WO2018034465A1 - 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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박광일
김연희
오태우
조원경
김동건
박은희
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Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating a retinal disease comprising maple leaf extract, and more particularly, the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating a retinal disease comprising maple leaf extract or a fraction thereof.
  • the present invention relates to a method for preventing or treating a retinal disease using the composition and a food composition for improving retinal disease, including a maple leaf extract or a fraction thereof.
  • Maple tree is 100m high, small branches are hairless, reddish brown. In addition, the leaves of the maple are opposite and deeply divided into 5-7 in the shape of palms. Cracks are broad, lanceolate, pointed at end, with cog teeth on edge, 5-6cm long. Petiole red in color, 3-5cm long. A flower blooms with a male flower and a bisexual flower. It blooms in dark red light in May and runs in the order of a mountain flower. Calyxes are 5 pieces with soft hairs and 5 petals. There are eight surgeries.
  • maples are used as a medicine called the root bark and branches in a herbal medicine called gradation axis.
  • gradation axis When the pain is severe due to arthritis, it is taken in water, and when the fracture is injured, it is used in combination with Ogapi, and has anti-inflammatory and detoxification effect.
  • the retina is a transparent neural tissue covering the innermost part of the eye, and light entering the eye is detected by the retina's eye cells through the inner layer of the retina.
  • Optic cells convert light information back into electrical information, which is passed through the optic nerve to the brain through cells in the inner retina.
  • the retina consists of ten layers from the outside to the inside of the eyeball. The ten constituent layers include retinal pigment epithelium, photoreceptor layer, outer boundary membrane, outer nucleus layer, outer ice layer, inner nucleus layer, inner plexus ganglion cell layer, nerve fiber layer, and inner layer.
  • the macula is an oval recessed site located slightly below the outside of the optic disc, where the optic nerve cells of the retina are concentrated. Since most of the visual stimulus cognitive function of the retina is responsible for the macula, lesions in the macula or optic nerve cell damage and defects in the macula may cause blindness or severe vision impairment.
  • retinal diseases caused by such loss of the retina or macular are all included in retina disorder.
  • Specific examples of such retinal diseases include the following.
  • Retinal circulatory disorders include retinal artery occlusion, retinal vein occlusion, periventricular pericarditis, hypertension retinopathy, diabetic retinopathy, and prematurity retinopathy.
  • retinitis is a typical disease such as sensory neuroretinitis caused by bacteria or fungi, retinal pigment epithelial inflammation found in newborns born to mothers infected with rubella, and all of them belong to retinal diseases caused by retinal damage.
  • Retinal degeneration includes retinal pigment degeneration, angiopathy, and drusen, all of which are retinal diseases caused by retinal damage.
  • Retinal detachment is also caused by the separation between the inner sensory nerve layer and the outer pigmented epithelium layer of the retina. Depending on whether the retinal tears were largely caused by retinal detachment and non-retinal retinal detachment, they are divided into retinal diseases caused by retinal damage.
  • retinal diseases include macular degeneration, macular dysplasia, diabetic retinopathy, retinal vein occlusion, hypertensive retinopathy, retinal aortic aneurysm, ocular ischemia, radiation retinopathy, prematurity retinopathy, acute retinal necrosis, retinitis, retinal choroiditis, Retinal diseases such as retinal detachment, retinal tumor, retinal damage due to trauma, and retinal damage caused by light.
  • Patent Document 1 the prior art literature related to the present invention is disclosed in the Republic of Korea Patent Publication No. 2012-0068432 (Patent Document 1), but the Patent Document 1 in the composition for the prevention and treatment of diabetes, obesity, including dolung ethanol extract Only the contents of the present disclosure are disclosed, and nothing is disclosed about the effects of preventing or treating retinal diseases using maple leaf extract.
  • the present inventors have completed the present invention by identifying a pharmaceutical composition for preventing or treating retinal disease, including maple leaf extract, as a result of research efforts to develop a novel substance having a prophylactic or therapeutic effect on a novel retinal disease.
  • Another object of the present invention is to provide a method of treating retinal disease, comprising administering the pharmaceutical composition to a subject.
  • Another object of the present invention to provide a food composition for improving retinal disease, including maple leaf extract.
  • Another object of the present invention to provide a feed composition for improving retinal disease, including maple leaf extract.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention is effective for retinal diseases, and is not only pharmaceutically usable as a prophylactic or therapeutic composition for retinal diseases, but also useful as a health functional food.
  • Figure 1 shows that after the oral or ocular administration of the maple leaf extract, as a result of immunohistostaining, it is confirmed that a significant protective effect when oral administration of the maple leaf extract.
  • Figure 4 is a fluorescent micrograph showing the results of the tunnel assay after oral or ocular administration of maple leaf extract.
  • 5 is a photograph showing the result of Western blot after oral or ocular administration of maple leaf extract.
  • 6 is an experimental result confirming cell death of optic ganglion cells after instillation or oral administration of maple leaf extract, (a) is a fluorescence micrograph, (b) calculates the number of cells positively reacted with the selected image Is a graph showing the results converted to the mean value for the control group.
  • FIG. 10 is a fluorescence micrograph showing the results of an experiment confirming the inhibition of cell death of the retinal tissue after instillation or orally administered maple leaf extract.
  • maple leaf extracts have an effect of treating retinal diseases while conducting various studies to develop a natural-derived formulation that can safely and effectively treat retinal diseases.
  • Maple trees are generally known to exhibit various pharmacological activities.
  • maple leaf extract reduces the expression of any one or more selected from the group consisting of Cleaved PARP, GFAP and Nestin, and increases the expression of any one or more selected from the group consisting of OPNISW, Brn3a and Tuj-1. It was confirmed that it shows a therapeutic effect of the retinal disease.
  • maple leaf extracts have the effect of treating retinal diseases is not known at all and was first identified by the inventors.
  • present invention was first invented by the present inventors for a pharmaceutical composition having a prophylactic or therapeutic effect on retinal diseases.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating retinal disease, including maple leaf extract or a fraction thereof.
  • the present invention also provides the use of the maple leaf extract or fractions thereof for the prevention or treatment of retinal diseases.
  • Maple in the present invention is 100m in height, small branches are hairless, reddish brown wood, the leaves of the maple means that they are deeply divided into 5-7 pieces in the shape of a palm.
  • the maple tree can be largely divided into roots, stems, leaves, the pharmaceutical composition of the present invention may include the maple leaf extract or fractions thereof. At this time, the extract of each part of the maple or fractions thereof may be achieved a prophylactic or therapeutic effect for the retinal disease without particular limitation for each part.
  • extract is extracted from maple leaves using a suitable solvent, and may include, for example, hot water extracts of maple leaves, polar solvent soluble extracts or nonpolar solvent soluble extracts.
  • any solvent that is acceptable in the art may be used, and water or an organic solvent may be used.
  • Solvents such as benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane and cyclohexane may be used alone or in combination. It is not limited.
  • any one of hot water extraction method, cold leaching extraction method, reflux cooling extraction method, solvent extraction method, steam distillation method, ultrasonic extraction method, elution method and compression method can be used.
  • the desired extract may further be subjected to a conventional fractionation process, it may be purified using conventional purification methods.
  • the method for preparing the maple leaf extract of the present invention there is no limitation on the method for preparing the maple leaf extract of the present invention, and any known method may be used.
  • the maple leaf extract included in the composition of the present invention may be prepared in a powder state by an additional process such as distillation under reduced pressure or freeze drying or spray drying. Can be.
  • the primary extract may be further purified using various chromatography such as silica gel column chromatography, thin layer chromatography, high performance liquid chromatography, and the like. You can also get
  • the maple leaf extract in the present invention is a concept including all the extracts, fractions and purified products obtained in each step of extraction, fraction or purification, their dilutions, concentrates or dried products.
  • composition of the present invention comprising such maple leaf extract as an active ingredient may be a pharmaceutical composition.
  • fraction of the present invention means the result obtained by performing the fractionation to separate a specific component or a specific component group from a mixture comprising various various components.
  • the fraction may be the result of fractionating the maple leaf extract by various methods such as solvent fractionation, ultrafiltration fractionation, chromatography fractionation.
  • the method for obtaining the fraction is also not particularly limited as long as it can obtain a fraction showing the effect of preventing or treating retinal disease, and may be performed according to a method commonly used in the art. As an example, a method of obtaining fractions from the maple hydrothermal extract using solvent fractionation may be used.
  • the kind of the fractionation solvent used to obtain the fraction in the present invention is not particularly limited as long as it can obtain a fraction exhibiting the effect of preventing or treating retinal diseases, and is performed according to a method commonly used in the art.
  • the fractionating solvent may be a polar solvent such as water or alcohol;
  • Non-polar solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform and dichloromethane may be used alone or in combination of one or more thereof.
  • retina disease refers collectively to a disease in which the reduction and damage of vision occurs due to damage of the retina or the macula, or their degeneration.
  • the pharmaceutical composition is to improve the retinal disease
  • specific examples of the retinal disease include retinal artery occlusion, retinal vein occlusion, periventricular pericarditis, hypertension retinopathy, diabetic retinopathy, prematurity retinopathy, sensory neuroretinopathy, Retinal pigment epithelial inflammation, retinal pigment degeneration, angioplasty, drusen, hiatus, retinal detachment, macular degeneration, maculopathy, diabetic retinopathy, retinal arteriovenous occlusion, hypertensive retinopathy, retinal aortic aneurysm, eye ischemia Syndrome, radiation retinopathy, prematurity retinopathy, acute retinal necrosis, retinitis, retinal choroiditis, retinal detachment, retinal tumor, retinal injury due to trauma or light retinal damage.
  • prevention refers to any action that inhibits or delays the development of retinal disease by administration of the composition of the present invention
  • treatment refers to the improvement or benefit of the symptoms caused by the retinal disease. Means any behavior that changes.
  • compositions for the prevention or treatment of retinal diseases comprising the maple leaf extract of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient are suitable carriers (specifically, for example, non-natural carriers) non-naturally occurring carriers), excipients, disintegrants, sweeteners, binders, coatings, swelling agents, lubricants, lubricants, flavoring agents, or diluents.
  • the maple leaf extract or a fraction thereof is not particularly limited, but may be included in an amount of 1 to 80 parts by weight, and more specifically 20 to 60 parts by weight, based on 100 parts by weight of the total composition.
  • the maple leaf extract or a fraction thereof is included in less than 1 part by weight, it is difficult to sufficiently express the prophylactic or therapeutic effect of the retinal disease to be achieved in the present invention and may not correspond to an embodiment of the present invention, the maple tree
  • the leaf extract or fractions thereof exceeds 80 parts by weight, the content of the remaining substances for the manufacture of a pharmaceutical application may be limited and thus may not correspond to one embodiment of the present invention.
  • the method of administering the pharmaceutical composition for preventing or treating the retinal disease is not particularly limited, and specifically, may be injected into an artery or vein, or subcutaneously, rectally, nasal, or any other parenteral. And more specifically, into an artery or vein, orally or directly into muscle cells.
  • the dosage level selected from the composition will depend on the activity of the compound, the route of administration, the severity of the condition being treated and the condition and previous history of the patient being treated. However, it is within the knowledge of the art to start with a dose of the compound at a lower level than required to achieve the desired therapeutic effect, and gradually increase the dosage until the desired effect is achieved, with the preferred dosage being age, sex , Body shape and weight.
  • the composition may be further processed before being formulated into a pharmaceutically acceptable pharmaceutical formulation, and specifically may be ground or polished into smaller particles.
  • the composition will also vary depending on the condition and the patient being treated, but this can be determined non-originally.
  • the pharmaceutical composition may be any one selected from the group consisting of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilizers and suppositories. It can have one formulation and can be a variety of oral or parenteral formulations. When formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used.
  • Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which form at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose (at least one compound). lactose) and gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc and the like are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solution solutions, emulsions, and syrups, and various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, may be included. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • composition of the present invention may be administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level is determined by the type and severity, age, sex, disease of the individual. It can be determined according to the type, activity of the drug, sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including the drug used concurrently and other factors well known in the medical field.
  • the compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations.
  • compositions of the present invention depend on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route and duration of administration, and the suitable total daily dosage can be determined by the practitioner within the scope of good medical judgment, Generally, an amount of 0.001 to 1000 mg / kg, specifically 0.05 to 500 mg / kg, more specifically 0.1 to 500 mg / kg, may be administered once to several times daily.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can achieve a prophylactic or therapeutic effect of retinal disease in a dose of 100 to 300 mg / kg.
  • the composition is not particularly limited as long as it is an object for the purpose of preventing or treating retinal diseases, and any individual may be applied.
  • any individual such as monkeys, dogs, cats, rabbits, marmots, rats, mice, cows, sheep, pigs, goats, and the like, and to humans, and the mode of administration is conventional in the art. If not included.
  • a method such as intraperitoneal administration, ocular administration or oral administration may be used, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition may be to reduce the expression of any one or more selected from the group consisting of Cleaved PARP, GFAP and Nestin (Nestin).
  • the pharmaceutical composition may be to increase the expression of OPNISW, Brn3a, Tuj-1.
  • the present invention provides a method for treating retinal disease, comprising administering the pharmaceutical composition to an individual.
  • the suspicious subject of the retinal disease in the present invention means any animal that has or can develop a retinal disease, and by administering the pharmaceutical composition of the present invention to the suspected retinal disease, the subject can be efficiently treated.
  • the term "administration" refers to the introduction of the pharmaceutical composition of the present invention to an individual suspected of retinal disease by any suitable method, and the route of administration may be various oral or parenteral routes as long as the target tissue can be reached. It can be administered through. Specifically, it may be administered in the manner of intraperitoneal administration, eye administration or oral administration, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a food composition for improving retinal disease, including a maple leaf extract or a fraction thereof.
  • the maple leaf extract or a fraction thereof may be prepared and consumed in the form of a food that can improve retinal disease while still having common sense.
  • the content of the retinal extract or fractions thereof included in the food is not particularly limited, but may be included in 0.001 to 10% by weight, more preferably 0.1 to 1% by weight based on the total weight of the food composition.
  • the food is a beverage, it may be included in a ratio of 1 to 10 g, preferably 2 to 7 g based on 100 ml.
  • the composition may include additional ingredients that are commonly used in food compositions to improve the smell, taste, time and the like.
  • it may include vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, panthotenic acid, and the like.
  • it may include minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), copper (Cu). It may also contain amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, valine and the like.
  • preservatives potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, sodium dehydroacetate, etc.
  • fungicides bleaching powder and highly bleaching powder, sodium hypochlorite, etc.
  • antioxidants butylhydroxyanisol (BHA), butylhydroxytoluene ( BHT), etc.
  • colorants such as tar pigments
  • colorants such as sodium nitrite, sodium nitrite
  • bleach sodium sulfite
  • seasonings such as MSG glutamate
  • sweeteners ducin, cyclate, saccharin, sodium, etc.
  • Food additives such as flavors (vanillin, lactones, etc.), swelling agents (alum, potassium D-tartrate, etc.), reinforcing agents, emulsifiers, thickeners (pigments), coatings, gum herbicides, foam inhibitors, solvents, improvers ) Can be added.
  • the additive is selected according to the type of food and used in an appropriate amount.
  • the food composition for retinal disease improvement comprising the maple leaf extract or a fraction thereof may be prepared for health functional food for improving retinal disease.
  • the food composition for example, confectionery, beverages, alcoholic beverages, fermented foods, canned food, milk processed foods, meat processed foods or noodles It may be prepared as a health functional food in the form of food.
  • the confectionery includes biscuits, pies, cakes, breads, candy, jelly, gum, cereals (including meal substitutes such as grain flour).
  • Beverages include drinking water, carbonated drinks, functional hot drinks, juices (eg, apples, pears, grapes, aloes, citrus fruits, peaches, carrots, tomato juices, and the like), sikhye, and the like.
  • Alcoholic beverages include sake, whiskey, shochu, beer, liquor, fruit wine, and the like.
  • Fermented foods include soy sauce, miso, and red pepper paste.
  • Canned food includes canned seafood (e.g., tuna, mackerel, saury, canned seashells, etc.), canned animal products (beef, pork, chicken, canned turkey, etc.), canned produce (corn, peaches, canned apples, etc.).
  • Milk processed foods include cheese, butter, yogurt, and the like.
  • Processed meat products include pork cutlet, beef cutlet, chicken cutlet and sausage. Includes sweet and sour pork, nuggets, breadfruits and more. Noodles, such as sealed packaging fresh noodles, are included.
  • the composition may be used in retort food, soups and the like.
  • the term "functional food” of the present invention is the same term as a food for special health use (FOSHU), the medicine, medical effect processed to appear efficiently in addition to nutritional control function It means a high food, the food may be prepared in various forms such as tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills, etc. in order to obtain a useful effect in improving retinal disease.
  • FOSHU special health use
  • the present invention provides a feed composition for retinal disease improvement comprising a maple leaf extract or a fraction thereof.
  • the feed composition prevents or improves retinal disease by incorporating maple leaf extract or a fraction thereof into the feed of the individual suspected of retinal disease.
  • Example 1 oral or ocular administration
  • mice (6 weeks old) were experimental animals, and one group was treated with N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) 600 mg / kg as shown in Formula 1 below, and the two groups were maple trees in addition to the ENU. Ethanol extract and hot water extract were treated to confirm the protective effect against retinal disease.
  • ENU N-ethyl-N-nitrosourea
  • the hot water extract was divided into 200 mg / kg
  • the ethanol extract was divided into 100 mg / kg and 200 mg / kg.
  • the ethanol extract 2 mg / kg was separately administered to the eye directly (5 days).
  • the tissue was fixed in 10% neutral formalin, and the tissues embedded in paraffin were chopped continuously by 4 ⁇ m. Attached. Treatment with H 2 O 2 for 30 minutes to eliminate endogenous peroxidase. 1:50 for anti-PKCalpha, anti-GFAP and anti-GFAP antibodies for immunohistochemical staining, 1: anti-OPN1SW for anti-OPN1SW After dilution with 50 each, overnight incubation at 4 ° C. was followed by washing, followed by labeling with a secondary antibody and observing with a microscope.
  • Tissue staining (H & E) showed no toxicity of each extract, and the ENU-administered group showed a thinner retinal layer and loss of the outer nuclear layer and the layer of rods and cones.
  • the group administered with 200 mg / kg ethanol extract of maple was confirmed to maintain the structure of the histologically similar to the control (control) group (Fig. 1).
  • OPN1SW photoreceptor cell antibody
  • GFAP expression was reduced in the group treated with 200 mg / kg of maple ethanol extract when stained with GFAP, a Muller cell indicator protein (FIG. 3).
  • TdT terminal deoxynucleotidyl transferase-Dutp nick end labeling assay kit
  • the reaction was carried out for 1 hour in a dark room condition at 37 ° C. using a tunnel reaction mixture (TUNEL reaction mixture, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) -dUTP) and a fluorescence microscope (515). -565 nm, green, Olympus optical, Tokyo, Japan).
  • the retina was extracted from the eye, the protein was extracted with RIPA buffer, and centrifuged for about 10 minutes at 12,000 rpm to obtain a supernatant.
  • the protein was quantified by Bradford (Bradford, Bio-Rad, Hercules, CA, U.S.A.), electrophoresed and separated by 7-12% SDS PAGE, and then transferred to a nitrocellulose membrane.
  • Each antibody was used as a primary treatment, and reacted with a secondary antibody conjugated with peroxidase, followed by ECL (enhanced chemilluminescence, Amersham biosciences, England).
  • Example 2 eye drop or oral administration
  • the ischemic stroke rat model by middle cerebral artery occlusion (MCAO) maintained anesthesia and body temperature was maintained at 37.0 ⁇ 0.5 during the procedure with a feedback-regulated heating pad.
  • the anterior skin of the anesthetized rat was incised, the muscle layer of the cervix was exposed and the left total carotid artery was found and carefully separated and detached so as not to damage the vagus nerve.
  • the branches of the external carotid artery and the internal carotid artery are carefully separated, and the external carotid artery is blocked.
  • the carotid artery is partially incised to enter the nylon operating room, To be closed. After 90 minutes, the nylon operating room was carefully removed to reopen the blood flow, and the blood flow was reopened to induce an animal model.
  • Table 2 shows the mode of drug administration by experimental conditions To indicate.
  • the eye drops were administered three times a day at 9:00 am, 1:00 pm, 5:00 and oral administration once a day, at 3:00 pm.
  • the drug was exposed to the drug for a total of 5 days and sacrificed after the last drug administration on the 5th day.
  • SK chemical's Gynexine F tablet which is prescribed to patients with ischemic retinopathy in the present clinical trial, was used. (6 mg / ml at 300g Rat).
  • Eyes of the sacrificed rats were removed at 5 days, fixed in 4% PFA for 10 minutes, separated only from the retinal tissue under an anatomical microscope, and cut into four edges of the retina to make the retina flat and fixed and stored in methanol.
  • Remove methanol for staining wash twice with TBS for 5 minutes, 0.3% Triton X-100 + 0.2% BSA + 5% normal goat serum / TBS to ensure that the antibody penetrates the cell membrane well and prevents nonspecific binding of the antibody
  • the primary antibody Brn3a ganglion cell marker
  • Nuclear staining with DAPI was performed for 10 minutes and observed by fluorescence microscope to image.
  • FIG. 6 is a result thereof.
  • FIG. 6A is an image obtained by reacting Brn3a, a specific antibody of ganglion cells (RGC), among constituent cells of retinal tissue, and FIG. was selected, and the number of cells that positively reacted with Brn3a on the selected image was converted to the% average value for the control group.
  • RRC ganglion cells
  • FIG. 7a is the result of immunofluorescence staining using neurons and neurofibrous marker Tuj-1 (Neuron-specific Class III ⁇ -tubulin) antibody. Images were observed by fluorescence microscopy.
  • Tuj-1 Neurofibrous marker
  • the expression of Tuj-1 positive nerve fibers decreased to 50% or more on the 5th day of MCAO surgery, but at 2 mg / ml rather than 1 mg / ml of KIOM-2015EE, and KIOM-2015EW.
  • the effect of KIOM-2015EE was higher than that of 2 mg / ml of KIOM-2015EE, and the effect of oral administration was more effective than that of eyedrops.
  • the graph of FIG. 7B five randomly selected from each image were obtained, and the fluorescence density positively reacted with Tuj-1 was obtained as a pixel value using the ImageJ program, and then expressed as a% average value for the control group. The picture was taken at a magnification of 100x.
  • FIG. 8a shows the results of immunofluorescence staining using glial fibrillary acidic protein (GFAP) antibodies that are glial and astrocytic markers. The image was observed by fluorescence microscopy.
  • GFAP glial fibrillary acidic protein
  • the glial cells that are activated around the injury include astrocytes and glial cells, which are frequently activated when a tissue is injured.
  • GFAP GFAP
  • FIG. 8B Five randomly selected from each image were obtained, and fluorescence density positively reacted with GFAP was obtained as a pixel value using an ImageJ program, and then expressed as a% average value for the control group. The picture was taken at a magnification of 100x.
  • the harvested eye was fixed in 4% PFA solution, and finally, paraffin was embedded to embed the tissue, and then cut to a thickness of 3 ⁇ m using a microtome. After paraffin was removed and hydrated for 1 hour in a drying oven, 5 minutes with hematoxylin solution, stained with eosin solution, washed, mounted and mounted on the cornea using microscopy. Morphological histological changes were obtained.
  • FIG. 9A 5 days after the MCAO operation, the thickness of the retinal tissue was increased and the number of cells in the ganglion cell layer (GCL) was significantly decreased due to swelling of the inner retinal layer (IPL) compared to the control group.
  • IPL inner retinal layer
  • FIG. 9B 5 randomly selected from each image were counted, the number of cells remaining in the ganglion cell layer was counted, and the percentage average value of the control group was shown. The picture was taken at a magnification of 100x.
  • TUNEL assay (Roche Diagnostics, Cat. No. 11 684 795 910) was performed according to the manual to confirm the effects of KIOM-2015E on cytotoxicity and cell death caused by MCAO surgery, and TUNEL-positive cells were subjected to fluorescence microscopy. Image was acquired by.
  • TUNEL-positive responses can be observed in the ganglion cell layer, the inner nuclear layer, and the outer nuclear layer. Can be. The picture was taken at a magnification of 100x.
  • maple leaf extract prevents the damage of the network and reduces the expression level of the protein causing the retinal disease, while increasing the expression level of OPNISW, Brn3a and Tuj-1, which uses the pharmaceutical composition according to the present invention. It is confirmed that the retinal disease can be prevented or treated.

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Abstract

본 발명은 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 상기 약학 조성물을 이용하여 망막 질환을 예방 또는 치료하는 방법 및 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 망막 질환에 효과적인 것으로서, 망막 질환의 예방 또는 치료 조성물로 약학적으로 이용 가능할 뿐 아니라, 건강기능식품으로서도 유용하게 이용될 수 있다.

Description

단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물
본 발명은 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 본 발명은 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물, 상기 약학 조성물을 이용하여 망막 질환을 예방 또는 치료하는 방법 및 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
단풍나무는 높이 100m에, 작은 가지는 털이 없으며, 붉은 빛을 띈 갈색 나무이다. 또한 단풍나무의 잎은 마주나고 손바닥 모양으로 5-7개로 깊게 갈라진다. 갈라진 조각은 넓은 바소 모양이고, 끝이 뾰족하며, 가장자리에 겹톱니가 있고, 길이가 5-6㎝이다. 잎자루는 붉은 색을 띄고 길이가 3-5㎝이다. 꽃은 수꽃과 양성화가 한 그루에 핀다. 5월에 검붉은 빛으로 피고 가지 끝에 산방꽃 차례를 이루며 달린다. 꽃받침 조각은 5개로 부드러운 털이 있고, 꽃잎도 5개이다. 수술은 8개이다.
이러한 단풍나무는 한방에서 뿌리 껍질과 가지를 계조축이라는 약재로 쓰는데, 무름관절염으로 통증이 심할 때 물에 달여서 복용하고, 골절상을 입었을 때 오가피를 배합해서 사용하며, 소염작용과 해독 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
한편, 망막은 안구의 가장 안쪽을 덮고 있는 투명한 신경조직으로 안구 내로 들어온 빛은 망막의 내층을 지나 망막의 시세포에 감지된다. 시세포는 빛 정보를 다시 전기적 정보로 전환하고 이 정보는 망막 내층의 세포를 통해 시신경을 지나서 뇌로 전달된다. 망막은 안구의 바깥쪽에서부터 안쪽까지 10개의 층으로 구성된다. 10개의 구성층은 망막색소상피층, 광수용체층, 바깥경계막, 바깥핵층, 바깥얼기층, 속핵층, 속얼기층 신경절세포층, 신경섬유층, 속경계막이 이에 해당한다. 또한 황반은 시신경 유두 (optic disc)의 외측 약간 아래 부위에 존재하는 타원형의 함몰 부위로 망막의 시신경 세포가 밀집되어 있는 부위이다. 망막의 시각적 자극 인지 기능의 대부분을 황반부에서 담당하게 되므로 황반부에 병변이 생기거나 황반부의 시신경세포 손상 및 결손이 생기는 경우에는 실명하거나 심각한 시력 장애를 겪게 된다.
이러한 망막 또는 황반의 손실로 인해 유발되는 질환들은 모두 망막 질환(retina disorder)에 포함된다. 이러한 망막 질환의 구체적인 예에는 다음과 같은 것들이 있다.
망막 질환 중 망막순환장애에 속하는 질환으로서 망막동맥폐쇄, 망막정맥폐쇄, 망막정맥주위염, 고혈압망막병증, 당뇨망막병증, 미숙아망막병증 등이 있다.
또한 망막염(retinitis)은 세균이나 진균에 의한 감각신경망막염증, 풍진에 감염된 모체에서 태어난 신생아에서 확인되는 망막색소상피염증 등이 대표적인 질환인데, 이들도 모두 망막 손상에 의한 망막 질환에 속한다.
또한 망막변성(retinal degeneration)을 유발하는 질환에는 망막색소변성, 혈관무늬병증, 드루젠 등이 있는데 이들도 모두 망막 손상에 의한 망막 질환에 속한다.
또한 망막박리(retinal detachment)는 망막의 안쪽의 감각신경층과 바깥쪽의 색소상피층 사이가 떨어지면서 발생한다. 크게 망막열공이 원인이 되었는지에 따라 열공망막박리와 비열공망막박리로 나누게 되며, 이들 또한 망막 손상에 의한 망막 질환에 속한다.
기타의 망막 질환으로서 황반변성, 황반이상증, 당뇨망막병증, 망막동정맥폐쇄, 고혈압성 망막병증, 망막대동맥류, 안허혈증후근, 방사선망막병증, 미숙아망막병증, 급성망막괴사, 망막염, 망막맥락막염, 망막박리, 망막종양, 외상에 의한 망막 손상, 빛에 의한 망막 손상 등의 망막 질환을 들 수 있다.
이러한 망막 질환의 치료법에 대한 연구가 활발하게 진행 중이기는 하나, 현재까지 완전한 치료법은 보고된 바가 없다. 특히 상기 망막 질환에 대하여는 수술적 치료법만이 존재하고 있을 뿐, 망막 질환에 대해 예방 또는 치료 효과가 있는가 약학 조성물 및 약물 치료법에 대하여는 현재까지 어떠한 기술도 보고되지 않고 있는 문제점이 있다.
한편, 본 발명과 관련된 선행기술문헌으로는 대한민국 공개특허 제2012-0068432호(특허문헌 1)가 개시되어 있으나, 상기 특허문헌 1에서는 돌단풍 잎 에탄올 추출물을 포함한 당뇨, 비만의 예방 및 치료용 조성물에 관한 내용이 개시되어 있을 뿐, 단풍나무 잎 추출물을 이용하여 망막 질환을 예방 또는 치료하는 효과에 관하여는 어떠한 내용도 개시되어 있지 않다.
본 발명자는 신규한 망막 질환에 예방 또는 치료 효과가 있는 신규한 물질을 개발하고자 에의 연구 노력한 결과, 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 주된 목적은 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 망막 질환의 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 망막 질환 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 망막 질환에 효과적인 것으로서, 망막 질환의 예방 또는 치료 조성물로 약학적으로 이용 가능할 뿐 아니라, 건강기능식품으로서도 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 단풍나무 잎 추출물을 경구 또는 안구 투여한 후, 면역조직염색법으로 관찰한 결과로서, 단풍나무 잎 추출물을 경구 투여하였을 때 유의적인 보호 효과가 나타나는 것을 확인한 것이다.
도 2는 단풍나무 잎 추출물을 경구 또는 안구 투여한 후, 면역조직염색법으로 관찰한 결과로서, OPNISW를 사용하여 염색하였을 때 단풍나무 에탄올 추출물에 의해 보호되는 것을 확인한 것이다.
도 3은 단풍나무 잎 추출물을 경구 또는 안구 투여한 후, 면역조직염색법으로 관찰한 결과로서, GFAP로 염색하였을 때 단풍나무 에탄올 추출물을 처리한 그룹에서 GFAP 발현이 감소됨을 확인한 것이다.
도 4는 단풍나무 잎 추출물을 경구 또는 안구 투여한 후, 터널 어쎄이한 결과를 나타내는 형광현미경 사진이다.
도 5는 단풍나무 잎 추출물을 경구 또는 안구 투여한 후, 웨스턴 블랏한 결과를 나타내는 사진이다.
도 6은 단풍나무 잎 추출물을 점안 또는 경구 투여한 후, 시신경절세포의 세포사를 확인한 실험 결과로서, (a)는 형광형미경 사진이고, (b)는 선택된 이미지와 양성반응한 세포수를 계산하여 대조군에 대한 평균값으로 전환된 결과를 나타내는 그래프이다.
도 7은 단풍나무 잎 추출물을 점안 또는 경구 투여한 후, 시신경절세포섬유 감소의 억제를 확인한 실험의 결과로서, (a)는 형광형미경 사진이고, (b)는 Tuj-1 양성 반응한 신경 섬유의 발현량 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 단풍나무 잎 추출물을 점안 또는 경구 투여한 후, 신경교세포 및 성상세포 활성의 억제를 확인한 실험의 결과로서, (a)는 형광형미경 사진이고, (b)는 KIOM-2015E에 의해 모든 그룹에서 유의하게 그 발현이 감소하는 결과를 나타내는 그래프이다.
도 9는 단풍나무 잎 추출물을 점안 또는 경구 투여한 후, 망막조직학적 변화를 확인한 실험의 결과로서, (a)는 형광형미경 사진이고, (b)는 선택된 이미지에서 신경절세포층에 남아있는 세포수를 센 다음, 대조군에 대한 평균 값을 나타내는 그래프이다.
도 10은 단풍나무 잎 추출물을 점안 또는 경구 투여한 후, 망막조직의 세포사 억제를 확인한 실험의 결과를 나타내는 형광현미경 사진이다.
본 발명자들은 안전하면서도 효과적으로 망막 질환을 치료할 수 있는 천연물 유래의 제제를 개발하고자 다양한 연구를 수행하던 중 단풍나무 잎 추출물이 망막 질환을 치료하는 효과를 나타냄을 발견하였다. 대체로 단풍나무는 다양한 약리활성을 나타낸다고 알려져 있다. 그러나 단풍나무의 망막 질환 치료효과에 관한 용도에 대하여는 보고되지 않았다. 또한 침습적 치료법만이 존재하고 있을 뿐, 망막 질환에 대해 예방 또는 치료 효과가 있는가 약학 조성물 및 약물 치료법에 대하여는 현재까지 어떠한 기술도 보고되지 않고 있다.
본 발명자들은 단풍나무 잎 추출물로부터 망막 질환의 치료효과가 나타날 것이라고 예측하고, 이로부터 망막 질환의 치료효과를 나타내는 유효성분을 규명하고자 다양한 연구를 수행하였으며, 이의 결과로 단풍나무 잎 추출물이 망막 질환을 치료하는 효과를 나타냄을 확인하였다. 즉, 단풍나무 잎 추출물은 Cleaved PARP, GFAP 및 네스틴(Nestin)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 감소시키고, OPNISW, Brn3a 및 Tuj-1로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 증가시켜 망막 질환의 치료효과를 나타냄을 확인하였다.
이처럼, 단풍나무 잎 추출물이 망막 질환을 치료하는 효과를 나타낸다는 사실은 지금까지 전혀 알려지지 않았고, 본 발명자에 의해 최초로 규명되었다. 또한 망막 질환에 대해 예방 또는 치료 효과가 있는가 약학 조성물에 대하여도 본 발명자들에 의해 최초로 발명되었다.
상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물의 망막 질환 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
이하, 본 발명에서의 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 구체적으로 설명한다.
본 발명에서 용어 "단풍나무"는 높이 100m에, 작은 가지는 털이 없으며, 붉은 빛을 띈 갈색 나무로서, 상기 단풍나무의 잎은 마주나고 손바닥 모양으로 5-7개로 깊게 갈라져 있는 것을 의미한다. 한편, 상기 단풍나무는 크게 뿌리, 줄기, 잎으로 나눌 수 있으며, 본 발명의 약학 조성물은 상기 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함할 수도 있다. 이때 상기 단풍나무의 부위별 추출물 또는 그의 분획물은 부위별로 특별한 제한 없이 망막 질환에 대한 예방 또는 치료효과가 달성될 수 있다.
본 발명에서 용어 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 단풍나무 잎으로부터 추출한 것이며, 예를 들어 단풍나무 잎의 열수추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성 용매 가용 추출물을 모두 포함할 수 있다.
단풍나무 잎으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 당업계에 허용되는 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 단풍나무 잎 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.
예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 단풍나무 잎 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.
따라서 본 발명에 있어서 단풍나무 잎 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
이러한 단풍나무 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 약학 조성물일 수 있다.
본 발명의 용어 "분획물"이란, 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물은 상기 단풍나무 잎 추출물을 용매 분획법, 한외여과 분획법, 크로마토그래피 분획법 등의 다양한 방법으로 분획한 결과물이 될 수 있다.
상기 분획물을 수득하는 방법 역시 망막 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 나타내는 분획물을 수득할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 일 예로서, 용매 분획법을 이용하여 단풍나무 열수 추출물로부터 분획물을 수득하는 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데 사용되는 분획 용매의 종류 역시 망막 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 나타내는 분획물을 수득할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 일 예로서, 상기 분획 용매로는 물, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexan), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 단독으로 또는 1종 이상 혼합한 것을 사용할 수 있다.
본 발명에서 용어, "망막 질환"은 망막 또는 황반의 손상, 또는 이들의 변성으로 인하여 시력의 감소 및 손상이 발생하는 질환을 총칭하여 의미한다.
한편, 상기 약학 조성물은 상기 망막 질환을 개선하는 것인데, 상기 망막 질환의 구체적인 예로는 망막동맥폐쇄, 망막정맥폐쇄, 망막정맥주위염, 고혈압망막병증, 당뇨망막병증, 미숙아망막병증, 감각신경망막염증, 망막색소상피염증, 망막색소변성, 혈관무늬병증, 드루젠, 열공망막박리, 비열공망막박리, 황반변성, 황반이상증, 당뇨망막병증, 망막동정맥폐쇄, 고혈압성 망막병증, 망막대동맥류, 안허혈증후근, 방사선망막병증, 미숙아망막병증, 급성망막괴사, 망막염, 망막맥락막염, 망막박리, 망막종양, 외상에 의한 망막 손상 또는 빛에 의한 망막 손상을 들 수 있다.
본 발명에서 용어, "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 망막 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 본 발명의 조성물에 의해 망막 질환에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 단풍나무 잎 추출물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 망막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체(구체적인 예로 비자연적 담체(non-naturally occurring carrier)가 이에 해당할 수 있다), 부형체, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제, 향미제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다.
또한, 상기 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물은 특별한 제한이 있는 것은 아니지만 구체적으로는 전체 조성물 100 중량부에 대하여 1-80 중량부로 포함될 수 있으며, 더욱 구체적으로는 20-60 중량부로 포함될 수 있다. 상기 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물이 1 중량부 미만으로 포함되는 경우에는 본 발명에서 달성하려는 망막 질환의 예방 또는 치료 효과를 충분히 발현시키기 어려워 본 발명의 일실시예에 해당할 수 없으며, 상기 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물이 80 중량부를 초과하는 경우에는 약학적인 응용 제품으로 제조하기 위한 나머지 물질들의 함량을 제한할 수 있어 본 발명의 일실시예에 해당할 수 없다.
한편, 상기 망막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 투여 방법은 특별한 제한이 있는 것은 아니지만, 구체적으로는 동맥 또는 정맥 내로 투입하거나, 피하로, 직장으로, 비강으로, 임의의 다른 비경구로도 투입될 수 있으며, 더욱 구체적으로는 동맥 또는 정맥 내로 투입하거나 경구 투여하거나 또는 근육 세포에 직접 투입할 수 있다.
또한 상기 조성물로부터 선택되는 투여 수준은 화합물의 활성, 투여 경로, 치료되는 병태의 중증도 및 치료되는 환자의 병태 및 이전 병력에 따를 것이다. 그러나 원하는 치료 효과의 달성을 위해 요구되는 것보다 낮은 수준의 화합물의 용량에서 시작하여, 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 서서히 증가시키는 것은 당업계의 지식 내에 있으며, 바람직한 투여량은 나이, 성별, 체형, 체중에 따라 결정될 수 있다. 상기 조성물은 약제학상 허용 가능한 제약 제제로 제제화 되기 전에 추가로 가공될 수 있으며, 구체적으로는 더 작은 입자들로 분쇄 또는 연마될 수 있다. 또한 상기 조성물은 병태 및 치료되는 환자에 따라 달라질 것이지만, 이는 비-독창적으로 결정할 수 있다.
또한 상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
본 발명에서 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르며, 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으나, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 구체적으로는 0.05 내지 500 mg/kg, 보다 구체적으로는 0.1 내지 500 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 특히 본 발명에서의 약학 조성물은 100 내지 300 mg/kg의 투여량인 것이 망막 질환의 예방 또는 치료 효과를 우수하게 달성할 수 있다. 상기 조성물은 망막 질환의 예방 또는 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 개체이든 적용가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물 및 인간 등 어느 개체에나 적용할 수 있으며, 투여의 방식은 당업계의 통상적인 방법이라면 제한 없이 포함한다. 예를 들어, 복강투여, 안구투여 또는 경구투여 등의 방식을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
한편, 상기 약학 조성물은 Cleaved PARP, GFAP 및 네스틴(Nestin)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 감소시키는 것일 수 있다.
또한 상기 약학 조성물은 OPNISW, Brn3a, Tuj-1 등의 발현을 증가시키는 것일 수 있다.
상술한 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 망막 질환 치료방법을 제공한다.
본 발명에서 상기 망막 질환의 의심 개체는 망막 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 모든 동물을 의미하며, 본 발명의 약학 조성물을 망막 질환이 의심되는 개체에 투여함으로써, 개체를 효율적으로 치료할 수 있다.
본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 망막 질환이 의심되는 개체에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 구체적으로, 복강투여, 안구투여 또는 경구투여의 방식으로 투여될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또 다른 하나의 양태로서 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물은 상식할 수 있으면서도 망막 질환 개선을 도모할 수 있는 식품의 형태로 제조되어 섭취할 수 있다. 이때, 상기 식품에 포함되는 상기 망막 추출물 또는 그의 분획물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%로 포함될 수 있다. 식품이 음료인 경우에는 100㎖를 기준으로 1 내지 10g, 바람직하게는 2 내지 7g의 비율로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.
한편, 상기 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 식품 조성물을 이용하여 망막 질환 개선용 건강기능성 식품을 제조할 수 있다.
구체적인 예로, 상기 식품 조성물을 이용하여 망막 질환의 증상을 개선시킬 수 있는 가공식품을 제조할 수 있는데, 예들 들어, 과자, 음료, 주류, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육류가공식품 또는 국수가공식품의 형태인 건강기능성 식품으로 제조될 수 있다. 이때, 과자는 비스킷, 파이, 케익, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 음료는 음용수, 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예들 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토 쥬스 등), 식혜 등을 포함한다. 주류는 청주, 위스키, 소주, 맥주, 양주, 과실주 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예들 들어, 참치, 고등어, 꽁치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파일애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지. 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.
본 발명의 용어 "건강기능성 식품(functional food)"이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 망막 질환의 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.
상술한 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 사료 조성물을 제공한다.
상기 사료 조성물은 망막 질환이 의심되는 개체의 사료에 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하여 섭취시킴으로써 망막 질환을 예방 또는 개선하게 된다.
이하 본 발명을 하기 예에 의해 상세히 설명한다. 다만, 하기 예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 하기 예에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: 경구 또는 안구 투여
< 실시예 1-1: 실험동물 및 처리방법>
Balb/c 마우스(6주령)을 실험동물로 하였으며, 이중 1그룹에 하기 화학식 1과 같은 N-ethyl-N-nitrosourea(ENU) 600 mg/kg을 처리하였고, 2그룹에는 상기 ENU에 더하여 단풍나무 에탄올 추출물과 열수 추출물을 처리하여 망막 질환에 대한 보호 작용을 확인하였다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2017008784-appb-I000001
하기 표 1과 같이 단풍나무 잎 추출물 중, 열수 추출물은 200 mg/kg을, 에탄올 추출물은 100 mg/kg, 200 mg/kg로 나누어 경구 투여하는 방법으로 진행하였다. 또한 이와 별도로 에탄올 추출물 2 mg/kg을 안구에 직접 투여하는 방법으로 진행하였다(5일).
Figure PCTKR2017008784-appb-T000001
< 실시예 1-2: 면역조직염색법>
조직을 10% 중성 포르말린에 고정한 후 파라핀에 포매된 조직을 4 μm 씩 연속적으로 박절하여 1장은 헤마톡실린-에오신(Hematoxylin-Eosin, H&E) 염색을 시행하고 나머지는 면역조직화학염색을 위해 슬라이드에 부착시켰다. 내인성 퍼옥시다제(peroxidase)를 없애기 위해 H2O2 로 30분간 처리하였다. 면역조직화학염색에 사용할 항-PKCalpha(anti-PKCalpha), 항-GFAP(anti-GFAP), 항-GFAP 항체(anti-GFAP antibody)는 1:50, 항-OPN1SW(anti-OPN1SW)는 1:50으로 각각 희석한 후 4℃에서 하룻밤 동안 배양(overnight incubation) 한 후 세척(washing)하였으며, 그 후 2차 항체(secondary antibody)로 표지하여 현미경으로 관찰하였다.
면역조직염색법의 실험결과
조직 염색하였을 (H&E) 각 추출물의 독성은 나타나지 않았으며, ENU를 투여한 그룹은 망막의 두께가 얇아지고 외과립층(out nuclear layer) 및 간추층(Layer of rods and cones) 부위가 소실된 것을 확인할 수 있었다. 그러나 단풍나무의 에탄올 추출물을 200 mg/kg로 투여한 그룹은 조직학적으로 대조군(control)군과 비슷한 수준의 구조를 유지하는 것을 확인 하였다(도 1).
또한 면역염색법을 사용하여 OPN1SW(photoreceptor cell 항체)를 사용하여 염색하였을 때 ENU그룹에서는 나타나지 않았지만 단풍나무의 에탄올 추출물을 200 mg/kg로 투여한 그룹에서는 보호되는 것을 확인할 수 있었으며, bipolar cells 지표인 PKCalpha로 염색 하였을 때 세포(cell) 바디와 액손(axon)에 데미지를 막아주는 것을 확인 할 수 있었다(도 2).
또한 뮬러 세포(Muller cell) 지표 단백질인 GFAP로 염색하였을 때 단풍나무의 에탄올 추출물을 200 mg/kg를 처리한 그룹에서는 GFAP 발현이 감소하는 것을 확인하였다(도 3).
< 실시예 1-3: 터널 어쎄이 ( TUNEL assay)>
터미널 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제-Dutp 닉 엔드 레이블링 어쎄이 키트(Terminal deoxynucleotidyl Transferase(TdT)-dUTP nick end labeling assay kit, Roche Diagnostic, Mannheim, Germany)을 사용하여 인사이투(in situ) 방식으로 분석하였다.
면역조직염색법에 사용된 조직을 이용하여 탈파라핀 과정을 거친 후, 터널 리액션 믹스쳐(TUNEL reaction mixture, terminal deoxynucleotidyl Transferase(TdT)-dUTP)로 37℃ 암실 조건하에서 1시간 동안 반응시키고 형광현미경(515-565nm, green, Olympus optical, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다.
터널 어쎄이의 실험결과
터널 어세이(Tunel assay)로 세포사멸을 확인 하였을 때 단풍나무의 에탄올 추출물 200mg/kg이 세포 사멸을 막는 것을 확인 하였다(도 4).
< 실시예 1-4: 웨스턴 블랏 (Western blot)>
안구에서 망막을 적출하여 RIPA 버퍼(buffer)로 단백질을 추출하여 12,000rpm에서 약 10분간 원심 분리하여 침전시킨 후 상층액을 얻었다. 이를 브래드포드(Bradford, Bio-Rad, Hercules, CA, U.S.A.)로 단백질 정량하여 7-12% SDS PAGE로 전기 영동하여 분리한 후, 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)에 이동시켰다. 각 항체를 사용하여 1차로 처리하고, 퍼옥시다제(peroxidase)가 접합(conjugation)된 2차 항체와 반응 후 ECL (enhanced chemilluminescence,Amersham biosciences, England)를 시행하여 분석하였다.
웨스턴 블랏의 실험결과
웨스턴 블랏(Western blot)으로 단백질의 발현량을 조사하였을 때, 단풍나무 에탄올 추출물을 투입한 경우(좌측으로부터 5, 6(200 mg/kg)번째 레인) Cleaved PARP, GFAP, 네스틴(Nestin)의 발현량이 감소하는 것을 확인하였으며, 반대로 OPN1SW의 발현량은 ENU를 처리한 그룹에 비해 유의적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다(도 5).
실시예 2: 점안 또는 경구 투여
<실시예 2-1: fMCAO 수술 방법>
중뇌대동맥폐쇄(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)에 의한 허혈성 뇌졸중 흰쥐모델은 마취 상태를 유지하며 체온은 feedback-regulated heating pad로 수술 과정 동안 37.0±0.5를 유지시켰다. 마취된 흰쥐의 전경부 중앙의 피부를 절개하고 경부의 근육층을 드러낸 후 좌측 총 경동맥을 찾아 미주신경이 손상되지 않도록 조심스럽게 분리 및 박리하였다. 총경동맥을 고정시킨 후 외경동맥과 내경동맥의 분지를 조심스럽게 분리하고 외경동맥을 차단한 후, 총경동맥의 혈류를 일시적으로 차단한 상태에서 총경동맥을 일부 절개하여 나일론 수술실을 진입시켜 중뇌대동맥이 폐쇄되도록 하였다. 혈류의 재개통을 위하여 90분 후 나일론 수술실을 조심스럽게 제거하여 혈류를 재개통시켜 동물모델을 유발하였다.
< 실시예 2-2: 실험조건 및 계획>
Figure PCTKR2017008784-appb-T000002
상기 표 2(KIOM-2015EW; 단풍나무 물 추출물, KIOM-2015EE; 25% 단풍나무 에탄올 추출물, E.D.;topical eye drop(점안), P.O.; oral administration(경구투여))은 실험 조건별 약물투여 양상을 나타내는 것이다.
한편, 점안의 경우 하루에 세 번 오전 9:00, 오후 1:00, 5:00, 경구 투여의 경우 하루에 한 번, 오후 3:00에 실시하였다. 총 5일 동안 약물에 노출시켰으며, 5일째 마지막 약물 투여 후 희생하였다.
허혈로 인한 시신경세포 손상 모델에 알맞은 양성대조군 약제로는 현 임상에서 허혈성 망막병증환자에게 처방되는 SK케미칼의 기넥신 F정을 사용하였고, 복용량은 몸무게 대비 하루에 한 번 먹는 양으로 환산하여 투여하였다(Rat 300g 기준, 6 mg/ml).
< 실시예 2-3: 실시예 2의 실험결과>
허혈성 망막신경변성 동물모델에서 KIOM -2015E에 의한 시신경절세포의 세포사 억제 확인 실험의 결과( KIOM -2015E-mediated protection of RGC degradation after fMCAO-induced ischemic damage)
5일째 희생된 Rat의 안구를 적출하여, 4% PFA에 10분간 고정하고, 해부현미경하에서 망막조직만을 분리하고 망막의 가장자리를 4군데 절개하여 망막을 편평하게 펴서 메탄올에 고정 및 저장하여 사용하였다. 염색을 위해 메탄올을 제거하고, TBS에 5분간 두 번 수세하고, 항체가 세포막을 잘 투과하고 항체의 비특이적 결합을 방지하기 위하여 0.3% Triton X-100+0.2% BSA + 5% normal goat serum/TBS로 60분간 상온에서 반응시킨 다음, 이어서 1차 항체인 Brn3a (ganglion cell marker(신경절세포 표지자))를 상온에서 1시간 반응시키고 제거한 후, 2차 항체인 Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG와 상온에서 1시간 추가 반응하였다. DAPI로 핵 염색 10분간 수행하고 형광현미경으로 관찰하여 이미지화 하였다.
도 6은 이의 결과인데, 구체적으로 도 6a는 망막 조직의 구성세포 중 신경절 세포(Retinal Ganglion Cell(RGC))의 특이 항체인 Brn3a를 반응시켜 획득한 이미지이며, 도 6b는 각 이미지 중에서 임으로 5개를 선택하고, 선택된 이미지에 Brn3a와 양성반응한 세포수를 마운팅하여 대조군에 대한 % 평균값으로 전환된 것이다. 도 6b를 통해 단풍나무 에탄올 추출물이 물 추출물의 경우보다 시신경 세포의 사멸이 억제되는 것을 확인할 수 있으며, 단풍나무 에탄올 추출물의 경우 양성대조군과도 거의 유사한 결과를 나타냄을 알 수 있다. 사진은 100x의 배율로 촬영되었다.
허혈성 망막신경변성 동물모델에서 KIOM -2015E에 의한 시신경절세포섬유의 감소 억제 확인 실험( KIOM -2015E-mediated blockade of RGC nerve fiber degradation after fMCAO-induced ischemic damage)
상기 실험예 2-1과 같은 방법으로 면역형광 염색하였다. 도 7a는 신경세포 및 신경섬유 표지자인 Tuj-1(Neuron-specific Class III β-tubulin) 항체를 이용한 면역형광 염색의 결과이다. 형광현미경으로 관찰하여 이미지화하였다.
도 7b에서 Tuj-1 양성 반응한 신경 섬유의 발현은 MCAO 수술 5일째 50% 이상의 수준으로 감소하였으나, KIOM-2015EE의 농도 1 mg/ml의 점안보다는 2 mg/ml의 점안에서, 그리고 KIOM-2015EW의 2 mg/ml보다는 KIOM-2015EE의 점안에서 그 효과가 더 증가함을 확인할 수 있고, 점안의 경우보다 경구투여의 경우 더 효과적으로 시신경섬유의 분해를 억제함을 확인할 수 있었다. 도 7B의 그래프는 각 이미지 중에서 임으로 5개를 선택하고, Tuj-1과 양성 반응한 형광 밀도를 ImageJ 프로그램을 이용하여 픽셀 값으로 얻은 뒤, 대조군에 대한 % 평균값으로 나타내었다. 사진은 100x의 배율로 촬영되었다.
허혈성 망막신경변성 동물모델에서 KIOM -2015E에 의한 신경교세포 및 성상세포의 활성 억제 확인 실험( KIOM -2015E-mediated blockade of Astrocyte activation after fMCAO-induced ischemic damage)
상기 실험예 2-1과 같은 방법으로 면역형광 염색하였다. 도 8a는 신경교세포 및 성상세포 표지자인 GFAP(glial fibrillary acidic protein) 항체를 이용한 면역형광염색 결과이다. 형광현미경으로 관찰하여 이미지화 하였다.
손상 주위에 활성화되는 교세포에는 성상세포와 신경교세포가 있는데, 보통 조직에 상처가 생기면 빈번히 활성화되는 것으로, 성상교세포의 표지자인 GFAP의 증감을 확인하였다. MCAO 수술 후 5일째, GFAP의 발현이 현저히 증가한 것을 확인하였고, 도 8b를 통해 KIOM-2015E에 의해 모든 그룹에서 유의하게 그 발현이 감소하는 것을 확인하였다. 도 8B의 그래프는 각 이미지 중에서 임으로 5개를 선택하고, GFAP와 양성 반응한 형광 밀도를 ImageJ 프로그램을 이용하여 픽셀 값으로 얻은 뒤, 대조군에 대한 % 평균값으로 나타내었다. 사진은 100x의 배율로 촬영되었다.
허혈성 망막신경변성 모델에서 KIOM -2015E에 의한 망막조직학적 변화 확인 실험(Representative photomicrographs of hematoxylin and eosin stained retinal sections)
망막의 조직학적 변화를 확인하기 위하여 수확한 안구를 4% PFA용액에 고정한 후 최종적으로 파라핀을 침투시켜 조직을 포매한 다음 마이크로톰(microtome)을 이용하여 3μm의 두께로 절단하였다. 건조 오븐(Drying oven)에서 1시간 동안 파라핀을 제거 및 수화 후, 헤마톡실린 용액으로 5분, 에오신 용액으로 염색시키고 수세한 다음, 마운팅(mounting)하고, 마이크로스코피(microscopy)를 이용하여 각막의 형태학적 조직학적 변화를 획득하였다.
도 9a를 통해 MCAO 수술 후 5일째, 대조군과 비교하여 내망상층(IPL) 팽윤으로 망막 조직의 두께가 증가하고, 신경절세포층(GCL)의 세포수가 현저하게 감소함을 관찰하였다. 뿐만아니라 광수용체 세포층 및 바깥쪽 부분(segment)의 구조가 탈락하거나 불규칙한 것을 확인하였다. 그러나 KIOM-2015E의 점안 및 경구투여를 포함한 모든 그룹에서 이러한 변화가 억제되어 있음을 관찰하였다(도 9b). 도 9b의 그래프는 각 이미지 중에서 임으로 5개를 선택하고, 신경절세포층에 남아있는 세포수를 센 다음, 대조군에 대한 % 평균값으로 나타내었다. 사진은 100x의 배율로 촬영되었다.
허혈성 망막신경변성 모델에서 KIOM -2015E에 의한 망막조직의 세포사 억제 확인 실험(Representative images of retinas after TUNEL assay and counterstaining with DAPI)
MCAO 수술로 이한 세포 독성 및 세포사에 따른 KIOM-2015E의 효과를 확인하기 위해 TUNEL 어세이(Roche Diagnostics, Cat. No. 11 684 795 910)을 매뉴얼에 따라 수행하고, TUNEL-양성반응 세포들은 형광현미경으로 이미지를 획득하였다.
도 10에서 MCAO 수술 후 5일째, 신경절 세포층 외, 내핵층 및 외핵층에서도 TUNEL 양성 반응을 나타내는 것을 관찰할 수 있으며, KIOM-2015E의 점안 및 투여한 모든 그룹에서 TUNEL 양성 반응 세포수가 감소함을 확인할 수 있다. 사진은 100x의 배율로 촬영되었다.
이를 통해 단풍나무 잎 추출물이 망망의 손상을 막고 망막 질환을 일으키는 단백질의 발현량을 감소시키면서, OPNISW, Brn3a, Tuj-1의 발현량은 증가시킴을 확인하였으며, 이는 본 발명에 따른 약학 조성물을 이용하여 망막 질환을 예방 또는 치료할 수 있음을 확인한 것이다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 망막 질환은 망막동맥폐쇄, 망막정맥폐쇄, 망막정맥주위염, 고혈압망막병증, 당뇨망막병증, 미숙아망막병증, 감각신경망막염증, 망막색소상피염증, 망막색소변성, 혈관무늬병증, 드루젠, 열공망막박리, 비열공망막박리, 황반변성, 황반이상증, 당뇨망막병증, 망막동정맥폐쇄, 고혈압성 망막병증, 망막대동맥류, 안허혈증후근, 방사선망막병증, 미숙아망막병증, 급성망막괴사, 망막염, 망막맥락막염, 망막박리, 망막종양, 외상에 의한 망막 손상 및 빛에 의한 망막 손상으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환인 것인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 Cleaved PARP, GFAP 및 네스틴(Nestin)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 감소시키는 것인, 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 OPNISW, Brn3a 및 Tuj-1로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 증가시키는 것인, 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 망막 질환 치료방법.
  6. 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 식품 조성물.
  7. 단풍나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막 질환 개선용 사료 조성물.
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