KR20230142544A - 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 신규 제조 방법 - Google Patents

항체-면역 부활화제 콘주게이트의 신규 제조 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230142544A
KR20230142544A KR1020237029436A KR20237029436A KR20230142544A KR 20230142544 A KR20230142544 A KR 20230142544A KR 1020237029436 A KR1020237029436 A KR 1020237029436A KR 20237029436 A KR20237029436 A KR 20237029436A KR 20230142544 A KR20230142544 A KR 20230142544A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
formula
compound
antibody
agent
compound represented
Prior art date
Application number
KR1020237029436A
Other languages
English (en)
Inventor
도모카즈 오구라
다케시 나카야
히데카즈 이노우에
나루미 아베
유조 아베
다츠야 나카무라
유코 야마모토
고헤이 사카니시
다츠히로 사카모토
사토시 나카네
Original Assignee
다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 filed Critical 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
Publication of KR20230142544A publication Critical patent/KR20230142544A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6873—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an immunoglobulin; the antibody being an anti-idiotypic antibody
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages
    • C07F7/1872—Preparation; Treatments not provided for in C07F7/20
    • C07F7/188—Preparation; Treatments not provided for in C07F7/20 by reactions involving the formation of Si-O linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages
    • C07F7/1872—Preparation; Treatments not provided for in C07F7/20
    • C07F7/1892—Preparation; Treatments not provided for in C07F7/20 by reactions not provided for in C07F7/1876 - C07F7/1888
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65586—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system at least one of the hetero rings does not contain nitrogen as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/65746—Esters of oxyacids of phosphorus the molecule containing more than one cyclic phosphorus atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6581—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and nitrogen atoms with or without oxygen or sulfur atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6584—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and nitrogen atoms with or without oxygen or sulfur atoms, as ring hetero atoms having one phosphorus atom as ring hetero atom
    • C07F9/65842—Cyclic amide derivatives of acids of phosphorus, in which one nitrogen atom belongs to the ring
    • C07F9/65844—Cyclic amide derivatives of acids of phosphorus, in which one nitrogen atom belongs to the ring the phosphorus atom being part of a five-membered ring which may be condensed with another ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/02—Phosphorylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
    • C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
    • C07H13/08—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals directly attached to carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/067—Pyrimidine radicals with ribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/073—Pyrimidine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/167—Purine radicals with ribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/213—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids containing cyclic phosphate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/23—Heterocyclic radicals containing two or more heterocyclic rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, not provided for in groups C07H19/14 - C07H19/22
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/02—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명의 목적은, 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 이용 가능한, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 입체 선택적인 신규 제조 방법, 및 그 제조 중간체를 제공하는 것에 있다. 또, 그 제조 방법을 사용한, 고리형 디뉴클레오티드-링커 및 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조 방법을 제공하는 것에 있다. 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 또는 (Sc-II) 를 사용함으로써, 화합물 (I) 과 화합물 (IV) 를, 입체 선택적으로 축합시키는 공정을 포함하는, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 제조 방법을 제공한다.

Description

항체-면역 부활화제 콘주게이트의 신규 제조 방법
본 발명은, 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 이용 가능한, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 입체 선택적인 신규 제조 방법 및 그 제조 중간체에 관한 것이다. 또, 그 제조 방법을 포함하는, 고리형 디뉴클레오티드-링커 및 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 신규 제조 방법에 관한 것이다. 또한, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 제조에 사용하는 원료 화합물의 신규 제조 방법, 및 그 제조 중간체에 관한 것이다.
고리형 디뉴클레오티드 (Cyclic dinucleotide, 이하, CDN 이라고도 한다) 는 STING (Stimulator of Interferon Genes) 을 활성화시킨다 (비특허문헌 1). 이 활성화에 의해 CDN 을 항암 마우스에 투여함으로써 STING 개재에 의한 항종양 면역 응답이 증강되어 종양 증식이 현저하게 저해되고, 마우스의 생존율을 개선하는 것이 나타났다 (비특허문헌 2). 최근의 연구에 의해, 생체 내에서 핵산 분해 효소에 의한 분해를 받지 않고 STING 아고니스트 활성을 갖는 합성 저분자 화합물이 개발되어 있다 (예를 들어, 특허문헌 1 ∼ 5). 이와 같은 활성을 나타내는 CDN 과 항체를 링커를 개재하여 결합시킨 항체 약물 복합체 (Antibody Drug Conjugate, ADC) 도 연구되고 있으며, 항원이 발현되어 있는 종양에서 항종양 효과가 나타나고 있다 (특허문헌 6, 특허문헌 7).
지금까지 연구되고 있는 CDN 은 2 종류의 뉴클레오티드를 고리형으로 연결할 때에 2 개의 포스포로티오에이트 결합으로 불리는 황 수식된 5 가의 인산 결합을 갖고 있으며, 비대칭의 뉴클레오티드끼리로 고리형화한 경우, 각각의 포스포로티오에이트부의 인 원자 상에 부제 (不齊) 점이 생성된다. 지금까지 보고되어 온 CDN 의 합성법에서는 인 상의 부제를 제어하지 않고 합성을 실시하며, 결과적으로 생성되는 4 종류의 디아스테레오머를 정제함으로써, 목적으로 하는 절대 입체 배치를 갖는 CDN 을 취득하고 있다 (예를 들어, 비특허문헌 3, 특허문헌 1 ∼ 7). 이와 같은 합성법의 경우, 4 종류의 디아스테레오머의 생성에 의해 저수율이 되는 점, 또 디아스테레오머는 물성이 유사하기 때문에, 그 분리 정제에는 저부하량으로의 HPLC 에 의한 엄밀한 분리 채취 정제가 필요해지는 점에서, 이와 같은 합성법으로 목적물을 대량으로 합성하려면 큰 부하가 발생하고 있었다. 입체 선택적인 CDN 의 합성법으로는 5 가 인과 부제 보조기를 조합한 화합물을 사용하는 방법이 보고되어 있지만, 고리화시의 수율로는 저수율에 그치고 있다 (비특허문헌 4). 또, 입체 선택적인 포스포로티오에이트의 합성법은 지금까지 3 가의 인과 부제 보조기를 조합한 입체 제어형 올리고뉴클레오티드에 관련하여 몇 가지의 연구예가 있다 (예를 들어, 비특허문헌 5 ∼ 9, 특허문헌 8 ∼ 9). 한편으로, 고리형 디뉴클레오티드 합성에 응용 가능한 화합물을 사용한 디뉴클레오티드 결합 생성의 예는 없고, 실제로 입체 선택적으로 고리형 디뉴클레오티드를 합성한 예도 없다.
국제공개 제2014/189805호 국제공개 제2014/189806호 국제공개 제2016/145102호 국제공개 제2017/093933호 국제공개 제2018/060323호 국제공개 제2020/050406호 국제공개 제2021/177438호 국제공개 제2005/092909호 국제공개 제2016/012305호
Mol. Cell, 2013, 51, 226-235 Sci. Rep. 2016, 6, 19049 J. Med. Chem. 2016. 59. 10253-10267 Science 2018. 361. 1234-1238 Tetrahedron Lett. 1998. 39. 2491-2494 Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. 8. 2539-2544 J. Am. Chem. Soc. 2002. 124. 4962-4963 J. Am. Chem. Soc. 2003. 125. 8307-8317 J. Am. Chem. Soc. 2008. 130. 16031-16037
본 발명은 일면에 있어서, 항체 약물 복합체, 특히, STING 아고니스트 활성을 갖고, 면역 세포를 부활화하는 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 중간체로서 유용한, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 신규 제조 방법을 제공하는 것이다.
고리형 디뉴클레오티드의 입체 선택적인 합성에는 아인산이라고 하는 강한 산성 관능기를 갖는 뉴클레오티드와 산성에 현저하게 불안정한 광학 활성의 아미다이트 부위를 갖는 뉴클레오티드를 실용적인 수율 및 높은 입체 선택성으로 결합시키는 방법이 필요해진다. 그러나, 종래의 제조 방법은 입체 비선택적인 합성법이기 때문에, 목적물의 생성 비율도 낮고, 그것에 수반하여 정제가 곤란해지기 때문에 총 수율은 현저하게 낮았다.
따라서, 본 발명의 과제 중 하나는, 입체 선택적 합성을 사용함으로써 목적물의 생성 비율을 높이고, 그것에 수반하여 정제 부하를 저감시켜, 총 수율이 향상되는 공업적으로 우수한 CDN 의 신규 제조 방법을 제공하는 것이다. 또, 그 제조 방법을 사용한 CDN-링커의 신규 제조 방법을 제공하는 것이다.
또, 본 발명의 과제 중 하나는, 고리형 디뉴클레오티드의 합성에 사용하는 원료 화합물의 조제에 대해, 보다 공정수가 단축되어, 수율이 향상된 신규 제조 방법도 제공하는 것이다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해, 예의 검토한 결과, 광학 활성의 포스피틸화제를 사용한, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 입체 선택적인 합성법을 알아내고, 그것에 의해 디아스테레오머 정제 부하를 저감시켜, 총 수율이 향상된 신규 제조 방법을 완성시켰다. 또, 그 제조 방법에 의해 얻어진 CDN 을 사용한 CDN-링커의 구축, 및 그 CDN-링커를 사용한 항체-면역 부활화제 콘주게이션의 구축을 실시하였다. 또한, 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 원료 화합물의 조제에 대해, 종래의 제조 방법보다 공정수가 단축되어, 수율이 향상된 신규 제조 방법을 알아내어, 본 발명을 완성시켰다.
즉 본원 발명은, 이하에 관한 것이다.
[1]
식 (Rp-VII) :
[화학식 1]
Figure pct00001
[식 중,
A1 은,
[화학식 2]
Figure pct00002
이고,
Q 는, 티올기 또는 하이드록시기이고,
PG1 은, 하이드록시기의 보호기이고, 및
PG3 은, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염의 제조 방법으로서,
(공정 a1) 식 (I) :
[화학식 3]
Figure pct00003
[식 중,
PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
PG2 는 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물을, 이하의 식 (Rc-II-1) 및 (Rc-II-2) 로 이루어지는 군에서 선택되는 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) :
[화학식 4]
Figure pct00004
[식 중,
R1 은, 수소 또는 메틸이고,
R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고,
여기서, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및
상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다.]
와 반응시켜, 식 (Rc-III) :
[화학식 5]
Figure pct00005
[식 중,
PG1, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
B1 은,
[화학식 6]
Figure pct00006
이고, R1 및 R2 는, 위에서 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 a2) 얻어진 식 (Rc-III) 의 화합물을, 식 (IV) :
[화학식 7]
Figure pct00007
[식 중,
A2 는,
[화학식 8]
Figure pct00008
이고, 및
PG4 는, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염과, 활성화제의 존재하에서 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로 처리하고, 추가로 티오화제와 반응시키고, 계속해서 PG2 를 탈보호하여, 식 (Rc-V) :
[화학식 9]
Figure pct00009
[식 중,
A2, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고,
B2 는,
[화학식 10]
Figure pct00010
이고, 및
PG6 은, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
(공정 a3) 얻어진 식 (Rc-V) 의 화합물 또는 그 염을, 축합제의 존재하에서 고리화시키고, 이어서, 티오화제 또는 산화제와 반응시켜, 식 (Rc-VI) :
[화학식 11]
Figure pct00011
[식 중,
A2, B2, Q, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 그리고
(공정 a4) 얻어진 식 (Rc-VI) 의 화합물의 티오인산 부위의 보호기인 B2, 및 A2 중의 보호기인 PG4 를 탈보호하여, 식 (Rp-VII) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[2]
공정 a2 에 있어서, 티오화제와 반응시킨 후이고, PG2 를 탈보호하기 전에 얻어지는 중간체가, 식 (Rc-V0) :
[화학식 12]
Figure pct00012
[식 중,
A2, B2, PG1, PG2 및 PG3 은, [1] 에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물 또는 그 염인, [1] 에 기재된 방법.
[3]
식 (Sp-VII) :
[화학식 13]
Figure pct00013
[식 중,
A1 은,
[화학식 14]
Figure pct00014
이고,
Q 는, 티올기 또는 하이드록시기이고,
PG1 은, 하이드록시기의 보호기이고, 및
PG3 은, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염의 제조 방법으로서,
(공정 a1) 식 (I) :
[화학식 15]
Figure pct00015
[식 중,
PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
PG2 는 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물을, 이하의 식 (Sc-II-1) 및 (Sc-II-2) 로 이루어지는 군에서 선택되는 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) :
[화학식 16]
Figure pct00016
[식 중,
R1 은, 수소 또는 메틸이고,
R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고,
여기서, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및
상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다.]
와 반응시켜, 식 (Sc-III) :
[화학식 17]
Figure pct00017
[식 중,
PG1, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
B1S 는,
[화학식 18]
Figure pct00018
이고, R1 및 R2 는, 위에서 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 a2) 얻어진 식 (Sc-III) 의 화합물을, 식 (IV) :
[화학식 19]
Figure pct00019
[식 중,
A2 는,
[화학식 20]
Figure pct00020
이고, 및
PG4 는, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염과, 활성화제의 존재하에서 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로 처리하고, 추가로 티오화제와 반응시키고, 계속해서 PG2 를 탈보호하여, 식 (Sc-V) :
[화학식 21]
Figure pct00021
[식 중,
A2, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고,
B2S 는,
[화학식 22]
Figure pct00022
이고, 및
PG6 은, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
(공정 a3) 얻어진 식 (Sc-V) 의 화합물 또는 그 염을, 축합제의 존재하에서 고리화시키고, 이어서, 티오화제 또는 산화제와 반응시켜, 식 (Sc-VI) :
[화학식 23]
Figure pct00023
[식 중,
A2, B2S, Q, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 그리고
(공정 a4) 얻어진 식 (Sc-VI) 의 화합물의 티오인산 부위의 보호기인 B2S, 및 A2 중의 보호기인 PG4 를 탈보호하여, 식 (Sp-VII) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[4]
공정 a2 에 있어서, 티오화제와 반응시킨 후이고, PG2 를 탈보호하기 전에 얻어지는 중간체가, 식 (Sc-V0) :
[화학식 24]
Figure pct00024
[식 중,
A2, B2S, PG1, PG2 및 PG3 은, [2] 에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물 또는 그 염인, [2] 에 기재된 방법.
[5]
공정 a2 에 있어서의 활성화제가, 1-페닐이미다졸, 벤조이미다졸, 1-메틸벤조이미다졸, 1-시아노메틸피페리딘, 1-피롤리딘아세토니트릴, 1-(시아노메틸)이미다졸, 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [1] ∼ [4] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[6]
공정 a2 에 있어서의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 무수 아세트산, N-숙신이미딜아세테이트, 펜타플루오로페닐아세테이트, 에틸트리플루오로아세테이트, 메틸트리플루오로아세테이트, 펜타플루오로페닐트리플루오로아세테이트, 트리플루오로아세틸벤조트리아졸, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 1-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, 디-tert-부틸디카보네이트, 9-플루오레닐메틸펜타플루오로페닐카보네이트, 1-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]벤조트리아졸, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, N-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐옥시)숙신이미드, N-카르보벤질옥시숙신이미드, 디벤질디카보네이트, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드, N-에톡시카르보닐프탈이미드, 및 메틸이미다졸-1-카르복실레이트로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [1] ∼ [5] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[7]
공정 a2 에 있어서의 티오화제가, 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, 3H-1,2-벤조디티올-3-온-1,1-디옥사이드, 5-페닐-3H-1,2,4-디티아졸-3-온 및 [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [1] ∼ [6] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[8]
공정 a3 에 있어서의 축합제가, 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스포리난 2-옥사이드, 디메틸클로로포스페이트, 디에틸클로로포스페이트, 2-클로로-2-옥소-1,3,2-디옥사포스포란, 1H-벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트, 클로로트리피롤리디노헥사플루오로포스페이트, 브로모트리피롤리디노헥사플루오로포스페이트, 및 프로필포스폰산 무수물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [1] ∼ [7] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[9]
공정 a3 에 있어서의 티오화제가, 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, 3H-1,2-벤조디티올-3-온-1,1-디옥사이드, 5-페닐-3H-1,2,4-디티아졸-3-온 및 [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[10]
공정 a3 에 있어서의 산화제가, 요오드, tert-부틸하이드로퍼옥사이드, 3-클로로과벤조산, 과산화수소, 과요오드산, 과망간산칼륨 및 산소로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[11]
PG4 가, 벤질, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐인, [1] ∼ [10] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[12]
PG6 이, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 메톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐인, [1] ∼ [11] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[13]
상기 식 (IV) 의 화합물 또는 그 염이, 이하의 공정 :
(공정 a5) 식 (VIII) :
[화학식 25]
Figure pct00025
[식 중,
A2 는, [1] 에 정의한 바와 같고, 및
PG5 는, 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을, 아인산에스테르와 반응시켜, 식 (IX) :
[화학식 26]
Figure pct00026
[식 중, A2 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
혹은,
(공정 a5') 식 (VIII') :
[화학식 27]
Figure pct00027
[식 중,
A1 은 [1] 에 정의한 바와 같고, 및
PG5 는 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을, 아인산에스테르와 반응시켜, 식 (IX') :
[화학식 28]
Figure pct00028
[식 중, A1 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 및
(공정 a5") 얻어진 식 (IX') 의 화합물 또는 그 염을, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (IX) :
[화학식 29]
Figure pct00029
[식 중, A2 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정
그리고
(공정 a6) 공정 a5 또는 공정 a5" 에서 얻어진 식 (IX) 의 화합물의 5' 수산기의 보호기인 PG5 를 탈보호하여, 식 (IV) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정에 의해 제조되는, [1] ∼ [12] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[14]
공정 a5 및 공정 a5' 의 아인산에스테르가, 아인산디페닐, 아인산메틸, 아인산디에틸, 및 아인산디부틸로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [13] 에 기재된 방법.
[15]
공정 a5" 의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 무수 아세트산, 아세틸클로라이드, N-숙신이미딜아세테이트, 펜타플루오로페닐아세테이트, 1-아세틸-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘, N-메톡시디아세트아미드, N-아세틸이미다졸, 트리플루오로아세트산 무수물, 비스트리플루오로아세트아미드, 에틸트리플루오로아세테이트, 메틸트리플루오로아세테이트, 펜타플루오로페닐트리플루오로아세테이트, 트리플루오로아세틸벤조트리아졸, S-에틸트리플루오로티오아세테이트, N-메틸비스트리플루오로아세트아미드, 트리플루오로아세틸트리플레이트, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, 벤조일클로라이드, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 벤조일트리플루오로메탄술포네이트, 3-벤조일티아졸리딘-2-티온, tert-부틸페닐카보네이트, N-(tert-부톡시카르보닐옥시)프탈이미드, 2-(tert-부톡시카르보닐티오)-4,6-디메틸피리딘, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, tert-부틸카르바제이트, 2-(tert-부톡시카르보닐옥시이미노)-2-페닐아세토니트릴, 1-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, 디-tert-부틸디카보네이트, 9-플루오레닐메틸펜타플루오로페닐카보네이트, 클로로포름산 9-플루오레닐메틸, 9-플루오레닐메틸카르바제이트, 19-플루오레닐메틸카바메이트, 1-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]벤조트리아졸, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, 클로로포름산알릴, 디알릴디카보네이트, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, 알릴페닐카보네이트, N-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐옥시)숙신이미드, 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸, 클로로포름산벤질, 벤질카르바제이트, 벤질페닐카보네이트, N-카르보벤질옥시숙신이미드, 디벤질디카보네이트, 4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드, N-에톡시카르보닐프탈이미드, 클로로포름산에틸, 디에틸디카보네이트, 에틸이미다졸-1-카르복실레이트, 2-에톡시-1-(에톡시카르보닐)-1,2-디하이드로퀴놀린, 클로로포름산메틸, 디메틸카보네이트, 디메틸디카보네이트, 또는 메틸이미다졸-1-카르복실레이트로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [13] 또는 [14] 에 기재된 방법.
[16]
[1] 에 기재된 공정 a3 에 있어서, 상기 티오화제를 사용함으로써, 식 (Rp-VII) 의 화합물 (식 중, Q 가 티올기이다) 또는 그 염을 얻는 것을 특징으로 하는, [1], [2], [5] ∼ [9] 및 [11] ∼ [12] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[17]
[1] 에 기재된 공정 a4 에 있어서, 얻어진 식 (Rp-VII) 의 화합물 (식 중, Q 는 티올기이다) 을, 그 염으로 변환시키기 전에, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 처리하거나, 및/또는, 그 염으로 변환시킨 후에, 결정화하여, 식 (Rp, Rp-VII') :
[화학식 30]
Figure pct00030
의 화합물 또는 그 염을 얻는 것을 추가로 포함하는, [16] 에 기재된 방법.
[18]
추가로
(공정 a7) 얻어진 식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물의 보호기인 PG1 및 PG3 을 탈보호하여, 식 (Rp, Rp-X) :
[화학식 31]
Figure pct00031
[식 중,
A1 은, [1] 에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 및
(공정 a8) 얻어진 식 (Rp, Rp-X) 의 화합물 또는 그 염을,
식 (XI) :
[화학식 32]
Figure pct00032
로 나타내는 화합물 또는 그 활성 에스테르체와 축합시켜, 식 (Rp, Rp-XII) :
[화학식 33]
Figure pct00033
[식 중, A1 은, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, [17] 에 기재된 방법.
[19]
추가로,
(공정 a9) 얻어진 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물 또는 그 염과, 항체 또는 그 항체의 기능성 단편 (이하, Ab 라고 한다) 을 결합시켜, 식 (Rp, Rp-XIII) :
[화학식 34]
Figure pct00034
[식 중,
m 은 1 내지 10 의 범위이고,
Ab 의 당사슬은, 임의로 리모델링되어 있고,
Ab 는, 수식되어 있어도 되는 아미노산 잔기의 측사슬로부터 직접 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 결합하거나, 또는 Ab 의 당사슬 또는 리모델링된 당사슬로부터 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 결합하고 있고,
A1 은,
[화학식 35]
Figure pct00035
이다.]
으로 나타내는 항체-면역 부활화제 콘주게이트, 또는 그것들의 혼합물을 얻는 공정을 포함하는, [18] 에 기재된 방법.
[20]
공정 a9 에 있어서, 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물 또는 그 염과 Ab 를, 변형 촉진형 아지드-알킨 부가 고리화 반응 (strain-promoted azide-alkyne cycloaddition) 반응에 의해 결합시키는 것을 특징으로 하는, [19] 에 기재된 방법.
[21]
항체가, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 DLL3 항체, 항 FAP 항체, 항 CDH11 항체, 항 CDH6 항체, 항 A33 항체, 항 CanAg 항체, 항 CD19 항체, 항 CD20 항체, 항 CD22 항체, 항 CD30 항체, 항 CD33 항체, 항 CD56 항체, 항 CD70 항체, 항 CD98 항체, 항 TROP2 항체, 항 CEA 항체, 항 Cripto 항체, 항 EphA2 항체, 항 G250 항체, 항 MUC1 항체, 항 GPNMB 항체, 항 Integrin 항체, 항 PSMA 항체, 항 Tenascin-C 항체, 항 SLC44A4 항체, 항 Mesothelin 항체, 항 ENPP3 항체, 항 CD47 항체, 항 EGFR 항체, 항 GPR20 항체, 및 항 DR5 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 항체인, [19] 또는 [20] 에 기재된 방법.
[22]
식 (Rc-III) :
[화학식 36]
Figure pct00036
[식 중,
B1 은, [1] 에 정의한 바와 같고,
PG1 은, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고,
PG2 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸이고,
PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이다.]
으로 나타내는 화합물.
[23]
식 (Rc-V0) :
[화학식 37]
Figure pct00037
[식 중,
A2 및 B2 는, [1] 에 정의한 바와 같고,
PG1 은, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고,
PG2 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸이고,
PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이다.]
으로 나타내는 화합물 또는 그 염.
[24]
식 (Rc-V) :
[화학식 38]
Figure pct00038
[식 중,
A2 및 B2 는, [1] 에 정의한 바와 같고,
PG1 은, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고,
PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염.
[25]
상기 식 (I) 의 화합물 (식 중, PG1 은 tert-부틸디메틸실릴이다) 이, 이하의 공정 :
(공정 b1) 식 (XIV) :
[화학식 39]
Figure pct00039
[식 중, PG2 는, [1] 에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물을, 식 (XV) :
[화학식 40]
Figure pct00040
[식 중,
PG3 은, [1] 에 정의한 바와 같고, 및
X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.]
로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XVI) :
[화학식 41]
Figure pct00041
[식 중, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 b2) 얻어진 식 (XVI) 의 화합물을, 실릴화제와 반응시켜, 이하의 식 (I') 의 화합물 및 식 (XVII) 의 화합물과의 혼합물 :
[화학식 42]
Figure pct00042
[식 중, PG2, 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
을 얻고, 이어서, 염기의 존재하에서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, [1] ∼ [21] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[26]
공정 b1 의 반응이 염기의 존재하에서 실시되고, 그 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센인, [25] 에 기재된 방법.
[27]
공정 b2 에 있어서, 식 (XVI) 의 화합물과 실릴화제의 반응을, 제 1 염기의 존재하에서 실시하여, 식 (I') 의 화합물과 식 (XVII) 의 화합물의 혼합물을 얻고, 이어서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 제 2 염기의 존재하에서, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, [25] 또는 [26] 에 기재된 방법.
[28]
제 1 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [27] 에 기재된 방법.
[29]
제 2 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [27] 또는 [28] 에 기재된 방법.
[30]
공정 b2 의 실릴화제가, tert-부틸디메틸클로로실란, 또는 tert-부틸디메틸실릴트리플레이트인, [25] ∼ [29] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[31]
상기 식 (XV) 의 화합물이, 이하의 공정 :
(공정 b3) 식 (XVIII) :
[화학식 43]
Figure pct00043
[식 중, PG3 은, [1] 에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물을, 산 또는 염기의 존재하에서, 2-할로에탄올과 반응시켜, 식 (XV) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, [25] ∼ [30] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[32]
공정 b3 의 염기가, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [31] 에 기재된 방법.
[33]
식 (XV) :
[화학식 44]
Figure pct00044
[식 중,
PG3 이, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이고, 및
X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.]
로 나타내는 화합물.
[34]
상기 식 (VIII') 의 화합물
[식 중,
A1 은,
[화학식 45]
Figure pct00045
이고, 및
PG5 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이다.]
이, 이하의 공정 :
(공정 c1) 식 (XIX) :
[화학식 46]
Figure pct00046
로 나타내는 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XX) :
[화학식 47]
Figure pct00047
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c2) 얻어진 식 (XX) 의 화합물을, 가수 분해하여, 식 (XXI) :
[화학식 48]
Figure pct00048
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c3) 얻어진 식 (XXI) 의 화합물을, 염소화제와 반응시켜, 식 (XXII) :
[화학식 49]
Figure pct00049
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c4) 얻어진 식 (XXII) 의 화합물을, 식 (XXIII) :
[화학식 50]
Figure pct00050
으로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XXIV) :
[화학식 51]
Figure pct00051
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c5) 얻어진 식 (XXIV) 의 화합물로부터 벤조일기를 탈보호하여, 식 (XXV) :
[화학식 52]
Figure pct00052
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
(공정 c6) 얻어진 식 (XXV) 의 화합물 또는 그 염을, 트리틸화제와 반응시켜, 식 (VIII') 의 화합물 (식 중, A1 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다) 또는 그 염을 얻는 공정에 의해 제조되는, [13] ∼ [21] 및 [25] ∼ [32] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[35]
추가로,
(공정 c7) 얻어진 식 (VIII') 의 화합물 (식 중, A1 및 PG5 는, [34] 에 정의한 바와 같다) 또는 그 염을, 실릴화제와 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXVII) :
[화학식 53]
Figure pct00053
[식 중,
PG4 는, 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고,
PG5 는, 위에 정의한 바와 같고, 및
PG7 은, 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 그리고
(공정 c8) 얻어진 식 (XXVII) 의 화합물의 보호기인 PG7 을 탈보호하여, 식 (VIII) :
[화학식 54]
Figure pct00054
[식 중,
A2 는,
[화학식 55]
Figure pct00055
이고, 및
PG4 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, [34] 에 기재된 방법.
[36]
공정 c3 의 염소화제가, 트리클로로이소시아누르산, 클로로이소시아누르산, 디클로로이소시아누르산, N-클로로숙신이미드, 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인, 및 사염화탄소로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개이고,
공정 c3 의 반응이, 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트, 트리-o-톨릴포스파이트, 트리페닐포스파이트, 트리에틸포스파이트, 및 트리페닐포스핀으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 존재하에서 실시되는, [34] 또는 [35] 에 기재된 방법.
[37]
공정 c4 가, 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산리튬, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 존재하에서 실시되는, [34] ∼ [36] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[38]
공정 c6 의 트리틸화제가, 4,4-디메톡시트리틸클로라이드, 4-메톡시트리틸클로라이드, 2-클로로트리틸클로라이드, 및 트리틸클로라이드로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [34] ∼ [37] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[39]
공정 c7 의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 벤조일화제, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐화제, tert-부톡시카르보닐화제, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐화제, 알릴옥시카르보닐화제, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐화제, 및 벤질옥시카르보닐화제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [35] ∼ [38] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[40]
상기 식 (XXIII) 의 화합물이, 이하의 공정 :
(공정 c9) 식 (XXVIII) :
[화학식 56]
Figure pct00056
로 나타내는 화합물로부터 tert-부톡시카르보닐기를 탈보호하여, 식 (XXIX) :
[화학식 57]
Figure pct00057
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c10) 얻어진 식 (XXIX) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하여, 식 (XXX) :
[화학식 58]
Figure pct00058
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 c11) 얻어진 식 (XXX) 의 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIII) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, [34] ∼ [39] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[41]
상기 식 (XXVIII) 의 화합물이, 이하의 공정 :
(공정 c12) 식 (XXXI) :
[화학식 59]
Figure pct00059
로 나타내는 화합물을, 1-메틸이미다졸의 존재하, tert-부톡시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXXII) :
[화학식 60]
Figure pct00060
로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 c13) 얻어진 식 (XXXII) 의 화합물을, 프로파르길알데히드디에틸아세탈과 반응시켜, 식 (XXVIII) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, [40] 에 기재된 방법.
[42]
상기 식 (XXIV) 의 화합물이, 상기 공정 c4 대신에, 이하의 공정 :
(공정 c14) 상기 식 (XXII) 의 화합물을, 상기 식 (XXIX) 의 화합물과 반응시켜, 식 (XXXIII) :
[화학식 61]
Figure pct00061
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 c15) 얻어진 식 (XXXIII) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하고, 추가로 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIV) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, [34] ∼ [39] 및 [41] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[43]
식 (XX) :
[화학식 62]
Figure pct00062
으로 나타내는 화합물.
[44]
식 (XXII) :
[화학식 63]
Figure pct00063
로 나타내는 화합물.
[45]
식 (XXIV) :
[화학식 64]
Figure pct00064
로 나타내는 화합물.
[46]
식 (XXV) :
[화학식 65]
Figure pct00065
로 나타내는 화합물 또는 그 염.
[47]
식 (VIII'-1) :
[화학식 66]
Figure pct00066
[식 중, PG5 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염.
[48]
식 (XXVII) :
[화학식 67]
Figure pct00067
[식 중,
PG4 가, 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고,
PG5 가, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이고, 및
PG7 이, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, tert-부틸디메틸실릴, tert-부틸디페닐실릴, 또는 트리페닐실릴이다.]
로 나타내는 화합물.
[49]
식 (XXVIII) :
[화학식 68]
Figure pct00068
로 나타내는 화합물.
[50]
식 (I) :
[화학식 69]
Figure pct00069
[식 중,
PG1 은, tert-부틸디메틸실릴이고,
PG2 는, 하이드록시기의 보호기이고, 및
PG3 은, 아미노기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
(공정 b1) 식 (XIV) :
[화학식 70]
Figure pct00070
[식 중, PG2 는, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물을, 식 (XV) :
[화학식 71]
Figure pct00071
[식 중,
PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.]
로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XVI) :
[화학식 72]
Figure pct00072
[식 중, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 b2) 얻어진 식 (XVI) 의 화합물을, 실릴화제와 반응시켜, 이하의 식 (I') 의 화합물 및 식 (XVII) 의 화합물과의 혼합물 :
[화학식 73]
Figure pct00073
[식 중, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
을 얻고, 이어서, 염기의 존재하에서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[51]
공정 b1 의 반응이 염기의 존재하에서 실시되고, 그 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센인, [50] 에 기재된 방법.
[52]
공정 b2 에 있어서, 식 (XVI) 의 화합물과 실릴화제의 반응을, 제 1 염기의 존재하에서 실시하여, 식 (I') 의 화합물과 식 (XVII) 의 화합물의 혼합물을 얻고, 이어서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 제 2 염기의 존재하에서, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, [50] 또는 [51] 에 기재된 방법.
[53]
제 1 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [52] 에 기재된 방법.
[54]
제 2 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [52] 또는 [53] 에 기재된 방법.
[55]
공정 b2 의 실릴화제가, tert-부틸디메틸클로로실란, 또는 tert-부틸디메틸실릴트리플레이트인, [50] ∼ [54] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[56]
식 (XV) :
[화학식 74]
Figure pct00074
[식 중,
PG3 은, 아미노기의 보호기이고, 및
X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.]
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
(공정 b3) 식 (XVIII) :
[화학식 75]
Figure pct00075
[식 중, PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물을, 산 또는 염기의 존재하에서, 2-할로에탄올과 반응시켜, 식 (XV) 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[57]
공정 b3 의 염기가, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [56] 에 기재된 방법.
[58]
식 (VIII') :
[화학식 76]
Figure pct00076
[식 중,
A1 은,
[화학식 77]
Figure pct00077
이고, 및
PG5 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이다.]
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
(공정 c1) 식 (XIX) :
[화학식 78]
Figure pct00078
로 나타내는 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XX) :
[화학식 79]
Figure pct00079
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c2) 얻어진 식 (XX) 의 화합물을, 가수 분해하여, 식 (XXI) :
[화학식 80]
Figure pct00080
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c3) 얻어진 식 (XXI) 의 화합물을, 염소화제와 반응시켜, 식 (XXII) :
[화학식 81]
Figure pct00081
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c4) 얻어진 식 (XXII) 의 화합물을, 식 (XXIII) :
[화학식 82]
Figure pct00082
으로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XXIV) :
[화학식 83]
Figure pct00083
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c5) 얻어진 식 (XXIV) 의 화합물로부터 벤조일기를 탈보호하여, 식 (XXV) :
[화학식 84]
Figure pct00084
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
(공정 c6) 얻어진 식 (XXV) 의 화합물 또는 그 염을, 트리틸화제와 반응시켜, 식 (VIII') 의 화합물 (식 중, A1 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다) 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[59]
추가로,
(공정 c7) 얻어진 식 (VIII') 의 화합물 (식 중, A1 및 PG5 는, [55] 에 정의한 바와 같다) 또는 그 염을, 실릴화제와 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXVII) :
[화학식 85]
Figure pct00085
[식 중,
PG4 는, 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고,
PG5 는, 위에 정의한 바와 같고, 및
PG7 은, 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 그리고
(공정 c8) 얻어진 식 (XXVII) 의 화합물의 보호기인 PG7 을 탈보호하여, 식 (VIII) :
[화학식 86]
Figure pct00086
[식 중,
A2 는,
[화학식 87]
Figure pct00087
이고, 및
PG4 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, [58] 에 기재된 방법.
[60]
공정 c3 의 염소화제가, 트리클로로이소시아누르산, 클로로이소시아누르산, 디클로로이소시아누르산, N-클로로숙신이미드, 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인, 및 사염화탄소로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개이고,
공정 c3 의 반응이, 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트, 트리-o-톨릴포스파이트, 트리페닐포스파이트, 트리에틸포스파이트, 및 트리페닐포스핀으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 존재하에서 실시되는, [59] 에 기재된 방법.
[61]
공정 c4 가, 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산리튬, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 존재하에서 실시되는, [59] 또는 [60] 에 기재된 방법.
[62]
공정 c6 의 트리틸화제가, 4,4-디메톡시트리틸클로라이드, 4-메톡시트리틸클로라이드, 2-클로로트리틸클로라이드, 및 트리틸클로라이드로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [59] ∼ [61] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[63]
공정 c7 의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 벤조일화제, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐화제, tert-부톡시카르보닐화제, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐화제, 알릴옥시카르보닐화제, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐화제, 및 벤질옥시카르보닐화제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, [59] ∼ [62] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[64]
식 (XXIII) :
[화학식 88]
Figure pct00088
으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
(공정 c9) 식 (XXVIII) :
[화학식 89]
Figure pct00089
로 나타내는 화합물로부터 tert-부톡시카르보닐기를 탈보호하여, 식 (XXIX) :
[화학식 90]
Figure pct00090
로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
(공정 c10) 얻어진 식 (XXIX) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하여, 식 (XXX) :
[화학식 91]
Figure pct00091
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 c11) 얻어진 식 (XXX) 의 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIII) 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[65]
식 (XXVIII) :
[화학식 92]
Figure pct00092
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
(공정 c12) 식 (XXXI) :
[화학식 93]
Figure pct00093
로 나타내는 화합물을, 1-메틸이미다졸의 존재하, tert-부톡시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXXII) :
[화학식 94]
Figure pct00094
로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 c13) 얻어진 식 (XXXII) 의 화합물을, 프로파르길알데히드디에틸아세탈과 반응시켜, 식 (XXVIII) 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
[66]
식 (XXIV) :
[화학식 95]
Figure pct00095
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
(공정 c14) 식 (XXII) :
[화학식 96]
Figure pct00096
로 나타내는 화합물을, 식 (XXIX) :
[화학식 97]
Figure pct00097
로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XXXIII) :
[화학식 98]
Figure pct00098
으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
(공정 c15) 얻어진 식 (XXXIII) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하고, 추가로 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIV) 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법에 관한 것이다.
본 발명에 의해, 고리형 디뉴클레오티드의 입체 선택적인 제조 방법을 제공할 수 있다. 이 제조 방법에 의하면, 디아스테레오머 정제의 부담이 경감되어, 목적으로 하는 입체 배치를 갖는 CDN 을 보다 고수율로, 대량으로 제조할 수 있다. 또, 그 결과로서, 이 입체 선택적인 CDN 의 제조 방법을 포함하는 CDN-링커의 제조 방법에 의해, CDN-링커를 고수율로 제조할 수 있다. 또한, 본 발명에 의해, 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 원료 화합물의 조제에 대해서도, 보다 짧은 공정수로, 또한 고수율로 제조할 수 있다.
도 1 은, 고리형 디뉴클레오티드의 제조 방법에 있어서, 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 를 사용하여, 2 종류의 뉴클레오티드 (화합물 (I) 및 화합물 (IV)) 를 입체 선택적으로 포스포로티에이트 결합시켜, 제조 중간체 (Rc-V) 를 얻는 공정을 나타낸다.
도 2 는, 항 CD70 항체 1 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 1) 및 항 CD70 항체 1 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 2) 을 나타낸다.
도 3 은, 항 CD70 항체 2 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 3) 및 항 CD70 항체 2 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 4) 을 나타낸다.
도 4 는, 항 TROP2 항체 1 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 5) 및 항 TROP2 항체 1 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 6) 을 나타낸다.
도 5 는, 항 TROP2 항체 2 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 7) 및 항 TROP2 항체 2 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 8) 을 나타낸다.
도 6 은, 항 EGFR 항체 1 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 9) 및 항 EGFR 항체 1 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 10) 을 나타낸다.
도 7 은, 항 EGFR 항체 2 의 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 11) 및 항 EGFR 항체 2 의 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 12) 을 나타낸다.
도 8 은, 항 CD70 항체 1 의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 13), 항 CD70 항체 1 의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 14), 항 CD70 항체 1 의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 15), 항 CD70 항체 1 의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 16), 항 CD70 항체 1 의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 17), 및 항 CD70 항체 1 의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 18) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
도 9 는, 항 CD70 항체 2 의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 19), 항 CD70 항체 2 의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 20), 항 CD70 항체 2 의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 21), 항 CD70 항체 2 의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 22), 항 CD70 항체 2 의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 23), 및 항 CD70 항체 2 의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 24) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
도 10 은, 항 TROP2 항체 1 의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 25), 항 TROP2 항체 1 의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 26), 항 TROP2 항체 1 의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 27), 항 TROP2 항체 1 의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 28), 항 TROP2 항체 1 의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 29), 및 항 TROP2 항체 1 의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 30) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
도 11 은, 항 TROP2 항체 2 의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 31), 항 TROP2 항체 2 의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 32), 항 TROP2 항체 2 의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 33), 항 TROP2 항체 2 의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 34), 항 TROP2 항체 2 의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 35), 및 항 TROP2 항체 2 의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 36) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
도 12 는, 항 EGFR 항체 1 의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 37), 항 EGFR 항체 1 의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 38), 항 EGFR 항체 1 의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 39), 항 EGFR 항체 1 의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 40), 항 EGFR 항체 1 의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 41), 및 항 EGFR 항체 1 의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 42) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
도 13 은, 항 EGFR 항체 2 의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 43), 항 EGFR 항체 2 의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 44), 항 EGFR 항체 2 의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 45), 항 EGFR 항체 2 의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 46), 항 EGFR 항체 2 의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 47), 및 항 EGFR 항체 2 의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 48) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
도 14 는, 트라스투주맙 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 49) 및 트라스투주맙 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 50) 을 나타낸다.
도 15 는, 개변 HER2 항체의 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 49) 및 개변 HER2 항체의 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 51) 을 나타낸다.
도 16 은, 퍼투주맙 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 52) 및 퍼투주맙 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 53) 을 나타낸다.
도 17 은, 개변 HER2 항체 2 의 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 52) 및 개변 HER2 항체 2 의 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 54) 을 나타낸다.
도 18 은, 항 CDH6 항체의 경사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 55) 및 항 CD33 항체의 중사슬의 아미노산 서열 (서열 번호 56) 을 나타낸다.
도 19 는, 항체-면역 부활화제 콘주게이트 ((XXXIV) 의 분자) 인, SG 형 당사슬 리모델링 항체로부터 얻어진 항체-면역 부활화제 콘주게이트 (도 1A 의 (XXXIV) 의 분자) 및 MSG 형 당사슬 리모델링 항체로부터 얻어진 항체-면역 부활화제 콘주게이트 (도 1B 의 (XXXIV) 의 분자) 를 모식적으로 나타낸 것이다. (a) 는 면역 부활화제 D, (b) 는 링커 L, (c) 는 PEG 링커 (L(PEG)), (d) 는 N297 당사슬 (여기서, 백색의 원은 NeuAc(Sia), 백색의 육각형은 Man, 흑색의 육각형은 GlcNAc, 백색의 마름모꼴은 Gal, 및 백색의 역삼각형은 Fuc) 을 각각 나타낸다. 백색의 오각형은, 링커 L 유래의 알킨과 PEG 링커 유래의 아지드기가 반응하여 생성된 트리아졸 고리를 나타낸다. Y 자형은, 항체 Ab 를 나타낸다. PEG 링커는, 비환원 말단에 위치하는 시알산의 2 위치의 카르복실기와 아미드 결합을 개재하여 연결되어 있다. 이와 같은 표시 방법은, 특별히 언급이 없는 한, 본 명세서의 전체를 통틀어 적용된다.
도 20 은, 퍼투주맙의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 57), 퍼투주맙의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 58), 퍼투주맙의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 59), 퍼투주맙의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 60), 퍼투주맙의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 61), 및 퍼투주맙의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 62) 을 나타낸다. CDR 서열은 IMGT 의 정의에 의해 결정하였다.
도 21 은, 항 CDH6 항체의 CDRL1 아미노산 서열 (서열 번호 63), 항 CDH6 항체의 CDRL2 아미노산 서열 (서열 번호 64), 항 CDH6 항체의 CDRL3 아미노산 서열 (서열 번호 65), 항 CDH6 항체의 CDRH1 아미노산 서열 (서열 번호 66), 항 CDH6 항체의 CDRH2 아미노산 서열 (서열 번호 67), 및 항 CDH6 항체의 CDRH3 아미노산 서열 (서열 번호 68) 을 나타낸다. CDR 서열은 Kabat 의 정의에 의해 결정하였다.
본 발명은, 일 양태로서, STING 아고니스트 활성을 갖고, 면역 세포를 부활화하는 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 중간체인 CDN 유도체의 신규한 제조 방법을 제공한다. 그러한 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 국제공개 제2020/050406호 (특허문헌 6) 에 개시되어 있다.
본 발명의 일 실시형태는, 이하의 식 (Rp-VII) 또는 식 (Sp-VII) 의 구조를 갖는 CDN 유도체를, 입체 선택적으로 합성하는 방법이다.
[화학식 99]
Figure pct00099
일 실시형태인, 식 (Rp-VII) 의 CDN 유도체의 신규한 제조 방법을 중심으로 한, 본 발명의 대표적인 스킴의 개요를 이하에 나타낸다.
[화학식 100]
Figure pct00100
이하, 본 발명을 실시하기 위한 바람직한 형태에 대해 설명한다. 또한, 이하에 설명하는 실시형태는, 본 발명의 대표적인 실시형태의 일례를 나타낸 것이며, 이것에 의해 본 발명의 범위가 좁게 해석되지는 않는다. 또한, 본 명세서에 있어서, 화합물을 나타내기 위해, 각 반응식 중에 나타내는 화합물의 번호를 사용한다. 즉,「식 (I) 의 화합물」,「화합물 (I)」등으로 칭한다. 또, 그 이외의 번호의 화합물에 대해서도 동일하게 기재한다.
＜1. 고리형 디뉴클레오티드 (CDN) 및 CDN-링커의 제조＞
＜1-1. 고리형 디뉴클레오티드 (화합물 (Rp-VII) 및 (Sp-VII)) 의 제조 방법 및 그 중간체＞
종래의 제조 방법에서는, 이하에 나타내는 4 종류의 고리형 디뉴클레오티드가, 입체 비선택적으로 합성되어 있었다 (특허문헌 6 등 참조). 이들 4 종류의 고리형 디뉴클레오티드의 입체 배치는, 2 개의 인 원자 상의 절대 입체 배치에 대해, (2 위치의 인의 절대 입체 배치, 10 위치의 인의 절대 입체 배치) 의 순으로, (Rp, Rp), (Sp, Rp), (Rp, Sp), (Sp, Sp) 로 표기된다.
[화학식 101]
Figure pct00101
본 발명의 CDN 의 제조에서는, 일 실시형태에 있어서, 식 (Rp-VII) 의 고리형 디뉴클레오티드를, 이하의 합성 스킴 ＜A1-Rp＞ 에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜A1-Rp＞]
[화학식 102]
Figure pct00102
다른 실시형태에서는, 식 (Sp-VII) 의 고리형 디뉴클레오티드는, 이하의 합성 스킴 ＜A1-Sp＞ 에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜A1-Sp＞]
[화학식 103]
Figure pct00103
상기 [합성 스킴 ＜A1-Rp＞ 및 ＜A1-Sp＞] 중,
PG1 은, 하이드록시기의 보호기이고,
PG2 는, 하이드록시기의 보호기이고,
PG3 은, 아미노기의 보호기이고,
A1 은,
[화학식 104]
Figure pct00104
이고,
A2 는,
[화학식 105]
Figure pct00105
(여기서, PG4 는, 아미노기의 보호기이다)
이고,
광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 는,
[화학식 106]
Figure pct00106
(여기서, R1 은, 수소 또는 메틸이고, R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및 상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다)
이고, 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) 는,
[화학식 107]
Figure pct00107
(여기서, R1 및 R2 는, 위의 포스피틸화제 (Rc-II) 와 동일한 의미이다)
이고,
합성 스킴 ＜A1-Rp＞ 에 있어서, B1 은,
[화학식 108]
Figure pct00108
이고, 합성 스킴 ＜A1-Sp＞ 에 있어서, B1S 는,
[화학식 109]
Figure pct00109
이고,
합성 스킴 ＜A1-Rp＞ 에 있어서, B2 는,
[화학식 110]
Figure pct00110
이고, 합성 스킴 ＜A1-Sp＞ 에 있어서, B2S 는,
[화학식 111]
Figure pct00111
(여기서, PG6 은, 아미노기의 보호기이다)
이고,
Q 는, 티올기 또는 하이드록시기이다.
본 제조 방법에 있어서, PG1 로는, 예를 들어, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴을 들 수 있다. 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴이다. 보다 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴이다.
PG2 로는, 예를 들어, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸을 들 수 있다. 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸 또는 트리틸이다. 보다 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸이다.
PG3 으로는, 예를 들어, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐을 들 수 있다. 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 또는 알릴옥시카르보닐이다. 보다 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
PG4 로는, 예를 들어, 벤질, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐을 들 수 있다. 바람직하게는 벤조일 또는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
PG6 으로는, 예를 들어, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 메톡시카르보닐 또는 에톡시카르보닐을 들 수 있다. 바람직하게는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 또는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다. 보다 바람직하게는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 알릴옥시카르보닐, 또는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 a1)
일 실시형태에서는, 본 공정은, 식 (I) 의 화합물을, 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 와 반응시켜, 식 (Rc-III) 의 화합물을 얻는 공정이다. 다른 실시형태에서는, 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) 와 반응시켜, 식 (Sc-III) 의 화합물을 얻는 공정이다.
일 실시형태에 있어서, 본 공정에 사용되는 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 로는, 이하의 식 (Rc-II-1) 또는 식 (Rc-II-2) :
[화학식 112]
Figure pct00112
[식 중,
R1 은, 수소 또는 메틸이고,
R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고,
여기서, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및
상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다.]
로 나타내는 화합물을 들 수 있다. 상기 광학 활성의 포스피틸화제는, 식 (I) 의 화합물과 식 (IV) 의 화합물을 입체 선택적으로 축합시켜, 식 (Rc-V) 의 화합물을 생성시키기 위한 시약이고, 식 (I) 의 화합물과 입체 선택적으로 반응하여, 식 (Rc-III) 의 중간체가 생성된다.
광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 로는, (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aR)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-메틸-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aR)-1-클로로-3-[(4-메틸벤젠-1-술포닐)메틸]테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-[(4-니트로페닐)메틸]테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aR)-1-클로로-3-{[메틸(디페닐)실릴]메틸}테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-[(4-메톡시페닐)메틸]테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-(디페닐메틸)테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aR)-1-클로로-3a,4-디하이드로-1H,3H-[1,3,2]옥사자포스포로[3,4-a]인돌 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aR)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-메틸-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aR)-1-클로로-3-{[메틸(디페닐)실릴]메틸}테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aR)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aR)-1-클로로-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aR)-1-클로로-3-{[메틸(디페닐)실릴]메틸}테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 광학 활성의 포스피틸화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (I) 로 나타내는 화합물에 대하여, 1 ∼ 3 당량이다.
상기에 예시된 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 의 구조를 이하에 나타낸다.
Figure pct00113
또, 다른 실시형태에 있어서 사용되는 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) 로는, 이하의 식 (Sc-II-1) 또는 식 (Sc-II-2) :
[화학식 113]
Figure pct00114
[식 중,
R1 은, 수소 또는 메틸이고,
R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고,
여기서, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및
상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다.]
로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) 로는, (3aS)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aS)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-메틸-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aS)-1-클로로-3-[(4-메틸벤젠-1-술포닐)메틸]테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-[(4-니트로페닐)메틸]테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aS)-1-클로로-3-{[메틸(디페닐)실릴]메틸}테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-[(4-메톡시페닐)메틸]테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-(디페닐메틸)테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aS)-1-클로로-3a,4-디하이드로-1H,3H-[1,3,2]옥사자포스포로[3,4-a]인돌 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 (3aS)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aS)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-메틸-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aS)-1-클로로-3-{[메틸(디페닐)실릴]메틸}테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 (3aS)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3aS)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3R,3aS)-1-클로로-3-페닐테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴, (3S,3aS)-1-클로로-3-{[메틸(디페닐)실릴]메틸}테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 광학 활성의 포스피틸화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (I) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
상기에 예시된 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) 의 구조를 이하에 나타낸다.
Figure pct00115
본 공정에서는 입체 선택적으로 반응이 진행되어, 원하는 절대 입체 배치를 갖는 식 (III) 의 화합물을 얻을 수 있다. 여기서, 식 (III) 의 화합물의 절대 입체 배치는, 이하에 예시하는 바와 같이, 프롤린올 골격 중에 포함되는 부제 탄소 원자 상의 절대 입체 배치의 (Rc) 또는 (Sc) 를 사용하여 나타낸다.
[화학식 114]
Figure pct00116
일 실시형태에 있어서, R1 및 R2 가 수소 원자인 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) 를 사용한 경우, 이하에 나타내는 바와 같이, 인 원자 상의 절대 입체 배치가 (Sp) 인 식 (Rc-III) 의 화합물이 생성된다.
[화학식 115]
Figure pct00117
또, 다른 실시형태에 있어서, 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) 를 사용한 경우, 인 상의 부제점에 관하여 반대의 절대 입체 배치를 갖는 디아스테레오머를 취득할 수 있다.
[화학식 116]
Figure pct00118
즉, 절대 입체 배치가 (Rc) 또는 (Sc) 인 광학 활성의 포스피틸화제를 사용함으로써, 각각 90 ％ 이상의, 바람직하게는 95 ％ 이상의, 보다 바람직하게는 98 ％ 이상의 높은 선택성으로, 원하는 디아스테레오머를 얻을 수 있다. 종래의 제조 방법에서는, 입체 비선택적으로 포스포로티오에이트 결합이 형성되고, 대체로 50 : 50 의 비율로 (Rp) 체와 (Sp) 체가 생성되기 때문에, 목적으로 하는 절대 입체 배치를 갖는 화합물의 수율은 절반 이하였다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (I) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 아세토니트릴, 디클로로메탄, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 톨루엔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -78 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 10 시간이고, 보다 바람직하게는 5 ∼ 180 분이다.
(공정 a2)
일 실시형태에서는, 본 공정은, 식 (Rc-III) 의 화합물을, 식 (IV) 의 화합물 또는 그 염과, 활성화제의 존재하에서 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로 처리하고, 추가로 티오화제 (황화제 또는 티올화제라고도 한다) 와 반응시키고, 계속해서 PG2 를 탈보호하여, 식 (Rc-V) 의 화합물을 얻는 공정이다. 임의로, PG2 를 탈보호하기 전에 생성물을 단리해도 된다. 다른 실시형태에서는, 식 (Sc-III) 의 화합물로부터, 동일한 반응에 의해, 식 (Sc-V) 의 화합물을 얻는 공정이다. 본 공정은, 임의로 유기 또는 무기 염기로 처리하여, 그 염으로 변환시키는 공정을 포함한다.
본 공정에 있어서, 티오화제와 반응시킨 후이고, PG2 를 탈보호하기 전에 얻어지는 중간체로서, 식 (Rc-V0) :
[화학식 117]
Figure pct00119
으로 나타내는 화합물 또는 그 염 (여기서, A2, B2, PG1, PG2 및 PG3 은, 합성 스킴 ＜A1-Rp＞ 에서 설명한 기와 동일한 의미이다) 이 얻어진다.
또, 다른 실시양태에서는, 티오화제와 반응시킨 후이고, PG2 를 탈보호하기 전에 얻어지는 중간체로서, 식 (Sc-V0) :
[화학식 118]
Figure pct00120
으로 나타내는 화합물 또는 그 염 (여기서, A2, B2S, PG1, PG2 및 PG3 은, 합성 스킴 ＜A1-Sp＞ 에서 설명한 기와 동일한 의미이다) 이 얻어진다.
일 실시형태로는, 본 공정에서는, 입체 선택적으로 반응이 진행되어, 목적으로 하는 절대 입체 배치를 갖는 식 (Rc-V) 의 화합물을, 식 (Rc-V0) 의 중간체를 개재하여 얻을 수 있다. 식 (V) 및 식 (V0) 의 절대 입체 배치의 표기는, 상기 식 (III) 의 화합물과 동일하게, B2 내 프롤린올 골격 중에 포함되는 부제 탄소 원자 상의 절대 입체 배치를 사용하여 나타낸다.
[화학식 119]
Figure pct00121
본 공정에서는, 식 (Rc-III) 으로 구축한 부제 환경을 유지하면서, 70 ％ 이상, 75 ％ 이상, 80 ％ 이상, 85 ％ 이상, 90 ％ 이상, 95 ％ 이상 또는 98 ％ 이상의 선택성으로, 입체 반전형으로 반응이 진행된다. 이로써, 원하는 디아스테레오머를, 70 ％ 이상, 75 ％ 이상, 80 ％ 이상, 85 ％ 이상, 90 ％ 이상, 95 ％ 이상 또는 98 ％ 이상의 높은 선택성으로 얻을 수 있다. 종래법에서는, 입체 비선택적으로 식 (I) 의 화합물과 식 (IV) 의 화합물이 축합되기 때문에, 대체로 50 : 50 의 비율로, 식 (V) 의 화합물에 상당하는, 분리 곤란한 (Rp) 체와 (Sp) 체의 혼합물이 얻어지고 있었다. 따라서, 원하는 화합물인 (Rc-V) 체의 수율에 관해서는, 입체 선택성의 관점에서 약 2 배의 개선이 보여질 뿐만 아니라, 분리 곤란한 대량의 인 상의 디아스테레오머의 분리 부하를 고려하면, 생산성은 3 ∼ 10 배 정도까지 향상되는 것으로 상정된다.
한편, 식 (Sc-III) 의 화합물을 사용한 경우, 동일하게 반전된 디아스테레오머인 식 (Sc-V) 의 화합물을, 식 (Sc-V0) 의 중간체를 개재하여 얻을 수 있다. 따라서, 사용하는 광학 활성의 포스피틸화제의 프롤린올 골격 상의 부제 탄소의 절대 입체 배치에 의해, 원하는 절대 입체 배치를 갖는 화합물을 입체 선택적으로 얻을 수 있다.
본 공정에서 사용되는 활성화제로는, 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물의 절대 입체 배치를 저해하지 않고 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 1-페닐이미다졸, 벤조이미다졸, 1-메틸벤조이미다졸, 1-시아노메틸피페리딘, 1-피롤리딘아세토니트릴, 1-(시아노메틸)이미다졸, 또는 그것들의 염을 들 수 있고, 바람직하게는 1-페닐이미다졸, 1-메틸벤조이미다졸, 1-시아노메틸피페리딘, 1-(시아노메틸)이미다졸 또는 그것들의 염을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1-페닐이미다졸, 1-메틸벤조이미다졸 또는 그것들의 염을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 활성화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정에 사용되는 화합물 (IV) 또는 그 염의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 3 당량이고, 보다 바람직하게는 0.8 ∼ 1.2 당량이다.
본 공정에 사용되는 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 무수 아세트산, 아세틸클로라이드, N-숙신이미딜아세테이트, 펜타플루오로페닐아세테이트, 1-아세틸-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘, N-메톡시디아세트아미드, N-아세틸이미다졸, 트리플루오로아세트산 무수물, 비스트리플루오로아세트아미드, 에틸트리플루오로아세테이트, 메틸트리플루오로아세테이트, 펜타플루오로페닐트리플루오로아세테이트, 트리플루오로아세틸벤조트리아졸, S-에틸트리플루오로티오아세테이트, N-메틸비스트리플루오로아세트아미드, 트리플루오로아세틸트리플레이트, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, 벤조일클로라이드, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 벤조일트리플루오로메탄술포네이트, 3-벤조일티아졸리딘-2-티온, tert-부틸페닐카보네이트, N-(tert-부톡시카르보닐옥시)프탈이미드, 2-(tert-부톡시카르보닐티오)-4,6-디메틸피리딘, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, tert-부틸카르바제이트, 2-(tert-부톡시카르보닐옥시이미노)-2-페닐아세토니트릴, 1-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, 디-tert-부틸디카보네이트, 9-플루오레닐메틸펜타플루오로페닐카보네이트, 클로로포름산 9-플루오레닐메틸, 9-플루오레닐메틸카르바제이트, 19-플루오레닐메틸카바메이트, 1-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]벤조트리아졸, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, 클로로포름산알릴, 디알릴디카보네이트, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, 알릴페닐카보네이트, N-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐옥시)숙신이미드, 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸, 클로로포름산벤질, 벤질카르바제이트, 벤질페닐카보네이트, N-카르보벤질옥시숙신이미드, 디벤질디카보네이트, 4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드, N-에톡시카르보닐프탈이미드, 클로로포름산에틸, 디에틸디카보네이트, 에틸이미다졸-1-카르복실레이트, 2-에톡시-1-(에톡시카르보닐)-1,2-디하이드로퀴놀린, 클로로포름산메틸, 디메틸카보네이트, 디메틸디카보네이트, 또는 메틸이미다졸-1-카르복실레이트를 들 수 있고, 바람직하게는 무수 아세트산, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 무수 아세트산, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.7 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 5 시간이고, 보다 바람직하게는 5 ∼ 90 분이다.
본 공정의 활성화제, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제, 및 티오화제의 반응은, 바람직하게는 탈수제의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 탈수제로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 몰레큘러시브 3A, 몰레큘러시브 4A, 몰레큘러시브 5A, 몰레큘러시브 13X, 황산마그네슘, 황산나트륨, 및 염화칼슘 등을 들 수 있고, 바람직하게는 몰레큘러시브 3A, 몰레큘러시브 4A, 몰레큘러시브 5A, 몰레큘러시브 13X 및 황산나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 몰레큘러시브 3A, 몰레큘러시브 4A 를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 탈수제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물의 질량에 대하여, 0.01 ∼ 3 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 1 배의 질량이다.
본 공정에서 사용되는 티오화제로는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, 3H-1,2-벤조디티올-3-온-1,1-디옥사이드, 5-페닐-3H-1,2,4-디티아졸-3-온 및 [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온을 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 티오화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 2 당량이다.
본 공정의 티오화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 5 시간이고, 보다 바람직하게는 5 ∼ 90 분이다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-III) 또는 식 (Sc-III) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 20 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 10 당량이다.
본 공정의 탈보호 반응에 사용되는 산으로는, 예를 들어, 염산, 황산, 포름산, 옥살산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 모노클로로아세트산, 디클로로아세트산, 트리클로로아세트산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 벤젠술폰산 등을 들 수 있다. 바람직하게는 염산, 아세트산, 모노클로로아세트산, 디클로로아세트산을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 염산, 디클로로아세트산을 들 수 있다. 탈보호에 사용되는 pH 는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 1 ∼ 4 이다. 탈보호 반응의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한, 제한되지 않지만, 바람직하게는 -30 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ 내지 30 ℃ 이다. 본 반응의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0.5 ∼ 48 시간이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 24 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 아세토니트릴, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 아세토니트릴을 들 수 있다.
식 (Rc-V) 또는 식 (Sc-V) 의 화합물을 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 유기 염기로는, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등을 들 수 있다. 또, 무기 염기로는, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등이 있다. 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨을 들 수 있다. 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨을 들 수 있다.
(공정 a3)
일 실시형태에서는, 본 공정은, 식 (Rc-V) 의 화합물 또는 그 염을, 축합제의 존재하에서 고리화시키고, 이어서, 티오화제 또는 산화제와 반응시켜, 식 (Rc-VI) 의 화합물을 얻는 공정이다. 다른 실시형태에서는, 식 (Sc-V) 의 화합물로부터, 동일한 반응에 의해, 식 (Sc-VI) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정에 있어서, 티오화제와 반응시키는 경우, Q 가 티올기인 식 (VI) 의 화합물을 얻을 수 있다. 또, 본 공정에 있어서, 산화제와 반응시키는 경우, Q 가 하이드록시기인 식 (VI) 의 화합물을 얻을 수 있다.
본 공정에 사용되는 축합제로는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스포리난 2-옥사이드, 디메틸클로로포스페이트, 디에틸클로로포스페이트, 2-클로로-2-옥소-1,3,2-디옥사포스포란, 1H-벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트, 클로로트리피롤리디노헥사플루오로포스페이트, 브로모트리피롤리디노헥사플루오로포스페이트, 프로필포스폰산 무수물, 디이소프로필클로로포스페이트, 비스(2,6-디메틸페닐)클로로포스페이트, 비스(디메틸아미노)포스포릴클로라이드, 비스(2-옥소-3-옥졸리디닐)포스폰산클로라이드, 디페닐포스핀산클로라이드, 디에틸클로로티오포스페이트, (7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트, 6-트리플루오로메틸-1H-벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트, 디페닐포스포로클로리데이트, 비스(2,2,2-트리클로로에틸)포스포로클로리데이트, 디클로로인산에틸, o-페닐렌포스포로클로리데이트, 3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온, 2-클로로-1-메틸피리디늄요오다이드, 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-벤조트리아졸륨 3-옥사이드헥사플루오로포스페이트, (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스(디메틸아미노)포스포늄헥사플루오로포스페이트, 1-아다만탄카르보닐클로라이드, 피발로일클로라이드를 들 수 있고, 바람직하게는 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스포리난 2-옥사이드, 디메틸클로로포스페이트, 디에틸클로로포스페이트, 2-클로로-2-옥소-1,3,2-디옥사포스포란, 프로필포스폰산 무수물을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스포리난 2-옥사이드, 2-클로로-2-옥소-1,3,2-디옥사포스포란, 프로필포스폰산 무수물을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 축합제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-V) 또는 식 (Sc-V) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 축합제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -78 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 0 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 10 시간이고, 보다 바람직하게는 5 분 ∼ 2 시간이다.
본 공정에서 사용되는 티오화제로는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, 3H-1,2-벤조디티올-3-온-1,1-디옥사이드, 5-페닐-3H-1,2,4-디티아졸-3-온 및 [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온을 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 티오화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-V) 또는 식 (Sc-V) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 2 당량이다.
본 공정의 티오화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -40 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 10 시간이고, 보다 바람직하게는 5 분 ∼ 3 시간이다.
본 공정에서 사용되는 산화제로는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 요오드, 브롬, tert-부틸하이드로퍼옥사이드, 3-클로로과벤조산, 과산화수소, 과요오드산, 과망간산칼륨, 산소 및 오존 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 요오드, 3-클로로과벤조산, 과산화수소, 산소를 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 산화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rc-V) 또는 식 (Sc-V) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 산화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -40 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 10 시간이고, 보다 바람직하게는 5 분 ∼ 3 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 피리딘을 들 수 있다.
식 (VI) 의 화합물의 절대 입체 배치는, B2 내의 프롤린올 골격 상의 부제 탄소 원자의 절대 입체 배치로 나타낸다. 또한, Q 가 티올기인 식 (VI) 의 화합물에서는, 이하에 나타내는 바와 같이, 2 개의 인 원자 상의 절대 입체 배치에 대하여, (2 위치의 인의 절대 입체 배치, 10 위치의 인의 절대 입체 배치) 의 순으로 표기한다. 앞의 프롤린올 골격 상의 부제 탄소 원자 상의 입체와 함께, (Rc, Rp, Rp), (Rc, Sp, Rp), (Rc, Rp, Sp), (Rc, Sp, Sp), (Sc, Rp, Rp), (Sc, Sp, Rp), (Sc, Rp, Sp), (Sc, Sp, Sp) 로 표기된다.
[화학식 120]
Figure pct00122
본 공정에 있어서의 고리화 반응은, 입체 선택적으로 반응을 제어하는 것은 아니지만, 분자 자체의 입체 구조에 기초하여, 일방의 디아스테레오머의 생성이 우위로 진행된다. 예를 들어, 본 명세서의 실시예 3, 실시예 8 및 실시예 A5-4 에 나타낸 바와 같이, 식 (Rc-V) 의 화합물에서 식 (Rc-VI) 의 화합물로의 고리화 반응에 있어서, 원하는 절대 입체 배치를 갖는 (Rc, Rp, Rp-VI) 체가, (Rc, Sp, Rp-VI) 체에 대하여, 약 70 : 30 ∼ 85 : 15 의 선택성으로 얻어졌다.
(공정 a4)
일 실시형태에서는, 본 공정은, (Rc-VI) 의 화합물의 티오인산 부위의 보호기인 B2, 및 A2 중의 보호기인 PG4 를 탈보호하여, 식 (Rp-VII) 의 화합물을 얻는 공정이다. 다른 실시형태에서는, 식 (Sc-VI) 의 화합물로부터, 동일한 반응에 의해, 식 (Sp-VII) 의 화합물을 얻는 공정이다. 본 공정은, 임의로 유기 또는 무기 염기로 처리하여, 그 염으로 변환시키는 공정을 포함한다.
본 공정의 탈보호 반응에 사용되는 암모니아는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 28 ％ 암모니아수를 사용할 수 있다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 30 ℃ ∼ 65 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 1 ∼ 96 시간이고, 보다 바람직하게는 5 ∼ 48 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 피리딘, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 피리딘을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 메탄올, 피리딘을 들 수 있다.
식 (Rp-VII) 또는 식 (Sp-VII) 의 화합물을 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 유기 염기로는, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등을 들 수 있다. 또, 무기 염기로는, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등을 들 수 있다. 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨을 들 수 있다.
(신규 중간체)
상기 [합성 스킴 ＜A1-Rp＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (Rc-III) 으로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 121]
Figure pct00123
여기서, B1 은,
[화학식 122]
Figure pct00124
이고, R1 은, 수소 또는 메틸이고, R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및 상기 페닐은, 비치환이거나, 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있는 기가 바람직하다.
보다 바람직하게는 B1 은,
[화학식 123]
Figure pct00125
이고, 더욱 바람직하게는 B1 은,
[화학식 124]
Figure pct00126
이다.
PG1 은, 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디메틸실릴이고, 보다 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴이다.
PG2 는, 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸이고, 보다 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸이다.
PG3 은, 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고, 보다 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
또, 상기 [합성 스킴 ＜A1-Rp＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (Rc-V0) 으로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 125]
Figure pct00127
여기서, A2 는, 바람직하게는
[화학식 126]
Figure pct00128
이고, 보다 바람직하게는
[화학식 127]
Figure pct00129
이다.
PG4 는, 아미노기의 보호기이고, 바람직하게는 벤질, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐을 들 수 있다. 보다 바람직하게는 벤조일 또는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
B1, PG1, PG2 및 PG3 은, 상기에 나타낸 식 (Rc-III) 의 화합물의 각 기와 동일한 의미이다.
또한, 상기 [합성 스킴 ＜A1-Rp＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (Rc-V) 로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 128]
Figure pct00130
여기서, A2 는, 상기에 나타낸 식 (Rc-V0) 의 화합물의 A2 와 동일한 의미이다.
B2 는, 바람직하게는
[화학식 129]
Figure pct00131
이고, R1 은, 수소 또는 메틸이고, R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있거나, 및 상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있는 기가 바람직하다.
보다 바람직하게는 B2 는,
[화학식 130]
Figure pct00132
이고, 더욱 바람직하게는 B2 는,
[화학식 131]
Figure pct00133
이다.
PG6 은, 아미노기의 보호기이고, 바람직하게는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 메톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐이고, 보다 바람직하게는 아세틸, 트리플루오로아세틸이다.
PG1 은, 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고, 보다 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴이다.
PG3 은, 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고, 보다 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
또, 본 공정 a4 는, 식 (Rp-VII) 에 있어서, Q 가 티올기인 화합물을, 그 염으로 변환시키기 전에, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 처리하거나, 및/또는, 그 염으로 변환시킨 후에, 결정화하여, 식 (Rp, Rp-VII') :
[화학식 132]
Figure pct00134
의 화합물 또는 그 염을 얻는 것을 추가로 포함한다.
본 발명의 제조 방법에 의해 얻어진 식 (Rp-VII) 또는 식 (Sp-VII) 로 나타내는 화합물, 특히, 식 (Rp, Rp-VII') 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-XII) 로 나타내는 CDN-링커 (이하, CDN 콘주게이트 전구체라고도 한다), 및 그 CDN 콘주게이트 전구체에 추가로 항체가 결합한 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 위해 사용할 수 있다. 또, 본 발명의 제조 방법에 의해 얻어진 식 (Rp-VII) 또는 식 (Sp-VII) 의 화합물은, 이것에 한정되지 않고, 다른 화학 구조를 갖는 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조나, 그 밖의 용도를 위해 사용할 수도 있다.
＜1-2. 본 발명의 화합물 (Rp-VII) 의 제조 방법과 종래법 (특허문헌 6 외) 의 비교＞
종래법에서는, 고리형 디뉴클레오티드가, 대략 동일한 비율로 4 종류의 디아스테레오머 혼합물이 생성되기 때문에, 목적으로 하는 입체 배치를 갖는 고리형 디뉴클레오티드를, 칼럼 정제로 취득할 필요가 있어, 수율이 매우 낮아진다는 문제가 있었다. 본 발명의 식 (Rp-VII) 의 화합물의 제조 방법에서는, 목적으로 하는 입체를 선택적으로 합성하는 것이 가능해지고, 결과적으로, 이하에 나타내는 특허문헌 6 의 합성 스킴과 비교하여, 총 수율의 향상, 칼럼 정제의 회피와 같은 우수한 효과를 갖는 제조 방법의 제공이 가능해졌다.
[종래법의 합성 스킴 (특허문헌 6 실시예 77 의 합성 스킴으로부터]
[화학식 133]
Figure pct00135
[본 발명의 식 (Rp-VII) 의 제조 방법의 효과]
종래의 합성 루트 (특허문헌 6) 에서는, 인 상의 입체에 대해서는, 반응으로 제어하는 것이 아니라, 4 종류의 디아스테레오머 혼합물로 합성하고, 최종적으로 칼럼 정제로 원하는 입체를 취득하는 방법이었기 때문에, 수율이 매우 낮았다 (8 반응 공정의 총 수율 7.5 ％ (불순물 함유로 기재되어 있다)).
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, 제 1 단계의 포스포로티오에이트 결합을 입체 선택적으로 실시하는 것이 가능하고, 결과적으로, 식 (I) 의 화합물로부터의 총 수율이 약 20 ∼ 40 ％ 향상되고, 품질도 HPLC 분석으로 92.4 ∼ ＞ 99 ％ 로 고품질이었다.
또한, 상기 합성 스킴 ＜A1-Rp＞ 또는 ＜A1-Sp＞ 의 (공정 a1) 에 있어서, 식 (I) 의 화합물로서, 이하의 식 (I-1) 또는 식 (I-2) :
[화학식 134]
Figure pct00136
[식 중,
A3 은, 치환 혹은 비치환의 데아자푸린기, 치환 혹은 비치환의 푸린염기, 또는 치환 혹은 비치환의 피리미딘염기이고, 및
Y 는, 각각 독립적으로, H, F 또는 -O-PG1 이고, 여기서, PG1 은, 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물을 사용하고, 및
(공정 a2) 에 있어서, 식 (IV) 로서, 이하의 식 (IV-1) 또는 식 (IV-2) :
[화학식 135]
Figure pct00137
[식 중,
A4 는, 치환 혹은 비치환의 데아자푸린기, 치환 혹은 비치환의 푸린염기, 또는 치환 혹은 비치환의 피리미딘염기이고, 및
Z 는, 각각 독립적으로, H, F 또는 -O-PG1 이고, 여기서, PG1 은, 하이드록시기의 보호기이다.]
로 나타내는 화합물 또는 그 염을 사용함으로써, 그 조합에 따라, 식 (Rp-VII) 에 대응하는 이하의 12 원 고리 ∼ 14 원 고리 구조를 갖는 4 종류의 고리형 디뉴클레오티드 유도체, 또는, 식 (Sp-VII) 에 대응하는 12 원 고리 ∼ 14 원 고리 구조를 갖는 4 종류의 고리형 디뉴클레오티드 (도시 생략) 를 합성할 수도 있다.
[화학식 136]
Figure pct00138
＜1-3. 식 (IV) 의 화합물의 제조 방법＞
상기 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 식 (IV) 의 화합물 또는 그 염은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜A2＞]
[화학식 137]
Figure pct00139
상기 [합성 스킴 ＜A2＞] 중,
A1 및 A2 는, 상기 [합성 스킴 ＜A1＞] 과 동일한 의미이고,
PG5 는, 하이드록시기의 보호기이다.
본 제조 방법에 있어서, PG5 로는, 예를 들어, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸을 들 수 있다. 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸 또는 4-메톡시트리틸을 들 수 있다.
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 a5) 및 (공정 a5')
본 공정은, 식 (VIII) 또는 식 (VIII') 의 화합물을, 아인산에스테르와 반응시켜, 식 (IX) 혹은 식 (IX') 의 화합물 또는 그것들의 염을 얻는 공정이다.
본 공정에 사용되는 아인산에스테르로는, 아인산디페닐, 아인산메틸, 아인산디에틸, 또는 아인산디부틸을 들 수 있고, 바람직하게는 아인산디페닐, 아인산메틸을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 아인산디페닐을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 아인산에스테르의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (VIII) 또는 식 (VIII') 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 20 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 10 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 120 시간이고, 보다 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 피리딘, 아세토니트릴을 들 수 있다.
식 (IX) 또는 식 (IX') 의 화합물을, 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 시약으로는, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔, 프로필아민, iso-프로필아민, 부틸아민, iso-부틸아민, tert-부틸아민, 펜틸아민, 아닐린, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨 tert-부톡시드, 염화나트륨, 및 염화칼륨 등이 있다. 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, iso-프로필아민, 부틸아민, iso-부틸아민, tert-부틸아민, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨을 들 수 있다. 보다 바람직하게는 트리에틸아민, tert-부틸아민, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨을 들 수 있다. 염으로 변환시키기 위해 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (2) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 3 ∼ 8 당량이다.
(공정 a5")
본 공정은, 식 (IX') 의 화합물 또는 그 염을, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (IX) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정이다.
본 공정에 사용되는 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 무수 아세트산, 아세틸클로라이드, N-숙신이미딜아세테이트, 펜타플루오로페닐아세테이트, 1-아세틸-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘, N-메톡시디아세트아미드, N-아세틸이미다졸, 트리플루오로아세트산 무수물, 비스트리플루오로아세트아미드, 에틸트리플루오로아세테이트, 메틸트리플루오로아세테이트, 펜타플루오로페닐트리플루오로아세테이트, 트리플루오로아세틸벤조트리아졸, S-에틸트리플루오로티오아세테이트, N-메틸비스트리플루오로아세트아미드, 트리플루오로아세틸트리플레이트, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, 벤조일클로라이드, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 벤조일트리플루오로메탄술포네이트, 3-벤조일티아졸리딘-2-티온, tert-부틸페닐카보네이트, N-(tert-부톡시카르보닐옥시)프탈이미드, 2-(tert-부톡시카르보닐티오)-4,6-디메틸피리딘, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, tert-부틸카르바제이트, 2-(tert-부톡시카르보닐옥시이미노)-2-페닐아세토니트릴, 1-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, 디-tert-부틸디카보네이트, 9-플루오레닐메틸펜타플루오로페닐카보네이트, 클로로포름산 9-플루오레닐메틸, 9-플루오레닐메틸카르바제이트, 19-플루오레닐메틸카바메이트, 1-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]벤조트리아졸, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, 클로로포름산알릴, 디알릴디카보네이트, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, 알릴페닐카보네이트, N-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐옥시)숙신이미드, 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸, 클로로포름산벤질, 벤질카르바제이트, 벤질페닐카보네이트, N-카르보벤질옥시숙신이미드, 디벤질디카보네이트, 4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드, N-에톡시카르보닐프탈이미드, 클로로포름산에틸, 디에틸디카보네이트, 에틸이미다졸-1-카르복실레이트, 2-에톡시-1-(에톡시카르보닐)-1,2-디하이드로퀴놀린, 클로로포름산메틸, 디메틸카보네이트, 디메틸디카보네이트, 또는 메틸이미다졸-1-카르복실레이트를 들 수 있고, 바람직하게는 무수 아세트산, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, 4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (IX') 로 나타내는 화합물에 대하여, 1 ∼ 15 당량이고, 보다 바람직하게는 3 ∼ 8 당량이다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (IX') 로 나타내는 화합물에 대하여, 1 ∼ 20 당량이고, 보다 바람직하게는 4 ∼ 10 당량이다.
본 공정의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 40 ℃ ∼ 80 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 1 시간 ∼ 96 시간이고, 보다 바람직하게는 24 시간 ∼ 72 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 4-메틸피리딘, 2-메틸테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 1-메틸-2-피롤리돈을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 2-메틸테트라하이드로푸란, 아세토니트릴을 들 수 있다.
얻어진 식 (IX) 의 화합물을 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 시약 및 그 양으로는, 상기 공정 a5 와 동일한 시약 및 양을 사용할 수 있다.
(공정 a6)
본 공정은, 식 (IX) 의 화합물의 5' 수산기의 보호기인 PG5 를 탈보호하여, 식 (IV) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 탈보호 반응에 사용되는 산으로는, 아세트산, 클로로아세트산, 디클로로아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산, 및 황산 등을 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산, 클로로아세트산, 디클로로아세트산, 트리클로로아세트산을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 디클로로아세트산을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 산의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (IX) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.05 ∼ 500 당량이고, 보다 바람직하게는 0.1 ∼ 200 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 1 시간 ∼ 96 시간이고, 보다 바람직하게는 5 시간 ∼ 48 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 아세토니트릴, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
＜1-4. CDN-링커 (화합물 (Rp, Rp-XII)) 의 제조 방법＞
식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물 또는 그 염은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다. 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물은, 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조 전구체이다.
[합성 스킴 ＜A3＞]
[화학식 138]
Figure pct00140
상기 [합성 스킴 ＜A3＞] 중,
PG1, PG3, A1 은, 상기 [합성 스킴 ＜A1-Rp＞] 와 동일한 의미이다.
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 a7)
본 공정은, 식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물의 보호기인 PG1 및 PG3 을 탈보호하여, 식 (Rp, Rp-X) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정에 사용하는 탈보호제로는, 불화암모늄, 불화테트라-n-부틸암모늄, 불화수소피리딘, 및 트리에틸아민삼불화수소산염 등을 들 수 있고, 바람직하게는 불화암모늄, 불화테트라-n-부틸암모늄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 불화테트라-n-부틸암모늄을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 탈보호제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-VII') 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 60 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 30 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 10 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 30 분 ∼ 240 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 120 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란, 디클로로메탄, 디메틸술폭시드를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 테트라하이드로푸란, 디메틸술폭시드를 들 수 있다.
(공정 a8)
본 공정은, 식 (Rp, Rp-X) 의 화합물과 식 (XI) 의 화합물을 축합시켜, 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정이다.
식 (XI) 로 나타내는 화합물은, 바람직하게는 활성 에스테르로 유도함으로써, 식 (Rp, Rp-X) 으로 나타내는 화합물과 축합시킬 수 있다. 본 공정에서 사용되는 식 (XI) 로 나타내는 화합물의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-X) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.3 ∼ 3 당량이고, 보다 바람직하게는 0.7 ∼ 1.3 당량이다.
본 공정에 있어서의 활성 에스테르로의 유도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드·염산염 (WSCD·HCl), 또는 N,N'-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC) 등의 축합제를 사용하여, 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt), 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (HOAt), N-하이드록시숙신이미드, 시아노(하이드록시이미노)아세트산에틸, 또는 p-니트로페놀 등의 첨가제를 사용하여 실시할 수 있고, 또는, 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-벤조트리아졸륨 3-옥사이드헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드헥사플루오로포스페이트 (HATU), 또는 (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄헥사플루오로인산염 (COMU), 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드 (DMT-MM) 등의 축합제를 사용하여 실시할 수 있다. 바람직하게는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드·염산염과 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt), 또는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드·염산염과 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸, 또는 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드 (DMT-MM) 를 사용하여 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드·염산염의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-X) 으로 나타내는 화합물에 대하여 0.5 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 0.7 ∼ 2 당량이다. 본 공정에 사용되는 1-하이드록시벤조트리아졸, 또는 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-X) 으로 나타내는 화합물에 대하여 0.05 ∼ 4 당량이고, 보다 바람직하게는 0.1 ∼ 2 당량이다. 본 공정에 사용되는 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-X) 으로 나타내는 화합물에 대하여 0.3 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 0.7 ∼ 2 당량이다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 및 아세트산나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민, N-메틸모르폴린을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (Rp, Rp-X) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 물, 테트라하이드로푸란, N,N-디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 및 디메틸술폭시드 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있다.
식 (Rp, Rp-XII) 를 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 염기로는, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 프로필아민, iso-프로필아민, 부틸아민, iso-부틸아민, tert-부틸아민, 펜틸아민, 아닐린 등의 유기 염기나, 2-에틸헥산산칼륨, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 2-에틸헥산산나트륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨 tert-부톡시드, 염화나트륨, 및 염화칼륨 등의 무기 염기를 들 수 있다. 바람직하게는 트리에틸아민, tert-부틸아민, 2-에틸헥산산칼륨, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 2-에틸헥산산나트륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨을 들 수 있다. 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 2-에틸헥산산칼륨, 탄산나트륨을 들 수 있다.
식 (Rp, Rp-XII) 를 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 용매로는, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 물, 2-프로판올, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 및 아세트산에틸 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있다.
＜2. 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 원료 화합물 (I) 의 제조＞
＜2-1. 식 (I) 의 화합물의 제조 방법＞
상기 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 식 (I) 의 화합물은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜B1＞]
[화학식 139]
Figure pct00141
상기 [합성 스킴 ＜B1＞] 중,
PG1, PG2, 및 PG3 은, 상기 [합성 스킴 ＜A1-Rp＞] 와 동일한 의미이고,
X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.
본 제조 방법에 있어서,
PG1 은 하이드록시기의 보호기를 나타내고, 그 보호기로서, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴을 들 수 있다. 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴이다. 보다 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴이다.
PG2 는 하이드록시기의 보호기를 나타내고, 그 보호기로서, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸을 들 수 있다. 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸 또는 트리틸이다. 보다 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸이다.
PG3 은 아미노기의 보호기를 나타내고, 그 보호기로서, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐을 들 수 있다. 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 또는 알릴옥시카르보닐이다. 보다 바람직하게는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 b1)
본 공정은, 식 (XIV) 의 화합물을, 식 (XV) 의 화합물과 반응시켜, 식 (XVI) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 반응은, 염기의 존재하에서 실시되고, 그 염기로는, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 사용할 수 있고, 바람직하게는 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIV) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 10 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 20 ℃ ∼ 50 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 30 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 5 시간 ∼ 36 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 들 수 있다.
(공정 b2)
본 공정은, 식 (XVI) 의 화합물을, 실릴화제와 반응시켜, 식 (I') 의 화합물 및 식 (XVII) 의 화합물과의 혼합물 :
[화학식 140]
Figure pct00142
을 얻고, 이어서, 염기의 존재하에서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정이다.
또, 본 공정은, 식 (XVI) 의 화합물과 실릴화제의 반응을, 제 1 염기의 존재하에서 실시하여, 식 (I') 의 화합물과 식 (XVII) 의 화합물의 혼합물을 얻고, 이어서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 제 2 염기의 존재하에서, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정을 포함한다.
식 (XVII) 의 화합물에서 식 (I') 의 화합물로의 변환은, 그 혼합물 용액 중의 평형 반응, 및 식 (XVII) 의 화합물과 식 (I') 의 화합물의 용해성의 차를 이용하여, 그 혼합물의 용액으로부터, 식 (I') 의 화합물을 정석시킴으로써 실시된다.
여기서, 제 1 염기로는, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 2,6-루티딘 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 들 수 있고, 바람직하게는 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 2,6-루티딘, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 제 1 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XVI) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 제 1 염기를 사용하는 반응의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 10 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 40 ℃ ∼ 70 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 30 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 5 시간 ∼ 36 시간이다.
본 공정의 제 1 염기를 사용하는 반응의 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 들 수 있다.
본 공정의 실릴화제로는, tert-부틸디메틸클로로실란, 또는 tert-부틸디메틸실릴트리플레이트를 들 수 있고, 바람직하게는 tert-부틸디메틸클로로실란을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 실릴화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIV) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 2 ∼ 4 당량이다.
또, 제 2 염기로는, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 2,6-루티딘, 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 들 수 있고, 바람직하게는 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 2,6-루티딘, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 제 2 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIV) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.01 ∼ 3 당량이고, 보다 바람직하게는 0.05 ∼ 1 당량이다.
본 공정의 제 2 염기를 사용하는 반응의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 10 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 10 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 분 ∼ 10 시간이고, 보다 바람직하게는 5 분 ∼ 90 분이다.
본 공정의 제 2 염기를 사용하는 반응의 제 1 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 테트라하이드로푸란, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 테트라하이드로푸란을 들 수 있다.
본 공정의 제 2 염기를 사용하는 반응의 제 2 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 테트라하이드로푸란, 헵탄, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 헵탄을 들 수 있다.
＜2-2. 식 (XV) 의 화합물의 제조 방법 및 그 중간체＞
상기 식 (I) 의 제조에 사용하는 식 (XV) 의 화합물은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜B2＞]
[화학식 141]
Figure pct00143
상기 [합성 스킴 ＜B2＞] 중,
PG3 은, 상기 [합성 스킴 ＜A1＞] 과 동일한 의미이고,
X 는, 상기 [합성 스킴 ＜B1＞] 과 동일한 의미이다.
이하에, 공정 b3 에 대해 설명한다.
(공정 b3)
본 공정은, 식 (XVIII) 로 나타내는 화합물을, 산 또는 염기의 존재하에서, 2-할로에탄올과 반응시켜, 식 (XV) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 염기로는, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센을 들 수 있고, 바람직하게는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 수산화나트륨을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 화합물 (XVIII) 의 출발 원료인 글리실글리신에 대하여, 0.5 ∼ 2 당량이다. 그 화합물 (XVIII) 은, 글리실글리신으로부터, 아미노기의 보호 및 카르복시기의 아세틸옥시기로의 변환에 의해 얻을 수 있다.
본 공정에서 사용되는 2-할로에탄올은, 2-클로로에탄올, 2-브로모에탄올, 및 3-요오도에탄올을 들 수 있고, 바람직하게는 2-브로모에탄올, 2-요오도에탄올을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 2-브로모에탄올을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 2-할로에탄올의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 화합물 (XVIII) 의 출발 원료인 글리실글리신의 양에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 4 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 20 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 36 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 1,2-디메톡시에탄, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 1,2-디메톡시에탄을 들 수 있다.
(신규 중간체)
상기 합성 [스킴 ＜B1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (XV) 로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 142]
Figure pct00144
여기서, PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이고, 및
X 는, 바람직하게는 Cl, Br, 또는 I 이고, 보다 바람직하게는 Br 이다.
＜2-3. 본 발명의 화합물 (I) 의 제조 방법과 종래법 (특허문헌 6 외) 의 비교＞
본 발명의 식 (I) 의 화합물의 제조 방법은, 종래법의 과제였던, 2', 3' 위치의 수산기 중, 3' 위치 수산기의 선택적 tert-부틸디메틸실릴화체의 합성이 가능해지고, 결과적으로, 이하에 나타내는 특허문헌 6 의 합성 스킴과 비교하여, 총 수율의 향상, 공정수의 삭감, 칼럼 정제의 회피와 같은 우수한 효과를 갖는 제조 방법의 제공이 가능해졌다.
[종래법의 합성 스킴 (특허문헌 6 실시예 77 의 합성 스킴으로부터]
[화학식 143]
Figure pct00145
[본 발명의 식 (I) 의 제조 방법의 효과]
(효과 1) 2', 3' 위치의 수산기 중, 3' 위치 수산기의 선택적 tert-부틸디메틸실릴화체 (I) 의 합성
종래의 합성 루트 (특허문헌 6) 에서는, tert-부틸디메틸실릴화 공정 (공정 5) 에 있어서, 2', 3' 위치의 수산기 중, 3' 위치를 선택적으로 tert-부틸디메틸실릴화할 수 없고, 2' 위치가 tert-부틸디메틸실릴화된 부생성물이 생성되는 점 등에서, 목적으로 하는 식 (I) 의 화합물의 수율이 약 35 ％ 로 낮았다. 또, 2', 3' 위치의 수산기의 선택적 실릴화 반응으로서, 키랄 이미다졸을 사용하여 선택적으로 3' 위치를 트리에틸실릴화하는 방법이 알려져 있지만 (Org. Lett., Vol.15, No.18, 2013, pp.4710-4713 참조), 특수한 키랄 이미다졸이어서 용이하게 입수할 수 없다는 문제가 있었다. 또한, 은 시약을 사용하는 선택적인 tert-부틸디메틸실릴화도 알려져 있지만 (Tetrahedron Lett., Vol.22, No.52, 1981, pp.5423-5246 참조), 고가의 은 시약을 반응 기질 당량과 동등 이상 사용할 필요가 있기 때문에 바람직하지 않고, 또한 본 기질을 사용하여 동일한 조건에서 실시하였지만, 원하는 선택성을 얻을 수 없었다.
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, 2', 3' 위치의 수산기의 비선택적인 TBS 기의 도입 후에, 2' 위치와 3' 위치 사이에서 TBS 기가 전이되는 조건을 알아내고, 또한 식 (I) 로 나타내는 목적으로 하는 3' 위치 수산기가 TBS 화된 화합물만이 결정화되는 조건을 알아냄으로써, 우위로 목적으로 하는 식 (I) 의 화합물을 취득하는 것이 가능해졌다.
(효과 2) 공정수 삭감, 수율 향상, 칼럼 정제 회피
종래의 합성 루트 (특허문헌 6) 에서는, 핵산 염기 아미드기의 N-알킬화시에, 반응 기질에 2', 3' 위치의 수산기를 보호하고 있음으로써 여분의 탈보호 공정이 필요하였다.
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, 2', 3' 위치의 수산기가 무보호인 채로 핵산 염기 아미드기의 N-알킬화가 진행되는 알킬화제 (식 (XV) 의 화합물) 를 알아냄으로써, 2', 3' 위치 수산기의 보호, 탈보호 공정이 불필요해져, 2 공정 단축된 제조 방법의 제공이 가능해졌다.
(효과 3) 전체 스킴을 통한, 수율 향상, 칼럼 정제 회피
종래의 합성 루트 (특허문헌 6) 에서는, 출발 원료의 2',3',5'-트리스-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]이노신으로부터 식 (I) 의 화합물까지의 총 수율이, 약 13 ％ (5 공정) 였지만, 본 발명의 제조 방법에서는, 출발 원료의 이노신으로부터 수율 약 60 ％ (3 공정) 로 식 (I) 의 화합물의 합성이 가능해졌다. 또, 종래의 합성 루트 (특허문헌 6) 에서는, 모든 공정에서, 폐기물량 (실리카 겔이나 헥산, 아세트산에틸과 같은 전개 용매 등) 의 증가나 리드 타임의 장기화를 초래하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피의 정제를 실시하여 생성물을 취득하고 있었지만, 본 발명의 제조 방법에서는, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 회피하여, 환경 부하 경감과 생산성을 향상시키는 것이 가능해졌다.
＜3. 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 원료 화합물 (VIII) 및 식 (VIII') 의 제조＞
＜3-1. 식 (VIII) 및 식 (VIII') 의 화합물의 제조 방법 및 그 중간체＞
상기 고리형 디뉴클레오티드의 제조에 사용하는 식 (VIII) 및 식 (VIII') 의 화합물은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜C1＞]
[화학식 144]
Figure pct00146
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 중,
PG4 는, 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고,
PG5 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이고, 및
PG7 은, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, tert-부틸디메틸실릴, tert-부틸디페닐실릴, 또는 트리페닐실릴이다.
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 c1)
본 공정은, 식 (XIX) 의 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XX) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정에서 사용되는 벤조일화제는, 염화벤조일, 브롬화벤조일, 벤조산 무수물 또는 트리플루오로메탄술폰산벤조일 등을 들 수 있고, 바람직하게는 염화벤조일, 브롬화벤조일을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 염화벤조일을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 벤조일화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIX) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 2 당량이다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기, 그리고 이것들의 혼합물을 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 및 아세트산나트륨, 그리고 이것들의 혼합물을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민과 4-디메틸아미노피리딘의 혼합물을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIX) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.1 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 0.2 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -40 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 35 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 0.5 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드를 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 아세토니트릴을 들 수 있다.
(공정 c2)
본 공정은, 식 (XX) 으로 나타내는 화합물을 가수 분해하여, 식 (XXI) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정에서 사용되는 산으로는, 염산, 아세트산, 클로로아세트산, 디클로로아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 및 황산 등을 들 수 있고, 바람직하게는 염산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 황산을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 p-톨루엔술폰산을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 산의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XX) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 20 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 10 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 40 ℃ ∼ 80 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 1,2-디메톡시에탄, 2-메틸테트라하이드로푸란, 테트라하이드로푸란, 시클로펜틸메틸에테르 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르와 물의 혼합 용매를 들 수 있다.
(공정 c3)
본 공정은, 식 (XXI) 의 화합물을, 염소화제와 반응시켜, 식 (XXII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 염소화제로는, 트리클로로이소시아누르산, 클로로이소시아누르산, 디클로로이소시아누르산, N-클로로숙신이미드, 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인, N-클로로사카린, N-N-디클로로-p-톨루엔술폰아미드, N-N-디클로로벤젠술폰아미드, 또는 사염화탄소를 들 수 있고, 바람직하게는 트리클로로이소시아누르산, 클로로이소시아누르산, 디클로로이소시아누르산을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리클로로이소시아누르산을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염소화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXI) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.1 ∼ 6 당량이고, 보다 바람직하게는 0.3 ∼ 3 당량이다.
또, 본 공정의 반응은, 바람직하게는 인 시약의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 인 시약으로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트, 트리-o-톨릴포스파이트, 트리페닐포스파이트, 트리에틸포스파이트, 트리부틸포스핀, 트리페닐포스핀, 트리스(디메틸아미노)포스핀, 또는 트리스(디에틸아미노)포스핀을 들 수 있고, 바람직하게는 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트, 트리-O-톨릴포스파이트, 트리페닐포스파이트를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 인 시약의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXI) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 6 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -80 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 30 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄, 1,2-디메톡시에탄, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 디클로로메탄, 시클로펜틸메틸에테르 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있다.
(공정 c4)
본 공정은, 식 (XXII) 의 화합물을, 식 (XXIII) 과 반응시켜, 식 (XXIV) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 반응은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산세슘, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기, 그리고 이것들의 혼합물을 들 수 있고, 바람직하게는 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 탄산세슘을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 10 ℃ ∼ 50 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논, 디메틸술폭시드를 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 디메틸술폭시드를 들 수 있다.
(공정 c5)
본 공정은, 식 (XXIV) 의 화합물로부터 벤조일기를 탈보호하여, 식 (XXV) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정이다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산세슘, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기, 그리고 이것들의 혼합물을 들 수 있고, 바람직하게는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 수산화나트륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXIV) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.001 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로푸란, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 에탄올 또는 물과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매를 들 수 있다.
식 (XXV) 의 화합물을 그 염으로 변환시킬 때에 사용하는 산으로는, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말레산, 벤조산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 염산, 질산, 황산, 인산 등을 들 수 있다. 바람직하게는 아세트산, p-톨루엔술폰산, 염산을 들 수 있다. 보다 바람직하게는 p-톨루엔술폰산, 염산을 들 수 있다. 염으로 변환시키기 위해 사용되는 산의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXIV) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
(공정 c6)
본 공정은, 식 (XXV) 의 화합물 또는 그 염을, 트리틸화제와 반응시켜, 식 (VIII') 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정이다.
본 공정의 트리틸화제로는, 4,4-디메톡시트리틸클로라이드, 4-메톡시트리틸클로라이드, 2-클로로트리틸클로라이드, 또는 트리틸클로라이드 들 수 있고, 바람직하게는 4,4-디메톡시트리틸클로라이드, 4-메톡시트리틸클로라이드를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 트리틸화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXV) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 6 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 36 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 피리딘을 들 수 있다.
(공정 c7)
본 공정은, 식 (VIII') 로 나타내는 화합물 또는 그 염을, 실릴화제와 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXVII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 실릴화제로는, 트리메틸클로로실란, 트리메틸실릴트리플레이트, 트리에틸클로로실란, 트리에틸실릴트리플레이트, 트리이소프로필클로로실란, 트리이소프로필실릴트리플레이트, tert-부틸디메틸클로로실란, tert-부틸디메틸실릴트리플레이트, tert-부틸디페닐클로로실란, tert-부틸디페닐실릴트리플레이트, 트리페닐클로로실란, 또는 트리페닐실릴트리플레이트를 들 수 있고, 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴트리플레이트를 들 수 있다.
본 공정의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로는, 벤조일화제, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐화제, tert-부톡시카르보닐화제, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐화제, 알릴옥시카르보닐화제, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐화제, 또는 벤질옥시카르보닐화제를 들 수 있고, 바람직하게는 벤조일화제, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐화제를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (VIII') 로 나타내는 화합물 또는 그 염에 대하여, 0.5 ∼ 6 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 피리딘을 들 수 있다.
(공정 c8)
본 공정은, 식 (XXVII) 로 나타내는 화합물을, 의 화합물의 보호기인 PG7 을 탈보호하여, 식 (VIII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정에 사용되는 탈보호제로는, 불화암모늄, 불화테트라-n-부틸암모늄, 불화수소피리딘, 및 트리에틸아민삼불화수소산염 등을 들 수 있고, 바람직하게는 불화암모늄, 불화테트라-n-부틸암모늄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 불화테트라-n-부틸암모늄을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 탈보호제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXVII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.1 ∼ 5 당량이고, 보다 바람직하게는 0.2 ∼ 2 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 테트라하이드로푸란을 들 수 있다.
(신규 중간체)
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (XX) 으로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 145]
Figure pct00147
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (XXII) 로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 146]
Figure pct00148
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (XXIV) 로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 147]
Figure pct00149
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (XXV) 로 나타내는 화합물 또는 그 염을 들 수 있다.
[화학식 148]
Figure pct00150
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (VIII'-1) 로 나타내는 화합물 또는 그 염을 들 수 있다.
[화학식 149]
Figure pct00151
여기서, PG5 는, 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이다.
상기 [합성 스킴 ＜C1＞] 에 있어서의 신규 중간체로서, 이하의 식 (XXVII) 로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 150]
Figure pct00152
여기서, PG4 는, 바람직하게는 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐 또는 벤질옥시카르보닐이고, 보다 바람직하게는 벤조일 또는 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이다.
PG5 는, 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이고, 보다 바람직하게는 4,4'-디메톡시트리틸 또는 4-메톡시트리틸이다.
PG7 이, 바람직하게는 하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, tert-부틸디메틸실릴, tert-부틸디페닐실릴 또는 트리페닐실릴이고, 보다 바람직하게는 tert-부틸디메틸실릴이다.
＜3-2. 식 (XXIII) 의 화합물의 제조 방법 및 그 중간체＞
상기 식 (VIII) 의 제조에 사용하는 식 (XXIII) 의 화합물은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜C2＞]
[화학식 151]
Figure pct00153
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 c9)
본 공정은, 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물로부터 tert-부톡시카르보닐기를 탈보호하여, 식 (XXIX) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 수산화나트륨을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 6 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 테트라하이드로푸란을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 에탄올을 들 수 있다.
(공정 c10)
본 공정은, 식 (XXIX) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하여, 식 (XXX) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 알킨의 환원 반응의 촉매로서 금속 촉매를 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 금속 촉매는, 수소화를 촉매하는 것이면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는 루테늄 촉매, 로듐 촉매, 팔라듐 촉매, 백금 촉매, 또는 니켈 촉매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 팔라듐 촉매를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 금속 촉매의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물의 질량에 대하여, 0.01 내지 1 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.02 ∼ 0.4 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.05 ∼ 0.2 배의 질량이다. 수소 가스 압력은, 통상적으로 100 ∼ 1000 ㎪ 이고, 바람직하게는 100 ∼ 700 ㎪ 이고, 보다 바람직하게는 200 ∼ 500 ㎪ 이다. 본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 20 ℃ ∼ 80 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정의 알킨의 환원 반응에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, 아세트산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1-메틸-2-피롤리돈을 들 수 있다.
본 공정의 환원적 아미노화 반응의 촉매로서 금속 촉매를 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 금속 촉매는, 수소화를 촉매하는 것이면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는 루테늄 촉매, 로듐 촉매, 팔라듐 촉매, 백금 촉매, 또는 니켈 촉매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 팔라듐 촉매를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 금속 촉매의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물의 질량에 대하여, 0.01 내지 1 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.02 ∼ 0.4 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.05 ∼ 0.2 배의 질량이다. 수소 가스 압력은, 통상적으로 100 ∼ 1000 ㎪ 이고, 바람직하게는 100 ∼ 700 ㎪ 이고, 보다 바람직하게는 200 ∼ 500 ㎪ 이다. 본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 20 ℃ ∼ 80 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정의 환원적 아미노화 반응에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, 아세트산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 물, 아세트산 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1-메틸-2-피롤리돈, 물, 아세트산의 혼합 용매를 들 수 있다.
(공정 c11)
본 공정은, 식 (XXX) 의 화합물을, 벤조일화제와 반응시킨 후, 염기 처리에 의해 탈벤조일화하여, 식 (XXIII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 벤조일화제로는, 벤조일클로라이드, 벤조일브로마이드, 무수 벤조산 또는 트리플루오로메탄술폰산벤조일 등을 들 수 있고, 바람직하게는 벤조일클로라이드를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 벤조일화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXX) 으로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 벤조일화제와의 반응은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드, 그리고 이것들의 혼합 염기 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔, 그리고 이것들의 혼합 염기를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 4-디메틸아미노피리딘의 혼합 염기를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 벤조일화제와의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정의 벤조일화제와의 반응에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 들 수 있다.
본 공정의 염기 처리에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민을 들 수 있다. 본 공정의 염기 처리에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 염기 처리의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정의 염기 처리에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 메탄올과 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논의 혼합 용매를 들 수 있다.
상기 [합성 스킴 ＜C2＞] 에 있어서의 중간체로서, 이하의 식 (XXVIII) 로 나타내는 화합물을 들 수 있다.
[화학식 152]
Figure pct00154
＜3-3. 식 (XXVIII) 의 화합물의 제조 방법＞
상기 식 (XXIII) 의 제조에 사용하는 식 (XXVIII) 의 화합물은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜C3＞]
[화학식 153]
Figure pct00155
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 c12)
본 공정은, 식 (XXXI) 의 화합물을, 1-메틸이미다졸의 존재하, tert-부톡시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXXII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 tert-부톡시카르보닐화제로는, 이탄산디-tert-부틸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, N-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-(tert-부톡시카르보닐옥시)프탈이미드 등을 들 수 있고, 바람직하게는 이탄산디-tert-부틸을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 tert-부톡시카르보닐화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXXI) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 6 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란, 아세트산에틸, 벤젠, 톨루엔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있다.
(공정 c13)
본 공정은, 식 (XXXII) 로 나타내는 화합물을, 프로파르길알데히드디에틸아세탈과 반응시켜, 식 (XXVIII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정은, 바람직하게는 천이 금속 촉매의 존재하에서 실시할 수 있고, 바람직하게는 팔라듐 촉매의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 팔라듐 촉매는, 반응이 진행되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 아세트산팔라듐 (II), 트리플루오로아세트산팔라듐 (II), 염화팔라듐 (II), 브롬화팔라듐 (II), 요오드화팔라듐 (II), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II) 디클로라이드 등의 2 가의 팔라듐염 및 그 착물이나, 팔라듐 블랙, 팔라듐카본, 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (0), 비스(디벤질리덴아세톤)팔라듐 (0) 등의 0 가 팔라듐 금속 및 그 착물 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II) 디클로라이드를 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 팔라듐 촉매의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXXII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.0001 ∼ 1 당량이고, 보다 바람직하게는 0.005 ∼ 0.05 당량이다.
또한, 본 공정은, 바람직하게는 상기 팔라듐 촉매 외에, 구리 촉매의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용할 수 있는 구리 촉매는, 염화구리 (I), 브롬화구리 (I) 및 요오드화구리 (I) 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 요오드화구리 (I) 을 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 구리 촉매의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXXII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.0001 ∼ 1 당량이고, 보다 바람직하게는 0.005 ∼ 0.05 당량이다.
또, 본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드, 그리고 이것들의 혼합 염기 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 트리에틸아민을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXXII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 15 ℃ ∼ 50 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드를 들 수 있다.
＜3-4. 식 (XXIV) 의 화합물의 제조 방법＞
상기 식 (VIII) 및 식 (VIII') 의 제조에 사용하는 식 (XXIV) 의 화합물은, 이하의 합성 스킴에 따라서 제조할 수 있다.
[합성 스킴 ＜C4＞]
[화학식 154]
Figure pct00156
이하에, 각 공정에 대해 설명한다.
(공정 c14)
본 공정은, 식 (XXII) 의 화합물을, 식 (XXIX) 의 화합물과 반응시켜, 식 (XXXIII) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정의 반응은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산세슘, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기, 그리고 이것들의 혼합물을 들 수 있고, 바람직하게는 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 탄산세슘을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXII) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 10 ℃ ∼ 50 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 72 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 24 시간이다.
본 공정에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 헵탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논, 디메틸술폭시드를 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 디메틸술폭시드를 들 수 있다.
(공정 c15)
본 공정은, 식 (XXXIII) 으로 나타내는 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하고, 추가로 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIV) 의 화합물을 얻는 공정이다.
본 공정에 있어서의 알킨의 환원 반응 및 환원적 아미노화 반응은 촉매로서 금속 촉매를 사용할 수 있다. 본 공정에 사용되는 금속 촉매는, 수소화를 촉매하는 것이면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는 루테늄 촉매, 로듐 촉매, 팔라듐 촉매, 백금 촉매, 또는 니켈 촉매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 팔라듐 촉매를 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 금속 촉매의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XXXIII) 으로 나타내는 화합물의 질량에 대하여, 0.01 내지 1 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.02 ∼ 1 배의 질량이고, 보다 바람직하게는 0.05 ∼ 0.5 배의 질량이다. 수소 가스 압력은, 통상적으로 100 ∼ 1000 ㎪ 이고, 바람직하게는 100 ∼ 900 ㎪ 이고, 200 ∼ 700 ㎪ 이다. 본 공정의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 0 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 15 ℃ ∼ 80 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 96 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 36 시간이다.
본 공정에 있어서의 알킨의 환원 반응에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, 아세트산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 에탄올, 메탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 에탄올을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 환원적 아미노화 반응에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, 아세트산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 에탄올, 물, 아세트산 그리고 이것들의 혼합 용매를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 물과 아세트산의 혼합 용매를 들 수 있다.
본 공정의 벤조일화 반응에서 사용되는 벤조일화제는, 무수 벤조산, 염화벤조일, 브롬화벤조일, 또는 트리플루오로메탄술폰산벤조일 등을 들 수 있고, 바람직하게는 염화벤조일, 브롬화벤조일을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 염화벤조일을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 벤조일화제의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIX) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.5 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 벤조일화는, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피롤리딘, N-메틸피페리딘, 피리딘, 2-메틸피리딘, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등의 유기 염기나, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 및 칼륨 tert-부톡시드 등의 염기를 들 수 있고, 바람직하게는 트리에틸아민, 2,6-메틸피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨, 및 아세트산나트륨을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 4-디메틸아미노피리딘을 들 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기의 양은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 식 (XIX) 로 나타내는 화합물에 대하여, 0.05 ∼ 10 당량이고, 보다 바람직하게는 0.2 ∼ 5 당량이다.
본 공정의 벤조일화의 반응 온도는, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ℃ 부터 반응에 사용하는 용매의 비점까지, 보다 바람직하게는 0 ℃ ∼ 90 ℃ 이다. 본 공정의 반응 시간은, 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 5 분 ∼ 24 시간이고, 보다 바람직하게는 1 시간 ∼ 10 시간이다.
본 공정의 벤조일화에 사용되는 용매로는, 반응을 저해하는 것이 아니면 특별히 한정은 되지 않지만, 예를 들어, 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세트산에틸, 헥산, 펜탄, 시클로헥산, 에틸시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠, 아세톤, 2-부타논, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 및 디메틸술폭시드, 그리고 이것들의 혼합 용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 2-메틸피리딘, 3-메틸피리딘, 4-메틸피리딘, 2,6-루티딘, 아세토니트릴, 디클로로메탄을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 피리딘을 들 수 있다.
＜3-5. 본 발명의 화합물 (VIII) 의 제조 방법과 종래법 (특허문헌 6 외) 의 비교＞
본 발명의 식 (VIII) 의 화합물의 제조 방법은, 이하에 나타내는 특허문헌 6 의 합성 스킴과 비교하여, 총 수율의 향상, 공정수의 삭감, 칼럼 정제의 회피와 같은 우수한 효과를 갖는 제조 방법의 제공이 가능해졌다.
[종래법의 합성 스킴 1 (특허문헌 6 실시예 1 및 44 의 합성 스킴으로부터]
[화학식 155]
Figure pct00157
[종래법의 합성 스킴 2 (특허문헌 6 실시예 42 의 합성 스킴으로부터]
[화학식 156]
Figure pct00158
[본 발명의 식 (VIII) 의 제조 방법의 효과]
(효과 1) 합성 루트의 개량 (수율 개선, 칼럼 정제 생략)
종래법의 합성 루트 (특허문헌 6/종래법의 합성 스킴 1) 에서는, 시판되고 있는 5-Iodotubercidin 으로부터 11 공정으로, 식 (VIII) 의 화합물을 합성하였지만, 직선형 합성 (linear synthesis) 이기 때문에, 통산 수율이 5 ％ 로 낮은 것이 과제였다.
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, 병렬형 합성 (convergent synthesis) 으로 함으로써, 입수 가능한 원재료인 화합물 (XXXI) 과 2'-데옥시-2'-플루오로우리딘으로부터의 공정수가, 각각 10 공정으로 단축되고, 통산 수율은 화합물 (XXXI) 로부터는 17 ％, 2'-데옥시-2'-플루오로우리딘으로부터는 9 ％ 로 개선되었다.
(효과 2) 화합물 (XX) 의 탈글리코실화에 의한 2-플루오로리보오스 유도체의 합성
종래법으로서, 2'-데옥시-2'-플루오로-5,6-디하이드로우리딘과 같은 디하이드로우리딘 유도체를 가수 분해하여, 화합물 (XXI) 과 같은 2-데옥시-2-플루오로리보오스 유도체를 합성하는, 산 가수 분해법이 알려져 있다 (Carbohydrate Res., I, 1966, pp.455-466 참조). 그러나, 이 방법을 화합물 (XIX) 에 적용하여, 화합물 (XXI) 을 합성하면, 부반응으로서 수산기의 벤조일기의 탈보호를 수반하여, 수율이 낮다는 문제가 있었다.
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, 화합물 (XIX) 의 우리딘부를 벤조일화하여 화합물 (XX) 으로 하면, 가수 분해에 대한 반응성이 향상되고, 보다 완화된 조건에서 탈글리코실화가 가능해지고, 벤조일기의 탈보호가 억제됨으로써 수율이 향상되었다.
(효과 3) 화합물 (XXI) 의 선택적인 α 클로로화 반응에 의한 화합물 (XXII) 의 합성
종래, 2-플루오로리보오스 유도체의 클로로화 반응으로서, 2, 5 위치의 수산기를 TBDMS 기로 보호한 2-플루오로리보오스 유도체를, 메실클로라이드/트리에틸아민 조건에서 처리하는 방법이 보고되어 있지만, 이 방법에서는 클로로화당은 α/β 의 혼합물로서 얻어진다 (J. Org. Chem., 2009, 74, pp.5779-5789, 및 국제공개 제2011/003018호 참조). 또, 2, 5 위치의 수산기를 벤질기로 보호한 2-플루오로리보오스 유도체를, 헥사메틸아인산트리아미드/사염화탄소로 처리하는 수법도 보고되어 있지만, 이 방법에서는 β 체가 생성되고, α 체의 합성에는 적용할 수 없었다 (국제공개 제2014/124430호 및 국제공개 제2015/038596호 참조).
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, α-클로로-2-플루오로리보오스 유도체의 합성법에 대해 검토한 결과, 2, 5 위치의 수산기를 벤조일기로 보호한 2-플루오로리보오스 유도체 (화합물 (XXI)) 를, 트리아릴포스파이트 또는 트리아릴포스핀과 트리클로로이소시아누르산과 같은 클로로화제의 조합에 의해 클로로화함으로써, 높은 α 선택성 (α/β ＝ 15/1) 으로 반응이 진행되는 것을 알아내어, α-클로로-2-플루오로리보오스 유도체의 효율적인 합성법을 확립할 수 있었다.
또, 종래법으로서, 트리아릴포스핀과 클로로화제에 의한 알코올의 클로로화 반응이 오래 전부터 알려져 있으며, 예를 들어 트리페닐포스핀과 사염화탄소의 조합에 의한 클로로화 반응은, Appel 반응으로서 널리 알려져 있다 (Angew. Chem. Int. Edit., Vol.14, No.12, 1975, pp.801-811 참조). 그러나, 이 Appel 반응은, 반응 후에 트리페닐포스핀옥사이드가 생성되기 때문에, 그 제거를 위해 실리카 겔 칼럼에 의한 정제가 필요해져, 대량 합성에 있어서 과제가 있었다.
한편, 본 발명의 제조 방법에서는, 트리아릴포스파이트에 2,4-디-tert-부틸페닐포스파이트를 사용함으로써, 부산물의 인산에스테르가 분액으로 제거 가능하여, 칼럼 정제의 회피에 성공하였다.
(효과 4) Boc 보호 루트에 의한 화합물 (XXIII) 의 합성
종래법의 합성 루트 (특허문헌 6/종래법의 합성 스킴 2) 에서는, 화합물 (XXXI) 로부터 화합물 (XXIX) 를 합성하는 소노가시라 반응 공정의 수율이 낮아, 통산 수율이 18 ％ 로 낮은 것이 과제였다. 본 발명의 제조 방법에서는, Boc 보호기를 사용한 화합물 (XXXII) 를 경유함으로써, 소노가시라 반응 공정의 수율이 향상되어, 통산 수율이 53 ％ 로 개선되었다.
＜4. 항체-면역 부활화제 콘주게이트 (Rp, Rp-XIII) 의 제조 방법＞
＜4-1. 항체 및 그 당사슬 리모델링＞
＜4-1-1. 항체＞
본 명세서에 있어서,「항체의 기능성 단편」이란,「항체의 항원 결합 단편」이라고도 불리며, 항원과의 결합 활성을 갖는 항체의 부분 단편을 의미하고 있고, Fab, F(ab')2, Fv, scFv, diabody, 선상 항체 및 항체 단편으로 형성된 다특이성 항체 등을 포함한다. 또, F(ab')2 를 환원 조건하에서 처리한 항체의 가변 영역의 1 가의 단편인 Fab' 도 항체의 항원 결합 단편에 포함된다. 단, 항원과의 결합능을 갖고 있는 한 이들 분자에 한정되지 않는다. 또, 이들 항원 결합 단편에는, 항체 단백질의 전체 길이 분자를 적당한 효소로 처리한 것 뿐만 아니라, 유전자 공학적으로 개변된 항체 유전자를 사용하여 적당한 숙주 세포에 있어서 산생된 단백질도 포함된다.
본 명세서에 있어서,「기능성 단편」은, IgG 중사슬의 Fc 영역에 있어서 잘 보존된 N 결합형 당사슬에 의한 수식을 받는 아스파라긴 (Asn297) 및 그 주변의 아미노산을 유지하고, 또한 항원과의 결합능을 갖고 있는 기능성 단편을 포함한다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항체는, 면역 글로불린을 의미하고, 항원과 면역 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자이다. 본 발명의 항체로서, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY 중 어느 클래스여도 되지만, IgG 가 바람직하다. 또, 서브클래스로서, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2 중 어느 것이어도 되지만 IgG1, IgG2 또는 IgG4 가 바람직하다 (IgG 중사슬의 Fc 영역에 ADCC 및 ADCP 활성에 영향을 미치는 변이를 갖는 항체를 포함한다).
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항체의 아이소타입으로서 IgG1 을 사용하는 경우에는, 정상 영역의 아미노산 잔기의 일부를 치환시킴으로써, 이펙터 기능을 조정하는 것이 가능하다 (WO88/07089, WO94/28027, WO94/29351 참조). IgG1 의 변이체로는, 예를 들어, IgG1 LALA 변이 (IgG1-L234A, L235A) 를 들 수 있다. 상기 L234A, L235A 는 EU index (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol.63, No.1 (May 15, 1969), pp.78-85) 에 의해 특정되는 234 위치 및 235 위치의 류신의 알라닌으로의 치환을 나타낸다.
항체 분자의 중사슬 및 경사슬에는 각각 3 개 지점의 상보성 결정 영역 (CDR : Complementarity determining region) 이 있는 것이 알려져 있다. CDR 은, 초가변 영역 (hypervariable region) 이라고도 불리며, 항체의 중사슬 및 경사슬의 가변 영역 내에 있어, 일차 구조의 변이성이 특히 높은 부위이고, 중사슬 및 경사슬의 폴리펩티드 사슬의 일차 구조 상에 있어서, 각각 3 개 지점으로 분리되어 있다. 본 명세서 중에 있어서는, 항체의 CDR 에 대해, 중사슬의 CDR 을 중사슬 아미노산 서열의 아미노 말단측에서부터 CDRH1, CDRH2, CDRH3 으로 표기하고, 경사슬의 CDR 을 경사슬 아미노산 서열의 아미노 말단측에서부터 CDRL1, CDRL2, CDRL3 으로 표기한다. 이들 부위는 입체 구조 상에서 서로 근접하여, 결합하는 항원에 대한 특이성을 결정하고 있다.
항체는, 어느 종에서 유래해도 되지만, 바람직하게는 인간, 래트, 마우스 및 토끼를 예시할 수 있다. 인간 이외의 종에서 유래하는 경우에는, 주지의 기술을 사용하여, 키메라화 또는 인간화하는 것이 바람직하다. 본 발명의 항체는, 폴리클로날 항체여도 되고, 모노클로날 항체여도 되지만, 모노클로날 항체가 바람직하다. 모노클로날 항체에는, 래트 항체, 마우스 항체, 토끼 항체 등의 비인간 동물 유래의 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 그것들의 기능성 단편, 또는 그것들의 수식체가 포함된다.
항체는, 바람직하게는 종양 세포 또는 면역 세포를 표적으로 하는 항체이지만, 이것들에 한정되지 않는다. 항체는, 보다 바람직하게는 종양 세포를 표적으로 하는 항체이다.
항체의 종양 세포에 대한 결합성은, 플로 사이토메트리를 사용하여 확인할 수 있다. 종양 세포 내에 대한 항체의 도입은, (1) 치료 항체에 결합하는 이차 항체 (형광 표지) 를 사용하여 세포 내에 도입된 항체를 형광 현미경으로 가시화하는 어세이 (Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761), (2) 치료 항체에 결합하는 이차 항체 (형광 표지) 를 사용하여 세포 내에 도입된 형광량을 측정하는 어세이 (Molecular Biology of the Cell Vol.15, 5268-5282, December 2004) 또는 (3) 치료 항체에 결합하는 이뮤노톡신을 사용하여, 세포 내에 도입되면 독소가 방출되어 세포 증식이 억제된다는 Mab-ZAP 어세이 (Bio Techniques 28 : 162-165, January 2000) 를 사용하여 확인할 수 있다. 이뮤노톡신으로는, 디프테리아 독소의 촉매 영역과 프로테인 G 의 리콤비넌트 복합 단백질도 사용 가능하다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 종양 세포를 표적으로 한 항체를 사용하는 경우, 항체 자체가 항종양 효과를 갖는 것은, 바람직하지만, 필수는 아니다.
면역 부활화제 그리고 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 항종양 활성은, 종양 세포에 대한 세포 상해 활성, 항세포 효과, 종양 체적의 퇴축을 말한다. 공지된 in vitro 또는 in vivo 의 평가계를 사용하여, 항종양 활성을 확인할 수 있다.
면역 부활화제 그리고 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 면역 부활화 활성은, 면역 세포에 대한 종양 세포의 감수성 항진 또는 종양 세포를 통한 면역 세포의 부활화를 말한다. 공지된 in vitro 또는 in vivo 의 평가계를 사용하여, 면역 부활화 활성을 확인할 수 있다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항체로는, 예를 들어, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 DLL3 항체, 항 FAP 항체, 항 CDH11 항체, 항 CDH6 항체, 항 A33 항체, 항 CanAg 항체, 항 CD19 항체, 항 CD20 항체, 항 CD22 항체, 항 CD30 항체, 항 CD33 항체, 항 CD56 항체, 항 CD70 항체, 항 CD98 항체, 항 TROP2 항체, 항 CEA 항체, 항 Cripto 항체, 항 EphA2 항체, 항 G250 항체, 항 MUC1 항체, 항 GPNMB 항체, 항 Integrin 항체, 항 PSMA 항체, 항 Tenascin-C 항체, 항 SLC44A4 항체, 항 Mesothelin 항체, 항 ENPP3 항체, 항 CD47 항체, 항 EGFR 항체, 항 GPR20 항체 또는 항 DR5 항체를 들 수 있지만, 이것들에 한정되지 않는다. 본 발명의 항체로서, 바람직하게는 항 HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙 또는 퍼투주맙), 항 CDH6 항체, 항 CD33 항체, 항 EphA2 항체, 항 CD70 항체, 항 TROP2 항체, 또는 항 EGFR 항체이고, 보다 바람직하게는 항 HER2 항체, 항 CDH6 항체, 항 CD70 항체, 항 TROP2 항체, 또는 항 EGFR 항체이다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항체는, 이 분야에서 통상적으로 실시되는 방법을 사용하여, 항원이 되는 폴리펩티드를 동물에게 면역시키고, 생체 내에 산생되는 항체를 채취, 정제함으로써 얻을 수 있다. 항원의 유래는 인간에 한정되지 않고, 마우스, 래트 등의 인간 이외의 동물에서 유래하는 항원을 동물에게 면역시킬 수도 있다. 이 경우에는, 취득된 이종 항원에 결합하는 항체와 인간 항원의 교차성을 시험함으로써, 인간의 질환에 적용 가능한 항체를 선별할 수 있다.
또, 공지된 방법 (예를 들어, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497, Kennett, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N. Y. (1980)) 에 따라서, 항원에 대한 항체를 산생하는 항체 산생 세포와 미엘로마 세포를 융합시킴으로써 하이브리도마를 수립하고, 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다.
또한, 항원은 항원 단백질을 코드하는 유전자를 유전자 조작에 의해 숙주 세포에 산생시킴으로써 얻을 수 있다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 인간화 항체는 공지된 방법 (예를 들어, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855, (1984), Nature (1986) 321, p.522-525, WO90/07861) 에 따라서 취득할 수 있다.
예를 들어, 항 HER2 항체 (US5821337, WO2004/008099, WO2020/050406 등), 항 CD33 항체 (WO2014/057687, WO2020/050406 등), 항 EphA2 항체 (WO2009/028639, WO2020/050406 등), 항 CDH6 항체 (WO2018/212136, WO2020/050406 등), 항 CD70 항체 (WO2004/073656, WO2007/038637, WO2021/177438 등), 항 TROP2 항체 (WO2015/098099, WO2021/177438 등), 항 EGFR 항체 (WO1998/050433, WO2002/092771, WO2021/177438 등) 는, 공지된 수단에 의해 취득할 수 있다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항 HER2 항체는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 이하의 특성을 갖는 것이 바람직하다.
(1) 이하의 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 항 HER2 항체 ;
(a) HER2 에 특이적으로 결합한다.
(b) HER2 와 결합함으로써 HER2 발현 세포에 내재화되는 활성을 갖는다.
(2) HER2 의 세포 외 도메인에 결합하는 상기 (1) 에 기재된 항체.
(3) 상기 항체가 모노클로날 항체인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 항체.
(4) 항체 의존성 세포 상해 (ADCC) 활성 및/또는 보체 의존성 세포 상해 (CDC) 활성을 갖는 상기 (1) ∼ (3) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(5) 마우스 모노클로날 항체, 키메라 모노크로날 항체 또는 인간화 모노클로날 항체인, 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(6) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, ADCC 및 ADCP 활성의 저감을 가져오는 변이를 포함하는, 상기 (1) ∼ (3) 에 기재된 항체.
(7) 서열 번호 50 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 49 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(8) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, EU 인덱스에 의해 나타내는 234 위치 및 235 위치의 류신이 알라닌으로 치환되어 있는, 상기 (6) 에 기재된 항체.
(9) 서열 번호 51 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 49 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (8) 에 기재된 항체.
(10) 서열 번호 53 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 52 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (4) 에 기재된 항체.
(11) 서열 번호 54 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 52 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (8) 에 기재된 항체.
(12) 서열 번호 57 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 58 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 59 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 60 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 61 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 62 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (8) 에 기재된 항체.
(13) 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 있는 상기 (1) ∼ (12) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(14) 상기 (1) ∼ (13) 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주 세포를 배양하는 공정 및 당해 공정에서 얻어진 배양물로부터 목적으로 하는 항체를 채취하는 공정을 포함하는 당해 항체의 제조 방법에 의해 얻어지는 항체.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항 CD70 항체는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 이하의 특성을 갖는 것이 바람직하다.
(1) CD70 에 특이적으로 결합하는 항 CD70 항체.
(2) CD70 의 세포 외 도메인에 결합하는 상기 (1) 에 기재된 항체.
(3) 상기 항체가 모노클로날 항체인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 항체.
(4) 항체 의존성 세포 상해 (ADCC) 활성 및/또는 보체 의존성 세포 상해 (CDC) 활성을 갖는 상기 (1) ∼ (3) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(5) 마우스 모노클로날 항체, 키메라 모노크로날 항체, 또는 인간화 모노클로날 항체인, 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(6) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, ADCC 및 ADCP 활성의 저감을 가져오는 변이를 포함하는, 상기 (1) ∼ (3) 에 기재된 항체.
(7) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, EU 인덱스에 의해 나타내는 234 위치 및 235 위치의 류신이 알라닌으로 치환되어 있는, 상기 (6) 에 기재된 항체.
(8) 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (7) 에 기재된 항체.
(9) 서열 번호 4 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 3 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (7) 에 기재된 항체.
(10) 서열 번호 13 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 14 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 15 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 16 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 17 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 18 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (7) 에 기재된 항체.
(11) 서열 번호 19 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 20 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 21 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 22 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 23 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 24 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (7) 에 기재된 항체.
(12) 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 있는 상기 (1) ∼ (11) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(13) 상기 (1) ∼ (12) 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주 세포를 배양하는 공정 및 당해 공정에서 얻어진 배양물로부터 목적으로 하는 항체를 채취하는 공정을 포함하는 당해 항체의 제조 방법에 의해 얻어지는 항체.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항 TROP2 항체는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 이하의 특성을 갖는 것이 바람직하다.
(1) TROP2 에 특이적으로 결합하는 항 TROP2 항체.
(2) TROP2 의 세포 외 도메인에 결합하는 상기 (1) 에 기재된 항체.
(3) 상기 항체가 모노클로날 항체인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 항체.
(4) 항체 의존성 세포 상해 (ADCC) 활성 및/또는 보체 의존성 세포 상해 (CDC) 활성을 갖는, 상기 (1) ∼ (3) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(5) 마우스 모노클로날 항체, 키메라 모노크로날 항체, 또는 인간화 모노클로날 항체인, 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(6) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, ADCC 및 ADCP 활성의 저감을 가져오는 변이를 포함하는, 상기 (1) ∼ (3) 에 기재된 항체.
(7) 서열 번호 6 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 5 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(8) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, EU 인덱스에 의해 나타내는 234 위치 및 235 위치의 류신이 알라닌으로 치환되어 있는, 상기 (6) 에 기재된 항체.
(9) 서열 번호 8 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 7 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (8) 에 기재된 항체.
(10) 서열 번호 25 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 26 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 27 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 28 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 29 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 30 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (8) 에 기재된 항체.
(11) 서열 번호 31 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 32 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 33 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 34 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 35 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 36 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (8) 에 기재된 항체.
(12) 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 있는 상기 (1) ∼ (11) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(13) 상기 (1) ∼ (12) 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주 세포를 배양하는 공정 및 당해 공정에서 얻어진 배양물로부터 목적으로 하는 항체를 채취하는 공정을 포함하는 당해 항체의 제조 방법에 의해 얻어지는 항체.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항 EGFR 항체는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 이하의 특성을 갖는 것이 바람직하다.
(1) EGFR 에 특이적으로 결합하는 항 EGFR 항체.
(2) EGFR 의 세포 외 도메인에 결합하는 상기 (1) 에 기재된 항체.
(3) 상기 항체가 모노클로날 항체인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 항체.
(4) 항체 의존성 세포 상해 (ADCC) 활성 및/또는 보체 의존성 세포 상해 (CDC) 활성을 갖는 상기 (1) ∼ (3) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(5) 마우스 모노클로날 항체, 키메라 모노크로날 항체, 또는 인간화 모노클로날 항체인, 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(6) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, ADCC 및 ADCP 활성의 저감을 가져오는 변이를 포함하는, 상기 (1) ∼ (3) 에 기재된 항체.
(7) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, EU 인덱스에 의해 나타내는 234 위치 및 235 위치의 류신이 알라닌으로 치환되어 있는, 상기 (6) 에 기재된 항체.
(8) 서열 번호 10 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 9 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (7) 에 기재된 항체.
(9) 서열 번호 12 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 11 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (7) 에 기재된 항체.
(10) 서열 번호 37 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 38 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 39 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 40 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 41 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 42 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (7) 에 기재된 항체.
(11) 서열 번호 43 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 44 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 45 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 46 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 47 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 48 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (7) 에 기재된 항체.
(12) 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 있는 상기 (1) ∼ (11) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(13) 상기 (1) ∼ (12) 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주 세포를 배양하는 공정 및 당해 공정에서 얻어진 배양물로부터 목적으로 하는 항체를 채취하는 공정을 포함하는 당해 항체의 제조 방법에 의해 얻어지는 항체.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항 CDH6 항체는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 이하의 특성을 갖는 것이 바람직하다.
(1) CDH6 에 특이적으로 결합하는 항 CDH6 항체.
(2) CDH6 의 세포 외 도메인에 결합하는 상기 (1) 에 기재된 항체.
(3) 상기 항체가 모노클로날 항체인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 항체.
(4) 항체 의존성 세포 상해 (ADCC) 활성 및/또는 보체 의존성 세포 상해 (CDC) 활성을 갖는 상기 (1) ∼ (3) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(5) 마우스 모노클로날 항체, 키메라 모노크로날 항체, 또는 인간화 모노클로날 항체인, 상기 (1) ∼ (4) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(6) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, ADCC 및 ADCP 활성의 저감을 가져오는 변이를 포함하는, 상기 (1) ∼ (3) 에 기재된 항체.
(7) 중사슬 정상 영역이 인간 IgG1 의 중사슬 정상 영역이고, EU 인덱스에 의해 나타내는 234 위치 및 235 위치의 류신이 알라닌으로 치환되어 있는, 상기 (6) 에 기재된 항체.
(8) 서열 번호 56 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 및 서열 번호 55 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (7) 에 기재된 항체.
(9) 서열 번호 63 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 64 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 65 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬, 그리고, 서열 번호 66 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 67 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 68 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬을 포함하여 이루어지는 인간화 모노클로날 항체인 상기 (1) ∼ (3), (6) 또는 (7) 에 기재된 항체.
(10) 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 있는 상기 (1) ∼ (9) 중 어느 하나에 기재된 항체.
(11) 상기 (1) ∼ (10) 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주 세포를 배양하는 공정 및 당해 공정에서 얻어진 배양물로부터 목적으로 하는 항체를 채취하는 공정을 포함하는 당해 항체의 제조 방법에 의해 얻어지는 항체.
＜4-1-2. 항체의 당사슬 리모델링＞
최근, 불균일한 항체의 당사슬을, 효소 반응에 의해 리모델링하여, 관능기를 갖는 당사슬을 균일하게 도입하는 방법이 보고되어 있다 (ACS Chem. Biol. 2012, 7, 110-122, ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7, 1005-1008). 이 당사슬 리모델링 기술을 사용하여, 부위 특이적으로 약물을 도입하고, 균일한 ADC 를 합성하는 시도도 이루어지고 있다 (Bioconjugate Chem. 2015, 26, 2233-2242, Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 2361-2367, US2016361436).
당사슬의 리모델링은, 먼저 가수 분해 효소를 이용하여, 단백질 (항체 등) 에 부가되어 있는 불균일한 당사슬을 말단의 GlcNAc 만 남기고 절제하여, GlcNAc 가 부가된 균일한 단백질 부분을 조제한다 (이하,「억셉터」라고 한다). 다음으로, 별도 조제한 임의의 당사슬을 준비하고 (이하,「도너」라고 한다), 이 억셉터와 도너를, 당 전이 효소를 사용하여 연결한다. 이로써, 임의의 당사슬 구조를 가진 균일한 당단백질을 합성할 수 있다.
본 명세서에 있어서,「당사슬」이란, 2 개 이상의 단당이 글리코시드 결합에 의해 결합된 구조 단위를 의미한다. 구체적인 단당이나 당사슬을, 예를 들어 "GlcNAc-", "SG-" 와 같이, 약호로서 표기하는 경우가 있다. 구조식 중에서 이들 약호로 기재한 경우, 환원 말단에서 다른 구조 단위와의 글리코시드 결합에 귀속되는 산소 원자 또는 질소 원자는, 특별한 정의가 있는 경우를 제외하고, 당해 당사슬을 나타내는 약호에는 포함되지 않는 것으로서 표시된다.
본 명세서에 있어서, 당사슬의 기본 단위가 되는 단당의 기재는, 별도로 정하는 경우를 제외하고, 편의상, 그 고리 구조에 있어서, 고리를 구성하는 산소 원자에 결합하고, 또한 하이드록시기 (또는 글리코시드 결합에 귀속되는 산소 원자) 와 직접 결합한 탄소 원자를 1 위치 (시알산에 있어서만 2 위치) 로서 표기한다. 실시예 화합물의 명칭은, 화학 구조 전체로서 부여된 것이며, 이 룰은 반드시 적용되는 것은 아니다.
본 명세서에 있어서, 당사슬을 기호 (예를 들어, SG, MSG, GlcNAc 등) 로서 기재하는 경우, 별도로 정의되는 경우를 제외하고, 환원 말단의 탄소까지를, 당해 기호에 포함시키는 것으로 하고, N- 또는 O-글리코시드 결합에 귀속되는 N 또는 O 는, 당해 기호에는 포함되지 않는 것으로 한다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조에 사용되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 다음 식 (XXXIV) :
[화학식 157]
Figure pct00159
로 나타내고, 항체 Ab 또는 그 기능성 단편은, 그 아미노산 잔기 (예를 들어, 시스테인, 리신 등) 의 측사슬로부터 직접 L 에 결합하거나, Ab 의 당사슬 또는 리모델링된 당사슬로부터 L 에 결합하고 있다. 아미노산 잔기의 측사슬은, 예를 들어 아지드기 등으로 수식되어 있어도 된다.
여기서,
Ab 는, 항체 또는 그 항체의 기능성 단편을 나타내고, 그 항체의 당사슬은 리모델링되어 있어도 되고,
m1 은 1 내지 10 의 범위이고,
L 은, Ab 와 D 를 연결하는 링커를 나타내고,
링커 L 은, -Lb-La-Lp-Lc-* 로 나타내고,
식 중, 아스테리스크는, 면역 부활화제 D 와 결합하고 있는 것을 나타내고,
Lp 가 -GGFG- 이고, 여기서, G 는 글리신을 나타내고, F 는 페닐알라닌을 나타내고,
La 가, -C(=O)-CH2CH2-C(=O)- 를 나타내고,
Lb 가, 다음 식 :
[화학식 158]
Figure pct00160
(상기로 나타내는 Lb 의 구조식에 있어서, 아스테리스크는 La 와 결합하고 있는 것을 나타내고, 파선은 Ab 의 당사슬 또는 리모델링된 당사슬과 결합하고 있는 것을 나타낸다) 을 나타내고,
Lc 가, -NH-CH2- 를 나타낸다.
D 는,
[화학식 159]
Figure pct00161
을 나타낸다.
본 명세서에 있어서, Ab 의 당사슬은, N 결합형 당사슬이나 O 결합형 당사슬이고, 바람직하게는 N 결합형 당사슬이다.
N 결합형 당사슬은 N 글리코시드 결합, O 결합형 당사슬은 O 글리코시드 결합에 의해, 항체의 아미노산 측사슬과 결합하고 있다.
본 명세서에 있어서, Ab 는, IgG 이고, 바람직하게는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 이다.
IgG 는 그 중사슬의 Fc 영역에 있어서의 297 번째의 아스파라긴 잔기 (이하,「Asn297 또는 N297」이라고 한다) 에 잘 보존된 N 결합형 당사슬 (이하,「Asn297 당사슬 또는 N297 당사슬」이라고 한다) 을 갖고 있고, 항체 분자의 활성이나 동태 등에 기여하는 것이 알려져 있다 (Eon-Duval, A. et al, Biotechnol. Prog. 2012, 28, 608-622, Sanglier-Cianferani, S., Anal. Chem. 2013, 85, 715-736).
IgG 의 정상 영역에 있어서의 아미노산 서열은 잘 보존되어 있고, Edelman 등의 보고 (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 63, 78-85, (1969)) 에 있어서, 각각의 아미노산이 EU 번호 (EU INDEX) 로 특정되어 있다. 예를 들어, Fc 영역에 있어서 N 결합형 당사슬이 부가하는 Asn297 은, EU 번호에 있어서 297 위치에 상당하는 것이고, 분자의 단편화나 영역 결손에 의해 실제의 아미노산 위치가 변동된 경우라도 EU 번호로 표시함으로써 아미노산이 일의적으로 특정된다.
하기 도면은 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트가 항체 또는 그 기능성 단편의 상기 N297 당사슬로부터 L 에 결합하고 있는 경우를 나타낸다. m2 는 1 또는 2 의 정수를 나타낸다.
[화학식 160]
Figure pct00162
또한, 당해 리모델링된 당사슬을 갖는 항체를 당사슬 리모델링 항체라고 한다.
SGP (α2,6-SGP) 는, Sialylglycopeptide 의 약어이고, N 결합형 당펩티드의 대표적인 것이다. SGP 는, 예를 들어, WO2011/027868 에 기재된 방법에 따라서, 계란의 난황으로부터 단리, 정제할 수 있다. 또, SGP 의 정제품이 도쿄 화성 공업 및 후시미 제약소로부터 판매되고 있다. 본 명세서에 있어서, SGP 의 당사슬 부분을 SG 로 표기하고, SG 의 환원 말단의 GlcNAc 가 1 개 결손된 당사슬을 SG(10) 으로 표기한다. SG(10) 은, 예를 들어, 우메가와 등의 보고 (Biochim. Biophys. Acta 2010, 1800, 1203-1209) 를 참조하여, SGP 의 효소적인 가수 분해에 의해 조제할 수 있다. 또, SG(10) 도 도쿄 화성 공업 및 후시미 제약소로부터 구입할 수 있다.
본 명세서에 있어서, SG(10) 의 β-Man 의 분기 사슬의 어느 일방만으로 비환원 말단의 시알산이 결손된 당사슬 구조를 MSG(9) 로 표기하고, 분기 사슬의 1-3 당사슬에만 시알산을 갖는 것을 MSG1, 분기 사슬의 1-6 당사슬에만 시알산을 갖는 것을 MSG2 로 각각 표기한다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 사용되는 리모델링된 당사슬은, N297-(Fuc)SG, N297-(Fuc)MSG1, N297-(Fuc)MSG2, 또는 N297-(Fuc)MSG1 과 N297-(Fuc)MSG2 의 혼합물이고, 바람직하게는 N297-(Fuc)SG, N297-(Fuc)MSG1 또는 N297-(Fuc)MSG2 이고, 보다 바람직하게는 N297-(Fuc)SG 또는 N297-(Fuc)MSG1 이다.
N297-(Fuc)SG 는 이하의 구조식 또는 배열식으로 나타낸다.
[화학식 161]
Figure pct00163
[화학식 162]
Figure pct00164
상기 식 중, 파선은 항체의 Asn297 에 결합하고 있는 것을 나타내고,
L(PEG) 는, -(CH2-CH2-O)n5-CH2-CH2-NH- 를 나타내고, 그 L(PEG) 의 우측단의 아미노기가 N297 당사슬의 β-Man 의 분기 사슬의 1-3 사슬측 및 1-6 사슬측의 양방의 비환원 말단의 시알산의 2 위치의 카르복실기와 아미드 결합하고 있는 것을 나타내고,
아스테리스크는, 상기 링커 L, 특히 링커 L 에 있어서의 Lb 의 1,2,3-트리아졸 고리 상의 1 위치 또는 3 위치의 질소 원자와 결합하고 있는 것을 나타내고,
여기서, n5 는 2 ∼ 10 의 정수이고, 바람직하게는 2 ∼ 5 의 정수이다.
N297-(Fuc)MSG1 은 이하의 구조식 또는 배열식으로 나타낸다.
[화학식 163]
Figure pct00165
[화학식 164]
Figure pct00166
상기 식 중, 파선은 항체의 Asn297 에 결합하고 있는 것을 나타내고,
L(PEG) 는, -(CH2-CH2-O)n5-CH2-CH2-NH- 를 나타내고, 그 L(PEG) 의 우측단의 아미노기가 N297 당사슬의 β-Man 의 분기 사슬의 1-3 사슬측의 비환원 말단의 시알산의 2 위치의 카르복실기와 아미드 결합하고 있는 것을 나타내고,
아스테리스크는, 상기 링커 L, 특히 링커 L 에 있어서의 Lb 의 1,2,3-트리아졸 고리 상의 1 위치 또는 3 위치의 질소 원자와 결합하고 있는 것을 나타내고,
여기서, n5 는, 2 ∼ 10 의 정수이고, 바람직하게는 2 ∼ 5 의 정수이다.
N297-(Fuc)MSG2 는 이하의 구조식 또는 배열식으로 나타낸다.
[화학식 165]
Figure pct00167
[화학식 166]
Figure pct00168
상기 식 중, 파선은 항체의 Asn297 에 결합하고 있는 것을 나타내고,
L(PEG) 는, -(CH2-CH2-O)n5-CH2-CH2-NH- 를 나타내고, 그 L(PEG) 의 우측단의 아미노기가 N297 당사슬의 β-Man 의 분기 사슬의 1-6 사슬측의 비환원 말단의 시알산의 2 위치의 카르복실기와 아미드 결합하고 있는 것을 나타내고,
아스테리스크는, 상기 링커 L, 특히 링커 L 에 있어서의 Lb 의 1,2,3-트리아졸 고리 상의 1 위치 또는 3 위치의 질소 원자와 결합하고 있는 것을 나타내고,
여기서, n5 는 2 ∼ 10 의 정수이고, 바람직하게는 2 ∼ 5 의 정수이다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체의 N297 당사슬이, N297-(Fuc)SG 인 경우, 항체는 이량체이기 때문에, 항체-면역 부활화제 콘주게이트는 4 개의 링커 L 및 4 개의 면역 부활화제 D 가 결합된 분자 (상기 m2 ＝ 2) 가 된다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체의 N297 당사슬이, N297-(Fuc)MSG1 혹은 N297-(Fuc)MSG2 또는 그것들의 혼합물인 경우, 항체는 이량체이기 때문에, 항체-면역 부활화제 콘주게이트는 2 개의 링커 L 및 2 개의 면역 부활화제 D 가 결합된 분자 (상기 m2 ＝ 1) 가 된다 (도 19 참조).
N297 당사슬은, 바람직하게는 N297-(Fuc)SG 혹은 N297-(Fuc)MSG1 또는 N297-(Fuc)MSG2 이고, 보다 바람직하게는 N297-(Fuc)SG 또는 N297-(Fuc)MSG1 이고, 더욱 바람직하게는 N297-(Fuc)SG 이다.
본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체의 N297 당사슬이 N297-(Fuc)SG 혹은 N297-(Fuc)MSG1 또는 N297-(Fuc)MSG2 인 경우, 균일성이 높은 ADC 를 취득할 수 있다.
＜4-2. 당사슬 리모델링 항체의 제조＞
당사슬 리모델링 항체는, 예를 들어 WO2018/003983, WO2020/050406, WO2021/177438, PLos ONE 2018, 13, e0193534 등에 기재된 방법에 준하여, 다음 식에 나타내는 방법으로 제조할 수 있다.
[화학식 167]
Figure pct00169
(D-1 공정)
본 공정은, 목적으로 하는 항체에 대하여, 공지된 효소 반응을 사용하여 항체의 아미노산 서열 297 번째의 아스파라긴에 결합하는 N 결합형 당사슬 (N297 결합 당사슬) 의 환원 말단 키토비오스 구조의 GlcNAcβ1-4GlcNAc 간의 글리코시드 결합을 가수 분해에 의해 절단하여, 당사슬 절단 항체를 제조하는 공정이다. 목적으로 하는 항체 (1) (10 ㎎/mL) 을 완충액 (인산 완충액 등) 중, 0 ℃ 부터 40 ℃ 까지에 있어서, 야생형 EndoS 효소 등의 가수 분해 효소를 사용하여 환원 말단의 키토비오스 구조의 GlcNAcβ1 과 4GlcNAc 간의 글리코시드 결합의 가수 분해 반응을 실시하였다. 반응 시간은 10 분 내지 72 시간, 바람직하게는 1 시간 내지 6 시간이다. 야생형 EndoS 효소는 항체 (1) 100 ㎎ 에 대하여, 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎, 바람직하게는 0.1 ㎎ 내지 3 ㎎ 을 사용하였다. 반응 종료 후, 어피니티 크로마토그래피 (HiTrap rProtein A FF (5 ml) (GE 헬스케어 제조)) 및/또는 하이드록시아파타이트 칼럼 (Bio-Scale Mini CHT Type I 카트리지 (5 ml) (BIO-RAD 제조)) 으로 정제하여, (Fucα1,6)GlcNAc 항체 (2) 를 얻었다.
(D-2 공정)
본 공정은, D-1 공정에서 얻어진 (Fucα1,6)GlcNAc 항체 (2) 에 대하여, 공지된 효소 반응을 사용하여 아지드기를 포함하는 PEG 링커를 갖는 SG 형 또는 MSG (MSG1, MSG2) 형 당사슬 옥사졸린체 (이하,「아지드 당사슬 옥사졸린체」) 를 결합시켜, 당사슬 리모델링 항체 (3) 을 제조하는 공정이다.
항체 (2) 를 완충액 (인산 완충액 등) 중, 0 ℃ 부터 40 ℃ 까지에 있어서, EndoS (D233Q/Q303L) 등의 당 전이 효소 존재하, 아지드 당사슬 옥사졸린체와 반응시킴으로써, 당사슬 전이 반응을 실시하였다. 반응 시간은 10 분 내지 72 시간, 바람직하게는 1 시간 내지 6 시간이다. EndoS 효소 (D233Q/Q303L) 는 항체 100 ㎎ 에 대하여, 1 ㎎ 내지 10 ㎎, 바람직하게는 1 ㎎ 내지 3 ㎎ 을 사용하고, 아지드 당사슬 옥사졸린체는 2 당량 내지 과잉 당량, 바람직하게는 4 당량 내지 20 당량 사용하였다. 반응 종료 후, 어피니티 크로마토그래피 (HiTrap rProtein A FF (5 ml) (GE 헬스케어 제조)) 및 하이드록시아파타이트 칼럼 (Bio-Scale Mini CHT Type I 카트리지 (5 ml) (BIO-RAD 제조)) 으로 정제하여, 당사슬 리모델링 항체 (3) 을 얻었다.
상기 당사슬 리모델링 항체의 조제에 있어서, 항체 수용액의 농축, 농도 측정, 그리고 버퍼 교환은, 후술하는 공통 조작 A 내지 C 에 따라서 실시할 수 있다.
또한, SG 형의 아지드 당사슬 옥사졸린체는 WO2018/003983 에 기재된 방법에 준하여 합성하였다. 일례로서 [N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox (WO2018/003983 에 기재된 화합물 1-10) 의 합성 방법을 다음 식에 나타낸다.
[화학식 168]
Figure pct00170
MSG 형의 아지드 당사슬 옥사졸린체도 WO2018/003983 에 기재된 방법에 준하여 합성하였다. 일례로서 [N3-PEG(3)]-MSG1(9)-Ox (WO2018/003983 에 기재된 화합물 1-11) 의 합성 방법을 다음 식에 나타낸다.
[화학식 169]
Figure pct00171
(D-3 공정)
본 공정은, D-1 공정에서 얻어진 (Fucα1,6)GlcNAc 항체 (2) 에 대하여, 2 종류의 Endo 효소를 사용한 당사슬 전이 반응에 의해, 당사슬 리모델링 항체 (3) 을 제조하는 공정이다. 2 종류의 효소를 동시에 사용함으로써, 환원 말단이 활성화되어 있지 않은 SGP 나 (SG)Asn 등을 당사슬 도너로 하여, 항체의 N297 당사슬로 직접 당사슬 전이시킬 수 있다.
사용하는 2 종류의 Endo 효소에 관하여, 효소 A (EndoM 형 효소) 및 효소 B (EndoS 형 효소) 를 적절히 조합할 수 있다.
효소 A 로는, EndoM, EndoOm, EndoCC 와 그 가수 분해 활성을 저하시킨 EndoM 변이체, EndoOm 변이체, EndoCC 변이체 등을 예시할 수 있다. 효소 A 로서 바람직한 것은, EndoM N175Q, EndoCC N180H, EndoOm N194Q 이다.
효소 B 로는, EndoS, EndoS2 (EndoS49) 및 그것들의 가수 분해 활성을 저하시킨 EndoS 변이체, EndoS2 (EndoS49) 변이체 등을 예시할 수 있다. 효소 B 로서 바람직한 것은, EndoS D233Q, EndoS D233Q/Q303L, EndoS D233Q/E350A, EndoS D233Q/E350Q, EndoS D233Q/E350D, EndoS D233Q/E350N, EndoS D233Q/D405A, EndoS2 D184M, EndoS2 T138Q 등이다.
당사슬 도너로는, ([N3-PEG(3)]2-SG)-Asn-PEG(3)-N3, [N3-PEG(3)]-MSG1-Asn-PEG(3)-N3, [N3-PEG(3)]-MSG2-Asn-PEG(3)-N3 등을 사용할 수 있다.
항체 (2) 를 완충액 (트리스 완충액 등) 중, 효소 A (EndoM 형 효소) 및 효소 B (EndoS 형 효소) 의 당 전이 효소 존재하, ([N3-PEG(3)]2-SG)-Asn-PEG(3)-N3 과 반응시킴으로써, 당사슬 전이 반응을 실시하였다. 반응 온도는, 사용하는 효소의 지적 온도에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 통상적으로 15 ∼ 50 도이고, 바람직하게는 25 ∼ 40 도이다. 반응 시간은, 2 시간 ∼ 48 시간의 사이에서, 적절히 선택할 수 있다.
반응 종료 후, 반응 스케일에 적합한 정제 방법 (어피니티 크로마토그래피, 하이드록시아파타이트 칼럼 등) 이나 한외 여과 방법 (한외 여과막) 을 선택하여, 당사슬 리모델링 항체 (3) 을 얻었다.
상기 당사슬 리모델링 항체의 조제에 있어서, 항체 수용액의 농축, 농도 측정, 그리고 버퍼 교환은, 후술하는 공통 조작 A 내지 C 에 따라서 실시할 수 있다.
또한, ([N3-PEG(3)]2-SG)-Asn-PEG(3)-N3 은, WO2018/003983 에 기재된 방법에 준하여 합성하였다. WO2018/003983 에 기재된 공정 1-2A 에 있어서, Fmoc-(SG-)Asn (1S2S-11NC-Asn-Fmoc, 당사슬 공학 연구소 제조) 으로부터 조제한 Fmoc-(SG-)Asn 프리체와 11-아지드-3,6,9-트리옥사운데칸-1-아민과 반응시켜 ([N3-PEG(3)]2-SG)-Asn-PEG(3)-N3 (WO2018/003983 에 기재된 화합물 1-13) 을 얻었다.
MSG 형의 당사슬 도너 [N3-PEG(3)]-MSG1-Asn-PEG(3)-N3, [N3-PEG(3)]-MSG2-Asn-PEG(3)-N3 도 WO2019065964 의 실시예 154 의 공정 1 내지 공정 3 에 기재된 방법에 준하여 합성할 수 있다.
＜4-3. 항체와 면역 부활화제의 콘주게이션＞
식 (Rp, Rp-XIII) 의 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 이하의 방법에 따라서 제조할 수 있다.
[화학식 170]
Figure pct00172
(여기서, 항체-면역 부활화제 콘주게이트 (Rp, Rp-XIII) 의 좌측의 2 개의 아스테리스크 (*) 는 우측의 아스테리스크로 나타내는 CDN-링커 부분을 나타낸다)
항체-면역 부활화제 콘주게이트 (Rp, Rp-XIII) 은, 당사슬 리모델링 항체 (3) 과 CDN 콘주게이트 전구체 (Rp, Rp-XII) 를 고리화 부가 반응에 의해 결합시켜, 제조할 수 있다. 고리화 부가 반응으로는, 예를 들어 Diels-Alder 반응, 및 1,3-쌍극자 고리화 부가 반응을 들 수 있고, 바람직하게는 1,3-쌍극자 고리화 부가 반응을 사용하여 제조한다. 1,3-쌍극자 고리화 부가 반응으로는, 예를 들어, 아지드와 말단 알킨의 고리화 부가 반응, 및 SPAAC (변형 촉진형 아지드-알킨 부가 고리화 반응 strain-promoted azide-alkyne cycloaddition : J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 15046-15047) 반응을 들 수 있고, 바람직하게는 SPAAC 반응을 사용하여 제조한다.
본 제조법은, 상기 D-2 공정 또는 D-3 공정에서 얻어진 당사슬 리모델링 항체 (3) 과 CDN 콘주게이트 전구체 (Rp, Rp-XII) 를 SPAAC 반응에 의해 결합시켜, 항체-면역 부활화제 콘주게이트 (Rp, Rp-XIII) 을 제조하는 방법이다.
(E-1 공정) (공정 a9)
당사슬 리모델링 항체 (3) 의 완충 용액 (인산 완충액, 아세트산 완충액, 붕산 완충액 등) 과 CDN 콘주게이트 전구체 (Rp, Rp-XII) 를 적당한 용매 (디메틸술폭시드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 프로필렌글리콜 또는 그것들의 혼합 용매) 에 용해시킨 용액을 혼합함으로써, SPAAC 반응을 실시하였다. CDN 콘주게이트 전구체 (Rp, Rp-XII) 는, 당사슬 리모델링 항체 (3) 1 몰에 대하여, 2 몰 내지 과잉 몰, 바람직하게는 4 몰 내지 30 몰이고, 유기 용매의 비율은, 항체의 완충 용액에 대하여 1 ％ 내지 200 ％ (v/v) 가 바람직하다. 반응 온도는 0 ℃ 내지 37 ℃, 바람직하게는 15 ℃ 내지 25 ℃ 이고, 반응 시간은 1 시간 내지 150 시간, 바람직하게는 6 시간 내지 72 시간이다. 반응 용액의 pH 는 5 내지 9 가 바람직하다. 반응 용액을 후술하는 공통 조작 D 에 기재된 방법에 따라서 정제하여, 항체-면역 부활화제 콘주게이트 (Rp, Rp-XIII) 을 얻었다.
항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 후술하는 공통 조작 D 내지 G 에 의해 버퍼 교환, 정제, 항체 농도의 측정 및 항체 1 분자당의 면역 부활화제 평균 결합수의 측정을 실시하고, 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 동정을 실시할 수 있다.
공통 조작 A : 항체 수용액의 농축
Amicon (등록 상표) Ultra 원심식 필터 디바이스 (50,000 NMWL, Merck Millipore Ltd.) 에 항체 또는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 용액을 넣고, 원심기 (Allegra X-15R, Beckman Coulter, Inc.) 를 사용한 원심 조작 (2000 G 내지 4000 G 로 5 분간 내지 20 분간 원심) 에 의해, 항체 및 항체-면역 부활화제 콘주게이트 용액을 농축시켰다.
공통 조작 B : 항체의 농도 측정
UV 측정기 (Nanodrop 1000, Thermo Fisher Scientific, Inc.) 를 사용하여, 메이커 규정의 방법에 따라, 항체 농도의 측정을 실시하였다. 그 때에, 항체마다 상이한 280 ㎚ 흡광 계수 (1.3 mL㎎-1㎝-1 내지 1.8 mL㎎-1㎝-1) 를 사용하였다.
공통 조작 C : 항체의 버퍼 교환
항체 수용액에 완충액 (인산 완충 생리 식염수 (pH 6.0), 인산 완충액 (pH 6.0) 등) 을 첨가하고, 공통 조작 A 에 기재된 방법에 따라서 농축시켰다. 이 조작을 수 회 실시한 후, 공통 조작 B 에 기재된 방법에 따라서 항체 농도를 측정하였다. 이 항체 완충 용액에, 적절히 완충액 (인산 완충 생리 식염수 (pH 6.0), 인산 완충액 (pH 6.0) 등) 을 첨가하여, 목적으로 하는 농도 (예를 들어, 약 10 ㎎/mL) 의 항체 완충 용액을 조제하였다.
공통 조작 D : 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 정제 (겔 여과 크로마토그래피)
아세트산 완충액 (10 mM Acetate Buffer, 5 ％ Sorbitol, pH 5.5 ; 본 명세서에서는 ABS 라고 칭한다) 또는 그 이외의 적당한 완충액으로 NAP 칼럼 (NAP-5, NAP-10, NAP-25 (GE 헬스케어 제조)) 을 평형화시켰다. 이 NAP 칼럼에, 항체-면역 부활화제 콘주게이트 반응 용액을 차지하고, 메이커 규정량의 완충액을 자연 유하시키고, 항체 획분을 분리 채취하였다. 이 획분을 다시 NAP 칼럼에 차지하고, 메이커 규정량의 완충액을 자연 유하시키고, 항체 획분을 분리 채취하였다. 이 조작을 합계 2 회 내지 3 회 반복함으로써, 미결합의 면역 부활화제 링커나 디메틸술폭시드, 프로필렌글리콜을 제거한 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 얻었다. 필요에 따라, 공통 조작 A 및 C 에 의해 항체-면역 부활화제 콘주게이트 용액의 농도를 조절하였다.
공통 조작 E : 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체 농도 및 항체 1 분자당의 면역 부활화제 평균 결합수의 측정 (UV 법)
항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 결합 면역 부활화제 농도는, WO2020/050406, WO2021/177438 에 기재된 방법에 준하여, 흡광 광도계 (UV/VIS Spectrometer Lambda 25, PerkinElmer, Inc.) 를 사용하여, 항체-면역 부활화제 콘주게이트 수용액의 280 ㎚ 및 250 ㎚ 의 2 파장에 있어서의 흡광도를 측정함으로써 산출할 수 있다.
공통 조작 F : 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체 농도 및 항체 1 분자당의 면역 부활화제 평균 결합수의 측정 (역상 고속 액체 크로마토그래피 법 : RP-HPLC)
항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체 농도 및 항체 1 분자당의 면역 부활화제 평균 결합수는, 전술한 공통 조작 E 에 추가하여, WO2020/050406, WO2021/177438 에 기재된 방법에 준하여 고속 액체 크로마토그래피 분석에 의해 구할 수 있다.
공통 조작 G : 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체 농도 및 항체 1 분자당의 면역 부활화제 평균 결합수의 측정 (소수성 상호 작용-고속 액체 크로마토그래피법 : HI-HPLC)
항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체 농도 및 항체 1 분자당의 면역 부활화제 평균 결합수는, 전술한 공통 조작 E 및 F 에 추가하여, WO2020/050406, WO2021/177438 에 기재된 방법에 준하여 고속 액체 크로마토그래피 분석에 의해 구할 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 또는 그 제조 중간체에는, 입체 이성체 혹은 부제 탄소 원자에서 유래하는 광학 이성체, 기하 이성체, 호변 이성체 또는 d 체, l 체, 아트로프 이성체 등의 광학 이성체가 존재하는 경우도 있는데, 이들 이성체, 광학 이성체 및 이것들의 혼합물 모두 본 발명에 포함된다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서, 항체 1 분자에 대한 면역 부활화제의 결합수는, 그 유효성, 안전성에 영향을 미치는 중요 인자이다. 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 제조는, 면역 부활화제의 결합수가 일정한 수가 되도록, 반응시키는 원료·시약의 사용량 등의 반응 조건을 규정하여 실시되지만, 저분자 화합물의 화학 반응과는 달리, 상이한 수의 면역 부활화제가 결합한 혼합물로서 얻어지는 것이 통상이다. 항체 1 분자에 대한 면역 부활화제의 결합수는 평균값, 즉, 평균 면역 부활화제 결합수 (DAR : Drug to Antibody Ratio) 로서 특정할 수 있다. 항체 분자에 대한 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 결합수는 컨트롤 가능하며, 1 항체당의 면역 부활화제 평균 결합수로서, 1 내지 10 의 범위의 고리형 디뉴클레오티드 유도체를 결합시킬 수 있지만, 바람직하게는 1 내지 8 개이고, 보다 바람직하게는 1 내지 5 개이다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서, 항체 Ab 가, 항체 Ab 의 리모델링된 당사슬로부터 L 에 결합하고 있는 경우, 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 있어서의 항체 1 분자당의 면역 부활화제 결합수 m2 는 1 또는 2 의 정수이다. 당해 당사슬이 N297 당사슬이고, 당사슬이 N297-(Fuc)SG 인 경우, m2 는 2 이고, DAR 은 3 ∼ 5 의 범위 (바람직하게는 3.2 ∼ 4.8 의 범위이고, 보다 바람직하게는 3.5 ∼ 4.2 의 범위) 이다. N297 당사슬이 N297-(Fuc)MSG1, N297-(Fuc)MSG2 또는 N297-(Fuc)MSG1 과 N297-(Fuc)MSG2 의 혼합물인 경우, m2 는 1 이고, DAR 은 1 ∼ 3 의 범위 (바람직하게는 1.0 ∼ 2.5 의 범위, 보다 바람직하게는 1.2 ∼ 2.2 의 범위) 이다.
또한, 당업자라면 본원의 실시예의 기재로부터 항체에 필요한 수의 면역 부활화제를 결합시키는 반응을 설계할 수 있고, 고리형 디뉴클레오티드 유도체의 결합수를 컨트롤한 항체를 취득할 수 있다.
또한, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 또는 그 제조 중간체는, 대기 중에 방치하거나, 또는 재결정함으로써, 수분을 흡수하여, 흡착수가 부착되거나, 수화물이 되는 경우가 있으며, 그러한 물을 포함하는 화합물 및 염도 본 발명에 포함된다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 또는 그 제조 중간체가, 아미노기 등의 염기성기를 갖는 경우, 원하는 바에 따라 의약적으로 허용되는 염으로 할 수 있다. 그러한 염으로는, 예를 들어 염산염, 요오드화수소산염 등의 할로겐화수소산염 ; 질산염, 과염소산염, 황산염, 인산염 등의 무기산염 ; 메탄술폰산염, 트리플루오로메탄술폰산염, 에탄술폰산염 등의 저급 알칸술폰산염 ; 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염 등의 아릴술폰산염 ; 포름산염, 아세트산염, 말산염, 푸마르산염, 숙신산염, 시트르산염, 타르타르산염, 옥살산염, 말레산염 등의 유기산염 ; 및 오르니틴산염, 글루탐산염, 아스파르트산염 등의 아미노산염을 들 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 또는 그 제조 중간체가, 인산기 및/또는 티오인산기를 그 구조에 포함하기 때문에, 일반적으로 염기 부가염을 형성하는 것이 가능하다. 또, 그 제조 중간체가, 카르복시기 등의 산성기를 갖는 경우에도, 일반적으로 염기 부가염을 형성하는 것이 가능하다. 의약적으로 허용되는 염으로는, 예를 들어, 나트륨염, 칼륨염, 리튬염 등의 알칼리 금속염 ; 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토금속염 ; 암모늄염 등의 무기염 ; 디벤질아민염, 모르폴린염, 페닐글리신알킬에스테르염, 에틸렌디아민염, N-메틸글루카민염, 디에틸아민염, 트리에틸아민염, tert-부틸아민염, 시클로헥실아민염, 디시클로헥실아민염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염, 디에탄올아민염, N-벤질-N-(2-페닐에톡시)아민염, 피페라진염, 테트라메틸암모늄염, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄염 등의 유기 아민염 등을 들 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 및 그 제조 중간체는, 공기 중의 수분을 흡수하거나 함으로써 수화물로서 존재하는 경우도 있다. 본 발명의 용매화물로는, 의약적으로 허용할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 구체적으로는, 수화물, 에탄올화물, 2-프로판올화물 등이 바람직하다. 또, 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트 및 그 제조 중간체 중에 질소 원자가 존재하는 경우에는 N-옥사이드체로 되어 있어도 되고, 이들 용매화물 및 N-옥사이드체도 본 발명의 범위에 포함된다. 또, 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트 및 그 제조 중간체 중에 황 원자가 존재하는 경우에는 술폭시드체로 되어 있어도 되고, 이들 용매화물 및 술폭시드체도 본 발명의 범위에 포함된다.
또, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 및 그 제조 중간체에는, 다양한 방사성 또는 비방사성 동위체로 라벨된 화합물도 포함된다. 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 및 그 제조 중간체를 구성하는 원자의 1 이상에, 원자 동위체의 비천연 비율도 함유할 수 있다. 원자 동위체로는, 예를 들어, 중수소 (2H), 트리튬 (3H), 요오드-125 (125I) 또는 탄소-14 (14C) 등을 들 수 있다. 또, 본 발명 화합물은, 예를 들어, 트리튬 (3H), 요오드-125 (125I) 또는 탄소-14 (14C) 와 같은 방사성 동위체로 방사성 표지될 수 있다. 방사성 표지된 화합물은, 치료 또는 예방제, 연구 시약, 예를 들어, 어세이 시약, 및 진단제, 예를 들어, 인비보 화상 진단제로서 유용하다. 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 모든 동위체 변이종은, 방사성인지의 여부를 불문하고, 본 발명의 범위에 포함된다.
＜5. 의약＞
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 암세포에 대하여 항종양 면역 활성 또는 세포 상해 활성을 나타내는 점에서, 의약으로서, 특히 암에 대한 치료제 및/또는 예방제, 또는 항종양제로서 사용할 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트가 적용되는 암의 종류로는, 폐암 (비소세포 폐암, 소세포 폐암 등), 신장암, 요로 상피암, 대장암, 전립선암, 다형 신경 교아종, 난소암 (표층 상피성 종양, 간질성 종양, 배세포 종양 등), 췌장암, 유방암, 멜라노마, 간암, 방광암, 위암, 식도암, 자궁체암, 정소암 (세미노마, 비세미노마), 자궁경부암, 태반 융모암, 뇌종양, 두경부암, 갑상선암, 중피종, 소화관 간질 종양 (Gastrointestinal Stromal Tumor, GIST), 담낭암, 담관암, 부신암, 인두암, 설암, 청기 (聽器) 암, 흉선암, 소장암, 유극세포암, 백혈병, 악성 림프종, 형질 세포종, 골수종, 육종 등을 들 수 있지만, 항체-면역 부활화제 콘주게이트에 대해서는, 치료 대상이 되는 암세포에 있어서 항체-면역 부활화제 콘주게이트 중의 항체를 인식할 수 있는 단백질을 발현하고 있는 암세포이면 이것들에는 한정되지는 않는다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 포유 동물에 대하여 바람직하게 투여할 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간이다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트가 포함되는 의약 조성물에 있어서 사용되는 물질로는, 투여량이나 투여 농도에 있어서, 이 분야에 있어서 통상적으로 사용되는 제제 첨가물 기타에서 적절히 선택하여 적용할 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 1 종 이상의 약학적으로 적합성의 성분을 포함하는 의약 조성물로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 상기 의약 조성물은, 대표적으로는, 1 종 이상의 약학적 캐리어 (예를 들어, 멸균된 액체 (예를 들어, 물 및 오일 (석유, 동물, 식물, 또는 합성 기원의 오일 (예를 들어, 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등)) 을 포함한다)) 를 포함한다. 물은, 상기 의약 조성물이 정맥 내 투여되는 경우에 보다 대표적인 캐리어이다. 식염수 용액, 그리고 덱스트로오스 수용액 및 글리세롤 수용액도 또한, 액체 캐리어로서, 특히 주사용 용액을 위해 사용될 수 있다. 적절한 약학적 부형제는, 당해 분야에서 공지이다. 상기 조성물은 또, 원한다면, 미량의 습윤제 혹은 유화제, 또는 pH 완충화제를 포함할 수 있다. 적절한 약학적 캐리어의 예는, E. W. Martin 에 의한「Remington's Pharmaceutical Sciences」에 기재된다. 그 처방은, 투여의 양태에 대응한다.
다양한 송달 시스템이 공지이며, 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 도입 방법으로는, 피내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 및 피하의 경로를 들 수 있지만, 이것들에 한정되지 않는다. 투여는, 예를 들어, 주입 또는 볼러스 주사에 의한 것일 수 있다. 특정한 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 투여는, 주입에 의한 것이다. 비경구적 투여는, 바람직한 투여 경로이다.
대표적 실시형태에 있어서, 상기 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 포함하는 의약 조성물은, 인간에 대한 정맥 내 투여에 적합한 의약 조성물로서, 상습적 순서에 따라서 처방된다. 대표적으로는, 정맥 내 투여를 위한 조성물은, 멸균의 등장성의 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우, 상기 의약은 또, 가용화제 및 주사 부위에서의 동통을 완화시키기 위한 국소 마취제 (예를 들어, 리그노카인) 를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 성분은, 예를 들어, 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 사셰 등에 밀봉하여 시일된 용기 중의 동결 건조 분말 또는 무수의 농축물로서, 별개로, 또는 단위 제형 중에서 함께 혼합하여 중 어느 쪽으로 공급된다. 상기 의약 조성물이 주입에 의해 투여될 예정인 경우, 그것은, 예를 들어, 멸균의 제약 그레이드의 물 또는 식염수를 포함하는 주입 보틀로 투약될 수 있다. 상기 의약이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 식염수의 앰플은, 예를 들어, 상기 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록, 제공될 수 있다. 상기 의약 조성물은, 용액으로서 제공되는 경우도 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 포함하는 의약 조성물은 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트만을 포함하는 의약 조성물이어도 되고, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트 및 다른 암 치료제를 포함하는 의약 조성물이어도 된다. 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 다른 암 치료제와 함께 투여할 수도 있고, 이로써 항종양 효과를 증강시킬 수 있다. 이와 같은 목적으로 사용되는 다른 암 치료제는, 항체-면역 부활화제 콘주게이트와 동시에, 따로 따로, 혹은 연속하여 개체에 투여되어도 되고, 각각의 투여 간격을 변경하여 투여해도 된다. 이와 같은 암 치료제로서, 대사 길항제, 알킬화제, 미소관 저해제 등의 화학 요법제 (abraxane, carboplatin, cisplatin, gemcitabine, irinotecan (CPT-11), paclitaxel, docetaxel, pemetrexed, vinblastine 또는 국제공개 제WO2003/038043호 팜플렛에 기재된 약제 등), 호르몬 조정약 (LH-RH 아날로그인 류프로렐린 등, 고세렐린, 에스트라무스틴, 에스트로겐 길항약인 타목시펜, 라록시펜 등), 아로마타아제 저해제 (아나스트로졸, 레트로졸, 엑스메스탄 등), 키나아제 저해제, PARP 저해제, 골 파괴 억제제, 골 형성 촉진제, 전이 억제제, 분자 표적약 (항 EGFR 항체, 항 VEGF 항체, 항 VEGFR 항체 등), 면역 체크 포인트 저해약 (항 PD-1 항체인 니볼루맙, 펨브로리주맙 등, 항 PD-L1 항체인 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 등, 항 PD-L2 항체, 항 CTLA4 항체인 이필리무맙 등, 항 A2aR 항체, A2a 수용체 안타고니스트, 항 LAG3 항체, 항 TIM3 항체 등), 항제어성 T 세포약 (항 CTLA4 항체, 항 CD25 항체, 항 GITR 항체, 항 GARP 항체, 항 TIGIT 항체, 항 CCR8 항체 등), 면역 활성화제 (항 4-1BB 항체, 항 OX40 항체, 항 CD40 항체, 항 CD3 항체, 항 CD28 항체, IL-2 아날로그, 사이토카인, TLR 아고니스트 등), 면역 조절제 (항 CD47 항체, 항 SIRPα 항체, 억제성 미엘로이드 조정제 등), ADCC (Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity) 활성, ADCP (Antibody Dependent Cellular Phagocytosis) 활성 또는 보체 활성을 갖는 항체 의약, BiTE (Bi-specific T-cell engagers), Antibody-Drug-Conjugate (ADC) (예를 들어, Deruxtecan, DM1, Pyrrolobenzodiazepine, MMAF 등을 포함하는 약제 콘주게이트 (항 HER2-ADC, 항 TROP2-ADC, 항 HER3-ADC 등)), 광역학 요법을 조합한 ADC 등, 또한 항종양 백신, 항종양 세포 치료 (CAR-T, TCR-T, 수상 세포, NK 세포 등), 항종양 세균 치료, 항종양 바이러스 치료 등을 들 수 있지만, 항종양 활성을 갖는 약제이면 한정되지는 않는다. 또한, 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 본 발명의 다른 항체-면역 부활화제 콘주게이트와 함께 투여할 수도 있고, 이로써 항종양 효과를 증강시킬 수 있다. 또, 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트는 면역 부활화제 뿐만 아니라, 항종양 효과를 가져오는 치료, 예를 들어 방사선, 중량자선, 외과적 수술, 골수 이식 등과의 병용에 의해 항종양 효과를 증강시킬 수 있지만, 항종양 효과를 갖는 치료이면 한정되지는 않는다.
이와 같은 의약 조성물은, 선택된 조성과 필요한 순도를 갖는 제제로 하여, 동결 건조 제제 혹은 액상 제제로서 제제화하면 된다. 동결 건조 제제로서 제제화할 때에는, 이 분야에 있어서 사용되는 적당한 제제 첨가물이 포함되는 제제여도 된다. 또 액제에 있어서도 동일하게 하여, 이 분야에 있어서 사용되는 각종 제제 첨가물을 포함하는 액상 제제로서 제제화할 수 있다.
의약 조성물의 조성 및 농도는 투여 방법에 따라서도 변화하지만, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 포함하는 의약 조성물에 포함되는 항체-면역 부활화제 콘주게이트는, 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 항원에 대한 친화성, 즉, 항원에 대한 해리 정수 (Kd 값) 의 점에 있어서, 친화성이 높을 (Kd 값이 낮을) 수록, 소량의 투여량이어도 약효를 발휘시킬 수 있다. 따라서, 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 투여량의 결정에 있어서는, 항체-면역 부활화제 콘주게이트와 항원의 친화성의 상황에 기초하여 투여량을 설정할 수도 있다. 본 발명의 항체-면역 부활화제 콘주게이트를 인간에 대하여 투여할 때에는, 예를 들어, 약 0.001 ∼ 100 ㎎/㎏ 을 1 회 혹은 1 ∼ 180 일간에 1 회의 간격으로 복수 회 투여하면 된다.
이하 본 발명을 실시예에서 설명하지만, 본 발명은 이것들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 이하에 있어서,「화합물 (I)」또는 합성 스킴 중의「(I)」은,「식 (I) 의 화합물」에 대응하는 것을 나타내고, 그 이후의 화합물 번호에 대해서도 동일하다.
실시예
이하의 실시예에 있어서, 별개의 규정이 있는 경우를 제외하고, 실온은 15 ℃ 내지 35 ℃ 를 나타낸다. 탈수 디클로로메탄은 후지 필름 와코 순약으로부터 판매되고 있는 디클로로메탄 (초탈수) 을 사용하였다. 탈수 아세토니트릴은, 후지 필름 와코 순약으로부터 판매되고 있는 아세토니트릴 (초탈수) 을 사용하였다. 탈수 피리딘은, 칸토 화학으로부터 판매되고 있는 피리딘 (탈수) 을 사용하였다. 실리카 겔 크로마토그래피는 Biotage Sfar HC D (20 ㎛, Biotage 제조), 아미노 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피는 Biotage Sfar Amino D (50 ㎛, Biotage 제조), 분리 채취 HPLC 는 Agilent Preparative HPLC System (Agilent Technology 제조) 을 사용하여 실시하였다. 분리 채취 칼럼은, XBridge Prep OBD (5 ㎛, C18, 130 Å, 250 × 30 ㎜, Waters 제조) 를 사용하였다.
각종 스펙트럼 데이터의 측정에는 이하의 기기를 사용하였다. 1H-NMR 및 31P-NMR 스펙트럼은, JEOL 제조의 ECZ500R 을 사용하여 측정하였다. 매스 스펙트럼은 Shimadzu LCMS-2010 및 LCMS-2020 (시마즈 제작소 제조) 을 사용하여 측정하였다. LC/MS 의 측정은, 이하의 조건에서 실시하였다 [칼럼 : XBridge C18, 3.5 ㎛, 150 × 4.6 ㎜ (Waters 제조), 이동상 : 10 mM 아세트산암모늄/아세토니트릴, 아세토니트릴 : 10 ％ ∼ 97.5 ％ (0 분 ∼ 42 분)].
[A. 고리형 디뉴클레오티드 (CDN) 의 합성]
A-1 CDN1 의 합성 1
고리형 디뉴클레오티드 (CDN1) 를, 이하의 합성 스킴 A-1 에 따라서 합성하였다. 합성 스킴 A-1 에 있어서, A2 ＝ Bz-테트라아자벤조[cd]아줄렌기, Q ＝ 티올기, PG1 ＝ TBS, PG2 ＝ DMTr, PG3 ＝ Teoc, PG6 ＝ Ac 이고, (Rc-II) 로서, (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용하였다.
[합성 스킴 A-1]
[화학식 171]
Figure pct00173
실시예 1 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-2'-O-[(1S,3aR)-테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴-1-일]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (Rc-III) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 172]
Figure pct00174
(공정 1)
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (10.0 g) 에 탈수 디클로로메탄 (150 mL) 을 첨가하여 -5 ℃ 로 냉각시키고, 트리에틸아민 (1.73 mL) 을 첨가하였다. 상기 용액에 문헌으로 이미 알려진 (Tetrahedron Letter, 1998, 39, 2491-2494) (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴의 탈수 디클로로메탄 (50 mL) 용액을 적하하고, 동 온도에서 30 분간 교반하였다. 실온으로 승온시키고, 30 분간 교반 후, 반응액을 농축시켰다. 농축된 미정제 생성물을 디클로로메탄으로 희석 용해시키고, 아미노 실리카 겔 크로마토그래피 [디클로로메탄/아세트산에틸] 로 정제하여, 목적 화합물을 얻었다 (10.4 g).
Figure pct00175
실시예 2 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-{[(2R)-1-아세틸피롤리딘-2-일]메톡시}{[(2R,3R,4R,5R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-5-(하이드록시메틸)옥솔란-3-일]옥시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-벤조일-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스페이트 (식 (Rc-V) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 173]
Figure pct00176
(공정 2)
6-벤조일-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌의 트리에틸아민염 (260 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (2.7 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 4A (12.5 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하였다. 다른 용기에서, 실시예 1 에서 얻어진 화합물 (540 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (2.7 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 4A (25 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하고, 앞서 조제한 6-벤조일-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌의 트리에틸아민염의 아세토니트릴 용액을 첨가하였다. 0.4 mol/L 로 조제한 1-페닐이미다졸륨트리플레이트의 탈수 아세토니트릴 용액 (2.7 mL) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하였다. 계속해서, 1 mol/L 로 조제한 무수 아세트산의 탈수 아세토니트릴 용액 (0.45 mL) 을 첨가하고, 그 후 트리에틸아민 (55 ㎎) 을 첨가허여 30 분간 교반하였다. 계속해서, 크산탄하이드라이드 (74 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하고, 반응액을 여과함으로써 몰레큘러시브를 여과 제거하였다. 여과액을 0 ℃ 로 냉각시키고, 20 ％ 식염수 (2.7 mL) 를 첨가하고, 염산으로 pH 2.5 로 조정하고, 동 온도에서 밤새 교반을 실시하였다. 반응액을 분액하고, 얻어진 유기층에 20 ％ 식염수 (2.7 mL) 를 첨가하고, 트리에틸아민으로 pH 7 이 되도록 중화시켰다. 그 후, 분액에 의해 얻어진 유기층을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 [아세토니트릴/메탄올] 로 조 (粗) 정제하고, 농축 건고시켜, 목적 화합물을 얻었다. 반응시에 생성되는 인 원자 상의 디아스테레오머는 HPLC 측정의 결과, 98.5 : 1.5 였다.
Figure pct00177
31P-NMR 데이터는 역상 HPLC [10 mM 아세트산암모늄 수용액/아세토니트릴] 로 얻은 단리품을 사용하여 측정하였다.
실시예 3 :
2-(트리메틸실릴)에틸(2-{[(2-{9-[(5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-{[(2R)-1-아세틸피롤리딘-2-일]메톡시}-14-(6-벤조일-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2-옥소-2-술파닐-10-술파닐리덴옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-디하이드로-1H-푸린-1-일}에톡시)메틸]아미노}-2-옥소에틸)카바메이트 (식 (Rc-VI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 174]
Figure pct00178
(공정 3)
실시예 2 에서 얻어진 화합물 (320 ㎎) 을 탈수 피리딘 (50 mL) 으로 공비 탈수하여, 16 mL 의 피리딘 용액을 조제하고, -20 ℃ 로 냉각시켰다. 다른 용기에 2-클로로-2-옥소-1,3,2-디옥사포스포란 (171 ㎎) 을 칭량하고, -20 ℃ 로 냉각시켰다. 상기 피리딘 용액을 2-클로로-1,3,2-디옥사포스포란-2-옥사이드의 용기에 첨가하고, -20 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 고리화시에 발생하는 인 원자 상의 디아스테레오머비는 75 : 25 였다. 물 (43 ㎎) 을 첨가하고, 10 분간 동 온도에서 교반 후, 크산탄하이드라이드 (40 ㎎) 를 첨가하고, 실온까지 승온시키고, 1 시간 교반하였다. 얻어진 반응액을 5 ％ 중조수 (3 mL) 로 ??치하고, 아세트산에틸 (12 mL) 과 20 ％ 식염수 (3 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 수층을 아세트산에틸 (3 mL) 로 재추출하고, 1 번째의 분액으로 얻어진 유기층과 재추출하여 얻어진 유기층을 합치하고, 20 ％ 식염수 (1.5 mL) 와 5 ％ 중조수 (1 mL) 의 혼합액으로 세정하였다. 계속해서, 유기층을 농축 건고시키고, 메탄올 (30 mL) 을 첨가하고, 다시 농축 건고시켜, 목적 화합물을 얻었다.
Figure pct00179
31P-NMR 데이터는 역상 HPLC [10 mM 아세트산트리에틸암모늄 수용액/아세토니트릴] 로 얻은 단리품을 사용하여 측정하였다.
실시예 4 :
비스(N,N-디에틸에탄아미늄)(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2,10-디옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2,10-비스(티올레이트) (식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 175]
Figure pct00180
(공정 4)
실시예 2 에서 얻어진 화합물에 메탄올 (12 mL) 을 첨가한 메탄올 용액에 28 ％ 암모니아수 (4.5 mL) 를 첨가하고, 60 ℃ 에서 30 시간 교반하였다. 얻어진 반응액을 농축시키고, 잔류물을 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산트리에틸암모늄 수용액/아세토니트릴] 로 정제하여, 인 원자 상의 단일의 디아스테레오머 (Rp, Rp 체) 로서 목적 화합물을 84 ㎎ 얻었다. 또한 단리된 화합물의 HPLC 순도는 92.4 ％ 였다.
Figure pct00181
A-2 화합물 (IV) (A2 ＝ Bz-테트라아자벤조[cd]아줄렌기) 의 합성
상기 합성 스킴 A-1 에 사용하는 원료 화합물 (IV) 를, 이하의 스킴에 따라서, 합성하였다.
[합성 스킴 A-2]
[화학식 176]
Figure pct00182
실시예 5 :
6-벤조일-2-{5-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (IX) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 177]
Figure pct00183
(공정 1)
6-벤조일-2-{5-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (800 ㎎) 을 피리딘 (6 mL) 에 용해시키고 0 ℃ 로 냉각시켰다. 아인산디페닐 (1.31 g) 을 첨가하고, 냉각하 1 시간 교반하였다. 계속해서, 물 (3 mL) 을 첨가한 후에 트리에틸아민 (3 mL) 을 첨가하고, 실온하에서 2 시간 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄 (8 mL) 과 5 ％ 중조수 (2 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 5 ％ 중조수 (4 mL) 로 유기층을 2 회 세정하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 목적 화합물을 얻었다.
실시예 6 :
6-벤조일-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (IV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 178]
Figure pct00185
(공정 2)
실시예 5 에서 얻은 화합물의 용액을 0 ℃ 로 냉각시키고 디클로로아세트산 (12 mL) 을 첨가하고, 냉각하 24 시간의 교반을 실시하였다. 반응액을 실리카 겔 크로마토그래피 [아세토니트릴/메탄올] 로 정제하고, 농축에 의해 아세토니트릴 용액으로 조제하여, 목적 화합물을 얻었다 (NMR 에 의한 2 공정 통산 정량값 358 ㎎).
A-3 CDN2 의 합성
고리형 디뉴클레오티드 (CDN2) 를, 이하의 합성 스킴 A-3 에 따라서 합성하였다. 합성 스킴 A-3 에 있어서, A2 ＝ Bz-아데닌기, Q ＝ 티올기, PG1 ＝ TBS, PG2 ＝ DMTr, PG3 ＝ Teoc, PG6 ＝ Ac 이다.
[합성 스킴 A-3]
[화학식 179]
Figure pct00187
실시예 7 :
나트륨(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-{[(2R)-1-아세틸피롤리딘-2-일]메톡시}{[(2R,3R,4R,5R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-5-(하이드록시메틸)옥솔란-3-일]옥시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (식 (Rc-V) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 180]
Figure pct00188
(공정 1)
특허문헌 WO2015/185565 에 기재된 (2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-3-일수소포스포네이트 (400 ㎎) 를 탈수 아세토니트릴 (4 mL) 에 용해시키고, 트리에틸아민 (97 ㎎) 과 몰레큘러시브 4A (20 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하였다. 다른 용기에서, 실시예 1 에서 얻어진 화합물 (1.1 g) 을 탈수 아세토니트릴 (5.5 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 4A (25 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하고, 앞서 조제한 (2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-3-일수소포스포네이트의 트리에틸아민염의 아세토니트릴 용액을 첨가하였다. 0.4 mol/L 로 조제한 1-페닐이미다졸륨트리플레이트의 탈수 아세토니트릴 용액 (5.5 mL) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하였다. 계속해서, 1 mol/L 로 조제한 무수 아세트산의 탈수 아세토니트릴 용액 (1.14 mL) 을 첨가하고, 그 후 트리에틸아민 (139 ㎎) 을 첨가하여 30 분간 교반하였다. 계속해서, 크산탄하이드라이드 (154 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하고, 반응액을 여과함으로써 몰레큘러시브를 여과 제거하였다. 여과 제거된 몰레큘러시브를 탈수 아세토니트릴 (5 mL) 로 세정하고, 여과액과 세정액을 합치한 후에 0 ℃ 로 냉각시키고, 20 ％ 식염수 (6 mL) 를 첨가하고, 염산으로 pH 2.5 로 조정하고, 동 온도에서 밤새 교반을 실시하였다. 반응액을 분액하고, 얻어진 유기층에 20 ％ 식염수 (6 mL) 를 첨가하고, 트리에틸아민으로 pH 7 이 되도록 중화시켰다. 그 후, 분액에 의해 얻어진 유기층을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 [아세트산에틸/메탄올/0.4 ％ 트리에틸아민] 로 조정제하였다. 회수한 프랙션을 농축시키고, 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산암모늄 수용액/아세토니트릴] 로 정제하고, 아세토니트릴을 농축 제거하였다. 얻어진 수용액에 식염을 첨가하고, 테트라하이드로푸란으로 추출하고, 농축 건고에 의해 목적 화합물을 취득하였다 (776 ㎎). 반응시에 생성되는 인 원자 상의 디아스테레오머는 HPLC 측정의 결과, 98.5 : 1.5 였다.
Figure pct00189
실시예 8 :
나트륨(5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-{[(2R)-1-아세틸피롤리딘-2-일]메톡시}14-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2-옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-10-술파닐리덴옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3.2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2-티올레이트 (식 (Rc-VI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 181]
Figure pct00190
(공정 2)
실시예 7 에서 얻어진 화합물 (18 ㎎) 을 탈수 피리딘 (1 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 4A (3 ㎎) 를 첨가하였다. 고리화시에 발생하는 인 원자 상의 디아스테레오머비는 70 : 30 이었다. 계속해서, 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스포리난 2-옥사이드 (5.7 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하고, 몰레큘러시브를 여과 제거하였다. 여과액에 물 (10 ㎎) 을 첨가하고, 5 분간 교반 후, 크산탄하이드라이드 (2.6 ㎎) 를 첨가하여 30 분간 교반하였다. 반응액에 5 ％ 중조수 (2 mL) 를 첨가하여 반응을 정지시키고, 아세트산에틸을 첨가하여 분액 추출을 실시하였다. 유기층을 농축 건고시키고, 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산암모늄 수용액/아세토니트릴] 로 정제하고, 아세토니트릴을 농축 제거하였다. 얻어진 수용액에 식염을 첨가하고, 테트라하이드로푸란으로 추출하고, 농축 건고에 의해 단일의 인 상의 디아스테레오머로서 목적 화합물을 취득하였다 (4 ㎎).
Figure pct00191
실시예 9 :
이나트륨(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-아미노-9H-푸린-9-일)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2,10-디옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3.2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2-비스티올레이트 (식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 182]
Figure pct00192
(공정 3)
실시예 8 에서 얻어진 화합물 (1.6 ㎎) 을 MeOH (0.1 mL) 에 용해시키고, 28 ％ 암모니아수 (0.05 mL) 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 24 시간 교반하였다. 얻어진 반응액을 LC-MS 분석하여, 인 원자 상의 단일의 디아스테레오머 (Rp, Rp 체) 로서 목적 화합물이 생성되어 있는 것을 확인하였다.
A-4 화합물 (IV) (A2 ＝ Bz-아데닌기) 의 합성
상기 합성 스킴 A-3 에 사용하는 원료 화합물 (IV) 를, 이하의 스킴에 따라서, 합성하였다.
[합성 스킴 A-4]
[화학식 183]
Figure pct00194
실시예 10 :
N-벤조일-5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2'-데옥시-2'-플루오로-3'-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]아데노신 (식 (IX) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 184]
Figure pct00195
(공정 1)
시판되는 N-벤조일-5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2'-데옥시-2'-플루오로아데노신 (1 g) 을 피리딘 (7.5 mL) 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시켰다. 아인산디페닐 (1.73 g) 을 첨가하고, 냉각하 1 시간 교반하였다. 계속해서, 물 (3.7 mL) 을 첨가하고, 그 후 트리에틸아민 (3.7 mL) 을 첨가하고, 실온하 2 시간 교반하였다. 반응액을 5 mL 가 될 때까지 농축시켜, 목적 화합물을 얻었다.
실시예 11 :
N-벤조일-2'-데옥시-2'-플루오로-3'-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]아데노신 (식 (IV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 185]
Figure pct00197
(공정 2)
실시예 10 에서 얻어진 용액에 디클로로메탄 (10 mL) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시켰다. 냉각하, 디클로로아세트산을 pH 3 이 될 때까지 첨가하고, 24 시간 교반하였다. 반응액을 실리카 겔 크로마토그래피 [아세트산에틸/메탄올] 로 정제하고, 농축에 의해 아세토니트릴 용액으로 조제하고, 농염산을 사용하여 pH 2 이하로 조정하였다. pH 조정과 함께 석출된 백색 결정을 여과하고, 80 ％ 아세토니트릴 수용액으로 결정을 세정하고, 건조시켜 목적 화합물을 취득하였다 (수량 0.24 g, 수율 37 ％).
Figure pct00198
A-5 CDN1 의 합성 2
고리형 디뉴클레오티드 (CDN1) 를, 이하의 합성 스킴 A-5 에 따라서 합성하였다. 합성 스킴 A-5 에 있어서, A2 ＝ Teoc-테트라아자벤조[cd]아줄렌기, Q ＝ 티올기, PG1 ＝ TBS, PG2 ＝ DMTr, PG3 ＝ Teoc, PG6 ＝ TFAc 이고, (Rc-II) 로서, (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용하였다.
[합성 스킴 A-5]
[화학식 186]
Figure pct00199
실시예 A5-1 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-2'-O-[(1S,3aR)-테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴-1-일]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (Rc-III) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 187]
Figure pct00200
(공정 1)
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-(2,3,3-트리메틸부탄-2-일)-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (372.7 ㎎, 0.39 mmol), 몰레큘러시브 3A (80 ㎎) 의 디클로로메탄 (0.8 mL) 용액을 질소하 실온에서 2 시간 교반한 후, 0 ℃ 로 냉각시켜 트리에틸아민 (58.7 μL, 0.42 mmol) 을 첨가하고, 문헌으로 이미 알려진 (Tetrahedron Letter, 1998, 39, 2491-2494) (3aR)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴 (64.3 ㎎, 0.39 mmol) 의 디클로로메탄 (0.6 mL) 용액을 첨가하였다. 실온에서 1.5 시간 교반하여 목적 화합물의 디클로로메탄 용액을 얻었다.
실시예 A5-2 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-({(2R,3R,4R,5R)-5-{[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시]메틸}-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]옥솔란-3-일}옥시){[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]메톡시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-{[2-[트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (식 (Rc-V0) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 188]
Figure pct00201
(공정 2)
N,N-디에틸에탄아미늄 2-(트리메틸실릴)에틸 2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[옥사이드(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-6-카르복실레이트 (200 ㎎, 0.32 mmol) 의 아세토니트릴 (2.0 mL) 용액에 몰레큘러시브 3A (60 ㎎) 를 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 그 용액을 -10 ℃ 로 냉각 후, 트리에틸아민 (18.1 μL, 0.13 mmol) 을 첨가하고, 실시예 A5-1 에서 얻은 화합물의 디클로로메탄 용액을 적하하고, 0.2 mL 의 디클로로메탄으로 세정하였다. 0.8 mol/L 의 1-메틸벤조이미다졸륨트리플레이트의 아세토니트릴 용액 (809.4 μL, 0.65 mmol) 을 첨가하고, 1.5 시간 교반 후, 0.8 mol/L 의 1-메틸벤조이미다졸륨트리플레이트의 아세토니트릴 용액 (121.4 μL, 0.10 mmol) 을 추가하였다. 반응 종료를 확인 후, -10 ℃ 에서 트리에틸아민 (158.0 μL, 1.13 mmol), 1-(트리플루오로아세틸)이미다졸 (66.3 μL, 0.58 mmol) 을 첨가하고, 실온까지 승온시켰다. 약 30 분 교반 후, 크산탄하이드라이드 (63.2 ㎎, 0.42 mmol) 를 첨가하고, 실온에서 15 분 교반하였다. 반응액을 약 2.5 mL 까지 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (0.4 ％ 트리에틸아민 함유의 0 ∼ 12 ％ 메탄올아세토니트릴) 로 정제하여, 목적 화합물을 미황색 고체 (536.0 ㎎, 수율 90 ％) 로서 얻었다. 반응시에 생성되는 인 원자 상의 디아스테레오머는 HPLC 측정의 결과, 94.7 : 5.3 이었다.
Figure pct00202
실시예 A5-3 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-{[(2R,3R,4R,5R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-5-(하이드록시메틸)옥솔란-3-일]옥시}({2-[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]메톡시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (식 (Rc-V) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 189]
Figure pct00203
(공정 3)
실시예 A5-2 에서 얻은 화합물 (4.1 g, 2.25 mmol) 의 디클로로메탄 (100 mL) 용액에, 아세토니트릴 (15 mL), 에탄올 (4.1 g, 89.84 mmol) 을 실온에서 첨가하였다. 디클로로아세트산 (0.9 g, 6.74 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 15 시간 교반하였다. 트리에틸아민 (0.91 g, 8.98 mmol), 물 (50 mL) 을 첨가하고, 교반하였다. 수층을 폐기하고, 아세토니트릴 (22.5 mL), 에탄올 (6.2 g, 134.8 mmol), 물 (50 mL) 을 첨가하였다. 수층을 폐기하고, 감압하에서 약 15 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세토니트릴 (100 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 15 mL 까지 용매를 증류 제거하는 조작을 2 회 실시하여, 목적 화합물의 아세토니트릴 용액 (13.95 g) 을 얻었다.
실시예 A5-4 :
나트륨(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2-옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-10-술파닐리덴-14-(6-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-10-{[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]메톡시}옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2-티올레이트 (식 (Rc-VI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 190]
Figure pct00204
(공정 4)
피리딘 (42 mL), 디클로로메탄 (42 mL) 의 혼합 용액에 T3P 의 아세토니트릴 용액 (1.7 mol/L, 4.9 mL, 8.30 mmol) 을 첨가하고 -20 ℃ 로 냉각시켰다. 실시예 A5-3 에서 얻은 화합물의 아세토니트릴 용액 (13.67 g) 을 적하하고, -20 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 고리화시에 발생하는 인 원자 상의 디아스테레오머비는 85 : 15 였다. 크산탄하이드라이드 (0.62 g, 4.15 mmol) 를 첨가하고, 약 0 ℃ 까지 가온시키고, 3 시간 교반하였다. 5 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (22.5 mL), 아세트산에틸 (40 mL), 식염 (1.2 g) 을 첨가하고, 교반하였다. 수층을 폐기하고, 물 (22.5 mL), 탄산수소나트륨 (1.1 g), 식염 (2.4 g) 의 용액으로 세정하였다. 얻어진 유기층을 감압하에서 약 15 mL 까지 용매를 증류 제거하여, 목적 화합물의 피리딘 용액을 얻었다.
실시예 A5-5 :
비스(N,N-디에틸에탄아미늄)(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2,10-디옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-14-(6,7,8,9)-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2,10-비스(티올레이트) (식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 191]
Figure pct00205
(공정 5)
실시예 A5-4 에서 얻은 화합물의 피리딘 용액에 28 ％ 암모니아수 (35 mL) 를 첨가하고, 약 45 ℃ 에서 15 시간 교반하였다. 실온으로 냉각 후, 헵탄 (35 mL) 을 첨가하여 교반하였다. 유기층을 폐기하고, 얻어진 수층을 헵탄 (35 mL) 으로 세정하였다. 수층을 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산트리에틸아민 수용액/아세토니트릴] 로 정제하고, 얻어진 분획을 물로 희석시켰다. 이 용액에 대하여, 실리카 겔을 사용한 고상 추출을 실시하고, 0.1 ％ 트리에틸아민/아세토니트릴 용액으로 용출시키고, 얻어진 분획을 감압하에서 약 15 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세트산에틸 (100 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 15 mL 까지 용매를 증류 제거하는 조작을 2 회 반복하고, 아세트산에틸 (10 mL) 을 첨가하였다. 이 아세트산에틸 용액을 실온하에서 헵탄 (175 mL) 에 적하하여 30 분 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 고체를 여과 채취하고, 헵탄 (25 mL) 으로 세정하였다. 고체를 40 ℃ 에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물을 백색 분말 (1.9 g, 수율 55 ％, HPLC : ＞ 99 ％) 로서 얻었다.
A-6 화합물 (IV) (A2 ＝ Teoc-테트라아자벤조[cd]아줄렌기) 의 합성
상기 합성 스킴 A-5 에 사용하는 원료 화합물 (IV) 를, 이하의 스킴에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 A-6]
[화학식 192]
Figure pct00206
참고예 A6-1 :
2-{2-데옥시-2-플루오로-5-О-[(4-메톡시페닐)(디페닐)메틸]-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌·염산염 (식 (VIII') 의 화합물의 염산염에 상당) 의 합성
[화학식 193]
Figure pct00207
(공정 1)
실시예 25-2 에서 얻어진 화합물의 p-톨루엔술폰산염 (34.2 g, 71.2 mmol) 의 피리딘 (171 mL) 용액에, 실온에서 4-메톡시트리틸클로라이드 (26.4 g, 85.4 mmol) 를 첨가하였다. 실온에서 약 24 시간 교반한 후, 5 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (171 mL) 을 적하하였다. 톨루엔 (684 mL) 을 첨가하고, 교반 후에 수층을 폐기하였다. 얻어진 유기층을 10 ％ 식염수 (171 mL) 로 세정하여, 유기층을 얻었다. 피리딘염산염 (8.2 g, 71.2 mmol) 을 첨가하고, 1 시간 교반하였다. 추가로 피리딘염산염 (12.3 g, 106.8 mmol) 을 첨가하고 약 23 시간 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 톨루엔 (103 mL) 으로 결정을 세정하여, 목적 화합물의 염산염의 습결정을 취득하였다.
실시예 A6-1 :
2-메틸프로판-2-아미늄 2-{2-데옥시-2-플루오로-5-O-[(4-메톡시페닐)(디페닐)메틸]-3-O-[옥사이드(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-6-카르복실레이트 (식 (IX') 의 화합물의 tert-부틸아민염에 상당) 의 합성
[화학식 194]
Figure pct00208
(공정 2)
참고예 A6-1 에서 얻은 염산염의 습결정에 아세트산에틸 (342 mL), 5 ％ 탄산수소나트륨 (342 mL) 을 첨가하여 실온에서 교반하였다. 수층을 폐기하고, 얻어진 유기층을 10 ％ 식염수 (171 mL) 로 세정하였다. 유기층에 아세토니트릴 (171 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 170 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세토니트릴 (342 mL) 을 추가하고, 감압하에서 약 170 mL 까지 용매를 증류 제거하고, 트리에틸아민 (61.2 g, 605.2 mmol) 을 첨가하였다. 아인산디페닐 (43.4 g, 185.1 mmol) 을 적하하고, 실온에서 47 시간 교반하였다. 물 (34.2 mL) 을 첨가 후, 약 5 시간 교반하였다. 아세트산에틸 (513 mL), 23 ％ 탄산수소칼륨 (239 mL) 을 첨가하고, 교반한 후, 수층을 폐기하였다. 유기층을 20 ％ 탄산수소칼륨 (239 mL) 으로 2 회 세정하고, 얻어진 유기층을 감압하, 약 170 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세토니트릴 (342 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 170 mL 까지 용매를 증류 제거하는 조작을 2 회 실시 후, 아세토니트릴 (342 mL) 을 첨가하였다. tert-부틸아민 (2.3 mL, 21.4 mmol) 을 첨가 후, 목적 화합물의 tert-부틸아민염의 종결정 (34.2 ㎎) 을 첨가하여 밤새 교반하였다. 추가로 tert-부틸아민 (42.8 mL, 405.8 mmol) 을 3 회로 나눠 적하하였다 (5.3 mL, 15.0 mL, 22.5 mL). 실온에서 교반한 후, -1 ℃ 로 냉각시켰다. -1 ℃ 에서 약 6 시간 교반하여 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 아세토니트릴 (102 mL) 로 세정하였다. 결정을 40 ℃ 에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물의 tert-부틸아민염을 백색 결정 (35.7 g, 수율 70 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00209
실시예 A6-2 :
칼륨 2-(트리메틸실릴)에틸 2-{2-데옥시-2-플루오로-5-O-[(4-메톡시페닐)(디페닐)메틸]-3-O-[옥사이드(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-6-카르복실레이트 (식 (IX) 의 화합물의 칼륨염에 상당) 의 합성
[화학식 195]
Figure pct00210
(공정 3)
4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠 (59.2 g, 209.0 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (36.0 g, 278.6 mmol) 의 아세토니트릴 (125 mL) 용액을 60 ℃ 로 가온시키고, 실시예 A6-1 에서 얻은 tert-부틸아민염 (25.0 g, 34.8 mmol) 을 3 회로 나눠 첨가하였다. 60 ℃ 에서 약 2 일간 교반한 후, 실온까지 냉각시키고, 이소프로필아민 (10.3 g, 174.2 mmol) 을 적하 후, 2.5 시간 교반하였다. 아세트산이소프로필 (250 mL), 10 ％ 염화암모늄 수용액 (250 mL) 을 첨가하여 교반 후, 수층을 폐기하였다. 유기층을 10 ％ 염화암모늄 수용액 (250 mL) 으로 세정 후, 10 ％ 탄산칼륨 수용액 (500 mL) 으로 2 회 세정하였다. 또한 10 ％ 염화칼륨 수용액 (250 mL) 으로 세정한 유기층을 감압하, 약 125 mL 까지 용매를 증류 제거하여, 목적 화합물의 칼륨염의 아세토니트릴 용액 (123.9 g) 을 얻었다.
실시예 A6-3 :
N,N-디에틸에탄아미늄 2-(트리메틸실릴)에틸 2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[옥사이드(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-6-카르복실레이트 (식 (IV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 196]
Figure pct00211
(공정 4)
실시예 A6-2 에서 얻은 칼륨염의 아세토니트릴 용액 (121.2 g) 에 디클로로메탄 (417 mL), 메탄올 (55.4 mL) 을 첨가 후, 실온에서 디클로로아세트산 (22.0 g, 170.7 mmol) 을 적하하였다. 약 27 시간 교반 후, 트리에틸아민 (20.7 g, 204.8 mmol) 을 적하하여 목적 화합물의 용액 (658.1 g) 을 얻었다. 그 목적 화합물의 용액 (26.9 g) 을 감압하, 약 5 mL 까지 용매를 증류 제거하고, 아세토니트릴 (3 mL), 물 (10 mL), n-헵탄 (10 mL) 을 첨가하고, 교반 후에 수층을 얻었다. 수층을 n-헵탄 (10 mL) 으로 세정하고, 디클로로메탄 (20 mL) 을 첨가 후, 트리에틸아민 (97 μL) 으로 pH 를 8.5 로 조정하였다. 트리에틸아민염산염 (500 ㎎) 을 첨가하고, 교반 후에 유기층을 얻었다. 유기층에 물 (10 mL), 트리에틸아민염산염 (500 ㎎) 을 첨가하고, 교반 후에 수층을 폐기하였다. 얻어진 유기층을 감압하, 약 5 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세토니트릴 (10 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 5 mL 까지 용매를 증류 제거하는 조작을 2 회 실시하여 목적 화합물의 트리에틸아민염의 아세토니트릴 용액을 얻었다 (632.6 ㎎, 수율 74 ％).
Figure pct00212
A-7 CDN-링커의 합성
CDN-링커를, 이하의 스킴에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 A-7]
[화학식 197]
Figure pct00213
참고예 A7-1 :
N-[4-(11,12-디데하이드로디벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부타노일]글리실글리실-L-페닐알라닌 (식 (XI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 198]
Figure pct00214
(공정 1)
1-{[4-(11,12-디데하이드로디벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부타노일]옥시}피롤리딘-2,5-디온 (5.0 g, 12.4 mmol), 글리실글리실-L-페닐알라닌 (4.2 g, 14.9 mmol) 의 아세토니트릴 (50 mL), 물 (50 mL) 현탁액에 실온에서 트리에틸아민 (2.3 mL, 16.1 mmol) 을 첨가하고, 약 4 시간 교반하였다. 1 mol/L 의 염산 수용액 (16.2 mL) 을 첨가 후, 목적 화합물의 종결정 (4.6 ㎎) 을 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반하고, 얻어진 현탁액에 물 (100 mL) 을 2 시간에 걸쳐서 적하하였다. 40 ℃ 에서 약 1.5 시간 교반 후, 1 mol/L 의 염산 수용액 (16.2 mL) 을 첨가하였다. 30 분 교반 후, 실온으로 냉각시키고, 추가로 2 시간 교반하였다. 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 아세토니트릴/물 (1/3, 50 mL) 로 세정하였다. 결정을 30 ℃ 에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (6.7 g, 수율 95 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00215
실시예 A7-1 :
N-[(2-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-16-하이드록시-2,10-디옥소-2,10-비스(술파닐)-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-디하이드로-1H-푸린-1-일}에톡시)메틸]글리신아미드 (식 (Rp, Rp-X) 의 화합물에 상당) 의 합성 1
[화학식 199]
Figure pct00216
(공정 2)
실시예 A5-4 에서 얻은 화합물 (1 g, 0.76 mmol) 의 디메틸술폭시드 (3 mL) 용액에 실온하에서 70 ％ 테트라부틸암모늄플루오리드 수용액 (3 mL) 을 첨가하고, 30 ℃ 에서 2 일간 교반하였다. 아세토니트릴 (12 mL), 염화칼슘 (0.59 g, 5.32 mmol) 을 첨가하여 실온에서 14 시간 교반하였다. 트리에틸아민 (1 mL), 물 (2 mL) 을 첨가하고, 실온에서 2 시간 교반 후, 5 mol/L 의 염산수 (1.2 mL) 를 6 회로 나눠 첨가하였다. 트리에틸아민 (60 μL) 을 첨가하고, 불용물을 여과 분리하였다. 얻어진 여과액을 감압하에서 약 10 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세토니트릴 (20 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 10 mL 까지 용매를 증류 제거하는 조작을 2 회 반복한 후, 아세토니트릴 (50 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 10 mL 까지 용매를 증류 제거하는 조작을 2 회 반복하였다. 얻어진 용액에 5 mol/L 의 염산수 (165 μL) 를 첨가하고, 아세토니트릴 (50 mL) 을 첨가 후, 0 ℃ 까지 냉각시켜 2 시간 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 고체를 여과 채취하고, 아세토니트릴 (5 mL) 로 세정하였다. 고체를 25 ℃ 에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (0.46 g, 수율 71 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00217
실시예 A7-2 :
N-[(2-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-16-하이드록시-2,10-디옥소-2,10-비스(술파닐)-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-디하이드로-1H-푸린-1-일}에톡시)메틸]글리신아미드 (식 (Rp, Rp-X) 의 화합물에 상당) 의 합성 2
[화학식 200]
Figure pct00218
(공정 2')
실시예 A5-4 에서 얻은 화합물 (0.8 g, 0.60 mmol) 의 디메틸술폭시드 (2.4 mL) 용액에 실온하에서 70 ％ 테트라부틸암모늄플루오리드 수용액 (2.4 mL) 을 첨가하고, 실온에서 4 일간 교반하였다. 아세토니트릴 (9.6 mL), 탄산칼슘 (0.67 g, 6.65 mmol), DOWEX 50Wx8 (2.24 g, 2.42 mmol) 을 첨가하여 실온에서 1.5 시간 교반하였다. 반응액의 감압 탈기 조작을 실시한 후, 트리에틸아민 (0.8 mL) 을 첨가하여 1 시간 교반하였다. 불용물을 여과 분리하고, 아세토니트릴 (8.0 mL) 로 불용물을 세정하였다. 얻어진 여과액을 감압하에서 약 4 mL 까지 용매를 증류 제거하였다. 아세토니트릴을 첨가하여 8 mL 로 조정하고, 용액 (8 mL) 에 5 mol/L 의 염산수 (280 μL) 를 첨가하고, 아세토니트릴 (9.6 mL) 을 첨가 후, 1 시간 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 고체를 여과 채취하고, 아세토니트릴 (4.0 mL) 로 세정하였다. 고체를 실온에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (0.48 g, 수율 91 ％) 으로서 얻었다.
실시예 A7-3 :
비스(N,N-디에틸에탄아미늄)N-[4-(11,12-디데하이드로디벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부타노일]글리실글리실-L-페닐알라닐-N-[(2-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-16-하이드록시-2,10-디옥소-2,10-디술파이드-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6,-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-디하이드로-1H-푸린-1-일}에톡시)메틸]글리신아미드 (식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 201]
Figure pct00219
(공정 3)
참고예 A7-1 에서 얻은 화합물 (132.6 ㎎, 0.23 mmol) 의 아세토니트릴 (1.8 mL), 물 (0.44 mL) 의 현탁액에 트리에틸아민 (52.6 ㎎, 0.52 mmol) 을 첨가 후, 실시예 A7-2 에서 얻은 화합물 (222.0 ㎎, 0.26 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드 (93.5 ㎎, 0.34 mmol) 를 첨가하고, 실온에서 18 시간 교반하였다. 반응액에 아세토니트릴 (2.2 mL), 시클로펜틸메틸에테르 (2.2 mL), 13.8 ％ 황산나트륨 수용액 (3.3 mL) 을 첨가하고, 교반하였다. 수층을 폐기하고, 얻어진 유기층을 감압하, 용매를 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적 화합물을 백색 고체로서 얻었다 (222 ㎎, 수율 59 ％).
Figure pct00220
실시예 A7-4 :
이칼륨 N-[4-(11,12-디데하이드로디벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부타노일]글리실글리실-L-페닐알라닐-N-[(2-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-16-하이드록시-2,10-디옥소-2,10-디술파이드-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6,-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-디하이드로-1H-푸린-1-일}에톡시)메틸]글리신아미드 (식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 202]
Figure pct00221
(공정 3')
참고예 A7-1 에서 얻어진 화합물 (177.3 ㎎, 0.31 mmol) 의 아세토니트릴 (3.9 mL), 물 (0.78 mL) 의 현탁액에 트리에틸아민 (70.8 ㎎, 0.70 mmol) 을 첨가 후, 실시예 A7-2 에서 얻은 화합물 (300.0 ㎎, 0.35 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드 (125.1 ㎎, 0.45 mmol) 를 첨가하고, 실온에서 5.5 시간 교반하였다. 반응액에 아세토니트릴 (3.9 mL), 시클로펜틸메틸에테르 (2.0 mL), 13.8 ％ 황산나트륨 수용액 (5.8 mL) 을 첨가하고, 교반 후에 수층을 폐기하여 유기층을 얻었다. 2-에틸헥산산칼륨 (380.4 ㎎, 2.09 mmol) 의 2-프로판올 (19.5 mL) 용액에 유기층을 실온에서 적하 후, 1 시간 교반하였다. 시클로펜틸메틸에테르 (7.8 mL) 를 첨가하고, 약 15 시간 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 고체를 여과 채취하고, 2-프로판올/아세토니트릴/시클로펜틸메틸에테르 (5/2/2, 3 mL) 로 세정하였다. 감압하, 실온에서 약 8 시간 건조시켜, 목적 화합물을 백색 고체로서 얻었다 (384.6 ㎎, 수율 74 ％).
Figure pct00222
실시예 A7-5 :
이나트륨 N-[4-(11,12-디데하이드로디벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부타노일]글리실글리실-L-페닐알라닐-N-[(2-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-16-하이드록시-2,10-디옥소-2,10-디술파이드-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6,-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-디하이드로-1H-푸린-1-일}에톡시)메틸]글리신아미드 (식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 203]
Figure pct00223
(공정 3")
참고예 A7-1 에서 얻어진 화합물 (18.1 ㎎, 0.03 mmol) 의 아세토니트릴 (0.5 mL) 의 현탁액에, 트리에틸아민 (12.1 μL, 0.09 mmol), 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드 (10.4 ㎎, 0.04 mmol) 를 실온에서 첨가하였다. 실시예 A7-2 에서 얻은 화합물 (25.0 ㎎, 0.03 mmol) 을 실온에서 첨가하고, 2 시간 교반하였다. 반응액에 감압하에서 농축시키고, 얻어진 잔류물에 아세트산에틸 (0.75 mL), 5 ％ 탄산나트륨 수용액 (0.25 mL) 을 첨가하였다. 2 층 용액으로부터 오일 성분을 분리하고, 오일 성분에 아세토니트릴 (1 mL) 을 첨가하여 실온에서 6 시간 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 상청 성분을 제거하여, 고체를 얻었다. 고체를 감압하에서 5 시간 건조시켜, 목적 화합물을 백색 고체로서 얻었다 (38.2 ㎎, 수율 91 ％).
A-8 CDN1 의 합성 3
고리형 디뉴클레오티드 (CDN1) 를, 이하의 합성 스킴 A-8 에 따라서 합성하였다. 합성 스킴 A-8 에 있어서, A2 ＝ Teoc-테트라아자벤조[cd]아줄렌기, Q ＝ 티올기, PG1 ＝ TBS, PG2 ＝ DMTr, PG3 ＝ Teoc, PG6 ＝ TFAc 이고, (Rc-II) 로서, (3aR)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용하였다.
[합성 스킴 A-8]
[화학식 204]
Figure pct00225
이하의 실시예 A8-1 ∼ A8-4 에 있어서, 분리 채취 HPLC 는 Agilent Preparative HPLC System (Agilent Technology 제조) 을 사용하여 실시하였다. 분리 채취 칼럼은 YMC-Actus Triart C18 (250 * 20 ㎜ I.D. S-5 ㎛, 12 ㎚) 을 사용하였다.
각종 스펙트럼 데이터의 측정에는 이하의 기기를 사용하였다. 매스 스펙트럼은 Shimadzu LCMS-2020 (시마즈 제작소 제조) 을 사용하여 측정하였다. LC/MS 의 측정은, 이하의 조건에서 실시하였다 [칼럼 : XBridge C18, 3.5 ㎛, 150 × 4.6 ㎜ (Waters 제조), 이동상 : 10 mM 아세트산암모늄 (혹은 아세트산트리에틸아민)/아세토니트릴].
실시예 A8-1 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-2'-O-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴-1-일]-1-(2-{[(N-{[2-[트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (Rc-III) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 205]
Figure pct00226
(공정 1)
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (1.00 g) 에 탈수 디클로로메탄 (14 mL) 과 몰레큘러시브 3A (200 ㎎) 를 첨가하여 2 시간 교반하였다. 그 후 반응계를 -10 ℃ 로 냉각시키고, 트리에틸아민 (0.58 mL) 을 첨가하였다. 상기 용액에 문헌으로 이미 알려진 (Angewandte Chemie International Edition, 2009, 48, 496-499) (3aR)-1-클로로-3,3-디메틸테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴 (0.504 g) 의 탈수 디클로로메탄 (6 mL) 용액을 적하하고, 실온에서 1 시간 교반한 후, 반응액을 농축시켰다. 농축된 미정제 생성물을 디클로로메탄으로 희석 용해시키고, 아미노 실리카 겔 크로마토그래피 [디클로로메탄/아세트산에틸] 로 정제하여, 목적 화합물을 얻었다 (1.06 g).
실시예 A8-2 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-({(2R,3R,4R,5R)-5-{[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시]메틸}-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]옥솔란-3-일}옥시)({2-[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]프로판-2-일}옥시)포스포로티오일]옥시}메틸)-4-플루오로-5-(6-{[2-[트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-3-일포스포네이트 (식 (Rc-V0) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 206]
Figure pct00228
(공정 2)
2-(트리메틸실릴)에틸-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌의 트리에틸아민염 (250 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (2.5 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 3A (75 ㎎) 를 첨가하고, 1 시간 교반하였다. 다른 용기에, 실시예 A8-1 에서 얻은 화합물 (497 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (2.5 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 3A (50 ㎎) 를 첨가하고, 1 시간 교반한 후, -10 ℃ 로 식힌 앞서 조제한 2-(트리메틸실릴)에틸-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌의 트리에틸아민염의 아세토니트릴 용액에 첨가하였다. 0.8 mol/L 로 조제한 1-메틸벤조이미다졸트리플레이트의 탈수 아세토니트릴 용액 (1.01 mL) 을 첨가하고, -10 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 계속해서, 트리에틸아민 (164 ㎎) 을 첨가하고, 그 후 1-트리플루오로아세틸이미다졸 (119 ㎎) 을 첨가하여 1 시간 교반하였다. 계속해서, 크산탄하이드라이드 (58 ㎎) 를 첨가하고, 1 시간 교반하고, 반응액을 여과함으로써 몰레큘러시브를 여과 제거하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 [메탄올/아세토니트릴 (0.4 ％ 트리에틸아민)] 로 정제하여, 목적 화합물을 얻었다. 반응시에 생성되는 인 원자 상의 디아스테레오머는 HPLC 측정의 결과, ＞ 99 : 1 이었다.
실시예 A8-3 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-{[(2R,3R,4R,5R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-5-(하이드록시메틸)옥솔란-3-일]옥시}({2-[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]프로판-2-일}옥시)포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (식 (Rc-V) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 207]
Figure pct00230
(공정 3)
실시예 A8-2 에서 얻은 화합물 (180 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (0.54 mL) 과 디클로로메탄 (3.6 mL) 에 용해시키고, 에탄올 (0.23 mL) 과 디클로로아세트산 (38.0 ㎎) 을 첨가하고, 실온하 밤새 교반을 실시하였다. 계속해서, 트리에틸아민 (39.7 ㎎) 을 첨가하여 5 분간 교반한 후, 물 (1.8 mL) 을 첨가하여 분액하였다. 유기층에 물 (1.8 mL) 과 아세토니트릴 (0.54 mL) 과 에탄올 (0.23 mL) 을 첨가하여 다시 분액하였다. 계속해서, 유기층을 농축 건고시킨 후, 아세토니트릴 (4 mL) 을 첨가하고, 다시 농축 건고시켜, 목적 화합물을 얻었다.
실시예 A8-4 :
비스(N,N-디에틸에탄아미늄)(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2,10-디옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2,10-비스(티올레이트) (식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 208]
Figure pct00232
(공정 4)
실시예 A8-3 에서 얻은 미정제 생성물에 탈수 아세토니트릴 (0.54 mL) 을 첨가하고, -15 ℃ 로 냉각시켰다. 다른 용기에 탈수 피리딘 (1.53 mL) 과 디클로로메탄 (1.53 mL) 과 프로필포스폰산 무수물의 50 ％ 아세토니트릴 용액 (176 μL) 을 첨가하고, -15 ℃ 로 냉각시켰다. 상기 아세토니트릴 용액을 프로필포스폰산 무수물 용액의 용기에 첨가하고, -15 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 그 후, 크산탄하이드라이드 (23 ㎎) 를 첨가하고, 0 ℃ 까지 승온시키고, 1 시간 교반하였다. 얻어진 반응액에 중조 (43 ㎎) 와 식염 (43 ㎎) 의 물 (0.8 mL) 용액과 아세트산에틸 (1.6 mL) 을 첨가하여 분액하였다. 유기층을 중조 (43 ㎎) 와 식염 (43 ㎎) 의 물 (0.8 mL) 용액으로 세정하였다. 계속해서, 유기층을 농축 건고시켜, 나트륨(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2-옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-10-술파닐리덴-14-(6-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2 일)-10-({2-[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]프로판-2-일}옥시)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2-티올레이트 (식 (VI) 의 화합물에 상당) 를 얻었다. 얻어진 화합물에, 피리딘 (0.48 mL) 과 28 ％ 암모니아수 (1.01 mL) 를 첨가하고, 53 ℃ 에서 15 시간 교반하였다. 얻어진 반응액을 n-헵탄으로 2 회 세정한 후, 수층을 농축시키고, 잔류물을 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산트리에틸아민 수용액/아세토니트릴] 로 정제하여, 인 원자 상의 단일의 디아스테레오머 (Rp, Rp 체) 로서 목적 화합물을 66.1 ㎎ 얻었다. 또한 단리된 화합물의 HPLC 순도는 99.8 ％ 였다.
Figure pct00233
A-9 CDN3 의 합성
고리형 디뉴클레오티드 (CDN3) 를, 이하의 합성 스킴 A-9 에 따라서 합성하였다. 합성 스킴 A-9 에 있어서, A2 ＝ Teoc-테트라아자벤조[cd]아줄렌기, Q ＝ 하이드록시기, PG1 ＝ TBS, PG3 ＝ Teoc, PG6 ＝ TFAc 이다.
[합성 스킴 A-9]
[화학식 209]
Figure pct00234
이하의 실시예 A9-1 에 있어서, 분리 채취 칼럼은 YMC-Actus Triart C18 (250 * 20 ㎜ I.D. S-5 ㎛, 12 ㎚) 을 사용하였다.
각종 스펙트럼 데이터의 측정에는 이하의 기기를 사용하였다. 매스 스펙트럼은 Shimadzu LCMS-2020 (시마즈 제작소 제조) 을 사용하여 측정하였다. LC/MS 의 측정은, 이하의 조건에서 실시하였다 [칼럼 : XBridge C18, 3.5 ㎛, 150 × 4.6 ㎜ (Waters 제조), 이동상 : 10 mM 아세트산암모늄 (혹은 아세트산트리에틸아민)/아세토니트릴].
실시예 A9-1 :
비스(N,N-디에틸에탄아미늄)(5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2,10-디옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-10-술파이드-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2-올레이트 (식 (Rp-VII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 210]
Figure pct00235
(공정 1)
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(R)-{[(2R)-1-아세틸피롤리딘-2-일]메톡시}{[(2R,3R,4R,5R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-5-(하이드록시메틸)옥솔란-3-일]옥시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-벤조일-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (170 ㎎) 의 탈수 피리딘 용액 (1.7 mL) 에 탈수 아세토니트릴 (0.54 mL) 을 첨가하고, -15 ℃ 로 냉각시켰다. 다른 용기에 탈수 디클로로메탄 (1.7 mL) 과 프로필포스폰산 무수물의 50 ％ 아세토니트릴 용액 (192 μL) 을 첨가하고, -15 ℃ 로 냉각시켰다. 상기 탈수 피리딘-아세토니트릴 용액을 프로필포스폰산 무수물 용액의 용기에 첨가하고, -15 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 그 후, 요오드 (85 ㎎) 를 첨가하고, 실온까지 승온시키고, 1 시간 교반하였다. 얻어진 반응액에 물 (0.5 mL) 을 첨가하여 10 분간 교반하고, 아황산나트륨 포화 용액을 첨가하여 요오드를 ??치한 후, 아세트산에틸 (1.8 mL) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 20 ％ 식염수 (1.0 mL) 로 세정하였다. 계속해서, 유기층을 농축 건고시키고, 피리딘 (0.6 mL) 과 28 ％ 암모니아수 (1.26 mL) 를 첨가하고, 53 ℃ 에서 15 시간 교반하였다. 얻어진 반응액을 n-헵탄으로 2 회 세정한 후, 수층을 농축시키고, 잔류물을 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산트리에틸아민 수용액/아세토니트릴] 로 정제하여, 인 원자 상의 단일의 디아스테레오머 (Rp 체) 로서 목적 화합물을 52 ㎎ 얻었다. 또한 단리된 화합물의 HPLC 순도는 98.7 ％ 였다.
Figure pct00236
A-10 CDN4 의 합성
고리형 디뉴클레오티드 (CDN4) 를, 이하의 합성 스킴 A-10 에 따라서 합성하였다. 합성 스킴 A-10 에 있어서, A2 ＝ Teoc-테트라아자벤조[cd]아줄렌기, Q ＝ 티올기, PG1 ＝ TBS, PG2 ＝ DMTr, PG3 ＝ Teoc, PG6 ＝ TFAc 이고, (Sc-II) 로서, (3aS)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴을 사용하였다.
[합성 스킴 A-10]
[화학식 211]
Figure pct00237
이하의 실시예 A10-1 ∼ A10-4 에 있어서, 분리 채취 칼럼은 YMC-Actus Triart C18 (250 * 20 ㎜ I.D. S-5 ㎛, 12 ㎚) 을 사용하였다.
각종 스펙트럼 데이터의 측정에는 이하의 기기를 사용하였다. LC/MS 의 측정은, 이하의 조건에서 실시하였다 [칼럼 : XBridge C18, 3.5 ㎛, 150 × 4.6 ㎜ (Waters 제조), 이동상 : 10 mM 아세트산암모늄 (혹은 아세트산트리에틸아민)/아세토니트릴].
실시예 A10-1 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-2'-O-[(1R,3aS)-테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴-1-일]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (Sc-III) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 212]
Figure pct00238
(공정 1)
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (3.00 g) 에 탈수 디클로로메탄 (42 mL) 과 몰레큘러시브 3A (600 ㎎) 를 첨가하여 2 시간 교반하였다. 그 후 반응계를 -10 ℃ 로 냉각시키고, 트리에틸아민 (0.575 mL) 을 첨가하였다. 상기 용액에 문헌으로 이미 알려진 (Tetrahedron Letter, 1998, 39, 2491-2494) (3aS)-1-클로로테트라하이드로-1H,3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자포스폴의 탈수 디클로로메탄 (9 mL) 용액을 적하하고, 실온에서 1 시간 교반한 후, 반응액을 농축시켰다. 농축된 미정제 생성물을 디클로로메탄으로 희석 용해시키고, 아미노 실리카 겔 크로마토그래피 [디클로로메탄/아세트산에틸] 로 정제하여, 목적 화합물을 얻었다 (3.37 g).
Figure pct00239
실시예 A10-2 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(S)-({(2R,3R,4R,5R)-5-{[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시]메틸}-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]옥솔란-3-일}옥시){[(2S)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]메톡시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-{[2-[트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (식 (Sc-V0) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 213]
Figure pct00240
(공정 2)
2-(트리메틸실릴)에틸-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌의 트리에틸아민염 (200 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (1.0 mL) 에 용해시키고, 몰레큘러시브 3A (60 ㎎) 를 첨가하고, 1 시간 교반하였다. 다른 용기에, 실시예 A10-1 에서 얻은 화합물 (388 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (1.0 mL) 로 용해시키고, 몰레큘러시브 3A (40 ㎎) 를 첨가하고, 1 시간 교반한 후, -10 ℃ 로 식힌 상기 2-(트리메틸실릴)에틸-2-{2-데옥시-2-플루오로-3-O-[하이드록시(옥소)-λ5-포스파닐]-β-D-리보푸라노실}-2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌의 트리에틸아민염의 아세토니트릴 용액에 첨가하였다. 0.4 mol/L 로 조제한 N-페닐이미다졸륨트리플레이트의 탈수 아세토니트릴 용액 (1.21 mL) 을 첨가하고, -10 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 계속해서, 트리에틸아민 (131 ㎎) 을 첨가하고, 그 후 1-트리플루오로아세틸이미다졸 (96 ㎎) 을 첨가하여 30 분간 교반하였다. 계속해서, 크산탄하이드라이드 (58 ㎎) 를 첨가하고, 30 분간 교반하고, 반응액을 여과함으로써 몰레큘러시브를 여과 제거하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 [메탄올/아세토니트릴 (0.4 ％ 트리에틸아민)] 로 정제하고, 농축 건고시켜, 목적 화합물을 얻었다. 반응시에 생성되는 인 원자 상의 디아스테레오머는 HPLC 측정의 결과, 78.6 : 21.3 이고, 취득된 목적물의 디아스테레오머 선택성은 84.7 : 15.3 이었다.
Figure pct00241
실시예 A10-3 :
N,N-디에틸에탄아미늄(2R,3R,4R,5R)-2-({[(S)-{[(2R,3R,4R,5R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-[1-(2,2-디메틸-6,9-디옥소-5,12-디옥사-7,10-디아자-2-실라테트라데칸-14-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-5-(하이드록시메틸)옥솔란-3-일]옥시}{[(2S)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]메톡시}포스포로티오일]옥시}메틸)-5-(6-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)-4-플루오로옥솔란-3-일포스포네이트 (식 (Sc-V) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 214]
Figure pct00242
(공정 3)
실시예 A10-2 에서 얻은 화합물 (180 ㎎) 을 탈수 아세토니트릴 (0.54 mL) 과 디클로로메탄 (3.6 mL) 에 용해시키고, 에탄올 (0.23 mL) 과 디클로로아세트산 (38.0 ㎎) 을 첨가하고, 실온하 밤새 교반을 실시하였다. 계속해서, 트리에틸아민 (39.7 ㎎) 을 첨가하여 5 분간 교반한 후, 물 (1.8 mL) 을 첨가하여 분액하였다. 유기층에 물 (1.8 mL) 과 아세토니트릴 (0.54 mL) 과 에탄올 (0.23 mL) 을 첨가하여 다시 분액하였다. 계속해서, 유기층을 농축 건고시키고, 아세토니트릴 (4 mL) 을 첨가하고, 다시 농축 건고시켜, 목적 화합물을 얻었다.
Figure pct00243
실시예 A10-4 :
비스(N,N-디에틸에탄아미늄)(2R,5R,7R,8R,10S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2,10-디옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-[트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-14-(6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2-일)옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2,10-비스(티올레이트) (식 (Rp, Sp-VII') 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 215]
Figure pct00244
(공정 4)
실시예 A10-3 에서 얻은 미정제 생성물에 탈수 아세토니트릴 (0.54 mL) 을 첨가하고, -15 ℃ 로 냉각시켰다. 다른 용기에 탈수 피리딘 (1.53 mL) 과 디클로로메탄 (1.53 mL) 과 프로필포스폰산 무수물의 50 ％ 아세토니트릴 용액 (172 μL) 을 첨가하고, -15 ℃ 로 냉각시켰다. 상기 실시예 A10-3 의 화합물의 아세토니트릴 용액을 프로필포스폰산 무수물 용액의 용기에 첨가하고, -15 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 그 후, 크산탄하이드라이드 (23 ㎎) 를 첨가하고, 0 ℃ 까지 승온시키고, 밤새 교반하였다. 얻어진 반응액에 중조 (43 ㎎) 와 식염 (43 ㎎) 의 물 (0.8 mL) 용액과 아세트산에틸 (1.6 mL) 을 첨가하여 분액하였다. 유기층을 중조 (43 ㎎) 와 식염 (43 ㎎) 의 물 (0.8 mL) 용액으로 세정하였다. 계속해서, 유기층을 농축 건고시켜, 나트륨(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-15-플루오로-2-옥소-7-[6-옥소-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)-1,6-디하이드로-9H-푸린-9-일]-10-술파닐리덴-14-(6-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-2 일)-10-{[(2R)-1-(트리플루오로아세틸)피롤리딘-2-일]메톡시}옥타하이드로-2H,10H,12H-5,8-메타노-2λ5,10λ5-푸로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사디포스파시클로테트라데신-2-티올레이트 (식 (VI) 의 화합물에 상당) 를 얻었다. 얻어진 화합물에, 피리딘 (0.48 mL) 과 28 ％ 암모니아수 (1.01 mL) 를 첨가하고, 53 ℃ 에서 15 시간 교반하였다. 얻어진 반응액을 n-헵탄으로 2 회 세정한 후, 수층을 농축시키고, 잔류물을 분리 채취 HPLC [10 mM 아세트산트리에틸아민 수용액/아세토니트릴] 로 정제하여, 인 원자 상의 단일의 디아스테레오머 (Rp, Sp 체) 로서 목적 화합물을 47.6 ㎎ 얻었다. 또한 단리된 화합물의 HPLC 순도는 95.9 ％ 였다.
Figure pct00245
[B 원료 화합물 (I) 의 합성]
B-1 화합물 (XV) (X ＝ Br) 의 합성
다음의 합성 스킴 B-2 에 사용하는 원료 화합물 (XV) 를, 이하의 스킴에 따라서, 합성하였다.
[합성 스킴 B-1]
[화학식 216]
Figure pct00246
참고예 1 :
[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메틸아세테이트 (식 (XVIII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 217]
Figure pct00247
(공정 1)
글리실글리신 (60 g, 0.45 mol), 트리에틸아민 (69 g, 0.68 mol), 물 (600 mL), 테트라하이드로푸란 (600 mL) 의 용액을 0 ℃ 로 냉각 후, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드 (130 g, 0.50 mol) 를 첨가하고, 25 ℃ 에서 22 시간 교반하였다. 반응액을 감압하, 900 mL 까지 농축 후, 아세트산에틸 (600 mL) 을 첨가하였다. 트리에틸아민 (69 g, 0.68 mol) 을 첨가, 교반한 후, 유기층을 폐기하였다. 얻어진 수층에 아세트산에틸 (600 mL) 을 첨가하고, 농염산 (116 g) 을 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 얻어진 유기층을 10 wt％ 식염수 (600 mL) 로 2 회 세정하였다. 유기층을 감압하에서 농축시켜, N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실글리신의 아세트산에틸 용액 (120 mL) 을 얻었다.
(공정 2)
사아세트산납 (302 g, 0.68 mol), 아세트산 (360 mL), 테트라하이드로푸란 (600 mL) 의 용액을 35 ℃ 로 가온 후, N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실글리신의 아세트산에틸 용액 (120 mL) 에 테트라하이드로푸란 (600 mL) 을 첨가한 용액을 적하하였다. 35 ℃ 에서 1 시간 교반한 후, 석출물을 여과 채취하고, 아세트산에틸 (600 mL) 로 세정하였다. 여과액을 20 wt％ 시트르산삼나트륨 이수화물 수용액 (300 mL) 으로 7 회 세정하였다. 얻어진 유기층에 20 wt％ 식염수 (180 mL) 를 첨가 후, 25 wt％ 수산화나트륨 수용액을 적당량 첨가하여 pH 를 6.5 로 하였다. 수층을 폐기하고, 얻어진 유기층을 감압하, 약 600 mL 까지 농축시켰다. 1,2-디메톡시에탄 (1200 mL) 을 첨가하고, 감압하에서 약 600 mL 까지 농축시켰다. 이 조작을 다시 실시하여, 목적 화합물의 1,2-디메톡시에탄 용액 (약 600 mL) 을 얻었다.
실시예 12 :
N-[(2-브로모에톡시)메틸]-N2-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리신아미드 (식 (XV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 218]
Figure pct00248
(공정 3)
참고예 1 에서 얻은 화합물의 1,2-디메톡시에탄 용액 (약 600 mL) 에 1,2-디메톡시에탄 (300 mL) 을 첨가하고, 실온하에서 2-브로모에탄올 (114 g, 0.91 mol) 을 첨가하였다. 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 10 mol/L 수산화나트륨 수용액 (66 g, 0.50 mol) 을 첨가하고, 3.5 시간 교반하였다. 반응액에 아세트산 (41 g, 0.68 mol) 을 첨가하였다. 추가로 물 (300 mL) 을 첨가하고, 목적 화합물 (60 ㎎) 의 종결정을 첨가하고, 물 (600 mL) 을 첨가하였다. 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 50 ％ 함수 1,2-디메톡시에탄 (360 mL) 으로 결정을 세정하였다. 결정을 40 ℃ 에서 밤새 교반하여, 목적 화합물을 백색 결정 (15 g, 수율 80 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00249
B-2 화합물 (I) 의 합성 1
상기 합성 스킴 A-1, A-5, A-8 및 A-10 에 사용하는 원료 화합물 (I) 을, 이하의 스킴에 따라서, 합성하였다.
[합성 스킴 B-2]
[화학식 219]
Figure pct00250
참고예 2 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]이노신 (식 (XIV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 220]
Figure pct00251
(공정 1)
이노신 (5.0 g, 18.4 mmol), 피리딘 (30 mL), 디메틸술폭시드 (20 mL) 의 용액에 질소 기류하, 실온에서 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (7.0 g, 20.5 mmol) 를 첨가하였다. 2 시간 교반 후, 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (1.3 g, 3.7 mmol) 를 추가하였다. 4 시간 교반 후, 반응액에 5 wt％ 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 톨루엔 (50 mL), 20 wt％ 식염수 (25 mL) 를 첨가하였다. 수층을 폐기하고, 유기층에 5 wt％ 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 20 wt％ 식염수 (25 mL) 를 첨가하였다. 수층을 폐기 후, 유기층을 20 wt％ 식염수 (50 mL) 로 세정하였다. 얻어진 유기층을 감압하, 약 20 mL 까지 농축시켜 얻어진 용액에 아세트산에틸 (100 mL) 을 적하하였다. 50 ℃ 에서 1 시간 교반 후, 실온으로 냉각시켜 밤새 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 아세트산에틸 (40 mL) 로 세정하였다. 결정을 감압하, 40 ℃ 에서 건조시켜 목적 화합물을 백색 결정 (9.0 g, 수율 85 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00252
실시예 13 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신의 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (식 (XVI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 221]
Figure pct00253
(공정 2)
참고예 2 에서 얻은 화합물 (3.0 g, 5.3 mmol), N-[(2-브로모에톡시)메틸]-N2-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리신아미드 (5.6 g, 15.7 mmol), 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (30 mL) 의 용액을 35 ∼ 40 ℃ 로 가열하였다. 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (1.5 mL, 11.8 mmol) 을 적하하였다. 35 ∼ 40 ℃ 에서 16 시간 교반한 후, 실온까지 냉각시켰다. 톨루엔 (45 mL), 10 wt％ 식염수 (30 mL) 를 첨가하여 교반한 후, 수층을 폐기하였다. 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (15 mL), 10 wt％ 식염수 (15 mL) 를 첨가하여 교반한 후, 수층을 폐기하였다. 얻어진 유기층을 10 wt％ 식염수 (30 mL) 로 2 회 세정하고, 감압하, 약 15 mL 까지 농축시켰다. 농축액에 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (15 mL) 을 첨가, 감압하에서 농축시켜, 목적 화합물의 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 용액 (약 24 mL) 을 얻었다.
실시예 14 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-(2,3,3-트리메틸부탄-2-일)-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (I) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 222]
Figure pct00254
(공정 3)
실시예 13 에서 얻은 화합물의 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 용액 (약 24 mL) 에 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (15 mL) 을 첨가하고, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (4.0 mL, 31.5 mmol), tert-부틸디메틸클로로실란 (2.2 g, 14.5 mmol) 을 첨가하였다. 55 ∼ 60 ℃ 로 가온시키고, 7 시간 교반한 후, 실온까지 냉각시켰다. 반응액에 톨루엔 (60 mL), 물 (30 mL) 을 첨가하고, 교반하였다. 수층을 폐기하고, 얻어진 유기층을 감압하, 약 15 mL 까지 농축시켰다. 농축액에 테트라하이드로푸란 (30 mL) 을 첨가하고, 감압하, 약 15 mL 까지 농축시켰다. 동일한 조작을 2 회 반복하여, 5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-(2,3,3-트리메틸부탄-2-일)-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (목적 화합물) 과 5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2'-O-(2,3,3-트리메틸부탄-2-일)-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신의 혼합물 (6 : 4) 의 테트라하이드로푸란 용액 (약 15 mL) 을 얻었다. 테트라하이드로푸란 (30 mL), 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (0.07 mL, 0.5 mmol), 목적 화합물의 결정 (1.0 ㎎) 을 첨가하였다. 25 ℃ 에서 30 분 교반한 후, n-헵탄 (30 mL) 을 첨가하고, 25 ℃ 에서 밤새 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 테트라하이드로푸란/n-헵탄 (1/1, 30 mL) 으로 결정을 세정하였다. 결정을 감압하에서 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (3.7 g, 수율 73 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00255
B-3 화합물 (XV) (X ＝ I) 의 합성
다음의 합성 스킴 B-4 에 사용하는 원료 화합물 (XV) 를, 이하의 스킴에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 B-3]
[화학식 223]
Figure pct00256
실시예 B3-1 :
N-[(2-요오도에톡시)메틸]-N2-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리신아미드 (식 (XV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 224]
Figure pct00257
(공정 1)
[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메틸아세테이트 (15.0 g, 51.7 mmol), 1,2-요오도에탄 (8.1 mL, 103.3 mmol) 에 1,2-디메톡시에탄 (225 mL) 을 첨가한 용액을 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 10 mol/L 수산화나트륨 수용액 (5.2 mL, 51.7 mmol) 을 첨가하고, 1 시간 교반하였다. 반응액에 아세트산 (4.4 mL, 77.5 mol) 을 첨가하였다. 추가로 물 (75 mL) 을 첨가하고 목적 화합물의 종결정 (15 ㎎) 을 첨가하고, 물 (300 mL) 을 첨가하였다. 추가로 종결정 (15 ㎎), 물 (45 mL) 을 첨가 후, 종결정 (15 ㎎) 과 물 (75 mL) 을 추가하였다. 0 ℃ 에서 1 시간 하고, 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 50 ％ 함수 1,2-디메톡시에탄 (150 mL) 으로 결정을 세정하였다. 결정을 40 ℃ 에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (16.0 g, 수율 77 ％) 으로서 얻었다.
Figure pct00258
B-4 화합물 (I) 의 합성 2
상기 합성 스킴 A-1, A-5, A-8 및 A-10 에 사용하는 원료 화합물 (I) 을, 이하의 스킴에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 B-4]
[화학식 225]
Figure pct00259
실시예 B4-1 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (XVI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 226]
Figure pct00260
(공정 1)
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]이노신 (500 ㎎, 0.88 mmol), N-[(2-요오도에톡시)메틸]-N2-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리신아미드 (529 ㎎, 1.31 mmol), 디메틸포름아미드 (2 mL) 의 용액을 실온에서 25 시간 교반하였다. 톨루엔 (10 mL), 2.5 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (5 mL) 을 첨가하고, 15 분 교반하였다. 수층을 폐기하고, 얻어진 유기층을 10 ％ 식염수 (5 mL) 로 세정하고, 유기층을 감압하 농축시킨 잔류물에 톨루엔 (5 mL) 을 첨가하고 다시 감압하 농축시켜 목적 화합물의 조체 (粗體) 를 얻었다.
실시예 B4-2 :
5'-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3'-O-(2,3,3-트리메틸부탄-2-일)-1-(2-{[(N-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]카르보닐}글리실)아미노]메톡시}에틸)이노신 (식 (I) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 227]
Figure pct00261
(공정 2)
실시예 B4-1 에서 얻은 화합물의 5 분의 1 량에 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (1 mL), 2,6-루티딘 (41 μL, 0.35 mmol), 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (11 μL, 0.15 mmol) 을 첨가하고, 약 2 시간 교반하였다. 그 후, 2,6-루티딘 (12 μL, 0.10 mmol), 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (11 μL, 0.05 mmol) 을 추가하고, 약 19 시간 교반하였다. 그 후, 추가로 2,6-루티딘 (3 μL, 0.02 mmol), 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (3 μL, 0.01 mmol) 을 추가하고, 2 시간 교반하였다. 톨루엔 (2 mL), 2.5 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (1 mL) 을 첨가하고, 교반하였다. 수층을 폐기하고, 얻어진 유기층을 20 ％ 식염수 (1 mL) 로 세정하여, 유기층을 얻었다. 감압하에서 농축시키고, 얻어진 잔류물에 테트라하이드로푸란 (1 mL) 을 첨가하여 용해시킨 후, 헵탄 (0.3 mL) 을 첨가하였다. 목적 화합물의 종결정을 첨가하고, 헵탄 (0.3 mL) 을 2 회 첨가하였다. 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 테트라하이드로푸란/n-헵탄 (11/14, 0.5 mL) 으로 세정하였다. 결정을 감압하에서 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (80 ㎎, 수율 48 ％) 으로서 얻었다.
[C 원료 화합물 (VIII) 의 합성]
C-1 화합물 (XXIII) 의 합성
다음의 합성 스킴 C-2 에 사용하는 원료 화합물 (XXIII) 을, 이하의 스킴에 따라서, 합성하였다.
[합성 스킴 C-1]
[화학식 228]
Figure pct00262
실시예 15 :
tert-부틸-4-아미노-5-요오드-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-카르복실레이트 (식 (XXXII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 229]
Figure pct00263
(공정 1)
5-요오드-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 (318.5 g, 1.225 mol) 의 톨루엔 (1750 mL) 용액에 이탄산디-tert-부틸 (294.1 g, 1.347 mol), 1-메틸이미다졸 (50.28 g, 0.612 mol) 을 첨가하고, 실온에서 6 시간 교반하였다. 반응액에 헵탄 (7000 mL) 을 적하하고, 실온에서 10 분간 교반한 후, 0 ℃ 까지 냉각시키고, 1 시간 교반하였다. 석출된 결정을 여과하고, 톨루엔/헵탄 (280 mL/1120 mL) 혼합액으로 세정 후, 40 ℃ 에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (415.7 g, 1.154 mol, 수율 94.2 ％) 을 얻었다.
Figure pct00264
실시예 16 :
tert-부틸-4-아미노-5-(3,3-디에톡시프로파-1-인-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-카르복실레이트 (식 (XXVIII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 230]
Figure pct00265
(공정 2)
실시예 15 에서 얻어진 화합물 (285.4 g, 0.792 mol) 의 N,N-디메틸포름아미드 (1500 mL) 용액을 감압하에서 탈기 조작을 실시한 후, 요오드화구리 (I) (1.51 g, 0.0079 mol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II) 디클로라이드 (3.89 g, 0.0055 mol), 프로파르길알데히드디에틸아세탈 (182.8 g, 1.426 mol), 트리에틸아민 (240.5 g, 2.377 mol) 을 첨가하고, 실온에서 18.5 시간 교반하였다. 반응액에 톨루엔 (6000 mL), 10 ％ 염화암모늄 수용액 (1500 mL) 을 첨가하여 교반하고, 분액하여 수층을 제거하였다. 얻어진 유기층을 10 ％ 염화암모늄 수용액 (1500 mL) 으로 2 회, 20 ％ 염화나트륨 수용액 (1500 mL) 으로 1 회 세정하였다. 활성탄 (30 g) 을 첨가하여 실온에서 약 2 시간 교반한 후, 활성탄을 여과 분리하고, 활성탄을 톨루엔 (600 mL) 으로 세정하여 여과액을 합치하고, 1500 mL 까지 감압 농축시켰다. 헵탄 (6000 mL) 을 적하하고, 실온에서 약 10 분간 교반한 후, 0 ℃ 까지 냉각시키고, 1 시간 교반하였다. 석출된 결정을 여과하고, 톨루엔/헵탄 (240 mL/960 mL) 혼합액으로 세정 후, 40 ℃ 에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (269.9 g, 0.749 mol, 수율 94.6 ％) 을 얻었다.
Figure pct00266
실시예 17 :
5-(3,3-디에톡시프로파-1-인-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 (식 (XXIX) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 231]
Figure pct00267
(공정 3)
실시예 16 에서 얻어진 화합물 (250.0 g, 0.694 mol) 의 에탄올 (1500 mL) 용액에 4 mol/L 수산화나트륨 용액 (260.1 mL, 1.040 mol) 을 첨가하고, 실온에서 약 1.5 시간 교반하였다. 반응액에 물 (1500 mL) 을 첨가한 후, 2 M 염산으로 pH 를 7.5 로 조정하고, 실온에서 약 45 분간 교반하였다. 계속해서, 물 (3000 mL) 을 적하하고, 실온에서 2 시간 교반하였다. 석출된 결정을 여과하고, 에탄올/물 (250 mL/750 mL) 혼합액, 0 ℃ 로 냉각시킨 아세토니트릴 (1000 mL) 로 세정하였다. 얻어진 결정을 40 ℃ 에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (152.5 g, 0.586 mol, 수율 84.4 ％) 을 얻었다.
Figure pct00268
실시예 18 :
6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (XXX) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 232]
Figure pct00269
(공정 4)
실시예 17 에서 얻어진 화합물 (63.0 g, 0.242 mol) 의 1-메틸피롤리돈 (189 mL) 혼합물에, 5 ％ 팔라듐탄소 (13.4 g, 수분 53.2 ％) 를 첨가하고, 수소 분위기하 (300 ㎪), 40 ℃ 에서 약 2 시간 교반하였다. 반응계 내를 질소 치환시키고, 아세트산 (630 mL), 물 (32 mL) 및 5 ％ 팔라듐탄소 (13.4 g, 수분 53.2 ％) 를 첨가하고, 수소 분위기하 (300 ㎪), 50 ℃ 에서 약 21 시간 교반하였다. 반응계 내를 질소 치환시키고, 물 (300 mL) 을 첨가하고 나서 팔라듐탄소를 여과 분리하고, 팔라듐탄소를 아세트산 (150 mL), 물 (150 mL) 의 혼합액으로 세정 후, 여과액을 550 mL 까지 감압 농축시켰다. 50 ℃ 에서 물 (620 mL) 및 48 ％ 수산화칼륨 수용액 (20 mL) 을 적하하고, 0 ∼ 5 ℃ 로 냉각시켜 약 20 시간 교반하였다. 석출물을 여과하고, 여과 분리된 결정을 냉각된 1-메틸피롤리돈/물 (36 mL/144 mL) 혼합액으로 세정하고, 추가로 물 (320 mL) 로 세정하였다. 얻어진 결정을 감압하 50 ℃ 에서 건조시켜, 목적 화합물 (37.0 g, 0.212 mol, 수율 87.8 ％) 을 얻었다.
Figure pct00270
실시예 19 :
페닐(2,7,8,9-테트라하이드로-6H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌-6-일)메타논 (식 (XXIII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 233]
Figure pct00271
(공정 5)
실시예 18 에서 얻어진 화합물 (4.0 g, 23.0 mmol) 의 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (40 mL) 의 혼합물에, 트리에틸아민 (10.6 mL, 75.9 mol), 4-디메틸아미노피리딘 (280 ㎎, 2.3 mmol) 을 실온에서 첨가한 후, 0 ∼ 5 ℃ 로 냉각시키고 벤조일클로라이드 (8.3 mL, 72.0 mmol) 를 첨가하였다. 약 21 시간 교반한 후, 반응액에 메탄올 (20 mL), 트리에틸아민 (12.0 mL) 을 첨가하고, 약 23 시간 교반하였다. 아세트산 (6.7 mL), 물 (102 mL) 을 첨가하고, 0 ∼ 5 ℃ 에서 약 2 시간 교반하였다. 석출물을 여과하고, 여과 분리된 분말을 냉각된 아세토니트릴/물 (2 mL/18 mL) 혼합 용액으로 세정하였다. 얻어진 분말을 아세토니트릴 (40 mL) 에 현탁시키고, 0 ∼ 5 ℃ 에서 약 1 시간 교반하였다. 석출물을 여과하고, 여과 분리된 분말을 차가운 아세토니트릴 (10 mL) 로 세정하였다. 얻어진 분말을 감압하 50 ℃ 에서 건조시켜, 목적 화합물 (5.13 g, 18.4 mmol, 수율 80.0 ％) 을 얻었다.
Figure pct00272
C-2 화합물 (VIII) 의 합성
상기 합성 스킴 A-2 에 사용하는 원료 화합물 (VIII) 을, 이하의 스킴에 따라서, 합성하였다.
[합성 스킴 C-2]
[화학식 234]
Figure pct00273
참고예 3 :
2'-데옥시-2'-플루오로-3,4,5,6-테트라하이드로우리딘의 합성
[화학식 235]
Figure pct00274
(공정 1)
1 L 오토클레이브에 2'-데옥시-2'-플루오로우리딘 (70.0 g, 28.4 mmol), 메탄올 (420 mL) 을 첨가하고, 5 ％ 팔라듐탄소 (13.57 g, 수분 52.2 ％) 를 첨가하고, 수소 분위기하 (300 ㎪), 50 ℃ 에서 7 시간 교반하였다. 반응계 내를 질소 치환 후, 팔라듐탄소를 여과하고, 메탄올/물 (189 mL/21 mL) 혼합액으로 세정하였다. 여과액을 210 mL 이하까지 감압 농축시키고, N,N-디메틸아세트아미드 (350 mL), 톨루엔 (350 mL) 을 첨가하고 350 mL 까지 감압 농축시켰다. 그 후 톨루엔 (350 mL) 을 첨가하고 다시 350 mL 까지 감압 농축시켰다. 동일한 조작을 추가로 2 회 반복하여, 목적 화합물을 얻었다.
참고예 4 :
3',5'-디-O-벤조일-2'-데옥시-2'-플루오로-3,4,5,6-테트라하이드로우리딘 (식 (XIX) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 236]
Figure pct00275
(공정 2)
참고예 3 에서 얻어진 N,N-디메틸아세트아미드 용액 (340 mL) 에, 피리딘 (76.5 g, 96.7 mmol) 을 첨가하고, 빙랭하에서, 염화벤조일 (85.4 g, 60.5 mmol) 을 적하 후, 혼합물을 실온하에서 2.5 시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (6.8 mL), 2-프로판올 (408 mL) 을 첨가 후, 50 ℃ 로 승온시키고, 물 (102 mL) 을 적하하였다. 동 온도에서 30 분 교반 후, 물 (136 mL) 을 첨가하고 30 분 교반한 후, 실온까지 냉각시켜 22 시간 교반하였다. 0 ℃ 로 냉각시켜 1 시간 교반한 후 석출된 결정을 여과하고, 2-프로판올/물 (204 mL/122 mL) 혼합액으로 세정 후, 40 ℃ 에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (117.2 g, 25.7 mmol, 수율 93.0 ％) 을 백색 고체로서 얻었다.
Figure pct00276
실시예 20 :
3-벤조일-3',5'-디-O-벤조일-2'-데옥시-2'-플루오로-3,4,5,6-테트라하이드로우리딘 (식 (XX) 의 화합물에 상당) 의 합성 1
[화학식 237]
Figure pct00277
(공정 3)
참고예 4 에서 얻어진 화합물 (67.0 g, 14.7 mmol) 의 아세토니트릴 (402 mL) 현탁액에, 4-디메틸아미노피리딘 (18.0 g, 14.7 mmol), 트리에틸아민 (26.8 g, 26.5 mmol) 을 첨가 후, 빙랭시켰다. 염화벤조일 (33.1 g, 23.5 mmol) 을 적하하고, 실온으로 승온 후, 1 시간 교반하였다. 반응액을 빙랭시키고, 시클로펜틸메틸에테르 (670 mL) 를 첨가하여 희석 후, 10 ％ 식염수 (670 mL) 를 첨가하여 5 분간 교반하고, 분액하였다. 유기층을 0.5 M 토실산 수용액 (670 mL) 으로 세정 후, 추가로 물 (335 mL) 로 세정하였다. 얻어진 유기층에 시클로펜틸메틸에테르 (670 mL) 를 첨가하고 670 mL 까지 감압 농축시켜, 목적 화합물을 얻었다.
실시예 21 :
3-벤조일-3',5'-디-O-벤조일-2'-데옥시-2'-플루오로-3,4,5,6-테트라하이드로우리딘 (식 (XX) 의 화합물에 상당) 의 합성 2
[화학식 238]
Figure pct00278
(공정 3')
참고예 4 에서 얻어진 화합물 (200 ㎎, 0.44 mmol) 의 N,N-디메틸아세트아미드 (2 mL) 용액에, 실온하에서 4-디메틸아미노피리딘 (5.35 ㎎, 0.04 mmol), 트리에틸아민 (70.9 ㎎, 0.70 mmol) 을 첨가 후, 염화벤조일 (80.1 ㎎, 0.57 mmol) 을 적하하여 3 시간 교반하였다. 4-디메틸아미노피리딘 (5.35 ㎎, 0.04 mmol), 트리에틸아민 (70.9 ㎎, 0.70 mmol) 을 첨가 후, 염화벤조일 (80.1 ㎎, 0.57 mmol) 을 추가하여 추가로 17 시간 교반하고, 4-디메틸아미노피리딘 (5.35 ㎎, 0.04 mmol), 트리에틸아민 (70.9 ㎎, 0.70 mmol) 을 첨가 후, 염화벤조일 (80.1 ㎎, 0.57 mmol) 을 추가하여 2 시간 교반하였다. 반응액에 아세트산에틸 (4 mL) 을 첨가하여 희석 후, 5 ％ 식염수 (4 mL) 를 첨가하여 5 분간 교반하고, 분액하였다. 유기층을 5 ％ 식염수 (4 mL) 로 세정 후, 감압 농축시키고 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/아세트산에틸 ＝ 70/30, 60/40) 로 정제하여, 목적 화합물 (226 ㎎, 0.40 mmol, 수율 91.6 ％) 을 백색 거품상 물질로서 얻었다.
Figure pct00279
실시예 22 :
3,5-디-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-D-리보푸라노오스 (식 (XXI) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 239]
Figure pct00280
(공정 4)
실시예 20 에서 얻어진 시클로펜틸메틸에테르 용액 (670 mL) 에, p-톨루엔술폰산 일수화물 (139.8 g, 73.5 mmol) 의 수용액 (134 mL) 을 첨가하고, 혼합물을 가열하여 60 ℃ 에서 6 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시킨 후 분액하고, 수층을 시클로펜틸메틸에테르 (335 mL) 로 추출하였다. 유기층을 합쳐서 8 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (503 mL) 으로 2 회 세정, 물 (335 mL) 로 세정한 후, 유기층을 335 mL 까지 감압 농축시켜, 목적 화합물을 얻었다.
실시예 23 :
3,5-디-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-α-D-리보푸라노실클로라이드 (식 (XXII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 240]
Figure pct00281
(공정 5)
실시예 22 에서 얻어진 시클로펜틸메틸에테르 용액 (50 mL) 에, 디클로로메탄 (50 mL) 을 첨가하고, 빙랭하, 트리클로로이소시아누르산 (1.55 g, 6.66 mmol), 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트 (8.64 g, 13.35 mmol) 를 첨가하였다. 동 온도에서 1 시간 교반하고 트리클로로이소시아누르산 (1.55 g, 6.66 mmol), 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트 (8.64 g, 13.35 mmol) 를 첨가하여 1 시간 교반하였다. 반응액에 시클로펜틸메틸에테르 (100 mL) 를 첨가하고 150 mL 이하까지 감압 농축시킨 후 2 M 수산화나트륨 수용액 (50 mL), 10 ％ 티오황산나트륨 수용액 (50 mL) 을 첨가하여 20 분간 교반하였다. 반응 혼합물을 분액하고, 유기층을 2 M 수산화나트륨 수용액 (100 mL) 으로 2 회, 6 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (100 mL), 물 (100 mL) 로 2 회 분액 세정하였다. 유기층을 30 mL 이하까지 감압 농축시키고, 헵탄 (100 mL) 을 첨가하고 30 mL 이하까지 감압 농축시켰다. 헵탄 (100 mL), 아세토니트릴 (100 mL) 을 첨가하여 분액, 아세토니트릴층을 헵탄 (100 mL) 으로 추가로 분액 세정하였다. 아세토니트릴층에 활성탄 (0.5 g) 을 첨가하여 30 분간 교반하고 여과 후, 시클로펜틸메틸에테르 (50 mL) 로 세정하였다. 여과액을 50 mL 까지 감압 농축시키고, CPME (100 mL) 를 첨가하고 50 mL 까지 감압 농축시켰다. 50 ℃ 로 가온시키고, 헵탄 (50 mL) 을 첨가하고 50 mL 까지 감압 농축 후, 헵탄 (50 mL) 을 적하하였다. 동 온도에서 30 분간 교반하고, 그 후 50 mL 까지 감압 농축 후, 헵탄 (50 mL) 을 첨가하였다. 동일한 조작을 추가로 2 회 반복한 후, 시클로펜틸메틸에테르 (10 mL) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각 후, 석출된 결정을 여과하고, 헵탄/시클로펜틸메틸에테르 (45 mL/5 mL) 혼합액으로 세정 후, 실온하에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (6.2 g, 16.4 mmol, 수율 61.3 ％) 을 백색 고체로서 얻었다.
Figure pct00282
실시예 24-1 :
6-벤조일-2-(3,5-디-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (XXIV) 의 화합물에 상당) 의 합성 1
[화학식 241]
Figure pct00283
(공정 6)
실시예 19 에서 얻은 화합물 (2.51 g, 9.02 mmol) 의 디메틸술폭시드 (25 mL) 용액에 탄산세슘 (8.72 g, 26.78 mmol) 을 첨가하고 10 분 교반한 후, 실시예 23 에서 얻은 화합물 (6.82 g, 18.01 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 2 시간 교반하였다. 톨루엔 (25 mL), 물 (25 mL) 및 활성탄 (0.50 g) 을 첨가하고, 30 분 교반한 후에 여과하였다. 활성탄을 톨루엔 (12.5 mL) 으로 세정 후, 여과 세정액을 분액하고, 유기층에 1 M 염산 (25 mL) 및 활성탄 (0.49 g) 을 첨가하고, 30 분 교반한 후에 여과하였다. 활성탄을 톨루엔 (12.5 mL) 으로 세정 후, 여과 세정액을 분액하고, 유기층을 10 ％ 인산수소이칼륨 수용액 (12.5 mL), 물 (12.5 mL) 로 2 회 분액 세정하였다. 얻어진 유기층을 40 ℃ 에서 감압하 농축시켜, 용액량을 12.5 mL 로 하였다. 용액을 40 ℃ 에서 교반하고, 목적물의 석출을 확인한 후, 50 ℃ 로 승온시키고, 톨루엔 (12.5 mL) 및 2-프로판올 (50.0 mL) 을 첨가하였다. 용액을 0 ℃ 로 서랭시킨 후, 여과를 실시하고, 여과물을 톨루엔 (2.0 mL)/2-프로판올 (8.0 mL) 혼합액으로 세정하고 40 ℃ 에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (3.15 g, 5.08 mmol, 수율 56.4 ％) 을 백색 고체로서 얻었다.
Figure pct00284
실시예 24-2 :
6-벤조일-2-(3,5-디-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (XXIV) 의 화합물에 상당) 의 합성 2
[화학식 242]
Figure pct00285
(공정 6')
실시예 19 에서 얻은 화합물 (1.0 g, 3.59 mmol) 의 디메틸술폭시드 (8 mL) 용액에 탄산세슘 (3.51 g, 10.77 mmol) 을 첨가하고 10 분 교반한 후, 실시예 23 에서 얻은 화합물 (2.72 g, 7.18 mmol) 을 3 분할로 첨가하고, 첨가에 사용한 기구를 디메틸술폭시드 (2 mL) 로 세정하고, 실온에서 3 시간 교반하였다. 아세트산 (1.19 g, 19.75 mmol), 아세토니트릴 (15 mL), 메탄올 (5 mL) 을 첨가하였다. 40 ℃ 로 가온시키고, 물 (5 mL) 을 적하하였다. 약 40 ℃ 에서 목적 화합물의 종결정 (0.5 ㎎) 을 첨가하고, 물 (7 mL) 을 1 시간에 걸쳐서 적하하였다. 적하 후, 실온까지 되돌리고, 밤새 교반하였다. 얻어진 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 아세토니트릴/물 (7/3, 25 mL), 이어서 에탄올 (5 mL) 로 세정하였다. 결정에 에탄올 (20 mL) 을 첨가하고, 실온하에서 약 30 분 교반하였다. 현탁액으로부터 결정을 여과 채취하고, 에탄올 (5 mL) 로 세정하였다. 결정을 40 ℃ 에서 밤새 건조시켜, 목적 화합물을 백색 결정 (1.4 g, 수율 63 ％) 으로서 얻었다.
실시예 25-1 :
2-(2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (XXV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 243]
Figure pct00286
(공정 7)
실시예 24 에서 얻어진 화합물 (6.50 g, 10.47 mmol) 의 테트라하이드로푸란 용액 (52 mL) 에 물 (26 mL) 및 4 M 수산화나트륨 수용액 (10.5 mL) 을 첨가하고, 실온하 21 시간 교반하였다. 반응액의 pH 를 농염산을 사용하여 pH 9.6 으로 조정한 후, 식염 (8.15 g) 및 시클로펜틸메틸에테르 (26 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 수층을 테트라하이드로푸란 (52 mL) 및 시클로펜틸메틸에테르 (26 mL) 의 혼합 용액으로 3 회 추출하였다. 유기층을 혼합하고, 20 ％ 식염수 (26 mL) 로 세정하였다. 얻어진 유기층을 농축 후, 잔류물에 1-프로판올 (130 mL) 을 첨가하고 농축시키는 조작을 3 회 반복하여, 용액량을 33 mL 로 조정하였다. 용액을 80 ℃ 로 가온시키고, 헵탄 (130 mL) 을 첨가 후, 천천히 5 ℃ 로 냉각시키고, 2 시간 교반하였다. 석출된 결정을 여과하고, 1-프로판올/헵탄 (6.5 mL/26 mL) 혼합액 및 헵탄 (13 mL) 으로 세정 후, 실온하에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (2.88 g, 9.34 mmol, 수율 89.2 ％) 을 백색 고체로서 얻었다.
Figure pct00287
실시예 25-2 :
2-(2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌·p-톨루엔술폰산염 (식 (XXV) 의 화합물의 p-톨루엔술폰산염에 상당) 의 합성 (별법)
[화학식 244]
Figure pct00288
(공정 7')
실시예 24 에서 얻어진 화합물 (300 ㎎, 0.48 mmol) 의 에탄올 (1.5 mL) 용액에 나트륨에톡시드의 에탄올 용액 (20 ％, 0.012 mL, 0.03 mmol) 을 첨가하고, 65 ℃ 에서 6 시간 교반하였다. 실온까지 냉각 후, p-톨루엔술폰산 일수화물 (184 ㎎, 0.97 mmol), 에탄올 (0.6 mL) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하였다. 그 후, 톨루엔 (6.3 mL) 을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반한 후, 0 ℃ 까지 냉각시켰다. 0 ℃ 에서 4 시간 교반한 후, 석출된 결정을 여과하고, 0 ℃ 로 냉각된 에탄올/톨루엔 (0.3 mL/0.9 mL) 혼합액으로 세정하였다. 얻어진 결정을 40 ℃ 에서 감압 건조시켜 목적 화합물 (215.9 ㎎, 0.45 mmol, 수율 93.0 ％) 을 얻었다.
Figure pct00289
실시예 26 :
2-{5-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (VIII') 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 245]
Figure pct00290
(공정 8)
실시예 25 에서 얻어진 화합물 (2.80 g, 9.08 mmol) 의 피리딘 (8.4 mL) 용액에 4,4-디메톡시트리틸클로라이드 (3.98 g) 를 첨가하고, 실온에서 7 시간 교반하였다. 반응액에 톨루엔 (56 mL) 및 물 (15 mL) 을 첨가 후 분액하고, 유기층을 물 (15 mL) 로 2 회 세정하였다. 유기층을 감압 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/아세트산에틸) 로 정제하여, 목적 화합물 (5.65 g, 9.25 mmol, 수율 101.9 ％) 을 얻었다.
Figure pct00291
실시예 27 :
6-벤조일-2-{5-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-3-O-[tert-부틸(디메틸)실릴]-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (XXVII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 246]
Figure pct00292
(공정 9)
실시예 26 에서 얻어진 화합물 (50.0 ㎎, 0.0819 mmol) 의 피리딘 (0.15 mL) 용액에 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (0.038 mL, 0.165 mmol) 을 첨가하고, 30 분 교반한 후, 염화벤조일 (0.019 gmL, 0.165 mmol) 을 첨가하고, 2 시간 교반하였다. 톨루엔 (0.5 mL) 및 물 (0.5 mL) 를 첨가 후 분액하고, 얻어진 유기층을 물 (0.5 mL) 로 2 회 세정을 실시한 후에 감압하에서 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/아세트산에틸) 로 정제하여, 목적 화합물 (56.4 ㎎, 0.0680 mmol, 수율 83.1 ％) 을 얻었다.
Figure pct00293
실시예 28 :
6-벤조일-2-{5-O-[비스(4-메톡시페닐)(페닐)메틸]-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실}-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (VIII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 247]
Figure pct00294
(공정 10)
실시예 27 에서 얻어진 화합물 (15.0 ㎎, 0.0181 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (0.075 mL) 용액에 테트라부틸암모늄플루오리드의 테트라하이드로푸란 용액 (1 M, 0.0090 mL, 0.009 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 1.5 시간 교반하였다. 톨루엔 (0.3 mL), 포화 염화암모늄 수용액 (0.3 mL) 을 첨가하여 분액하고, 얻어진 유기층을 포화 염화암모늄 수용액 (0.3 mL) 으로 세정하고, 유기층을 감압하 농축시킴으로써 목적 화합물 (12.2 ㎎, 0.0171 mmol, 수율 94.5 ％) 을 얻었다.
Figure pct00295
C-3 화합물 (XXIV) 의 합성
상기 합성 스킴 C-2 중의 화합물 (XXIV) 는, 이하의 스킴에 따라서 합성할 수도 있다.
[합성 스킴 C-3]
[화학식 248]
Figure pct00296
실시예 29 :
7-(3,5-디-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실)-5-(3,3-디에톡시프로파-1-인-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 (식 (XXXIII) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 249]
Figure pct00297
(공정 1)
실시예 17 에서 얻은 화합물 (132.2 ㎎, 0.508 mmol) 의 아세토니트릴 (2 mL) 용액에 탄산세슘 (210.1 ㎎, 0.595 mmol) 을 첨가하고, 15 분 교반한 후, 실시예 23 에서 얻은 화합물 (100.0 ㎎, 0.264 mmol) 을 첨가하고, 17 시간 교반하였다. 반응액에 아세트산 (50 μL) 을 첨가 후, 아세트산에틸 (1 mL) 및 물 (1 mL) 을 첨가하여 분액하였다. 수층을 아세트산에틸 (1 mL) 로 추출 후, 얻어진 유기층을 합치하고, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/아세트산에틸) 로 정제하여, 목적 화합물 (78.7 ㎎, 0.131 mmol, 수율 49.5 ％) 을 얻었다.
Figure pct00298
실시예 30 :
6-벤조일-2-(3,5-디-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-β-D-리보푸라노실)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-2,3,5,6-테트라아자벤조[cd]아줄렌 (식 (XXIV) 의 화합물에 상당) 의 합성
[화학식 250]
Figure pct00299
(공정 2)
실시예 29 에서 얻어진 화합물 (78.7 ㎎, 0.131 mmol) 의 에탄올 (3.5 mL) 용액에 10 ％ 팔라듐탄소 (34.4 ㎎, 수분 48 ％) 를 첨가하고, 수소 분위기하 (300 ㎪), 실온에서 23 시간 교반 후, 반응액을 추가로, 수소 분위기하 (500 ㎪), 40 ℃ 에서 10 시간 교반하였다. 반응계를 질소 치환 후, 팔라듐탄소를 여과하고, 에탄올 (1 mL) 로 세정하였다. 여과액을 감압하 농축 후, 아세트산 (1.4 mL), 물 (70 μL) 및 10 ％ 팔라듐탄소 (34.4 ㎎, 수분 48 ％) 를 첨가하고, 수소 분위기하 (500 ㎪), 50 ℃ 에서 14 시간 교반하였다. 반응계를 질소 치환 후, 팔라듐탄소를 여과하고, 아세트산에틸 (1 mL) 로 세정하였다. 여과액을 감압하 농축 후, 아세트산에틸 (1.5 mL), 물 (1.5 mL), 인산칼륨 (0.15 g) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 감압하 농축시켰다. 잔류물에 피리딘 (1.5 mL), 염화벤조일 (60 μL, 0.51 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (3.0 ㎎, 0.025 mmol) 을 첨가하고, 50 ℃ 에서 2 시간 교반한 후, 염화벤조일 (30 μL, 0.26 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (8.5 ㎎, 0.070 mmol) 을 첨가하고, 70 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각시키고, 16 시간 교반한 후, 아세트산에틸 (2 mL) 및 물 (2 mL) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 10 ％ 인산칼륨 수용액 (1 mL) 으로 2 회 세정하였다. 유기층을 감압 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산/아세트산에틸) 로 정제하여, 목적 화합물 (50.8 ㎎, 0.0819 mmol, 수율 62.5 ％) 을 얻었다.
참고예 5 : 항 CD70 항체 1 의 제조
항 CD70 항체 1 은 WO2004/073656 을 참조하여 제조하였다. 실시예에서 사용한 항 CD70 항체 1 은, 아이소타입이 IgG1 이고, LALA 변이를 갖는다. 본 실시예에서 사용한 항 CD70 항체 1 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 1) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 2) 을 도 2 에 나타낸다. 서열 번호 1 (도 2) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 112 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 2 (도 2) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 118 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 13), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 14), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 15), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 16), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 17), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 18) 을 도 8 에 나타낸다.
참고예 6 : 항 CD70 항체 2 의 제조
항 CD70 항체 2 는 WO2007/038637 을 참조하여 제조하였다. 본 실시예에서 사용한 항 CD70 항체 2 는, 아이소타입이 IgG1 이고, LALA 변이를 갖는다. 본 실시예에서 사용한 항 CD70 항체 2 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 3) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 4) 을 도 3 에 나타낸다. 서열 번호 3 (도 3) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 108 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 4 (도 3) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 118 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 19), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 20), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 21), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 22), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 23), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 24) 을 도 9 에 나타낸다.
참고예 7 : 항 TROP2 항체 1 의 제조
항 TROP2 항체 1 은 WO2015/098099 를 참조하여 제조하였다. 본 실시예에서 사용한 항 TROP2 항체 1 은, 아이소타입이 IgG1 이다. 본 실시예에서 사용한 항 TROP2 항체 1 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 5) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 6) 을 도 4 에 나타낸다. 서열 번호 5 (도 4) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 108 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 6 (도 4) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 121 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 25), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 26), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 27), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 28), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 29), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 30) 을 도 10 에 나타낸다.
참고예 8 : 항 TROP2 항체 2 의 제조
항 TROP2 항체 1 은 WO2015/098099 를 참조하여 제조하였다. 본 실시예에서 사용한 항 TROP2 항체 1 은, 아이소타입이 IgG1 이다. 항 TROP2 항체 2 는, 항 TROP2 항체 1 에 LALA 변이를 도입하였다. 본 실시예에서 사용한 항 TROP2 항체 2 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 7) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 8) 을 도 5 에 나타낸다. 서열 번호 7 (도 5) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 108 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 8 (도 5) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 121 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 31), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 32), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 33), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 34), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 35), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 36) 을 도 11 에 나타낸다.
참고예 9 : 항 EGFR 항체 1 의 제조
항 EGFR 항체 1 은, 벡티빅스 점적 정맥 주사 100 ㎎ 심사 결과 보고서 (2010년 3월 5일 의약 식품국 심사 관리과) 를 참조하여 제조하였다. 본 실시예에서 사용한 항 EGFR 항체 1 은, 아이소타입이 IgG1 이고, LALA 변이를 갖는다. 본 실시예에서 사용한 항 EGFR 항체 1 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 9) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 10) 을 도 6 에 나타낸다. 서열 번호 9 (도 6) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 108 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 10 (도 6) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 119 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 37), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 38), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 39), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 40), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 41), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 42) 을 도 12 에 나타낸다. CDR 서열은 WO1998/050433 을 참조하였다.
참고예 10 : 항 EGFR 항체 2 의 제조
항 EGFR 항체 2 는 WO2002/092771 을 참조하여 제조하였다. 본 실시예에서 사용한 항 EGFR 항체 2 는, 아이소타입이 IgG1 이고, LALA 변이를 갖는다. 본 실시예에서 사용한 항 EGFR 항체 2 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 11) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 12) 을 도 7 에 나타낸다. 서열 번호 11 (도 7) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 108 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 12 (도 7) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 116 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 43), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 44), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 45), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 46), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 47), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 48) 을 도 13 에 나타낸다.
참고예 11 : 항 HER2 항체의 제조
본 명세서에 있어서,「트라스투주맙」은 HERCEPTIN (등록 상표), huMAb4D5-8, rhuMAb4D5-8 로 불리는 경우도 있으며, 서열 번호 1 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 및 서열 번호 2 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬을 갖는 인간화 IgG1 항체이다. 아미노산 서열은 US5821337 을 참조하였다. 트라스투주맙의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 49) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 50) 을 도 14 에 나타낸다.
항 HER2 항체는, 트라스투주맙의 중사슬 아미노산 서열의 EU 인덱스 234 번째 및 235 번째의 류신 (L) 을 알라닌 (A) 으로 변이 (본 명세서 중, LALA 변이라고도 한다) 시킨, 트라스투주맙의 정상 영역 개변 IgG1 항체 (본 명세서 중, 개변 항 HER2 항체라고도 한다) 를 설계하여, 제조할 수 있다. 개변 항 HER2 항체의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 49) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 51) 을 도 15 에 나타낸다.
참고예 12 : 항 HER2 항체 2 의 제조
「퍼투주맙」은 PERJETA (등록 상표) 로 불리는 경우도 있으며, 서열 번호 28 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 및 서열 번호 53 에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬을 갖는 인간화 IgG1 항체이다. 아미노산 서열은 WO2004/008099 를 참조하였다. 본 명세서에서는 항 HER2 항체 2 라고도 한다. 퍼투주맙의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 52) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 53) 을 도 16 에 나타낸다.
항 HER2 항체 2 는, LALA 변이에 추가하여, 중사슬 아미노산 서열의 EU 인덱스 214 번째의 리신 (K) 을 아르기닌 (R) 으로 변이시킨 G1m3 알로타입의 정상 영역을 갖는 항 HER2 항체 2 를 설계하여, 제조할 수 있다 (본 명세서 중, 개변 항 HER2 항체 2 라고도 한다). 본 실시예에서 사용한 개변 항 HER2 항체 2 의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 52) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 54) 을 도 17 에 나타낸다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 57), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 58), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 59), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 60), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 61), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 62) 을 도 21 에 나타낸다.
참고예 13 : 항 CDH6 항체의 제조
항 CDH6 항체는 WO2018/212136 을 참조하여 제조할 수 있다. 본 실시예에서 사용한 항 CDH6 항체는, 아이소타입이 IgG1 이고, LALA 변이에 추가하여, 중사슬 아미노산 서열의 EU 인덱스 329 번째의 프롤린 (P) 을 글리신 (G) 으로 한 변이를 갖는다. 본 실시예에서 사용한 항 CDH6 항체의 경사슬 아미노산 서열 (서열 번호 55) 및 중사슬 아미노산 서열 (서열 번호 56) 을 도 18 에 나타낸다. 서열 번호 55 (도 18) 에 나타내는 경사슬 서열 중에서, 1 ∼ 107 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 경사슬 가변 영역이고, 서열 번호 56 (도 18) 에 나타내는 중사슬 서열 중에서, 1 ∼ 122 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 서열은 중사슬 가변 영역이다. 당해 항체의 CDRL1 의 아미노산 서열 (서열 번호 63), CDRL2 의 아미노산 서열 (서열 번호 64), CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 65), CDRH1 의 아미노산 서열 (서열 번호 66), CDRH2 의 아미노산 서열 (서열 번호 67), 및 CDRH3 의 아미노산 서열 (서열 번호 68) 을 도 21 에 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED <120> New Method for Producing Antibody-Immunostimulant Conjugate <130> SAP-866-PCT <141> 2022-01-31 <150> JP 2021014624 <151> 2021-02-01 <150> JP 2021066316 <151> 2021-04-09 <160> 68 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 Light Chain <400> 1 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 2 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 Heavy Chain <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Ala Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 3 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 Light Chain <400> 3 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 4 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 Heavy Chain <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Thr Asp Gly Tyr Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 5 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 Light Chain <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 6 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 Heavy Chain <400> 6 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala 20 25 30 Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 7 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 Light Chain <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 8 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 Heavy Chain <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala 20 25 30 Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 Light Chain <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln His Phe Asp His Leu Pro Leu 85 90 95 Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 10 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 Heavy Chain <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Asp Tyr Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly His Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Thr Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr 85 90 95 Cys Val Arg Asp Arg Val Thr Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 11 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 Light Chain <400> 11 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn 20 25 30 Ile Gly Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ser Phe Lys Gly Leu Ile 35 40 45 Tyr His Gly Thr Asn Leu Asp Asp Glu Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ala Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 12 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 Heavy Chain <400> 12 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ile Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Thr Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 CDRL1 <400> 13 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 CDRL2 <400> 14 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 CDRL3 <400> 15 Gln His Ser Arg Glu Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 CDRH1 <400> 16 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 CDRH2 <400> 17 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Ala Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 1 CDRH3 <400> 18 Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Met Asp Tyr 1 5 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 CDRL1 <400> 19 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 CDRL2 <400> 20 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 CDRL3 <400> 21 Gln Gln Arg Thr Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 CDRH1 <400> 22 Ser Tyr Ile Met His 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 CDRH2 <400> 23 Val Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CD70 Antibody 2 CDRH3 <400> 24 Asp Thr Asp Gly Tyr Asp Phe Asp Tyr 1 5 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 CDRL1 <400> 25 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 CDRL2 <400> 26 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 CDRL3 <400> 27 Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 CDRH1 <400> 28 Thr Ala Gly Met Gln 1 5 <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 CDRH2 <400> 29 Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 1 CDRH3 <400> 30 Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 CDRL1 <400> 31 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 CDRL2 <400> 32 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 CDRL3 <400> 33 Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 34 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 CDRH1 <400> 34 Thr Ala Gly Met Gln 1 5 <210> 35 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 CDRH2 <400> 35 Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 36 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TROP2 Antibody 2 CDRH3 <400> 36 Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 CDRL1 <400> 37 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 CDRL2 <400> 38 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 CDRL3 <400> 39 Gln His Phe Asp His Leu Pro Leu Ala 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 CDRH1 <400> 40 Ser Gly Asp Tyr Tyr Trp Thr 1 5 <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 CDRH2 <400> 41 Gly His Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 1 CDRH3 <400> 42 Asp Arg Val Thr Gly Ala Phe Asp Ile 1 5 <210> 43 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 CDRL1 <400> 43 His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn Ile Gly 1 5 10 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 CDRL2 <400> 44 His Gly Thr Asn Leu Asp Asp 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 CDRL3 <400> 45 Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 46 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 CDRH1 <400> 46 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Phe Ala Trp Asn 1 5 10 <210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 CDRH2 <400> 47 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR Antibody 2 CDRH3 <400> 48 Val Thr Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr 1 5 <210> 49 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Trastuzumab Light Chain <400> 49 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 50 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Trastuzumab Heavy Chain <400> 50 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 51 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified HER2 antibody Heavy Chain <400> 51 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 52 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab Light Chain <400> 52 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 53 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab Heavy Chain <400> 53 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 54 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified HER2 Antibody 2 Heavy Chain <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 55 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody Light Chain <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Ala 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 56 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody Heavy Chain <400> 56 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Asn 20 25 30 Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Glu Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Tyr Gly Gly Phe Ala Gly Gly Tyr Phe Asp Phe Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 57 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab CDRL1 <400> 57 Gln Asp Val Ser Ile Gly 1 5 <210> 58 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab CDRL2 <400> 58 Ser Ala Ser 1 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab CDRL3 <400> 59 Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab CDRH1 <400> 60 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr 1 5 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab CDRH2 <400> 61 Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 62 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pertuzumab CDRH3 <400> 62 Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody CDRL1 <400> 63 Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 64 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody CDRL2 <400> 64 Asp Ala Asn Thr Leu Gln Thr 1 5 <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody CDRL3 <400> 65 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Ala 1 5 <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody CDRH1 <400> 66 Arg Asn Phe Met His 1 5 <210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody CDRH2 <400> 67 Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Glu Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 68 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CDH6 Antibody CDRH3 <400> 68 Gly Val Tyr Gly Gly Phe Ala Gly Gly Tyr Phe Asp Phe 1 5 10

Claims (49)

  1. 식 (Rp-VII) :
    Figure pct00300

    [식 중,
    A1 은,
    Figure pct00301

    이고,
    Q 는, 티올기 또는 하이드록시기이고,
    PG1 은, 하이드록시기의 보호기이고, 및
    PG3 은, 아미노기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염의 제조 방법으로서,
    (공정 a1) 식 (I) :
    Figure pct00302

    [식 중,
    PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
    PG2 는 하이드록시기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물을, 이하의 식 (Rc-II-1) 및 (Rc-II-2) 로 이루어지는 군에서 선택되는 광학 활성의 포스피틸화제 (Rc-II) :
    Figure pct00303

    [식 중,
    R1 은, 수소 또는 메틸이고,
    R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고,
    여기서, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및
    상기 페닐은, 비치환이거나, 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다.]
    와 반응시켜 식 (Rc-III) :
    Figure pct00304

    [식 중,
    PG1, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
    B1 은,
    Figure pct00305

    이고, R1 및 R2 는, 위에서 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 a2) 얻어진 식 (Rc-III) 의 화합물을, 식 (IV) :
    Figure pct00306

    [식 중,
    A2 는,
    Figure pct00307

    이고, 및
    PG4 는, 아미노기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염과, 활성화제의 존재하에서 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로 처리하고, 추가로 티오화제와 반응시키고, 계속해서 PG2 를 탈보호하여, 식 (Rc-V) :
    Figure pct00308

    [식 중,
    A2, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고,
    B2 는,
    Figure pct00309

    이고, 및
    PG6 은, 아미노기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
    (공정 a3) 얻어진 식 (Rc-V) 의 화합물 또는 그 염을, 축합제의 존재하에서 고리화시키고, 이어서, 티오화제 또는 산화제와 반응시켜, 식 (Rc-VI) :
    Figure pct00310

    [식 중,
    A2, B2, Q, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 그리고
    (공정 a4) 얻어진 식 (Rc-VI) 의 화합물의 티오인산 부위의 보호기인 B2, 및 A2 중의 보호기인 PG4 를 탈보호하여, 식 (Rp-VII) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    공정 a2 에 있어서, 티오화제와 반응시킨 후이고, PG2 를 탈보호하기 전에 얻어지는 중간체가, 식 (Rc-V0) :
    Figure pct00311

    [식 중,
    A2, B2, PG1, PG2 및 PG3 은, 제 1 항에 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물 또는 그 염인, 방법.
  3. 식 (Sp-VII) :
    Figure pct00312

    [식 중,
    A1 은,
    Figure pct00313

    이고,
    Q 는, 티올기 또는 하이드록시기이고,
    PG1 은, 하이드록시기의 보호기이고, 및
    PG3 은, 아미노기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염의 제조 방법으로서,
    (공정 a1) 식 (I) :
    Figure pct00314

    [식 중,
    PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
    PG2 는 하이드록시기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물을, 이하의 식 (Sc-II-1) 및 (Sc-II-2) 로 이루어지는 군에서 선택되는 광학 활성의 포스피틸화제 (Sc-II) :
    Figure pct00315

    [식 중,
    R1 은, 수소 또는 메틸이고,
    R2 는, 수소, 탄소수 1 ∼ 3 의 알킬 또는 페닐이고,
    여기서, 상기 알킬은, 비치환이거나, 또는 1 개 이상의 페닐, 토실 혹은 디페닐메틸실릴로 치환되어 있고, 및
    상기 페닐은, 비치환이거나, 또는 니트로 혹은 메톡시로 치환되어 있다.]
    와 반응시켜 식 (Sc-III) :
    Figure pct00316

    [식 중,
    PG1, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고, 및
    B1S 는,
    Figure pct00317

    이고, R1 및 R2 는, 위에서 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 a2) 얻어진 식 (Sc-III) 의 화합물을, 식 (IV) :
    Figure pct00318

    [식 중,
    A2 는,
    Figure pct00319

    이고, 및
    PG4 는, 아미노기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염과, 활성화제의 존재하에서 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제로 처리하고, 추가로 티오화제와 반응시키고, 계속해서 PG2 를 탈보호하여, 식 (Sc-V) :
    Figure pct00320

    [식 중,
    A2, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같고,
    B2S 는,
    Figure pct00321

    이고, 및
    PG6 은, 아미노기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
    (공정 a3) 얻어진 식 (Sc-V) 의 화합물 또는 그 염을, 축합제의 존재하에서 고리화시키고, 이어서, 티오화제 또는 산화제와 반응시켜, 식 (Sc-VI) :
    Figure pct00322

    [식 중,
    A2, B2S, Q, PG1 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 그리고
    (공정 a4) 얻어진 식 (Sc-VI) 의 화합물의 티오인산 부위의 보호기인 B2S, 및 A2 중의 보호기인 PG4 를 탈보호하여, 식 (Sp-VII) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
  4. 제 2 항에 있어서,
    공정 a2 에 있어서, 티오화제와 반응시킨 후이고, PG2 를 탈보호하기 전에 얻어지는 중간체가, 식 (Sc-V0) :
    Figure pct00323

    [식 중,
    A2, B2S, PG1, PG2 및 PG3 은, 제 2 항에 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물 또는 그 염인, 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 a2 에 있어서의 활성화제가, 1-페닐이미다졸, 벤조이미다졸, 1-메틸벤조이미다졸, 1-시아노메틸피페리딘, 1-피롤리딘아세토니트릴, 1-(시아노메틸)이미다졸, 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 a2 에 있어서의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 무수 아세트산, N-숙신이미딜아세테이트, 펜타플루오로페닐아세테이트, 에틸트리플루오로아세테이트, 메틸트리플루오로아세테이트, 펜타플루오로페닐트리플루오로아세테이트, 트리플루오로아세틸벤조트리아졸, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 1-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, 디-tert-부틸디카보네이트, 9-플루오레닐메틸펜타플루오로페닐카보네이트, 1-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]벤조트리아졸, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, N-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐옥시)숙신이미드, N-카르보벤질옥시숙신이미드, 디벤질디카보네이트, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드, N-에톡시카르보닐프탈이미드, 및 메틸이미다졸-1-카르복실레이트로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 a2 에 있어서의 티오화제가, 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, 3H-1,2-벤조디티올-3-온-1,1-디옥사이드, 5-페닐-3H-1,2,4-디티아졸-3-온 및 [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 a3 에 있어서의 축합제가, 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스포리난 2-옥사이드, 디메틸클로로포스페이트, 디에틸클로로포스페이트, 2-클로로-2-옥소-1,3,2-디옥사포스포란, 1H-벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트, 클로로트리피롤리디노헥사플루오로포스페이트, 브로모트리피롤리디노헥사플루오로포스페이트, 및 프로필포스폰산 무수물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 a3 에 있어서의 티오화제가, 크산탄하이드라이드, 비스(페닐아세틸)디술파이드, 3H-1,2-벤조디티올-3-온-1,1-디옥사이드, 5-페닐-3H-1,2,4-디티아졸-3-온 및 [(N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노]-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 a3 에 있어서의 산화제가, 요오드, tert-부틸하이드로퍼옥사이드, 3-클로로과벤조산, 과산화수소, 과요오드산, 과망간산칼륨 및 산소로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    PG4 가, 벤질, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐인, 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    PG6 이, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, 메톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐인, 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 (IV) 의 화합물 또는 그 염이, 이하의 공정 :
    (공정 a5) 식 (VIII) :
    Figure pct00324

    [식 중,
    A2 는, 제 1 항에 정의한 바와 같고, 및
    PG5 는, 하이드록시기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을, 아인산에스테르와 반응시켜, 식 (IX) :
    Figure pct00325

    [식 중, A2 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
    혹은,
    (공정 a5') 식 (VIII') :
    Figure pct00326

    [식 중,
    A1 은 제 1 항에 정의한 바와 같고, 및
    PG5 는 위에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을, 아인산에스테르와 반응시켜, 식 (IX') :
    Figure pct00327

    [식 중, A1 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 및
    (공정 a5") 얻어진 식 (IX') 의 화합물 또는 그 염을, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (IX) :
    Figure pct00328

    [식 중, A2 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정
    그리고
    (공정 a6) 공정 a5 또는 공정 a5" 에서 얻어진 식 (IX) 의 화합물의 5' 수산기의 보호기인 PG5 를 탈보호하여, 식 (IV) 의 화합물 또는 그 염을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    공정 a5 및 공정 a5' 의 아인산에스테르가, 아인산디페닐, 아인산메틸, 아인산디에틸, 및 아인산디부틸로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  15. 제 13 항 또는 제 14 항에 있어서,
    공정 a5" 의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 무수 아세트산, 아세틸클로라이드, N-숙신이미딜아세테이트, 펜타플루오로페닐아세테이트, 1-아세틸-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘, N-메톡시디아세트아미드, N-아세틸이미다졸, 트리플루오로아세트산 무수물, 비스트리플루오로아세트아미드, 에틸트리플루오로아세테이트, 메틸트리플루오로아세테이트, 펜타플루오로페닐트리플루오로아세테이트, 트리플루오로아세틸벤조트리아졸, S-에틸트리플루오로티오아세테이트, N-메틸비스트리플루오로아세트아미드, 트리플루오로아세틸트리플레이트, 1-트리플루오로아세틸이미다졸, 무수 벤조산, 벤조일클로라이드, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 펜타플루오로페닐벤조에이트, 벤조일트리플루오로메탄술포네이트, 3-벤조일티아졸리딘-2-티온, tert-부틸페닐카보네이트, N-(tert-부톡시카르보닐옥시)프탈이미드, 2-(tert-부톡시카르보닐티오)-4,6-디메틸피리딘, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, tert-부틸카르바제이트, 2-(tert-부톡시카르보닐옥시이미노)-2-페닐아세토니트릴, 1-tert-부톡시카르보닐-1,2,4-트리아졸, N-tert-부톡시카르보닐이미다졸, 디-tert-부틸디카보네이트, 9-플루오레닐메틸펜타플루오로페닐카보네이트, 클로로포름산 9-플루오레닐메틸, 9-플루오레닐메틸카르바제이트, 19-플루오레닐메틸카바메이트, 1-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]벤조트리아졸, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐옥시]숙신이미드, 클로로포름산알릴, 디알릴디카보네이트, N-(알릴옥시카르보닐옥시)숙신이미드, 알릴페닐카보네이트, N-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐옥시)숙신이미드, 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸, 클로로포름산벤질, 벤질카르바제이트, 벤질페닐카보네이트, N-카르보벤질옥시숙신이미드, 디벤질디카보네이트, 4-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]니트로벤젠, 2-(트리메틸실릴)에틸-3-니트로-1H-1,2,4-트리아졸-1-카르복실레이트, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐옥시]숙신이미드, N-에톡시카르보닐프탈이미드, 클로로포름산에틸, 디에틸디카보네이트, 에틸이미다졸-1-카르복실레이트, 2-에톡시-1-(에톡시카르보닐)-1,2-디하이드로퀴놀린, 클로로포름산메틸, 디메틸카보네이트, 디메틸디카보네이트, 또는 메틸이미다졸-1-카르복실레이트로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  16. 제 1 항, 제 2 항, 제 5 항 내지 제 9 항 및 제 11 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 1 항에 기재된 공정 a3 에 있어서, 상기 티오화제를 사용함으로써, 식 (Rp-VII) 의 화합물 (식 중, Q 가 티올기이다) 또는 그 염을 얻는 것을 특징으로 하는, 방법.
  17. 제 16 항에 있어서,
    제 1 항에 기재된 공정 a4 에 있어서, 얻어진 식 (Rp-VII) 의 화합물 (식 중, Q 는 티올기이다) 을, 그 염으로 변환시키기 전에, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 처리하거나, 및/또는, 그 염으로 변환시킨 후에, 결정화하여, 식 (Rp, Rp-VII') :
    Figure pct00329

    의 화합물 또는 그 염을 얻는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  18. 제 17 항에 있어서,
    추가로
    (공정 a7) 얻어진 식 (Rp, Rp-VII') 의 화합물의 보호기인 PG1 및 PG3 을 탈보호하여, 식 (Rp, Rp-X) :
    Figure pct00330

    [식 중,
    A1 은, 제 1 항에 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정, 및
    (공정 a8) 얻어진 식 (Rp, Rp-X) 의 화합물 또는 그 염을,
    식 (XI) :
    Figure pct00331

    로 나타내는 화합물 또는 그 활성 에스테르체와 축합시켜, 식 (Rp, Rp-XII) :
    Figure pct00332

    [식 중, A1 은, 위에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    추가로,
    (공정 a9) 얻어진 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물 또는 그 염과, 항체 또는 그 항체의 기능성 단편 (이하, Ab 라고 한다) 을 결합시켜, 식 (Rp, Rp-XIII) :
    Figure pct00333

    [식 중,
    m 은 1 내지 10 의 범위이고,
    Ab 의 당사슬은, 임의로 리모델링되어 있고,
    Ab 는, 수식되어 있어도 되는 아미노산 잔기의 측사슬로부터 직접 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 결합하거나, 또는 Ab 의 당사슬 또는 리모델링된 당사슬로부터 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물에 결합하고 있고,
    A1 은,
    Figure pct00334

    이다.]
    으로 나타내는 항체-면역 부활화제 콘주게이트, 또는 그것들의 혼합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
  20. 제 19 항에 있어서,
    공정 a9 에 있어서, 식 (Rp, Rp-XII) 의 화합물 또는 그 염과 Ab 를, 변형 촉진형 아지드-알킨 부가 고리화 반응 (strain-promoted azide-alkyne cycloaddition) 반응에 의해 결합시키는 것을 특징으로 하는, 방법.
  21. 제 19 항 또는 제 20 항에 있어서,
    항체가, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 DLL3 항체, 항 FAP 항체, 항 CDH11 항체, 항 CDH6 항체, 항 A33 항체, 항 CanAg 항체, 항 CD19 항체, 항 CD20 항체, 항 CD22 항체, 항 CD30 항체, 항 CD33 항체, 항 CD56 항체, 항 CD70 항체, 항 CD98 항체, 항 TROP2 항체, 항 CEA 항체, 항 Cripto 항체, 항 EphA2 항체, 항 G250 항체, 항 MUC1 항체, 항 GPNMB 항체, 항 Integrin 항체, 항 PSMA 항체, 항 Tenascin-C 항체, 항 SLC44A4 항체, 항 Mesothelin 항체, 항 ENPP3 항체, 항 CD47 항체, 항 EGFR 항체, 항 GPR20 항체, 및 항 DR5 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 항체인, 방법.
  22. 식 (Rc-III) :
    Figure pct00335

    [식 중,
    B1 은, 제 1 항에 정의한 바와 같고,
    PG1 은, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고,
    PG2 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸이고,
    PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이다.]
    으로 나타내는 화합물.
  23. 식 (Rc-V0) :
    Figure pct00336

    [식 중,
    A2 및 B2 는, 제 1 항에 정의한 바와 같고,
    PG1 은, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고,
    PG2 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸, 또는 트리틸이고,
    PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이다.]
    으로 나타내는 화합물 또는 그 염.
  24. 식 (Rc-V) :
    Figure pct00337

    [식 중,
    A2 및 B2 는, 제 1 항에 정의한 바와 같고,
    PG1 은, tert-부틸디메틸실릴, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, 또는 tert-부틸디페닐실릴이고,
    PG3 은, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염.
  25. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 (I) 의 화합물 (식 중, PG1 은, tert-부틸디메틸실릴이다) 이, 이하의 공정 :
    (공정 b1) 식 (XIV) :
    Figure pct00338

    [식 중, PG2 는, 제 1 항에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물을, 식 (XV) :
    Figure pct00339

    [식 중,
    PG3 은, 제 1 항에 정의한 바와 같고, 및
    X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.]
    로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XVI) :
    Figure pct00340

    [식 중, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
    으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
    (공정 b2) 얻어진 식 (XVI) 의 화합물을, 실릴화제와 반응시켜, 이하의 식 (I') 의 화합물 및 식 (XVII) 의 화합물과의 혼합물 :
    Figure pct00341

    [식 중, PG2 및 PG3 은, 위에 정의한 바와 같다.]
    을 얻고, 이어서, 염기의 존재하에서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  26. 제 25 항에 있어서,
    공정 b1 의 반응이 염기의 존재하에서 실시되고, 그 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센인, 방법.
  27. 제 25 항 또는 제 26 항에 있어서,
    공정 b2 에 있어서, 식 (XVI) 의 화합물과 실릴화제의 반응을, 제 1 염기의 존재하에서 실시하여, 식 (I') 의 화합물과 식 (XVII) 의 화합물의 혼합물을 얻고, 이어서, 그 혼합물 중의 식 (XVII) 의 화합물을, 제 2 염기의 존재하에서, 식 (I') 의 화합물로 변환시켜, 식 (I') 의 화합물을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    제 1 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서,
    제 2 염기가, 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  30. 제 25 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 b2 의 실릴화제가, tert-부틸디메틸클로로실란, 또는 tert-부틸디메틸실릴트리플레이트인, 방법.
  31. 제 25 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 (XV) 의 화합물이, 이하의 공정 :
    (공정 b3) 식 (XVIII) :
    Figure pct00342

    [식 중, PG3 은, 제 1 항에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물을, 산 또는 염기의 존재하에서, 2-할로에탄올과 반응시켜, 식 (XV) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  32. 제 31 항에 있어서,
    공정 b3 의 염기가, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  33. 식 (XV) :
    Figure pct00343

    [식 중,
    PG3 이, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐이고, 및
    X 는, Cl, Br, 또는 I 이다.]
    로 나타내는 화합물.
  34. 제 13 항 내지 제 21 항 및 제 25 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 (VIII') 의 화합물
    [식 중,
    A1 은,
    Figure pct00344

    이고, 및
    PG5 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이다.]
    이, 이하의 공정 :
    (공정 c1) 식 (XIX) :
    Figure pct00345

    로 나타내는 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XX) :
    Figure pct00346

    으로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 c2) 얻어진 식 (XX) 의 화합물을, 가수 분해하여, 식 (XXI) :
    Figure pct00347

    로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 c3) 얻어진 식 (XXI) 의 화합물을, 염소화제와 반응시켜, 식 (XXII) :
    Figure pct00348

    로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 c4) 얻어진 식 (XXII) 의 화합물을, 식 (XXIII) :
    Figure pct00349

    으로 나타내는 화합물과 반응시켜, 식 (XXIV) :
    Figure pct00350

    로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 c5) 얻어진 식 (XXIV) 의 화합물로부터 벤조일기를 탈보호하여, 식 (XXV) :
    Figure pct00351

    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정,
    (공정 c6) 얻어진 식 (XXV) 의 화합물 또는 그 염을, 트리틸화제와 반응시켜, 식 (VIII') 의 화합물 (식 중, A1 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다) 또는 그 염을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  35. 제 34 항에 있어서,
    추가로,
    (공정 c7) 얻어진 식 (VIII') 의 화합물 (식 중, A1 및 PG5 는, 제 34 항에 정의한 바와 같다) 또는 그 염을, 실릴화제와 반응시키고, 이어서, 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXVII) :
    Figure pct00352

    [식 중,
    PG4 는, 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고,
    PG5 는, 위에 정의한 바와 같고, 및
    PG7 은, 하이드록시기의 보호기이다.]
    로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 그리고
    (공정 c8) 얻어진 식 (XXVII) 의 화합물의 보호기인 PG7 을 탈보호하여, 식 (VIII) :
    Figure pct00353

    [식 중,
    A2 는,
    Figure pct00354

    이고, 및
    PG4 및 PG5 는, 위에 정의한 바와 같다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염을 얻는 공정을 포함하는, 방법.
  36. 제 34 항 또는 제 35 항에 있어서,
    공정 c3 의 염소화제가, 트리클로로이소시아누르산, 클로로이소시아누르산, 디클로로이소시아누르산, N-클로로숙신이미드, 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인, 및 사염화탄소로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개이고,
    공정 c3 의 반응이, 트리스(2,4-디-tert-부틸페닐)포스파이트, 트리-o-톨릴포스파이트, 트리페닐포스파이트, 트리에틸포스파이트, 및 트리페닐포스핀으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 존재하에서 실시되는, 방법.
  37. 제 34 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 c4 가, 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산리튬, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 존재하에서 실시되는, 방법.
  38. 제 34 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 c6 의 트리틸화제가, 4,4-디메톡시트리틸클로라이드, 4-메톡시트리틸클로라이드, 2-클로로트리틸클로라이드, 및 트리틸클로라이드로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  39. 제 35 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 c7 의 아실화제 또는 알콕시카르보닐화제가, 벤조일화제, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐화제, tert-부톡시카르보닐화제, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐화제, 알릴옥시카르보닐화제, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐화제, 및 벤질옥시카르보닐화제로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개인, 방법.
  40. 제 34 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 (XXIII) 의 화합물이, 이하의 공정 :
    (공정 c9) 식 (XXVIII) :
    Figure pct00355

    로 나타내는 화합물로부터 tert-부톡시카르보닐기를 탈보호하여, 식 (XXIX) :
    Figure pct00356

    로 나타내는 화합물을 얻는 공정,
    (공정 c10) 얻어진 식 (XXIX) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하여, 식 (XXX) :
    Figure pct00357

    으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
    (공정 c11) 얻어진 식 (XXX) 의 화합물을, 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIII) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  41. 제 40 항에 있어서,
    상기 식 (XXVIII) 의 화합물이, 이하의 공정 :
    (공정 c12) 식 (XXXI) :
    Figure pct00358

    로 나타내는 화합물을, 1-메틸이미다졸의 존재하, tert-부톡시카르보닐화제와 반응시켜, 식 (XXXII) :
    Figure pct00359

    로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
    (공정 c13) 얻어진 식 (XXXII) 의 화합물을, 프로파르길알데히드디에틸아세탈과 반응시켜, 식 (XXVIII) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  42. 제 34 항 내지 제 39 항 및 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 (XXIV) 의 화합물이, 상기 공정 c4 대신에, 이하의 공정 :
    (공정 c14) 상기 식 (XXII) 의 화합물을, 상기 식 (XXIX) 의 화합물과 반응시켜, 식 (XXXIII) :
    Figure pct00360

    으로 나타내는 화합물을 얻는 공정, 및
    (공정 c15) 얻어진 식 (XXXIII) 의 화합물을, 촉매의 존재하에서, 알킨의 환원 반응, 이어서 환원적 아미노화 반응을 실시하고, 추가로 벤조일화제와 반응시켜, 식 (XXIV) 의 화합물을 얻는 공정에 의해 제조되는, 방법.
  43. 식 (XX) :
    Figure pct00361

    으로 나타내는 화합물.
  44. 식 (XXII) :
    Figure pct00362

    로 나타내는 화합물.
  45. 식 (XXIV) :
    Figure pct00363

    로 나타내는 화합물.
  46. 식 (XXV) :
    Figure pct00364

    로 나타내는 화합물 또는 그 염.
  47. 식 (VIII'-1) :
    Figure pct00365

    [식 중, PG5 는, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이다.]
    로 나타내는 화합물 또는 그 염.
  48. 식 (XXVII) :
    Figure pct00366

    [식 중,
    PG4 가, 벤조일, 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 또는 벤질옥시카르보닐이고,
    PG5 가, 4,4'-디메톡시트리틸, 4-메톡시트리틸, 2-클로로트리틸 또는 트리틸이고, 및
    PG7 이, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, tert-부틸디메틸실릴, tert-부틸디페닐실릴, 또는 트리페닐실릴이다.]
    로 나타내는 화합물.
  49. 식 (XXVIII) :
    Figure pct00367

    로 나타내는 화합물.
KR1020237029436A 2021-02-01 2022-01-31 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 신규 제조 방법 KR20230142544A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2021-014624 2021-02-01
JP2021014624 2021-02-01
JP2021066316 2021-04-09
JPJP-P-2021-066316 2021-04-09
PCT/JP2022/003512 WO2022163846A1 (ja) 2021-02-01 2022-01-31 抗体－免疫賦活化剤コンジュゲートの新規製造方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230142544A true KR20230142544A (ko) 2023-10-11

Family

ID=82654680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237029436A KR20230142544A (ko) 2021-02-01 2022-01-31 항체-면역 부활화제 콘주게이트의 신규 제조 방법

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20240150390A1 (ko)
EP (1) EP4286393A4 (ko)
JP (1) JPWO2022163846A1 (ko)
KR (1) KR20230142544A (ko)
BR (1) BR112023012932A2 (ko)
CA (1) CA3207210A1 (ko)
IL (1) IL304855A (ko)
TW (1) TW202241454A (ko)
WO (1) WO2022163846A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024024935A1 (ja) * 2022-07-29 2024-02-01 第一三共株式会社 抗腫瘍効果を有する抗体薬物複合体の新規製造方法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005092909A1 (ja) 2004-03-25 2005-10-06 Toudai Tlo, Ltd. 立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法
WO2014189805A1 (en) 2013-05-18 2014-11-27 Auro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
WO2014189806A1 (en) 2013-05-18 2014-11-27 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for inhibiting "stimulator of interferon gene" dependent signalling
WO2016012305A1 (de) 2014-07-23 2016-01-28 Wacker Chemie Ag Härtbare organopolysiloxanzusammensetzungen
WO2016145102A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene" -dependent signalling
WO2017093933A1 (en) 2015-12-03 2017-06-08 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Cyclic purine dinucleotides as modulators of sting
WO2018060323A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cyclic dinucleotide compounds
WO2020050406A1 (ja) 2018-09-06 2020-03-12 第一三共株式会社 新規環状ジヌクレオチド誘導体及びその抗体薬物コンジュゲート
WO2021177438A1 (ja) 2020-03-06 2021-09-10 第一三共株式会社 新規環状ジヌクレオチド誘導体を含む抗体薬物コンジュゲート

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP1392359B2 (en) 2001-05-11 2013-03-13 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Specific binding proteins and uses thereof
HU230378B1 (hu) 2001-11-01 2016-03-29 Uab Research Foundation Anti-DR5 ellenanyagok és anti-DR4 ellenanyagok és más terápiás ágensek kombinációi
HUP0600340A3 (en) 2002-07-15 2011-06-28 Genentech Inc Methods for identifying tumors that are responsive to treatment with anti-erbb2 antibodies
US7662387B2 (en) 2003-02-20 2010-02-16 Seattle Genetics Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
EA016186B1 (ru) 2005-09-26 2012-03-30 Медарекс, Инк. Человеческие моноклональные антитела к cd70 и их применение
HUE032301T2 (en) 2007-08-30 2017-09-28 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-EPHA2 antibody
US9790252B2 (en) 2009-07-01 2017-10-17 Cornell University 2-fluorinated riboses and arabinoses and methods of use and synthesis
BR112012000828A8 (pt) * 2009-07-06 2017-10-10 Ontorii Inc Novas pró-drogas de ácido nucleico e métodos de uso das mesmas
JP5566226B2 (ja) 2009-09-03 2014-08-06 旭化成株式会社 １１糖シアリルオリゴ糖ペプチドの製造方法
KR102584005B1 (ko) 2012-10-11 2023-09-27 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 글리신아미드 화합물의 제조 방법
WO2014124430A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Emory University Nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
EP3043803B1 (en) 2013-09-11 2022-04-27 Emory University Nucleotide and nucleoside compositions and their uses
RU2743077C2 (ru) 2013-12-25 2021-02-15 Дайити Санкио Компани, Лимитед Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство
JP6462006B2 (ja) 2014-06-04 2019-01-30 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ Ｓｔｉｎｇのモジュレーターとしての環式ジヌクレオチド
US11559581B2 (en) 2015-01-09 2023-01-24 Oxford University Innovation Limited Antibody conjugates and methods of making the antibody conjugates
KR102493562B1 (ko) 2016-07-01 2023-01-30 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 hANP-Fc 함유 분자 콘주게이트
US11591362B2 (en) * 2017-03-29 2023-02-28 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Orthogonal protecting groups for the preparation of stereodefined phosphorothioate oligonucleotides
TW202330036A (zh) 2017-05-15 2023-08-01 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物之製造方法
US11597744B2 (en) * 2017-06-30 2023-03-07 Sirius Therapeutics, Inc. Chiral phosphoramidite auxiliaries and methods of their use
TWI820044B (zh) 2017-09-29 2023-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005092909A1 (ja) 2004-03-25 2005-10-06 Toudai Tlo, Ltd. 立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法
WO2014189805A1 (en) 2013-05-18 2014-11-27 Auro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
WO2014189806A1 (en) 2013-05-18 2014-11-27 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for inhibiting "stimulator of interferon gene" dependent signalling
WO2016012305A1 (de) 2014-07-23 2016-01-28 Wacker Chemie Ag Härtbare organopolysiloxanzusammensetzungen
WO2016145102A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene" -dependent signalling
WO2017093933A1 (en) 2015-12-03 2017-06-08 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Cyclic purine dinucleotides as modulators of sting
WO2018060323A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cyclic dinucleotide compounds
WO2020050406A1 (ja) 2018-09-06 2020-03-12 第一三共株式会社 新規環状ジヌクレオチド誘導体及びその抗体薬物コンジュゲート
WO2021177438A1 (ja) 2020-03-06 2021-09-10 第一三共株式会社 新規環状ジヌクレオチド誘導体を含む抗体薬物コンジュゲート

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. 8. 2539-2544
J. Am. Chem. Soc. 2002. 124. 4962-4963
J. Am. Chem. Soc. 2003. 125. 8307-8317
J. Am. Chem. Soc. 2008. 130. 16031-16037
J. Med. Chem. 2016. 59. 10253-10267
Mol. Cell, 2013, 51, 226-235
Sci. Rep. 2016, 6, 19049
Science 2018. 361. 1234-1238
Tetrahedron Lett. 1998. 39. 2491-2494

Also Published As

Publication number Publication date
EP4286393A1 (en) 2023-12-06
WO2022163846A1 (ja) 2022-08-04
EP4286393A4 (en) 2024-06-26
CA3207210A1 (en) 2022-08-04
JPWO2022163846A1 (ko) 2022-08-04
TW202241454A (zh) 2022-11-01
US20240150390A1 (en) 2024-05-09
IL304855A (en) 2023-09-01
BR112023012932A2 (pt) 2023-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11583590B2 (en) Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate and method of use thereof for treating a tumor
KR102567590B1 (ko) 신규 고리형 디뉴클레오티드 유도체 및 그 항체 약물 콘쥬게이트
EP3950061A1 (en) Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3949988A1 (en) Combination of antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate and parp inhibitor
EP3949987A1 (en) Anti-her2 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP4115909A1 (en) Antibody-drug conjugate including novel cyclic dinucleotide derivative
BR112021009251A2 (pt) conjugado anticorpo-fármaco, anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo, polinucleotídeo, vetor de expressão, célula hospedeira, composição farmacêutica, e, métodos para produção de um anticorpo com glicano remodelado, de um conjugado anticorpo-fármaco, do anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo e para tratamento de um tumor.
WO2022163846A1 (ja) 抗体－免疫賦活化剤コンジュゲートの新規製造方法
WO2024024935A1 (ja) 抗腫瘍効果を有する抗体薬物複合体の新規製造方法
CN116867795A (zh) 抗体－免疫刺激剂偶联物的新型制造方法
RU2809547C2 (ru) Новое производное циклического динуклеотида и его конъюгат антитело-лекарственное средство

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination