WO2014198105A1

WO2014198105A1 - 一种对照提取物的标定方法及应用

Info

Publication number: WO2014198105A1
Application number: PCT/CN2013/087757
Authority: WO
Inventors: 陈浩达
Original assignee: Chen Haoda
Priority date: 2013-06-13
Filing date: 2013-11-25
Publication date: 2014-12-18
Also published as: CN104237398B; CN104237398A

Abstract

一种对照提取物的标定方法，对照提取物有n个批次，每批均含有m个成分，每批对照提取物均配制成浓度为C _ij的溶液，将任一批对照提取物溶液以进样体积和信号值S _ij进行线性回归，得出第j个成分的回归方程的相关系数，利用此系数和第i批对照提取物的第j个成分的信号值S _ij及S ₁ _j，计算出同一成分在不同批次对照提取物中的信号质量比的值，进而列出第i批对照提取物中各成分的信号值与进样量之间的关系式，形成方程组，统计该方程组的各成分的根，在相对标准偏差低于可接受的判别误差时，标定成功。该标定方法可减少工作量，为药品提供更科学合理的标准制定思路。

Description

一种对照提取物的标定方法及应用

技术领域

本发明涉及分析领域，具体的涉及一种对照提取物的标定方法及应用。

背景技术

在进行药品的研发和检验过程中，对照品起着一个非常重要的角色，然而对照品的分离和精制是一项繁琐而又困难的工作。现行新药注册法规上对于含量测定用对照品的技术要求是：一般化药对照品的纯度要求为 99.5% ，有关物质对照品纯度要求为 95% ，中药对照品的纯度要求为 98% ，所述的纯度检测方法大都采用归一法，为了达到这个纯度，研究者用尽各种分离方法如萃取、柱色谱、高速逆流色谱、制备液相色谱、反复重结晶等手段，即便这样，还不能达到含量测定所需的纯度，期间所用到的大量有机溶剂，试验过程中试剂的消耗带来的环境污染和人体的健康是巨大的。

在进行中药、天然药物等含多种成分药物的质量研究时，由于成分复杂，测量某一两个成分并不能代表该产品的质量，欲分离出其中的纯大多数成分并作为对照品进行含量测定时，就目前的技术来说是不现实的，纵然投入大量的物力、人力，浪费大量的有机溶剂，甚至动用制备色谱等，从经济上和以后的推广上也是不合算的。

对于有关物质用对照品，分离则更困难。

可喜的是，针对多成分药物，人们提出了使用对照提取物作为对照，制定质量标准，简化了应用，降低了成本。文献马玲云，马双成中药标准物质的发展现状与展望 [J]. 中国药事， 2010 ， 24 （ 12 ）： 1232-1235. 上提到了对照提取物的标定要求： 1 ）原料的来源、提取部位及制备工艺应明确； 2 ）主成分及含量相对固定（ TLC 、 HPLC 、 GC ）； 3 ）理化特征换批间应一致（溶解度、相对密度、折光率、旋光度等）。从上述要求可知，对照提取物中的主成分只是含量相对固定，并不能标定出其具体的含量比例，如若确定其具体的主成分含量，还得使用对照品进行测定。

就目前的行业现状，对照品的纯度检测方法通常是用归一法进行检测，以主成分峰面积占所有成分的峰面积的百分比，此种检测方法有一个缺限，不同成分的峰面积与质量的比值通常是不同的，因此归一法测定对照品的纯度实际上是有一定的方法误差，如同一对照品，采用 HPLC-UV 法检测纯度，当检测波长不同时，检测结果是不一样的。

技术问题

如上，在新药研发和药品的质量控制中，对照品的来源是相当的困难，归一法测定对照品纯度有一定的缺限，如何突破技术难关，弄清中药中的大部分成分的质量，还能解决化药中有关物质对照品来源困难，完善对照品的纯度标定方法，对多成分对照提取物中各成分的含量进行标定，并将对照提取物作为对照进行新药研发和药品的质量控制是本发明所要解决的问题。

技术解决方案

本发明针对上述问题，提出了一种对照提取物的各组分的标定方法，在标定过程中不需要使用高纯度的对照品，而只需多批对照提取物。

本发明是这样实现的：

一种对照提取物的标定方法，对照提取物共有 n 个批次，分别为第 1 、 2 、 3 …… i …… n 批，每个批次均含有 m 个成分，它们分别为 A₁ 、 A₂ 、 A₃ …… A_j …… A_m ，其中 n ≥ m, 1 <i ≤ n ， 1 < j ≤ m ，每批对照提取物通过色谱法 W 在仪器中进行检测，各种成分均能达到分离的效果，成分 A_j 的信号质量 N_j 与一定范围 [ D_j1 ， D_j2 ] 内的信号值 S_j 存在如下的一一对应函数关系式：

S_j = f_j (N_j) ，式中， j=1 、 2 、 3 …… m

步骤一、各批对照提取物中的各成分关系式

每批对照提取物如第 i 批对照提取物，均配制成一定的浓度 C_i ，以一定的进样体积 V_i 进样，进样质量为 M_i=C_i* V_i ，第 i 批对照提取物中的成分A₁ 、A₂ 、A₃ ……A_j ……A_m的进样浓度分别为C _i1 、C_i2 、C_i3 ……C_ij ……C_im，在仪器中的信号质量分别为N_i1 、N_i2 、N_i3 ……N_ij ……N_im ，它们在仪器中的信号值分别为S_i1 、S_i2 、S_i3 ……S_ij ……S_im ，各批对照提取物中的各组分存在如下的关系式：

M₁ ＝ N₁₁ + N₁₂ + N₁₃ …… N_1j …… + N_1m

M₂ ＝ N₂₁+ N₂₂ +N₂₃ …… N_2j …… + N_2m

……

M_i ＝ N_i1+ N_i2 + N_i3 …… N_ij …… + N_im

……

M_n ＝ N_n1 + N_n2 + N_n3 …… N_nj …… + N_nm

S_{i j} = f_j (N_ij) ； N_ij = C_ij *V _i ，其中， i=1 、 2 、 …… n， j=1 、 2 、 …… m

步骤二、方程组的建立

由于成分 A_j 的信号质量 N_ij 与信号值 S_ij 存在一一对应的关系，将任一批对照提取物溶液如第 1 批，以不同的进样体积（ V ）通过色谱法 W 分离后在仪器中进行检测，根据函数 S_j = f_j(N_j) = f_j(C_1j*V) 可知：

由于 C_1j 是一个固定的未知值，因此对于第 1 批的对照提取物所配制的溶液，存在函数关系式： S_j = g_j(V) 及它的反函数 V = g_j ^-1 ( S_j ) ，即第 1 批对照提取物的溶液的不同进样体积（ V ），有一个固定的信号值与之相对应，同样，一个固定的信号值，存在第1批对照提取物溶液的某个进样体积与之相对应，且两个函数的相关系数是通过线性回归可确定出具体数值，令 N_ij = λ_ij * N_1j = λ_ij *C_1j* V₁ ，式中，λ_ij 是同一成分的信号质量比，则存在下列等式：　

S_ij = f_j (N_{i
j} )= f_j (N_1j * λ_ij )= f_j (C_1j *V₁ * λ_ij )= g_j ( V₁ * λ_ij )

S_1j = f_j (N_{1
j} ) =g_j ( V₁ )

λ_ij = g_j ^-1 ( S_ij ) / V ₁ ，其中 i=2 、 3 …… n ， j=1 、 2 、 …… m

在上式中， S_ij 、 S_1j 、 V₁是具体的固定值，函数 g_j （ V ）的相关系数是固定的，因此 λ_ij 是可以计算出的一个具体值，这样，根据步骤一中的关系式，可得到如下的方程组：

1 ） M₁ ＝ N₁₁ + N₁₂ + N₁₃ …… N_1j …… + N_1m

2 ） M₂ ＝ N₂₁+ N₂₂ +N₂₃ …… N_2j …… + N_2m

＝ λ₂₁ *N₁₁ + λ₂₂ * N₁₂ + λ₂₃ * N₁₃ ……λ_2j * N_1j …… + λ_2m * N_1m

……

i ） M_i ＝ N_i1+ N_i2 + N_i3 …… N_ij …… + N_im

＝ λ_i1 *N₁₁ + λ_i2 * N₁₂ + λ_i3 * N₁₃ ……λ_ij * N_1j …… + λ_im * N_1m

……

m ） M_n ＝ N_n1 + N_n2 + N_n3 …… N_nj …… + N_nm

＝ λ_n1 *N₁₁ + λ_n2 * N₁₂ + λ_n3 * N₁₃ ……λ_nj * N_1j …… + λ_nm * N_1m

步骤三、方程组的求解

选择其中的 m 行，共有 u=C_n ^m 种 m 行组成的方程组，

解第 1 种 m 行的方程组，得出第 1 批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（ N₁₁₁ 、 N₁₂₁ …… N_1j1 …… N_1m1 ），

各成分的信号质量和为： N₁₀₁= N₁₁₁ + N₁₂₁ + N₁₃₁ …… N_1j1 …… + N_1m1 ，

记 Q₁₁= （ N₁₁₁ ， N₁₂₁ …… N_1j1 …… N_1m1 ， N₁₀₁ ）；

解第 2 种 m 行的方程组，得出第 1 批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（ N₁₁₂ 、 N₁₂₂ …… N_1j2 …… N_1m2 ），

各成分的信号质量和为： N₁₀₂= N₁₁₂ + N₁₂₂ + N₁₃₂ …… N_1j2 …… + N_1m2 ，

记 Q₁₂= （ N₁₁₂ ， N₁₂₂ …… N_1j2 …… N_1m2 ， N₁₀₂ ）；

……

解第 k 种 m 行的方程组，其中 1 ≤ k ≤ u ，得出第 1 批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（ N_11k 、 N_12k …… N_1jk …… N_1mk ），

各成分的信号质量和为： N_10k=N_11k + N_12k + N_13k …… N_1jk …… + N_1mk ，

记 Q_1k= （ N_11k ， N_12k …… N_1jk …… N_1mk ， N_10k ）；

……

解第 u 种 m 行的方程组，得出第 1 批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（ N_11u 、 N_12u …… N_1ju …… N_1mu ），

各成分的信号质量和为： N_{10 u} = N_11u + N_12u + N_13u …… N_1ju …… + N_1mu ，

记 Q_1u= （ N_11u ， N_12u …… N_1ju …… N_1mu ， N_10u ）。

步骤四、统计第 1 批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和

统计第 1 批对照提取物的第 1 种成分 A₁ 信号质量的 u 种值（ N₁₁₁ ， N₁₁₂ ， …… N_11k …… N_11u ），得出统计值（ T₁₁ ， e₁₁ ），其中 T₁₁ 为平均值， e₁₁ 为标准偏差，相对标准偏差 P₁₁= e₁₁/ T₁₁ ；

统计第 1 批对照提取物的第 2 种成分 A₂ 信号质量的 u 种值（ N₁₂₁ ， N₁₂₂ ， …… N_12k …… N_12u ），得出统计值（ T₁₂ ， e₁₂ ），其中 T₁₂ 为平均值， e₁₂ 为标准偏差，相对标准偏差 P₁₂ ＝ e₁₂/ T₁₂ ；

……

统计第 1 批对照提取物的第 j 种成分 A_j 信号质量的 u 种值（ N_1j1 ， N_1j2 ， …… N_1jk …… N_1ju ），得出统计值（ T_1j ， e_1j ），其中 T_1j 为平均值， e_1j 为标准偏差，相对标准偏差 P_1j ＝ e_1j/ T_1j ；

……

统计第 1 批对照提取物的第 m 种成分 A_m 信号质量的 u 种值（ N_1m1 ， N_1m2 ， …… N_1mk …… N_1mu ），得出统计值（ T_1m ， e_1m ），其中 T_1m 为平均值， e_1m 为标准偏差，相对标准偏差 P_1m ＝ e_1m/T_1m ；

统计第 1 批对照提取物的 m 种成分信号质量总和的 u 种值（ N₁₀₁ ， N₁₀₂ ， …… N_10k …… N_10u ），得出统计值（ T₁₀ ， e₁₀ ），其中 T₁₀ 为平均值， e₁₀ 为标准偏差；相对标准偏差 P₁₀ ＝ e₁₀/T₁₀ ；

当相对标准偏差 P₁₁ 、 P₁₂ …… P_1j …… P_1m 、 P₁₀ 均低于可接受的判别误差 R 时，则标定成功，第 1 批对照提取物的各成分在仪器中的信号质量为（ T₁₁ ， T₁₂ …… T_1j …… T_1m ），信号质量总和为 T₁₀ ，第 1 批对照提取物的各成分的百分含量或者为（ T₁₁/ M₁ ， T₁₂/ M₁ …… T_1j/ M₁ …… T_1m/ M₁ ），或者为（ T₁₁/T₁₀ ， T₁₂/T₁₀ …… T_1j/ T₁₀ …… T_1m/ T₁₀ ），其中，可接受的判别误差 R 与仪器的精密度、操作人员的操作误差、提取物纯化的难易程度、提取物中成分的稳定性等有关，其值或者是 5% ，或者 3% ，或者 2% ，或者1%等。

所述对照提取物的标定方法，在步骤三中还可以解出其余的 n-1 批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的 u 种值，具体的求解方法为：

由于 Q_1k=（N_11k ，N_12k ……N_1jk ……N_1mk ，N_10k ），其中，k=1 、2 ……u ；

N_ij= λ_ij * N_1j 即 N_ijk= λ_ij * N_1jk 所以：

第i批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的 u 种值为：

Q_ik= （ N_i1k ， N_i2k …… N_ijk …… N_imk ， N_i0k ）

= （ λ_i1 * N_11k ， λ_i2 * N_12k …… λ_ij * N_1jk …… λ_im * N_1mk ， N_i0k ），其中， i=2、3 …… n，k=1 、 2 …… u ；

在步骤四中，统计所有批次对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的u种值的相对标准偏差（ P_i1 ， P_i2 …… P_ij …… P_im ， P_i0 ），其中 i=1 、 2 、 3 …… n 。

当相对标准偏差 P_ij 均低于可接受的判别误差 R 时，则标定成功。

所述对照提取物的标定方法，若函数 S_j = f_j(N_j) 为直线线性关系时，即

S_j= f_j(N_j)=a_j*N_j+b_j ，对第 1 批对照提取物溶液，作如下的函数变换：

S_j= f_j(N_j)=a_j*N_j+b_j= a_j*(C_1j*V)+b_j= (a_j*C_1j) *V+b_j = g_j ( V )

以不同的进样体积（ V ）进样，可回归出函数 g_j ( V )= (a_j*C_1j) *V+b_j 的相关系数 (a_j*C_1j 、 b_j) 的具体值，这样对于第 1 批和第 i 批对照提取物，令 N_ij= λ_ij * N_1j ，有下列的关系式：

S_ij= f_j(N_ij)=a_j*N_ij+b_j= a_j*( λ_ij *N_1j)+b_j

S_1j= f_j(N_ij)=a_j*N_1j+b_j

解上二式，可得 λ_ij = （ S_ij － b_j ） / ( S_1j － b_j) ，

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

当 b_j 与 S_ij 中最小的信号值的比值很小如低于 1% 时，线性关系式可以近似的认为是通过原点的， λ_ij 的大小可以估算为 S_ij/S_1j 。

所述对照提取物的标定方法，若函数 S_j = f_j(N_j) 为对数线性关系时，即

S_j= f_j(N_j)=10^(a_j*lg(N_j)+b _j) ，对第 1 批对照提取物溶液，作如下的函数变换：

S_j= f_j(N_j)=10^(a_j*lg(N_j)+b _j) =10^( a_j*lg(C_1j*V)+b_j)

=10^( a_j*lg(V)+b_j+ a_j*lg(C_1j)) = g_j ( V )

函数 S_j =g_j ( V ) = 10^( a_j*lg(V)+b_j+ a_j*lg(C_1j)) 中的相关系数（ a_j 、 b_j+ a_j*lg(C_1j) ）是通过试验及线性回归能得出具体值，这样对于第一批和第 i 批，令 N_ij= λ_ij *N_1j ，有下列的关系式

lg(S_1j)= a_j*lg(N_1j)+b_j

lg(S_ij)= a_j*lg(N_ij)+b_j= a_j*lg( λ_ij *N_1j )+b_j

= a_j*lg( λ_ij )+ a_j*lg(N_1j )+b_j = a_j*lg( λ_ij ) + lg(S_1j)

解上二式，可得 λ_ij =10^{ [lg(S_ij) － lg(S_1j)] / a_j }

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

所述对照提取物的标定方法，对于第 i 批对照提取物的 A_j 成分，若 S_ij 不在区间 [D_j1 ， D_j2] 内，可通过调节第 i 批的进样质量为 M_i ＇ = γ_ij *M_i ，使进样后的信号值 S_ij ＇落在区间 [ D_j1 ， D_j2 ] 内， γ_ij 是一个通过试验能得到的具体数值，此时， N_ij ＇ = γ_ij *N_ij ， λ_ij 的计算方法主要分两种情况：

情况 1 ：函数为直线线性关系，则：

S_1j= a_j*N_1j+b_j

S_ij ＇ =a_j*N_ij ＇＋ b_j = a_j*N_ij* γ_ij ＋ b_j = a_j* λ_ij * N_1j* γ_ij ＋ b_j

= ( S_1j － b_j) * λ_ij * γ_ij ＋ b_j

λ_ij = （ S_ij ＇－ b_j ） / ( S_1j － b_j)/ γ_ij

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

情况 2 ：函数为对数线性关系，则：

lg(S_ij ＇) = a_j*lg(N_ij ＇)+b_j = a_j*lg(N_ij * γ_ij )+b_j = a_j*lg( λ_ij *N_1j * γ_ij )+b_j

= a_j*lg( λ_ij )+ a_j*lg( γ_ij )+a_j*lg(N_1j )+b_j

= a_j*lg( λ_ij ) + a_j*lg( γ_ij ) +lg(S_1j)

λ_ij =10^{[ lg （ S_ij ＇） - a_j*lg( γ_ij ) -lg(S_1j)]/ a_j }

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

上式中， S_1j 、 S_ij ＇、 γ_ij 均是实验后所得的具体值， a_j 是线性回归后所得的具体值，因此，λ_ij 也是可以计算出来的一个具体值。

所述对照提取物的标定方法，在函数关系 S_j=f_j(N_j)=a_j*N _j+b_j 时，步骤二、三、四还可作如下的更改：

步骤二、方程组的建立

对第一批对照提取物所配制的溶液，存在函数： S_j=f_j(N_j)=a_j*N _j+b_j= a_j*C_1j*V+b_j ，以不同进样体积（ V ）所对应的信号值作线性回归，得出信号值在 [D_j1 ， D_j2] 范围内的线性关系式，且值 a_j*C_1j 和 b_j 是可回归出结果的值；

由 S_j=a_j*N_j+b_j 可知： N_j=1/a_j* (S_j-b_j) ，其中 S_j ∈ [D_j1 ， D_j2] ；

令α_j =1/a_j ，

若第 i 批对照提取物的第 j 个成分的信号值 S_ij 在区间 [D_j1 ， D_j2] 内，则

N_{i j} =1/a_j* (S_{i
j} -b_j) = (S_{i j} -b_j) * α_j

式中，α_j 是一个未知值，系数 S_{i j} -b_j 是一个可计算出结果的值，记ω_{i j}

若第 i 批对照提取物的第 j 个成分的信号值 S_ij 不在区间 [Dj₁，Dj₂] 内，可调节第 i 批对照提取物的进样质量为M_i＇=γ_ij*M_i，使进样后的信号值S_ij＇落在区间 [D_j1，D_j2] 内，γ_ij是一个通过试验能得到的具体数值，此时，N_ij＇=γ_ij*N_ij，

N_ij ＇ =1/a_j* (S_ij ＇ -b_j)= α_j *(S_ij ＇ -b_j)= γ_ij *N_ij

N_ij = α_j * (S_{i
j} ＇ -b_j)/ γ_ij

式中， α_j 是一个未知值，系数 (S_{i j} ＇ -b_j)/ γ_ij 是一个可计算出结果的值，为方便方程的书写，也记作ω_{i j} ，因此，对于第 i 批对照提取物溶液的第 j 个成分 A_j ，存在如下的关系式：

N_ij= ω_{i j} * α_j ，ω_{i j} 是一个可计算出结果的固定值， α_j 是一个未知值， i= 1 、 2 、 3 …… n ， j=1 、 2 、 …… m 　

当 b_j 　很小时，ω_{i j} 的近似值是 S_{i j} 或 S_{i j} ＇ / γ_ij

根据步骤一的结果，存在下列的方程组：

M₁ ＝ ω₁₁ * α₁ + ω₁₂ * α₂ + ω₁₃ * α₃ ……ω_{1 j} * α_j …… + ω_1m * α_m

M₂ ＝ ω₂₁ * α₁ + ω₂₂ * α₂ + ω₂₃ * α₃ ……ω_{2 j} * α_j …… + ω_{2 m} * α_m

……

M_i ＝ ω_i1 * α₁ + ω_i2 * α₂ + ω_i3 * α₃ ……ω_{i j} * α_j …… + ω_{i m} * α_m

……

M_n ＝ ω_n1 * α₁ + ω_n2 * α₂ + ω_n3 * α₃ ……ω_{n j} * α_j …… + ω_{n m} * α_m

步骤三、方程组的求解

选择其中的 m 行，共有 u=C_n ^m 种 m 行组成的方程组，解第 k 种方程组，得根为（ α_1k 、 α_2k 、 ……α_ik 、 ……α_mk ），其中， k=1 、 2 …… u ；

步骤四、统计

统计 α₁ 的 u 种值（ α₁₁ ， α₁₂ ， ……α_1k ……α_1u ），得出统计值（ Γ₁ ， e₁ ），其中 Γ₁ 为平均值， e₁ 为标准偏差，相对标准偏差 ε₁= e₁/ Γ₁ ；

统计 α₂ 的 u 种值（ α₂₁ ， α₂₂ ， ……α_2k ……α_2u ），得出统计值（ Γ₂ ， e₂ ），其中 Γ₂ 为平均值， e₂ 为标准偏差，相对标准偏差ε₂= e₂/ Γ₂ ；

……

统计 α_j 的 u 种值（ α_j1 ， α_j2 ， ……α_jk ……α_ju ），得出统计值（ Γ_j ， e_j ），其中 Γ_j 为平均值， e_j 为标准偏差，相对标准偏差 ε _j= e_j/ Γ_j ；

……

统计 α_m 的 u 种值（ α_m1 ， α_m2 ， ……α_mk ……α_mu ），得出统计值（ Γ_m ， e_m ），其中 Γ_m 为平均值， e_m 为标准偏差，相对标准偏差 ε _m= e_m/ Γ_m ；

当相对标准偏差 ε ₁ 、 ε ₂ …… ε _j …… ε _m 均低于可接受的判别误差 R 时，则标定成功，第 1 批对照提取物的各成分在仪器中的信号质量为（ ω₁₁ * Γ₁ ， ω₁₂ * Γ₂ ……ω_1j * Γ_j ……ω_1m * Γ_m ），各成分在仪器中的信号质量和为N ₁₀ =ω₁₁ * Γ₁ +ω₁₂ * Γ₂+ ……+ω_1j * Γ_j +……+ω_1m * Γ_m，第1 批对照提取物的各成分的百分含量或者为（ ω₁₁ * Γ₁ /M ₁ ， ω₁₂ * Γ₂ /M₁ ……ω_1j * Γ_j /M₁ ……ω_1m * Γ_m /M₁ ），或者为（ ω₁₁ * Γ₁ /N₁₀ ， ω₁₂ * Γ₂ /N₁₀ ……ω_1j * Γ_j /N₁₀ ……ω_1m * Γ_m /N₁₀ ）。

所述对照提取物的标定方法中：

色谱法 W 可以是液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法等；

检测成分信号的仪器可以是紫外检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电喷雾检测器、质谱等，还可以是通过化学反应来检测成分的信号，如薄层色谱扫描法中的显色方法及扫描方法、化学成分的衍生化等；

目前分析行业中所能接受的分析方法如 TLCS 、 HPLC-UV 、 HPLC-ELSD 、 GC 、液质、气质等，可以是一种，也可以是多种组合；

所述统计方法为统计学上可接受的通用方法，如算术平均、加权平均等。

本发明中可接受的判别误差 R 可以作这样的理解：

在进行含量测定的方法学研究中，重现性试验得出的多个含量中，到底哪个值是样品的含量呢，为此引入了相对标准偏差，只有相对标准偏差低于行业认可的值后，重现性试验才成功，它的平均值就是样品中的含量；

同样，在本发明中的标定过程中，如第 i 批对照提取物溶液的第 j 个成分 A_j 在仪器中的信号质量 N_ij 有 u 种标定结果，它们是（ N_ij1 、 N_ij2 、 …… N_ijk …… N_iju ） , 到底哪个值是它的实际信号质量呢，为此引入可接受的判别误差 R ，只有相对标准偏差低于 R 值，标定才能成功，计算出来的 u 种结果的平均值就是实际信号质量，因此 R 值设定的大小与仪器的精密度、操作人员的操作误差、提取物纯化的难易程度、提取物中成分的稳定性等因系有关，其值或者设定为 5% ，或者 3% ，或者 2%，或者1% 等。

所述对照提取物的标定方法中，若相对标准偏差 P_ij 中有一个大于可接受的判别误差 R 如 R=5% 时，一个重要的原因是对照提取物不纯，有些成分在该检测条件下未检出，需要重新纯化或调整检测条件，再行研究。

所述对照提取物的标定方法在医药研发、检验中有着广泛的应用，如在药品研究或检验时，当某些成分未得到合法的来源或者来源非常困难时，可选用本发明的对照提取物的标定方法，进行标定，用于药品研发或检检，不仅成本低，而且极大的加快研发速度和检验速度，更有利于环境的保护和人员的健康。

为进一步保证对照提取物的标定成功率，可预先采用多种方法确定对照提取物中的成分个数，如不同展开剂、显色剂的薄层色谱图，不同流动相、不同检测波长的高压液相色谱图、不同流动相的的蒸发光散射检测器的检测谱图等。

本发明中的多批对照提取物中的各成分应相同，最好是经初步确定含有的成分个数确定其中的一批，其余的 n-1 批为这一批的亚批次。

如本发明中的某些批次的对照提取物的均匀性有一定波动时，标定所得的结果应是配制成溶液的那一部分的对照提取物的各组分含量，因此在实际检验时应使用多批提取物进行配制，并重新进行标定后测定。

本发明中的各批对照提取物中各成分的含量比例最好有较大的差异，以更好的提高标定成功率。

本发明中的对照提取物中的水分、无机物、有机溶剂等一些不可在本发明中所提及的仪器中体现的，应当进行扣除，若能体现的，相应的信号及信号质量还应扣除，具体的计算方法参照文献马玲云，马双成中药标准物质的发展现状与展望 [J]. 中国药事， 2010 ， 24 （ 12 ）： 1232-1235. 。

本发明中的对照提取物是指含有多个成分的混合物，它包括但不限于从中药、天然药物中经提取、分离纯化后仍含有多个成分的混合物，化药合成过程中所得的含有多个成分的混合物或分离后的混合物等。

本发明的对照提取物的制备方法不是本发明的保护范围，但是制备后的对照提取物中各成分或某些成分的含量赋值，在没有合法来源或规范性来源时，而是利用本发明的标定方法进行标定，则属于本发明的保护范围。

本发明中仪器检测条件，如液相色谱的检测波长、流动相的比例、薄层色谱的展开条件及显色条件等一些现有技术，不是本发明的保护范围。

应用本发明的对照提取物标定方法，将所得的对照提取物用于研发、检验时，对照品是本发明的保护范围，其供试品的制备方法、仪器检测条件如检测波长、流动相等不属于本发明的保护范围。

本发明中的进样浓度的具体详解为：将对照提取物加入一定的溶剂，配制成均匀的溶液，用来进入测定仪器中，它的单位是 mg/ml 、μ g/ml 等，对照提取物可以是固体、液体等。

本发明中的进样质量的具体详解为：进入仪器的质量，是进样浓度与进样体积的积，单位可以是纳克 (ng) 、微克（μ g ）等。

本发明中的信号质量、信号值的具体详解为：信号值指的是某一种成分在检测仪器中出现了色谱峰，这个峰的峰面积、峰高等信号的大小即为信号值，这个信号值所代表的这种成分的质量即为信号质量，它的单位可以是纳克 (ng) 、微克（μ g ）等。

本发明提供了一种利用多批对照提取物中各成分的信号值之间的关系来标定对照提取物中各成分的含量，任何在本发明的基础上或参照本发明，对方程式作简单的数学变换、统计方法的改变等，或参照解方程的过程来调节进样质量以求解某些成分的含量，均是本发明的保护范围。

有益效果

本发明在化工、医药中有着非常广泛的应用：

1 ）由于对照品自始自终贯穿于药品研发、生产、质检等，因此能对对照提取物进行科学合理的标定，确定提取物中各成分的含量，可极大的减少工作量，降低研发成本和检验成本，同时还为中药产品的真假优劣提供了更强的辩别依据。

2 ）解决化药研究中有关物质对照品制备困难的问题

化药有关物质制备成纯品非常困难，应用本标定方法对有关物质混合物进行标定，可很好的解决。

3 ）为归一法定对照品纯度的缺限提供了一个更好的补充

目前对对照品的纯度标定方法是归一法，如一般化药对照品的纯度要求为 99.5% ，有关物质对照品纯度要求为 95% ，中药对照品的纯度要求为 98% ，它们的标定方法都是归一法，但这种方法有一个明显的缺限，它的杂质与主成分不是同一种成分，不同成分对光的响应程度是不同的，如中药对照品以归一法进行纯度标定时，不同的检测波长，标定的纯度是不一样的，而本发明的标定方法中，是将主成分与杂质看着不同成分进行标定，并结合统计，因此标出的对照品纯度的可信度更高。

4 ）为中药指纹图谱评价中药质量提供更科学的标准

针对中药指纹图谱中各种成分，采用化学方法制备对照提取物，标定后可准确的确定中药指纹图谱中各成分的含量，再进行统计，应用这种方法与传统的以峰面积统计相比，具有更高的可信度。

附图说明

本发明的最佳实施方式

本实施例中， n=4 ， m=2 ，四批对照提取物均含有 A₁ 、 A₂ 两种成分，检测成分的方法为 HPLC ，检测波长为 275nm ，流动相为甲醇：水 =40 ： 60 。

在目前的 HPLC-UV 测定物质含量时，在一定的范围内，基本上都是直线线性关系，本例中信号值 S₁ 、 S₂ 是 A₁ 、 A₂ 成分在色谱图中的峰面积，具体的线性范围 [D₁₁ ， D₁₂] 和 [D₂₁ ， D₂₂] 及一一对应函数关系式在步骤二中再确定，对照提取物中的各成分的信号值与信号质量的一一对应函数可初步拟定如下：

S₁=f₁(N₁)=a₁*N ₁+b₁

S₂=f₂(N₂)=a₂*N ₂+b₂

步骤一、各批对照提取物中的各成分关系式

将四批对照提取物加乙醇分别配制成 C₁=92.84 μ g/ml 、 C₂=91.20 μ g/ml 、 C₃=87 μ g/ml 、 C₄=93.8 μ g/ml ，进样体积均是 10 μ l ，平行进样，即 V₁=10 μ l 、 V₂=10 μ l 、 V₃=10 μ l 、 V₄=10 μ l ，进样质量 M₁=C₁* V₁ =92.84μ g/ml × 10 μ l=928.4ng ， M₂= 912ng ， M₃= 870ng ， M₄= 938ng ，每批对照提取物中的各种成分在仪器中的信号值即峰面积 S_ij ，取平均值，见表 1 ，它的信号质量 N_ij 与峰面积存在如下的关系式：

S_ij=f_j(N_ij) ， i=1 、 2 、 3 、 4 ， j=1 、 2

表 1 ：四批对照提取物中的两种成分的峰面积

批次	1	2	3	4
成分 A₁	642729.5	1055470	1234247	428558
成分 A₂	1531597	959022.5	622472.5	1823704

各批对照提取物中的各组分存在如下的关系式：

M₁ ＝ N₁₁ + N₁₂ ＝ 928.4

M₂ ＝ N₂₁+ N₂₂ ＝ 912

M₃ ＝ N₃₁+ N₃₂ ＝ 870

M₄ ＝ N₄₁+ N₄₂ ＝ 938

步骤二、方程组的建立

现将第一批对照提取物溶液，以不同的进样体积（ V ）进样，两种成分的峰面积如下表：

表 2 第一批对照提取物的不同进样体积的两种成分的峰面积

进样体积（μ l ）	2	5	10	15	20
成分 A₁	126812.5	321050	645925.5	973823	1297368
成分 A₂	306995.5	769032.5	1537062	2313502	3076325

在第一批对照提取物溶液中， A₁ 成分的浓度为 C₁₁ ， A₂ 成分的浓度为 C₁₂ ；

将函数 S₁=f₁(N₁) 作如下的变换：

S₁=f₁(N₁)= a₁*N₁+b₁ = a₁*(C₁₁*V)+b₁ = (a₁*C₁₁)*V+b₁ = g₁ ( V )

针对第一批对照提取物溶液中的 A₁ 成分，以进样体积对峰面积进行线性回归，回归方程如下：

y = 65089x - 3933.6 ，回归系数 R₁=1 ，线性关系良好，其中线性相关系数 a₁*C₁₁ =65089 ， b₁ =- 3933.6 ，线性范围 [D₁₁ ， D₁₂]= [126812.5 ， 1297368]

将函数 S₂=f₂(N₂) 作如下的变换：

S₂=f₂(N₂)= a₂*N₂+b₂ = a₂*(C₁₂*V)+b₂ = (a₂*C₁₂)*V+b₂ = g₂ (V )

针对第一批对照提取物溶液中的 A₂ 成分，以进样体积对峰面积进行线性回归，回归方程如下：

y = 153980x - 805.22 ，回归系数 R₂=1 ，线性关系良好，其中线性相关系数

a₂*C₁₂ =153980 ， b₂ =- 805.22 ，线性范围 [D₂₁ ， D₂₂]= [306995.5 ， 3076325]

由于表 1 中四批对照提取物中的两种成分的峰面积都在各自的线性范围内，因此无需再调整进样质量。

根据λ_ij = （ S_ij － b_j ） / ( S_1j － b_j) 及表 1 中四批对照提取物的峰面积，计算第 2 、 3 、 4 批中的信号质量比 λ_ij 值，结果如下表：

表 3 ：各批对照提取物中各成分的信号质量比

批次	1	2	3	4
成分 A₁	1	1.6383	1.9147	0.6688
成分 A₂	1	0.6264	0.4067	1.1906

另外，在四批对照提取物的峰面积中，最小的峰面积相对于线性相关系数的绝对值 |b₁| 和 |b₂| 都大得多， |b₁|/428558=0.92% <1% ， |b₁| /622472.5=0.13%<1% ，因此可粗略的认为线性关系的直线是通过原点的，此时信号质量比与信号值比相等，本实例中采用精确计算的值作为信号质量比。

综上，四批对照提取物中各成分信号质量的方程组如下：

1 ） N₁₁ + N₁₂ ＝ 928.4

2 ） 1.6383*N₁₁+ 0.6264*N₁₂ ＝912

3 ） 1.9147*N₁₁+ 0.4067*N₁₂ ＝870

4 ） 0.6688*N₁₁+ 1.1906*N₁₂ ＝ 938

步骤三、方程组的求解

对上列方程组中，选择其中的 2 行，共有 u=C₄ ²=6 种方程组，

解第 1 种方程组，选择 1 ）、 2 ）行，得出第 1 批对照提取物中 A₁ 、 A₂ 成分在仪器中的信号质量及两种成分的信号质量和为：

Q₁₁= （ N₁₁₁ 、 N₁₂₁ 、 N₁₀₁ ） = （ 326.56、 601.84 、 928.4 ）

解第 2 种方程组，选择 1 ）、 3 ）行，得出第 1 批对照提取物中 A₁ 、 A₂ 成分在仪器中的信号质量及两种成分的信号质量和为：

Q₁₂= （ N₁₁₂ 、 N₁₂₂ 、 N₁₀₂ ） = （326.54、601.86、928.4）

解第 3 种方程组，选择 1 ）、 4 ）行，得出第 1 批对照提取物中 A₁ 、 A₂ 成分在仪器中的信号质量及两种成分的信号质量和为：

Q₁₃= （ N₁₁₃ 、 N₁₂₃ 、 N₁₀₃ ） = （320.72、607.68、928.4）

解第 4 种方程组，选择 2 ）、 3 ）行，得出第 1 批对照提取物中 A₁ 、 A₂ 成分在仪器中的信号质量及两种成分的信号质量和为：

Q₁₄= （ N₁₁₄ 、 N₁₂₄ 、 N₁₀₄ ） = （ 326.52、601.96、928.5）

解第 5 种方程组，选择 2 ）、 4 ）行，得出第 1 批对照提取物中 A₁ 、 A₂ 成分在仪器中的信号质量及两种成分的信号质量和为：

Q₁₅= （ N₁₁₅ 、 N₁₂₅ 、 N₁₀₅ ） = （ 325.32 、 605.10、 930.4）

解第 6 种方程组，选择 3 ）、 4 ）行，得出第 1 批对照提取物中 A₁ 、 A₂ 成分在仪器中的信号质量及两种成分的信号质量和为：

Q₁₆= （ N₁₁₆ 、 N₁₂₆ 、 N₁₀₆ ） = （ 325.92、 604.76、 930.7 ）

步骤四、统计

统计第 1 批对照提取物溶液的 A₁ 成分信号质量的 6 种值（326.56，326.54，320.72 ，326.52 ，325.32 ，325.92 ），得出统计值（325.26，2.3），即平均值T₁₁=325.26，标准偏差e₁₁=2.3，相对标准偏差 P₁₁=e₁₁/T₁₁=0.7%；

统计第 1 批对照提取物溶液的A₂成分信号质量的 6种值（601.84，601.86，607.68 ， 601.96， 605.10，604.76），得出统计值（603.86，2.4），即平均值T₁₂=603.86，标准偏差e₁₂=2.4，相对标准偏差P₁₂=e₁₂/T₁₂=0.4%；

统计第 1 批的两种成分的信号质量和的 6 种值（928.4，928.4，928.4，928.5，930.4，930.7），得出统计值（929.1，1.1），即平均值T₁₀=929.1，标准偏差e₁₀=1.1，相对标准偏差P₁₀=e₁₀/T₁₀=0.12%；

由于标准偏差 P₁₁ 、 P₁₂ 、 P₁₀ 较小，小于 2% ，标定成功，第一批对照提取物溶液的两种成分在仪器中的信号质量为（325.26ng ，603.86ng ），第一批对照提取物中， A₁ 成分的含量为 T₁₁/M₁ = 325.26 /928.4=35.03% 或 T₁₁/T₁₀ = 325.26 /929.1=35% ； A₂ 成分的含量为 T₁₂ /M₁ =603.86/928.4=65.04% 或 T₁₂ /T₁₀ =603.86/929.1=65% 。

本发明的实施方式

工业实用性

本发明在化工、医药中有着非常广泛的应用：

1 ）由于对照品自始自终贯穿于药品研发、生产、质检等，因此能对中药对照提取物进行科学合理的标定，确定提取物中各成分的含量，可极大的减少工作量，降低研发成本和检验成本，促进药品研发进度，同时还为中药产品的真假优劣提取了更强的辩别依据。

2 ）解决化药研究中有关物质对照品制备困难的问题

3 ）为归一法定对照品纯度的缺限提供了一个更好的补充

目前对对照品的纯度标定方法是归一法，但这种方法有一个明显的缺限，它的杂质与主成分不是同一种成分，不同成分对光的响应程度是不同的，如中药对照品以归一法进行纯度标定时，不同的检测波长，测定的纯度是不一样的，而本发明的标定方法中，是将主成分与杂质看着不同成分进行标定的，并结合统计，因此标出的对照品纯度的可信度更高。

4）为中药、天然药物等多成分药品提供更科学合理的质量标准

药品质量标准中的一个关键因素是对照品，对多成分药品能提供对照提取物作对照品，能更好的控制药品质量。

5）为中药指纹图谱评价中药质量提供更科学的标准

针对中药指纹图谱中各种成分，采用化学方法制备对照提取物，标定后可准确的确定中药指纹图谱中各成分的含量，再进行统计，应用这种方法与传统的以峰面积计算相比，具有更高的可信度。

序列表自由内容

Claims

1 、一种对照提取物的标定方法，其特征在于：

对照提取物共有 n 个批次，分别为第 1 、 2 、 3 …… i …… n 批，每个批次均含有 m 个成分，它们分别为 A₁ 、 A₂ 、 A₃ …… A_j …… A_m ，其中 n ≥ m, 1 < i ≤ n ， 1 < j ≤ m ，每批对照提取物通过色谱法 W 在仪器中进行检测，各种成分均能达到分离的效果，成分 A_j 的信号质量 N_j 与一定范围 [ D_j1 ， D_j2 ] 内的信号值 S_j 存在如下的一一对应函数关系式：

S_j = f_j (N_j) ，式中， j=1 、 2 、 3 …… m

步骤一、各批对照提取物中的各成分关系式

每批对照提取物如第 i 批对照提取物，均配制成一定的浓度 C_i ，以一定的进样体积 V_i 进样，进样质量为 M_i=C_i* V_i ，第 i 批对照提取物中的成分 A₁ 、 A₂ 、 A₃ …… A_j …… A_m 的进样浓度分别为 C_i1 、 C_i2 、 C_i3 …… C_ij …… C_im ，在仪器中的信号质量分别为 N_i1 、 N_i2 、 N_i3 …… N_ij …… N_im ，它们在仪器中的信号值分别为 S_i1 、 S_i2 、 S_i3 …… S_ij …… S_im ，各批对照提取物中的各组分存在如下的关系式：

M₁ ＝ N₁₁ + N₁₂ + N₁₃ …… N_1j …… + N_1m

M₂ ＝ N₂₁+ N₂₂ +N₂₃ …… N_2j …… + N_2m

……

M_i ＝ N_i1+ N_i2 + N_i3 …… N_ij …… + N_im

……

M_n ＝ N_n1 + N_n2 + N_n3 …… N_nj …… + N_nm

S_{i j} = f_j (N_ij) ，N_ij=C_ij* V_i

其中， i=1 、 2 、 …… n， j=1 、 2 、 …… m

步骤二、方程组的建立

由于成分 A_j 的信号质量 N_ij 与信号值 S_ij 存在一一对应的关系，将任一批对照提取物溶液如第 1 批，以不同的进样体积（ V ）通过色谱法 W 分离并进行检测，根据函数 S_j = f_j(N_j) = f_j(C_1j*V) 可知：

由于C_1j是一个固定的未知值，因此对于第1批的对照提取物所配制的溶液，存在函数关系式：S_j=g_j(V)及它的反函数V=g_j ^-1 (S_j ) ，即第1批对照提取物的溶液的不同进样体积（V），有一个固定的信号值与之相对应，同样，一个固定的信号值，存在第1批对照提取物溶液的某个进样体积与之相对应，且这两个函数的相关系数是通过线性回归可确定出具体数值，令N_ij= λ_ij*N_1j=λ_ij*C_1j* V₁，式中，λ_ij是信号质量比，则存在下列等式：　

S_1j= f_j(N_1j) =g_j(V₁)

λ_ij = g_j ^-1 ( S_ij ) / V ₁ ，其中 i=2 、3 …… n ，j=1、2、…… m

在上式中， S_ij 、 S_1j 、 V₁ 是具体的固定值，函数 g_j （ V ）的相关系数是固定的，因此 λ_ij 是可以计算出的一个具体值，这样，根据步骤一中的关系式，可得到如下的方程组：

1 ） M₁ ＝ N₁₁ + N₁₂ + N₁₃ …… N_1j …… + N_1m

2 ） M₂ ＝ N₂₁+ N₂₂ +N₂₃ …… N_2j …… + N_2m

……

i ） M_i ＝ N_i1+ N_i2 + N_i3 …… N_ij …… + N_im

……

n ） M_n ＝ N_n1 + N_n2 + N_n3 …… N_nj …… + N_nm

步骤三、方程组的求解

选择其中的 m 行，共有 u=C_n ^m 种 m 行组成的方程组，

各成分的信号质量和为：N₁₀₁=N₁₁₁+N₁₂₁+N₁₃₁……N_1j1……+N_1m1，

各成分的信号质量和为：N₁₀₂=N₁₁₂+N₁₂₂+N₁₃₂……N_1j2……+N_1m2，

……

各成分的信号质量和为 N_10k=N_11k+N_12k+N_13k……N_1jk……+N_1mk，

记 Q_1k= （ N_11k ， N_12k …… N_1jk …… N_1mk ， N_10k ）；

……

各成分的信号质量和为：N_10u=N_11u+N_12u+N_13u……N_1ju……+N_1mu，

记 Q_1u= （ N_11u ， N_12u …… N_1ju …… N_1mu ， N_10u ）。

……

当相对标准偏差 P₁₁ 、 P₁₂ …… P_1j …… P_1m 、 P₁₀ 均低于可接受的判别误差 R 时，则标定成功，第 1 批对照提取物的各成分在仪器中的信号质量为（ T₁₁ ， T₁₂ …… T_1j …… T_1m ），总信号质量为 T₁₀ ，第 1 批对照提取物的各成分的百分含量或者为（ T₁₁/M₁ ， T₁₂/M₁ …… T_1j/M₁ …… T_1m/M₁ ），或者为（ T₁₁/T₁₀ ， T₁₂/T₁₀ …… T_1j/T₁₀ …… T_1m/T₁₀ ），其中，可接受的判别误差 R 与仪器的精密度、操作人员的操作误差、提取物纯化的难易程度、提取物中成分的稳定性等有关，其值或者是 5% ，或者 3% ，或者 2% ，或者 1% 等。

2 、根据权利要求 1 所述的对照提取物的标定方法，其特征在于：

在步骤三中解出了第 1 批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的u种值，即

Q_1k=（N_11k，N_12k……N_1jk……N_1mk，N_10k），其中，k=1、2……u；

由于 N_ij= λ_ij * N_1j ，所以： N_ijk= λ_ij * N_1jk

于是可计算出第 i 批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的 u 种值，即

Q_ik= （ N_i1k ， N_i2k …… N_ijk …… N_imk ， N_i0k ）

=（ λ_i1 * N_11k ， λ_i2 *N_12k …… λ_ij * N_1jk …… λ_im *N_1mk ， N_i0k ），

其中， i=2 、 3 …… n ， k=1 、 2 、…… u ；

在步骤四中，除了统计第 1 批对照提取物各成分的信号质量及信号质量总和的相对标准偏差（ P₁₁ ， P₁₂ …… P_1j …… P_1m ， P₁₀ ）外，还应统计：

第 i 批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的 u 种值的相对标准偏差（P_i1，P_i2……P_ij……P_im，P_i0），其中i=2、3……n；

当相对标准偏差 P_ij 均低于可接受的判别误差 R 时，则标定成功，其中 i=1 、 2 、 3 …… n ， j=1 、 2 、 3 …… m 、 0 。

3 、根据权得要求1或2所述的对照提取物的标定方法，其特征在于：

函数 S_j = f_j(N_j) 为直线线性关系时，即 S_j= f_j(N_j)=a_j*N_j+b_j

对第 1 批对照提取物溶液，作如下的函数变换：

S_j= f_j(N_j)=a_j*N_j+b_j= a_j*(C_1j*V)+b_j= (a_j*C_1j) *V+b_j = g_j ( V )

S_ij= f_j(N_ij)=a_j*N_ij+b_j= a_j*( λ_ij *N_1j)+b_j

S_1j= f_j(N_ij)=a_j*N_1j+b_j

解上二式，可得 λ_ij = （ S_ij － b_j ） / ( S_1j － b_j) ，

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

当b_j 的绝对值与 S_ij 中最小的信号值的比值很小如低于 1% 时，线性关系式可以近似的认为是通过原点的， λ_ij 的大小可以估算为 S_ij/S_1j ，此时信号质量比就是信号值的比。

4、根据权得要求1或2所述对照提取物的标定方法，其特征在于：

函数 S_j = f_j(N_j) 为对数线性关系时，即

S_j= f_j(N_j)=10^(a_j*lg(N_j)+b _j)

对第一批对照提取物溶液，作如下的函数变换：

S_j= f_j(N_j)=10^(a_j*lg(N_j)+b _j) =10^( a_j*lg(C_1j*V)+b_j)

=10^( a_j*lg(V)+b_j+ a_j*lg(C_1j)) = g_j ( V )

lg(S_1j)= a_j*lg(N_1j)+b_j

lg(S_ij)= a_j*lg(N_ij)+b_j= a_j*lg( λ_ij *N_1j )+b_j

= a_j*lg( λ_ij )+ a_j*lg(N_1j )+b_j

= a_j*lg( λ_ij ) + lg(S_1j)

解上二式，可得 λ_ij =10^{ [lg(S_ij) － lg(S_1j)] / a_j }

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

5 、根据权利要求 3 所述对照提取物的标定方法，其特征在于：

对于第 i 批对照提取物的 A_j 成分，若 S_ij 不在区间 [D_j1 ， D_j2] 内，可通过调节第 i 批的进样质量为 M_i ＇ = γ_ij *M_i ，使进样后的信号值 S_ij ＇落在区间 [ D_j1 ， D_j2 ] 内，

γ_ij 是一个通过试验能得到的具体数值，此时， N_ij ＇ = γ_ij *N_ij ， λ_ij 的计算方法如下：

S_1j= a_j*N_1j+b_j

= ( S_1j － b_j) * λ_ij * γ_ij ＋ b_j

λ_ij = （ S_ij ＇－ b_j ） / ( S_1j － b_j)/ γ_ij

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

6 、根据权利要求 4 所述对照提取物的标定方法，其特征在于：

对于第 i 批对照提取物的 A_j 成分，若 S_ij 不在区间 [D_j1 ， D_j2] 内，可通过调节第 i 批的进样质量为 M_i ＇ = γ_ij *M_i ，使进样后的信号值 S_ij ＇落在区间 [ D_j1 ， D_j2 ] 内， γ_ij 是一个通过试验能得到的具体数值，此时， N_ij ＇ = γ_ij *N_ij ， λ_ij 的计算方法如下：

lg(S_ij＇) = a_j*lg(N_ij＇)+b_j = a_j*lg(N_ij * γ_ij )+b_j = a_j*lg( λ_ij *N_1j * γ_ij )+b_j

= a_j*lg( λ_ij )+ a_j*lg( γ_ij )+a_j*lg(N_1j )+b_j

= a_j*lg( λ_ij ) + a_j*lg( γ_ij ) +lg(S_1j)

λ_ij =10^{[ lg （ S_ij＇） - a_j*lg( γ_ij ) -lg(S_1j)]/ a_j }

其中， i=2 、 3 …… n，　　　 j=1 、 2 、 …… m 　

7、根据权利要求1或2所述的对照提取物的标定方法，其特征在于：

若函数关系S_j=f_j(N_j)=a_j*N_j+b_j时，步骤二、三、四作如下的更改：

步骤二、方程组的建立

对第一批对照提取物所配制的溶液，存在函数： S_j=f_j(N_j)=a_j*N _j+b_j= a_j*C_1j*V+b_j ，以不同进样体积（ V ）所对应的信号值作线性回归，得出信号值在 [D_j1 ， D_j2] 范围内的线性关系式，且值 a_j*C_1j 和 b_j 是固定值，但 a_j 和 C_1j 均是固定的未知值；

令α_j =1/a_j ，

N_{i j} =1/a_j* (S_{i j} -b_j) = (S_{i j} -b_j) * α_j

式中，α_j是一个未知值，系数S_ij-b_j是一个可计算出结果的值，记ω_ij ，

若第 i 批对照提取物的第 j 个成分的信号值 S_ij 不在区间 [D_j1 ， D_j2] 内，可调节第 i 批对照提取物的进样质量为 M_i ＇ = γ_ij *M_i ，使进样后的信号值 S_ij ＇落在区间 [ D_j1 ， D_j2 ] 内， γ_ij 是一个通过试验能得到的具体数值，此时， N_ij ＇ = γ_ij *N_ij ，

N_ij ＇ =1/a_j* (S_ij ＇ -b_j)= α_j *(S_ij ＇ -b_j)= γ_ij *N_ij

N_ij = α_j * (S_{i j} ＇ -b_j)/ γ_ij

N_ij= ω_{i j} * α_j ，ω_{i
j} 是一个可计算出结果的固定值， α_j 是一个未知值， i= 1 、 2 、 3 …… n ， j=1 、 2 、 …… m 　；

当 b_j 　很小时，ω_{i j} 的近似值是 S_{i
j} 或 S_{i j} ＇ / γ_ij

根据步骤一的结果，存在下列的方程组：

……

步骤三、方程组的求解

选择其中的m行，共有u=C_n ^m 种m行组成的方程组，解第 k 种方程组，得根为（α_1k、α_2k、……α_ik、……α_mk），其中，k=1、2……u；

步骤四、统计

统计α₁的u种值（α₁₁，α₁₂，……α_1k……α_1u），得出统计值（Γ₁，e₁），其中Γ₁为平均值，e₁为标准偏差，相对标准偏差ε₁=e₁/Γ₁；

统计α₂的u种值（α₂₁，α₂₂，……α_2k……α_2u），得出统计值（Γ₂，e₂），其中Γ₂为平均值，e₂ 为标准偏差，相对标准偏差ε₂=e₂/Γ₂；

……

统计α_j的u种值（α_j1，α_j2，……α_jk……α_ju），得出统计值（Γ_j，e_j），其中Γ_j为平均值，e_j为标准偏差，相对标准偏差ε_j=e_j/Γ_j；

……

统计α_m的u种值（α_m1，α_m2，……α_mk……α_mu），得出统计值（Γ_m，e_m），其中Γ_m为平均值，e_m为标准偏差，相对标准偏差ε_m= e_m/Γ_m；

当相对标准偏差 ε ₁ 、ε ₂ ……ε _j …… ε _m 均低于可接受的判别误差 R 时，则标定成功，第 1 批对照提取物的各成分在仪器中的信号质量为（ω₁₁*Γ₁，ω₁₂*Γ₂……ω_1j*Γ_j……ω_1m*Γ_m），各成分在仪器中的信号质量和N₁₀=ω₁₁*Γ₁+ω₁₂*Γ₂+……+ω_1j*Γ_j……+ω_1m*Γ_m，第 1 批对照提取物的各成分的百分含量或者为（ω₁₁*Γ₁/M₁，ω₁₂*Γ₂/M₁……ω_1j*Γ_j/M₁……ω_1m*Γ_m/M₁），或者为（ω₁₁*Γ₁/N₁₀ ，ω₁₂*Γ₂/N₁₀ ……ω_1j*Γ_j/N₁₀ ……ω_1m*Γ_m/N₁₀ ）。

8 、根据上述任一权利要求所述对照提取物的标定方法，其特征在于：

色谱法 W 可以是液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法等；

目前分析行业中所能接受的分析方法如TLCS、HPLC-UV、HPLC-ELSD、GC、液质、气质等，可以是一种，也可以是多种组合；

9 、一种对照提取物的应用，其特征在于：

选用权利要求 1~8 中任一权利要求所述的标定方法标得的对照提取物作为对照品用于药品研究或药品检验。