理することにより、2-(トリメチルシリル)エトキシカルボニル基を除去した。フッ化テトラブチルアンモニウムは、化合物(8c’)1モルに対して過剰モル、好ましくは10から30モル用いた。反応時間は1時間から48時間、好ましくは4時間から24時間である。反応液に緩衝液を加えて希釈後、必要に応じて有機溶媒成分を減圧下で留去した。残留物を分取HPLC[緩衝液/アセトニトリル、緩衝液/メタノール等]、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[緩衝液/アセトニトリル、緩衝液/メタノール等]又はそれらを組み合わせることにより精製し、化合物(9c’)を得た。
本工程は、式(9c’)の化合物に対して公知の有機化学的手法を用いて、式(4c)の化合物との縮合反応を行うことによって、式(3’)の化合物を製造する工程である。B法B-4工程に記載された手法に従って化合物(3’)を得た。
糖鎖リモデリング抗体は、例えばWO2018/003983などに記載の方法に準じて、次式に示す方法で製造することができる。
本工程は、目的の抗体に対して、公知の酵素反応を用いて抗体のアミノ酸配列297番目のアスパラギンに結合するN結合型糖鎖(N297結合糖鎖)の還元末端キトビオース構造のGlcNAcβ1-4GlcNAc間のグリコシド結合を加水分解により切断し、糖鎖切断抗体を製造する工程である。
目的の抗体(1d)(10mg/mL)を緩衝液(リン酸緩衝液等)中、0℃から40℃までにおいて、野生型EndoS酵素等の加水分解酵素を用いて還元末端のキトビオース構造のGlcNAcβ1と4GlcNAc間のグリコシド結合の加水分解反応を実施した。反応時間は10分から72時間、好ましくは1時間から6時間である。野生型EndoS酵素は抗体(1d)100mgに対して、0.1mgから10mg、好ましくは0.1mgから3mgを用いた。反応終了後、アフィニティークロマトグラフィー(HiTrap rProtein A FF(5ml)(GEヘルスケア製))及び/又はハイロドキシアパタイトカラム(Bio-Scale Mini CHT Type Iカートリッジ(5ml)(BIO-RAD製))で精製し、(Fucα1,6)GlcNAc抗体(2d)を得た。
本工程は、D-1工程で得られた(Fucα1,6)GlcNAc抗体(2d)に対し、公知の酵素反応を用いてアジド基を含むPEGリンカーを有するSG型又はMSG(MSG1、MSG2)型糖鎖オキサゾリン体(以下、「アジド糖鎖オキサゾリン体」)を結合させ、糖鎖リモデリング抗体(3d)を製造する工程である。
なお、SG型のアジド糖鎖オキサゾリン体はWO2018/003983に記載の方法に準じて合成した。一例として[N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox(WO2018/003983に記載の化合物1-10)の合成方法を次式に示す。
本製造法は、D法D-2工程で得られた糖鎖リモデリング抗体(3d)とB法B-4工程で得られたコンジュゲーション前駆体(2)をSPAAC(strain-promoted azide-alkyne cycloaddition:J.Am.Chem.Soc.2004,126,15046-15047)反応により結合させ、抗体薬物コンジュゲート(1e)を製造する方法である。
糖鎖リモデリング抗体(3d)の緩衝溶液(リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等)と、コンジュゲーション前駆体(2)を適当な溶媒(ジメチルスルホキシド、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、プロピレングリコール又はそれらの混合溶媒)に溶解させた溶液を混合することで、SPAAC反応を実施した。コンジュゲーション前駆体(2)は、糖鎖リモデリング抗体(3d)1モルに対して、2モルから過剰モル、好ましくは4モルから30モルであり、有機溶媒の比率は、抗体の緩衝溶液に対し1%から200%(v/v)が好ましい。反応温度は0℃から37℃、好ましくは15℃から25℃であり、反応時間は1時間から150時間、好ましくは6時間から72時間である。反応溶液のpHは5から9が好ましい。反応溶液を後述の共通操作Dに記載の方法に従って精製し、抗体薬物コンジュゲート(1e)を得た。
システインコンジュゲーションを有する本発明の抗体薬物コンジュゲートは、参考例1等に従って調製した目的の抗体とB’法B-8工程で得られたマレイミド基を有するコンジュゲーション前駆体(2’)を用いて、WO2014/057687などに記載の方法に準じて製造することができる。
E法において、コンジュゲーション前駆体(2)をC’法C’-8工程で得られたコンジュゲーション前駆体(3’)に変えることによって、次式に示す抗体薬物コンジュゲート(1e’’)を得た。
Amicon(登録商標) Ultra遠心式フィルターデバイス(50,000 NMWL,Merck Millipore Ltd.)に抗体又は抗体薬物コンジュゲート溶液を入れ、遠心機(Allegra X-15R,Beckman Coulter,Inc.)を用いた遠心操作(2000Gから4000Gで5分間から20分間遠心)により、抗体及び抗体薬物コンジュゲート溶液を濃縮した。
UV測定器(Nanodrop 1000,Thermo Fisher Scientific,Inc.)を用いて、メーカー規定の方法に従い、抗体濃度の測定を行った。その際に、抗体ごとに異なる280nm吸光係数(1.3mLmg-1cm-1から1.8mLmg-1cm-1)を用いた。
抗体水溶液に緩衝液(リン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)、リン酸緩衝液(pH6.0)等)を加え、共通操作Aに記載の方法に従って濃縮した。この操作を数回行った後、共通操作Bに記載の方法に従って抗体濃度を測定した。この抗体緩衝溶液に、適宜緩衝液(リン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)、リン酸緩衝液(pH6.0)等)を加えて、目的の濃度(例えば、約10mg/mL)の抗体緩衝溶液を調製した。
酢酸緩衝液(10mM Acetate Buffer,5% Sorbitol,pH5.5;本明細書ではABSと称する)又はそれ以外の適当な緩衝液でNAPカラム(NAP-5,NAP-10,NAP-25(GEヘルスケア製))を平衡化させた。このNAPカラムに、抗体薬物コンジュゲート反応溶液をチャージし、メーカー規定量の緩衝液を自然流下させ、抗体画分を分取した。この画分を再度NAPカラムにチャージし、メーカー規定量の緩衝液を自然流下させ、抗体画分を分取した。この操作を合計2回から3回繰り返すことで、未結合の薬物リンカーやジメチルスルホキシド、プロピレングリコールを除いた抗体薬物コンジュゲートを得た。必要に応じて、共通操作A及びCにより抗体薬物コンジュゲート溶液の濃度を調節した。
抗体薬物コンジュゲートにおける結合薬物濃度は、吸光光度計(UV/VIS Spectrometer Lambda 25,PerkinElmer,Inc.)を用いて、抗体薬物コンジュゲート水溶液の280nm及び260nm(260nm以外の波長を用いることもある)の二波長における吸光度を測定した後に、下記の計算を行うことで算出することができる。ある波長における全吸光度は系内に存在する全ての吸収化学種の吸光度の和に等しい(吸光度の加成性)ことから、抗体と薬物のコンジュゲーション前後において、抗体及び薬物のモル吸光係数に変化がないと仮定すると、抗体薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び薬物濃度は、下記の関係式で示される。
A280=AD,280+AA,280=εD,280CD+εA,280CA 式(I)
A260=AD,260+AA,260=εD,260CD+εA,260CA 式(II)
ここで、A280は280nmにおける抗体薬物コンジュゲート水溶液の吸光度を示し、A260は260nmにおける抗体薬物コンジュゲート水溶液の吸光度を示し、AA,280は280nmにおける抗体の吸光度を示し、AA,260は260nmにおける抗体の吸光度を示し、AD,280は280nmにおけるコンジュゲート前駆体の吸光度を示し、AD,260は260nmにおけるコンジュゲート前駆体の吸光度を示し、εA,280は280nmにおける抗体のモル吸光係数を示し、εA,260は260nmにおける抗体のモル吸光係数を示し、εD,280は280nmにおけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数を示し、εD,260は260nmにおけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数を示し、CAは抗体薬物コンジュゲートにおける抗体濃度を示し、CDは抗体薬物コンジュゲートにおける薬物濃度を示す。ここで、εA,280、εA,260、εD,280、εD,260は、事前に用意した値(計算推定値又は実測値)が用いられる。例えば、εA,280は、抗体のアミノ酸配列から、既知の計算方法(Protein Science,1995,vol.4,2411-2423)によって推定することができる。εA,260は、抗体のUV測定から得られた実測値とεA,280の推定値から計算した値を用いた。実施例において、改変抗HER2抗体のモル吸光係数は、εA,280=215380及びεA,260=110117を用いた。改変抗LPS抗体のモル吸光係数は、εA,280=227300及びεA,260=110710を用いた。εD,280及びεD,260は、用いるコンジュゲート前駆体をあるモル濃度に溶解させた溶液の吸光度を測定することで、ランベルト・ベールの法則(吸光度=モル濃度×モル吸光係数×セル光路長)によって、得ることができる。実施例におけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数は、都度UV測定で得た。抗体薬物コンジュゲート水溶液のA280及びA260を測定し、これらの値を式(I)及び(II)に代入して連立方程式を解くことによって、CA及びCDを求めることができる。さらにCDをCAで除することによって、抗体一分子あたりの薬物平均結合数を求めることができる。
抗体薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び抗体一分子あたりの薬物平均結合数は、前述の共通操作Eに加え、以下の方法を用いる高速液体クロマトグラフィー分析によって求めることができる。
抗体薬物コンジュゲート溶液(約1mg/mL、60μL)をジチオトレイトール(DTT)水溶液(100mM、15μL)と混合した。混合物を37℃で30分間インキュベートして、抗体薬物コンジュゲートのL鎖及びH鎖間のジスルフィド結合を切断した。この反応溶液をそのままHPLC分析に用いた。
代表的な分析条件は下記の通り。
HPLCシステム:Agilent 1290 HPLCシステム(Agilent Technologies)
検出器:紫外吸光度計(測定波長:280nm)
カラム:Acquity BEH Phenyl(2.1×50mm、1.7μm、Waters製)
カラム温度:75℃
流速:0.8mL/min
サンプル注入量:10μL
移動相A:0.1%トリフルオロ酢酸(TFA),15%イソプロピルアルコール水溶液
移動相B:0.075%TFA,15%イソプロピルアルコールアセトニトリル溶液
グラジエントプログラム(移動相B):14%-36%(0分-15分),36%-80%(15-17分),80%-14%(17分―17.1分),14%-14%(17.1分―23分)
[F-3.データ解析]
〔F-3-1〕薬物の結合していない抗体のL鎖(L0)及びH鎖(H0)に対して、薬物の結合したH鎖(薬物が一つ結合したH鎖:H1、薬物が二つ結合したH鎖:H2)は、結合した薬物の数に比例して疎水性が増して保持時間が大きくなることから、原則的にL0、H0、H1、H2の順に溶出される。L0及びH0との保持時間を比較することにより検出ピークをL0H0、H1、H2のいずれかに割り当てることができる。
抗体薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び抗体一分子あたりの薬物平均結合数は、前述の共通操作E及びFに加え、以下の方法を用いる高速液体クロマトグラフィー分析によって求めることができる。
抗体薬物コンジュゲート溶液(約1mg/mL、60μL)をそのままHPLC分析に用いた。
代表的な分析条件は下記の二通り。
HPLCシステム:SHIMADZU CBM-20A(島津製作所)
検出器:紫外吸光度計(測定波長:280nm)
カラム:TSK-gel Butyl-NPR(4.6×100mm,2.5μm,TOSOH製)
カラム温度:25℃付近の一定温度
移動相A:1.5M硫酸アンモニウム含有25mMリン酸緩衝液(pH=7.0)
移動相B:25mMリン酸緩衝液(pH=7.0)/イソプロピルアルコール混合液(3:1)
流速:0.8mL/min
サンプル注入量:15μL
グラジエントプログラム(移動相B):10%-15%(0分-5分),15%-65%(5分-20分)
又は
HPLCシステム:SHIMADZU CBM-20A(島津製作所)
検出器:紫外吸光度計(測定波長:280nm)
カラム:PolyPROPYL A(4.6×100mm,3μm,1500Å,PolyLC製)
カラム温度:40℃付近の一定温度
移動相A:1.5M硫酸アンモニウム含有20mMリン酸緩衝液(pH=7.4)
移動相B:20mMリン酸緩衝液(pH=7.4)
流速:0.8mL/min
サンプル注入量:15μL
グラジエントプログラム(移動相B):40%-80%(0分-20分)
〔G-3-1〕抗体に結合した薬物の数に比例して疎水性が増して保持時間が大きくなることから、SPAAC反応でのコンジュゲーションの場合は、原則的にDAR=0、DAR=2、DAR=4の順に溶出される。DAR=0との保持時間を比較することにより、検出ピークをDAR=2及びDAR=4のいずれかに割り当てることができる。抗体や薬物リンカーの種類に依存してDAR=1及びDAR=3のピークが検出されることもある。検出ピークのDARは、HI-HPLCで当該ピークを分画後、マススペクトルを測定して推定することもある。
〔G-3-2〕薬物リンカーにUV吸収があるため、薬物リンカーの結合数に応じて、抗体及び薬物リンカーのモル吸光係数を用いて下式に従ってピーク面積値の補正を行った。
本発明のCDN誘導体又は抗体薬物コンジュゲートは、がん細胞に対して抗腫瘍免疫活性又は細胞傷害活性を示すことから、医薬として、特にがんに対する治療剤及び/又は予防剤、又は抗腫瘍剤として使用することができる。
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
MS(ESI)m/z:647(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.25(1H,s),7.03(1H,s),6.10(1H,s),5.63(2H,brs),4.49-4.44(2H,m),4.26(1H,dd,J=9.7,4.8Hz),4.17(1H,m),4.00(1H,t,J=9.7Hz),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.91(9H,s),0.13(3H,s),0.11(3H,s).
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-(3,3-ジエトキシプロパ-1-イン-1-イル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程1で得られた化合物(910mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(3.0mL)-テトラヒドロフラン(9.0mL)混合溶液にプロパルギルアルデヒドジメチルアセタール(1.01mL)、トリエチルアミン(0.392mL)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(163mg)、及びヨウ化銅(I)(53.6mg)を順に加え、40℃で18時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(878mg)を得た。
MS(ESI)m/z:647(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.27(1H,s),7.17(1H,s),6.09(1H,s),5.56(2H,brs),5.50(1H,s),4.48(1H,dd,J=9.1,4.9Hz),4.42(1H,d,J=4.9Hz),4.25(1H,dd,J=9.4,4.6Hz),4.17(1H,m),4.00(1H,t,J=9.7Hz),3.85-3.77(2H,m),3.66(2H,m),1.28(6H,t,J=7.3Hz),1.08(9H,s),1.04(9H,s),0.91(9H,s),0.13(3H,s),0.11(3H,s).
2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程2で得られた化合物(878mg)のエタノール(8.8mL)溶液に10%パラジウム炭素(M)wet(500mg)を加え、水素雰囲気下、室温で9時間攪拌した。触媒を濾去した後、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を減圧濃縮した。残留物の酢酸(8.8mL)溶液に10%パラジウム炭素(M)wet(500mg)を加え、水素雰囲気下、40℃で2日間攪拌した。触媒を濾去した後、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(603mg)を得た。
MS(ESI)m/z:561(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.47(1H,brs),8.07(1H,s),6.70(1H,s),6.14(1H,s),4.47-4.43(2H,m),4.29(1H,dd,J=9.1,4.8Hz),4.15(1H,m),3.99(1H,t,J=9.7Hz),3.55(2H,m),2.89(2H,t,J=5.4Hz),2.04(2H,m),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.90(9H,s),0.10(3H,s),0.10(3H,s).
6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程3で得られた化合物(2.17g)のジクロロメタン(21.7mL)溶液に室温で、ピリジン(1.56mL)、N,N-ジメチルアミノピリジン(94.5mg)、及び塩化ベンゾイル(0.898mL)を順に加え、50℃で15時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した。ジクロロメタンで抽出後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.91g)を得た。
MS(ESI)m/z:665(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.08(1H,s),7.37-7.33(3H,m),7.23(2H,t,J=7.6Hz),6.97(1H,s),6.21(1H,s),4.50-4.46(2H,m),4.37-4.30(2H,m),4.28-4.09(2H,m),4.02(1H,t,J=10.0Hz),3.03(2H,t,J=6.3Hz),2.29-2.17(2H,m),1.10(9H,s),1.05(9H,s),0.90(9H,s),0.10(6H,s).
6-ベンゾイル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(1.91g)のジクロロメタン(15mL)溶液に、0℃で調製したフッ化水素-ピリジン(0.30mL)とピリジン(1.88mL)の混合液を加え、0℃で2時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液をジクロロメタンで抽出した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をピリジン(15mL)に溶解し、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(1.17g)を加え、0℃で12時間攪拌した。メタノールを加え30分間攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液をジクロロメタンで抽出した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.98g)を得た。
MS(ESI)m/z:827(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.07(1H,s),7.47(2H,m),7.37-7.19(13H,m),6.84(4H,m),6.37(1H,d,J=5.5Hz),4.75(1H,t,J=5.2Hz),4.38-4.20(4H,m),3.80(6H,s),3.53(1H,dd,J=10.7,2.8Hz),3.40(1H,dd,J=11.0,3.1Hz),2.83(1H,d,J=3.7Hz),2.78(2H,t,J=6.4Hz),2.17(2H,m),0.81(9H,s),-0.03(3H,s),-0.21(3H,s).
6-ベンゾイル-2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程5で得られた化合物(1.98g)のジクロロメタン(23.9mL)溶液にN,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.02mL)と2-シアノエチルN,N-ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト(1.07mL)を加え、室温で15時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液をジクロロメタンで抽出後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.06g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=7:3)として得た。
MS(ESI)m/z:1027(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.06(0.3H,s),8.04(0.7H,s),7.50-7.16(15H,m),6.85-6.79(4H,m),6.35(0.7H,d,J=6.7Hz),6.31(0.3H,d,J=6.1Hz),4.84(0.7H,dd,J=7.0,4.6Hz),4.78(0.3H,t,J=5.8Hz),4.43-4.17(4H,m),4.04-3.85(1.3H,m),3.80-3.76(6H,m),3.69-3.43(3H,m),3.50(0.7H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.33-3.26(1H,m),2.87-2.76(2H,m),2.74-2.60(1.4H,m),2.31(0.6H,t,J=6.7Hz),2.23-2.11(2H,m),1.21-1.13(7.8H,m),1.04(4.2H,d,J=6.7Hz),0.73(2.7H,s),0.72(6.3H,s),―0.03(0.9H,s),-0.06(2.1H,s),-0.24(3H,s).
6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(1.37g)のアセトニトリル(6.67mL)溶液に水(48μL)とトリフルオロ酢酸ピリジン塩(335mg)を加え、室温で15分間攪拌した。反応液にtert-ブチルアミン(6.67mL)を加え、室温で15分間攪拌した。反応液を減圧濃縮した後、残留物をアセトニトリル(5mL)で2回共沸した。残留物のジクロロメタン(16.7mL)溶液に水(0.240mL)を加えた後、ジクロロ酢酸(0.953mL)のジクロロメタン(16.7mL)溶液を加え、室温で15分間攪拌した。ピリジン(1.82mL)を加えて反応を停止した後、反応液を減圧濃縮した。残留物を脱水アセトニトリル(10mL)で3回共沸し、最後の1回は5mL程度のアセトニトリルを残した。得られた標題化合物のアセトニトリル溶液をそのまま次の反応に用いた。
市販(ChemGenes)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(1.31g)を脱水アセトニトリル(10mL)で3回共沸し、最後の1回は5mL程度のアセトニトリルを残し、モレキュラーシーブス3A,1/16(ペレット状のもの5粒)を加えた。上記工程7で合成した溶液に、上述のアセトニトリル溶液を加え、窒素雰囲気下、室温で20分間攪拌した。反応液にN,N-ジメチル-N’-(3-スルファニリデン-3H-1,2,4-ジチアゾール-5-イル)メタンイミドアミド(300mg)を加え、室温で30分間攪拌した後、反応液を減圧濃縮した。残留物のジクロロメタン(19.0mL)溶液に水(0.240mL)を加えた後、ジクロロ酢酸(1.20mL)のジクロロメタン(19.0mL)溶液を加え、室温で15分間攪拌した。反応液にピリジン(13.2mL)を加えて反応を停止した後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}ベンズアミド
上記工程8で得られた粗生成物のピリジン(39.6mL)溶液を25mL程度まで濃縮した後、2-クロロ-5,5-ジメチル-1,3,2λ5-ジオキサホスフィナン-2-オン(908mg)を加え、室温で30分間攪拌した。反応液に水(0.84mL)と3H-1,2-ベンゾジチオール-3-オン(336mg)を加え、室温で15分間攪拌した。反応液を炭酸水素ナトリウム(5.25g)の水溶液(180mL)に注ぎ、室温で30分間攪拌した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、乾燥剤を濾去し濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物(507mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1219(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程9で得られた化合物(507mg)のメタノール(5mL)溶液に28%アンモニア水(5mL)を加え、室温で14時間攪拌した。反応液を濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物(301mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:958(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程10で得られた化合物(301mg)にトリエチルアミン三フッ化水素酸塩(3.84mL)を加え、45℃で3時間攪拌した。室温下、反応液に氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム水溶液(20mL)とトリエチルアミン(4mL)の混合液を加えた。反応液を減圧濃縮後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:0%-25%(0分-40分)]で精製し、リン原子上のジアステレオマーを分離した。得られた化合物(トリエチルアミン塩)を以下の手法でナトリウム塩に変換した。
BT AG(登録商標) 50W-X2 Resin(biotechnology grade,100-200mesh,hydrogen form)(500mg)を純水に懸濁し、空のカラムに充填した。過剰の純水を自然流下させた後、1M水酸化ナトリウム水溶液(5mL)と純水(10mL)を順に自然流下させた。上記で得られた化合物を純水(5mL)に溶解してカラムにチャージした。自然流下した溶液を分取後、更に純水(10mL)で溶出した。目的物を含む画分を併せて凍結乾燥し、標題化合物のジアステレオマー1(83.4mg)、ジアステレオマー2(44.8mg)、及びジアステレオマー3(13.1mg)を得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2,3)。
ジアステレオマー1
MS(ESI)m/z:730(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.74(1H,s),8.17(1H,s),8.02(1H,s),7.10(1H,s),6.34(1H,d,J=8.5Hz),6.30(1H,d,J=4.8Hz),5.41-5.34(1H,m),5.19-5.13(1H,m),4.85(1H,d,J=3.6Hz),4.79(1H,t,J=4.5Hz),4.52-4.41(2H,m),4.40-4.31(2H,m),4.07-3.97(2H,m),3.52-3.47(2H,m),2.90-2.76(2H,m),2.05-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),54.5(s).
ジアステレオマー2
MS(ESI)m/z:730(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.82(1H,s),8.17(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.35(1H,d,J=2.4Hz),6.33(1H,s),5.50-5.43(2H,m),4.80(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.52-4.28(5H,m),4.02(1H,d,J=12.1Hz),3.93-3.86(1H,m),3.54-3.47(2H,m),2.95-2.88(2H,m),2.05-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.0(s),60.2(s).
ジアステレオマー3
MS(ESI)m/z:730(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.16(1H,s),8.17(1H,s),8.02(1H,s),7.12(1H,s),6.35(1H,d,J=8.5Hz),6.29(1H,d,J=6.7Hz),5.63-5.56(1H,m),5.54-5.46(1H,m),4.79(1H,dd,J=6.7,4.8Hz),4.53-4.43(2H,m),4.36-4.28(2H,m),4.26-4.19(1H,m),4.16-4.09(1H,m),3.93-3.86(1H,m),3.52-3.47(2H,m),2.92-2.87(2H,m),2.04-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.8(s),58.7(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
(実施例1に記載した化合物1のジアステレオマー4)
N-ベンゾイル-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]アデノシン
市販(ChemGenes)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(962mg)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、標題化合物のアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液をそのまま次の反応に用いた。
上記工程1で得られた化合物と実施例1工程6で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2-(2-シアノエトキシ)-10-オキソ-10-スルファニル-2-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}ベンズアミド
上記工程2で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(367mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1219(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程3で得られた化合物(367mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(115mg:不純物含有)とジアステレオマー4(101mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:958(M+H)+.
ジアステレオマー4(高極性)
MS(ESI)m/z:958(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(化合物1のジアステレオマー4)
上記工程4で得られた化合物(ジアステレオマー4)(101mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール、メタノール:5%-100%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(28.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:730(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.11(1H,s),8.19(1H,s),8.02(1H,s),7.08(1H,s),6.35(1H,d,J=8.5Hz),6.27(1H,d,J=4.8Hz),5.43-5.36(1H,m),5.29-5.21(1H,m),4.95-4.88(1H,m),4.80(1H,dd,J=4.5,2.3Hz),4.50-4.43(1H,m),4.42-4.33(2H,m),4.30-4.22(1H,m),4.20-4.03(2H,m),3.52-3.46(2H,m),2.85-2.66(2H,m),2.05-1.90(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.1(s),54.1(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-2,10,15,16-テトラヒドロキシ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(オラート)
実施例1工程11で得られた化合物(ジアステレオマー1)(30.0mg)のアセトン(0.5mL)-水(0.2mL)溶液にトリエチルアミン(0.27mL)とヨードメタン(60μL)を加えて1日間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:0%-20%(0分-40分)]で精製した。得られた化合物を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:698(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.55(1H,s),8.18(1H,s),8.01(1H,s),7.32(1H,s),6.26(1H,s),6.13(1H,s),5.00-4.85(2H,m),4.68-4.64(1H,m),4.48-4.23(5H, m),4.15-4.04(2H,m),3.49-3.39(2H,m),2.90-2.66(2H,m),1.98-1.83(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:-0.22(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例1工程7の反応を以下のスケールで実施した(原料:1.01g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と市販(Wuhu Nuowei Chemistry)の5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-N-(2-メチルプロパノイル)グアノシン(954mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-2-イル}-2-メチルプロパンアミド
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(357mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1201(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程3で得られた化合物(357mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(241mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:974(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程3で得られた化合物(241mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]でリン原子上のジアステレオマーを分離し、標題化合物の2種類のジアステレオマーをそれぞれトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:5%-20%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物のジアステレオマー1(56.7mg)とジアステレオマー2(25.9mg)を得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2)。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:746(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.03(1H,s),8.00(1H,s),7.11(1H,s),6.27(1H,d,J=3.0Hz),5.99(1H,d,J=8.5Hz),5.67-5.61(1H,m),5.27-5.21(1H,m),4.85(1H,d,J=3.6Hz),4.73(1H,dd,J=3.9,2.0Hz),4.48-4.39(2H,m),4.38-4.30(2H,m),4.18-4.08(2H,m),3.51-3.45(2H,m),2.80-2.71(1H,m),2.63-2.53(1H,m),2.02-1.84(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.6(s),53.5(s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:746(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.20(1H,s),8.01(1H,s),7.19(1H,s),6.32(1H,d,J=6.0Hz),6.05(1H,d,J=8.5Hz),5.67-5.53(1H,m),5.47-5.40(1H,m),4.77-4.71(1H,m),4.51-4.46(1H,m),4.45-4.30(3H,m),4.28-4.25(1H,m),4.19-4.08(1H,m),3.96-3.89(1H,m),3.53-3.46(2H,m),2.92-2.79(2H,m),2.05-1.93(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:61.7(s),59.5(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
2’,3’,5’-トリ-O-アセチル-1-[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]イノシン
2’,3’,5’-トリ-O-アセチルイノシン(5.00g)のテトラヒドロフラン(90mL)懸濁液に、2-(トリメチルシリル)エチル (2-ヒドロキシエチル)カルバメート(3.12g)とトリフェニルホスフィン(3.99g)を加えた後、ジプロパン-2-イル (E)-ジアゼン-1,2-ジカルボキシラート(3.05mL)のテトラヒドロフラン(10mL)溶液を加え、室温で15時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物(3.01g)を得た。
MS(ESI)m/z:582(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.96(1H,s),7.93(1H,s),6.10(1H,d,J=4.8Hz),5.86(1H,t,J=5.4Hz),5.58 (1H,t,J=5.1Hz),4.96(1H,t,J=7.3Hz),4.47-4.40(2H,m),4.36(1H,dd,J=13.0,5.1Hz),4.24 (2H,t,J=5.4Hz),4.15(2H,t,J=8.8Hz),3.55(2H,q,J=6.0Hz),2.15(3H,s),2.13(3H,s),2.10(3H,s),0.97(2H,t,J=8.8Hz),0.03(9H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-1-[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]イノシン
上記工程1で得られた化合物(3.01g)のテトラヒドロフラン(15mL)-メタノール(15mL)溶液に炭酸カリウム(100mg)を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に酢酸(83μL)を加え、減圧濃縮し、残留物をピリジンで共沸した。再度ピリジン(30mL)に溶解後、0℃で4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(2.10g)を加え、30分間攪拌した後、冷蔵庫で終夜保管した。反応液にメタノール(1mL)を加え、30分間攪拌した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(3.61g)を得た。
MS(ESI)m/z:758(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.92(1H,s),7.76(1H,s),7.37(2H,d,J=7.3Hz),7.29-7.14(7H,m),6.78(4H, d,J=8.5Hz),5.94(1H,d,J=5.4Hz),5.63(1H,br s),4.81-4.74(1H,m),4.46-4.41(1H,m),4.36-4.31(1H,m),4.19-4.05(4H,m),3.76(6H,s),3.52-3.44(2H,m),3.44-3.31(2H,m),0.99-0.91 (2H,m),0.02(9H,s).(観測可能なピークのみ記載)
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]イノシン
上記工程2で得られた化合物(3.61g)のジクロロメタン(18mL)溶液に、イミダゾール(811mg)とtert-ブチル(クロロ)ジメチルシラン(861mg)を加え、室温で17時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.61g)と標題化合物の位置異性体である5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]イノシン(1.31g)をそれぞれ得た。
MS(ESI)m/z:872(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ: 7.98(1H,s),7.85(1H,s),7.39(2H,d,J=7.9Hz),7.32-7.15(7H,m),6.78(4H,d, J=9.1Hz),5.93(1H,d,J=4.8Hz),5.22-5.11(1H,m),4.60(1H,q,J=5.6Hz),4.47(1H,t,J=4.2Hz),4.28-4.08(5H,m),3.77(6H,s),3.59-3.49(2H,m),3.45(1H,dd,J=10.3,3.0Hz),3.26(1H,dd,J=10.3,3.9Hz),3.15-3.08(1H,m),0.95(2H,t,J=8.5Hz),0.88(9H,s),0.07(3H,s),0.02(9H,s),0.00(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:872(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ: 7.99(1H,s),7.82(1H,s),7.46-7.41(2H,m),7.35-7.19(7H,m),6.84-6.78(4H, m),5.98(1H,d,J=5.4 Hz),5.06-4.96(1H,m),4.84(1H,t,J=5.4 Hz),4.34-4.08(6H,m),3.78(6H,s),3.54(2H,q,J=5.8Hz),3.48(1H,dd,J=10.6,2.7 Hz),3.39(1H,dd,J=10.6,3.9 Hz),2.71(1H,d, J=4.2Hz),0.99-0.91(2H,m),0.85(9H,s),0.03(9H,s),0.02(3H,s),-0.12(3H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-1-[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]イノシン
上記工程3で得られた化合物(1.61g)のジクロロメタン(18.5mL)溶液に、4,5-ジシアノイミダゾール(240mg)と2-シアノエチルN,N,N’,N’-テトライソプロピルホスホロジアミダイト(0.703mL)を加え、室温で15時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液をジクロロメタンで抽出後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をDIOLシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.95g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=61:39)として得た。
MS(ESI)m/z:1072(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.04(0.39H,s),7.99(0.61H,s),7.83(0.39H,s),7.82(0.61H,s),7.42(2H,d,J=7.3Hz),7.35-7.15(7H,m),6.85-6.77(4H,m),6.15(0.61H,d,J=6.0Hz),6.09(0.39H,d,J=4.8 Hz),5.34-5.24(0.61H,m),5.12-5.03(0.39H,m),4.86-4.76(0.39H,m),4.72-4.62(0.61H,m),4.47-4.42(0.39H,m),4.42-4.36(0.69H,m),4.31-4.05(6H,m),3.78(6H,s),3.78-3.65(1H,m),3.61-3.39(7H,m), 3.35 (0.61H,dd,J=10.6,3.9Hz),3.28(0.39H,dd,J=10.9,4.2Hz),2.49(0.78H,t,J=6.0Hz),2.29(1.22H,t,J=5.7Hz),1.30-0.94(12H,m),0.85(5.49H,s),0.84(3.51H,s),0.09(1.17H,s),0.08(1.83H,s),0.03(9H,s),0.02(1.83H,s),0.00(1.17H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:910mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程4で得られた化合物(950mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル (2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)カルバメート
上記工程5で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(602mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1303(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-7-{6-オキソ-1-[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(602mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(205mg:不純物含有)とジアステレオマー2(244mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1146(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1146(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー1)(145mg:不純物含有)にトリエチルアミン三フッ化水素酸塩(1.31mL)を加え、45℃で3時間攪拌した。室温下、反応液に氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム溶液(10mL)とトリエチルアミン(2mL)の混合溶液を加えた。反応液を減圧濃縮後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製した。得られた化合物のテトラヒドロフラン(4mL)溶液にフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,2mL)を加え、室温で39時間攪拌した。反応液に、10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液(4mL)を加え、減圧濃縮した。残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:5%-50%(0分-40分)]で精製した。得られた化合物(トリエチルアミン塩)の塩交換を行う際に、化合物を溶解する溶媒及び溶出液の一部にアセトニトリル-メタノール-純水(1:1:1)の混合液を用いる以外は、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(72.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:774(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.60(1H,s),8.15(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.26(1H,d,J=4.8Hz),6.24(1H,t,J=5.1Hz),5.47(1H,dt,J=8.2,4.2Hz),5.23-5.17(1H,m),4.77-4.73(2H,m),4.52-4.44(2H,m),4.36-4.19(3H,m),4.14-4.02(3H,m),3.48(2H,t,J=4.8Hz),3.31-3.26(2H,m),2.90-2.74(2H,m),2.01-1.93(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.7(s),54.7(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(133mg:不純物含有)を用いて上記工程8-1と同様の手法で反応及び塩交換を行い、標題化合物(55.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:774(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.72(1H,s),8.25(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.31(1H,d,J=6.7Hz),6.28(1H,d,J=8.5 Hz),5.47-5.38(2H,m),4.77(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.48(1H,d,J=4.2Hz),4.46-4.37(2H,m),4.37-4.29(3H,m),4.27-4.18(1H,m),4.08-4.02(1H,m),3.92-3.85(1H,m),3.53-3.46(2H,m),3.28-3.23(2H,m),2.93-2.86(2H,m),2.04-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.6(s),60.0(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
2’,3’,5’-トリ-O-アセチル-1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)イノシン
市販(Ark Pharm)の2’,3’,5’-トリ-O-アセチルイノシン(10.0g)のテトラヒドロフラン(100mL)懸濁液に、2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エタン-1-オール(5.37g)とトリフェニルフォスフィン(7.69g)を加えた後、ジプロパン-2-イル (E)-ジアゼン-1,2-ジカルボキシレート(6.10mL)を加え、室温で6時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/ジクロロメタン]で精製し、標題化合物をトリフェニルホスフィンオキシドとの混合物(10.6g)として得た。
MS(ESI)m/z:553(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.05(1H,s),7.92(1H,s),6.12(1H,d,J=5.4Hz),5.86(1H,t,J=5.4Hz),5.59(1H,dd,J=5.4,4.2Hz),4.47-4.41(2H,m),4.38-4.31(1H,m),4.22-4.17(2H,m),3.89(2H,t,J=4.8Hz),2.15(3H,s),2.14(3H,s),2.08(3H,s),0.83(9H,s),-0.06(3H,s),-0.06(3H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)イノシン
上記工程1で得られた化合物(10.6g)を用いて、実施例5工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物をトリフェニルホスフィンオキシドとの混合物(7.21g)として得た。
MS(ESI)m/z:729(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.01(1H,s),7.97(1H,s),7.35-7.30(2H,m),7.25-7.17(7H,m),6.81-6.76(4H,m),5.95(1H,d,J=5.4Hz),5.13(1H,brs),4.68-4.61(1H,m),4.43-4.36(2H,m),4.31-4.23(1H,m),4.15-4.08(1H,m),3.89(2H,t,J=4.5Hz),3.77(6H,s),3.42(1H,dd,J=10.3,3.6Hz),3.34(1H,dd,J=10.3,3.6Hz),3.10(1H,brs),0.83(9H,s),-0.06(3H,s),-0.07(3H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)イノシン
上記工程2で得られた化合物(7.21g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.17g)と標題化合物の位置異性体である5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)イノシン(2.55g)を得た。
MS(ESI)m/z:843(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99(1H,s),7.97(1H,s),7.43-7.39(2H,m),7.33-7.19(7H,m),6.83-6.77(4H,m),5.96(1H,d,J=4.2Hz),4.56-4.50(2H,m),4.33-4.25(1H,m),4.19-4.02(2H,m),3.89(2H,t,J=4.8Hz),3.78(6H,s),3.45(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.27(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.03(1H,d,J=6.0Hz),0.88(9H,s),0.82(9H,s),0.07(3H,s),-0.01(3H,s),-0.07(3H,s),-0.07(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:843(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.98(1H,s),7.94(1H,s),7.46-7.42(2H,m),7.35-7.20(7H,m),6.85-6.79(4H,m),5.99(1H,d,J=5.4Hz),4.83(1H,t,J=5.1Hz),4.33-4.29(1H,m),4.27-4.24(1H,m),4.24-4.12(2H,m),3.90(2H,t,J=4.5Hz),3.79(3H,s),3.78(3H,s),3.48(1H,dd,J=10.3,3.0Hz),3.40(1H,dd,J=10.3,3.0Hz),2.71(1H,d,J=3.6Hz),0.86(9H,s),0.83(9H,s),0.01(3H,s),-0.07(3H,s),-0.07(3H,s),-0.11(3H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}イノシン
上記工程3で得られた化合物(2.17g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.65g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1043(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.03(0.53H,s),8.01(0.47H,s),7.97(0.53H,s),7.93(0.47H,s),7.45-7.41(2H,m),7.35-7.19(7H,m),6.83-6.78(4H,m),6.17(0.53H,d,J=4.2Hz),6.05(0.47H,d,J=4.2Hz),4.87-4.80(0.47H,m),4.64-4.58(0.53H,m),4.46-4.40(1H,m),4.30-4.05(3H,m),3.92-3.87(2H,m),3.78(6H,s),3.86-3.40(5H,m),3.33-3.24(1H,m),2.54(0.94H,t,J=6.0Hz),2.43(1.06H,t,J=6.7Hz),1.16-1.09(9H,m),1.01-0.97(3H,m),0.83(4.23H,s),0.83(4.77H,s),0.82(9H,s),0.07(1.41H,s),0.04(1.59H,s),-0.02(3H,s),-0.07(1.41H,s),-0.08(1.59H,s),-0.08(3H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:935mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程4で得られた化合物(950mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
3-({(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-イル}オキシ)プロパンニトリル
上記工程5で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(494mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1274(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(494mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(88.5mg:不純物含有)とジアステレオマー2(70.7mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1003(M-C6H15Si+2H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1003(M-C6H15Si+2H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー1)(88.5mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(25.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:775(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.63(1H,s),8.22(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.30-6.24(2H,m),5.46-5.37(1H,m),5.23-5.15(1H,m),4.83-4.79(1H,m),4.78-4.74(1H,m),4.53-4.42(2H,m),4.35-4.16(3H,m),4.16-3.97(3H,m),3.83-3.78(2H,m),3.52-3.47(2H,m),2.88-2.81(2H,m),2.03-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.8(s),54.4(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(70.7mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール、メタノール:15%-70%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(17.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:775(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.72(1H,s),8.23(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.30(2H,dd,J=13.6,7.6Hz),5.48-5.39(2H,m),4.78(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.51-4.28(5H,m),4.26-4.13(2H,m),4.06-4.00(1H,m),3.93-3.86(1H,m),3.85-3.80(2H,m),3.52-3.47(2H,m),2.94-2.88(2H,m),2.05-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.9(s),60.0(s).
N-(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
実施例5工程8-1で得られた化合物(10.0mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(0.5mL)溶液に、トリエチルアミン(8μL)と1-[(ヒドロキシアセチル)オキシ]ピロリジン-2,5-ジオン(5.3mg)を加え、室温で2時間攪拌した。反応液を10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液で希釈し、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-30%(0分-40分)]で精製した。得られた化合物(トリエチルアミン塩)を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(10.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:832(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.57(1H,s),8.04(1H,s),8.03(1H,s),7.13(1H,s),6.26(1H,d,J=4.2Hz),6.24-6.19(1H,m),5.57-5.49(1H,m),5.26-5.18(1H,m),4.80(1H,d,J=3.6Hz),4.76(1H,t,J=4.5 Hz),4.51-4.41(2H,m),4.35-4.17(3H,m),4.11-3.95(3H,m),3.91(2H,s),3.62-3.55(2H,m),3.52-3.45(2H,m),2.89-2.65(2H,m),2.02-1.91(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.6(s),54.3(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
実施例5工程8-2で得られた化合物(30.0mg)を用いて、上記工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)]。
MS(ESI)m/z:832(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.69(1H,s),8.14(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.31(1H,d,J=6.7Hz),6.26(1H,d,J=7.9Hz),5.49-5.40(2H,m),4.77(1H,dd,J=6.7,4.8Hz),4.48(1H,d,J=4.2Hz),4.46-4.28(4H,m),4.22(2H,t,J=5.4Hz),4.06-4.00(1H,m),3.94(2H,s),3.92-3.86(1H,m),3.70-3.55(2H,m),3.52-3.47(2H,m),2.92-2.86(2H,m),2.04-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.7(s),59.9(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’,3’-ビス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-クロロアデノシン
文献既知(J.Med.Chem.1989,32,1135-1140)の5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-クロロアデノシン(29.1g)のN,N-ジメチルホルミアミド(145mL)溶液に、イミダゾール(16.4g)とtert-ブチルジメチルクロロシラン(18.2g)を加え、室温で18時間攪拌した。反応液に水を加えて反応を停止した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(34.9g)を得た。
MS(ESI)m/z:832(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.02(1H,s),7.47-7.42(2H,m),7.36-7.32(4H,m),7.31-7.18(3H,m),6.84-6.79(4H,m),5.90(1H,d,J=4.8Hz),5.72(2H,brs),4.74(1H,dd,J=4.5,2.3Hz),4.25(1H,dd,J=4.2,2.3Hz),4.21(1H,q,J=4.2Hz),3.78(6H,s),3.58(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.33(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),0.84(9H,s),0.82(9H,s),0.04(3H,s),-0.01(3H,s),-0.02(3H,s),-0.17(3H,s).
N-アセチル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’,3’-ビス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-クロロアデノシン
上記工程1で得られた化合物(34.9g)のピリジン(210mL)溶液に、無水酢酸(140mL)と4-ジメチルアミノピリジン(515mg)を加え、窒素雰囲気下、室温で21時間攪拌した。反応液をジクロロメタン(100mL)で希釈した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物にジクロロメタン(210mL)とモルホリン(7.30mL)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(45.4g:不純物含有)を得た。得られた化合物はそれ以上の精製を行わずに次の反応に用いた。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.95(1H,brs),8.22(1H,s),7.45-7.42(2H,m),7.34-7.20(7H,m),6.82(4H,dq,J=9.4,2.7Hz),5.96(1H,d,J=4.8Hz),4.72-4.69(1H,m),4.23(2H,brs),3.79(6H,s),3.59(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.35(1H,dd,J=10.3,3.6Hz),2.73(3H,s),0.83(9H,s),0.82(9H,s),0.04(3H,s),0.00(3H,s),-0.03(3H,s),-0.18(3H,s).
N-アセチル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-クロロアデノシン
上記工程2で得られた化合物(45.4g:不純物含有)のテトラヒドロフラン(200mL)溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1.0M,100mL)を加え、窒素雰囲気下、室温で3時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/アセトン/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(23.0g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.71(1H,brs),8.16(1H,s),7.28-7.16(9H,m),6.78-6.73(4H,m),5.99(1H,d,J=5.4Hz),4.86(1H,t,J=5.1Hz),4.49(1H,dd,J=5.1,2.7Hz),4.39(1H,q,J=3.2Hz),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.42(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.35(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),2.66(3H,s).
N-アセチル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-クロロアデノシン
上記工程3で得られた化合物(23.0g)のN,N-ジメチルホルムアミド(178mL)溶液に、イミダゾール(5.94g)とtert-ブチルジメチルクロロシラン(6.44g)を加え、窒素雰囲気下、室温で18時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(9.01g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.42(1H,brs),8.14(1H,s),7.38-7.35(2H,m),7.29-7.18(7H,m),6.80-6.76(4H,m),5.99(1H,d,J=4.2Hz),4.71-4.66(2H,m),4.17-4.14(1H,m),3.78(6H,s),3.49(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.29(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.02(1H,d、J=5.4Hz),2.67(3H,s),0.89(9H,s),0.11(3H,s),0.02(3H,s).
N-アセチル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-クロロ-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン
上記工程4で得られた化合物(9.01g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(10.6g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=65:35)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.40(1H,brs),8.31(0.35H,s),8.25(0.65H,s),7.38(2H,d,J=7.3Hz),7.29-7.19(7H,m),6.80(4H,dd,J=9.1,2.4Hz),6.27(0.35H,d,J=3.0Hz),6.13(0.65H,d,J=3.6Hz),4.88-4.83(0.65H,m),4.69-4.65(0.35H,m),4.56(1H,t,J=4.8Hz),4.23-4.17(1H,m),3.93-3.78(1H,m),3.78(6H,s),3.64-3.54(4H,m),3.33-3.28(1H,m),2.67(3H,s),2.56(1.3H,t,J=6.3Hz),2.52(0.7H,t,J=6.3Hz),1.16(2.1H,d,J=7.3Hz),1.14(3.9H,d,J=6.0Hz),1.12(3.9H,d,J=6.0Hz),1.02(2.1H,d,J=6.7Hz),0.83(5.9H,s),0.82(3.1H,s),0.10(1.9H,s),0.07(1.1H,s),0.01H(3H,s).
N,N-ジエチルエタンアミニウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アセトアミド-2-クロロ-9H-プリン-9-イル)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-チオラート
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:2.06g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程5で得られた化合物(1.98g)を用いて、実施例1工程8及び実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(180mg)とジアステレオマー2(167mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1191(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.10(1H,s),8.00(1H,s),7.40-7.36(2H,m),7.30-7.23(4H,m),6.38(1H,d,J=8.5Hz),6.35(1H,d,J=3.0Hz),5.67-5.60(1H,m),5.09-5.04(1H,m),4.72(1H,d,J=3.6Hz),4.50-4.29(8H,m),4.07(1H,dd,J=12.4,4.5Hz),3.91-3.83(1H,m),3.54-3.45(1H,m),3.17(6H,q,J=7.3Hz),3.08(2H,t,J=6.0Hz),2.45-2.42(2H,m),2.42(3H,s),2.28-2.23(2H,m),1.29(9H,t,J=7.3Hz),1.01(9H,s),0.90(9H,s),0.29(3H,s),0.28(3H,s),0.25(3H,s),0.10(3H,s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1191(M+H)+.
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(49.6mg)のメタノール(1.28mL)溶液に、エチレンジアミン(256μL)を加え、60℃で2時間攪拌した後、マイクロウェーブ反応装置を用いて120℃で2時間反応させた。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:40%-70%(0分-30分)]で精製し、標題化合物を(37.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1016(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.27(1H,s),7.99(1H,s),7.16(1H,s),6.25(1H,d,J=4.2Hz),6.09(1H,d,J=8.5Hz),5.41-5.35(1H,m),5.12-5.08(1H,m),4.86-4.80(2H,m),4.69(1H,t,J=4.5Hz),4.51-4.45(1H,m),4.29-4.23(2H,m),4.11-4.03(2H,m),3.51-3.44(4H,m),3.13-3.04(2H,m),2.80-2.76(2H,m),2.02-1.92(2H,m),0.99(9H,s),0.84(9H,s),0.32(3H,s),0.29(3H,s),0.24(3H,s),0.07(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(50.0mg:不純物含有)のメタノール(1.29mL)溶液に、エチレンジアミン(25.8μL)を加え、60℃で2時間攪拌した後、マイクロウェーブ反応装置を用いて120℃で2時間反応させた。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-50%(0分-30分)]で精製し、標題化合物を(23.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1016(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.16(1H,s),8.00(1H,s),7.08(1H,s),6.33(1H,d,J=7.3Hz),6.13(1H,d,J=8.5Hz),5.51-5.48(1H,m),5.30(1H,t,J=4.8Hz),5.13-5.06(1H,m),4.95(1H,d,J=4.2Hz),4.66-4.55(2H,m),4.24(1H,s),4.08(1H,dd,J=12.4,4.5Hz),3.89-3.83(1H,m),3.69-3.61(1H,m),3.50-3.33(4H,m),3.12-3.01(14H,m),2.89(2H,t,J=5.4Hz),2.03-1.96(2H,m),1.25(18H,t,J=7.3Hz),0.99(9H,s),0.74(9H,s),0.27(6H,s),0.18(3H,s),-0.08(3H,s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7-1で得られた化合物(37.2mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-20%(0分-30分)]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
MS(ESI)m/z:788(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.21(1H,brs),8.01(1H,s),7.07(1H,s),6.27(1H,d,J=3.6Hz),6.10(1H,d,J=8.5Hz),5.51-5.41(1H,m),5.16-5.11(1H,m),4.83(1H,d,J=3.6Hz),4.73(1H,t,J=4.2Hz),4.50-4.45(2H,m),4.35-4.29(2H,m),4.16-4.04(2H,m),3.50-3.42(4H,m),3.17-3.05(2H,m),2.82-2.66(2H,m),2.04-1.92(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),54.2(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7-2で得られた化合物(23.7mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-20%(0分-30分)]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
MS(ESI)m/z:788(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.27(1H,brs),8.02(1H,s),7.15(1H,s),6.31(1H,d,J=6.0Hz),6.12(1H,d,J=8.5Hz),5.45-5.33(2H,m),4.75(1H,dd,J=5.7,4.5Hz),4.50(1H,d,J=4.2Hz),4.47-4.30(4H,m),4.17-4.13(1H,brm),3.94-3.89(1H,m),3.69-3.59(1H,brm),3.51-3.44(3H,m),3.21-3.07(2H,m),2.88-2.85(2H,m),2.03-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.2(s),59.8(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例8工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(50.1mg)のメタノール(1.29mL)溶液に、2-アミノエタノール(258μL)を加え、60℃で2時間攪拌した後、マイクロウェーブ反応装置を用いて120℃で2時間反応させた。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-60%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(39.4mg)をエタノールアミン由来の化合物を含む混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1017(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.32(1H,s),8.01(1H,s),7.16(1H,s),6.28(1H,d,J=5.4Hz),6.13(1H,d,J=9.1Hz),5.44-5.38(1H,m),5.19-5.14(1H,m),4.98-4.83(2H,m),4.78-4.75(1H,m),4.45-4.39(1H,m),4.28-4.22(1H,m),4.18(1H,s),4.13-4.07(1H,m),4.04-3.99(1H,m),3.67(2H,t,J=5.4Hz),3.51-3.42(4H,m),2.86(2H,t,J=5.4Hz),2.04-1.98(2H,m),0.98(9H,s),0.82(9H,s),0.31(3H,s),0.27(3H,s),0.22(3H,s),0.05(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例8工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(49.3mg:不純物含有)のメタノール(1.27mL)溶液に、2-アミノエタノール(254μL)を加え、60℃で2時間攪拌した後、マイクロウェーブ反応装置を用いて120℃で3時間反応させた。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-60%(0分-30分)]で精製し、標題化合物を(26.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1017(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.25(1H,s),8.01(1H,s),7.10(1H,s),6.36(1H,d,J=7.3Hz),6.17(1H,d,J=7.9Hz),5.59-5.53(1H,m),5.41(1H,t,J=4.5Hz),5.21-5.14(1H,m),5.02-4.95(2H,m),4.70-4.61(2H,m),4.18(1H,s),4.03(1H,dd,J=12.1,4.8Hz),3.91-3.86(1H,m),3.75-3.69(2H,m),3.52-3.43(4H,m),3.14(12H,q,J=7.3Hz),2.93-2.91(2H,m),2.04-1.99(2H,m),1.28(18H,t,J=7.6Hz),0.99(9H,s),0.75(9H,s),0.27(6H,s),0.21(3H,s),-0.05(3H,s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程1-1で得られた混合物(39.4mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-20%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(16.8mg)を得た
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.25(1H,s),8.02(1H,s),7.10(1H,s),6.30(1H,d,J=3.6Hz),6.15(1H,d,J=8.5Hz),5.49-5.42(1H,m),5.21-5.16(1H,m),4.87-4.85(1H,m),4.77(1H,t,J=4.2Hz),4.50-4.35(3H,m),4.31(1H,s),4.12-4.10(2H,m),3.64(2H,t,J=5.4Hz),3.51-3.38(4H,m),2.85-2.70(2H,m),2.02-1.94(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.8(s),53.9(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程1-2で得られた化合物(26.1mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-20%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(18.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.35(1H,s),8.03(1H,s),7.17(1H,s),6.33(1H,d,J=6.0Hz),6.16(1H,d,J=8.5Hz),5.49-5.41(2H,m),4.80(1H,t,J=5.4Hz),4.51-4.26(5H,m),4.07(1H,d,J=12.7Hz),3.94-3.89(1H,m),3.67(2H,5,J=5.7Hz),3.53-3.39(4H,m),2.89(2H,t,J=5.4Hz),2.03-1.99(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.8(s),60.3(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノ-2-メチルプロピル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノ-2-メチルプロピル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例8工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(41.0mg)のメタノール(1.10mL)溶液に、1,2‐ジアミノ‐2‐メチルプロパン(210μL)を加え、60℃で2時間攪拌した後、マイクロウェーブ反応装置を使用し120℃で6時間反応させた。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-60%(0分-30分)]で簡易精製し、標題化合物を(16.3mg:不純物含有)を得た。得られた化合物はそれ以上の精製を行わずに次の反応に用いた。
MS(ESI)m/z:1044(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノ-2-メチルプロピル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程1で得られた化合物(16.3mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(6.4mg)を得た
MS(ESI)m/z:816(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.28(1H,brs),8.01(1H,s),7.05(1H,s),6.27(1H,d,J=4.2Hz),6.15(1H,d,J=7.9Hz),5.41-5.27(1H,m),5.13-5.08(1H,m),4.84(1H,d,J=3.6Hz),4.73(1H,t,J=4.5Hz),4.50-4.44(2H,m),4.36-4.31(2H,m),4.16-4.00(2H,m),3.49(2H,dd,J=6.3,3.3Hz),3.31-3.25(2H,m),2.84-2.70(2H,m),2.03-1.91(2H,m),1.34(3H,s),1.30(3H,s).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),54.5(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-(アミノメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-シアノアデノシン
文献既知(J.Am.Chem.Soc.1989,111,8502-8504)の2-シアノアデノシン(440mg)のピリジン(8.00mL)溶液に4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(642mg)を加え、窒素雰囲気下、室温で4時間攪拌した。反応液にメタノール(10mL)を加えて反応を停止した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(528mg)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.21(1H,s),7.31-7.17(9H,m),6.79-6.70(4H,m),5.99(1H,d,J=5.4Hz),5.86(2H,brs),4.86(1H,q,J=4.6Hz),4.65(1H,t,J=3.6Hz),4.48-4.45(1H,m),4.41(1H,q,J=3.0Hz),3.79(6H,s),3.46(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.34(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),2.93(1H,d,J=2.4Hz).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]アデノシン
上記工程1で得られた化合物(14.3g)のテトラヒドロフラン(500mL)溶液に水素化リチウムアルミニウムのテトラヒドロフラン溶液(約2.5M,29.0mL)を加え、窒素雰囲気下、40℃で2時間攪拌した。反応液を氷冷して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(450mL)を加え10分間攪拌した後、1-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}オキシ)ピロリジン-2,5-ジオン(25.0g)を加え、室温で18時間反応させた。飽和ロッシェル塩水溶液を加え、2.5時間攪拌した後、ジクロロメタン/メタノールの混合液で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(10.8g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.01(1H,s),7.26-7.15(9H,m),6.75-6.71(4H,m),6.37(1H,brs),5.93(1H,d,J=6.0Hz),5.67(2H,brs),5.59(1H,brs),4.77-4.74(1H,m),4.46-4.37(4H,m),4.21(2H,t,J=8.5Hz),3.76(3H,s),3.76(3H,s),3.42(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.25(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.16(1H,brs),1.03(2H,t,J=8.5Hz),0.05(9H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]アデノシン
上記工程2で得られた化合物(10.8g)のピリジン(70.0mL)溶液にクロロトリメチルシラン(15.0mL)を加え、窒素雰囲気下、室温で2時間攪拌した。反応液に塩化ベンゾイル(8.44mL)を加え、更に2時間攪拌した。反応液を0℃まで冷却し、水(21.0mL)を加えて10分間攪拌した後、28%アンモニア水(31.4mL)を加えて同温度で更に20分間攪拌した。室温まで昇温して更に3時間攪拌した後、反応液を減圧濃縮した。残留物を酢酸エチルに懸濁させ、固体を濾去した。濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(9.47g)を得た。
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:9.54(1H,brs),8.17(2H,d,J=6.7Hz),7.91(1H,brs),7.66-7.52(3H,m),7.35-7.10(9H,m),6.75(4H,d,J=8.5Hz),6.45(1H,brs),6.23(1H,brs),6.03(1H,d,J=6.7Hz),4.70-4.65(2H,m),4.45-4.19(5H,m),3.73(6H,s),3.38-3.32(2H,m),2.65(1H,brs),1.05(2H,t,J=8.8Hz),0.00(9H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]アデノシン
上記工程3で得られた化合物(9.47g)を用いて、実施例8工程4と同様の手法により標題化合物(3.13g)を得た。
MS(ESI)m/z:961(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.87(1H,brs),8.24(1H,brs),8.02(2H,d,J=7.3Hz),7.64-7.51(3H,m),7.40-7.18(9H,m),6.81-6.77(4H,m),6.08(1H,d,J=4.8Hz),5.85(1H,brs),4.70-4.52(4H,m),4.23-4.17(3H,m),3.77(6H,s),3.50(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),3.29(1H,dd、J=10.9,4.2Hz),3.21(1H,d,J=6.0Hz),1.06-1.02(2H,m),0.89(9H,s),0.09(3H,s),0.05(9H,s),0.01(3H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]アデノシン
上記工程4で得られた化合物(1.49g)のジクロロメタン(15.5mL)溶液にN,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.58mL)と2-シアノエチルN,N-ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト(1.04mL)を加え、窒素雰囲気下、室温で2時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]及びC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[アセトニトリル:100%]で精製し、標題化合物(1.39g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ8.84(1H,s),8.33(0.6H,s),8.28(0.4H,s),8.02-7.99(2H,m),7.64-7.59(1H,m),7.55-7.51(2H,m),7.42-7.20(9H,m),6.82-6.79(4H,m),6.30(0.4H,d,J=4.2Hz),6.25(0.6H,d,J=4.2Hz),5.95-5.88(1H,m),4.89-4.77(1H,m),4.60-4.58(2H,m),4.51-4.45(1H,m),4.25-4.18(3H,m),3.86-3.46(5H,m),3.78(6H,s),3.35-3.29(1H,m),2.53(1.2H,t,J=6.3Hz),2.38(0.8H,t,J=6.3Hz),1.16-0.98(14H,m),0.85(3.6H,s),0.84(5.4H,s),0.10(1.8H,s),0.08(1.2H,s),0.05(9H,s),0.01(1.2H,s).-0.01(1.8H,s).
N,N-ジエチルエタンアミニウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-ベンズアミド-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]-9H-プリン-9-イル}-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-チオラート
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:1.94g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程5で得られた化合物(2.19g)を用いて、実施例1工程8及び実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(138mg)とジアステレオマー2(82.8mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
1H-NMR(CD3OD)δ:9.08(1H,s),8.11(2H,d,J=7.3Hz),7.98(1H,s),7.67(1H,t,J=7.6Hz),7.57(2H,t,J=7.9Hz),7.37(2H,d,J=7.9Hz),7.28-7.22(4H,m),6.54(1H,d,J=8.5Hz),6.36(1H,d,J=1.8Hz),5.66-5.59(1H,m),5.07-5.02(1H,m),4.85-4.83(1H,m),4.72(1H,d,J=3.6Hz),4.58-4.08(12H,m),3.88-3.78(1H,m),3.49-3.38(1H,m),3.21(6H,q,J=7.3Hz),3.05-3.00(2H,m),2.49-2.40(1H,m),2.34-2.26(1H,m),2.09-2.03(2H,m),1.31(9H,t,J=7.6Hz),1.21-1.09(2H,m),1.02(9H,s),0.91(9H,s),0.30(3H,s),0.29(3H,s),0.26(3H,s),0.12(3H,s),0.05(9H,s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1392(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.91(1H,s),8.10-8.07(2H,m),7.94(1H,s),7.67-7.63(1H,m),7.59-7.54(2H,m),7.41-7.20(6H,m),6.54(1H,d,J=8.5Hz),6.22(1H,d,J=5.4Hz),5.36-5.30(1H,m),3.20(6H,q,J=7.3Hz),3.04-3.00(2H,m),2.85-2.75(2H,m),2.23-2.13(2H,m),1.30(9H,t,J=7.3Hz),1.03(9H,s),0.79(9H,s),0.05(9H,s).(観測可能なピークのみ記載)
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(42.3mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(25.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1131(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.72(1H,s),8.00(1H,s),7.26(1H,s),6.35(1H,d,J=9.1Hz),6.26(1H,d,J=4.8Hz),5.42-5.36(1H,m),5.20-5.15(1H,m),4.91-4.87(2H,m),4.80-4.78(1H,m),4.43(1H,t,J=11.2Hz),4.36-4.28(3H,m),4.20-4.15(3H,m),4.09-3.99(2H,m),3.51(2H,d,J=6.7Hz),3.13(12H,q,J=7.3Hz),2.85(2H,brs),2.01-1.97(2H,m),1.25(18H,t,J=7.3Hz),1.07-1.00(2H,m),1.00(9H,s),0.82(9H,s),0.32(3H,s),0.28(3H,s),0.25(3H,s),0.07(12H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(82.8mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(45.2mg)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:8.61(1H,s),8.01(1H,s),7.08(1H,s),6.34(2H,t,J=7.9Hz),5.49(1H,dd,J=10.6,4.5Hz),5.42(1H,t,J=5.1Hz),5.24-5.17(1H,m),5.00-4.95(2H,m),4.69-4.57(2H,m),4.36(2H,t,J=17.8Hz),4.22-4.15(3H,m),4.05(1H,dd,J=12.4,5.1Hz),3.90-3.85(1H,m),3.51(2H,d,J=9.1Hz),3.17(12H,q,J=7.3Hz),2.92(2H,t,J=5.4Hz),2.04-1.99(2H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz),1.07-0.98(2H,m),1.00(9H,s),0.74(9H,s),0.28(3H,s),0.28(3H,s),0.21(3H,s),0.07(9H,s),-0.06(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程7-1で得られた化合物(25.9mg)にトリエチルアミン三フッ化水素酸塩(700μL)を加え、55℃で2時間攪拌した。室温下、反応液に氷冷した1M炭酸トリエチルアンモニウム水溶液(3.5mL)とトリエチルアミン(1.10mL)の混合液を加え、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-40%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(19.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:903(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.71(1H,s),8.03(1H,s),7.10(1H,s),6.37(1H,d,J=7.9Hz),6.28(1H,d,J=4.2Hz),5.38-5.33(1H,m),5.18-5.13(1H,m),4.84-4.80(2H,m),4.50-4.40(2H,m),4.35-4.40(4H,m),4.21-4.16(2H,m),4.07-4.00(2H,m),3.51-3.49(2H,m),3.07(12H,q,J=7.3Hz),2.85(2H,t,J=5.4Hz),2.02-1.97(2H,m),1.23(18H,t,J=7.3Hz),1.04(2H,t,J=8.2Hz),0.07(9H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)メチル]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程7-2で得られた化合物(45.2mg)を用いて、上記工程8-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(37.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:903(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.75(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.36(1H,d,J=9.1Hz),6.33(1H,d,J=6.7Hz),5.51-5.42(2H,m),4.81(1H,dd,J=6.7,4.8Hz),4.51-4.28(7H,m),4.18(2H,dt,J=8.3,2.6Hz),4.02(1H,d,J=12.7Hz),3.92-3.87(1H,m),3.51-3.47(2H,m),3.13(12H,q,J=7.3Hz),2.93-2.90(2H,m),2.04-1.98(2H,m),1.27(18H,t,J=7.3Hz),1.06-0.99(2H,m),0.06(9H,s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-(アミノメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程8-1で得られた化合物(19.1mg)のテトラヒドロフラン(576μL)溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,288μL)を加え、窒素雰囲気下、室温で終夜攪拌した後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-30%(0分-40分)]及びSep-Pak(登録商標) C18[水/アセトニトリル].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(8.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:759(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.48(1H,s),8.03(1H,s),7.04(1H,s),6.27(1H,d,J=3.6Hz),6.24(1H,d,J=8.5Hz),5.98-5.93(1H,m),5.04-4.99(1H,m),4.81-4.79(2H,m),4.45-4.39(2H,m),4.31-4.27(2H,m),4.12-3.99(4H,m),3.54-3.44(2H,m),2.88-2.85(2H,m),2.02-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.6,55.5.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-(アミノメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程8-2で得られた化合物(37.1mg)を用いて、上記工程9-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(12.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:759(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.61(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.31(1H,d,J=6.0Hz),6.28(1H,d,J=8.5Hz),5.61-5.55(1H,m),5.38-5.35(1H,m),4.80(1H,t,J=5.1Hz),4.54(1H,d,J=4.2Hz),4.48-4.28(4H,m),4.13(2H,s),4.08-4.04(1H,m),3.94-3.90(1H,m),3.52-3.49(2H,m),2.90-2.88(2H,m),2.03-1.98(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.2(s),60.0(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
6-クロロ-2-ヨード-9-{2,3,5-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン
市販(Amadis Chemical)の6-クロロ-2-ヨード-9-β-D-リボフラノシル-9H-プリン(9.65g)のエチレングリコールジメチルエーテル(120mL)溶液に、0℃でN,N-ジイソプロピルエチルアミン(40.7mL)とtert-ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート(26.9mL)を加え、窒素雰囲気下、室温まで昇温して19時間攪拌した。反応液を0℃まで冷却し、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(13.7g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.48(1H,s),6.02(1H,d,J=4.2Hz),4.54(1H,t,J=4.5Hz),4.29(1H,t,J=4.5Hz),4.18-4.15(1H,m),4.04(1H,dd,J=11.5,4.2Hz),3.80(1H,dd,J=11.5,2.4Hz),0.96(9H,s),0.93(9H,s),0.84(9H,s),0.17(3H,s),0.16(3H,s),0.10(3H,s),0.09(3H,s),0.01(3H,s),-0.16(3H,s).
(工程2)
2-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-6-クロロ-9-{2,3,5-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン
上記工程1で得られた化合物(13.7g)のテトラヒドロフラン(121mL)溶液に、窒素雰囲気下でテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(2.10g)と下記の手法で調製したベンジルオキシメチルヨウ化亜鉛(約0.9M,30.2mL)を加え、室温で20時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(7.29g)を得た。
[ベンジルオキシメチルヨウ化亜鉛の調製]
窒素雰囲気下、亜鉛粉末(5.99g)のテトラヒドロフラン(17.1mL)懸濁液を超音波処理した後、ヨードメチルベンゾエート(12.0g)のテトラヒドロフラン(21.3mL)溶液を10~15℃で加え、同温度で1.5時間攪拌し、ベンジルオキシメチルヨウ化亜鉛のテトラヒドロフラン溶液(約0.9M,38.4mL)を得た。
MS(ESI)m/z:763(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.58(1H,s),8.13(1H,dd,J=8.5,1.2Hz),7.60-7.56(1H,m),7.47-7.43(2H,m),6.09(1H,d,J=4.8Hz),5.60(1H,d,J=13.9Hz,),5.56(1H,d,J=13.9Hz),4.48(1H,t,J=4.5Hz),4.27(1H,t,J=4.2Hz),4.15-4.11(1H,m),4.03(1H,dd,J=11.5,3.0Hz),3.80(1H,dd,J=11.5,2.4Hz)0.96(9H,s),0.90(9H,s),0.76(9H,s),0.16(3H,s),0.15(3H,s),0.08(3H,s),0.06(3H,s),-0.07(3H,s),-0.27(3H,s).
2-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-6-クロロ-9-β-D-リボフラノシル-9H-プリン
上記工程2で得られた化合物(7.29g)のテトラヒドロフラン(47.7mL)溶液に、窒素雰囲気、0℃でフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,38mL)を加え、同温度で2.5時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(3.69g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.23(1H,s),8.15(2H,dd,J=8.5,1.2Hz),7.63-7.59(1H,m),7.48(2H,t,J=7.9Hz),5.89(1H,d,J=6.0Hz),5.61(1H,d,J=13.9Hz),5.56(1H,d,J=14.5Hz),4.90(1H,q,J=5.6Hz),4.46-4.43(1H,m),4.28(1H,q,J=2.2Hz),4.02(1H,dd,J=10.0,2.7Hz),3.84-3.79(1H,m),3.71-3.65(1H,m),3.56-3.53(1H,m),2.70(1H,d,J=2.4Hz).
2-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-リボフラノシル}-6-クロロ-9H-プリン
上記工程3で得られた化合物(2.36g)のピリジン(56mL)溶液に、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(2.30g)を加え、窒素雰囲気下、室温で17時間攪拌した。反応液にエタノール(20mL)を加えて、更に10分間程度攪拌した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.41g)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+Na)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.32(1H,s),8.14-8.11(2H,m),7.64-7.59(1H,m),7.49-7.44(2H,m),7.23-7.12(9H,m),6.72(4H,d,J=7.9Hz),5.94(1H,d,J=5.4Hz),5.64(1H,d,J=15.1Hz),5.59(1H,d,J=14.5Hz),4.83-4.77(2H,m),4.37-4.33(2H,m),3.77(6H,s),3.35(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.28(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),2.64(1H,s).
2-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-6-クロロ-9H-プリン
上記工程4で得られた化合物(2.61g)のエチレングリコールジメチルエーテル(72.0mL)溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.89mL)とtert-ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート(1.24mL)を加え、窒素雰囲気下、室温で1.5時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.10g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.35(1H,s),8.12-8.10(2H,m),7.60-7.56(1H,m),7.46-7.42(2H,m),7.37-7.35(2H,m),7.28-7.20(7H,m),6.81-6.75(4H,m),6.00(1H,d,J=4.8Hz),5.50(2H,s),4.69(1H,q,J=5.6Hz),4.39(1H,dd,J=5.1,3.9Hz),4.16(1H,q,J=3.8Hz),3.77(6H,s),3.45(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.31(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.06(1H,d,J=6.7Hz),0.86(9H,s),0.04(3H,s),-0.02(3H,s).
2-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-6-クロロ-9H-プリン
上記工程5で得られた化合物(511mg)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(569mg)をリン原子に関するジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.43(0.6H,s),8.39(0.4H,s),8.10(2H,d,J=7.9Hz),7.58(1H,t,J=7.6Hz),7.47-7.38(4H,m),7.31-7.18(7H,m),6.82-6.78(4H,m),6.25(0.4H,d,J=4.8Hz),6.21(0.6H,d,J=4.8Hz),5.49(1H,d,J=13.9Hz),5.45(1H,d,13.9Hz),4.98-4.93(0.6H,m),4.83-4.78(0.4H,m),4.45(0.6H,t,J=4.2Hz),4.36(0.4H,t,J=4.2Hz),4.21-4.17(1H,m),3.78(6H,s),3.76-3.32(6H,m),2.46(1.2H,t,J=6.3Hz),2.30(0.8H,t,J=6.3Hz),1.28-0.86(12H,m),0.825(5.4H,s),0.815(3.6H,s),0.08(1.8H,s),0.04(1.2H,s),-0.01(1.8H,s),-0.02(1.2H,s).
N,N-ジエチルエタンアミニウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{2-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-6-クロロ-9H-プリン-9-イル}-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-チオラート
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:2.72g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程6で得られた化合物(3.03g)を用いて、実施例1工程8及び実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(351mg)とジアステレオマー2(351mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1268(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.30(1H,s),8.14(2H,d,J=7.3Hz),7.99(1H,s),7.64(1H,t,J=7.3Hz),7.52(2H,t,J=7.9Hz),7.40-7.36(2H,m),7.30-7.23(4H,m),6.43(1H,d,J=8.5Hz),6.37(1H,d,J=3.0Hz),5.62-5.56(1H,m),5.62(2H,s),5.06-5.01(1H,m),4.83(1H,dd,J=4.5,2.7Hz),4.69(1H,d,J=4.2Hz),4.49-4.28(7H,m),4.08(1H,dd,J=12.1,4.8Hz),3.81-3.70(1H,m),3.46-3.38(1H,m),3.17-3.10(8H,m),2.29-2.23(4H,m),1.28(9H,t,J=7.3Hz),0.91(9H,s),0.90(9H,s),0.29(3H,s),0.20(3H,s),0.16(3H,s),0.11(3H,s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1268(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.97(1H,s),8.14(2H,d,J=8.5Hz),7.94(1H,s),7.68-7.63(1H,m),7.55-7.50(2H,m),7.39-7.36(2H,m),7.26-7.21(4H,m),6.41(1H,d,J=7.9Hz),6.21(1H,d,J=5.4Hz),5.64(1H,d,J=15.1Hz),5.57(1H,d,J=15.1Hz),5.25-5.18(2H,m),5.13-5.10(1H,m),5.04-5.01(1H,m),4.94-4.78(3H,m),4.51(1H,t,J=10.9Hz),4.33-4.06(6H,m),3.15(6H,q,J=7.3Hz),3.08-2.96(2H,m),2.84-2.71(2H,m),2.25-2.19(2H,m),1.28(9H,t,J=7.3Hz),0.91(9H,s),0.79(9H,s),0.19(6H,s),0.14(3H,s)-0.07(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[6-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー1)(37.3mg)のメタノール(0.500mL)溶液に、28%アンモニア水溶液(0.500mL)を加え、シールドチューブ中60℃で3時間攪拌した。反応液をそのまま分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:35%-55%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(22.0mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:988(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[6-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(37.7mg)のテトラヒドロフラン(0.500mL)溶液に、28%アンモニア水溶液(0.500mL)を加え、シールドチューブ中60℃で3時間攪拌した。28%アンモニア水溶液(0.500mL)を追加し更に3時間攪拌した。28%アンモニア水溶液(0.500mL)を追加し更に終夜攪拌した。反応液をそのまま分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-50%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(19.3mg)を得た。
MS(ESI)m/z:988(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.64(1H,s),8.02(1H,s),7.09(1H,s),6.35(2H,d,J=7.9Hz),5.48-5.41(2H,m),5.26-5.19(1H,m),5.00-4.95(2H,m),4.70-4.53(4H,m),4.22(1H,s),4.06(1H,dd,J=12.1,4.8Hz),3.91-3.86(1H,m),3.53-3.48(2H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),2.92(2H,t,J=5.4Hz),2.04-1.99(2H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz),1.00(9H,s),0.74(9H,s),0.28(6H,s),0.21(3H,s),-0.06(3H,s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8-1で得られた化合物(22.0mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(8.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:760(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.70(1H,s),8.03(1H,s),7.14(1H,s),6.39(1H,d,J=8.5Hz),6.29(1H,d,J=3.6Hz),5.40-5.35(1H,m),5.15(1H,dt,J=9.1,3.8Hz),4.84(1H,d,J=3.6Hz),4.80(1H,t,J=4.5Hz),4.57(2H,s),4.51-4.43(2H,m),4.38-4.31(2H,m),4.09-4.00(2H,m),3.52-3.48(2H,m),2.89-2.76(2H,m),2.01-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.1(s),54.4(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8-2で得られた化合物(19.3mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(6.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:760(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.76(1H,s),8.05(1H,s),7.18(1H,s),6.38(1H,d,J=8.5Hz),6.33(1H,d,J=6.7Hz),5.49-5.43(2H,m),4.81(1H,dd,J=6.3,4.5Hz),4.58(2H,s),4.51-4.29(5H,m),4.04(1H,d,J=12.1Hz),3.93-3.88(1H,m),3.54-3.52(2H,m),2.92(2H,t,J=5.4Hz),2.05-2.00(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.0(s),60.3(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-6-クロロ-9H-プリン
文献既知(J.Org.Chem.2000,65,5104-5113)の9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-リボフラノシル}-6-クロロ-9H-プリン(15.3g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(8.44g)と標題化合物の位置異性体である9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-6-クロロ-9H-プリン(5.77g)を得た。
MS(ESI)m/z:703(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.71(1H,s),8.37(1H,s),7.40-7.37(2H,m),7.31-7.19(7H,m),6.82-6.78(4H,m),6.06(1H,d,J=4.9Hz),4.79-4.74(1H,m),4.59(1H,dd,J=4.9,3.9Hz),4.20(1H,dd,J=3.9,1.9Hz),3.79(3H,s),3.78(3H,s),3.52(1H,dd,J=10.7,3.4Hz),3.29(1H,dd,J=10.7,3.9Hz),3.08(1H,d,J=6.8Hz),0.90(9H,s),0.10(3H,s),0.03(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:703(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.67(1H,s),8.36(1H,s),7.46-7.42(2H,m),7.36-7.20(7H,m),6.84-6.80(4H,m),6.11(1H,d,J=5.4Hz),5.00-4.97(1H,m),4.40-4.35(1H,m),4.31-4.28(1H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.52(1H,dd,J=10.7,2.9Hz),3.42(1H,dd,J=10.7,3.9Hz),2.68(1H,d,J=3.9Hz),0.84(9H,s),0.00(3H,s),-0.16(3H,s).
9-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-6-クロロ-9H-プリン
上記工程1で得られた化合物(5.39g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.78g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
MS(ESI)m/z:903(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.69(0.5H,s),8.67(0.5H,s),8.43(0.5H,s),8.41(0.5H,s),7.43-7.37(2H,m),7.32-7.19(7H,m),6.83-6.78(4H,m),6.30(0.5H,d,J=4.4Hz),6.21(0.5H,d,J=4.9Hz),5.06-5.00(0.5H,m),4.86-4.80(0.5H,m),4.56-4.50(1H,m),4.27-4.20(1H,m),3.79(6H,s),3.75-3.62(1H,m),3.57-3.46(4H,m),3.30(1H,dt,J=10.7,3.9Hz),2.50(1H,t,J=6.3Hz),2.37(1H,t,J=6.6Hz),1.13-1.06(9H,m),0.90(1.5H,s),0.89(1.5H,s),0.86(4.5H,s),0.85(4.5H,s),0.12(1.5H,s),0.08(1.5H,s),0.02(1.5H,s),0.02(1.5H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:1.84g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程2で得られた化合物(1.62g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
3-{[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-(6-クロロ-9H-プリン-9-イル)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-イル]オキシ}プロパンニトリル
上記工程3で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(626mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1134(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ- 2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程4で得られた化合物(299mg:ジアステレオマー混合物)のエタノール(10mL)溶液にエチレンジアミン(0.352mL)とトリエチルアミン(0.735mL)を加え、60℃で15時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(122mg:不純物含有)とジアステレオマー2(111mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1001(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1001(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程5で得られた化合物(ジアステレオマー1)(122mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(29.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:773(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.77(1H,s),8.27(1H,s),8.03(1H,s),7.10(1H,s),6.35(1H,d,J=8.5Hz),6.27(1H,d,J=4.8Hz),5.41(1H,ddd,J=7.9,4.2,2.1Hz),5.21-5.14(1H,m),4.84-4.77(2H,m),4.49-4.38(2H,m),4.35-4.26(2H,m),4.09-3.99(2H,m),3.92-3.80(2H,m),3.51-3.45(2H,m),3.22(2H,t,J=6.0Hz),2.89-2.81(2H,m),2.02-1.94(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.8(s),55.0(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程5で得られた化合物(ジアステレオマー2)(119mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(15.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:773(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.83(1H,s),8.27(1H,s),8.02(1H,s),7.10(1H,s),6.35(1H,d,J=7.9Hz),6.32(1H,d,J=6.7Hz),5.55-5.43(2H,m),4.81(1H,dd,J=7.0,4.5 Hz),4.52-4.29(5H,m),4.06-4.00(1H,m),3.93-3.80(3H,m),3.52-3.47(2H,m),3.21(2H,t,J=5.7Hz),2.94-2.88(2H,m),2.05-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),60.1(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-{6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-{6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例13工程4で得られた化合物(313mg)のエタノール(10mL)溶液に、2-アミノエタノール(0.330mL)とトリエチルアミン(0.769mL)を加え、60℃で15時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(111mg:不純物含有)とジアステレオマー2(102mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1002(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1002(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-{6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程1で得られた化合物(ジアステレオマー1)(111mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(47.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:774(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.70(1H,s),8.22(1H,s),8.03(1H,s),7.10(1H,s),6.34(1H,d,J=8.5Hz),6.29(1H,d,J=4.8Hz),5.41-5.34(1H,m),5.19-5.13(1H,m),4.84(1H,d,J=4.2Hz),4.79(1H,dd,J=4.8,2.4Hz),4.52-4.41(2H,m),4.39-4.31(2H,m),4.07-3.96(2H,m),3.81-3.66(4H,m),3.52-3.47(2H,m),2.90-2.77(2H,m),2.03-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),54.4(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-{6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程1で得られた化合物(ジアステレオマー2)(102mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(27.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:774(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.78(1H,s),8.22(1H,s),8.02(1H,s),7.12(1H,s),6.34(1H,d,J=1.8Hz),6.32(1H,s),5.52-5.42(2H,m),4.80(1H,dd,J=6.7,4.8Hz),4.50-4.28(5H,m),4.05-3.98(1H,m),3.93-3.86(1H,m),3.81-3.68(4H,m),3.53-3.47(2H,m),2.95-2.88(2H,m),2.05-1.98(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.0(s),60.2(s).
N-[2-({9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}アミノ)エチル]-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-(6-{[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例13工程6-2で得られた化合物(10.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-35%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(6.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:831(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.78(1H,s),8.24(1H,s),8.02(1H,s),7.12(1H,s),6.33(2H,d,J=6.7Hz),5.52-5.42(2H,m),4.80(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.50-4.27(5H,m),4.04-3.98(1H,m),3.95(2H,s),3.93-3.86(1H,m),3.83-3.73(2H,m),3.58-3.46(4H,m),2.95-2.88(2H,m),2.05-1.98(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),60.4(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{2-アミノ-6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
2-アセトアミド-2’,3’,5’-トリ-O-アセチル-N-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)アデノシン
市販(東京化成工業)の6-クロロ-9-β-D-リボフラノシル-9H-プリン-2-アミン(5.00g)のエタノール(30mL)溶液に2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エタン-1-アミン(3.49g)とN,N-ジイソプロピルエチルアミン(4.33mL)を加え、80℃で65時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物にピリジン(15mL)と無水酢酸(15mL)を加え、70℃で4時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(8.91g)を得た。
MS(ESI)m/z:609(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.84(1H,s),7.77(1H,s),6.14(1H,brs),6.03(1H,d,J=4.8Hz),5.92(1H,t, J=5.1Hz),5.72(1H,t,J=5.1Hz),4.50-4.40(2H,m),4.35(1H,dd,J=11.8,4.5Hz),3.83(2H,t, J=5.1Hz),3.76-3.63(2H,m),2.54(3H,s),2.14(3H,s),2.10(6H,s),0.91(9H,s),0.07(6H,s).
2-アセトアミド-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-N-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)アデノシン
上記工程1で得られた化合物(4.00g)のジクロロメタン(40mL)溶液にナトリウムメトキシドのメタノール溶液(1.0M,6.64mL)を加え、0℃で1時間攪拌した。反応液に酢酸(0.413mL)とピリジン(0.5mL)を加えて反応を停止した後、反応液を減圧濃縮した。残留物にピリジンを加えた後、減圧下で一部濃縮し、ピリジン(約20mL)溶液を調製した。この溶液に0℃で4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(4.68g)を加え、同温度で30分間攪拌した後、4℃で終夜保存した。反応液にメタノール(2mL)を加え、30分間攪拌した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(4.41g)を得た。
MS(ESI)m/z:785(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.97(1H,s),7.90(1H,s),7.21-7.08(9H,m),6.73-6.67(4H,m),6.14(1H,s),5.88(1H,d,J=6.7Hz),4.91-4.85(1H,m),4.46(1H,t,J=3.0Hz),4.32(1H,d,J=5.4Hz),3.86-3.80(2H,m),3.76(3H,s),3.76(3H,s),3.70-3.66(1H,m),3.42-3.34(2H,m),3.13(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),2.24(3H,s),0.90(9H,s),0.07(3H,s),0.07(3H,s).(観測可能なピークのみ記載)
2-アセトアミド-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-N-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)アデノシン
上記工程2で得られた化合物(4.41g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.75g)及び標題化合物の位置異性体である2-アセトアミド-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-N-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)アデノシン(1.31g)を得た。
MS(ESI)m/z:899(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.89(1H,s),7.69(1H,brs),7.39-7.34(2H,m),7.29-7.18(7H,m),6.80-6.75(4H,m),6.11(1H,brs),5.89(1H,d,J=5.4Hz),4.65(1H,dd,J=5.4,2.7Hz),4.43(1H,dd,J=5.1,3.3Hz),4.19-4.15(1H,m),3.83(2H,dd,J=5.4,2.7Hz),3.77(6H,s),3.74-3.63(2H,m),3.40(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.22(1H,dd,J=10.9,3.9Hz),2.43(3H,s),0.90(9H,s),0.88(9H,s),0.10(3H,s),0.06(6H,s),0.03(3H,s).(観測可能なピークのみを記載)
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:899(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.84(1H,s),7.52(1H,brs),7.48-7.44(2H,m),7.37-7.32(4H,m),7.29-7.18(3H,m),6.83-6.78(4H,m),6.12(1H,brs),5.89(1H,d,J=6.0Hz),4.96-4.89(1H,m),4.32-4.27(1H,m),4.24(1H,dd,J=3.2,1.6Hz),3.84(2H,dd,J=5.4,2.7Hz),3.78(6H,s),3.75-3.65(2H,m),3.48(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),3.35(1H,dd,J=10.6,3.6Hz),2.72(1H,d,J=3.0Hz),2.37(3H,s),0.91(9H,s),0.84(9H,s),0.07(6H,s),-0.01(3H,s),-0.17(3H,s).
2-アセトアミド-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-N-(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン
上記工程3で得られた化合物(1.75g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.08g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
MS(ESI)m/z:1099(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.90(0.6H,s),7.88(0.4H,s),7.61(1H,d,J=7.3 Hz),7.45-7.18(9H,m),6.81(4H,m),6.10(0.6H,d,J=5.4Hz),6.09(1H,brs),6.06(0.4H,d,J=4.8Hz),4.95-4.85(0.6H,m),4.76-4.69(0.4H,s),4.45-4.41(0.6H,m),4.40-4.36(0.4H,m),4.19-4.13(1H,m),3.86-3.80(2H,m),3.78(6H,s),3.75-3.41(8H,m),3.32-3.22(1H,m),2.55-2.45(3H,m),2.36-2.30(1H,m),1.30-1.10(9H,m),0.92(1.2H,d,J=6.7Hz),0.90(9H,s),0.85(9H,s),0.76(1.8H,d,J=6.7Hz),0.10(1.8H,s),0.07(1.2H,s),0.06(6H,s),0.00(3H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:981mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程4で得られた化合物(1.05g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-[(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)アミノ]-9H-プリン-2-イル}アセトアミド
上記工程5で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(413mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1330(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{2-アミノ-6-[(2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}エチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(413mg)のメタノール(5mL)と28%アンモニア水(5mL)に溶解させ、室温で63時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で簡易精製し、低極性のジアステレオマー1と高極性のジアステレオマー2を分離した。それぞれのジアステレオマーを再度メタノール(5mL)と28%アンモニア水(5mL)に溶解させ、100℃で2日間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(70.4mg:不純物含有)とジアステレオマー2(65.1mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1131(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1131(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{2-アミノ-6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー1)(70.4mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)]。
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(20.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ: 8.24(1H,s),8.02(1H,s),7.09(1H,s),6.29(1H,d,J=4.2Hz),6.12(1H,d,J=8.5Hz),5.46-5.39(1H,m),5.22-5.15(1H,m),4.84(1H,d,J=3.6Hz),4.80(1H,t,J=4.5Hz),4.50-4.32(3H,m),4.32-4.28(1H,m),4.12-3.98(2H,m),3.74(2H,t,J=5.4Hz),3.68-3.60(2H,m),3.48(2H,t,J=5.4Hz),2.87-2.70(2H,m),2.01-1.93(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.8(s),54.1(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{2-アミノ-6-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(65.1mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール、メタノール:0%-60%(0分-40分)]。
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(7.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.39(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.33(1H,d,J=6.7Hz),6.13(1H,d,J=8.5Hz),5.51-5.40(2H,m),4.83-4.78(1H,m),4.51-4.29(4H,m),4.28-4.23(1H,m),4.07-4.00(1H,m),3.94-3.87(1H,m),3.75(2H,t,J=5.7Hz),3.69-3.62(2H,m),3.53-3.47(2H,m),2.91(2H,t,J=5.7Hz),2.05-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.9(s),60.3(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[6-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
6-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-{2,3,5-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン
文献既知(J.Org.Chem.1997,62,6833-6841)の6-クロロ-9-{2,3,5-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン(10.7g)を用いて、実施例12工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(10.4g)を得た。
MS(ESI)m/z:729(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.94(1H,s),8.50(1H,s),8.18-8.13(2H,m),7.60-7.54(1H,m),7.48-7.41(2H,m),6.13(1H,d,J=4.2Hz),5.88(2H,s),4.63(1H,dd,J=4.5,2.1Hz),4.34(1H,dd,J=4.2,2.1Hz),4.17-4.14(1H,m),4.04(1H,dd,J=11.5,3.6Hz),3.80(1H,dd,J=11.5,2.4Hz),0.94(9H,s),0.93(9H,s),0.80(9H,s),0.14(3H,s),0.13(3H,s),0.11(3H,s),0.10(3H,s),-0.02(3H,s),-0.20(3H,s).
6-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン
上記工程1で得られた化合物(10.3g)のテトラヒドロフラン(50mL)溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,49.4mL)を加え、0℃で4時間攪拌した。反応液に酢酸(2.83mL)を加えた後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で粗精製した。粗生成物のピリジン(50mL)溶液に、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(10.1g)を0℃で加え、4℃で終夜攪拌した。反応液にメタノール(2mL)を加え、1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(4.62g)を得た。
MS(ESI)m/z:689(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.91(1H,s),8.33(1H,s),8.15-8.11(2H,m),7.60-7.54(1H,m),7.46-7.40(2H,m),7.27-7.12(9H,m),6.75-6.70(4H,m),6.04(1H,d,J=6.0Hz),5.88(2H,s),5.43(1H,brs),4.90-4.84(1H,m),4.48-4.41(2H,m),3.76(6H,s),3.44(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.30(1H,dd,J=10.6,3.3Hz),3.09(1H,brs).
6-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン
上記工程2で得られた化合物(4.53g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.09g)及び標題化合物の位置異性体である6-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-9H-プリン(1.81g)を得た。
MS(ESI)m/z:803(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.92(1H,s),8.32(1H,s),8.16-8.12(2H,m),7.60-7.54(1H,m),7.47-7.36(4H,m),7.31-7.17(7H,m),6.81-6.76(4H,m),6.07(1H,d,J=4.8Hz),5.87(2H,s),4.81-4.74(1H,m),4.62-4.57(1H,m),4.22-4.17(1H,m),3.77(6H,s),3.52(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.26(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.12(1H,d,J=6.7Hz),0.89(9H,s),0.09(3H,s),0.02(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:803(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.87(1H,s),8.31(1H,s),8.17-8.13(2H,m),7.60-7.55(1H,m),7.48-7.42(4H,m),7.35-7.31(4H,m),7.28-7.17(3H,m),6.83-6.78(4H,m),6.12(1H,d,J=5.4Hz),5.88(2H,s),4.99(1H,dd,J=5.1,2.6Hz),4.40-4.34(1H,m),4.28(1H,dd,J=3.6,2.0Hz),3.77(6H,s),3.53(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),3.40(1H,dd,J=10.9,3.9Hz),2.68(1H,d,J=4.8Hz),0.84(9H,s),0.00(3H,s),-0.14(3H,s).
6-[(ベンゾイルオキシ)メチル]-9-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-9H-プリン
上記工程3で得られた化合物(2.04g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.37g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=56:44)として得た。
MS(ESI)m/z:1003(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.88(0.44H,s),8.87(0.56H,s),8.37(0.44H,s),8.35(0.56H,s),8.16-8.11(2H,m),7.60-7.54(1H,m),7.47-7.38(4H,m),7.33-7.16(7H,m),6.83-6.76(4H,m),6.31(0.44H,d,J=4.8Hz),6.21(0.56H,d,J=4.8Hz),5.87(0.88H,s),5.86(1.12H,s),5.08-5.01(0.56H,m),4.86-4.80(0.44H,m),4.56-4.50(1H,m),4.27-4.20(1H,m),3.85-3.54(2H,m),3.78(6H,s),3.54-3.44(3H,m),3.34-3.25(1H,m),2.51(1.12H,t,J=6.3Hz),2.34(0.88H,t,J=6.3Hz),1.14-1.05(9H,m),0.90(3H,d,J=6.7Hz),0.85(5.04H,s),0.85(3.96H,s),0.11(1.68H,s),0.08(1.32H,s),0.01(3H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:783mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程4で得られた化合物(765mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}メチル ベンゾエート
上記工程5で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(345mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1234(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[6-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(345mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(101mg:不純物含有)とジアステレオマー2(89.9mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:973(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:973(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[6-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー1)(101mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)]。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(59.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.07(1H,s),8.88(1H,s),8.03(1H,s),7.10(1H,s),6.48(1H,d,J=8.5Hz),6.29(1H,d,J=4.8Hz),5.46(1H,dt,J=7.9,4.2Hz),5.21-5.15(1H,m),5.10(2H,s),4.84-4.80(1H,m),4.79(1H,t,J=4.5Hz),4.51-4.42(2H,m),4.37-4.34(1H,m),4.33-4.24(1H,m),4.09-3.97(2H,m),3.52-3.47(2H,m),2.89-2.82(2H,m),2.03-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),54.8(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[6-(ヒドロキシメチル)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(88.5mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール、メタノール:10%-70%(0分-40分)]。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(27.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.16(1H,s),8.87(1H,s),8.03(1H,s),7.11(1H,s),6.51(1H,d,J=8.5Hz),6.33(1H,d,J=6.7Hz),5.58-5.45(2H,m),5.12-5.09(2H,m),4.81-4.76(1H,m),4.53-4.49(1H,m),4.48-4.36(2H,m),4.34(2H,s),4.09-4.02(1H,m),3.92-3.85(1H,m),3.53-3.47(2H,m),2.94-2.87(2H,m),2.05-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),60.1(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[4-アミノ-5-(3-アミノプロピル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
4-アジド-5-ヨード-7-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
文献既知(Synth.Commun.2012,42,358-374)の4-クロロ-5-ヨード-7-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン(17.96g)のN,N-ジメチルホルムアミド(90mL)溶液に、アジ化テトラブチルアンモニウム(10.1g)を加え、80℃で30分間攪拌した。反応液を室温に戻し、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(17.66g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:9.18(1H,s),8.13-8.09(2H,m),8.03-7.99(2H,m),7.95-7.90(2H,m),7.64-7.34(10H,m),6.71(1H,d,J=5.1Hz),6.20(1H,t,J=5.5Hz),6.11(1H,t,J=5.3Hz),4.96(1H,dd,J=12.2,3.2Hz),4.88-4.84(1H,m),4.70(1H,dd,J=12.2,3.2Hz).
4-アジド-7-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロパ-1-イン-1-イル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
上記工程1で得られた化合物(9.64g)のN,N-ジメチルホルムアミド(30mL)-テトラヒドロフラン(100mL)混合溶液に、2-(トリメチルシリル)エチルプロパ-2-イン-1-イルカルバメート(6.58g)、トリエチルアミン(4.57mL)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(763mg)、及びヨウ化銅(I)(251mg)を順に加え、室温で終夜攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(7.20g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:9.16(1H,s),8.14-8.08(2H,m),8.03-7.99(2H,m),7.94-7.90(2H,m),7.66(1H,s),7.65-7.35(9H,m),6.66(1H,d,J=5.1Hz),6.22(1H,t,J=5.5Hz),6.10(1H,t,J=5.3Hz),5.07(1H,brs),4.95(1H,dd,J=12.3,2.9Hz),4.88-4.84(1H,m),4.70(1H,dd,J=12.3,3.7Hz),4.29(2H,d,J=5.5Hz),4.21(2H,t,J=8.6Hz),1.02(2H,t,J=8.6Hz),0.05(9H,s).
7-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程2で得られた化合物(7.20g)のメタノール(70mL)-テトラヒドロフラン(70mL)混合溶液に20%水酸化パラジウム炭素(2g)を加え、水素雰囲気下、室温で2時間攪拌した。触媒を濾去した後、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(5.45g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.26(1H,s),8.19-8.15(2H,m),8.02-7.97(2H,m),7.96-7.92(2H,m),7.65-7.48(5H,m),7.43-7.32(4H,m),6.82(1H,s),6.73(1H,d,J=6.3Hz),6.17(1H,t,J=5.9Hz),6.11(1H,dd,J=5.9,3.9Hz),5.23(2H,s),4.90(1H,dd,J=12.2,3.4Hz),4.77-4.70(2H,m),4.63(1H,dd,J=12.2,3.4Hz),4.15(2H,t,J=8.6Hz),3.20-3.10(2H,m),2.62(2H,t,J=7.6Hz),1.72-1.62(2H,m),1.01-0.94(2H,m),0.04(9H,s).
N,N-ジベンゾイル-7-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程3で得られた化合物(5.45g)のジクロロメタン(60mL)溶液に、0℃でピリジン(1.69mL)と塩化ベンゾイル(2.01mL)を順に加え、0℃で5分間攪拌後、さらにトリエチルアミン(2.91mL)を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とジクロロメタンを加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、さらに酢酸エチルとヘキサンで粉末化した。得られた固体を濾取し、標題化合物(6.16g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.54(1H,s),8.20-8.16(2H,m),8.02-7.98(2H,m),7.96-7.92(2H,m),7.82-7.76(4H,m),7.65-7.32(15H,m),7.18(1H,brs),6.82(1H,d,J=5.9Hz),6.17(1H,t,J=6.1Hz),6.13(1H,dd,J=5.9,3.5Hz),4.94(1H,dd,J=12.2,3.2Hz),4.79-4.75(1H,m),4.65(1H,dd,J=12.2,3.2Hz),4.41(1H,brs),4.08(2H,t,J=8.6Hz),2.95-2.87(2H,m),2.58-2.50(2H,m),1.54-1.52(2H,m),0.97-0.91(2H,m),0.02(9H,s).
N-ベンゾイル-7-β-D-リボフラノシル-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程4で得られた化合物(6.16g)のテトラヒドロフラン(250mL)溶液に、0℃でナトリウムメトキシドのメタノール溶液(1.0M,12.0mL)を滴下し、室温で1時間攪拌した。0℃で反応液に酢酸(1.07mL)を加えた後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[酢酸エチル/メタノール]で精製し、さらに酢酸エチルとヘキサンで粉末化した。得られた固体を濾取し、標題化合物(3.35g)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:8.62(1H,s),8.04(2H,d,J=7.0Hz),7.69-7.62(1H,m),7.60-7.54(3H,m),6.26(1H,d,J=6.3Hz),4.59(1H,t,J=5.7Hz),4.31(1H,dd,J=5.1,3.5Hz),4.12-4.01(3H,m),3.86(1H,dd,J=12.3,2.9Hz),3.76(1H,dd,J=12.1,3.5Hz),3.01(2H,t,J=6.7Hz),2.76(2H,t,J=7.4Hz),1.86-1.76(2H,m),0.93(2H,t,J=8.2Hz),0.03(9H,s).
N-ベンゾイル-7-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-リボフラノシル}-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程5で得られた化合物(3.35g)をピリジンで共沸し、残留物の無水ピリジン(50mL)溶液に、0℃で4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(2.38g)を加え、室温で終夜攪拌した。反応液にエタノール(5mL)を加えて反応を停止した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し標題化合物(4.34g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.51(1H,brs),8.30(1H,brs),8.05-7.90(1H,m),7.56-7.42(3H,m),7.39-7.31(2H,m),7.29-7.16(10H,m),6.81-6.75(4H,m),6.22(1H,d,J=5.9Hz),4.91(1H,brs),4.76-4.67(2H,m),4.45-4.41(1H,m),4.38-4.29(1H,m),4.05-3.95(2H,m),3.77(6H,s),3.50(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),3.37-3.27(1H,m),3.19-2.94(4H,m),2.66(1H,brs),1.82(1H,brs),0.93-0.76(2H,m),-0.01(9H,s).
N-ベンゾイル-7-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン(3’-O-TBS体)
上記工程6で得られた化合物(4.34g)を用いて、実施例8工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.51g)と、標題化合物の位置異性体である、N-ベンゾイル-7-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン(2’-O-TBS体)(2.01g)をそれぞれ得た。
(3’-OTBS体)(高極性)
1H-NMR(CDCl3)δ:8.38-8.26(2H,m),8.10-8.03(1H,m),7.58-7.40(5H,m),7.36-7.20(10H,m),6.86-6.77(4H,m),6.30-6.22(1H,m),5.02-4.89(1H,m),4.63-4.45(2H,m),4.17-4.10(1H,m),4.04-3.92(2H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.59-3.52(1H,m),3.32-3.23(1H,m),3.17-2.80(4H,m),1.86-1.64(2H,m),0.89(9H,s),0.86-0.72(2H,m),0.09(3H,s),0.01(3H,s),-0.01(9H,s).
(2’-OTBS体)(低極性)
1H-NMR(CDCl3)δ:8.39-8.25(2H,m),8.04(1H,s),7.57-7.42(5H,m),7.37-7.18(10H,m),6.87-6.80(4H,m),6.33(1H,d,J=5.1Hz),5.01(1H,brs),4.78(1H,t,J=5.7Hz),4.40-4.33(1H,m),4.29-4.25(1H,m),4.05-3.92(2H,m),3.80(3H,s),3.79(3H,s),3.59-3.51(1H,m),3.44-3.37(1H,m),3.16-3.03(1H,m),2.99-2.81(3H,m),1.74-1.61(2H,m),0.83(9H,s),0.80-0.70(2H,m),0.00--0.03(12H,m),-0.20(3H,s).
N-ベンゾイル-7-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-5-[3-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)プロピル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程7で得られた化合物(3’-OTBS体)(1.51g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、リン原子上のジアステレオマーである標題化合物のジアステレオマー1(0.77g)とジアステレオマー2(0.48g)をそれぞれ得た。
ジアステレオマー1(低極性)
1H-NMR(CDCl3)δ:8.36-8.27(2H,m),8.02(1H,brs),7.57-7.40(5H,m),7.37-7.21(10H,m),6.87-6.77(4H,m),6.39(1H,d,J=5.1Hz),4.98(1H,brs),4.85-4.73(1H,m),4.56-4.47(1H,m),4.20-4.15(1H,m),4.05-3.92(2H,m),3.88-3.67(8H,m),3.63-3.47(3H,m),3.33-3.23(1H,m),3.15-2.82(3H,m),2.60-2.45(2H,m),1.83-1.64(2H,m),1.10(6H,d,J=6.7Hz),0.92(6H,d,J=6.7Hz),0.87(9H,s),0.81-0.71(2H,m),0.12(3H,s),0.03(3H,s),-0.01(9H,s).
ジアステレオマー2(高極性)
1H-NMR(CDCl3)δ:8.36-8.28(2H,m),8.05(1H,brs),7.57-7.38(5H,m),7.36-7.19(10H,m),6.84-6.79(4H,m),6.48-6.40(1H,m),5.02(1H,brs),4.65-4.42(2H,m),4.19-4.15(1H,m),4.06-3.90(2H,m),3.80-3.48(11H,m),3.32-3.24(1H,m),3.17-3.03(2H,m),2.99-2.86(1H,m),2.51-2.40(2H,m),1.86-1.69(2H,m),1.18-1.02(12H,m),0.85(9H,s),0.81-0.71(2H,m),0.08(3H,s),0.02(3H,s),-0.01(9H,s).
2-(トリメチルシリル)エチル (3-{4-ベンズアミド-7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル}プロピル)カルバメート
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:1.08g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程8で得られた化合物(1.25g:ジアステレオマー混合物)を用いて、実施例1工程8及び実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-50%(0分-35分)]でリン原子上のジアステレオマーを分離し、標題化合物のジアステレオマー1(0.19g)とジアステレオマー2(0.043g)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1419(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1419(M+H)+.
2-(トリメチルシリル)エチル (3-{4-アミノ-7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル}プロピル)カルバメート
上記工程9で得られた化合物(ジアステレオマー1)(0.19g)を用いて、実施例12工程8-1と同様の手法で反応を行った。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:40%-70%(0分-35分)]で精製し、標題化合物(58mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1158(M+H)+.
2-(トリメチルシリル)エチル (3-{4-アミノ-7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル}プロピル)カルバメート
上記工程9で得られた化合物(ジアステレオマー2)(43mg)を用いて、実施例12工程8-1と同様の手法で反応を行った。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-60%(0分-35分)]で精製し、標題化合物(15mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1158(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[4-アミノ-5-(3-アミノプロピル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程10-1で得られた化合物(58mg)のテトラヒドロフラン(1mL)溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,5mL)を加え、室温で終夜攪拌した。反応が完結していないので、更に40℃で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-40%(0分-35分)]で精製した。さらにSep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-30%]で精製し、標題化合物(25mg)を得た。
MS(ESI)m/z:786(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[4-アミノ-5-(3-アミノプロピル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程10-2で得られた化合物(15mg)を用いて、上記工程11-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(7.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:786(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[4-アミノ-5-(3-アミノプロピル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程11-1で得られた化合物(25mg)を用いて、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(17mg)を得た。
MS(ESI)m/z:786(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.028(1H,s),8.025(1H,s),7.71(1H,s),7.09(1H,s),6.51(1H,d,J=8.2Hz),6.26(1H,d,J=5.1Hz),5.38-5.29(1H,m),5.17-5.10(1H,m),4.85-4.80(1H,m),4.75(1H,d,J=3.9Hz),4.44-4.37(1H,m),4.33-4.23(3H,m),4.09-3.97(2H,m),3.52-3.46(2H,m),3.00-2.72(6H,m),2.13-2.02(2H,m),2.02-1.93(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:56.65(s),55.31(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[4-アミノ-5-(3-アミノプロピル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程11-2で得られた化合物(7.2mg)を用いて、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(6.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:786(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.02(1H,s),8.01(1H,s),7.75(1H,s),7.07(1H,s),6.52(1H,d,J=8.6Hz),6.29(1H,d,J=7.4Hz),5.61-5.55(1H,m),5.47-5.37(1H,m),4.86-4.83(1H,m),4.56-4.43(2H,m),4.31-4.21(3H,m),4.06-3.99(1H,m),3.91-3.84(1H,m),3.54-3.46(3H,m),3.00-2.87(5H,m),2.29-2.07(2H,m),2.06-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.08(s),58.68(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
3-ブロモ-N-(プロパ-2-エン-1-イル)-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-アミン
市販(Bepharm)の3-ブロモ-4-クロロ-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン(8.50g)をジオキサン(140mL)に懸濁させ、室温でN,N,-ジイソプロピルエチルアミン(12.5mL)とアリルアミン(11mL)を加え、同温度で70時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をジクロロメタンと酢酸エチルでスラリー状にした後、固体を濾取した(固体1)。濾液を減圧濃縮後、同様の操作を2回繰り返してそれぞれ固体2と固体3を得た。最後の濾液をシリカゲルカラム[ヘキサン/酢酸エチル]で精製して固体4を得た。さらに、固体1をシリカゲルカラム[ヘキサン/酢酸エチル]で精製して固体5得た。固体4と固体5を併せて、標題化合物を(4.48g)得た。固体2と固体3を併せて、不純物を含む標題化合物(3.78g)を得た。
MS(ESI)m/z:254(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:13.82(1H,s),8.26(1H,s),7.23(1H,t,J=5.9Hz),5.96(1H,m),5.18(1H,dd,J=17.1,1.5Hz),5.10(1H,dd,J=10.3,1.5Hz),4.19(2H,m).
3-ブロモ-N-(プロパ-2-エン-1-イル)-1-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程1で得られた化合物(1.00g)と市販(Ark Pharm)の1-O-アセチル-2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノース(2.58g)をニトロメタン(50mL)に懸濁させた後、加熱して溶解させた。加熱還流下で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体(0.63mL)を加え、同温度で1時間攪拌した。1-O-アセチル-2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノース(0.40g)と三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体(0.10mL)を追加して、さらに3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.80g)を得た。
MS(ESI)m/z:698(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.40(1H,s),8.13(2H,m),7.96(4H,m),7.59-7.32(9H,m),6.79(1H,d,J=3.4Hz),6.39(1H,dd,J=5.1,3.7Hz),6.25(1H,t,J=5.6Hz),6.17(1H,t,J=5.6Hz),6.00(1H,m),5.31(1H,dd,J=17.1,1.0Hz),5.24(1H,dd,J=10.5,1.2Hz),4.81(1H,m),4.75(1H,dd,J=12.0,3.7Hz),4.63(1H,dd,J=12.2,4.4Hz),4.30(2H,m).
3-エテニル-N-(プロパ-2-エン-1-イル)-1-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程2で得られた化合物(11.65g)のトルエン(120mL)に溶液を、減圧下で超音波処理して脱気した。窒素雰囲気下、反応液にトリブチルビニルすず(12.8mL)とテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(2.73g)を加え、2時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(10.07g)を得た。
MS(ESI)m/z:646(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.42(1H,s),8.09(2H,m),7.99(2H,m),7.95(2H,m),7.59-7.50(3H,m),7.42-7.33(6H,m),6.90-6.84(2H,m),6.43(1H,dd,J=5.4,3.4Hz),6.32(1H,t,J=5.9Hz),6.00(1H,m),5.94(1H,dd,J=17.6,1.0Hz),5.67(1H,dd,J=11.2,1.0Hz),5.56(1H,t,J=5.6Hz),5.27(1H,dd,J=17.1,1.0Hz),5.22(1H,dd,J=10.3,1.0Hz),4.82(1H,m),4.77(1H,dd,J=12.2,3.9Hz),4.62(1H,dd,J=11.7,4.9Hz),4.29(2H,m).
2-(2,3,5-トリ-O-ベンゾイル-β-D-リボフラノシル)-6,7-ジヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程3で得られた化合物(9.0g)をベンゼンで2回共沸した。残留物のジクロロメタン溶液(480mL)に(+)-10-カンファースルホン酸(4.2g)とベンジリデン[1,3-ビス(2,4,6-トリメチルフェニル)イミダゾリジン-2-イリデン]ジクロリド(トリシクロヘキシル-λ5-ホスファニル)ルテニウム(第二世代Grubbs触媒)(360mg)を加え、3時間加熱還流した。第二世代Grubbs触媒(360mg)を追加し、さらに1時間加熱還流した。反応液を室温まで冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で順に洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(6.39g)を得た。
MS(ESI)m/z:618(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.39(1H,s),8.11(2H,m),7.99(2H,m),7.96(2H,m),7.57-7.52(3H,m),7.42-7.35(6H,m),6.83(1H,d,J=2.9Hz),6.76(1H,d,J=10.7Hz),6.43(1H,dd,J=5.1,3.2Hz),6.33(1H,t,J=5.9Hz),6.12(1H,m),5.61(1H,brs),4.83(1H,m),4.78(1H,dd,J=12.2,3.9Hz),4.63(1H,dd,J=12.0,4.6Hz),4.16(2H,m).
2-β-D-リボフラノシル-6,7-ジヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(620mg)のメタノール(10mL)-テトラヒドロフラン(5.0mL)混合溶液に、室温でナトリウムメトキシドのメタノール溶液(1.0M,0.10mL)を加え、同温度で18時間攪拌した。反応液を1規定塩酸で中和後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(279mg)を得た。
MS(ESI)m/z:306(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.23(1H,s),6.79(1H,m),6.22-6.17(2H,m),4.74(1H,t,J=5.1Hz),4.42(1H,t,J=4.6Hz),4.14(2H,dd,J=5.9,1.5Hz),4.11(1H,q,J=4.1Hz),3.81(1H,dd,J=12.4,3.2Hz),3.68(1H,dd,J=12.4,4.6Hz).
2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-6,7-ジヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程5で得られた化合物(2.81g)を用いて、実施例1の工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(4.72g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.38(1H,s),6.85(1H,dt,J=11.0,1.4Hz),6.28(1H,s),6.16-6.08(1H,m),5.78(1H,brs),4.71-4.63(2H,m),4.39(1H,dd,J=9.0,5.1Hz),4.22-4.10(3H,m),3.96(1H,dd,J=10.6,9.0Hz),1.11(9H,s),1.05(9H,s),0.90(9H,s),0.11(3H,s),0.09(3H,s).
2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(2.12g)のテトラヒドロフラン(20mL)溶液に、酢酸(パスツールピペットで3滴)、10%パラジウム炭素(AD)wet(0.82g)を加え、水素雰囲気下、室温で3時間攪拌した。触媒を濾去した後、テトラヒドロフランで洗浄し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.09g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.29(1H,s),6.33(1H,brs),6.27(1H,s),4.70(1H,d,J=4.7Hz),4.62(1H,dd,J=9.6,4.9Hz),4.39(1H,dd,J=9.0,5.1Hz),4.21-4.08(1H,m),3.95(1H,dd,J=10.4,9.2Hz),3.65-3.58(2H,m),3.15-2.99(2H,m),2.22-2.10(2H,m),1.11(9H,s),1.05(9H,s),0.90(9H,s),0.10(3H,s),0.09(3H,s).
6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程7で得られた化合物(2.09g)を用いて、実施例1工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.23g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.19(1H,s),7.47-7.40(3H,m),7.33-7.28(2H,m),6.34(1H,s),4.72(1H,d,J=4.7Hz),4.66(1H,dd,J=9.4,4.7Hz),4.49(1H,dd,J=14.7,8.0Hz),4.40(1H,dd,J=9.0,5.1Hz),4.24-4.09(2H,m),3.96(1H,dd,J=10.6,9.0Hz),3.26-3.11(2H,m),2.45-2.23(2H,m),1.12(9H,s),1.05(9H,s),0.90(9H,s),0.12(3H,s),0.10(3H,s).
6-ベンゾイル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程8で得られた化合物(2.23g)を用いて、実施例1工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.69g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.22(1H,s),7.55-7.51(2H,m),7.46-7.36(7H,m),7.32-7.26(2H,m),7.26-7.16(3H,m),6.80-6.73(4H,m),6.43(1H,d,J=5.5Hz),5.32(1H,t,J=5.5Hz),4.43(1H,dd,J=14.3,8.0Hz),4.34-4.29(1H,m),4.25-4.13(2H,m),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.46(1H,dd,J=10.4,3.3Hz),3.17-3.05(3H,m),2.79(1H,d,J=3.5Hz),2.40-2.19(2H,m),0.82(9H,s),0.03(3H,s),-0.13(3H,s).
6-ベンゾイル-2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程9で得られた化合物(2.69g)を用いて、実施例5の工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.93g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.22(0.4H,s),8.21(0.6H,s),7.56-7.50(2H,m),7.44-7.37(7H,m),7.28-7.18(5H,m),6.81-6.73(4H,m),6.44(0.6H,d,J=6.3Hz),6.40(0.4H,d,J=6.3Hz),5.34-5.28(1H,m),4.47-4.35(2.4H,m),4.32-4.26(0.6H,m),4.25-4.16(1H,m),4.03-3.84(1H,m),3.80-3.73(6H,m),3.69-3.44(4H,m),3.18-3.00(3H,m),2.73-2.59(1H,m),2.40-2.19(3H,m),1.22-1.14(8.4H,m),1.01(3.6H,d,J=6.7Hz),0.76(3.6H,s),0.74(5.4H,s),0.02(1.2H,s),0.01(1.8H,s),-0.12(1.8H,s),-0.15(1.2H,s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程10で得られた化合物(1.04g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-(ジヒドロキシホスファニル)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と市販(Cool Pharm)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(1.20g)を用いて、実施例1工程8、実施例1工程9、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25-50%(0分-35分)]でリン原子上のジアステレオマーを分離し、標題化合物のジアステレオマー1(15mg)とジアステレオマー2(55mg)を得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2)。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程11で得られた化合物(ジアステレオマー1)(20mg)に、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩(1mL)を加え、45℃で2時間攪拌した。反応液を氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム水溶液(3mL)とトリエチルアミン(1mL)の混合溶液に加えて反応を停止した。Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-17%]で精製し、標題化合物(15mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程11で得られた化合物(ジアステレオマー2)(43mg)を用いて、上記工程12-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(34mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程12-1で得られた化合物(15mg)を用いて、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物のジアステレオマー混合物(12mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.79(1H,s),8.18(1H,s),8.14(1H,s),6.37-6.34(2H,m),5.50(1H,dd,J=10.8,5.3Hz),5.40-5.33(1H,m),5.06(1H,dd,J=4.5,2.9Hz),4.94(1H,d,J=3.5Hz),4.67-4.30(4H,m),4.03(1H,ddd,J=12.5,6.1,2.2Hz),3.93(1H,dt,J=18.1,6.1Hz),3.58(2H,d,J=7.4Hz),3.02(2H,t,J=5.9Hz),2.18-2.04(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:56.5(s),54.2(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-1,2,3,5,6-ペンタアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程12-2で得られた化合物(34mg)を用いて、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物のジアステレオマー混合物(28mg:ジアステレオマー比=4:1)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.16(0.2H,s),8.85(0.8H,s),8.19(0.2H,s),8.17(0.8H,s),8.14(0.8H,s),8.13(0.2H,s),6.38-6.30(2H,m),5.67-5.61(0.8H,m),5.57-5.36(1.2H,m),5.22(0.8H,dd,J=5.9,4.3Hz),5.10(0.2H,t,J=4.5Hz),4.64-4.26(4.8H,m),4.16-4.10(0.2H,m),4.05-3.98(1H,m),3.86-3.79(1H,m),3.62-3.54(2H,m),3.07(1.6H,t,J=5.7Hz),2.98(0.4H,t,J=5.9Hz),2.17-2.04(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.5(s),63.4(s),60.0(s),59.9(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-14-(8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
文献既知(J.Med.Chem.2008,51,3934-3945)の4-クロロ-5-ヨード-7-β-D-リボフラノシル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン(3.15g)を用いて、実施例1の工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.97g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.62(1H,s),7.38(1H,s),6.18(1H,s),4.53-4.47(1H,m),4.44(1H,d,J=3.9Hz),4.24-4.18(2H,m),4.06-3.98(1H,m),1.09(9H,s),1.05(9H,s),0.92(9H,s),0.13(3H,s),0.12(3H,s).
4-(ベンジルオキシ)-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
上記工程1で得られた化合物(4.97g)とベンジルアルコール(1.0mL)のテトラヒドロフラン(50mL)溶液に、氷冷下で水素化ナトリウム(ミネラルオイルを37%含有)(426mg)を加え、室温に昇温し終夜攪拌した。氷冷下、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液を酢酸エチルで抽出後、有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(3.38g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.43(1H,s),7.62-7.57(2H,m),7.43-7.37(2H,m),7.36-7.30(1H,m),7.13(1H,s),6.15(1H,s),5.65(1H,d,J=13.7Hz),5.62(1H,d,J=13.7Hz),4.50-4.43(2H,m),4.27(1H,dd,J=9.2,4.9Hz),4.21-4.12(1H,m),4.01(1H,dd,J=10.4,9.2Hz),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.11(3H,s).
4-(ベンジルオキシ)-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-(3-ヒドロキシプロパ-1-イン-1-イル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
上記工程2で得られた化合物(3.38g)と2-プロピン-1-オール(1.35mL)を用い、反応温度を室温として、実施例1工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.22g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.46(1H,s),7.59-7.55(2H,m),7.43-7.33(3H,m),7.22(1H,s),6.16(1H,s),5.60(1H,d,J=12.7Hz),5.57(1H,d,J=12.7Hz),4.51-4.41(4H,m),4.27(1H,dd,J=9.5,5.0Hz),4.19(1H,dt,J=9.9,5.0Hz),4.01(1H,dd,J=9.9,9.5Hz),1.52(1H,t,J=6.3Hz),1.08(9H,s),1.04(9H,s),0.91(9H,s),0.13(3H,s),0.11(3H,s).
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-(3-ヒドロキシプロピル)-3,7-ジヒドロ-4H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オン
上記工程3で得られた化合物(3.38g)を用いて、反応溶媒をメタノール(20mL)-テトラヒドロフラン(20mL)の混合液とし、実施例19工程7と同様の手法で反応を行い、標題化合物(0.92g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:11.36(1H,brs),7.86(1H,s),6.69(1H,s),6.10(1H,s),4.48(1H,dd,J=9.2,4.9Hz),4.37(1H,d,J=5.1Hz),4.23(1H,dd,J=9.3,4.8Hz),4.16(1H,dt,J=9.8,4.8Hz),4.02(1H,dd,J=9.8,9.3Hz),3.84(1H,t,J=6.3Hz),3.58(2H,dd,J=11.9,6.1Hz),3.03-2.90(2H,m),1.86(2H,s),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.90(9H,s),0.10(6H,s).
2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(0.92g)のテトラヒドロフラン(32mL)溶液に、氷冷下でトリフェニルホスフィン(0.62g)とアゾジカルボン酸ジイソプロピル(0.47mL)を加え、室温まで昇温して1時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(0.77g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.44(1H,s),6.85(1H,s),6.19(1H,s),4.56-4.51(2H,m),4.50-4.44(2H,m),4.35(1H,dd,J=9.5,5.0Hz),4.17(1H,dt,J=10.0,5.0Hz),4.00(1H,dd,J=10.0,9.5Hz),2.98-2.92(2H,m),2.28-2.20(2H,m),1.10(9H,s),1.05(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.11(3H,s).
2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程5で得られた化合物(0.95g)を用いて、実施例1工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.13g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.42(1H,s),7.48-7.43(2H,m),7.37-7.21(7H,m),7.19(1H,s),6.85-6.79(4H,m),6.35(1H,d,J=5.4Hz),4.71(1H,t,J=5.4Hz),4.55-4.48(2H,m),4.35(1H,dd,J=8.2,4.3Hz),4.22(1H,q,J=3.0Hz),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.53(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),3.37(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),2.80(1H,d,J=4.3Hz),2.71(2H,t,J=5.5Hz),2.23-2.15(2H,m),0.83(9H,s),-0.04(3H,s),-0.16(3H,s).
2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(1.13g)を用いて、精製にシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]を用いたこと以外は、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.00g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.41(0.4H,s),8.39(0.6H,s),7.51-7.43(2H,m),7.39-7.17(8H,m),6.85-6.79(4H,m),6.34(0.6H,d,J=6.7Hz),6.30(0.4H,d,J=5.9Hz),4.82(0.6H,dd,J=6.7,4.7Hz),4.76(0.4H,dd,J=5.9,4.7Hz),4.55-4.47(2H,m),4.43-4.35(1.2H,m),4.30-4.25(0.8H,m),4.05-3.85(1H,m),3.81-3.76(6H,m),3.70-3.47(4H,m),3.32-3.24(1H,m),2.79-2.64(3.2H,m),2.31(0.8H,t,J=6.5Hz),2.23-2.14(2H,m),1.20-1.15(8.4H,m),1.03(3.6H,d,J=7.0Hz),0.75(3.6H,s),0.73(5.4H,s),-0.03(1.2H,s),-0.08(1.8H,s),-0.20(1.2H,s),-0.22(1.8H,s).
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-14-(8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}ベンズアミド
上記工程7で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-(ジヒドロキシホスファニル)-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と市販(Cool Pharm)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(1.28g)を用いて、実施例1工程8、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1を含む混合物とジアステレオマー2を含む混合物をそれぞれ得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1116(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1116(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー1を含む混合物)を全量用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(73mg)をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-60%(0分-35分)]。
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー2を含む混合物)を全量用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(58mg)をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-50%(0分-35分)]。
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-14-(8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程9-1で得られた化合物(68mg)を用いて、実施例19工程12-1と同様の手法で反応を行った後、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(42mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,s),8.31(1H,s),8.17(1H,s),7.36(1H,s),6.38(1H,d,J=4.7Hz),6.34(1H,d,J=8.2Hz),5.42-5.34(1H,m),5.24-5.16(1H,m),4.86-4.81(2H,m),4.64-4.29(6H,m),4.12-4.01(2H,m),2.98-2.81(2H,m),2.28-2.13(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.2(s),54.4(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-14-(8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程9-2で得られた化合物(58mg)を用いて、実施例19工程12-1と同様の手法で反応を行った後、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(35mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.81(1H,s),8.31(1H,s),8.17(1H,s),7.38(1H,s),6.41(1H,d,J=6.7Hz),6.34(1H,d,J=8.6Hz),5.56-5.41(2H,m),4.87(1H,m),4.64-4.27(7H,m),4.06-3.99(1H,m),3.92-3.88(1H,m),2.99(2H,t,J=5.5Hz),2.28-2.19(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),60.5(s).
[合成スキーム]
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-フェニルアラニルグリシントリフルオロアセテート
市販(BACHEM)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシン(3.00g)のジクロロメタン(30mL)溶液に室温でトリフルオロ酢酸(15mL)を加え、同温度で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、トルエンに懸濁させて再度減圧濃縮した。この濃縮操作をさらに2回繰り返した。残留物をジエチルエーテル(100mL)でスラリー状にした後、濾取し、標題化合物(3.27g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:337(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.60(1H,brs),8.48(1H,t,J=5.6Hz),8.44(1H,t,J=5.9Hz),8.31(1H,d,J=8.8Hz),7.97(3H,brs),7.28-7.16(5H,m),4.58(1H,m),3.87(1H,dd,J=16.8,5.6Hz),3.78(2H,d,J=5.9Hz),3.67(1H,dd,J=17.1,5.4Hz),3.56(2H,brd,J=4.4Hz),3.05(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),2.74(1H,dd,J=13.7,10.3Hz).
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシン
上記工程1で得られた化合物(2.09g)のN,N-ジメチルホルミアミド(46.4mL)溶液にトリエチルアミン(0.804mL)と1-{[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]オキシ}ピロリジン-2,5-ジオン(1.87g)を加え、室温で21時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製した。得られた化合物のジクロロメタン溶液にジエチルエーテルを加えてスラリー状にした後、濾取し、標題化合物(2.10g)を得た。
MS(ESI)m/z:624(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.20-7.91(4H,m),7.68-7.13(13H,m),4.98(1H,dd,J=13.9,3.2Hz),4.51-4.46(1H,m),3.73-3.47(7H,m),3.00(1H,dd,J=13.9,4.1Hz),2.73(1H,t,J=11.7Hz),2.67-2.57(1H,m),2.29-2.22(1H,m),2.06-2.01(1H,m),1.80-1.73(1H,m).(観測可能なピークのみ記載)
2,5-ジオキソピロリジン-1-イルN-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシナート
上記工程2で得られた化合物(2.10g)のN,N-ジメチルホルミアミド(33.7mL)溶液にN-ヒドロキシスクシンイミド(426mg)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(710mg)を加え、窒素雰囲気下、室温で16時間攪拌した。反応液をジクロロメタンで希釈後、氷水で3回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。油状の残留物に酢酸エチルを加えて固体を析出させた。溶媒を減圧下で留去、得られた固体にジエチルエーテルを加えてスラリー状にした後、濾取し、標題化合物(2.18g)を得た。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.74-8.69(1H,m),8.16-8.08(2H,m),8.00-7.93(1H,m),7.71-7.15(13H,m),5.00(1H,dd,J=13.9,3.0Hz),4.55-4.49(1H,m),4.27(2H,t,J=6.0Hz),3.77-3.68(1H,m),3.64-3.50(4H,m),3.02(1H,dd,J=13.9,4.2Hz),2.82-2.73(5H,m),2.69-2.58(1H,m),2.33-2.24(1H,m),2.10-2.02(1H,m),1.83-1.75(1H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)グリシンアミド
(薬物リンカー1)
実施例5工程8-2で得られた化合物(10.0mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)溶液にトリエチルアミン(8μL)と上記工程3で得られた化合物(17.6mg)を加え,室温で2時間攪拌した。反応液に、ベンジルアミン(3μL)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液とメタノールを加え、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-50%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(10.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1379(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.72(1H,d,J=10.0Hz),8.15(1H,d,J=10.0Hz),8.02(1H,s),7.63-7.50(2H,m),7.42-7.37(3H,m),7.32-7.13(8H,m),7.12(1H,s),6.31(1H,d,J=6.7Hz),6.25(1H,d,J=8.5Hz),5.51-5.40(2H,m),5.09-4.99(1H,m),4.85-4.77(1H,m),4.53-4.42(2H,m),4.42-4.15(5H,m),4.04-3.96(1H,m),3.92-3.46(12H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),
3.16-2.73(5H,m),2.40-2.23(2H,m),2.06-1.94(4H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]イノシン
イノシン(10.0g)のピリジン(50mL)とN,N-ジメチルアセトアミド(50mL)溶液に、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(15.2g)を0℃で加えた後、4℃で64時間攪拌した。反応液にメタノール(2mL)を加え、10分攪拌後に50mL程度まで濃縮した。残留物に2-ブロモエチルベンゾエート(7.02mL)と2,3,4,6,7,8,9,10-オクタヒドロピリミド[1,2-a]アゼピン(13.9mL)を加え、室温で1日攪拌した。反応液に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(15.2g)を得た。
MS(ESI)m/z:719(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.00(1H,s),7.98(1H,s),7.98-7.94(2H,m),7.62-7.15(12H,m),6.80-6.75(4H,m),5.95(1H,d,J=5.4Hz),4.82-4.79(1H,m),4.72-4.64(3H,m),4.55-4.34(5H,m),3.77(6H,s),3.43(1H,dd,J=10.6,3.9Hz),3.34(1H,dd,J=10.6,3.6Hz).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]イノシン
上記工程1で得られた化合物(3.01g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で合成を行い、標題化合物(1.20g)と標題化合物の位置異性体である1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]イノシン(1.22g)を得た。
MS(ESI)m/z:833(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.03(1H,s),7.98-7.96(1H,m),7.96(1H,s),7.96-7.94(1H,m),7.59-7.52(1H,m),7.44-7.38(4H,m),7.32-7.15(7H,m),6.83-6.77(4H,m),5.94(1H,d,J=4.8Hz),4.69-4.63(2H,m),4.59-4.35(4H,m),4.16(1H,dd,J=3.8,1.9Hz),3.77(6H,d,J=1.8Hz),3.47(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),3.27(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.00(1H,d,J=6.7Hz),0.87(9H,s),0.06(3H,s),-0.01(3H,s).
(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:833(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.01(1H,s),7.97-7.93(2H,m),7.91(1H,s),7.59-7.53(1H,m),7.45-7.38(4H,m),7.35-7.17(7H,m),6.83-6.77(4H,m),5.97(1H,d,J=6.0Hz),4.84(1H,t,J=5.4Hz),4.71-4.60(2H,m),4.52-4.37(2H,m),4.33-4.28(1H,m),4.28-4.24(1H,m),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.47(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),3.38(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),2.71(1H,d,J=3.0Hz),0.80(9H,s),-0.03(3H,s),-0.19(3H,s).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}イノシン
上記工程2で得られた化合物(1.20g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で合成を行い、標題化合物(1.41g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=0.55:0.45)として得た。
MS(ESI)m/z:1033(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.05(0.45H,s),8.04(0.55H,s),7.99-7.95(2H,m),7.95(0.55H,s),7.92(0.45H,s),7.59-7.53(1H,m),7.45-7.39(4H,m),7.35-7.10(7H,m),6.83-6.78(4H,m),6.15(0.55H,d,J=5.4Hz),6.08(0.45H,d,J=6.0Hz),4.86-4.49(3H,m),4.49-4.35(3H,m),4.25-4.10(1H,m),3.78(6H,s),3.72-3.41(5H,m),3.35-3.25(1H,m),2.47(1H,t,J=6.7Hz),2.32(1H,t,J=6.3Hz),1.33-1.24(6H,m),1.13-1.03(6H,m),0.84(4.05H,s),0.84(4.95H,s),0.08(1.35H,s),0.05(1.65H,s),0.00(1.35H,s),-0.01(1.65H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:1.40g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程3で得られた化合物(1.41g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行った。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程4で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(778mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1264(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程5で得られた化合物(778mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(255mg)とジアステレオマー2(不純物含有)を得た。ジアステレオマー2を分取HPLC[水/0.2%トリエチルアミン含有アセトニトリル,0.2%トリエチルアミン含有アセトニトリル:5%-50%(0分-40分)]で再度精製し、標題化合物のジアステレオマー2(94.6mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1003(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.66(1H,s),8.21(1H,s),8.04(1H,s),7.33(1H,s),6.27(1H,d,J=5.1Hz),6.25(1H,d,J=3.6Hz),5.39-5.29(1H,m),5.18-5.11(1H,m),4.85-4.81(1H,m),4.79-4.74(1H,m),4.71-4.66(1H,m),4.50-4.42(1H,m),4.36-4.21(2H,m),4.09-3.98(2H,m),3.85-3.78(2H,m),3.78-3.69(2H,m),3.55-3.46(2H,m),3.17(12H,q,J=7.3Hz),2.98-2.75(2H,m),2.05-1.88(2H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz),0.98(9H,s),0.85(9H,s),0.31(3H,s),0.27(3H,s),0.25(3H,s),0.09(3H,s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1003(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.50(1H,s),8.22(1H,s),8.07(1H,s),7.20(1H,s),6.33(1H,d,J=7.3Hz),6.26(1H,d,J=9.1Hz),5.59-5.44(1H,m),5.38-5.32(1H,m),5.21-5.11(1H,m),4.99-4.89(2H,m),4.68-4.54(2H,m),4.25-4.12(3H,m),4.09-4.03(1H,m),3.90-3.80(3H,m),3.59-3.51(2H,m),3.20(12H,q,J=7.3Hz),2.96-2.89(2H,m),2.07-1.98(2H,m),1.30(18H,t,J=7.3Hz),0.99(9H,s),0.74(9H,s),0.27(3H,s),0.27(3H,s),0.20(3H,s),-0.05(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-yl)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(30mg)のテトラヒドロフラン(0.5mL)溶液に[(N-{[(9H-フルオレン-9-イル)メトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メチル アセテート(91.7mg)とp-トルエンスルホン酸1水和物(11.8mg)を加え、室温で6時間攪拌した。反応液にN,N-ジメチルホルムアミド(0.5mL)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(56μL)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液に10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液を加え、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、不純物として原料を含む標題化合物(25.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1089(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(84.6mg)を用いて、上記工程7-1と同様の手法で反応を行い、不純物として原料を含む標題化合物(70.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1089(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)ジアステレオマー1
上記工程7-1で得られた化合物(25.6mg)にトリエチルアミン三フッ化水素酸塩(2mL)を加え、45℃で3時間攪拌した。室温下、反応液に氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム溶液(10mL)とトリエチルアミン(2mL)の混合液を加えた。反応液を減圧濃縮後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー(10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル)で精製し、標題化合物(16.6mg:工程7-1の原料由来の不純物を含む)を得た。
MS(ESI)m/z:861(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7-2で得られた化合物(70.9mg)を用いて、上記工程8-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(51.7mg:工程7-2の原料由来の不純物を含む)を得た。
MS(ESI)m/z:861(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー2a:ジアステレオマー1)
上記工程8-1で得られた化合物(16.6mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(0.5mL)溶液にトリエチルアミン(6μL)と後述の工程11で得られた化合物(15.5mg)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液にベンジルアミン(3μL)を加え、室温で1時間攪拌した。10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液とメタノールを加え、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-45%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(5.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1409(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.66-8.60(1H,m),8.17(1H,s),8.02(1H,s),7.65-7.48(2H,m),7.43-7.36(3H,m),7.31-7.13(8H,m),7.11(1H,s),6.30-6.21(2H,m),5.46-5.37(1H,m),5.23-5.16(1H,m),5.08-4.99(1H,m),4.86-4.81(1H,m),4.80-4.75(1H,m),4.70-4.40(7H,m),4.40-4.20(3H,m),4.10-3.97(3H,m),3.86-3.58(8H,m),3.51-3.43(3H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.01-2.93(1H,m),2.85-2.72(3H,m),2.37-2.15(2H,m),2.01-1.93(2H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).(観測可能なピークのみ記載)
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-yl)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー2b:ジアステレオマー2)
上記工程8-2で得られた化合物(51.7mg)を用いて、上記工程9-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(33.7mg)を得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-50%(0分-30分)]。
MS(ESI)m/z:1409(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,d,J=6.7Hz),8.19(1H,d,J=3.0Hz),8.02(1H,s),7.66-7.50(2H,m),7.43-7.37(3H,m),7.33-7.13(8H,m),7.11(1H,s),6.33-6.23(2H,m),5.51-5.38(2H,m),5.04(1H,t,J=13.6Hz),4.83-4.77(1H,m),4.64-4.55(2H,m),4.52-4.26(6H,m),4.25-3.97(2H,m),3.93-3.45(13H,m),3.19(12H,q,J=7.3Hz),3.17-3.11(1H,m),3.02-2.92(1H,m),2.91-2.73(3H,m),2.40-2.24(2H,m),2.07-1.95(3H,m),1.30(18H,t,J=7.3Hz).
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニン
市販(BACHEM)の(2S)-2-[[2-[(2-アミノアセチル)アミノ]アセチル]アミノ]-3-フェニルプロパン酸(2.86g)のN,N-ジメチルホルムアミド(51.2mL)溶液にトリエチルアミン(2.56mL)と市販(Click Chemistry Tools)の1-{[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]オキシ}ピロリジン-2,5-ジオン(3.69g)を加え、室温で24時間攪拌した。反応液にクエン酸一水和物(24.0g)の水(500mL)溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物を酢酸エチル/アセトニトリル混合溶液に溶解させた後、ジイソプロピルエーテルで析出させて濾取し、標題化合物(4.30g)を得た。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.8(1H,brs),8.15-7.95(3H,m),7.68-7.17(13H,m),5.01(1H,d,J=14.2Hz),4.41-4.37(1H,m),3.74-3.57(5H,m),3.05-3.01(1H,m),2.87(1H,dd,J=14.2,9.3Hz),2.68-2.59(1H,m),2.32-2.25(1H,m),2.09-2.03(1H,m),1.82-1.76(1H,m).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニネート
上記工程10で得られた化合物(2.10g)のN,N-ジメチルホルムアミド(75.9mL)溶液にN-ヒドロキシスクシンイミド(961mg)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(1.60g)を加え、窒素雰囲気下、室温で21時間攪拌した。反応液をジクロロメタンで希釈し、氷水で3回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物にトルエンを加え、再度減圧濃縮した。残留物をアセトニトリルに溶解し、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[アセトニトリル:100%]で精製した。目的物を含むフラクションを減圧濃縮後、残留物にジイソプロピルエーテルを加えてスラリー状にした。得られた固体を濾取し、標題化合物(2.59g)を得た。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.58-8.51(1H,m),8.17-8.00(2H,m),7.66-7.20(13H,m),5.02-4.98(1H,m),4.90-4.85(1H,m),3.78-3.57(5H,m),3.24-3.19(1H,m),3.06-3.00(1H,m),2.82(4H,brs),2.67-2.58(1H,m),2.32-2.23(1H,m),2.09-2.02(1H,m),1.82-1.75(1H,m).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]グリシンアミド
(薬物リンカー3)
実施例8工程8-2で得られた化合物(4.8mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(0.29mL)溶液に、トリエチルアミン(1.9μL)と実施例21工程3で得られた化合物(5.2mg)を加え、窒素雰囲気下、室温で1.5時間攪拌した。ベンジルアミン(3.2μL)を加えて反応を停止した後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-40%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(8.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1393(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.35(1H,brs),8.02(1H,s),7.61-7.15(14H,m),6.33(1H,dd,J=6.0,3.0Hz),6.15-6.09(1H,m),5.49-5.37(2H,m),5.05(1H,dd,J=13.9,12.1Hz),4.85-4.79(1H,m),4.53-4.21(6H,m),4.06-3.61(8H,m),3.51-3.13(6H,m),3.16(12H,q,J=7.3Hz),3.06-2.65(7H,m),2.35-1.94(4H,m),1.28(18H,t,J=7.6Hz).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[6-アミノ-2-({2-[(グリシルアミノ)methoxy]エチル}アミノ)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-yl)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例9工程1-2で得られた化合物(17.6mg)を用いて、実施例22工程7-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(8.3mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1103(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-({2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}アミノ)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程1で得られた化合物(10.7mg)を用いて、実施例22工程8-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(7.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:875(M+H)+.
(工程3)
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-{[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エトキシ]メチル}グリシンアミド
(薬物リンカー4)
上記工程2で得られた化合物(7.6mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った。以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(7.6mg)をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-40%(0分-30分)].
MS(ESI)m/z:1423(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ: 8.37(1H,brs),8.01(1H,d,J=2.4Hz),7.63-7.11(14H,m),6.33(1H,d,J=6.7Hz),6.17(1H,d,J=7.3Hz),5.51-5.36(2H,m),5.09-5.03(1H,m),4.84-4.80(1H,m),4.63-4.25(8H,m),4.07-3.58(9H,m),3.50-3.41(4H,m),3.28-2.72(8H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),2.45-1.96(4H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
改変抗HER2抗体-[SG-(N3)2]2の合成
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-改変抗HER2抗体の調製
参考例1に従って調製した改変抗HER2抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(20mL,12.6mg/mL,pH6.0)に、野生型EndoSのリン酸緩衝生理食塩水溶液(0.147mL,7.70mg/mL,pH6.0)を加え、37℃で2時間15分間振盪した。反応の進行具合をExperion電気泳動ステーション(BIO-RAD製)で確認した。反応終了後、以下の方法に従い、アフィニティークロマトグラフィーによる精製とハイドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーによる精製を行った。
(1)アフィニティークロマトグラフィーによる精製
精製装置:AKTA avant 25(GE ヘルスケア製)
カラム:HiTrap rProtein A FF(5mL)(GE ヘルスケア製)
流速:5mL/min(チャージ時は1.25mL/min)
上記で得た反応液を2回に分けて精製した。カラムへの結合時には、反応液をカラムへ添加し、結合バッファー[20mMリン酸緩衝液(pH6.0)]を1.25mL/minで2CV流し、更に5mL/minで5CV流した。中間洗浄時には、洗浄溶液[20mMリン酸緩衝液(pH7.0),0.5M塩化ナトリウム溶液]を15CV流した。溶出時には、溶出バッファー(ImmunoPure IgG Elution buffer、PIERCE製)を6CV流した。溶出液を1Mトリス緩衝液(pH9.0)で直ちに中和した。目的物を含むフラクションを共通操作Cに記載の方法に従い、5mMリン酸緩衝液,50mM 2-モルホリノエタンスルホン酸(MES)溶液(pH6.8)への緩衝液交換を行った。得られた緩衝溶液の抗体濃度を共通操作Bに記載の方法に従って測定し、粗精製された標題抗体溶液(26.57mg/mL,9.0mL)を得た。
(2)ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーによる精製
精製装置:AKTA avant 25(GE ヘルスケア製)
カラム:Bio-Scale Mini CHT Type Iカートリッジ(5mL)(BIO-RAD製)
流速:5mL/min(チャージ時は1.25mL/min)
上記(1)で得られた溶液をカラムへ添加し、A液[5mMリン酸緩衝液,50mM MES溶液(pH6.8)]を1.25mL/minで2CV流し、更に5mL/minで3CV流した。その後、A液とB液[5mMリン酸緩衝液,50mM MES溶液(pH6.8)、2M塩化ナトリウム溶液]を用いて、溶出した。溶出条件は、A液:B液=100:0~0:100(5CV)である。さらに、洗浄溶液[500mMリン酸緩衝液(pH6.5)]を5CV流した。目的物を含むフラクションを共通操作Cに記載の方法に従い、20mMリン酸緩衝液(pH6.0)への緩衝液交換を行った。得られた緩衝溶液の抗体濃度を共通操作Bに記載の方法に従って測定し、標題抗体溶液(17.29mg/mL,約13mL)を得た。
改変抗HER2抗体-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(17.29mg/mL,13mL,pH6.0)に[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(WO2018/003983の化合物1-10)(52mg)の20mMリン酸緩衝溶液(pH6.0)(3.0mL+洗い込み1.0mL)及びEndoS(D233Q/Q303L)のリン酸緩衝生理食塩水溶液(0.698mL,5.8mg/mL,pH6.0)を加え、30℃で4時間振盪した。反応液を-80℃で15時間保存した後、30℃で解凍し、[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(7.4mg)及びEndoS(D233Q/Q303L)のリン酸緩衝生理食塩水溶液(0.155mL,5.8mg/mL,pH6.0)を追加して30℃で2時間振盪した。反応の進行具合をExperion電気泳動ステーション(BIO-RAD製)で確認した。反応終了後、上記工程1と同様にアフィニティークロマトグラフィーによる精製とハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーによる精製を行った。目的物を含むフラクション(合計7本)を前の4本と後の3本に分けて、それぞれを共通操作Cに記載の方法に従って、リン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)への緩衝液交換を行った。得られた緩衝溶液の抗体濃度を共通操作Bに記載の方法に従って測定し、標題抗体溶液(前の4本:14.99mg/mL,10mL)と標題抗体溶液(後の3本:10.97mg/mL,6.2mL)をそれぞれ得た。
改変抗LPS抗体-[SG-(N3)2]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-改変抗LPS抗体の調製
参考例2に従って調製した改変抗LPS抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(8.5mL,10.96mg/mL,pH6.0)を用いて、実施例25工程1と同様の操作を行い、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(11.70mg/mL,7.5mL,pH6.0)を得た。
改変抗LPS抗体-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(11.70mg/mL,7.5mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(20.3mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(10.55mg/mL,7.5mL,pH6.0)を得た。
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.97mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー3のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.0907mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.159mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS(10mM Acetate Buffer,5% Sorbitol,pH5.5)溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.97mg/mL
抗体収量:3.41mg(62%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.97mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー4のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.0907mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.159mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.08mg/mL
抗体収量:3.78mg(69%)
薬物平均結合数:3.2
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.97mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.0907mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.159mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で47時間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.91mg/mL
抗体収量:3.17mg(58%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体2のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.55mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー3のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.174mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.326mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(6.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.11mg/mL
抗体収量:7.23mg(69%)
薬物平均結合数:3.9
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
4-(ベンジルオキシ)-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-(4-ヒドロキシブタ-1-イン-1-イル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
実施例20工程2で得られた化合物(3.37g)と3-ブチン-1-オール(1.72mL)を用いて、反応温度を室温にして、実施例1工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.74g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.44(1H,s),7.58-7.53(2H,m),7.42-7.31(3H,m),7.16(1H,s),6.16(1H,s),5.61(2H,dd,J=14.9,12.5Hz),4.47(1H,dd,J=9.2,4.9Hz),4.42(1H,d,J=4.7Hz),4.26(1H,dd,J=9.4,4.7Hz),4.17(1H,td,J=9.9,4.8Hz),4.01(1H,t,J=9.6Hz),3.71-3.64(2H,m),2.65(2H,t,J=6.1Hz),1.87(1H,t,J=6.5Hz),1.08(9H,s),1.04(9H,s),0.91(9H,s),0.11(3H,s),0.10(3H,s).
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-(4-ヒドロキシブチル)-3,7-ジヒドロ-4H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オン
上記工程1で得られた化合物(2.74g)を用いて、反応溶媒をメタノール(30mL)-テトラヒドロフラン(30mL)混合溶媒とし、実施例19工程7と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.21g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:11.55(1H,brs),7.90(1H,s),6.63(1H,s),6.09(1H,s),4.47(1H,dd,J=9.0,5.1Hz),4.38(1H,d,J=4.7Hz),4.24(1H,dd,J=9.4,4.7Hz),4.19-4.11(1H,m),4.01(1H,t,J=9.8Hz),3.82-3.74(2H,m),2.88(1H,brs),2.83-2.74(2H,m),1.85-1.75(2H,m),1.71-1.62(2H,m),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.90(9H,s),0.102(3H,s),0.099(3H,s).
2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン
上記工程2で得られた化合物(1.89g)を用いて、実施例20工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.40g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.41(1H,s),6.84(1H,s),6.21(1H,s),4.54-4.43(4H,m),4.31(1H,dd,J=9.6,4.9Hz),4.17(1H,td,J=10.0,5.1Hz),4.00(1H,dd,J=10.4,9.2Hz),2.87-2.73(2H,m),2.05-1.87(4H,m),1.10(9H,s),1.05(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.10(3H,s).
2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン
上記工程3で得られた化合物(1.61g)を用いて、実施例1の工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.95g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.40(1H,s),7.49-7.43(2H,m),7.38-7.20(8H,m),6.86-6.78(4H,m),6.38(1H,d,J=5.5Hz),4.70(1H,t,J=5.3Hz),4.54-4.45(2H,m),4.38-4.31(1H,m),4.26-4.18(1H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.53(1H,dd,J=10.6,2.3Hz),3.37(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),2.81(1H,d,J=3.9Hz),2.56-2.45(2H,m),2.00-1.91(2H,m),1.86-1.76(2H,m),0.82(9H,s),-0.04(3H,s),-0.17(3H,s).
2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン
上記工程4で得られた化合物(1.95g)を用いて、実施例5工程4と同様に操作し、標題化合物(2.20g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.39(0.4H,s),8.37(0.6H,s),7.51-7.45(2H,m),7.40-7.20(8H,m),6.86-6.78(4H,m),6.37(0.6H,d,J=6.7Hz),6.32(0.4H,d,J=6.3Hz),4.83-4.78(0.6H,m),4.77-4.70(0.4H,m),4.56-4.44(2H,m),4.42-4.33(1.4H,m),4.29-4.24(0.6H,m),4.07-3.86(1H,m),3.82-3.75(6H,m),3.70-3.46(4H,m),3.32-3.24(1H,m),2.76-2.65(1H,m),2.63-2.49(2H,m),2.32(1H,t,J=6.7Hz),2.01-1.90(2H,m),1.87-1.74(2H,m),1.23-1.12(8.4H,m),1.03(3.6H,d,J=6.7Hz),0.74(3.6H,s),0.72(5.4H,s),-0.04(1.2H,s),-0.08(1.8H,s),-0.21(1.2H,s),-0.23(1.8H,s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ビス(スルファニル)-14-(7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程5で得られた化合物(1.18g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と市販(Cool Pharm)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(1.49g)を用いて、実施例1工程8、工程9、及び工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。この混合物をHPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-60%(0分-35分)]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(50mg)とジアステレオマー2(34mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:973(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:973(M+H)+.
ジナトリウム(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(50mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(33mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,s),8.30(1H,s),8.17(1H,s),7.40(1H,s),6.39(1H,d,J=4.3Hz),6.34(1H,d,J=8.6Hz),5.40-5.36(1H,m),5.22-5.17(1H,m),4.87-4.84(1H,m),4.80(1H,t,J=4.5Hz),4.64-4.31(6H,m),4.11-4.03(2H,m),2.82(1H,dd,J=16.4,8.6Hz),2.68(1H,dd,J=16.2,8.8Hz),2.06-1.71(4H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.1(s),54.2(s).
ジナトリウム(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(7,8,9,10-テトラヒドロ-2H-6-オキサ-2,3,5-トリアザシクロオクタ[1,2,3-cd]インデン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(34mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.81(1H,s),8.30(1H,s),8.17(1H,s),7.40(1H,s),6.43(1H,d,J=6.7Hz),6.34(1H,d,J=8.6Hz),5.55-5.42(2H,m),4.87-4.84(1H,m),4.59-4.28(7H,m),4.06-3.99(1H,m),3.94-3.86(1H,m),2.96-2.81(2H,m),2.07-1.94(2H,m),1.93-1.80(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),60.5(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-14-[(7S)-7-メチル-8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル]-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
4-(ベンジルオキシ)-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-[(3R)-3-ヒドロキシブタ-1-イン-1-イル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
実施例20工程2で得られた化合物(2.54g)と(R)-(+)-3-ブチン-2-オール(1.36mL)を用いて、反応温度を室温にし、実施例1工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.85g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.46(1H,s),7.57(2H,d,J=7.0Hz),7.44-7.32(3H,m),7.20(1H,s),6.16(1H,s),5.58(1H,d,J=12.9Hz),5.55(1H,d,J=13.7Hz),4.71-4.63(1H,m),4.48(1H,dd,J=9.2,4.9Hz),4.42(1H,d,J=4.7Hz),4.26(1H,dd,J=9.4,4.7Hz),4.23-4.14(1H,m),4.01(1H,t,J=9.6Hz),1.70(1H,d,J=5.5Hz),1.42(3H,d,J=6.7Hz),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.11(3H,s).
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-[(3R)-3-ヒドロキシブチル]-3,7-ジヒドロ-4H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オン
上記工程1で得られた化合物(1.85g)を用いて、反応溶媒をメタノール(15mL)-テトラヒドロフラン(15mL)混合溶媒とし、実施例19工程7と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.34g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:11.81(1H,s),7.89(1H,s),6.68(1H,s),6.12(1H,s),4.49(1H,dd,J=9.2,4.5Hz),4.34(1H,d,J=4.3Hz),4.27-4.14(3H,m),4.03(1H,t,J=9.6Hz),3.77-3.65(1H,m),3.17-3.06(1H,m),2.85-2.74(1H,m),1.84-1.73(1H,m),1.71-1.61(1H,m),1.15(3H,d,J=6.3Hz),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.90(9H,s),0.10(6H,s).
(7S)-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-7-メチル-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程2で得られた化合物(1.34g)を用いて、実施例20工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(0.70g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.43(1H,s),6.82(1H,s),6.19(1H,s),4.58-4.43(3H,m),4.33(1H,dd,J=9.6,5.0Hz),4.17(1H,td,J=10.0,5.0Hz),4.00(1H,dd,J=10.4,9.2Hz),3.06-2.97(1H,m),2.89-2.79(1H,m),2.23-2.08(2H,m),1.60(3H,d,J=6.3Hz),1.10(9H,s),1.05(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.11(3H,s).
(7S)-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-7-メチル-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程3で得られた化合物(0.70g)を用いて、実施例1の工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(0.82g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.41(1H,s),7.49-7.43(2H,m),7.37-7.20(7H,m),7.16(1H,s),6.85-6.78(4H,m),6.35(1H,d,J=5.5Hz),4.72(1H,t,J=5.3Hz),4.57-4.47(1H,m),4.36(1H,dd,J=9.0,3.9Hz),4.22(1H,q,J=3.1Hz),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.52(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),3.37(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),2.81(1H,d,J=3.9Hz),2.78-2.58(2H,m),2.16-2.07(2H,m),1.59(3H,d,J=6.7Hz),0.83(9H,s),-0.03(3H,s),-0.15(3H,s).
(7S)-2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-7-メチル-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(0.82g)を用いて、実施例5の工程4と同様に操作し、標題化合物(0.85g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.40(0.4H,s),8.38(0.6H,s),7.50-7.43(2H,m),7.39-7.16(8H,m),6.86-6.78(4H,m),6.34(0.6H,d,J=6.7Hz),6.30(0.4H,d,J=5.9Hz),4.86-4.80(0.6H,m),4.79-4.74(0.4H,m),4.55-4.46(1H,m),4.44-4.35(1.4H,m),4.29-4.24(0.6H,m),4.05-3.85(1H,m),3.82-3.75(6H,m),3.69-3.47(4H,m),3.31-3.24(1H,m),2.82-2.61(3H,m),2.31(1H,t,J=6.7Hz),2.17-2.07(2H,m),1.58-1.55(3H,m),1.22-1.13(8.4H,m),1.03(3.6H,d,J=6.7Hz),0.75(3.6H,s),0.74(5.4H,s),-0.03(1.2H,s),-0.07(1.8H,s),-0.19(1.2H,s),-0.21(1.8H,s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-[(7S)-7-メチル-8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル]-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程5で得られた化合物(0.85g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、(7S)-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-7-メチル-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と市販(Cool Pharm)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(1.12g)を用いて、実施例1工程8、工程9、及び工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。この混合物をHPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-60%(0分-35分)]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(95mg)とジアステレオマー2(44mg)を得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2)。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:973(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:973(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-14-[(7S)-7-メチル-8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル]-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(95mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(57mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.72(1H,s),8.30(1H,s),8.17(1H,s),7.35(1H,s),6.37(1H,d,J=4.3Hz),6.34(1H,d,J=8.2Hz),5.40-5.35(1H,m),5.22-5.17(1H,m),4.85-4.81(2H,m),4.66-4.58(1H,m),4.53-4.40(2H,m),4.39-4.30(2H,m),4.12-4.01(2H,m),3.02-2.93(1H,m),2.80-2.68(1H,m),2.23-2.14(1H,m),2.12-2.00(1H,m),1.57(3H,d,J=6.3Hz).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.1(s),54.3(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-14-[(7S)-7-メチル-8,9-ジヒドロ-6-オキサ-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル]-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(44mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(30mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.81(1H,s),8.30(1H,s),8.17(1H,s),7.36(1H,s),6.41(1H,d,J=6.7Hz),6.34(1H,d,J=8.6Hz),5.55-5.42(2H,m),4.87-4.84(1H,m),4.65-4.57(1H,m),4.55-4.28(5H,m),4.06-3.99(1H,m),3.93-3.86(1H,m),3.11-3.01(1H,m),2.95-2.83(1H,m),2.29-2.19(1H,m),2.16-2.03(1H,m),1.57(3H,d,J=6.3Hz).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.7(s),61.2(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
4-(ベンジルオキシ)-5-{3-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ]プロパ-1-イン-1-イル}-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
実施例20工程3で得られた化合物(4.17g)を用いて、反応溶媒をジクロロメタン(40mL)-ピリジン(40mL)混合溶媒とし、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.70g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.44(1H,s),7.53-7.47(4H,m),7.41-7.35(4H,m),7.33-7.11(7H,m),6.86-6.79(4H,m),6.17(1H,s),5.61(1H,d,J=13.7Hz),5.58(1H,d,J=13.7Hz),4.49(1H,dd,J=9.0,5.0Hz),4.44(1H,d,J=4.8Hz),4.29(1H,dd,J=9.6,5.0Hz),4.23-4.15(1H,m),4.04(1H,t,J=9.8Hz),3.98(2H,s),3.78(6H,s),1.10(9H,s),1.05(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.11(3H,s).
5-{3-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ]プロピル}-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-3,7-ジヒドロ-4H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オン
上記工程1で得られた化合物(5.70g)のメタノール(100mL)-テトラヒドロフラン(50mL)混合溶液に、ギ酸アンモニウム(3.71g)と10%パラジウム炭素(AD)wet(2g)を加え、室温で3時間攪拌した。触媒を濾去した後、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(4.56g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:11.61(1H,brs),7.75(1H,s),7.48-7.44(2H,m),7.37-7.14(7H,m),6.84-6.79(4H,m),6.57(1H,s),6.05(1H,s),4.45(1H,dd,J=9.2,4.9Hz),4.35(1H,d,J=5.1Hz),4.23(1H,dd,J=9.6,4.9Hz),4.16-4.10(1H,m),3.97(1H,t,J=9.8Hz),3.78(6H,s),3.19-3.08(2H,m),2.90(2H,t,J=7.8Hz),2.07-1.98(2H,m),1.09(9H,s),1.04(9H,s),0.89(9H,s),0.09(3H,s),0.08(3H,s).
5-{3-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ]プロピル}-7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-3,7-ジヒドロ-4H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-チオン
上記工程2で得られた化合物(1.01g)のジクロロメタン(10mL)溶液に、ピリジン(0.461mL)を加え、氷冷下でトリフルオロメタンスルホン酸無水物(0.385mL)を滴下し30分間攪拌した。同温度で反応液に一硫化水素ナトリウムn水和物(2.54g)のN,N-ジメチルホルミアミド(25mL)懸濁液を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加え、セライトで濾過した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(0.51g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:10.83(1H,s),7.83(1H,s),7.50-7.44(2H,m),7.39-7.14(7H,m),6.87-6.79(4H,m),6.72(1H,s),6.07(1H,s),4.48-4.42(1H,m),4.31(1H,d,J=4.3Hz),4.21-4.09(2H,m),3.99-3.92(1H,m),3.79(6H,s),3.19-3.09(4H,m),2.09-1.98(2H,m),1.08(9H,s),1.04(9H,s),0.90(9H,s),0.09(3H,s),0.09(3H,s).
7-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-5-(3-ヒドロキシプロピル)-3,7-ジヒドロ-4H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-チオン
上記工程3で得られた化合物(2.79g)のジクロロメタン(80mL)溶液に、蒸留水(4mL)を加え、氷冷下でジクロロ酢酸(1.28mL)を滴下し30分間攪拌した。同温度で反応液にピリジン(2.50mL)を加えた後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(0.96g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:11.16(1H,s),7.89(1H,s),6.83(1H,s),6.11(1H,s),4.51-4.45(1H,m),4.36-4.29(1H,m),4.22-4.13(2H,m),4.06-3.97(1H,m),3.68(2H,t,J=6.1Hz),3.27-3.09(2H,m),2.25-2.13(1H,brm),2.00-1.93(2H,m),1.08(9H,s),1.04(9H,s),0.90(9H,s),0.10(6H,s).
2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-O-(ジ-tert-ブチルシリリデン)-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(0.35g)を用いて、実施例20工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(0.25g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.53(1H,s),6.92(1H,s),6.21(1H,s),4.50-4.44(2H,m),4.30(1H,dd,J=9.6,4.9Hz),4.17(1H,td,J=10.0,5.0Hz),4.00(1H,dd,J=10.4,9.2Hz),3.18-3.12(2H,m),3.06-3.00(2H,m),2.39-2.30(2H,m),1.09(9H,s),1.05(9H,s),0.91(9H,s),0.12(3H,s),0.11(3H,s).
2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程5で得られた化合物(0.41g)を用いて、実施例1工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(0.46g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.52(1H,s),7.48-7.42(2H,m),7.37-7.20(8H,m),6.85-6.78(4H,m),6.36(1H,d,J=5.1Hz),4.70(1H,t,J=5.1Hz),4.37(1H,dd,J=8.8,4.1Hz),4.23-4.19(1H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.53(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),3.38(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),3.16-3.09(2H,m),2.78(1H,d,J=4.1Hz),2.76-2.70(2H,m),2.30-2.22(2H,m),0.83(9H,s),-0.03(3H,s),-0.14(3H,s).
2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-β-D-リボフラノシル)-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(0.46g)を用いて、実施例5工程4と同様に操作し、標題化合物(0.48g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.51(0.4H,s),8.49(0.6H,s),7.50-7.43(2H,m),7.38-7.23(8H,m),6.86-6.78(4H,m),6.36(0.6H,d,J=6.7Hz),6.32(0.4H,d,J=5.5Hz),4.83-4.78(0.6H,m),4.76-4.71(0.4H,m),4.45-4.35(1.4H,m),4.29-4.24(0.6H,m),4.04-3.84(1H,m),3.82-3.75(6H,m),3.70-3.48(4H,m),3.32-3.25(1H,m),3.16-3.09(2H,m),2.84-2.73(2H,m),2.73-2.61(1H,m),2.36-2.20(3H,m),1.22-1.13(8.4H,m),1.03(3.6H,d,J=7.0Hz),0.76(3.6H,s),0.75(5.4H,s),-0.03(1.2H,s),-0.07(1.8H,s),-0.18(1.2H,s),-0.20(1.8H,s).
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}ベンズアミド
上記工程7で得られた化合物(0.48g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と市販(Cool Pharm)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(0.61g)を用いて、実施例1工程8、工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。この混合物をHPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:40%-90%(0分-35分)]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(40mg)とジアステレオマー2(18mg)をそれぞれ得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1132(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1132(M+H)+.
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー1)(40mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-60%(0分-35分)]で精製し、標題化合物(35mg)を得た。
MS(ESI)m/z:975(M+H)+.
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー2)(18mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-50%(0分-35分)]で精製し、標題化合物(15mg)を得た。
MS(ESI)m/z:975(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程9-1で得られた化合物(35mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(18mg)を得た。
MS(ESI)m/z:747(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,s),8.41(1H,s),8.17(1H,s),7.48(1H,s),6.40(1H,d,J=4.3Hz),6.34(1H,d,J=8.6Hz),5.40-5.35(1H,m),5.23-5.17(1H,m),4.86-4.79(2H,m),4.54-4.41(2H,m),4.39-4.31(2H,m),4.12-4.01(2H,m),3.23-3.16(2H,m),3.05-2.86(2H,m),2.36-2.20(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.1(s),54.2(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程9-2で得られた化合物(15mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(8.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:747(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.81(1H,s),8.41(1H,s),8.17(1H,s),7.49(1H,s),6.43(1H,d,J=6.7Hz),6.34(1H,d,J=8.2Hz),5.55-5.41(2H,m),4.87-4.82(1H,m),4.57-4.27(5H,m),4.07-3.99(1H,m),3.94-3.86(1H,m),3.24-3.16(2H,m),3.12-3.03(2H,m),2.39-2.25(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.0(s),60.5(s).
1-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]ピリミジン-2,4(1H,3H)-ジオン
1-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]ピリミジン-2,4(1H,3H)-ジオン
実施例1工程7の反応を以下のスケールで実施した(原料:1.01g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と市販(ANGENE)の5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}ウリジン(1.03g)を用いて、実施例1の工程8、工程9、及び工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。この混合物をHPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-60%(0分-35分)]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(50mg)とジアステレオマー2(23mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:935(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:935(M+H)+.
ジナトリウム(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-1(2H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程1で得られた化合物(ジアステレオマー1)(50mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(30mg)を得た。
MS(ESI)m/z:707(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.09(1H,d,J=8.2Hz),8.03(1H,s),7.16(1H,s),6.32(1H,d,J=8.6Hz),6.28(1H,d,J=4.3Hz),5.82(1H,d,J=8.2Hz),5.08-5.01(1H,m),4.93-4.84(1H,m),4.73(1H,t,J=4.5Hz),4.68(1H,d,J=3.9Hz),4.48-4.38(2H,m),4.33-4.24(1H,m),4.23(1H,d,J=2.3Hz),4.09-3.99(2H,m),3.56-3.46(2H,m),2.96-2.83(2H,m),2.07-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.3(s),54.6(s).
ジナトリウム(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-1(2H)-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程1で得られた化合物(ジアステレオマー2)(23mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル=5:1]で精製し、標題化合物のトリエチルアミン塩を得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(11mg)を得た。
MS(ESI)m/z:707(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.08(1H,d,J=7.8Hz),8.01(1H,s),7.16(1H,s),6.35(1H,d,J=8.6Hz),6.31(1H,d,J=6.7Hz),5.85(1H,d,J=7.8Hz),5.38-5.33(1H,m),5.04-4.96(1H,m),4.75(1H,dd,J=6.5,4.5Hz),4.50-4.34(3H,m),4.33-4.26(1H,m),4.22-4.17(1H,m),4.04-3.97(1H,m),3.91-3.84(1H,m),3.53-3.46(2H,m),2.97-2.87(2H,m),2.05-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.2(s),60.2(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-(6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-7-(6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例13工程4で得られた化合物(313mg)のテトラヒドロフラン(5.0mL)溶液に、N-[(E)-(ピリジン-2-イル)メチリデン]ヒドロキシルアミン(337mg)とN,N,N’,N’-テトラメチルグアニジン(0.346mL)を加え、室温で1日間攪拌した。反応液にメタノール(5.0mL)と28%アンモニア水(5.0mL)を加え、50℃で5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(106mg:不純物含有)とジアステレオマー2(105mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-7-(6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程1で得られた化合物(ジアステレオマー1)(106mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):7%-50%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(43.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.66(1H,s),8.02(2H,s),7.09(1H,s),6.30(1H,d,J=6.8Hz),6.28(1H,d,J=4.8Hz),5.45-5.38(1H,m),5.20-5.13(1H,m),4.82(1H,d,J=4.2Hz),4.77(1H,t,J=4.5Hz),4.52-4.41(2H,m),4.36-4.27(2H,m),4.08-3.97(2H,m),3.53-3.46(2H,m),2.88-2.80(2H,m),2.04-1.95(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.7(s),54.6(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-7-(6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程1で得られた化合物(ジアステレオマー2)(105mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):7%-45%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:731(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.72(1H,s),8.03(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.32(1H,d,J=6.0Hz),6.30(1H,d,J=8.0Hz),5.49-5.40(2H,m),4.77(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.49(1H,d,J=4.5Hz),4.47-4.29(4H,m),4.07-4.01(1H,m),3.93-3.86(1H,m),3.52-3.47(2H,m),2.90(2H,t,J=5.4Hz),2.05-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.9(s),60.0(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[1-(3-ヒドロキシプロピル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
1-[3-(ベンゾイルオキシ)プロピル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]イノシン
3-ブロモプロパン-1-オール(1.14mL)のテトラヒドロフラン(25mL)溶液に、トリエチルアミン(1.83mL)と塩化ベンゾイル(1.43mL)を加え、室温で6時間攪拌した。反応溶液を濾過し、テトラヒドロフランで洗浄し、濾液を減圧濃縮した。残留物の脱水N,N-ジメチルアセトアミド(25mL)溶液に、市販(Aamdis Chemical)の5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]イノシン(5.0g)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(2.75mL)を加え、室温で3日間攪拌した。反応液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物(4.41g)を得た。
MS(ESI)m/z:733(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.00-7.98(1H,m),7.98-7.96(1H,m),7.97(1H,s),7.96(1H,s),7.58-7.52(1H,m),7.46-7.39(2H,m),7.35-7.30(2H,m),7.26-7.16(7H,m),6.81-6.75(4H,m),5.87(1H,d,J=6.0Hz),4.85(1H,d,J=3.6Hz),4.67-4.62(1H,m),4.43-4.34(3H,m),4.30-4.16(2H,m),3.78-3.75(1H,m),3.77(6H,s),3.42(1H,dd,J=10.3,3.6Hz),3.33(1H,dd,J=10.3,3.6Hz),3.02(1H,d,J=2.4Hz),2.32(2H,dd,J=11.8,5.7Hz).
1-[3-(ベンゾイルオキシ)プロピル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]イノシン
上記工程1で得られた化合物(4.41g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.60g)と標題化合物の位置異性体である1-[3-(ベンゾイルオキシ)プロピル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]イノシン(1.70g)を得た。
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.01(1H,d,J=1.2Hz),8.00(1H,s),7.99(1H,d,J=1.2Hz),7.93(1H,s),7.60-7.52(1H,m),7.46-7.38(4H,m),7.33-7.16(7H,m),6.83-6.77(4H,m),5.90(1H,d,J=4.8Hz),4.58-4.52(1H,m),4.50-4.46(1H,m),4.39(2H,t,J=6.0Hz),4.28-4.12(3H,m),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.46(1H,dd,J=10.6,3.9Hz),3.26(1H,dd,J=10.6,3.9Hz),2.99(1H,d,J=6.7Hz),2.30(2H,dd,J=13.3,6.0Hz),0.88(9H,s),0.07(3H,s),0.00(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.01(1H,d,J=1.8Hz),7.99(1H,d,J=1.8Hz),7.98(1H,s),7.87(1H,s),7.59-7.54(1H,m),7.47-7.40(4H,m),7.36-7.17(7H,m),6.84-6.78(4H,m),5.94(1H,d,J=5.4Hz),4.84(1H,t,J=5.4Hz),4.41-4.35(2H,m),4.33-4.28(1H,m),4.28-4.19(3H,m),3.78(3H,s),3.78(3H,s),3.48(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),3.37(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),2.68(1H,d,J=3.6Hz),2.34-2.26(2H,m),0.84(9H,s),0.01(3H,s),-0.13(3H,s).
1-[3-(ベンゾイルオキシ)プロピル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}イノシン
上記工程2で得られた化合物(1.60g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.91g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=67:33)として得た。
MS(ESI)m/z:1047(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.04-8.00(0.33H,m),8.03(1H,s),8.02(1H,s),7.91(0.67H,d,J=14.5Hz),7.60-7.53(1H,m),7.49-7.40(4H,m),7.35-7.17(7H,m),6.84-6.78(4H,m),6.14(0.67H,d,J=5.1Hz),6.06(0.33H,d,J=6.0Hz),4.86-4.78(0.33H,m),4.68-4.61(0.67H,m),4.44-4.35(2H,m),4.29-4.09(4H,m),3.78(6H,s),3.65-3.42(6.33H,m),3.34-3.24(0.67H,m),2.76(1.34H,t,J=6.6Hz),2.50(0.66H,t,J=6.6Hz),2.38(1.34H,t,J=6.6Hz),2.30(0.66H,t,J=6.6Hz),1.30-1.24(6H,m),1.15-1.07(4.02H,m),0.95(1.98H,d,J=6.6Hz),0.84(9H,s),0.09(0.99H,s),0.05(2.01H,s),0.00(3H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:981mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程3で得られた化合物(1.03g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
3-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}プロピル ベンゾエート
上記工程4で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(774mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1278(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(3-ヒドロキシプロピル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程5で得られた化合物(774mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[0.2%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(101mg:不純物含有)とジアステレオマー2(90.8mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1017(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1017(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[1-(3-ヒドロキシプロピル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(101mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(48.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.65(1H,s),8.28(1H,s),8.03(1H,s),7.09(1H,s),6.28(1H,s),6.27(1H,d,J=4.8Hz),5.46-5.38(1H,m),5.21-5.13(1H,m),4.83-4.80(1H,m),4.79-4.75(1H,m),4.52-4.39(2H,m),4.36-4.28(2H,m),4.26-4.17(1H,m),4.17-4.08(1H,m),4.08-3.97(2H,m),3.59(2H,t,J=5.7Hz),3.49(2H,t,J=4.8Hz),2.91-2.74(2H,m),2.02-1.92(4H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.6(s),54.6(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[1-(3-ヒドロキシプロピル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(90.8mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:3%-20%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(22.3mg)を得た。
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.71(1H,s),8.29(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.32(1H,d,J=6.7Hz),6.28(1H,d,J=8.5Hz),5.48-5.38(2H,m),4.80-4.74(1H,m),4.51-4.47(1H,m),4.47-4.28(4H,m),4.27-4.14(2H,m),4.07-4.01(1H,m),3.92-3.86(1H,m),3.60(2H,t,J=6.0Hz),3.53-3.47(2H,m),2.93-2.87(2H,m),2.06-1.94(4H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.8(s),59.9(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[2-アミノ-1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-N-[(ジメチルアミノ)メチリデン]グアノシン
文献既知(Journal of Organic Chemistry,1994,59,7243-7248)のN-[(ジメチルアミノ)メチリデン]グアノシン(10.0g)のN,N-ジメチルアセトアミド(50mL)-ピリジン(50mL)混合溶液に4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(10.5g)を0℃で加え、4℃で16時間攪拌した。反応液に安息香酸2-ブロモエチル(6.54mL)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(11.0mL)を加え、室温で2日間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物をトリフェニルホスフィンオキシドとの混合物(16.7g)として得た。
MS(ESI)m/z:789(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.17(1H,s),7.93-7.89(2H,m),7.55(1H,s),7.54-7.48(1H,m),7.42-7.36(4H,m),7.31-7.26(4H,m),7.25-7.19(2H,m),7.16-7.11(1H,m),6.82-6.76(4H,m),5.96(1H,d,J=6.7Hz),4.79-4.70(1H,m),4.70-4.61(2H,m),4.60-4.52(1H,m),4.52-4.45(1H,m),4.41-4.38(1H,m),4.34-4.30(1H,m),3.75(3H,s),3.75(3H,s),3.39-3.36(2H,m),2.89(3H,s),2.80(3H,s).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-N-[(ジメチルアミノ)メチリデン]グアノシン
上記工程1で得られた化合物(15.7g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(4.82g)と標題化合物の位置異性体である1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-N-[(ジメチルアミノ)メチリデン]グアノシン(6.01g)を得た。
MS(ESI)m/z:903(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.24(1H,s),7.99-7.95(2H,m),7.85(1H,s),7.56-7.50(1H,m),7.44-7.38(4H,m),7.34-7.27(6H,m),7.24-7.18(1H,m),6.84-6.79(4H,m),5.98(1H,d,J=4.2Hz),4.87-4.77(2H,m),4.72-4.61(2H,m),4.41-4.36(2H,m),4.16-4.09(1H,m),3.78(3H,s),3.78(3H,s),3.45(1H,dd,J=10.6,3.9Hz),3.25(1H,dd,J=10.6,3.9Hz),3.05(1H,d,J=5.4Hz),2.91(3H,s),2.78(3H,s),0.86(9H,s),0.05(3H,s),-0.04(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:903(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.23(1H,s),7.97-7.91(2H,m),7.82(1H,s),7.56-7.50(1H,m),7.45-7.36(4H,m),7.35-7.26(6H,m),7.25-7.19(1H,m),6.85-6.79(4H,m),5.98(1H,d,J=5.4Hz),4.88-4.77(2H,m),4.73-4.62(3H,m),4.32-4.27(1H,m),4.23-4.19(1H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.47(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.37(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),2.90(3H,s),2.76(1H,d,J=2.5Hz),2.75(3H,s),0.84(9H,s),0.02(3H,s),-0.15(3H,s).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-N-[(ジメチルアミノ)メチリデン]グアノシン
上記工程2で得られた化合物(4.81g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.41g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=7:3)として得た。
MS(ESI)m/z:1103(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.33(0.7H,s),8.31(0.3H,s),7.98-7.94(2H,m),7.87(0.3H,s),7.80(0.7H,s),7.56-7.50(1H,m),7.46-7.37(4H,m),7.35-7.27(6H,m),7.24-7.18(1H,m),6.85-6.80(4H,m),6.14(0.7H,d,J=6.0Hz),6.13(0.3H,d,J=5.4Hz),4.92-4.59(4H,m),4.55-4.48(0.7H,m),4.33-4.29(0.3H,m),4.25-4.21(0.6H,m),4.17-4.13(1.4H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.60-3.38(5H,m),3.33-3.23(1H,m),2.93(2.1H,s),2.92(0.9H,s),2.82(2.1H,s),2.81(0.9H,s),2.47-2.42(0.6H,m),2.34-2.27(1.4H,m),1.09(4.2H,d,J=6.7Hz),1.07(1.8H,d,J=7.3Hz),1.05(4.2H,d,J=6.7Hz),0.91(1.8H,d,J=7.3Hz),0.84(9H,s),0.07(0.9H,s),0.04(2.1H,s),-0.02(3H,s).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:1.68g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程3で得られた化合物(1.81g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-2-{(E)-[(ジメチルアミノ)メチリデン]アミノ}-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル)エチル ベンゾエート
上記工程4で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.15g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1334(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[2-アミノ-1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程5で得られた化合物(1.15g)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(134mg:不純物含有)とジアステレオマー2(127mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1018(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1018(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[2-アミノ-1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(134mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(36.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.01(1H,s),7.99(1H,s),7.17(1H,s),6.23(1H,d,J=2.4Hz),5.96(1H,d,J=8.5Hz),5.67-5.58(1H,m),5.29-5.22(1H,m),4.95-4.85(1H,m),4.83-4.79(1H,m),4.48-4.40(2H,m),4.39-4.31(2H,m),4.22-4.09(3H,m),3.73-3.66(2H,m),3.56-3.50(1H,m),3.50-3.44(2H,m),2.80-2.68(1H,m),2.48-2.35(1H,m),2.00-1.88(1H,m),1.87-1.77(1H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.6(s),53.1(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[2-アミノ-1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(127mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:3%-20%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(20.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.20(1H,s),8.02(1H,s),7.19(1H,s),6.31(1H,d,J=6.0Hz),6.05(1H,d,J=8.5Hz),5.62-5.52(1H,m),5.47-5.40(1H,m),4.80-4.75(1H,m),4.51-4.47(1H,m),4.47-4.21(5H,m),4.16-4.09(1H,m),3.99-3.89(2H,m),3.84-3.78(2H,m),3.52-3.46(2H,m),2.93-2.83(1H,m),2.82-2.72(1H,m),2.03-1.92(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:61.6(s),59.6(s).
N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例8工程8-2で得られた化合物(6.6mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(2.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:846(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.33(1H,s),8.02(1H,s),7.16(1H,s),6.33(1H,d,J=6.0Hz),6.18(1H,d,J=8.5Hz),5.53-5.45(2H,m),4.79(1H,t,J=5.1Hz),4.50-4.25(5H,m),4.10(1H,d,J=11.5Hz),3.97(2H,s),3.94-3.89(1H,m),3.53-3.39(6H,m),2.88(2H,t,J=5.7Hz),2.04-1.98(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.6,60.1.
N-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}メチル)-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-ヒドロキシアセトアミド)メチル]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例11工程9-2で得られた化合物(4.6mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
MS(ESI)m/z:817(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.75(1H,s),8.02(1H,s),7.12(1H,s),6.36(1H,d,J=8.5Hz),6.33(1H,d,J=6.7Hz),5.49-5.41(2H,m),4.80(1H,dd,J=6.7,4.8Hz),4.50-4.29(7H,m),4.07(2H,s),4.05-4.01(1H,m),3.92-3.87(1H,m),3.51-3.49(2H,m),2.93-2.90(2H,m),2.03-1.99(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.2,60.3.
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[(1-アミノシクロプロピル)メチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-クロロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例8工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(590mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(420mg)を得た。
MS(ESI)m/z:992(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.76(1H,s),7.97(1H,s),7.30(1H,s),6.23(1H,d,J=4.8Hz),6.22(1H,d,J=7.9Hz),5.43-5.37(1H,m),5.19-5.15(1H,m),4.85-4.77(3H,m),4.44-4.31(2H,m),4.22(1H,brs),4.08-4.00(2H,m),3.52-3.48(2H,m),3.14(12H,q,J=7.3Hz),2.84-2.81(2H,m),2.02-1.92(2H,m),1.26(18H,t,J=7.3Hz),1.00(9H,s),0.85(9H,s),0.33(3H,s),0.28(3H,s),0.27(3H,s),0.10(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-クロロ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例8工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(710mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(452mg)を得た。
MS(ESI)m/z:992(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.55(1H,s),8.01(1H,s),7.07(1H,s),6.34(1H,d,J=7.3Hz),6.20(1H,d,J=8.5Hz),5.52-5.44(1H,m),5.38-5.36(1H,m),5.17-5.10(1H,m),4.98-4.95(2H,m),4.67-4.57(2H,m),4.25(1H,brs),4.11-4.07(1H,m),3.89-3.84(1H,m),3.52-3.49(2H,m),3.18(12H,q,7.3Hz),2.93-2.91(2H,m),2.03-1.99(2H,m),1.30(18H,t,J=7.3Hz),1.00(9H,s),0.74(9H,s),0.27(6H,s),0.20(3H,s),-0.28(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[(1-アミノシクロプロピル)メチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
1-(アミノメチル)シクロプロパン-1-アミン・2HCl(309mg)のメタノール(40mL)溶液に、MP-Carbonateレジン(5.45g)を加え、室温で二時間攪拌した。レジンを濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物のメタノール(0.837mL)溶液を、上記工程1-1で得られた化合物(30.0mg)に加え、マイクロウェーブ反応装置を用い、120℃で4時間反応させた。反応液を減圧濃縮後、残留物を分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-60%(0分-30分)]で精製し、標題化合物を含む混合物を得た。得られた混合物はそのまま次の工程に用いた。
MS(ESI)m/z:1042(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[(1-アミノシクロプロピル)メチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程1-2で得られた化合物(58.6mg)を用いて、上記工程2-1と同様の手法により標題化合物を含む混合物を得た。得られた混合物はそのまま次の反応に用いた。
MS(ESI)m/z:1042(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[(1-アミノシクロプロピル)メチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程2-1で得られた混合物を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-20%(0分-30分)]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(2.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:812(M-2Na+1H)―.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.25(1H,s),8.01(1H,s),7.04(1H,s),6.28(1H,d,J=4.2Hz),6.12(1H,d,J=7.9Hz),5.43-5.35(1H,m),5.15-5.11(1H,m),4.75(1H,t,J=4.2Hz),4.65-4.56(1H,m),4.49-4.43(2H,m),4.37-4.31(2H,m),4.15-4.01(2H,m),3.73-3.59(1H,m),3.50-3.47(2H,m),3.22-3.15(1H,m),2.85-2.68(2H,m),2.00-1.93(2H,m),0.87-0.80(4H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.7(s),54.3(s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[(1-アミノシクロプロピル)メチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程2-2で得られた混合物を用いて、実施例1工程11と同様の手法により標題化合物を含む混合物を得た。得られた混合物はそのまま次の反応に用いた。
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[6-アミノ-2-({[1-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)シクロプロピル]メチル}アミノ)-9H-プリン-9-イル]-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程3-2で得られた混合物のN,N-ジメチルホルムアミド(1.0mL)溶液にトリエチルアミン(40.8μL)と2,5-ジオキソピロリジン-1-イル(2-(トリメチルシリル)エチル)カーボネート(39.5mg)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に水を加えてクエンチ後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-50%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(11.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:958(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.40(1H,s),8.03(1H,s),7.12(1H,s),6.32(1H,d,J=6.7Hz),6.18(1H,d,J=8.5Hz),5.53-5.49(1H,m),5.46-5.39(1H,m),4.83(1H,dd,J=6.3,4.5Hz),4.53-4.30(4H,m),4.26-4.24(1H,m),4.13-4.08(2H,m),4.04-4.00(1H,m),3.93-3.88(1H,m),3.60(1H,d,J=13.9Hz),3.52-3.49(2H,m),3.40(1H,d,J=13.9Hz),3.04(12H,q,7.3Hz),2.93-2.90(2H,m),2.04-1.99(2H,m),1.23(18H,t,J=7.3Hz),0.96-0.92(2H,m),0.84-0.80(2H,m),0.76-0.73(2H,m),0.02(9H,s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[(1-アミノシクロプロピル)メチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程4で得られた化合物(11.0mg)のテトラヒドロフラン(474μL)溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,237μL)を加え、窒素雰囲気下、40℃で3時間攪拌した。反応液に10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液を加えてクエンチ後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)]及びSep-Pak(登録商標)C18[水/アセトニトリル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(4.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:812(M-2Na+1H)-.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.34(1H,s),8.01(1H,s),7.14(1H,s),6.32(1H,d,J=6.0Hz),6.16(1H,d,J=8.5Hz),5.43-5.37(2H,m),4.78(1H,t,J=5.4Hz),4.50-4.28(5H,m),4.12-4.08(1H,m),3.95-3.89(1H,m),3.69-3.64(1H,m),3.51-3.48(2H,m),3.26(1H,d,J=14.5),2.89-2.86(2H,m),2.03-1.98(2H,m),0.83-0.79(4H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.3(s),60.0(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルアミノ)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルアミノ)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例12工程7で得られたジアステレオマー2(高極性)(56.5mg)のメタノール(1.00mL)溶液に、40%メチルアミン水溶液(1.00mL)を加え、封管中60℃で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮して標題化合物を含む混合物を得た。得られた混合物をそのまま次の反応に用いた。
MS(ESI)m/z:1002(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-7-[2-(ヒドロキシメチル)-6-(メチルアミノ)-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程1で得られた混合物を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-20%(0分-30分)]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(16.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:774(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.70(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.38(1H,d,J=9.1Hz),6.33(1H,d,J=7.3Hz),5.49-5.42(2H,m),4.80(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.60(2H,s),4.50-4.28(5H,m),4.05-4.00(1H,m),3.92-3.87(1H,m),3.52-3.49(2H,m),3.14(3H,brs),2.91(2H,t,J=5.4Hz),2.04-1.99(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),60.3(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
5-(3,3-ジエトキシプロパ-1-イン-1-イル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
市販(PharmaBlock)の5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン(22g)のN,N-ジメチルホルミアミド(70mL)溶液に、ヨウ化銅(1.61g)、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムジクロリド(5.94g)、及びトリエチルアミン(35mL)を加えた。プロパルギルアルデヒドジエチルアセタール(22mL)を2時間かけて加え、室温で終夜攪拌した。反応液にクロロホルム(350mL)を加え、水で2回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エチル(350mL)を加え、終夜攪拌した。析出した固体を濾取し、標題化合物(9.60g)を得た。
MS(ESI)m/z:261(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.04(1H,brs),8.11(1H,brs),7.57(1H,s),6.56(2H,brs),5.59(1H,s),3.68(2H,m),3.57(2H,m),1.17(6H,t,J=7.3Hz).
5-(3,3-ジエトキシプロピル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程1で得られた化合物(17.9g)のテトラヒドロフラン(160mL)-エタノール(80mL)混合溶液に、10%パラジウム炭素(M)wet(25.0g)を加え、水素雰囲気下、室温で終夜攪拌した。触媒をセライトで濾去し、濾液を減圧濃縮し、標題化合物(17.0g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:265(M+H)+.
6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程2で得られた化合物(50.21g)を90%酢酸水溶液(344mL)に溶解し、50℃で終夜攪拌した。原料の消失を確認後、反応液にパラジウム炭素(M)wet(60g)を加え、水素雰囲気下、40℃で終夜攪拌した。触媒をセライトで濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(350mL)を加え、クロロホルム/メタノール(9:1)で7回抽出した。有機層を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]で精製し、標題化合物(18.47g)を得た。
MS(ESI)m/z:175(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:11.26(1H,brs),7.97(1H,s),7.37(1H,brs),6.86(1H,brs),3.35(2H,m),2.80(2H,t,J=5.4Hz),1.88(2H,m).
フェニル(2,7,8,9-テトラヒドロ-6H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-6-イル)メタノン
上記工程3で得られた化合物(8.47g)のジクロロメタン(120mL)懸濁液に、脱水ピリジン(39.2mL)、N,N-ジメチルアミノピリジン(2.38g)、及び塩化ベンゾイル(22.6mL)を順に加え、室温で1時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物にクロロホルム(150mL)、メタノール(60mL)、及びトリエチルアミン(50mL)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液をクロロホルムと水の二層に注ぎ、クロロホルムで抽出した。有機層を25w/v%硫酸水素カリウム水溶液で2回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エチル(50mL)とヘキサン(125mL)を順に加えてスラリー状にした後、1時間攪拌した。析出した固体を濾取し、標題化合物(9.89g)を得た。
MS(ESI)m/z:279(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:10.07(1H,brs),8.11(1H,s),7.39-7.21(5H,m),7.12(1H,s),4.32(2H,m),3.06(2H,m),2.26(2H,m).
6-ベンゾイル-2-[2-デオキシ-3,5-ビス-O-(4-メチルベンゾイル)-β-D-エリスロ-ペントフラノシル]-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(7.10g)のアセトニトリル(80mL)懸濁液に、窒素雰囲気下、粉末状の水酸化カリウム(2.9g)とトリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチル]アミン(0.41mL)を加え、室温で15分間攪拌した。氷冷下、文献既知(Synlett 2004(2):335-337)の2-デオキシ-3,5-ビス-O-(4-メチルベンゾイル)-α-D-エリスロ-ペントフラノシルクロリド(10.12g)とアセトニトリル(60mL)を加え、室温まで昇温し、終夜攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した。析出した固体を濾取した後、水で洗浄し、標題化合物(9.70g)を得た。
MS(ESI)m/z:631(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.10(1H,s),8.00-7.96(4H,m),7.37-7.22(9H,m),7.10(1H,s),6.88(1H,dd,J=8.5,5.4Hz),5.76(1H,m),4.77(1H,dd,J=11.8,3.9Hz),4.65-4.57(2H,m),4.32(1H,m),4.20(1H,m),2.90-2.78(3H,m),2.73(1H,ddd,J=2.1,5.7,8.5Hz),2.44(6H,s),2.19(2H,m).
6-ベンゾイル-2-(2-デオキシ-β-D-エリスロ-ペントフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程5で得られた化合物(8.69g)のメタノール(45mL)-テトラヒドロフラン(135mL)混合溶液に、-10℃で2規定水酸化ナトリウム水溶液(27.6mL)を20分間かけて滴下した。同温度で2時間攪拌後、1規定塩酸(58mL)を加えて反応を停止した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]で精製し、標題化合物(4.09g)を得た。
MS(ESI)m/z:395(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.04(1H,s),7.39-7.23(5H,m),7.05(1H,s),6.27(1H,dd,J=9.7,5.4Hz),6.00(1H,d,J=10.9Hz),4.77(1H,d,J=4.8Hz),4.41(1H,dd,J=14.5,7.9Hz),4.19(1H,s),4.15(1H,dd,J=14.5,7.9Hz),3.94(1H,d,J=12.7Hz),3.74(1H,m),3.16-2.95(3H,m),2.30-2.14(3H,m),1.96(1H,s).
6-ベンゾイル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-デオキシ-β-D-エリスロ-ペントフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(4.55g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(6.38g)を得た。
MS(ESI)m/z:697(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.08(1H,s),7.43(2H,d,J=7.9Hz),7.36-7.19(13H,m),6.84-6.76(5H,m),4.66(1H,brs),4.31(1H,m),4.21(1H,m),4.07(1H,m),3.79(6H,s),3.44(1H,dd,J=10.0,3.9Hz),3.38(1H,dd,J=10.3,4.8Hz),2.85(2H,t,J=6.3Hz),2.66(1H,m),2.47(1H,ddd,J=4.1,6.5,13.9Hz),2.18(2H,m).(観測可能なピークのみ記載)
6-ベンゾイル-2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-2-デオキシ-β-D-エリスロ-ペントフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程7で得られた化合物(6.37g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(6.05g)をジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.09(0.5H,s),8.08(0.5H,s),7.46-7.41(2H,m),7.35-7.19(13H,m),6.84-6.75(5H,m),4.82-4.76(1H,m),4.35-4.19(3H,m),3.89-3.54(4H,m),3.79(1.5H,s),3.79(1.5H,s),3.78(1.5H,s),3.78(1.5H,s),3.42(1H,td,J=9.8,3.8Hz),3.38-3.30(1H,m),2.81(2H,t,J=6.3Hz),2.74-2.66(1H,m),2.63-2.49(1H,m),2.62(1H,t,J=6.0Hz),2.45(1H,t,J=6.3Hz),2.21-2.14(2H,m),1.20-1.17(9H,m),1.11(3H,d,J=6.7Hz).
上記工程8で得られた化合物(868mg)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-エリスロ-ペントフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と実施例22工程3で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程9で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(702mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1134(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程10で得られた化合物(702mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(119mg:不純物含有)とジアステレオマー2(113mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:873(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:873(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程11で得られた化合物(ジアステレオマー1)(119mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(51.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:759(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.69(1H,s),8.24(1H,s),8.02(1H,s),7.09(1H,s),6.68(1H,t,J=7.0Hz),6.29(1H,d,J=8.5Hz),5.36-5.27(2H,m),4.75-4.71(1H,m),4.41-4.30(3H,m),4.28-4.12(3H,m),4.06-4.00(1H,m),3.94-3.84(1H,m),3.82(2H,t,J=4.8Hz),3.52-3.47(2H,m),2.91-2.69(4H,m),2.04-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.3(s),54.9(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程11で得られた化合物(ジアステレオマー2)(113mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(65.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:759(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.78(1H,s),8.24(1H,s),8.02(1H,s),7.08(1H,s),6.73(1H,dd,J=9.1,5.4Hz),6.29(1H,d,J=8.5Hz),5.59-5.52(1H,m),5.45-5.37(1H,m),4.45(1H,d,J=4.2Hz),4.40-4.16(6H,m),4.01(1H,d,J=12.7Hz),3.87-3.75(3H,m),3.53-3.46(2H,m),2.93-2.88(2H,m),2.87-2.65(2H,m),2.06-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),57.3(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
1-(2,7,8,9-テトラヒドロ-6H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-6-イル)エタン-1-オン
実施例42工程3で得られた化合物(6.88g)を無水酢酸(48mL)に溶解し、90℃で攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をクロロホルム(100mL)-メタノール(50mL)-トリエチルアミン(30mL)の混合液に溶解した。室温で4時間攪拌後、反応液をクロロホルムと水の二層に注ぎ、クロロホルムで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物にヘキサン/酢酸エチル(1:2)を加えてスラリー状にした後、固体を濾取し、標題化合物(7.18g)を得た。
MS(ESI)m/z:217(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.47(1H,s),7.21(1H,s),4.11(2H,d,J=8.5Hz),2.97(2H,t,J=6.3Hz),2.46(3H,s),2.06(2H,m).
6-アセチル-2-(3,5-ジ-O-ベンゾイル-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-アラビノフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程1で得られた化合物(6.00g)と市販(CARBOSYNTH)の[(2R,3R,4S,5R)-3-ベンゾイルオキシ-5-ブロモ-4-フルオロ-テトラヒドロフラン-2-イル]メチル ベンゾエート(14.1g)を用いて、実施例42工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(11.45g)を得た。
MS(ESI)m/z:559(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.58(1H,s),8.12(4H,t,J=7.3Hz),7.69-7.44(6H,m),7.28(1H,d,J=2.4Hz),6.92(1H,dd,J=23.3,2.7Hz),5.77(1H,dd,J=17.5,3.0Hz),5.34(1H,dd,J=50.2,3.0Hz),4.83(2H,dd,J=11.8,4.5Hz),4.76(2H,dd,J=11.8,5.1Hz),4.56(1H,m),4.14(2H,m),2.90(2H,t,J=6.7Hz),2.07(3H,s).
6-アセチル-2-(2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-アラビノフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程2で得られた化合物(8.70g)のメタノール(58mL)-テトラヒドロフラン(117mL)混合溶液に、-20℃で2規定水酸化ナトリウム水溶液(32mL)を12分間かけて滴下した。同温度で3時間攪拌後、1規定塩酸(66mL)を加えて反応を停止した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]で精製し、標題化合物(3.27g)を得た。
MS(ESI)m/z:351(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.54(1H,s),7.20(1H,d,J=1.8Hz),6.68(1H,dd,J=17.5,4.2Hz),5.16(1H,ddd,J=52.0,2.4,1.2Hz),4.75(1H,ddd,J=19.2,2.6,1.3Hz),4.16(1H,m),4.08(2H,m),3.99(1H,dd,J=12.1,3.6Hz),3.92(1H,dd,J=12.1,4.2Hz),2.93(2H,m),2.52(3H,s),2.07(2H,m).(観測可能なピークのみ記載)
6-アセチル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-アラビノフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程3で得られた化合物(3.95g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.66g)を得た。
MS(ESI)m/z:653(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.56(1H,s),7.50-7.20(10H,m),6.85-6.78(5H,m),5.07(1H,dt,J=51.8,3.2Hz),4.59(1H,brd,J=18.1Hz),4.21-4.02(3H,m),3.80(3H,s),3.79(3H,s),3.50(1H,dd,J=10.3,5.4Hz),3.44(1H,dd,J=10.0,5.1Hz),2.88(2H,m),2.54(3H,s),2.42(1H,brs),2.07(2H,m).
6-アセチル-2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-アラビノフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(5.68g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.08g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
MS(ESI)m/z:853(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.58(0.5H,s),8.57(0.5H,s),7.51-7.20(10H,m),6.85-6.76(5H,m),5.24-5.02(1H,m),4.76-4.60(1H,m),4.21-4.05(3H,m),3.91-3.74(1H,m),3.80(1.5H,s),3.79(1.5H,s),3.79(1.5H,s),3.79(1.5H,s),3.69-3.55(3H,m),3.49-3.37(2H,m),2.95-2.80(2H,m),2.61(1H,t,J=6.3Hz),2.54(3H,s),2.43(1H,t,J=6.7Hz),2.11-2.03(2H,m),1.21-1.17(9H,m),1.11(3H,d,J=7.3Hz).
上記工程5で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-アセチル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-アラビノフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。このアセトニトリル溶液と実施例22工程3で得られた化合物(1.21g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-アセチル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程6で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(757mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1090(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程7で得られた化合物(757mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(113mg:不純物含有)とジアステレオマー2(108mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:891(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:891(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー1)(113mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(28.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:777(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.67(1H,s),8.24(1H,s),8.04(1H,s),7.05(1H,s),6.73(1H,dd,J=23.9,2.7Hz),6.28(1H,d,J=8.5Hz),5.43-5.24(3H,m),4.77-4.72(1H,m),4.51-4.32(4H,m),4.26-4.12(2H,m),4.06-3.91(2H,m),3.82(2H,t,J=5.1Hz),3.50(2H,t,J=5.1Hz),2.92-2.85(2H,m),2.06-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.8(s),54.7(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー2)(108mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-20%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(3.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:777(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.76(1H,s),8.23(1H,s),8.04(1H,s),7.06(1H,s),6.73(1H,dd,J=24.5,2.1Hz),6.28(1H,d,J=8.5Hz),5.53-5.45(1H,m),5.43-5.27(2H,m),4.62-4.49(1H,m),4.45-4.41(1H,m),4.40-4.27(2H,m),4.27-4.15(3H,m),4.03-3.92(2H,m),3.87-3.78(2H,m),3.51(2H,t,J=5.6Hz),2.90(2H,t,J=5.6Hz),2.08-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.0(s),57.8(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
実施例1工程4で得られた化合物(35.80g)のジクロロメタン(322mL)-ピリジン(35mL)混合溶液に、氷冷下でフッ化水素-ピリジン(6.33g)のジクロロメタン(36mL)溶液を5分間かけて加え、同温度で3時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(268mL)と飽和食塩水(143mL)を順に加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物にヘキサン/酢酸エチル(1:1)(108mL)を加えてスラリー状にした後、50℃で30分間攪拌し、ヘキサン(161mL)を追加して更に2時間攪拌した。析出した固体を濾取し、ヘキサン/酢酸エチル(4:1)(143mL)で洗浄し、標題化合物(26.81g)を得た。
MS(ESI)m/z:525(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:7.98(1H,s),7.65(1H,s),7.39(1H,m),7.26-7.20(4H,m),6.19(1H,d,J=6.5Hz),5.15(1H,t,J=5.6Hz),5.00(1H,d,J=4.8Hz)4.48(1H,t,J=5.6Hz),4.27(1H,m),4.11-4.02(2H,m),3.97(1H,m),3.67-3.57(2H,m),2.99(2H,m),2.23-2.07(2H,m),0.68(9H,s),-0.11(3H,s),-0.26(3H,s).
6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3,5-ビス-O-(オキサン-2-イル)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程1で得られた化合物(19.93g)と3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(35mL)のN,N-ジメチルホルミアミド(200mL)溶液に、氷冷下でp-トルエンスルホン酸一水和物(7.25g)を加え、室温で3時間攪拌した。氷冷下で反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を水と飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(24.73g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.10-8.07(1H,m),7.59-7.35(1H,m),7.35-7.27(3H,m),7.25-7.17(2H,m),6.44-6.36(1H,m),4.90-3.36(13H,m),3.06-2.96(2H,m),2.31-2.15(2H,m),2.01-1.43(12H,m),0.84-0.73(9H,m),0.04-(-0.35)(6H,m).
6-ベンゾイル-2-[3,5-ビス-O-(オキサン-2-イル)-β-D-リボフラノシル]-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程2で得られた化合物(24.73g)と酢酸(3.1mL)のテトラヒドロフラン(250mL)溶液に、氷冷下でフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,55mL)を加え、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物に酢酸エチルを加え、水と飽和食塩水で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(18.74g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.12-8.09(1H,m),7.49-7.30(4H,m),7.28-7.20(2H,m),6.41-6.30(1H,m),4.83-4.18(7H,m),4.12-3.50(7H,m),3.06-2.97(2H,m),2.31-2.17(2H,m),1.96-1.47(12H,m).
6-ベンゾイル-2-[3,5-ビス-O-(オキサン-2-イル)-β-D-アラビノフラノシル]-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程3で得られた化合物(18.74g)とピリジン(13.1mL)のジクロロメタン(300mL)溶液に、氷冷下でトリフルオロメタンスルホン酸無水物(11mL)を滴下し10分間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をテトラヒドロフラン(300mL)に溶解し、氷冷下で亜硝酸テトラブチルアンモニウム(28.34g)のテトラヒドロフラン(150mL)溶液を滴下し、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物に酢酸エチルを加え、水と飽和食塩水で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(10.46g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.13-8.06(1H,m),7.63-7.30(4H,m),7.29-7.18(2H,m),6.79-6.55(1H,m),4.93-3.45(14H,m),3.11-2.95(2H,m),2.32-2.14(2H,m),1.98-1.44(12H,m).
6-ベンゾイル-2-[2-デオキシ-2-フルオロ-3,5-ビス-O-(オキサン-2-イル)-β-D-リボフラノシル]-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(10.46g)とピリジン(7.3mL)のジクロロメタン(200mL)溶液に、氷冷下でトリフルオロメタンスルホン酸無水物(6.1mL)を滴下し10分間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をテトラヒドロフラン(200mL)に溶解し、氷冷下でフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,150mL)を加え、同温度で3時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(7.65g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.13-8.08(1H,m),7.53-7.31(4H,m),7.26-7.22(2H,m),6.68-6.53(1H,m),5.42-5.08(1H,m),4.93-4.18(6H,m),4.10-3.76(3H,m),3.71-3.47(3H,m),3.06-2.96(2H,m),2.29-2.18(2H,m),1.96-1.47(12H,m).
6-ベンゾイル-2-(2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-リボフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程5で得られた化合物(7.65g)のエタノール(150mL)溶液に、p-トルエンスルホン酸ピリジニウム(6.62g)を加え、50℃で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物に酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(3.55g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.05(1H,s),7.41-7.35(3H,m),7.30-7.24(2H,m),7.06(1H,s),6.07-6.00(2H,m),5.85(1H,ddd,J=52.8,6.7,4.7Hz),4.66(1H,d,J=3.9Hz),4.42-4.31(2H,m),4.20(1H,m),3.93(1H,dd,J=12.9,1.6Hz),3.74(1H,td,J=12.3,1.6Hz),3.12-2.96(2H,m),2.51(1H,s),2.33-2.15(2H,m).
6-ベンゾイル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(3.55g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.77g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.09(1H,s),7.45-7.41(2H,m),7.36-7.17(13H,m),6.85-6.79(4H,m),6.53(1H,dd,J=17.2,2.3Hz),5.40(1H,ddd,J=53.2,4.8,2.3Hz),4.83-4.72(1H,m),4.32-4.21(2H,m),4.19-4.14(1H,m),3.79(3H,s),3.79(3H,s),3.59(1H,dd,J=11.0,2.7Hz),3.45(1H,dd,J=11.0,3.5Hz),2.79(2H,t,J=6.3Hz),2.45(1H,s),2.24-2.11(2H,m).
6-ベンゾイル-2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-リボフラノシル)-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程7で得られた化合物(5.77g)を用いて、実施例1の工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.95g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.10(0.5H,s),8.09(0.5H,s),7.45-7.12(15H,m),6.84-6.75(4H,m),6.57-6.46(1H,m),5.61-5.33(1H,m),5.07-4.83(1H,m),4.34-4.18(3H,m),3.93-3.72(7H,m),3.69-3.49(4H,m),3.38-3.27(1H,m),2.87-2.68(2H,m),2.61(1H,td,J=6.3,1.6Hz),2.40(1H,td,J=6.4,2.1Hz),2.21-2.12(2H,m),1.21-1.13(9H,m),1.03(3H,d,J=6.7Hz).
上記工程8で得られた化合物(1.02g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例22工程3で得られた化合物(1.15g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程9で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(818mg:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1152(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程10で得られた化合物(818mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(107mg:不純物含有)とジアステレオマー2(101mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:891(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:891(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程11で得られた化合物(ジアステレオマー1)(107mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(29.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:777(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,m),8.11(1H,m),8.03(1H,s),7.11(1H,s),6.47(1H,d,J=17.5Hz),6.26(1H,d,J=8.5Hz),5.53-5.36(2H,m),5.29-5.17(1H,m),4.77(1H,d,J=4.2Hz),4.54-4.46(1H,m),4.44-4.38(1H,m),4.35-4.32(1H,m),4.30-4.25(2H,m),4.25-4.16(1H,m),4.06-3.99(1H,m),3.96-3.85(1H,m),3.82-3.71(2H,m),3.54-3.42(2H,m),2.77-2.68(1H,m),2.66-2.55(1H,m),2.02-1.81(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.5(s),53.0(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程11で得られた化合物(ジアステレオマー2)(101mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-20%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(11.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:777(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.61(1H,m),8.16(1H,m),8.02(1H,m),7.36(1H,s),6.49(1H,dd,J=16.0,2.1Hz),6.28(1H,d,J=8.5Hz),5.56-5.33(3H,m),4.58-4.49(2H,m),4.45-4.37(2H,m),4.31-4.27(1H,m),4.25-4.16(1H,m),4.10-3.98(3H,m),3.80(2H,t,J=5.1Hz),3.48(2H,dd,J=6.7,3.6Hz),2.90-2.72(2H,m),2.00-1.90(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:59.5(s),57.7(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]イノシン
市販(Aamdis Chemical)の5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]イノシン(13.0g)のN,N-ジメチルアセトアミド(60mL)懸濁液に、N-(2-ブロモエチル)フタルイミド(7.02g)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(4.1mL)を加え、室温で終夜攪拌した。N-(2-ブロモエチル)フタルイミド(1.75g)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(1.1mL)を追加し、更に1日間攪拌した。反応液に水を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物(12.4g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.83(1H,s),7.76-7.67(4H,m),7.64(1H,s),7.35-7.33(2H,m),7.25-7.11(7H,m),6.74-6.70(4H,m),5.93(1H,d,J=5.1Hz),5.68(1H,d,J=3.9Hz),4.71(1H,q,J=4.8Hz),4.43(1H,m),4.37-4.18(3H,m),4.10-4.06(2H,m),3.730(3H,s),3.728(3H,s),3.51(1H,m),3.36(1H,dd,J=10.6,3.9Hz),3.32(1H,dd,J=11.0,5.5Hz).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]イノシン
上記工程1で得られた化合物(12.4g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(4.18g)と標題化合物の位置異性体である5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]イノシン(6.31g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.00(1H,s),7.82-7.77(2H,m),7.74(1H,s),7.72-7.67(2H,m),7.41-7.39(2H,m),7.32-7.19(7H,m),6.83-6.78(4H,m),5.90(1H,d,J=5.1Hz),4.53-4.41(3H,m),4.32-4.25(1H,m),4.19-4.11(3H,m),3.79(3H,s),3.78(3H,s),3.46(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),3.24(1H,dd,J=10.8,4.1Hz),2.98(1H,d,J=6.7Hz),0.85(9H,s),0.04(3H,s),-0.03(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
1H-NMR(CDCl3)δ:7.97(1H,s),7.82-7.78(2H,m),7.73-7.69(2H,m),7.66(1H,s),7.44-7.41(2H,m),7.33-7.18(7H,m),6.81(4H,d,J=7.8Hz),5.91(1H,d,J=5.9Hz),4.82(1H,t,J=5.5Hz),4.43(1H,m),4.34-4.23(3H,m),4.18-4.08(2H,m),3.79(6H,s),3.46(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),3.36(1H,dd,J=10.6,3.5Hz),2.70(1H,d,J=3.1Hz),0.83(9H,s),-0.04(3H,s),-0.19(3H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]イノシン
上記工程2で得られた化合物(8.89g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(9.45g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.01(0.5H,s),8.00(0.5H,s),7.82-7.77(2H,m),7.74(0.5H,s),7.72-7.67(2.5H,m),7.42(2H,d,J=7.8Hz),7.33-7.18(7H,m),6.81(4H,d,J=8.6Hz),6.10(0.5H,d,J=5.5Hz),6.04(0.5H,d,J=5.1Hz),4.75(0.5H,m),4.60(0.5H,m),4.49-4.41(1H,m),4.38-4.23(2H,m),4.22-4.05(3H,m),3.79(6H,s),3.78-3.65(1H,m),3.62-3.39(4H,m),3.33-3.23(1H,m),2.49(1H,t,J=6.3Hz),2.34(1H,t,J=6.7Hz),1.12-1.08(9H,m),0.91(3H,d,J=7.0Hz),0.82(9H,s),0.06(1.5H,s),0.03(1.5H,s),-0.03(3H,s).
実施例44工程8で得られた化合物(1.30g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と上記工程3で得られた化合物(1.50g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
3-{[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-{1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-イル]オキシ}プロパンニトリル
上記工程4で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(828mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1177(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程5で得られた化合物(828mg)のエタノール(5.0mL)-テトラヒドロフラン(5.0mL)混合溶液に、ヒドラジン一水和物(0.342mL)を加え、50℃で6時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(90.9mg:不純物含有)とジアステレオマー2(91.1mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:890(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:890(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(90.9mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-50%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(20.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:776(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.54(1H,s),8.03(1H,s),7.99(1H,s),7.13(1H,s),6.44(1H,d,J=18.1Hz),6.22(1H,d,J=7.9Hz),5.56-5.38(2H,m),5.33-5.21(1H,m),4.72(1H,d,J=4.2Hz),4.58-4.49(1H,m),4.41-4.24(4H,m),4.24-4.17(1H,m),4.05-3.98(1H,m),3.86-3.76(1H,m),3.50-3.42(2H,m),3.27-3.16(2H,m),2.78-2.68(1H,m),2.59-2.49(1H,m),1.98-1.80(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.5(s),53.1(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(91.1mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-45%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(26.3mg)を得た。
MS(ESI)m/z:776(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.56(1H,s),8.08(1H,s),8.02(1H,s),7.37(1H,s),6.48(1H,d,J=16.2Hz),6.23(1H,d,J=7.9Hz),5.58-5.32(3H,m),4.65-4.27(6H,m),4.07-3.96(3H,m),3.48-3.42(2H,m),3.38-3.23(2H,m),2.85-2.75(1H,m),2.69-2.59(1H,m),1.99-1.81(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:59.0(s),57.6(s).
N-(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
実施例45工程7-1で得られた化合物(15.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-45%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(10.3mg)を得た。
MS(ESI)m/z:834(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.46(1H,brm),8.04(1H,s),7.82(1H,brm),7.15(1H,brm),6.43(1H,d,J=16.9Hz),6.17(1H,dd,J=9.1,4.5Hz),5.70-5.24(3H,m),4.81-4.75(1H,m),4.52-4.44(1H,m),4.43-4.26(4H,m),4.24-3.94(2H,m),3.89-3.84(2H,m),3.72-3.37(5H,m),2.75-2.65(1H,m),2.48-2.32(1H,m),1.98-1.76(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.0(s),53.0(s).
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
実施例45工程7-2で得られた化合物(15.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-45%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(10.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:834(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.54(1H,brs),8.03(1H,s),7.97(1H,brs),7.35(1H,brs),6.48(1H,d,J=15.7Hz),6.23(1H,d,J=8.5Hz),5.65-5.39(3H,m),4.57-4.47(2H,m),4.46-4.36(2H,m),4.31-4.19(2H,m),4.07-3.96(2H,m),3.95-3.78(3H,m),3.67-3.43(4H,m),2.85-2.75(1H,m),2.71-2.59(1H,m),2.00-1.84(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:59.1(s),57.5(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
2-[(2-アザニウミルエチル)アミノ]アデノシン ジクロリド
文献既知(WO2012/159072)の2-({2-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)アデノシン(28.7g)のメタノール(240mL)溶液に、塩化水素のジオキサン溶液(約4M,240mL)を加え、室温で終夜攪拌した。反応液を50mL程度まで減圧濃縮後、析出した固体をジエチルエーテルで懸濁させて濾取し、標題化合物(28.8g)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:8.32(1H,s),5.98(1H,d,J=6.0Hz),4.51(1H,t,J=5.4Hz),4.30(1H,dd,J=5.1,3.3Hz),4.14-4.11(1H,m),3.86-3.72(4H,m),3.23(2H,t,J=6.0Hz).
2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程1で得られた化合物(28.8g)のテトラヒドロフラン(330mL)-水(70mL)混合液にトリエチルアミン(37mL)と1-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}オキシ)ピロリジン-2,5-ジオン(18.4g)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、トルエンで共沸した。残留物をトルエンに懸濁させて、固体を濾取した。得られた固体をジクロロメタンとメタノールに溶解させ、減圧濃縮した。残留物にテトラヒドロフランを加え、析出した固体を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をジクロロメタンとメタノールに溶解させ、減圧濃縮した。析出した固体をジクロロメタンに懸濁させて濾取し、標題化合物(22.5g)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:7.92(1H,s),5.83(1H,d,J=6.0Hz),4.77(1H,t,J=5.4Hz),4.33(1H,dd,J=4.8,3.0Hz),4.14-4.10(3H,m),3.87(1H,dd,J=12.4,2.7Hz),3.73(1H,dd,J=12.1,3.0Hz),3.50-3.42(2H,m),3.32-3.29(2H,m),0.98-0.86(2H,m),0.03(9H,s).
N-ベンゾイル-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程2で得られた化合物(24.7g)を用いて、実施例11工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(22.1g)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:8.19(1H,s),8.05(2H,d,J=7.9Hz),7.63(1H,t,J=7.6Hz),7.54(2H,t,J=7.6Hz),5.95(1H,d,J=5.4Hz),4.75(1H,t,J=5.4Hz),4.36(1H,t,J=4.5Hz),4.11-4.07(3H,m),3.86(1H,dd,J=12.4,3.3Hz),3.75(1H,dd,J=12.1,3.6Hz),3.59-3.47(2H,m),3.36-3.33(2H,m),0.92(2H,t,J=8.2Hz),0.00(9H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程3で得られた化合物(22.1g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(29.5g)を得た。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:10.7(1H,s),8.09(1H,s),8.01-7.99(2H,m),7.64-7.60(1H,m),7.52(2H,t,J=7.6Hz),7.36-7.34(2H,m),7.26-7.17(7H,m),7.05-7.02(1H,m),6.95-6.92(1H,m),6.85-6.80(4H,m),5.88(1H,d,J=4.8Hz),5.53(1H,d,J=5.4Hz),5.20(1H,d,J=5.4Hz),4.72-4.63(1H,m),4.34-4.26(1H,m),4.05-3.99(3H,m),3.72-3.71(6H,m),3.31-3.10(6H,m),0.89(2H,t,J=8.5Hz),0.00(9H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程4で得られた化合物(29.5g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(6.85g)を得た。
1H-NMR(DMSO-d6,90℃)δ:10.3(1H,brs),8.02(1H,s),7.99(2H,d,J=7.3Hz),7.60(1H,t,J=7.3Hz),7.51(2H,t,J=7.6Hz),7.37(2H,d,J=7.3Hz),7.28-7.20(7H,m),6.85-6.82(4H,m),6.69-6.53(2H,m),5.86(1H,d,J=5.4Hz),5.07-5.04(1H,m),4.80-4.74(1H,m),4.36-4.33(1H,m),4.08-3.99(3H,m),3.74(6H,s),3.37-3.15(6H,m),0.89(2H,t,J=7.9Hz),0.86(9H,s),0.09(3H,s),0.04(3H,s),0.01(9H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程5で得られた化合物(6.22g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(6.18g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
1H-NMR(CD3Cl)δ:8.82(1H,s),8.00-7.97(2H,m),7.88(0.5H,s),7.85(0.5H,s),7.59(1H,t,J=7.0Hz),7.51(2H,t,J=7.6Hz),7.43(2H,d,J=7.3Hz),7.33-7.20(7H,m),6.81(4H,d,J=8.5Hz),6.08-6.01(1H,m),5.19-4.88(2H,m),4.51-4.42(1H,m),4.20-4.08(3H,m),3.82-3.24(11H,m),3.78(6H,s),2.52(1H,5,J=6.3Hz),2.38-2.34(1H,m),1.14-1.09(9H,m),0.90-0.85(2H,m),0.87(9H,s),0.12(1.5H,s),0.09(1.5H,s),0.03(3H,s),-0.01(9H,s).
実施例44工程8で得られた化合物(1.03g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と上記工程6で得られた化合物(999mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル [2-({6-ベンズアミド-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]カルバメート
上記工程7で得られた混合物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(370mg:不純物含有)とジアステレオマー2(201mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1307(M-H)-.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1307(M-H)-.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー1)(370mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(134mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1048(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8で得られた化合物(ジアステレオマー2)(201mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(49.1mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1048(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程9-1で得られた化合物(134mg)を用いて実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(22mg)を得た。
MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.04(1H,brs),8.01(1H,s),7.06(1H,s),6.43(1H,d,J=16.9Hz),6.00(1H,d,J=7.3Hz),5.78-5.55(1H,m),5.39(1H,dd,J=51.7,3.9Hz),5.31-5.18(1H,m),4.80(1H,d,J=3.6Hz),4.50-4.44(1H,m),4.40-4.32(4H,m),4.14-4.10(1H,m),3.52-3.40(2H,m),3.35-3.23(2H,m),3.06-2.90(2H,m),2.63-2.53(1H,m),2.40-2.20(1H,m),1.99-1.76(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.2(s),52.6(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程9-2で得られた化合物(49.1mg:不純物含有)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21mg)を得た。
MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.02(1H,brs),8.01(1H,s),7.40(1H,s),6.48(1H,d,J=16.3Hz),6.01(1H,d,J=7.9Hz),5.80-5.63(1H,m),5.45-5.28(2H,m),4.54-4.48(2H,m),4.41-4.36(2H,m),4.28-4.20(2H,m),4.08-4.03(1H,m),3.54-3.41(2H,m),3.40-2.52(6H,m),2.03-1.84(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.8(s).
(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-15-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3’-O-(1H-イミダゾール-1-カルボチオイル)イノシン
実施例22工程2で得られた化合物(2’-O-TBS体)(1.45g)のN,N-ジメチルホルムアミド(8.7mL)溶液に、室温でN,N-ジメチル-4-アミノピリジン(213mg)とジ(1H-イミダゾール-1-イル)メタンチオン(1.55g)を加え、20時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.58g)を得た。
MS(ESI)m/z:943(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.38(1H,s),8.05(1H,s),8.02-7.94(3H,m),7.93(1H,s),7.66-7.65(1H,m),7.60-7.52(1H,m),7.46-7.18(10H,m),7.08(1H,s),6.83-6.80(4H,m),6.07(1H,dd,J=5.4,3.0Hz),6.02(1H,d,J=6.0Hz),5.20(1H,dd,J=6.7,5.4Hz),4.72-4.63(2H,m),4.55-4.38(3H,m),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.57-3.56(2H,m),0.65(9H,s),-0.11(3H,s),-0.26(3H,s).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3’-デオキシイノシン
上記工程1で得られた化合物(1.69g)のベンゼン(10mL)溶液に、室温で水素化トリブチルスズ(1.42mL)と2,2’-アゾビス(イソブチロニトリル)(29.4mg)を加え、80℃で4時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.12g)を得た。
MS(ESI)m/z:817(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99-7.96(4H,m),7.60-7.55(1H,m),7.46-7.19(11H,m),6.83-6.81(4H,m),5.94(1H,d,J=1.2Hz),4.68-4.60(4H,m),4.52-4.39(2H,m),3.79(6H,s),3.42-3.34(2H,m),2.15-2.08(1H,m),1.94-1.89(1H,m),0.86(9H,s),0.06(3H,s),0.04(3H,s).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシイノシン
上記工程2で得られた化合物(1.75g)のテトラヒドロフラン(11mL)溶液に、0℃でフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,2.6mL)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.29g)を得た。
MS(ESI)m/z:703(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99-7.95(4H,m),7.60-7.55(1H,m),7.45-7.37(4H,m),7.29-7.17(7H,m),6.81-6.78(4H,m),5.88(1H,d,J=3.0Hz),4.76-4.63(4H,m),4.52-4.40(2H,m),3.78(6H,s),3.36(1H,dd,J=10.3,3.0Hz),3.29(1H,dd,J=10.3,4.8Hz),2.30-2.23(1H,m),2.18-2.12(1H,m).(観測可能なピークのみ記載)
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-3’-デオキシイノシン
上記工程3で得られた化合物(1.28g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.47g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
MS(ESI)m/z:820(M-C6H14N+OH+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99-7.94(4H,m),7.59-7.56(1H,m),7.46-7.42(4H,m),7.33-7.18(7H,m),6.81(4H,d,J=8.5Hz),6.13(0.5H,br s),6.07(0.5H,br s),4.84-4.39(6H,m),3.84-3.52(10H,m),3.42-3.34(2H,m),2.59(1H,t,J=6.3Hz),2.52(1H,t,J=6.3Hz),2.30-2.07(2H,m),1.18-1.07(12H,m).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:836mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程4で得られた化合物(735mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程5で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(67.6mg)とジアステレオマー2(91.6mg)を得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2)。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1134(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1134(M+H)+.
(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー1)(67.6mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-50%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(34.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:873(M+H)+.
(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程6で得られた化合物(ジアステレオマー2)(91.6mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-50%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(44.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:873(M+H)+.
ジナトリウム (5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-15-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7-1で得られた化合物(34.9mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:759(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.34(1H,brs),8.23(1H,s),8.02(1H,s),7.24(1H,brs),6.28(1H,d,J=3.6Hz),6.15(1H,d,J=3.0Hz),5.37-5.32(1H,m),4.99-4.93(1H,m),4.74-4.58(3H,m),4.36-4.29(2H,m),4.24-4.13(3H,m),4.00-3.91(1H,m),3.82(2H,t,J=4.8Hz),3.51-3.49(2H,m),3.00-2.90(3H,m),2.57-2.51(1H,m),2.02-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:59.7(s),56.2(s).
ジナトリウム (5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-15-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7-2で得られた化合物(44.2mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、Sep-Pak(登録商標) C18[0.1%トリエチルアミン水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(26.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:759(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.48-8.46(1H,brm),8.24(1H,s),8.03(1H,s),7.41-7.38(1H,brm),6.32(1H,d,J=4.8Hz),6.15(1H,d,J=4.2Hz),5.46-5.41(1H,m),5.21-5.17(1H,m),4.68-4.65(1H,m),4.59-4.54(2H,m),4.50-4.44(1H,m),4.35-4.32(1H,m),4.21-4.18(2H,m),4.02-3.92(2H,m),3.84-3.81(2H,m),3.52-3.50(2H,m),2.96-2.83(3H,m),2.54-2.48(1H,m),2.03-1.98(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:60.3(s),59.1(s).
(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-2’,5’-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]イノシン
市販(Amadis Chemical)の5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]イノシン(20.0g)のピリジン(50mL)-N,N-ジメチルアセトアミド(70.1mL)混合溶液に、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(12.5g)、2-ブロモエチルベンゾエート(6.60mL)、及び1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(13.1mL)を加え、室温で20時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水を加えて反応を停止した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(24.1g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1121(M+H)+.
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-2’,5’-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-(トリフルオロメタンスルホニル)イノシン
上記工程1で得られた化合物(24.1g)のジクロロメタン(120mL)溶液に、ピリジン(19.0mL)を加えた後、0℃でトリフルオロメタンスルホン酸無水物(5.96mL)をゆっくり滴下し、同温度で1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水を加えて反応を停止後、ジクロロメタンで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(19.7g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1153(M+H)+.
9-{2,5-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-キシロフラノシル}-1-(2-ヒドロキシエチル)-1,9-ジヒドロ-6H-プリン-6-オン
上記工程2で得られた化合物(19.7g)のN,N-ジメチルホルムアミド(85.4mL)溶液に、酢酸セシウム(8.20g)を加え、室温で16時間攪拌した。反応液に、メタノール(85.4mL)と炭酸カリウム(4.72g)を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に水を加えて反応を停止した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(12.2g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:917(M+H)+.
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-9-{2,5-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-キシロフラノシル}-1,9-ジヒドロ-6H-プリン-6-オン
上記工程3で得られた化合物(12.2g)のジクロロメタン(48.8mL)溶液に、ピリジン(1.61mL)と無水安息香酸(3.16g)を加え、室温で64時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水を加えて反応を停止した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(7.36g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1021(M+H)+.
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-2’,5’-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-3’-フルオロイノシン
上記工程4で得られた化合物(7.36g)のジクロロメタン(37.0mL)溶液に、2,6-ルチジン(3.34mL)を加えた後、-78℃で三フッ化N,N-ジエチルアミノ硫黄(1.42g)を加え、窒素雰囲気下、徐々に室温まで昇温した後、終夜攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液をゆっくり加えて反応を停止した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(6.89g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1023(M+H)+.
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-3’-フルオロイノシン
上記工程5で得られた化合物(6.89g)のジクロロメタン(25.0mL)溶液に、水(0.303mL)とジクロロ酢酸(1.39mL)を加え、室温で63時間攪拌した。反応液にピリジン(2.0mL)を加え、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]及びDIOLシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で粗精製した。得られた化合物のピリジン(25.0mL)溶液に、0℃で4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(1.83g)を加え、4℃で21時間攪拌した。反応液にメタノール(1.0mL)を加え、4℃で1時間攪拌した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.33g)を得た。
MS(ESI)m/z:721(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99(1H,s),7.95(1H,d,J=1.2Hz),7.93(1H,s),7.93(1H,d,J=1.5Hz),7.58-7.51(1H,m),7.43-7.37(2H,m),7.35-7.30(2H,m),7.26-7.13(7H,m),6.82-6.75(4H,m),5.98(1H,d,J=7.3Hz),5.13(1H,dd,J=54.7,4.1Hz),5.05-4.92(1H,m),4.63(2H,t,J=5.1Hz),4.56-4.25(4H,m),3.76(3H,s),3.76(3H,s),3.45(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.34(1H,dd,J=10.9,3.6Hz).
1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-3’-デオキシ-3’-フルオロイノシン
上記工程6で得られた化合物(1.33g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.49g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
MS(ESI)m/z:921(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99(0.5H,s),7.98-7.93(3H,m),7.88(0.5H,s),7.58-7.52(1H,m),7.45-7.37(4H,m),7.33-7.18(7H,m),6.85-6.77(4H,m),6.14(0.5H,d,J=7.3Hz),6.10(0.5H,d,J=7.9Hz),5.27-5.01(2H,m),4.70-4.61(2H,m),4.57-4.30(3H,m),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.62-3.33(6H,m),2.56(1H,t,J=6.3Hz),2.32(1H,t,J=6.3Hz),1.12(6H,d,J=6.3Hz),1.04(3H,d,J=6.3Hz),0.76(3H,d,J=6.3Hz).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:948mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程7で得られた化合物(850mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-16-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程8で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(709mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1152(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-16-フルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程9で得られた化合物(709mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(108mg:不純物含有)とジアステレオマー2(102mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:891(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:891(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程10で得られた化合物(ジアステレオマー1)(108mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:3%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(40.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:777(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.66(1H,m),8.26(1H,s),8.02(1H,s),7.09(1H,s),6.29-6.24(2H,m),5.68-5.45(2H,m),5.26-5.18(1H,m),4.78-4.73(1H,m),4.62-4.42(3H,m),4.26-3.98(5H,m),3.85-3.78(2H,m),3.53-3.47(2H,m),2.91-2.84(2H,m),2.04-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.0(s),56.9(s).
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程10で得られた化合物(ジアステレオマー2)(102mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:3%-25%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(26.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:777(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,m),8.25(1H,s),8.02(1H,s),7.10(1H,brs),6.33(1H,d,J=6.7Hz),6.28(1H,d,J=9.1Hz),5.65-5.50(1H,m),5.49-5.43(1H,m),5.31(1H,dd,J=54.4,3.6Hz),4.79(1H,dd,J=6.3,4.5Hz),4.62-4.34(4H,m),4.27-4.14(2H,m),4.08-4.01(1H,m),3.93-3.87(1H,m),3.86-3.80(2H,m),3.53-3.47(2H,m),2.95-2.89(2H,m),2.06-1.97(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:63.1(s),59.7(s).
(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
3’-デオキシ-3’-フルオロイノシン
市販(Angene)の3’-デオキシ-3’-フルオロアデノシン(2.38g)の酢酸(120mL)溶液に、亜硝酸ナトリウム(6.10g)の水溶液(48mL)を少しずつ加え、室温で43時間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮し、トルエンで2回共沸した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(3.76g)を得た。
MS(ESI)m/z:271(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.30(1H,s),8.05(1H,s),6.03(1H,d,J=7.8Hz),5.08(1H,dd,J=54.4,4.1Hz),4.89-4.85(1H,m),4.38(1H,dt,J=26.8,3.2Hz),3.82-3.73(2H,m).
3’-デオキシ-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]-3’-フルオロイノシン
上記工程1で得られた化合物(3.76g)のN,N-ジメチルアセトアミド(37.6mL)溶液に、2-(2-ブロモエチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン(6.60mL)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(3.12mL)を加え、室温で3日間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物(3.51g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:444(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.87(1H,s),7.84(1H,s),7.81(2H,dd,J=5.4,3.0Hz),7.73(2H,dd,J=5.4,3.0Hz),5.83(1H,d,J=7.9Hz),5.28(1H,dd,J=11.5,2.4Hz),5.18(1H,dd,J=55.0,4.2Hz),5.01-4.87(1H,m),4.49(1H,d,J=28.4Hz),4.43-4.28(2H,m),4.19-4.08(2H,m),3.95(1H,d,J=8.2Hz),3.91-3.84(1H,m),3.76(1H,d,J=13.3Hz).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]-3’-フルオロイノシン
上記工程2で得られた化合物(3.51g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(4.05g)を得た。
MS(ESI)m/z:746(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.95(1H,s),7.79(2H,dd,J=5.4,3.0Hz),7.73(1H,s),7.70(2H,dd,J=5.4,3.0Hz),7.34-7.29(2H,m),7.25-7.18(7H,m),6.81-6.76(4H,m),5.92(1H,d,J=7.3Hz),5.12(1H,dd,J=54.4,4.2Hz),4.97-4.85(1H,m),4.55-4.40(2H,m),4.30-4.22(1H,m),4.21-4.01(2H,m),3.77(6H,s),3.73(1H,d,J=10.3Hz),3.43(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.32(1H,dd,J=10.9,3.6Hz).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-3’-デオキシ-1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]-3’-フルオロイノシン
上記工程3で得られた化合物(4.05g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(4.35g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
MS(ESI)m/z:946(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.95(0.5H,s),7.94(0.5H,s),7.84-7.78(2H,m),7.73-7.68(2H,m),7.65(1H,s),7.43-7.41(2H,m),7.32-7.15(7H,m),6.84-6.77(4H,m),6.09(0.5H,d,J=7.9Hz),6.05(0.5H,d,J=7.9Hz),5.31-5.16(1H,m),5.15-4.98(1H,m),4.51-4.21(3H,m),4.20-4.05(2H,m),3.793(1.5H,s),3.789(3H,s),3.784(1.5H,s),3.66-3.55(2H,m),3.50-3.30(4H,m),2.56(1H,t,J=6.3Hz),2.41(1H,t,J=6.3Hz),1.16(3H,d,J=7.3Hz),1.14(3H,d,J=7.3Hz),1.10(3H,d,J=7.3Hz),0.83(3H,d,J=7.3Hz).
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:1.47g)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程4で得られた化合物(1.35g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
3-{[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-{1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-16-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-イル]オキシ}プロパンニトリル
上記工程5で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.25g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1177(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-16-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程6で得られた化合物(1.25g)のエタノール(7.5mL)-テトラヒドロフラン(7.5mL)混合溶液に、ヒドラジン一水和物(0.599mL)を加え、50℃で6時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(145mg:不純物含有)とジアステレオマー2(198mg:不純物含有)を得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2)。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:890(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:890(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー1)(145mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):5%-50%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(70.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:776(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.64(1H,s),8.23(1H,s),8.02(1H,s),7.07(1H,s),6.27(1H,d,J=4.5Hz),6.25(1H,d,J=6.7Hz),5.67-5.43(2H,m),5.23-5.16(1H,m),4.76(1H,t,J=5.1Hz),4.63-4.45(3H,m),4.31-4.03(5H,m),3.51-3.46(2H,m),3.31-3.26(2H,m),2.90-2.83(2H,m),2.03-1.94(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),56.9(s).
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(198mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):5%-50%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(69.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:776(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,s),8.27(1H,s),8.02(1H,s),7.09(1H,s),6.31(1H,d,J=6.7Hz),6.26(1H,d,J=8.5Hz),5.62-5.47(1H,m),5.47-5.41(1H,m),5.30(1H,dd,J=53.8,3.6Hz),4.78(1H,dd,J=6.7,4.2Hz),4.58(1H,d,J=26.0Hz),4.51-4.41(2H,m),4.40-4.23(3H,m),4.11-4.05(1H,m),3.93-3.86(1H,m),3.53-3.46(2H,m),3.36-3.28(2H,m),2.90(2H,t,J=5.7Hz),2.05-1.96(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.8(s),59.4(s).
N-(2-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
実施例50工程8-1で得られた化合物(25.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(18.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:834(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.60(1H,m),8.12(1H,m),8.02(1H,s),7.11(1H,brs),6.27(1H,d,J=4.9Hz),6.23(1H,d,J=9.1Hz),5.75-5.58(1H,m),5.54(1H,dd,J=53.5,3.0Hz),5.28-5.20(1H,m),4.75(1H,t,J=5.2Hz),4.62-4.52(1H,m),4.52-4.42(2H,m),4.29-4.01(5H,m),3.92(2H,s),3.64-3.58(2H,m),3.53-3.47(2H,m),2.93-2.76(2H,m),2.06-1.93(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),56.7(s).
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
実施例50工程8-2で得られた化合物(ジアステレオマー2)(15.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(7.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:834(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.69(1H,m),8.16(1H,s),8.02(1H,s),7.11(1H,s),6.32(1H,d,J=6.7Hz),6.26(1H,d,J=8.6Hz),5.67-5.51(1H,m),5.48-5.43(1H,m),5.29(1H,dd,J=54.0,3.7Hz),4.77(1H,dd,J=6.4,4.6Hz),4.62-4.33(2H,m),4.25-4.17(2H,m),4.08-4.01(1H,m),3.94(2H,s),3.93-3.85(1H,m),3.70-3.56(2H,m),3.52-3.46(2H,m),2.93-2.86(2H,m),2.04-1.97(4H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.8(s),59.5(s).
(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
2’,5’-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-ヨードアデノシン
市販(Amadis Chemical)の2-ヨードアデノシン(1.35g)をピリジンで3回共沸した。残留物の脱水ピリジン(17.0mL)溶液に、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(2.35g)を加え、窒素雰囲気、室温で終夜攪拌した。反応液にメタノール(5.00mL)を加えて反応を停止した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.96g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:998(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.88(1H,s),7.29-7.12(18H,m),6.73-6.60(8H,m),6.31(1H,d,J=7.9Hz),5.69(2H,brs),5.13(1H,dd,J=7.6,4.5Hz),4.07(1H,t,J=3.3Hz),3.77(6H,s),3.76(3H,s),3.74(3H,s),3.14(2H,d,J=3.6Hz),2.87(1H,d,J=4.2Hz),2.28(1H,s).
2’,5’-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-ヨード-3’-O-(トリフルオロメタンスルホニル)アデノシン
上記工程1で得られた化合物(100mg)をトルエンで3回共沸した。残留物の脱水ジクロロメタン(1.0mL)溶液に、窒素雰囲気下、0℃でピリジン(0.20mL)とトリフルオロメタンスルホン酸無水物(27.0μL)を加え、同温度で80分間攪拌した。トリフルオロメタンスルホン酸無水物(27.0μL)を追加し、更に80分間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(57.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1130(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.73(1H,s),7.32-7.09(18H,m),6.79-6.70(6H,m),6.60-6.56(2H,m),6.19(1H,dd,J=8.2,3.9Hz),6.01(1H,d,J=7.9Hz),5.59(2H,brs),4.05(1H,d,J=3.6Hz),3.98(1H,t,J=6.7Hz),3.78(3H,s),3.77(3H,s),3.71(3H,s),3.70(3H,s),3.39(1H,dd,J=10.9,6.0Hz),3.17(1H,dd,J=10.6,7.0Hz).
9-{2,5-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-β-D-キシロフラノシル}-2-ヨード-9H-プリン-6-アミン
上記工程2で得られた化合物(2.76g)のN,N-ジメチルホルミアミド(24.4mL)溶液に酢酸セシウム(1.20g)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液にメタノール(24.4mL)と炭酸カリウム(675mg)を加え、更に2時間攪拌した。反応液に水を加えて固体を析出させた後、減圧下でメタノール成分を留去した。得られた固体濾取して標題化合物(2.38g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.02(1H,s),7.42-7.13(18H,m),6.79-6.72(8H,m),5.68(2H,brs),5.55(1H,d,J=1.2Hz),5.49(1H,d,J=9.1Hz),4.48(1H,s),4.41-4.37(1H,m),4.06(1H,dd,J=9.1,3.6Hz),3.77(9H,s),3.76(3H,s),3.56-3.48(2H,m).
2’,5’-ビス-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-3’-フルオロ-2-ヨードアデノシン
上記工程3で得られた化合物(2.54g)のジクロロメタン(17.0mL)溶液に、ピリジン(1.13mL)を加えた後、氷冷下で三フッ化N,N-ジエチルアミノ硫黄(0.397mL)を加え、窒素雰囲気下、室温で40分間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(2.02g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1000(M+H)+.
3’-デオキシ-3’-フルオロ-2-ヨードアデノシン
上記工程4で得られた混合物(2.02g)のジクロロメタン溶液(20.2mL)に、氷冷下、水(0.364mL)とジクロロ酢酸(0.996mL)を加え、室温で15分間攪拌した。反応液にピリジン(1.95mL)を加えて反応を停止後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.34g:不純物含有)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:5.94(1H,d,J=7.9Hz),5.09(1H,dd,J=54.7,4.3Hz),4.95-4.89(1H,m),4.40(1H,d,J=27.3Hz),3.87-3.76(2H,m).(観測可能なピークのみ記載)
2-[(2-アミノエチル)アミノ]-3’-デオキシ-3’-フルオロアデノシン
上記工程5で得られた化合物(1.34g)にエチレンジアミン(1.35mL)を加え、110℃で1時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物(543mg:不純物含有)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:7.94(1H,s),5.88(1,d,J=7.9Hz),5.09(1H,dd,J=54.7,4.5Hz),4.95(1H,dq,J=25.1,4.2Hz),4.38(1H,dt,J=27.6,2.7Hz),3.84-3.76(2H,m),3.56-3.53(2H,m),3.01(2H,t,J=5.7Hz).
3’-デオキシ-3’-フルオロ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程6で得た化合物(543mg)のテトラヒドロフラン溶液(10mL)に、1-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}オキシ)ピロリジン-2,5-ジオン(961mg)、N,N-ジメチルホルムアミド(5.0mL)、及びメタノール(5.0mL)を加え、室温で1.5時間攪拌した。1-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}オキシ)ピロリジン-2,5-ジオン(800mg)を追加し、更に40分間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(483mg)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:7.87(1H,s),5.83(1H,d,J=7.9Hz),5.15-4.96(2H,m),4.35(1H,dt,J=27.4,2.7Hz),4.11-4.04(2H,m),3.84-3.73(2H,m),3.48-3.38(2H,m),2.96-2.83(2H,m),0.95-0.83(2H,m),0.00(9H,s).
N-ベンゾイル-3’-デオキシ-3’-フルオロ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程7で得た化合物(483mg)を用いて、実施例11工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(374mg)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:9.16-9.03(1H,m),8.01(2H,d,J=7.3Hz),7.63-7.33(4H,m),5.85-5.60(2H,m),5.21-4.91(2H,m),4.45(1H,d,J=27.8Hz),4.19-4.06(2H,m),3.92(1H,d,J=12.7Hz),3.77-3.34(6H,m),1.05-0.87(2H,m),-0.02(9H,s).(観測可能なピークのみ記載)
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-3’-フルオロ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程8で得られた化合物(374mg)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(398mg)を得た。
MS(ESI)m/z:878(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.94(1H,brs),8.01-7.98(2H,m),7.88-7.81(1H,m),7.62-7.49(3H,m),7.40-7.20(9H,m),6.83-6.78(4H,m),6.12-5.48(2H,m),5.22-4.98(2H,m),4.52(1H,d,J=27.8Hz),4.24-4.10(2H,m),3.77(6H,s),3.65-3.29(8H,m),1.04-0.88(2H,m),0.01(9H,brs).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-3’-デオキシ-3’-フルオロ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}アデノシン
上記工程9で得られた化合物(398mg)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(434mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.79-8.75(1H,m),8.00-7.97(2H,m),7.83(0.5H,s),7.77(0.5H,s),7.61-7.21(12H,m),6.84-6.79(4H,m),6.07-5.96(1H,m),5.58-5.10(3H,m),4.50-4.40(1H,m),4.11-4.06(2H,m),3.87-3.80(1H,m),3.79(3H,s),3.78(3H,s),3.65-3.20(10H,m),2.63-2.59(1H,m),2.39(1H,t,J=6.3Hz),1.17(3H,d,J=6.7Hz),1.15(3H,d,J=6.7Hz),1.10(3H,d,J=6.7Hz),0.92-0.86(2H,m),0.81(3H,d,J=6.7Hz),-0.01(9H,s).
化合物A:
N,N-ジエチルエタンアミニウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-ベンズアミド-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-16-フルオロ-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-チオラート
化合物B:
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-ベンズアミド-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-16-フルオロ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例1工程7と同じ反応を以下のスケールで実施した(原料:502mg)。得られた化合物のアセトニトリル溶液と上記工程10で得られた化合物(434mg)を用いて、実施例1工程8及び実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物Aのジアステレオマー1(43.9mg)及びジアステレオマー2(27.0mg)、並びに標題化合物Bのジアステレオマー1(55.0mg)及びジアステレオマー2(121mg)を得た(それぞれ不純物含有)。
化合物Aのジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1309(M+H)+.
化合物Aのジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1309(M+H)+.
化合物Bのジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1256(M+H)+.
化合物Bのジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1256(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-16-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程11で得られた化合物A(ジアステレオマー1)(43.9mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物を得た。
MS(ESI)m/z:1048(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-16-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程11で得られた化合物B(ジアステレオマー1)(55.0mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物を得た。
MS(ESI)m/z:1048(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-16-フルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程11で得られた化合物A(ジアステレオマー2)(27.0mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物を得た。
MS(ESI)m/z:1048(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程12-1及び12’-1で得られた化合物を併せて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行い、標題化合物(36.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:934(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程12-2で得られた化合物を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行い、標題化合物(12.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:934(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程13-1で得られた化合物(36.4mg)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-40分)]及びSep-Pak(登録商標) C18[水/アセトニトリル/0.1%トリエチルアミン].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.26(1H,brs),8.01(1H,s),7.04(1H,s),6.27(1H,d,J=4.8Hz),6.13(1H,d,J=7.9Hz),5.69-5.50(1H,m),5.57(1H,dd,J=53.5,2.7Hz),5.14-5.10(1H,m),4.73(1H,t,J=4.8Hz),4.62-4.53(1H,m),4.50-4.44(2H,m),4.24-4.01(3H,m),3.67-3.58(1H,m),3.50-3.44(3H,m),3.20-3.04(2H,m),2.83-2.81(2H,m),2.04-1.94(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.4(s),56.5(s).
ビス(N,N,N-トリブチルブタン-1-アミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程13-2で得られた化合物(29.5mg)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物(24.2mg:不純物含有)を得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)]、Sep-Pak(登録商標) C18[水/アセトニトリル/0.1%トリエチルアミン]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-25%(0分-30分)].
1H-NMR(CD3OD)δ:8.27(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.32(1H,d,J=6.0Hz),6.15(1H,d,J=7.9Hz),5.63-5.51(1H,m),5.39-5.35(1H,m),5.30(1H,dd,J=54.4,3.6Hz),4.77(1H,t,J=5.1Hz),4.60-4.34(4H,m),4.19-4.13(1H,m),3.92-3.88(1H,m),3.70-3.62(1H,m),3.51-3.45(3H,m),3.26-3.07(18H,m),2.98-2.87(2H,m),2.03-1.99(2H,m),1.70-1.62(16H,m),1.47-1.37(16H,m),1.03(24H,t,J=7.3Hz).
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-16-フルオロ-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程14-2で得られた化合物(19.0mg:不純物含有)を、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-25%(0分-30分)]で精製した。
得られた化合物を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(8.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.27(1H,s),8.01(1H,s),7.12(1H,s),6.31(1H,d,J=6.0Hz),6.15(1H,d,J=8.5Hz),5.65-5.49(1H,m),5.38-5.34(1H,m),5.30(1H,dd,J=55.0,3.0Hz),4.77(1H,dd,J=5.7,4.5Hz),4.60-4.34(4H,m),4.19-4.13(1H,m),3.92-3.88(1H,m),3.68-3.61(1H,m),3.51-3.45(3H,m),3.22-3.07(2H,m),2.89-2.87(2H,m),2.03-1.98(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.6(s),59.5(s).
(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-アミノ-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
2’-O-アセチル-3’-アジド-5’-O-ベンゾイル-3’-デオキシ-N-(2-メチルプロパノイル)グアノシン
文献既知(Recl.Trav.Chim.Pay-Bas 1986,105,85-91)の1,2-ジ-O-アセチル-3-アジド-5-O-ベンゾイル-3-デオキシ-D-リボフラノース(4.0g)のアセトニトリル(60mL)溶液に、N2-イソブチリルグアニン(3.65g)とN,O-ビス(トリメチルシリル)アセトアミド(8.08mL)を室温で加え、70℃で3時間攪拌した。トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート(2.98mL)を70℃で加え、同温度で1日間攪拌した。反応液を冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(4.82g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:12.2(1H,s),9.42(1H,s),8.02(2H,m),7.71(1H,s),7.63(1H,m),7,48(2H,m),5.97(1H,d,J=3.9Hz),5.87(1H,dd,J=5.5,3.9Hz),5.10(1H,dd,J=11.7,5.5Hz),4.93(1H,t,J=5.9Hz),4.66(1H,dd,J=11.7,5.5Hz),4.14(1H,q,J=7.2Hz),2.77(1H,m),2.21(3H,s),1.31(6H,m).
3’-アジド-3’-デオキシ-N-(2-メチルプロパノイル)グアノシン
上記工程1で得られた化合物(5.48g)のテトラヒドロフラン(64mL)-メタノール(32mL)混合溶液に、5M水酸化ナトリウム(17mL)を0℃で加え、15分間攪拌した。反応液に酢酸(5.08mL)を加えて反応を停止し、反応液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(3.8g)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:8.29(1H,s),5.97(1H,d,J=5.7Hz),4.86(1H,t,J=5.3Hz),4.29(1H,t,J=5.3Hz),4.10(1H,dt,J=5.9,2.4Hz),3.87(1H,dd,J=12.1,3.1Hz),3.76(1H,dd,J=12.3,3.3Hz),2.74(1H,m),1.24(6H,d,J=6.7Hz).
3’-アジド-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-N-(2-メチルプロパノイル)グアノシン
上記工程2で得られた化合物(3.8g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(5.78g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:11.9(1H,s),7.68(2H,d,J=7.4Hz),7.60(1H,s),7.57(2H,d,J-8.6Hz),7.51(2H,d,J=8.6Hz),7.39-7.18(3H,m),7.02(1H,d,J=4.7Hz),6.95(2H,d,J=9.0Hz),6.89(2H,d,J=9.0Hz),5.84(1H,m),5.63(1H,d,J=7.8Hz),4.58(1H,dd,J=6.7,2.3Hz),3.99(1H,m),3.83(3H,s),3.81(3H,s),3.63(1H,dd,J=11.0,1.6Hz),2.92(1H,dd,J=10.8,2.5Hz),0.91(1H,m),69(3H,d,J=6.7Hz),0.21(3H,d,J=7.0Hz).
3’-アミノ-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-N-(2-メチルプロパノイル)グアノシン
上記工程3で得られた化合物(5.17g)のメタノール(60mL)溶液に、トリフェニルホスフィン(3.98g)を加え、室温で4時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.22g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.77(2H,d,J=6.7Hz),7.49-7.17(8H,m),6.86-6.77(4H,m),5.93(1H,d,J=2.7Hz),5.85(1H,d,J=3.5Hz),5.02(1H,dd,J=6.7,2.7Hz),4.74(1H,m),4.32(1H,m),4.06(1H,m),3.79(3H,s),3.78(3H,s),3.72(1H,t,J=5.9Hz),3.49(1H,dd,J=10.4,3.3Hz),3.33(1H,dd,J=10.4,3.7Hz),2.26(1H,m),1.21-0.95(6H,m).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-デオキシ-N-(2-メチルプロパノイル)-3’-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)グアノシン
上記工程4で得られた化合物(2.22g)のN,N-ジメチルホルムアミド(20mL)溶液に、トリフルオロ酢酸エチル(4.0mL)を加え、50℃で2日間攪拌した。反応液を冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(2.06g)を得た。
MS(ESI)m/z:751(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:12.0(1H,brs),7.81(1H,brs),7.65(1H,s),7.59(2H,d,J=7.4Hz),7.47(2H,d,J=9.0Hz),7.43(2H,d,J=8.6Hz),7.27-7.18(3H,m),6.87(2H,d,J=9.0Hz),6.82(2H,d,J=9.0Hz),5.72(1H,d,J=6.3Hz),5.67(1H,m),5.02(1H,m),4.33(1H,m),3.80(3H,s),3.78(3H,s),3.60(1H,dd,J=10.6,1.6Hz),3.29(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),1.36(1H,m),0.82(3H,d,J=7.0Hz),0.44(3H,d,J=6.7Hz).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-3’-デオキシ-N-(2-メチルプロパノイル)-3’-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)グアノシン
上記工程5で得られた化合物(1.0g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(780mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
2-メチルプロパン-2-アミニウム 6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-[オキシド(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
実施例1工程6で得られた化合物(5.0g)のアセトニトリル(30mL)溶液に、水(0.18mL)とトリフルオロ酢酸ピリジン塩(1.2g)を加え、室温で30分間攪拌した。反応液にtert-ブチルアミン(30mL)を加え、室温で30分間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をアセトニトリルで2回共沸した。残留物のジクロロメタン(50mL)溶液に水(0.88mL)とジクロロ酢酸(3.2mL)のジクロロメタン(50mL)溶液を順に加え、室温で1時間攪拌した。メタノール(5mL)とピリジン(6.3mL)を加えて反応を停止した後、反応液を減圧濃縮した。残留物をDIOLシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル→ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(3.0g)を得た。
MS(ESI)m/z:589(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.01(1H,s),7.65(1H,s),7.44(1H,m),7.34-7.26(4H,m),7.02(1H,d,J=639.3Hz),6.24(1H,s),4.89(1H,m),4.81(1H,ddd,J=10.6,5.1,1.6Hz),4.43-4.27(3H,m),3.90(2H,m),3.14(2H,m),2.30(2H,m),1.42(9H,s),0.80(9H,s),-0.27(6H,s).
ジヌクレオチドA
上記工程7で得られた化合物(543mg)のジクロロメタン(6.0mL)-アセトニトリル(6.0mL)混合溶液に、モレキュラーシーブス3A,1/16(500mg)と4,5-ジシアノイミダソール(126mg)を加え、室温で15分間攪拌した。反応液に上記工程6で得られた化合物(780mg)を加え、5時間攪拌後、N,N-ジメチル-N’-(3-スルファニリデン-3H-1,2,4-ジチアゾール-5-イル)メタンイミドアミド(219mg)を加え、更に2時間攪拌した。反応液からモレキュラーシーブス3Aを濾去し、濾液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製した。得られた化合物(740mg)のジクロロメタン(6.0mL)溶液に、水(0.086mL)とジクロロ酢酸(0.158mL)のジクロロメタン(6.0mL)溶液を順に加え、室温で1.5時間攪拌した。ピリジン(0.31mL)を加えて反応を停止後、反応液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(520mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1168(M+H)+.
N-{9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデン-16-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-2-イル}-2-メチルプロパンアミド
上記工程8で得られた化合物(270mg)を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(110mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1182(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-アミノ-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程9で得られた化合物(110mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(34.2mg)とジアステレオマー2(19.3mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:859(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:859(M+H)+.
ジナトリウム (5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-アミノ-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程10で得られた化合物(ジアステレオマー1)(34.2mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(8.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.01(1H,s),7.93(1H,s),7.01(1H,s),6.20(1H,d,J=3.9Hz),6.01(1H,d,J=8.6Hz),5.65(1H,m),5.19(1H,dt,J=9.5,4.0Hz),4.68(1H,t,J=4.3Hz),4.40-4.28(2H,m),4.23(1H,m),4.17(1H,m),4.11-4.01(3H,m),3.41(2H,m),2.75-2.53(2H,m),1.98-1.78(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.0(s),54.3(s).
ジナトリウム (5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-アミノ-7-(2-アミノ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-15-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程10で得られた化合物(ジアステレオマー2)(19.3mg)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(5.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:10.7(1H,s),8.40(2H,brs),8.09(1H,s),8.03(1H,s),7.74(1H,brs),7.22(1H,s),6.95(1H,brs),6.53(2H,brs),61.6(2H,t,J=8.2Hz),5.57(1H,q,J=8.0Hz),5.25(1H,dd,J=7.8,4.3Hz),4.61(1H,dd,J=7.6,4.5Hz),4.38(1H,s),4.27-4.11(3H,m),3.85-3.71(3H,m),3.35(2H,m),2.80(2H,m),1.93(2H,m).
31P-NMR(DMSO-d6)δ:60.3(s),58.3(s).
(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ジフルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例44工程8で得られた化合物(636mg)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例49工程7で得られた化合物(640mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-10-(2-シアノエトキシ)-15,16-ジフルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(228mg:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1040(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ジフルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程2で得られた化合物(228mg)をメタノール(5mL)と28%アンモニア水溶液(5mL)に溶解し、60℃で12時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-30%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):7%-50%(0分-40分)]で順に精製し、標題化合物のジアステレオマー1とジアステレオマー2をそれぞれトリエチルアミン塩として得た(HPLCの保持時間:ジアステレオマー1>2)。
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物のジアステレオマー1(12.5mg)とジアステレオマー2(15.8mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:779(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.63(1H,s),8.16(1H,s),8.03(1H,s),7.08(1H,s),6.47(1H,dd,J=17.5,1.8Hz),6.27(1H,d,J=7.9Hz),5.64-5.36(3H,m),5.31-5.20(1H,m),4.62-4.50(2H,m),4.44-4.39(1H,m),4.32-4.12(3H,m),4.10-4.03(1H,m),3.99-3.91(1H,m),3.83-3.72(2H,m),3.52-3.46(2H,m),2.78-2.72(2H,m),2.04-1.85(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.5(s),55.0(s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:779(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.69(1H,s),8.21(1H,s),8.03(1H,s),7.25(1H,s),6.49(1H,dd,J=15.1,3.0Hz),6.28(1H,d,J=9.1Hz),5.64-5.28(4H,m),4.61-4.39(4H,m),4.26-4.17(1H,m),4.13-3.95(3H,m),3.84-3.77(2H,m),3.53-3.45(2H,m),2.92-2.77(2H,m),2.02-1.92(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:60.7(s),57.4(s).
(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジフルオロ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例44工程8で得られた化合物(696mg)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例52工程10で得られた化合物(738mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル [2-({6-ベンズアミド-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-10-(2-シアノエトキシ)-15,16-ジフルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]カルバメート
上記工程1で得られた混合物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物を含む混合物(1.31g)を得た。得られた混合物はそのまま次の反応に用いた。
MS(ESI)m/z:1195(M-H)-.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジフルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程2で得られた混合物(1.31g)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(249mg:不純物含有)とジアステレオマー2(344mg:不純物含有)をそれぞれ得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:936(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:936(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジフルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー1)(249mg:不純物含有)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-40%(0分-30分)]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:0%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(9.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:792(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.17(1H,brs),8.01(1H,s),7.01(1H,s),6.45(1H,d,J=17.5Hz),6.07(1H,d,J=8.5Hz),5.84-5.64(1H,m),5.61(1H,dd,J=53.5,3.3Hz),5.40(1H,dd,J=52.0,4.2Hz),5.30-5.18(1H,m),4.59-4.17(6H,m),3.54-3.42(2H,m),3.39-3.31(2H,m),3.05-2.98(2H,m),2.69-2.51(2H,m),2.02-1.83(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.3(s),54.8(s).
ジナトリウム (5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-15,16-ジフルオロ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー2)(344mg:不純物含む)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-40%(0分-30分)]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(4.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:792(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.05(1H,brs),8.01(1H,s),7.35(1H,s),6.50(1H,d,J=16.3Hz),6.06(1H,d,J=8.5Hz),5.98-5.75(1H,m),5.48-5.28(3H,m),4.59-4.28(3H,m),4.29-4.22(1H,m),4.04-3.98(1H,m),3.56-3.42(2H,m),3.36-2.61(6H,m),2.05-1.86(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.4(brs),57.6(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)デカヒドロ-2H,10H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-シクロペンタ[l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)-5-(ヒドロキシメチル)シクロペンタン-1,2-ジオール
文献既知(WO2015/199136)の7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-({[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}メチル)-2,2-ジメチルテトラヒドロ-2H,3aH-シクロペンタ[d][1,3]ジオキソール-4-イル]-4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン(6.0g)に、トリフルオロ酢酸(36mL)と水(12mL)を順に加え、室温で3時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、標題化合物の粗体を得た。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-アミノ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)-5-(ヒドロキシメチル)シクロペンタン-1,2-ジオール
上記工程1で得られた化合物(4.4g)の1,4-ジオキサン(40mL)溶液に、28%アンモニア水(40mL)を加え、90℃で72時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[水/メタノール]で精製し、標題化合物(3.4g)を得た。
1H-NMR(CD3OD)δ:8.07(1H,s),7.56(1H,s),6.57(1H,brs),4.89(1H,dd,J=19.2,8.6Hz),4.79(1H,d, 6.7Hz),4.70(1H,t,J=5.3Hz),4.59(1H,d,J=4.3Hz),4.15(1H,m),3.78(1H,m),3.45(2H,m),2.14(1H,m),2.03(1H,m),1.48(1H,m).
7-[(4aR,6R,7S,7aR)-2,2-ジ-tert-ブチル-7-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}ヘキサヒドロ-2H-シクロペンタ[d][1,3,2]ジオキサシリン-6-イル]-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程2で得られた化合物(3.3g)を用いて、実施例1工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(4.6g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.27(1H,s),7.00(1H,s),5.69(1H,brs),4.92(1H,dt,J=9.0,1.2Hz),4.32(3H,m),3.98(1H,t,J=10.8Hz),2.58(1H,m),2.26(1H,m),1.74(1H,brs),1.49(1H,dt,J=12.5,8.6Hz),1.13(9H,s),1.09(9H,s),0.86(9H,s),0.06(3H,s),0.00(3H,s).
7-[(4aR,6R,7S,7aR)-2,2-ジ-tert-ブチル-7-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}ヘキサヒドロ-2H-シクロペンタ[d][1,3,2]ジオキサシリン-6-イル]-5-(3,3-ジエトキシプロパ-1-イン-1-イル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン
上記工程3で得られた化合物(4.6g)を用いて、実施例1工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(3.6g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.30(1H,s),7.15(1H,s),5.61(1H,brs),5.55(1H,s),4.90(1H,dt,J=9.0,1.2Hz),4.32(3H,m),3.97(1H,t,J=10.8Hz),3.86(2H,m),3.71(2H,m),2.58(1H,m),2.28(1H,m),1.68(1H,s),1.48(1H,m),1.32(6H,t,J=7.0Hz),1.13(9H,s),1.09(9H,s),0.86(9H,s),0.05(3H,s),0.04(3H,s).
2-[(4aR,6R,7S,7aR)-2,2-ジ-tert-ブチル-7-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}ヘキサヒドロ-2H-シクロペンタ[d][1,3,2]ジオキサシリン-6-イル]-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程4で得られた化合物(3.60g)を用いて、実施例1工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.44g)を得た。
MS(ESI)m/z:589(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.18(1H,s),6.66(1H,s),6.55(1H,brs),4.94(1H,m),4.36-4.25(3H,m),3.97(1H,t,J=10.8Hz),3.57(2H,m),2.93(2H,t,J=5.5Hz),2.58(1H,m),2.27(1H,m),2.09(1H,m),1.46(1H,dt,J=12.5,8.6Hz),1.29(1H,m),1.12(9H,s),1.08(9H,s),0.86(9H,s),0.04(3H,s),0.03(3H,s).
{2-[(4aR,6R,7S,7aR)-2,2-ジ-tert-ブチル-7-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}ヘキサヒドロ-2H-シクロペンタ[d][1,3,2]ジオキサシリン-6-イル]-2,7,8,9-テトラヒドロ-6H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-6-イル}(フェニル)メタノン
上記工程5で得られた化合物(2.44g)を用いて、実施例1工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.01g)を得た。
MS(ESI)m/z:663(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.12(1H,s),7.42-7.25(5H,m),6.97(1H,s),5.04(1H,t,J=9.0Hz),4.44(1H,m),4.38(1H,dd,J=10.0,4.9Hz),4.33-4.23(3H,m),4.00(1H,t,J=10.8Hz),3.06(2H,m),2.60(1H,m),2.29(3H,m),1.57(1H,m),1.14(9H,s),1.10(9H,s),0.84(9H,s),0.06(3H,s),0.05(3H,s).
{2-[(1R,2S,3R,4R)-4-{[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ]メチル}-2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-3-ヒドロキシシクロペンチル]-2,7,8,9-テトラヒドロ-6H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-6-イル}(フェニル)メタノン
上記工程6で得られた化合物(2.01g)を用いて、実施例1工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.13g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.03(1H,s),7.49(2H,m),7.38-7.19(13H,m),7.02(1H,s),6.83(4H,m),5.07(1H,m),4.60(1H,dd,J=8.6,5.1Hz),4.29(2H,m),3.99(1H,m),3.79(6H,s),3.33(1H,dd,J=9.4,3.9Hz),3.22(1H,dd,J=9.2,4.1Hz),2.97(2H,t,J=6.5Hz),2.68(1H,d,J=1.6Hz),2.37-2.18(5H,m),0.73 (9H,s),-0.18(3H,s),-0.47(3H,s).
(1R,2S,3R,5R)-3-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-5-{[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ]メチル}-2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}シクロペンチル 4-オキソペンタノエート
レブリン酸(2.96g)のテトロヒドロフラン(20mL)溶液に、N,N-ジシクロヘキシルカルボジイミド(2.63g)を加え、室温で12時間攪拌した。析出物を濾去した後、濾液を減圧濃縮した。残留物のジクロロメタン(20mL)溶液に、上記工程7で得られた化合物(2.10g)と4-ジメチルアミノピリジン(155mg)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止後、酢酸エチルで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.35g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.02(1H,s),7.49(2H,m),7.40-7.19(13H,m),7.04(1H,s),6.84(4H,m),5.26(1H,dd,J=5.1,2.0Hz),5.06(1H,q,J=9.0Hz),4.61(1H,dd,J=8.8,4.9Hz),4.28(2H,m),3.79(6H,s),3.39(1H,dd,J=9.2,3.7Hz),3.19(1H,dd,J=9.4,3.9Hz),3.00-1.85(14H,m),0.64(9H,s),-0.13(3H,s),-0.45(3H,s).
(1R,2S,3R,5R)-3-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-2-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-5-(ヒドロキシメチル)シクロペンチル-4-オキソペンタノエート
上記工程8で得られた化合物(2.35g)のジクロロメタン(25mL)溶液に、水(0.24mL)とジクロロ酢酸(1.05mL)のジクロロメタン(25mL)溶液を順に加え、室温で1時間攪拌した。反応液にメタノール(1.0mL)と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止した後、酢酸エチルで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.15g)を得た。
MS(ESI)m/z:621(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.05(1H,s),7.38-7.17(5H,m),7.04(1H,s),5.19(1H,dd,J=4.5,1.4Hz),4.82-4.69(2H,m),4.47(1H,dd,J=14.5,7.4Hz),4.31(1H,d,J=7.8Hz),4.15-4.08(1H,m),3.83(1H,m),3.75(1H,d,J=10.8Hz),3.11-2.95(2H,m),2.90-2.51(4H,m),2.47-2.32(2H,m),2.32-2.11(3H.m),2.22(3H,s),0.68(9H,s),-0.16(3H,s),-0.50(3H,s).
N-ベンゾイル-2’-O-[({(1R,2R,3S,4R)-4-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-3-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2-[(4-オキソペンタノイル)オキシ]シクロペンチル}メトキシ)(2-シアノエトキシ)ホスホロチオイル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]アデノシン
上記工程9で得られた化合物(550mg)のアセトニトリル(12mL)溶液に、モレキュラーシーブス3A,1/16(500mg)とN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(1.23g)を加え、室温で15分攪拌した。反応液に4,5-ジシアノイミダソールを加えて1時間攪拌後、3H-1,2-ベンゾチオール-3-オン 1,1-ジオキシド(355mg)を加え、更に1時間攪拌した。反応液からモレキュラーシーブス3Aを濾去し、濾液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.17g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1539(M+H)+.
N-ベンゾイル-2’-O-[{[(1R,2R,3S,4R)-4-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-3-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2-ヒドロキシシクロペンチル]メトキシ}(2-シアノエトキシ)ホスホロチオイル]-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]アデノシン
上記工程10で得られた化合物(1.22g)のアセトニトリル(2.0mL)溶液に、ヒドラジン一水和物(0.25mL)の酢酸(5.0mL)-ピリジン(7.5mL)混合溶液を加え、室温で30分攪拌した。反応液に水を加えて反応を停止した後、酢酸エチルで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(770mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1442(M+H)+.
N-ベンゾイル-2’-O-[{[(1R,2R,3S,4R)-4-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-3-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2-{[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]オキシ}シクロペンチル]メトキシ}(2-シアノエトキシ)ホスホロチオイル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]アデノシン
上記工程11で得られた化合物(770mg)のピリジン(8.0mL)溶液に、亜リン酸ジフェニル(0.61mL)を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に水(20mL)、アセトニトリル(8.0 mL)、及び酢酸トリエチルアンモニウム水溶液(2M,1.6mL)を加え、1時間攪拌後、反応液を減圧濃縮した。残留物のジクロロメタン(5.0mL)溶液に、水(0.096mL)とジクロロ酢酸(0.22mL)のジクロロメタン(5.0mL)溶液を順に加え、30分間攪拌した。ピリジン(0.43mL)を加えて反応を停止した後、反応液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(400mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1203(M+H)+.
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンデカヒドロ-2H,10H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-シクロペンタ[l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}ベンズアミド
上記工程12で得られた化合物(400mg)を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(300mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1217(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)デカヒドロ-2H,10H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-シクロペンタ[l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程13で得られた化合物(300mg)のメタノール(10mL)溶液に、28%アンモニア水(10mL)を加え、室温で12時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物にトリエチルアミン三フッ化水素酸塩(3.0mL)を加え、45℃で2時間攪拌した。氷冷した1M炭酸水素トリエチルアンモニウム溶液(18mL)-トリエチルアミン(6.0mL)混合溶液に反応液を滴下して反応を停止した。反応液を減圧濃縮後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1とジアステレオマー2をそれぞれトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物のジアステレオマー1(45.6mg)とジアステレオマー2(12.6mg)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:728(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.69(1H,s),8.10(1H,s),7.93(1H,s),7.10(1H,s),6.29(1H,d,J=8.2Hz),5.38(1H,dq,J=9.7.2.7Hz),4.99(2H,m),4.79(1H,d,J=3.9Hz),4.61(1H,dd,J=7.2,4.9Hz),4.36(1H,m),4.29(1H,m),4.19(1H,m),3.99(1H,m),3.89(1H,q,J=9.9Hz),3.47(2H,t,J=4.9Hz),2.80(2H.q,J=5.7Hz),2.72(1H,m),2.37(1H,dt,J=16.4,6.7Hz),1.94(2H,m),1.61(1H,dt,J=16.4,6.7Hz).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.3(s),54.0(s).
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:728(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.74(1H,s),8.10(1H,s),7.95(1H,s),7.09(1H,s),6.26(1H,d,J=8.6Hz), 5.44(1H,m),5.24(1H,m),5.06(1H,q,J=9.3Hz),4.59(1H,dd,J=9.4,4.3Hz),4.51(1H,d,J=4.3Hz),4.34-4.21(3H,m),3.94(1H,m),3.74(1H,m),3.47(2H,m),2.85(2H,t,J=5.5Hz),2.54(1H,m),2.45(1H,dt,J=17.1,6.7Hz),1.95(2H,m),1.38(1H,ddd,J=14.6,8.3,5.0Hz).
31P-NMR(CD3OD)δ:62.7(s),60.1(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)-10-スルファニリデン-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オン
6-ベンゾイル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-(4-オキソペンタノイル)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
実施例1工程5で得られた化合物を用いて、実施例56工程8と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.8g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.08(1H,s),7.48-7.19(15H,m),6.37(4H,d,J=6.7Hz),5.48(1H,dd,J=5.1,2.3Hz),4.83(1H,dd,J=6.7,5.1Hz),4.37-4.00(3H,m),3.80(3H,s),3.79(3H,s),3.69(1H,m),3.54(1H,dd,J=10.6,2.7Hz),3.39(1H,dd,J=11.0,2.7Hz),2.90-2.57(6H,m),2.20(3H,s),2.20-2.11(2H,m),0.69(9H,s),-0.03(3H,s),-0.29(3H,s).
6-ベンゾイル-2-{2-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-3-O-(4-オキソペンタノイル)-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程1で得られた化合物(2.8g)を用いて、実施例56工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.74g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.06(1H,s),7.38-7.20(5H,m),7.04(1H,s),6.32(1H,dd,J=12.1,1.6Hz),5.64(1H,d,J=7.8Hz),5.47(1H,d,J=5.1Hz),5.16(1H,dd,J=7.8,5.1Hz),4.40(1H,m),4.29(1H,s),4.17(1H,m),3.91(1H,m),3.75(1H,m),3.02(2H,m),2.90-2.60(4H,m),2.30-2.14(2H,m),2,22(3H,s),0.68(9H,s),-0.15(3H,s),-0.46(3H,s).
N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-[(2-シアノエトキシ){[(2,4-ジクロロフェニル)メチル]スルファニル}ホスホロチオイル]アデノシン
市販(ChemGenes)のN-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}アデノシン(3.73g)のアセトニトリル(30mL)溶液に、モレキュラーシーブス3A,1/16(1.0g)と2,4-ジクロロベンジルメルカプタン(1.8mL)を加え、室温で10分間攪拌した。反応液にイミダゾール過塩素酸塩(3.18g)を加えて2.5時間攪拌後、硫黄(242mg)を加え、更に1時間攪拌した。反応液からモレキュラーシーブス3Aを濾去し、濾液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.73g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1111(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.89(1H,s),8.74(1H,d,J=1.8Hz),8.32(0.5H s),8.26(0.5H,s),8.02(2H,m),7.64-7.61(15H,m),6.82(4H,d,J=9.0),6.45(0.5H,d,J=6.7Hz),6.38(0.5H,d,J=6.3Hz),5.88(0.5H,ddd,J=14.2,6.6,4.8Hz),5.74(0.5H,ddd,J=14.4,6.4,4.8Hz),4.75(0.5H,dd,J=4.7,2.7Hz),4.64(0.5H,dd,J=4.7,2.3Hz),4.22-3.82(5H,m),3.78(6H,s),3.58-3.53(2H,m),3.34-3.29(2H,m),2,57(1H,t,J=6.3Hz),2.48(1H,t,J=6.3Hz),0.90(4.5H,s),0.88(4.5H,s),0.16(1.5H,s),0.11(1.5H,s),0.07(1.5H,s),0.04(1.5H,s).
N,N-ジエチルエタンアミニウム N-ベンゾイル-5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-[{[(2,4-ジクロロフェニル)メチル]スルファニル}(スルフィド)ホスホリル]アデノシン
上記工程3で得られた化合物(2.66g)のアセトニトリル(30mL)溶液に、トリエチルアミン(30mL)を加え、室温で4時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をDIOLシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.5g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1058(M+H)+.
ジヌクレオチドB
上記工程4で得られた化合物(2.5g)のジクロロメタン(10mL)溶液に、モレキュラーシーブス4A,1/16(1.0g)、上記工程2で得られた化合物(930mg)、及び1-メチルイミダゾール(1.18mL)を順に加え、室温で20分間攪拌した。反応液に2,4,6-トリイソプロピルベンゼルスルホニルクロリド(905mg)を加え、更に4時間攪拌した。反応液からモレキュラーシーブス4Aを濾去し、濾液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.04g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1662(M+H)+.
ジヌクレオチドC
上記工程5で得られた化合物(1.04g)を用いて、実施例56工程11と同様の手法で反応を行い、標題化合物(820mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1564(M+H)+.
ジヌクレオチドD
上記工程6で得られた化合物(820mg)を用いて、実施例56工程12と同様の手法で反応を行い、標題化合物(440mg)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
N-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-{[(2,4-ジクロロフェニル)メチル]スルファニル}-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}ベンズアミド
上記工程7で得られた化合物(440mg)を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(360mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1340(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-ベンズアミド-9H-プリン-9-イル)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8で得られた化合物(360mg)のジメチルスルホキシド溶液に、1-ドデカンチオール(434mg)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(0.40mL)を加え、室温で6時間攪拌した。反応液をそのままC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物(130mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1182(M+H)+ .
ジナトリウム (2S,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2-オキソ-10-スルファニリデン-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程9で得られた化合物(130mg)を用いて、実施例56工程14と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
得られたトリエチルアミン塩を実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(62.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:746(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.70(1H,s),8.07(1H,s),8.03(1H,s),7.25(1H,s),6.26(1H,d,J=8.6Hz),6.21(1H,d,J=5.9Hz),5.52(1H,dq,J=14.1,5.2Hz),5.36(1H,m),4.70(1H,dd,J=5.7,4.5Hz),4.42(1H,d,J=4.3Hz),4.37-4.26(3H,m),4.21(1H,m),3.96(1H,m),3.84(1H,m),3.50(2H,m),2.81(2H,m),1.93(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:119.8(s),59.4(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
4-クロロ-5-ヨード-7-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
市販(PharmaBlock)の4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン(73.8g)のN,N-ジメチルホルミアミド(10mL)溶液に、氷冷下で水素化ナトリウム(ミネラルオイルを45%含有)(13.3g)を加え、室温まで昇温しながら40分間攪拌した。再度氷冷し、[2-(クロロメトキシ)エチル](トリメチル)シラン(51.0mL)を10分間かけて加えた後、同温度で30分間攪拌した。大部分が固化した反応液に水(260mL)を少しずつ加えて反応を停止した。固体を濾取し、水(1500mL)とヘキサン(600mL)で洗浄後、減圧下40℃で乾燥し、標題化合物(97.63g)を得た。
MS(ESI)m/z:410(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.64(1H,s),7.54(1H,s),5.61(2H,s),3.52(2H,t,J=8.3Hz),0.92(2H,t,J=8.3Hz),-0.04(9H,s).
4-(ベンジルオキシ)-5-ヨード-7-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
ベンジルアルコール(27mL)のN,N-ジメチルホルミアミド(170mL)溶液に、氷冷下で水素化ナトリウム(ミネラルオイルを45%含有)(12g)を加え、室温まで昇温しながら40分間攪拌した。再度氷冷し、上記工程1で得られた化合物(97.63g)のN,N-ジメチルホルミアミド(360mL)懸濁液を40分間かけて加え、同温度で35分間攪拌した。反応液に氷片と飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液と酢酸エチルの二層に注ぎ、酢酸エチル:トルエン(9:1)で抽出した。有機層を水と飽和食塩水で2回ずつ洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(107.7g)を得た。
MS(ESI)m/z:482(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.47(1H,s),7.61(2H,d,J=7.3Hz),7.41(2H,t,J=7.6Hz),7.36-7.30(1H,m),7.30(1H,s),5.65(2H,s),5.57(2H,s),3.52(2H,t,J=8.3Hz),0.91(2H,t,J=8.3Hz),-0.05(9H,s).
4-(ベンジルオキシ)-5-(3,3-ジエトキシプロパ-1-イン-1-イル)-7-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン
上記工程2で得られた化合物(113.4g)のアセトニトリル(1000mL)-トリエチルアミン(98mL)混合溶液に、窒素雰囲気下、室温でヨウ化銅(4.49g)、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(0)(8.17g)、及び3,3-ジエトキシプロパ-1-イン(104mL)を加え、同温度で4.5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物に酢酸エチルとヘキサンを加え、析出した固体を濾去した。固体を酢酸エチル:ヘキサン(1:1)の混合液で洗浄後、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(145.5g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:482(M+H)+.
5-(3,3-ジエトキシプロピル)-7-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オール
上記工程3で得られた化合物(145.5g)のエタノール(900mL)溶液に、10%パラジウム炭素触媒(M)wet(50.2g)を加え、水素雰囲気下、室温で5時間攪拌した。反応液にジクロロメタン(500mL)を加え、セライトで触媒を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で2回精製し、標題化合物(59.6g)を得た。
MS(ESI)m/z:418(M+Na)+,394[M-H]-.
1H-NMR(CDCl3)δ:11.23(1H,brs),7.85(1H,s),6.79(1H,s),5.47(2H,s),4.58(1H,t,J=5.9Hz),3.69(2H,m),3.57-3.49(4H,m),2.90(2H,t,J=7.8Hz),2.07(2H,m),1.23(6H,t,J=7.1Hz),0.91(2H,t,J=8.1Hz),-0.04(9H,s).
5-(3,3-ジエトキシプロピル)-7-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-チオール
上記工程4で得られた化合物(59.6g)の脱水ジクロロメタン(300mL)溶液に、窒素雰囲気下、2,6-ルチジン(42mL)を加えた。トリフルオロメタンスルホン酸無水物(31mL)を-20℃で20分間かけて滴下し、同温度で20分間攪拌した。N,N-ジメチルホルムアミド(500mL)と一硫化水素ナトリウムn水和物(33.5g)を氷冷下で加え、室温まで昇温した後、2.5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、低沸点成分を留去した。残留物を酢酸エチルと氷冷した飽和塩化アンモニウム水溶液の二層に注ぎ、酢酸エチル:トルエン(9:1)の混合液で抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液で1回、飽和食塩水で2回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物と2,6-ルチジンの混合物を得た。得られた混合物を酢酸エチルと1規定塩酸の二層に注ぎ、酢酸エチルで2回抽出した。有機層を飽和食塩水で3回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、標題化合物(57.6g)を得た。
MS(ESI)m/z:410[M-H]-.
1H-NMR(CDCl3)δ:11.69(1H,brs),7.90(1H,s),6.96(1H,s),5.49(2H,s),4.61(1H,t,J=5.9Hz),3.71(2H,m),3.55(2H,m),3.49(2H,t,J=8.1Hz),3.14(2H,t,J=7.8Hz),2.08(2H,m),1.23(6H,t,J=7.1Hz),0.90(2H,t,J=8.3Hz),-0.04(9H,s).
3-(4-スルファニル-7-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)プロパン-1-オール
上記工程5で得られた化合物(31.62g)を80%酢酸水溶液(300mL)に溶解し、室温で30分間攪拌した。原料の消失を確認後、氷冷し、水素化ホウ素ナトリウム(1.45g)を少量ずつ注意深く加え、同温度で30分間攪拌した。次いで、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム(24.4g)を15分間かけて加え、同温度で1.5時間攪拌した。反応液を5分の1程度の量まで減圧濃縮した。残留物に炭酸水素ナトリウム(固体)を注意深く加えてある程度中和した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムと飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(17.93g)を得た。
MS(ESI)m/z:340[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:11.92(1H,brs),7.95(1H,s),7.01(1H,s),5.51(2H,s),3.70(2H,t,J=5.9Hz),3.50(2H,t,J=8.1Hz),3.23(2H,t,J=7.3Hz),2.33(1H,brs),1.99(2H,m),0.91(2H,t,J=8.3Hz),-0.04(9H,s).
2-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]メチル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程6で得られた化合物(31.31g)の脱水テトラヒドロフラン(600mL)溶液に、窒素雰囲気下、0℃でトリフェニルホスフィン(25.4g)とジイソプロピルアゾジカルボキシラート(21.8g)を加え、同温度で1時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/酢酸エチル]及びシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で順に精製し、標題化合物(35.93g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:322[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.57(1H,s),7.08(1H,s),5.58(2H,s),3.52(2H,t,J=8.3Hz),3.17(2H,m),3.06(2H,t,J=5.6Hz),2.36(2H,m),0.92(2H,t,J=8.3Hz),-0.05(9H,s).
(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)メタノール
上記工程7で得られた化合物(35.93g)のジクロロメタン(150mL)溶液に、室温でトリフルオロ酢酸(150mL)を加え、同温度で1.5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、トルエンで4回共沸した。残留物にジクロロメタン:ヘキサン(1:2)の混合液を加え、析出した固体を濾取した(固体1)。濾液を減圧濃縮後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル→酢酸エチル/メタノール]で精製し、固体2を得た。固体1と固体2を併せて、標題化合物(20.13g)を得た。
MS(ESI)m/z:222[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.60(1H,s),7.19(1H,s),5.71(2H,s),3.21(2H,m),3.07(2H,m),2.38(2H,m).(観測可能なピークのみ記載)
2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程8で得られた化合物(20.13g)のメタノール(250mL)懸濁液に、28%アンモニア水溶液(150mL)を加え、室温で1.5時間攪拌した。反応液を減圧下で半分程度の量まで濃縮した。析出した固体を濾取し、エタノールで洗浄し、固体1を得た。濾液を減圧濃縮し、同様の操作で固体2を得た。濾液をシリカゲルに塗した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製した。目的物を含むフラクションを減圧濃縮し、エタノールでスラリー洗浄後、固体を濾取した(固体3)。固体1、固体2、及び固体3を併せて、標題化合物(12.36g)を得た。
MS(ESI)m/z:192[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:10.53(1H,brs),8.57(1H,s),7.10(1H,s),3.18(2H,m),3.08(2H,t,J=5.6Hz),2.37(2H,m).
2-(2,3,5-トリ-O-ベンジル-β-D-アラビノフラノシル)-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程9で得られた化合物(13.47g)の脱水アセトニトリル(350mL)懸濁液に、窒素雰囲気下、粉末状の水酸化カリウム(10.3g)とトリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチル]アミン(1.13mL)を加え、室温で1.5時間攪拌した。氷冷下、文献既知(J.Med.Chem.1976,19,6,814-816)の2,3,5-トリ-O-ベンジル-α-D-アラビノフラノシルクロリド(40.2g)のアセトニトリル(100mL)溶液を少しずつ加えた後、室温まで昇温して4時間攪拌した。不溶物を濾去し、アセトニトリルで洗浄した。濾液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で2回精製し、標題化合物(26.19g)を得た。
MS(ESI)m/z:594[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.51(1H,s),7.37-7.17(14H,m),6.86(2H,m),6.82(1H,d,J=4.9Hz),4.68(1H,d,J=11.7Hz),4.59(1H,d,J=11.7Hz),4.54(1H,d,J=13.2Hz),4.52(1H,d,J=11.7Hz),4.36-4.33(2H,m),4.22(1H,d,J=11.7Hz),4.14-4.08(2H,m),3.77(1H,dd,J=10.7,3.9Hz),3.72(1H,dd,J=10.5,4.1Hz),3.13(2H,m),2.81(2H,m),2.27(2H,m).
2-β-D-アラビノフラノシル-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程10で得られた化合物(26.19g)の脱水ジクロロメタン(300mL)溶液に、窒素雰囲気下、-78℃で三塩化ホウ素のジクロロメタン溶液(1M,200mL)を加え、同温度で2時間攪拌した後、0℃まで昇温して更に4時間攪拌した。反応液を再度-78℃まで冷却し、メタノール(80mL)のジクロロメタン(160mL)溶液を加え、室温まで昇温しながら30分間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、エタノールで2回共沸した。残留物にエタノール(200mL)とジエチルエーテル(100mL)を加えてスラリー状にし、固体を濾取した(固体1)。濾液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製した。目的物を含むフラクションを減圧濃縮後、エタノールを加えてスラリー状にし、固体を濾取した(固体2)。固体1と固体2を併せて標題化合物(13.2g)を得た。
MS(ESI)m/z:324[M+H]+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.73(1H,s),7.96(1H,s),6.70(1H,d,J=4.9Hz),4.32(1H,t,J=4.6Hz),4.25(1H,t,J=4.6Hz),3.97(1H,m),3.90(1H,dd,J=12.0,3.2Hz),3.85(1H,dd,J=12.0,4.6Hz),3.53(2H,m),3.17(2H,m),2.43(2H,m).
2-[3,5-ビス-O-(オキサン-2-イル)-β-D-アラビノフラノシル]-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程11で得られた化合物(15.35g)の脱水ジメチルスルホキシド(160mL)溶液に、0℃で3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(17.2mL)とp-トルエンスルホン酸一水和物(9.02g)を加え、室温で3時間攪拌した。3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(8.6mL)を追加し、45分間攪拌した後、直ぐにトリエチルアミン(13mL)を加えて反応を停止した。反応液を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の二層に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を水で1回、飽和食塩水で2回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(10.81g)を4種類のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:492[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.548(0.2H,s),8.546(0.3H,s),8.54(0.3H,s),8.53(0.2H,s),7.54(0.2H,s),7.53(0.3H,s),7.51(0.2H,s),7.44(0.3H,s),6.75(0.2H,d,J=5.4Hz),6.71(0.2H,d,J=5.9Hz),6.57(0.3H,d,J=5.9Hz),6.56(0.3H,d,J=5.9Hz),4.87-4.69(2H,m),4.55-3.54(10H,m),3.18-3.12(2H,m),3.10-2.96(2H,m),2.40-2.30(2H,m),1.92-1.51(12H,m).
2-[2-デオキシ-2-フルオロ-3,5-ビス-O-(オキサン-2-イル)-β-D-リボフラノシル]-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程12で得られた化合物(10.81g)の脱水ジクロロメタン(150mL)溶液に、窒素雰囲気下、0℃でピリジン(5.3mL)とトリフルオロメタンスルホン酸無水物(5.6mL)を加え、同温度で1時間攪拌した。反応液に氷片を入れて反応を停止した後、反応液を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の二層に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で2回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、トリフラートの粗体をアモルファスとして得た。得られたトリフラートの粗体を脱水テトラヒドロフラン(150mL)に溶解し、氷冷下でフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液(約1M,154mL)を少しずつ加え、同温度で終夜攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した。反応液を半分程度の量まで減圧濃縮した。残留物を酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液の二層に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液で1回、飽和食塩水で2回洗浄した。水層を酢酸エチルで再度抽出し、抽出液を飽和食塩水で洗浄した。有機層を併せて無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、標題化合物(40.37g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:494[M+H]+.
2-(2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-リボフラノシル)-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程13で得られた化合物(40.37g)のメタノール(400mL)溶液にp-トルエンスルホン酸一水和物(2.09g)を加え、60℃で4時間攪拌した。反応液にトリエチルアミン(16mL)を加えて反応を停止した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル→酢酸エチル/メタノール]で精製した。目的物を含むフラクションをスラリー状になるまで減圧濃縮し、固体を濾取した。得られた固体をヘキサン/酢酸エチル(1:1)で洗浄し、固体1を得た。濾液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、固体2を得た。固体1と固体2を併せて標題化合物(5.32g)得た。
MS(ESI)m/z:326[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.51(1H,s),7.01(1H,s),6.00(1H,dd,J=13.7,6.3Hz),5.95(1H,dd,J=11.7,2.0Hz),5.87(1H,ddd,J=52.7,6.3,4.9Hz),4.69(1H,m),4.32(1H,brs),3.96(1H,d,J=12.7Hz),3.77(1H,m),3.17(2H,m),3.04(2H,m),2.41-2.31(3H,m).
2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程14で得られた化合物(5.32g)を用いて、実施例11工程1と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物(10.1g)を得た。
MS(ESI)m/z:628[M+H]+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.54(1H,s),7.42(2H,d,J=7.3Hz),7.32-7.21(8H,m),6.81(4H,m),6.52(1H,dd,J=17.3,2.2Hz),5.37(1H,ddd,J=53.3,4.4,2.4Hz),4.76(1H,m),4.16(1H,m),3.789(3H,s),3.786(3H,s),3.59(1H,dd,J=10.7,2.4Hz),3.44(1H,dd,J=10.7,3.4Hz),3.12(2H,m),2.76(2H,t,J=5.6Hz),2.27(2H,m),2.18(1H,dd,J=7.8,2.9Hz).
2-(5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-2-デオキシ-2-フルオロ-β-D-リボフラノシル)-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程15で得られた化合物(10.1g)を用いて、実施例1工程6と同様の手法で反応を行い、標題化合物(12.6g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=1:1)として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:8.53(1H,s),7.40(2H,m),7.34-7.17(8H,m),6.84-6.74(4H,m),6.53(0.5H,dd,J=17.3,2.2Hz),6.48(0.5H,dd,J=17.6,1.5Hz),5.50-5.31(1H,m),4.99(0.5H,m),4.85(0.5H,m),4.31-4.26(1H,m),3.93-3.76(1H,m),3.792(1.5H,s),3.789(1.5H,s),3.779(1.5H,s),3.776(1.5H,s),3.67-3.51(4H,m),3.34-3.30(1H,m),3.13-3.10(2H,m),2.76-2.69(2H,m),2.61(1H,td,J=6.3,2.4Hz),2.39(1H,m),2.28-2.21(2H,m),1.19-1.15(9H,m),1.03(3H,d,J=6.8Hz).
上記工程16で得られた化合物(740mg)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例22工程3で得られた化合物(924mg)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-furo[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程17で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(502mg:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1065(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程18で得られた化合物(502mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法を用いて反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(67.8mg:不純物含有)とジアステレオマー2(69.5mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:908(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:908(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程19で得られた化合物(ジアステレオマー1)(67.8mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:25%-75%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(21.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:794(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.55(1H,brs),8.41(1H,s),8.09(1H,brs),7.51(1H,s),6.58(1H,d,J=16.9Hz),6.25(1H,d,J=7.9Hz),5.55-5.34(2H,m),5.30-5.17(1H,m),4.74(1H,d,J=4.2Hz),4.55-4.47(1H,m),4.46-4.40(1H,m),4.37-4.30(2H,m),4.28-4.16(2H,m),4.05-3.99(1H,m),3.90-3.70(3H,m),3.28-3.20(1H,m),3.18-3.10(1H,m),2.91-2.82(1H,m),2.76-2.64(1H,m),2.33-2.22(1H,m),2.21-2.09(1H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.6(s),52.7(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程19で得られた化合物(ジアステレオマー2)(69.5mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:25%-75%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(14.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:794(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.60(1H,s),8.41(1H,s),8.16(1H,s),7.72(1H,s),6.60(1H,d,J=15.7Hz),6.28(1H,d,J=7.9Hz),5.61-5.33(3H,m),4.59-4.49(2H,m),4.48-4.39(2H,m),4.34-4.27(1H,m),4.25-4.16(1H,m),4.11-3.99(3H,m),3.86-3.75(2H,m),3.25-3.11(2H,m),3.05-2.90(2H,m),2.35-2.17(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:59.1(s),57.9(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例58工程16で得られた化合物(1.80g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例45工程3で得られた化合物(2.30g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
3-{[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-7-{1-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-イル]オキシ}プロパンニトリル
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.22g)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1090(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程2で得られた化合物(1.22g)を用いて、実施例45工程6と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(108mg:不純物含有)とジアステレオマー2(111mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:907(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:907(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー1)(108mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-50%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(44.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:793(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.50(1H,s),8.42(1H,s),7.92(1H,s),7.56(1H,s),6.56(1H,d,J=16.3Hz),6.21(1H,d,J=6.0Hz),5.57-5.40(2H,m),5.35-5.22(1H,m),4.73-4.67(1H,m),4.58-4.49(1H,m),4.45-4.26(4H,m),4.24-4.15(1H,m),4.05-3.96(1H,m),3.78-3.51(1H,m),3.26-3.06(4H,m),2.93-2.82(1H,m),2.70-2.51(1H,m),2.29-2.07(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.5(s),52.9(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-[1-(2-アミノエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー2)(111mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:20%-60%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(40.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:793(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.57(1H,s),8.41(1H,s),8.13(1H,s),7.72(1H,s),6.59(1H,dd,J=15.7,1.8Hz),6.26(1H,d,J=8.5Hz),5.61-5.34(3H,m),4.57-4.48(2H,m),4.48-4.38(2H,m),4.38-4.28(2H,m),4.08-3.98(3H,m),3.29-3.21(2H,m),3.20-3.12(2H,m),3.02-2.92(1H,m),2.92-2.81(1H,m),2.29-2.15(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.7(s),57.8(s).
N-(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)-2-ヒドロキシアセトアミド
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
実施例59工程4-1で得られた化合物(20.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-30%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(15.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:851(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.43(1H,s),8.40(1H,brs),7.66(1H,brs),7.58(1H,s),6.53(1H,d,J=16.3Hz),6.14(1H,d,J=8.5Hz),5.73-5.64(1H,m),5.59-5.42(1H,m),5.42-5.29(1H,m),4.80-4.74(1H,m),4.53-4.26(5H,m),4.21-4.12(1H,m),3.99-3.92(1H,m),3.83(2H,s),3.66-3.56(1H,m),3.43-3.26(2H,m),3.23-3.06(2H,m),2.89-2.79(1H,m),2.49-2.33(1H,m),2.27-2.15(1H,m),2.15-2.02(1H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.0(s),52.6(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-{1-[2-(2-ヒドロキシアセトアミド)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
実施例59工程4-2で得られた化合物(10.0mg)を用いて、実施例7工程1-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:7%-25%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(6.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:851(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.46(1H,s),8.42(1H,s),7.84(1H,s),7.78(1H,s),6.59(1H,d,J=15.1Hz),6.20(1H,d,J=7.9Hz),5.69-5.38(3H,m),4.60-4.50(2H,m),4.48-4.38(2H,m),4.31-4.20(2H,m),4.10-3.93(2H,m),3.87(2H,s),3.73-3.57(2H,m),3.52-3.41(1H,m),3.25-3.10(2H,m),3.01-2.90(1H,m),2.83-2.71(1H,m),2.30-2.11(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.2(s),57.6(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ビス(スルファニル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例58工程16で得られた化合物(1.80g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-2,7,8,9-テトラヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例47工程6で得られた化合物(3.10g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル [2-({6-ベンズアミド-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]カルバメート
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.83g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1222(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-アミノ-2-{[2-({[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}アミノ)エチル]アミノ}-9H-プリン-9-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程2で得られた混合物(1.83g)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(151mg:不純物含有)とジアステレオマー2(103mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1065(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1065(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー1)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー1)(151mg:不純物含有)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(10.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:807(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.39(1H,s),7.97(1H,brs),7.55(1H,s),6.51(1H,d,J=16.3Hz),6.00-5.92(1H,m),5.83-5.65(1H,m),5.44(1H,dd,J=52.0,3.6Hz),5.34-5.20(1H,m),4.77(1H,d,J=3.6Hz),4.49-4.31(5H,m),4.11-4.07(1H,m),3.28-2.72(8H,m),2.29-1.99(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.3(s),52.3(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{6-アミノ-2-[(2-アミノエチル)アミノ]-9H-プリン-9-イル}-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
(ジアステレオマー2)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー2)(103mg:不純物含有)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-30%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(12.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:807(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.39(1H,s),7.95(1H,brs),7.82(1H,s),6.58(1H,d,J=15.1Hz),6.00-5.95(1H,m),5.90-5.71(1H,m),5.40(1H,dd,J=51.7,3.3Hz),5.38-5.25(1H,m),4.53-4.39(4H,m),4.28-4.18(2H,m),4.10-4.05(1H,m),3.27-2.54(8H,m),2.34-2.10(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:57.9(s),57.3(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-2,16-ジヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-10-スルファニル-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例44工程8で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例22工程3で得られた化合物(1.13g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-ヒドロキシ-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-furo[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程1で得られた粗生成物のピリジン(32.5mL)溶液を25mL程度まで濃縮後、2-クロロ-5,5-ジメチル-1,3,2λ5-ジオキサホスフィナン-2-オン(945mg)を加え、室温で30分間攪拌した。反応液にヨウ素(1.11g)を加え、1時間攪拌した。反応液を炭酸水素ナトリウム(4.30g)の水溶液(150mL)に注ぎ、30分間攪拌後、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール]で精製し、標題化合物(671mg:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1136(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オラート
上記工程2で得られた化合物(671mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(55.6mg:不純物含有)とジアステレオマー2(65.7mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:875(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:875(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オラート
(ジアステレオマー1)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー1)(55.6mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:5%-25%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(11.3mg)を得た。
MS(ESI)m/z:761(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.55(1H,m),8.15(1H,m),8.03(1H,s),7.14(1H,d,J=4.8Hz),6.46(1H,d,J=18.1Hz),6.28(1H,d,J=7.9Hz),5.50-5.29(2H,m),5.16-5.04(1H,m),4.74-4.69(1H,m),4.40-4.18(6H,m),4.13-4.07(1H,m),4.02-3.91(1H,m),3.84-3.74(2H,m),3.53-3.43(2H,m),2.81-2.63(2H,m),2.02-1.85(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:53.4(s),-0.86(s).
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オラート
(ジアステレオマー2)
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー2)(65.7mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:3%-20%(0分-30分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(23.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:761(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,d,J=3.0Hz),8.19(1H,d,J=2.4Hz),8.03(1H,s),7.40(1H,s),6.49(1H,dd,J=16.3, 1.8Hz),6.29(1H,d,J=8.5Hz),5.51-5.22(3H,m),4.59-4.55(1H,m),4.43-4.17(5H,m),4.14-4.01(3H,m),3.85-3.78(2H,m),3.51-3.44(2H,m),2.90-2.75(2H,m),1.99-1.90(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:59.7(s),-0.75(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-10,16-ジヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2-スルファニル-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例44工程8で得られた化合物(1.02g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た(アセトニトリル溶液A)。実施例22工程3で得られた化合物(1.23g)を脱水アセトニトリル(10mL)で3回共沸脱水した。最後の1回は7mL程度のアセトニトリルを残し、モレキュラーシーブス3A,1/16(ペレット状のもの5粒)を加えた(アセトニトリル溶液B)。アセトニトリル溶液Aとアセトニトリル溶液Bを混合し、窒素雰囲気下、室温で15分間攪拌した。反応液にtert-ブチルヒドロペルオキシドのデカン溶液(5.5M,0.50mL)を加え、40分間攪拌後、反応液を氷冷し、チオ硫酸ナトリウム5水和物(826mg)の水溶液(1.1mL)を加え、10分間攪拌した。反応液に水(20mL)を加え、ジクロロメタン-メタノール混合液で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物のジクロロメタン(15.9mL)溶液に水(0.200mL)とジクロロ酢酸(1.00mL)のジクロロメタン(15.9mL)溶液を順に加え、室温で15分間攪拌した。反応液にピリジン(11.0mL)を加えて反応を停止後、反応液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
N,N-ジエチルエタンアミニウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-{1-[2-(ベンゾイルオキシ)エチル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル}-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-チオラート
上記工程1で得られた粗生成物を、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(122mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1136(M+H)+.
(工程3)
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-10-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2-スルファニル-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
上記工程2で得られた化合物(122mg,不純物含有)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
MS(ESI)m/z:875(M+H)+.
(工程4)
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-2-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-オラート
上記工程3で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:2%-30%(0分-30分)]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(30mg)を得た。
MS(ESI)m/z:761(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,s),8.12(1H,s),8.02(1H,s),7.13(1H,s),6.47(1H,d,J=18.1Hz),6.27(1H,d,J=8.5Hz),5.41(1H,dd,J=51.7,3.9Hz),5.29-5.16(2H,m),4.58-4.52(2H,m),4.36-4.17(5H,m),4.05-3.90(2H,m),3.82-3.71(2H,m),3.52-3.43(2H,m),2.76-2.63(2H,m),2.02-1.85(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:58.0(s),-0.97(s).
(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-2,10,16-トリヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ジオン
実施例44工程8で得られた化合物(1.00g)と実施例22工程3で得られた化合物(1.13g)を用いて、実施例63工程1と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル ベンゾエート
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例62工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(602mg:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1120(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(オラート)
上記工程2で得られた化合物(602mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物(90.8mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:859(M+H)+.
ジナトリウム (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-7-[1-(2-ヒドロキシエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(オラート)
上記工程3で得られた化合物(90.8mg:不純物含有)を用いて、実施例1工程11と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物をトリエチルアミン塩として得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:1%-20%(0分-40分)].
得られたトリエチルアミン塩を、実施例1工程11に記載の[ナトリウム塩への変換]と同様の手法で塩交換を行い、標題化合物(40.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:745(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.56(1H,s),8.19(1H,s),8.03(1H,s),7.10(1H,s),6.46(1H,d,J=18.7Hz),6.31(1H,d,J=8.5Hz),5.51-5.32(1H,m),5.24-5.01(2H,m),4.61-4.56(1H,m),4.41-4.21(5H,m),4.21-3.97(3H,m),3.87-3.75(2H,m),3.54-3.41(2H,m),2.83-2.67(2H,m),2.02-1.85(2H,m).
31P-NMR(CD3OD)δ:-0.59(s),-0.81(s).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-ビス{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-7-(6-{[(グリシルアミノ)メトキシ]メチル}-9H-プリン-9-イル)-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
実施例17工程7で得られた化合物(ジアステレオマー2)(80.6mg)を用いて、実施例22工程7-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(66.1mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1059(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-{[(グリシルアミノ)メトキシ]メチル}-9H-プリン-9-イル)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程1で得られた化合物(66.1mg)を用いて、実施例22工程8-1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(40.4mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:831(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[({9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-6-イル}メトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー5)
上記工程2で得られた化合物(40.4mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-45%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(5.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1379(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:9.17(1H,s),8.83(1H,d,J=4.8Hz),8.01(1H,d,J=3.6Hz),7.63-7.45(2H,m),7.40-7.34(3H,m),7.29-7.12(8H,m),7.09(1H,s),6.47(1H,d,J=8.5Hz),6.31(1H,d,J=6.7Hz),5.56-5.47(2H,m),5.05-4.91(4H,m),4.88-4.73(3H,m),4.57-4.30(5H,m),4.09-4.01(1H,m),4.00-3.55(9H,m),3.52-3.45(2H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.02-2.94(1H,m),2.90-2.71(3H,m),2.35-2.20(2H,m),2.04-1.92(3H,m),1.27(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-({2-[(2,5-ジオキソピロリジン-1-イル)オキシ]-2-オキソエトキシ}メチル)グリシンアミド
文献既知(WO2014/057687)の{[(N-{[(9H-フルオレン-9-イル)メトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}酢酸(955mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(8.0mL)溶液に、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(0.74mL)を加え、室温で1時間攪拌した(反応液A)。実施例22工程10で得られた化合物(938mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(8.0mL)溶液にN-ヒドロキシスクシンイミド(229mg)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(380mg)を加え、室温で50分間攪拌した(反応液B)。反応液Aを反応液Bに加え、室温で1時間攪拌した。反応液にジクロロメタン(50mL)と10%クエン酸水溶液(10mL)を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/(クロロホルム/メタノール/水=7:3:1の下層)]で精製した。得られた化合物のN,N-ジメチルホルムアミド(8.0mL)溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド(229mg)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(380mg)を加え、室温で30分間攪拌した。反応液にジクロロメタン(100mL)と水(25mL)を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]で精製した。目的物を含むフラクションを減圧濃縮し、残留物にジエチルエーテルを加えてスラリー状にした。得られた固体を濾取し、標題化合物(412mg)を得た。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.72(1H,m),8.32(1H,m),8.17-7.96(3H,m),7.71-7.15(13H,m),5.01(1H,d,J=13.9Hz),4.70-4.48(5H,m),3.81-3.51(7H,m),3.05(1H,dd,J=14.2,3.9Hz),2.83(4H,s),2.80(1H,m),2.64(1H,m),2.28(1H,m),2.07(1H,m),1.79(1H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-({2-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)アミノ]-2-オキソエトキシ}メチル)グリシンアミド
(薬物リンカー6)
実施例5工程8-2で得られた化合物(20.0mg)と上記工程1で得られた化合物(23.7mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:30%-80%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(14.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1466(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.74-8.69(1H,m),8.17-8.12(1H,m),8.04-7.96(1H,m),7.65-7.13(13H,m),7.13-7.04(1H,m),6.33-6.23(2H,m),5.50-5.31(2H,m),5.07-4.94(2H,m),4.85-4.76(1H,m),4.71-4.26(10H,m),4.18-3.53(13H,m),3.53-3.33(3H,m),3.19(12H,q,J=7.3Hz),3.05-2.92(1H,m),2.91-2.70(3H,m),2.40-2.20(2H,m),2.07-1.87(2H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
[(N-{[(9H-フルオレン-9-イル)メトキシ]カルボニル}-L-イソロイシル)アミノ]メチル アセテート
市販(IRIS)のN-{[(9H-フルオレン-9-イル)メトキシ]カルボニル}-L-イソロイシルグリシン(2.50g)のテトラヒドロフラン(45mL)-トルエン(15mL)混合液に、室温でピリジン(0.588mL)と四酢酸鉛(3.24g)を加え、65℃で3時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、水と飽和食塩水で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(2.06g)を得た。
MS(ESI)m/z:447(M+Na)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.77(2H,d,J=7.9Hz),7.58(2H,d,J=7.3Hz),7.40(2H,t,J=7.3Hz),7.32(2H,td,J=7.6,1.2Hz),6.97-6.92(1H,br m),5.32-5.20(3H,m),4.47-4.37(2H,m),4.21(1H,t,J=6.7Hz),4.05-4.01(1H,m),2.04(3H,s),1.92-1.84(1H,br m),1.51-1.41(1H,br m),1.17-1.07(1H,br m),0.93-0.89(6H,m).
ベンジル {[(N-{[(9H-フルオレン-9-イル)メトキシ]カルボニル}-L-イソロイシル)アミノ]メトキシ}アセテート
上記工程1で得られた化合物(2.06g)のテトラヒドロフラン(48mL)懸濁液に、0℃でグリコール酸ベンジル(1.38mL)とp-トルエンスルホン酸一水和物(92.3mg)を加え、室温で4時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水で洗浄後、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を併せて、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(1.72g)を得た。
MS(ESI)m/z:553(M+Na)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.76(2H,d,J=7.9Hz),7.58(2H,d,J=7.3Hz),7.42-7.29(9H,m),6.74-6.69(1H,br m),5.24-5.21(1H,br m),5.17(2H,s),4.86(2H,d,J=6.7Hz),4.48-4.39(2H,m),4.23-4.19(3H,m),4.04-4.00(1H,m),1.95-1.87(1H,br m),1.50-1.41(1H,br m),1.15-1.07(1H,br m),0.93-0.89(6H,m).
N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-{[2-(ベンジルオキシ)-2-オキソエトキシ]メチル}-L-イソロイシンアミド
上記工程2で得られた化合物(1.72g)のアセトニトリル(40mL)懸濁液に、室温で1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(0.290mL)を加え、1時間攪拌した(反応液A)。市販のN-[(ベンジルオキシ)カルボニル]グリシルグリシル-L-プロリン(1.41g)のアセトニトリル(20mL)懸濁液に、室温で3H-[1,2,3]トリアゾロ[4,5-b]ピリジン-3-オール(529mg)、1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(746mg)、及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.678mL)を加え、1時間攪拌した。この反応液を室温で上記反応液Aに加え、6時間攪拌後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]で精製し、標題化合物(1.56g)を得た。
MS(ESI)m/z:676(M+Na)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:7.37-7.27(10H,m),5.17(2H,s),5.09(2H,s),4.82-4.70(2H,m),4.56-4.44(1H,m),4.17-4.14(3H,m),4.07-3.96(2H,m),3.83-3.82(2H,m),3.64-3.48(2H,m),2.34-1.78(5H,m),1.61-1.51(1H,m),1.25-1.13(1H,m),0.95-0.87(6H,m).
グリシルグリシル-L-プロリル-N-[(カルボキシメトキシ)メチル]-L-イソロイシンアミド
上記工程3で得られた化合物(1.56g)のメタノール(8mL)-テトラヒドロフラン(24mL)-ジクロロメタン(8mL)混合液に、10%パラジウム炭素(M)wet(1.4g)を加え、水素雰囲気下、室温で23時間攪拌した。反応液にメタノール/テトラヒドロフラン(1:1)混合液(50mL)を加え、セライトで濾過した。セライトをメタノール/テトラヒドロフラン(1:1)混合液で洗浄した。濾液を減圧濃縮後、残留物にメタノール(20mL)、テトラヒドロフラン(20mL)、及び10%パラジウム炭素(M)wet(1.0g)を加え、水素雰囲気下、室温で3時間攪拌した。反応液をセライトで濾過後、セライトをメタノール/テトラヒドロフラン(1:1)で洗浄した。濾液を減圧濃縮し、標題化合物の粗体(1.02g)を得た。
MS(ESI)m/z:430(M+H)+.
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-[(カルボキシメトキシ)メチル]-L-イソロイシンアミド
上記工程4で得られた化合物(1.02g)のN,N-ジメチルホルムアミド(24mL)溶液に、1-{[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]オキシ}ピロリジン-2,5-ジオン(956mg)とN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.496mL)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]で精製した。目的物を含むフラクションを減圧濃縮後、残留物に酢酸エチルを加えて固化させた。得られた固体を濾取し、標題化合物(1.06g)を得た。
MS(ESI)m/z:739(M+Na)+,715(M-H)-.
1H-NMR(CD3OD)δ:7.64-7.59(2H,m),7.48-7.44(3H,m),7.38-7.23(3H,m),5.15-5.12(1H,m),4.74-4.70(2H,m),4.64-4.48(1H,m),4.25-4.18(1H,m),4.11-3.96(3H,m),3.91-3.85(1H,m),3.78-3.57(5H,m),2.84-2.75(1H,m),2.39-2.16(3H,br m),2.08-1.84(5H,br m),1.61-1.52(1H,br m),1.23-1.15(1H,br m),0.96-0.87(6H,m).
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-({2-[(2,5-ジオキソピロリジン-1-イル)オキシ]-2-オキソエトキシ}メチル)-L-イソロイシンアミド
上記工程5で得られた化合物(1.06g)のN,N-ジメチルホルムアミド(16mL)懸濁液に、N-ヒドロキシスクシンイミド(187mg)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(312mg)を加え、室温で16時間攪拌した。反応液をクロロホルムで希釈し、水で3回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エチルを加え、得られた固体を濾取した。濾取した固体にジエチルエーテルを加え、スラリー状にした後、固体を濾取し、標題化合物(767mg)を得た。
MS(ESI)m/z:836(M+Na)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:7.68-7.56(2H,m),7.48-7.44(3H,m),7.38-7.23(3H,m),5.15-5.12(1H,m),4.83-4.70(2H,m),4.64-4.50(3H,m),4.24-3.55(8H,m),2.83-2.76(5H,m),2.38-2.18(3H,m),2.11-1.84(5H,br m),1.60-1.52(1H,m),1.25-1.13(1H,m),0.98-0.87(6H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-({2-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)アミノ]-2-オキソエトキシ}メチル)-L-イソロイシンアミド
(薬物リンカー7)
実施例5工程8-2で得られた化合物(20.0mg)と上記工程6で得られた化合物(20.9mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:30%-80%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(11.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1472(M+H)+
1H-NMR(CD3OD)δ:8.71(1H,brs),8.19-8.13(1H,m),8.02(1H,s),7.64-7.56(2H,m),7.48-7.41(3H,m),7.37-7.08(4H,m),6.34-6.23(2H,m),5.48-5.36(2H,m),5.16-5.08(1H,m),4.98-4.55(6H,m),4.52-4.15(7H,m),4.07-3.81(6H,m),3.80-3.45(8H,m),3.19(12H,q,J=7.3Hz),2.93-2.85(2H,m),2.85-2.71(1H,m),2.45-2.30(1H,m),2.30-2.11(2H,m),2.08-1.83(6H,m),1.66-1.45(1H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz),1.28-1.10(1H,m),1.01-0.85(7H,m).
[合成スキーム]
N-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-バリル-L-アラニン
市販(ChemFun)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシン(5.00g)とN-ヒドロキシスクシンイミド(2.97g)のN,N-ジメチルホルミアミド(50mL)溶液に、窒素雰囲気下、0℃で1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(4.95g)を加え、室温に昇温して1時間攪拌した。反応液にトリエチルアミン(3.6mL)と市販(国産化学)のL-バリル-L-アラニン(4.05g)を加え、同温度6時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製した。目的物を含むフラクションを減圧濃縮し、ジエチルエーテルを加えてスラリー状にした。得られた固体を濾取し、標題化合物(4.99g)を得た。
MS(ESI)m/z:401(M-H)-.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.43(1H,br),8.27(1H,d,J=6.8Hz),7.92(1H,t,J=5.4Hz),7.79(1H,d,J=9.3Hz),6.99(1H,t,J=5.9Hz),4.19(1H,t,J=8.1Hz),4.13(1H,m),3.73(2H,d,J=5.4Hz),3.52(2H,d,J=5.9Hz),1.92(1H,dd,m),1.35(9H,s),1.24(3H,d,J=7.3Hz),0.85(3H,d,J=6.3Hz),0.79(3H,d,J=6.8Hz).
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-バリル-L-アラニン トリフルオロアセテート
上記工程1で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.10g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:301(M-H)-.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.49(1H,br),8.54(1H,t,J=5.6Hz),8.34(1H,d,J=6.8Hz),8.03(1H,d,J=9.3Hz),8.00(3H,brs),4.24(1H,dd,J=8.8,6.8Hz),4.17(1H,m),3.93-3.84(2H,m),3.62-3.58(2H,m),1.96(1H,m),1.27(3H,d,J=7.3Hz),0.89(3H,d,J=6.8Hz),0.84(3H,d,J=6.8Hz).
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-バリル-L-アラニン
上記工程2で得られた化合物(861mg)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(737mg)を得た。
MS(ESI)m/z:590(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.46(1H,s),8.28(1H,t,J=8.1Hz),8.18(1H,t,J=5.9Hz),8.13(0.5H,t,J=5.6Hz),8.04(0.5H,t,J=5.9Hz),7.99(0.5H,t,J=5.9Hz),7.73(0.5H,d,J=1.5Hz),7.67(1H,m),7.61(1H,m),7.53-7.44(3H,m),7.40-7.28(3H,m),5.03(0.5H,d,J=6.3Hz),5.00(0.5H,d,J=6.3Hz),4.21(1H,dd,J=9.0,7.1Hz),4.18-4.08(1H,m),3.78-3.67(2H,m),3.65-3.55(3H,m),2.72-2.59(1H,m),2.28(1H,d,J=7.8Hz),2.09-2.03(1H,m),1.99-1.91(1H,m),1.79(1H,m),1.25(1.5H,d,J=5.4Hz),1.24(1.5H,d,J=5.4Hz),0.87(3H,d,J=6.8Hz),0.82-0.79(3H,m).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-バリル-L-アラニナート
上記工程3で得られた化合物(260mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(84mg)を得た。
MS(ESI)m/z:687(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.73(1H,t,J=7.0Hz),8.18(0.5H,t,J=5.7Hz),8.12(0.5H,t,J=5.7Hz),8.04(0.5H,t,J=5.7Hz),7.98(0.5H,t,J=5.7Hz),7.84-7.60(3H,m),7.52-7.44(3H,m),7.40-7.28(3H,m),5.03(0.5H,d,J=6.0Hz),5.00(0.5H,d,J=6.0Hz),4.69-4.58(1H,m),4.22(1H,t,J=7.6Hz),3.80-3.54(5H,m),2.80(4H,s),2.73-2.59(1H,m),2.34-2.24(1H,m),2.11-2.02(1H,m),1.99-1.91(1H,m),1.79(1H,m),1.45(1.5H,d,J=3.6Hz),1.43(1.5H,d,J=3.6Hz),0.85(3H,d,J=6.7Hz),0.83-0.79(3H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-バリル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-L-アラニンアミド
(薬物リンカー8)
実施例8工程8-2で得られた化合物(5.3mg)と上記工程4で得られた化合物(4.5mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-35%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(5.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1359(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.37(1H,brs),8.02(1H,s),7.66-7.13(9H,m),6.33(1H,d,J=6.7Hz),6.13(1H,d,J=9.1Hz),5.49-5.42(2H,m),5.13-5.04(1H,m),4.83-4.80(1H,m),4.51-3.63(14H,m),3.51-3.37(4H,m),3.14(12H,q,J=7.3Hz),2.90-2.72(5H,m),2.36-1.96(6H,m),1.34-1.25(21H,m),0.98-0.86(6H,m).
[合成スキーム]
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-プロリル-L-イソロイシン トリフルオロアセテート
市販(Hangzhou Peptide Biochem)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-プロリル-L-イソロイシン(1.00g)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.02g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:343(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.61(1H,s),8.51(0.7H,t,J=5.1Hz),8.48(0.3H,t,J=4.9Hz),8.35(0.3H,d,J=8.8Hz),8.05(0.7H,d,J=8.3Hz),7.99(3H,brs),4.55(0.3H,dd,J=8.3,2.4Hz),4.46(0.7H,dd,J=8.8,2.9Hz),4.23(0.3H,dd,J=8.5,5.6Hz),4.15(0.7H,dd,J=8.3,5.9Hz),4.06(0.7H,dd,J=17.6,5.4Hz),3.99-3.95(1H,m),3.63-3.36(4.3H,m),2.28-2.20(0.3H,m),2.07-2.00(0.7H,m),1.96-1.74(4H,m),1.46-1.36(1H,m),1.26-1.13(1H,m),0.89-0.83(6H,m).
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-L-イソロイシン
上記工程1で得られた化合物(1.02g)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(993mg)を得た。
MS(ESI)m/z:630(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.57(1H,s),8.30(0.3H,dd,J=8.5,3.6Hz),8.14-8.06(1H,m),8.00(0.7H,d,J=7.9Hz),7.88-7.80(1H,m),7.70-7.66(1H,m),7.63-7.60(1H,m),7.53-7.27(6H,m),5.04(0.7H,d,J=14.5Hz),5.02(0.3H,d,J=14.5Hz),4.56(0.3H,dd,J=8.5,2.4Hz),4.47-4.43(0.7H,m),4.20(0.3H,dd,J=8.2,5.7Hz),4.12(0.7H,m),3.99-3.36(7H,m),2.68-2.58(1H,m),2.34-2.18(1.3H,m),2.09-1.74(6.7H,m),1.44-1.34(1H,m),1.25-1.12(1H,m),0.87-0.80(6H,m).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-L-イソロイシナート
上記工程2で得られた化合物(300mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(287mg)を得た。
MS(ESI)m/z:727(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.77-8.67(0.3H,m),8.50(0.5H,d,J=8.3Hz),8.31(0.2H,m),8.10-8.04(1H,m),7.88-7.79(1H,m),7.68-7.57(2H,m),7.49-7.26(6H,m),5.01(1H,d,J=14.2Hz),4.80-4.42(2H,m),3.97-3.84(1H,m),3.79-3.34(6H,m),2.78(4H,s),2.64-2.57(1H,m),2.30-1.74(8H,m),1.56-1.17(2H,m),1.00-0.80(6H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-L-イソロイシンアミド
(薬物リンカー9)
実施例8工程8-2で得られた化合物(51.8mg)と上記工程3で得られた化合物(36.9mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-35%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(62.5mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1397(M-H)-.
[合成スキーム]
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-フェニルアラニル-L-メチオニン トリフルオロアセテート
市販(Hangzhou Peptide Biochem)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-L-メチオニン(1.00g)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.19g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:411(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.48(1H,t,J=5.4Hz),8.41(1H,d,J=7.8Hz),8.27(1H,d,J=8.3Hz),7.97(3H,m),7.28-7.18(5H,m),4.58(1H,m),4.32(1H,m),3.85(1H,dd,J=17.1,5.9Hz),3.68(1H,dd,J=16.6,5.4Hz),3.56(2H,m),3.04(1H,dd,J=13.9,3.7Hz),2.74(1H,dd,J=13.7,10.3Hz),2.47(1H,m),2.05(3H,s),2.00(1H,m),1.88(1H,m),1.48(1H,d,J=10.3Hz).(観測可能なピークのみ記載)
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-L-メチオニン
上記工程1で得られた化合物(1.03g)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(652mg)を得た。
MS(ESI)m/z:698(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.67(1H,brs),8.28(0.7H,d,J=7.9Hz),8.25(0.3H,d,J=7.9Hz),8.17(0.7H,t,J=5.7Hz),8.10(0.3H,t,J=5.7Hz),8.04-7.93(2H,m),7.73-7.15(13H,m),5.00(1H,d,J=13.9Hz),4.56-4.49(1H,m),4.35-4.28(1H,m),3.74-3.49(5H,m),3.03(1H,dd,J=13.9,3.6Hz),2.79-2.22(5H,m),2.11-1.76(4H,m),2.02(2.1H,s),2.02(0.9H,s).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-L-メチオニナート
上記工程2で得られた化合物(201mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(95mg)を得た。
MS(ESI)m/z:795(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.84-8.59(1H,m),8.17-7.96(3H,m),7.72-7.15(13H,m),5.01(0.55H,d,J=14.5Hz),5.00(0.45H,d,J=13.9Hz),4.86-4.74(1H,m),4.56-4.48(1H,m),3.75-3.50(5H,m),3.05-2.52(6H,m),2.82(4H,brs),2.33-1.73(4H,m),2.05(3H,s).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-L-メチオニンアミド
(薬物リンカー10)
実施例8工程8-2で得られた化合物(6.0mg)と上記工程3で得られた化合物(5.5mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-40%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(2.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1467(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.23(1H,brs),7.93(1H,s),7.54-7.07(14H,m),6.23(1H,d,J=6.7Hz),6.05-5.98(1H,m),5.41-5.31(2H,m),5.00-4.93(1H,m),4.73-4.69(1H,m),4.41-3.52(14H,m),3.44-2.62(12H,m),3.08(12H,q,J=7.3Hz),2.38-2.13(3H,m),2.02-1.80(8H,m),1.19(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-バリル-N5-カルバモイル-L-オルニチン トリフルオロアセテート
市販(Hangzhou Peptide Biochem)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-バリル-N5-カルバモイル-L-オルニチン(1.00g)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.02g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:389(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.52(1H,brs),8.55(1H,t,J=5.4Hz),8.29(1H,d,J=7.3Hz),8.03-7.96(4H,m),5.97(1H,brs),5.40(1H,brs),4.26(1H,t,J=7.8Hz),4.11(1H,m),3.93-3.85(2H,m),3.60(2H,d,J=5.9Hz),2.95(2H,brs),1.97(1H,m),1.69(1H,m),1.56(1H,m),1.39(2H,m),0.88(3H,d,J=6.8Hz),0.84(3H,d,J=6.8Hz).(観測可能なピークのみ記載)
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-バリル-N5-カルバモイル-L-オルニチン
上記工程1で得られた化合物(1.02g)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(795mg)を得た。
MS(ESI)m/z:676(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.49(1H,s),8.28-8.22(1H,m),8.18(0.5H,t,J=6.0Hz),8.13(0.5H,t,J=5.7Hz),8.06(0.5H,t,J=5.7Hz),8.01(0.5H,t,J=6.0Hz),7.75-7.71(1H,m),7.69-7.65(1H,m),7.62-7.59(1H,m),7.52-7.43(3H,m),7.40-7.28(3H,m),5.93(1H,t,J=5.7Hz),5.38(2H,brs),5.02(0.5H,d,J=13.9Hz),5.01(0.5H,d,J=13.9Hz),4.24(1H,dd,J=8.8,7.0Hz),4.10(1H,m),3.79-3.54(5H,m),2.93(2H,q,J=6.4Hz),2.73-2.60(1H,m),2.29(1H,m),2.09-1.91(2H,m),1.79(1H,m),1.72-1.63(1H,m),1.60-1.50(1H,m),1.43-1.33(2H,m),0.86(3H,d,J=6.7Hz),0.81(1.5H,d,J=6.7Hz),0.80(1.5H,d,J=6.7Hz).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-バリル-N5-カルバモイル-L-オルニチナート
上記工程2で得られた化合物(300mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(177mg)を得た。
MS(ESI)m/z:773(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.75(1H,t,J=6.1Hz),8.20(0.5H,t,J=6.1Hz),8.15(0.5H,t,J=5.6Hz),8.06(0.5H,t,J=5.9Hz),8.02(0.5H,t,J=5.9Hz),7.83(0.5H,d,J=8.8Hz),7.77(0.5H,d,J=8.8Hz),7.72(0.5H,d,J=7.8Hz),7.67(0.5H,d,J=6.3Hz),7.62-7.59(1H,m),7.52-7.44(3H,m),7.39-7.29(3H,m),6.03(1H,brs),5.43(2H,brs),5.03(0.5H,d,J=13.7Hz),5.01(0.5H,d,J=14.2Hz),4.59-4.54(1H,m),4.25(1H,m),3.79-3.68(5H,m),2.97(2H,q,J=6.5Hz),2.80(4H,s),2.71-2.60(1H,m),2.28(1H,m),2.10-2.03(1H,m),2.00-1.93(1H,m),1.88-1.72(3H,m),1.54-1.49(2H,m),0.85(3H,d,J=5.4Hz),0.81(1.5H,d,J=4.9Hz),0.80(1.5H,d,J=6.8Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-バリル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-N5-カルバモイル-L-オルニチンアミド
(薬物リンカー11)
実施例8工程8-2で得られた化合物(5.0mg)と上記工程3で得られた化合物(3.8mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-35%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(3.0mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1443(M-H)-.
[合成スキーム]
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-フェニルアラニル-N5-カルバモイル-L-オルニチン トリフルオロアセテート
市販(Hangzhou Peptide Biochem)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N5-カルバモイル-L-オルニチン(1.00g)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.05g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:437(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.63(1H,brs),8.49(1H,t,J=5.4Hz),8.40(1H,d,J=7.8Hz),8.26(1H,d,J=8.3Hz),7.97(3H,brs),7.28-7.17(5H,m),6.00(1H,brs),5.41(2H,brs),4.60(1H,m),4.17(1H,m),3.85(1H,dd,J=16.6,5.4Hz),3.67(1H,dd,J=16.6,5.4Hz),3.56(2H,d,J=5.9Hz),3.03(1H,dd,J=13.9,3.7Hz),2.96(2H,brs),2.73(1H,dd,J=13.9,10.5Hz),1.73(1H,m),1.58(1H,m),1.40(2H,m).
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N5-カルバモイル-L-オルニチン
上記工程1で得られた化合物(1.05g)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(550mg)を得た。
MS(ESI)m/z:724(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.60(1H,s),8.29(1H,t,J=9.1Hz),8.17(0.5H,t,J=5.7Hz),8.10(0.5H,t,J=5.7Hz),8.04-7.94(2H,m),7.72-7.14(13H,m),5.94(1H,br),5.39(2H,s),5.01(0.5H,d,J=13.9Hz),5.00(0.5H,d,J=14.5Hz),4.56(1H,m),4.15(1H,m),3.74-3.49(5H,m),3.04-2.93(3H,m),2.77-2.58(2H,m),2.28(1H,m),2.05(1H,m),1.83-1.70(2H,m),1.62-1.52(1H,m),1.46-1.32(2H,m).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N5-カルバモイル-L-オルニチナート
上記工程2で得られた化合物(225mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(226mg)を得た。
MS(ESI)m/z:821(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.80(1H,t,J=7.6Hz),8.19-7.96(3H,m),7.72-7.15(13H,m),6.03-5.89(1H,br),5.43(2H,brs),5.01(0.5H,d,J=14.0Hz),4.99(0.5H,d,J=14.0Hz),4.65-4.53(2H,m),3.74-3.50(5H,m),3.03-2.95(3H,m),2.81(4H,s),2.78-2.58(2H,m),2.28(1H,m),2.07(1H,m),1.91-1.73(3H,m),1.56-1.49(2H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-N5-カルバモイル-L-オルニチンアミド
(薬物リンカー12)
実施例8工程8-2で得られた化合物(5.1mg)と上記工程3で得られた化合物(4.0mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-35%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(4.6mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1493(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.31(1H,brs),8.02(1H,s),7.62-7.14(14H,m),6.32(1H,d,J=6.0Hz),6.11(1H,brd,J=5.4Hz),5.55-5.41(2H,m),5.06(1H,dd,J=13.9,11.5Hz),4.86-2.73(28H,m),3.19(12H,q,J=7.5Hz),2.39-2.16(2H,m),2.04-1.94(3H,m),1.84-1.74(1H,m),1.73-1.62(1H,m),1.51-1.37(2H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
N-(アザニウミルアセチル)グリシル-L-イソロイシル-N5-カルバモイル-L-オルニチン トリフルオロアセテート
市販(Hangzhou Peptide Biochem)のN-(tert-ブトキシカルボニル)グリシルグリシル-L-イソロイシル-N5-カルバモイル-L-オルニチン(1.00g)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.09g)の粗体を得た。
MS(ESI)m/z:403(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.54(1H,t,J=5.4Hz),8.30(1H,d,J=7.3Hz),8.03(1H,d,J=9.3Hz),7.99(3H,brs),5.99(1H,brs),4.27(1H,t,J=8.1Hz),4.11(1H,m),3.92-3.83(2H,m),3.60(2H,m),2.95(2H,m),1.71(2H,m),1.56(1H,m),1.48-1.33(3H,m),1.08(1H,m),0.86(3H,d,J=6.8Hz),0.81(3H,t,J=7.3Hz).(観測可能なピークのみ記載)
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-イソロイシル-N5-カルバモイル-L-オルニチン
上記工程1で得られた化合物(1.08g)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(524mg)を得た。
MS(ESI)m/z:690(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.47(1H,brs),8.25(1H,t,J=6.0Hz),8.17(0.5H,t,J=5.7Hz),8.12(0.5H,t,J=6.0Hz),8.04(0.5H,t,J=6.0Hz),7.99(0.5H,t,J=6.0Hz),7.76-7.66(2H,m),7.62-7.59(1H,m),7.52-7.29(6H,m),5.92(1H,t,J=5.4Hz),5.38(2H,s),5.02(0.5H,d,J=14.5Hz),5.01(0.5H,d,J=13.9Hz),4.25(1H,t,J=8.2Hz),4.09(1H,m),3.78-3.54(5H,m),2.93(2H,q,J=6.4Hz),2.73-2.59(1H,m),2.33-2.24(1H,m),2.10-2.02(1H,m),1.79(1H,ddd,J=16.6,7.3,5.7Hz),1.74-1.63(2H,m),1.60-1.50(1H,m),1.45-1.33(3H,m),1.09-1.00(1H,m),0.84(3H,d,J=6.7Hz),0.79(1.5H,t,J=6.7Hz),0.77(1.5H,t,J=7.0Hz).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-イソロイシル-N5-カルバモイル-L-オルニチナート
上記工程2で得られた化合物(250mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(224mg)を得た。
MS(ESI)m/z:787(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.75(1H,t,J=6.4Hz),8.19(0.5H,t,J=5.8Hz),8.14(0.5H,t,J=5.8Hz),8.06(0.5H,t,J=5.8Hz),8.01(0.5H,t,J=5.8Hz),7.89-7.65(2H,m),7.63-7.58(1H,m),7.53-7.27(6H,m),5.96(1H,m),5.42(2H,brs),5.02(0.5H,d,J=14.0Hz),5.01(0.5H,d,J=14.0Hz),4.64-4.51(1H,m),4.26(1H,t,J=8.2Hz),3.79-3.55(5H,m),3.01-2.93(2H,m),2.80(4H,brs),2.73-2.58(1H,m),2.28(1H,m),2.12-2.02(1H,m),1.87-1.68(4H,m),1.54-1.38(3H,m),1.11-1.02(1H,m),0.83(3H,d,J=6.7Hz),0.78(1.5H,t,J=6.7Hz),0.76(1.5H,t,J=6.7Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-イソロイシル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-N5-カルバモイル-L-オルニチンアミド
(薬物リンカー13)
実施例8工程8-2で得られた化合物(5.4mg)と上記工程3で得られた化合物(4.0mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-35%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(4.7mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1457(M-H)-.
[合成スキーム]
N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシン
市販(東京化成工業)のグリシルグリシン(0.61g)を用いて、実施例21工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.08g)を得た。
MS(ESI)m/z:420(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.57(1H,s),8.12(1H,t,J=6.0Hz),8.07(1H,t,J=5.7Hz),7.69-7.67(1H,m),7.62-7.60(1H,m),7.52-7.29(6H,m),5.03(1H,d,J=13.9Hz),3.73(2H,d,J=6.0Hz),3.70-3.55(3H,m),2.64(1H,m),2.28(1H,m),2.06(1H,ddd,J=15.3,7.7,5.6Hz),1.79(1H,ddd,J=16.5,7.4,5.6Hz).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシナート
上記工程1で得られた化合物(1.07g)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(942mg)を得た。
MS(ESI)m/z:517(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.40(1H,t,J=6.0Hz),8.19(1H,t,J=6.0Hz),7.69-7.67(1H,m),7.64-7.62(1H,m),7.53-7.29(6H,m),5.05(1H,d,J=14.5Hz),4.26(1H,dd,J=18.1,6.0Hz),4.19(1H,dd,J=18.1,6.0Hz),3.72-3.59(3H,m),2.81(4H,brs),2.68-2.59(1H,m),2.33-2.24(1H,m),2.07(1H,ddd,J=15.4,7.6,5.7Hz),1.80(1H,ddd,J=16.3,7.3,5.4Hz).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-L-ロイシナート
上記工程2で得られた化合物(250mg)と市販(国産化学)のL-プロリル-L-ロイシン(166mg)のN,N-ジメチルホルムアミド(5.0mL)懸濁液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.25mL)を加え、室温で2.5時間攪拌した。L-プロリル-L-ロイシン(833mg)を追加して終夜攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物にクロロホルム(50mL)と10%クエン酸水溶液(10mL)を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/(クロロホルム:メタノール:水=7:3:1)の下層]で粗精製した。粗生成物のN,N-ジメチルホルムアミド(5.0mL)溶液にN-ヒドロキシスクシンイミド(67mg)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(111mg)を加え、室温で1.5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残留物にクロロホルム(40mL)と水(15mL)を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム/メタノール]、[酢酸エチル/メタノール]で順に精製し、標題化合物(127mg)を得た。
MS(ESI)m/z:727(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.85(0.3H,m),8.56(0.5H,d,J=7.3Hz),8.33(0.2H,m),8.09(1H,m),7.91-7.79(1H,m),7.70-7.28(8H,m),5.04(0.7H,d,J=14.5),5.03(0.3H,d,J=13.9),4.71-4.29(2H,m),4.01-3.30(7H,m),2.79(4H,brs),2.63(1H,m),2.33-1.64(10H,m),0.93-0.83(6H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-L-ロイシンアミド
(薬物リンカー14)
実施例8工程8-2で得られた化合物(6.9mg)と上記工程3で得られた化合物(4.7mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-40%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(7.2mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1397(M-H)-.
[合成スキーム]
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-アラニル-L-グルタミナート
市販(和光純薬工業)のL-アラニル-L-グルタミン(263mg)と実施例74工程2で得られた化合物(250mg)を用いて、実施例74工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(90mg)を得た。
MS(ESI)m/z:716(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.59(0.8H,d,J=7.3Hz),8.48(0.2H,m),8.20-7.92(3H,m),7.70-7.25(9H,m),6.85(1H,brs),5.02(1H,d,J=13.9Hz),4.62(1H,m),4.33(1H,m),3.75-3.56(5H,m),2.80(4H,brs),2.64(1H,m),2.33-2.21(3H,m),2.15-2.03(2H,m),1.99-1.87(1H,m),1.83-1.76(1H,m),1.24-1.17(3H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム)N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-アラニル-N1-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-L-グルタムアミド
(薬物リンカー15)
実施例8工程8-2で得られた化合物(6.9mg)と上記工程1で得られた化合物(4.7mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル、アセトニトリル:20%-40%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(3.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1388(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.38-8.35(1H,m),8.02(1H,s),7.66-7.13(9H,m),6.33(1H,d,J=6.7Hz),6.14-6.10(1H,m),5.51-5.42(2H,m),5.14-5.06(1H,m),4.84-4.79(1H,m),4.53-3.64(14H,m),3.56-3.11(6H,m),3.15(12H,q,J=7.5Hz),2.92-2.69(4H,m),2.42-1.93(8H,m),1.45-1.24(3H,m),1.27(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-L-プロリナート
市販(Cool Pharm)の1-(tert-ブトキシカルボニル)-L-プロリル-L-プロリン(777mg)を用いて、実施例21工程1と同様の手法で反応を行い、1-[(2S)-ピロリジン-1-イウム-2-カルボニル]-L-プロリン トリフルオロアセテートの粗体を得た。この粗生成物と実施例74工程2で得られた化合物(428mg)を用いて、実施例74工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(238mg)を得た。
MS(ESI)m/z:711(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.12-8.08(1H,m),7.90(0.2H,s),7.82(0.8H,d,J=4.8Hz),7.70-7.61(2H,m),7.52-7.29(6H,m),5.07-5.01(1H,m),4.88-4.86(0.2H,m),4.77-4.74(0.2H,m),4.69-4.62(0.8H,m),4.60-4.56(0.8H,m),4.02-3.38(9H,m),2.79(4H,brs),2.68-2.58(1H,m),2.37-2.24(2H,m),2.16-1.73(9H,m).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-プロリル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]-L-プロリンアミド
(薬物リンカー16)
実施例8工程8-2で得られた化合物(6.9mg)と上記工程1で得られた化合物(4.6mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-40%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(5.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1383(M+H)+.
[合成スキーム]
[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メチル アセテート
市販(SUNDIA)のN-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシルグリシン(9.32g)を用いて、実施例67工程1と同様の手法で反応を行い、標題化合物(8.24g)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.14(1H,brs),5.27(2H,d,J=7.3Hz),5.20(1H,brs),4.22-4.16(2H,m),3.88(2H,d,J=6.0Hz),2.08(3H,s),1.04-0.97(2H,m),0.05(9H,s).
2’,3’,5’-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-ヒドロキシエチル)イノシン
文献既知(Chem.Pharm.Bull.1987,35(1),72-79)の2’,3’,5’-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]イノシン(31.3g)のテトラヒドロフラン(75mL)-N,N-ジメチルアセトアミド(75mL)混合溶液に、2-ブロモエタノール(4.82mL)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(7.65mL)を加え、室温で23時間攪拌した。反応液に、水と酢酸エチルを加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(29.4g)を得た。
MS(ESI)m/z:655(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.16(1H,s),7.99(1H,d,J=2.4Hz),5.97(1H,d,J=4.2Hz),4.40-4.25(3H,m),4.18-4.06(3H,m),4.03-3.92(2H,m),3.79(1H,dd,J=11.5,2.4Hz),3.08-2.83(1H,brm),0.96(9H,s),0.92(9H,s),0.82(9H,s),0.15(3H,s),0.14(3H,s),0.09(3H,s),0.08(3H,s),-0.02(3H,s),-0.15(3H,s).
2’,3’,5’-トリス-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)イノシン
上記工程2で得られた化合物(15.6g)のトルエン(46.8mL)溶液に上記工程1で得られた化合物(10.4g)とピリジン(9.63mL)を加え、110℃で12時間攪拌した。反応液に上記工程1で得られた化合物(3.46g)を追加し、110℃で1日間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とジクロロメタンを加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル]で精製し、標題化合物(20.6g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:885(M+H)+.
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)イノシン
上記工程3で得られた化合物(20.6g)のテトラヒドロフラン(50mL)溶液にトリエチルアミン三フッ化水素酸塩(10mL)を加え、室温で17時間攪拌した。氷冷下、反応液に1M炭酸水素トリエチルアンモニウム溶液(50mL)とトリエチルアミン(10mL)の混合液をゆっくり加えた後、反応液を減圧濃縮した。残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[水/アセトニトリル]で粗精製後、凍結乾燥した。得られた粗体をピリジンで共沸し、残留物のピリジン(50mL)溶液に、4,4’-ジメトキシトリチルクロリド(4.73g)を0℃で加え、4℃で17時間攪拌した。反応液にメタノール(2mL)を加え、室温で15分間攪拌後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン/酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(9.18g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:845(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.94(1H,s),7.88(1H,s),7.65(1H,brs),7.41-7.36(2H,m),7.32-7.15(7H,m),6.83-6.76(4H,m),5.96(1H,d,J=6.1Hz),5.73-5.65(2H,m),4.87-4.80(1H,m),4.76-4.61(2H,m),4.44-4.39(1H,m),4.35-4.30(1H,m),4.22-4.05(4H,m),3.83-3.73(2H,m),3.77(6H,s),3.72-3.67(2H,m),3.48-3.32(3H,m),0.99-0.91(2H,m),0.02(9H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)イノシン
上記工程4で得られた化合物(5.96g)を用いて、実施例5工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.33g)と標題化合物の位置異性体である5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)イノシン(2.45g)を得た。
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99(1H,s),7.93(1H,s),7.45-7.39(2H,m),7.35-7.18(7H,m),7.05(1H,brs),6.84-6.77(4H,m),5.92(1H,d,J=5.4Hz),5.46(1H,brs),4.71-4.61(3H,m),4.54-4.51(1H,m),4.22-4.10(5H,m),3.81-3.76(2H,m),3.78(3H,s),3.78(3H,s),3.74(2H,d,J=6.0Hz),3.48(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.26(1H,dd,J=10.9,4.2Hz),3.16(1H,d,J=6.7Hz),1.00-0.93(2H,m),0.89(9H,s),0.09(3H,s),0.02(9H,s),0.02(3H,s).
位置異性体(2’-O-TBS体)
MS(ESI)m/z:959(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.99(1H,s),7.91(1H,s),7.48-7.42(2H,m),7.37-7.18(8H,m),6.85-6.78(4H,m),5.96(1H,d,J=5.4Hz),5.63(1H,brs),4.88(1H,t,J=5.1Hz),4.66(2H,d,J=6.7Hz),4.36-4.32(1H,m),4.27-4.19(2H,m),4.18-4.10(3H,m),3.81-3.74(4H,m),3.78(3H,s),3.78(3H,s),3.50(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),3.38(1H,dd,J=10.9,3.6Hz),2.73(1H,d,J=4.2Hz),0.97-0.90(2H,m),0.86(9H,s),0.02(3H,s),0.01(9H,s),-0.09(3H,s).
5’-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-{(2-シアノエトキシ)[ジ(プロパン-2-イル)アミノ]ホスファニル}-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)イノシン
上記工程5で得られた化合物(2.33g)を用いて、実施例5工程4と同様の手法で反応を行い、標題化合物(2.72g)をリン原子上のジアステレオマー混合物(ジアステレオマー比=6:4)として得た。
MS(ESI)m/z:1159(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:8.03(0.4H,s),8.02(0.6H,s),7.95(0.6H,s),7.92(0.4H,s),7.46-7.40(2H,m),7.35-7.17(7H,m),6.88(1H,brs),6.84-6.78(4H,m),6.15(0.6H,d,J=4.2Hz),6.10(0.4H,d,J=4.8Hz),5.34(1H,brs),4.86-4.61(3H,m),4.48-4.42(1H,m),4.29-4.09(5H,m),3.83-3.44(9H,m),3.79(3H,s),3.78(3H,s),3.32-3.23(1H,m),2.58-2.49(1H,m),2.44-2.38(1H,m),1.15(3.6H,d,J=6.7Hz),1.11(6H,d,J=6.7Hz),1.04-0.92(2H,m),0.97(2.4H,d,J=6.7Hz),0.85(3.6H,s),0.84(5.4H,s),0.09(1.2H,s),0.06(1.8H,s),0.03(9H,s),0.00(3H,s).
実施例44工程8で得られた化合物(2.15g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と上記工程6で得られた化合物(2.72g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル (2-{[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-オキソ-2-スルファニル-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]アミノ}-2-オキソエチル)カルバメート
上記工程7で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.47g:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1278(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-7-[6-オキソ-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程8で得られた化合物(1.47g)のメタノール(10mL)-テトラヒドロフラン(10mL)混合溶液に、28%アンモニア水(10mL)を加え、50℃で6時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をC18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(204mg:不純物含有)とジアステレオマー2(205mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1121(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1121(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程9で得られた化合物(ジアステレオマー1)(204mg)を用いて、実施例11工程9-1と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-50%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(40.7mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:863(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(チオラート)
上記工程9で得られた化合物(ジアステレオマー2)(205mg)を用いて、実施例11工程9-1と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-50%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(50.8mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:863(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー17a:ジアステレオマー1)
上記工程10-1で得られた化合物(40.7mg)を用いて、実施例22工程9-1
と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:40%-90%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(25.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1411(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,s),8.09(1H,s),8.04(1H,s),7.57-7.49(2H,m),7.43-7.34(3H,m),7.32-7.08(9H,m),6.47(1H,d,J=16.9Hz),6.23(1H,d,J=7.9Hz),5.56-5.37(2H,m),5.31-5.17(1H,m),5.03(1H,d,J=13.9Hz),4.79(1H,d,J=4.2Hz),4.64-4.38(6H,m),4.36-4.21(4H,m),4.05-3.60(10H,m),3.53-3.42(3H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.01-2.92(1H,m),2.86-2.73(1H,m),2.70-2.54(2H,m),2.37-2.16(2H,m),2.06-1.77(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー17b:ジアステレオマー2)
上記工程10-2で得られた化合物(50.8mg)を用いて、実施例22工程9-1
と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:45%-90%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(23.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1411(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.67(1H,s),8.14(1H,s),8.02(1H,s),7.67-7.50(2H,m),7.43-7.36(3H,m),7.34-7.12(9H,m),6.48(1H,d,J=15.1Hz),6.26(1H,t,J=8.8Hz),5.60-5.31(3H,m),5.09-5.00(1H,m),4.61-4.22(9H,m),4.11-3.59(13H,m),3.50-3.44(2H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.04-2.93(1H,m),2.87-2.74(3H,m),2.39-2.22(2H,m),2.06-1.85(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)グリシンアミド
(薬物リンカー18)
実施例45工程7-2で得られた化合物(10.0mg)と実施例21工程3で得られた化合物(8.8mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-50%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:45%-90%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(10.9mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1381(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.61(1H,s),8.03(1H,s),8.02(1H,s),7.64-7.49(2H,m),7.44-7.37(3H,m),7.35-7.11(9H,m),6.48(1H,dd,J=15.1,1.8Hz),6.24(1H,d,J=8.5Hz),5.62-5.39(3H,m),5.03(1H,dd,J=18.4,14.2Hz),4.55-4.37(5H,m),4.29-4.18(2H,m),4.04-3.91(3H,m),3.87-3.52(8H,m),3.50-3.41(3H,m),3.19(12H,q,J=7.3Hz),3.18-3.10(1H,m),3.02-2.92(1H,m),2.86-2.66(3H,m),2.40-2.21(2H,m),2.06-1.84(3H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-({2-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)アミノ]-2-オキソエトキシ}メチル)グリシンアミド
(薬物リンカー19)
実施例45工程7-2で得られた化合物(20.0mg)と実施例66工程1で得られた化合物(19.8mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:20%-45%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:30%-80%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(22.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1468(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.66(1H,brs),8.10(1H,brs),8.04-7.96(1H,m),7.66-7.35(5H,m),7.33-7.12(9H,m),6.52-6.41(1H,m),6.28-6.22(1H,m),5.64-5.31(3H,m),5.07-4.99(1H,m),4.70-4.20(9H,m),4.11-3.51(14H,m),3.50-3.30(3H,m),3.27-3.10(1H,m),3.19(12H,q,J=7.3Hz),3.07-2.93(1H,m),2.89-2.65(3H,m),2.41-2.18(2H,m),2.05-1.82(2H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィドオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)グリシンアミド
(薬物リンカー20)
実施例59工程4-2で得られた化合物(25.0mg)と実施例21工程3で得られた化合物(25.8mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-50%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:50%-90%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(33.1mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1398(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,brs),8.39(1H,d,J=8.5Hz),8.00(1H,brs),7.71(1H,brs),7.64-7.49(2H,m),7.44-7.37(3H,m),7.32-7.10(8H,m),6.59(1H,d,J=15.1Hz),6.23(1H,d,J=8.5Hz),5.65-5.36(3H,m),5.03(1H,dd,J=16.6,14.2Hz),4.57-4.38(5H,m),4.30-4.17(2H,m),4.07-3.95(2H,m),3.94-3.50(9H,m),3.50-3.35(1H,m),,3.19(12H,q,J=7.3Hz),3.18-3.07(3H,m),3.04-2.73(4H,m),2.40-2.11(4H,m),2.05-1.92(1H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-({2-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィドオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エチル)アミノ]-2-オキソエトキシ}メチル)グリシンアミド
(薬物リンカー21)
実施例59工程4-2で得られた化合物(15.0mg)と実施例66工程1で得られた化合物(17.4mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-50%(0分-40分)]、及び分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:40%-90%(0分-40分)]で精製し、標題化合物(21.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1485(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.61(1H,brs),8.41-8.34(1H,m),8.10-8.05(1H,m),7.72-7.37(6H,m),7.32-7.12(8H,m),6.63-6.50(1H,m),6.27-6.22(1H,m),5.65-5.31(3H,m),5.07-4.94(1H,m),4.68-4.20(10H,m),4.11-3.53(14H,m),3.26-3.08(2H,m),3.19(12H,q,J=7.3Hz),3.06-2.67(4H,m),2.40-2.11(4H,m),2.05-1.88(1H,m),1.29(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(8,9-ジヒドロ-6-チア-2,3,5-トリアザベンゾ[cd]アズレン-2(7H)-イル)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィドオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]グリシンアミド
(薬物リンカー22)
実施例61工程4-2で得られた化合物(4.4mg)と実施例21工程3で得られた化合物(3.5mg)を用いて、実施例21工程4と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:25%-45%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(6.4mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1412(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.37(1H,d,J=1.2Hz),8.10-7.98(1H,m),7.75(1H,s),7.62-7.13(13H,m),6.59(1H,d,J=16.3Hz),6.01(1H,brs),5.82-5.62(1H,m),5.54-5.33(2H,m),5.04(1H,d,J=14.5Hz),4.57-3.48(14H,m),3.35-2.65(12H,m),3.17(12H,q,J=7.3Hz),2.35-2.11(4H,m),2.00-1.92(1H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
tert-ブチル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシナート
市販(BACHEM)のN-[(ベンジルオキシ)カルボニル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニン(5.00g)とグリシン tert-ブチルエステル塩酸塩(2.03g)のN,N-ジメチルホルミアミド(50mL)溶液に、氷冷下、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(4.11mL)と1‐エチル‐3‐(3‐ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(3.01g)を加え、室温まで昇温しながら終夜攪拌した。反応液をクロロホルムと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の二層に注ぎ、クロロホルムで抽出した。有機層を水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮後、トルエンで2回共沸した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(4.51g)を得た。
MS(ESI)m/z:527(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.40(1H,t,J=5.7Hz),8.15(1H,d,J=9.1Hz),8.00(1H,t,J=5.7Hz),7.51(1H,t,J=6.0Hz),7.38-7.16(10H,m),5.03(2H,s),4.52(1H,m),3.80-3.54(6H,m),3.05(1H,dd,J=13.9,3.6Hz),2.76(1H,dd,J=14.2,10.6Hz),1.41(9H,s).
tert-ブチル グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシナート
上記工程1で得られた化合物(4.51g)のメタノール(20mL)-ジクロロメタン(80mL)混合液に、10%パラジウム炭素(M)wet(750mg)を加え、水素雰囲気下、室温で終夜攪拌した。10%パラジウム炭素(M)wet(1.5g)を追加し、水素雰囲気下、室温で終夜攪拌した。反応液をセライトで濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(3.18g)を得た。
MS(ESI)m/z:393(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.42(1H,t,J=6.1Hz),8.20(1H,d,J=8.8Hz),8.00(1H,brs),7.28-7.16(5H,m),4.53(1H,m),3.78-3.73(3H,m),3.61(1H,brd,J=16.1Hz),3.06(3H,dd,J=15.4,5.6Hz),2.76(1H,dd,J=14.2,10.3Hz),1.88(2H,br),1.41(9H,s).
tert-ブチル N-[6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシナート
上記工程2で得られた化合物(2.65g)と市販(東京化成工業)の6-マレイミドヘキサン酸 N-スクシンイミジル(2.20g)をN,N-ジメチルホルミアミド(20mL)に溶解し、室温で7時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残留物をジクロロメタンと水の二層に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水で3回、飽和食塩水で1回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(3.52g)を得た。
MS(ESI)m/z:586(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.28-7.17(5H,m),7.09(1H,t,J=5.1Hz),6.96(1H,t,J=5.1Hz),6.91(1H,d,J=8.3Hz),6.68(2H,s),6.52(1H,t,J=4.9Hz),4.86(1H,q,J=7.3Hz),4.02-3.88(5H,m),3.82(1H,dd,J=18.1,4.9Hz),3.51(2H,t,J=7.1Hz),3.15(1H,dd,J=14.2,6.3Hz),3.04(1H,dd,J=13.7,7.3Hz),2.25(2H,t,J=7.6Hz),1.70-1.57(4H,m),1.45(9H,s),1.32(2H,s).
N-[6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシン
上記工程3で得られた化合物(1.00g)のジクロロメタン(9.0mL)溶液に、0℃でトリフルオロ酢酸(4.5mL)を加え、室温で2.5時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、トルエンで2回共沸した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[ジクロロメタン/メタノール]で精製し、標題化合物(534mg)を得た。
MS(ESI)m/z:530(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:12.59(1H,br),8.34(1H,t,J=5.9Hz),8.10(1H,d,J=8.8Hz),8.07(1H,t,J=5.9Hz),7.99(1H,t,J=5.6Hz),7.27-7.16(5H,m),7.00(2H,s),4.52(1H,m),3.76(2H,d,J=5.9Hz),3.74(1H,m),3.66(2H,d,J=5.4Hz),3.57(1H,dd,J=16.8,5.6Hz),3.36(2H,t,J=7.1Hz),3.04(1H,dd,J=13.9,4.1Hz),2.77(1H,dd,J=13.9,10.0Hz),2.10(2H,t,J=7.3Hz),1.51-1.43(4H,m),1.19(2H,m).
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル N-[6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニルグリシナート
上記工程4で得られた化合物(462mg)を用いて、実施例21工程3と同様の手法で反応を行い、標題化合物(258mg)を得た。
MS(ESI)m/z:627(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.70(0.85H,t,J=6.1Hz),8.44(0.15H,t,J=5.9Hz),8.17(0.85H,d,J=8.8Hz),8.11(0.15H,d,J=8.8Hz),8.06(1H,t,J=5.6Hz),7.99-7.95(1H,m),7.27-7.16(5H,m),6.99(2H,s),4.53(1H,m),4.28(1.7H,d,J=5.9Hz),3.85(0.3H,d,J=5.9Hz),3.74(1H,dd,J=17.1,5.9Hz),3.66(2H,d,J=5.9Hz),3.58(1H,dd,J=16.8,5.6Hz),3.36(2H,t,J=7.1Hz),3.04(1H,dd,J=13.9,4.1Hz),2.81(4H,brs),2.77(1H,dd,J=10.0,3.7Hz),2.10(2H,t,J=7.3Hz),1.51-1.44(4H,m),1.20(2H,d,J=7.3Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[2-({6-アミノ-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-15,16-ジヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2,10-ジスルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-9H-プリン-2-イル}アミノ)エチル]グリシンアミド
(薬物リンカー23)
実施例8工程8-2で得られた化合物(9.5mg)と上記工程5で得られた化合物(7.5mg)を用いて、実施例23工程1と同様の手法で反応を行った後、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-30%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(7.8mg)を得た。
MS(ESI)m/z:1299(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.35(1H,s),8.02(1H,s),7.29-7.15(6H,m),6.76(2H,s),6.32(1H,d,J=6.7Hz),6.11(1H,d,8.5Hz),5.48-5.36(2H,m),4.82-4.79(1H,m),4.50-4.25(6H,m),4.06-3.81(7H,m),3.61-3.37(9H,m),3.17-2.89(4H,m),3.14(12H,q,J=7.3Hz),2.21-1.96(4H,m),1.58-1.48(4H,m),1.30-1.21(2H,m),1.27(18H,t,J=7.3Hz).
抗HER2抗体2-[SG-(N3)2]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-抗HER2抗体2の調製
市販のPERJETA(登録商標)点滴静注420mg/14mL(中外製薬)(3.5mL)を共通操作Cに従ってバッファー交換し、リン酸緩衝生理食塩水溶液(6.0mL,15.39mg/mL,pH6.0)得た。実施例25工程1と同様の操作を行い、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(12.96mg/mL,7.5mL,pH6.0)を得た。
抗HER2抗体2-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(12.96mg/mL,7.5mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(22.5mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(10.21mg/mL,9.0mL,pH6.0)を得た。
改変抗HER2抗体2-[SG-(N3)2]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-改変抗HER2抗体2の調製
参考例5に従って調製した改変抗HER2抗体2のリン酸緩衝生理食塩水溶液(24mL,12.25mg/mL,pH6.0)を用いて、実施例25工程1と同様の操作を行い、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(20.86mg/mL,12.5mL,pH6.0)を得た。
改変抗HER2抗体2-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(20.86mg/mL,12.5mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(52mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(10.87mg/mL,22mL,pH6.0)を得た。
抗CD33抗体-[SG-(N3)2]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-抗CD33抗体の調製
参考例6に従って調製した抗CD33抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(9.0mL,11.56mg/mL,pH6.0)を用いて、実施例25工程1と同様の操作を行い、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(11.62mg/mL,8mL,pH6.0)を得た。
抗CD33抗体-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(11.62mg/mL,8mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(21.5mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(10.01mg/mL,8mL,pH6.0)を得た。
抗EphA2抗体-[SG-(N3)2]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-抗EphA2抗体の調製
参考例7に従って調製した抗EphA2抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(8.0mL,12.83mg/mL,pH6.0)を用いて、実施例25工程1と同様の操作を行い、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(13.51mg/mL,7mL,pH6.0)を得た。
抗EphA2抗体-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(13.51mg/mL,7mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(21.7mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(8.91mg/mL,7.5mL,pH6.0)を得た。
抗CDH6抗体-[SG-(N3)2]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-抗CDH6抗体の調製
参考例8に従って調製した抗CDH6抗体のHBSor(25mMヒスチジン/5%ソルビトール,pH=6.0)緩衝液(5.0mL,20.0mg/mL)を共通操作Cに従って、リン酸緩衝生理食塩水溶液(pH=6.0)へとバッファー交換後、実施例25工程1と同様の操作を行い、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(9.58mg/mL,9.0mL,pH6.0)を得た。
抗CDH6抗体-[SG-(N3)2]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(9.58mg/mL,9.0mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]2-SG(10)Ox(24.5mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(10.69mg/mL,7.5mL,pH6.0)を得た。
改変抗HER2抗体2-[MSG1-(N3)]2の調製
[合成スキーム]
(Fucα1,6)GlcNAc-改変抗HER2抗体2の調製
実施例85工程1と同様の反応を行い、原料抗体の緩衝溶液(10mL,12.25mg/mL,pH6.0)から、標題抗体の20mMリン酸緩衝溶液(14.84mg/mL,7.5mL,pH6.0)を得た。
改変抗HER2抗体2-[MSG1-(N3)]2の調製
上記工程1で得られた抗体の20mMリン酸緩衝溶液(14.84mg/mL,7.5mL,pH6.0)と[N3-PEG(3)]-MSG1(9)-Ox(WO2018/003983の化合物1-11)(19mg)を用いて、実施例25工程2と同様の操作を行い、標題抗体のリン酸緩衝生理食塩水溶液(10.48mg/mL,9.25mL,pH6.0)を得た。
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.97mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー1のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.091mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.159mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.49mg/mL
抗体収量:1.71mg(31%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.97mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.091mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.159mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.91mg/mL
抗体収量:3.17mg(58%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,4.00mL)をプロピレングリコール(2.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.707mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(1.293mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(24.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.96mg/mL
抗体収量:23.57mg(59%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,4.00mL)をプロピレングリコール(2.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー5のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.707mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(1.293mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(24.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.10mg/mL
抗体収量:26.86mg(67%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,4.00mL)をプロピレングリコール(2.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー6のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.707mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(1.293mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(24.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.34mg/mL
抗体収量:32.92mg(82%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体2のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.55mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.087mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.163mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.88mg/mL
抗体収量:3.08mg(62%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体6のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(8.91mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.073mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.177mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びFに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.60mg/mL
抗体収量:2.10mg(47%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体5のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.01mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.083mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.167mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.73mg/mL
抗体収量:2.57mg(51%)
薬物平均結合数:3.9
糖鎖リモデリング抗体7のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.69mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー2bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.96mg/mL
抗体収量:3.37mg(63%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体3のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.21mg/mL,1.50mL)をプロピレングリコール(0.750mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー3のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.253mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.497mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(9.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.02mg/mL
抗体収量:9.73mg(64%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー8のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.93mg/mL
抗体収量:3.24mg(61%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.35mg/mL,13.50mL)をプロピレングリコール(6.750mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー9のジメチルスルホキシド溶液(10mM,2.310mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(4.440mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(74.3mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.36mg/mL
抗体収量:100.8mg(72%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー10のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.63mg/mL
抗体収量:2.22mg(42%)
薬物平均結合数:3.5
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー11のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.94mg/mL
抗体収量:3.29mg(62%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー12のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.92mg/mL
抗体収量:3.20mg(60%)
薬物平均結合数:3.5
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー13のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.01mg/mL
抗体収量:3.52mg(66%)
薬物平均結合数:3.5
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー14のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.78mg/mL
抗体収量:2.74mg(51%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー15のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.32mg/mL
抗体収量:4.61mg(86%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー16のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.088mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.162mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.93mg/mL
抗体収量:3.25mg(61%)
薬物平均結合数:3.6
糖鎖リモデリング抗体1のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.70mg/mL,4.00mL)をプロピレングリコール(2.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー7のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.707mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(1.293mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(24.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.33mg/mL
抗体収量:32.64mg(82%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.87mg/mL,8.00mL)をプロピレングリコール(4.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー17aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,1.079mL,抗体1分子に対して18当量)とプロピレングリコール(2.921mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(44.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.16mg/mL
抗体収量:51.5mg(59%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.87mg/mL,8.00mL)をプロピレングリコール(4.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー17bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,1.079mL,抗体1分子に対して18当量)とプロピレングリコール(2.921mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(44.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.24mg/mL
抗体収量:54.99mg(63%)
薬物平均結合数:3.9
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー19のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.180mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.320mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.79mg/mL
抗体収量:5.53mg(51%)
薬物平均結合数:3.9
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー21のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.180mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.320mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.84mg/mL
抗体収量:5.91mg(54%)
薬物平均結合数:3.9
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー22のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.180mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.320mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(5.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.92mg/mL
抗体収量:4.60mg(42%)
薬物平均結合数:3.5
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー18のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.180mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.320mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.08mg/mL
抗体収量:7.53mg(69%)
薬物平均結合数:3.9
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー20のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.180mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.320mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.09mg/mL
抗体収量:7.62mg(70%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体8のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.48mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー17aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.087mL,抗体1分子に対して12当量)とプロピレングリコール(0.413mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.77mg/mL
抗体収量:5.36mg(51%)
薬物平均結合数:1.8
糖鎖リモデリング抗体8のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.48mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー17bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.087mL,抗体1分子に対して12当量)とプロピレングリコール(0.413mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.91mg/mL
抗体収量:6.34mg(61%)
薬物平均結合数:1.8
参考例1に従って調製した抗HER2抗体のリン酸緩衝溶液を、共通操作Cに従ってバッファー交換し、リン酸緩衝生理食塩水/5mM-EDTAの抗体溶液(7.69mg/mL)を調製した。この抗体溶液(0.65mL)にトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩の水溶液(10mM,20.7μL)とリン酸水素二カリウム水溶液(1M,9.8μL)を加えた。反応液のpHが7.4±1.0以内であることを確認した後、37℃で2時間攪拌した。薬物リンカー23のDMSO溶液(10mM,0.0689mL)を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で1時間反応させた。反応液にN-アセチル-L-システイン水溶液(100mM,6.9μL)を加えて反応を停止した。反応液を共通操作Cに記載の方法に従ってバッファー交換し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(1.6mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.46mg/mL
抗体収量:2.34mg(47%)
薬物平均結合数:6.5
[合成スキーム]
実施例44工程8で得られた化合物(1.55g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例77工程6で得られた化合物(1.96g)を用いて、実施例1工程8と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル (2-{[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-ヒドロキシ-2-オキソ-10-スルファニリデンオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]アミノ}-2-オキソエチル)カルバメート
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例62工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.07g:不純物含有)をリン原子上のジアステレオマー混合物として得た。
MS(ESI)m/z:1262(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-7-[6-オキソ-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オラート
上記工程2で得られた(1.07g)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール(1:1),アセトニトリル-メタノール(1:1):25%-90%(0分-40分)]で精製し、標題化合物のジアステレオマー1(67.8mg:不純物含有)とジアステレオマー2(56.6mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1105(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1105(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オラート
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー1)(67.8mg)を用いて、実施例11工程9-1と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール(1:1),アセトニトリル-メタノール(1:1):10%-60%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(33.7mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2-オラート
上記工程3で得られた化合物(ジアステレオマー2)(56.6mg)を用いて、実施例11工程9-1と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール(1:1),アセトニトリル-メタノール(1:1):10%-60%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(32.6mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2-オキシド-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(ジアステレオマー1)
上記工程4-1で得られた化合物(33.7mg)と実施例22工程11で得られた化合物(21.3mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(11.2mg)を得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:40%-90%(0分-40分)].
MS(ESI)m/z:1395(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.57-8.54(1H,m),8.16-8.10(1H,m),8.04(1H,s),7.64-7.49(2H,m),7.44-7.34(3H,m),7.33-7.11(9H,m),6.46(1H,d,J=18.1Hz),6.26(1H,d,J=8.5Hz),5.54-5.30(2H,m),5.18-5.00(2H,m),4.75-4.71(1H,m),4.65-4.20(10H,m),4.13-3.93(2H,m),3.88-3.60(8H,m),3.55-3.40(2H,m),3.26-3.15(1H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.02-2.91(1H,m),2.87-2.61(3H,m),2.38-2.18(2H,m),2.06-1.80(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2-オキシド-2,10-ジオキソ-10-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(ジアステレオマー2)
上記工程4-2で得られた化合物(32.6mg)と実施例22工程11で得られた化合物(20.6mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(16.7mg)を得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]、分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/メタノール,メタノール:40%-90%(0分-40分)]、及び分取HPLC[100mMヘキサフルオロ-2-プロパノール,8mMトリエチルアミン水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-45%(0分-40分)].
MS(ESI)m/z:1395(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,s),8.17-8.13(1H,m),8.02(1H,s),7.64-7.50(2H,m),7.42-7.35(4H,m),7.32-7.12(8H,m),6.49(1H,d,J=16.3Hz),6.27(1H,dd,J=8.2,6.3Hz),5.50-5.21(3H,m),5.08-5.00(1H,m),4.66-4.23(9H,m),4.14-3.98(3H,m),3.91-3.52(9H,m),3.48-3.41(2H,m),3.23-3.12(1H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.03-2.94(1H,m),2.85-2.75(3H,m),2.40-2.23(2H,m),2.06-1.87(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
N,N-ジエチルエタンアミニウム 6-ベンゾイル-2-{5-O-[ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メチル]-2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[オキシド(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
実施例44工程7で得られた化合物(1.49g)のピリジン(10.4mL)溶液に、氷冷下で亜リン酸ジフェニル(599μL)を加え、室温まで昇温して30分間攪拌した。亜リン酸ジフェニル(200μL)を追加して、更に2時間攪拌した。氷冷下、反応液に水(1.5mL)を加え、室温で30分間攪拌した後、減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[酢酸エチル/メタノール/0.1%トリエチルアミン]で精製し、標題化合物(1.41g)を得た。
MS(ESI)m/z:779(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.01(1H,s),7.54(1H,s),7.42-7.39(2H,m),7.32-7.19(10H,m),7.14-7.09(2H,s),6.84(1H,dd,J=628.7,1.8Hz),6.83-6.79(4H,m),6.53(1H,dd,J=17.5,1.8Hz),5.54(1H,ddd,J=52.1,4.0,2.0Hz),5.37-5.27(1H,m),4.31-4.21(3H,m),3.55(1H,dd,J=11.2,2.1Hz),3.38(1H,dd,J=10.9,3.0Hz),3.34(6H,s),3.19(6H,q,J=7.5Hz),2.84-2.69(2H,m),2.18-2.12(2H,m),1.29(9H,t,J=7.3Hz).
6-ベンゾイル-2-{2-デオキシ-2-フルオロ-3-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-β-D-リボフラノシル}-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン
上記工程1で得られた化合物(1.41g)のジクロロメタン(20.0mL)溶液に、水(289μL)とジクロロ酢酸(1.14mL)のジクロロメタン(20.0mL)溶液を加え、室温で10分間攪拌した。反応液にピリジン(2.19mL)を加えて反応を停止した後、減圧濃縮した。残留物にトリフルオロ酢酸ピリジン塩(402mg)を加え、脱水アセトニトリル(15mL)で3回共沸し、最後の1回は10mL程度のアセトニトリルを残した。得られたアセトニトリル溶液をそのまま次の反応に用いた。
MS(ESI)m/z:477(M+H)+.
実施例77工程6で得られた化合物(2.15g)と上記工程2で得られた化合物のアセトニトリル溶液を用いて、実施例63工程1と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル (2-{[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-2-スルファニルオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]アミノ}-2-オキソエチル)カルバメート
上記工程3で得られた粗生成物を用いて、実施例1工程9と同様の手法で反応を行い、標題化合物(1.00g:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1262(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-15-フルオロ-2,10-ジオキソ-7-[6-オキソ-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル]-2-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-オラート
上記工程4で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行い、標題化合物のジアステレオマー1(191mg:不純物含有)とジアステレオマー2(369mg:不純物含有)を得た。
ジアステレオマー1(低極性)
MS(ESI)m/z:1105(M+H)+.
ジアステレオマー2(高極性)
MS(ESI)m/z:1105(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-オラート
上記工程5で得られた化合物(ジアステレオマー1)(191mg)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(21.9mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.39(1H,s),8.03(1H,s),7.71(1H,s),7.24(1H,s),6.45(1H,d,J=17.5Hz),6.15(1H,d,J=8.5Hz),5.79-5.65(2H,m),5.46-5.36(1H,m),4.63-4.23(9H,m),4.01-3.95(1H,m),3.65-3.57(2H,m),3.52-3.37(5H,m),3.15(12H,q,J=7.3Hz),2.76-2.68(1H,m),2.39-2.30(1H,m),1.92-1.82(2H,m),1.28(18H,t,J=7.6Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-2-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-10-オラート
上記工程5で得られた化合物(ジアステレオマー2)(369mg)を用いて、実施例40工程5と同様の手法で反応を行い、標題化合物(137mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:847(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.96(1H,s),8.14(1H,s),8.02(1H,s),7.04(1H,s),6.46(1H,d,J=19.3Hz),6.28(1H,d,J=8.5Hz),5.61(1H,dd,J=52.0,4.2Hz),5.38-5.23(2H,m),4.69-4.63(2H,m),4.56(1H,d,J=10.3Hz),4.39-4.30(4H,m),4.26-4.17(3H,m),3.97-3.91(1H,m),3.84-3.72(2H,m),3.52-3.46(2H,m),3.32-3.25(2H,m),2.97(12H,q,J=7.3Hz),2.74-2.63(2H,m),2.03-1.84(2H,m),1.21(18H,t,J=7.3Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-10-オキシド-2,10-ジオキソ-2-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー25a:ジアステレオマー1)
上記工程6-1で得られた化合物(21.9mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物(26.3mg)を得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-50%(0分-30分)]及びSep-Pak(登録商標) C18[水/アセトニトリル/0.1%トリエチルアミン].
MS(ESI)m/z:1395(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.58(1H,d,J=4.2Hz),8.08-8.02(2H,m),7.64-7.13(14H,m),6.46(1H,d,J=18.1Hz),6.26-6.21(1H,m),5.45(1H,d,J=53.2Hz),5.35-5.18(2H,m),5.07-5.01(1H,m),4.62-4.13(10H,m),4.09-3.90(2H,m),3.87-3.43(11H,m),3.21-3.09(1H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.00-2.89(1H,m),2.83-2.52(3H,m),2.37-2.21(2H,m),2.03-1.79(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-10-オキシド-2,10-ジオキソ-2-スルフィド-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
(薬物リンカー25b:ジアステレオマー2)
上記工程6-2で得られた化合物(47.5mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製し、標題化合物(15.1mg)を得た。
[精製条件]分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:30%-50%(0分-30分)]及びSep-Pak(登録商標) C18[水/アセトニトリル/0.1%トリエチルアミン].
MS(ESI)m/z:1395(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.99(1H,d,J=3.6Hz),8.14(1H,d,J=1.8Hz),8.02-8.00(1H,m),7.64-7.13(13H,m),7.01-6.98(1H,m),6.47(1H,dd,J=19.0,2.7Hz),6.27(1H,dd,J=8.5,4.2Hz),5.67-5.52(1H,m),5.37-5.16(2H,m),5.08-5.01(1H,m),4.67-4.14(11H,m),4.10-3.61(10H,m),3.47-3.42(2H,m),3.17-3.10(1H,m),3.15(12H,q,J=7.5Hz),3.00-2.92(1H,m),2.84-2.75(1H,m),2.63-2.54(2H,m),2.32-2.20(2H,m),2.03-1.79(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
[合成スキーム]
実施例77工程6で得られた化合物(1.26g)を用いて、実施例1工程7と同様の手法で反応を行い、3’-O-[tert-ブチル(ジメチル)シリル]-2’-O-[ヒドロキシ(オキソ)-λ5-ホスファニル]-1-(2-{[(N-{[2-(トリメチルシリル)エトキシ]カルボニル}グリシル)アミノ]メトキシ}エチル)イノシンのアセトニトリル溶液を得た。得られたアセトニトリル溶液と実施例44工程8で得られた化合物(1.00g)を用いて、実施例63工程1と同様の手法で反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
2-(トリメチルシリル)エチル (2-{[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]アミノ}-2-オキソエチル)カルバメート
上記工程1で得られた粗生成物を用いて、実施例62工程2と同様の手法で反応を行い、標題化合物(678mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1246(M+H)+.
2-(トリメチルシリル)エチル (2-{[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ベンゾイル-6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)-16-{[tert-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-10-(2-シアノエトキシ)-15-フルオロ-2-ヒドロキシ-2,10-ジオキソオクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]アミノ}-2-オキソエチル)カルバメート
上記工程2で得られた化合物(678mg)を用いて、実施例1工程10と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):25%-90%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(99.6mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:1089(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,16R)-15-フルオロ-7-(1-{2-[(グリシルアミノ)メトキシ]エチル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-2,10-ビス(オラート)
上記工程3で得られた化合物(99.6mg)を用いて、実施例11工程9-1と同様の手法で反応を行った後、C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル-メタノール溶液(1:1),アセトニトリル-メタノール溶液(1:1):10%-60%(0分-30分)]で精製し、標題化合物(60.8mg:不純物含有)を得た。
MS(ESI)m/z:831(M+H)+.
ビス(N,N-ジエチルエタンアミニウム) N-[4-(11,12-ジデヒドロジベンゾ[b,f]アゾシン-5(6H)-イル)-4-オキソブタノイル]グリシルグリシル-L-フェニルアラニル-N-[(2-{9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-フルオロ-16-ヒドロキシ-2,10-ジオキシド-2,10-ジオキソ-14-(6,7,8,9-テトラヒドロ-2H-2,3,5,6-テトラアザベンゾ[cd]アズレン-2-イル)オクタヒドロ-2H,10H,12H-5,8-メタノ-2λ5,10λ5-フロ[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]ペンタオキサジホスファシクロテトラデシン-7-イル]-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-1-イル}エトキシ)メチル]グリシンアミド
上記工程4で得られた化合物(60.8mg)と実施例22工程11で得られた化合物(21.3mg)を用いて、実施例22工程9-1と同様の手法で反応を行った後、以下の[精製条件]で精製を行い、標題化合物(30.5mg)を得た。
[精製条件]C18シリカゲルカラムクロマトグラフィー[10mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液/アセトニトリル]と分取HPLC[100mMヘキサフルオロ-2-プロパノール,8mMトリエチルアミン水溶液/アセトニトリル,アセトニトリル:10%-45%(0分-40分)].
MS(ESI)m/z:1379(M+H)+.
1H-NMR(CD3OD)δ:8.56(1H,s),8.16-8.10(1H,m),8.05(1H,s),7.63-7.49(2H,m),7.45-7.35(3H,m),7.33-7.12(9H,m),6.45(1H,d,J=18.3Hz),6.27(1H,d,J=9.8Hz),5.55-4.99(4H,m),4.65-4.42(5H,m),4.38-4.01(8H,m),3.89-3.60(9H,m),3.52-3.42(2H,m),3.18(12H,q,J=7.3Hz),3.00-2.91(1H,m),2.87-2.60(3H,m),2.38-2.19(2H,m),2.04-1.81(3H,m),1.28(18H,t,J=7.3Hz).
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.87mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー24aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.135mL,抗体1分子に対して18当量)とプロピレングリコール(0.365mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びFに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.08mg/mL
抗体収量:7.54mg(69%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.87mg/mL,1.00mL)をプロピレングリコール(0.500mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー24bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.135mL,抗体1分子に対して18当量)とプロピレングリコール(0.365mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(7.0mL)を得た。
共通操作E及びFに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.12mg/mL
抗体収量:7.85mg(72%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.87mg/mL,2.00mL)をプロピレングリコール(1.00mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー26のジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.270mL,抗体1分子に対して18当量)とプロピレングリコール(0.730mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(14.0mL)を得た。
共通操作E及びFに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.05mg/mL
抗体収量:14.71mg(68%)
薬物平均結合数:3.8
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,3.00mL)をプロピレングリコール(1.50mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー25aのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.540mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.960mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で3日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(19mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:1.38mg/mL
抗体収量:26.28mg(80%)
薬物平均結合数:3.7
糖鎖リモデリング抗体4のリン酸緩衝生理食塩水(pH6.0)溶液(10.89mg/mL,0.500mL)をプロピレングリコール(0.250mL)で希釈した。この溶液に薬物リンカー25bのジメチルスルホキシド溶液(10mM,0.090mL,抗体1分子に対して24当量)とプロピレングリコール(0.160mL)の混合液を加え、チューブローテーター(MTR-103,アズワン株式会社)を用いて室温で2日間反応させた。反応液を共通操作Dに記載の方法に従って精製し、目的とする抗体薬物コンジュゲートのABS溶液(3.5mL)を得た。
共通操作E及びGに記載の方法に従って分析し、下記の結果を得た。
抗体濃度:0.93mg/mL
抗体収量:3.25mg(60%)
薬物平均結合数:3.5
本明細書において、「トラスツズマブ」はHERCEPTIN(登録商標)、huMAb4D5-8、rhuMAb4D5-8と呼ばれることもあり、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号2に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を有するヒト化IgG1抗体である。アミノ酸配列はUS5821337を参照した。トラスツズマブの軽鎖アミノ酸配列(配列番号1)及び重鎖アミノ酸配列(配列番号2)を図4に示す。
抗LPS抗体はWO2015/046505を参照して作製した。本実施例で使用した抗LPS抗体は、アイソタイプがIgG1であり、LALA変異を有する(本明細書中、改変抗LPS抗体ともいう)。本実施例で使用した改変抗LPS抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を配列番号26及び配列番号27に示す。
本明細書で、リファレンス化合物として使用したML-RR-CDA・2Na+は、特許文献3(WO2014/189805)に記載された方法に従って合成した。
本明細書で、リファレンス化合物として使用した2’,3’-cGAMPは、cGASを用いてATPとGTPから酵素的に合成した。cGASの調製及び酵素反応は、文献記載の方法(Immunity,2013,39,1019-1031、Cell Rep.2014,6,421-430)を適宜改変して実施した。精製は、弱塩基性陰イオン交換樹脂(DIAION WA10)及び合成吸着剤(SEPABEADS SP207SS)を用いたカラムクロマトグラフィーにより実施した。
「ペルツズマブ」はPERJETA(登録商標)と呼ばれることもあり、配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号29に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を有するヒト化IgG1抗体である。アミノ酸配列はWO2004/008099を参照した。本明細書では抗HER2抗体2ともいう。ペルツズマブの軽鎖アミノ酸配列(配列番号28)及び重鎖アミノ酸配列(配列番号29)を図17に示す。
抗CD33抗体はWO2014/057687を参照して作製した。本実施例で使用した抗CD33抗体は、アイソタイプがIgG1であり、LALA変異を有する。本実施例で使用した抗CD33抗体の軽鎖アミノ酸配列(配列番号31)及び重鎖アミノ酸配列(配列番号32)を図19に示す。
抗EphA2抗体はWO2009/028639を参照して作製した。本実施例で使用した抗EphA2抗体は、アイソタイプがIgG1である。本実施例で使用した抗EphA2抗体の軽鎖アミノ酸配列(配列番号33)及び重鎖アミノ酸配列を(配列番号34)を図20に示す。
抗CDH6抗体はWO2018/212136を参照して作製した。本実施例で使用した抗CDH6抗体は、アイソタイプがIgG1であり、LALA変異に加え、重鎖アミノ酸配列のEUインデックス329番目のプロリン(P)をグリシン(G)にした変異を有する。本実施例で使用した抗CDH6抗体の軽鎖アミノ酸配列(配列番号35)及び重鎖アミノ酸配列を(配列番号36)を図に21示す。
<レポータージーンアッセイ>
ヒトSTINGアゴニスト活性は、STING経路の下流にあるインターフェロン制御因子3(interferon regulatory factor-3(IRF3))の経路の活性化を確認できるTHP1-DualTM細胞(HAQ変異型)(InvivoGen,CA,US)を用いて評価した。マウスSTINGアゴニスト活性はRAW-DualTM細胞(InvivoGen)を用いて評価した。
ヒトSTING(本明細書中、ヒトTMEM173と称することもある)の哺乳動物細胞発現用プラスミドは、232番目のアルギニン(R)がヒスチジン(H)に変異した(本明細書中、H232変異又はREF変異という)ヒトTMEM173 cDNA Clone(Accession NM_198282.3,H232(REF)変異型STING発現プラスミド)(GeneCopoeia,MD,US)を購入した。ヒトH232(REF)変異型STINGのアミノ酸配列を配列番号4に、ヌクレオチド配列を配列番号5に示す。また、H232変異型STING発現プラスミドを鋳型とし、Inverse PCR法に基づく部位特異的変異導入を行って野生型STINGおよび変異型STINGの発現プラスミドを作製した。詳細には、先ず2種類のPrimer(5’-CGTGCTGGCATCAAGGATCGGGTTTAC-3’(H232R(WT)fwd)(配列番号12)及び5’-GTCACCGGTCTGCTGGGGCAGTTTATC-3’(H232R(WT)rev))(配列番号13)とKOD-Plus-Mutagenesis Kit(SMK-101)(東洋紡)を用いてPCRを実施し、DNAシーケンシングにより目的の野生型(R232)STING発現プラスミドの構築を確認した。ヒト野生型STINGのアミノ酸配列を配列番号6に、ヌクレオチド配列を配列番号7に示す。
ヒトSTING C末結合ドメイン(aa139-342)蛋白質(UniProt entry Q86WV6)cDNAは、全長のヒトTMEM173 cDNA clone発現プラスミド(野生型、H232変異型およびHAQ変異型)から2種類のPrimer(5’-ACCTGTATTTTCAGGGCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTG-3’(hST Fw_v2)(配列番号20)及び5’-CAGAATTCGCAAGCTTTTAAGTAACCTCTTCCTTTTCCTCCTGC-3’(hST Rv_V3)(配列番号21))を用いたPCRで作製した。PCR産物は、N末にヒスチジン6塩基からなる6xHisタグ、Avidinタグ及びTEVプロテアーゼ切断サイトを有するよう、In-Fusion HD Cloning Kit(タカラバイオ)を使用して大腸菌発現用ベクターであるpET15bへ挿入し、pET15b-HisAviTEV-hSTING(139-342)ヒト野生型、pET15b-HisAviTEV-hSTING(139-342)ヒトREF変異型及びpET15b-HisAviTEV-hSTING(139-342)ヒトAQ変異型の発現プラスミドを構築した。
作製した各pET15b-HisAviTEV-hSTING(139-342)(ヒト野生型、ヒトREF変異型及びヒトAQ変異型のSTING C末結合ドメイン蛋白質)発現プラスミド及びpET15b-HisAviTEV-mSTING(138-341)(マウス野生型のSTING C末結合ドメイン蛋白質)発現プラスミドはそれぞれpCDF_Duet-1 BirA(1-321)発現プラスミドと同時にCompetent E.coli Rosetta 2(DE3)(Merck Millipore,MA,US)に形質転換し、各HisAviTEV-STING発現株を作製した。これらの発現株を100μg/mLアンピシリン、50μg/mL ストレプトマイシン、及び30μg/mL カナマイシンを含むTB培地に添加し、37℃で培養後、100μM IPTGで誘導発現しさらに16℃で培養した。
STING C末結合ドメイン蛋白質への化合物の結合性は、蛋白質の熱変性温度の上昇を指標とするProtein thermal shift assayにより行った。
マウス:5週齢の雌性BALB/cマウス(BALB/cAnNCrlCrlj)(日本チャールス・リバー)を実験使用前にSPF条件下で4日間以上馴化した。
腫瘍体積(mm3)=0.5×長径(mm)×[短径(mm)]2
試験化合物は生理食塩水(大塚製薬工場)によって希釈して使用した。投与の際は50μLを腫瘍内投与した。
結果を図7aおよび図7bに示す。図中の黒四角線はビヒクル群、白四角線は化合物番号6a投与群、白逆三角線は化合物番号8b投与群、白丸線は化合物番号9b投与群を示す。縦軸は腫瘍体積(mm3)、横軸は腫瘍移植後の日数を示している。ビヒクル群は腫瘍の増殖が進行した。これに対し、化合物投与群では腫瘍の増殖が著しく抑制された。
American Type Culture Collection社より購入したマウス大腸がん細胞株CT26.WT(CRL2638)にヒトHER2遺伝子を導入したCT26.WT-hHER2細胞を作成した。詳細には、ヒトHER2のcDNAを含むプラスミド(Clone ID IOH82145; Thermo Fisher Scientific)を用いてcDNAを増幅し、これをIn-Fusion HD Cloning Kit(Clontech)を用いてpQCXINレトロウイルスベクター(タカラバイオ)に挿入した。ヒトHER2挿入pQCXINレトロウイルスベクターをEcoPack2-293細胞株(タカラバイオ)にLipofectamine 3000(Thermo Fisher Scientific)を用いて導入し、上澄を回収してCT26.WTに感染させた。細胞は250μg/mL Geneticin(Thermo Fisher Scientific)添加培地で維持した。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、6日後に無作為に群分けを実施した。各抗体-CDNコンジュゲートは30μgの用量で、Day6に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は6匹又は8匹とした。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、7日後に無作為に群分けを実施した。抗体-CDNコンジュゲート(19)は30μgの用量で、Day7に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は6匹とした。
結果を図10に示す。図中の黒四角線はビヒクル群、白三角線は抗HER2抗体-CDNコンジュゲート(19)投与群を示す。抗HER2抗体-CDNコンジュゲート(19)は薬物リンカーがシステインコンジュゲーションで抗体に結合されている。縦軸は腫瘍体積(mm3)、横軸は腫瘍移植後の日数を示している。ビヒクル群は腫瘍の増殖が進行した。これに対し、抗HER2抗体-CDNコンジュゲート(19)投与群では腫瘍の増殖が著しく抑制された。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、6日後に無作為に群分けを実施した。各抗体-CDNコンジュゲートは30μgの用量で、Day6に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は5匹とした。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、7日後に無作為に群分けを実施した。各投与検体は、Day7に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は5匹とした。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、7日後に無作為に群分けを実施した。各抗体-CDNコンジュゲートは30μgの用量で、Day7に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は5匹又は6匹とした。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、7日後に無作為に群分けを実施した。各抗体-CDNコンジュゲートは60μgの用量で、Day7に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は5匹とした。
American Type Culture Collection社より購入したマウス大腸がん細胞株CT26.WT(CRL2638)にヒトEphA2遺伝子を導入したCT26.WT-hEphA2細胞を作成した。詳細には、ヒトEphA2のcDNAを含むpDONR221(Thermo Fisher Scientific)を用いてcDNAを増幅し、これをGateway vector conversion system(Thermo Fisher Scientific)を用いてpLNCXレトロウイルスベクター(タカラバイオ)に挿入した。ヒトEphA2挿入pLNCXレトロウイルスベクターをEcoPack2-293細胞株(タカラバイオ)にLipofectamine 2000(Thermo Fisher Scientific)を用いて導入し、上澄を回収してCT26.WTに感染させた。細胞は500μg/mL Geneticin(Thermo Fisher Scientific)添加培地で維持した。
American Type Culture Collection社より購入したマウスリンパ球様細胞株P388D1(CCL-46)にヒトCD33遺伝子を導入したP388D1-hCD33細胞を作成した。詳細には、ヒトCD33のcDNAを挿入したpLVSINレンチウイルスベクター(タカラバイオ)を作成し、Lenti-X293T細胞株(タカラバイオ)にLentiviral High Titer Packaging Mix(タカラバイオ)を用いて導入し、上澄を回収してP388D1に感染させた。細胞は2μg/mL Puromycin(Thermo Fisher Scientific)添加培地で維持した。
CT26.WT-hHER2細胞を生理食塩水に懸濁し、5.0×106細胞をBALB/cマウスの右腋窩部に皮下移植し(Day0)、7日後に無作為に群分けを実施した。各抗体-CDNコンジュゲートは60μgの用量で、Day7に計1回尾静脈内投与した。またビヒクル群として酢酸塩緩衝液を投与する群を設定した。各群のマウス匹数は6匹とした。
配列番号1:トラスツズマブの軽鎖のアミノ酸配列
配列番号2:トラスツズマブの重鎖のアミノ酸配列
配列番号3:改変抗HER2抗体の重鎖のアミノ酸配列
配列番号4:ヒトH232(REF)変異型STINGのアミノ酸配列
配列番号5:ヒトH232(REF)変異型STINGのヌクレオチド配列
配列番号6:ヒト野生型STINGのアミノ酸配列
配列番号7:ヒト野生型STINGのヌクレオチド配列
配列番号8:ヒトHAQ変異型STINGのアミノ酸配列
配列番号9:ヒトHAQ変異型STINGのヌクレオチド配列
配列番号10:マウスSTINGのアミノ酸配列
配列番号11:マウスSTINGのヌクレオチド配列
配列番号12~21:プライマーの配列
配列番号22:HisAviTEV-hSTING(139-342)ヒト野生型蛋白質のアミノ酸配列
配列番号23:HisAviTEV-hSTING(139-342)ヒトREF変異型蛋白質のアミノ酸配列
配列番号24:HisAviTEV-hSTING(139-342)ヒトAQ変異型蛋白質のアミノ酸配列
配列番号25:His-Avi-TEV-mSTING(138-341)マウス野生型蛋白質のアミノ酸配列
配列番号26:改変抗LPS抗体の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号27:改変抗LPS抗体の重鎖のアミノ酸配列
配列番号28:ペルツズマブ軽鎖のアミノ酸配列
配列番号29:ペルツズマブ重鎖のアミノ酸配列
配列番号30:改変抗HER2抗体2の重鎖のアミノ酸配列
配列番号31:抗CD33抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号32:抗CD33抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号33:抗EphA2抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号34:抗EphA2抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号35:抗CDH6抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号36:抗CDH6抗体重鎖のアミノ酸配列
Claims (106)
- 次式(II):
Abは、抗体又は該抗体の機能性断片を示し、該抗体の糖鎖はリモデリングされていてもよく、
Lは、AbとDを連結するリンカーを示し、
Abはそのアミノ酸残基から直接Lに結合するか、Abの糖鎖又はリモデリングされた糖鎖からLに結合していてもよく、
Dは、次式(I):
Lは、L1又はL2に含まれる任意の-NH2又はヒドロキシ基と結合し、
L1は、ヒドロキシ基、-NH2、2-ヒドロキシアセチルアミノメチル基及び2-[(2-ヒドロキシアセチル)アミノ]エチル基からなる群から選択される1乃至3個の基により任意の位置で置換されていてもよい、次式
R6及びR6’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基を示し、
R7及びR7’は、それぞれ独立して、水素原子又はC1-C6アルキル基を示し、該C1-C6アルキル基は、ハロゲン原子及びオキソ基からなる群から選択される1又は2個の置換基により置換されていてもよく、
R8及びR8’は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示し、
Z5は、窒素原子又は-CH=を示す)
からなる群から選択される基を示し、
L2は、下記(i)又は(ii):
(i)Lと結合するとき、L2は、-NHR’、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示し、ここで、R’は、水素原子、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示し、該C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基は、1乃至6個のハロゲン原子で置換されてもよい;又は
(ii)Lと結合しないとき、L2は、水素原子又はハロゲン原子を示す、
から選択される基を示し、
Q1及びQ1’は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、チオール基又はボラノ基(BH3 -)を示し、
Q2及びQ2’は、それぞれ独立して、酸素原子又は硫黄原子を示し、
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
Y1及びY2は、酸素原子又は-CH2-を示し、
X3及びX4は、下記(iii)又は(iv):
(iii)Y1が酸素原子のとき、X3-X4は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(iv)Y1が-CH2-のとき、X3-X4は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
X5及びX6は、下記(v)又は(vi):
(v)Y2が酸素原子のとき、X5-X6は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(vi)Y2が-CH2-のとき、X5-X6は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
R1,R2及びR3は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、-OR’、-OC(=O)R’、-N3、-NHR’、-NR’R’’又は-NHC(=O)R’(ここで、R’は、前に定義した通りであり、R’’は、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示す)を示し、
W1は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子又は-CH-を示し、
W2は、窒素原子又は-CH=を示し、
R4は、水素原子、ハロゲン原子又は-NH2を示し、
R5は、下記(vii)乃至(x):
(vii)W1が窒素原子のとき、R5は水素原子、C1-C6アルキル基、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示す;
(viii)W1が酸素原子のとき、R5は存在せず;
(ix)W1が硫黄原子のとき、R5は存在せず;又は
(x)W1が-CH-のとき、R5は水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2又はC1-C6アルキル基を示す、
から選択される基を示し、
Z1-Z2-Z3は、一緒になって、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-R’’’-、-CH=CH-CH2-、-CH=CX-CH2-、-CX=CH-CH2-、-CX=CX-CH2-、-C(=O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(=O)-、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示し、Xは、ハロゲン原子を示す)又は下記式のいずれかで表される基
で表される化合物を示す)
で表される抗体薬物コンジュゲート。 - W1が窒素原子である、請求項1に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W1が窒素原子であり、R5が水素原子である、請求項2に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W1が酸素原子である、請求項1に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W1が硫黄原子である、請求項1に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W1が-CH-である、請求項1に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W1が-CH-であり、R5が水素原子である、請求項6に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-CH2-又は-CH=CH-CH2-である、請求項1~7のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-である、請求項1~7のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-R’’’-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示す)である、請求項1~7のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W2が-CH=である、請求項1~10のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- W2が窒素原子である、請求項1~10のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- R4が、水素原子を示す、請求項1~12のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- R4が、フッ素原子を示す、請求項1~12のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- L1中のR8及びR8’が、それぞれ独立して、水素原子である、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- L2が、Lと結合し、-NH2、-CH2NH2又は-CH2OHを示す、請求項1~18のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- L2が、Lと結合せず、水素原子又はフッ素原子を示す、請求項1~18のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Q1及びQ1’が、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はチオール基を示す、請求項1~20のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- X1及びX2が、酸素原子を示す、請求項1~21のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Y1及びY2が、酸素原子を示す、請求項1~22のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- X3及びX4が、-CH2-O-を示す、請求項1~23のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- X5及びX6が、-CH2-O-を示す、請求項1~24のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- R1,R2及びR3が、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基又はフッ素原子である、請求項1~25のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- リンカーLが、-Lb-La-Lp-Lc-*で示され、
式中、アステリスクは、薬物Dと結合していることを示し、
Lpは、標的細胞において切断可能なアミノ酸配列からなるリンカーを示すか又は存在せず、
Laは、以下の群から選択されるいずれか一つを示し、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)n3-CH2-C(=O)-、
-(CH2)n4-O-C(=O)-、及び、
-(CH2)n9-C(=O)-
(ここで、n2は1~3の整数を示し、n3は1~5の整数を示し、n4は0~2の整数を示し、n9は2~7の整数を示す)、
Lbは、LaとAbの糖鎖又はリモデリングされた糖鎖を結合するスペーサー又はLaとAbのシステイン残基を結合するスペーサーを示し、並びに、
Lcは、-NH-CH2-、―NH-フェニル基-CH2-O(C=O)-又は―NH-ヘテロアリール基-CH2-O(C=O)-を示すか又は存在しない
請求項1~40のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。 - Lcが存在しない、請求項41に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Lcが-NH-CH2-である、請求項41に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Lpが、以下:
-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-FG-、-GGPI-、-PI-、-GGVCit-、-VCit-、-GGVK-、-VK-、-GGFCit-、-FCit-、-GGFM-、-FM-、-GGLM-、-LM-、-GGICit-及び-ICit-
からなる群から選択されるいずれか一つを示す、請求項41~43のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。 - Lpが、-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-FG-、-GGVCit-、-VCit-、-GGFCit-又は-FCit-のいずれか一つである、請求項44に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Lpが、-GGFG-、-GGPI-、-GGVA-、-GGFM-、-GGVCit-、-GGFCit-、-GGICit-、-GGPL-、-GGAQ-又は-GGPP-のいずれか一つである、請求項41~43のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Lpが、-GGFG-又は-GGPI-である、請求項46に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- Laが、以下:
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)3-CH2-C(=O)-、
-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)4-CH2-C(=O)-、及び
-(CH2)5-C(=O)-
からなる群から選択されるいずれか一つを示す、請求項41~47のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。 - 抗体薬物コンジュゲートにおける抗体1分子あたりの平均薬物結合数が、1から10個の範囲である、請求項1~51のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体薬物コンジュゲートにおける抗体1分子あたりの平均薬物結合数が、1から5個の範囲である、請求項52に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体が、抗体のAsn297に結合する糖鎖(N297糖鎖)からLに結合している、請求項1~53のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- N297糖鎖が、リモデリングされた糖鎖である、請求項54に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- N297糖鎖が、N297-(Fuc)MSG1又はN297-(Fuc)SGである、請求項54又は55に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体が、抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗DLL3抗体、抗FAP抗体、抗CDH11抗体、抗CDH6抗体、抗A33抗体、抗CanAg抗体、抗CD19抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD98抗体、抗TROP2抗体、抗CEA抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体、抗Mesothelin抗体、抗ENPP3抗体、抗CD47抗体、抗EGFR抗体、抗GPR20抗体又は抗DR5抗体である、請求項1~56のいずれか1項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体が、抗HER2抗体である、請求項57に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体が、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号2に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、又は、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号3に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体である、請求項58に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体が、配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号29に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、又は、配列番号28に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号30に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体である、請求項58に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 抗体が、配列番号31に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号32に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、配列番号33に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号34に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体、又は、配列番号35に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号36に記載のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体である、請求項57に記載の抗体薬物コンジュゲート。
- 次式(Ia):
L1は、ヒドロキシ基、-NH2、2-ヒドロキシアセチルアミノメチル基及び2-[(2-ヒドロキシアセチル)アミノ]エチル基からなる群から選択される1乃至3個の基により任意の位置で置換されていてもよい、次式
R6及びR6’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基を示し、
R7及びR7’は、それぞれ独立して、水素原子又はC1-C6アルキル基を示し、該C1-C6アルキル基は、ハロゲン原子及びオキソ基からなる群から選択される1又は2個の置換基により置換されていてもよく、
R8及びR8’は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示し、
Z5は、窒素原子又は-CH=を示す)
からなる群から選択される基を示し、
L3は、水素原子、ハロゲン原子、-NH2、ヒドロキシC1-C3アルキル基又はアミノC1-C3アルキル基を示し、
Q1及びQ1’は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、チオール基又はボラノ基(BH3 -)を示し、
Q2及びQ2’は、それぞれ独立して、酸素原子又は硫黄原子を示し、
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸素原子、硫黄原子又は-CH2-を示し、
Y1及びY2は、酸素原子又は-CH2-を示し、
X3及びX4は、下記(iii)又は(iv):
(iii)Y1が酸素原子のとき、X3-X4は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(iv)Y1が-CH2-のとき、X3-X4は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
X5及びX6は、下記(v)又は(vi):
(v)Y2が酸素原子のとき、X5-X6は、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-CH2-又は-CH2-CF2-を示す;又は
(vi)Y2が-CH2-のとき、X5-X6は、-O-CH2-を示す、
から選択される基を示し、
R1,R2及びR3は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、-OR’、-OC(=O)R’、-N3、-NHR’、-NR’R’’又は-NHC(=O)R’(ここで、R’は、水素原子、C1-C6アルキル基、C2-C6アルケニル基、C2-C6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示し、該C1-6アルキル基、C2-C6アルケニル基又はC2-C6アルキニル基は、1乃至6個のハロゲン原子で置換されてもよい、R’’は、C1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基又はC3-C6シクロアルキル基を示す)を示し、
W1は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子又は-CH-を示し、
W2は、窒素原子又は-CH=を示し、
R4は、水素原子、ハロゲン原子又は-NH2を示し、
R5は、下記(vii)乃至(x):
(vii)W1が窒素原子のとき、R5は水素原子、C1-C6アルキル基、ヒドロキシC1-C6アルキル基又はアミノC1-C6アルキル基を示す;
(viii)W1が酸素原子のとき、R5は存在せず;
(ix)W1が硫黄原子のとき、R5は存在せず;又は
(x)W1が-CH-のとき、R5は水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、-NH2又はC1-C6アルキル基を示す、
から選択される基を示し、
Z1-Z2-Z3は一緒になって、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-R’’’-、-CH=CH-CH2-、-CH=CX-CH2-、-CX=CH-CH2-、-CX=CX-CH2-、-C(=O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(=O)-、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示し、Xは、ハロゲン原子を示す)又は下記式のいずれかで表される基
で示される化合物又はその薬理上許容される塩。 - W1が窒素原子である、請求項62に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W1が窒素原子であり、R5が水素原子である、請求項63に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W1が酸素原子である、請求項62に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W1が硫黄原子である、請求項62に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W1が-CH-である、請求項62に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W1が-CH-であり、R5が水素原子である、請求項67に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-CH2-又は-CH=CH-CH2-である、請求項62~68のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH(CH3)-CH2-又は-CH2-CH2-CH(CH3)-である、請求項62~68のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- Z1、Z2及びZ3が、一緒になって、-CH2-CH2-R’’’-(ここで、R’’’は、-O-又は-CH2-CH2-を示す)である、請求項62~68のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W2が-CH=である、請求項62~71のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- W2が窒素原子である、請求項62~71のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- R4が、水素原子を示す、請求項62~73のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- R4が、フッ素原子を示す、請求項62~73のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- L1中のR8及びR8’が、それぞれ独立して、水素原子である、請求項62~75のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- L1が、次式からなる群から選択される基
R10は、ヒドロキシ基、-NH2、-NHC(=O)CH2OH、-CH2NHC(=O)CH2OH、-CH2CH2NHC(=O)CH2OH、ヒドロキシC1-C3アルキル基又はアミノC1-C3アルキル基を示し、
R11及びR11’は、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子若しくはメチル基を示すか、又は、R11及びR11’が結合してシクロプロパンを示し、
Z4は、-CH2-、-NH-又は酸素原子を示す)
である、請求項62~76のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。 - L3が、水素原子、フッ素原子、-NH2、-CH2OH又は-CH2NH2を示す、請求項62~79のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- Q1及びQ1’が、それぞれ独立して、ヒドロキシ基又はチオール基を示す、請求項62~80のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- X1及びX2が、酸素原子を示す、請求項62~81のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- Y1及びY2が、酸素原子を示す、請求項62~82のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- X3及びX4が、-CH2-O-を示す、請求項62~83のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- X5及びX6が、-CH2-O-を示す、請求項62~84のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- R1,R2及びR3が、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基又はフッ素原子である、請求項62~85のいずれか1項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩。
- 請求項1~61に記載の抗体薬物コンジュゲート及び請求項62~100に記載の化合物又はその薬理上許容される塩からなる群から選択されるいずれかを含有する、STINGアゴニスト。
- 請求項1~61に記載の抗体薬物コンジュゲート及び請求項62~100に記載の化合物又はその薬理上許容される塩からなる群から選択されるいずれかを含有する、医薬組成物。
- 請求項1~61に記載の抗体薬物コンジュゲート及び請求項62~100に記載の化合物又はその薬理上許容される塩からなる群から選択されるいずれかを含有する、抗腫瘍剤。
- 腫瘍が、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、子宮体がん、精巣がん、子宮頸がん、胎盤絨毛がん、多形神経膠芽腫、脳腫瘍、頭頚部がん、甲状腺がん、中皮腫、消化管間質腫瘍(GIST)、胆のうがん、胆管がん、副腎がん、有棘細胞がん、白血病、悪性リンパ腫、形質細胞腫、骨髄腫又は肉腫である、請求項103に記載の抗腫瘍剤。
- 請求項1~61に記載の抗体薬物コンジュゲート、請求項62~100に記載の化合物又はその薬理上許容される塩、請求項101に記載のSTINGアゴニスト、請求項102に記載の医薬組成物及び請求項103又は104に記載の抗腫瘍剤からなる群から選択されるいずれかを投与することを含む、がんの治療方法。
- がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、子宮体がん、精巣がん、子宮頸がん、胎盤絨毛がん、多形神経膠芽腫、脳腫瘍、頭頚部がん、甲状腺がん、中皮腫、消化管間質腫瘍(GIST)、胆のうがん、胆管がん、副腎がん、有棘細胞がん、白血病、悪性リンパ腫、形質細胞腫、骨髄腫又は肉腫である、請求項105に記載の方法。
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