JPWO2017026429A1 - 筋肉合成促進剤 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤、
[2]ホエイタンパク質加水分解物が、ジペプチドを含み、前記ジペプチドが、
(1)Ile−Leu、及びLeu−Ala、並びに
(2)Ala−Leu、Val−Leu、Lys−Ile、Leu−Leu、Ile−Asn、Leu−Glu、Leu−Val、及びIle−Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチドである、[1]に記載の筋肉合成促進剤、
[3]ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素により加水分解することにより得られる、[1]又は[2]に記載の筋肉合成促進剤、
[4]タンパク質分解酵素がバシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、フレーバザイムより選ばれる1種又は2種以上である、[3]に記載の筋肉合成促進剤、
[5]タンパク質分解酵素による加水分解が、20〜80℃で2〜48時間で行われる、[3]又は[4]に記載の筋肉合成促進剤、
[6]一食あたりの単位包装形態からなり、該単位包装形態中に、ホエイタンパク質加水分解物を一食摂取量として総タンパク質含量換算で1〜40g含む、[1]〜[5]のいずれか1に記載の筋肉合成促進剤、
[7]運動する対象のための、[1]〜[6]のいずれか1に記載の筋肉合成促進剤、
[8]運動が筋肉トレーニングである、[7]に記載の筋肉合成促進剤、
[9]筋肉合成促進用組成物である、[1]〜[8]のいずれか一項に記載の剤、
[10]飲食品または医薬品である、[1]〜[9]のいずれか一項に記載の剤。
[11]ホエイタンパク質加水分解物の有効量を配合すること含む、筋肉合成促進剤の製造方法。
[12]ホエイタンパク質加水分解物の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含む、筋肉合成促進方法、
[13]ホエイタンパク質加水分解物が、ジペプチドを含み、前記ジペプチドが、
(1)Ile−Leu、及びLeu−Ala、並びに
(2)Ala−Leu、Val−Leu、Lys−Ile、Leu−Leu、Ile−Asn、Leu−Glu、Leu−Val、及びIle−Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチドである、[12]に記載の筋肉合成促進方法、
[14]ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素により加水分解することにより得られる、[12]又は[13]に記載の筋肉合成促進方法、
[15]タンパク質分解酵素がバシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、フレーバザイムより選ばれる1種又は2種以上である、[14]に記載の筋肉合成促進方法、
[16]タンパク質分解酵素による加水分解を、20〜80℃で2〜48時間で行う、[14]又は[15]に記載の筋肉合成促進方法、
[17]ホエイタンパク質加水分解物を一食摂取量として総タンパク質含量換算で1〜40gで対象に摂取させる、[12]〜[15]のいずれか1に記載の筋肉合成促進方法、
[18]対象が運動する対象である、[12]〜[17]のいずれか1に記載の筋肉合成促進方法、
[19]運動が筋肉トレーニングである、[18]に記載の筋肉合成促進方法。
[20]筋肉合成促進剤の製造のための、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
[21]筋肉合成促進剤としての、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
[22]筋肉合成促進のための、ホエイタンパク質加水分解物。
なお、本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応温度は、使用するタンパク質加水分解酵素の至適温度を鑑み、1段階、又は2段階以上の反応温度を設定することができる。2段階以上の反応温度を設定する場合には、その順番は任意である。
なお、本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応温度を2段階以上で設定する場合には、前記の反応時間において、任意に2段階以上の反応温度を設定することができる。
なお、本発明のホエイタンパク質加水分解物を得るために、タンパク質加水分解酵素によりホエイタンパク質を加水分解する場合の、反応pHは、使用するタンパク質加水分解酵素の至適pHを鑑み、1段階、又は2段階以上の反応pHを設定することができる。2段階以上の反応pHを設定する場合には、その順番は任意である。
(1)Ile−Leu、及びLeu−Ala、並びに
(2)Ala−Leu、Val−Leu、Lys−Ile、Leu−Leu、Ile−Asn、Leu−Glu、Leu−Val、及びIle−Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチド。
すなわち、(1)のIle−Leu、及びLeu−Alaはそれぞれ、本発明のホエイタンパク質加水分解物に含有されていることが特に好ましく、(2)のAla−Leu、Val−Leu、Lys−Ile、Leu−Leu、Ile−Asn、Leu−Glu、Leu−Val、及びIle−Valの中でも最低1種のジペプチドが、本発明のホエイタンパク質加水分解物に含有されていることが特に好ましい。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mg、及びアスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)500mgを組み合わせて溶液に加え、50℃で8時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例1の筋肉合成促進剤とした。
実施例1の筋肉合成促進剤の粉末を0.1%トリフルオロ酢酸水溶液に1000倍(体積比)に希釈し、以下の条件によりLC/MSを用い、Ile−Leu、Ile−Trp、Ala−Leu、Val−Leu、Asp−Leu、Lys−Ile、Leu−Leu、Ile−Asn、Leu−Ala、及びLeu−Gluを定量(単位はmg/gタンパク質)した。
なお、LC/MSの条件は以下の通りである。
分析条件
カラム:Develosil ODS−HG−3(15mm×2mm)
移動相:A液:0.05% TFA水溶液
B液:0.05% TFAアセトニトリル溶液
移動相の通液開始から0minに3体積%B液、40min後に20体積%B液(いずれもA液及びB液の合計に対する割合)となるように、グラジエントをかけた。
カラム温度:35℃
流速:0.2mL/min
MS条件
Ionization:API−ES positive
SIM ion:m/z 245
Drying gas:10L/min at 350℃
Nebulizer:25psig
Fragmentor:30V
EM gain:1
以下の通り、実施例1の筋肉合成促進剤による筋肉合成促進効果を検証した。
(1)ラットの水泳試験
実験動物には、初期体重が130〜170gのSD系雄性ラット(日本クレア株式会社より入手した)を用いた。
固形飼料(オリエンタル酵母工業株式会社製)を用いて、ラットを3〜5日間予備飼育した後、水泳運動に馴化させるために、ラットを30分間の水泳運動(水温34℃)に供した。馴化水泳運動実施日の翌日から翌々日にかけて16時間絶食させた後、ラットを試験群ごとで体重差が生じないように5つに分けた(各試験群8尾ずつ)。その後、ラットを2時間の水泳運動に供した。水泳運動終了直後に、水(すなわち、0gタンパク質/kg体重)又は筋肉合成促進剤2.5重量%又は10重量%の溶液又はホエイタンパク質2.5重量%又は10重量%の溶液を20mL/kg体重(すなわち、0.5gタンパク質/kg体重又は2.0gタンパク質/kg体重)でラットに経口摂取させた。経口摂取から45分後に、重水素ラベルフェニルアラニン溶液(重水素ラベルフェニルアラニン225mgを生理食塩水10mLに溶解して調製した)を2.0mL/kg体重でラットに尾静脈投与した。尾静脈投与から15分後に(すなわち経口摂取から60分後に)、イソフルラン麻酔下でラットを解剖した。腹部大静脈より全採血した後に、上肢三頭筋を摘出し、生理食塩水で洗浄後、直ちに液体窒素で凍結した。尾静脈投与の時刻及び上肢三頭筋の凍結保存の時刻は正確に記録した。上肢三頭筋は分析時まで−80℃に保存した。
先行文献(A. Kanda et al., Br J Nutr, Sep. 28, 981-987, 2013)の記載に基づいて、摘出、保存した上肢三頭筋についての骨格筋合成速度(FSR)を測定した。具体的には、骨格筋細胞のタンパク質に同化して存在する、あるいは骨格筋細胞中に遊離状態で存在する、フェニルアラニン(Phe)及び重水素ラベルフェニルアラニン(Phe(Ring−D5))量を、LC/MS/MS(Waters社製)を用いてそれぞれ定量した。この測定条件は以下の通りである。すなわち、装置:LC/MS/MS(Waters社製)、カラム:ACQUITY UPLC BEH C18(Waters社製)、移動相:0.05%TFA水/0.05%TFA含有アセトニトリル、注入量 3μL、流速 0.3mL/min、UV 215nmである。
FSR(%/day)=(Eb×100)/(Ea×t)
Ea:エンリッチメント(骨格筋細胞中に遊離状態で存在)
Eb:エンリッチメント(骨格筋細胞のタンパク質に同化して存在)
t:尾静脈投与から、上肢三頭筋を凍結保存するまでの時間(単位:日)
エンリッチメント=Phe(Ring−D5)/(Phe+Phe(Ring−D5))
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で8時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例2の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で8時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例3の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、トリプシン(ノボ社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例4の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、トリプシン(ノボ社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例5の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、ペプシン(和光純薬社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、バシラス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼMアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例6の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、ペプシン(和光純薬社)500mgを溶液に加え、37℃で4時間反応後、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼNアマノ、アマノエンザイム社)、50℃で4時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例7の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、フレーバザイム(ノボ社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例8の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(ウマミザイム、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例9の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼAアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例10の筋肉合成促進剤とした。
ホエイタンパク質50gを水1Lに溶解させた。溶解したホエイタンパク質溶液をpH調整剤でpH7に調整し、アスペルギルス属由来のプロテアーゼ(プロテアーゼPアマノ、アマノエンザイム社)500mgを溶液に加え、50℃で6時間、ホエイタンパク質を加水分解した。プロテアーゼを加熱失活後、得られた溶液を凍結乾燥により粉末にしたものを実施例11の筋肉合成促進剤とした。
Claims (15)
- ホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする筋肉合成促進剤。
- ホエイタンパク質加水分解物が、ジペプチドを含み、前記ジペプチドが、
(1)Ile−Leu、及びLeu−Ala、並びに
(2)Ala−Leu、Val−Leu、Lys−Ile、Leu−Leu、Ile−Asn、Leu−Glu、Leu−Val、及びIle−Valよりなる群から選択される少なくとも1種のジペプチドである、請求項1に記載の筋肉合成促進剤。 - ホエイタンパク質加水分解物が、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素により加水分解することにより得られる、請求項1又は請求項2に記載の筋肉合成促進剤。
- タンパク質分解酵素がバシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン、フレーバザイムより選ばれる1種又は2種以上である、請求項3に記載の筋肉合成促進剤。
- タンパク質分解酵素による加水分解が、20〜80℃で2〜48時間で行われる、請求項3又は請求項4に記載の筋肉合成促進剤。
- 一食あたりの単位包装形態からなり、該単位包装形態中に、ホエイタンパク質加水分解物を一食摂取量として総タンパク質含量換算で1〜40g含む、請求項1〜請求項5のいずれか1項に記載の筋肉合成促進剤。
- 運動する対象のための、請求項1〜請求項6のいずれか1項に記載の筋肉合成促進剤。
- 運動が筋肉トレーニングである、請求項7に記載の筋肉合成促進剤。
- 筋肉合成促進用組成物である、請求項1〜請求項8のいずれか1項に記載の剤。
- 飲食品または医薬品である、請求項1〜請求項9のいずれか1項に記載の剤。
- ホエイタンパク質加水分解物の有効量を配合すること含む、筋肉合成促進剤の製造方法。
- ホエイタンパク質加水分解物の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含む、筋肉合成促進方法。
- 筋肉合成促進剤の製造のための、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
- 筋肉合成促進剤としての、ホエイタンパク質加水分解物の使用。
- 筋肉合成促進のための、ホエイタンパク質加水分解物。
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