WO2018126523A1 - 脯组环二肽的合成方法 - Google Patents

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WO2018126523A1
WO2018126523A1 PCT/CN2017/075123 CN2017075123W WO2018126523A1 WO 2018126523 A1 WO2018126523 A1 WO 2018126523A1 CN 2017075123 W CN2017075123 W CN 2017075123W WO 2018126523 A1 WO2018126523 A1 WO 2018126523A1
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methyl ester
histidine
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王惠嘉
王慧
苏晨灿
张忠旗
李乾
王万科
高长波
郭添
韩广
赵金礼
杨小琳
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陕西慧康生物科技有限责任公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the invention belongs to the technical field of polypeptide synthesis, and in particular, the invention relates to a method for synthesizing a guanidine ring dipeptide.
  • Histidine-proline cyclic dipeptide (Cyclo (His-Pro), abbreviated as CHP, ⁇ group cyclic dipeptide) is a class of active peptides, specifically endogenous cyclic dipeptides, widely distributed, human , monkeys, dogs, cats, rats and frogs are all present in the body, which is cyclized by thyrotropin releasing hormone (TRH) by pyroglutamic acid aminopeptidase hydrolysis to remove pyroglutamic acid. .
  • TRH thyrotropin releasing hormone
  • TRH thyrotropin releasing hormone
  • the quinone ring dipeptide has many biological activities. In recent years, studies have shown that it has a good blood sugar lowering effect and is expected to become a drug market.
  • Cisoka guanidine ring dipeptide which is specifically protected by the action of proline methyl ester and protected histidine under the action of dicyclohexylcarbodiimide.
  • the hydrazine group dipeptide methyl ester is then deprotected by the action of ethyl chloride solution of hydrogen chloride to form a guanidine ring dipeptide.
  • the disadvantage of this method is that the protected bismuth dipeptide methyl ester, in a solution of hydrogen chloride in ethyl acetate, for a long time of high temperature reflux reaction, will have an irreversible effect on the optical purity of the product.
  • the invention provides a method for synthesizing a guanidine ring dipeptide, comprising the following steps:
  • step (2) the amino group prepared in the step (1) is protected.
  • the dipeptide methyl ester is deprotected in a solution of piperidine in tetrahydrofuran and is cyclically synthesized into a guanidine ring dipeptide.
  • the ratio of the amino group-protected hydrazine group dipeptide methyl ester, tetrahydrofuran, piperidine is 1-4 g: 25-55 ml: 0.5-2 ml, preferably, the amino group-protected hydrazine group dipeptide methyl ester and piperazine
  • the ratio of pyridine is 2g: 40ml: 1ml.
  • an amino group-protected quinone dipeptide methyl ester is prepared from histidine methyl ester hydrochloride and an amino-protected proline.
  • the amino group protected by the fluorenylmethoxycarbonyl group and the N-hydroxysuccinimide form an active ester under the action of N,N'-dicyclohexylcarbodiimide. Further, it is further reacted with histidine methyl ester hydrochloride under basic conditions to form a guanidine dipeptide methyl ester whose amino group is protected by fluorenylmethoxycarbonyl.
  • the molar ratio of valine, N-hydroxysuccinimide, N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, histidine methyl ester hydrochloride whose amino group is protected by fluorenylmethoxycarbonyl is 6-10:8-12:8-12:9-12, preferably 8:9:9:9.6.
  • an amino group-protected quinone dipeptide methyl ester is prepared from a proline methyl ester hydrochloride and an amino group-protected histidine.
  • the amino group protected by the fluorenylmethoxycarbonyl group and the N-hydroxysuccinimide form an active ester under the action of N,N'-dicyclohexylcarbodiimide. Further, it is further reacted with valine methyl ester hydrochloride under basic conditions to form a guanidine dipeptide methyl ester whose amino group is protected by fluorenylmethoxycarbonyl.
  • the molar ratio of histidine, N-hydroxysuccinimide, N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, valine methyl ester hydrochloride protected by anthracene methoxycarbonyl group is 6-10:8-12:8-12:9-12, preferably 8:9:9:9.6.
  • the guanidine ring dipeptide is an L-L ⁇ group ring dipeptide, an L-D type ⁇ group ring dipeptide, a D-L type ⁇ group ring dipeptide, and a D-D type ⁇ group ring dipeptide.
  • the method for synthesizing the guanidine ring dipeptide provided by the present invention has the following advantages:
  • Fig. 1 is a 1 H NMR chart of a LL-type quinone ring dipeptide of the first embodiment of the present invention.
  • Fig. 2 is a mass spectrum of the L-L type quinone ring dipeptide of the first embodiment of the present invention.
  • Fig. 3 is a 1 H NMR chart of a LL-type quinone ring dipeptide of a second embodiment of the present invention.
  • the existing synthetic method of the guanidine ring dipeptide generally has the problems of harsh reaction conditions, tedious steps, large optical purity loss and low yield.
  • the present invention proposes a new synthetic route using liquid phase synthesis.
  • the guanidine ring dipeptide was prepared by the method. Compared with the prior methods, the method of the invention has fewer synthetic steps, the amino acid does not need much protection, only the amino group of one of the starting amino acids is protected, the reaction condition is mild, the operation is easy, the optical purity is not lost, and the yield is Also very high, reaching 80%.
  • the method of the present invention comprises a proline protected by histidine methyl ester hydrochloride and an amino group, or a histidine protected by a proline methyl ester hydrochloride and an amino group to prepare an amino-protected hydrazine.
  • the group dipeptide methyl ester, and the amino group protected guanidine group dipeptide methyl ester are deprotected and cyclically synthesized into a guanidine ring dipeptide.
  • the method for synthesizing a guanidine ring dipeptide of the present invention comprises the steps of:
  • An amino-protected purine group dipeptide methyl ester is prepared from histidine methyl ester hydrochloride and an amino-protected proline. Specifically, an amino group protected by a fluorenylmethoxycarbonyl group and an N-hydroxysuccinimide form an active ester under the action of N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, and further with a histidine methyl ester. hydrochloride fluorene reaction prolyl amino group protected dipeptide ester methoxycarbonyl group under basic conditions (e.g., NaHCO 3 presence).
  • the above-prepared oxime methyl dicarbonyl methyl ester protected by a fluorenylmethoxycarbonyl group is deprotected and cyclically synthesized at room temperature (for example, 25 ° C) in a solution of piperidine in tetrahydrofuran.
  • the ratio of the hydrazine group dipeptide methyl ester tetrahydrofuran and piperidine whose amino group is protected by fluorenylmethoxycarbonyl is 1-4 g: 25-55 ml: 0.5-2 ml, preferably, the amino group protected hydrazine group dipeptide methyl ester and piperazine
  • the ratio of pyridine is 2g: 40ml: 1ml.
  • the ratio of the ingredients between the respective substances is controlled within the above range, which is the result of the inventors' consideration of the preparation method of each step than the consideration of a plurality of factors, and the upper and lower 10% floating within the above protection range.
  • the technical effects described can still be achieved.
  • the preferred technical solution is as above.
  • the guanidine ring dipeptide synthesized by the method of the present invention may be a LL type ⁇ group ring dipeptide, an LD type ⁇ group ring dipeptide, a DL type ⁇ group ring dipeptide, and a DD type ⁇ group ring dipeptide.
  • the starting material of the LL-type guanidine ring dipeptide is the histidine methyl ester hydrochloride of the L configuration and the N- ⁇ methoxycarbonyl-proline of the L configuration; the LD type ⁇ group cyclic dipeptide
  • the starting material is histidine methyl ester hydrochloride in the L configuration and N-fluorenylmethoxycarbonyl-proline in the D configuration; the starting material of the DL type guanidine ring dipeptide is the ammonia in the D configuration.
  • N-fluorenylmethoxycarbonyl-valine. 1 and 2 are 1 H NMR charts and mass spectra of LL-type quinone ring dipeptides, respectively.
  • the method for synthesizing a guanidine ring dipeptide of the present invention comprises the steps of:
  • An amino-protected purine group dipeptide methyl ester is prepared from proline methyl ester hydrochloride and an amino-protected histidine. Specifically, an amino group protected by a fluorenylmethoxycarbonyl group and an N-hydroxysuccinimide form an active ester under the action of N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, and further with a valine methyl ester.
  • the hydrochloride salt is reacted under basic conditions to form a hydrazine group dipeptide methyl ester whose amino group is protected by fluorenylmethoxycarbonyl.
  • the molar ratio of histidine, N-hydroxysuccinimide, N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, valine methyl ester hydrochloride protected by anthracene methoxycarbonyl is 6-10 : 8-12: 8-12: 9-12, preferably 8:9:9:9.6.
  • the above-prepared oxime methyl dicarbonyl methyl ester protected by a fluorenylmethoxycarbonyl group is deprotected and cyclically synthesized at room temperature (for example, 25 ° C) in a solution of piperidine in tetrahydrofuran.
  • the ratio of the hydrazine group dipeptide methyl ester tetrahydrofuran and piperidine whose amino group is protected by fluorenylmethoxycarbonyl is 1-4 g: 25-55 ml: 0.5-2 ml, preferably, the amino group protected hydrazine group dipeptide methyl ester and piperazine
  • the ratio of pyridine is 2g: 40ml: 1ml.
  • the ratio of the ingredients between the respective substances is controlled within the above range, which is the result of the inventors' consideration of the preparation method of each step than the consideration of a plurality of factors, and the upper and lower 10% floating within the above protection range.
  • the technical effects described can still be achieved.
  • the preferred technical solution is as above.
  • the guanidine ring dipeptide synthesized by the method of the present invention may be a LL type ⁇ group ring dipeptide, an LD type ⁇ group ring dipeptide, a DL type ⁇ group ring dipeptide, and a DD type ⁇ group ring dipeptide.
  • the starting material of the LL-type quinone cyclic dipeptide is the glutamic acid methyl ester hydrochloride of the L configuration and the N-fluorenyl methoxycarbonyl-histidine of the L configuration; the cyclic dipeptide of the LD type ⁇ group
  • the starting material is valine methyl ester hydrochloride in the L configuration and N-fluorenylmethoxycarbonyl-histidine in the D configuration;
  • the starting material of the DL type guanidine ring dipeptide is the hydrazine in the D configuration.
  • the ethyl ester layer was washed twice with dilute aqueous hydrochloric acid to remove excess H-His-OCH 3 , washed three times with brine, the aqueous solution was neutral, and the ethyl ester layer was dried and filtered. evaporated to dryness to give a white foamy solid product was Fmoc-Pro-His-OCH 3 30g.
  • the ethyl ester layer was washed twice with dilute aqueous hydrochloric acid to remove excess H-His-OCH 3 , washed three times with brine, the aqueous solution was neutral, and the ethyl ester layer was dried and filtered to dry.
  • the white foamy solid product Fmoc-Pro-His-OCH 3 31 g was obtained.

Abstract

提供了一种脯组环二肽的合成方法，包括：由组氨酸和脯氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯，其中组氨酸和脯氨酸中的一种是甲酯盐酸盐的形式，另一种是氨基被保护的形式；将氨基被保护的脯组二肽甲酯脱保护并环合成脯组环二肽。

Description

脯组环二肽的合成方法 技术领域
本发明属于多肽合成技术领域，具体地，本发明涉及一种脯组环二肽的合成方法。
背景技术
组氨酸-脯氨酸环二肽(Cyclo(His-Pro)，简称CHP，脯组环二肽)是一类活性肽类物质，具体为内源性环状二肽，分布极为广泛，人，猴，狗，猫，大鼠及蛙体内均有其存在，在生物体内是由促甲状腺素释放激素(TRH)经焦谷氨酸氨肽酶水解脱去焦谷氨酸后环化而成。脯组环二肽具有多方面的生物学活性，近些年研究表明，有很好的降低血糖作用，有望成为药物投入市场。
申请号为200510109439.9的中国发明专利申请公开了一种制备脯组环二肽的方法，该方法具体是脯氨酸甲酯与保护的组氨酸在二环己基碳二亚胺的作用下生成保护的脯组二肽甲酯，然后在氯化氢的乙酸乙酯液作用下脱保护生成脯组环二肽。该方法的弊端是保护的脯组二肽甲酯，在氯化氢的乙酸乙酯液溶液中，长时间高温回流反应，会对产物的光学纯度造成不可逆转的影响。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种脯组环二肽的合成方法。
本发明提供了一种脯组环二肽的合成方法，包括如下步骤：
(1)由组氨酸和脯氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯，其中，组氨酸和脯氨酸中的一种是甲酯盐酸盐的形式，另一种是氨基被保护的形式；
(2)将步骤(1)制备的氨基被保护的脯组二肽甲酯脱保护并环合成脯组环二肽。
前述的合成方法，在步骤(2)中，将步骤(1)制备的氨基被保护的脯 组二肽甲酯在哌啶的四氢呋喃溶液中脱保护并环合成脯组环二肽。
前述的合成方法，氨基被保护的脯组二肽甲酯、四氢呋喃、哌啶的比例是1-4g：25-55ml：0.5-2ml，优选地，氨基被保护的脯组二肽甲酯与哌啶的比例是2g：40ml：1ml。
前述的合成方法，在步骤(1)中，由组氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的脯氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯。
前述的合成方法，在步骤(1)中，氨基被芴甲氧羰基保护的脯氨酸与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚胺的作用下生成活泼酯，再进一步与组氨酸甲酯盐酸盐在碱性条件下反应生成氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯。
前述的合成方法，氨基被芴甲氧羰基保护的脯氨酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、组氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比是6-10：8-12：8-12：9-12，优选是8:9:9:9.6。
前述的合成方法，在步骤(1)中，由脯氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的组氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯。
前述的合成方法，在步骤(1)中，氨基被芴甲氧羰基保护的组氨酸与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚胺的作用下生成活泼酯，再进一步与脯氨酸甲酯盐酸盐在碱性条件下反应生成氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯。
前述的合成方法，氨基被芴甲氧羰基保护的组氨酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、脯氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比是6-10：8-12：8-12：9-12，优选是8:9:9:9.6。
前述的合成方法，所述脯组环二肽是L-L型脯组环二肽、L-D型脯组环二肽、D-L型脯组环二肽、D-D型脯组环二肽。
相对于现有技术，本发明提供的脯组环二肽的合成方法具有如下优点：
(1)使用氨基被保护的脯氨酸或组氨酸为起始原料合成脯组环二肽，最后在哌啶的四氢呋喃溶液中脱保护和环合一次性完成，避免了以往工艺中脱保护和环合必须两步才能完成的缺陷。
(2)在碱性环境中常温反应完成，避免了以往工艺在高温和酸性环境 的条件下环合造成的光学纯度发生改变的缺陷。
附图说明
图1是本发明第一种具体实施方式的L-L型脯组环二肽的1H NMR图。
图2是本发明第一种具体实施方式的L-L型脯组环二肽的质谱图。
图3是本发明第二种具体实施方式的L-L型脯组环二肽的1H NMR图。
图4是本发明第二种具体实施方式的L-L型脯组环二肽的质谱图。
具体实施方式
为充分了解本发明之目的、特征及功效，借由下述具体的实施方式，对本发明做详细说明。
现有的脯组环二肽的合成方法普通存在反应条件苛刻、步骤冗长、光学纯度损失大且收率不高的问题，针对这些问题，本发明提出了一条新的合成路线，采用液相合成法制备脯组环二肽。相较于现有的方法，本发明的方法合成步骤少，氨基酸无需太多保护，只需要起始氨基酸中的一种的氨基被保护，反应条件温和，易操作，光学纯度不损失，收率也很高，达到80％。
本发明的方法包括由组氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的脯氨酸，或者，由脯氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的组氨酸，来制备氨基被保护的脯组二肽甲酯，以及氨基被保护的脯组二肽甲酯脱保护并环合成脯组环二肽。
根据本发明的第一种具体实施方式，本发明的脯组环二肽合成方法包括如下步骤：
(1)制备氨基被保护的脯组二肽甲酯
由组氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的脯氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯。具体地，氨基被芴甲氧羰基保护的脯氨酸与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚胺的作用下生成活泼酯，再进一步与组氨酸甲酯盐酸盐在碱性条件(例如，NaHCO3存在下)下反应生成氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯。
其中，氨基被芴甲氧羰基保护的脯氨酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、组氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比是6-10：8-12：8-12：9-12，优 选是8:9:9:9.6。
(2)脱保护与环合
将上述制备的氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯在哌啶的四氢呋喃溶液中在室温下(例如25℃)脱保护并环合成脯组环二肽。
其中，氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯四氢呋喃、哌啶的比例是1-4g：25-55ml：0.5-2ml，优选地，氨基被保护的脯组二肽甲酯与哌啶的比例是2g：40ml：1ml。
在各步骤中控制各个物质之间的配料比在上述范围内，这是发明人对各个步骤的制备方法配料比经过多个因素的考虑得到的结果，在上述保护范围内进行上下10％的浮动依然可以达到所述的技术效果。优选技术方案如上。
本发明的方法合成的脯组环二肽可以是L-L型脯组环二肽、L-D型脯组环二肽、D-L型脯组环二肽、D-D型脯组环二肽。其中，L-L型脯组环二肽的起始原料为L构型的组氨酸甲酯盐酸盐和L构型的N-芴甲氧羰基-脯氨酸；L-D型脯组环二肽的起始原料为L构型的组氨酸甲酯盐酸盐和D构型的N-芴甲氧羰基-脯氨酸；D-L型脯组环二肽的起始原料为D构型的组氨酸甲酯盐酸盐和L构型的N-芴甲氧羰基-脯氨酸；D-D型脯组环二肽的起始原料为D构型的组氨酸甲酯盐酸盐和D构型的N-芴甲氧羰基-脯氨酸。图1和图2分别是L-L型脯组环二肽的1H NMR图和质谱图。
根据本发明的第二种具体实施方式，本发明的脯组环二肽合成方法包括如下步骤：
(1)制备氨基被保护的脯组二肽甲酯
由脯氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的组氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯。具体地，氨基被芴甲氧羰基保护的组氨酸与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚胺的作用下生成活泼酯，再进一步与脯氨酸甲酯盐酸盐在碱性条件下反应生成氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯。
其中，氨基被芴甲氧羰基保护的组氨酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、脯氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比是6-10：8-12：8-12：9-12，优选是8:9:9:9.6。
(2)脱保护与环合
将上述制备的氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯在哌啶的四氢呋喃溶液中在室温下(例如25℃)脱保护并环合成脯组环二肽。
其中，氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯四氢呋喃、哌啶的比例是1-4g：25-55ml：0.5-2ml，优选地，氨基被保护的脯组二肽甲酯与哌啶的比例是2g：40ml：1ml。
在各步骤中控制各个物质之间的配料比在上述范围内，这是发明人对各个步骤的制备方法配料比经过多个因素的考虑得到的结果，在上述保护范围内进行上下10％的浮动依然可以达到所述的技术效果。优选技术方案如上。
本发明的方法合成的脯组环二肽可以是L-L型脯组环二肽、L-D型脯组环二肽、D-L型脯组环二肽、D-D型脯组环二肽。其中，L-L型脯组环二肽的起始原料为L构型的脯氨酸甲酯盐酸盐和L构型的N-芴甲氧羰基-组氨酸；L-D型脯组环二肽的起始原料为L构型的脯氨酸甲酯盐酸盐和D构型的N-芴甲氧羰基-组氨酸；D-L型脯组环二肽的起始原料为D构型的脯氨酸甲酯盐酸盐和L构型的N-芴甲氧羰基-组氨酸；D-D型脯组环二肽的起始原料为D构型的脯氨酸甲酯盐酸盐和D构型的N-芴甲氧羰基-组氨酸。图3和图4分别是L-L型脯组环二肽的1H NMR图和质谱图。
实施例
下面实施例中使用的各个物质如果没有特别说明，所使用的原料和仪器均是商购获得，是本领域常规使用仪器和原料，只要其能满足实验需要即可。
下面对说明书中的简写进行说明：
Fmoc：芴甲氧羰基
THF：四氢呋喃
HOSu：N-羟基琥珀酰亚胺
DCC：N,N'-二环己基碳二亚胺
His：组氨酸
Pro：脯氨酸
TLC：薄层色谱
实施例1 L-L型脯组环二肽
1.将Fmoc-L-Pro-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解，在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol)，DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入L-H-His-OCH3.2HCl(23g，0.096mol)，NaHCO3(30g，0.36mol),H2O150ml,常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-His-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-Pro-His-OCH3 31g。
2.将Fmoc-Pro-His-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物L-L型脯组环二肽8.2g，经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例2 L-D型脯组环二肽
1.将Fmoc-L-Pro-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解，在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol),DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入D-H-His-OCH3.2HCl((23g，0.096mol)，NaHCO3(30g，0.36mol)，H2O150ml,常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-His-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-Pro-His-OCH3 30g。
2.将Fmoc-Pro-His-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚,，搅拌，过滤，得白色固体产物L-D型脯组环二肽8.1g，经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例3 D-D型脯组环二肽
1.将Fmoc-D-Pro-OH(27g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中， 磁力搅拌，搅拌使其全部溶解,在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol),DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入D-H-His-OCH3.2HCl((23g，0.096mol)，NaHCO3(30g，0.36mol)，H2O150ml,常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-His-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-Pro-His-OCH3 33g。
2.将Fmoc-Pro-His-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物D-D-型脯组环二肽8.4g,经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例4 D-L型脯组环二肽
1.将Fmoc-D-Pro-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解,在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol)，DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入L-H-His-OCH3.2HCl(23g，0.096mol)，NaHCO3(30g，0.36mol)，H2O150ml，常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-His-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-Pro-His-OCH3 31g。
2.将Fmoc-Pro-His-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物D-L-型脯组环二肽8.3g,经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例5 L-L型脯组环二肽
1.将Fmoc-L-His-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解,在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol)，DCC(18.3g， 0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入L-H-Pro-OCH3.HCl(16g，0.096mol)，NaHCO3(20g，0.24mol)，H2O150ml，常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-Pro-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-His-Pro-OCH3 33g。
2.将Fmoc-His-Pro-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物L-L型脯组环二肽8g，经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例6 L-D型脯组环二肽
1.将Fmoc-L-His-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解，在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol)，DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入D-H-Pro-OCH3.HCl(16g，0.096mol)，NaHCO3(20g，0.24mol)，H2O150ml，常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-Pro-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-His-Pro-OCH3 32g。
2.将Fmoc-His-Pro-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物L-D型脯组环二肽8.3g，经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例7 D-D型脯组环二肽
1.将Fmoc-D-His-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解,在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol)，DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF 补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入D-H-Pro-OCH3.HCl(16g，0.096mol)，NaHCO3(20g，0.24mol)，H2O150ml,常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-Pro-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-His-Pro-OCH3 35g.
2.将Fmoc-His-Pro-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物D-D-型脯组环二肽8.8g，经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。
实施例8 D-L型脯组环二肽
1.将Fmoc-D-His-OH(30g，0.08mol)，500mlTHF加入到茄型瓶中，磁力搅拌，搅拌使其全部溶解,在依次加入HOSu(10.2g，0.09mol)，DCC(18.3g，0.09mol)，常温搅拌一晚上，出现大量白色沉淀，过滤，取滤液，加THF补足500ml体积，常温下搅拌，分别向滤液中加入L-H-Pro-OCH3.HCl(16g，0.096mol)，NaHCO3(20g，0.24mol)，H2O150ml，常温搅拌一晚上，TLC显示反应完全，处理，蒸干THF，加入乙酸乙酯和水，搅拌，分层，取乙酯层，水层用乙酯萃取一次，倒掉，合并乙酯层，乙酯层用稀盐酸水溶液洗2遍除去过量的H-Pro-OCH3，在用盐水洗3遍，水溶液呈中性，乙酯层干燥过滤蒸干，得到白色泡沫状固体产物Fmoc-His-Pro-OCH3 34g。
2.将Fmoc-His-Pro-OCH3 20g，加入400mlTHF溶解，在加入10ml哌啶，常温下搅拌6小时，TLC显示反应完全，蒸干溶剂，加入乙醚，搅拌，过滤，得白色固体产物D-L-型脯组环二肽8.6g，经质谱以及核磁共振氢谱测定，证明所得产物正确。

Claims (10)

  1. 一种脯组环二肽的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
    (1)由组氨酸和脯氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯，其中，组氨酸和脯氨酸中的一种是甲酯盐酸盐的形式，另一种是氨基被保护的形式；
    (2)将步骤(1)制备的氨基被保护的脯组二肽甲酯脱保护并环合成脯组环二肽。
  2. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤(2)中，将步骤(1)制备的氨基被保护的脯组二肽甲酯在哌啶的四氢呋喃溶液中脱保护并环合成脯组环二肽。
  3. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，氨基被保护的脯组二肽甲酯、四氢呋喃、哌啶的比例是1-4g：25-55ml：0.5-2ml，优选地，氨基被保护的脯组二肽甲酯与哌啶的比例是2g：40ml：1ml。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，由组氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的脯氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯。
  5. 根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，氨基被芴甲氧羰基保护的脯氨酸与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚胺的作用下生成活泼酯，再进一步与组氨酸甲酯盐酸盐在碱性条件下反应生成氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯。
  6. 根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，氨基被芴甲氧羰基保护的脯氨酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、组氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比是6-10：8-12：8-12：9-12，优选是8:9:9:9.6。
  7. 根据权利要求1-3任一项所述的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，由脯氨酸甲酯盐酸盐和氨基被保护的组氨酸制备氨基被保护的脯组二肽甲酯。
  8. 根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，氨基被芴甲氧羰基保护的组氨酸与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚 胺的作用下生成活泼酯，再进一步与脯氨酸甲酯盐酸盐在碱性条件下反应生成氨基被芴甲氧羰基保护的脯组二肽甲酯。
  9. 根据权利要求8所述的合成方法，其特征在于，氨基被芴甲氧羰基保护的组氨酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、脯氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比是6-10：8-12：8-12：9-12，优选是8:9:9:9.6。
  10. 根据权利要求1-9任一项所述的合成方法，其特征在于，所述脯组环二肽是L-L型脯组环二肽、L-D型脯组环二肽、D-L型脯组环二肽、D-D型脯组环二肽。
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