WO2017026429A1 - 筋肉合成促進剤 - Google Patents

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WO2017026429A1
WO2017026429A1 PCT/JP2016/073233 JP2016073233W WO2017026429A1 WO 2017026429 A1 WO2017026429 A1 WO 2017026429A1 JP 2016073233 W JP2016073233 W JP 2016073233W WO 2017026429 A1 WO2017026429 A1 WO 2017026429A1
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WO
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protein
whey protein
leu
muscle synthesis
muscle
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Application number
PCT/JP2016/073233
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English (en)
French (fr)
Inventor
恭佑 中山
亮一 田川
三本木 千秋
Original Assignee
株式会社明治
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Filing date
Publication date
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Priority to JP2017534432A priority patent/JPWO2017026429A1/ja
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    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a muscle synthesis promoter.
  • Whey protein contains many BCAAs (branched chain amino acids: valine, leucine, isoleucine), and has a fast rate (absorption rate) from oral intake to digestion absorption (because of the short time), so it has fast-acting muscle synthesis. It is known that muscles can be efficiently strengthened while preventing muscle fatigue by showing a promoting effect and ingesting especially during exercise. On the other hand, the casein protein is not suitable for subjects who need an immediate effect of promoting muscle synthesis because the rate from absorption to digestion (absorption rate) is slower (longer time) than whey protein. It is said that there is (see Patent Document 1). Therefore, whey protein is mainly used as protein powder.
  • BCAAs branched chain amino acids: valine, leucine, isoleucine
  • whey protein can be made from whey that is discharged after curding raw milk with acid, rennet, and heating in the natural cheese production process. Since it can be reused without being discarded, it is significant to use whey protein in terms of environment.
  • whey protein has an immediate effect of promoting muscle synthesis, but it naturally requires ingestion of a predetermined amount of whey protein in order to achieve this effect. Ingestion of such a predetermined amount of whey protein sometimes makes it difficult for infants and the elderly who cannot take a large amount of energy, but even for healthy adults, the intake energy and protein intake There are also concerns about the onset of lifestyle-related diseases such as obesity and the induction of dysfunction of the liver, kidneys, etc., due to an excess of the above. In addition, taking whey protein itself may be a psychological burden regardless of age.
  • whey protein has a sufficiently immediate effect of promoting muscle synthesis, and it is surmised that the speed of whey protein absorbability contributes to this.
  • the absorption of whey protein into the body is extremely fast compared to other proteins, and so far, it is thought that there is no one that has the same effect of promoting muscle synthesis with less intake (dose) than whey protein. It was done. Therefore, although it is true that there is a situation where the intake of the whey protein is a burden, it is not always a large amount of protein that has the same or higher muscle synthesis promoting effect with a lower intake (administration) amount than the whey protein.
  • a muscle synthesis promoter that does not require ingestion has not been known so far. Therefore, it has been a problem to provide a new muscle synthesis promoter that exhibits such effects.
  • the present inventors have found a muscle synthesis promoter comprising a whey protein hydrolyzate as an active ingredient, and further, the muscle synthesis promoter is converted into whey protein.
  • the present inventors have found that it can be used as a protein source that exhibits the same or higher muscle synthesis promoting effect at a lower intake (administration) amount than whey protein, and does not necessarily need to take a large amount of protein.
  • the present inventors have rapidly absorbed the whey protein itself into the body, there is no one that exhibits the same level of muscle synthesis promoting effect with less intake (administration) than the whey protein.
  • the present inventors have unexpectedly found that the whey protein hydrolyzate has a more immediate effect of promoting muscle synthesis compared to the whey protein itself.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention was comparable to whey protein and was expected to exhibit the same muscle synthesis promoting effect as whey protein. It was unexpectedly found that the whey protein hydrolyzate of the invention has a further immediate effect of promoting muscle synthesis as compared with conventional whey proteins. The above phenomenon was surprising. The present invention is based on these findings.
  • a muscle synthesis promoter comprising whey protein hydrolyzate as an active ingredient
  • the whey protein hydrolyzate contains a dipeptide, and the dipeptide (1) Ile-Leu and Leu-Ala, and (2) Ala-Leu, Val-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile-Asn, Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val
  • the muscle synthesis promoter according to [1] which is at least one dipeptide selected from the group
  • the proteolytic enzyme is one or more selected from Bacillus genus proteolytic enzyme, Aspergillus genus proteolytic enzyme, trypsin, pepsin, and flavorzyme
  • a method for producing a muscle synthesis promoter comprising blending an effective amount of a whey protein hydrolyzate.
  • a method for promoting muscle synthesis which comprises allowing a subject in need thereof to take an effective amount of a whey protein hydrolyzate, [13]
  • the whey protein hydrolyzate contains a dipeptide, and the dipeptide (1) Ile-Leu and Leu-Ala, and (2) Ala-Leu, Val-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile-Asn, Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val
  • the method for promoting muscle synthesis according to [12] which is at least one dipeptide selected from the group, [14]
  • a muscle synthesis promoter containing whey protein hydrolyzate as an active ingredient can be provided.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can be used as a protein source in place of whey protein, which has the same or higher muscle synthesis promoting effect with less intake (administration) amount than whey protein, and does not necessarily need to consume a large amount of protein. can do. Since the muscle synthesis promoter of the present invention uses whey protein hydrolyzate as an active ingredient, the burden of digestion and degradation on the subject is lighter than that of whey protein.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention is particularly advantageous in that it can exert an excellent muscle synthesis promoting action while reducing the digestive burden on the subject, in addition to exhibiting an effect with a less intake amount than whey protein. It is. Moreover, whey protein is usually discharged after curding raw material milk with acid, rennet, heating, and the like in the production process of natural cheese, and discarded to become industrial waste. The whey protein hydrolyzate contained as an active ingredient in the muscle synthesis promoter of the present invention can be used as a raw material by reusing the whey that is industrial waste. The significance of the invention is great.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention is a muscle synthesis promoter containing whey protein hydrolyzate as an active ingredient.
  • Active ingredient means an ingredient required for exerting a muscle synthesis promoting effect.
  • the “active ingredient” means a component that is required to exert a muscle synthesis promoting effect for a subject that needs immediate muscle synthesis promotion.
  • “Promoting muscle synthesis” means promoting the synthesis of muscle by ingesting whey protein hydrolyzate and absorbing it in the body as a nutrient. Therefore, the muscle synthesis promoter of the present invention is used for that and the state resulting therefrom.
  • the purpose of promoting muscle synthesis includes muscle gain, muscle growth promotion, muscle tissue repair, muscle recovery, muscle enhancement, muscle strength improvement, health promotion effect and muscle performance improvement associated with muscle synthesis promotion. Health improvement effect and exercise ability improvement accompanying tissue repair, muscle strength improvement, muscle synthesis promotion. Promoting muscle synthesis also includes assimilation of muscle proteins from amino acids.
  • “Immediately effective muscle synthesis promotion” means that muscle synthesis is promoted by the immediate absorption of whey protein hydrolyzate.
  • the muscle synthesis promotion of the present invention includes muscle synthesis promotion in a healthy person.
  • Subjects requiring immediate muscle synthesis promotion means subjects who need to promote muscle protein synthesis in order to restore muscle tissue and promote muscle growth.
  • it means a subject to exercise in order to promote muscle synthesis, prevent muscle loss, and promote muscle mass recovery.
  • the exercise is preferably strength training (resistance exercise), and more preferably long-term strength training, for example, in that muscle synthesis is promoted by applying a certain load to muscle strength. It is strength training that is continued for 30 minutes to 5 hours at a frequency of 1 to 7 days in a week. Examples of strength training include dumbbell exercise, squat exercise, and machine training.
  • Examples of subjects who take the muscle synthesis promoter of the present invention include, for example, athletes, sports enthusiasts (athletes), those who need exercise to improve lifestyle-related diseases, and elderly people for health promotion. Persons who need exercise, infants and / or children who need to build muscle during the development / growth process, or suffer from muscle lowering diseases (eg sarcopenia) and need to promote muscle synthesis through exercise And patients. Further, the target may be an animal other than a human (domestic animals such as horses and cows, pets such as dogs and cats, appreciation animals kept in zoos, etc.).
  • the time when the muscle synthesis promoter of the present invention is ingested (administered) by a subject in need of immediate muscle synthesis promotion may be before exercise, after exercise, or during exercise.
  • the time of intake is preferably after exercise, more preferably immediately after exercise.
  • the intake period is preferably within 3 hours after the end of exercise, immediately after exercise. More preferably, within 2 hours after the end of exercise, more preferably within 1 hour after the end of exercise, and particularly preferably within 30 minutes after the end of exercise (Levenhagenhaet al. Am J Physiol Endocrinol Metab (2001), 280, EE982-E993).
  • Immediately effective muscle synthesis promoting action equal to or better than whey protein means an action equal to or higher than the muscle synthesis promoting action observed when orally ingesting (administering) whey protein having the same protein content.
  • the muscle synthesis promoting action includes an anabolic action of muscle protein from amino acids.
  • the muscle synthesis promoting action can be confirmed, for example, by measuring the triceps surae muscle synthesis rate (FSR) of the upper limb in the test group within 1 hour after administration of the test substance after the rat swimming test. it can.
  • FSR triceps surae muscle synthesis rate
  • the FSR of the muscle synthesis promoter group of the present invention is comparable or similar to the FSR of the control group that orally ingested the same amount of whey protein, which is said to have an immediate effect of promoting muscle synthesis. In the case of the degree or more, it can be judged that the muscle synthesis promoting action is significant.
  • Protein content means the total amount of amino acids contained in various proteins.
  • the protein content may be measured and calculated by a conventional method such as Kjeldahl method or Raleigh method. Actually, in the case of the Kjeldahl method, it can be calculated by measuring nitrogen contained in various proteins and multiplying the value by a nitrogen-protein conversion factor (usually 6.25).
  • a nitrogen-protein conversion factor usually 6.25.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention is also called whey peptide, and there is no particular limitation on the means and / or method as long as all or part of the whey protein as a raw material is hydrolyzed.
  • the whey protein used in the present invention may be a whey protein that has been separated or purified, and is a raw material, food or drink that already contains whey protein and casein protein in a specific protein ratio (for example, a milk protein mixture, etc.) ) Can also be used.
  • the separated and purified whey proteins include, for example, whey stock solutions (sweet whey, acid whey, etc.), concentrates thereof, dried products (whey powder etc.), frozen products thereof, and reduced solutions thereof. Can be used. Furthermore, desalted whey, whey protein concentrate (WPC), whey protein purified product (WPI), ⁇ -lactalbumin ( ⁇ -La), ⁇ -lactoglobulin ( ⁇ -Lg), immunoglobulin, lactoferrin, etc., and These reducing solutions can be used.
  • WPC whey protein concentrate
  • WPI whey protein purified product
  • ⁇ -La ⁇ -lactalbumin
  • ⁇ -Lg ⁇ -lactoglobulin
  • immunoglobulin lactoferrin, etc.
  • raw materials and foods and drinks containing whey protein include raw milk, pasteurized milk (such as milk), skim milk, component-adjusted milk, processed milk, and dairy products (concentrated milk, powdered milk, condensed milk, fermented milk (yogurt) Etc.), lactic acid bacteria beverages, processed cheeses, ice creams, creams), and milk protein concentrates (MPC), and their concentrates, their dried products, their frozen products, and the like.
  • the raw material and food / beverage products containing the said whey protein may acquire and use a commercial item, and may prepare and use them themselves.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention can be prepared by hydrolyzing the whey protein as described above once or more.
  • the whey protein may be hydrolyzed at least partially during the separation and purification steps, and after such partial hydrolysis, further hydrolysis may be performed.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention can be prepared by hydrolyzing the whey protein by a known method, but can be preferably prepared by hydrolysis with a proteolytic enzyme.
  • the protein hydrolase is not particularly limited as long as the effect of promoting muscle synthesis of the present invention can be obtained.
  • the type and reaction conditions are arbitrarily set with reference to the description of Japanese Patent No. 5645360. it can.
  • proteolytic enzymes derived from microorganisms belonging to the genus Bacillus or Aspergillus papain derived from papaya, bromelain derived from pineapple, actinidine derived from kiwi, pancreatin, trypsin
  • proteolytic enzymes derived from animals such as chymotrypsin can be used alone or in combination.
  • a commercial item can be used for these proteolytic enzymes.
  • proteolytic enzymes include, for example, protease M Amano (Amanoenzyme), protease N Amano (Amanoenzyme), protease P Amano (Amanoenzyme), protease A Amano (Amanoenzyme), trypsin (Novo) ), Pepsin (Wako Pure Chemical Industries), Umamizyme (Amanoenzyme), and Flavorzyme (Novo), but are not limited thereto.
  • the proteolytic enzyme used to hydrolyze whey protein is selected from the group consisting of Bacillus derived proteolytic enzyme, Aspergillus derived proteolytic enzyme, trypsin, pepsin, and flavorzyme. One kind or two or more kinds.
  • the reaction temperature is preferably 20 to 80 ° C., more preferably 25 to 75 ° C., and still more preferably 30 It is ⁇ 70 ° C., more preferably 35 to 65 ° C., further preferably 40 to 60 ° C., particularly preferably 45 to 55 ° C.
  • a reaction temperature of 20 ° C. or higher is preferable because whey protein can be efficiently hydrolyzed by a proteolytic enzyme.
  • the reaction temperature is 80 ° C. or lower, inactivation due to denaturation of the proteolytic enzyme is suppressed, which is preferable.
  • the reaction temperature when hydrolyzing whey protein with a protein hydrolase is one step in view of the optimum temperature of the protein hydrolase used, or Two or more reaction temperatures can be set. When two or more reaction temperatures are set, the order is arbitrary.
  • the reaction time is preferably 2 to 48 hours, more preferably 2 to 36 hours, still more preferably 2 -24 hours, more preferably 2-18 hours, more preferably 2-14 hours, more preferably 4-12 hours, still more preferably 6-10 hours, particularly preferably 7-9 hours.
  • a reaction time of 2 hours or longer is preferable because much whey protein can be hydrolyzed by a proteolytic enzyme.
  • a reaction time of 48 hours or less is preferable because the whey protein can be efficiently hydrolyzed.
  • the reaction time is arbitrarily determined in the above reaction time. Two or more reaction temperatures can be set.
  • the amount of protein hydrolase added is particularly effective if the muscle synthesis promoting effect of the present invention is achieved.
  • it is preferably 0.5 to 10 g, more preferably 0.7 to 5 g, still more preferably 0.8 to 4 g, and particularly preferably 1 to 2 g with respect to 100 g of protein.
  • the reaction pH when hydrolyzing the whey protein with a protein hydrolase is preferably near the optimum pH of the protein hydrolase used.
  • a proteolytic enzyme derived from the genus Bacillus and a proteolytic enzyme derived from the genus Aspergillus are used in combination, it is preferably pH 5-9, more preferably pH 5.5-8.5, still more preferably pH 6-8, and particularly preferably Has a pH of 6.5 to 7.5.
  • reaction pH is one step in view of the optimum pH of the protein hydrolase used, or Two or more stages of reaction pH can be set.
  • reaction pH of two or more steps the order is arbitrary.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention can also be used as an indicator that a specific dipeptide is contained as an indicator of degradation.
  • the specific dipeptide is preferably Ile-Leu, Leu-Ala, Ala-Leu, Val-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile-Asn, Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val, which includes at least one dipeptide selected from these groups.
  • Ile is isoleucine
  • Leu is leucine
  • Ala is alanine
  • Val is valine
  • Lys is lysine
  • Asn is asparagine
  • Glu glutamic acid.
  • the dipeptide can be measured by LC / MS, and specifically can be measured by the method described in Test Example 1 described later.
  • the specific dipeptides preferably includes a specific dipeptide that satisfies the following (1) and (2).
  • (1) Ile-Leu and Leu-Ala, and (2) Ala-Leu, Val-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile-Asn, Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val At least one dipeptide selected from the group; That is, it is particularly preferred that (1) Ile-Leu and Leu-Ala are each contained in the whey protein hydrolyzate of the present invention, and (2) Ala-Leu, Val-Leu, Lys-Ile. It is particularly preferable that at least one dipeptide among Leu-Leu, Ile-Asn, Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val is contained in the whey protein hydrolyzate of the present invention.
  • the content is preferably the protein content of the whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 0.5 mg or more per gram, more preferably 0.5 to 10 mg per gram of protein content, still more preferably 0.5 to 8 mg per gram of protein content, and still more preferably 0.5 per gram of protein content. -6 mg, particularly preferably 0.5-4 mg per gram of protein content.
  • the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable.
  • the content of the dipeptide Ile-Leu is 10 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content thereof is preferably the protein content of whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 0.5 mg or more per gram, more preferably 0.5 to 10 mg per gram of protein content, still more preferably 0.5 to 8 mg per gram of protein content, and still more preferably 0.5 per gram of protein content. -6 mg, particularly preferably 0.5-4 mg per gram of protein content.
  • the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable.
  • the content of the dipeptide Leu-Ala is 10 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content is preferably the protein content of whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 0.2 mg or more per gram, more preferably 0.2 to 10 mg per gram of protein content, still more preferably 0.2 to 8 mg per gram of protein content, still more preferably 0.2 per gram of protein content. -6 mg, particularly preferably 0.2-5 mg per gram of protein content. If the content of the dipeptide Ala-Leu is 0.2 mg or more per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable. Moreover, if the content of the dipeptide Ala-Leu is 10 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content thereof is preferably the protein content of whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein is 1 mg or more per gram, more preferably 1 to 15 mg per gram of protein content, more preferably 1 to 12 mg per gram of protein content, still more preferably 1 to 10 mg per gram of protein content, particularly preferably the protein content 1-8 mg per gram. If the content of the dipeptide Val-Leu is 1 mg or more per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable. Moreover, if the content of dipeptide Val-Leu is 15 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content is preferably the protein content of the whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 0.2 mg or more per gram, more preferably 0.2 to 15 mg per gram of protein content, still more preferably 0.2 to 12 mg per gram of protein content, still more preferably 0.2 per gram of protein content. ⁇ 10 mg, particularly preferably 0.2 to 8 mg / g protein content.
  • the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable. Further, if the content of the dipeptide Lys-Ile is 15 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content is preferably the protein content of the whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 0.2 mg or more per gram, more preferably 0.2 to 25 mg per gram of protein content, still more preferably 0.2 to 20 mg per gram of protein content, still more preferably 0.2 per gram of protein content. ⁇ 18 mg, particularly preferably 0.2 to 16 mg / g protein content.
  • the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable.
  • the content of the dipeptide Leu-Leu is 25 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content is preferably the protein content of the whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 1 mg or more per gram, more preferably 1 to 10 mg per gram of protein content, more preferably 1 to 8 mg per gram of protein content, more preferably 1 to 6 mg per gram of protein content, particularly preferably the protein content 1 to 5 mg per gram. If the content of the dipeptide Ile-Asn is 1 mg or more per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable. Moreover, if the content of the dipeptide Ile-Asn is 10 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the content thereof is preferably the protein content of whey protein hydrolyzate (before hydrolysis).
  • the protein content of whey protein) is 0.5 mg or more per gram, more preferably 0.5 to 12 mg per gram of protein content, still more preferably 0.5 to 10 mg per gram of protein content, more preferably 0.5 per gram of protein content. ⁇ 8 mg, particularly preferably 0.5 to 6 mg per g protein content. If the content of the dipeptide Leu-Glu is 0.5 mg or more per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the muscle synthesis promoting effect of the present invention is more exhibited, which is preferable. Moreover, if the content of the dipeptide Leu-Glu is 12 mg or less per gram of protein content of the whey protein hydrolyzate, the whey protein hydrolyzate of the present invention can be efficiently prepared, which is preferable.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention is in a liquid state immediately after preparation, in order to enhance its storage stability, it is cryopreserved, dried (spray-dried, freeze-dried), concentrated, and heat-sterilized (plate-type heat-sterilized, tube -Type heat sterilization, batch-type heat sterilization, current heat sterilization, microwave heat sterilization, indirect heat sterilization such as retort heating, direct heat sterilization such as steam injection and steam infusion), non-heat sterilization (light irradiation sterilization, radiation Irradiation sterilization, high voltage pulse sterilization).
  • the form dried (spray drying, freeze-drying) is preferable from the ease of handling.
  • the whey protein hydrolyzate of the present invention can enhance the muscle synthesis promoting effect as compared with the whey protein itself, which is the effect of the present invention
  • other food ingredients and / or food additive ingredients may be added.
  • it can.
  • sweeteners sucgars, liquid sugars, fructose, maltose, trithermal sugar, etc.
  • sugar alcohols erythritol, etc.
  • high-sensitivity sweeteners stevia
  • Aspartame, sucralose, acesulfame potassium acidulant, thickening polysaccharide, fragrance, fruit juice, emulsifier, vegetable juice, and the like.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can be used for the purpose of imparting additional functions of the muscle synthesis promoter of the present invention.
  • minerals calcium, iron, manganese, magnesium, zinc, etc.
  • vitamins, functional materials, probiotic lactic acid bacteria, etc. are added,
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can be used.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can be in the form of a powder in a container for the purpose of providing in the market.
  • a well-known thing can be used for a container, such as paper, a bag, a box, a can, and a bottle.
  • the capacity of the container is not particularly limited, and for example, 1 to 5000 g, 2 to 4000 g, 3 to 3000 g, 4 to 2000 g, 4 to 1000 g, 4 to 500 g, 4 to 250 g, 4 to 200 g, 4 to 100 g, 4 to 100 g, 50 g, 4-30 g.
  • a family size for example, 300 to 5000 g, 300 to 4000 g, 300 to 3000 g, 300 to 2000 g, 300 to 1500 g, 300 to 1400 g, 300 to 1300 g, 300 to 1200 g, 300 to 1100 g.
  • personal size 1 to 500 g, 2 to 250 g, 3 to 200 g, 4 to 100 g, 4 to 50 g, 4 to 40 g, 4 to 30 g, 5 to 30 g, 10 to 30 g, 15 to 30 g.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can be in the form of a beverage in a container (a beverage in which powder is dispersed and dissolved) for the purpose of providing on the market.
  • a container such as a paper container, a soft bag, a PET bottle, a can, and a bottle.
  • the capacity of the container is not particularly limited, and is, for example, 1 to 5000 g, 2 to 4000 g, 3 to 3000 g, 4 to 2000 g, 5 to 1000 g, 6 to 800 g, 7 to 1300 g, 80 to 1200 g, 90 to 1100 g.
  • a family size for example, 300 to 5000 g, 300 to 4000 g, 300 to 3000 g, 300 to 2000 g, 300 to 1500 g, 300 to 1400 g, 300 to 1300 g, 300 to 1200 g, 300 to 1100 g
  • it is 10 to 500 g, 20 to 500 g, 30 to 500 g, 40 to 500 g, 50 to 500 g, 60 to 500 g, 70 to 500 g, 80 to 500 g, 90 to 500 g.
  • ingestion such that the protein content of the whey protein degradation product is preferably 0.05 g / kg body weight or more per meal. More preferably 0.05 to 0.67 g / kg body weight, still more preferably 0.05 to 0.33 g / kg body weight, more preferably 0.07 to 0.33 g / kg body weight, still more preferably It is ingested (administered) so as to be 0.07 to 0.25 g / kg body weight, particularly preferably 0.08 to 0.25 g / kg body weight.
  • the typical weight of the subject is estimated to be about 60 kg.
  • one meal means one time in a state that requires immediate effective muscle synthesis promotion.
  • a single meal is not taken at a time (at a time), It may be taken in several degrees.
  • the muscle synthesis promoting agent of the present invention is ingested (administered) to a subject in need of immediate muscle synthesis promotion, the amino acid concentration in the blood stream can be immediately In terms of improvement, it is preferably within 2 hours after the end of exercise, more preferably within 1 hour after the end of exercise, more preferably within 30 minutes after the end of exercise, and particularly preferably, Within 5 minutes after the end of exercise.
  • the method of ingesting (administering) the muscle synthesis promoting agent of the present invention to a subject in need of immediate muscle synthesis promotion is based on oral administration (oral administration), enteral administration, gastric fistula, etc. Can be appropriately selected, but is preferably taken orally.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention comprises a unit package form per serving, and the whey protein degradation product is contained in the unit as the total intake of the protein.
  • the content is preferably adjusted to 1 g or more in terms of content, specifically 1 to 40 g, preferably 2 to 20 g, more preferably 3 to 20 g, further preferably 4 to 15 g, particularly preferably 5 to 15 g. To be prepared.
  • ⁇ consisting of a unit packaging form per meal '' is a form in which the intake amount per meal is determined in advance, for example, as a food and drink that can be taken orally in a specific amount, not only general foods, It means forms such as beverages (drinks, etc.), health supplements, health functional foods, and supplements.
  • unit packaging form per meal for example, in the case of liquid beverages, gel-like, paste-like, paste-like jelly, powder-like, granule-like, capsule-like, block-like solid foods, etc.
  • a specific amount (dose) can be defined in packaging containers such as cans, glass bottles (such as bottles), plastic containers (such as plastic bottles), packs, pouches, film containers, paper boxes, etc., or intake per serving (usage, dose) ) Is displayed on a packaging container, a homepage, etc., and the form which can prescribe
  • the muscle synthesis promoter of the present invention has the effect of the present invention even if it is ingested in a small amount, so it is in any form such as a bite-sized block shape or a mini can drink that can be consumed with a single drink.
  • intake and swallowing are easy, and convenience for children and elderly people can be improved.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention is such that the whey protein hydrolyzate is Ile-Leu, Leu-Ala, Ala-Leu, Val-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile. -Includes dipeptides consisting of Asn, Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention is such that the whey protein hydrolyzate is Ile-Leu, Leu-Ala, Val-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile-Asn, It includes dipeptides consisting of Leu-Glu, Leu-Val, and Ile-Val.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can provide a composition comprising a muscle synthesis promoter. That is, the muscle synthesis promoter of the present invention can be used alone as it is, but as long as the function of promoting muscle synthesis is exerted, various compositions for oral intake (for oral administration) such as foods and drinks and pharmaceuticals.
  • the composition can also be included as a raw material (raw material), an additive and the like, and a composition having an immediate effect of promoting muscle synthesis can be obtained. Therefore, according to one embodiment of the present invention, a composition comprising the muscle synthesis promoter of the present invention is provided.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can itself be provided in the form of a composition containing a plurality of components. Therefore, according to one embodiment of the present invention, there is provided a composition for promoting muscle synthesis, comprising a whey protein hydrolyzate as an active ingredient.
  • a composition for promoting muscle synthesis comprising a whey protein hydrolyzate as an active ingredient.
  • the form of these compositions is not particularly limited as long as it exerts an effect of promoting muscle synthesis.
  • the composition is solid (powder, granule, capsule, block, etc.), liquid, gel, paste, It can take a form such as a paste, and is preferably a powder.
  • Compositions include food and beverage compositions and pharmaceutical compositions.
  • a food and drink for promoting muscle synthesis comprising whey protein hydrolyzate as an active ingredient.
  • the form of the food or drink is not particularly limited as long as it is a form that can be taken orally, such as a solution, suspension, emulsion, powder, or solid molded product.
  • soft drink, fruit juice drink, vegetable drink, soy milk drink, coffee drink, tea Beverages such as beverages, powdered beverages, concentrated beverages, alcoholic beverages
  • flour products such as bread, pasta, noodles, cake mixes, bread crumbs
  • milk drinks, yogurts, lactic acid bacteria drinks, ice creams, creams How dairy products; agricultural canning, jam, marmalade such, processed agricultural products such as serial; such as frozen food, and the like.
  • the food or drink is a dairy product, more preferably
  • Foods and drinks include health foods, functional foods, dietary supplements, functional labeling foods, foods for specified health use, foods for the sick, infant formulas, milk powders for pregnant or lactating women, or muscle synthesis promotion
  • foods and beverages with a label indicating that they are used are included.
  • a pharmaceutical product for promoting muscle synthesis which contains a whey protein hydrolyzate as an active ingredient.
  • the pharmaceutical may be prepared as an oral preparation or a parenteral preparation according to a conventional method using additives that are acceptable for formulation.
  • oral preparations take the form of solid preparations such as tablets, powders, fine granules, granules, capsules, pills, sustained-release preparations, and liquid preparations such as solutions, suspensions, and emulsions. Can do.
  • a parenteral preparation it can take the form of an injection or a suppository. From the viewpoint of simplicity, an oral preparation is preferable.
  • Additives that are acceptable for formulation include, for example, excipients, stabilizers, preservatives, wetting agents, emulsifiers, lubricants, sweeteners, colorants, fragrances, buffers, antioxidants, pH Examples thereof include regulators.
  • the pharmaceutical agent of the present invention can be used for the treatment or prevention of diseases that require muscle synthesis promotion, specifically, muscle damage diseases (for example, sarcopenia).
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can be provided by blending an effective amount of whey protein hydrolyzate and any orally acceptable additive. Therefore, according to another aspect of the present invention, there is provided a method for producing a muscle synthesis promoter comprising blending an effective amount of a whey protein hydrolyzate.
  • the method for producing a muscle synthesis promoter of the present invention may further include a step of heating and homogenizing a mixture obtained by blending the whey protein hydrolyzate, and the present invention includes such an embodiment.
  • a method for promoting muscle synthesis comprising ingesting an effective amount of a whey protein hydrolyzate to a subject in need thereof.
  • the method excludes medical practice for humans.
  • the “medical action for humans” means an action that requires a doctor or the like to ingest (administer) a medicine to a human.
  • the subject is preferably a healthy person.
  • the muscle synthesis promotion method of the present invention may be used to improve a disease or condition related to muscle damage in a subject. Therefore, the method for promoting muscle synthesis of the present invention is preferably a method for treating a disease or condition associated with muscle damage, and more preferably a method for improving sarcopair. As used herein, “amelioration” includes not only treating an established disease or condition, but also preventing a disease or condition that may be established in the future. In addition, the muscle synthesis promotion method of this invention can be implemented according to description of the muscle synthesis promoter in this specification.
  • ingestion such that the protein content of the whey protein degradation product is preferably 0.05 g / kg body weight or more per meal. More preferably 0.05 to 0.67 g / kg body weight, still more preferably 0.05 to 0.33 g / kg body weight, more preferably 0.07 to 0.33 g / kg body weight, still more preferably 0. 0.07 to 0.25 g / kg body weight, particularly preferably 0.08 to 0.25 g / kg body weight.
  • the typical weight of the subject is estimated to be about 60 kg.
  • a sufficient effect can be obtained even when the intake dose is small as compared with the case where the whey protein is ingested, so that the burden on the child and the elderly can be reduced.
  • the whey protein hydrolyzate in the muscle synthesis promoting method of the present invention, can be ingested so that the protein content is 1 g or more per meal, specifically,
  • the ingestion amount can be 1 to 40 g, preferably 2 to 20 g, more preferably 3 to 20 g, still more preferably 4 to 15 g, and particularly preferably 5 to 15 g.
  • the use of a whey protein hydrolyzate for promoting muscle synthesis is provided.
  • the use of the invention is a non-therapeutic use.
  • a whey protein hydrolyzate for the production of a food or drink for promoting muscle synthesis or a pharmaceutical product.
  • a whey protein hydrolyzate for promoting muscle synthesis is provided.
  • the effect of promoting muscle synthesis can be further enhanced as compared with the unhydrolyzed whey protein itself.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention is higher in the intake (administration) of a certain amount of protein content than the whey protein not hydrolyzed. It was shown to have an effect.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention was ingested (administered) at 0.5 g protein / kg body weight, whey protein was 2.0 g protein / kg body weight. Compared to the case of ingestion (administration), the effect as a muscle synthesis promoter was higher than the equivalent.
  • the muscle synthesis promoting agent of the present invention has a strong muscle synthesis promoting ability when a certain amount of protein content is ingested (administered) as compared with the whey protein conventionally known for its rapid muscle synthesis promoting effect.
  • the effect can be expected.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention can reduce the protein content to be ingested when obtaining an effect equivalent to the intake of whey protein, and can be expected to be effective in a small amount. It becomes easy to do.
  • the whey protein hydrolyzate which is an active ingredient has already been partially decomposed, the digestive burden can be reduced.
  • whey protein hydrolyzate of the present invention can exert the effect of promoting muscle synthesis with a smaller amount of intake than whey protein.
  • Protein in “mg / g protein” and “g protein / kg body weight” described later means the protein content.
  • Example 1 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water.
  • the dissolved whey protein solution is adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, and combined with 500 mg of protease derived from Bacillus (Protease M Amano, Amano Enzyme) and 500 mg of protease derived from Aspergillus (Protease N Amano, Amano Enzyme)
  • the whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 8 hours. After the protease was deactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 1.
  • Example 1 The muscle synthesis promoter powder of Example 1 was diluted 1000 times (volume ratio) in a 0.1% trifluoroacetic acid aqueous solution, and LC / MS was used under the following conditions to obtain Ile-Leu, Ile-Trp, Ala- Leu, Val-Leu, Asp-Leu, Lys-Ile, Leu-Leu, Ile-Asn, Leu-Ala, and Leu-Glu were quantified (unit: mg / g protein).
  • the LC / MS conditions are as follows.
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 1 was 3.82 mg / g protein, Ala-Leu was 1.53 mg / g protein, Val-Leu was 4.70 mg / g protein, and Lys-Ile was 4.82 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 1.56 mg / g protein, Ile-Asn was 3.98 mg / g protein, Leu-Ala was 0.75 mg / g protein, and Leu-Glu was 4.35 mg / g protein.
  • Example 2 The muscle synthesis promoting effect of the muscle synthesis promoter of Example 1 was verified as follows.
  • Rat swimming test SD male rats obtained from CLEA Japan, Inc. having an initial weight of 130 to 170 g were used as experimental animals.
  • the rats were preliminarily raised for 3 to 5 days using a solid feed (Oriental Yeast Co., Ltd.), and then subjected to a 30-minute swimming exercise (water temperature: 34 ° C.) in order to acclimate to the swimming exercise. After fasting for 16 hours from the next day to the day after the acclimated swimming exercise, the rats were divided into five groups (8 in each test group) so that there was no difference in body weight between the test groups.
  • the rats were subjected to a 2-hour swimming exercise.
  • 20 mL / kg of water ie 0 g protein / kg body weight
  • a muscle synthesis promoter 2.5% or 10% by weight solution or whey protein 2.5% or 10% by weight solution
  • Rats were orally ingested at body weight (ie 0.5 g protein / kg body weight or 2.0 g protein / kg body weight).
  • a deuterium labeled phenylalanine solution (prepared by dissolving 225 mg of deuterium labeled phenylalanine in 10 mL of physiological saline) was administered to the rat via the tail vein at 2.0 mL / kg body weight.
  • Rats were dissected under isoflurane anesthesia 15 minutes after tail vein administration (ie 60 minutes after oral ingestion). After whole blood was collected from the abdominal vena cava, the triceps muscle of the upper limb was removed, washed with physiological saline, and immediately frozen with liquid nitrogen. The time of tail vein administration and the time of cryopreservation of the upper limb triceps were accurately recorded. The upper limb triceps were stored at ⁇ 80 ° C. until analysis.
  • apparatus LC / MS / MS (manufactured by Waters), column: ACQUITY UPLC BEH C18 (manufactured by Waters), mobile phase: acetonitrile containing 0.05% TFA water / 0.05% TFA, injection amount 3 ⁇ L, flow rate 0.3 mL / min, UV 215 nm.
  • FSR skeletal muscle synthesis rate
  • the average value ⁇ standard error of each test group was determined from the obtained numerical values.
  • a water intake group (0 g protein / kg body weight) was used as a control group, and a multiple comparison test by the Dunnett method was performed in all groups.
  • Student's t-test was performed between the group ingesting the muscle synthesis promoter of Example 1 and the group ingested whey protein at the same protein intake. In all cases, the significance level was less than 5% (p ⁇ 0.05). The result is shown in FIG.
  • Example 1 This muscle synthesis promoter significantly increased the rate of skeletal muscle synthesis in rats compared to the case of water ingestion at both 0.5 g protein / kg body weight and 2.0 g protein / kg body weight ( FIG. 1). Furthermore, the rate of skeletal muscle synthesis in rats after ingesting 0.5 g protein / kg body weight of the muscle synthesis promoter of Example 1 was compared with the rate of skeletal muscle synthesis in rats after ingesting 0.5 g protein / kg body weight of whey protein. The value was significantly high (FIG. 1).
  • the rate of skeletal muscle synthesis in rats when 2.0 g protein / kg body weight of the muscle synthesis promoter of Example 1 was ingested was the same as that of whey protein having the same protein content. Compared to speed, it was on an upward trend from the equivalent (Fig. 1).
  • the skeletal muscle synthesis rate of rats after ingesting 0.5 g protein / kg body weight of the muscle synthesis promoter of Example 1 was also compared with the skeletal muscle synthesis rate of rats after ingesting 2.0 g protein / kg body weight of whey protein. As a result, there was an upward trend from the equivalent (FIG. 1).
  • the muscle synthesis promoter of the present invention has a higher muscle synthesis promoting effect than whey protein, and it was confirmed that the difference between these effects becomes remarkable particularly when ingested in small amounts.
  • the muscle synthesis promoter of the present invention has been known to have an immediate effect of promoting muscle synthesis, and exerts an equivalent muscle synthesis promoting effect when consumed in a smaller amount than whey protein. Moreover, it has been found that the muscle synthesis promoter of the present invention retains an excellent muscle synthesis promoting action and can reduce the amount of intake even though the hydrolyzate is an active ingredient. From this, it is confirmed that the muscle synthesis promoter of the present invention is advantageous in effectively promoting muscle synthesis while reducing the digestive burden of subjects with reduced visceral functions such as kidney and stomach. It was done.
  • Example 2 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of protease derived from Bacillus (Protease M Amano, Amano Enzyme) was added to the solution, and whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 8 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 2.
  • protease derived from Bacillus Protease M Amano, Amano Enzyme
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 2 was 2.39 mg / g protein, Ala-Leu was 0.64 mg / g protein, Val-Leu was 2.35 mg / g protein, and Lys-Ile was 1.97 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 0.67 mg / g protein, Ile-Asn was 2.73 mg / g protein, Leu-Ala was 1.22 mg / g protein, and Leu-Glu was 1.90 mg / g protein.
  • Example 3 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of protease derived from Aspergillus (Protease N Amano, Amano Enzyme) was added to the solution, and whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 8 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 3.
  • protease derived from Aspergillus Protease N Amano, Amano Enzyme
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 3 was 3.74 mg / g protein, Ala-Leu was 1.98 mg / g protein, Val-Leu was 2.13 mg / g protein, and Lys-Ile was 1.07 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 8.20 mg / g protein, Ile-Asn was 2.40 mg / g protein, Leu-Ala was 1.77 mg / g protein, and Leu-Glu was 1.08 mg / g protein.
  • Example 4 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water.
  • the dissolved whey protein solution is adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of trypsin (Novo) is added to the solution, and after reacting at 37 ° C. for 4 hours, 500 mg of protease derived from Bacillus (protease M Amano, Amano Enzyme) is added.
  • the whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 4 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 4.
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 2 was 3.16 mg / g protein, Ala-Leu was 4.77 mg / g protein, Val-Leu was 5.33 mg / g protein, and Lys-Ile was 4.84 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 1.07 mg / g protein, Ile-Asn was 1.65 mg / g protein, Leu-Ala was 0.83 mg / g protein, and Leu-Glu was 4.82 mg / g protein.
  • Example 5 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of trypsin (Novo) was added to the solution, reacted at 37 ° C. for 4 hours, and then protease derived from the genus Aspergillus (Protease N Amano, Amano Enzyme), 50 The whey protein was hydrolyzed at 4 ° C. for 4 hours. After the protease was deactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 5.
  • trypsin Novo
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 5 is 3.57 mg / g protein, Ala-Leu is 2.04 mg / g protein, Val-Leu is 2.60 mg / g protein, and Lys-Ile is 0.74 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 4.89 mg / g protein, Ile-Asn was 1.61 mg / g protein, Leu-Ala was 1.96 mg / g protein, and Leu-Glu was 0.71 mg / g protein.
  • Example 6 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water.
  • the dissolved whey protein solution is adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of pepsin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is added to the solution, and after reacting at 37 ° C. for 4 hours, a protease derived from Bacillus (protease M Amano, Amano Enzyme) 500 mg was added to the solution and the whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 4 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 6.
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 6 was 1.47 mg / g protein, Ala-Leu was 0.75 mg / g protein, Val-Leu was 4.92 mg / g protein, and Lys-Ile was 0.54 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 2.21 mg / g protein, Ile-Asn was 1.59 mg / g protein, Leu-Ala was 2.80 mg / g protein, and Leu-Glu was 0.62 mg / g protein.
  • Example 7 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution is adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of pepsin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is added to the solution, reacted at 37 ° C. for 4 hours, and then protease derived from the genus Aspergillus (protease N Amano, Amano Enzyme) The whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 4 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 7.
  • pepsin Wipsin derived from the genus Aspergillus
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 7 was 2.86 mg / g protein, Ala-Leu was 2.28 mg / g protein, Val-Leu was 3.90 mg / g protein, and Lys-Ile was 0.81 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 13.37 mg / g protein, Ile-Asn was 2.82 mg / g protein, Leu-Ala was 3.08 mg / g protein, and Leu-Glu was 0.97 mg / g protein.
  • Example 8 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjuster, and 500 mg of flavorzyme (Novo) was added to the solution, and the whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 6 hours. After the protease was deactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 8.
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 8 was 0.62 mg / g protein, Ala-Leu was 0.35 mg / g protein, Val-Leu was 1.58 mg / g protein, and Lys-Ile was 1.54 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 0.20 mg / g protein, Ile-Asn was 1.64 mg / g protein, Leu-Ala was 1.05 mg / g protein, and Leu-Glu was 1.40 mg / g protein.
  • Example 9 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjuster, 500 mg of protease derived from the genus Aspergillus (Ummamizyme, Amano Enzyme) was added to the solution, and whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 6 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 9.
  • protease derived from the genus Aspergillus Ummamizyme, Amano Enzyme
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 3 was 2.78 mg / g protein, Ala-Leu was 1.09 mg / g protein, Val-Leu was 6.25 mg / g protein, and Lys-Ile was 6.45 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 1.85 mg / g protein, Ile-Asn was 4.93 mg / g protein, Leu-Ala was 3.93 mg / g protein, and Leu-Glu was 5.87 mg / g protein.
  • Example 10 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjuster, 500 mg of protease derived from Aspergillus (Protease A Amano, Amano Enzyme) was added to the solution, and whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 6 hours. After heating and deactivating the protease, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 10.
  • protease derived from Aspergillus Protease A Amano, Amano Enzyme
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 8 was 2.17 mg / g protein, Ala-Leu was 0.64 mg / g protein, Val-Leu was 4.23 mg / g protein, and Lys-Ile was 2.72 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 2.22 mg / g protein, Ile-Asn was 3.23 mg / g protein, Leu-Ala was 2.97 mg / g protein, and Leu-Glu was 2.48 mg / g protein.
  • Example 11 50 g of whey protein was dissolved in 1 L of water. The dissolved whey protein solution was adjusted to pH 7 with a pH adjusting agent, 500 mg of protease derived from the genus Aspergillus (protease P Amano, Amano Enzyme) was added to the solution, and whey protein was hydrolyzed at 50 ° C. for 6 hours. After the protease was inactivated by heating, the resulting solution was powdered by freeze-drying and used as the muscle synthesis promoter of Example 11.
  • protease derived from the genus Aspergillus protease derived from the genus Aspergillus
  • the muscle synthesis promoter Ile-Leu of Example 3 was 1.85 mg / g protein, Ala-Leu was 0.66 mg / g protein, Val-Leu was 5.19 mg / g protein, and Lys-Ile was 3.83 mg / g.
  • the g protein, Leu-Leu was 1.74 mg / g protein, Ile-Asn was 3.70 mg / g protein, Leu-Ala was 3.54 mg / g protein, and Leu-Glu was 3.56 mg / g protein.

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Abstract

本発明は、ホエイタンパク質よりも少量の摂取(投与)で同等以上の筋肉合成促進効果を奏する、筋肉合成促進剤に関する。より詳細には、本発明は、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤に関する。

Description

筋肉合成促進剤 関連出願の参照
 本特許出願は、先に出願された日本国特許出願である特願2015-158295(出願日:2015年8月10日)に基づく優先権の主張を伴うものである。この先の特許出願における全開示内容は、引用することにより本願発明の開示の一部とされる。
 本発明は、筋肉合成促進剤に関する。
 近年、健康増進及び/又は運動能力向上を目的として、筋肉合成の促進、筋肉喪失の予防、及び筋肉量の回復促進のために、タンパク質を主成分とする栄養補助剤(サプリメント)を経口摂取して、運動する者(対象)は多い。このような栄養補助剤として、プロテイン粉末があり、その主成分として、牛乳を原料とするホエイタンパク質(乳清タンパク質)が知られている。
 ホエイタンパク質では、BCAA(分岐鎖アミノ酸:バリン、ロイシン、イソロイシン)が多く含まれ、また、経口摂取から消化吸収までの速度(吸収速度)が速いため(時間が短いため)、即効性の筋肉合成促進効果を示し、特に運動時に摂取することによって、筋肉疲労を防ぎながら、筋肉を効率良く増強できることが知られている。一方、カゼインタンパク質では、ホエイタンパク質と比べて、経口摂取から消化吸収までの速度(吸収速度)が遅いため(時間が長いため)、即効的な筋肉合成促進効果を必要とする対象には不向きであるといわれている(特許文献1参照)。そのため、プロテイン粉末には、ホエイタンパク質が主に用いられている。
 すなわち、カゼインタンパク質との比較において、ホエイタンパク質の経口摂取は、即効的に筋肉合成を促進する上で、最も良い形態でもある。さらに、ホエイタンパク質は、ナチュラルチーズの製造過程のうち、原料乳を酸、レンネット、及び加熱などで凝乳した後に排出されるホエイを原料とすることもでき、ホエイを産業廃棄物などとして改めて廃棄することなく、再利用することができることなどから、環境的な面においても、ホエイタンパク質を利用することの意義は大きい。
特表2009-507044号公報
 前記の通り、ホエイタンパク質は、即効性の筋肉合成促進効果を有することが既に知られているが、その効果を奏するには、当然ながら、所定量のホエイタンパク質の摂取を必要とする。このような所定量のホエイタンパク質の摂取は、時として、エネルギーを多量に摂取できない乳幼児や高齢者には、その摂取自体が困難となり、一方、健常な成人であっても、摂取エネルギー及び摂取タンパク質の過多に伴う、肥満を始めとする生活習慣病の発症、肝臓、腎臓等の機能障害誘発の懸念もある。また、年齢を問わず、ホエイタンパク質を摂取すること自体が心理的な負担となる場合もある。特に、運動直後は、筋肉合成を速やかに促進させる必要があるにもかかわらず、運動によるホルモン分泌作用によって食欲が減退するため、ホエイタンパク質の摂取が負担となる場合もある。また、美容・痩身目的で運動する対象は摂取エネルギーをできる限り減らしたい傾向にある。
 このように、ホエイタンパク質は、十分に即効性の筋肉合成促進効果を奏することが知られており、それにはホエイタンパク質の吸収性の速さが寄与していると推察される。ホエイタンパク質の体内への吸収性は他のタンパク質と比較して極めて速いため、ホエイタンパク質よりも少ない摂取(投与)量で同程度の筋肉合成促進効果を奏するものなど存在しないと、これまでは考えられていた。それゆえに、前記のホエイタンパク質の摂取が負担となる場面があることも事実でありながらも、ホエイタンパク質よりも少ない摂取(投与)量で同程度以上の筋肉合成促進効果を奏する、必ずしも多量のタンパク質を摂取する必要のない筋肉合成促進剤は、これまで知れられていない。そこで、このような効果を奏する、新たな筋肉合成促進剤を提供することが課題であった。
 本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分として含んでなる筋肉合成促進剤を見出し、さらに、該筋肉合成促進剤が、ホエイタンパク質に代わる、ホエイタンパク質よりも少ない摂取(投与)量で同程度以上の筋肉合成促進効果を奏する、必ずしも多量のタンパク質を摂取する必要のないタンパク源として使用することができることを見出した。
 より具体的には、本発明者らは今般、ホエイタンパク質自体、体内への吸収が速いため、ホエイタンパク質よりも少ない摂取(投与)量で同程度の筋肉合成促進効果を奏するものは存在しないと、これまでは考えられていたにもかかわらず、ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質自体と比較して、更なる即効的な筋肉合成促進作用があるという現象を予想外にも見出した。体内への吸収の速さという観点を考えると、本発明のホエイタンパク質加水分解物は、ホエイタンパク質と同程度であり、ホエイタンパク質と同等の筋肉合成促進効果を奏することが予想されたが、本発明のホエイタンパク質加水分解物は、従来のホエイタンパク質と比較して、更なる即効的な筋肉合成促進作用があるという現象を予想外にも見出した。上記の現象は驚くべきものであった。本発明は、これらの知見に基づくものである。
 すなわち、本発明は、次の通りとなる。
[1]ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤、
[2]ホエイタンパク質加水分解物が、ジペプチドを含み、前記ジペプチドが、
(1)Ile-Leu、及びLeu-Ala、並びに
(2)Ala-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチドである、[1]に記載の筋肉合成促進剤、
[3]ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素により加水分解することにより得られる、[1]又は[2]に記載の筋肉合成促進剤、
[4]タンパク質分解酵素がバシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、フレーバザイムより選ばれる1種又は2種以上である、[3]に記載の筋肉合成促進剤、
[5]タンパク質分解酵素による加水分解が、20~80℃で2~48時間で行われる、[3]又は[4]に記載の筋肉合成促進剤、
[6]一食あたりの単位包装形態からなり、該単位包装形態中に、ホエイタンパク質加水分解物を一食摂取量として総タンパク質含量換算で1~40g含む、[1]~[5]のいずれか1に記載の筋肉合成促進剤、
[7]運動する対象のための、[1]~[6]のいずれか1に記載の筋肉合成促進剤、
[8]運動が筋肉トレーニングである、[7]に記載の筋肉合成促進剤、
[9]筋肉合成促進用組成物である、[1]~[8]のいずれか一項に記載の剤、
[10]飲食品または医薬品である、[1]~[9]のいずれか一項に記載の剤。
[11]ホエイタンパク質加水分解物の有効量を配合すること含む、筋肉合成促進剤の製造方法。
[12]ホエイタンパク質加水分解物の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含む、筋肉合成促進方法、
[13]ホエイタンパク質加水分解物が、ジペプチドを含み、前記ジペプチドが、
(1)Ile-Leu、及びLeu-Ala、並びに
(2)Ala-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチドである、[12]に記載の筋肉合成促進方法、
[14]ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素により加水分解することにより得られる、[12]又は[13]に記載の筋肉合成促進方法、
[15]タンパク質分解酵素がバシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、フレーバザイムより選ばれる1種又は2種以上である、[14]に記載の筋肉合成促進方法、
[16]タンパク質分解酵素による加水分解を、20~80℃で2~48時間で行う、[14]又は[15]に記載の筋肉合成促進方法、
[17]ホエイタンパク質加水分解物を一食摂取量として総タンパク質含量換算で1~40gで対象に摂取させる、[12]~[15]のいずれか1に記載の筋肉合成促進方法、
[18]対象が運動する対象である、[12]~[17]のいずれか1に記載の筋肉合成促進方法、
[19]運動が筋肉トレーニングである、[18]に記載の筋肉合成促進方法。
[20]筋肉合成促進剤の製造のための、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
[21]筋肉合成促進剤としての、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
[22]筋肉合成促進のための、ホエイタンパク質加水分解物。
 本発明では、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤を提供することができる。本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質に代わる、ホエイタンパク質よりも少ない摂取(投与)量で同程度以上の筋肉合成促進効果を奏する、必ずしも多量のタンパク質を摂取する必要のないタンパク源として使用することができる。本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分として用いることから、ホエイタンパク質よりも対象への消化分解の負担が軽い。よって、本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質よりも少ない摂取量で効果を発揮することと併せて、対象の消化負担を軽減しつつ優れた筋肉合成促進作用を付与しうる点で特に有利である。また、ホエイタンパク質は、通常、ナチュラルチーズの製造過程のうち、原料乳を酸、レンネット、および加熱などで凝乳した後に排出され、廃棄されて産業廃棄物となる。本発明の筋肉合成促進剤に有効成分として含まれるホエイタンパク質の加水分解物は、この産業廃棄物となるホエイを再利用して原料とすることができることから、環境面や経済面からも、本発明の意義は大きい。
本発明の筋肉合成促進剤と、ホエイタンパク質を経口投与した場合の、骨格筋合成速度(FSR(%/day))の相違を示している。
 本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤である。
 「有効成分」とは、筋肉合成促進効果を奏する上で必要とされる成分のことを意味する。一つの形態として、「有効成分」とは、即効的な筋肉合成促進を必要とする対象のための筋肉合成促進効果を奏する上での必要とされる成分のことを意味する。
 「筋肉合成促進」とは、ホエイタンパク質加水分解物を摂取し、栄養素として体内で吸収することにより、筋肉の合成を促進することを意味する。従って、本発明の筋肉合成促進剤は、そのことにおよびそのことに起因する状態に用いられる。例えば、筋肉合成促進の目的には、筋肉増量、筋肉成長助長、筋肉組織修復、筋肉リカバリー、筋肉増強、筋力向上、筋肉合成促進に伴う健康増進効果および運動能力向上が挙げられ、好ましくは、筋肉組織修復、筋力向上、筋肉合成促進に伴う健康増進効果および運動能力向上である。筋肉合成促進には、アミノ酸からの筋肉タンパク質の同化も包含される。「即効的な筋肉合成促進」とは、ホエイタンパク質加水分解物の即時吸収に伴う筋肉の合成を促進することを意味する。本発明の筋肉合成促進は、健常者における筋肉合成促進を包含する。
 「即効的な筋肉合成促進を必要とする対象」とは、筋肉組織を修復し、筋肉成長を助長するために、筋肉タンパク質の合成を促進する必要がある対象を意味し、例えば、健康増進や運動能力向上を目的として、筋肉合成の促進、筋肉喪失の予防、及び筋肉量の回復促進のために、運動する対象を意味する。ここで、筋力に一定の負荷をかけることにより、筋肉の合成が促進される点で、運動は、好ましくは、筋力トレーニング(レジスタンス運動)であり、より好ましくは、長期的な筋力トレーニング、例えば、連続して30分間~5時間を、1週間のうち1日~7日の頻度で継続される筋力トレーニングである。筋力トレーニングには、例えば、ダンベル運動、スクワット運動、マシントレーニングが挙げられる。
 本発明の筋肉合成促進剤を摂取する対象には、例えば、スポーツ選手、スポーツ愛好者(アスリート)、生活習慣病の改善のために運動を必要とする者、高齢者などの健康増進のために運動を必要とする者、乳幼児及び/又は子供などの発育/成長の過程で筋肉を作っていく必要のある者、又は筋肉低下疾患(例えば、サルコペニア)を患い、運動により筋肉合成の促進を必要とする患者が挙げられる。また、この対象には、ヒト以外の動物(馬、牛などの家畜、犬、猫などの愛玩動物、動物園などで飼育されている鑑賞動物など)であってもよい。
 本発明の筋肉合成促進剤を、即効的な筋肉合成促進を必要とする対象に摂取させる(投与する)時期は、運動前であっても運動後であっても運動中であってもよい。ここで、この摂取させる時期は、好ましくは、運動後であり、より好ましくは、運動直後である。そして、運動により生じる骨格筋分解(異化)を抑制し、かつ、アミノ酸からタンパク質への同化を促進できる点で、この摂取させる時期は、好ましくは、運動直後のうち、運動終了後から3時間以内であり、より好ましくは、運動終了後から2時間以内であり、さらに好ましくは、運動終了後から1時間以内であり、特に好ましくは、運動終了後から30分以内である(Levenhagen et al. Am J Physiol Endocrinol Metab (2001), 280, E982-E993参照)。
 ホエイタンパク質と同等以上の即効的な筋肉合成促進作用とは、タンパク質含量が同量のホエイタンパク質を経口摂取(投与)した場合にみられる、筋肉合成促進作用と同等レベル以上の作用を意味する。なお、筋肉合成促進作用には、アミノ酸からの筋肉タンパク質の同化作用も包含される。ここで、筋肉合成促進作用では、例えば、ラットの水泳試験後に、試験物質を投与してから1時間以内において、試験群の上肢三頭筋合成速度(FSR)を測定することによって確認することができる。すなわち、即効的な筋肉合成促進作用があるといわれているタンパク質濃度が同量のホエイタンパク質を経口摂取した対照群のFSRに比べて、本発明の筋肉合成促進剤群のFSRが同程度や同程度以上の場合には、筋肉合成促進作用として有意であると判断できる。
 「タンパク質含量」とは、各種のタンパク質に含まれるアミノ酸の総量を意味する。ここで、タンパク質含量は、ケルダール法やローリー法などの慣用の方法によって測定して算出してもよい。実際に、ケルダール法の場合には、各種のタンパク質に含まれる窒素を測定し、その値に、窒素-タンパク質換算係数(通常 6.25)を乗じて算出することができる。例えば、本発明のホエイタンパク質加水分解物は、ホエイタンパク質を加水分解することにより得られたものであることから、上述のように算出されるホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量は、加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量と理論上は同一である。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物とは、乳清ペプチドともよばれ、原料となるホエイタンパク質の全部又は一部を加水分解していれば、その手段及び/又は方法において、特に制限はない。本発明に用いられるホエイタンパク質は、分離や精製されたホエイタンパク質であってもよく、ホエイタンパク質とカゼインタンパク質とを既に特定のタンパク質量比で含んでいる原料や飲食品(例えば、乳タンパク質混合物など)を用いることもできる。
 分離や精製されたホエイタンパク質には、例えば、ホエイの原液(甘性ホエイ、酸ホエイなど)、その濃縮物、その乾燥物(ホエイ粉など)、その凍結物など、及び、これらの還元溶液などを用いることができる。さらに、脱塩ホエイ、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質精製物(WPI)、α-ラクトアルブミン(α-La)、β-ラクトグロブリン(β-Lg)、免疫グロブリン、ラクトフェリンなど、及び、これらの還元溶液を用いることができる。また、ホエイタンパク質を含んでいる原料や飲食品には、例えば、生乳、殺菌乳(牛乳など)、脱脂乳、成分調整牛乳、加工乳、乳製品(濃縮乳、粉乳、練乳、発酵乳(ヨーグルトなど)、乳酸菌飲料、プロセスチーズ類、アイスクリーム類、クリーム類)、及び乳タンパク質濃縮物(MPC)、並びにそれらの濃縮物、それらの乾燥物、それらの凍結物などを用いることができる。このとき、前記のホエイタンパク質を含んでいる原料や飲食品は、市販品を入手して用いてもよいし、自ら調製して用いてもよい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、上述のようなホエイタンパク質を1回以上加水分解することによって調製することができる。例えば、分離、精製工程中においてホエイタンパク質を少なくとも部分的に加水分解し、このような部分的な加水分解後、さらに別の加水分解を行い調製してもよい。本発明のホエイタンパク質加水分解物は、ホエイタンパク質を公知の方法で加水分解することで調製することができるが、好ましくは、タンパク質分解酵素による加水分解により調製することができる。タンパク質加水分解酵素は、本発明の筋肉合成促進効果が得られる限り、特に限定されるものではなく、日本国特許第5645360号などの記載を参考にして、その種類や反応条件などは任意に設定できる。例えば、バシラス属(Bacillus)又はアスペルギルス属(Aspergillus)に属する微生物由来のタンパク質分解酵素、パパイヤ由来のパパイン、パイナップル由来のブロメライン、キウイ由来のアクチニダインなどの植物由来のタンパク質分解酵素、パンクレアチン、トリプシン、キモトリプシンなどの動物由来のタンパク質分解酵素が挙げられ、これらの1種又は2種以上を組み合わせて使用できる。また、これらのタンパク質分解酵素は、市販品を用いることができる。市販品のタンパク質分解酵素は、例えば、プロテアーゼMアマノ(アマノエンザイム社)、プロテアーゼNアマノ(アマノエンザイム社)、プロテアーゼPアマノ(アマノエンザイム社)、プロテアーゼAアマノ(アマノエンザイム社)、トリプシン(ノボ社)、ペプシン(和光純薬社)、ウマミザイム(アマノエンザイム社)、フレーバザイム(ノボ社)などがあるが、これに制限されない。本発明の好ましい態様によれば、ホエイタンパク質を加水分解するために用いられるタンパク質分解酵素は、バシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、およびフレーバザイムからなる群から選択される一種または二種以上である。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応温度は、好ましくは20~80℃、より好ましくは25~75℃、さらに好ましくは30~70℃、さらに好ましくは35~65℃、さらに好ましくは40~60℃、特に好ましくは45~55℃である。反応温度が20℃以上であれば、タンパク質分解酵素により、ホエイタンパク質を効率よく加水分解でき、好ましい。また、反応温度が80℃以下であれば、タンパク質分解酵素の変性による失活が抑制され、好ましい。
 なお、本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応温度は、使用するタンパク質加水分解酵素の至適温度を鑑み、1段階、又は2段階以上の反応温度を設定することができる。2段階以上の反応温度を設定する場合には、その順番は任意である。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応時間は、好ましくは2~48時間、より好ましくは2~36時間、さらに好ましくは2~24時間、さらに好ましくは2~18時間、さらに好ましくは2~14時間、さらに好ましくは4~12時間、さらに好ましくは6~10時間、特に好ましくは7~9時間である。反応時間が2時間以上であれば、タンパク質分解酵素により、ホエイタンパク質を多く加水分解でき、好ましい。また、反応時間が48時間以下であれば、ホエイタンパク質を効率よく加水分解でき、好ましい。
 なお、本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応温度を2段階以上で設定する場合には、前記の反応時間において、任意に2段階以上の反応温度を設定することができる。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、タンパク質加水分解酵素の添加量は、本発明の筋肉合成促進効果が奏されれば、特に制限はないが、タンパク質100gに対して、好ましくは0.5~10g、より好ましくは0.7~5g、さらに好ましくは0.8~4g、特に好ましくは1~2gである。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応pHは、使用するタンパク質加水分解酵素の至適pH近傍であれば、好ましい。例えば、バシラス属由来のタンパク質分解酵素及びアスペルギルス属由来のタンパク質分解酵素を併用する場合には、好ましくはpH5~9、より好ましくはpH5.5~8.5、さらに好ましくはpH6~8、特に好ましくはpH6.5~7.5である。
 なお、本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応pHは、使用するタンパク質加水分解酵素の至適pHを鑑み、1段階、又は2段階以上の反応pHを設定することができる。2段階以上の反応pHを設定する場合には、その順番は任意である。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドを含むことを指標とすることもできる。ここでいう、特定のジペプチドとは、好ましくは、Ile-Leu、Leu-Ala、Ala-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valであり、これらの群から選択される少なくとも1種のジペプチドを含むものをいう。ここで、Ileはイソロイシン、Leuはロイシン、Alaはアラニン、Valはバリン、Lysはリジン、Asnはアスパラギン、Gluはグルタミン酸をそれぞれ表す。上記ジペプチドは、LC/MSにより測定することができ、具体的には、後述する試験例1に記載の方法で測定できる。
 前記の特定のジペプチドにおいて、さらに好ましくは以下の(1)と(2)を満たす特定のジペプチドを含むものをいう。
(1)Ile-Leu、及びLeu-Ala、並びに
(2)Ala-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチド。
 すなわち、(1)のIle-Leu、及びLeu-Alaはそれぞれ、本発明のホエイタンパク質加水分解物に含有されていることが特に好ましく、(2)のAla-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valの中でも最低1種のジペプチドが、本発明のホエイタンパク質加水分解物に含有されていることが特に好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドIle-Leuを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり0.5mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~10mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~8mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~6mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~4mgである。ジペプチドIle-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり0.5mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドIle-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり10mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドLeu-Alaを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり0.5mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~10mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~8mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~6mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~4mgである。ジペプチドLeu-Alaの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり0.5mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドLeu-Alaの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり10mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドAla-Leuを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり0.2mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~10mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~8mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~6mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~5mgである。ジペプチドAla-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり0.2mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドAla-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり10mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドVal-Leuを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり1mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり1~15mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり1~12mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり1~10mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり1~8mgである。ジペプチドVal-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり1mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドVal-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり15mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドLys-Ileを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり0.2mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~15mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~12mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~10mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~8mgである。ジペプチドLys-Ileの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり0.2mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドLys-Ileの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり15mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドLeu-Leuを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり0.2mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~25mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~20mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~18mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり0.2~16mgである。ジペプチドLeu-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり0.2mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドLeu-Leuの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり25mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドIle-Asnを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり1mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり1~10mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり1~8mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり1~6mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり1~5mgである。ジペプチドIle-Asnの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり1mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドIle-Asnの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり10mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、分解の指標として、特定のジペプチドLeu-Gluを含むことを指標とする場合には、その含量は、好ましくはホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量(加水分解前のホエイタンパク質のタンパク質含量)1gあたり0.5mg以上、より好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~12mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~10mg、さらに好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~8mg、特に好ましくはタンパク質含量1gあたり0.5~6mgである。ジペプチドLeu-Gluの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり0.5mg以上であれば、本発明の筋肉合成促進効果がより奏され、好ましい。また、ジペプチドLeu-Gluの含量がホエイタンパク質加水分解物のタンパク質含量1gあたり12mg以下であれば、効率よく本発明のホエイタンパク質加水分解物を調製でき、好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、調製直後は、液状であるものの、その保存性を高めるために、凍結保存、乾燥(噴霧乾燥、凍結乾燥)、濃縮、加熱殺菌(プレート式加熱殺菌、チューブ式加熱殺菌、バッチ式加熱殺菌、通電加熱殺菌、マイクロウエーブ波による加熱殺菌、レトルト加熱などの間接加熱殺菌、スチームインジェクション、スチームインフュージョンなどの直接加熱殺菌)、非加熱殺菌(光照射殺菌、放射線照射殺菌、高電圧パルス殺菌)をすることができる。中でも、取扱いの容易さから、乾燥(噴霧乾燥、凍結乾燥)させた形態が好ましい。
 本発明のホエイタンパク質加水分解物は、本発明の効果である、ホエイタンパク質自体と比較して、筋肉合成促進効果を高められれば、その他の食品原料及び/又は食品添加物原料を添加することができる。例えば、本発明の筋肉合成促進剤の嗜好性の付与を目的に、甘味料(砂糖類、液糖類、果糖、麦芽糖、三温糖など)、糖アルコール(エリスリトールなど)、高感度甘味料(ステビア、アスパルテーム、スクラロース、アセスルファムカリウム)、酸味料、増粘多糖類、香料、果汁、乳化剤、野菜汁などを添加することができる。また、本発明の筋肉合成促進剤の追加の機能付与を目的に、ミネラル類(カルシウム、鉄、マンガン、マグネシウム、亜鉛など)、ビタミン類、機能性素材、プロバイオティクス乳酸菌などを添加して、本発明の筋肉合成促進剤とすることができる。
 本発明の筋肉合成促進剤は、市場での提供を目的として、容器入りの粉末の形態にすることができる。容器は、紙、袋、箱、缶、ビンなど、公知のものを使用することができる。容器の容量は、特に制限はなく、例えば、1~5000g、2~4000g、3~3000g、4~2000g、4~1000g、4~500g、4~250g、4~200g、4~100g、4~50g、4~30gである。中でも、ファミリーサイズ(複数服用)の場合には、例えば、300~5000g、300~4000g、300~3000g、300~2000g、300~1500g、300~1400g、300~1300g、300~1200g、300~1100gであり、パーソナルサイズ(個別服用)の場合、1~500g、2~250g、3~200g、4~100g、4~50g、4~40g、4~30g、5~30g、10~30g、15~30gである。
 本発明の筋肉合成促進剤は、市場での提供を目的として、容器入り飲料(粉末を分散溶解した飲料)の形態にすることができる。容器は、紙容器、ソフトバック、ペットボトル、缶、ビンなど、公知のものを使用することができる。容器の容量は、特に制限はなく、例えば、1~5000g、2~4000g、3~3000g、4~2000g、5~1000g、6~800g、7~1300g、80~1200g、90~1100gである。中でも、ファミリーサイズ(複数飲用)の場合には、例えば、300~5000g、300~4000g、300~3000g、300~2000g、300~1500g、300~1400g、300~1300g、300~1200g、300~1100gであり、パーソナルサイズ(個別飲用)の場合、10~500g、20~500g、30~500g、40~500g、50~500g、60~500g、70~500g、80~500g、90~500gである。
 本発明の一つの実施態様によれば、例えば、本発明の筋肉合成促進剤では、ホエイタンパク質分解物のタンパク質含量が一食あたり、好ましくは、0.05g以上/kg体重となるように摂取(投与)され、より好ましくは0.05~0.67g/kg体重であり、さらに好ましくは0.05~0.33g/kg体重、より好ましくは0.07~0.33g/kg体重、さらに好ましくは0.07~0.25g/kg体重、特に好ましくは0.08~0.25g/kg体重となるように摂取(投与)される。ここで、対象の代表的な体重は、約60kgと見積もっている。
 「一食」とは、即効的な筋肉合成促進を必要とする状態の一回ごとを意味し、例えば、本発明の筋肉合成促進剤では、一食で一息に(一度に)摂取せず、数度に分けて摂取してもよい。本発明の筋肉合成促進剤を即効的な筋肉合成促進を必要とする対象に摂取させる(投与する)時期は、数度に分けて摂取する場合には、血流中のアミノ酸濃度を即効的に高められる点で、好ましくは、運動終了後から2時間以内であり、より好ましくは、運動終了後から1時間以内であり、さらに好ましくは、運動終了後から30分以内であり、特に好ましくは、運動終了後から5分以内である。
 本発明の筋肉合成促進剤を即効的な筋肉合成促進を必要とする対象に摂取させる(投与する)方法は、経口摂取(経口投与)、経腸投与、胃ろうなどから、その対象及び用途により、適宜選択することができるが、好ましくは経口摂取である。
 本発明の別の実施態様によれば、例えば、本発明の筋肉合成促進剤は、一食あたりの単位包装形態からなり、該単位中に、前記ホエイタンパク質分解物を、一食摂取量として総タンパク質含量換算で1g以上に調整したものが望ましく、具体的には、1~40g、好ましくは2~20g、より好ましくは3~20g、さらに好ましくは4~15g、特に好ましくは5~15gとなるように調製してなる。ここで、「一食あたりの単位包装形態」からなるとは、一食あたりの摂取量があらかじめ定められた形態のものであり、例えば、特定量を経口摂取し得る飲食品として、一般食品のみならず、飲料(ドリンク剤など)、健康補助食品、保健機能食品、サプリメントなどの形態を意味する。「一食あたりの単位包装形態」では、例えば、液状の飲料、ゲル状・糊状・ペースト状のゼリー、粉末状・顆粒状・カプセル状・ブロック状の固体状の食品などの場合には、金属缶、ガラスビン(ボトルなど)、プラスチック容器(ペットボトルなど)、パック、パウチ、フィルム容器、紙箱などの包装容器で特定量(用量)を規定できる形態、あるいは、一食あたりの摂取量(用法、用量)を包装容器やホームページなどに表示することで特定量を規定できる形態が挙げられる。本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分として用いるため、ホエイタンパク質と比較して、加熱によるゲル化が少なく、従って、飲料、ゼリー等の製造工程において適した物性を維持することができる。また、本発明の筋肉合成促進剤は、少量の摂取であっても本発明の効果を奏するため、一口サイズのブロック状や、一飲みで摂取できるミニ缶飲料など、どのような形態であっても、摂取・嚥下が容易であり、子供や高齢者にとっての利便性を向上することができる。
 本発明の好ましい態様によれば、本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質加水分解物が、Ile-Leu、Leu-Ala、Ala-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valからなるジペプチドを含む。本発明のより好ましい態様によれば、本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質加水分解物が、Ile-Leu、Leu-Ala、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valからなるジペプチドを含む。
 本発明の一つの実施態様によれば、例えば、本発明の筋肉合成促進剤では、筋肉合成促進剤を含んでなる組成物を提供することができる。すなわち、本発明の筋肉合成促進剤では、そのまま単独で使用することができるが、筋肉合成促進機能が発揮される限りにおいて、飲食品や医薬品などの種々の経口摂取用(経口投与用)の組成物に対して、原料(素材)や添加剤などとして含ませることもでき、即効的な筋肉合成促進効果を有する組成物を得ることができる。よって、本発明の一つの実施態様によれば、本発明の筋肉合成促進剤を含んでなる組成物が提供される。
 また、上述の通り、本発明の筋肉合成促進剤はそれ自体、複数の成分が配合された組成物の形態で提供することができる。したがって、本発明の一つの実施態様によれば、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分として含む、筋肉合成促進用組成物が提供される。これら組成物の形態は、筋肉合成促進効果を奏する限り特に限定されるものではないが、例えば、固体状(粉末状、顆粒状、カプセル状、ブロック状など)、液状、ゲル状、糊状、ペースト状などの形態をとることができ、好ましくは粉末状である。組成物には、飲食品組成物および医薬組成物が包含される。
 本発明の好ましい態様によれば、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分として含む、筋肉合成促進用飲食品が提供される。本発明において、飲食品の形態は、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されない。具体的には、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類;清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類;パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品;飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子などの菓子類;ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料;加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類;乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品;農産缶詰、ジャム・マーマレード類、シリアルなどの農産加工品;冷凍食品などが挙げられる。好ましくは、飲食品は、乳製品であり、より好ましくは乳飲料、乳酸菌飲料である。
 また、飲食品には、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、乳幼児用調整粉乳、妊産婦もしくは授乳婦用粉乳、または筋肉合成促進のために用いられる物である旨の表示を付した飲食品のような分類のものも包含される。
 本発明の別の態様によれば、ホエイタンパク質加水分解物を有効成分として含む、筋肉合成促進用医薬品が提供される。医薬品とは、製剤化のために許容されうる添加剤を併用して、常法に従い、経口製剤または非経口製剤として調製したものであってもよい。経口製剤の場合には、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤などの固形製剤、溶液、懸濁液、乳濁液などの液状製剤の形態をとることができる。また、非経口製剤の場合には、注射剤や座剤の形態をとることができる。簡易性の点からは、経口製剤であることが好ましい。製剤化のために許容されうる添加剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、緩衝剤、酸化防止剤、pH調整剤などが挙げられる。本発明の医薬品は、筋肉合成促進を必要とする疾患、具体的には、筋肉損傷疾患(例えば、サルコペニア)の治療または予防に用いることができる。
 また、上述の通り、本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質加水分解物の有効量と、任意の経口上許容可能な添加物とを配合することにより提供することができる。したがって、本発明の別の態様によれば、ホエイタンパク質加水分解物の有効量を配合することを含む、筋肉合成促進剤の製造方法が提供される。本発明の筋肉合成促進剤の製造方法では、ホエイタンパク質加水分解物を配合して得られる混合物を加熱、均一化する工程をさらに含んでいてもよく、本発明にはかかる態様も包含される。
 また、本発明のさらに別の実施態様によれば、ホエイタンパク質加水分解物の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含む、筋肉合成促進方法が提供される。本発明の別の好ましい態様によれば、上記方法は、ヒトに対する医療行為を除くものとされる。ここで、「ヒトに対する医療行為」とは、医師等の処方を必要として、ヒトに対して医薬品を摂取させる(投与する)行為などを意味する。また、上記実施態様において、対象は好ましくは健常者である。
 また、本発明の筋肉合成促進方法は、対象における筋肉損傷に関連した疾患または状態の改善に用いてもよい。従って、本発明の筋肉合成促進方法は、好ましくは筋肉損傷に関連した疾患または状態の治療方法であり、より好ましくはサルコペアの改善方法である。ここで、「改善」とは、確立された疾患または状態を治療することだけでなく、将来確立される可能性のある疾患または状態を予防することをも含む。なお、本発明の筋肉合成促進方法は、本願明細書における筋肉合成促進剤の記載に従って実施することができる。
 本発明の一つの好ましい実施態様によれば、本発明の筋肉合成促進方法において、ホエイタンパク質分解物のタンパク質含量が一食あたり、好ましくは、0.05g以上/kg体重となるように摂取(投与)され、より好ましくは0.05~0.67g/kg体重であり、さらに好ましくは0.05~0.33g/kg体重、より好ましくは0.07~0.33g/kg体重、さらに好ましくは0.07~0.25g/kg体重、特に好ましくは0.08~0.25g/kg体重となるように摂取(投与)させることができる。ここで、対象の代表的な体重は、約60kgと見積もっている。本発明では、摂取用量が少なくてもホエイタンパク質を摂取する場合と比較して十分な効果が得られるため、子供や高齢者に対する負担を減らすことができる。
 本発明の一つの好ましい実施態様によれば、本発明の筋肉合成促進方法において、前記ホエイタンパク質加水分解物をタンパク質含量で一食あたり1g以上となるように摂取させることができ、具体的には、1~40g、好ましくは2~20g、より好ましくは3~20g、さらに好ましくは4~15g、特に好ましくは5~15gとなるように摂取させることができる。
 本発明の一つ実施態様によれば、筋肉合成促進のための、ホエイタンパク質加水分解物の使用が提供される。本発明の一つの好ましい実施態様によれば、本発明の使用は、非治療的使用とされる。
 本発明の一つの実施形態によれば、筋肉合成促進用飲食品または医薬品の製造のための、ホエイタンパク質加水分解物の使用が提供される。
 本発明の一つの実施態様によれば、筋肉合成を促進するための、ホエイタンパク質加水分解物が提供される。
 ところで、本発明の筋肉合成促進剤によれば、加水分解していないホエイタンパク質自体と比較して、筋肉合成促進効果をより高めることができる。例えば、後述する動物実験による実施例(試験例1)において、一定量のタンパク質含量の摂取(投与)では、本発明の筋肉合成促進剤は、加水分解していないホエイタンパク質と比較して、高い効果を有することが示された。また、後述する動物実験による実施例(試験例1)において、本発明の筋肉合成促進剤を0.5gタンパク質/kg体重で摂取(投与)した場合、ホエイタンパク質を2.0gタンパク質/kg体重で摂取(投与)した場合と比較して、その筋肉合成促進剤としての効果は同等より上昇傾向であった。
 すなわち、本発明の筋肉合成促進剤は、従来、即効性のある筋肉合成促進効果で公知であったホエイタンパク質と比較して、一定量のタンパク質含量を摂取(投与)すれば、強い筋肉合成促進効果が期待できる。また、本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質の摂取と同等の効果を得る場合には、摂取すべきタンパク質含量を低減することができ、少量で効果が期待できるため、より摂取(投与)しやすくなる。さらに、有効成分であるホエイタンパク質加水分解物は既に部分的に分解されているため、消化負担も軽減することができる。これまでは、ホエイタンパク質自体の摂取において、時として、エネルギーを多量に摂取できない乳幼児や高齢者には、その摂取自体が困難となり、また、健常な成人であっても、摂取エネルギー及び摂取タンパク質の過多に伴う、肥満を始めとする生活習慣病の発症、肝臓、腎臓等の機能障害誘発の懸念もある。さらに、年齢を問わず、ホエイタンパク質を摂取すること自体が心理的な負担となる場合もある。特に、運動直後は、筋肉合成を速やかに促進させる必要があるにもかかわらず、運動によるホルモン分泌作用によって食欲が減退するため、ホエイタンパク質の摂取が負担となることも多く、また美容・痩身目的で運動する対象は、摂取エネルギーを減らしたい傾向にある。一方、本発明のホエイタンパク質加水分解物は、ホエイタンパク質よりも少ない摂取量で筋肉合成促進効果を奏することができるため、前記の課題も解決できる。
 以下では、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は、これにより限定されない。なお、後述する「mg/gタンパク質」および「gタンパク質/kg体重」における「タンパク質」は、タンパク質含量を意味する。
[実施例1]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mg、及びアスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)500mgを組み合わせて溶液に加え、50℃で8時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例1の筋肉合成促進剤とした。
[試験例1]
 実施例1の筋肉合成促進剤の粉末を0.1%トリフルオロ酢酸水溶液に1000倍(体積比)に希釈し、以下の条件によりLC/MSを用い、Ile-Leu、Ile-Trp、Ala-Leu、Val-Leu、Asp-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Ala、及びLeu-Gluを定量(単位はmg/gタンパク質)した。
 なお、LC/MSの条件は以下の通りである。
分析条件
カラム:Develosil ODS-HG-3(15mm×2mm)
移動相:A液:0.05% TFA水溶液
    B液:0.05% TFAアセトニトリル溶液
 移動相の通液開始から0minに3体積%B液、40min後に20体積%B液(いずれもA液及びB液の合計に対する割合)となるように、グラジエントをかけた。
カラム温度:35℃
流速:0.2mL/min
MS条件
Ionization:API-ES positive
SIM ion:m/z 245
Drying gas:10L/min at 350℃
Nebulizer:25psig
Fragmentor:30V
EM gain:1
 実施例1の筋肉合成促進剤のIle-Leuは3.82mg/gタンパク質、Ala-Leuは1.53mg/gタンパク質、Val-Leuは4.70mg/gタンパク質、Lys-Ileは4.82mg/gタンパク質、Leu-Leuは1.56mg/gタンパク質、Ile-Asnは3.98mg/gタンパク質、Leu-Alaは0.75mg/gタンパク質、Leu-Gluは4.35mg/gタンパク質であった。
[試験例2]
 以下の通り、実施例1の筋肉合成促進剤による筋肉合成促進効果を検証した。
(1)ラットの水泳試験
 実験動物には、初期体重が130~170gのSD系雄性ラット(日本クレア株式会社より入手した)を用いた。
 固形飼料(オリエンタル酵母工業株式会社製)を用いて、ラットを3~5日間予備飼育した後、水泳運動に馴化させるために、ラットを30分間の水泳運動(水温34℃)に供した。馴化水泳運動実施日の翌日から翌々日にかけて16時間絶食させた後、ラットを試験群ごとで体重差が生じないように5つに分けた(各試験群8尾ずつ)。その後、ラットを2時間の水泳運動に供した。水泳運動終了直後に、水(すなわち、0gタンパク質/kg体重)又は筋肉合成促進剤2.5重量%又は10重量%の溶液又はホエイタンパク質2.5重量%又は10重量%の溶液を20mL/kg体重(すなわち、0.5gタンパク質/kg体重又は2.0gタンパク質/kg体重)でラットに経口摂取させた。経口摂取から45分後に、重水素ラベルフェニルアラニン溶液(重水素ラベルフェニルアラニン225mgを生理食塩水10mLに溶解して調製した)を2.0mL/kg体重でラットに尾静脈投与した。尾静脈投与から15分後に(すなわち経口摂取から60分後に)、イソフルラン麻酔下でラットを解剖した。腹部大静脈より全採血した後に、上肢三頭筋を摘出し、生理食塩水で洗浄後、直ちに液体窒素で凍結した。尾静脈投与の時刻及び上肢三頭筋の凍結保存の時刻は正確に記録した。上肢三頭筋は分析時まで-80℃に保存した。
(2)骨格筋合成速度(FSR)の測定
 先行文献(A. Kanda et al., Br J Nutr, Sep. 28, 981-987, 2013)の記載に基づいて、摘出、保存した上肢三頭筋についての骨格筋合成速度(FSR)を測定した。具体的には、骨格筋細胞のタンパク質に同化して存在する、あるいは骨格筋細胞中に遊離状態で存在する、フェニルアラニン(Phe)及び重水素ラベルフェニルアラニン(Phe(Ring-D5))量を、LC/MS/MS(Waters社製)を用いてそれぞれ定量した。この測定条件は以下の通りである。すなわち、装置:LC/MS/MS(Waters社製)、カラム:ACQUITY UPLC BEH C18(Waters社製)、移動相:0.05%TFA水/0.05%TFA含有アセトニトリル、注入量 3μL、流速 0.3mL/min、UV 215nmである。
 ここで、以下の式により、骨格筋合成速度(FSR)を算出した。
 FSR(%/day)=(Eb×100)/(Ea×t)
   Ea:エンリッチメント(骨格筋細胞中に遊離状態で存在)
   Eb:エンリッチメント(骨格筋細胞のタンパク質に同化して存在)
   t:尾静脈投与から、上肢三頭筋を凍結保存するまでの時間(単位:日)
   エンリッチメント=Phe(Ring-D5)/(Phe+Phe(Ring-D5))
 得られた数値から各試験群の平均値±標準誤差を求めた。統計処理はまず水摂取群(0gタンパク質/kg体重)を対照群とし、全群でDunnett法による多重比較検定を行った。また同一のタンパク質摂取量において、実施例1の筋肉合成促進剤を摂取した群と、ホエイタンパクを質摂取した群との間でStudentのt検定を行った。いずれの場合も有意水準は5%未満とした(p<0.05)。この結果を図1に示す。
 ホエイタンパク質は、2.0gタンパク質/kg体重の摂取でのみ、水摂取の場合(0gタンパク質/kg体重)と比較してラットの骨格筋合成速度を有意に上昇させたのに対し、実施例1の筋肉合成促進剤は、0.5gタンパク質/kg体重、2.0gタンパク質/kg体重のいずれの摂取においても、水摂取の場合と比較してラットの骨格筋合成速度を有意に上昇させた(図1)。さらに、実施例1の筋肉合成促進剤の0.5gタンパク質/kg体重の摂取におけるラットの骨格筋合成速度は、ホエイタンパク質の0.5gタンパク質/kg体重の摂取におけるラットの骨格筋合成速度と比較して、有意に高値を示した(図1)。
 実施例1の筋肉合成促進剤の2.0gタンパク質/kg体重の摂取におけるラットの骨格筋合成速度は、同一タンパク質含量であるホエイタンパク質の2.0gタンパク質/kg体重の摂取におけるラットの骨格筋合成速度と比較して、同等より上昇傾向であった(図1)。また、実施例1の筋肉合成促進剤の0.5gタンパク質/kg体重の摂取におけるラットの骨格筋合成速度も、ホエイタンパク質の2.0gタンパク質/kg体重の摂取におけるラットの骨格筋合成速度と比較して、同等より上昇傾向であった(図1)。図1に示される通り、本発明の筋肉合成促進剤は、ホエイタンパク質と比較して筋肉合成促進効果が高く、特に少量摂取では、これらの効果の差が顕著になることが確認された。
 以上より、本発明の筋肉合成促進剤は、これまで、即効性の筋肉合成促進効果があると知られていた、ホエイタンパク質より少量の摂取で同等の筋肉合成促進効果を発揮することを見出した。また、本発明の筋肉合成促進剤は、加水分解物を有効成分とするにもかかわらず優れた筋肉合成促進作用を保持し、摂取量も低減可能なことを見出した。このことから、本発明の筋肉合成促進剤は、腎臓、胃をはじめとする内臓機能の低下した対象等の消化負担を軽減しつつ筋肉合成促進を効果的に行う上で有利であることが確認された。
[実施例2]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で8時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例2の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例2の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例2の筋肉合成促進剤のIle-Leuは2.39mg/gタンパク質、Ala-Leuは0.64mg/gタンパク質、Val-Leuは2.35mg/gタンパク質、Lys-Ileは1.97mg/gタンパク質、Leu-Leuは0.67mg/gタンパク質、Ile-Asnは2.73mg/gタンパク質、Leu-Alaは1.22mg/gタンパク質、Leu-Gluは1.90mg/gタンパク質であった。
[実施例3]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で8時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例3の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例3の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例3の筋肉合成促進剤のIle-Leuは3.74mg/gタンパク質、Ala-Leuは1.98mg/gタンパク質、Val-Leuは2.13mg/gタンパク質、Lys-Ileは1.07mg/gタンパク質、Leu-Leuは8.20mg/gタンパク質、Ile-Asnは2.40mg/gタンパク質、Leu-Alaは1.77mg/gタンパク質、Leu-Gluは1.08mg/gタンパク質であった。
[実施例4]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、トリプシン(ノボ社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例4の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例4の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例2の筋肉合成促進剤のIle-Leuは3.16mg/gタンパク質、Ala-Leuは4.77mg/gタンパク質、Val-Leuは5.33mg/gタンパク質、Lys-Ileは4.84mg/gタンパク質、Leu-Leuは1.07mg/gタンパク質、Ile-Asnは1.65mg/gタンパク質、Leu-Alaは0.83mg/gタンパク質、Leu-Gluは4.82mg/gタンパク質であった。
[実施例5]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、トリプシン(ノボ社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例5の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例5の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例5の筋肉合成促進剤のIle-Leuは3.57mg/gタンパク質、Ala-Leuは2.04mg/gタンパク質、Val-Leuは2.60mg/gタンパク質、Lys-Ileは0.74mg/gタンパク質、Leu-Leuは4.89mg/gタンパク質、Ile-Asnは1.61mg/gタンパク質、Leu-Alaは1.96mg/gタンパク質、Leu-Gluは0.71mg/gタンパク質であった。
[実施例6]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、ペプシン(和光純薬社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例6の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例6の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例6の筋肉合成促進剤のIle-Leuは1.47mg/gタンパク質、Ala-Leuは0.75mg/gタンパク質、Val-Leuは4.92mg/gタンパク質、Lys-Ileは0.54mg/gタンパク質、Leu-Leuは2.21mg/gタンパク質、Ile-Asnは1.59mg/gタンパク質、Leu-Alaは2.80mg/gタンパク質、Leu-Gluは0.62mg/gタンパク質であった。
[実施例7]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、ペプシン(和光純薬社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例7の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例7の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例7の筋肉合成促進剤のIle-Leuは2.86mg/gタンパク質、Ala-Leuは2.28mg/gタンパク質、Val-Leuは3.90mg/gタンパク質、Lys-Ileは0.81mg/gタンパク質、Leu-Leuは13.37mg/gタンパク質、Ile-Asnは2.82mg/gタンパク質、Leu-Alaは3.08mg/gタンパク質、Leu-Gluは0.97mg/gタンパク質であった。
[実施例8]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、フレーバザイム(ノボ社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例8の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例8の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例8の筋肉合成促進剤のIle-Leuは0.62mg/gタンパク質、Ala-Leuは0.35mg/gタンパク質、Val-Leuは1.58mg/gタンパク質、Lys-Ileは1.54mg/gタンパク質、Leu-Leuは0.20mg/gタンパク質、Ile-Asnは1.64mg/gタンパク質、Leu-Alaは1.05mg/gタンパク質、Leu-Gluは1.40mg/gタンパク質であった。
[実施例9]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(ウマミザイム、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例9の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例9の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例3の筋肉合成促進剤のIle-Leuは2.78mg/gタンパク質、Ala-Leuは1.09mg/gタンパク質、Val-Leuは6.25mg/gタンパク質、Lys-Ileは6.45mg/gタンパク質、Leu-Leuは1.85mg/gタンパク質、Ile-Asnは4.93mg/gタンパク質、Leu-Alaは3.93mg/gタンパク質、Leu-Gluは5.87mg/gタンパク質であった。
[実施例10]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼAアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例10の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例10の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例8の筋肉合成促進剤のIle-Leuは2.17mg/gタンパク質、Ala-Leuは0.64mg/gタンパク質、Val-Leuは4.23mg/gタンパク質、Lys-Ileは2.72mg/gタンパク質、Leu-Leuは2.22mg/gタンパク質、Ile-Asnは3.23mg/gタンパク質、Leu-Alaは2.97mg/gタンパク質、Leu-Gluは2.48mg/gタンパク質であった。
[実施例11]
 ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼPアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例11の筋肉合成促進剤とした。
 試験例1に基づき、実施例11の筋肉合成促進剤のジペプチド含量を測定した。実施例3の筋肉合成促進剤のIle-Leuは1.85mg/gタンパク質、Ala-Leuは0.66mg/gタンパク質、Val-Leuは5.19mg/gタンパク質、Lys-Ileは3.83mg/gタンパク質、Leu-Leuは1.74mg/gタンパク質、Ile-Asnは3.70mg/gタンパク質、Leu-Alaは3.54mg/gタンパク質、Leu-Gluは3.56mg/gタンパク質であった。

Claims (15)

  1.  ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤。
  2.  ホエイタンパク質加水分解物が、ジペプチドを含み、前記ジペプチドが、
    (1)Ile-Leu、及びLeu-Ala、並びに
    (2)Ala-Leu、Val-Leu、Lys-Ile、Leu-Leu、Ile-Asn、Leu-Glu、Leu-Val、及びIle-Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチドである、請求項1に記載の筋肉合成促進剤。
  3.  ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素により加水分解することにより得られる、請求項1又は請求項2に記載の筋肉合成促進剤。
  4.  タンパク質分解酵素がバシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、フレーバザイムより選ばれる1種又は2種以上である、請求項3に記載の筋肉合成促進剤。
  5.  タンパク質分解酵素による加水分解が、20~80℃で2~48時間で行われる、請求項3又は請求項4に記載の筋肉合成促進剤。
  6.  一食あたりの単位包装形態からなり、該単位包装形態中に、ホエイタンパク質加水分解物を一食摂取量として総タンパク質含量換算で1~40g含む、請求項1~請求項5のいずれか1項に記載の筋肉合成促進剤。
  7.  運動する対象のための、請求項1~請求項6のいずれか1項に記載の筋肉合成促進剤。
  8.  運動が筋肉トレーニングである、請求項7に記載の筋肉合成促進剤。
  9.  筋肉合成促進用組成物である、請求項1~請求項8のいずれか1項に記載の剤。
  10.  飲食品または医薬品である、請求項1~請求項9のいずれか1項に記載の剤。
  11.  ホエイタンパク質加水分解物の有効量を配合すること含む、筋肉合成促進剤の製造方法。
  12.  ホエイタンパク質加水分解物の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含む、筋肉合成促進方法。
  13.  筋肉合成促進剤の製造のための、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
  14.  筋肉合成促進剤としての、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
  15.  筋肉合成促進のための、ホエイタンパク質加水分解物。
     
     
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