WO2015053280A1 - カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩および／またはその製造方法 - Google Patents

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salt
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carboxymethyl group
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俊一 藤川
友紀奈 阿部
和則 朝岡
拓史 吉田
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キユーピー株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or a salt thereof and / or a production method thereof, and a cosmetic, a food composition and a pharmaceutical composition containing the same.
  • water-soluble polysaccharides such as hyaluronic acid contain a hydroxyl group or a carboxyl group, and many have high viscosity due to hydrogen bonds formed between these groups (Japanese Patent Laid-Open No. Sho 63-63). 57602).
  • the high viscosity of the water-soluble polysaccharide may cause poor touch in external medicines and cosmetics, and may cause poor texture in oral medicines and foods. For this reason, a water-soluble polysaccharide having water retention, low stickiness and excellent texture is required.
  • the present invention provides a method for producing a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or a salt thereof, which can easily obtain a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid having a high whiteness and a high carboxymethylation rate. .
  • the present invention also provides a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or a salt thereof having a high whiteness and a high carboxymethylation rate, and cosmetics, food compositions and pharmaceutical compositions containing the same.
  • the present inventor has found that by reacting hyaluronic acid with haloacetic acid and / or a salt thereof under specific conditions, a modified hyaluronic acid having high whiteness and a predetermined carboxymethylation rate can be obtained. It was.
  • the inventors of the present application have also found that the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof obtained by using this method has high whiteness, excellent water retention, and low viscosity.
  • a dissolved raw material hyaluronic acid and / or salt thereof is treated with haloacetic acid and / or a salt thereof in a hydrous solvent having a temperature of 30 ° C. or lower.
  • the haloacetic acid may be chloroacetic acid and / or bromoacetic acid.
  • the dissolved raw material hyaluronic acid and / or salt thereof has a molecular weight of 4,000 to 4,000,000. be able to.
  • the b value representing the hue of the color of the obtained carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof is It can be 5 or less.
  • a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid having a molecular weight of 800,000 or more is obtained by the reaction step. be able to.
  • a carboxymethylation rate with respect to a disaccharide unit constituting hyaluronic acid is 5% or more and 200% or less by the reaction step.
  • a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid can be obtained.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to one embodiment of the present invention has a molecular weight of 800,000 or more, and a carboxymethylation rate with respect to a disaccharide unit constituting hyaluronic acid is 5% or more and 200% or less. is there.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof described in 8 above may have a kinematic viscosity of 30 mm 2 / s to 200 mm 2 / s.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof described in any one of 8 to 10 above may have a b value representing a color hue of 5 or less.
  • a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to any one of 1 to 5 above, a carboxymethyl group-containing modification having a molecular weight of 4,000 or more and less than 800,000 by the reacting step.
  • Hyaluronic acid and / or a salt thereof can be obtained.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to one embodiment of the present invention has a molecular weight of 4,000 or more and less than 800,000, and a carboxymethylation rate with respect to a disaccharide unit constituting hyaluronic acid is 60% or more.
  • a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid that is 200% or less can be obtained.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof described in 14 above may have a kinematic viscosity of 1 mm 2 / s to 200 mm 2 / s.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to any one of the above 14 to 16, may have a b value representing a color hue of 5 or less.
  • a cosmetic according to one embodiment of the present invention contains the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to any one of 8 to 11, 14 to 17.
  • the food composition which concerns on 1 aspect of this invention contains the carboxymethyl group containing modified hyaluronic acid in any one of said 8 thru
  • the pharmaceutical composition which concerns on 1 aspect of this invention contains the carboxymethyl group containing modified hyaluronic acid in any one of said 8 thru
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof described in 8 to 11 above has a molecular weight of 800,000 or more, and a carboxymethylation rate with respect to a disaccharide unit constituting hyaluronic acid is 5% or more and 200% or less.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof described in 14 to 17 above has a molecular weight of 4,000 or more and less than 800,000, and the carboxymethylation rate with respect to a disaccharide unit constituting hyaluronic acid Is 60% or more and 200% or less, it has water retention and has a smaller viscosity than hyaluronic acid having the same molecular weight.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof has high whiteness, low stickiness, good touch (has a smooth touch), and good texture Therefore, it can be used, for example, as a component of pharmaceuticals, cosmetics and foods.
  • FIG. 1 is a graph showing the results of measuring the water retention rate of a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to an example of the present invention.
  • FIG. 2 is a diagram showing the results of a sensory test on the viscosity of a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to an example of the present invention.
  • FIG. 3 is a diagram showing the results of a sensory test relating to the feel of a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof according to an example of the present invention.
  • parts means “parts by mass” and “%” means “mass%” unless otherwise specified.
  • the method for producing a carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof (sometimes referred to simply as “modified hyaluronic acid” in the present specification) according to an embodiment of the present invention has a temperature of 30 ° C. or lower. And reacting the dissolved raw material hyaluronic acid and / or salt thereof with haloacetic acid and / or salt thereof in a water-containing solvent.
  • the water-containing solvent is water or a mixture of a water-soluble organic solvent and water, and the ratio of the water-soluble organic solvent in the mixture is 60 v / v% or less.
  • the reaction step at least a part of hyaluronic acid and / or a salt thereof (preferably all or most of hyaluronic acid and / or a salt thereof) and haloacetic acid and / or a salt thereof in the reaction solution (aqueous solvent).
  • the hyaluronic acid and / or salt thereof and the haloacetic acid and / or salt thereof can be reacted with each other in a dissolved state.
  • the reaction solution may be visually transparent in that hyaluronic acid and / or a salt thereof and haloacetic acid and / or a salt thereof are dissolved.
  • hyaluronic acid refers to a polysaccharide having one or more repeating structural units composed of disaccharides of glucuronic acid and N-acetylglucosamine.
  • the “hyaluronic acid salt” is not particularly limited, but is preferably a food or pharmaceutically acceptable salt, for example, sodium salt, potassium salt, calcium salt, zinc salt, magnesium salt, ammonium salt, etc. Is mentioned.
  • Hyaluronic acid is basically a disaccharide or more containing at least one disaccharide unit in which the 1-position of ⁇ -D-glucuronic acid and the 3-position of ⁇ -DN-acetyl-glucosamine are bonded, and ⁇ It is basically composed of -D-glucuronic acid and ⁇ -DN-acetyl-glucosamine, and is a combination of a plurality of disaccharide units.
  • the sugar may be an unsaturated sugar, and examples of the unsaturated sugar include non-reducing terminal sugars, usually those having unsaturated carbon atoms between positions 4 and 5 of glucuronic acid.
  • the raw material hyaluronic acid and / or salt thereof used as the raw material used in the production method according to the present embodiment may be extracted from natural products such as animals (for example, biological tissues such as chicken crown, umbilical cord, skin, joint fluid, etc.). Well, or those obtained by culturing microorganisms, animal cells or plant cells (for example, fermentation methods using bacteria of the genus Streptococcus, etc.), chemically synthesized or enzymatically synthesized, etc. can be used. .
  • animals for example, biological tissues such as chicken crown, umbilical cord, skin, joint fluid, etc.
  • well or those obtained by culturing microorganisms, animal cells or plant cells (for example, fermentation methods using bacteria of the genus Streptococcus, etc.), chemically synthesized or enzymatically synthesized, etc. can be used. .
  • raw material hyaluronic acid and / or a salt thereof either the crude extract or the purified product may be used, but the purity is 90% in that the purified product, specifically, carboxymethylation can proceed smoothly. It is preferable to use raw material hyaluronic acid and / or a salt thereof having a (mass ratio) above.
  • the average molecular weight of the raw material hyaluronic acid and / or salt thereof dissolved in the reacting step is usually from 4,000 to 4,000,000 in that carboxymethylation can be performed smoothly. It is preferable that it is 3 million or less.
  • the average molecular weight of the raw material hyaluronic acid and / or salt thereof can be measured by the following method.
  • ⁇ Measurement method of molecular weight That is, about 0.05 g of (purified) hyaluronic acid (this product) was accurately weighed and dissolved in 0.2 mol / L sodium chloride solution to make exactly 100 mL, and 8 mL, 12 mL and 16 mL of this solution were accurately A sample solution is prepared by adding 0.2 mol / L sodium chloride solution to each to make exactly 20 mL. This sample solution and a 0.2 mol / L sodium chloride solution were 30.0 ⁇ 0.1 ° C. according to the viscosity measurement method (first method capillary viscometry method) of the Japanese Pharmacopoeia (16th revision) general test method.
  • the specific viscosity is measured by (Equation (A)), and the reduced viscosity at each concentration is calculated (Equation (B)).
  • a graph is drawn with the reduced viscosity on the vertical axis and the concentration (g / 100 mL) of the product converted to dry matter on the horizontal axis, and the intrinsic viscosity is determined from the intersection of the straight line connecting the points and the vertical axis.
  • the intrinsic viscosity obtained here is substituted into Laurent's formula (formula (C)), and the average molecular weight is calculated (Torvar C Laurent, Marion Ryan, and Adolph Pietroszkiewicz, "Fractionation of hyaluronic Acid,” Biocetic Acid. , 42, 476-485 (1960), Chikako Yokata, “Molecular weight evaluation of sodium hyaluronate preparations by SEC-MALLS”, National Institute of Health, 121, 030-033 (2003)).
  • the content of the raw material hyaluronic acid and / or its salt is an indicator of the purity of the raw material hyaluronic acid and / or its salt
  • the content of the raw material hyaluronic acid and / or its salt is It can be said that the greater the amount, the higher the purity of the raw material hyaluronic acid and / or its salt.
  • the hyaluronic acid content in the raw material hyaluronic acid and / or its salt is a value calculated from the glucuronic acid quantitative value measured by the carbazole sulfate method (for example, Japanese Pharmacopoeia).
  • an aqueous solution of hyaluronic acid is added and mixed in a sodium borate / sulfuric acid solution, the hyaluronic acid is decomposed by heating, cooled, mixed with a carbazole / ethanol solution, heated and left to cool.
  • This is a method for measuring absorbance (530 nm).
  • a calibration curve is prepared using D-glucuronolactone treated in the same manner, and a D-glucuronolactone conversion value is calculated, and then multiplied by 1.102 to obtain a glucuronic acid quantitative value.
  • the obtained glucuronic acid quantitative value is multiplied by (molecular weight of hyaluronic acid / molecular weight of glucuronic acid) to calculate the content of hyaluronic acid.
  • modified hyaluronic acid and / or salt thereof refers to hyaluronic acid and / or a salt thereof in which an organic group is introduced at least partially, and is different from hyaluronic acid and / or a salt thereof. It has a structure.
  • organic group refers to a group having a carbon atom.
  • carboxymethyl group refers to the group represented by.
  • carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof refers to hyaluronic acid and / or salt thereof into which a carboxymethyl group has been introduced at least partially.
  • the hydroxyl group constituting hyaluronic acid (see the following formula (1)) (in the following formula (1), N-acetylglucosamine constituting the hyaluronic acid is used.
  • C-4 position, C-6 position, and at least a part of the hydroxyl atoms of glucuronic acid constituting hyaluronic acid (C-2 position, C-3 position) are —CH 2 —CO 2 H and / or Or a group represented by —CH 2 —CO 2 — ).
  • the hydrogen atom of the hydroxyl group at one or more positions among the hydroxyl groups at these positions is —CH 2 —CO 2 H and / or —CH 2 —CO 2.
  • the group represented by- may be substituted.
  • disaccharide unit constituting hyaluronic acid refers to one unit composed of disaccharides (glucuronic acid and N-acetylglucosamine) adjoining to constitute hyaluronic acid.
  • Carboxymethylation rate with respect to disaccharide units constituting an acid is the number of carboxymethyl groups contained in one unit relative to the one unit, and more specifically, when the unit is 100%. The ratio (%) of the number of carboxymethyl groups contained in one unit relative to the one unit.
  • n a number of 1 to 7,500.
  • the modified hyaluronic acid according to the present embodiment can be, for example, a compound represented by the following formula (2).
  • R 1 to R 5 independently represent a hydroxyl group, a group represented by —CH 2 —CO 2 H, or a group represented by —CH 2 —CO 2 — (where R 1 to R Except for the case where each R 5 represents a hydroxyl group.)
  • N represents a number from 1 to 7,500.
  • ⁇ PH> In the production method according to this embodiment, it is preferably carried out under basic conditions used for the reaction in that the nucleophilicity of the hydroxyl group can be increased, and the pH of the reaction solution (hydrous solvent) is 9 or more ( 9 or more and 14 or less, preferably 10 or more and 14 or less, more preferably 11 or more and 14 or less.
  • a basic electrolyte in order to adjust the reaction solution to basic, a basic electrolyte can be used in the reaction solution.
  • the basic electrolyte include alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium hydroxide, and alkaline earth metal hydroxides such as calcium hydroxide, magnesium hydroxide and barium hydroxide.
  • the concentration of the basic electrolyte in the reaction solution is, for example, 0.2 mol / L or more and 10 mol / L in that any of the modified hyaluronic acids of the first example and the second example described later can be efficiently obtained. Or less, preferably 0.5 mol / L or more and 8 mol / L or less.
  • the concentration of the hyaluronic acid in the water-containing solvent is 0.05 g / mL or more and 0.5 g / mL in that any modified hyaluronic acid of the first example and the second example described later can be efficiently obtained.
  • the following is preferable.
  • the haloacetic acid and / or salt thereof is obtained by using a carboxymethyl group as a raw material hyaluronic acid. And / or used to introduce salts thereof.
  • the haloacetic acid can be, for example, monohaloacetic acid and / or a salt thereof, and more specifically, chloroacetic acid and / or a salt thereof, or bromoacetic acid or a salt thereof is preferable.
  • the salt of haloacetic acid is preferably, for example, an alkali metal salt of chloroacetic acid and / or an alkali metal salt of bromoacetic acid, and more preferably sodium chloroacetate and / or sodium bromoacetate.
  • the amount of haloacetic acid and / or its salt used is usually 10% or more and 500% or less (mass ratio) of the amount of raw material hyaluronic acid and / or its salt used, and 50% or more and 200% or less (mass ratio). Is preferred.
  • the water-containing solvent is water or a mixed solution of a water-soluble organic solvent and water, so that the raw material hyaluronic acid and / or a salt thereof is excellent in solubility.
  • the hydrous solvent is a mixed solution of a water-soluble organic solvent and water, that is, when the hydrous solvent contains both water and the water-soluble organic solvent, the hydrous solvent can improve the solubility of hyaluronic acid.
  • the ratio of the water-soluble organic solvent is usually 60 v / v% or less (over 0 v / v% to 60 v / v% or less), 40 v / v% or less (over 0 v / v% to 40 v / v% or less) ) Is preferable.
  • water-soluble organic solvent examples include alcohol solvents such as methanol, ethanol, 1-propanol, and 2-propanol, ketone solvents such as acetone and methyl ethyl ketone, tetrahydrofuran, acetonitrile, and the like. Can be used in combination. Of these, lower alcohols having 1, 2 or 3 carbon atoms such as isopropanol and ethanol are preferred.
  • the temperature of the reaction solution is usually 30 ° C. or lower (preferably higher than 0 ° C. and 30 ° C. or lower) from the viewpoint that carboxylation can proceed smoothly and a decrease in molecular weight can be suppressed. More preferably, it is 10 ° C. or lower (preferably higher than 0 ° C. and 30 ° C. or lower). In particular, by setting the temperature of the reaction solution to 10 ° C. or less, modified hyaluronic acids having a high molecular weight (800,000 or more) can be easily obtained.
  • the temperature of the reaction liquid in (1) is usually (preferably higher than 0 ° C. and not higher than 30 ° C.), and preferably not lower than 1 ° C. and not higher than 30 ° C.
  • the temperature of the reaction solution in the reaction is usually 10 ° C. or lower (preferably higher than 0 ° C. and 10 ° C. or lower), and preferably 1 ° C. or higher and 10 ° C. or lower.
  • the carboxymethylation rate (hereinafter simply referred to as “carboxymethylation”) for a disaccharide unit having a high molecular weight (for example, a molecular weight of 800,000 or more) and constituting hyaluronic acid.
  • carboxymethylation for a disaccharide unit having a high molecular weight (for example, a molecular weight of 800,000 or more) and constituting hyaluronic acid.
  • carboxymethylation for a disaccharide unit having a high molecular weight (for example, a molecular weight of 800,000 or more) and constituting hyaluronic acid.
  • carboxymethylation rate for a disaccharide unit having a high molecular weight (for example, a molecular weight of 800,000 or more) and constituting hyaluronic acid.
  • modified hyaluronic acids having a high for example, 50% or more, preferably 50% or more and 200% or less
  • a modified hyaluronic acid having a low molecular weight (for example, a molecular weight of less than 800,000) and a high carboxymethylation rate (for example, 60% or more, preferably 60% or more and 200% or less), which is a second example described later, is produced.
  • the reaction is preferably carried out at a temperature of 10 ° C. or higher (for example, 10 ° C. or higher and 35 ° C. or lower, preferably 15 ° C. or higher, more preferably 20 ° C. or higher, more preferably room temperature).
  • reaction time is usually preferably 30 minutes or longer and 100 hours or shorter, more preferably 60 minutes or longer and 60 hours or shorter from the viewpoint that the carboxylation can proceed smoothly and the decrease in molecular weight can be suppressed. preferable.
  • modified hyaluronic acids having a molecular weight of 800,000 or more can be easily obtained. That is, according to the production method according to the present embodiment, modified hyaluronic acids having high molecular weight and high whiteness can be easily obtained.
  • the carboxymethylation rate of the obtained modified hyaluronic acid can be 5% or more and 200% or less.
  • modified hyaluronic acids having a molecular weight of 4,000 or more and less than 800,000 can be easily obtained.
  • the carboxymethylation rate of the obtained modified hyaluronic acid can be 60% or more and 200% or less. That is, according to the production method according to the present embodiment, modified hyaluronic acids having a relatively low molecular weight of 4,000 to less than 800,000, a high carboxymethyl group of 60% to 200%, and high whiteness are obtained. It can be easily obtained.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof (modified hyaluronic acid) according to this embodiment has a molecular weight of 4,000 to 2,000,000.
  • the molecular weight of the carboxylmethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof can be measured by the following method.
  • a gel filtration column Using a gel filtration column, a plurality of (purified) hyaluronic acids (reference substances) with known molecular weights are subjected to liquid chromatography analysis, and a calibration curve is created from their retention times. Similarly, the molecular weight of the modified hyaluronic acid can be determined by performing liquid chromatography analysis on the modified hyaluronic acid to be measured and determining the molecular weight using the calibration curve.
  • liquid chromatography analyzer examples include Waters Alliance 2690 HPLC Separations Module (manufactured by Waters), Waters Alliance 2695 HPLC Separations Module (manufactured by Waters), and 1200 Series. Manufactured).
  • Examples of the column that can be used for liquid chromatography analysis include a column for ligand exchange chromatography (ligand exchange mode + size exclusion mode) manufactured by shodex, model name “SUGAR KS-801”, “SUGAR KS-802”, “SUGAR KS-803”, “SUGAR KS-804”, “SUGAR KS-805”, “SUGAR KS-806”, “SUGAR KS-807”, and TOSOH size exclusion chromatography columns And model name “TSKgel GMPW”.
  • ligand exchange chromatography ligand exchange mode + size exclusion mode
  • the carboxymethylation rate of the modified hyaluronic acid is a peak indicating the proton of the methyl group (—CH 3 ) of the N-acetyl group bonded to the C-2 position in the hyaluronic acid skeleton in the 1 H-NMR spectrum.
  • the modified hyaluronic acid according to the present embodiment has a carboxymethylation rate of 5% or more and 200% or less in that the water retention is high with respect to hyaluronic acid having the same molecular weight and the viscosity is suppressed. It is preferably 10% or more and 200% or less, more preferably 50% or more and 200% or less, further preferably 60% or more and 200% or less, and 70% or more and 200% or less. It is particularly preferred that
  • the carboxymethylation rate is 5% or more and 200% or less, so that the viscosity is lower than that of hyaluronic acid having the same molecular weight. For this reason, for example, it can be used as a component of pharmaceuticals, cosmetics, and foods.
  • the kinematic viscosity of the modified hyaluronic acid according to the present embodiment is 1 mm 2 / s or more and 200 mm 2 / s or less.
  • the kinematic viscosity of the modified hyaluronic acid according to the present embodiment can be measured using an Ubbelohde viscometer (manufactured by Shibata Scientific Instruments Co., Ltd.). At this time, a Ubbelohde viscometer having a coefficient such that the number of seconds of flow is 200 seconds or more and 1,000 seconds is selected. The measurement is performed in a constant temperature water bath at 30 ° C. so that there is no temperature change.
  • the kinematic viscosity (unit: mm 2 / s) can be obtained from the product of the number of seconds of flow of the aqueous solution measured by the Ubbelohde viscometer and the coefficient of the Ubbelohde viscometer.
  • the modified hyaluronic acid according to the present embodiment has a low kinematic viscosity and good tactile sensation (has a smooth tactile sensation) compared to hyaluronic acid and / or a salt thereof having the same molecular weight. And the texture is good.
  • the modified hyaluronic acid according to the present embodiment When the modified hyaluronic acid according to the present embodiment is used, for example, in cosmetics, food compositions, and pharmaceuticals, the modified hyaluronic acid according to the present embodiment has a lightness of color because it does not affect the color of the product. Higher and less yellowish are preferred.
  • the modified hyaluronic acids according to this embodiment may have a b value (hereinafter also simply referred to as “b value”) representing a hue of a color of 5 or less, preferably 4 or less, and preferably 3 or less. Is more preferable, and 0 or more is preferable.
  • B value is a value that defines the hue (hue) of the color of the substance. The larger the b value, the stronger the yellowness, while the smaller the b value, the stronger the blueness.
  • the modified hyaluronic acids according to the present embodiment can have an L value (hereinafter also simply referred to as “L value”) representing the lightness of the color of 90 or more (90 to 100), and the L value is 92 or more. It is preferable that the L value is 93 or more.
  • the L value is a value that defines the lightness of the color of the substance, and is represented by a numerical value between 0 and 100.
  • An L value of 100 indicates the brightest state (perfect white), while an L value of 0 indicates the darkest state (perfect black).
  • B value and L value can be displayed in Lab chromaticity coordinates by the color difference display method defined by JIS Z 8730. Moreover, b value and L value can be measured with a commercially available color difference meter. In the present invention, the b value and the L value are measured for solid modified hyaluronic acids.
  • the b value and L value of the modified hyaluronic acid according to the present embodiment can be obtained by, for example, attaching a 10 ⁇ lens to a color difference meter (trade name “COLOR AND COLOR DIFFERENCE METERMODEL 1001 DP”, manufactured by Nippon Denshoku Industries Co., Ltd.) It is possible to measure with 1 g or more of the measurement sample.
  • a color difference meter trade name “COLOR AND COLOR DIFFERENCE METERMODEL 1001 DP”, manufactured by Nippon Denshoku Industries Co., Ltd.
  • the b value measured by a color difference meter is 5 or less (moreover, the L value is 90 or more), so that a cosmetic, It can be used as a raw material for foods and pharmaceuticals.
  • the first example of the modified hyaluronic acid according to this embodiment (also referred to as “high molecular weight” in the present invention) has a carboxymethylation rate of 5% or more and 200% or less (preferably 10% or more and 40% or more). Or may be 50% or more, more preferably 60% or more, still more preferably 70% or more), and the molecular weight is 800,000 or more (preferably 800,000 or more and 2 million or less). is there.
  • the kinematic viscosity can be 30 mm 2 / s or more and 200 mm 2 / s or less (preferably 50 mm 2 / s or more and 200 mm 2 / s or less).
  • the modified hyaluronic acid which is the first example has a molecular weight of 800,000 or more and a carboxymethylation rate of 5% or more and 200% or less, so that it is higher in molecular weight than hyaluronic acid having the same molecular weight. Since the viscosity is low, for example, when used as a component of pharmaceuticals or cosmetics, the touch is good.
  • Hyaluronic acid with a molecular weight of 800,000 or higher has a higher viscosity than lower molecular weight hyaluronic acid.
  • the modified hyaluronic acid as the first example has a molecular weight of 800,000 or more and a carboxymethylation rate of 5% or more and 200% or less, so that the molecular weight is as high as 800,000 or more.
  • its viscosity is lower than that of hyaluronic acid of the same molecular weight.
  • it when used as a pharmaceutical or cosmetic ingredient, it has less stickiness and feels good (has a smooth feel) , Has excellent texture and high whiteness.
  • a second example of the modified hyaluronic acid according to the present embodiment (also referred to as “low molecular weight” in the present invention) has a carboxymethylation rate of 60% to 200% (preferably 70% to 200%). And the molecular weight is 4,000 or more and less than 800,000.
  • the kinematic viscosity may be 1 mm 2 / s or more and 30 mm 2 / s or less (preferably 10 mm 2 / s or more and 29 mm 2 / s or less).
  • the modified hyaluronic acid that is the second example has a molecular weight of 4,000 to less than 800,000 and a carboxymethylation rate of 60% to 200%, so that the viscosity is higher than that of hyaluronic acid having the same molecular weight. Low. For this reason, for example, when it is used as a component of pharmaceuticals or cosmetics, it has a good touch, an excellent texture, and a high whiteness.
  • Examples of the method for converting carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid according to the present embodiment into a salt thereof include, for example, an alkaline aqueous solution (for example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, ammonium hydroxide, etc. And an aqueous solution).
  • an acid aqueous solution for example, an aqueous solution of hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, etc.
  • a method using an acidic cation exchange resin for example, an alkaline aqueous solution (for example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, ammonium hydroxide, etc.
  • an aqueous solution for example, an acid aqueous solution (for example, an aqueous solution of hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, etc.) is used.
  • the modified hyaluronic acid according to the present embodiment has a high water retention effect due to the carboxyl group constituting the carboxymethyl group. For this reason, it has a high water retention effect in biological tissues such as skin.
  • the modified hyaluronic acid according to this embodiment may be applied to or ingested on the surface of a living tissue, and particularly preferably applied to or contacted with skin such as the face, arms, fingers, feet, and joints.
  • the modified hyaluronic acid according to this embodiment has a lower viscosity than the hyaluronic acid having the same molecular weight due to the carboxyl group constituting the carboxymethyl group. For this reason, for example, when used in cosmetics, it is less sticky and has a good touch (has a smooth feel), so it can be used as a cosmetic ingredient. Moreover, the modified hyaluronic acids according to the present embodiment are excellent in solubility in water, and can be used for various products containing water, for example.
  • modified hyaluronic acids according to this embodiment can be taken orally. Therefore, the modified hyaluronic acids according to the present embodiment can be used as, for example, pharmaceutical ingredients and food ingredients.
  • Carboxymethylcellulose (hereinafter also referred to as “CMC”) is widely used as, for example, an emulsifier, a thickener and the like.
  • This CMC is industrially produced by treating cellulose with a large amount of alkaline water to obtain alkaline cellulose, then dispersing the cellulose in a water-containing organic solvent and reacting with monohaloacetic acid (Japanese Patent Laid-Open No. 2000-34301). Issue gazette).
  • ⁇ Effect> (Method for producing modified hyaluronic acid) (1) Prevention of browning
  • the modified hyaluronic acid having a high whiteness for example, a b value of 5 or less
  • the production method of the present embodiment at least a part of the raw material hyaluronic acid and / or salt thereof and haloacetic acid and / or salt thereof are dissolved in the reaction solution (mixed solution).
  • the hyaluronic acid and / or salt thereof and the haloacetic acid and / or salt thereof can be reacted.
  • carboxymethylation advances smoothly.
  • modified hyaluronic acids having high whiteness can be easily obtained without undergoing normal purification such as activated carbon treatment, and thus production efficiency is excellent.
  • the manufacturing method which concerns on this embodiment does not exclude performing normal refinement
  • the generated modified hyaluronic acid is dissolved in the reaction solution in the reaction step.
  • an organic solvent such as ethanol is added to the reaction solution, and the produced modified hyaluronic acid is precipitated and recovered, thereby producing the produced modified hyaluronic acid and the haloacetic acid and / or salt thereof as a reactant. Can be easily separated. For this reason, post-processing is simple.
  • modified hyaluronic acid has a carboxymethyl group, and thus has a carboxyl group more than that of unmodified hyaluronic acid having the same molecular weight and / or a salt thereof. Since it contains many, the water retention effect is more excellent.
  • the molecular weight is 800,000 or more
  • the carboxymethylation rate is 5% or more and 200% or less
  • the molecular weight is 4,000 or more and less than 800,000.
  • the carboxymethylation rate is 60% or more and 200% or less
  • it has high water retention and has a low viscosity as compared with hyaluronic acid having the same molecular weight.
  • the modified hyaluronic acids according to the present embodiment have little stickiness, good tactile sensation (has a smooth tactile sensation), and good texture, and are used, for example, as components of pharmaceuticals, cosmetics, and foods. be able to.
  • the modified hyaluronic acids according to the present embodiment are obtained by the production method according to the present embodiment, browning during the reaction is suppressed.
  • the modified hyaluronic acid according to the present embodiment has a b value representing a hue of a color of 5 or less and high whiteness.
  • carboxymethyl group has high biocompatibility and low antigenicity.
  • carboxymethylated cellulose having a carboxymethyl group is used in a wide range of applications such as cosmetics, pharmaceuticals, and foods as described above.
  • hyaluronic acid is used in a wide range of applications such as cosmetics, pharmaceuticals, and foods. Therefore, the modified hyaluronic acid according to this embodiment in which a part of the functional group of hyaluronic acid is carboxymethylated has high biocompatibility and low antigenicity.
  • hyaluronic acid is originally different from cellulose which is poorly water-soluble in that it is excellent in water-solubility. That is, cellulose is carboxymethylated for the purpose of improving water solubility, whereas carboxymethylation of hyaluronic acid is intended to further improve the water retention effect rather than to improve water solubility. In that respect, it is novel and original, completely different in conception and action from cellulose carboxymethylation.
  • the cosmetic according to one embodiment of the present invention contains the modified hyaluronic acid according to the above embodiment.
  • the content of the modified hyaluronic acid in the cosmetic according to the present embodiment is, for example, 0.001% by mass or more and 5% by mass or less, and can be appropriately determined according to the usage form.
  • the aspect of the cosmetic according to the present embodiment is not particularly limited, and examples thereof include skin cosmetics.
  • the modified hyaluronic acid according to the above embodiment for skin cosmetics, it has an appropriate viscosity and has a high water retention effect, so moisturizes the skin and improves the feeling of bulkiness of the skin. it can.
  • Examples of the cosmetic for skin according to the present embodiment include, for example, face wash, cleanser, lotion (for example, whitening lotion), cream (for example, vanishing cream, cold cream), milky lotion, cosmetic liquid, pack ( For example, jelly-type peel-off type, paste-type wipe-off type, powder-type wash-out type), cleansing, foundation, lipstick, lip balm, lip gloss, lip liner, blusher, shaving lotion, after sun lotion, deodorant lotion, body lotion (hand care lotion) Body oils, soaps, and bath additives.
  • the following ingredients may be further blended in the cosmetic according to the present embodiment.
  • the component include cationized polysaccharides (eg, cationized hyaluronic acid, cationized hydroxyethyl cellulose, cationized guar gum, cationized starch, cationized locust bean gum, cationized dextran, cationized chitosan, and cationized honey).
  • cationized polysaccharides eg, cationized hyaluronic acid, cationized hydroxyethyl cellulose, cationized guar gum, cationized starch, cationized locust bean gum, cationized dextran, cationized chitosan, and cationized honey).
  • Anionic surfactants eg, alkylbenzene sulfonates, polyoxyalkylene alkyl ether sulfates, alkyl sulfates, olefin sulfonates, fatty acid salts, dialkylsulfosuccinates, etc.
  • nonionic surfactants eg , Polyoxyethylene fatty acid esters, polyoxyethylene hydrogenated castor oil derivatives, etc.
  • cationic surfactants eg, alkyltrimethylammonium salts, dialkyldimethylammonium salts, alkylpyridines
  • Um salt stearyltrimethylammonium chloride, etc.
  • amphoteric surfactant eg, alkylbetaine, alkylamidopropylbetaine, imidazolinium betaine, egg yolk lecithin, soybean lecithin, etc.
  • oil eg, silicone, silicone derivatives, liquid paraffin, Squalane, beeswax
  • the food composition which concerns on one Embodiment of this invention contains the modified hyaluronic acid which concerns on the said embodiment.
  • the content of the modified hyaluronic acid in the food composition according to the present embodiment is, for example, 0.001% by mass or more and 5% by mass or less, and can be appropriately determined according to the usage form.
  • the aspect of the food composition containing the modified hyaluronic acid according to the present embodiment is not particularly limited, for example, processed rice foods that are staple foods, bread making, etc., canned retort canned foods, frozen foods, side dishes, dried foods, etc.
  • processed rice foods that are staple foods, bread making, etc.
  • canned retort canned foods frozen foods, side dishes, dried foods, etc.
  • seasonings such as mayonnaise, beverages, confectionery, desserts, liquids, gels, soft capsules, etc.
  • general health foods that are permitted to express physiological functions Can do.
  • the pharmaceutical composition which concerns on one Embodiment of this invention contains the modified hyaluronic acid which concerns on the said embodiment.
  • the content of the modified hyaluronic acid in the pharmaceutical composition according to this embodiment is, for example, 0.001% by mass and 5% by mass or less, and can be appropriately determined according to the usage form.
  • the usage pattern of the pharmaceutical composition according to this embodiment is not particularly limited, and may be a powder, granule, high-concentration liquid, low-concentration liquid, or the like.
  • a dry form is preferable to a liquid form.
  • the pharmaceutical composition according to the present embodiment is blended with a bulking agent, a binder, a lubricant, a preservative, an antioxidant, a fragrance, a sweetener, an acidulant, an excipient, and the like as necessary. be able to.
  • vitamins such as vitamin C, vitamin B2, vitamin B12, and vitamin E, various nutritional components such as nutritional components such as nucleic acid, chondroitin sulfate, and collagen, and mineral components such as iron and zinc can also be blended.
  • Example 1 Preparation of carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid> After weighing 1.04 g of sodium hydroxide into a 30 mL sample bottle, 8 mL of water was added and dissolved. Next, 2.0 g of hyaluronic acid was added and dissolved, then 1.52 g of sodium monochloroacetate was added and dissolved, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 48 hours. Here, the pH of the reaction solution was 13. Thereafter, 80 mL of ethanol was placed in a 200 mL beaker, and the reaction solution was added with stirring to precipitate carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid.
  • the precipitate was collected in a 200 mL beaker with a 400-mesh filter cloth, and then 40 mL of a 10% sodium chloride aqueous solution was added to dissolve the precipitate. Further, after adjusting the pH with an 8% aqueous hydrochloric acid solution, 80 mL of ethanol was added to the solution while stirring to precipitate the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid again. After washing three times with 100 mL of 80% aqueous ethanol, the solution was filtered under reduced pressure and dried under reduced pressure at 55 ° C. for 3 hours to obtain Experiment No. 1-containing modified hyaluronic acid.
  • Example 2 Preparation of carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid> Except that the concentration of sodium hydroxide, the amount of aqueous solvent used, the type of solvent, the type and amount of haloacetic acid and / or its salt, the reaction temperature, and the reaction time were changed as shown in Table 1 and Table 2.
  • carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid of Experiment Nos. 2 to 36 was obtained.
  • “room temperature” means a temperature of 25 ° C. or higher and 30 ° C. or lower.
  • Table 1 shows the results using sodium monochloroacetate as the haloacetic acid and / or salt thereof
  • Table 2 shows the results using monobromoacetic acid as the haloacetic acid and / or salt thereof.
  • the molecular weight of the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experiment Nos. 1 to 36 was measured by the method described in the above embodiment. Further, the kinematic viscosity of the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experiment Nos. 2, 20, 21, 23, 27, and 36 was measured by the method described in the above-described embodiment. 2 /s,91.8mm 2 /s,54.7mm 2 / s, was a 92mm 2 /s,9.69mm 2 /s,121.10mm 2 / s .
  • the carboxymethylation rate of the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experiment Nos. 1 to 36 was determined from the integrated value of 1 H-NMR spectrum by the following method.
  • sample preparation 7 mg of a sample and 1 mg of sodium 4,4-dimethyl-4-silapentanesulfonate (DSS) as an internal standard substance were dissolved in 0.7 mL of heavy water, transferred to an NMR sample tube, and capped.
  • DSS sodium 4,4-dimethyl-4-silapentanesulfonate
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid and / or salt thereof of the present invention has little stickiness, good tactile feel, little stickiness, good touch (has a smooth feel), and has a texture. Since it is good, it can be used, for example, as a component of pharmaceuticals, cosmetics and foods.
  • modified hyaluronic acid having a relatively low molecular weight (less than 800,000) and a high carboxymethylation rate (60% or more and 200% or less) is used.
  • a relatively low molecular weight less than 800,000
  • a high carboxymethylation rate 60% or more and 200% or less
  • Example 1 Water retention test> The weighing bottle was placed in a vacuum dryer together with 10 g of phosphorus (V) oxide and dried at 60 ° C. for 30 minutes under reduced pressure. After the dried weighing bottle was cooled in a desiccator, the weight of the empty weighing bottle was measured, and 1.0 g of the 1.0% solution of the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid of the above experiment numbers 6, 12 and 23 was weighed. did.
  • FIG. 1 shows the measurement results of the water retention of the modified hyaluronic acid and the hyaluronic acid.
  • the left side is the water retention rate of hyaluronic acid (unmodified), and the right side is the water retention rate of carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid, which are shown in pairs for each molecular weight.
  • FIG. 1 shows that the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid of the present invention has a higher water retention rate than hyaluronic acid having the same molecular weight.
  • ⁇ Test Example 2 Sensory test> Sensory evaluation was performed about the viscosity (visual observation) and feel of the modified hyaluronic acid of the experiment number 21. In the sensory evaluation, hyaluronic acid (both manufactured by QP Corporation) having a molecular weight of 800,000 and a molecular weight of 1.17 million was used as a control.
  • Evaluation was performed by 6 adult men and women (5 men and 1 woman) as panelists, and the viscosity (visual observation) and feel of molecular weight of 800,000 were evaluated based on the following evaluation criteria.
  • the average of the evaluation results of 6 people is shown in FIGS. 2 and 3, respectively.
  • the evaluation sample used the aqueous solution whose concentration of each sample is 1%. Moreover, about the touch, the touch when this aqueous solution was apply
  • Viscosity visual: 5 points (high viscosity), 4 points (slightly high viscosity), 3 points (normal viscosity), 2 points (slightly low viscosity), 1 point (low viscosity)
  • Feel 5 points (smooth), 4 points (less sticky, rather smooth) 3 points (sticky), 2 points (slightly sticky), 1 point (sticky)
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid of the present invention is less sticky and dull and has a low viscosity appearance as compared to hyaluronic acid having the same molecular weight. I understand that.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid of the experiment number 21 was obtained by carrying out the reaction at a temperature of 30 ° C. or less, it was recognized visually to be white, and b representing the hue of the color Since the value is 5 or less, it can be understood that the whiteness is high.
  • the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid having the experiment numbers 18 and 30 was obtained by carrying out the reaction at a temperature exceeding 30 ° C., so that browning was visually observed and b represents the hue of the color. Since the value greatly exceeded 5, it can be understood that the whiteness is low.
  • ⁇ Formulation example 1 lotion>
  • a lotion containing the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 was prepared according to the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.2% Sodium hyaluronate 0.1% Hydrolyzed hyaluronic acid 0.1% Hydrolyzed alkyl hyaluronate (C12-13) glyceryl 0.1% Collagen peptide 0.1% 1,3-butylene glycol 5.0% Glycerol 3.0% Isostearyl alcohol 0.1% Tocopherol acetate 0.1% POE (20) sorbitan monolaurate 0.5% POE (15) lauryl alcohol ether 0.5% Zinc pyrrolidonecarboxylate 0.1% Ethylparaben 0.1% Methylparaben 0.15% Ethanol 5.0% Perfume Appropriate amount Purified water Remaining
  • ⁇ Formulation Example 2 Latex>
  • an emulsion was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the following formulation.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.3% Pentylene glycol 5.0% Glycerol 3.0% Squalane 5.0% Stearic acid 0.5% Stearyl alcohol 2.0% Vaseline 4.0% Sorbitan stearate 1.0% POE (10) monostearate 1.0% Carboxy vinyl polymer 0.5% Polyquaternium-51 0.1% Methylparaben 0.15% Propylparaben 0.1% Potassium hydroxide 0.1% BHT 0.02% EDTA-2 sodium 0.02% Perfume Appropriate amount Purified water Remaining
  • a cream (emollient cream) was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 2 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental example 2) 0.5% Polyethylene glycol 4.0% 1,3-propanediol 6.0% Squalane 11.0% Dimethicone 1.0% Cetanol 6.0% Stearic acid 2.0% Hydrogenated cocoglyceryl 4.0% Tricaprylin 8.0% Glycerol monostearate 3.0% POE (20) cetyl alcohol ether 2.0% Coenzyme Q10 0.03% Ceramide 0.1% Dilauroyl glutamate ricin sodium 0.1% EDTA-2 sodium 0.02% Propylparaben 0.1% Methylparaben 0.15% Perfume appropriate amount Purified water remaining
  • ⁇ Formulation example 4 essence>
  • a cosmetic liquid (whitening moisturizing essence) was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 2 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental example 2) 0.8% Sodium hyaluronate 0.2% Hydrolyzed hyaluronic acid 0.1% 1,3-butylene glycol 5.0% Glycerin 1.5% POE sorbitan monostearate 1.0% Sorbitan monostearate 0.5% Xanthan gum 0.2% Sodium alginate 0.2% Carboxyvinyl polymer 0.2% Potassium hydroxide 0.1% Olive oil 0.2% Tocopherol 0.1% EDTA-2 sodium 0.02% Arginine 0.15% Dipotassium glycyrrhizinate 0.05% Arbutin 0.2% Retinol palmitate 0.2% Cousin extract 0.2% Seaweed extract 0.2% Tranexamic acid 0.1% Elastin 0.
  • ⁇ Formulation example 5 serum pack>
  • a cosmetic liquid pack (paste peel-off type) was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.5% Polyvinyl acetate emulsion 17.0% Polyvinyl alcohol 11.0% Sorbitol 5.0% Polyethylene glycol 400 5.0% Squalane 2.5% POE sorbitan monostearate 1.0% Titanium oxide 4.0% Talc 8.0% Ethanol 8.0% Methylparaben 0.15% Perfume Appropriate amount Purified water Remaining
  • a face wash (cleansing foam) was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.2% Cationized hyaluronic acid 0.1% (Hypo Veil, manufactured by QP Corporation)
  • Glycerin 10.0% Polyethylene glycol 400 15.0% Dipropylene glycol 10.0% Sodium lauroyl glutamate 20.0% POE (2) monostearate 5.0% Palm fatty acid sodium glutamate 8.0% Alkyl betaine 2.0% EDTA-2 sodium 0.02% Propylparaben 0.1% Methylparaben 0.15% Perfume Appropriate amount Purified water Remaining
  • ⁇ Formulation example 7 Sunscreen>
  • a sunscreen (milky lotion) blended with the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 was prepared according to the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.2% 1,3-butylene glycol 3.0% Dipropylene glycol 3.0% Cyclomethicone 5.0% Dimethicone 5.0% Cetanol 1.0% Vaseline 1.0% Octyl methoxycinnamate 5.0% Titanium oxide 2.0% Zinc oxide 2.0% Sorbitan stearate 1.0% POE (20) sorbitan monostearate 1.0% Phenoxyethanol 0.8% Methylparaben 0.1% Perfume Appropriate amount Purified water Remaining
  • a lip balm was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.1% Microcrystalline wax 1.5% Ceresin 12.0% Squalane 10.0% Decamethyltetrasiloxane 10.0% Diisostearyl malate 5.0% Candelilla wax 2.0% Vaseline 8.0% Glyceryl hydroxystearate 2.0% Menthol 0.05% Liquid paraffin 1.0% Tocopherol acetate 0.1% Tocopherol 0.05% Propylparaben 0.1% Perfume Appropriate amount Purified water Remaining
  • ⁇ Formulation example 9 shampoo>
  • a shampoo was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.2% Cationized hyaluronic acid 0.1% (Hypo Veil, manufactured by QP Corporation) POE (20) sodium lauryl ether sulfate 11.0% Lauroyl sodium aspartate 10.0%
  • coconut oil fatty acid amidopropyl betaine 4.0%
  • ⁇ Formulation example 10 hair conditioner>
  • a hair conditioner was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.3% Cationized hyaluronic acid 0.2% (Hypo Veil, manufactured by QP Corporation)
  • Stearyl alcohol 4.0% Cetanol 1.5% Hydroxyethyl urea 1.0% Aminopropyl dimethicone 1.5% Dimethicone 0.5% Hydrolyzed silk 1.0% 1,3-butylene glycol 1.0% Glycerol 3.0% Cetyl 2-ethylhexanoate 2.0% Isocetyl myristate 0.4% L-Arginine 0.1% Trehalose 0.1% Sorbitol 0.1% Keratin peptide 0.1% POE (4) stearyl ether 1.0% Stearic acid dimethylaminopropylamide 3.0% Distearyldimethyl
  • ⁇ Formulation Example 11 Soft capsule>
  • a soft capsule was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the following formulation.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 20% Olive oil 35% Beeswax 5% Medium chain triglyceride 5% Gelatin 25% Glycerin 10%
  • ⁇ Formulation example 12 Powder>
  • a powder (granule) was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 10% Lactose 60% Corn starch 25% Hypromellose 5%
  • ⁇ Formulation example 13 soft capsule>
  • a tablet was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 25% Lactose 24% 20% crystalline cellulose Corn starch 15% Dextrin 15% Silicon dioxide 1%
  • ⁇ Formulation example 14 jelly beverage>
  • a white peach jelly beverage containing a spout pouch was prepared by blending the carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid obtained in Experimental Example 1 with the formulation described below.
  • Carboxymethyl group-containing modified hyaluronic acid (Experimental Example 1) 0.20% Xanthan gum 1.00% Carrageenan 0.5% Dextrin alcohol 3.0% Sucralose 1% 4-fold concentrated white peach juice 5.00% Citric acid 0.60% Sodium citrate 0.20% L-ascorbic acid 0.10% Peach flavoring 0.20% Purified water remaining

Abstract

　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法は、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含み、前記含水溶媒は、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であり、前記混合液中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％以下である。

Description

カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩および／またはその製造方法
　本発明は、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩および／またはその製造方法、ならびにこれを含む化粧料、食品組成物および医薬組成物に関する。
　例えばヒアルロン酸等の水溶性多糖類は、水酸基やカルボキシル基を含有するものが多く、これらの基の間で形成される水素結合に起因して、粘度が高いものが多い（特開昭６３－５７６０２号公報）。水溶性多糖類の粘度の高さは、外用医薬品および化粧品においては、手触りの悪さをもたらすことがあり、また、内服医薬品および食品においては、食感の悪さをもたらすことがある。このため、保水力を有し、かつ、べとつきが少なく、食感に優れた水溶性多糖類が求められている。
　本発明は、白色度が高く、かつ、カルボキシメチル化率が高いカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を簡便に得ることができる、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法を提供する。
　本発明はまた、白色度が高く、かつ、カルボキシメチル化率が高いカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを含む化粧料、食品組成物および医薬組成物を提供する。
　本願発明者は、特定の条件にてヒアルロン酸をハロ酢酸および／またはその塩と反応させることにより、白色度が高く、かつ、所定のカルボキシメチル化率を有する修飾ヒアルロン酸が得られることを見出した。
　また、本願発明者は、かかる方法を用いて得られた、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、白色度が高く、保水力に優れ、かつ低粘度であることを見出した。
　１．本発明の一態様に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法は、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含み、前記含水溶媒は、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であり、前記混合液中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％以下である。
　２．上記１に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記ハロ酢酸は、クロロ酢酸および／またはブロモ酢酸であることができる。
　３．上記１または２に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記含水溶媒における前記ヒアルロン酸の濃度が０．０５ｇ／ｍＬ以上０．５ｇ／ｍＬ以下であることができる。
　４．上記１ないし３のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量が４，０００以上４００万以下であることができる。
　５．上記１ないし４のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、得られるカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の色の色相を表すｂ値が５以下であることができる。
　６．上記１ないし５のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記反応させる工程によって、分子量が８０万以上である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を得ることができる。
　７．上記６に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記反応させる工程によって、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が５％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を得ることができる。
　８．本発明の一態様に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、分子量が８０万以上であり、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が５％以上２００％以下である。
　９．上記８に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、動粘度が３０ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下であることができる。
　１０．上記８または９に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、ヒアルロン酸を構成する水酸基のうち少なくとも一部の水酸基の水素原子が、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基に置換されていることができる。
　１１．上記８ないし１０のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、色の色相を表すｂ値が５以下であることができる。
　１２．上記１ないし５のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記反応させる工程によって、分子量が４，０００以上８０万未満である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を得ることができる。
　１３．上記１２に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、前記反応させる工程によって、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を得ることができる。
　１４．本発明の一態様に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、分子量が４，０００以上８０万未満であり、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を得ることができる。
　１５．上記１４に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、動粘度が１ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下であることができる。
　１６．上記１４または１５に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、ヒアルロン酸を構成する水酸基のうち少なくとも一部の水酸基の水素原子が、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基に置換されていることができる。
　１７．上記１４ないし１６のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、色の色相を表すｂ値が５以下であることができる。
　１８．本発明の一態様に係る化粧料は、上記８ないし１１、１４ないし１７のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。
　１９．本発明の一態様に係る食品組成物は、上記８ないし１１、１４ないし１７のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。
　２０．本発明の一態様に係る医薬品組成物は、上記８ないし１１、１４ないし１７のいずれかに記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。
　上記１ないし７、１２および１３に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法によれば、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含み、前記含水溶媒は、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であり、前記混合液中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％以下であることにより、白色度が高く、かつ、所定のカルボキシメチル化率を有する修飾ヒアルロン酸を簡便に得ることができる。
　上記８ないし１１に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、分子量が８０万以上であり、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であり、また、上記１４ないし１７に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、分子量が４，０００以上８０万未満であり、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下であることにより、保水力を有し、かつ、同程度の分子量のヒアルロン酸と比較して粘度が小さい。これにより、該カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩は、白色度が高いのに加えて、べたつきが少なく、手触りが良好であり（サラサラした触感を有する）、かつ、食感が良好であるため、例えば医薬品、化粧品および食品の成分として使用することができる。
図１は、本発明の一実施例に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の保水率の測定結果を示す図である。 図２は、本発明の一実施例に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の粘度に関する官能検査の結果を示す図である。 図３は、本発明の一実施例に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の感触に関する官能検査の結果を示す図である。
　以下、図面を参照しつつ、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、格別に断らない限り、「部」は「質量部」を意味し、「％」は「質量％」を意味する。
　[カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法]
　本発明の一実施形態に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩（本明細書において、単に「修飾ヒアルロン酸類」と記載することもある。）の製造方法は、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含む。ここで、前記含水溶媒は、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であり、前記混合液中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％以下である。
　上記反応させる工程において、反応液（含水溶媒）中にヒアルロン酸および／またはその塩の少なくとも一部（好ましくは、ヒアルロン酸および／またはその塩の全部または大部分）とハロ酢酸および／またはその塩とが溶解した状態で該ヒアルロン酸および／またはその塩と該ハロ酢酸および／またはその塩とを反応させることができる。この場合、ヒアルロン酸および／またはその塩とハロ酢酸および／またはその塩とが溶解している点で、前記反応液は目視にて透明であってもよい。
　＜原料ヒアルロン酸および／またはその塩＞
　本発明において、「ヒアルロン酸」とは、グルクロン酸とＮ－アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類をいう。また、「ヒアルロン酸の塩」としては、特に限定されないが、食品または薬学上許容しうる塩であることが好ましく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
　ヒアルロン酸は、基本的にはβ－Ｄ－グルクロン酸の１位とβ－Ｄ－Ｎ－アセチル－グルコサミンの３位とが結合した２糖単位を少なくとも１個含む２糖以上のものでかつβ－Ｄ－グルクロン酸とβ－Ｄ－Ｎ－アセチル－グルコサミンとから基本的に構成され、２糖単位が複数個結合したものである。該糖は不飽和糖であってもよく、不飽和糖としては、非還元末端糖、通常、グルクロン酸の４，５位炭素間が不飽和のもの等が挙げられる。
　本実施形態に係る製造方法に用いられる原料である原料ヒアルロン酸および／またはその塩は、動物等の天然物（例えば鶏冠、さい帯、皮膚、関節液などの生体組織など）から抽出されたものでもよく、または、微生物、動物細胞もしくは植物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的または酵素的に合成されたものなどを使用することができる。
　原料ヒアルロン酸および／またはその塩としては、当該粗抽出物および精製物のいずれを用いてもよいが、精製物、具体的には、カルボキシメチル化が円滑に進行できる点で、純度が９０％（質量比）以上の原料ヒアルロン酸および／またはその塩を用いることが好ましい。
　＜原料ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量＞
　本実施形態に係る製造方法において、前記反応させる工程で溶解させる原料ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量は通常、カルボキシメチル化を円滑に行うことができる点で、４，０００以上４００万以下であることが好ましく、３００万以下であることがより好ましい。なお、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量は、下記の方法にて測定することができる。
　＜分子量の測定方法＞
　即ち、約０．０５ｇの（精製）ヒアルロン酸（本品）を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液及びこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液および０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十六改正）一般試験法の粘度測定法（第１法毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（Ａ））、各濃度における還元粘度を算出する（式（Ｂ））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（Ｃ））に代入し、平均分子量を算出する（Ｔｏｒｖａｒｄ　Ｃ　Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｍａｒｉｏｎ　Ｒｙａｎ，ａｎｄ　Ａｄｏｌｐｈ　Ｐｉｅｔｒｕｓｚｋｉｅｗｉｃｚ，”Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　Ａｃｉｄ”,　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ａｃｔａ．，４２,４７６－４８５(１９６０)、四方田千佳子、「ヒアルロン酸ナトリウム製剤のＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによる分子量評価」、国立衛研報、第１２１号，０３０－０３３(２００３)）。
　（式Ａ）比粘度＝｛試料溶液の所要流下秒数｝／（０．２ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム溶液の所要流下秒数）｝－１
　（式Ｂ）還元粘度（ｄＬ／ｇ）＝比粘度／（本品の換算した乾燥物に対する濃度ｇ／１００ｍＬ））
　（式Ｃ）極限粘度（ｄＬ／ｇ）＝３．６×１０－４Ｍ０．７８
Ｍ：平均分子量
　＜原料ヒアルロン酸および／またはその塩の含有量＞
　原料ヒアルロン酸および／またはその塩において、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の含有量は、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の純度の指標であり、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の含有量が多いほど、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の純度が高いといえる。
　本発明において、原料ヒアルロン酸および／またはその塩におけるヒアルロン酸の含有量は、カルバゾール硫酸法（例えば日本薬局方）にて測定されたグルクロン酸定量値から算出された値である。
　カルバゾール硫酸法は、ホウ酸ナトリウム・硫酸溶液中にヒアルロン酸水溶液を加えて混和し、ヒアルロン酸を加熱分解した後冷却し、カルバゾール・エタノール溶液を加えて混和し、加熱後放冷した試料液の吸光度（５３０ｎｍ）を測定する方法である。同様に処理したＤ－グルクロノラクトンを用いて検量線を作成し、Ｄ－グルクロノラクトン換算値を算出した後、１．１０２を乗じてグルクロン酸定量値を求める。得られたグルクロン酸定量値に（ヒアルロン酸の分子量／グルクロン酸の分子量）を乗じてヒアルロン酸の含有量を算出する。
　＜カルボキシメチル化＞
　本発明において、「修飾ヒアルロン酸および／またはその塩」とは、少なくとも一部に有機基が導入されているヒアルロン酸および／またはその塩のことをいい、ヒアルロン酸および／またはその塩とは異なる構造を有する。また、本発明において「有機基」とは、炭素原子を有する基のことをいう。
　また、本発明において、「カルボキシメチル基」とは、「－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈ」または「－ＣＨ２－ＣＯ２ －」で表される基のことをいう。
　したがって、本発明において、「カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩」とは、少なくとも一部にカルボキシメチル基が導入されているヒアルロン酸および／またはその塩のことをいう。
　より具体的には、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類では、例えば、ヒアルロン酸（下記式（１）参照）を構成する水酸基（下記式（１）において、ヒアルロン酸を構成するＮ－アセチルグルコサミンのＣ－４位、Ｃ－６位、ならびに、ヒアルロン酸を構成するグルクロン酸のＣ－２位、Ｃ－３位）の少なくとも一部の水酸基の水素原子が、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基)に置換されていることができる。すなわち、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類では、これらの位置にある水酸基のうち１または２以上の位置にある水酸基の水素原子が、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基に置換されていてもよい。
　本発明において、「ヒアルロン酸を構成する２糖単位」とは、ヒアルロン酸を構成する、隣り合って結合する２糖（グルクロン酸およびＮ－アセチルグルコサミン）で構成される１単位をいい、「ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率」とは、該１単位に対する、該１単位に含まれるカルボキシメチル基の数であり、より具体的には、該１単位を１００％とした場合、該１単位に対する、該１単位に含まれるカルボキシメチル基の数の割合（％）をいう。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
 　（式中、ｎは１以上７，５００以下の数を示す。）
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は例えば、下記式（２）で表される化合物であることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 　（式中、Ｒ１～Ｒ５は独立して、水酸基、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈで表される基、または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基を表し（ただし、Ｒ１～Ｒ５がいずれも水酸基を表す場合を除く。）ｎは１以上７，５００以下の数を示す。）
　＜ｐＨ＞
　本実施形態に係る製造方法において、水酸基の求核性を高めることができる点で、前記反応に使用する塩基性条件下で行われることが好ましく、反応液（含水溶媒）のｐＨが９以上（９以上１４以下、好ましくは１０以上１４以下、より好ましくは１１以上１４以下）であることがより好ましい。
　なお、反応液を塩基性に調整するために、塩基性電解質を反応液中で使用することができる。塩基性電解質としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属の水酸化物、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化バリウム等のアルカリ土類金属の水酸化物が挙げられる。後述する第１の例および第２の例のいずれの修飾ヒアルロン酸類を効率良く得ることができる点で、反応液中の塩基性電解質の濃度は例えば、０．２モル／Ｌ以上１０モル／Ｌ以下であり、好ましくは、０．５モル／Ｌ以上であり、８モル／Ｌ以下である。
　また、後述する第１の例および第２の例のいずれの修飾ヒアルロン酸類を効率良く得ることができる点で、前記含水溶媒における前記ヒアルロン酸の濃度が０．０５ｇ／ｍＬ以上０．５ｇ／ｍＬ以下であることが好ましい。
　＜ハロ酢酸および／またはその塩＞
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類の製造方法（以下、単に「本実施形態に係る製造方法」と略することもある。）において、ハロ酢酸および／またはその塩は、カルボキシメチル基を原料ヒアルロン酸および／またはその塩に導入するために使用される。
　ハロ酢酸は例えば、モノハロ酢酸および／またはその塩であることができ、より具体的には、クロロ酢酸および／またはその塩、または、ブロモ酢酸またはその塩であることが好ましい。ハロ酢酸の塩は例えば、クロロ酢酸のアルカリ金属塩および／またはブロモ酢酸のアルカリ金属塩であることが好ましく、クロロ酢酸ナトリウムおよび／またはブロモ酢酸ナトリウムであることがより好ましい。
　＜ハロ酢酸および／またはその塩の使用量＞
　ハロ酢酸および／またはその塩の使用量は通常、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の使用量の１０％以上５００％以下（質量比）であり、５０％以上２００％以下（質量比）あることが好ましい。
　＜含水溶媒＞
　本実施形態に係る製造方法において、前記含水溶媒が、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であることにより、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の溶解性に優れている。
　含水溶媒が水溶性有機溶媒と水との混合液である場合、すなわち、含水溶媒が水および水溶性有機溶媒の両方を含む場合、ヒアルロン酸の溶解性を高めることができる点で、該含水溶媒中における水溶性有機溶媒の割合は通常６０ｖ／ｖ％以下（０ｖ／ｖ％を超えて６０ｖ／ｖ％以下）であり、４０ｖ／ｖ％以下（０ｖ／ｖ％を超えて４０ｖ／ｖ％以下）であることが好ましい。
　水溶性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールなどのアルコール系溶媒、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン系溶媒、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等を挙げることができ、これらを単独でまたは組み合わせて使用することができる。このうち、イソプロパノール、エタノール等の炭素原子数１、２または３の低級アルコールが好ましい。
　＜反応温度＞
　前記反応において、カルボキシル化を円滑に進行でき、かつ、分子量の低下を抑制できる点から、反応液の温度は通常３０℃以下（好ましくは０℃を超えかつ３０℃以下）であることが好ましく、１０℃以下（好ましくは０℃を超えかつ３０℃以下）であることがより好ましい。特に、反応液の温度を１０℃以下とすることにより、高分子量（８０万以上）の修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができる。
　例えば、ハロ酢酸および／またはその塩としてクロロ酢酸および／またはその塩を使用する場合、カルボキシメチル化が円滑に進行でき、かつ、得られる修飾ヒアルロン酸類の褐変を抑えることができる点で、前記反応における反応液の温度は通常（好ましくは０℃を超えかつ３０℃以下）であることができ、１℃以上３０℃以下であることが好ましい。
　また、例えば、ハロ酢酸および／またはその塩としてブロモ酢酸および／またはその塩を使用する場合、カルボキシメチル化が円滑に進行でき、得られる修飾ヒアルロン酸類の褐変および分子量の低下を抑えることができる点で、前記反応における反応液の温度は通常１０℃以下（好ましくは０℃を超えかつ１０℃以下）であることができ、１℃以上１０℃以下であることが好ましい。
　より具体的には、後述する第１の例である、高分子量（例えば分子量８０万以上）であり、かつ、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率（以下、単に「カルボキシメチル化率」ともいう。）が高い（例えば５０％以上、好ましくは５０％以上２００％以下））修飾ヒアルロン酸類を製造するためには、ハロ酢酸および／またはその塩として、ブロモ酢酸および／またはその塩を使用して、反応液の温度を１０℃以下（例えば、０℃を超えかつ１０℃以下）で反応を行うことが好ましい。
　また、後述する第２の例である、低分子量（例えば分子量８０万未満）であり、カルボキシメチル化率が高い（例えば６０％以上、好ましくは６０％以上２００％以下）修飾ヒアルロン酸類を製造するためには、反応液の温度を１０℃以上（例えば、１０℃以上３５℃以下、好ましくは１５℃以上、より好ましくは２０℃以上、さらに好ましくは室温）で反応を行うことが好ましい。
　＜反応時間＞
　前記反応において、カルボキシル化を円滑に進行でき、かつ、分子量の低下を抑制できる点から、反応時間は通常３０分以上１００時間以下であることが好ましく、６０分以上６０時間以下であることがより好ましい。
　＜第１製造例＞
　本実施形態に係る製造方法によれば、分子量が８０万以上である、修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができる。すなわち、本実施形態に係る製造方法によれば、高分子量であり、かつ、白色度が高い修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができる。
　この場合、得られる修飾ヒアルロン酸類のカルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であることができる。
　＜第２製造例＞
　本実施形態に係る製造方法において、分子量が４，０００以上８０万未満である、修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができる。
　この場合、得られる修飾ヒアルロン酸類のカルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下であることができる。すなわち、本実施形態に係る製造方法によれば、分子量が４，０００以上８０万未満と比較的低く、カルボキシメチル基が６０％以上２００％以下と高く、かつ、白色度が高い修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができる。
　[カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩]
　＜分子量＞
　本実施形態に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩（修飾ヒアルロン酸類）は、分子量が４，０００以上２００万以下である。本発明において、カルボキシルメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量は、以下の方法にて測定することができる。
　ゲル濾過カラムを用いて、分子量が既知である複数の(精製)ヒアルロン酸（基準物質）を液体クロマトグラフィー分析することで、それらの保持時間より検量線を作成する。同様に、測定対象である修飾ヒアルロン酸類を液体クロマトグラフィー分析し、前記検量線を用いて分子量を求めることで、修飾ヒアルロン酸類の分子量を求めることができる。
　前記液体クロマトグラフィー分析に使用することができる液体クロマトグラフィー分析装置としては、例えば、Ｗａｔｅｒｓ　Ａｌｌｉａｎｃｅ　２６９０　ＨＰＬＣ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　Ｍｏｄｕｌｅ（Ｗａｔｅｒｓ社製）、Ｗａｔｅｒｓ　Ａｌｌｉａｎｃｅ　２６９５　ＨＰＬＣ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　Ｍｏｄｕｌｅ（Ｗａｔｅｒｓ社製）、１２００　Ｓｅｒｉｅｓ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）が挙げられる。また、液体クロマトグラフィー分析に使用することができるカラムとしては、例えば、ｓｈｏｄｅｘ社製　配位子交換クロマトグラフィー用カラム（配位子交換モード＋サイズ排除モード)、型名「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０１」、「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０２」、「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０３」、「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０４」、「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０５」、「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０６」、「ＳＵＧＡＲ　ＫＳ－８０７」や、ＴＯＳＯＨ製　サイズ排除クロマトグラフィーカラム、型名「ＴＳＫｇｅｌ　ＧＭＰＷ」が挙げられる。
　＜カルボキシメチル化率＞
　本発明において、修飾ヒアルロン酸類のカルボキシメチル化率は、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルにおいて、ヒアルロン酸骨格中のＣ－２位に結合するＮ－アセチル基のメチル基（－ＣＨ３）のプロトンを示すピーク（２ｐｐｍ付近に発現）の積算値に対する、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基中のメチレン基（－ＣＨ２－）のプロトンを示すピーク（３．８ｐｐｍ以上４．２ｐｐｍ以下の範囲に発現）の積算値の割合（％）で表される。
　また、同程度の分子量を有するヒアルロン酸に対して保水力が高いうえに、粘度が抑えられている点で、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、カルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であることができ、１０％以上２００％以下であることが好ましく、５０％以上２００％以下であることがより好ましく、６０％以上２００％以下であることがさらに好ましく、７０％以上２００％以下であることが特に好ましい。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類によれば、カルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であることにより、同程度の分子量を有するヒアルロン酸と比較して粘度が低い。このため、例えば、医薬品、化粧品、および食品の成分として使用することができる。
　＜動粘度＞
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類の動粘度は、動粘度が１ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下である。本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類の動粘度は、ウベローデ粘度計（柴田科学器械工業株式会社製）を用いて測定することができる。この際、流下秒数が２００秒以上１，０００秒になるような係数のウベローデ粘度計を選択する。また、測定は３０℃の恒温水槽中で行ない、温度変化のないようにする。ウベローデ粘度計により測定された前記水溶液の流下秒数と、ウベローデ粘度計の係数との積により、動粘度（単位：ｍｍ２／ｓ）を求めることができる。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、同程度の分子量を有するヒアルロン酸および／またはその塩と比較して、動粘度が小さいため、べたつきが少なく、触感が良好（サラサラした触感を有する）であり、かつ、食感が良好である。
　＜色相＞
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を例えば化粧料、食品組成物、および医薬品などに使用する場合、製品の色に影響を及ぼさないという点から、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は色の明度が高く、かつ、黄味が弱いほうが好ましい。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、色の色相を表すｂ値（以下、単に「ｂ値」ともいう）が５以下であることができ、４以下であることが好ましく、３以下であることがより好ましく、また、０以上であることが好ましい。
　ｂ値は、物質が有する色の色相（ｈｕｅ）を規定する値であり、ｂ値が大きいほど黄味が強いことを示し、一方、ｂ値が小さいほど青味が強いことを示す。
　また、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、色の明度を表すＬ値（以下、単に「Ｌ値」ともいう）が９０以上（９０以上１００以下）であることができ、Ｌ値が９２以上であることが好ましく、Ｌ値が９３以上であることがより好ましい。
　Ｌ値は、物質が有する色の明度（ｌｉｇｈｔｎｅｓｓ）を規定する値であり、０～１００の間の数値で表される。Ｌ値が１００である場合最も明るい状態（完全な白色）を示し、一方、Ｌ値が０である場合最も暗い状態（完全な黒色）を示す。
　ｂ値およびＬ値は、ＪＩＳ　Ｚ　８７３０によって規定される色差表示方法によって、Ｌａｂ系色度座標で表示されることができる。また、ｂ値およびＬ値は、市販の色差計により測定することができる。なお、本発明においては、固体の修飾ヒアルロン酸類について、ｂ値およびＬ値を測定するものとする。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類のｂ値およびＬ値は、例えば、色差計（商品名「ＣＯＬＯＲ　ＡＮＤ　ＣＯＬＯＲ　ＤＩＦＦＥＲＥＮＣＥ　ＭＥＴＥＲＭＯＤＥＬ　１００１　ＤＰ」，日本電色工業株式会社製）に１０Φレンズを装着し、ガラスセルに測定試料１ｇ以上を敷き詰めて測定することができる。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類によれば、色差計により測定されたｂ値が５以下（さらには、Ｌ値が９０以上）であることにより、さらなる精製工程を必要とせずに、化粧料、食品、および医薬品の原料として使用することができる。
　＜第１の例（高分子量体）＞
　（分子量および動粘度）
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類の第１の例（本発明において「高分子量体」ともいう。）は、カルボキシメチル化率が５％以上２００％以下（好ましくは１０％以上、４０％以上であってもよく、あるいは５０％以上であってもよく、より好ましくは６０％以上、さらに好ましくは７０％以上）であり、かつ、分子量が８０万以上（好ましくは８０万以上２００万以下）である。この場合、第１の例は、動粘度が３０ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下（好ましくは５０ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下）であることができる。
　第１の例である修飾ヒアルロン酸類は、分子量が８０万以上であり、カルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であることにより、高分子量でありながら、同程度の分子量のヒアルロン酸よりも粘度が低いため、例えば医薬品や化粧品の成分として使用した場合、手触りが良好である。
　分子量が８０万以上のヒアルロン酸は、これより低分子のヒアルロン酸と比較して粘度が高いため、例えば医薬品や化粧品の成分として使用した場合、ヒアルロン酸の濃度が高くなると、使用時にべたつきを感じることがある。これに対して、該第１の例である修飾ヒアルロン酸類は、分子量が８０万以上であり、かつ、カルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であることにより、分子量が８０万以上と高分子量であるにも関わらず、同程度の分子量のヒアルロン酸よりも粘度が低いため、例えば医薬品や化粧品の成分として使用した場合、べたつきが少なく、手触りが良好であるうえ（サラサラした触感を有する）、優れた食感を有し、かつ、白色度が高い。
　＜第２の例（低分子量体）＞
　（分子量および動粘度）
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類の第２の例（本発明において「低分子量体」ともいう。）は、カルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下（好ましくは７０％以上２００％以下）であり、かつ、分子量が４，０００以上８０万未満である。この場合、第２の例は、動粘度が１ｍｍ２／ｓ以上３０ｍｍ２／ｓ以下（好ましくは１０ｍｍ２／ｓ以上２９ｍｍ２／ｓ以下）であることができる。
　第２の例である修飾ヒアルロン酸類は、分子量が４，０００以上８０万未満であり、カルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下であることにより、同程度の分子量のヒアルロン酸よりも粘度が低い。このため、例えば医薬品や化粧品の成分として使用した場合、手触りが良好であるうえ、優れた食感を有し、かつ、白色度が高い。
　＜塩の変換＞
　本実施形態に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸からその塩へと変換する方法、ならびに、本実施形態に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の塩から該修飾ヒアルロン酸へと変換する方法は、特に限定されるわけではなく、公知の方法を用いて行なうことができる。
　本実施形態に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸からその塩へと変換する方法としては、例えば、アルカリ水溶液（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化アンモニウム等の水溶液）を用いて処理する方法が挙げられる。また、本実施形態に係るカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の塩から該修飾ヒアルロン酸へと変換する方法としては、例えば、酸水溶液（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の水溶液）を用いて処理する方法や、酸性陽イオン交換樹脂を用いる方法が挙げられる。
　＜用途＞
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、該カルボキシメチル基を構成するカルボキシル基に起因して、高い保水効果を有する。このため、例えば皮膚等の生体組織において高い保水効果を有する。本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、生体組織の表面に塗布または接触して摂取させてもよいし、特に、顔、腕、手指、足、関節などの皮膚に塗布または接触させるのが好ましい。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、該カルボキシメチル基を構成するカルボキシル基に起因して、同程度の分子量を有するヒアルロン酸と比較して粘度が低い。このため、例えば化粧料に使用した場合、べたつきが少なく、手触りが良好である（サラサラした触感を有する）ため、化粧品の成分として使用することができる。そのうえ、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、水に対する溶解性に優れているため、例えば水を含有する種々の製品に使用できる。
　あるいは、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、経口摂取することができる。よって、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、例えば医薬品および食品の成分として使用することができる。
　[作用効果]
　＜公知技術（カルボキシメチル化セルロースの製造方法）＞
　本実施形態に係る製造方法の作用効果を説明するにあたり、まず、公知技術である、カルボキシメチル化セルロースの製造方法について説明する。
　カルボキシメチルセルロース（以下、「ＣＭＣ」ともいう）は例えば、乳化剤、増粘剤等として幅広く利用されている。このＣＭＣは、工業的には、セルロースを大量のアルカリ水で処理してアルカリセルロースとした後、含水有機溶媒中に分散させてモノハロ酢酸と反応させることにより、製造される（特開２０００－３４３０１号公報）。
　しかしながら、上記の方法を用いてヒアルロン酸をカルボキシメチル化しようとした場合、ヒアルロン酸のカルボキシメチル化が十分に進行しない。その理由として、ヒアルロン酸が含水有機溶媒に十分に溶解しないことが推測される。
　＜作用効果＞
　（修飾ヒアルロン酸類の製造方法）
　（１）褐変の防止
　本実施形態に係る製造方法によれば、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含むことにより、白色度が高い（例えばｂ値が５以下）修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができる。
　より具体的には、上記本実施形態に係る製造方法によれば、反応液（混合液）中で、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の少なくとも一部とハロ酢酸および／またはその塩とが溶解した状態で該ヒアルロン酸および／またはその塩と該ハロ酢酸および／またはその塩とを反応させることができる。このため、前記反応液中において、該原料ヒアルロン酸および／またはその塩と該ハロ酢酸および／またはその塩との反応性に優れているため、カルボキシメチル化が円滑に進行する。これにより、得られる修飾ヒアルロン酸類の褐変を防止することができるため、白色度が高い修飾ヒアルロン酸を簡便に得ることができる。
　このため、本実施形態に係る製造方法によれば、活性炭処理等の通常の精製を経なくても、白色度が高い修飾ヒアルロン酸類を簡便に得ることができるため、製造効率が優れている。なお、本実施形態に係る製造方法は、上記反応させる工程の後に、活性炭処理等の通常の精製を行うことを除外するものではない。
　（２）カルボキシメチル化率の調整
　本実施形態に係る製造方法によれば、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含むことにより、所定のカルボキシメチル化率を有する修飾ヒアルロン酸を得ることができる。ここで、カルボキシメチル化率は例えば、ハロ酢酸および／またはその塩の濃度および種類、ｐＨ、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の濃度および分子量、反応温度および反応時間を適宜選択することにより、調整することができる。
　（３）高いカルボキシメチル化率
　特に、本実施形態に係る製造方法によれば、上述したように、前記反応液中において、該溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩と該ハロ酢酸および／またはその塩との反応性に優れているため、カルボキシメチル化が円滑に進行することから、白色度が高く、かつカルボキシメチル化率が高い（例えば、５０％以上）修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を効率良く得ることができる。
　（４）後処理の簡便性
　本実施形態に係る製造方法では、上記反応させる工程において、生成した修飾ヒアルロン酸類は反応液中で溶解している。このため、該反応液に例えばエタノール等の有機溶媒を添加して、生成した修飾ヒアルロン酸類を沈殿させて回収することにより、生成した修飾ヒアルロン酸類と、反応剤であるハロ酢酸および／またはその塩とを容易に分離することができる。このため、後処理が簡便である。
　（修飾ヒアルロン酸類の作用効果）
　（１）保水効果の向上
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、カルボキシメチル基を有することにより、修飾されていない同程度の分子量のヒアルロン酸および／またはその塩と比較して、カルボキシル基をより多く含むため、保水効果がより優れている。
　より具体的には、該カルボキシメチル基中のカルボキシル基が水と水素結合を構成するため、該カルボキシル基に起因して保水力がより高くなると推測される。
　（２）優れた触感および食感
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類に含まれるカルボキシメチル基を構成するカルボキシルイオン（ＣＯ２－）の負電荷同士が反発することによって、該修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の立体構造中のからみが少なくなるため、粘度が低くなると推測される。
　したがって、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類によれば、分子量が８０万以上であり、カルボキシメチル化率が５％以上２００％以下であるか、または、分子量が４，０００以上８０万未満であり、カルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下であることにより、高い保水力を有し、かつ、同程度の分子量のヒアルロン酸と比較して粘度が小さい。これにより、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類はべたつきが少なく、触感が良好（サラサラした触感を有する）であり、かつ、食感が良好であるため、例えば医薬品、化粧品および食品の成分として使用することができる。
　（３）高い白色度
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、本実施形態に係る製造方法で得られたものであることにより、反応中の褐変が抑えられている。本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は例えば、色の色相を表すｂ値が５以下であり、白色度が高い。
　（４）優れた生体適合性
　カルボキシメチル基は生体適合性が高く、抗原性が低い。このため、カルボキシメチル基を有するカルボキシメチル化セルロースは、上述したように、化粧品、医薬品、食品等の幅広い用途に使用されている。さらに、ヒアルロン酸は、化粧品、医薬品、食品等の幅広い用途に使用されている。したがって、ヒアルロン酸の官能基の一部がカルボキシメチル化された、本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類は、生体適合性が高く、抗原性が低い。
　（５）着想の独創性
　なお、ヒアルロン酸は元来、水溶性に優れている点で、元来、難水溶性であるセルロースとは異なる。すなわち、セルロースは、水溶性の向上を目的としてカルボキシメチル化するのに対して、ヒアルロン酸のカルボキシメチル化は、水溶性の向上を目的とするというよりも、保水効果のさらなる向上を目的とするものである点で、セルロースのカルボキシメチル化とは着想および作用効果が全く異なる、新規でかつ独創性を有するものである。
　［化粧料］
　本発明の一実施形態に係る化粧料は、上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を含有する。本実施形態に係る化粧料における、修飾ヒアルロン酸類の含有量は例えば０．００１質量％以上５質量％以下であり、使用形態に応じて適宜決定することができる。
　本実施形態に係る化粧料の態様は特に限定されないが、例えば、皮膚用化粧料が挙げられる。上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を皮膚用化粧料に使用することにより、適度な粘度を有し、かつ、保水効果が高いため、皮膚に潤いを付与し、皮膚のかさつき感を改善することができる。
　本実施形態に係る皮膚用化粧料の態様としては、例えば、洗顔料、洗浄料、化粧水（例えば、美白化粧水）、クリーム（例えば、バニシングクリーム、コールドクリーム）、乳液、美容液、パック（例えば、ゼリー状ピールオフタイプ、ペースト状拭き取りタイプ、粉末状洗い流しタイプ）、クレンジング、ファンデーション、口紅、リップクリーム、リップグロス、リップライナー、頬紅、シェービングローション、アフターサンローション、デオドラントローション、ボディローション（ハンドケアローション、フットケアローションを含む）、ボディオイル、石鹸、入浴剤が挙げられる。
　本実施形態に係る化粧料にはさらに、以下の成分が配合されていてもよい。前記成分としては、例えば、カチオン化多糖類（例えば、カチオン化ヒアルロン酸、カチオン化ヒドロキシエチルセルロース、カチオン化グアーガム、カチオン化澱粉、カチオン化ローカストビーンガム、カチオン化デキストラン、カチオン化キトサン、カチオン化ハチミツ等）、アニオン界面活性剤（例えば、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキル硫酸エステル塩、オレフィンスルホン酸塩、脂肪酸塩、ジアルキルスルホコハク酸塩等）、非イオン界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘導体等）、陽イオン界面活性剤（例えば、アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等）、両性界面活性剤（例えば、アルキルベタイン、アルキルアミドプロピルベタイン、イミダゾリニウムベタイン、卵黄レシチン、大豆レシチン等）、油分（例えば、シリコーン、シリコーン誘導体、流動パラフィン、スクワラン、ミツロウ、カルナバロウ、オリーブ油、アボガド油、ツバキ油、ホホバ油、馬油等）、保湿剤（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム、加水分解ヒアルロン酸、アセチル化ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ジメチルシラノール、セラミド、ラウロイルグルタミン酸ジフィトステリルオクチルドデシル、フィトグリコーゲン、加水分解卵殻膜、トレハロース、グリセリン、アテロコラーゲン、ソルビトール、マルチトール、１，３－ブチレングリコール等）、高級脂肪酸（例えば、ラウリン酸、ベヘニン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸等）、高級アルコール（例えば、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、イソステアリルアルコール、バチルアルコール等）、多価アルコール（例えば、グリセリン、ジグリセリン、１，３－プロパンジオール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ペンチレングリコール等）、増粘剤（例えば、セルロースエーテル、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、パルミチン酸デキストリン等）、両性高分子樹脂化合物（例えば、ベタイン化ジアルキルアミノアルキルアクリレート共重合体等）、カチオン性高分子樹脂化合物（例えば、ビニルピロリドン／ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体カチオン化物、ポリジメチルジアリルアンモニウムハライド型カチオン性ポリマー等）、防腐剤（例えば、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール等）、酸化防止剤（例えば、トコフェノール、ＢＨＴ等）、金属封鎖剤（例えば、エデト酸塩、エチドロン酸塩等）、紫外線吸収剤（例えば、ベンゾフェノン誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、メトキシ桂皮酸誘導体等）、紫外線反射剤（例えば、酸化チタン、酸化亜鉛等）、タンパク質加水分解物（例えば、ケラチンペプチド、コラーゲンペプチド、大豆ペプチド、コムギペプチド、ミルクペプチド、シルクペプチド、卵白ペプチド等）、アミノ酸（例えば、アルギニン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ヒドロキシプロリン、システイン、セリン、Ｌ－テアニン等）、天然物エキス（クジンエキス、カジルエキス海草エキス、ユーカリエキス、ローヤルゼリーエキス、ローズマリーエキス、ブナの木エキス等）、その他の機能性成分（コエンザイムＱ１０、アルブチン、ポリクオタニウム５１、エラスチン、白金ナノコロイド、パルミチン酸レチノール、パンテノール、アラントイン、ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウム、リン酸アスコルビルマグネシウム、Ｌ－アスコルビン酸２－グルコシド、エラグ酸、コウジ酸、リノール酸、トラネキサム酸等）、リン脂質ポリマー、香料、色素が挙げられる。
　［食品組成物］
　本発明の一実施形態に係る食品組成物は、上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を含有する。本実施形態に係る食品組成物における、修飾ヒアルロン酸類の含有量は例えば０．００１質量％以上５質量％以下であり、使用形態に応じて適宜決定することができる。上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を食品組成物に使用することにより、同程度のヒアルロン酸と比較して粘度が抑えられているため、食感に優れている。
　本実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を含有する食品組成物の態様は特に限定されないが、例えば、主食である米飯加工食品、製パン類等、副食であるレトルト缶詰、冷凍食品、惣菜、乾燥食品等、マヨネーズ等調味料、飲料、菓子、デザート類、液状，ゲル状またはソフトカプセル状等のサプリメント類等の一般食品全般のほか、生理機能を表現することを許可された特定保健用食品全般を挙げることができる。
　［医薬品組成物］
　本発明の一実施形態に係る医薬品組成物は、上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を含有する。本実施形態に係る医薬品組成物における、修飾ヒアルロン酸類の含有量は例えば０．００１質量％５質量％以下であり、使用形態に応じて適宜決定することができる。上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類を医薬品組成物に使用することにより、同程度のヒアルロン酸と比較して粘度が抑えられているため、食感に優れている。
　本実施形態に係る医薬品組成物の使用形態には、特に制限はなく、粉末状、顆粒状、高濃度液状、低濃度液状等の使用形態とすることができる。上記実施形態に係る修飾ヒアルロン酸類の分子量の安定性を鑑み、液状より乾燥形態が好ましい。
　なお、本実施形態に係る医薬品組成物には、必要に応じて、増量剤、結合剤、滑沢剤、保存剤、酸化防止剤、香料、甘味料、酸味料、賦形剤等を配合することができる。また、ビタミンＣ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ１２、ビタミンＥ等のビタミン類、核酸、コンドロイチン硫酸、コラーゲン等の栄養成分、鉄、亜鉛等のミネラル成分等の各種栄養成分を配合することもできる。
　［実施例］
　以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。
　＜実験例１：カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の調製＞
　３０ｍＬのサンプル瓶に水酸化ナトリウム１．０４ｇを秤り取った後、水８ｍＬを添加して溶解させた。次に、ヒアルロン酸２．０ｇを添加し溶解させた後、モノクロロ酢酸ナトリウム１．５２ｇを添加して溶解させて、室温で４８時間静置した。ここで、前記反応液のｐＨは１３であった。その後、２００ｍＬビーカーにエタノール８０ｍＬを入れ、該反応液を撹拌しながら添加し、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を沈殿させた。その後、４００メッシュのろ布で沈殿を２００ｍＬビーカーに回収した後、１０％塩化ナトリウム水溶液４０ｍＬを添加して沈殿を溶解させた。さらに、８％塩酸水溶液でｐＨを調製した後、溶解液に撹拌しながらエタノール８０ｍＬを入れ、再度カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を沈殿させた。８０％含水エタノール１００ｍＬで３回洗浄した後、減圧濾過し、５５℃で３時間減圧乾燥することにより、実験番号１のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を得た。
　＜実験例２：カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の調製＞
　水酸化ナトリウムの濃度、含水溶媒の使用量、溶媒の種類、ハロ酢酸および／またはその塩の種類および使用量、反応温度、および反応時間を表１および表２のように変更した以外は、実施例１と同様の方法によって、実験番号２ないし３６のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を得た。なお、本実施例において、「室温」とは、２５℃以上３０℃以下の温度を意味する。
　なお、表１は、ハロ酢酸および／またはその塩としてモノクロロ酢酸ナトリウムを使用した結果を示しており、表２は、ハロ酢酸および／またはその塩としてモノブロモ酢酸を使用した結果を示している。
　また、実験番号２ないし３６の反応液のｐＨはいずれも、１０以上１４以下の範囲であった。
　実験番号１ないし１７，１９ないし２９，３１ないし３６のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を目視にて確認したところ、白色であった（ｂ値が５以下であった）。一方、上記実験番号１８および３０のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を目視にて確認したところ、褐変が認められた（ｂ値が５を大きく超えていた）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　実験番号１ないし３６で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の分子量は、上述の実施形態に記載された方法によって測定された。また、実験番号２，２０，２１，２３，２７，３６で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の動粘度を、上述の実施形態に記載された方法によって測定したところ、それぞれ、３．４９ｍｍ２／ｓ、９１．８ｍｍ２／ｓ、５４．７ｍｍ２／ｓ、９２ｍｍ２／ｓ、９．６９ｍｍ２／ｓ、１２１．１０ｍｍ２／ｓであった。なお、実験番号１ないし３６で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸のカルボキシメチル化率は、以下の方法にて１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの積算値より求めた。
　（試料調製）
　試料７ｍｇと内部標準物質４，４－ジメチル－４－シラペンタンスルホン酸ナトリウム（ＤＳＳ）１ｍｇを重水０．７ｍＬに溶かし、ＮＭＲ試料管に移し入れ、キャップした。
　（測定条件）
装置：Ｖａｒｉａｎ　ＮＭＲ　ｓｙｓｔｅｍ　４００ＮＢ型(バリアンテクノロジーズジャパンリミテッド)
観測周波数：４００ＭＨｚ
温度：３０℃
基準：ＤＳＳ（０ｐｐｍ）
積算回数：６４回
　（解析方法）
　１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの２．０ｐｐｍ付近に現れるヒアルロン酸のＮ－アセチル基（ＣＨ３）のピークと、３．８ｐｐｍ以上４．２ｐｐｍ以下の範囲に現れるカルボキシメチル基のメチレン基（－ＣＨ２―）のピークを積分した。積分値から下記の式より、修飾ヒアルロン酸を構成するヒアルロン酸の２糖繰り返し単位毎に結合しているカルボキシメチル基の数を、カルボキシメチル化率（ＣＭ化率）を求めた。
　ＣＭ化率＝(３．８ｐｐｍ以上４．２ｐｐｍ以下の範囲に現れるピーク積分値／２)／(２．０ＰＰＭのピーク積分値／３)
　表１および表２に示されるように、上記実験番号１ないし１５，１９ないし２９，３１ないし３６のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸によれば、温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含み、前記含水溶媒は、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であり、前記混合液中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％以下であることにより、白色度が高く、かつ、カルボキシメチル化率が高い修飾ヒアルロン酸を簡便な方法にて得られることが理解できる。
　なかでも、上記実験番号２０ないし２６，３１ないし３６のように、ハロ酢酸および／またはその塩としてモノブロモ酢酸を使用し、かつ、温度が１０℃以下の含水溶媒中で当該反応を行う場合、白色度が高く、かつ、高い分子量（８０万以上）かつ高いカルボキシメチル化率（４０％以上、好ましくは５０％以上）を有する修飾ヒアルロン酸を得られることが理解できる。該修飾ヒアルロン酸は保水力を有し、かつ、同程度の分子量のヒアルロン酸と比較して粘度が小さいことが理解できる。これにより、本発明のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩はべたつきが少なく、触感が良好でありべたつきが少なく、手触りが良好であり（サラサラした触感を有する）、かつ、食感が良好であるため、例えば医薬品、化粧品および食品の成分として使用することができる。
　また、上記実験番号２７ないし２９のように、ハロ酢酸および／またはその塩としてモノブロモ酢酸を使用し、かつ、温度が３０℃以下の含水溶媒中で当該反応を行う場合、白色度が高く、４，０００以上８０万未満の分子量を有し、かつ、高いカルボキシメチル化率（６０％以上）を有する修飾ヒアルロン酸を得られることが理解できる。
　さらに、上記実験番号３，９ないし１３，１５，１９のように、ハロ酢酸および／またはその塩としてモノクロロ酢酸ナトリウムを使用して、温度が３０℃以下の含水溶媒中で当該反応を行う場合、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量、反応温度、反応時間、および使用するモノクロロ酢酸ナトリウムや水酸化ナトリウムの量を調整することにより、白色度が高く、高い分子量（８０万以上）を有し、かつ、５％以上２００％以下のカルボキシメチル化率を有する修飾ヒアルロン酸を得られることが理解できる。
　さらに、上記実験番号１，２，４ないし８，１４のように、ハロ酢酸および／またはその塩としてモノクロロ酢酸ナトリウムを使用して、温度が３０℃以下の含水溶媒中で当該反応を行う場合、原料ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量、反応温度、反応時間、および使用するモノクロロ酢酸ナトリウムや水酸化ナトリウムの量を調整することにより、白色度が高く、４，０００以上８０万未満の分子量を有し、かつ、高いカルボキシメチル化率（６０％以上２００％以下）のカルボキシメチル化率を有する修飾ヒアルロン酸を得られることが理解できる。
　これに対して、上記実験番号１６および１７では、比較的低分子（８０万未満）で、かつ、高いカルボキシメチル化率（６０％以上２００％以下）のカルボキシメチル化率を有する修飾ヒアルロン酸を得ることはできなかった。
　上記実験番号１６および１７では、反応に使用する含水溶媒中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％を超えていたため、反応に用いたヒアルロン酸の大部分が該含水溶媒に溶解せず、反応液が２相に分離した。このため、上記実験番号１６および１７では、反応終了後、反応に用いたモノクロロ酢酸ナトリウムを完全に除去するために、反応生成物を一旦、水に溶解させた後、沈殿して精製しなければならず、後処理が煩雑であった。
　これに対して、上記実験番号１ないし１５，１８，２０ないし２９，３１ないし３６では、生成したカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸が反応液中で溶解していた。このため、該反応液にエタノールを添加して、生成したカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を沈殿させて回収することにより、生成したカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸と、反応剤であるハロ酢酸および／またはその塩とを容易に分離することができ、後処理が簡便であった。
　＜試験例１：保水力試験＞
　秤量瓶を酸化リン(Ｖ)１０ｇと一緒に真空乾燥機に入れ、減圧下、６０℃で３０分間乾燥させた。乾燥させた秤量瓶をデシケーター中で冷ました後、空の秤量瓶の重量を測定し、上記実験番号６，１２および２３のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の１．０％液を１．０ｇ秤量した。また、上記実験番号６，１２および２３で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸と同じかまたは近似する分子量（２０万，９０万，１２０万）を有する３種類のヒアルロン酸（いずれもキユーピー株式会社製）も同様の処理にて、秤量瓶に秤量した。次に、これらの秤量瓶を、シリカゲルを同封したデシケーターに入れて、３５℃の恒温機に入れて２２．５時間保持した後に質量を測定した。以下の式に基づいて、保水率（％）を算出した。
　保水率（％）＝｛（恒温機に入れる前のサンプルの質量）－（２２．５時間後のサンプルの質量）｝／（恒温機に入れる前のサンプルの質量）×１００（％）
　上記修飾ヒアルロン酸および上記ヒアルロン酸の保水率の測定結果を図１に示す。図１のグラフにおいて、左側はヒアルロン酸（未修飾）の保水率、右側はカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸の保水率であり、分子量ごとにペアにして示す。
　図１によれば、本発明のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸は、同程度の分子量のヒアルロン酸と比較して保水率が高いことが理解できる。
　＜試験例２：官能試験＞
　上記実験番号２１の修飾ヒアルロン酸の粘度（目視）および感触について、官能評価を行った。官能評価においては、コントロール（対照）として、それぞれ分子量８０万および分子量１１７万のヒアルロン酸（いずれもキユーピー株式会社製）を使用した。
　評価は、パネラーとして成人男女６名（男性５名、女性１名）が行い、分子量８０万の粘度（目視）および感触を３点として、以下の評価基準により行った。６名の評価結果の平均を図２および図３にそれぞれ示す。
　なお、評価試料は、各試料の濃度が１％の水溶液を用いた。また、感触については、該水溶液を上腕に塗布したときの感触を評価した。
　（評価基準）
　粘度（目視）…５点（粘度が高い）、４点（粘度がやや高い）、３点（粘度が普通）、２点（粘度がやや低い）、１点（粘度が低い）
　感触…５点（さらっとしている）、４点（べたつきが少なく、どちらかといえばさらっとしている）、３点（べたつきがある）、２点（べたつきがやや大きい）、１点（べたつきが大きい）
　図２および図３によれば、本発明のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸は、同程度の分子量を有するヒアルロン酸と比較して、べたつきが少なくてさらっとしており、かつ、粘度が低い外観を有することが理解できる。
　＜試験例３：白色度＞
　上記実験番号の１８，２１および３０のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸のｂ値およびＬ値を、色差計（商品名「ＣＯＬＯＲ　ＡＮＤ　ＣＯＬＯＲ　ＤＩＦＦＥＲＥＮＣＥ　ＭＥＴＥＲＭＯＤＥＬ　１００１　ＤＰ」，日本電色工業株式会社製）に１０Φレンズを装着し、ガラスセルに測定試料１ｇ以上を敷き詰めて測定した。その結果を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　上記実験番号２１のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸は、３０℃以下の温度で反応を行って得られたものであるため、目視で白色であることが認められ、かつ、色の色相を表すｂ値が５以下であることから、白色度が高いことが理解できる。
　これに対して、上記実験番号１８，３０のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸は、３０℃を超える温度で反応を行って得られたため、目視で褐変が認められ、かつ、色の色相を表すｂ値が５を大幅に超えていたことから、白色度が低いことが理解できる。
　＜配合例１：化粧水＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した化粧水を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．２％
　　ヒアルロン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　加水分解ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　加水分解ヒアルロン酸アルキル（Ｃ１２－１３）グリセリル　０．１％
　　コラーゲンペプチド　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　イソステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウリル酸エステル　　　　　０．５％
　　ＰＯＥ（１５）ラウリルアルコールエーテル　　　　　　　　０．５％
　　ピロリドンカルボン酸亜鉛　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　エチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例２：乳液＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した乳液を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．３％
　　ペンチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５％
　　ステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０％
　　ステアリン酸ソルビタン　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　ＰＯＥ（１０）モノステアリン酸エステル　　　　　　　　　１．０％
　　カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　　０．５％
　　ポリクオタニウム－５１　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　プロピルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ＢＨＴ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２％
　　ＥＤＴＡ－２ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例３：クリーム＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例２で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したクリーム（エモリエントクリーム）を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例２）　　　０．５％
　　ポリエチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０％
　　１，３－プロパンジオール　　　　　　　　　　　　　　　　６．０％
　　スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１１．０％
　　ジメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．０％
　　ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　水添ココグリセリル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０％
　　トリカプリリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０％
　　モノステアリン酸グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　ＰＯＥ（２０）セチルアルコールエーテル　　　　　　　　　２．０％
　　コエンザイムＱ１０　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０３％
　　セラミド　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウム　　　　　　　　０．１％
　　ＥＤＴＡ－２ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２％
　　プロピルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例４：美容液＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例２で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した美容液（美白保湿エッセンス）を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例２）　　　０．８％
　　ヒアルロン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　加水分解ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５％
　　ＰＯＥソルビタンモノステアリン酸エステル　　　　　　　　１．０％
　　ソルビタンモノステアリン酸エステル　　　　　　　　　　　０．５％
　　キサンタンガム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　アルギン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　オリーブ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ＥＤＴＡ－２ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２％
　　アルギニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　グリチルリチン酸ジカリウム　　　　　　　　　　　　　　０．０５％
　　アルブチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　パルミチン酸レチノール　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　クジンエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　海藻エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　トラネキサム酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　エラスチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　コラーゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　リン酸アスコルビン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　０．１％
　　クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　プロピルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例５：美容液パック＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した美容液パック（ペースト状ピールオフタイプ）を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　０．５％
　　ポリ酢酸ビニルエマルジョン　　　　　　　　　　　　　１７．０％
　　ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　１１．０％
　　ソルビトール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　ポリエチレングリコール４００　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．５％
　　ＰＯＥソルビタンモノステアリン酸エステル　　　　　　　１．０％
　　酸化チタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０％
　　タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０％
　　エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例６：洗顔料＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した洗顔料（クレンジングフォーム）を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．２％
　　カチオン化ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　（キユーピー株式会社製、ヒアロベール）
　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０％
　　ポリエチレングリコール４００　　　　　　　　　　　　　１５．０％
　　ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０％
　　ラウロイルグルタミン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　２０．０％
　　ＰＯＥ（２）モノステアリン酸エステル　　　　　　　　　　５．０％
　　パーム脂肪酸グルタミン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　８．０％
　　アルキルベタイン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　ＥＤＴＡ－２ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２％
　　プロピルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例７：サンスクリーン＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したサンスクリーン（乳液）を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．２％
　　１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　シクロメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　ジメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　メトキシケイヒ酸オクチル　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　酸化チタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　酸化亜鉛　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　ステアリン酸ソルビタン　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアリン酸エステル　　　　１．０％
　　フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例８：リップクリーム＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したリップクリームを調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．１％
　　マイクロクリスタリンワックス　　　　　　　　　　　　　　１．５％
　　セレシン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２．０％
　　スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０％
　　デカメチルテトラシロキサン　　　　　　　　　　　　　　１０．０％
　　リンゴ酸ジイソステアリル　　　　　　　　　　　　　　　　５．０％
　　キャンデリラロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０％
　　ヒドロキシステアリン酸グリセリル　　　　　　　　　　　　２．０％
　　メントール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５％
　　流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５％
　　プロピルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例９：シャンプー＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したシャンプーを調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．２％
　　カチオン化ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　（キユーピー株式会社製、ヒアロベール）
　　ＰＯＥ（２０）ラウリルエーテル硫酸ナトリウム　　　　　１１．０％
　　ラウロイルアスパラギン酸ナトリウム　　　　　　　　　　１０．０％
　　ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン　　　　　　　　　　　４．０％
　　ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド　　　　　　　　　　　　２．０％
　　ＥＤＴＡ－２ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　安息香酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例１０：ヘアコンディショナー＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したヘアコンディショナーを調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　０．３％
　　カチオン化ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２％
　　（キユーピー株式会社製、ヒアロベール）
　　ステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０％
　　セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５％
　　ヒドロキシエチルウレア　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　アミノプロピルジメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　１．５％
　　ジメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５％
　　加水分解シルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　２－エチルヘキサン酸セチル　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
　　ミリスチン酸イソセチル　　　　　　　　　　　　　　　　　０．４％
　　Ｌ－アルギニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　トレハロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ソルビトール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ケラチンペプチド　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　ＰＯＥ（４）ステアリルエーテル　　　　　　　　　　　　　１．０％
　　ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド　　　　　　　　３．０％
　　塩化ジステアリルジメチルアンモニウム　　　　　　　　　　０．２％
　　安息香酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３％
　　フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８％
　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％
　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量
　＜配合例１１：ソフトカプセル＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したソフトカプセルを調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　　２０％
　　オリーブ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３５％
　　ミツロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５％
　　中鎖脂肪酸トリグリセリド　　　　　　　　　　　　　　　　　　５％
　　ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５％
　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０％
　＜配合例１２：散剤＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した散剤（顆粒剤）を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　　１０％
　　乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０％
　　トウモロコシデンプン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５％
　　ヒプロメロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５％
　＜配合例１３：ソフトカプセル＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合した錠剤を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　　　２５％
　　乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２４％
　　結晶セルロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０％
　　トウモロコシデンプン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５％
　　デキストリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５％
　　二酸化ケイ素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１％
　＜配合例１４：ゼリー飲料＞
　本配合例では、以下に記す処方にて、実験例１で得られたカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸を配合したスパウトパウチ入り白桃ゼリー飲料を調製した。
　　カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸（実験例１）　　０．２０％
　　キサンタンガム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．００％
　　カラギーナン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５％
　　デキストリンアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
　　スクラロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１％
　　４倍濃縮白桃果汁　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．００％
　　クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．６０％
　　クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２０％
　　Ｌ－アスコルビン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１０％
　　ピーチ香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２０％
　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残量

Claims (20)

  1. 　温度が３０℃以下の含水溶媒中で、溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩をハロ酢酸および／またはその塩と反応させる工程を含み、
    　前記含水溶媒は、水、または水溶性有機溶媒と水との混合液であり、
    　前記混合液中における水溶性有機溶媒の割合が６０ｖ／ｖ％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  2. 　請求項１において、
    　前記ハロ酢酸は、クロロ酢酸および／またはブロモ酢酸である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  3. 　請求項１または２において、
    　前記含水溶媒における前記ヒアルロン酸の濃度が０．０５ｇ／ｍＬ以上０．５ｇ／ｍＬ以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  4. 　請求項１ないし３のいずれか１項において、
    　前記溶解した原料ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量が４，０００以上４００万以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  5. 　請求項１ないし４のいずれか１項において、
    　得られるカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の色の色相を表すｂ値が５以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  6. 　請求項１ないし５のいずれか１項において、
    　前記反応させる工程によって、分子量が８０万以上である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸が得られる、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  7. 　請求項６において、
    　前記反応させる工程によって、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が５％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸が得られる、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  8. 　分子量が８０万以上であり、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が５％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  9. 　請求項８において、
    　動粘度が３０ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  10. 　請求項８または９において、
    　ヒアルロン酸を構成する水酸基のうち少なくとも一部の水酸基の水素原子が、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基に置換されている、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  11. 　請求項８ないし１０のいずれか１項において、
    　色の色相を表すｂ値が５以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  12. 　請求項１ないし５のいずれか１項において、
    　前記反応させる工程によって、分子量が４，０００以上８０万未満である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸が得られる、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  13. 　請求項１２において、
    　前記反応させる工程によって、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸が得られる、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
  14. 　分子量が４，０００以上８０万未満であり、ヒアルロン酸を構成する２糖単位に対するカルボキシメチル化率が６０％以上２００％以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  15. 　請求項１４において、
    　動粘度が１ｍｍ２／ｓ以上２００ｍｍ２／ｓ以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  16. 　請求項１４または１５において、
    　ヒアルロン酸を構成する水酸基のうち少なくとも一部の水酸基の水素原子が、－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈおよび／または－ＣＨ２－ＣＯ２ －で表される基に置換されている、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  17. 　請求項１４ないし１６のいずれか１項において、
    　色の色相を表すｂ値が５以下である、カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩。
  18. 　請求項８ないし１１、１４ないし１７のいずれか１項に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する、化粧料。
  19. 　請求項８ないし１１、１４ないし１７のいずれか１項に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する、食品組成物。
  20. 　請求項８ないし１１、１４ないし１７のいずれか１項に記載のカルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する、医薬品組成物。
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