WO2019189350A1 - κ－カゼイングリコマクロペプチドを含む組成物の製造方法 - Google Patents

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WO2019189350A1
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gmp
treatment
aqueous solution
membrane
permeate
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祥二郎 玉置
伊藤　大輔
博文 福留
拓 中埜
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雪印メグミルク株式会社
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    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a composition containing ⁇ -casein glycomacropeptide (hereinafter also referred to as “GMP”).
  • GMP ⁇ -casein glycomacropeptide
  • LA ⁇ -lactalbumin
  • GMP one of the sialic acids contained in milk, is also called caseino macropeptide (hereinafter also referred to as “CMP”), and is produced when rennet or pepsin is allowed to act on ⁇ casein in milk. It is a binding peptide. It is conventionally known that GMP is contained in cheese whey and rennet casein whey. The molecular weight of GMP is about 9,000 Da, and it is said that it exists as a monomer below pH 4, and as a polymer (molecular weight above 50,000 Da) above pH 4.
  • Breast milk contains about 3 to 5 times as much sialic acids as milk, and these sialic acids are also considered to function as an infection protective factor for infants.
  • GMP which is one of sialic acids
  • LA is a major protein that accounts for approximately 30% of the protein contained in breast milk.
  • LA is known to have various physiologically active functions such as gastric mucosa protective action.
  • LA is a protein having a molecular weight of about 14,000 Da.
  • Patent Document 1 (1) obtains a permeate obtained by ultrafiltration membrane treatment with a molecular weight cut-off of 10,000 to 50,000 Da after adjusting the milk raw material containing GMP to less than pH 4, and this permeate. Is produced using a membrane having a molecular weight cut-off of 50,000 Da or less, and a method for producing GMP is disclosed. Patent Document 1 describes that the permeate obtained in (1) is again adjusted to pH 4 or higher and then concentrated using an ultrafiltration membrane having a fractional molecular weight of 50,000 Da or less, or obtained in (1). A method for obtaining a composition having a high GMP content by concentrating the permeate using an ultrafiltration membrane having a fractional molecular weight of 10,000 Da or less is disclosed.
  • whey protein whey adjusted to pH 5.0 or higher is heated at a temperature of 80 ° C. or higher to produce whey protein aggregates, and the aggregates are microfiltration membranes or fractions having a pore size of 0.5 ⁇ m or less.
  • a method for producing a composition having a high GMP content characterized in that GMP is recovered in a membrane permeate by separation with an ultrafiltration membrane having a molecular weight of 50,000 Da or more.
  • US Pat. No. 6,053,097 comprises a step of providing a whey-derived feed comprising CMP and at least one additional protein, having a pH of at most 4, and an ultrafiltration membrane that allows monomer CMP to pass through.
  • a filter to ultrafilter the whey-derived feed, thereby providing a UF permeate enriched for CMP and a UF residue, and a first composition derived from the UF permeate Containing a caseino macropeptide comprising: contacting a product with a cation exchange material; and collecting a fraction of the first composition that does not bind to the cation exchange material, thereby obtaining the CMP-containing composition.
  • a method for producing the composition is disclosed.
  • Patent Document 4 discloses an ultrafiltration membrane in which the whey is cooled, the pH is adjusted to 6 to 9 after addition of Ca and / or Mg, and the precipitate formed after heating and holding at 40 to 60 ° C. has a membrane pore diameter of 1 ⁇ m or less. Removing the concentrated solution by treating with a membrane having a pore size of 50,000 Da or less after adjusting the pH of the obtained filtrate to 4 or more, and collecting the concentrated solution with a pH of 3.0 to 5 After adjusting to 0.0, heat and hold at 40 to 55 ° C.
  • Example 1 described in Patent Document 1 assuming that the protein concentration in 1 kg of whey protein concentrate is 80% by mass and the GMP content with respect to the total protein concentration is 15% by mass, it can be obtained by freeze-drying the concentrated solution. Based on 54 g of GMP, the GMP recovery is 45%. On the other hand, when the protein concentration in Gouda cheese whey 500L was assumed to be 0.7 mass% using Example 2 and the GMP content relative to the total protein concentration was 15 mass%, it was obtained by concentration, desalting, and lyophilization. Based on 5.7 g of GMP, the GMP recovery rate was 1.1%, and when the starting material was cheese whey, there was a problem that the recovery rate was significantly reduced. Moreover, although there was description regarding the purity of the obtained GMP composition in patent document 2, there was no description regarding a recovery rate, and it was unknown.
  • the first object of the present invention is to provide a method for producing a composition containing GMP with a high yield even if the starting material is cheese whey or whey protein concentrate, although the operation is simple. To do.
  • Patent Documents 1 to 3 have many essential steps and are complicated to operate, and require considerable time and labor to obtain the target product. Therefore, an unprecedented novel method for producing a composition containing GMP that can solve the above problems has been demanded.
  • This invention makes it a 2nd subject to provide the manufacturing method of the composition containing GMP with easy operation and shortening manufacturing time.
  • Patent Documents 1 to 3 In addition, in the techniques disclosed in Patent Documents 1 to 3, obtaining LA is not disclosed at all, and many steps are required to obtain a target product. In addition, Patent Documents 3 and 4 that disclose recovery of both GMP and LA have many essential steps, are very complicated in operation, and require considerable time and labor to obtain a target product. there were. Therefore, an unprecedented novel method for producing a composition containing GMP and LA that can solve the above-described problems has been demanded. It is a third object of the present invention to provide a method for producing a composition containing GMP and LA that is easy to operate and has a short production time.
  • GMP has a molecular weight of about 9,000 Da, and is said to exist as a monomer below pH 4, and as a polymer (molecular weight above 50,000 Da) above pH 4.
  • an aqueous solution of milk raw material containing GMP and having a pH of 4 to 9 was prepared, and hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions, metal ions, It has been found that a composition containing GMP can be obtained from a permeate obtained by treating with a membrane having a fractional molecular weight of 9,000 to 50,000 Da, even though the pH is 4 or more. , Completed the invention.
  • the present invention includes the following configurations.
  • a composition containing GMP comprising: a step of obtaining an aqueous solution after pretreatment, and a step of (C) subjecting the aqueous solution after pretreatment to membrane treatment using a membrane having a fractional molecular weight of 9,000 Da or more and 300,000 Da or less. Manufacturing method.
  • a composition containing GMP comprising: a step of obtaining an aqueous solution after pretreatment, and a step of (C) subjecting the aqueous solution after pretreatment to membrane treatment using a membrane having a fractional molecular weight of 9,000 Da or more and 300,000 Da or less. Manufacturing method.
  • GMP has a molecular weight of about 9,000 Da, and is said to exist as a monomer below pH 4, and as a polymer (molecular weight above 50,000 Da) above pH 4.
  • an aqueous solution of milk raw material containing GMP and having a pH of 4 to 9 is prepared, and hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated in the aqueous solution.
  • the present inventors have found that a composition containing GMP can be obtained from a permeate obtained by treatment with a membrane having a molecular weight cut off of 9,000 to 50,000 Da even though the pH is 4 or more. .
  • the present invention includes the following configurations.
  • A a step of preparing an aqueous solution containing a milk raw material having a pH of 4 to 9, and (B) producing hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions in the aqueous solution;
  • C a step of subjecting the aqueous solution in which the hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated to a membrane treatment using a membrane having a fractional molecular weight of 9,000 to 50,000 Da;
  • a process for producing a composition comprising GMP comprising: (2)
  • D The method for producing the composition according to (1), further comprising a step of obtaining a composition containing GMP as the permeate in the step (C).
  • the manufacturing method of the composition as described in (1) or (2) which does not include the process of adjusting pH of the aqueous solution containing a milk raw material from less than 4 to 4 or more, (4) (E) The composition according to any one of (1) to (3), further comprising a step of subjecting the concentrated liquid obtained in the step (C) to the membrane treatment again to obtain a repermeated liquid. Manufacturing method, (5) (F) The method according to any one of (1) to (4), further comprising a step of concentrating the permeate and / or the repermeate using a membrane having a molecular weight cut-off smaller than 9,000.
  • composition Production method of composition, and (6) The composition according to any one of (1) to (5), wherein the molecular weight cut-off of the membrane used in the step (C) is 30,000 to 50,000 Da Manufacturing method.
  • C. Third embodiment As a result of intensive studies by the inventors, an aqueous solution containing GMP and LA and having a pH of 4 to 9 is prepared, and hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions and metal ions are generated in the aqueous solution. The inventors have found that a composition containing GMP and LA can be obtained from a permeate obtained by membrane treatment using a membrane having a fractional molecular weight of 300,000 Da or less, and completed the invention. Specifically, the present invention includes the following configurations.
  • A a step of preparing an aqueous solution containing a milk raw material having a pH of 4 to 9, and (B) producing hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions in the aqueous solution; (C) generating metal ions; (D) subjecting the aqueous solution in which the hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions and metal ions are generated to membrane treatment using a membrane having a molecular weight cut off of 9,000 to 300,000 Da;
  • a method for producing a composition comprising GMP and LA characterized by comprising: (2)
  • E The method for producing the composition according to (1), further comprising a step of obtaining a composition containing GMP and LA as the permeate in the step (D).
  • composition according to (1) or (2) which does not include a step of adjusting the pH of the aqueous solution containing the milk raw material from less than 4 to 4 or more before the step (D), (4) The composition according to any one of (1) to (3), further comprising: (F) subjecting the concentrated liquid obtained in the step (D) to the membrane treatment again to obtain a repermeated liquid. And (5) (G) further comprising the step of concentrating the permeate and / or repermeate using a membrane having a molecular weight cut-off smaller than 9,000.
  • the manufacturing method of the composition in any one.
  • the invention according to the first embodiment provides an unprecedented method for producing a composition containing a novel GMP.
  • a method for producing a composition containing GMP which is simple in operation but has a high yield regardless of whether the starting material is cheese whey or whey protein concentrate.
  • the invention according to the second embodiment provides an unprecedented novel method for producing a composition containing GMP that can solve the above-mentioned problems.
  • GMP can be recovered in a high yield by a simple technique.
  • the invention according to the third embodiment provides an unprecedented novel method for producing a composition containing GMP and LA that can solve the above-mentioned problems.
  • GMP and LA can be recovered in a high yield by a simple technique. There is no report yet on a method capable of recovering GMP and LA at a high yield and with a small number of steps.
  • FIG. 1 is a flowchart of a method for producing a composition containing GMP.
  • GMP which is a sialic acid
  • whey protein concentrate WPC
  • WPI whey protein isolate
  • desalted cheese whey powder non-desalted cheese whey powder, and the like.
  • the same material as GMP can be used for LA.
  • an aqueous solution of the above-described milk raw material is prepared.
  • the solid concentration at this time is preferably 0.001% by mass or more, more preferably 0.001% by mass to 35% by mass, and 0.01% by mass to 20% by mass. Is most preferred.
  • the pH of the aqueous solution containing the milk raw material is preferably in the range of 4 to 9. This is because the selectivity of the permeated liquid and the concentrated liquid in the concentration treatment step is enhanced by satisfying the pH conditions, the conditions of carbonic acid (hydrogen) ions and metal ions, and the conditions of the permeable membrane described later.
  • the pH of the aqueous solution containing the milk raw material is within the range of 4 to 9, it is not necessary to adjust the pH, but when the pH of the aqueous solution containing the milk raw material is less than 4 or more than 9, the pH is 4 to 9. You may adjust so that it may become.
  • any pH can be used as long as it can be used for the production of foods and pharmaceuticals to be taken orally.
  • the reagent for adjusting the pH from above 9 to 9 or less include the use of one or more acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, lactic acid, etc., and the reagent for adjusting the pH from less than 4 to 4 or more
  • the use of one or more bases such as sodium hydroxide and potassium hydroxide can be exemplified.
  • the pH may be 4 to 9, preferably greater than 4 and 9 or less, more preferably pH 4.5 to 8.5, still more preferably pH 5.0 to 8.5, and pH 5.5. To 8.5 is more preferred, and pH 6.0 to 8.5 is most preferred.
  • hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated in an aqueous solution containing a milk raw material and having a pH of 4 to 9.
  • the bicarbonate ions and / or carbonate ions may be generated simultaneously with the preparation of the aqueous solution containing the milk raw material and having a pH of 4 to 9, but in order to prevent the disappearance of the bicarbonate ions and / or carbonate ions, It is preferably generated after preparation.
  • carbonate (hydrogen) ion includes carbonate ion, bicarbonate ion, or both.
  • the bicarbonate ion and / or carbonate ion may be generated by any component or method as long as it generates carbonate ion and / or bicarbonate ion in an aqueous solution. These compounds and / or methods may be combined to produce carbonate ions and / or bicarbonate ions.
  • a method of adding carbon dioxide such as injecting gaseous carbon dioxide, adding liquid or solid carbon dioxide, a method of adding a bicarbonate such as sodium bicarbonate, potassium bicarbonate, calcium bicarbonate, ammonium bicarbonate, Examples thereof include a method of adding a carbonate such as sodium carbonate, potassium carbonate, ammonium carbonate, or calcium carbonate.
  • an aqueous solution in which these salts are dissolved in water to generate carbonate ions and / or bicarbonate ions may be added to the aqueous solution containing the milk ingredients.
  • Hydrogen carbonate or carbonate may be directly added to the aqueous solution.
  • a solution having a pH of 4 to 9 containing a milk raw material containing GMP is prepared, and hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated in the aqueous solution.
  • the concentration of bicarbonate ions and / or carbonate ions in the solution can be 0.001% by mass or more and 5% by mass or less. Specific ranges include 0.001 to 5 mass%, 0.0025 to 3 mass%, 0.005 to 2 mass%, 0.0075 to 2 mass%, 0.01 to 2 mass%, and 0.025. It can be ⁇ 2% by weight, or 0.05 ⁇ 2% by weight.
  • the light metal salt and / or transition metal salt used in the embodiment will be described.
  • the light metal salt and / or transition metal salt may be any as long as it contains a monovalent to trivalent cation of the light metal or transition metal, and one or more metal ions can be used.
  • Light metal ions and / or transition metal ions contained in light metal salts and / or transition metal salts include sodium, potassium, magnesium, calcium, manganese, iron, copper, zinc, etc., but are present in foods and humans Sodium, potassium, magnesium, calcium, manganese, iron, copper, zinc and the like are preferably used.
  • Examples of the light metal salt and / or transition metal salt include hydrochloride, sulfate, nitrate, acetate, lactate, carbonate, oxalate, phosphate, and the like.
  • inorganic salts and organic salts of light metals and / or transition metals mineral materials derived from milk, and whey minerals produced during the production of WPI and / or WPC can be used.
  • an ultrafiltration membrane having a molecular weight cut-off smaller than 9,000 when using cheese whey and rennet casein whey as raw materials, or when using raw materials obtained by adding a raw material containing GMP to acid whey, an ultrafiltration membrane having a molecular weight cut-off smaller than 9,000 Alternatively, a permeate containing whey mineral obtained when adjusting GMP by pretreatment with the above may be used.
  • an aqueous solution in which metal ions are generated by dissolving these salts may be added to an aqueous solution containing milk raw materials, or directly into an aqueous solution containing milk raw materials.
  • a light metal salt and / or carbonate By adding a light metal salt and / or carbonate, hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions and metal ions can be generated simultaneously.
  • metal ions When metal ions are generated in an aqueous solution containing milk raw materials, metal ions may be generated simultaneously with hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions in an aqueous solution containing milk raw materials and adjusted to pH 4-9. When not generating, it is preferable to generate metal ions after hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated.
  • the lower limit of the metal ion in the solution is 0.0001% by mass or more, 0.00025% by mass or more, 0.0005% by mass or more, 0.00075% by mass or more, or 0.001% by mass or more.
  • the upper limit of the concentration of metal ions in the solution can be 5% by mass or less, 3% by mass or less, or 2% by mass or less. Specific ranges are 0.0001-5 mass%, 0.00025-3 mass%, 0.0005-2 mass%, 0.00075-2 mass%, or 0.001-2 mass%. Can do.
  • Separatation membrane In the method for producing a composition containing GMP according to the embodiment, a bicarbonate ion and / or a carbonate ion, a light metal salt and / or a transition metal salt in an aqueous solution containing a milk raw material and having a pH of 4 to 9.
  • the resulting product is subjected to membrane treatment.
  • Any membrane can be used as long as the molecular weight cut off is 9,000 to 300,000 Da, preferably 10,000 to 300,000 Da, more preferably 20,000 to 100,000 Da. Preferably, 30,000 to 100,000 Da is most preferable.
  • the film material examples include polysulfone, polyether sulfone, tetrafluoroethylene, ceramic, hydrophilic films such as cellulose acetate, nitrocellulose, polyacrylonitrile, and aromatic polyamide, or charged films.
  • the membrane treatment method used in the method for producing the composition containing GMP according to the embodiment may be any method as long as it is a method commonly used in the treatment and production of foods and pharmaceuticals taken orally. Examples thereof include filtration in a flow system and diafiltration.
  • the permeate in this membrane treatment can be obtained as a composition containing GMP. It is not necessary to adjust the temperature of the solution during the membrane treatment, but it is preferably 0 ° C. or higher and 15 ° C. or lower in consideration of the growth of microorganisms.
  • FIG. 1 is a flowchart of a method for producing a composition containing GMP. The manufacturing method of the composition containing GMP is demonstrated using the flowchart of FIG. In addition, although the method example of FIG. 1 is used for description, the present invention is not limited to this method example.
  • Step 1 Pretreatment of aqueous solution containing milk raw materials (Step 1) A milk raw material is dissolved in water to prepare an aqueous solution containing GMP.
  • the aqueous solution containing GMP has an ultrafine pH of the aqueous solution containing GMP and has a molecular weight cut-off smaller than 9,000 Da before hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated in the aqueous solution containing GMP. It is preferable to adjust the concentration of GMP by pretreatment with a filtration membrane or the like. Moreover, it is preferable to remove fats, insolubles, etc. using a pretreatment such as a cream separator or clarifier. It is also possible to heat-treat the aqueous solution containing the milk raw material and GMP for the purpose of sterilization.
  • Step 2 Concentration treatment of aqueous solution containing milk raw materials
  • Concentration treatment A Concentration treatment of an aqueous solution containing GMP is performed (concentration treatment A).
  • GMP-containing permeate a permeate containing GMP
  • Concentrate 1 a concentrate (concentrate 1) are obtained.
  • Any membrane can be used for the concentration treatment as long as the molecular weight cut off is 9,000 to 300,000 Da, preferably 10,000 to 300,000 Da, more preferably 20,000 to 100,000 Da. 30,000 to 100,000 Da is most preferable.
  • Step 3 One method for improving the yield of GMP is a diafiltration (hereinafter also referred to as “DF”) treatment of the concentrate 1.
  • GMP remaining in the concentrate 1 can be recovered from the permeate (GMP-containing permeate 2) by DF treatment in which membrane treatment is performed while adding water or the like to the concentrate 1. It is preferable to collect GMP as much as possible from the repermeate (GMP-containing permeate 2) by repeating this.
  • Water added to the concentrate includes filtered water, ion-exchanged water, distilled water, ultrapure water, a permeate obtained by concentrating a permeate containing GMP by membrane treatment, a solution with adjusted pH and ionic strength, or A mixture of these can be used.
  • step 4 Concentration and / or desalting treatment of GMP-containing permeate (steps 4 and 5) Since the composition containing GMP (GMP-containing permeate 1 and GMP-containing permeate 2) obtained as a permeate for membrane treatment contains lactose and minerals in addition to the target GMP, the molecular weight cutoff is 9 It is possible to concentrate and desalinate using an ultrafiltration membrane having a fractional molecular weight of less than 1,000 Da, that is, to remove lactose and minerals. Thereby, it is possible to further increase the GMP content in the composition. The molecular weight cutoff of the ultrafiltration membrane for concentration and / or desalting is preferably 5,000 Da or less.
  • step 6 Spray drying and / or lyophilization of the composition containing GMP (step 6) Furthermore, it is possible to obtain a composition containing GMP with reduced water content by means such as spray drying and / or freeze drying.
  • Example A1 Preparation of composition containing GMP from cheese whey Step 1: 40 kg of cheddar cheese whey was clarified at 75 ° C. and subjected to clarifier to remove insoluble matters. After removing the insoluble matter, the cheddar cheese whey was concentrated 4 times using an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut off of 5,000 Da to obtain 10 kg of concentrate and 30 kg of permeate. Sodium bicarbonate was added to 10 kg of this cheddar cheese whey concentrate and stirred well. Thereafter, 2.5 kg of permeate was added to prepare 12.5 kg of desalted cheddar cheese whey having a sodium bicarbonate concentration of 0.42% by mass. The pH of 0.42 mass% sodium bicarbonate-desalted cheddar cheese whey was 8.4.
  • Step 2 The aqueous solution obtained in Step 1 was filtered by a cross-flow system using a filtration membrane (polysulfone material, molecular weight cut off 50,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the temperature was 10 ° C., and the average operating pressure was 0.2 MPa, and 6.25 kg of the concentrated liquid and 6.25 kg of the permeated liquid (composition containing GMP) were obtained by this treatment, and the pH of the obtained permeated liquid was 7.5. Met.
  • Step 3 DF treatment was performed on 6.25 kg of the concentrate obtained in Step 2.
  • the filtration membrane used and the operating conditions are the same as described in Step 2.
  • the DF treatment was terminated when the re-permeate (composition containing GMP) reached 18.75 kg.
  • Step 4 A total of 25 kg (pH 7.6) of the permeate and repermeate obtained in Steps 2 and 3 was used with a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2) .
  • Concentration treatment was carried out by a cross flow method under the treatment conditions of a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa, whereby 5 kg of concentrate (composition containing GMP) and 20 kg of permeate were obtained.
  • Step 5 Subsequently, DF treatment of 5 kg of the concentrate containing GMP obtained in Step 4 was performed.
  • the used filtration membrane and operating conditions are the same as in Step 4.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 10 kg.
  • Step 6 5 kg of concentrated liquid containing GMP after DF treatment was freeze-dried to obtain 75 g of powdered GMP.
  • the content of dry powdery GMP was 37% by mass per solid content.
  • the recovery rate of GMP from the used raw material was 50% by mass.
  • Example A2 Preparation of Whey Protein Purified Product (WPI) and Composition Containing GMP from Whey Mineral Material Step 1: 8% by weight WPI aqueous solution, whey using cheese whey-derived Provon 190 (Glanbia) as WPI A 2 mass% whey mineral aqueous solution was prepared using FondlacSL (Meggle) as a mineral material. The ash content analysis value of FondacSL was 5024 mg for K, 1704 mg for Na, 252 mg for Mg, and 1044 mg for Ca per 100 g. Moreover, the sodium hydrogencarbonate aqueous solution which added sodium hydrogencarbonate to ion-exchange water so that a density
  • Step 2 This aqueous solution was subjected to a filtration process by a cross flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 50,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 10 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.5.
  • Step 3 DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in Step 2.
  • the filtration membrane used and the operating conditions are the same as described in Step 2.
  • the DF treatment was completed when the re-permeate (composition containing GMP) reached 15 kg.
  • Step 4 A total of 25 kg (pH 7.5) of the permeate and repermeate obtained in Steps 2 and 3 was filtered through a membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ). Then, concentration treatment was performed by a cross flow method. The treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrated liquid (composition containing GMP) and 20 kg of permeate were obtained.
  • Step 5 Subsequently, the concentrated solution containing GMP obtained in Step 4 was subjected to DF treatment.
  • the used filtration membrane and operating conditions are the same as in Step 4.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 15 kg.
  • Step 6 5 kg of the concentrated solution containing GMP after DF treatment was freeze-dried to obtain 86 g of a composition containing powdered GMP.
  • the content of dry powdery GMP was 36% by mass per solid content.
  • the recovery rate of GMP from the used raw material was 50% by mass.
  • Example A3 Preparation of Whey Protein Purified Product (WPI) and Composition Containing GMP from Copper Sulfate Step 1: Prepare 8 mass% WPI aqueous solution using Provon 190 (Glanbia) derived from cheese whey as WPI did. Next, an aqueous sodium hydrogen carbonate solution in which sodium hydrogen carbonate was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 3.36% by mass was prepared. Furthermore, a copper (II) sulfate pentahydrate aqueous solution prepared by adding copper (II) sulfate pentahydrate (Kanto Chemical Co., Inc.) to ion-exchanged water so as to have a concentration of 0.12% by mass was prepared.
  • WPI Whey Protein Purified Product
  • Composition Containing GMP from Copper Sulfate Step 1 Prepare 8 mass% WPI aqueous solution using Provon 190 (Glanbia) derived from cheese whey as WPI did. Next, an a
  • Step 2 This aqueous solution was subjected to a filtration process by a cross flow method using a filtration membrane (polysulfone material, fractional molecular weight 100,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 10 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained.
  • Step 3 DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in Step 2.
  • the filtration membrane used and the operating conditions are the same as described in Step 2.
  • the DF treatment was terminated when the re-permeation liquid (composition containing GMP) reached 40 kg.
  • Step 4 The permeate and re-permeate 50 kg (pH 7.3) obtained in Steps 2 and 3 were filtered using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ). Concentration treatment was performed by a cross flow method. The treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrated liquid (composition containing GMP) and 45 kg of permeate were obtained.
  • a filtration membrane polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 .
  • Step 5 Subsequently, DF treatment of 5 kg of the concentrate containing GMP obtained in Step 4 was performed.
  • the used filtration membrane and operating conditions are the same as in Step 4.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 10 kg.
  • Step 6 5 kg of concentrated solution containing GMP after DF treatment was freeze-dried to obtain 42 g of a composition containing powdered GMP.
  • the content of dry powdered GMP was 40% by mass per solid content.
  • the recovery rate of GMP from the used raw material was 31% by mass.
  • Example A4 Preparation of Whey Protein Purified Product (WPI) and Composition Containing GMP from Iron Chloride Step 1: Prepare 8 mass% WPI aqueous solution using Provon 190 (Glanbia) derived from cheese whey as WPI did. Next, an aqueous sodium hydrogen carbonate solution in which sodium hydrogen carbonate was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 3.36% by mass was prepared. Furthermore, an iron (III) chloride hexahydrate aqueous solution in which iron (III) hexahydrate (Pure Chemical Co., Ltd.) was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 0.14% by mass was prepared.
  • Step 2 This aqueous solution was subjected to a filtration process by a cross flow method using a filtration membrane (polysulfone material, fractional molecular weight 100,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 10 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained.
  • Step 3 DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in Step 2.
  • the filtration membrane used and the operating conditions are the same as described in Step 2.
  • the DF treatment was terminated when the re-permeate (composition containing GMP) reached 30 kg.
  • Step 4 The permeate and re-permeate 40 kg (pH 7.3) obtained in Steps 2 and 3 were filtered using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ). Concentration treatment was performed by a cross flow method. The treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate (composition containing GMP) and 35 kg of permeate were obtained.
  • a filtration membrane polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 .
  • Step 5 Subsequently, DF treatment of 5 kg of the concentrate containing GMP obtained in Step 4 was performed.
  • the used filtration membrane and operating conditions are the same as in Step 4.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 15 kg.
  • Step 6 5 kg of concentrated solution containing GMP after DF treatment was lyophilized to obtain 71 g of a composition containing powdered GMP.
  • the content of dry powdery GMP was 28% by mass per solid content.
  • the recovery rate of GMP from the used raw material was 37% by mass.
  • the method for producing a composition containing GMP according to the embodiment may include a step of adjusting the pH of the aqueous solution containing the milk raw material from outside the range of 4-9 to within the range of 4-9. Or it is preferable not to include such a process from a viewpoint of maintaining stability.
  • the pH of the aqueous solution when the pH of the aqueous solution is in the range of 4 to 9, it is not necessary to adjust the pH to be in the range of 4 to 9. However, when the pH is less than 4 or more than 9, the pH is adjusted to 4-9. Any pH can be used as long as it can be used for the production of foods and pharmaceuticals to be taken orally.
  • the reagent for adjusting the pH from above 9 to 9 or less include one or more of hydrochloric acid, sulfuric acid, lactic acid, etc., and water as a reagent for adjusting the pH from less than 4 to 4 or more.
  • One or more uses of sodium oxide, potassium hydroxide and the like can be exemplified.
  • the pH may be 4-9, preferably greater than 4 and 9 or less, more preferably pH 4.5-8.5, even more preferably pH 5-8, and even more preferably pH 5.5-8.
  • pH 6-8 is most preferred.
  • a solution having a solid content of pH 4 to 9 is prepared, and hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated in the aqueous solution.
  • the concentration of hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions in the solution at this time may be 0.001 wt% or more and 35 wt% or less.
  • the concentration of bicarbonate ions and / or carbonate ions in the solution can be 0.001 wt% or more and 5 wt% or less. Specific ranges include 0.001 to 5% by weight, 0.0025 to 3% by weight, 0.005 to 2% by weight, 0.0075 to 2% by weight, 0.01 to 2% by weight, and 0.025. It can be ⁇ 2% by weight, or 0.05-2% by weight.
  • a solution in which bicarbonate ions and / or carbonate ions are generated in an aqueous solution containing a milk raw material and having a pH of 4 to 9 is subjected to membrane treatment.
  • Any membrane can be used as long as the molecular weight cut off is 9,000 to 50,000 Da, preferably 10,000 to 50,000 Da, more preferably 20,000 to 50,000 Da. Preferably, 30,000 to 50,000 Da is most preferable.
  • the material of the membrane include polysulfone, polyethersulfone, tetrafluoroethylene, and ceramic.
  • hydrophilic materials such as cellulose acetate, nitrocellulose, polyacrylonitrile, and aromatic polyamide are used. It is preferable to use a membrane or a charged membrane.
  • Diafiltration (DF) treatment method In order to obtain GMP, when obtaining a permeate containing GMP from a raw material containing GMP in membrane treatment, obtaining a repermeate as much as possible is to improve yield. preferable. More specifically, it is more preferable to add water to the concentrated liquid produced in the step (C) and perform ultrafiltration again, or repeat this to obtain a repermeated liquid.
  • the water added to the concentrate is filtered water, ion-exchanged water, distilled water, ultrapure water, a permeate obtained when the permeate containing GMP is concentrated by membrane treatment, a solution with adjusted pH or ionic strength, or A mixture of these can be used.
  • aqueous solution containing milk raw material has a fractional molecular weight of less than 9,000 Da before adjusting the pH of the aqueous solution and generating bicarbonate ions and / or carbonate ions in the aqueous solution. It is preferable to adjust the concentration of GMP by pretreatment with an ultrafiltration membrane or the like having a molecular weight cut off. Moreover, it is preferable to remove fats, insolubles, and the like in the raw material using a pretreatment such as a cream separator or a clarifier. It is also possible to heat-treat these raw materials for the purpose of sterilization.
  • step (C) Concentration and / or desalination after step (C) Since the composition containing GMP obtained as the permeate for membrane treatment contains lactose and minerals in addition to the target GMP, fractionation It is possible to concentrate and desalinate using an ultrafiltration membrane having a molecular weight cut-off smaller than 9,000 Da, that is, to remove lactose and minerals. Thereby, it is possible to further increase the GMP content.
  • the molecular weight cutoff of the ultrafiltration membrane for concentration and / or desalting is preferably 5,000 Da or less.
  • composition containing GMP with reduced water content can be obtained by means such as spray-drying and / or freeze-drying.
  • the second embodiment does not include metal ions.
  • Example B Examples of the invention according to the second embodiment will be described in detail below, but the present invention is not limited thereto.
  • Example B1 Preparation of composition containing GMP from cheese whey Cheddar cheese whey 44L was subjected to clarifier after sterilization at 75 ° C. to remove insoluble matters. After removing the insoluble matter, the cheddar cheese whey was concentrated twice using an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut off of 5,000 Da to obtain a 20 L concentrated solution and a 20 L permeated solution. 20 L of aqueous potassium hydrogen carbonate solution was added to 20 L of this cheddar cheese whey concentrate to prepare 40 L of cheddar cheese whey having a potassium hydrogen carbonate concentration of 0.2 mass%.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polysulfone material, molecular weight cut off 30,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 35 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • 35 kg of this permeate was concentrated by a cross flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrated liquid (composition containing GMP) and 30 kg of permeate were obtained.
  • Example B2 Preparation of composition containing GMP from purified whey protein (WPI)
  • WPI purified whey protein
  • a 4% WPI aqueous solution was prepared using Provon 190 (Glanbia) derived from cheese whey as WPI.
  • a sodium hydrogen carbonate aqueous solution in which sodium hydrogen carbonate was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 0.33% by mass was prepared.
  • 7.5 kg of 0.33% by mass sodium hydrogen carbonate aqueous solution was added to 7.5 kg of 4% WPI aqueous solution and stirred well to prepare 15 kg of 2% WPI-0.16% by mass Na hydrogen carbonate aqueous solution.
  • the pH of the 2% WPI-0.16 mass% aqueous sodium hydrogen carbonate solution was 7.2.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 50,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 10 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • the concentrate containing GMP obtained in the previous paragraph was subjected to DF treatment.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as in the previous paragraph.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 18 kg.
  • the concentrated solution containing GMP obtained was 2 kg.
  • Example B3 Preparation of composition containing GMP from whey protein concentrate (WPC)
  • WPC whey protein concentrate
  • a 6% WPC aqueous solution was prepared using cheese whey-derived WPC80 (Sachsenmirch) as WPC.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution in which sodium hydrogen carbonate was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 0.33% by mass was prepared.
  • 7.5 kg of 0.33% by mass Na bicarbonate aqueous solution was added to 7.5 kg of 6% WPC 80 aqueous solution and stirred well to prepare 15 kg of 3% WPC-0.16 wt% Na bicarbonate aqueous solution.
  • the pH of the 6% WPC aqueous solution was 6.7, and the pH of the 3% WPC-0.16 mass% aqueous sodium hydrogen carbonate solution was 7.2.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 30,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 10 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in the previous paragraph.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as described in the previous paragraph.
  • DF treatment was terminated when the re-permeated liquid (composition containing GMP reached 15 kg).
  • 25 kg of permeate and re-permeate obtained in the previous paragraph and the previous paragraph were concentrated by a cross-flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 2 kg of concentrate (composition containing GMP) and 23 kg of permeate were obtained.
  • the concentrate containing GMP obtained in the previous paragraph was subjected to DF treatment.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as in the previous paragraph.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 6 kg.
  • the concentrated solution containing GMP obtained was 2 kg.
  • Example B4 Preparation of composition containing GMP from rennet casein whey 105 L of rennet casein whey adjusted to pH 7.2 with sodium hydroxide was held for 15 seconds after reaching 75 ° C. and then sterilized. And insoluble materials were removed. After removing the insoluble matter, it was concentrated twice using an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut off of 5,000 Da to obtain a 50 L concentrated solution and a 50 L permeated solution. The pH of the rennet casein whey concentrate after the concentration treatment was 7.3, and Brix was 6.2%.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polysulfone material, molecular weight cut off 50,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 70 kg of permeate (composition containing GMP) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in the previous paragraph.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as described in the previous paragraph.
  • the DF treatment was terminated when the re-permeate (composition containing GMP) reached 30 kg.
  • a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da, membrane) was obtained by combining 100 kg of the liquid (composition containing GMP) of 70 kg of the permeate obtained in the previous paragraph and 30 kg of the repermeate obtained in the previous paragraph.
  • Concentration treatment was performed by a cross flow method using an area of 0.33 m 2 ). The treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrated liquid (composition containing GMP) and 95 kg of permeate were obtained.
  • the third embodiment of the present invention will be described focusing on differences from the first embodiment described above.
  • the method for producing a composition containing GMP and LA according to the embodiment can include a step of adjusting the pH of the aqueous solution containing the milk raw material from outside the range of 4-9 to within the range of 4-9. From the viewpoint of maintaining the chemical structure or stability, it is preferable not to include such a step.
  • the pH of the aqueous solution when the pH of the aqueous solution is in the range of 4-9, it is not necessary to adjust the pH in the range of 4-9. However, when the pH is less than 4 or more than 9, the pH is adjusted to 4-9. Any pH can be used as long as it can be used for the production of foods and pharmaceuticals to be taken orally.
  • One or more uses of hydrochloric acid, sulfuric acid, lactic acid and the like can be exemplified as reagents for adjusting the pH from above 9 to below 9.
  • a reagent for adjusting the pH from less than 4 to 4 or more one or more uses such as sodium hydroxide and potassium hydroxide can be exemplified.
  • the pH may be 4-9, preferably greater than 4 and 9 or less, more preferably pH 4.5-8.5, even more preferably pH 5-8, and even more preferably pH 5.5-8.
  • pH 6-8 is most preferred.
  • a solution having a solid content of pH 4 to 9 is prepared, and hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions are generated in the aqueous solution.
  • the concentration of hydrogen carbonate ions and / or carbonate ions in the solution at this time may be 0.001 wt% or more and 35 wt% or less.
  • the concentration of bicarbonate ions and / or carbonate ions in the solution can be 0.001 wt% or more and 5 wt% or less. Specific ranges include 0.001 to 5% by weight, 0.0025 to 3% by weight, 0.005 to 2% by weight, 0.0075 to 2% by weight, 0.01 to 2% by weight, and 0.025. It can be ⁇ 2% by weight, or 0.05-2% by weight.
  • a solution in which bicarbonate ions and / or carbonate ions are generated in an aqueous solution containing a milk raw material and having a pH of 4 to 9 is subjected to membrane treatment.
  • Any membrane can be used as long as the molecular weight cut off is 9,000 to 300,000 Da or less, preferably 20,000 to 200,000 Da, more preferably 30,000 to 100,000 Da. More preferably, 30,000 to 50,000 Da is most preferable.
  • the upper limit may be less than 50,000 Da, for example, 45,000 Da, or 40,000 Da, and specific ranges are 9,000 to 45,000 Da, 10,000 to 40,000 Da, or 20,000.
  • a membrane of ⁇ 40,000 Da may be used.
  • the material of the membrane include polysulfone, polyethersulfone, tetrafluoroethylene, and ceramic.
  • hydrophilic materials such as cellulose acetate, nitrocellulose, polyacrylonitrile, and aromatic polyamide are used. It is preferable to use a membrane or a charged membrane.
  • the membrane treatment method used in the method for producing a composition containing GMP and LA according to the embodiment may be any method as long as it is a method commonly used in the treatment and production of foods and pharmaceuticals taken orally. Examples thereof include cross-flow filtration, diafiltration, and the like.
  • the permeate in this membrane treatment can be obtained as a composition containing GMP and LA. It is not necessary to adjust the temperature of the solution during the membrane treatment, but it is preferably 0 ° C. or higher and 15 ° C. or lower in consideration of the growth of microorganisms.
  • Diafiltration (DF) treatment method In order to obtain GMP and LA, when obtaining a permeate containing GMP and LA from a raw material containing GMP and LA in membrane treatment, obtain a repermeate as much as possible. Is preferable for improving the yield. More specifically, it is more preferable to add the concentrated solution produced in the step (D) and ultrafilter again, or to repeat this to obtain a repermeated solution. Water added to the concentrate is filtered water, ion-exchanged water, distilled water, ultrapure water, a permeate obtained by concentrating a permeate containing GMP and LA by membrane treatment, a solution with adjusted pH and ionic strength. Or a mixture thereof.
  • aqueous solution containing milk raw material has a fractional molecular weight of less than 9,000 Da before adjusting the pH of the aqueous solution and generating bicarbonate ions and / or carbonate ions in the aqueous solution. It is preferable to adjust the concentrations of GMP and LA by pretreatment with an ultrafiltration membrane having a molecular weight of the molecular weight. Moreover, it is preferable to remove fats, insolubles, and the like in the raw material using a pretreatment such as a cream separator or a clarifier. It is also possible to heat-treat these raw materials for the purpose of sterilization.
  • the composition containing GMP and LA obtained as a permeate for membrane treatment contains lactose and minerals in addition to the intended GMP and LA. Therefore, it is possible to concentrate and desalinate using an ultrafiltration membrane having a fractional molecular weight smaller than 9,000 Da, that is, to remove lactose and minerals. Thereby, it is possible to raise GMP and LA content more.
  • the molecular weight cutoff of the ultrafiltration membrane for concentration and / or desalting is preferably 5,000 Da or less. Although it is not necessary to adjust the temperature of the solution during the ultrafiltration membrane treatment, it is preferably 0 ° C. or more and 15 ° C. or less in consideration of the growth of microorganisms.
  • Example C Examples of the invention according to the third embodiment will be described in detail below, but the present invention is not limited thereto.
  • Example C1 Preparation of composition containing GMP and LA from cheese whey Gouda cheese whey 54L was sterilized at 75 ° C. and subjected to clarifier to remove insoluble matters.
  • the sodium concentration contained in Gouda cheese whey excluding insolubles was 0.04% by mass
  • potassium concentration was 0.16% by mass
  • calcium concentration was 0.03% by mass
  • magnesium concentration was 0.006% by mass.
  • the pH of the Gouda cheese whey concentrate after the concentration treatment was 6.3.
  • An aqueous potassium hydrogen carbonate solution was added to 25 L of this Gouda cheese whey concentrate.
  • the permeate obtained when Gouda cheese whey is concentrated twice is used as an aqueous potassium bicarbonate solution.
  • 50 L of Gouda cheese whey having a Brix of 6.3% and a potassium bicarbonate concentration of 0.1% by mass was prepared.
  • This aqueous solution was subjected to a filtration treatment by a cross flow method using a filtration membrane (polysulfone material, molecular weight cut off 50,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa.
  • 5 kg of concentrate and 45 kg of permeate were obtained.
  • the pH of the obtained permeate was 7.3.
  • Example C2 Preparation of composition containing GMP and LA from purified whey protein (WPI)
  • a 4% WPI aqueous solution was prepared using Provon 190 (Glanbia) derived from cheese whey as WPI.
  • a sodium hydrogen carbonate aqueous solution in which sodium hydrogen carbonate was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 0.3% by mass was prepared.
  • a 0.1 mass% aqueous copper sulfate solution was prepared using copper sulfate pentahydrate as a light metal / transition metal salt. Ion exchange water was used for the preparation of the sodium hydrogen carbonate aqueous solution and the copper sulfate aqueous solution.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 300,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 10 kg of concentrated liquid and 20 kg of permeated liquid (composition containing GMP and LA) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • the concentrate containing GMP and LA obtained in the previous paragraph was subjected to DF treatment.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as in the previous paragraph.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 18 kg.
  • the obtained concentrate containing GMP and LA was 2 kg.
  • the content of dry powdered GMP was 27% by mass and the content of LA was 57% by mass.
  • the content of ⁇ -lactoglobulin was 7% by mass.
  • the recovery rate of GMP from the raw materials used was 24%.
  • Example C3 Preparation of composition containing GMP and LA from whey protein concentrate (WPC)
  • WPC80 Sendsenmirch
  • a sodium hydrogen carbonate aqueous solution in which sodium hydrogen carbonate was added to ion-exchanged water so as to have a concentration of 0.33% by mass was prepared.
  • 7.5 kg of 0.33% by mass Na bicarbonate aqueous solution was added to 7.5 kg of 6% WPC 80 aqueous solution and stirred well to prepare 15 kg of 3% WPC-0.16 wt% Na bicarbonate aqueous solution.
  • the pH of the 6% WPC aqueous solution was 6.7, and the pH of the 3% WPC-0.16 mass% aqueous sodium hydrogen carbonate solution was 7.2.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 30,000 Da, membrane area 0.33 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 10 kg of permeate (composition containing GMP and LA) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in the previous paragraph.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as described in the previous paragraph.
  • the DF treatment was terminated when the re-permeate (composition containing GMP and LA) reached 15 kg.
  • the concentrate containing GMP and LA obtained in the previous paragraph was subjected to DF treatment.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as in the previous paragraph.
  • the DF treatment was finished when the permeate reached 6 kg.
  • the obtained concentrate containing GMP and LA was 2 kg.
  • Example C4 Preparation of a composition containing GMP and LA from rennet casein whey After maintaining and sterilizing rennet casein whey 105L adjusted to pH 7.2 with sodium hydroxide for 15 seconds after reaching 75 ° C A clarifier was applied to remove insoluble materials. After removing the insoluble matter, it was concentrated twice using an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut off of 5,000 Da to obtain a 50 L concentrated solution and a 50 L permeated solution. The pH of the rennet casein whey concentrate after the concentration treatment was 7.3. To 50 L of this rennet casein whey concentrate, 25 L of potassium hydrogen carbonate aqueous solution was added, and 75 L of Brix 6.7% rennet casein whey having a potassium bicarbonate concentration of 0.1 mass% was prepared.
  • This aqueous solution was filtered by a cross flow method using a filtration membrane (polysulfone material, molecular weight cut off 50,000 Da, membrane area 0.2 m 2 ).
  • the conditions for the filtration treatment were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.2 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate and 70 kg of permeate (composition containing GMP and LA) were obtained. The pH of the obtained permeate was 7.3.
  • DF treatment was performed on 5 kg of the concentrate obtained in the previous paragraph.
  • the filtration membrane and operating conditions used are the same as described in the previous paragraph.
  • the DF treatment was terminated when the re-permeate (composition containing GMP and LA) reached 30 kg.
  • composition containing GMP and LA 100 kg of a liquid (composition containing GMP and LA), which is a combination of 70 kg of the permeate obtained in the previous paragraph and 30 kg of the repermeate obtained in the previous paragraph, is filtered through a membrane (polyether sulfone material, molecular weight cut off 5,000 Da). Then, concentration treatment was performed by a cross flow method using a membrane area of 0.33 m 2 ). The treatment conditions were a temperature of 10 ° C. and an average operating pressure of 0.4 MPa. By this treatment, 5 kg of concentrate (composition containing GMP and LA) and 95 kg of permeate were obtained.
  • the dry powder GMP content was 35% by mass and the LA content was 58% by mass.
  • the content of ⁇ -lactoglobulin was 7% by mass.
  • the recovery rate of GMP from the used raw material was 21%.

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Abstract

（Ａ）ｐＨが４～９である、乳原料を含有する水溶液を調製する工程と、（Ｂ）水溶液に前処理を行い、炭酸（水素）イオンと、金属イオンと、を含有する前処理後の水溶液を得る工程と、（Ｃ）前処理後の水溶液を、分画分子量９，０００Ｄａ以上３００，０００Ｄａ以下の膜を用いた膜処理に供する工程と、を含むＧＭＰを含む組成物の製造方法に関する。係る製造方法によれば、操作が簡易でありながら、出発原料がチーズホエイ、ホエイ蛋白質濃縮物のいずれであっても収率の高い、ＧＭＰを含む組成物を得ることができる。

Description

κ－カゼイングリコマクロペプチドを含む組成物の製造方法
　本発明は、κ－カゼイングリコマクロペプチド（以下、「ＧＭＰ」ともいう。）を含む組成物の製造方法に関する。本発明は、ＧＭＰとα－ラクトアルブミン（以下、「ＬＡ」ともいう。）を含む組成物の製造方法にも関する。
　乳中に含まれるシアル酸類の一つであるＧＭＰはカゼイノマクロペプチド（以下、「ＣＭＰ」ともいう。）とも呼ばれ、牛乳のκカゼインにレンネット又はペプシンを作用させた時に生成するシアル酸結合ペプチドである。ＧＭＰは、チーズホエイおよびレンネットカゼインホエイ中に含まれることが、従来から知られている。なお、ＧＭＰの分子量は約９，０００Ｄａであり、ｐＨ４未満ではモノマーで、またｐＨ４以上ではポリマー（分子量５０，０００Ｄａ以上）で存在すると言われている。
　母乳中には、牛乳と比較して３～５倍程度のシアル酸類が含まれており、このシアル酸類も乳児の感染防御因子の一つとして機能するものと考えられている。シアル酸類の一つであるＧＭＰもウイルスや細菌に対する感染防御作用や、乳酸菌増殖活性を有することが知られている。またＬＡは、ＧＭＰ同様に母乳中に含まれるタンパク質の約３割を占める主要なタンパク質である。ＬＡは、ＧＭＰ同様に胃粘膜の保護作用等の様々な生理活性機能を有することが知られている。ＬＡは、分子量約１４，０００Ｄａのタンパク質である。
　このことから、母乳代替品、機能性食品等の食品としてシアル酸類であるＧＭＰを利用するための工業的規模での生産が強く望まれている。これまでに乳中のシアル酸類であるＧＭＰを分別する技術として、限外濾過あるいは逆浸透膜、イオン交換樹脂を用いる方法が挙げられる。
　特許文献１は、（１）ＧＭＰを含有する乳質原料物質をｐＨ４未満に調整した後、分画分子量１０，０００～５０，０００Ｄａの限外濾過膜処理により得た透過液を得、この透過液を分画分子量５０，０００Ｄａ以下の膜を用いて濃縮することを特徴とするＧＭＰの製造法を開示する。また、特許文献１は、（１）で得た透過液を再度ｐＨ４以上に調整した後に分画分子量５０，０００Ｄａ以下の限外濾過膜を用いて濃縮することや、（１）で得たこの透過液を分画分子量１０，０００Ｄａ以下の限外濾過膜を用いて濃縮することにより、ＧＭＰ含有量の高い組成物を得る方法を開示している。
　特許文献２は、ｐＨ５．０以上に調整した乳質ホエイを８０℃以上の温度で加熱処理して乳清タンパク質会合物を生成させ、該会合物をポアサイズ０．５μｍ以下の精密濾過膜または分画分子量５０，０００Ｄａ以上の限外濾過膜で分離しＧＭＰを膜透過液に回収することを特徴とするＧＭＰ含有量の高い組成物の製造方法を開示している。
　特許文献３は、ＣＭＰと少なくとも１種類の追加的なタンパク質とを含んでなり、最大で４のｐＨを有する、ホエイ由来供給物を提供するステップと、単量体ＣＭＰを通過させる限外濾過膜フィルターを使用して、前記ホエイ由来供給物を限外濾過し、それによってＣＭＰに関して富化されたＵＦ透過液とＵＦ残余分とを提供するステップと、前記ＵＦ透過液に由来する第１の組成物をカチオン交換材に接触させるステップと、前記カチオン交換材と結合しない前記第１の組成物の画分を収集し、それによって前記ＣＭＰ含有組成物を得るステップとを含む、カゼイノマクロペプチド含有組成物を製造する方法を開示している。
　特許文献４はホエイを冷却し、Ｃａ及び／又はＭｇを添加後にｐＨを６～９に調整することと、４０～６０℃で加熱保持後に生成した沈殿物を膜孔径１μｍ以下の限外濾過膜で処理して除去することと、得られた濾過液のｐＨを４以上に調整後に膜孔径５０，０００Ｄａ以下の膜で処理して濃縮液を回収することと、濃縮液をｐＨ３．０～５．０に調整後に４０～５５℃で３０～６０分加熱保持することと、生成した沈殿物を回収しさらにｐＨを６～８に調整して沈殿物を溶解することと、必要に応じて濃縮、脱塩、乾燥粉末化することを特徴とするシアル酸類とα―ラクトアルブミン含有量の高い組成物の製造法を開示する。
特許第２６７３８２８号 特許第３２２５０８０号 特許第６３９６３０９号 特許第３０４４４８７号
　特許文献１に記載の実施例１を利用して、ホエイ蛋白質濃縮物１ｋｇ中のタンパク質濃度を８０質量％、総タンパク質濃度に対するＧＭＰ含量を１５質量％と仮定すると、濃縮液の凍結乾燥によって得られた５４ｇのＧＭＰに基づいて、ＧＭＰの回収率は４５％となる。一方で、実施例２を使用してゴーダチーズホエイ５００Ｌ中のタンパク質濃度を０．７質量％、総タンパク質濃度に対するＧＭＰ含量を１５質量％と仮定すると、濃縮、脱塩、凍結乾燥によって得られた５．７ｇのＧＭＰに基づいて、ＧＭＰの回収率は１．１％となり、出発原料がチーズホエイの場合には、回収率が著しく低下するといった課題があった。また、特許文献２には得られたＧＭＰ組成物の純度に関する記載はあるものの、回収率に関する記載がなく、不明であった。
　特許文献３の方法では、得られるＧＭＰ組成物の回収率が５０％に達するものの、ＵＦ膜処理とカチオン交換クロマトグラフィーの両方の処理が必要であり、操作が煩雑かつ目的物を得るまでに相当の時間と労力が必要であった。
　そのため、操作が簡易でありながら、出発原料がチーズホエイ、ホエイ蛋白質濃縮物のいずれであっても収率の高い、ＧＭＰを含む組成物の製造方法が求められていた。
　本発明は、操作が簡易でありながら、出発原料がチーズホエイ、ホエイ蛋白質濃縮物のいずれであっても収率の高い、ＧＭＰを含む組成物の製造方法を提供することを第一の課題とする。
　特許文献１～３の開示する技術は、必須となる工程も多く操作が煩雑であり、目的物を得るまでに相当の時間と労力が必要であった。そのため、前記課題を解決することができる従来にない新規な、ＧＭＰを含む組成物の製造方法が求められていた。
　本発明は、操作が容易で製造時間が短縮された、ＧＭＰを含む組成物の製造方法を提供することを第二の課題とする。
　また特許文献１～３の開示する技術では、ＬＡを得ることは全く開示されておらず、また、目的物を得るまでに多くの工程が必要であった。また、ＧＭＰ及びＬＡの両方を回収することを開示した特許文献３、４は、必須となる工程が多く、操作が非常に複雑であり、目的物を得るまでに相当の時間と労力が必要であった。そのため、前記課題を解決することができる従来にない新規な、ＧＭＰとＬＡとを含む組成物の製造方法が求められていた。
　本発明は、操作が容易で製造時間が短縮された、ＧＭＰとＬＡとを含む組成物の製造方法を提供することを第三の課題とする。
［Ａ．第一の実施形態］
　ＧＭＰの分子量は約９，０００Ｄａであり、ｐＨ４未満ではモノマーで、またｐＨ４以上ではポリマー（分子量５０，０００Ｄａ以上）で存在すると言われている。これに対して、発明者らが鋭意検討した結果、ＧＭＰを含み且つｐＨが４～９である乳原料の水溶液を調製し、該水溶液中で炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンと、金属イオンと、を生じさせることにより、ｐＨが４以上であるにもかかわらず、分画分子量９，０００～５０，０００Ｄａの膜で処理し得られた透過液からＧＭＰを含む組成物が得られることを見出し、発明を完成させた。具体的には、本発明は以下の構成を含むものである。
［１］（Ａ）ｐＨが４～９である、乳原料を含有する水溶液を調製する工程と、（Ｂ）前記水溶液に前処理を行い、炭酸（水素）イオンと、金属イオンと、を含有する前処理後の水溶液を得る工程と、（Ｃ）前処理後の水溶液を、分画分子量９，０００Ｄａ以上３００，０００Ｄａ以下の膜を用いた膜処理に供する工程と、を含むＧＭＰを含む組成物の製造方法。
［２］（Ｃ）工程の透過液として、ＧＭＰを含む組成物を得ることを特徴とする［１］に記載の組成物の製造方法。
［３］（Ｂ）工程と（Ｃ）工程の間に、ｐＨ４未満の乳原料を含む水溶液をｐＨ４以上に調整する工程を含む、［１］又は［２］に記載の組成物の製造方法。
［４］（Ｃ）工程で得られた濃縮液を前記膜処理に再度供し、この処理により得られえる再透過液を得る（Ｄ）工程をさらに含む、［１］～［３］のいずれか一つに記載の組成物の製造方法。
［５］分画分子量が９，０００Ｄaより小さい膜を用いて、前記透過液及び/または再透過液を濃縮する（Ｅ）工程をさらに含む、［４］に記載の組成物の製造方法。
［６］（Ｃ）工程において使用する膜の分画分子量が、３０，０００Ｄa～１００，０００Ｄａである、［１］～［５］のいずれか一つに記載の組成物の製造方法。
［Ｂ．第二の実施形態］
　ＧＭＰの分子量は約９，０００Ｄａであり、ｐＨ４未満ではモノマーで、またｐＨ４以上ではポリマー（分子量５０，０００Ｄａ以上）で存在すると言われている。
　これに対して、発明者らが鋭意検討した結果、ＧＭＰを含み且つｐＨが４～９である乳原料の水溶液を調製し、該水溶液中で炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせることにより、ｐＨが４以上であるにもかかわらず、分画分子量９，０００～５０，０００Ｄａの膜で処理し得られた透過液からＧＭＰを含む組成物が得られることを見出し、発明を完成させた。具体的には、本発明は以下の構成を含むものである。
（１）（Ａ）乳原料を含むｐＨが４以上９以下の水溶液を調製する工程と、
（Ｂ）前記水溶液中に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせる工程と、
（Ｃ）前記炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせた水溶液を分画分子量９，０００～５０，０００Ｄａの膜を用いた膜処理に供する工程と、
を含むことを特徴とするＧＭＰを含む組成物の製造方法、
（２）（Ｄ）前記工程（Ｃ）の透過液として、ＧＭＰを含む組成物を得る工程をさらに含む、（１）に記載の組成物の製造方法、
（３）前記工程（Ｃ）より前に、乳原料を含む水溶液のｐＨを４未満から４以上に調整する工程を含まない、（１）又は（２）に記載の組成物の製造方法、
（４）（Ｅ）前記工程（Ｃ）で得られた濃縮液を前記膜処理に再度供し、再透過液を得る工程をさらに含む、（１）～（３）のいずれかに記載の組成物の製造方法、
（５）（Ｆ）分画分子量が９,０００より小さい膜を用いて、前記透過液及び／又は再透過液を濃縮する工程をさらに含む、（１）～（４）のいずれかに記載の組成物の製造方法、並びに
（６）前記工程（Ｃ）において使用する膜の分画分子量が、３０，０００～５０，０００Ｄａである、（１）～（５）のいずれかに記載の組成物の製造方法。
［Ｃ．第三の実施形態］
　発明者らが鋭意検討した結果、ＧＭＰとＬＡを含み且つｐＨが４～９である水溶液を調製し、該水溶液中で炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンと、金属イオンと、を生じさせることにより、分画分子量３００，０００Ｄａ以下の膜を用いた膜処理の透過液からＧＭＰと、ＬＡと、を含む組成物が得られることを見出し、発明を完成させた。具体的には、本発明は以下の構成を含むものである。
（１）（Ａ）乳原料を含むｐＨが４以上９以下の水溶液を調製する工程と、
（Ｂ）前記水溶液中に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせる工程と、
（Ｃ）金属イオンを生じさせる工程と、
（Ｄ）前記炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンと、金属イオンと、を生じさせた水溶液を分画分子量９，０００～３００，０００Ｄａの膜を用いた膜処理に供する工程と、
を含むことを特徴とするＧＭＰと、ＬＡと、を含む組成物の製造方法、
（２）（Ｅ）前記工程（Ｄ）の透過液として、ＧＭＰとＬＡとを含む組成物を得る工程
をさらに含む、（１）に記載の組成物の製造方法、
（３）前記工程（Ｄ）より前に、乳原料を含む水溶液のｐＨを４未満から４以上に調整する工程を含まない、（１）又は（２）に記載の組成物の製造方法、
（４）（Ｆ）前記工程（Ｄ）で得られた濃縮液を前記膜処理に再度供し、再透過液を得る工程をさらに含む、（１）～（３）のいずれかに記載の組成物の製造方法、並びに
（５）（Ｇ）分画分子量が９,０００より小さい膜を用いて、前記透過液及び／又は再透過液を濃縮する工程をさらに含む、（１）～（４）のいずれかに記載の組成物の製造方法。
　第一の実施形態に係る発明は、従来にない新規なＧＭＰを含む組成物の製造方法を提供するものである。本発明によれば、操作が簡易でありながら、出発原料がチーズホエイ、ホエイ蛋白質濃縮物のいずれであっても収率の高い、ＧＭＰを含む組成物の製造方法が提供される。
　第二の実施形態に係る発明は、前記課題を解決することができる従来にない新規な、ＧＭＰを含む組成物の製造方法を提供するものである。本発明によれば、簡便な手法により、ＧＭＰを高い収率で回収することが可能である。
　第三の実施形態に係る発明は、前記課題を解決することができる従来にない新規な、ＧＭＰと、ＬＡと、を含む組成物の製造方法を提供するものである。本発明によれば、簡便な手法により、ＧＭＰとＬＡとを高い収率で回収することが可能である。ＧＭＰとＬＡとを高収率で同時に、少ない工程数で回収可能な方法は、未だ報告がない。
図１はＧＭＰを含む組成物の製造方法のフローチャートである。
　第一、第二、第三の実施形態を挙げて本発明を説明するが、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
［Ａ．第一の実施形態］
　第一の実施形態に係る組成物の製造方法に用いる原材料について説明する。
（乳原料）
　シアル酸類であるＧＭＰは、牛乳、山羊乳、羊乳等の乳類からチーズ又はレンネットカゼインを製造する際に副生されるホエイに含まれている。よって、実施の形態に係る組成物の製造方法では、このようなＧＭＰを含有する乳原料を用いればよく、チーズホエイ、レンネットカゼインホエイ、ホエイ蛋白質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイ蛋白質単離物（ＷＰＩ）、脱塩したチーズホエイ粉、無脱塩のチーズホエイ粉等を例示することができる。なお、ＬＡについてもＧＭＰと同様の材料を用いることができる。
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、上記した乳原料の水溶液を調製する。このときの固形分濃度は好ましくは０．００１質量％以上であれば良く、より好ましくは０．００１質量％以上３５質量％以下の濃度であれば良く、０．０１質量％以上２０質量％以下が最も好ましい。
（ｐＨ調整）
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含む水溶液のｐＨが４～９の範囲にあることが好ましい。このｐＨ条件と、後述する、炭酸（水素）イオン及び金属イオンの条件と、透過膜の条件とを満たすことで、濃縮処理工程における透過液と濃縮液の選択性が高まるからである。
　乳原料を含む水溶液のｐＨが４～９の範囲内である場合はｐＨを調整する必要はないが、乳原料を含む水溶液のｐＨが４未満、あるいは９を超える場合はｐＨが４～９となるように調整してもよい。しかし、ＧＭＰの化学構造又は安定性を保持する観点から、このようなｐＨ調整工程を含まないことが好ましい。例えば、本発明のＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含む水溶液のｐＨを一旦４未満に調整し、この水溶液を再度４以上に調整する工程を含まないことが好ましい。同様に、乳原料を含む水溶液のｐＨを一旦９より上に調整し、この水溶液を再度９以下に調整する工程を含まないことが好ましい。
　乳原料を含みかつｐＨが４～９である水溶液中に炭酸（水素）イオンと、金属イオンとを生じさせた後、ｐＨが４以下となった場合は、ｐＨを４以上に再調整することが好ましい。
　ｐＨの調整は食品、経口摂取する医薬品の製造に用いることができるものであればどのようなものでも用いることができる。ｐＨを９より上から９以下に調整するための試薬として、塩酸、硫酸、乳酸等の一つ以上の酸の使用を例示することができ、ｐＨを４未満から４以上に調整するための試薬として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の一つ以上の塩基の使用を例示することができる。但し、炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせるものを用いてｐＨを９より上から９以下に調整をすると、得られる組成物中のＧＭＰ量が低下するため好ましくない。
　上記したとおり、ｐＨは４～９であればよく、４より大きく９以下であることが好ましく、ｐＨ４．５～８．５がより好ましく、ｐＨ５．０～８．５がさらに好ましく、ｐＨ５．５～８．５がさらに好ましく、ｐＨ６．０～８．５が最も好ましい。
（炭酸水素イオン及び／または炭酸イオン）
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含み且つｐＨが４～９である水溶液中に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせる。炭酸水素イオン及び/または炭酸イオンは、乳原料を含み且つｐＨが４～９である水溶液の調製と同時に生じさせてもよいが、炭酸水素イオン及び/または炭酸イオンの消失を防止するために、調製後に発生させることが好ましい。
　なお、本明細書および特許請求の範囲における、「炭酸（水素）イオン」の用語には、炭酸イオンもしくは炭酸水素イオン、またはその両者が含まれる。
　炭酸水素イオン及び/または炭酸イオンは、水溶液中で炭酸イオン及び／または炭酸水素イオンを生じるものであればどのような成分や方法を用いて生成させてもよく、以下に例示した１種類あるいは複数の化合物及び/または方法を組み合わせて炭酸イオン及び/または炭酸水素イオンを生じさせればよい。
　気体状の二酸化炭素の吹き込み、液状あるいは固体状の二酸化炭素の添加といった二酸化炭素を添加する方法、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素アンモニウムなどの炭酸水素塩を添加する方法や、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸アンモニウム、炭酸カルシウムなどの炭酸塩を添加する方法等が例示できる。炭酸水素塩や炭酸塩を添加する場合、これらの塩を水に溶解して炭酸イオン及び／または炭酸水素イオンを発生させた水溶液を、乳原料を含む水溶液中に加えてもよく、乳原料を含む水溶液中に炭酸水素塩や炭酸塩を直接投入してもよい。
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、ＧＭＰを含有する乳原料を含むｐＨ４～９の溶液を調製し、該水溶液中に炭酸水素イオン及び/または炭酸イオンを溶液中に生じさせる。溶液中の炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンの濃度は、０．００１質量％以上、５質量％以下であることができる。具体的な範囲としては、０．００１～５質量％、０．００２５～３質量％、０．００５～２質量％、０．００７５～２質量％、０．０１～２質量％、０．０２５～２質量％、又は０．０５～２質量％であることができる。
（金属イオン）
　実施形態に用いる軽金属塩及び/または遷移金属塩について説明する。軽金属塩及び/または遷移金属塩は、軽金属あるいは遷移金属の１価から３価の陽イオンを含むものであればどのようなものでもよく、１種類又は複数の金属イオンを用いることができる。軽金属塩及び/または遷移金属塩に含まれる軽金属イオン及び/または遷移金属イオンとしては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛などが挙げられるが、食品やヒト中に存在するナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛などを用いることが好ましい。軽金属塩及び/または遷移金属塩の種類としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、乳酸塩、炭酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩などが挙げられる。
　これらの金属イオン源として、軽金属及び/または遷移金属の無機塩や有機塩、乳由来のミネラル素材やＷＰＩ及び／またはＷＰＣの製造時に生じるホエイミネラルを用いることができる。また、チーズホエイ、レンネットカゼインホエイを原料として使用する場合や、酸ホエイにＧＭＰを含む原料を添加した原料を使用する場合、分画分子量９，０００より小さい分画分子量を有する限外濾過膜等による前処理でＧＭＰを調整する際に得られるホエイミネラルを含む透過液を用いても良い。
　軽金属塩及び/または遷移金属塩を添加する場合、これらの塩を溶解することにより金属イオンを発生させた水溶液を、乳原料を含む水溶液中に加えてもよく、乳原料を含む水溶液中に直接軽金属塩及び/または炭酸塩を添加することにより、炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンと金属イオンとを同時に発生させることもできる。乳原料を含む水溶液に金属イオンを発生させる場合で、乳原料を含み且つｐＨが４～９に調整した水溶液に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンと同時に金属イオンを生じさせても良いが、同時に発生させない場合は、炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを発生させた後に、金属イオンを発生させることが好ましい。
　溶液中の金属イオンの下限は、具体的には、０．０００１質量％以上、０．０００２５質量％以上、０．０００５質量％以上、０．０００７５％質量％以上、又は０．００１質量％以上であることができる。溶液中の金属イオンの濃度の上限は、５質量％以下、３質量％以下、又は２質量％以下であることができる。具体的な範囲としては、０．０００１～５質量％、０．０００２５～３質量％、０．０００５～２質量％、０．０００７５～２質量％、又は０．００１～２質量％であることができる。
（分離膜）
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含み且つｐＨが４～９である水溶液中に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンと、軽金属塩及び/または遷移金属塩と、を生じさせたものを膜処理に供する。膜処理に用いる膜は分画分子量が９，０００～３００，０００Ｄａであればどのようなものでも用いることができるが、１０，０００～３００，０００Ｄａが好ましく、２０，０００～１００，０００Ｄａがより好ましく、３０,０００～１００，０００Ｄａが最も好ましい。
　膜の材質は、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、４フッ化エチレン、セラミックや、酢酸セルロース、ニトロセルロース、ポリアクリロニトリル、芳香族ポリアミド等の親水性の膜、あるいは荷電膜を例示することができる。
（膜処理方法）
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法に用いる膜処理法は、食品や経口摂取する医薬品の処理、製造等で一般的に用いられている方法であればどのようなものでもよく、クロスフロー方式での濾過処理、ダイアフィルトレーション等を例示できる。この膜処理における透過液を、ＧＭＰを含む組成物として得ることができる。なお、膜処理中の溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
（ＧＭＰを含む組成物の製造方法の一態様）
（フローチャート）
　図１はＧＭＰを含む組成物の製造方法のフローチャートである。ＧＭＰを含む組成物の製造方法について図１のフローチャートを用いて説明する。なお、説明には図１の方法例を用いるが、本発明はこの方法例に限定されるものではない。
（１）乳原料を含む水溶液の前処理（ステップ１）
　乳原料を水に溶解させＧＭＰを含む水溶液を調製する。
　ＧＭＰを含む水溶液は、ＧＭＰを含む水溶液のｐＨ調整、及びＧＭＰを含む水溶液中に炭酸水素イオン及び/または炭酸イオンを生じさせる前に、分画分子量９，０００Ｄａより小さい分画分子量を有する限外濾過膜等による前処理でＧＭＰの濃度を調整しておくことが好ましい。
　また、脂肪分、不溶物等をクリームセパレーター、クラリファイヤー等の前処理を用いて除いておくことが好ましい。乳原料やＧＭＰを含む水溶液を、殺菌を目的とした加熱処理をすることも可能である。
（２）乳原料を含む水溶液の濃縮処理（ステップ２）
　ＧＭＰを含む水溶液の濃縮処理を行う（濃縮処理Ａ）。これにより、ＧＭＰを含む透過液（ＧＭＰ含有透過液）と、濃縮液（濃縮液１）と、が得られる。濃縮処理に用いる膜は分画分子量が９，０００～３００，０００Ｄａであればどのようなものでも用いることができるが、１０，０００～３００，０００Ｄａが好ましく、２０，０００～１００，０００Ｄａがより好ましく、３０，０００～１００，０００Ｄａが最も好ましい。
（３）濃縮液のダイアフィルトレーション処理（ステップ３）
　ＧＭＰの収量を向上させる方法のひとつに、濃縮液１のダイアフィルトレーション（以下「ＤＦ」ともいう。）処理がある。
　濃縮液１に水などを加えながら膜処理をおこなうＤＦ処理によって、濃縮液１に残存するＧＭＰを透過液（ＧＭＰ含有透過液２）から回収できる。これを繰り返して再透過液（ＧＭＰ含有透過液２）からできるだけＧＭＰを回収することが好ましい。
　濃縮液に対する加水には、濾過水、イオン交換水、蒸留水、超純水、ＧＭＰを含む透過液を膜処理で濃縮する際に得られた透過液、ｐＨやイオン強度を調整した溶液、又はこれらを混合したもの等を使用できる。
（４）ＧＭＰ含有透過液の濃縮及び/または脱塩処理（ステップ４、５）
　膜処理の透過液として得られるＧＭＰを含む組成物（ＧＭＰ含有透過液１、ＧＭＰ含有透過液２）には、目的とするＧＭＰ以外に、乳糖やミネラルが含まれているため、分画分子量９，０００Ｄａより小さい分画分子量を有する限外濾過膜を用いて濃縮、脱塩すること、すなわち乳糖やミネラルを除去することが可能である。これにより、組成物中におけるＧＭＰ含量をより高めることが可能である。この濃縮及び/または脱塩用の限外濾過膜の分画分子量は、好ましくは５，０００Ｄａ以下である。
（５）ＧＭＰを含む組成物の噴霧乾燥及び/または凍結乾燥（ステップ６）
　さらに、噴霧乾燥及び/または凍結乾燥等の手段によって水分を減らしたＧＭＰを含む組成物を得ることができる。
（ＧＭＰを含む組成物のＧＭＰ含量測定方法）
　処理に使用した原料に含まれるＧＭＰ含量および処理の結果得られたＧＭＰを含む組成物に含まれるＧＭＰ含量はウレア－ＳＤＳ電気泳動法を用いて測定した。
[実施例Ａ]
　以下、第一の実施形態に係る発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。図１を参照しながら説明していく。
（実施例Ａ１）：チーズホエイからのＧＭＰを含む組成物の調製
　ステップ１：チェダーチーズホエイ４０ｋｇを７５℃達温殺菌後にクラリファイヤーにかけ、不溶物を除いた。不溶物を除いた後、分画分子量５，０００Ｄａの限外濾過膜を使用してチェダーチーズホエイを４倍濃縮し１０ｋｇの濃縮液と３０ｋｇの透過液を得た。
　このチェダーチーズホエイ濃縮液１０ｋｇに対して炭酸水素ナトリウムを添加し、よく攪拌した。その後、透過液２．５ｋｇを加え、炭酸水素ナトリウム濃度０．４２質量％の脱塩チェダーチーズホエイを１２．５ｋｇ調製した。０．４２質量％炭酸水素ナトリウム－脱塩チェダーチーズホエイのｐＨは８．４であった。
　ステップ２：ステップ１で得られた水溶液を、濾過膜（ポリスルフォン素材、分画分子量５０，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ2を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液６．２５ｋｇと透過液６．２５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．５であった。
　ステップ３：ステップ２で得られた濃縮液６．２５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ２の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰを含む組成物）が１８．７５ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　ステップ４：ステップ２、３で得られた、透過液及び再透過液の合計２５ｋｇ（ｐＨ７．６）を濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液２０ｋｇを得た。
　ステップ５：続いて、ステップ４で得られたＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ４と同じである。ＤＦ処理は透過液が１０ｋｇとなった時点で終了した。
　ステップ６：ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを７５ｇ得た。乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３７質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は５０質量％であった。
（実施例Ａ２）：ホエイタンパク質精製物（ＷＰＩ）およびホエイミネラル素材からのＧＭＰを含む組成物の調製
　ステップ１：ＷＰＩとしてチーズホエイ由来のＰｒｏｖｏｎ１９０（Ｇｌａｎｂｉａ社）を用いて８質量％ＷＰＩ水溶液、ホエイミネラル素材としてＦｏｎｄｌａｃＳＬ（Ｍｅｇｇｌｅ社）を用いて２質量％ホエイミネラル水溶液を調整した。ＦｏｎｄｌａｃＳＬの灰分分析値は１００ｇあたり、Ｋが５０２４ｍｇ、Ｎａが１７０４ｍｇ、Ｍｇが２５２ｍｇ、Ｃａが１０４４ｍｇであった。また、濃度が１．６８質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。
　次に、１．６８質量％炭酸水素ナトリウム水溶液３．７５ｋｇを８質量％ＷＰＩ水溶液３．７５ｋｇに加えよく攪拌した。その後、２質量％ホエイミネラル水溶液７．５ｋｇを加え、１５ｋｇの２質量％ＷＰＩ－０．４２質量％炭酸水素Ｎａ－１質量％ホエイミネラル水溶液を調製した。２質量％ＷＰＩ－０．４２質量％炭酸水素Ｎａ－１質量％ホエイミネラル水溶液のｐＨは８．２であった。
　ステップ２：この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５０，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液１０ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．５であった。
　ステップ３：ステップ２で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ２の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰを含む組成物）が１５ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　ステップ４：ステップ２、３で得られた、透過液及び再透過液の合計２５ｋｇ（ｐＨ７．５）を濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液２０ｋｇを得た。
　ステップ５：続いて、ステップ４で得られたＧＭＰを含む濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ４と同じである。ＤＦ処理は透過液が１５ｋｇとなった時点で終了した。
　ステップ６：ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを含む組成物を８６ｇ得た。乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３６質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は５０質量％であった。
（実施例Ａ３）：ホエイタンパク質精製物（ＷＰＩ）および硫酸銅からのＧＭＰを含む組成物の調製
　ステップ１：ＷＰＩとしてチーズホエイ由来のＰｒｏｖｏｎ１９０（Ｇｌａｎｂｉａ社）を用いて、８質量％ＷＰＩ水溶液を調整した。次に、濃度が３．３６質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。さらに、濃度が０．１２質量％となるようにイオン交換水に硫酸銅（ＩＩ）五水和物（関東化学社）を加えた硫酸銅（ＩＩ）五水和物水溶液を調整した。８質量％ＷＰＩ水溶液３．７５ｋｇに３．３６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液３．７５ｋｇを加えよく攪拌した。その後、硫酸銅水溶液７．５ｋｇを加え、１５ｋｇの２質量％ＷＰＩ－０．８４質量％炭酸水素Ｎａ－０．０６質量％硫酸銅水溶液を調製した。２質量％ＷＰＩ－０．８４質量％炭酸水素Ｎａ－０．０６質量％硫酸銅水溶液のｐＨは８であった。
　ステップ２：この水溶液を、濾過膜（ポリスルフォン素材、分画分子量１００，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液１０ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。
　ステップ３：ステップ２で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ２の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰを含む組成物）が４０ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　ステップ４：ステップ２，３で得られた、透過液及び再透過液５０ｋｇ（ｐＨ７．３）を濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液４５ｋｇを得た。
　ステップ５：続いて、ステップ４で得られたＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ４と同じである。ＤＦ処理は透過液が１０ｋｇとなった時点で終了した。
　ステップ６：ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを含む組成物を４２ｇ得た。乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり４０質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は３１質量％であった。
（実施例Ａ４）：ホエイタンパク質精製物（ＷＰＩ）および塩化鉄からのＧＭＰを含む組成物の調製
　ステップ１：ＷＰＩとしてチーズホエイ由来のＰｒｏｖｏｎ１９０（Ｇｌａｎｂｉａ社）を用いて、８質量％ＷＰＩ水溶液を調整した。次に、濃度が３．３６質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。さらに、濃度が０．１４質量％となるようにイオン交換水に塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（純正化学社）を加えた塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物水溶液を調整した。８質量％ＷＰＩ水溶液３．７５ｋｇに３．３６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液３．７５ｋｇを加えよく攪拌した。その後、塩化鉄水溶液７．５ｋｇを加え、１５ｋｇの２質量％ＷＰＩ－０．８４質量％炭酸水素Ｎａ－０．０７質量％塩化鉄水溶液を調製した。２質量％ＷＰＩ－０．８４質量％炭酸水素Ｎａ－０．０７質量％塩化鉄水溶液のｐＨは７．８であった。
　ステップ２：この水溶液を、濾過膜（ポリスルフォン素材、分画分子量１００，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液１０ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。
　ステップ３：ステップ２で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ２の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰを含む組成物）が３０ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　ステップ４：ステップ２，３で得られた、透過液及び再透過液４０ｋｇ（ｐＨ７．３）を濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液３５ｋｇを得た。
　ステップ５：続いて、ステップ４で得られたＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件はステップ４と同じである。ＤＦ処理は透過液が１５ｋｇとなった時点で終了した。
　ステップ６：ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを含む組成物を７１ｇ得た。乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり２８質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は３７質量％であった。
［Ｂ．第二の実施形態］
　本発明の第二の実施形態について、上述の第一の実施態様との相違点を中心に説明する。
（ｐＨ調整）
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含む水溶液のｐＨを４～９の範囲外から４～９の範囲内に調整する工程を含むことができるが、ＧＭＰの化学構造又は安定性を保持する観点から、このような工程を含まないことが好ましい。例えば、本発明のＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含む水溶液のｐＨを一旦４未満に調整し、この水溶液を再度４以上に調整する工程を含まないことが好ましい。同様に、乳原料を含む水溶液のｐＨを一旦９より上に調整し、この水溶液を再度９以下に調整する工程を含まないことが好ましい。
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、水溶液のｐＨが４～９の範囲内である場合はｐＨを４～９の範囲内に調整する必要はない。しかし、ｐＨが４未満、あるいは９を超える場合はｐＨが４～９となるよう調整する。ｐＨの調整は食品、経口摂取する医薬品の製造に用いることができるものであればどのようなものでも用いることができる。ｐＨを９より上から９以下に調整するための試薬として、塩酸、硫酸、乳酸等の一つ以上の使用を例示することができ、ｐＨを４未満から４以上に調整するための試薬として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の一つ以上の使用を例示することができる。しかしながら、炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせるものは、これらを用いてｐＨ調整をすると、得られる組成物中のＧＭＰ量が低下するため好ましくない。
　上記したとおり、ｐＨは４～９であればよく、４より大きく９以下であることが好ましく、ｐＨ４．５～８．５がより好ましく、ｐＨ５～８がさらに好ましく、ｐＨ５．５～８がさらに好ましく、ｐＨ６～８が最も好ましい。
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、固形分を含むｐＨ４～９の溶液を調製し、該水溶液中に炭酸水素イオン及び／又は炭酸イオンを溶液中に生じさせる。このときの溶液中の炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンの濃度は、０．００１重量％以上３５重量％以下であれば良い。
　溶液中の炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンの濃度は、具体的には、０．００１重量％以上、５重量％以下であることができる。具体的な範囲としては、０．００１～５重量％、０．００２５～３重量％、０．００５～２重量％、０．００７５～２重量％、０．０１～２重量％、０．０２５～２重量％、又は０．０５～２重量％であることができる。
（分離膜）
　実施形態に係るＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含み且つｐＨが４～９である水溶液中に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせたものを膜処理に供する。膜処理に用いる膜は分画分子量が９，０００～５０，０００Ｄａであればどのようなものでも用いることができるが、１０，０００～５０，０００Ｄａが好ましく、２０，０００～５０，０００Ｄａがより好ましく、３０,０００～５０，０００Ｄａが最も好ましい。
　膜の材質は、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、４フッ化エチレン、セラミック等を例示することができ、歩留りを上げるためには、酢酸セルロース、ニトロセルロース、ポリアクリロニトリル、芳香族ポリアミド等の親水性の膜、あるいは荷電膜を使用することが好ましい。
（ＧＭＰを含む組成物の製造方法の一態様）
（１）ダイアフィルトレーション（ＤＦ）処理方法
　ＧＭＰを得るため、ＧＭＰを含む原料から膜処理においてＧＭＰを含む透過液を得る際に、可能な限り再透過液を得ることが歩留まり向上のために好ましい。具体的には、工程（Ｃ）において生じた濃縮液に加水し再度限外濾過したり、これを繰り返して再透過液を得ることが更に好ましい。濃縮液への加水は、濾過水、イオン交換水、蒸留水、超純水、ＧＭＰを含む透過液を膜処理で濃縮する際に得られた透過液、ｐＨやイオン強度を調整した溶液、又はこれらを混合したものを使用できる。
（２）乳原料を含む水溶液の前処理
　乳原料を含む水溶液は、水溶液のｐＨ調整、及び水溶液中に炭酸水素イオン及び／又は炭酸イオンを生じさせる前に、分画分子量９，０００Ｄａより小さい分画分子量を有する限外濾過膜等による前処理でＧＭＰの濃度を調整しておくことが好ましい。
　また、原料中の脂肪分、不溶物等をクリームセパレーター、クラリファイヤー等の前処理を用いて除いておくことが好ましい。また、これらの原料に対して殺菌を目的とした加熱処理をすることも可能である。
（３）工程（Ｃ）後の濃縮及び／又は脱塩
　膜処理の透過液として得られるＧＭＰを含む組成物には、目的とするＧＭＰ以外に、乳糖やミネラルが含まれているため、分画分子量９，０００Ｄａより小さい分画分子量を有する限外濾過膜を用いて濃縮、脱塩すること、すなわち乳糖やミネラルを除去することが可能である。これにより、ＧＭＰ含量をより高めることが可能である。この濃縮及び／又は脱塩用の限外濾過膜の分画分子量は、好ましくは５，０００Ｄａ以下である。
（４）ＧＭＰを含む組成物の噴霧乾燥及び／又は凍結乾燥
　さらに、噴霧乾燥及び／又は凍結乾燥等の手段によって水分を減らしたＧＭＰを含む組成物を得ることができる。
（５）ＧＭＰを含む組成物のＧＭＰ含量測定方法
　処理に使用した原料に含まれるＧＭＰ含量および処理の結果得られたＧＭＰを含む組成物に含まれるＧＭＰ含量はウレア-ＳＤＳ電気泳動法を用いて測定した。
　第二の実施形態には、金属イオンが含まれないことが好ましい。
[実施例Ｂ]
　以下、第二の実施形態に係る発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例Ｂ１）：チーズホエイからのＧＭＰを含む組成物の調製
　チェダーチーズホエイ４４Ｌを７５℃達温殺菌後にクラリファイヤーにかけ、不溶物を除いた。不溶物を除いた後、分画分子量５，０００Ｄａの限外濾過膜を使用してチェダーチーズホエイを２倍濃縮し、２０Ｌの濃縮液と２０Ｌの透過液を得た。このチェダーチーズホエイ濃縮液２０Ｌに対して炭酸水素カリウム水溶液２０Ｌを加え、炭酸水素カリウムの濃度０．２質量％のチェダーチーズホエイを４０Ｌ調製した。
　この水溶液を、濾過膜（ポリサルフォン素材、分画分子量３０，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液３５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　この透過液３５ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液３０ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が１０ｋｇとなった時点で終了した。
　ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを３２ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３９質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は１９質量％であった。
（実施例Ｂ２）：ホエイタンパク質精製物（ＷＰＩ）からのＧＭＰを含む組成物の調製
　ＷＰＩとしてチーズホエイ由来のＰｒｏｖｏｎ１９０（Ｇｌａｎｂｉａ社）を用いて４％ＷＰＩ水溶液を調整した。濃度が０．３３質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。０．３３質量％炭酸水素ナトリウム水溶液７．５ｋｇを４％ＷＰＩ水溶液７．５ｋｇに加えよく攪拌し、１５ｋｇの２％ＷＰＩ－０．１６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液を調製した。２％ＷＰＩ－０．１６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液のｐＨは７．２であった。
　この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５０，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液１０ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　この透過液１０ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液２ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液８ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰを含む濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が１８ｋｇとなった時点で終了した。得られたＧＭＰを含む濃縮液は２ｋｇであった。
　ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液２ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを含む組成物を４４ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３０質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２２質量％であった。
（実施例Ｂ３）ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）からのＧＭＰを含む組成物の調製
　ＷＰＣとしてチーズホエイ由来のＷＰＣ８０（ザクセンミルヒ社）を用いて６％ＷＰＣ水溶液を調整した。次に、濃度が０．３３質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。６％ＷＰＣ８０水溶液７．５ｋｇに０．３３質量％炭酸水素Ｎａ水溶液７．５ｋｇを加えよく攪拌し、１５ｋｇの３％ＷＰＣ－０．１６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液を調製した。６％ＷＰＣ水溶液のｐＨは６．７、３％ＷＰＣ－０．１６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液のｐＨは７．２であった。
　この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量３０，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液１０ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　前段落で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰを含む組成物が１５ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　前々段落と前段落で得られた、透過液及び再透過液２５ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液２ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液２３ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰを含む濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が６ｋｇとなった時点で終了した。得られたＧＭＰを含む濃縮液は２ｋｇであった。
　ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液２ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを含む組成物を６４ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３０質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２５質量％であった。
（実施例Ｂ４）レンネットカゼインホエイからのＧＭＰを含む組成物の調製
　水酸化ナトリウムを用いてｐＨ７．２に調整したレンネットカゼインホエイ１０５Ｌを７５℃達温後１５秒間保持し殺菌した後にクラリファイヤーにかけ、不溶物を除いた。不溶物を除いた後、分画分子量５，０００Ｄａの限外濾過膜を使用して２倍濃縮し、５０Ｌの濃縮液と５０Ｌの透過液を得た。濃縮処理後のレンネットカゼインホエイ濃縮液のｐＨは７．３、Ｂｒｉｘは６．２％であった。このレンネットカゼインホエイ濃縮液５０Ｌに対して炭酸水素カリウム水溶液２５Ｌを加えた、Ｂｒｉｘ６．７％、炭酸水素カリウムの濃度０．１質量％のレンネットカゼインホエイを７５Ｌ調製した。
　この水溶液を、濾過膜（ポリサルフォン素材、分画分子量５０，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液７０ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　前段落で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰを含む組成物）が３０ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　前々段落で得られた透過液７０ｋｇと前段落で得られた再透過液３０ｋｇを併せた液（ＧＭＰを含む組成物）１００ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰを含む組成物）と透過液９５ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が１５ｋｇとなった時点で終了した。
　ＤＦ処理後のＧＭＰを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰを含む組成物を５６ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり４８質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２０質量％であった。
［Ｃ．第三の実施形態］
　本発明の第三の実施形態について、上述の第一の実施態様との相違点を中心に説明する。
（ｐＨ調整）
　実施形態に係るＧＭＰとＬＡを含む組成物の製造方法では、乳原料を含む水溶液のｐＨを４～９の範囲外から４～９の範囲内に調整する工程を含むことができるが、ＧＭＰの化学構造又は安定性を保持する観点から、このような工程を含まないことが好ましい。例えば、本発明のＧＭＰを含む組成物の製造方法では、乳原料を含む水溶液のｐＨを一旦４未満に調整し、この水溶液を再度４以上に調整する工程を含まないことが好ましい。同様に、乳原料を含む水溶液のｐＨを一旦９より上に調整し、この水溶液を再度９以下に調整する工程を含まないことが好ましい。
　実施形態に係るＧＭＰとＬＡを含む組成物の製造方法では、水溶液のｐＨが４～９の範囲内である場合はｐＨを４～９の範囲内に調整する必要はない。しかし、ｐＨが４未満、あるいは９を超える場合はｐＨが４～９となるよう調整する。ｐＨの調整は食品、経口摂取する医薬品の製造に用いることができるものであればどのようなものでも用いることができる。ｐＨを９より上から９以下に調整するための試薬として、塩酸、硫酸、乳酸等の一つ以上の使用を例示することができる。ｐＨを４未満から４以上に調整するための試薬として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の一つ以上の使用を例示することができる。しかしながら、炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせるものは、これらを用いてｐＨ調整をすると、得られる組成物中のＧＭＰとＬＡの量が低下するため好ましくない。
　上記したとおり、ｐＨは４～９であればよく、４より大きく９以下であることが好ましく、ｐＨ４．５～８．５がより好ましく、ｐＨ５～８がさらに好ましく、ｐＨ５．５～８がさらに好ましく、ｐＨ６～８が最も好ましい。
（炭酸水素イオン及び／または炭酸イオン）
　実施形態に係るＧＭＰとＬＡを含む組成物の製造方法では、固形分を含むｐＨ４～９の溶液を調製し、該水溶液中に炭酸水素イオン及び／又は炭酸イオンを溶液中に生じさせる。このときの溶液中の炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンの濃度は、０．００１重量％以上３５重量％以下であれば良い。
　溶液中の炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンの濃度は、具体的には、０．００１重量％以上、５重量％以下であることができる。具体的な範囲としては、０．００１～５重量％、０．００２５～３重量％、０．００５～２重量％、０．００７５～２重量％、０．０１～２重量％、０．０２５～２重量％、又は０．０５～２重量％であることができる。
（分離膜）
　実施形態に係るＧＭＰとＬＡを含む組成物の製造方法では、乳原料を含み且つｐＨが４～９である水溶液中に炭酸水素イオン及び／または炭酸イオンを生じさせたものを膜処理に供する。膜処理に用いる膜は分画分子量が９，０００～３００，０００Ｄａ以下であればどのようなものでも用いることができるが、２０，０００～２００，０００Ｄａが好ましく、３０，０００～１００，０００Ｄａがより好ましく、３０,０００～５０，０００Ｄａが最も好ましい。また、上限を５０，０００Ｄａ未満、例えば、４５，０００Ｄａ、又は４０，０００Ｄａとしてもよく、具体的な範囲としては、９，０００～４５，０００Ｄａ、１０，０００～４０，０００Ｄａ、又は２０，０００～４０，０００Ｄａの膜を使用してもよい。
　膜の材質は、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、４フッ化エチレン、セラミック等を例示することができ、歩留りを上げるためには、酢酸セルロース、ニトロセルロース、ポリアクリロニトリル、芳香族ポリアミド等の親水性の膜、あるいは荷電膜を使用することが好ましい。
（膜処理方法）
　実施形態に係るＧＭＰとＬＡを含む組成物の製造方法に用いる膜処理法は、食品や経口摂取する医薬品の処理、製造等で一般的に用いられている方法であればどのようなものでもよく、クロスフロー方式での濾過処理、ダイアフィルトレーション等を例示できる。この膜処理における透過液を、ＧＭＰとＬＡを含む組成物として得ることができる。
　なお、膜処理中の溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
（製造方法の一態様）
（１）ダイアフィルトレーション（ＤＦ）処理方法
　ＧＭＰとＬＡを得るため、ＧＭＰとＬＡを含む原料から膜処理においてＧＭＰとＬＡを含む透過液を得る際に、可能な限り再透過液を得ることが歩留まり向上のために好ましい。具体的には、工程（Ｄ）において生じた濃縮液に加水し再度限外濾過したり、これを繰り返して再透過液を得ることは更に好ましい。濃縮液への加水は、濾過水、イオン交換水、蒸留水、超純水、ＧＭＰとＬＡを含む透過液を膜処理で濃縮する際に得られた透過液、ｐＨやイオン強度を調整した溶液、又はこれらを混合したものを使用できる。
（２）乳原料を含む水溶液の前処理
　乳原料を含む水溶液は、水溶液のｐＨ調整、及び水溶液中に炭酸水素イオン及び／又は炭酸イオンを生じさせる前に、分画分子量９，０００Ｄａより小さい分画分子量の限外濾過膜等による前処理でＧＭＰとＬＡの濃度を調整しておくことが好ましい。
　また、原料中の脂肪分、不溶物等をクリームセパレーター、クラリファイヤー等の前処理を用いて除いておくことが好ましい。また、これらの原料に対して殺菌を目的とした加熱処理をすることも可能である。
（３）工程（Ｄ）後の濃縮及び／又は脱塩
　膜処理の透過液として得られるＧＭＰとＬＡを含む組成物には、目的とするＧＭＰとＬＡ以外に、乳糖やミネラルが含まれているため、分画分子量９，０００Ｄａより小さい分画分子量を有する限外濾過膜を用いて濃縮、脱塩すること、すなわち乳糖やミネラルを除去することが可能である。これにより、ＧＭＰとＬＡ含量をより高めることが可能である。この濃縮及び／又は脱塩用の限外濾過膜の分画分子量は、好ましくは５，０００Ｄａ以下である。限外濾過膜処理中の溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
（４）ＧＭＰを含む組成物の噴霧乾燥及び／又は凍結乾燥
　さらに、噴霧乾燥及び／又は凍結乾燥等の手段によって水分を減らしたＧＭＰとＬＡを含む組成物を得ることができる。
（５）ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物のＧＭＰ含量測定方法
　処理に使用した原料に含まれるＧＭＰ及びＬＡ含量および処理の結果得られたＧＭＰ及びＬＡを含む組成物に含まれるＧＭＰ及びＬＡ含量はウレア-ＳＤＳ電気泳動法を用いて測定した。
[実施例Ｃ]
　以下、第三の実施形態に係る発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例Ｃ１）：チーズホエイからのＧＭＰ及びＬＡを含む組成物の調製
　ゴーダチーズホエイ５４Ｌを７５℃達温殺菌後にクラリファイヤーにかけ、不溶物を除いた。不溶物を除いたゴーダチーズホエイに含まれるナトリウム濃度は０．０４質量％、カリウム濃度は０．１６質量％、カルシウム濃度は０．０３質量％、マグネシウム濃度は０．００６質量％であった。不溶物を除いた後、分画分子量５，０００Ｄａの限外濾過膜を使用し２倍濃縮し、２５Ｌの濃縮液と２５Ｌの透過液を得た。濃縮処理後のゴーダチーズホエイ濃縮液のｐＨは６．３であった。このゴーダチーズホエイ濃縮液２５Ｌに対して炭酸水素カリウム水溶液を加えた。炭酸水素カリウム水溶液を添加後に、ゴーダチーズホエイに内在する軽金属イオン及び／または遷移金属イオンを用いることを目的として、ゴーダチーズホエイを２倍濃縮した際に得られた透過液を炭酸水素カリウム水溶液を添加したゴーダチーズホエイ濃縮液に加え、Ｂｒｉｘ６．３％、炭酸水素カリウムの濃度０．１質量％のゴーダチーズホエイを５０Ｌ調製した。
　この水溶液を、濾過膜（ポリサルフォン素材、分画分子量５０，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ２）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液４５ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　この透過液４５ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）と透過液４０ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が３０ｋｇとなった時点で終了した。
　ＤＦ処理後のＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰとＬＡを含む組成物を５２ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３３質量％でありＬＡの含有率は６１質量％であった。β―ラクトグロブリンの含有率は６質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２１％であった。
（実施例Ｃ２）：ホエイタンパク質精製物（ＷＰＩ）からのＧＭＰ及びＬＡを含む組成物の調製
　ＷＰＩとしてチーズホエイ由来のＰｒｏｖｏｎ１９０（Ｇｌａｎｂｉａ社）を用いて４％ＷＰＩ水溶液を調整した。濃度が０．３質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。軽金属／遷移金属塩として硫酸銅５水和物を用いて０．１質量％の硫酸銅水溶液を調製した。炭酸水素ナトリウム水溶液及び硫酸銅水溶液の調製にはイオン交換水を用いた。０．１質量％の硫酸銅水溶液１５ｋｇを４％ＷＰＩ－０．３質量％炭酸水素Ｎａ水溶液１５ｋｇに加えよく攪拌し、３０ｋｇの２％ＷＰＩ－０．１５質量％炭酸水素Ｎａ－０．０５質量％硫酸銅水溶液を調製した。４％ＷＰＩ水溶液のｐＨは６．２、４％ＷＰＩ－０．３質量％炭酸水素Ｎａ水溶液のｐＨは７．２であった。２％ＷＰＩ－０．１５質量％炭酸水素Ｎａ－０．０５質量％硫酸銅水溶液のｐＨは６．８であった。
　この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量３００，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液１０ｋｇと透過液２０ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　この透過液２０ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液２ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）と透過液１８ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が１８ｋｇとなった時点で終了した。得られたＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液は２ｋｇであった。
　ＤＦ処理後のＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液２ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰとＬＡを含む組成物を１０６ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり２７質量％でありＬＡの含有率は５７質量％であった。β―ラクトグロブリンの含有率は７質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２４％であった。
（実施例Ｃ３）　ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）からのＧＭＰ及びＬＡを含む組成物の調製
　ＷＰＣとしてＷＰＣ８０（ザクセンミルヒ社）を用いて６％ＷＰＣ水溶液を調整した。濃度が０．３３質量％となるようにイオン交換水に炭酸水素ナトリウムを加えた炭酸水素ナトリウム水溶液を調製した。６％ＷＰＣ８０水溶液７．５ｋｇに０．３３質量％炭酸水素Ｎａ水溶液７．５ｋｇを加えよく攪拌し、１５ｋｇの３％ＷＰＣ－０．１６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液を調製した。６％ＷＰＣ水溶液のｐＨは６．７、３％ＷＰＣ－０．１６質量％炭酸水素Ｎａ水溶液のｐＨは７．２であった。
　この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量３０，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液１０ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　前段落で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）が１５ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　前々段落と前段落で得られた透過液及び再透過液（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）２５ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液２ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）と透過液２３ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が６ｋｇとなった時点で終了した。得られたＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液は２ｋｇであった。
　ＤＦ処理後のＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液２ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰとＬＡを含む組成物を６６ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３０質量％でありＬＡの含有率は６１質量％であった。β―ラクトグロブリンの含有率は９質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２７％であった。
（実施例Ｃ４）レンネットカゼインホエイからのＧＭＰ及びＬＡを含む組成物の調製
　水酸化ナトリウムを用いてｐＨ７．２に調整したレンネットカゼインホエイ１０５Ｌを７５℃達温後１５秒間保持し殺菌した後にクラリファイヤーにかけ、不溶物を除いた。不溶物を除いた後、分画分子量５，０００Ｄａの限外濾過膜を使用して２倍濃縮し、５０Ｌの濃縮液と５０Ｌの透過液を得た。濃縮処理後のレンネットカゼインホエイ濃縮液のｐＨは７．３であった。このレンネットカゼインホエイ濃縮液５０Ｌに対して炭酸水素カリウム水溶液２５Ｌを加えた、Ｂｒｉｘ６．７％、炭酸水素カリウムの濃度０.１質量％のレンネットカゼインホエイを７５Ｌ調製した。
　この水溶液を、濾過膜（ポリサルフォン素材、分画分子量５０，０００Ｄａ、膜面積０．２ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇと透過液７０ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）を得た。得られた透過液のｐＨは７．３であった。
　前段落で得られた濃縮液５ｋｇに対してＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落の記載と同じである。再透過液（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）が３０ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
　前々段落において得られた透過液７０ｋｇと前段落で得られた再透過液３０ｋｇを併せた液（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）１００ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルフォン素材、分画分子量５，０００Ｄａ、膜面積０．３３ｍ2）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液５ｋｇ（ＧＭＰ及びＬＡを含む組成物）と透過液９５ｋｇを得た。
　続いて、前段落で得られたＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液５ｋｇのＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液が３０ｋｇとなった時点で終了した。
　ＤＦ処理後のＧＭＰ及びＬＡを含む濃縮液５ｋｇを、凍結乾燥処理し、粉末状のＧＭＰとＬＡを含む組成物を９４ｇ得た。
　乾燥粉末状のＧＭＰの含有率は固形分あたり３５質量％でありＬＡの含有率は５８質量％であった。β―ラクトグロブリンの含有率は７質量％であった。使用した原料からのＧＭＰの回収率は２１％であった。

Claims (6)

  1. 　（Ａ）ｐＨが４～９である、乳原料を含有する水溶液を調製する工程と、
    　（Ｂ）前記水溶液に前処理を行い、炭酸（水素）イオンと、金属イオンと、を含有する前処理後の水溶液を得る工程と、
    　（Ｃ）前記前処理後の水溶液を、分画分子量９，０００Ｄａ以上３００，０００Ｄａ以下の膜を用いた膜処理に供する工程と、を含むκ―カゼイングリコマクロペプチドを含む組成物の製造方法。
  2. 　前記（Ｃ）工程の透過液として、κ―カゼイングリコマクロペプチドを含む組成物を得ることを特徴とする請求項１に記載の組成物の製造方法。
  3. 　前記（Ｃ）工程より前に、ｐＨ４未満の乳原料を含む水溶液をｐＨ４以上に調整する工程を含む、請求項１又は２に記載の組成物の製造方法。
  4. 　前記（Ｃ）工程で得られた濃縮液を前記膜処理に再度供し、この処理により得られえる再透過液を得る（Ｄ）工程をさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。
  5. 　分画分子量が９，０００Ｄaより小さい膜を用いて、前記透過液及び/または再透過液を濃縮する（Ｅ）工程をさらに含む、請求項１～４に記載の組成物の製造方法。
  6. 　前記（Ｃ）工程において使用する膜の分画分子量が、３０，０００Ｄa～１００，０００Ｄａである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。
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