WO2016140485A1 - 백신효과 증진 또는 개선용 조성물 - Google Patents

백신효과 증진 또는 개선용 조성물 Download PDF

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WO2016140485A1
WO2016140485A1 PCT/KR2016/002015 KR2016002015W WO2016140485A1 WO 2016140485 A1 WO2016140485 A1 WO 2016140485A1 KR 2016002015 W KR2016002015 W KR 2016002015W WO 2016140485 A1 WO2016140485 A1 WO 2016140485A1
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cells
compound
improving
acid
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PCT/KR2016/002015
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조시영
김완기
박찬웅
이지해
서대방
신송석
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(주)아모레퍼시픽
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system

Definitions

  • compositions that enhance or improve the effectiveness of a vaccine against infectious diseases.
  • Antibiotics are the first line of treatment for infectious patients, but they are problematic because of drug resistance and side effects.
  • the best way to combat infectious disease is to apply a vaccine, but the disadvantage is that antibodies are not always induced against all pathogens.
  • adjuvant agents are used to enhance specific immune responses against vaccine antigens.
  • Alum an adjuvant currently used in humans, has been reported to increase antigen stability and induce release of cytokines, but it is impossible to lyophilize or freeze vaccines, is not effective against all antigens, and promotes humoral immune responses only. There is a drawback that the use is limited by the application.
  • Naive T cells are T cells that have undergone differentiation and maturation but have not yet encountered antigen at the periphery. Upon encountering an unrecognized MHC: antigen complex presented on antigen-transmitting cells, antigens are recognized through the T-Cell Receptor signaling pathway and activated into effective T cells to initiate adaptive immunity. In aging, na ⁇ ve T cells are becoming less frequent and undergo aging (Martinez et al., AGE, 2011; 33, 197).
  • regulatory T cells do not promote an immune response, but rather inhibit it by maintaining homeostasis of immunity and blocking autoimmune responses. As aging increases, the frequency of regulatory T cells is closely related to the weakening of the immune response to the vaccine.
  • T cell function increases susceptibility to infection
  • ARS naive T cells
  • regulatory T cells have a positive effect of inhibiting the immune response and inducing immune tolerance to allogeneic antigens when transplanting their antigens or organs, but also reducing the vaccine effect.
  • These regulatory T cells increase with age, which may induce immune tolerance and reduce the vaccine's effectiveness in older people (Weyand et al., Gerontolgy 2013; 60, 130).
  • Patent Document 1 Republic of Korea Patent Publication No. 10-2013-0046115
  • a vaccine effect enhancing or improving composition having the effect of inducing the balance of immune cells imbalanced by aging to enhance the effect of the vaccine.
  • a food and pharmaceutical composition having an effect of preventing or improving an infectious disease by inducing the immune balance of the elderly.
  • One aspect of the present invention provides a composition for enhancing or improving a vaccine effect comprising a compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently unbranched or branched, C 1 to C 18 alkyl group, C 1 to C 18 alkenyl group , Alkynyl group of C 1 to C 18 or a cyclic alkyl group of C 3 to C 6 .
  • Another aspect of the present invention provides a composition for enhancing or improving a vaccine effect, wherein the compound is (+)-syringaresinol.
  • compositions for enhancing or improving a vaccine effect wherein the composition is a food composition or a pharmaceutical composition.
  • composition according to an aspect of the present invention includes the compound of Formula 1, specifically, (+)-syringa resinol as an active ingredient, thereby increasing the number of T cells reduced by aging.
  • composition according to one aspect of the present invention has the effect of increasing the proportion of na ⁇ ve T cells.
  • composition according to one aspect of the present invention has the effect of reducing the number of regulatory T cells.
  • composition according to another aspect of the present invention can enhance or improve the effect of the vaccine against infectious diseases, and in particular, when applied to the elderly, the effect of improving or improving the vaccine effect is excellent.
  • Figure 1 shows total T cells isolated from spleens of 6-week-old young rats, 52-week-old rats, 30% diet-limited mice, (+)-syringalecinol 10, and mice administered 50 mg / kg, respectively. It is a graph showing the frequency of.
  • FIG. 2 shows helper T cells isolated from spleens of 6-week-old young rats, 52-week-old rats, 30% diet-limited mice, (+)-syringalecinol 10, and mice administered 50 mg / kg, respectively. It is a graph showing the frequency of naive T cells of (CD4 + T cells) and killer T cells (CD8 + T cells), respectively.
  • FIG. 3 shows regulatory T cells isolated from spleens of 6-week-old young rats, 52-week old rats, 30% diet-limited mice, (+)-syringalecinol 10, and mice administered 50 mg / kg, respectively.
  • Figure 4 shows the young mice at 6 weeks old, 52 weeks old rats, 30% dietary restriction rats, (+)-sirringarecinol 10, rats administered 50 mg / kg, respectively, after administration of the influenza vaccine, It is a graph showing the amount of IgG measured in the blood.
  • the present invention relates to a composition for enhancing or improving a vaccine effect comprising a compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof as an active ingredient,
  • R 1 , R 2 , and R 3 And R 4 is independently an unbranched or branched C 1 to C 18 alkyl group, C 1 to C 18 alkenyl group, C 1 to C 18 alkynyl group (alkynyl group) or a C 3 to C 6 cyclic alkyl group (cyclic alkyl group).
  • a method for enhancing or improving a vaccine effect of a subject comprising an effective amount of the compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food-pharmaceutically acceptable salt thereof. It provides a method for enhancing or improving the vaccine effect, comprising the step of administering to.
  • a compound of formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof in the preparation of a composition for enhancing or improving the vaccine effect.
  • a compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food-pharmaceutically acceptable salt thereof is provided for enhancing or improving a vaccine effect.
  • the present invention provides a composition for regulating T cells comprising the compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a method for regulating T cells in a subject comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof It provides a method for T cell regulation, comprising the step of.
  • a compound of formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof in the preparation of a composition for modulating T cells.
  • a compound of Formula 1, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food-pharmaceutically acceptable salt thereof is provided for regulating T cells of a subject.
  • “derivative” means any compound that is changed from another substitutable position to another substituent.
  • the type of the substituent is not restricted, for example, C 1- 10, which may be substituted each independently hydroxyl, phenoxy, thienyl, furyl, pyridyl, cyclohexyl, alkyl alcohol, alkyl di-alcohol or an optionally substituted phenyl Bicyclic hydrocarbon groups; 5- C 6 cyclic hydrocarbon group which may be substituted with hydroxyl, hydroxymethyl, methyl or amino; Or a sugar moiety, but is not limited thereto.
  • sugar moiety refers to a group upon removal of one hydrogen atom from a polysaccharide molecule, and thus may refer to a moiety derived from a monosaccharide or oligosaccharide, for example.
  • pharmaceutically acceptable means the approval of a government or equivalent regulatory body to use in animals, more specifically in humans, by avoiding significant toxic effects when used in conventional medicinal dosages. It can be received or approved, or listed in a pharmacopoeia or recognized as another general pharmacopeia.
  • salts means salts according to one aspect of the invention that are pharmaceutically acceptable and have the desired pharmacological activity of the parent compound.
  • the salt is formed from (1) an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, or the like; Or acetic acid, propionic acid, hexanoic acid, cyclopentanepropionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, lactic acid, malonic acid, succinic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, 3- (4-hydroxybenzoyl) Benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, 1,2-ethane-disulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, 4-chlorobenzenes
  • the compound may include (+)-syringaresinol, a derivative thereof, or a pharmaceutically or food acceptable salt thereof.
  • a composition for regulating T cells may include (+)-syringaresinol, a derivative thereof, or a pharmaceutically or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • (+)-syringaresinol is a lignan compound having a chemical structure such as Chemical Formula 2, which is obtained through chemical synthesis, or at least one of flaxseed, yellowish white, orange, sesame and ginseng fruit. Can be extracted from.
  • the flaxseed, yellowish white, ogapi and sesame seeds include all the parts of the plant, for example, the leaves, stems, roots, berries or seeds of each plant, ginseng fruit includes ginseng fruit peel or flesh.
  • extract is a broad concept including all materials obtained by extracting the components of natural products, regardless of the extraction method, extraction solvent, extracted components or the form of the extract.
  • One aspect of the present invention provides a vaccine effect enhancing composition comprising (+)-syringa resinol as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a composition for regulating T cells, which comprises (+)-syringaresinol as an active ingredient.
  • (+)-Syringareresinol enhances the effect of the vaccine against infectious diseases by inhibiting the increase in the frequency of noncontact cells that increase with aging, and is particularly effective in older people.
  • the compound of formula (1) or (+)-syringalesinol comprises at least one of flaxseed, yellowish white, organo, sesame and ginseng fruit in a group consisting of water, an organic solvent and a mixture of water and an organic solvent Can be obtained by extraction with one or more selected.
  • the organic solvent includes one or more selected from the group consisting of alcohol, acetone, ether, ethyl acetate, diethyl ether, ethyl methyl ketone and chloroform, but is not limited thereto.
  • the alcohol includes a C 1 ⁇ C 5 lower alcohol, C 1 ⁇ C 5 lower alcohol is one selected from the group consisting of methanol, ethanol, isopropyl alcohol, n-propyl alcohol, n-butanol and isobutanol Including but not limited to the above.
  • the compound of formula 1 or (+)-syringalesinol may be included in the composition as an extract of flaxseed, yellowish white, organo, sesame and ginseng fruit, among which the vaccine effect against infectious diseases Effective fractions that enhance may be included.
  • the method for separating and purifying (+)-syringalesinol from ginseng fruit may comprise the following steps. Preparing an alcohol extract of ginseng fruit pulp; Eluting the prepared alcohol extract with a solvent comprising at least one of water and alcohol to obtain a fraction; And performing chromatography, in particular thin film chromatography (TLC), using an organic solvent as the developing solvent for the obtained fraction.
  • the organic solvent includes at least one selected from the group consisting of alcohol, acetone, ether, ethyl acetate, diethyl ether, ethyl methyl ketone, and chloroform, and the alcohol includes C 1 to C 5 alcohols.
  • the composition according to one aspect of the present invention may include as an active ingredient (+)-syringa resinol purified as described above.
  • a composition according to one aspect of the invention is 0.001% to 80% by weight, specifically 0.005% to 60% by weight, more specifically 0.01% to 30% by weight of the compound of formula 1 based on the total weight of the composition or ( +)-Syringalecinol.
  • the compound of Formula 1 or (+)-shiringaresinol is less than 0.001% by weight, it is not possible to obtain a sufficient effect of improving the vaccine against infectious diseases, and when it exceeds 80% by weight, safety and formulation stability may be lowered.
  • the compound of Formula 1 or (+)-cyringa resinol may increase the number of total T cells, increase the ratio of na ⁇ ve T cells to total T cells, and Provided is a composition for enhancing or improving vaccine effect that enhances or improves the vaccine effect through one or more of a number reduction.
  • One aspect of the present invention provides a food composition comprising a compound of formula 1 or (+)-syringaresinol as an active ingredient.
  • the food composition may enhance the effect of the vaccine and include a favorite food or health food composition.
  • the formulation of the food composition is not particularly limited, but may be, for example, formulated into a liquid such as tablets, granules, powders, drinks, caramels, gels, bars, and the like.
  • the food composition of each formulation may be suitably selected by a person skilled in the art according to the formulation or purpose of use in addition to the active ingredient, and may be synergistic when applied simultaneously with other raw materials.
  • the daily dosage of the active ingredient is within the level of those skilled in the art, the daily dosage of which is for example from 0.1 mg / kg / day to 5000 mg / kg / day, more specifically from 50 mg / kg / day to 500 mg / kg / day, but is not limited thereto, and may vary depending on various factors such as age, health condition, and complications of the subject to be administered.
  • One aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition comprising the compound of formula 1 or (+)-syringaresinol as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition can enhance the vaccine effect against various infectious diseases.
  • the pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention may be administered orally, parenteral, rectal, topical, transdermal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous.
  • Formulations for oral administration may be tablets, pills, soft and hard capsules, granules, powders, granules, solutions, emulsions or pellets, but are not limited thereto. It is not. These formulations may contain, in addition to the active ingredient, diluents (e.g. lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose or glycine), glidants (e.g. silica, talc, stearic acid or polyethylene glycol), or binders (e.g. magnesium aluminum Silicates, starch pastes, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose or polyvinylpyrrolidine). It may optionally contain pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, or sweeteners.
  • the tablets can be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods.
  • Formulations for parenteral administration may be, but are not limited to, injections, drops, lotions, ointments, gels, creams, suspensions, emulsions, suppositories, patches or sprays.
  • the active ingredient of the pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention will vary depending on the age, sex, weight, pathology and severity of the subject to be administered, the route of administration or the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of one skilled in the art and its daily dosage may be, for example, from 0.1 mg / kg / day to 500 mg / kg / day, more specifically from 5 mg / kg / day to 100 mg / kg. May be, but is not limited to.
  • mice purchased 28-week-old C57BL / 6 male mice from a central laboratory animal, were acclimated for two months in an animal laboratory environment of Pacific pharmaceuticals, and were tested from 36 weeks of age.
  • the sterilized feeder D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ, USA
  • Humidity was induced to 50 ⁇ 10% in °C and lighting was automatically adjusted day and night at 12 hour intervals Animal care was handled according to the pharmaceutical IACUC (IACUC14-014).
  • control group normal diet + saline administration
  • dietary restriction group (30% dietary restriction compared to the normal diet group
  • siringaresinol low concentration group (normal diet +10 mg / kg)
  • Shilinga Resinol high concentration group (normal diet + 50mg / kg) was divided.
  • the control group used 6-week-old young rats and 52-week old rats.
  • Siringaresinol was dissolved in Methylcellulos and 1 g of the composition was administered orally once a day for 10 weeks.
  • CD4 + T-cell subsets Naive (N, CD62L + CD44-), central memory (CM, CD62L + CD44 +), activated / effector memory (EM, CD62L +/- CD44 +)
  • CD8 + T-cell subsets Naive (N, CD62L + CD44-), central memory (CM, CD62L + CD44 +), activated / effector memory (EM, CD62L +/- CD44 +)
  • B-cell subsets follicular B cells (FOB, CD21 ++ CD23 ++), marginal zone B cells (MZB, CD21 + CD23-), transitional 1 B cells (T1, CD21 +/- CD23-), T2 (CD21 + CD23 + )
  • mice were 28 weeks old C57BL / 6 male mice purchased from a central laboratory animal, and then adapted for two months in a pathogen-free facility animal room environment in the Pacific. During the breeding period, the sterilized feeder (D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ, USA) and water were fed freely in a sterile fiter-top cage. Humidity was induced to 50 ⁇ 10% in °C and lighting was automatically adjusted day and night at 12 hour intervals Animal care was handled according to the pharmaceutical IACUC (IACUC14-014).
  • control group normal diet + saline administration
  • dietary restriction group (30% dietary restriction compared to the normal diet group
  • siringaresinol low concentration group (normal diet +10 mg / kg)
  • Shilinga Resinol high concentration group (normal diet + 50mg / kg) was divided.
  • the control group used 6-week-old young rats and 52-week old rats.
  • Siringaresinol was dissolved in Methylcellulos and 1 g of the composition was administered orally once a day for 10 weeks.
  • mice prepared in (2) were dosed intravenously with UV-inactivated influenza virus A / PR / 8/34 (H1N1 subtype) (Professor at Yonsei University, Log 24 HA titer) twice every three weeks. Blood was isolated 11 days after the second immunization.
  • the 96 well plate was coated with whole influenza A virus at 4 ° C. for 16 hours and then blocked with 5% skin milk for 2 hours.
  • 50 ⁇ l / well of serum diluted to 1/100 was added to the wells, followed by 1 hour incubation in 37 ° C.-5% CO 2 incubator, followed by washing three times with 0.05% TBS / Tween 20 solution and TBS solution.
  • polyIg's antibody was added thereto, followed by 1 hour incubation at room temperature, followed by washing with 0.05% TBS / Tween 20 solution and TBS solution.
  • OPD o-phenylendiamine
  • (+)-shiringaresinol showed high antibody production against influenza virus.
  • the high concentration of siringarecinol group normal diet + 50mg / kg
  • the control group old rats
  • (+)-syringaresinol can change the immune cell changes by aging similar to the young state, thereby enhancing or improving the vaccine effect against infectious diseases.
  • Vitamin B12 ......... 0.2 ⁇ g
  • Nicotinic Acid Amide ... 1.7 mg
  • composition ratio of the said vitamin and mineral mixture was mixed and consisted with the component suitable for a healthy food in a preferable Example, the compounding ratio may be arbitrarily modified.
  • the above ingredients are mixed according to a conventional method for preparing a health beverage, then stirred and heated at 85 ° C. for about 1 hour, and then the resulting solution is filtered and sterilized.
  • (+)-syringarecinol 50 mg of soybean extract, 100 mg of glucose, 50 mg of red ginseng extract, 96 mg of starch and 4 mg of magnesium stearate and 40 mg of 30% ethanol were added to form granules. Dry at 60 ° C. and tablet into tablets using a tablet press.
  • (+)-syringarecinol 100 mg of (+)-syringarecinol, 50 mg of soy extract, 100 mg of glucose and 600 mg of starch were mixed and 100 mg of 30% ethanol was added to form granules, followed by drying at 60 ° C. to form granules. Fill the gun.
  • a patch was prepared according to the composition shown in Table 1 below.
  • the method of manufacturing a patch is as follows. The mixture was neutralized using polyacrylic acid as a neutralizing agent, and the agar polymer was heated to 100 ° C. to boil and stirred. After cooling to 70 [deg.] C., an oil component, a softening agent, was added and (+)-syringaresinol was blended at 50 [deg.] C. or lower. The raw material blended by the extrusion method was sent to the coater and loaded into the nonwoven fabric. When the contents were loaded, the resultant was dried while passing through the chamber, and the formed nonwoven hydrogel was aged at 40 ° C. for 2-3 days and then cut to prepare a hydrogel patch.

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Abstract

본 발명은 화학식 1의 화합물, 구체적으로 (+)-시링가레시놀을 유효성분으로 포함하여 노화에 따른 T 세포의 종류와 수를 조절하여 백신효과를 증진 또는 개선시키는 조성물을 개시한다. 구체적으로 노화에 의해 감소된 T세포의 수를 증가시키는 효과가 있다.

Description

백신효과 증진 또는 개선용 조성물
본 명세서에는 감염성질환에 대한 백신효과를 증진 또는 개선시키는 조성물이 개시된다.
감염성 환자들의 치료에는 최우선적으로 항생제가 적용되지만 약물내성과 부작용 때문에 문제가 되고 있다. 이런 관점에서 감염성 질환에 대처하기 위한 최선의 방법은 백신을 적용하는 것이지만, 그 단점은 모든 병원균에 대해서 항체가 항상 유도되는 것은 아니라는 것이다. 이러한 이유 때문에 백신항원에 대한 특이적 면역반응을 강화하기 위하여 면역보조제를 사용하게 된다. 현재 사람에게 사용되는 면역보조제인 Alum은 항원의 안정성을 증가시키고 사이토카인의 방출을 유도한다는 보고가 있었으나, 백신의 동결건조나 동결을 불가능하게 하고 모든 항원에 대해 효과적이지 못하며 체액성 면역반응만을 촉진시킴에 따라 용도가 제한되어 있다는 단점이 있다.
최근에 개발되는 백신들은 미생물 전체를 사용하는 사균백신이나 생균백신보다는 균의 일부를 정제하여 사용하거나 특정유전자에 대한 재조합단백질 또는 펩타이드 형태로 사용하는 경향이 있으며, 이러한 백신은 일반적으로 면역원성이 높지 않으므로 항원특이적 항체생성을 증강시키는 효능이 우수한 면역보조제의 필요성이 증가하게 되었다. 특히, 65세 이상 고령층은 면역 체계 변화로 인해 항체 생성 및 반응이 낮아 일반 독감백신 접종 후에도 예방 효과가 떨어진다. 일반 독감백신이 건강한 성인에게 70~90% 면역 반응을 보이는 것과 달리 65세 이상 고령층은 그 효과가 17~53%에 불과하다. 2013년 초, 미국 질병통제예방센터(CDC)에서 발표한 자료에 의하면 65세 이상 노인의 10명중 7명이 독감 백신을 접종했음에도 불구하고 단 3명만 효과를 봤다는 보고가 있다.
또한, 이탈리아 로마 소재의 보건분야 국제 비영리단체인 `코흐레인 콜레보레이션(CC)' 코머스 제퍼슨 박사 연구팀은 전 세계에서 계절성 독감(인플루엔자) 백신 효과에 관한 연구보고서 75개를 수집-분석한 결과, 65세 이상 노인에 대한 독감 백신 접종이 실제 독감 예방에 효과가 없다는 결과를 보도했다. 때문에 최근 고령층의 감염질환에 대한 백신효과를 높이는 방안이 절실히 요구되고 있다.
노화와 함께 각종 감염질환에 걸릴 확률이 높아지는데, 이는 노화자체와 감염병들이 면역기능을 저하시킴으로써 질병에 대한 방어능력을 약화시키기 때문이다 (Yoshikawa, 1997; Crossley, 1995; 박, 1997).
노화에 따른 전반적인 면역력 약화에 의해 노인들은 감염성 질환에도 쉽게 노출되며 치료 후에도 다시 감염이 되는 경우가 많다. 또한, 전반적인 면역력 약화에도 불구하고 감염 축적에 의해 만성적인 염증 환경이 유도되고, 외부 물질에 의한 항원 변이 등으로 인해 항체 생산이 증가되어 천식과 같은 염증성 질환 또한 고령층에서 유병률이 증가한다. 따라서 고령층의 면역력 저하 원인을 구체적으로 분석하고, 이를 바탕으로 고령층에 특화된 치료법을 개발하려는 노력이 필요하다. 더불어 노인의 면역 조절 부전과 관련된 인자를 발굴하여 면역 조절 부전을 사전에 예측하고, 고위험군인 고령층에서의 염증성 질환 발병을 예방하는 방법론의 정립이 필요하다. 노화가 진행됨에 따라 면역 기능이 쇠퇴하는 면역노화(immunosenescence)가 일어나는데, 면역노화에 따른 변화 중 특히 T 세포의 수, 아형 비율 및 표현형의 변화 (Miller RA. Science 1996;273,70) 및 기능의 변화 (Won DI et al., Korean J Lab Med 2003; 23, 205; Ben-Yehunda et al., Cancer Invest 1992; 10, 525) 가 중요하다.
미경험 T세포(Naive T cell)는 분화와 성숙을 거쳤지만 아직 말초에서 항원을 만나지 못한 T 세포이다. 항원전달세포에 제시된 아직 인지되지 않은 MHC:항원 복합체를 만나면 T세포 항원 수용체 신호 전달 과정(T-Cell Receptor signaling pathway)을 통해 항원을 인식하고 효과 T세포로 활성화되어 적응 면역이 시작된다. 노화가 되면 미접촉 T 세포는 점점 빈도수가 감소하여 면역노화가 진행된다 (Martinez et al., AGE, 2011; 33, 197).
조절 T세포는 면역 반응을 촉진하는 것이 아니라 오히려 억제함으로써 면역의 항상성을 유지하며 자가면역반응 등을 차단한다. 노화가 되면서, 조절 T 세포의 빈도수의 증가는 백신에 대한 면역반응 약화와 매우 밀접한 관계를 가진다.
많은 연구보고가 T 세포 기능 저하가 감염에 대한 감수성을 높인다는 생각을 지지한다 (Ponnappan et al., ARS;2011, 14). 즉 노화가 진행됨에 따라 전체 T세포의 수가 감소하고, 또한 미경험 T 세포 (naive T cell)의 비중이 감소함으로써, 새로운 감염에 대한 면역능력이 감소된다. 특히, 조절 T 세포 (regulatory T cell)는 면역반응을 억제하는 기능을 하여, 자신의 항원이나 장기이식시 동종항원에 면역관용을 유도하는 긍정적인 효과가 있으나, 또한, 백신효과를 떨어뜨리는 효과도 가지고 있다. 이 조절 T 세포는 나이가 들어감에 따라 증가하여, 면역관용을 유도, 노인의 백신효과 감소에 영향을 줄 수 있다 (Weyand et al., Gerontolgy 2013;60, 130).
선행기술문헌
(특허문헌 1) 대한민국 공개특허 제 10-2013-0046115호
본 명세서의 일 측면에서는, 노화에 의해 불균형이 된 면역세포의 균형을 유도하여 백신의 효과를 증진시키는 효과를 가지는 백신효과증진 또는 개선 조성물을 제공하고자 한다.
또한 본 명세서의 다른 일 측면에서는, 고령층의 면역 균형을 유도하여 감염성 질환에 대한 예방 또는 개선 효과를 가지는 식품 및 약학 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은 하기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용 가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2016002015-appb-I000001
상기 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 직쇄(unbranched) 또는 분지(branched)된, C1 내지 C18의 알킬기(alkyl group), C1 내지 C18의 알케닐기(alkenyl group), C1내지 C18의 알키닐기(alkynyl group) 또는 C3내지 C6의 사이클릭 알킬기(cyclic alkyl group)이다.
본 발명의 다른 일측면은 상기 화합물은 (+)-시링가레시놀(syringaresinol)인 것을 특징으로 하는 백신 효과 증진 또는 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 조성물은 식품 조성물 또는 약학조성물인 것을 특징으로 하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 화학식 1의 화합물, 구체적으로 (+)-시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하여, 노화에 의해 감소된 T 세포의 수를 늘리는 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 미경험 T 세포의 비율을 증가시키는 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 조절 T 세포의 수를 감소시키는 효과가 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 감염성 질환에 대한 백신의 효과를 증진 또는 개선시킬 수 있으며, 특히 고령층에 적용 시 백신효과 증진 또는 개선하는 효과가 뛰어나다.
도 1은 6주령의 어린 쥐, 52주령의 늙은 쥐, 30% 식이를 제한한 쥐, (+)-시링가레시놀 10, 50 mg/kg을 각각 투여한 쥐의 비장에서 분리한 전체 T 세포의 빈도를 나타낸 그래프이다.
도 2는 6주령의 어린 쥐, 52주령의 늙은 쥐, 30% 식이를 제한한 쥐, (+)-시링가레시놀 10, 50 mg/kg을 각각 투여한 쥐의 비장에서 분리한 도움 T 세포 (CD4+ T cell) 와 킬러 T 세포 (CD8+ T cell) 의 각각 미경험 세포 (naive T cell)의 빈도를 나타낸 그래프이다.
도 3은 6주령의 어린 쥐, 52주령의 늙은 쥐, 30% 식이를 제한한 쥐, (+)-시링가레시놀 10, 50 mg/kg을 각각 투여한 쥐의 비장에서 분리한 조절 T 세포의 전체 도움 T 세포에 대한 빈도를 나타낸 그래프이다.
도 4은 6주령의 어린 쥐, 52주령의 늙은 쥐, 30% 식이를 제한한 쥐, (+)-시링가레시놀 10, 50 mg/kg을 각각 투여한 쥐에게 인플루엔자 백신을 투여한 후, 혈액내에서 측정한 IgG 양을 나타낸 그래프이다.
본 발명은 일 관점에서, 하기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물에 관한 것으로,
Figure PCTKR2016002015-appb-C000001
상기 R1,R2,R3 및 R4는 독립적으로 직쇄(unbranched) 또는 분지(branched)된, C1내지 C18의 알킬기(alkyl group), C1내지 C18의 알케닐기(alkenyl group), C1내지 C18의 알키닐기(alkynyl group) 또는 C3내지 C6의 사이클릭 알킬기(cyclic alkyl group)이다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 대상의 백신효과 증진 또는 개선을 위한 방법으로, 상기 방법은 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 백신효과 증진 또는 개선을 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 백신효과 증진 또는 개선시키기 위한 조성물을 제조하는데 있어서의 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 백신효과 증진 또는 개선 시키기 위한 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염을 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 관점에서, 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 T 세포 조절용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 대상의 T 세포 조절을 위한 방법으로, 상기 방법은 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는, T 세포 조절을 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 있어서, T 세포를 조절시키기 위한 조성물을 제조하는데 있어서의 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 대상의 T 세포 조절시키기 위한 상기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체, 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 그의 염을 제공한다.
본 명세서에서 "유도체"는 화합물들의 치환 가능한 위치에서 다른 치환기로 변경되는 모든 화합물을 의미한다. 이러한 치환기의 종류에는 제한이 없으며, 예컨대 각각 독립적으로 히드록실, 페녹시, 티에닐, 푸릴, 피리딜, 시클로헥실, 알킬알콜, 알킬디알콜 또는 임의 치환된 페닐로 치환될 수 있는 C1- 10비사이클릭 탄화수소기; 히드록실, 히드록시메틸, 메틸 또는 아미노로 치환될 수 있는 C5- 6사이클릭 탄화수소기; 또는 당 잔기를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "당 잔기"라는 용어는 다당류 분자로부터 1개의 수소 원자의 제거시의 기를 의미하며, 따라서 예를 들어 단당류 또는 올리고당으로부터 유래된 잔기를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능"이란 통상의 의약적 복용량(medicinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써, 동물, 더 구체적으로는 인간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인을 받을 수 있거나 승인 받거나, 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전으로 인지되는 것을 의미한다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일측면에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다. 아울러, 본 명세서에 따른 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물, 용매화물을 모두 포함할 수 있다.
본 발명의 일 관점인 백신효과 증진 또는 개선용 조성물에 있어서, 상기 화합물은 (+)-시링가레시놀 (syringaresinol), 그의 유도체 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용 가능한 그의 염을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 관점인 T 세포 조절용 조성물에 있어서, 상기 화합물은 (+)-시링가레시놀 (syringaresinol), 그의 유도체 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용 가능한 그의 염을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 "(+)-시링가레시놀(syringaresinol)"은 화학식 2와 같은 화학 구조를 가지는 리그난계 화합물로, 화학 합성을 통해 얻거나, 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매 중 하나 이상으로부터 추출할 수 있다. 상기 아마씨, 황백, 오가피 및 참깨는 각 식물의 잎, 줄기, 뿌리, 열매 또는 씨를 예로 들 수 있는 식물의 각 부위를 모두 포함하며, 인삼 열매는 인삼 열매 과피 또는 과육을 포함한다.
Figure PCTKR2016002015-appb-C000002
본 명세서에서 “추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.
본 발명의 일측면은 (+)-시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 백신효과 증진 조성물을 제공한다. 본 발명의 다른 측면은 (+)-시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 T 세포 조절용 조성물을 제공한다. (+)-시링가레시놀은 노화가 되면서 증가하는 미접촉세포의 빈도수의 증가를 억제함으로써, 감염성 질환에 대한 백신의 효과를 증진시켜서, 특히 노령층에 있어서 그 효과가 탁월하다.
본 발명의 일측면에서, 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매 중 하나 이상을 물, 유기 용매 및 물과 유기 용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 추출하여 수득할 수 있다. 상기 유기 용매는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 알코올은 C1~C5의 저급 알코올을 포함하며, C1~C5의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필알코올, n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 일측면에서, 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매의 추출물로 조성물에 포함될 수 있으며, 그 중 감염성 질환에 대한 백신 효과를 증진시키는 효과적인 분획이 포함될 수 있다.
본 발명의 일측면에서, (+)-시링가레시놀을 인삼 열매로부터 분리 및 정제하는 방법은 다음과 같은 단계를 포함할 수 있다. 인삼 열매 과육의 알코올 추출물을 제조하는 단계; 제조한 알코올 추출물을 물과 알코올 중 하나 이상을 포함하는 용매로 용출시켜 분획을 수득하는 단계; 및 수득한 분획에 대해 유기 용매를 전개 용매로 사용하여 크로마토그래피, 구체적으로 얇은 막 크로마토그래피(TLC)를 수행하는 단계. 상기에서 유기 용매는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하며, 알코올은 C1~C5의 알코올을 포함한다. 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기와 같이 정제된 (+)-시링가레시놀을 유효 성분으로 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물은 조성물 전체 중량을 기초로 0.001 중량% 내지 80 중량%, 구체적으로 0.005 중량% 내지 60 중량%, 더 구체적으로 0.01 중량% 내지 30 중량%의 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀을 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 제형 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다. 구체적으로 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀이 0.001 중량% 미만인 경우 충분한 감염성 질환에 대한 백신효과 증진 효과를 얻을 수 없고, 80 중량%를 초과하는 경우 안전성 및 제형 안정성이 낮아질 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀은 총 T 세포의 수 증가, 총 T 세포에 대한 미경험 T 세포의 비율의 증가 및 조절 T 세포의 수 감소 중 하나 이상을 통해 백신 효과를 증진 또는 개선하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면은 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 백신의 효과를 증진할 수 있으며, 기호 식품 또는 건강 식품 조성물을 포함한다.
상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 일측면은 화학식 1의 화합물 또는 (+)-시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 상기 약학 조성물은 다양한 감염성 질환에 대한 백신 효과를 강화할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 제형은 정제(錠劑), 환제(丸劑), 연질 및 경질 캅셀제, 과립제(顆粒劑), 산제, 세립제, 액제, 유탁제(乳濁濟) 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제(예: 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 500mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 100 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실험예 1] (+)-시링가레시놀의 노화 생쥐의 면역세포 아형의 빈도 및 수에 미치는 효과 평가
(1) 실험 동물
생쥐는 28주령의 C57BL/6 수컷 생쥐를 중앙실험동물에서 구입한 후, 태평양 제약의 동물실 환경에서 두달간 적응시킨후, 36주령부터 실험하였다. 사육기간 동안 멸균된 fiter-top cage에 사육하여 멸균된 사료 (a normal chow diet (D12450B, Research Diets, New Brunswick,NJ, USA) 와 물을 자유롭게 먹도록 하였다. 동물실의 환경은 온도 20 ±2℃, 습도 50 ±10% 가 유도되도록 하였으며 조명은 12시간 간격으로 주야를 자동으로 조절하였다. 동물관리는 제약 IACUC (IACUC14-014)에 따라 취급하였다.
(2) 시링가레시놀 식이
군당 10마리씩 분리를 하여, 대조군 (정상식이+식염수 투여), 식이제한군 (정상식이군에 비교하여 30% 식이량 제한), 시링가레시놀 저농도군 (정상식이+10 mg/kg), 시링가레시놀 고농도군 (정상식이+50mg/kg)으로 나누었다. 상기 대조군은 6주령의 어린 쥐, 52주령의 늙은 쥐를 사용하였다. 시링가레시놀은 Methylcellulos에 녹여서 조성물 전체 1g를 하루에 한번 10주 동안 경구투여하였다.
(3) 면역세포아형 분석
46주째 경추탈골에 의해 희생시킨 후, Spleen을 적출하여 무게를 잰 후, 믹서로 갈아서 single cells suspension을 만들었다. cell strainer로 single cells를 거른 후, RBC lysis buffer 혹은 hypertonic solution (distilled water)로 RBC를 제거하고, FACS를 위해서 cell strainer로 debris를 완전히 제거하였다. Live splenocyte의 전체수는 트립판 블루로 염색하여 세었다. FACS분석을 위하여 염색조건당 0.5~1 million 세포를 FACS buffer (2% FBS in PBS)에 재부유한 후 Fc recepotr를 30분간 blocking한다. 다음과 같은 세포아형에 맞는 형광이 표지된 항체를 넣고 4℃에서 30분간 반응하였다.
- CD4+ T-cell subsets: Naive (N, CD62L+CD44-), central memory (CM, CD62L+CD44+), activated /effector memory (EM, CD62L+/-CD44+)
- CD8+ T-cell subsets: Naive (N, CD62L+CD44-), central memory (CM, CD62L+CD44+), activated /effector memory (EM, CD62L+/-CD44+)
- B-cell subsets: follicular B cells (FOB,CD21++CD23++), marginal zone B cells (MZB, CD21+CD23-), transitional 1 B cells (T1, CD21+/-CD23-), T2 (CD21+CD23+)
- Dendritic cells (CD11c+)
- Monocytes (CD11b+Ly6C+), Granulocytes (CD11b+Ly6G+)
반응 후에FACS buffer로 세척하고, flow cytomerty (BD FACS LSR), FlowJo analysis (ver. 9.7.6, FlowJo))에서 세포아형의 수를 분석하였다. 그 결과를 도 1, 2에 나타내었다.
구체적으로 도 1의 경우 T 세포전체의 수는 Live splenocyte의 전체수에 비해, 대조군(늙은 쥐)인 정상식이군이 32%, 시링가레시놀 저농도군이 36%, 시링가레시놀 고농도군이 41%로 측정되었다.
또한 도 2의 경우 미경험 T 세포수는 전체 도움 T 세포수에 비해, 대조군이 50%인 반면, 시링가레시놀 고농도군은 55%였으며, 킬러 T 세포수에 대한 미경험 T 세포수는 대조군인 58%인 반면, 시링가레시놀 고농도군은 62%로 측정되었다.
또한 도 3의 경우 전체 도움 T 세포중 조절 T 세포의 비율이 대조군 (늙은 쥐)이 28%인 반면, 시링가레시놀 고농도군은 25%로서 측정되었다.
따라서, 시링가 레시놀을 조성물 전체 대비 0.003중량% 이상 투여한 경우, 미경험 T 세포수를 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 2] (+)-시링가레시놀의 노화 생쥐의 백신효과 증진 또는 개선 평가
(1) 실험 동물
생쥐는 28주령의 C57BL/6 수컷 생쥐를 중앙실험동물에서 구입한 후, 태평양 제약의 pathogen-free facility 동물실 환경에서 두달간 적응시킨후, 36주령부터 실험하였다. 사육기간 동안 멸균된 fiter-top cage에 사육하여 멸균된 사료 (a normal chow diet (D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ, USA) 와 물을 자유롭게 먹도록 하였다. 동물실의 환경은 온도 20 ±2℃, 습도 50 ±10% 가 유도되도록 하였으며 조명은 12시간 간격으로 주야를 자동으로 조절하였다. 동물관리는 제약 IACUC (IACUC14-014)에 따라 취급하였다.
(2) 시링가레시놀 식이
군당 10마리씩 분리를 하여, 대조군 (정상식이+식염수 투여), 식이제한군 (정상식이군에 비교하여 30% 식이량 제한), 시링가레시놀 저농도군 (정상식이+10 mg/kg), 시링가레시놀 고농도군 (정상식이+50mg/kg)으로 나누었다. 상기 대조군은 6주령의 어린 쥐, 52주령의 늙은 쥐를 사용하였다. 시링가레시놀은 Methylcellulos에 녹여서 조성물 전체 1g를 하루에 한번 10주 동안 경구투여하였다.
(3) Immunization 방법
(1) (2)에서 준비한 쥐에게 자외선으로 비활성화한 인플루엔자 바이러스 A/PR/8/34 (H1N1 subtype)(연세대 성백림 교수, log 24 HA titer)를 3주에 2번 정맥투여하였다. 두번째 immunization후 11일째에 혈액을 분리하였다.
(4) 인플레인자 바이러스에 대한 항체 분석
96well plate를 whole influenza A 바이러스로 4℃에서 16시간 동안 coating 한 후, 5% skin milk 로 두시간 동안 blocking하였다. 여기에 1/100으로 희석한 혈청을 50 ㎕/well씩 해당 well에 가한 뒤에 37℃-5% CO2 incubator에서 1시간 배양 후 0.05% TBS/Tween 20 용액과 TBS 용액으로 3회씩 세척하였다. 그 후에 polyIg's 항체를 첨가하여 상온에서 1시간 배양 후 0.05% TBS/Tween 20 용액과 TBS 용액을 이용하여 세척하였다. 여기에 OPD(o-phenylendiamine) 용액을 첨가하고 일정시간(30분)이 경과한 후에 황산을 첨가하여 반응을 정지시키고 microplate reader를 이용해 490 nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다.
도 4에서 볼 수 있듯이, (+)-시링가레시놀을 먹인 쥐는 인플루엔자 바이러스에 대한 높은 항체생성을 보였다. 구체적으로 시링가레시놀 고농도군 (정상식이+50mg/kg)이 시링가레시놀을 투여하지 않은 대조군(늙은 쥐)에 비해 40 이상의 흡광도를 보였다. 이를 토대로 (+)-시링가레시놀은 노화에 의한 면역세포의 변화를 젊은 상태와 유사하게 변화시켜, 감염성 질환에 대한 백신효과를 증진 또는 개선 할 수 있음을 알 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 건강 식품
(+)-시링가레시놀................... 1000 ㎎
비타민 혼합물
비타민 A 아세테이트...............70 ㎍
비타민 E ....................... 1.0 ㎎
비타민 B1...................... 0.13 ㎎
비타민 B2 ...................... 0.15 ㎎
비타민 B6........................ 0.5 ㎎
비타민 B12....................... 0.2 ㎍
비타민 C.......................... 10 ㎎
비오틴............................. 10 ㎍
니코틴산아미드.................... 1.7 ㎎
엽산............................... 50 ㎍
판토텐산 칼슘..................... 0.5 ㎎
무기질 혼합물
황산제1철........................ 1.75 ㎎
산화아연.......................... 0.82 ㎎
탄산마그네슘...................... 25.3 ㎎
제1인산칼륨......................... 15 ㎎
제2인산칼슘......................... 55 ㎎
구연산칼륨.......................... 90 ㎎
탄산칼슘........................... 100 ㎎
염화마그네슘...................... 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강 식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
[제형예 2] 건강 음료
(+)-시링가레시놀.......................... 1000 ㎎
구연산................................ 1000 ㎎
올리고당................................ 100 g
타우린.................................... 1 g
정제수.................................. 잔량
통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.
[제형예 3] 정제
(+)-시링가레시놀 100 mg, 대두 추출물 50 mg, 포도당 100 mg, 홍삼 추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정한다.
[제형예 4] 과립제
(+)-시링가레시놀 100 mg, 대두 추출물 50 mg, 포도당 100 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진한다.
[제형예 5] 패치제
하기 표 1에 기재된 조성에 따라 패치제를 제조하였다. 패치제를 제조하는 방법은 다음과 같다. 폴리아크릴산(polyacrylic acid)을 중화제로 사용하여 중화시 키고 아가(agar) 고분자를 100℃까지 가온하여 끓이고 교반하였다. 70℃까지 냉각시킨 다음, 유연제인 오일 (oil) 성분을 첨가하였고, 50℃ 이하에서 (+)-시링가레시놀을 배합하였다. 코팅기에 압출방식으로 배합된 원료를 흘려 보내 부직포에 로딩시켰다. 내용물이 로딩되면 챔버를 통과하면서 건조시키고 형성된 부직포 하이드로겔을 40℃에서 2~3일간 숙성 후 커팅하여 하이드로겔 패치를 제조하였다.
배합 성분 중량비(%)
피롤리디닐디아미노피리미딘옥사이드 0.2
(+)-시링가레시놀 0.1
폴리아크릴산 수용액 50.0
미네랄 오일 5.0
글리세린 5.0
소듐 하이드록사이드 2.0
아가 파우더 0.5
폴리솔베이트 1.0
알루미늄 글리신네이트 0.3
에탄올 10.0
방부제 적량
향 적량
정제수 잔액(to 100)

Claims (14)

  1. 하기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체 또는 약학적, 또는 식품학적으로 허용 가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016002015-appb-I000002
    상기 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 직쇄(unbranched) 또는 분지(branched)된, C1 내지 C18의 알킬기(alkyl group), C1 내지 C18의 알케닐기(alkenyl group), C1내지 C18의 알키닐기(alkynyl group) 또는 C3내지 C6의 사이클릭 알킬기(cyclic alkyl group)이다.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 화합물은 (+)-시링가레시놀(syringaresinol)인 백신효과 증진 또는 개선용 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 화합물은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추출물로부터 유래된 것을 특징으로 하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 화합물은 조성물 전체 중량을 기초로 0.001 내지 80 중량%인 것을 특징으로 하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 화합물은 총 T 세포의 수 증가, 총 T 세포에 대한 미경험 T 세포의 비율의 증가 및 조절 T 세포의 수 감소 중 하나 이상을 통해 백신 효과를 증진 또는 개선하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물.
  7. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 약학 조성물인 것을 특징으로 하는 백신효과 증진 또는 개선용 조성물.
  8. 하기 화학식 1의 화합물, 그의 유도체 또는 약학적, 또는 식품학적으로 허용 가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 T 세포 조절용 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016002015-appb-I000003
    상기 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 직쇄(unbranched) 또는 분지(branched)된, C1 내지 C18의 알킬기(alkyl group), C1 내지 C18의 알케닐기(alkenyl group), C1내지 C18의 알키닐기(alkynyl group) 또는 C3내지 C6의 사이클릭 알킬기(cyclic alkyl group)이다.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 화합물은 (+)-시링가레시놀(syringaresinol)인 T 세포 조절용 조성물.
  10. 제 8 항에 있어서,
    상기 화합물은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추출물로부터 유래된 것을 특징으로 하는 T 세포 조절용 조성물.
  11. 제 8 항에 있어서,
    상기 화합물은 조성물 전체 중량을 기초로 0.001 내지 80 중량%인 것을 특징으로 하는 T 세포 조절용 조성물.
  12. 제 8 항에 있어서,
    상기 화합물은 총 T 세포의 수 증가, 총 T 세포에 대한 미경험 T 세포의 비율의 증가 및 조절 T 세포의 수 감소 중 하나 이상을 통해 T 세포를 조절하는 T 세포 조절용 조성물.
  13. 제 8 항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 T 세포 조절용 조성물.
  14. 제 8 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 약학 조성물인 것을 특징으로 하는 T 세포 조절용 조성물.
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