WO2019174652A2

WO2019174652A2 - 一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用

Info

Publication number: WO2019174652A2
Application number: PCT/CN2019/087013
Authority: WO
Inventors: 唐小江; 卢肖宇; 胡伟; 肖凌琥
Original assignee: 广东众尔健生物科技有限公司
Priority date: 2018-03-16
Filing date: 2019-05-15
Publication date: 2019-09-19
Also published as: US20200405613A1; WO2019174652A3; CN109431850A

Abstract

本发明属于化妆品研发领域，尤其涉及一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用。本发明提供了一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用。与目前市面上常规的胶原相比，除具备一般胶原的特性外，鼠尾胶原还具有三螺旋结构稳定、胶原活性高以及免疫原性低的优点，其来源质量可控，生物安全性高，可不必采用辐照灭菌而降低生物活性；经实验测定可得，本发明提供的技术方案制得的鼠尾胶原，具有美白、抑制黑色素合成、抗氧化、抗过敏、激素肤质修复以及祛痘的性能。本发明提供的一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，解决了现有技术中，含有胶原蛋白的化妆品，通常还需添加调色剂、调味剂、稳定剂以及防腐剂，严重影响化妆品品质的技术缺陷。

Description

一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用

本申请要求于2018年12月28日提交中国专利局、申请号为201811619038.1、发明名称为“一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用”及于2018年03月16日提交中国专利局、申请号为201810218080.6、发明名称为“一种胶原在化妆品领域的应用”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

技术领域

本发明属于化妆品研发领域，尤其涉及一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用。

背景技术

随着经济的告诉发展，现代人，尤其是现代女性，对于美有了越来越高的追求。其中，由于胶原蛋白来源广泛，且不添加有化学合成的试剂，胶原蛋白在美容化妆品应用领域发展很快，是优质化妆品的新型原料及近代医学美容中皮肤组织理想的填充物。

胶原蛋白在美容化妆品应用领域发展很快，胶原蛋白可用作优质化妆品的新型原料及近代医学美容中皮肤组织理想的填充物。胶原蛋白用于化妆品中，由于其具有的营养性、修复性、保湿性、配伍性以及亲和性功效，受到了广大爱美女性的青睐。

技术问题

然而，现有技术中，应用于美容化妆品领域的胶原蛋白，通常为普通环境生长的动物，无法对其携带的微生物和寄生虫进行控制，可能携带对人体有害的病原体，存在安全隐患；杀灭胶原病原体的方法通常需要辐照，但会引起胶原结构变性而降低胶原的生物活性；另外鱼源或牛源的胶原，一般为有色、具有较大的腥臭味，需要添加调色剂以及调味剂，影响了消费者的体验；常用胶原本身纯度低，纯化难度大，纯化工艺复杂，易降低产品的稳定性，产品容易变性，在贮存和应用中还需要加入较大量的稳定剂和防腐剂。因此，迫切需要既安全又有效的胶原。

因此，研发出一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，用于解决现有技术中，含有胶原蛋白的化妆品，通常还需添加调色剂、调味剂、稳定剂以及防腐剂，严重影响化妆品品质的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，用于解决现有技术中，含有胶原蛋白的化妆品，通常还需添加调色剂、调味剂、稳定剂以及防腐剂，严重影响化妆品品质的技术缺陷。

本发明提供了一种胶原在化妆品领域的应用，所述胶原为鼠尾胶原。

优选地，所述鼠尾胶原为大鼠鼠尾胶原和/或小鼠鼠尾胶原。

优选地，所述大鼠和/或小鼠达到实验动物清洁级或无特定病原体(SPF)级。

优选地，所述鼠尾胶原应用的载体包括：面膜、精华液、乳膏、凝胶以及喷雾中的任意一种或多种。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在激素脸护肤品领域和/或脱敏护肤品的应用。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在祛痘护肤品领域的应用。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在抗皱护肤品领域的应用。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在保湿护肤品和/或润滑护肤品领域的应用。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在皮肤控油护肤品领域的应用。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在祛斑护肤品领域的应用。

优选地，所述应用为鼠尾胶原在皮肤修复护肤品领域的应用。

本发明中，所使用的鼠尾胶原是从大鼠或小鼠尾巴中提取出来的胶原蛋白，其提取液原液为无色无味的胶状液体，是天然的高纯度胶原，以I型胶原为主。鼠尾胶原是细胞贴壁培养的首选材料，可促进细胞贴壁生长，利用该特性，鼠尾胶原也有人用作伤口愈合用的创可贴、人造皮肤等，是皮肤修复良好的天然材料，但目前尚未见鼠尾胶原在化妆品中的应用。

由于大鼠或小鼠的体型小，可采取恒温恒湿恒压灭菌的屏障设施进行严格控制的人工饲养，其微生物和寄生虫可以完全控制，不会携带诸如疯牛病等危害人类的病原体，不必采取辐照进行灭菌而降低其活性，可以确保其安全性和有效性。目前已具有清洁级和无特定病原体(SPF)级的实验用大鼠和小鼠供应，具备产业化生产的条件。特别鼠尾的胶原含量丰富、纯度高、提取分离工艺简单，低温工艺可确保胶原不变性，得到的产品纯度高，杂质少，过敏原性低。研究还发现，用鼠尾胶原作为化妆品的主要功效性原料，具备安全、有效、稳定的特点，可避免调色剂、调味剂等不必要的添加，提高化妆品的品质。

综上所述，本发明提供了一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用。与目前市面上常规的胶原相比，除具备一般胶原的特性外，鼠尾胶原还具有三螺旋结构稳定、胶原活性高以及免疫原性低的优点，其来源质量可控，生物安全性高，可不必采用辐照灭菌而降低生物活性；经实验测定可得，本发明提供的技术方案制得的鼠尾胶原，具有美白、抑制黑色素合成、抗氧化、抗过敏、激素肤质修复以及祛痘的性能。本发明提供的一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，解决了现有技术中，含有胶原蛋白的化妆品，通常还需添加调色剂、调味剂、稳定剂以及防腐剂，严重影响化妆品品质的技术缺陷。

具体实施方式

本发明实施例提供了一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，用于解决现有技术中，含有胶原蛋白的化妆品，通常还需添加调色剂、调味剂、稳定剂以及防腐剂，严重影响化妆品品质的技术缺陷。

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为了更详细说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，进行具体地描述。

实施例1

本实施例为从大鼠中提取鼠尾胶原的具体实施例。

鼠尾胶原蛋白的提取方法，包括以下步骤：

(1)、取SPF级大鼠，安死术处死后，立即剪取尾巴，置在冰块上剥去皮肤，压扁，去除骨头和肌肉，放置于0～10℃的0.01～0.2mol/L Tris～HCl缓冲盐溶液，所抽提的尾胶原呈白色丝状。

(2)、上述丝状物在0～10℃下预处理4～36小时，搅拌，除杂蛋白，滤干水分，加0.05～2mol/L醋酸溶液。加入1；1000～1；50000的配比胃蛋白酶，共分三次加入，12～36小时加完。期间不间断搅拌至所有尾腱均被酶解呈现乳胶状。酶解持续36～144小时。

(3)、将乳胶状溶液于0～10℃条件下离心10～40分钟，除去不呈现乳胶状的固化物。往乳胶溶液中以1；0.5～1；2的体积配比加入0.01～0.1mol/L醋酸溶液。搅拌至胶状溶液成分混匀。

(4)、加入0.1～5mol/LNaCl溶液至乳胶状溶液并不断搅拌至有白色絮状沉淀在溶液中不再析出为止。高速离心溶液20～50min。收集沉淀。将乳胶溶液以1；(0.5～1)；4的体积比的量加入0.1～5mol/LNaCl溶液，于0～10℃下放置6～48h。次日重复步骤6。

(5)、集中步骤6中收集到的沉淀。用0.01～2mol/L醋酸溶液重复溶解后加入0.1～5mol/L NaCl溶液再次析出胶原蛋白。高速离心溶液20～50min。收集沉淀。重复此步骤1～5次直至所沉淀的胶原蛋白能够完全溶解。

(6)、将纯化完全的胶原蛋白用灌注于万级分子量截留的透析袋中透析48～96h。每天换水2～8次。透析外液用双蒸水进行。得到胶原蛋白原液，为无色无味的凝胶，其pH＝4.1～6.5，含量控制在1～10mg/ml。鼠尾胶原蛋白经过如下鉴定：(1)SDS～PAGE电泳(SDS～聚丙烯酰胺凝胶电泳)鉴定，其制备的鼠尾胶原蛋白以美国SIGMA公司的鼠尾胶原蛋白产品为对照，两者图谱无差异，三条带的分子量分别为220KD，105KD，95KD。氨基酸含量分析表明，其含有①胶原蛋白特征氨基酸羟脯氨酸，含量约为8％左右；②其不含胱氨酸、色氨酸这两种氨基酸，与其自身特征相符；③甘氨酸含量接近总氨基酸含量的三分之一，与其自身特征相符。制备的鼠尾胶原蛋白质量高，纯度好。

(7)、将透析完全的胶原蛋白溶液分装入20mL每瓶的小型玻璃瓶，40℃～0℃条件下进行冷冻干燥48～144h。冻干产品即为鼠尾胶原蛋白冻干纱布片。

实施例2

本实施例为从小鼠中提取鼠尾胶原的具体实施例。

鼠尾胶原蛋白的提取方法，包括以下步骤：

(1)、取SPF级小鼠，安死术处死后，立即剪取尾巴，置在冰块上剥去皮肤，压扁，去除骨头和肌肉，放置于0～10℃的0.01～0.2mol/L Tris～HCl缓冲盐溶液，所抽提的尾胶原呈白色丝状。

(2)、上述丝状物在0～10℃下预处理4～36小时，搅拌，除杂蛋白，滤干水分，加0.05～2mol/L醋酸溶液。加入1∶1000～1∶50000的配比胃蛋白酶，共分三次加入，12～36小时加完。期间不间断搅拌至所有尾腱均被酶解呈现乳胶状。酶解持续36～144小时。

(4)、加入0.1～5mol/LNaCl溶液至乳胶状溶液并不断搅拌至有白色絮状沉淀在溶液中不再析出为止。高速离心溶液20～50min。收集沉淀。将乳胶溶液以1∶(0.5～1)∶4的体积比的量加入0.1～5mol/LNaCl溶液，于0～10℃下放置6～48h。次日重复步骤6。

(6)、将纯化完全的胶原蛋白用灌注于万级分子量截留的透析袋中透析48～96h。每天换水2～8次。透析外液用双蒸水进行。得到胶原蛋白原液，为无色无味的凝胶，其pH＝4.1～6.5，含量控制在1～10mg/ml。鼠尾胶原蛋白的鉴定方法同实施例1之(6)。

(7)、将透析完全的胶原蛋白溶液分装入20mL每瓶的小型玻璃瓶，～40℃～0℃条件下进行冷冻干燥48～144h。冻干产品即为鼠尾胶原蛋白冻干纱布片。

实施例3

本实施例为利用实施例1制得的鼠尾胶原蛋白原液制备面膜的具体实施例。

表1：面膜处方

制备方法如下：

(1)加适量的水，将A相的鼠尾胶原蛋白溶解，使溶解完全，备用。

(2)将B相的透明质酸钠、辅酶Q10、血清白蛋白、1，3丁二醇溶解于适量水中，加热使完全溶解，待冷却后备用。

(3)在冰浴条件下，将第(1)步中的产物滴加入(2)的溶液中，搅拌半个小时，使其充分结合。

(4)将C相中的蓖麻油、甘油加入适量水中溶解。

(5)保持冰浴低温，将(3)的溶液滴入(4)中，迅速搅拌分散。

(6)将D相剩余量的水全部加入。搅拌，抽真空，得到活性原液。

(7)将上述活性原液注入以放置面膜的面中，密封成型，即得揭膜即得到鼠源胶原蛋白美容面膜。

与市面常见面膜相比，本品有两点优势。首先，本品A项为核心活性成分，B项为发挥活性的辅助成分，两相具有协同作用，透明质酸钠、辅酶Q10、血清白蛋白本身具有润滑、保湿、促前皮肤生长作用，与本品鼠尾胶原制成复合配方后，可以获得更优的效果。其次，本品工艺稳定，产品易于成形，不用低湿冷藏。工艺中控制使用蓖麻油、甘油等赋形成分，使获得面膜产品成分均匀，质量稳定。

实施例4

本实施例为验证实施例2制得的鼠尾胶原蛋白抑制细胞黑色素合成效果的具体实施例。

采用小鼠B16黑色素瘤细胞模型作为本品的评价系统。取B16细胞，经0.25％(重量百分数)胰酶消化，以RPMI～1640完全培养基配成密度为5*105/mL细胞悬液，接种于细胞培养板，置于37℃、5％(体积百分数)CO ₂的培养箱内培养。培养完成后，分别加入质量比为5％和10％的实施例1中的活性胶原蛋白原液的培养液，对照组加入等体积的完全培养基，继续培养48h。分别测定细胞内黑色素含量。

所得结果请参阅表2。

表2

项目	黑色素相对含量
对照组	98.5
5％活性胶原培养液	64.7
10％活性胶原培养液	42.5

结果说明，本发明鼠尾活性胶原具有显著抑制细胞黑色素合成的作用，具有美白作用。

实施例5

本实施例为验证实施例1制得的鼠尾胶原蛋白抗氧化效果的具体实施例。

体外实验采用连苯三酚和Cu ²⁺-H ₂O ₂系统测定了鼠尾活性胶原对超氧阴离子自由基和羟自由基清除活性，所得结果请参阅表3。

结果表明，上述鼠尾活性胶原能够显著清除超氧阴离子自由基与羟自由基。且存在一定的量效关系。

表3

实施例6

本实施例为验证实施例2制得的鼠尾胶原蛋白抗敏效果的具体实施例。

体外实验采用连苯三酚和Cu ²⁺-H ₂O ₂系统测定了鼠尾活性胶原对超氧阴离

实验原理：机体对过敏源产生抗体IgE，过敏原再次入侵机时，与IgE抗体相结合，发生FceRI交联，引发信号传导。通过设计透明质酸活性抑制实验验证本发明的抗敏活性。

实验步骤：配制0.2ml的0.25mmol/L的CaCl ₂溶液和0.8mL透明质酸液，37℃保温培养25min，加入0.6mL本发明鼠尾活性胶原活性原液，37℃保温培养25min；加入0.5mL透明质酸钠液，37℃保温培养30min；加入0.2mol/LNaOH溶液0.2mL和乙酞丙酮溶液0.6mL，加热15min，冷却后加入1.0mL埃尔利希试剂，无乙醇稀释，放置20min后进行显色，测定其吸光度值，所得结果请参阅表4。

表4

组别

鼠尾胶原活性原液

对照

	5％	10％	20％	40％	空白
抑制率	20.1	34.1	49.5	54.3	8.9.

结果表明，本发明鼠尾胶原活性原液对透明质酸酸的抑制率高，说明其具有抗敏的功效。

实施例7

本实施例为验证实施例1制得的鼠尾胶原蛋白对激素脸治疗效果的具体实施例。

挑选60名患有激素脸皮炎的患者，随机分成四组，分别试用实施例3制得的面膜及某市售治疗激素脸的面膜进行治疗，使用方法为：一天1次，将面膜覆盖在面部肌肤表面.。

皮肤修复结果如下：试验证明，本发明实施例1～3对于激素脸有突出的修复效果，试用者使用1～3个月的时间即有突出疗效，坚持试用半年时间即可完全康复，皮肤回归正常，且不发生反弹。

其中，激素脸患病等级区分请参阅表5。

表5

激素脸患病等级	鉴定标准
0	无红斑，皮肤正常
1	轻微红斑
2	红斑
3	红斑、丘疹、水泡
4	浮肿、大泡

对于激素脸皮肤，本品使用1～3天，红班变小，炎症逐步消失；使用2周后，皮肤过敏特性为逐步减轻，外观干燥、褪皮等现像缓解，使用3个月后，皮肤可实现完全脱敏，外观和功能恢复到正常皮肤水平。

根据患者激素脸严重程度，本品脸膜的使用时限和次数可适当增加或减少。对于轻度的患者，一般1个月内就能见效，并恢复正常皮肤的功能。对于重度的激素脸，有患者在坚持使用6个月后，成功恢复正常皮肤功能。

实施例8

挑选18例激素脸患者，观察和跟踪本品的疗效情况。均见显著的皮肤保健效果，并且无反弹，疗效显著。

病例1.

王某，女，26岁，护士，主要症状为：脸部皮肤干燥，有黑色斑反复出现，多处求医，症状无好转。皮肤表面可见有多处黑斑块，初步诊断为：黄褐斑、蝴蝶斑。采用实施例3制得的面膜外敷面部，每天二次。

使用面膜十天后颜面黑褐色斑块变浅，皮肤出现红润，继用面膜15.天后，黑褐色斑块已不明显，而且皮肤呈现细腻光泽，随访至今未见复发。

病例2.

张某，女，29岁，售票员，主要症状为：颜面红斑、炎症多年，多方医治无显著疗效，可以见到颜面有多处丘诊、红斑，形成硬结性脓肿，初步诊断：激素脸痤疮。采用实施例3制得的外敷面部，每天三次。

使用面膜十天后，颜面丘疹减少70％，红肿硬结块减少，继用面膜10.天后，痤疮大部分消退皮肤出现红润，而且皮肤呈现细腻光泽，随访至今未见复发。

实施例9

本实施例为验证实施例1制得的鼠尾胶原蛋白控油效果的具体实施例。

试验原理：根据光度计原理测定油脂水平。利用一种消光胶带，吸收人体皮肤上的油脂，胶带在油脂作用下发生物理变化，导致胶带的透光性发生变化。然后用光度计测定透光量，即可测出皮肤油脂的差异水平。

测试仪器：CuotometerMPA580油脂测试仪。

测试方法：挑选20名油性皮脸患者，共分为5组，分别为本品低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白组、市售控油面膜组。每组4 例患者，每天使用面膜一次，在连续使用2周和4周后，观察各组皮肤油性情况。根据油脂测试仪的检测结果，统计所测油脂含量数值，采用均值法，分析各组控油效果。

所得实验结果请参阅表6。

表6

	2周	4周
1％鼠尾胶原	56.4±4.7	52.8±5.0
5％鼠尾胶原	48.1±5.2	40.6±5.1
10％鼠尾胶原	37.3±3.9	32.1±4.2
空白组	80.1±6.2	83.1±5.6
市售控油面膜	52.1±4.1	46±5.1

由实验结果可知，本品中剂量组及高剂量组控油水平较市售产品更加，与空白及阳性对照组比均有异著性差异，表明本品具有较好的控油活性。

从上述技术方案可以得出，本发明实施例提供的技术方案，具有以下优点：

1、本发明的鼠尾胶原蛋白具有更好的安全性

本发明提供的技术方案中，所选用的鼠尾均来源于清洁级或SPF级的实验动物大鼠或小鼠，动物源质量可控，本身不会存在感染性疾病、人畜共患性疾病等，其来源生物安全性高，可不必采用辐照灭菌而降低生物活性。因此所得鼠尾胶原具有更好的生物安全性，其免疫原性很低，与皮肤发生过敏反应的概率低。另外，由于鼠尾胶原蛋白的制作工艺需经全程的低温控制，不会破原的天然三螺旋结构，所得胶原纯度高结构稳定，不易降解产生其它杂质进一步确保了其应用过程中的生物安全性。

2、本发明的鼠尾胶原蛋白的活性更佳

本发明中的鼠尾胶原蛋白具有一般胶原蛋白的活性，如营养性、保湿修复性等。此外，鼠尾胶原具有作为细胞培养基的用途，已有文献报道了在促进细胞生长、促进伤口愈合、修复皮肤方面的应用。因此，鼠尾胶原激素脸、除痘、除皱、保湿、脱敏、除斑、修复皮肤、润滑皮肤的作用更佳。另外，由于本发明的鼠尾胶原纯度高，无结构破坏，因此其用量较市上一般的胶原用量更低、效果更好。

3、鼠尾胶原具有脱敏作用

本发明鼠尾胶原涂抹于皮肤后，能形成一层保护膜，该膜本身具有较的透气性，同时又能阻挡过敏源于皮肤的刺激，长期使用对激素脸脱敏作明显。该和隔离作用对除痘和皮肤溃烂也有很好的疗效。

4、本发明鼠尾胶原蛋白生产工艺简单、质量可控

本发明的鼠尾胶原为无色无味的产品，市面上的鱼皮源或牛源的胶原般都具有较大的腥臭味，因此本品不需增加调味剂。

由于本发明的鼠尾胶原为低温下制备获得，所得产品结构稳定，不易变性，因此在贮存和应用中也不需要加入任何的稳定剂和防腐剂。

经过多批次验证的动物提取制备工艺，重现性好，质量可控性高。

综上所述，本发明提供了一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用。与目前市面上常规的胶原相比，除具备一般胶原的特性外，鼠尾胶原还具有三螺旋结构稳定、生物安性性高、胶原活性高以及免疫原性低的优点；经实验测定可得，本发明提供的技术方案制得的鼠尾胶原，具有美白、抑制黑色素合成、抗氧化、抗过敏、激素肤质修复、控油以及祛痘的性能。本发明提供的一种鼠尾胶原在化妆品领域的应用，解决了现有技术中，含有胶原蛋白的化妆品，通常还需添加调色剂、调味剂、稳定剂以及防腐剂，严重影响化妆品品质的技术缺陷。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

一种胶原在化妆品领域的应用，其特征在于，所述胶原为鼠尾胶原。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鼠尾胶原来源于大鼠鼠尾和/或小鼠鼠尾。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鼠尾胶原应用的载体包括：面膜、精华液、乳膏、凝胶以及喷雾中的任意一种或多种。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在激素脸护肤品和/或脱敏护肤品领域的应用。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在祛痘护肤品领域的应用。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在抗皱护肤品领域的应用。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在保湿护肤品和/或润滑护肤品领域的应用。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在控油护肤品领域的应用。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在祛斑护肤品领域的应用。
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为鼠尾胶原在皮肤修复护肤品领域的应用。