WO2015040967A1

WO2015040967A1 - 新規アルケニル硫酸エステル又はその塩

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Publication number: WO2015040967A1
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Abstract

　甘味や塩味の調整又はＥＮａＣ阻害に有用な新規化合物及びその用途の提供。　下記式（１）で示されるオクテニル硫酸エステル又はその塩（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）。

Description

新規アルケニル硫酸エステル又はその塩

　本発明は、新規なアルケニル硫酸エステル又はその塩、及びその用途に関する。

　近年、メタボリックシンドロームなどの生活習慣に起因する疾患や、健康に対する意識の高まりから、低カロリーやノンカロリーの食品や飲料等が、多く市販されている。これらの製品には、主に、糖アルコールや人工甘味料などの代替甘味料が使用されている。糖アルコールは、砂糖に比べて甘味度が低いものの、生体内で消化吸収されにくい。また、アスパルテームやアセスルファムＫに代表される人工甘味料は、体内で吸収されにくいか、もしくは、高い甘味度を有しているため、低使用量で十分な甘味を付与することができる。このように、代替甘味料はおいしさを損なうことなく、低カロリーの食品や飲料を実現するために有用である。

　しかしながら、代替甘味料の味質は一様でなく、望みの甘味を付与するためには、異なる甘味料を組み合わせて用いる必要があった。例えば、アスパルテームは甘味の立ち上がりが若干遅く、後引きのある甘味を有する。一方、アセスルファムＫは、甘味の立ち上がりが早く、キレの良い甘味を有している。そのため、両甘味料は組み合わせて使用することで、より自然な砂糖に近い甘味を呈するようになる。また、アセスルファムＫは後味に苦みが残ることが課題であり、その苦みを抑えるため、他の甘味料が併用される。また、天然由来の甘味料であるグリチルリチンは、立ち上がりが遅く、後甘味の強い成分であり、その甘味が一定時間持続する。

　元来、代替甘味料は、コストダウンを目的に開発されてきた。ところが最近では、低カロリー志向の多様な消費者ニーズに応えるべく、商品の特徴づけ、高付加価値化の手段の一つと考えられている。すなわち、バラエティーに富んだ特徴的な甘味を実現するために、既存の甘味料とは味質が異なる代替甘味料が求められていた。特に、持続性のある甘味料は、フレーバー増強作用、マスキング効果等の機能が期待されるため、よりおいしい食品の提供が可能となり、無理なくカロリーや糖質摂取量をコントロールできる点で、有用性が高い。

　甘味料の開発において、甘味受容体が同定されて以降、その甘味受容体を用いたスクリーニング方法が用いられるようになり、そのアゴニスト活性を指標に、甘味を付与する、もしくは増強する成分が同定されている(非特許文献１)。

　一方、甘味を付与する物質としては、アゴニスト活性以外の成分も考えられる。その一つに、ラクチゾールが挙げられる(非特許文献２)。ラクチゾールは、甘味受容体に対してアンタゴニスト活性、すなわち甘味を抑制する作用を有する(非特許文献２)。しかし、そのラクチゾールを口に含んだのち、水を飲用すると甘味が誘導される。その作用メカニズムは、ラクチゾールのインバースアゴニスト活性によるものと考えられている(非特許文献２)。当該文献によると、Ｇタンパク質共役受容体である甘味受容体は、定常的に弱く活性化された状態、すなわち、基礎活性の高い状態にあるが、ラクチゾールのようなインバースアゴニストはその基礎活性を積極的に抑える作用を有する。基礎活性が抑えられた状態で、水を飲用すると、リガンドと受容体が解離し、元の弱く活性化された状態に戻る際、甘味が誘導されると考えられている。また、ラクチゾールをあらかじめ口に含み、口腔内の甘味受容体の基礎活性を下げた状態で甘味料を摂取すると、甘味増強作用が観察される（非特許文献３）。このように、甘味を誘導させる方法としては、インバースアゴニストのようなアンタゴニストの一種を利用することも考えられる。

　また、食塩は、広く自然界の食材の多くに含有されており、通常の生活では不足する心配は殆どない。ただし、スポーツ等により大量の汗をかいたり、嘔吐や下痢をしている場合、熱中症の場合等には、多くのナトリウムが喪失され、血中ナトリウム量が減少する。したがって、ナトリウムを始めとするミネラルを適切に補給することが必要となる。例えば、熱中症予防のためには、こまめに水分を摂取すること、及び適切な塩分を摂取することが、厚生労働省より指導されている。

　しかしながら、ミネラル成分を飲食品に配合した場合、その濃度が高くなると塩味が強くなり、嗜好性が下がると云う問題がある。そこで、斯かる塩味を抑制する手段が求められ、例えば、イヌリン（特許文献１）や、Ｄ－プシコース（特許文献２）等の糖類を添加して、塩味をマスキングする方法等が知られている。

　斯かる塩味の口腔内受容の一つとして、近年、アミロライドによってその活性が抑制される電位非依存性のナトリウムチャネル（以下、「ＥＮａＣ」とも称する）が見出されている。アミロライドは、舌前方の塩味を抑制するが、舌後方の塩味は抑制せず、口腔内全体の感覚として約半分程度の塩味を抑えるだけであることが知られている（非特許文献４）。このことから、塩味の口腔内受容には、ＥＮａＣの他にアミロライド非感受性の塩味受容体も存在すると考えられ、当該受容体として苦味及び酸味受容体の関与が示唆されている。具体的には、１００ｍＭ以下の低濃度の塩味にはＥＮａＣが、高濃度の塩味には苦味や酸味の受容体が関与していると考えられている（非特許文献５）。したがって、低濃度の塩味の抑制には、ＥＮａＣを阻害することが有効であると考えられる。

　また、ＥＮａＣは、味蕾の他に、ヒトの多くの上皮組織（腎臓、膀胱、肺、気道、唾液腺、汗腺など）に発現し、ナトリウムイオンの流入経路となっている（非特許文献６）。例えば、腎臓においては、腎皮質集合管においてナトリウムを再吸収することにより体内ナトリウム量を緻密に制御することが知られており、体液量、血漿浸透圧、血圧等の調節に非常に重要な役割を有している。更にＥＮａＣの過剰発現や機能亢進は、高血圧症や腎機能悪化を始め、嚢胞性線維症、肺水腫、潰瘍性大腸炎、下痢等の疾患と関連があるとされ、ＥＮａＣ阻害剤は斯かる疾患の予防・改善に有用であることが報告されている（非特許文献６参照）。

　公知のアルケニル硫酸エステルのうち、シス／トランス－３－デセニルサルフェートが緑藻の形態変化誘導を齎すカイロモン様物質として（非特許文献７、非特許文献８）、トランス－３－デセニルサルフェートが抗菌活性を有すること（非特許文献９）等が報告されているが、甘味や塩味の調整やＥＮａＣ阻害作用を有するアルケニル硫酸エステルはこれまでに全く知られていない。

　　〔特許文献１〕特開２００７－２０９２６８号公報
　　〔特許文献２〕特許第５３１４２０７号公報

　　〔非特許文献１〕Servant, G. et al. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107(10), 4746-4751.
　　〔非特許文献２〕Galindo-Cuspinera, V. et al. Nature, 2006, 441, 354-357.
　　〔非特許文献３〕Schiffman, S.S. et al. Chemical senses, 1999, 24, 439-447.
　　〔非特許文献４〕Ninomiya, Y. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America, 1998, 95, 5347-5350.
　　〔非特許文献５〕Oka, Y.; et al. Nature, 494, 472-475 (2013)
　　〔非特許文献６〕Bhalla, V.; et al. Journal of American Society of Nephrology. 2008, 19, 1845-1854.
　　〔非特許文献７〕Yasumoto, K.; et al. Chemical ＆ Pharmceutical Bulltein, 2008, 56(1), 133-136.
　　〔非特許文献８〕Yasumoto, K.; et al. Tetrahedron Letters, 2005, 46, 4765-4767.
　　〔非特許文献９〕La, M-P.; et al. CHEMISTRY ＆ BIODIVERSITY, 2012, 9, 1166-1171

　本発明は、以下の１）～１５）に係るものである。
　１）下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩。

（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）

　２）上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする甘味調整剤。
　３）上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩を含有する甘味料組成物。
　４）上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩、又は上記２）の甘味料組成物を食品又は医薬品類へ含有させる、食品又は医薬品類に対する甘味の付与又は調整方法。
　５）上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤。
　６）上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする塩味抑制剤。
　７）上記６）の塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に対して使用する、塩味抑制方法。
　８）甘味調整剤を製造するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　９）甘味料組成物を製造するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　１０）食品又は医薬品類に対する甘味の付与又は調整に使用するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
　１１）上皮性ナトリウムチャネル阻害剤を製造するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　１２）塩味抑制剤を製造するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　１３）上皮性ナトリウムチャネル阻害に使用するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
　１４）塩味抑制に使用するための、上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
　１５）上記１）のオクテニル硫酸エステル又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する上皮性ナトリウムチャネル阻害方法。

ＥＮａＣ阻害効果を示す図。

発明の詳細な説明

　本発明は、甘味や塩味の調整又はＥＮａＣ阻害に有用な新規化合物及びその用途を提供することに関する。

　本発明者らは、オクテニル硫酸エステル又はその塩が、既存の甘味料と異なった遅効性で持続性のある甘味を付与できる甘味質となること、更に甘味物質の甘味を抑制或いは増強する甘味調整剤となること、またＥＮａＣ阻害作用及び塩味抑制作用があり、ＥＮａＣ阻害剤及び塩味抑制剤として使用できることを見出した。

　本発明の化合物は、既存の甘味料と異なった遅効性で持続性のある甘味を発揮し、フレーバー増強作用、マスキング効果等の機能を発揮し得る甘味質又は甘味調整剤として有用である。これを単独で、或いは他の甘味料と組み合わせて、食品や医薬品等に用いることにより、遅効性で持続性のある甘味を付与でき、より美味しい付加価値の高い食品等の提供が可能となる。
　また、本発明の化合物は、ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤として、塩化ナトリウム等の塩味物質を含有する口腔用組成物や、食品等に対して使用することにより、安全性を害することなく、当該塩味を低減できる。その結果、当該口腔用組成物の使用感を向上させる、食品の味を向上させる等、それらの製品価値を高めることができる。
　また、ＥＮａＣ阻害剤は、ＥＮａＣの過剰発現（機能亢進型変異）に起因して発症する疾患、例えば、高血圧症、嚢胞性線維症、肺水腫、潰瘍性大腸炎、下痢等の予防又は改善のために使用することができる。

　本発明の一般式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル（オクテニル硫酸エステル（１）と称する）は、下記式で示される、トランス－３－オクテニルサルフェート（１ａ）と、シス－３－オクテニルサルフェート（１ｂ）であるが、甘味、塩味抑制或いはＥＮａＣ阻害の点からトランス体が好ましい。

　本発明のオクテニル硫酸エステル（１）の好適な塩は、製薬学的に許容される塩であって、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩等）等の金属塩、アンモニウム塩、又はトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン、Ｎ－メチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、ジエチルアミン、シクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ－ベンジル－β－フェネチルアミン、１－エフェナミン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン等の含窒素有機塩基、リジン、アルギニン、オルニチンなどの塩基性アミノ酸との塩を挙げることができる。このうち、アルカリ金属塩が好ましく、ナトリウム塩、カリウム塩がより好ましい。

　また、本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、未溶媒和型のみならず、水和物又は溶媒和物としても存在することができる。従って、本発明においては、その全ての結晶型及び水和若しくは溶媒和物を含むものである。

　本発明のオクテニル硫酸エステル（１）は、例えば、トランス－３－オクテン－１－オール（２）又はシス－３－オクテン－１－オール（３）を、有機溶媒中、硫酸化試薬と反応させて硫酸エステル化することにより製造することができる。

　ここで用いられる硫酸化試薬としては、アルコール類を硫酸エステル化できるものであれば特に限定さないが、例えば三酸化硫黄ピリジン錯体、三酸化硫黄トリメチルアミン錯体、三酸化硫黄トリエチルアミン錯体、三酸化硫黄ジメチルホルムアミド錯体、硫酸－ジシクロヘキシルカルボジイミド、クロロ硫酸、濃硫酸、スルファミン酸等が挙げられ、このうち三酸化硫黄ピリジン錯体が好ましい。
　反応溶媒としては、上記エステル化反応を妨害するものでない限り限定されないが、好適な溶媒として、例えば、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、エーテル、四塩化炭素等が挙げられる。
　反応温度は、室温からその溶媒の沸点付近で行うことが可能であるが、好ましくは－２０～２００℃、より好ましくは０～１００℃である。また、反応時間は、０．１～４８時間、好ましくは１～１２時間である。

　原料として用いる、トランス－３－オクテン－１－オール（２）は、例えば、１－ヘプテンとパラホルムアルデヒドを、ジメチルアルミニウムクロライド等の有機アルミニウム化合物の存在下で反応させることにより得ることができる（Snider, B.B; et al. Journal of American Chemical Society, 1982, 104, 555-563.参照）。
　また、シス－３－オクテン－１－オール（３）は、一般に入手できるが、例えば、３－オクチン－１－オールを、リンドラー触媒を用いた接触水素化反応させることで、得ることができる。（Mayer, S.F.; et al. European Journal of Organic Chemistry, 2001, 4537-4542.参照）

　本発明のオクテニル硫酸エステル（１）の塩は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等の塩基性化合物、アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン、Ｎ－メチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、ジエチルアミン、シクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ－ベンジル－β－フェネチルアミン、１－エフェナミン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン等の含窒素有機塩基、リジン、アルギニン、オルニチンなどの塩基性アミノ酸との存在下、オクテニル硫酸エステル（１）を室温又は適宜加熱することにより得ることができる。また、オクテニル硫酸エステル（１）を、塩基性の陰イオン交換樹脂に吸着させ、上記塩基性化合物を含む溶離液で溶出させることでも得ることができる。

　上記反応により得られる本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩の単離及び／又は精製は、例えば濾過、洗浄、乾燥、再結晶、各種クロマトグラフィー等により、行うことができる。

　斯くして得られる、オクテニル硫酸エステル（１）は、後記試験例１－４に示すように、遅効性で持続性のある甘味を発揮する。また当該甘味は水によって助長される。さらに、オクテニル硫酸エステル（１）は、後記試験例５及び６に示すように、他の甘味料の甘味を調整する作用を有する。したがって、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、遅効性で持続性のある甘味を付与できる甘味質となり得、他の甘味料の甘味を調整する甘味調整剤となり得る。そして、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を含有する組成物は甘味料組成物となり得る。オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を単独又は組成物の形態で食品や医薬品類、飼料等に配合することにより、遅効性で持続性のある甘味を付与することができ、また、共存する他の甘味料（例えば、ショ糖、アスパルテーム、スクラロース、グリチルリチン等）の甘味を調整することができる。
　ここで、「遅効性」とは、経口摂取時にはすぐに甘さを感じないが、遅れて甘さを感じることを意味し、後述する「後味の甘味」と同義である。
　「甘味の調整」とは、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩以外の、甘味物質の甘味を抑制又は増強することを意味する。甘味の抑制としては、好適には他の甘味料を摂取した直後の先味の甘味を抑制することが挙げられ、甘味の増強としては、好適には口の中に残った後味の甘味を増強することが挙げられる。
　オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を用いた他の甘味料の甘味調製のための具体的方法としては、例えば、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を他の甘味料と同時に摂取して、他の甘味料の先味の甘味を抑制し、さらに口に残った当該甘味料の後味の甘味を増強させること、或いは予めオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を摂取した後に他の甘味料を摂取した場合における当該甘味料の甘味を増強させること等が挙げられる。オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を予め摂取した場合、他の甘味料の甘味の感受性を増強させるものと考えられる。

　本発明の甘味料組成物は、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩に、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等の甘味成分以外の添加剤を配合して調製することができる。当該甘味組成物は、粉末、顆粒、シロップ、錠剤等、いずれの形態であっても良い。
　また、当該甘味料組成物には、糖類（ショ糖、転化糖、異性化糖、ブドウ糖、果糖、乳糖、麦芽糖、トレハロース、キシロース等）、糖アルコール類（マルチトール、ソルビトール、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール等）、オリゴ糖類、食物繊維、アスパルテーム、サッカリン、アセスルファムＫ、スクラロース、ソーマチン、ステビオシド、グリチルリチン等の他の甘味料を含有することができる。この場合、他の甘味料の甘味を調整しつつ、甘味の立ち上がりが緩やかで、持続性の甘味を発揮させることができる。

　本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩、或いはこれを含む甘味料組成物は、食品、医薬品類、飼料等の甘味或いは甘味の調整が必要とされる各種製品（甘味付与又は調整対象品）に対する甘味の付与又は調整に広く使用することができる。これらの食品の例としては、飲料、チョコレートなどが挙げられる。また、医薬品類としては、散剤、錠剤、水剤、シロップ剤等の他、医薬部外品として扱われる歯磨、含喉剤等が挙げられ、甘味を好む動物用医薬品も包含される。

　本発明の甘味料組成物は、甘味付与又は調整対象品にとって味覚的に必要な程度まで任意に使用することができる。その使用量は、対象となる製剤の形態によっても異なるが、通常、本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩として、液体食品においては、必要とされる甘味と同等のショ糖濃度に対して１／１０００倍濃度以上、好ましくは１／５００倍濃度以上、更に好ましくは１／４００倍濃度以上であり、且つ１／２０倍濃度以下、好ましくは１／５０倍濃度以下、更に好ましくは１／１００倍濃度以下で使用でき、また、１／１０００倍濃度～１／２０倍濃度、好ましくは１／５００倍濃度～１／５０倍濃度、更に好ましくは１／４００倍濃度～１／１００倍濃度で使用できる。固体食品においては、必要とされる甘味と同等のショ糖重量に対して１／１０００倍濃度以上、好ましくは１／５００倍濃度以上、更に好ましくは１／４００倍濃度以上であり、且つ１／２０倍濃度以下、好ましくは１／５０倍濃度以下、更に好ましくは１／１００倍濃度以下で使用でき、また、１／１０００倍濃度～１／２０倍濃度、好ましくは１／５００倍濃度～１／５０倍濃度、更に好ましくは１／４００倍濃度～１／１００倍濃度で使用できる。

　甘味付与又は調整対象品への本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩、或いは甘味料組成物の使用方法としては、例えば、食品、医薬品類の製造時において、あるいはこれらの摂取または投与時において、混和、混練、溶解、浸漬、浸透、散布、噴霧、注入などの適宜の方法を採用して、当該対象品に含有させる方法が挙げられる。

　また、本発明のオクテニル硫酸エステル（１）は、後記実施例に示すように、ＥＮａＣからの細胞内へのナトリウムイオンの流入を阻害し、また、塩化ナトリウムによる塩味を効果的に抑制する。
　したがって、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、ＥＮａＣ阻害剤、塩味抑制剤となり得、また、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を製造するために使用することができる。

　本発明において、「ＥＮａＣ阻害」とは、上皮性ナトリウムチャネルからの細胞内へのナトリウムイオンの流入を阻害することを意味する。尚、ＥＮａＣ阻害活性は、適当な細胞系アッセイにおいて、ＥＮａＣに対する阻害効果を測定することによって試験することができる。例えば、ＥＮａＣを内生的に発現するか、または過剰発現するように設計された、単一細胞またはコンフルエント上皮を使用し、電気生理学的技術を使用して、チャンネル機能を評価することができる（The journal of biological chemistry, 284(2):pages 792-798 (2009)）。

　ＥＮａＣは、味蕾に発現し、アミロライド感受性の塩味受容体として機能する。また、ＥＮａＣは、腎臓、膀胱、肺、気道、唾液腺、汗腺等多くのヒト上皮組織にも発現し（前記非特許文献６）、体液量、血漿浸透圧、血圧等の調節を担っており、ＥＮａＣの過剰発現（機能亢進型変異）は、高血圧症や嚢胞性線維症、肺水腫、潰瘍性大腸炎、下痢等の疾患を引き起こすことが知られている（前記非特許文献６）。
　したがって、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、上記疾患の予防又は改善を目的とし、ＥＮａＣを阻害するために使用できる。ここで、「使用」は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。また、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。

　すなわち、本発明のＥＮａＣ阻害剤を含む組成物は、ＥＮａＣ阻害、或いは上述した各疾患に対する予防又は改善効果を奏する医薬品、医薬部外品又は食品となり、ＥＮａＣ阻害剤は、医薬品、医薬部外品若しくは食品へ配合するための素材又は製剤として有用である。尚、当該食品には、ＥＮａＣ阻害や上記疾患の症状改善を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品、サプリメントが包含される。
　医薬品、医薬部外品、食品の製剤形態は特に限定されず、夫々許容される担体とオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を適宜組み合わせて調製することができる。

　また、本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を用いた塩味の抑制は、塩味物質（塩味原因物質）を含有する組成物に対してこれらを使用することにより、当該塩味を抑制することができる。
　ここで、「塩味の抑制」には、塩味を低減すること、及び塩味を阻害することが含まれる。
　塩味物質含有組成物としては、例えば口腔用組成物、食品等が挙げられる。塩味物質としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン等のミネラル由来の金属イオン、塩化物イオン、及び当該金属イオンと塩化物イオンからなる金属塩化物の一種又は二種以上が挙げられる。代表的には塩化ナトリウム、塩化カリウムが挙げられる。

　本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を塩味抑制のために使用する場合の使用態様は、当該ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を、塩味物質含有組成物に配合すること、塩味物質含有組成物と併用すること等が主として挙げられる。
　塩味物質含有組成物との併用には、例えば、当該ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤の水溶液を調製し、これを予め口腔に含み、その後に塩味物質含有組成物を経口摂取等する方法、又は当該ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤の水溶液と塩味物質含有組成物を同時に経口摂取等する方法が挙げられる。

　本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤は、上記オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩のみを含むものでものよく、例えば、水、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、防腐剤、保存料、酸化防止剤のごとき医薬品類や食品に通常用いられる原料及び／又は素材の１又は複数を配合するものでもよい。また、その形態は、任意であり、溶液状、懸濁状、シロップ状、粉末状、顆粒状、粒子状等の何れもでもよく、所望の形状に成形することができる。

　上記塩味物質含有組成物（例えば、口腔用組成物、食品等）の形態は、水溶液、懸濁物、乳化物等の液状又はペースト状、あるいは粉末状、顆粒状、粒子状等の固形物のいずれでもよい。食品は、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、スポーツドリンク、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の一般飲食品や栄養食品、機能性食品等の何れの種類でもよい。口腔用組成物としては、例えば、歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム等が挙げられる。好適な塩味物質含有組成物としては、塩味物質を含有する各種固形食品、飲料、歯磨剤、洗口液等が挙げられる。

　本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤の斯かる組成物への適用に際しては、組成物の形態が、水溶液、懸濁物、乳化物等の液状又はペースト状の場合には、本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を添加し、充分に攪拌、分散する方法を適用することができる。また、組成物の形態が、粉末等の固形物の場合には、本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を単に添加、混合する方法を適用することができる。

　本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を、塩味物質含有組成物に対して使用する場合、ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤は、塩味物質１質量部に対して、本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を、０．００１質量部以上、好ましくは０．０１質量部以上で、９０質量部以下、好ましくは１０質量部以下で用いるのが好ましい。また、０．００１～９０質量部、好ましくは０．０１～１０質量部用いるのがより好ましい。

　本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を含有する医薬品、医薬部外品又は食品における、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩の含有量は、特に限定されないが、製剤全質量の０．１質量％以上、好ましくは１質量％以上、更に好ましくは１０質量％以上であり、そして９９質量％以下、好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは５０質量％以下である。また０．１～９９質量％、好ましくは１～９０質量％、更に好ましくは１０質量％～５０質量％が挙げられる。

　本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を医薬品或いはサプリメントに配合して使用する場合の投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩として、通常０．１ｍｇ以上、好ましくは１ｍｇ以上、更に好ましくは５ｍｇ以上であり、そして１０ｇ以下、好ましくは１ｇ以下、更に好ましくは５００ｍｇ以下である。また、０．１ｍｇ～１０ｇ、好ましくは１ｍｇ～１ｇ、更に好ましくは５～５００ｍｇが挙げられる。

　上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回～数回に分け、数週間～数ヶ月間継続して投与することが好ましい。また、投与又は摂取対象としては、それを必要としている若しくは希望しているヒト、例えば高血圧症や腎機能障害等のＥＮａＣの過剰発現に起因する疾患の予防又は改善を必要とする若しくは希望するヒトが挙げられる。

　上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩。

（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）

＜２＞上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする甘味調整剤。
＜３＞他の甘味料の先味の甘味を抑制する、上記＜２＞の甘味調整剤。
＜４＞さらに、他の甘味料の後味の甘味を増強する、上記＜３＞の甘味調整剤。
＜５＞オクテニル硫酸エステル又はその塩を予め摂取し、次いで他の甘味料を摂取した場合の当該他の甘味料の甘味を増強する、上記＜２＞の甘味調整剤。
＜６＞上記＜３＞～＜５＞において、他の甘味料としては、例えばはショ糖、アスパルテーム、スクラロース、グリチルリチンが挙げられ、好ましくはグリチルリチンである。
＜７＞上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩を含有する甘味料組成物。
＜８＞上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩、又は上記＜２＞～＜５＞のいずれかの甘味調整剤を食品又は医薬品類へ含有させる、食品又は医薬品類に対する甘味の付与又は調整方法。
＜９＞甘味調整剤を製造するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
＜１０＞甘味料組成物を製造するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
＜１１＞＜７＞又は＜１０＞の甘味料組成物において、甘味は遅効性の甘味である。
＜１２＞食品又は医薬品類に対する甘味の付与又は調整に使用するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
＜１３＞上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤。
＜１４＞上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする塩味抑制剤。
＜１５＞上皮性ナトリウムチャネル阻害剤を製造するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
＜１６＞塩味抑制剤を製造するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
＜１７＞上皮性ナトリウムチャネル阻害に使用するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
＜１８＞塩味抑制に使用するための、上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
＜１９＞上記＜１＞のオクテニル硫酸エステル又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する上皮性ナトリウムチャネル阻害方法。
＜２０＞＜１３＞の上皮性ナトリウムチャネル阻害剤又は＜１４＞の塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に対して使用する、塩味抑制方法。
＜２１＞上皮性ナトリウムチャネル阻害剤又は塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に配合して使用する、＜２０＞の方法。
＜２２＞塩味物質含有組成物がミネラル由来の金属イオン及び／若しくは塩化物イオン、又は当該金属イオンと塩化物イオンからなる金属塩化物を含有する組成物である、＜２０＞又は＜２１＞の方法。
＜２３＞ミネラルがナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びリンから選ばれる一種以上の金属である、＜２２＞の方法。
＜２４＞組成物が食品又は口腔用組成物である、＜２０＞～＜２３＞のいずれかの方法。
＜２５＞塩味物質１質量部に対して、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を、０．００１質量部以上、好ましくは０．０１質量部以上で、９０質量部以下、好ましくは１０質量部以下で用いるか、或いは０．００１～９０質量部、好ましくは０．０１～１０質量部用いる、＜２０＞～＜２４＞のいずれかの方法。

製造例１　シス－３－オクテニルサルフェートの合成

　シス－３－オクテン－１－オール（東京化成工業社製、２５６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）と三酸化硫黄ピリジン（６００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えて一晩撹拌した。続いて、１ＭのＮａＯＨ水溶液を加えて、反応系内を塩基性にしたのち、乾燥窒素を吹き付けテトラヒドロフランを除去した。残渣をＯＤＳ（コスモシール　１４０Ｃ１８　ＯＰＮ、１０ｇ、ナカライテスク社製）に通導後、水で洗浄し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出させ、得られた溶出液を減圧下濃縮乾固することで、シス－３－オクテニルサルフェート（８１ｍｇ）を得た。

　性状：白色粉末, 融点１８５℃（分解）;
　¹Ｈ　ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ）：δ０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－８），１．３３－１．３７（４Ｈ，ｍ，Ｈ－６，７），２．０８（２Ｈ，ｍ，Ｈ－５），２．４２（２Ｈ，ｔｄｄｄ，Ｊ＝７．２，７．２，１．０，１．０Ｈｚ，Ｈ－２），３．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１），５．４０（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１０．７，７．２，１．２Ｈｚ，Ｈ－３），５．４９（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１０．７，７．７，１．０Ｈｚ，Ｈ－４）

　¹³Ｃ　ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ）：δ１４．３３（Ｃ－８），２３．２５（Ｃ－７），２７．９９（Ｃ－６），２８．５５（Ｃ－５），３２．９８（Ｃ－２），６８．５７（Ｃ－８），１２５．６９（Ｃ－３），１３３．４６（Ｃ－４）

製造例２　トランス－３－オクテニルサルフェートの合成

　１－ヘプテン(１９６ｍｇ、２ｍｍｏｌ)に塩化メチレン（６ｍＬ）とパラホルムアルデヒド（６０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた後、０℃に冷却し、１．０８Ｍのジメチルアルミニウムクロライド－ヘキサン溶液（２．７７ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を滴下し、室温に昇温後一晩撹拌した。続いて、飽和リン酸二水素ナトリウム水溶液（２ｍＬ）と１Ｍ塩酸水溶液（３ｍＬ）加えた後、エーテル（１０ｍＬ）で抽出を３回繰り返し行い、得られたエーテル層を芒硝乾燥後、減圧濃縮し、トランス－３－オクテン－１－オール（１９０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を得た。続いて、得られたトランス－３－オクテン－１－オール（１９０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）と三酸化硫黄ピリジン（４２１ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を加えて一晩撹拌した。続いて、１ＭのＮａＯＨ水溶液を加えて、反応系内を塩基性にしたのち、乾燥窒素を吹き付けテトラヒドロフランを除去した。残渣をＯＤＳ（コスモシール　１４０Ｃ１８　ＯＰＮ、１０ｇ、ナカライテスク社製）に通導後、水で洗浄し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出させ、得られた溶出液を減圧下濃縮乾固することで、トランス－３－オクテニルサルフェート（１１５ｍｇ）を得た。

　性状：　白色粉末, 融点１５９℃（分解）;
　¹Ｈ　ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ）：δ０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－８），１．２９－１．３８（４Ｈ，ｍ，Ｈ－６，７），２．０１（２Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝６．８，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ－５），２．３５（２Ｈ，ｄｔｄ，Ｊ＝６．８，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ－２），３．９７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ－１），５．４４（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１５．３，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ－３），５．５５（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１５．３，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ－４）

　¹³Ｃ　ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ）：δ１４．２８（Ｃ－８），２３．２３（Ｃ－７），３２．７８（Ｃ－６），３０．４０（Ｃ－５），３３．７２（Ｃ－２），６８．８９（Ｃ－８），１２６．６２（Ｃ－３），１３４．２２（Ｃ－４）

試験例１　甘味の評価（１）
　トランス－３－オクテニルサルフェートを１ｗｔ％になるよう水に溶解し、試験用サンプルとした。調整した試験サンプル５０μＬを口に含んだのち、水を飲み、甘味の有無を６人の試験者を用いて判定した。その結果、表１に示すとおり、６名中６名が甘味を認識し、その甘味は一定時間持続した。

試験例２　甘味の評価（２）
　シス－３－オクテニルサルフェートを１ｗｔ％になるよう水に溶解し、試験用サンプルとした。調整した試験サンプル５０μＬを口に含んだのち、水を飲み、甘味の有無を４人の試験者を用いて判定した。その結果、表２に示すとおり、４名中４名が甘味を認識し、その甘味は一定時間持続した。

試験例３　甘味の評価（３）
　試験者７名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、１０ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェート溶液１０ｍＬを５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。その後、３０秒間隔で５分間、純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度を同様に評価してもらった。その結果、表３に示すとおり、水の摂取により、７名中７名が甘味を認識し、その甘味は一定時間持続した。

試験例４　甘味の評価（４）
　試験者７名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、１０ｍＭのシス－３－オクテニルサルフェート溶液１０ｍＬを５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。その後、３０秒間隔で５分間、純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度を同様に評価してもらった。その結果、表４に示すとおり、水の摂取により、７名中７名が甘味を認識し、その甘味は一定時間持続した。

試験例５　甘味調整作用
（１）ショ糖に対する作用
　試験者７名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、試験者には甘味料の種類と濃度を知らせず、ショ糖水溶液１０ｍＬ（７．５ｗｔ％）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。また、３０秒後に純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時に感じる甘味強度もショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。続いて、５ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェートを含むショ糖水溶液１０ｍＬ（７．５ｗｔ％）を提示し、５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準溶液と甘味強度を比較し、同様に評価してもらった。また、直後に純水１０ｍＬを５秒ほど口に含んだ後、吐き出させ、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。また、３０秒後に純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時に感じる甘味強度もショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。結果を下記表５に示す。

（２）アスパルテームに対する作用
　試験者７名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、試験者には甘味料の種類と濃度を知らせず、アスパルテーム水溶液１０ｍＬ（４９４ｐｐｍ）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。アスパルテームの濃度は、文献に従い、ショ糖水溶液（７．５ｗｔ％）と同様の甘味強度になるように調製した（Ｓｃｈｉｆｆｍａｎ，　Ｓ．Ｓ．　ｅｔ　ａｌ．　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｅｎｓｅｓ，　１９９９，　２４，　４３９－４４７．）。また、３０秒後に純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時に感じる甘味強度もショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。続いて、５ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェートを含むアスパルテーム水溶液１０ｍＬ（４９４ｐｐｍ）を提示し、５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準溶液と甘味強度を比較し、同様に評価してもらった。また、３０秒後に純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時に感じる甘味強度もショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。結果を表５に示す。

（３）スクラロースに対する作用
　アスパルテーム水溶液１０ｍＬ（４９４ｐｐｍ）をスクラロース水溶液１０ｍＬ（０．４９ｍＭ）に換え、（２）と同様にして、試験者６名に甘味強度を同様に評価してもらった。結果を表５に示す。

（４）グリチルリチンに対する作用
　試験者６名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出させ、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、試験者には甘味料の種類と濃度を知らせず、グリチルリチン水溶液１０ｍＬ（３０３ｐｐｍ）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。グリチルリチンの濃度は、文献に従い、ショ糖水溶液（５ｗｔ％）と同様の甘味強度になるように調製した（Schiffman, S.S. et al. Chemical senses, 1999, 24, 439-447.）。また、３０秒後に純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時に感じる甘味強度もショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。続いて、５ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェートを含むグリチルリチン水溶液１０ｍＬ（４９４ｐｐｍ）を提示し、５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準溶液と甘味強度を比較し、同様に評価してもらった。また、３０秒後に純水１０ｍＬを口に含んだ後、吐き出し、その時に感じる甘味強度もショ糖標準水溶液と比較し、同様に評価してもらった。結果を表５に示す。

　表５より、トランス－３－オクテニルサルフェートは、ショ糖、アスパルテーム、スクラロース、グリチルリチンの摂取した直後の先味の甘味を抑制し、口の中に残った後味の甘味を増強させることがわかった。特に、後甘味が強く、持続性のある甘味料であるグリチルリチンの場合は、その増強効果が顕著であった。

　試験例６　甘味増強作用
（１）スクラロース
　試験者６名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、試験者には甘味料の種類と濃度を知らせず、スクラロース水溶液１０ｍＬ（０．２５ｍＭ）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。続いて、事前に５ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェート溶液１０ｍＬを事前に５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、６０秒経過後に、スクラロース水溶液１０ｍＬ（０．２５ｍＭ）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。

（２）グリチルリチン
　試験者６名に、４種類のショ糖標準水溶液１０ｍＬ（２．５、５．０、７．５、１０．０ｗｔ％）を提示した。試験者には、それぞれの溶液を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度（０～１５）を、それぞれ２．５、５、７．５、１０とするように依頼した。次に、試験者には甘味料の種類と濃度を知らせず、グリチルリチン水溶液１０ｍＬ（０．２５ｍＭ）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。続いて、事前に５ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェート溶液１０ｍＬを５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、６０秒経過後に、グリチルリチン水溶液１０ｍＬ（０．２５ｍＭ）を５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、その時の甘味強度をショ糖標準水溶液と比較し、０～１５の範囲の数値で評価してもらった。結果を表６に示す。

　表６より、トランス－３－オクテニルサルフェートをあらかじめ摂取しておくことで、甘味料の甘味を増強する効果があることがわかった。

試験例７　オクテニル硫酸エステルのＥＮａＣ阻害活性
　The journal of biological chemistry, 284(2):pages 792-798 (2009)に記載の方法に準じ、アフリカツメガエル卵母細胞に発現させたＥＮａＣの阻害活性を測定した。具体的には以下の手順に従い、ＥＮａＣ複合体を発現させた卵母細胞にトランス－３－オクテニルサルフェートを添加し、ＥＮａＣの活性を電気生理学的に解析した。
　まず、ヒトＥＮａＣα、β、γそれぞれをコードするＤＮＡ配列は、同遺伝子がクローニングされたプラスミドベクター（クロンテック社製）を鋳型としてＰＣＲを行うことで得た。得られたＰＣＲ増幅断片を転写用ベクターｐＳＰ６４（プロメガ社製）に組み込み、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣα、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣβ、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣγそれぞれを作製した。
　ｐＳＰ６４／ＥＮａＣα、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣγをＥｃｏＲＩで、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣβをＰｖｕＩＩで、それぞれ消化することで、プラスミドＤＮＡを直鎖化した。これら直鎖化ＤＮＡに対してＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼ（タカラ社製）を使用することで、ＥＮａＣα、ＥＮａＣβ、ＥＮａＣγそれぞれを発現させるｐｏｌｙＡ配列が付加したｃＲＮＡを合成した。合成したｃＲＮＡにフェノール・クロロホルム処理を行い、得られた上清を回収し、さらにイソプロピルアルコールを混和して遠心分離することによりｃＲＮＡを沈殿させた。沈殿させたｃＲＮＡを７５％エタノールで洗浄した後に、蒸留水に１ｍｇ／ｍｌの濃度になるように溶解させた。
　得られたＥＮａＣα、ＥＮａＣβ、ＥＮａＣγそれぞれをコードするｃＲＮＡ水溶液を等量混和し、一つのアフリカツメガエル卵母細胞につき５０ｎｇずつ注入した。具体的には、マニピュレーター（ＮＡＲＩＳＨＩＧＥ社製）を用いてガラスキャピラリーにｃＲＮＡ水溶液を充填し、一つの卵母細胞につき５０ｎＬずつ注入した。その後、２－３日間をかけてＥＮａＣ a、β、γ、複合体を卵母細胞膜に発現させた。
　二本の微小ガラス電極を卵母細胞に刺入し、膜電位を－６０ｍＶに固定する。このとき、恒常的に活性状態にあるＥＮａＣ複合体によって誘起されるＮａ^＋イオンの流入を、電流量の変化に置き換えて測定した。すなわち、１１５ｍＭ　ＮａＣｌ溶液（１１５ｍＭ　ＮａＣｌ、２．５ｍＭ　ＫＣｌ、１．８ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＮａＨＣＯ_３、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中にあり、卵母細胞が内向きの電流を引き起こしている状況下で、同溶液に溶解させたトランス－３－オクテニルサルフェートを投与した。

　その結果、図１に示すとおり、トランス－３－オクテニルサルフェートは３－３０ｍＭの範囲で濃度依存的にＥＮａＣ発現卵母細胞の内向き電流を抑制した。この効果は、既存のＥＮａＣ阻害剤アミロライドと同様のものであった。また、このトランス－３－オクテニルサルフェートの効果は、ＥＮａＣを発現させない卵母細胞では認められなかったことから、ＥＮａＣに対するものであることが確かめられた。

試験例８
　被験者７名に塩味標準溶液として０．６ｗ／ｖの食塩水を呈示し、５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、感じた塩味強度（０～１０）を中央値の５とした。
　次に、食塩水溶液（０．６，１．０ｗ／ｖ％）をそれぞれ５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、感じた強度を、感じない場合は０、非常に強く感じる場合を１０とし、１から１０の範囲で回答してもらった。続いて、５ｍＭのトランス－３－オクテニルサルフェートを含む食塩水溶液（０．６，１．０ｗ／ｖ％）を調製し、試験者に呈示した。それぞれ５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、感じた強度を０から１０の値で回答してもらった。その結果を表７に示す。

　表７より、本発明のオクテニル硫酸エステルには塩味抑制作用があることが確認された。

Claims

　下記式（１）で示されるオクテニル硫酸エステル又はその塩。

（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）
　請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする甘味調整剤。
　他の甘味料の先味の甘味を抑制する、請求項２記載の甘味調整剤。
　さらに、他の甘味料の後味の甘味を増強する、請求項３記載の甘味調整剤。
　他の甘味料がグリチルリチンである請求項３又は４記載の甘味調整剤。
　オクテニル硫酸エステル又はその塩を予め摂取し、次いで他の甘味料を摂取した場合の当該他の甘味料の甘味を増強する、請求項２記載の甘味調整剤。
　請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩を含有する甘味料組成物。
　請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩、又は請求項２記載の甘味調整剤を食品又は医薬品類へ含有させる、食品又は医薬品類に対する甘味の付与又は調整方法。
　請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤。
　請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする塩味抑制剤。
　請求項９記載の上皮性ナトリウムチャネル阻害剤又は請求項１０記載の塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に対して使用する、塩味抑制方法。
　塩味物質含有組成物がミネラル由来の金属イオン及び／若しくは塩化物イオン、又は当該金属イオンと塩化物イオンからなる金属塩化物を含有する組成物である、請求項１１記載の方法。
　ミネラルがナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びリンから選ばれる一種以上の金属である、請求項１２記載の方法。
　組成物が食品又は口腔用組成物である、請求項１１～１３のいずれか１項記載の方法。
　甘味調整剤を製造するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　甘味料組成物を製造するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　食品又は医薬品類に対する甘味の付与又は調整に使用するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
　上皮性ナトリウムチャネル阻害剤を製造するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　塩味抑制剤を製造するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
　上皮性ナトリウムチャネル阻害に使用するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
　塩味抑制に使用するための、請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩。
　請求項１記載のオクテニル硫酸エステル又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する上皮性ナトリウムチャネル阻害方法。