JPH02276542A - κ―カゼイングリコマクロペプチドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、種々の生理活性をもつκ−カゼイングリコマ
クロペプチドを簡便に製造する方法に関する。

（従来の技術） に−カゼイングリコマクロペプチドは、牛乳のに一カゼ
インにレンネット又はペプシンを作用させた時に生成す
るシアル酸結合ペプチドであって、チーズホエー中に含
まれることが、従来から知られている。

従来、に−カゼイングリコマクロペプチドの製造法とし
ては、実験室的には、牛乳から単離したに一カゼインを
脱イオン水に溶解したものにペプシンを作用させた後、
トリクロル酢酸を加えてパラ−に一カゼイン画分を沈澱
させ、次いで得られた上清を脱イオン水に対して透析し
て脱塩した後、凍結乾燥することより調製する方法（ス
タン等「プルティン　オブ　エクスペリメンタル　バイ
オロジー　アンド　メディシンＪ　　（Ｂｕｌｌｕｔｉ
ｎ　ｏｆＢｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　Ｂｉｏｌｏｇｙ
　　ａｎｄ　　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）　　９６　　８８９
（１９８３））　、または、上記に一カゼインを脱イオ
ン水に溶解し、該溶液のｐＨを６．７に調整した後、し
ンネットを作用させ、次いで更にｐＨを４．６に調整し
てパラ−に一カゼインを沈澱させて除去し、得られた上
清を透析に付して脱塩した後、凍結乾燥して調製する方
法（アカデミツクブレス社発行「ミルクプロティンＪ　
　（Ｍｉｌｋ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）　ｐｐ２００）等が行
われていた。

しかし、これらの方法は、実験室的のものであるから、
当然大量生産には適さない。

一方、に−カゼイングリコマクロペプチドの産業上の利
用性が従来知られていなかったため、その大量生産のた
めの方法についても検討されていなかった。

ところが、最近になってκ−カゼイングリコマクロペプ
チドが犬の食欲を低下させる作用を有すること（スタン
等、「プルティン　オブ　エクスペリメンタル　バイオ
ロジー　アンド　メデイシンＪ　　　（Ｂｕｌｌｕｔｉ
ｎ　　ｏｆ　　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ　　ａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ）　９６．８８９　
（１９８３））が報告されたことから、肥満防止用食品
素材として利用され得ることが判った。

更に、その後、に−カゼイングリコマクロペプチドには
大腸菌の腸管細胞への付着を阻止したり、インフルエン
ザウィルスの感染を防御する効果（特開昭６３−２８４
１３３号）や抗歯垢効果（特開昭６３−２３３９１）号
）のあることが判明したことから、その工業的規模での
生産が強く望まれるようになった。

（発明が解決しようとする課Ｂ） かかる状況にあって、レンネットカゼインカードのホエ
ーからκ−カゼイングリコマクロペプチドを調製する方
法が開発された（特開昭６３−２８４１９９号）、この
方法は、従来用いてきたトリクロル酢酸を使わなくても
良いことから食品素材として充分利用可能であり、また
、大量生産も可能である。しかし、レンネットカゼイン
カードホエーを得る際に副生じてくるレンネットカゼイ
ンカードの上手な利用法を開発しない限り、カードの処
理にコストがかかり、ひいては、に−カゼイングリコマ
クロペプチドの製造コストを引き上げることにな力、実
際的ではない。

ところで、本発明者らは、に−カゼイングリコマクロペ
プチドの分子量がｐＨ４を境にしてシャープに変化する
性質を見出し、本発明をなすに到った。

従って、本発明は、この性質を利用して、簡便で、安価
にκ−カゼイングリコマクロペプチドを製造する方法を
提供することを目的とする。

（課題を解決するための手段） 本発明は、に−カゼイングリコマクロペプチドを含有す
る乳質原料物質、例えばチーズホエー、ホエー蛋白質濃
縮物、除蛋白質チーズホエー等を、まずｐＨ４未満に調
整した後、分画分子量１０．０００〜ｓｏ　、　ｏｏｏ
の膜を用い、限外濾過処理をして透過液を得、好ましく
は再度、該透過液をｐＨ４以上に調整した後、分画分子
量ｓｏ、ｏｏｏ以下の膜を用いて脱塩しｔｌｍすること
を特徴とするκ−カゼイングリコマクロペプチドの製造
法である。

に−カゼイングリコマクロペプチドはチーズ製造時にホ
エーの中に遊離してくることは昔から知られており、原
料としてチーズホエー或いはチーズホエーを限外濾過し
て製造されたホエー蛋白質濃縮物、又は、加熱等の方法
でホエー蛋白質を沈澱除去したチーズホエーや乳糖母液
を用いることができる。ホエー蛋白質濃縮物を用いる場
合は、水で還元したものを出発原料とするが、濃度は２
０％以下とすることが望ましい、濃度が高過ぎると限外
濾過の際に流速が低くなる。チーズホエーはどんなもの
でもよいが、カゼインのカードや脂肪が少量残存してい
ることが多いので遠心分離、クリームセパレーター、或
いはタラリファイヤー等でこれらを除去しておく、加熱
で除蛋白質したチーズホエー中には乳糖が主成分となっ
ており乳糖が沈澱してくることがある。この場合には沈
澱した乳糖を遠心分離、タラリファイヤー或いはデカン
タ−等で除去後、少し加温しておくとよい。

次に、これらのホエーのｐｉを４未満、好ましくは３．
５±０．２に調整する。　ｐＨが４以上になるとκ−カ
ゼイングリコマクロペプチドは互いに会合するために分
子量が高くなり膜を通過しにくくなる。

ｐ）の下限は特に制限はないが、ｐＨ３以下になるとに
−カゼイングリコマクロペプチドに結合しているシアル
酸が不安定となり、生理効果が減少することがある。但
し、脱シアル酸κ−カゼイングリコマクロペプチドを得
ようとする場合には、ｐ。

３以下であっても構わな、い、　ｐＨの調整は酸であれ
ば何でもよく、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸等を
例示し得る。

ｐＨ調整後、限外濾過を行うが、用いる膜の分画分子量
は１０．０００〜５０，０００である０分画分子量１０
．０００未満の膜を用いるとκ−カゼイングリコマクロ
ペプチドが透過しにくくなり、ｓｏ、ｏｏｏを趨える膜
ではκ−カゼイングリコマクロペプチドは透過するもの
の共存するホエー蛋白質の一部も透過しκ−カゼイング
リコマクロペプチドの純度が低くなる０通常、ホエー蛋
白質濃縮物の製造工程では分画分子量２０，０００程度
の膜を装着したモジエールで限外濾過することが一般的
であり、これと同じ膜を用いることができる。

限外濾過は、可能な限り濃縮し透過液を得ることが歩留
を向上させる上で好ましい、ａｍ液に加水し、再度限外
濾過したり、これを繰り返すことは更に好ましい。又、
この際、流速を上げるために５０℃位に加温しても良い
、しかし、６０℃を趨えるとホエー蛋白質が沈澱、或い
はゲル化してくるために６０℃以下で行うことが望まし
い、濃縮液はｐＨを中性に戻した後に乾燥し、ホエー蛋
白質濃縮物粉末とすることができる。

このようにして得られた透過液にはκ−カゼイングリコ
マクロペプチドの他に、乳糖やミネラルが含まれ、又、
に−カゼイングリコマクロペプチドの濃度も低いので脱
塩、濃縮を行うが、これには２通りの方法がある。

まず第１の方法は、透過液のｇ）Ｈを４以上に戻した後
に分画分子量ｓｏ、ｏｏｏ以下の膜で限外濾過、ダイア
フィルトレージ四ン、又は逆浸透濾過を行う。

ｐｕの調整はアルカリ剤なら何でも良く、例えば水酸化
ナトリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニア水等を用い
ることができる。に−カゼイングリコマクロペプチドは
ｐＨ４を境として、それ以下ではモノマー（分子量９．
０００）、それを超えるとポリマー（分子量４５，００
０）になることから目的に応じてｐＨ５以上とすること
が好ましい、又、用いる膜は分画分子量ｓｏ、ｏｏｏ以
下なら何でも良いが、５０．０００を超える膜ではκ−
カゼイングリコマクロペプチドが透過してしまう、一般
のホエー蛋白質濃縮物製造工程中で用いられている分画
分子量２０．０００程度の膜を用いるのが最も簡便であ
る。

透過液のｐＨを４以上に戻さなかった場合には、に−カ
ゼイングリコマクロペプチドはモノマーで存在するので
第２の方法を用いる。すなわち、分子量分画１０．００
０以下の膜、好ましくは８　、０００以下の膜で限外濾
過、ダイアフィルトレーシラン、或いは逆浸透濾過を行
い？１）ｉ液を得る。

いずれの方法においても、電気透析やイオン交換樹脂に
よる脱塩工程を組み合わせることには全く問題がない。

こうして得られた濃縮液には本質的にκ−カゼイングリ
コマクロペプチドしか含まれていないので、噴霧乾燥又
は凍結乾燥等の手段によって乾燥する。尚、に−カゼイ
ングリコマクロペプチドは熱に対して安定なために乾燥
工程の前に殺菌工程を入れることは更に望ましい。

（発明の効果） このように、本発明によればチーズホエー、ホエー蛋白
質濃縮物、除蛋白質チーズホエー等のｐＨを制御するだ
けで、に−カゼイングリコマクロペプチドを簡便に、大
量にかつ安価に製造し得る。

しかもその純度も高い。

更にホエー蛋白質濃縮物を通常製造している工場におい
ては新たに設備投置しなくても既存の限外濾過装置や逆
浸透濾過装置を用いてκ−カゼイングリコマクロペプチ
ドを製造することが可能であり、に−カゼイングリコマ
クロペプチド以外の蛋白質画分は、ホエー蛋白質濃縮物
として利用することが可能である。

又、トリクロル酢酸等の添加物を一切使用していないの
で、食品素材や医療品素材としてκ−カゼイングリコマ
クロペプチドを応用することが可能であり、産業界にと
って極めて有益である。

（実施例） 以下、実施例に基づき本発明を具体的に説明する。

実施例１ ホエー蛋白質濃縮物からのκ−カゼイングリコマクロペ
プチドの調製 ホエー蛋白質濃縮物（太陽化学制、商品名サンラクトＮ
−Ｎ−２）１を５０℃の水５０７に溶解し、濃塩酸によ
り、ｐＨ３，５に調整した。これを、分画分子量２０．
０００の限外濾過膜Ｃ００５社ＧＲ６１ＰＰ）を用い、
５０℃、圧力Ｑ、４ＭＰａ、平均透過液流速５２．４１
！　／＠”　・ｈにて限外濾過を行った。透過液量が４
０１に達した時点で濃縮液に５０℃の水４０１を加え、
連続して限外濾過を行った０以上の様にして連続運転を
行い、透過液を全量で１６０１’得た。

得られた透過液に、２５％苛性ソーダを加え、ｐＨ７，
０とし、再度同じ条件、同じ限外濾過膜で、濃縮液が５
１になるまで限外濾過を行い、脱塩濃縮した。続いて５
０℃の水を加え、濃縮液量を常に１０１に保ちながら、
これまでと同じ条件、同じ限外濾過膜でダイアフィルト
レージ四ンを行い、さらに脱塩した。このダイアフィル
トレージョンにより透過液量が８０１に達した時点で、
濃縮液に水を加えるのをやめ、濃縮液量が２１になるま
で限外濾過にて濃縮し、この濃縮液を凍結乾燥し、に−
カゼイングリコマクロペプチド５４ｇを得た。このもの
をウレア−３ＤＳ電気泳動法による分析の結果、純度は
８２％であった。（ウレア−３Ｏ３電気泳動法は、まず
サンプルを電気泳動し、これをコマシーブルー染色し、
得られた染色ゲルをデンシトメーター（ＧＥＬ？ｔＡＮ
　ＡＣロー１２）にかけ、そのピーク面積からサンプル
中のＧＭＰ純度を決定した。）実施例２ チーズホエーからのκ−カゼイングリコマクロペプチド
の調製 ゴーダチーズホエー（雪印乳業製）５０ｉを濃塩酸でＰ
Ｈ３，５に調整し、タラリファイヤーにかけ、不溶物を
除く、これをプレートヒーターで５０℃まで加温し、実
施例１で用いたものと同じ条件で、濃縮液の固形が２０
％になるまで濃縮した。この時得られた透過液３６０２
を２５％苛性ソーダでｐＨ７，０とし、実施例１と同様
の方法で濃縮、脱塩、凍結乾燥を行い、に−カゼイング
リコマクロペプチド５．７ｇを得た。ウレア−５ＤＳ電
気泳動法による分析の結果、純度は８０％であった。

実施例３ 除蛋白質チーズホエーからのκ−カゼイングリコマクロ
ペプチドの調製 ゴーダチーズホエー（雪印乳業製）５００Ｉｌを濃塩酸
でｐＨ４，６とし、蛋白質を沈澱させ、デカンテーショ
ンにより上清を得る。これを８０℃、１０分間加熱し、
タラリファイヤーにかけ、不溶物を除く。

これを５０℃まで冷却、濃塩酸でｐＨ３，５とし、この
温度を保ったまま実施例２で用いたものと同じ条件で、
濃縮液の固形が２０％になるまで濃縮した。

この時得られた透過液４１０ｊｌを２５％苛性ソーダで
ｐＨ７，０とし、実施例１と同様の方法で濃縮、脱塩、
凍結乾燥を行い、に−カゼイングリコマクロペプチド６
．５ｇを得た。ウレア−３Ｏ３電気泳動法による分析の
結果、純度は７８％であった。

実施例４ ホエー蛋白質濃縮物からのκ−カゼイングリコマクロペ
プチドの調製と、ルーズＲｏｌｌによる脱塩・濃縮 ホエー蛋白質濃縮物（太陽化学制、商品名サンラクトＮ
−Ｎ−２）１を５０℃の水５０４１に溶解したものを原
料とし、実施例１と同様にして限外濾過を行い、透過液
１６０１を得た。この透過液をｐＨ３，５のまま分画分
子量ｓ、ｏｏｏの限外濾過膜（ＤＤＳ社ＧＲ８１ＰＰ）
を用い、５０℃、圧力０．４ＭＰａ、平均透過液流速３
８．８１　／ｓ”・ｈにて限外濾過し、濃縮液量が２１
になるまで脱塩、濃縮を行った。この濃縮液を凍結乾燥
し、に−カゼイングリコマクロペプチド５４ｇを得た。

ウレア−３ＤＳ電気泳動法による分析の結果、純度は８
０％であった。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）κ−カゼイングリコマクロペプチドを含有する乳
   質原料物質をｐＨ４未満に調整した後、分画分子量１０
   ，０００〜５０，０００の膜を用い、限外濾過処理をし
   て透過液を得、この透過液を分画分子量５０，０００以
   下の膜を用いて濃縮することを特徴とするκ−カゼイン
   グリコマクロペプチドの製造法。
2. （２）限外濾過により得られた透過液を再度ｐＨ４以上
   に調整した後、濃縮する請求項（１）記載のκ−カゼイ
   ングリコマクロペプチドの製造法。
3. （３）濃縮を分画分子量１０，０００以下の膜を用いて
   行う請求項（１）記載のκ−カゼイングリコマクロペプ
   チドの製造法。