WO2013177947A1 - 一种防治乙型肝炎的组合物及其应用 - Google Patents

一种防治乙型肝炎的组合物及其应用 Download PDF

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WO2013177947A1
WO2013177947A1 PCT/CN2013/000622 CN2013000622W WO2013177947A1 WO 2013177947 A1 WO2013177947 A1 WO 2013177947A1 CN 2013000622 W CN2013000622 W CN 2013000622W WO 2013177947 A1 WO2013177947 A1 WO 2013177947A1
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ginseng
ganoderma lucidum
group
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PCT/CN2013/000622
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钟虹光
易敏之
卢建中
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江中药业股份有限公司
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    • A61P31/12—Antivirals
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    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses

Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing and treating hepatitis B and uses thereof.
  • Hepatitis B virus referred to as hepatitis B
  • Hepatitis B virus is a disease caused by hepatitis B virus (HBV) infection in the body.
  • Hepatitis B virus is a hepadnavirus that mainly exists in hepatocytes and damages hepatocytes, causing inflammation, necrosis, and fibrosis of hepatocytes.
  • Hepatitis B is divided into acute and chronic. Acute hepatitis B can be self-healing in 90% of adults, while chronic hepatitis B has different performances, including chronic hepatitis B carriers, chronic active hepatitis B, and hepatitis B cirrhosis.
  • Hepatitis B virus carrying rate in China is 7.18%, of which about one-third has repeated liver damage, which is characterized by active hepatitis B or cirrhosis.
  • Hepatitis B infection is worldwide, and the prevalence of HBV infection in different regions is different. Very large, according to the World Health Organization, about 2 billion people worldwide have been infected with HBV, of which 350 million people are chronically infected. About 1 million people die each year from liver and liver failure caused by HBV infection, cirrhosis and primary disease.
  • Liver cancer HCC.
  • a pharmaceutical composition having an immunostimulating effect including Ganoderma lucidum, American ginseng, and fermented Cordyceps powder; and Patent Application Publication No.
  • CN102228252A which discloses a method for relieving physical fatigue, is disclosed in the patent application No. CN101292742A.
  • the invention discloses a pharmaceutical composition with enhanced immunity, including Cordyceps polysaccharide or fermented Cordyceps powder, Ganoderma lucidum, American ginseng
  • the present invention selects a combination of raw materials Ganoderma lucidum, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis, and unexpectedly finds that the composition has the effect of preventing and treating hepatitis B.
  • the present invention provides a composition for preventing and treating hepatitis B, which is prepared from a raw material containing the following parts by weight: 5 to 200 parts of Ganoderma lucidum, 5 to 150 parts of American ginseng or ginseng, 1 to 90 parts of fermented Cordyceps powder and/or 1 to 120 parts of Cordyceps sinensis.
  • the raw material containing the following parts by weight or consisting of water and/or an alcohol extract of the following raw materials is used as an active ingredient.
  • the raw materials may be combined with water and/or alcohol to obtain a composition, or one or more of the raw materials may be combined with water and/or alcohol extract as active ingredients to form the composition.
  • composition of the present invention may further comprise other water and/or alcohol extracts added to the following parts by weight or the following raw materials which do not impair the efficacy of the present invention: 5 to 90 parts of rose, 5 to 150 parts of ganoderma lucidum spore powder, Any combination of one or more of Ganoderma lucidum spore oil, 1 to 90 parts, 10 to 400 parts of Radix Pseudostellariae, 1 to 120 parts of ginseng leaves, 3 to 400 parts of Codonopsis pilosula, and 3 to 4 parts of Astragalus.
  • 10 to 60 parts of rose Preferably, 10 to 120 parts of Ganoderma lucidum, 10 to 60 parts of Ganoderma lucidum spore oil, 20 to 200 parts of Radix Pseudostellariae, 20 to 90 parts of ginseng leaves, 20 to 200 parts of Codonopsis pilosula, 20 to 200 parts of Astragalus Any combination of one or several of them.
  • the composition of the present invention comprises 5 to 200 parts of Ganoderma lucidum, 5 to 90 parts of rose, 5 to 150 parts of American ginseng or ginseng, 1 to 90 parts of fermented Cordyceps powder, and/or Cordyceps 1 ⁇ Made up of 120 parts of raw materials.
  • composition of the present invention may further comprise other water or/or an alcohol extract of the following raw materials or the following raw materials which do not impair the efficacy of the present invention: 5 to 150 parts of ganoderma lucidum spore powder, and ganoderma lucidum spores Any combination of one or more of 1 to 90 parts of oil, 10 to 400 parts of Radix Pseudostellariae, 1 to 120 parts of ginseng leaves, 3 to 400 parts of Codonopsis pilosula, and 3 to 400 parts of Astragalus.
  • the composition of the present invention is made of raw materials containing 5 to 200 parts of Ganoderma lucidum, 5 to 90 parts of rose, 5 to 150 parts of American ginseng or ginseng, 1 to 90 parts of fermented Cordyceps powder and/or 1 to 120 parts of Cordyceps sinensis. . More preferably, the composition of the present invention is made of 5 to 200 parts of Ganoderma lucidum, 5 to 90 parts of rose, 5 to 150 parts of American ginseng or ginseng, 1 to 90 parts of fermented Cordyceps powder and/or 1 to 120 parts of Cordyceps sinensis. .
  • the composition of the present invention is made of a raw material containing 20 to 120 parts of Ganoderma lucidum, 10 to 60 parts of rose, 10 to 90 parts of American ginseng or ginseng, 3 to 60 parts of fermented Cordyceps powder and/or 3 to 90 parts of Cordyceps sinensis.
  • the composition of the present invention is made up of 20 to 120 parts of Ganoderma lucidum, 10 to 60 parts of rose, 10 to 90 parts of American ginseng or ginseng, 3 to 60 parts of fermented Cordyceps powder and/or 3 to 90 parts of Cordyceps sinensis. .
  • the composition of the present invention is prepared from a raw material containing 40 parts of Ganoderma lucidum, 30 parts of rose, 30 parts of American ginseng or ginseng, 20 parts of fermented Cordyceps powder and/or 6.7 parts of Cordyceps sinensis. More preferably, the composition of the present invention is prepared from 40 parts of Ganoderma lucidum, 30 parts of rose, 30 parts of American ginseng or ginseng, 20 parts of fermented Cordyceps powder and/or 6.7 parts of Cordyceps sinensis.
  • composition of the present invention may further comprise adding other water or/or an alcohol extract of the following raw materials or the following raw materials which do not impair the efficacy of the present invention: Ganoderma lucidum spore powder 5 to 150 parts, Ganoderma lucidum spores 1 to 90 parts of oil, Any combination of 10 to 400 parts of Radix Pseudostellariae, 1 to 120 parts of ginseng leaves, 3 to 400 parts of Codonopsis pilosula, and 3 to 400 parts of Astragalus membranaceus.
  • the present invention may also be used in place of ginseng leaves, Radix Pseudostellariae, Codonopsis pilosula, and Astragalus membranaceus instead of American ginseng or ginseng, in an amount similar to that further contained in the composition of the present invention.
  • the ganoderma lucidum of the present invention is a dried fruiting body of the polyporaceae Ganoderma lucidumile ss. ex Fr. ) Karst. or Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang, sexually sweet, flat, heart, lung, liver, kidney
  • the function of the ginseng described in the present invention is the dried roots and rhizomes of the Panax ginseng CA Mey., which can be various kinds of ginseng, such as garden ginseng and ginseng.
  • the Cordyceps sinensis in the invention is a dry complex of the larvae of the larvae of Cordyceps sinensis (Berk.) sace.
  • the fermented Cordyceps powder according to the present invention is a product obtained by fermentation culture of a strain isolated from Cordyceps sinensis (Berk.) sace., which may be, for example, the following species: Paeci lomyces hepiall i Chen et Dai, sp. nov; Chinese genus Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov; ergot fungus Cordyceps sinensis Chen sp. nov; bat moth spore enzyme Mortiscrslla hepial id CT & B.
  • the strain belonging to the fermented Cordyceps powder of the present invention is preferably Paecilomyces palustris or bat moth, or the genus Bacillus or the genus Pseudomonas or the genus Helminthaceae, or the genus Cordyceps sinensis or the genus Any combination of one or several of them.
  • the rose described in the present invention is a dry flower bud of the rose (Atosa i ⁇ osa Thumb), or a red rose Rose rugosacv. Plena; taste, sweet, slightly bitter, warm, most obvious The effect is to relieve depression, And blood, pain relief, mild drug.
  • Codonopsis pilosula is Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta (Nannf.) L. T. Shen ⁇ Jl
  • the psyllids of the present invention is a dried root of Pseudostellaria heterophylla (iq.) Pax ex Pax et Hoffm.
  • Ginseng leaves are dried leaves of Pangas ginseng C. A. Mey.
  • ⁇ is the leguminous Mongolian yellow Astragalus raembranaceus (Fi sch) Bge. var. mongholicus (Bge) Hsiao or membranous yellow Astragalus membranaceus (Fisch) Bge.
  • the ganoderma lucidum spore powder of the present invention is preferably a broken ganoderma spore powder.
  • the ganoderma lucidum spore powder of the present invention is a sexual germ cell of the ganoderma lucidum.
  • the ganoderma lucidum spore oil of the present invention is a lipid lipid substance extracted from the ganoderma spore powder.
  • the alcohol of the present invention is methanol or ethanol; the methanol concentration is 5-95%, and the ethanol concentration is 5-95%.
  • compositions of the present invention may be formulated into any dosage form by incorporating an acceptable additional agent or excipient in a health care product or drug or product.
  • the dosage form may be any one of a tablet, an oral solution, a granule, a capsule, a decoction, a pill, a pill, a powder, a lozenge, a leaching agent, a dipping agent, an injection, and a syrup.
  • the present invention provides a composition comprising Ganoderma lucidum, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis or a composition made of a raw material containing Ganoderma lucidum, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis or by Ganoderma lucidum, Use of a composition made of American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sin in the preparation of a composition or product for preventing and treating hepatitis B.
  • the present invention also provides a composition comprising Ganoderma lucidum, rose, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis or made of raw material containing Ganoderma lucidum, rose, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis
  • compositions comprising Ganoderma lucidum, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis or a composition made of a raw material containing Ganoderma lucidum, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis or by Ganoderma lucidum, American ginseng or A composition made of ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis is added to a composition of rose, ganoderma lucidum spore powder, ganoderma lucidum spore oil, ginseng ginseng, ginseng leaf, codonopsis pilosula, and astragalus.
  • compositions comprising Ganoderma lucidum, rose, American ginseng or ginseng, fermented Cordyceps powder and/or Cordyceps sinensis or a composition comprising a raw material of Ganoderma Lucidum, Rosette, American Ginseng or Ginseng, Fermented Cordyceps Powder and/or Cordyceps sinensis or a composition made of Ganoderma Lucidum, Rose, American Ginseng or Ginseng, Fermented Cordyceps Powder and/or Cordyceps sinensis
  • a composition comprising one or more of the components of Ganoderma lucidum spore powder, Ganoderma lucidum spore oil, Radix Pseudostellariae, ginseng leaf, Codonopsis pilosula, and Astragalus membranaceus in the preparation of a composition or product for preventing and treating hepatitis B.
  • the composition includes a health care product and a pharmaceutical product, wherein the "product" includes other products not included in the health care product or the pharmaceutical product, for example Smoked oil, pillows, etc.
  • the preparation process of the water and/or alcohol extract of the raw material of the traditional Chinese medicine composition of the present invention comprises the following steps:
  • the preparation process of the water and/or alcohol extract of the raw material of the traditional Chinese medicine composition of the present invention may also include the following steps:
  • the preparation process of the water and/or alcohol extract of the raw material of the traditional Chinese medicine composition of the present invention may further comprise the following steps:
  • step 2 Extracting and concentrating: After soaking the raw materials processed in step 1 with water, heating and boiling for several times, filtering the combined extracts, concentrating the filtrate to an appropriate amount, and concentrating the concentrated liquid after chilling, and then removing the impurities by idling;
  • the soaking time is 20 minutes to 60 minutes, and then heated and boiled 1 to 3 times, each time for 1 to 2 hours, and the water addition amount is 6 to 13 times.
  • Example 1 Take American ginseng 1.5kg, Ganoderma lucidum 2.0kg, Cordyceps sinensis 0.33kg, American ginseng, Ganoderma lucidum slice, Cordyceps sinensis powdered in the bag, the above 3 flavors with water soaked SOmin, heated and boiled 3 times, the first time added 13 times the amount of water, boiling After 2 hours, 10 times of water was added each time, and the extract was decoctioned for 1 hour, and the extract was combined and filtered three times, and the filtrate was concentrated to form a clear paste, which was spray-dried to prepare a composite powder.
  • the composition obtained was Composition 1 for the following pharmacodynamic experiments.
  • composition obtained was Composition 6, which was used in the following pharmacodynamic experiments.
  • Ginseng 150g fermented Cordyceps sinensis (hepiali Hirsutella Hirsutella hepialid Chen et Shen) 90g, Cordyceps 120 g, Ganoderma lucidum 200g, roses 90g, American ginseng, Ganoderma section, fermented Cordyceps powder placed in the bag, a powder post Cordyceps In the bag, the above five flavors are soaked in water for 1 hour, heated and boiled for 3 times, the first time is 2 hours, and after each hour, each time 10 times of water is added, and the extracts are combined for 3 times, and the filtrate is concentrated to an appropriate amount. After the liquid is allowed to cool, the air is centrifuged to remove impurities, and the auxiliary materials for oral liquid are added, and the mixture is mixed, and the oral liquid is prepared according to the conventional process of oral liquid.
  • Ginseng 500g fermented Cordyceps powder (Synensis sinensis Yin & Shen) 100g, Ganoderma lucidum 500g, rose 500g, ginseng, ganoderma lucidum slice, fermented Cordyceps powder in a bag, the above four flavors with water soaked 30rnin, heated fried Boil for 3 times, first add 15 times the amount of water for 2 hours, then each time for 1 hour, add 10 times of water each time, combine 3 times to extract the filtrate, concentrate the filtrate to the appropriate amount, and let the concentrate cool. Rapid centrifugation and impurity removal, adding common ingredients for oral liquid, mixing and hooking, according to the oral liquid conventional process to make 20000ml oral liquid.
  • Ginseng 150g fermented Cordyceps powder (Gliocladium roseum (link) Thom) 90g, Ganoderma lucidum 200g, rose 90g, ginseng, ganoderma lucidum slice, fermented Cordyceps powder in a bag, the above four flavors soaked in water for 1 hour, heated Decoction 2 times, the first 15 times the amount of water extraction for 2 hours, the second addition of water 10 times the amount of extraction 1. 5 hours, combined with 2 times the extract was filtered, the filtrate was concentrated to the appropriate amount, the concentrated solution was allowed to cool and then centrifuged In addition to impurities, add common ingredients in oral liquid, mix well, according to the oral liquid conventional process to make 20000ml oral solution.
  • the oral liquid was prepared according to the conventional process of oral liquid.
  • Example 23 Take ginseng 500g, fermented Cordyceps powder (Paecilomyces sinensis Chen, Xiao et Shi, sp. nov ) 100g, Ganoderma lucidum 500g, rose 500g, broken ganoderma lucidum spore powder 500g, ginseng, ganoderma lucidum slice, fermented Cordyceps powder Sprinkle with Ganoderma lucidum spore powder in a bag, soak the above 5 flavors with water for 20 minutes, heat and decoct for 3 times, add 13 times the amount of water for the first time for 2 hours, then add 1 time for each hour, add 9 times for each time, merge The extract is filtered for 3 times, and the filtrate is concentrated to an appropriate amount. The concentrated solution is cooled and centrifuged to remove impurities. The mixture is concentrated under reduced pressure into a paste or spray-dried into a powder. The granules are usually added to the granules and mixed uniform
  • the concentrated liquid is cooled and centrifuged at high speed, concentrated under reduced pressure or spray-dried into powder, and added to the commonly used auxiliary materials of the Ganoderma lucidum ginseng powder and the tablets, and uniformly mixed, and various tablets are prepared according to the conventional process of tablets.
  • fermented Cordyceps powder (Paecilomyces hepialli Chen et Dai, sp. nov) 50g; fermented Cordyceps powder (Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp.
  • the filtrate is concentrated to an appropriate amount, and the filtrate is concentrated to a suitable amount.
  • the amount of the concentrated solution is cooled and then centrifuged to remove impurities.
  • the mixture is concentrated under reduced pressure into a mash or spray to form a powder.
  • the auxiliary materials are added to the pills and mixed uniformly.
  • Various pills are prepared according to the conventional process of the pills.
  • ginseng 90g Ganoderma lucidum 120g, Cordyceps 90g, roses 60g, Ganoderma lucidum spore oil 90 g, American ginseng, Ganoderma section, Cordyceps
  • the bag is placed in a powder, soaked in water over four flavor 30min, heated boiling three times, the first time 2 After an hour, each time for 1 hour, add 10 times of water each time, combine 3 times of extract to filter, and concentrate the filtrate to an appropriate amount.
  • the concentrated liquid is cooled and centrifuged at high speed, concentrated under vacuum to form a paste or spray-dried into powder, and added to Ganoderma lucidum.
  • Spore oil and granules are commonly used as excipients, mixed evenly, and granules are prepared according to the conventional process of granules.
  • the filtrate is concentrated to an appropriate amount.
  • the concentrated solution is cooled and centrifuged at high speed.
  • the mixture is concentrated under reduced pressure into a paste or spray-dried into a powder.
  • Ganoderma lucidum spore oil and common ingredients are added to the pellets.
  • the mixture is uniformly mixed. Into various pills.
  • ginseng 300g Ganoderma lucidum 400g, fermented Cordyceps powder (Cephalosporium acremonium Corda, Icones Fungorum) 200g, rose 300g, Codonopsis 400g, American ginseng, Ganoderma lucidum, Codonopsis pilosula, Cordyceps powder in cloth bag, add 95%
  • the methanol is refluxed and extracted twice, each time for 1 hour, and then the extracts are combined, and methanol is recovered to obtain an alcohol extract; the dregs are further heated and boiled 3 times with water, the first time is 2 hours, and after each hour, each time water is added 10 Multiply, combine the alcohol extract and the water extract, filter, and concentrate the filtrate to an appropriate amount.
  • the concentrated solution is cooled and centrifuged to remove impurities.
  • the mixture is concentrated under reduced pressure into a paste or spray-dried into powder, and the granules are added to the auxiliary materials. , granules are prepared according to the conventional process of granules.
  • ginseng 300g Ganoderma lucidum 400g, fermented Cordyceps powder (Sporothrix insectorum de Hong & HC Evans) 200g, Rose 300g, Codonopsis 400g, Ginseng, Ganoderma lucidum slice, Cordyceps sinensis, crushed, placed in a bag, refluxed with 95% ethanol for 2 hours, ethanol is recovered to obtain alcohol extract; medicated residue and water heated to cook 3 Second, each time for 2 hours, combine the alcohol extract and the water extract, filter, and concentrate the filtrate to an appropriate amount. After the concentrate is allowed to cool, the supernatant is centrifuged to remove the impurities, and the common ingredients are added to the oral solution. A conventional process was used to prepare 20,000 ml of oral liquid.
  • the slag is further heated and decocted twice with water for 2 hours.
  • the alcohol extract and the water extract are combined, filtered, and the filtrate is concentrated to an appropriate amount.
  • the concentrated liquid is cooled, centrifuged at high speed, and added to the oral liquid. , evenly mixed, according to the oral liquid conventional process to make 20,000ml oral solution.
  • Example 51 Composition obtained in Example 1 1
  • Experimental report on prevention and treatment of hepatitis B virus
  • the test compound is the composition 1 compound powder obtained from Example 1 (American ginseng, Ganoderma lucidum, Cordyceps sinensis). It is supplied by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is brown solid powder, and the lg compound powder is equivalent to the total raw material. 10.97g, packed in capsule 0 when administered.
  • ALT and AST kits were provided by Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute; positive drug lamivudine, GlaxoSmithKline Pharmaceuticals (Suzhou) Co., Ltd. Production; Positive drug transfer factor capsule, Xi'an Jinhua Pharmaceutical Factory; Concanavalin A (ConA, Sigma); MTT Sigma:); Mianyang red blood cells (SRBC, Guangzhou Qiyun Biotechnology Co., Ltd.).
  • the model control group, the lamivudine-positive drug control group, and the composition of Example 1 were low, medium, and high dose groups.
  • the model group was fed with 200 mg kg of starch capsules, and the lamivudine group was given lamivudine 50 mg/kg.
  • the low, medium and high dose groups of the composition 1 of Example 1 were respectively 1.0 g of crude drug / kg, 2.0 g of crude drug. / kg, 6.0g crude drug / kg feeding, once a day for 28 consecutive days. Stop the drug for 7 days.
  • Serum DHBV DNA titer Before the administration, 7 days, 14 days, 21 days, 28 days, 7 days after withdrawal, the external jugular vein was taken, and the separated serum was stored at - 20 °C for examination. Using the dot blot method, the DHBV DNA probe was used to detect the serum before and after the drug, and the color of the spots displayed by hybridization with the plasmid DNA homologous to the probe and spotted on the nitrocellulose membrane was Standard, scanning with a scanner for quantitative analysis of spots.
  • Serum DHBsAg value Before the treatment, before the medication, 7, 14, 21, 28 days, 7 days of withdrawal, respectively, the external jugular vein was taken, and the separated serum was stored at - 20 'C for examination. The serum before and after administration was uniformly compared and tested, and the OD value was read by EUSA method and a microplate reader at 490 nm.
  • Serum ALT, AST test Animal blood was taken for 28 days and drug withdrawal for 7 days, and serum ALT and AST were detected by automatic biochemical analyzer.
  • liver pathology HE staining
  • composition 1 of Example 1 The effect of composition 1 of Example 1 on immune function
  • mice were divided into 5 groups, namely, the blank control group, the transfer factor capsule positive control group, the composition 1 of the low, medium and sputum dose groups of Example 1, and the number of experimental animals in each dose group was 12 only.
  • the transfer factor capsule group was administered with 27.3 mg kg, the low dose group was given 2.0 g crude drug/kg body weight; the middle dose group was administered with 4.0 g crude drug/kg body weight; the sputum dose group was administered with 12 g crude drug/kg body weight, respectively equivalent to human 5, 10 and 30 times the daily intake.
  • the sample was prepared in distilled water to prepare a corresponding concentration (18.23 mg dry powder / mL, 36.46 mg powder / mL, 109.38 mg dry powder / mL) of the gavage solution, and the amount of gastric perfusion of the mice was calculated as 0.1 mL/10 g body weight.
  • the blank control group was given an equal volume of distilled water. Gavage once a day for 30 consecutive days.
  • mice The spleen of mice was taken under aseptic conditions to prepare a single cell suspension. After lysis of red blood cells, the density of spleen cells was adjusted with RPMI-1640 medium containing 10% calf serum. A 5x10 6 /ml mouse spleen cell suspension was prepared. Each spleen cell suspension was separately added to two % well plates, one well was added to 75 ⁇ l of ConA, and the other well was added with an equal amount of medium as a control. Three replicate wells were repeated for each of the above samples. The 96-well plates were incubated for 72 h in a 5% C0 2 incubator at 37 °C.
  • MTT 5 mg ml 5 ( ⁇ l) was added to each well to continue the culture. After the culture was finished, the supernatant was discarded, 150 ⁇ l of acidic isopropanol was added to each well, and the mixture was mixed. The wavelength of 570 nm was measured by a microplate reader. At the optical density, the number of spleen lymphocyte transformations was calculated.
  • the spleen cell antibody production ability was determined by Jeme modified slide method. On the 4th day before the end of the experiment, in addition to the normal control group, each mouse was intraperitoneally injected with sheep red blood cells (SRBC) lx lO 8 . On the day of the experiment, the mice were sacrificed, and the spleen cell suspension was aseptically prepared. The cell concentration of the RPMI1640 medium was adjusted to 5 ⁇ 10 6 /ml and poured onto a slide of a thin layer of agarose agar, and then paralleled.
  • SRBC sheep red blood cells
  • mice in each group were intraperitoneally injected with 20% chicken red blood cells (CRBC) at intervals of 30 min.
  • CRBC chicken red blood cells
  • the animals were sacrificed by cervical dislocation, and the abdominal cavity was washed with saline, and then the peritoneal fluid was aspirated, respectively. Drop on two slides and incubate 30 n at 37 °C. The slides were washed, fixed, and air-dried, stained with Giemsa-phosphate buffer, counted by microscopy, and the percentage of phagocytosis and phagocytic index were calculated.
  • Phagocytosis rate (%) (number of macrophages that phagocytose chicken red blood cells / 100 macrophages) WOO
  • Phagocytic index number of chicken red blood cells phagocytized / 100 macrophages
  • the DHBV DNA titer was significantly reduced, and the dose group of the composition 1 of Example 1 showed bloody DHBV 21 days after administration.
  • the DNA titer was significantly reduced, and the serum DHBV DNA titer was significantly reduced in the low-dose group at 28 days of administration.
  • the DHBV DNA titer was significantly reduced, and the dose group of the composition 1 of Example 1 showed serum DHBV at 28 ⁇ after administration.
  • the DNA titer was significantly reduced, and the low-dose group had a decreasing trend, but it was not statistically significant.
  • test drug low dose group 1.0 0.73 ⁇ 0.10 0.74 ⁇ 0.14 0.70 ⁇ 0.09 0.6 ⁇ 0.12 0.66 ⁇ 0.17 0.64 ⁇ 0.15 test drug medium dose group 2.0 0.72 ⁇ 0.11 0.68 ⁇ 0.12 0.66 ⁇ 0.13 0.61 ⁇ 0.13 * 0.54 ⁇ 0.14" 0.51 ⁇ 0.14"” high dose group 6.0 0.74 ⁇ 0.14 0.65*0.15 0.63 ⁇ 0.13 0.55 ⁇ 0.12*** 0.42 ⁇ 0.12""0.38 ⁇ 0.13"” Compared with before administration, A P ⁇ 0.05, "P ⁇ 0.01 : Compared with the model control group, *P ⁇ 0.05, **P ⁇ 0.01.
  • Test drug dose group 6.0 35.27 12.55** 34.62 ⁇ 8.23** 45.62 ⁇ 12.72»* 4.67 ⁇ 13.09*» Compared with the model control group, *P ⁇ 0.05, **P ⁇ 0.01 o
  • the pathological changes of the liver were alleviated, the structure of the hepatic lobule was basically intact, and the hepatocyte degeneration was significantly lighter than that of the model group. Only the spot and the focal necrosis were scattered, and the slight fragment-like necrosis was only Seen in a few liver lobules.
  • Example 1 Effect on the conversion rate of mouse spleen lymphocytes (is) Group dose (g crude drug kg) Number of animals (only) Splenic lymphocyte transformation rate Blank control group 0.0 12 0.262 ⁇ 0.058
  • Group 5 (g crude drug kg) Number of animals (rats) hemolytic number (80 spleen cells) plaque control group 0.0 12 142.0 ⁇ 23.2
  • composition 1 of Example 1 can inhibit the replication of HBV DNA in viral hepatitis duck serum, reduce the titer of serum HBsAg, reduce the content of ALT and AST in serum, and damage liver cells caused by virus. It has a protective effect, suggesting that the composition 1 of the embodiment 1 has a good preventive effect on duck viral hepatitis.
  • the composition 1 of the first embodiment can increase the lymphocyte transformation rate, the phagocytosis function of the peritoneal macrophages, and the number of hemolytic plaques in the mouse, suggesting that the composition 1 of the embodiment 1 has a better effect of increasing the immune function of the body.
  • Example 52 Composition obtained in Example 2 2
  • Experimental report on prevention and treatment of hepatitis B virus
  • test compound is the composition 2 composite powder obtained from Example 2 (American ginseng, Ganoderma lucidum, fermented Cordyceps powder) provided by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is brown solid powder, lg composite powder dry powder Equivalent to total raw herbs
  • composition 2 (hereinafter referred to as composition 2) of Example 1 were low, medium, and high dose groups.
  • the model group was fed with starch glue 200mg/kg, the lamivudine group was given lamivudine 50mg/kg, and the composition 2 low, medium and high dose groups were respectively 1.0g raw drug/kg, 2.0g crude drug/kg, 6.0g crude drug / kg feeding, once a day for 28 consecutive days. Stop the drug for 7 days.
  • mice were divided into 5 groups, namely blank control group, transfer factor capsule positive control group, composition 2 low, medium and high dose groups, and the number of experimental animals in each dose group was 12.
  • the transfer factor capsule group was intragastrically administered with 27.3 mg/kg
  • the low dose group was intragastrically administered with 2.0 g of crude drug/kg body weight
  • the middle dose group was intragastrically administered with 4.0 g of crude drug/kg body weight
  • the high dose group was intragastrically administered with 12 g of crude drug/kg body weight, respectively equivalent to human 5, 10 and 30 times the daily intake.
  • the sample was prepared in distilled water to prepare a corresponding concentration (18.23 mg powder / mL, 36.46 mg dry powder / mL, 109.38 mg dry powder / mL) of the gavage solution, and the amount of the mice was calculated according to 0.1 mL/10 g body weight.
  • the blank control group was given an equal volume of distilled water. Gavage once a day for 30 consecutive days.
  • the pathological changes of the liver were alleviated, the structure of the hepatic lobule was substantially intact, and the hepatocyte degeneration was significantly lighter than that of the model group, only the spot, the focal necrosis were scattered, and the mild fragmentation was observed. Necrosis is only seen in a few liver lobules.
  • composition 2 has an effect of improving the immune function of mice.
  • Group dose (g crude drug / kg) number of animals (only) phagocytosis of chicken red blood cells phagocytosis of chicken red blood cells
  • composition 2 can inhibit viral hepatitis duck serum HBV DNA replication, reduce serum
  • composition 2 has a good preventive effect on duck viral hepatitis.
  • composition 2 can increase the lymphocyte transformation rate, the phagocytosis function of peritoneal macrophages and the number of hemolytic plaques in mice, suggesting that composition 2 has a better effect on the immune function of the body.
  • Example 53 Composition obtained in Example 3 3 Experimental report on prevention and treatment of hepatitis B virus:
  • the test compound is the composition 3 compound powder obtained in Example 3 (American ginseng, Ganoderma lucidum, fermented Cordyceps powder, Cordyceps sinensis). Provided by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is brown solid powder, lg compound powder dry powder It is equivalent to 12.39g of total raw medicine, and is packaged in capsule No. 0 when administered.
  • the reference drug is the composition of Example 1.
  • the composite powder (American ginseng, Ganoderma lucidum, Cordyceps sinensis) is supplied by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., and the sample is a brown solid powder, and the lg composite powder is equivalent to the total medicinal material 10.97g
  • the model control group, the lamivudine-positive drug control group, the composition 1 control group, and the composition 3 of Example 3 (hereinafter referred to as the composition 3) were low, medium, and high dose groups.
  • the model group was fed with starch capsule 200 mg/kg
  • the lamivudine group was given lamivudine 50 mg/kg
  • the composition 1 control group was fed with 2.0 g crude drug/kg composition 1
  • the composition 3 was low, medium and high dose.
  • the group was given l.Og crude drug k g , 2.0 g crude drug / kg, 6.0 g crude drug kg, and administered once a day for 28 consecutive days. The drug was stopped for 7 days.
  • mice were divided into 6 groups, namely blank control group, transfer factor capsule positive control group, composition 1 control group, composition 3 low, medium and high dose groups, experimental animals of each dose group.
  • the number is 12.
  • the transfer factor capsule group was intragastrically administered with 273 mgA g
  • the low dose group was intragastrically administered with 2.0 g of crude drug/kg body weight
  • the middle dose group was intragastrically administered with 4.0 g of crude drug weight
  • the sputum dose group was administered with 12 g of crude drug/kg body weight, respectively, equivalent to daily human exposure 5, 10 and 30 times the input.
  • the sample was prepared in distilled water to prepare a corresponding concentration (16.14 mg dry powder / mL, 32.28 mg dry powder / mL, 96.84 mg thousand powder / mL) of the gavage solution, and the amount of the stomach was calculated according to O.lmL / lOg body weight.
  • the blank control group was given an equal volume of distilled water. Gavage once a day for 30 consecutive days.
  • the control group 1 control mice were given a medium dose of 4.0 g crude drug / kg body weight (equivalent to 10 times the daily intake of humans), and the sample was prepared into distilled water to prepare 36.46 mg dry powder / mL gavage solution for experiment. Calculated at 0.1 mL/10 g body weight. 2.2.2 Test indicators
  • composition 3 has an effect of inhibiting DHBV DNA replication, and its action intensity is similar to that of composition 1.
  • the results are shown in Table 2.
  • the DHBV DNA titer in the serum of the model group was not significantly reduced.
  • the lamivudine group showed a significant decrease in serum DHBV DNA titer after 14 days of treatment.
  • the serum DHBV DNA titer decreased significantly at 21 days after administration, and the serum DHBV DNA titer was significantly decreased in the composition group 3 at 28 days after administration, and decreased in the low dose group.
  • Trend but no statistically significant. It is suggested that the composition 3 has an effect of lowering the DHBsAg titer, and its action intensity is similar to that of the composition 1.
  • the results are shown in Table 3.
  • the ALT and AST values in the serum of the model group were significantly higher than normal.
  • the low, medium and high dose groups of the lamivudine group and the composition 3 all significantly reduced serum ALT and AST. It is suggested that the composition 3 has a lowering effect on ALT and AST, and its action intensity is similar to that of the composition 1.
  • the pathological changes of the liver were alleviated, the structure of the hepatic lobule was substantially intact, the hepatocyte degeneration was significantly lighter than that of the model group, only the spot, the focal necrosis were scattered, and the mild fragmentation was observed. Necrosis is only seen in a few liver lobules. It is suggested that the composition 3 has an effect of alleviating the pathology of liver damage caused by viral infection, and its action intensity is similar to that of the composition 1.
  • composition 3 Effect of composition 3 on phagocytosis of peritoneal giant scorpion cells (i ⁇ s)
  • Group dose (g crude drug / kg) number of animals (only) phagocytosis of chicken red blood cells phagocytosis of chicken red blood cells
  • Phagocytosis rate (%) Phagocytosis index control group 0.0 12 32.81 ⁇ 7.9 0.47 ⁇ 0.09 Transfer factor control group 27.3 mg 12 58.3 ⁇ 9.2 ** 0.78 ⁇ 0.12 ** Composition 1 control group 4.0 12 43.1 ⁇ 9.1 * 0.63 ⁇ 0.15 * Low dose group of test drugs 2.0 12 36.3 ⁇ 6.8 0.55 ⁇ 0.16 Medium dose group 4.0 12 45.4 ⁇ 10.6* 0.65 ⁇ 0.12* Test substance ⁇ dose group 12.0 12 53.8 ⁇ 9.7** 0.72 ⁇ 0.10**
  • composition 3 can inhibit the replication of serum HBV DNA in viral hepatitis duck, reduce the serum HBsAg titer, reduce the serum ALT and AST levels, and protect the liver cell damage caused by the virus. It is suggested that the composition 3 has a good preventive effect on duck viral hepatitis. At the same time, composition 3 can improve the lymphocyte transformation rate, the phagocytosis function of peritoneal macrophages and the number of hemolytic plaques in mice, suggesting that composition 3 has a better effect on the immune function of the body. Its intensity of action is similar to that of composition 1.
  • Example 54 Composition obtained in Example 4 Experimental report on prevention and treatment of hepatitis B virus:
  • the test compound is the composition 4 of the compound 4 (American ginseng, Ganoderma lucidum, Cordyceps sinensis, rose) provided by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is brown solid powder, lg compound powder dry powder is equivalent to total Raw herbs
  • composition 4 of Example 4 (hereinafter referred to as composition 4) were low, medium, and high dose groups.
  • the model group was fed with 200 mg/kg of starch capsules, the lamivudine group was given lamivudine 50 mg/kg, and the composition 4 was low, medium and high dose groups respectively.
  • l.Og crude drug / kg 2.0g crude drug kg, 6.0g crude drug / kg feeding, once a day for 28 consecutive days. The drug was stopped for 7 days.
  • mice were divided into 5 groups, namely, blank control group, transfer factor capsule positive control group, composition 1 low, medium and high dose groups, and the number of experimental animals in each dose group was 12.
  • the transfer factor capsule group was intragastrically administered with 27.3 mg kg
  • the low dose group was intragastrically administered with 2.0 g of crude drug/kg body weight
  • the middle dose group was administered with 4.0 g of crude drug/kg body weight
  • the high dose group was intragastrically administered with 12 g of crude drug/kg body weight, respectively equivalent to human per 5, 10 and 30 times the daily intake.
  • the sample was prepared into the corresponding concentration (16.41 mg dry powder / mL, 32.81 mg dry powder / mL, 98.438 mg dry powder / mL) in distilled water for the experiment.
  • the amount of gastric perfusion was calculated according to O.lmUlOg body weight.
  • the blank control group was given an equal volume of steamed water to the stomach. Gavage once a day for 30 consecutive days.
  • the results are shown in Table 3.
  • the ALT and AST values in the serum of the model group were significantly higher than normal.
  • the low, medium and high dose groups of the lamivudine group and the composition 4 all significantly reduced serum ALT and AST.
  • the pathological changes of the liver were alleviated, the structure of the hepatic lobule was substantially intact, and the hepatocyte degeneration was significantly lighter than that of the model group, only the spot, the focal necrosis was scattered, and the mild fragmentation was observed. Necrosis is only seen in a few liver lobules.
  • Group dose (g crude drug kg) number of animals (only) phagocytosis of chicken red blood cells phagocytosis of chicken red blood cells
  • composition 4 can inhibit the replication of serum HBV DNA in viral hepatitis duck, reduce the serum HBsAg titer, reduce the serum ALT and AST levels, and protect the liver cell damage caused by the virus. It is suggested that the composition 4 has a good preventive effect on duck viral hepatitis. At the same time, composition 4 can improve the lymphocyte transformation rate, the phagocytosis function of peritoneal macrophages and the number of hemolytic plaques in mice, suggesting that composition 4 has a better effect on the immune function of the body.
  • Example 55 Composition obtained in Example 5 5 5
  • Experimental report on prevention and treatment of hepatitis B virus was
  • the test compound is the composition of Example 5, the composite powder (American ginseng, Ganoderma lucidum, fermented Cordyceps powder, rose) is provided by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is brown solid powder, lg composite powder dry powder It is equivalent to 12.56g of total raw medicine, and is packaged in capsule No. 0 when administered.
  • the composite powder American ginseng, Ganoderma lucidum, fermented Cordyceps powder, rose
  • Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd. the sample is brown solid powder, lg composite powder dry powder It is equivalent to 12.56g of total raw medicine, and is packaged in capsule No. 0 when administered.
  • mice were divided into 5 groups, namely, a blank control group, a transfer factor capsule positive control group, and a composition 5 of the example 5 (hereinafter referred to as composition 5) low, medium and high dose groups.
  • the number of experimental animals in each dose group was 12.
  • the transfer factor capsule group was intragastrically administered with 27.3 mg kg
  • the low dose group was intragastrically administered with 2.0 g of crude drug/kg body weight
  • the middle dose group was intragastrically administered with 4.0 g of crude drug/kg body weight
  • the high dose group was intragastrically administered with 12 g of crude drug/kg body weight, respectively equivalent to human per 5, 10 and 30 times the daily intake.
  • the samples were prepared in distilled water to prepare the corresponding concentrations (15.92 mg dry powder / mL, 31.85 mg dry powder / mL, 95.55 mg dry powder / mL) of the gavage solution, and the amount of the mice was calculated according to 0.1 mL/10 g body weight.
  • the blank control group was given an equal volume of distilled water. Gavage once a day for 30 consecutive days.
  • Model control group 0.75 ⁇ 0.21 0.71 ⁇ 0.18 0.77 ⁇ 0.09 0.73 ⁇ 0.15 0.72 ⁇ 0.14 0.74 ⁇ 0.12 lamivudine control group 50mg 0.74 ⁇ 0.0 0.64 ⁇ 0.17 0.51 0.08"0.43 ⁇ 0.12"** ⁇ .33 ⁇ ⁇ "» ⁇ 0.34 ⁇ 0.10""
  • Medium dose group 2.0 0.75 ⁇ 0.18 0.72 ⁇ 0.14 0.69 ⁇ 0.16 0.64 ⁇ 0.12* 0.58 ⁇ 0.13** 0.52 ⁇ 0.14
  • Test drug «Dose group 6.0 0.75 ⁇ 0.10 0.69 ⁇ 0.15 0.68 ⁇ 0.14 0.58 ⁇ 0.12 A ** 0.46 ⁇ 0.18""
  • the pathological changes of the liver were alleviated, the structure of the hepatic lobule was almost complete, and the hepatocyte degeneration was significantly lighter than that of the model group. Only the spots and focal necrosis were scattered, and the slight fragment-like necrosis was only Seen in a few liver lobules.
  • composition 5 has an effect of improving the immune function of mice.
  • the medium dose group of the test drug 4.0 12 0.362 ⁇ 0.077* The dose group of the test drug 12.0 12 0.388 ⁇ 0.080** Compared with the blank control group, *P ⁇ 0.05, **P ⁇ 0.01.
  • composition 5 Effect of composition 5 on phagocytosis of peritoneal macrophages (i ⁇ s)
  • composition 5 can inhibit the replication of serum HBV DNA in viral hepatitis duck, reduce the serum HBsAg titer, reduce the serum ALT and AST levels, and protect the liver cell damage caused by virus. It is suggested that the composition 5 has a good preventive effect on duck viral hepatitis. At the same time, composition 5 can increase the lymphocyte transformation rate, the phagocytosis function of peritoneal macrophages and the number of hemolytic plaques in mice, suggesting that composition 5 has a better effect on the immune function of the body.
  • Example 56 Composition obtained in Example 6 6 Test report on prevention and treatment of hepatitis B virus:
  • the test drug is composition 6 compound powder (American ginseng, Ganoderma lucidum, fermented Cordyceps powder, Cordyceps sinensis, rose flower) provided by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is brown solid powder, lg compound powder thousand powder is equivalent 13.78g of the total raw material was packaged in capsule No. 0 at the time of administration.
  • the reference drug is a composition 4 composite powder (American ginseng, Ganoderma lucidum, Cordyceps sinensis, rose flower) provided by Jiangzhong Pharmaceutical Co., Ltd., the sample is a brown solid powder, and the dry powder of lg composite powder is equivalent to 12.19 g of the total crude drug.
  • the model control group, the lamivudine-positive drug control group, the composition 4 control group, and the composition 6 of Example 6 were low, medium, and high dose groups.
  • the model group was fed with starch gelatin 200 mg/kg, the lamivudine group was given lamivudine 50 mg/kg, the composition 4 group was fed with 2.0 g crude drug/kg of composition 4, and the composition 6 was low, medium and sputum.
  • the dose group was administered with 1.0 g crude drug / kg, 2.0 g crude drug / kg, 6.0 g crude drug / kg, once a day for 28 consecutive days. The drug was stopped for 7 days.
  • mice were divided into 6 groups, namely blank control group, transfer factor capsule positive control group, composition 4 control group, composition 6 low, medium and high dose groups, and each dose group experiment.
  • the number of animals is 12.
  • the transfer factor capsule group was intragastrically administered with 27.3 mg/kg, and the low dose group was intragastrically administered with 2.0 g of crude drug weight; the middle dose group was administered with 4.0 g of crude drug/kg body weight; the high dose group was given 12 g of crude drug/kg body weight, which was equivalent to human per 5, 10 and 30 times the daily intake.
  • the sample was prepared in distilled water to prepare a corresponding concentration (14.52 mg dry powder / mL, 29.03 mg thousand powder / mL, 87.09 mg dry powder / mL) of the gastric juice, and the amount of the stomach was calculated according to 0. nL/10g body weight.
  • the blank control group was given an equal volume of distilled water. Gavage once a day for 30 consecutive days.
  • Composition 4 control mice were given a medium dose of 4.0 g crude drug / kg body weight (equivalent to 10 times the daily intake of humans), and the sample was formulated into distilled water to make 32.81 mg dry powder / mL gavage solution for experiment. O.lmL/lOg body weight calculation. 2.2.2 Test indicators
  • composition 6 has an effect of inhibiting DHBV DNA replication, and its action intensity is similar to that of composition 4.
  • the results are shown in Table 3.
  • the ALT and AST values in the serum of the model group were significantly lower than normal.
  • the lamivudine group and the composition 6 low, medium and sputum dose groups all significantly reduced serum ALT and AST. It is suggested that the composition 6 has a lowering effect on ALT and AST, and its action intensity is similar to that of the composition 4.
  • the pathological changes of the liver were alleviated, the structure of the hepatic lobule was basically intact, and the hepatocyte degeneration was significantly lighter than that of the model group. Only the spots and focal necrosis were scattered, and the slight fragment-like necrosis was only Seen in a few liver lobules. It is suggested that the composition 6 has the effect of alleviating the pathology of liver damage caused by viral infection, and its action intensity is similar to that of the composition 4.
  • composition 6 Effect of composition 6 on phagocytic function of peritoneal macrophages (its) group dose (g crude drug kg) number of animals (only) phagocytosis of chicken red blood cells phagocytosis of chicken red blood cells
  • phagocytic rate (%) phagocytic index blank control group 0.0 12 32.81 ⁇ 7.9 0.47 ⁇ 0.09 transfer factor control group 27.3mg 12 58.3 ⁇ 9.2** 0.78 ⁇ 0.12** composition 4 control group
  • composition 6 can inhibit the replication of HBV DNA in viral hepatitis duck serum, lower serum
  • composition 6 has a good preventive effect on duck viral hepatitis.
  • composition 6 can increase the lymphocyte transformation rate, the phagocytosis function of peritoneal macrophages and the number of hemolytic plaques in mice, suggesting that composition 6 has a better effect on the immune function of the body. Its The intensity of action is similar to composition 4.
  • Example 57 Clinical trial of the composition of the present invention for preventing and treating hepatitis B
  • Test sample P
  • Composition A of the present invention Weighing 300g of American ginseng, 400g of Ganoderma lucidum, 200g of fermented Cordyceps powder, 300g of rose, Panax ginseng, Ganoderma lucidum slice, fermented Cordyceps powder in a bag, soaking the above four flavors with water for 20 minutes, heating and frying Boil 3 times, each time for 1 hour, add 10 times of water each time, combine 3 times of extract to filter, concentrate the filtrate to the appropriate amount, remove the impurities after high-speed centrifugation, add the common materials for oral liquid, mix evenly, according to the conventional process of oral liquid. Make 20,000 ml oral solution.
  • Composition B of the present invention Weighing 300g of American ginseng, 400g of Ganoderma lucidum, 67g of Cordyceps sinensis, 300g of rose, Panax ginseng, Ganoderma lucidum slice, and Cordyceps sinensis powder are placed in a bag, the above four flavors are soaked in water for 30 minutes, and heated and boiled 3 times, Add 13 times of water at a time, decoct for 2 hours, then add 10 times of water each time, decoction and extract for 1 hour, combine 3 times of extract to filter, concentrate the filtrate to the appropriate amount, release the cold, centrifuge at high speed, add oral solution Commonly used auxiliary materials, mixed evenly, according to the oral liquid conventional process to make 20,000ml oral liquid.
  • test group takes the corresponding sample and takes it once a day, one bottle at a time (200ml/bottle).
  • HBV-DNA is the deoxyribonucleic acid of hepatitis B virus (ie, hepatitis B virus gene). HBV-DNA is the most direct, specific and sensitive indicator of HBV infection, HBV-DNA positive, suggesting HBV replication and contagious. The higher the HBV-DNA, the more severe the disease and the more infectious. The above clinical studies have shown that both the compositions of Group A and Group B of the present invention can significantly reduce the HBV-DNA load in the patient, indicating that the composition of the present invention is resistant to hepatitis B virus and can be used for the treatment of patients with viral hepatitis B.

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Abstract

本发明的目的在于提供一种防治乙型肝炎的组合物，含有下述重量份的原料灵芝5～200份、西洋参或人参5～150份、发酵虫草菌粉1～90份和/或冬虫夏草1～120份，或者由上述原料的水和/或醇提取物作活性成份组成的组合物在制备防治乙型肝炎的保健品或药品或产品中的应用。

Description

说 明 书
一种防治乙型肝炎的组合物及其应用
技术领域
本发明涉及一种防治乙型肝炎的组合物及其应用。
背景技术
乙型病毒性肝炎， 简称乙肝， 是一种由乙型肝炎病毒（HBV)感染机体后所引起的疾病。 乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒， 主要存在于肝细胞内并损害肝细胞， 引起肝细胞炎症、坏死、 纤维化。 乙型病毒性肝炎分急性和慢性两种。 急性乙型肝炎在成年人中 90%可自愈， 而慢性 乙型肝炎表现不一， 分为慢性乙肝携带者、 慢性活动性乙型肝炎、 乙肝肝硬化等。 我国目前 乙肝病毒携带率为 7.18%, 其中约三分之一有反复肝损害， 表现为活动性的乙型肝炎或者肝 硬化； 乙型肝炎感染呈世界性流行， 不同地区 HBV感染的流行强度差异很大， 据世界 性卫生组织报道， 全球约 20亿人曾感染过 HBV, 其中 3.5亿人为慢性感染者， 每年约 有 100 万人死于 HBV 感染所致肝肝衰竭、 肝硬化和原发性肝癌 （HCC )。 公幵号为 CN101292742A 的专利申请文件公开了一种具有增强免疫力作用的药物组合物， 包括灵芝、 西洋参、发酵虫草菌粉； 公开号为 CN102228252A的专利申请文件公开了一种具有缓解体力 疲劳的中药组合物， 含有西洋参和 /或人参、 灵芝、 发酵虫草菌粉； 公开号为 CN102000129A 本发明公开了一种具有增强免疫力作用的药物组合物， 包括虫草多糖或者发酵虫草菌粉， 灵 芝， 西洋参； 目前没有由灵芝、 西洋参或人参、 发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草制成的组合物 具有防治乙型肝炎的文献或报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治乙型肝炎的组合物及其应用。
本发明选择原料灵芝、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草进行组合， 意外地发 现该组合物具有治防治乙型肝炎的作用。
本发明提供一种防治乙型肝炎的组合物， 其由含有下述重量份的原料制成： 灵芝 5〜200 份、西洋参或人参 5~150份、发酵虫草菌粉 1~90份和 /或冬虫夏草 1〜120份。含有下述重 量份的原料或者由下述原料的水和 /或醇提取物作活性成份组成。或者所述原料混合后水提和 /或醇提得到组合物， 或者所述原料中的一种或几种经水提和 /或醇提提取物作活性成份组 成所述组合物。
上述技术方案中， 优选灵芝 20〜120份、 西洋参或人参 10~90份、 发酵虫草菌粉 3〜60 份和 /或冬虫夏草 3~90份。
更优选灵芝 40份、 西洋参或人参 30份、 发酵虫草菌粉 20份和 /或冬虫夏草 6.7份。 本发明组合物中还可以进一步包含添加其他不减弱本发明功效的下述重量份的原料或者 下列原料的水和 /或醇提物： 玫瑰花 5〜90份、灵芝孢子粉 5〜150份、灵芝孢子油 1〜90份、 太子参 10〜400份、人参叶 1〜120份、党参 3〜400份、黄芪 3〜400份中的一种或几种的任 意组合。
优选玫瑰花 10〜60份、灵芝抱子粉 10〜120份、灵芝孢子油 10〜60份、太子参 20〜200 份、 人参叶 20〜90份、 党参 20〜200份、 黄芪 20〜200份中的一种或几种的任意组合。
更优选玫瑰花 30份、 灵芝、 孢子粉 30份、 灵芝孢子油 20份、 太子参 40份、 人参叶 30 份、 党参 40份、 黄芪 40份中的一种或几种的任意组合。
在本发明的一个实施方案中， 本发明组合物由含有灵芝 5〜200份、玫瑰花 5〜90份、西 洋参或人参 5〜150份、 发酵虫草菌粉 1〜90份和 /或冬虫夏草 1 ~120份的原料制成。
上述技术方案中， 优选灵芝 20〜120份、 玫瑰花 10〜60份、 西洋参或人参 10〜90份、 发酵虫草菌粉 3〜60份和 /或冬虫夏草 3~90份。
最优选灵芝 40份、玫瑰花 30份、西洋参或人参 30份、发酵虫草菌粉 20份和 /或冬虫夏 草 6.7份。
上述技术方案中， 本发明组合物中还可以进一步包含添加其他不减弱本发明功效的下述 重量份的原料或者下列原料的水和 /或醇提物：灵芝孢子粉 5〜150份、灵芝孢子油 1〜90份、 太子参 10〜400份、人参叶 1〜120份、党参 3~400份、黄芪 3〜400份中的一种或几种的任 意组合。
优选地， 本发明组合物由含有灵芝 5〜200份、 玫瑰花 5〜90份、 西洋参或人参 5~150 份、 发酵虫草菌粉 1〜90份和 /或冬虫夏草 1〜120份的原料制成。 更优选地， 本发明组合物 由灵芝 5〜200份、 玫瑰花 5〜90份、 西洋参或人参 5〜150份、 发酵虫草菌粉 1〜90份和 / 或冬虫夏草 1〜120份的原料制成。
优选地， 本发明组合物由含有灵芝 20〜120份、 玫瑰花 10〜60份、 西洋参或人参 10〜 90份、 发酵虫草菌粉 3~60份和 /或冬虫夏草 3~90份的原料制成。 更优选地， 本发明组合物 由灵芝 20〜120份、玫瑰花 10〜60份、西洋参或人参 10〜90份、发酵虫草菌粉 3〜60份和 / 或冬虫夏草 3~90份的原料制成。
最优选地， 本发明组合物由含有灵芝 40份、玫瑰花 30份、 西洋参或人参 30份、发酵虫 草菌粉 20份和 /或冬虫夏草 6.7份的原料制成。更优选地， 本发明组合物由灵芝 40份、玫瑰 花 30份、 西洋参或人参 30份、 发酵虫草菌粉 20份和 /或冬虫夏草 6.7份的原料制成。
上述技术方案中， 本发明组合物中还可以进一步包含添加其他不减弱本发明功效的下述 重量份的原料或者下列原料的水和 /或醇提物： 灵芝孢子粉 5〜150份、灵芝孢子油 1 ~90份、 太子参 10〜400份、人参叶 1〜120份、党参 3〜400份、黄芪 3〜400份中的一种或几种的任 意组合。
本发明还可以选用人参叶、 太子参、 党参、 黄芪替代西洋参或人参， 用量和在本发明组 合物中进一步包含的添加量相同。
本发明的灵芝， 为多孔菌科灵真菌赤芝 Ganoderma lucidumile ss. ex Fr. ) Karst.或紫 芝 Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang的干燥子实体， 性味甘、 平， 归心、 肺、 肝、 肾 经， 具有滋补强壮、宁心安祌的功能； 本发明中所述的人参为五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根和根茎， 可以是各种种类的参， 如园参、 山参、 生晒参、 生晒山参、 白 糖参、 红参； 所述的人参叶为五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Mey.的干燥叶； 本发明 中所述的西洋参又名美国参、 花旗参、 洋参、 广东参， 系五加科植物西技洋参 Pa quinquefoliumL. 的干燥根， 性味甘、 微苦， 凉， 归心、 肺、 肾经， 具有补气养阴， 清热生 津的功能； 本发明中所述的冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis (Berk. ) sace. 寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。
本发明中所述的发酵虫草菌粉是从天然冬虫夏草 Cordyceps sinensis (Berk. ) sace.中分 离出来的菌种经发酵培养的产物，可以是如以下菌种:蝙蝠蛾拟青霉 Paeci lomyces hepiall i Chen et Dai, sp. nov; 中华被毛抱 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov; 麦 角菌科真菌冬虫夏草头孢 Cephalosporium sinensis Chen sp. nov； 蝙蝠蛾被孢酶 Mortiscrslla hepial id C. T. & B. l iu; 中国拟青霉 Paeci lomyces sinensis Chen, Xiao et Shi, sp. nov; 中国弯颈霉 Tolypocladium sinensis C. Ian Li ; 中国头孢霉 Cephalosporium sinens Chen sp. nov;蝙幅娥柱霉 Scytalidium hepial i i C. L. Li ; 中国金抱霉 Chrysosporium sinens Z. Q. liang； 中国轮枝孢 Vert ici Ilium sinens Wamg sp. nov； 顶孢头孢霉 Cephalosporium acremonium Corda, Icones Fungorum;中华束丝孢 Synnematium sinensis Yin & Shen; 虫花棒束孢 I sari a farinose (Holmsk. ) Fr. Systema Mycologicum; 金龟子绿僵菌 Metarhizium ani sopl i ae (Metsch) Sorokin； 蝙蝠娥被毛抱 Hirsutella hepial id Chen et Shen ; 虫草续孢 Sporothrix insectorum de Hong & H. C. Evans ; 粉红胶霉 Gl iocladium roseumd ink) Thorn; 孢霉属真菌 Mortierella SP中的一种或任意组合。
本发明发酵虫草菌粉所属的菌种优选蝙蝠蛾拟青霉或蝙蝠蛾被毛抱或中华束丝孢或粉 红胶霉或孢霉属真菌或麦角菌科真菌冬虫夏草头抱或中华被毛孢中的一种或几种的任意组 合。
本发明中所述的玫瑰花是蔷薇科植物玫瑰（Atosa i^osa Thumb)的干燥花蕾， 也可以是 重瓣红玫瑰 Rose rugosacv. Plena; 味辛、 甘、 微苦、 性温， 最明显的功效就是行气解郁， 和血， 止痛， 药性温和。
党参为桔梗科植物党参 Codonopsis pilosula(Franch. ) Nannf. 素花党参 Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta(Nannf. ) L. T. Shen ^Jl|¾ Codonopsis tangshen Oliv.的干 燥根。
本发明所述的太子参为石竹科植物孩儿参 Pseudostellaria heterophylla ( iq. ) Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根。
人参叶为五加科植物人参 Panar ginseng C. A. Mey.的干燥叶。
黄 |ξ为豆科植物蒙古黄 Astragalus raembranaceus (Fi sch) Bge. var. mongholicus (Bge) Hsiao或膜英黄 Astragalus membranaceus (Fisch) Bge.的干燥根。
本发明所述的灵芝孢子粉优选破壁灵芝孢子粉。
本发明的灵芝孢子粉是灵芝的有性生殖细胞一一担孢子粉。
本发明的灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中萃取出的油脂脂质物质。
本发明所述的醇是甲醇或乙醇； 甲醇浓度 5— 95%, 乙醇浓度为 5— 95%。
本发明组合物可以加入保健品或药品或产品中可接受的附加剂或赋形剂制备成任意剂 型。 该剂型可以是片剂、 口服液、 颗粒剂、 胶囊剂、 煎裔剂、 滴丸剂、 丸剂、 散剂、 锭剂、 流浸脔剂、 浸裔剂、 注射剂、 糖浆剂中的任意一种。
本发明提供了含有灵芝、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的组合物或者由含 有灵芝、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的原料制成的组合物或者由灵芝、西洋 参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草制成的组合物在制备防治乙型肝炎的组合物或产品中 的用途。
本发明还提供了含有灵芝、玫瑰花、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的组合 物或者由含有灵芝、玫瑰花、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的原料制成的组合 物或者由灵芝、玫瑰花、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草制成的组合物在制备防 治乙型肝炎的组合物或产品中的用途。
提供了含有灵芝、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的组合物或者由含有灵芝、 西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的原料制成的组合物或者由灵芝、西洋参或人参、 发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草制成的组合物加入玫瑰花、 灵芝孢子粉、 灵芝孢子油、 太子参、 人参叶、 党参、 黄芪中的一种或几种任意成份组成的组合物在制备防治乙型肝炎的组合物或 产品中的用途。
提供了含有灵芝、玫瑰花、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的组合物或者由 含有灵芝、玫瑰花、西洋参或人参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草的原料制成的组合物或者由 灵芝、 玫瑰花、 西洋参或人参、 发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草制成的组合物加入灵芝孢子粉、 灵芝孢子油、 太子参、 人参叶、 党参、 黄芪中的一种或几种任意成份组成的组合物在制备防 治乙型肝炎的组合物或产品中的用途。
本发明所述在制备防治乙型肝炎的组合物或产品中的用途中， 所述组合物包括保健品和 药品， 其中所述 "产品"包括没有包括在保健品或药品内的其它产品， 例如熏油、 抱枕等。
本发明所述中药组合物的原料的水和 /或醇提取物的制备工艺， 包括以下步骤：
1) 称取中药材原料：
2) 用醇或水对上述药材回流提取， 得到提取液做活性成份， 加入附加剂， 制成各种剂 型。
本发明所述中药组合物的原料的水和 /或醇提取物的制备工艺， 也可以包括以下步骤：
1 )称取中药材原料， 将原料药材加甲醇或乙醇进行提取， 提取液回收甲醇或乙醇， 得到 提取物 I；
2)将上述药渣挥干醉后， 加水进行提取， 得到提取物 II；
3)合并提取物 I和提取物 II , 过滤， 滤液浓缩至适量， 加入药学上常用辅料， 采用药剂 学上常规工艺制成所需制剂。
本发明所述中药组合物的原料的水和 /或醇提取物的制备工艺， 还可以包括以下步骤：
1) 原料准备： 称取中药材原料；
2) 提取浓縮： 将步骤 1中处理好的原料加水浸泡后， 加热煎煮多次， 合并提取液过滤, 滤液浓縮至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 备用；
3) 制备制剂： 将步骤 2中所得的浓缩液单独或加入医学上可接受的辅料， 采用药剂学 上常规工艺制成所需制剂；
上述步骤 2)中浸泡时间为 20分钟〜 60分钟，后加热煎煮 1〜3次，每次 1〜2小时， 加水量 6〜13倍。
为了更好地理解本发明， 下面将用由灵芝、人参或西洋参、发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草 制成的药物组合物的动物实验及结果来说明本发明具有防治乙型肝炎的作用。
同样地加入玫瑰花、 灵芝孢子粉、 灵芝孢子油、 人参、 太子参、 党参、 黄芪等任一种或 几种任意组合均能达到有同样的药理作用； 用人参叶、 太子参、 党参、 黄芪替代西洋参或人 参， 也能达到有同样的药理作用。
具体实施方式
实施例 1 取西洋参 1.5kg、 灵芝 2.0kg、 冬虫夏草 0.33kg, 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉后置 于布袋中， 以上 3味加水浸泡 SOmin, 加热煎煮 3次， 第一次加 13倍量水， 煎煮 2小时， 以 后每次加水 10倍量， 煎煮提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩成清膏， 喷雾干燥制 成复合粉。 获得的组合物是组合物 1， 用于下面的药效实验。
实施例 2
取西洋参 1.5kg、 灵芝 2.0kg、 发酵虫草菌粉 1.0kg, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置 于布袋中， 以上 3味加水浸泡 30min， 加热煎煮 3次， 第一次加 13倍量水， 煎煮 2小时， 以 后每次加水 10倍量， 煎煮提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩成清膏， 喷雾干燥制 成复合粉。 获得的组合物是组合物 2, 用于下面的药效实验。
实施例 3
取西洋参 1.5kg、灵芝 2.0kg、发酵虫草菌粉 1.0kg、冬虫夏草 0.33kg， 西洋参、灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 4味加水浸泡 30min, 加热煎 煮 3次， 第一次加 13倍量水， 煎煮 2小时， 以后每次加水 10倍量， 煎煮提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩成清膏， 喷雾干燥制成复合粉。 获得的组合物是组合物 3, 用于下 面的药效实验。
实施例 4
取西洋参 1.5kg、 灵芝 2.0kg、 冬虫夏草 0.33kg、 玫瑰花 1.5kg， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫 夏草打粉后置于布袋中， 以上 4味加水浸泡 30min, 加热煎煮 3次， 第一次加 13倍量水， 煎 煮 2小时， 以后每次加水 10倍量，煎煮提取 1小时，合并 3次提取液过滤，滤液浓缩成清膏， 喷雾干燥制成复合粉。 获得的组合物是组合物 4, 用于下面的药效实验。
实施例 5
取西洋参 1.5kg、 灵芝 2.0kg、 发酵虫草菌粉 1.0kg、 玫瑰花 1.5kg, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上 4味加水浸泡 30min, 加热煎煮 3次， 第一次加 13倍量水， 煎煮 2小时， 以后每次加水 10倍量， 煎煮提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩成清 膏， 喷雾干燥制成复合粉。 获得的组合物是组合物 5, 用于下面的药效实验。
实施例 6
取西洋参 1.5kg、 灵芝 2.0kg、 发酵虫草菌粉 1.0kg、 冬虫夏草 0.33kg、 玫瑰花 1.5kg， 西 洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸 泡 30min， 加热煎煮 3次， 第一次加 13倍量水， 煎煮 2小时， 以后每次加水 10倍量， 煎煮 提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩成清膏， 喷雾干燥制成复合粉。 获得的组合物 是组合物 6, 用于下面的药效实验。 取西洋参 300g、 灵芝 400g、 发酵虫草菌粉 （中华被毛孢 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov) 200g、 玫瑰花 300g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于 布袋中， 以上四味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3 次提取液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合 均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 8
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、 发酵虫草菌粉（蝙蝠蛾拟青霉 Paecilomyces hepialli Chen et Dai, sp. nov ) 200g、 玫瑰花 300g， 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置 于布袋中， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上五味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩 液放冷后高速离心除杂， 减压浓缩成裔或喷雾干燥成粉， 加入片剂常用辅料， 混合均匀， 按 片剂常规工艺制成片剂。
实施例 9
西洋参 150g、 发酵虫草菌粉 （蝙蝠蛾被毛孢 Hirsutella hepialid Chen et Shen) 90g、 冬虫夏草 120g、 灵芝 200g、 玫瑰花 90g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 冬 虫夏草打粉后置于布袋中， 以上五味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓縮液放冷后髙速 离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均勾， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 10
人参 500g、 发酵虫草菌粉 （中华束丝孢 Synnematium sinensis Yin & Shen) 100g、 灵 芝 500g、玫瑰花 500g，人参、灵芝切片，发酵虫草菌粉置于布袋中，以上四味加水浸泡 30rnin， 加热煎煮 3次， 第一次加 15倍量水煎煮 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3 次提取液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓縮液放冷后髙速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混 合均勾， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 11
西洋参 500g、 发酵虫草菌粉 （中华被毛抱 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu - et Zeng, sp. nov) 100g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g， 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋 中， 以上四味加水浸泡 20min， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 加入口服液 常用辅料， 混合均勾， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。 实施例 12
西洋参 150g、 冬虫夏草 120g、 灵芝 200g、 玫瑰花 90g， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打 粉后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小 时，每次加水 10倍量，合并 3次提取液过滤，滤液浓縮至适量，浓縮液放冷后高速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000πι1口服液。
实施例 13
人参 150g、发酵虫草菌粉（粉红胶霉 Gliocladium roseum(link) Thom ) 90g、灵芝 200g、 玫瑰花 90g, 人参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上四味加水浸泡 1小时， 加热 煎煮 2次， 第一次 15倍量水提取 2小时， 第二次加水 10倍量提取 1. 5小时， 合并 2次提取 液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 14
西洋参 150g、 发酵虫草菌粉 （蝙蝠蛾被毛孢 Hirsutella hepialid Chen et Shen) 90g、 冬虫夏草 120g、 灵芝 200g、 玫瑰花 90g, 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上五味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速 离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 15
西洋参 100g、 冬虫夏草 30g、 灵芝 200g、 玫瑰花 100g， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打 粉后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 30ηΰη， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小 时，每次加水 10倍量，合并 3次提取液过滤，滤液浓缩至适量，浓缩液放冷后高速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 16
西洋参 150g、 发酵虫草菌粉 （中华被毛抱 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov) 30g、 灵芝 200g、 玫瑰花 lOOg, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋 中， 以上四味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 加入口服液 常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 Π
西洋参 90g、 冬虫夏草 90g、 灵芝 120g、 玫瑰花 60g， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉 后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂，加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 18
人参 90g、 冬虫夏草 90g、 灵芝 120g、玫瑰花 60g, 人参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉后置 于布袋中， 以上四味加水浸泡 30min， 加热煎煮 3次， 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混 合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 19
西洋参 90g、发酵虫草菌粉（麦角菌科真菌冬虫夏草头孢 Cephalosporin sinensis Chen sp. nov) 60g、 灵芝 120g、 玫瑰花 60g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以 上四味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过 滤， 滤液浓縮至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口 服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 20
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、玫瑰花 300g， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉 后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂， 减 压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入片剂常用辅料， 混合均匀， 按片剂常规工艺制成各种片剂。 实施例 21
取西洋参 300g、灵芝 400g、发酵虫草菌粉（蝙蝠蛾拟青霉 Paecilomyces hepialli Chen et Dai, sp. nov ) 200g、 玫瑰花 300g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上 四味加水浸泡 20min,加热煎煮 3次，每次 1小时，每次加水 10倍量，合并 3次提取液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液 常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 22
取西洋参 500g、 冬虫夏草 100g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g、 破壁灵芝孢子粉 500g, 西洋 参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 第 一次加 12倍量水提取 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入破壁灵 芝孢子粉与片剂常用辅料， 混合均匀， 按片剂常规工艺制成各种片剂。
实施例 23 取人参 500g、 发酵虫草菌粉 （中国拟青霉 Paecilomyces sinensis Chen, Xiao et Shi, sp. nov ) 100g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g、 破壁灵芝孢子粉 500g, 人参、 灵芝切片， 发 酵虫草菌粉与破壁灵芝孢子粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 第一 次加 13倍量水提取 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 9倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液 浓缩至适量， 浓縮液放冷后髙速离心除杂， 减压浓縮成膏或喷雾干燥成粉， 加入颗粒剂常用 辅料， 混合均匀， 按颗粒剂常规工艺制成颗粒剂。
实施例 24
取西洋参 150g、 发酵虫草菌粉（中国弯颈霉 Tolypocladium sinensis C. Ian Li ) 90g、 灵芝 200g、 玫瑰花 90g、 破壁灵芝孢子粉 150g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋 中， 以上四味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 第一次加 12倍量水提取 2小时， 以后每次 1 小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心除 杂， 减压浓縮成裔或喷雾干燥成粉， 加入灵芝抱子粉与片剂常用辅料， 混合均匀， 按片剂常 规工艺制成各种片剂。
实施例 25
取西洋参 500g、 冬虫夏草 100g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g、 灵芝抱子油 100g, 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上四味加 80%乙醇回流提取 2次， 每次 2小时， 滤过， 滤液回收乙醇至无醇味， 减压浓縮成膏或喷雾干燥成粉， 加入灵芝孢子油与滴丸剂常 用辅料， 混合均匀， 按滴丸剂常规工艺制成滴丸。
实施例 26
取西洋参 500g、 发酵虫草菌粉（中华束丝孢 Synnematium sinensis Yin & Shen ) 100g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g、 破壁灵芝孢子粉 500g、 灵芝孢子油 100g、 人参叶 100g， 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上药材加水浸泡 40min， 加热煎煮 3次， 第一次 2 小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液 放冷后高速离心除杂， 减压浓縮成膏或喷雾干燥成粉， 加入破壁灵芝抱子粉、 灵芝抱子油与 颗粒剂常用辅料， 混合均匀， 按颗粒剂常规工艺制成颗粒剂。
实施例 27
取西洋参 150g、 发酵虫草菌粉 (蝙蝠蛾被毛孢 Hirsutella hepialid Chen et Shen ) 90g、 灵芝 200g、 玫瑰花 90g、 党参 400g, 西洋参、 灵芝、 党参切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍 量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 减压浓缩成膏或 喷雾干燥成粉， 加入片剂常用辅料， 混合均匀， 按片剂常规工艺制成各种片剂。 实施例 28
取西洋参 150g、 冬虫夏草 120g、 灵芝 200g、 玫瑰花 90g、 黄芪 400g, 西洋参、 灵芝、 黄芪切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 第一次 2 小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓縮液 放冷后高速离心除杂， 加入锭剂常用辅料， 混合均匀， 按锭剂常规工艺制成锭剂。
实施例 29
取西洋参 500g、 发酵虫草菌粉（蝙蝠蛾拟青霉 Paecilomyces hepialli Chen et Dai, sp. nov) 50g； 发酵虫草菌粉 （中华被毛孢 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov ) 50g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g、 党参 300g， 西洋参、 灵芝、 党参切片， 发酵 虫草菌粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心 除杂， 减压浓縮成膏或喷雾干燥成粉， 加入散剂常用辅料， 混合均匀， 按散剂常规工艺制成 散剂。
实施例 30
取西洋参 500g、 冬虫夏草 100g、 灵芝 500g、 玫瑰花 500g、 黄芪 300g, 西洋参、 灵芝、 黄芪切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 第一次 2 小时， 以后每次 1小时， 每次加水 9倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液 放冷后高速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000II11 口 服液。
实施例 31
取西洋参 100g、灵芝 200g、冬虫夏草 30g、发酵虫草菌粉 (Cs- C- Q80 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov) 3 g、 玫瑰花 100g、 灵芝孢子粉 lOOg, 西洋参、 灵芝切片， 冬 虫夏草打粉后与灵芝孢子粉置于布袋中， 以上药材加水浸泡 20min, 加热煎煮 3次， 第一次 加 11倍量水提取 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液 浓缩至适量， 浓縮液放冷后髙速离心除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入片剂常用辅 料， 混合均匀， 按片剂常规工艺制成各种片剂。
实施例 32
取西洋参 100g、 灵芝 200g、 发酵虫草菌粉 (蝙蝠蛾被孢酶 Mortiscrslla hepialid C. T. & B. liu)30g, 玫瑰花 100g、 灵芝抱子粉 I00g， 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉与灵芝孢子 粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 20tnin, 加热煎煮 3次， 第一次加 12倍量水提取 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 8倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 滤液浓缩至适 量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 减压浓缩成脔或喷雾千燥成粉， 加入丸剂常用辅料， 混合 均匀， 按丸剂常规工艺制成各种丸剂。
实施例 33
取西洋参 90g、 灵芝 120g、 冬虫夏草 90g、 玫瑰花 60g、 灵芝孢子油 90g， 西洋参、 灵芝 切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 30min, 加热煎煮 3次， 第一次 2小 时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放 冷后高速离心除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入灵芝孢子油与颗粒剂常用辅料， 混 合均匀， 按颗粒剂常规工艺制成颗粒剂。
实施例 34
取西洋参 100g、 灵芝 200g、 冬虫夏草 30g、 玫瑰花 100g、 太子参 200g， 西洋参、 灵芝 切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3次， 第一次加水 10倍量提取 2小时， 以后每次加水 8倍量提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适 量， 加入裔滋常用辅料， 混合均匀， 按膏滋常规工艺制成膏滋。
实施例 35
取西洋参 100g、 灵芝 200g、 冬虫夏草 30g、 玫瑰花 100g、 人参叶 200g, 西洋参、 灵芝 切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min， 加热煎煮 3次， 第一次加水 15倍量提取 2小时， 以后每次加水 10倍量提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至 适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 加入糖浆剂常用辅料， 混合均匀， 按糖浆剂常规工艺制 成糖浆剂。
实施例 36
取西洋参 100g、灵芝 200g、发酵虫草菌粉 (孢霉属真菌 Mortierella SP ) 30g、玫瑰花 100g、 党参 200g， 西洋参、灵芝、党参切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入片剂常 用辅料， 混合均匀， 按片剂常规工艺制成各种片剂。
实施例 37
取西洋参 100g、 灵芝 200g、 发酵虫草菌粉（中国轮枝孢 Verticillium sinens Wamg sp. nov) 30g,玫瑰花 100g、黄芪 200g, 西洋参、灵芝、黄芪切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍 量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 减压浓缩成膏或 喷雾干燥成粉， 加入胶囊剂常用辅料， 混合均匀， 按胶囊剂常规工艺制成胶襄。 实施例 38
取西洋参 90g、 灵芝 120g、 发酵虫草菌粉 (麦角菌科真菌冬虫夏草头孢 Cephalosporium sinensis Chen sp. nov ) 30g、 发酵虫草菌粉 (中华束丝抱 Synnematium sinensis Yin & Shen) 30g、 玫瑰花 60g、 灵芝抱子油 60g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上五 味加水浸泡 1小时， 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 13倍量， 合 并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干 燥成粉， 加入灵芝孢子油与丸剂常用辅料， 混合均匀， 按丸剂常规工艺制成各种丸剂。
实施例 39
取西洋参 90g、 灵芝 120g、 冬虫夏草 90g、玫瑰花 60g、黄芪 200g、 灵芝孢子油 10g, 西 洋参、灵芝、 黄芪切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3 次， 第一次加水 15倍量提取 2小时， 以后每次加水 10倍量提取 1小时， 合并 3次提取液过 滤， 滤液浓縮至适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂， 加入糖浆剂常用辅料， 混合均匀， 按糖 浆剂常规工艺制成糖浆剂。
实施例 40
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 发酵虫草菌粉（蝙蝠蛾柱霉 Scytalidium hepialii C. L. Li ) 200g、 玫瑰花 300g、 灵芝抱子粉 400g， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 20min，加热煎煮 3次，第一次加 15倍量水提取 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 减 压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入灵芝孢子粉与片剂常用辅料， 混合均匀， 按片剂常规工艺 制成各种片剂。
实施例 41
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g 、 玫瑰花 300g、 灵芝抱子油 20g, 洋参、 灵 芝切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上四味加水浸泡 30min, 加热煎煮 3次， 第一次 2 小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液 放冷后高速离心除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入灵芝孢子油与颗粒剂常用辅料， 混合均匀， 按颗粒剂常规工艺制成颗粒剂。
实施例 42
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 发酵虫草菌粉 (中国头孢霉 Cephalosporium sinens Chen sp. nov)200g、 玫瑰花 300g、 太子参 400g， 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40min, 加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍 量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓縮至适量， 浓缩液放冷后高速离心除杂， 减压浓縮成膏或 喷雾干燥成粉， 加入片剂常用辅料， 混合均匀， 按片剂常规工艺制成各种片剂。
实施例 43
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、 玫瑰花 300g、 太子参 400g, 西洋参、 灵芝 切片， 冬虫夏草打粉后置于布袋中， 以上 5味加水浸泡 40mi 加热煎煮 3次， 第一次加水 15倍量提取 2小时， 以后每次加水 10倍量提取 1小时， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至 适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂， 加入糖浆剂常用辅料， 混合均匀， 按糖浆剂常规工艺制 成糖浆剂。
实施例 44
取西洋参 300g、灵芝 400g,发酵虫草菌粉（中国金孢霉 Chrysosporium sinens Z. Q. liang) 100g; 发酵虫草菌粉（中华被毛孢 Hirsutel la sinensis Liu, Guo，Yu-et Zeng, sp. nov) 100g、 玫瑰花 300g， 西洋参、 灵芝切片， 虫草菌粉置于布袋中， 加入 5%甲醇回流提取 2次， 每次 1 小时， 然后合并提取液， 回收甲醇后得到醇提取液； 药渣再加水加热煎煮 2次， 第一次 2小 时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤液浓缩至适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂， 减压浓縮成裔或喷雾干燥成粉， 加入颗粒剂常用辅料， 混合均 匀， 按颗粒剂常规工艺制成颗粒剂。
实施例 45
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、 发酵虫草菌粉 （中华被毛孢 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu-et Zeng, sp. nov) 20g、 玫瑰花 300g， 西洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草 粉碎后置于布袋中， 加入 75%乙醇回流提取 2小时， 回收乙醇后得到醇提取液； 药渣再加水 加热煎煮 3次， 每次 2小时， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放 冷后高速离心除杂过滤， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml 口服液。
实施例 46
取人参 300g、 灵芝 400g、 发酵虫草菌粉 （顶抱头孢霉 Cephalosporium acremonium Corda, Icones Fungorum) 200g、 玫瑰花 300g、 党参 400g， 西洋参、 灵芝、 党参切片， 虫草 菌粉置于布袋中， 加入 95%甲醇回流提取 2次， 每次 1小时， 然后合并提取液， 回收甲醇后 得到醇提取液； 药渣再加水加热煎煮 3次， 第一次 2小时， 以后每次 1小时， 每次加水 10倍 量， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 减压 浓縮成膏或喷雾干燥成粉， 加入颗粒剂常用辅料， 混合均匀， 按颗粒剂常规工艺制成颗粒剂。 实施例 47
取人参 300g、 灵芝 400g、 发酵虫草菌粉 （虫草簇孢 Sporothrix insectorum de Hong & H. C. Evans) 200g、 玫瑰花 300g、 党参 400g, 人参、 灵芝切片， 冬虫夏草粉碎后置于布袋中， 加入 95%乙醇回流提取 2小时， 回收乙醇后得到醇提取液； 药渣再加水加热煎煮 3次，每次 2 小时， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤液浓縮至适量， 浓縮液放冷后髙速离心除杂过滤， 加入口服液常用辅料， 混合均勾， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 48
取人参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、 玫瑰花 300g、 灵芝孢子粉 300g、 黄芪 400g, 人参、 灵芝切片， 冬虫夏草粉碎后置于布袋中， 加入 5%乙醇回流提取 2小时， 回收乙醇后得 到醇提取液； 药渣再加水加热煎煮 2次， 每次 2小时， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤 液浓缩至适量， 浓縮液放冷后高速离心除杂过滤， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服 液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 49
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 发酵虫草菌粉 （ 虫花棒束孢 Isaria farinose (Holmsk. ) Fr. Systema Mycologicum) 200g、 玫瑰花 300g、 黄芪 400g, 西洋参、 灵 芝切片， 虫草菌粉置于布袋中， 加入 95%甲醇回流提取 2次， 每次 1小时， 然后合并提取液， 回收甲醇后得到醇提取液； 药渣再加水加热煎煮 3次， 第〜次 2小时， 以后每次 1小时， 每 次加水 10倍量， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后高速离心 除杂， 减压浓缩成膏或喷雾干燥成粉， 加入颗粒剂常用辅料， 混合均匀， 按颗粒剂常规工艺 制成颗粒剂。
实施例 50
取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、 玫瑰花 300g、 人参叶 90g， 西洋参、 灵芝切 片， 冬虫夏草粉碎后置于布袋中， 加入 5%乙醇回流提取 2小时， 回收乙醇后得到醇提取液； 药渣再加水加热煎煮 3次， 每次 2小时， 合并醇提取液和水提取液， 过滤， 滤液浓缩至适量, 浓缩液放冷后高速离心除杂过滤， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
实施例 51 : 实施例 1获得的组合物 1防治乙型病毒性肝炎动物试验报告：
I.实验材料
1.1样品来源： 受试药为实施例 1获得的组合物 1复合粉 （西洋参、 灵芝、 冬虫夏草） 由江 中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉干粉相当于总生药材 10.97g, 给药时用 0号胶囊包装。
1.2实验动物： 麻品系锥鸭 Id龄， 体重 40g~50g, 雄性， 由青云谱鸭场提供。 C57BL/6小鼠， 体重 18-22g，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号 SCXK (京） 2006-009。
1.3试剂： 丙氨酸氨基转移酶（ALT)、 天门冬酸氨基转移酶（AST)试剂盒由南京建成生物 工程研究所提供； 阳性药拉米夫定，葛兰素史克制药（苏州）有限公司生产； 阳性药转移因子 胶囊，西安金花制药厂；刀豆蛋白 A(ConA， Sigma公司)； MTT Sigma公司：);绵阳红细胞 (SRBC, 广州市齐云生物技术有限公司）。
1.4仪器： Beckman-CX7全自动血液生化仪， Beckman公司产品； OLYMPUS显微镜， 台湾 生产。切片机， 德国 Leica; YT-6C生物组织摊烤片机， 湖北省孝感市亚光医用电子技术公司； PH140A型培养箱 /干燥箱， 上海〜恒科技有限公司； 高速离心机， 贝克曼公司； GelDOC2000 型凝胶成像分析系统， 美国伯乐公司； APC300型电流仪、 水平式电泳槽， 伯乐公司； 数显 恒温水浴锅， 深圳天南海北有限公司； BSI103型电子分析天平， 塞多利斯公司。
2实验方法
2.1 实施例 1获得的组合物 1抗鸭乙型肝炎的药效学实验研究
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒性肝损伤动物模型的复制： 采用健康成年麻鸭产的蛋孵化的 Id龄雏鸭 100只， 经腹腔接种 0.2ml DHBV-DNA阳性病毒血清。 接种 1 周后， 分别从颈外静脉抽血 0.5ml/只， 分离血清， 用 HBsAg ELISA法检测筛选出感染阳性鸭， 饲养至 3 周龄作为模型动 物。
2.1.2动物分组与给药：将 DHBV感染成功的雏鸭 60 只随机分为 5 组，每组 12 只。模型对照 组、 拉米夫定阳性药对照组、 实施例 1的组合物 1低、 中、 高剂量组。 模型组喂服淀粉胶囊 200mg kg,拉米夫定组喂服拉米夫定 50mg/kg,实施例 1的组合物 1低、中、高剂量组分别按 l.Og 生药/ kg、 2.0g生药/ kg、 6.0g生药/ kg喂服， 每天给药 1 次， 连续 28天。 停药观察 7天。
2.1.3检测指标
2.1.3.1 血清 DHBV DNA滴度： 于用药前、用药 7、 14、 21、 28天、 停药 7天分别颈外静脉 抽血， 分离血清于 - 20 °C 保存待检。 采用斑点杂交法， 用地高辛标记 DHBV DNA探针将用 药前后的血清统一对比检测， 以与探针同源的质粒 DNA倍比稀释后、 点样于硝酸纤维薄膜上 杂交显示的斑点颜色深浅为标准， 用扫描仪进行膜片扫描， 对斑点进行定量分析。
2.1.3.2 血清 DHBsAg值： 于用药前、 于用药前、 用药 7、 14、 21、 28天、 停药 7天 分别颈 外静脉抽血，分离血清于 - 20 'C 保存待检。将用药前后的血清统一对比检测，采用 EUSA法、 酶标仪 490 nm读取 OD值。
2.1.3.3 血清 ALT、 AST检测： 于用药 28天、停药 7天分别取动物血液， 全自动生化分析仪检 测血清 ALT、 AST.
2.1.3. 各组肝脏病理 ( HE染色）检测： 于停药 7 d在 分别剖杀各组试验动物， 各取小块肝 组织固定于 10% 甲醛溶液， 石蜡切片， 用 HE染色， 病理检査。
2.2 实施例 1的组合物 1对免疫功能的影响
2.2.1 动物分组与给药： 小鼠分为 5组， 即空白对照组、 转移因子胶囊阳性对照组、 实施例 1 的组合物 1低、中、髙剂量组，各剂量组实验动物数为 12只。转移因子胶窠组灌胃 27.3mg kg， 低剂量组灌胃 2.0g生药/ kg体重；中剂量组灌胃 4.0g生药/ kg体重；髙剂量组灌胃 12g生药/ kg 体重，分别相当于人每日摄入量的 5、 10和 30倍。将样品以蒸馏水配制成相应浓度（18.23mg 干粉 /mL、36.46mg千粉 /mL、 109.38mg干粉 /mL)的灌胃液进行实验，小鼠灌胃量按 0.1mL/10g 体重计算。 空白对照组给予等体积蒸馏水灌胃。 每日灌胃 1次， 连续 30天。
2.2.2检测指标
2.2.2.1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化： 无菌条件下取小鼠脾脏， 制成单细胞悬液， 经裂解 红细胞后用含 10%小牛血清的 RPMI-1640培养液调脾细胞密度， 制成 5x l06/ml小鼠脾细胞悬 液。将每一份脾细胞悬液分别加入两个％孔板中， 其中一孔加入 75μ1 ConA, 另一孔加入等量 培养基作为对照。上述每个样品重复 3个复孔。 96孔板置于 37°C下 5%的 C02培养箱中培养 72h。 培养结束前 4h， 每孔加入 MTT(5mg ml)5(^l, 继续培养。 培养结束后， 弃上清液， 每孔加入 150μ1酸性异丙醇， 混匀， 用酶标仪测定 570nm波长处的光密度， 计算脾淋巴细胞转化数。
脾淋巴细胞转化数 -ConA剌激孔 OD值-无 ConA刺激孔 OD值
2.2.2.2 脾细胞抗体形成能力： 釆用 Jeme改良玻片法测定脾细胞抗体生成能力。 在实验结束 前第 4天， 除正常对照组外， 每只小鼠腹腔注射绵羊红细胞 (SRBC)l x lO8个。 实验结束当天， 处死小鼠， 无菌制备脾细胞悬液， 以 RPMI1640培养液调整其细胞浓度为 5xl06/ml倾倒于己刷 琼脂糖薄层的玻片上， 作平行片， 待琼脂凝固后， 将玻片水平扣放在片架上， 放入 C02培养 箱中孵育 1.5h, 然后加入补体 (1 : 8的新鲜豚鼠血清)， 继续温育 1.5h, 计数溶血空斑数。
2.2,2.3腹腔巨噬细胞吞噬能力：末次灌胃后， 各组小鼠腹腔注射 20%鸡红细胞 (CRBC)lml间隔 30min, 颈椎脱臼处死动物， 用生理盐水冲洗腹腔， 然后吸出腹腔液体 lml, 分别滴在两张玻 片上， 37'C孵育 30ηώ。玻片经清洗、 固定、 晾干后以 Giemsa-磷酸缓冲液染色后， 镜检计数, 计算吞噬百分率及吞噬指数。
吞噬率(％)=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 /100个巨噬细胞) WOO
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数 /100个巨噬细胞
2.3统计方法：实验数据以 ¾tS表示，采用单因素方差分析， 比较空白对照组、模型对照组、 实施例 1的组合物 1各组之间的差异， PO.05判断为差异具有显著性。
3结果
3.1 实施例 1的组合物 1抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄 3.1.1 对血清 DHBV DNA滴度的影响
结果见表 1。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 实施例 1的组合物 1高剂量组于给药后 14天出现有血清
DHBV DNA滴度明显降低， 实施例 1的组合物 1中剂量组于给药后 21天出现有血淸 DHBV
DNA滴度明显降低， 低剂量组于给药 28天血清 DHBV DNA滴度明显降低。
3.1.2对血清 DHBsAg 的 OD值改变情况
结果见表 2。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 实施例 1的组合物 I高剂量组于给药后 21天出现有血清
DHBV DNA滴度明显降低， 实施例 1的组合物 1中剂量组于给药后 28夭出现有血清 DHBV
DNA滴度明显降低， 低剂量组有降低的趋势， 但无显著统计学意义。
表 1 实施例 1的组合物 1对血清 DHBV DNA滴度的影响 （ i±s, n=12) 组别 ^ 用药前 用药 7d 用药 I4d 用药 21d 用药 28d 停药 7d
(g生药 /kg)
模型对照组 - 1507.3±123.5 1521.3±129.8 1528.7±121.69 1536.7±135.6 1508.6±143.7 1523. ±148.2 拉米夫定对
50mg 0.2"" 1277.3±150.2"" 1321.1±161.4** 照组 1498.8± 122.0 1438.2±129.7 1387.5±130.8** 1288. ±14
受试药低剂
1.0 1492.7± 125.6 1454.3±127.0 1412.4±129.4* 1402.5±14!.1* 1351.4±160.3*·· I368.6il56.83A' 量组
受试药中剂
2.0 1489.6±123.5 1438.4±126.6 1401.30±136.4* 1372.2±132.5*** 1314.1±154.2"** 1308.4±Ι52.8Α* 童组
受试药髙剂
6.0 】519.5±128.2 1436.8±137.5 1388.4±138.7*** 1376.7± 149.2*** 1290.3±156.1 "" 1300.7±155.0" 量组
与用药前比较， *P<0.05, " kP<0.01 ; 与模型对照组比较， 叩<0 .05, *»Ρ<0.01 «
表 2 实施例 1的组合物 1对血清 DHBsAg的 OD值改变情况（ its, n=12) 组别 用药前 用药 7d 用药 1 d 用药 21d 用药 284 停药 7d
(g生药 kg)
模型对照组 - 0.75±0.21 0.71±0.18 0.77土 0.09 0.73±0.15 0.72±0.14 0.74±0.12 拉米夫定对照组 50mg 0.74±0.09 0.6 ±0.17 0.51±0.084* 0.43±0.12"** 0.33±0.11 "" 0.34±0.10""
S试药低剂量组 1.0 0.73±0.10 0.74±0.14 0.70±0.09 0.6 ±0.12 0.66±0.17 0.64±0.15 受试药中剂量组 2.0 0.72±0.11 0.68±0.12 0.66±0.13 0.61±0.13* 0.54±0.14" 0.51±0.14"" 受试药高剂量组 6.0 0.74±0.14 0.65*0.15 0.63±0.13 0.55±0.12*** 0.42±0.12"" 0.38±0.13"" 与用药前比较， AP<0.05, "P<0.01 : 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01.
3.1.3对血清 ALT、 AST的影响
结果见表 3。 模型组血清中 ALT、 AST值明显髙于正常。 拉米夫定组和实施例 1的组合物 1 低、 中、 高剂量组均有明显的降低血清 ALT和 AST的作用。
表 3 组合物 1对血清 ALT、 AST的影响 （ its, n=12, U/L) 组别 第 28天 ALT 第 35天 ALT 第 28天 AST 第 35天 AST
(g生药 kg)
模型对照组 - 68.76t9.72 65.92±12.18 85.05*18.77 99.16±12.34 拉米夫定对照组 50mg 30.23±6.44** 31.87±6.80** 46.41±8.85** 40.06±6.44** 受试药低剂量组 1.0 48.18±8.27** 46.22±8.90** 58.18±8.27** 58.18±8.27** 受试药中剂量组 2.0 40.19±10.26** 42.31±11.08** 49.22±10.50** 49.19±11.23**
受试药髙剂量组 6.0 35.27 12.55** 34.62±8.23** 45.62±12.72»* 4.67±13.09*» 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01 o
3.1.4对肝脏组织病理学检查的影响
结果见表 4。 正常鸭肝组织细胞结构完整， 呈索状排列， 肝窦清晰， 汇管区清晰。模型组 肝实质细胞见明显变性， 改变和弥漫分布的点状、 灶状坏死。 表现为小叶结构不完整， 肝索 紊乱， 界板参差不齐， 浸润的炎细胞向小叶内延伸， 并可见肝细胞呈灶状坏死、 桥接坏死。 拉米夫定组鸭肝组织结构正常，肝细胞形态正常，肝窦清晰。经组合物 1中、高剂量治疗后，肝 脏病理变化有所减轻，肝小叶结构基本完整， 肝细胞变性改变明显轻于模型组， 仅见点、 灶状 坏死散在分布， 轻度的碎片样坏死仅见于少数肝小叶。
表 4 实施例 1的组合物 1对肝组织病理学的影响 （ its) 点状坏死（+) 点状坏死（-) 灶状坏死（+) 灶状坏死 （-)
(g生药 kg) (只）
模型对照组 - 12 12 0 11 1 拉米夫定对照组 50mg 】2 ] 11 ** 2* 10* 受试药低剂量组 1.0 12 9 3 8 4 受试药中剂量组 2.0 12 6 6 4 8 受试药高剂量组 6.0 12 2* 10* 3*
与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01 o
3.2 实施例 1的组合物 1对免疫功能的影响
结果见表 5、 6、 7。 与空白对照组相比较， 实施例 1的组合物 1中、 髙剂量组脾淋巴细胞转 化率、腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数均有明显升高， 且有统计学意义， 实施例 1的组合 物 1低剂量组也有升高的趋势但无统计学意义， 提示组合物 1有提高小鼠免疫功能的作用。
表 5 实施例 1的组合物 1对小鼠脾淋巴细胞转化率的影响 （ is) 组别 剂量（g生药 kg) 动物数（只） 脾淋巴细胞转化率 空白对照组 0.0 12 0.262±0.058
转移因子对照组 27.3mg 12 0.395±0.087**
受试药低剂量组 2.0 12 0.290±0.080
受试药中剂量组 4.0 12 0.346±0.075*
受试药髙剂量组 12.0 12 0.388±0.060** 与空白对照组相比， * P<0.05，" P<0.01.
表 6实施例 1的组合物 1对旗腔巨噬细胞吞噬功能的影响 C i±s) 剂量（g生药/ kg) 动物数 （只） 吞喷鸡红细胞 吞嚼鸡红细胞 吞噬率 吞魄 ϋ数 空白对照组 0.0 12 31.1±8.6 0.49±0.08 转移因子对照组 27.3mg 12 59.9±9.0** 0.76±0.11 ** 受试药低剂量组 2.0 12 32.5±6.9 0.54±0.16 受试药中剂量组 4.0 12 43.1±9.1* 0.63±0.15* 受试药高剂量组 12.0 12 52.2±10.4** 0.69±0.13** 与空白对照组相比， * P<0.05, ** P<0.01.
表 7 实施例 1的组合物 ί对小鼠抗体生成细胞功能的影响（ ts)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数（只） 溶血空斑数（八 06脾细胞） 空白对照组 0.0 12 142.0±23.2
转移因子对照组 27.3mg 12 178.5±21.8** 受试药低剂量组 2.0 12 150.8±19.0
受试药中剂量组 4.0 12 164.½22.1*
受试药高剂量组 】2.0 12 175.4±24.2** 与空白对照组相比， * Ρ<0.05，** Ρ<0,01.
4.结论：
经动物实验研究表明：实施例 1的组合物 1能抑制病毒性肝炎鸭血清 HBV DNA的复制、 降低血清 HBsAg的滴度， 降低血清中 ALT和 AST的含量， 且对病毒所致的肝细胞损伤有保 护作用， 提示实施例 1的组合物 1对鸭病毒性肝炎有较好的防治作用。 同时实施例 1的组合 物 1能提高小鼠淋巴细胞转化率、 腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数， 提示实施例 1的组 合物 1有较好的升高机体免疫功能的作用。
实施例 52: 实施例 2获得的组合物 2防治乙型病毒性肝炎动物试验报告：
1.实验材料
I.1样品来源： 受试药为实施例 2获得的组合物 2复合粉（西洋参、 灵芝、 发酵虫草菌粉） 由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉干粉相当于总生药材
II.41g, 给药时用 0号胶襄包装。
1.2实验动物： 同实施例 51。
1.3试剂： 同实施例 5】。 1.4仪器： 同实施例 51。
2实验方法
2.1组合物 2抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
2.L1 鸭乙型肝炎病毒性肝损伤动物模型的复制： 同实施例 51。
2.1.2动物分组与给药：将 DHBV感染成功的雏鸭 60 只随机分为 5 组，每组 12 只。模型对照 组、 拉米夫定阳性药对照组、 实施例 1的组合物 2 (下称组合物 2)低、 中、 高剂量组。模型组 喂服淀粉胶 200mg/kg, 拉米夫定组喂服拉米夫定 50mg/kg， 组合物 2低、 中、 高剂量组分别 按 l.Og生药/ kg、 2.0g生药/ kg、 6.0g生药/ kg喂服， 每天给药 1 次， 连续 28天。停药观察 7天。 2.1.3检测指标
2.1.3.1 血清 DHBV DNA滴度： 同实施例 51。
2.1.3.2 血清 DHBsAg值： 同实施例 51。
2.1.3.3 血清 ALT、 AST检测： 同实施例 51。
2.1.3.4 各组肝脏病理（HE染色）检测： 同实施例 51。
2.2 实施例 2获得的组合物 2对免疫功能的影响
2.2.1 动物分组与给药： 小鼠分为 5组， 即空白对照组、 转移因子胶囊阳性对照组、 组合物 2 低、 中、 高剂量组， 各剂量组实验动物数为 12只。 转移因子胶囊组灌胃 27.3mg/kg， 低剂量 组灌胃 2.0g生药/ kg体重；中剂量组灌胃 4.0g生药/ kg体重；高剂量组灌胃 12g生药/ kg体重， 分别相当于人每日摄入量的 5、 10和 30倍。将样品以蒸馏水配制成相应浓度（18.23mg千粉 /mL、 36.46mg干粉 /mL、 109.38mg干粉 /mL) 的灌胃液进行实验， 小鼠灌胃量按 0.1mL/10g 体重计算。 空白对照组给予等体积蒸馏水灌胃。 每日灌胃 1次， 连续 30天。
2.2.2检测指标
2.2.2.1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化： 同实施例 51。
2.2.2.2 脾细胞抗体形成能力： 同实施例 51。
2.2.2.3腹腔巨噬细胞吞噬能力： 同实施例 51。
2.3统计方法：实验数据以 ¾tS表示，采用单因素方差分析， 比较空白对照组、模型对照组、 组合物 2各组之间的差异， P<0.05判断为差异具有显著性。
3结果
3.1 组合物 2抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
3.1.1 对血清 DHBV DNA滴度的影响
结果见表 1。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 2高剂量组于给药后 14天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 2中剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组于给药 28天血清 DHBV DNA滴度明显降低。
3.1.2对血清 DHBsAg 的 OD值改变情况
结果见表 2。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 2高剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 2中剂量组于给药后 28天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组有降低的趋势， 但无显著统计学意义。
表 1 组合物 2对血清 DHBV DNA滴度的影响 （ its, n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 28d 停药 7d
(g生药 kg)
模型对照组 - 1507.3±123.5 1521.3±129.8 1528.7*121.69 1536.7±135.6 1508.6±143.7 1523.9±148.2 拉米夫定对
50mg 1438.2± 129.7 1387.5±134.8** 1288.¾140.2A*»*
ffi 1277.3±150.2"" 1321.1±161.4**: 组 1498.8±122.0
受试药低剂
1.0 1495.6± 122.3 1458.23±121.8 1408.2±131.6» 1398.7±140.2* 1350.7±156.6*** 1360.7±152.2** 量组
受试药中剂
2.0 1497.2± 125.8 1438.4±126.6 1 01.30±136.4* 1372.2±132.5A** 1314.1±154.2"" 1308.4±152.8** 量组
受试药髙剂
6.0 1503.5±120.9 1436.8±137.5 1388.4±138.7*** 1376.7±149.27*** 1290.3±156.1A A** 1300.7±155.0"' 量组
与用药前比较， AP<0.05, "P<0.01 : 与模型对照组比较， *P<0.05， **P<0.01. 组合物 2对血淸 DHBsAg的 OD值改变情况（ its, n=12) 组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 28d 停药 7d
(g生药 kg)
模型对照组 - 0.75±0.21 0.71±0.18 0.77±0.09 0.73±0.15 0.72±0.14 0.74±0.12 拉米夫定对照组 50mg 0.74*0.09 0.6 ±0.17 0.51±0.08" 0.43±0.12"" 0.33±0.1 1 "** 0.34±0.10*4** 受试药低剂量组 1.0 0.75±0.12 0.73±0.12 0.72±0.08 0.70±0.1 1 0.71±0.16 0.65±0.12 受试药中剂量组 2.0 0.77±0.13 0.69±0.10 0.68±0.14 0.62±0.15* 0.56±0.12** 0.50±0.13"** 受试药高剂量组 6.0 0.76±0.12 0.7ftt0.13 0.66±0.12 0.56±0.1 1 *** 0.47±0.13"** 0.34±0.12"** 与用药前比较， AP<0.05, "Ρ<0·01 ; 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01 o
3.1.3对血淸 ALT、 AST的影响
结果见表 3。 模型组血清中 ALT、 AST值明显髙于正常。 拉米夫定组和组合物 2低、 中、 高剂量组均有明显的降低血清 ALT和 AST的作用。
表 3 组合物 2对血清 ALT、 AST的影响 （ ±s, n=12, U/L) 剂量
组别 第 28天 ALT 第 35天 ALT 第 28天 AST 第 35天 AST
(g生药/ kg)
模型对照组 68.76±9.72 65.92±12.18 85.05±18.77 99.16±12.34 拉米夫定对照组 50mg 30.23±6.44** 31.87±6.80** 46.41±8.85** 40.06±6.44** 受试药低剂 *组 1.0 48.18±8,27** 46.22±8.90** 58.18±8.27** 58.18±8.27** 受试药中剂量组 2.0 40.19±10.26** 42.31±11.08** 49.22±10.50** 49.19±11.23** 受试药髙剂量组 6.0 35.27±12.55** 34.62±8.23** 45.62±12.72** 44.67±13.09** 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.0U
3.1.4对肝脏组织病理学检査的影响
结果见表 4。 正常鸭肝组织细胞结构完整， 呈索状排列， 肝窦清晰， 汇管区清晰。模型组 肝实质细胞见明显变性， 改变和弥漫分布的点状、 灶状坏死。 表现为小叶结构不完整， 肝索 紊乱， 界板参差不齐， 浸润的炎细胞向小叶内延伸， 并可见肝细胞呈灶状坏死、 桥接坏死。 拉米夫定组鸭肝组织结构正常，肝细胞形态正常，肝窦清晰。 经本发明组合物 2中、 髙剂量治 疗后，肝脏病理变化有所减轻，肝小叶结构基本完整， 肝细胞变性改变明显轻于模型组， 仅见 点、 灶状坏死散在分布， 轻度的碎片样坏死仅见于少数肝小叶。
表 4 组合物 2对肝组织病理学的影响 （ Lts) 剂量 动物数
组别 点状坏死 （+) 点状坏死 (-) 灶状坏死 (+) 灶状坏死 (-)
(g生药 kg) (只）
模型对照组 - 12 12 0 11 1 拉米夫定对照组 50mg 12 1 ** 11 ** 2* 10* 受试药低剂量组 1.0 12 9 3 8 4 受试药中剂量组 2.0 12 5 7 5 7 受试药高剂量组 6.0 12 2* 10* 3* 9* 与模型对照组比较， *P<0.05， **P<0.01。
3.2 组合物 2对免疫功能的影响
结果见表 5、 6、 7。 与空白对照组相比较， 组合物 2中、 高剂量组脾淋巴细胞转化率、 腹 腔巨噬细胞吞噬功能、溶血空斑数均有明显升高， 且有统计学意义， 组合物 2低剂量组也有升 髙的趋势但无统计学意义， 提示组合物 2有提高小鼠免疫功能的作用。
表 5 组合物 2对小鼠脾淋巴细胞转化率的影响 （ i±s)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数（只） 脾淋巴细胞转化率 空白对照组 0.0 12 0.253±0.054
转移因子对照组 27.3rag 12 0.386±0.082**
受试药低剂量组 2.0 12 0.294±0.074
受试药中剂量组 4.0 12 0.358±0.070*
受试药髙剂量组 12.0 12 0.382±0.066** 与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01.
表 6 组合物 2对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 （ i±s)
组别 剂量（g生药/ kg) 动物数（只） 吞噬鸡红细胞 吞噬鸡红细胞
吞噬率(％) 吞噬指数 空白对照组 0.0 12 32.81±7.9 0.47±0.09 转移因子对照组 27.3mg 12 58.3±9.2** 0.78±0.12** 受试药低剂量组 2.0 12 36.3±6.8 0.53±0.14 受试药中剂量组 4.0 12 45.4±10.6* 0.62±0.11* 受试药髙剂量组 12.0 12 53.8±9.7** 0.68±0.12** 与空白对照组相比， * P<0,05， ** P<0.01 o
表 7 组合物 2对小鼠抗体生成细胞功能的影响 （ i±s)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数（只） 溶血空斑数（AO6脾细胞） 空白对照组 0.0 12 140.7±20.6
转移因子对照组 27.3mg 12 176.1±21.2** 受试药低剂量组 2.0 12 151.6±19.5
受试药中剂量组 4.0 12 162.3±20.6*
受试药髙剂量组 12.0 12 173.01:22.4** 与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01.
4. 结论：
经动物实验研究表明： 组合物 2能抑制病毒性肝炎鸭血清 HBV DNA的复制、 降低血清
HBsAg的滴度， 降低血清中 ALT和 AST的含量， 且对病毒所致的肝细胞损伤有保护作用， 提示组合物 2对鸭病毒性肝炎有较好的防治作用。同时组合物 2能提高小鼠淋巴细胞转化率、 腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数， 提示组合物 2有较好的升髙机体免疫功能的作用。
实施例 53： 实施例 3获得的组合物 3防治乙型病毒性肝炎动物试验报告：
1.实验材料
1.1样品来源： 受试药为实施例 3获得的组合物 3复合粉 （西洋参、 灵芝、 发酵虫草菌粉、 冬虫夏草） 由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉干粉相当于总 生药材 12.39g, 给药时用 0号胶囊包装。 对照药为实施例 1的组合物 1复合粉（西洋参、 灵 芝、 冬虫夏草） 由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉干粉相当 于总生药材 10.97g
1.2实验动物： 同实施例 51。 1.3试剂： 同实施例 51。
1.4仪器： 同实施例 51。
2实验方法
2.1 组合物 3抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒性肝损伤动物模型的复制： 同实施例 1。
2.1.2动物分组与给药： 将 DHBV感染成功的雏鸭 72只随机分为 6组，每组 12 只。 模型对照 组、 拉米夫定阳性药对照组、 组合物 1对照组、 实施例 3的组合物 3 (下称组合物 3 )低、 中、 高剂量组。 模型组喂服淀粉胶囊 200mg/kg， 拉米夫定组喂服拉米夫定 50mg/kg， 组合物 1对照 组喂服 2.0g生药/ kg组合物 1， 组合物 3低、 中、 高剂量组分别按 l.Og生药 kg、 2.0g生药/ kg、 6.0g生药 kg喂服， 每天给药 1 次， 连续 28天。 停药观察 7天。
2.1.3 检测指标
2.1.3.1 血清 DHBV DNA滴度： 同实施例 51。
2.1.3.2 血清 DHBsAg值： 同实施例 51。
2.1.3.3 血清 ALT、 AST检测： 同实施例 51。
2.1.3.4 各组肝脏病理 ( HE染色）检测： 同实施例 51。
2.2组合物 3对免疫功能的影响
2.2.1 动物分组与给药： 小鼠分为 6组， 即空白对照组、转移因子胶囊阳性对照组、 组合物 1 对照组、 组合物 3低、 中、 高剂量组， 各剂量组实验动物数为 12只。 转移因子胶囊组灌胃 273mgA g, 低剂量组灌胃 2.0g生药/ kg体重； 中剂量组灌胃 4.0g生药 kg体重； 髙剂量组灌 胃 12g生药/ kg体重， 分别相当于人每日摄入量的 5、 10和 30倍。 将样品以蒸馏水配制成相 应浓度（16.14mg干粉 /mL、 32.28mg干粉 /mL、 96.84mg千粉 /mL)的灌胃液进行实验， 小鼠 灌胃量按 O.lmL/lOg体重计算。 空白对照组给予等体积蒸馏水灌胃。 每日灌胃 1次， 连续 30 天。 组合物 1对照组小鼠给予中剂量 4.0g生药/ kg体重 （相当于人每日摄入量的 10倍）， 将 样品以蒸馏水配制成 36.46mg干粉 /mL灌胃液进行实验， 灌胃量按 0.1mL/10g体重计算。 2.2.2检测指标
2.2.2.1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化： 同实施例 51
2.2.2.2 脾细胞抗体形成能力： 同实施例 51。
2.2.2.3腹腔巨噬细胞吞噬能力： 同实施例 51。
2.3统计方法：实验数据以 ¾tS表示，采用单因素方差分析， 比较空白对照组、模型对照组、 组合物 3各组之间的差异， P<0.05判断为差异具有显著性。
3结果 3.1 实施例 3获得的组合物 3抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
3.1.1 对血清 DHBV DNA滴度的影响
结果见表 1。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 3高剂量组于给药后 14天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 3中剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低剂 量组于给药 28天血清 DHBV DNA滴度明显降低。 提示组合物 3有抑制 DHBV DNA复制的作 用， 其作用强度与组合物 1相似。
3.1.2对血清 DHBsAg 的 OD值改变情况
结果见表 2。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 3高剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 3中剂量组于给药后 28天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组有降低的趋势， 但无显著统计学意义。 提示组合物 3有降低 DHBsAg滴度的作用， 其作 用强度与组合物 1相似。
表 1 组合物 3对血清 DHBV DNA滴度的影响 （ its, n=12) 剂量
组别 (g生药 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 28d 停药 7d kg)
模型对照组 1507.3±123.5 1521.3±129.8 1528.7±121.69 1536.7±135.6 1508.6±143.7 1523.9± 148.2 拉米夫定对
50mg 1498.8±122.0 1438.2±129.7 1387.5±134.8** 1288.¾=140.2"" 1277.3±150.2"" 1321.1±161.4** 照组
组合物 1对
2.0 1489.6*123.5 1438.4±126,6 1401.30±136.4* 1372.2±132.5A** 1314.1±154.2"** 1308.4±152.8** 照组
受试药低剂
1.0 1498.7±132.6 1466.2±120.5 1412.6±11 1.8* 1395.2±141.7* 1366.3±150.2*** 1368.5±150.3**! 量组
受试药中剂
2.0 1502.6±120.2 1442.7±136,0 1406.5±130.8* 1382.3±131.9A** 1339.7±156.2**** 1334.2±146.5** 量组
受试药高剂
6.0 1506.1±129.4 1435.6±131.9 1384.2±132.3"* 1372.4±140.5*»* 129 .0±|39.7"" 1322,1±158,1"' 量组
与用药前比较， AP<0.05, A AP<0.01 ; 与模型对照组比较， *P<0.05, »*P<0.01 o
表 2 组合物 3对血淸 DHBsAg的 OD值改变情况（ its, n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 28d 停药 7d
(g生药/ kg)
模型对照组 - 0.75±0.21 0.71±0.18 0.77±0.09 0.73±0.15 0.72±0.14 0.74±0.12 拉米夫定对照组 50mg 0.74±0.09 0.6 ±0.17 0.51±0.<58A* 0.43±0.12"** 0.33±0.11"** 0.34±0.10"** 组合物 1对照组 2.0 0.72±0.11 0.68±0.12 0.66±0.13 0.61±0.13* 0.54±0.14** 0.51±0.14**** 受试药低剂量组 1.0 0.73±0.18 0.70±0.13 0.70±0.09 0.68±0.12 0.66±0.17 0.68±0.14 受试药中剂量组 2.0 0.75±0.12 0.68±0Λ4 0.67±0.15 0.63±0.12* 0·55±0,15Α* 0.52±0.16"** 受试药髙剂量组 6.0 0.74±0.16 0.71±0.12 0.65±0.13 0.57±0.13*** 0.4 ±0.16"** 0.38±0.14"** 与用药前比较， *P<0.05， ▲▲Ρ<0.01 ; 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01
3.1.3对血清 ALT、 AST的影响
结果见表 3。 模型组血清中 ALT、 AST值明显高于正常。 拉米夫定组和组合物 3低、 中、 高剂量组均有明显的降低血清 ALT和 AST的作用。 提示组合物 3有降低 ALT、 AST的作用， 其 作用强度与组合物 1相似。
表 3 组合物 3对血清 ALT、 AST的影响 （ ts, n=12, U L) 剂量
组别 第 28天 ALT 第 35天 ALT 第 28天 AST 第 35天 AST
(g生药/ kg)
模型对照组 - 68.76±9.72 65.92±12.18 85.05±18.77 99.16±12.34 拉米夫定对照组 50mg 30.23±6. 4** 31.»"7±6.80** 46.4\±¾.85** 40.06±6 ** 组合物 1对照组 2.0 40.19±10.26** 42.31±11.08** 49.22±10.50** 49.19±11.23** 受试药低剂量组 1.0 50.15±8.23** 48.21±9.16** 52.45±8.76** 54.21±9.32** 受试药中剂量组 2.0 44.38±10.55** 43-68±11.09** 45.16±11.08** 45.40±13.76** 受试药高剂量组 6.0 36.67±12.79** 35.25±8.99** 44.26±12.76** 43.82±11.23** 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.0U
3.1.4对肝脏组织病理学检査的影响
结果见表 4。 正常鸭肝组织细胞结构完整， 呈索状排列， 肝窦清晰， 汇管区清晰。模型组 肝实质细胞见明显变性， 改变和弥漫分布的点状、 灶状坏死。 表现为小叶结构不完整， 肝索 紊乱， 界板参差不齐， 浸润的炎细胞向小叶内延伸， 并可见肝细胞呈灶状坏死、 桥接坏死。 拉米夫定组鸭肝组织结构正常，肝细胞形态正常，肝窦清晰。 经本发明组合物 3中、 高剂量治 疗后，肝脏病理变化有所减轻，肝小叶结构基本完整， 肝细胞变性改变明显轻于模型组， 仅见 点、灶状坏死散在分布， 轻度的碎片样坏死仅见于少数肝小叶。提示组合物 3有减轻病毒感染 所致肝损伤病理的作用， 其作用强度与组合物 1相似。
表 4 组合物 3对肝组织病理学的影响 （ ±s) 剂量 动物数
组别 点状坏死（+) 点状坏死 C-) 灶状坏死（+) 灶状坏死（-)
(g生药/ kg) (只）
模型对照组 - 12 12 0 11 1 拉米夫定对照组 50mg 12 1 ** 11** 2* 10* 组合物 1对照组 2.0 12 6 6 4 8 受试药低剂量组 1.0 12 8 4 5 7 受试药中剂量组 2.0 12 6 6 5 7 受试药髙剂量组 6.0 12 3* 9* 2* 10* 与模型对照组比较， *P<0.05， **P<0.01。
3,2组合物 3对免疫功能的影响
结果见表 5、 6、 7。 与空白对照组相比较， 组合物 3中、 高剂量组及组合物 1对照组脾淋巴 细胞转化率、腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数均有明显升高， 且有统计学意义， 组合物 3 低剂量组也有升高的趋势但无统计学意义，提示组合物 3有提高小鼠免疫功能的作用，其对免 疫功能的提髙作用与组合物 1相似。
表 5 组合物 3对小鼠脾淋巴细胞转化率的影响 （ Lte)
组别 剂量 （g生药 kg) 动物数 （只） 脾淋巴细胞转化率 空白对照组 0.0 12 0.253±0.054
转移因子对照组 27.3mg 12 0.386±0.082**
组合物 1对照组 4.0 12 0.346±0.075*
受试药低剂量组 2.0 12 0.288±0.078
受试药中剂量组 4.0 12 0.357±0.071 *
受试药高剂量组 12.0 12 0.386士 0.069** 与空白对照组相比， * P<0,05，** P<0.01.
组合物 3对腹腔巨咮细胞吞噬功能的影响 （ i±s)
组别 剂量 （g生药/ kg) 动物数（只） 吞噬鸡红细胞 吞噬鸡红细胞
吞噬率 (％ ) 吞噬指数 空白对照组 0.0 12 32.81 ±7.9 0.47^0.09 转移因子对照组 27.3mg 12 58.3±9.2** 0.78±0.12** 组合物 1对照组 4.0 12 43.1±9.1 * 0.63±0.15* 受试药低剂量组 2.0 12 36.3±6.8 0.55±0.16 受试药中剂量组 4.0 12 45.4±10.6* 0.65±0.12* 受试药髙剂量组 12.0 12 53.8±9.7** 0.72±0.10**
与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01。 表 7组合物 3对小鼠抗体生成细胞功能的影响 （ its)
组别 剂量（g生药/ kg) 动物数（只） 溶血空斑数（/106脾细胞） 空白对照组 0.0 12 140.7±20.6
转移因子对照组 27.3mg 12 176.1±21.2** 组合物 1对照组 4.0 12 164. ±22.1*
受试药低剂量组 2.0 12 152.8±18.4
受试药中剂量组 4.0 12 163.5±21.5*
受试药高剂量组 12.0 12 174.8±23.8** 与空白对照组相比， * P<0.05, ** PO.01.
4. 结论：
经动物实验研究表明： 组合物 3能抑制病毒性肝炎鸭血清 HBV DNA的复制、 降低血清 HBsAg的滴度， 降低血清中 ALT和 AST的含量， 且对病毒所致的肝细胞损伤有保护作用， 提示组合物 3对鸭病毒性肝炎有较好的防治作用。同时组合物 3能提髙小鼠淋巴细胞转化率、 腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数， 提示组合物 3有较好的升高机体免疫功能的作用。 其 作用强度与组合物 1相似。
实施例 54: 实施例 4获得的组合物 4防治乙型病毒性肝炎动物试验报告：
1.实验材料
1.1样品来源： 受试药为实施例 4的组合物 4复合粉（西洋参、 灵芝、 冬虫夏草、 玫瑰花） 由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg 复合粉干粉相当于总生药材
12.19g, 给药时，用 0 号胶囊包装。
1.2实验动物： 同实施例 51。
1.3试剂： 同实施例 51。
1.4仪器： 同实施例 51。
2实验方法
2.1 组合物 4抗鸭乙型肝炎的药效学实验研究
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒性肝损伤动物模型的复制： 同实施例 51。
2.1.2动物分组与给药：将 DHBV感染成功的雏鸭 60只随机分为 5组，每组 12只。模型对照 组、拉米夫定阳性药对照组、 实施例 4的组合物 4 (下称组合物 4)低、 中、 高剂量组。模型组 喂服淀粉胶囊 200mg/kg， 拉米夫定组喂服拉米夫定 50mg/kg， 组合物 4低、 中、 高剂量组分别 按 l.Og生药/ kg、 2.0g生药 kg、 6.0g生药/ kg喂服， 每天给药 1 次， 连续 28天。停药观察 7天。
2.1.3 检测指标
2.1.3.1 血清 DHBV DNA滴度： 同实施例 51。
2.1.3.2 血清 DHBsAg值： 同实施例 51。
2.1.3.3 血清 ALT、 AST检测： 同实施例 51。
2.1.3.4 各组肝脏病理（HE染色）检测： 同实施例 51。
2.2 组合物 4对免疫功能的影响
2.2.1 动物分组与给药： 小鼠分为 5组， 即空白对照组、 转移因子胶囊阳性对照组、 组合物 1 低、 中、 高剂量组， 各剂量组实验动物数为 12只。 转移因子胶囊组灌胃 27.3mg kg, 低剂量 组灌胃 2.0g生药 /kg体重；中剂量组灌胃 4.0g生药/ kg体重；高剂量组灌胃 12g生药/ kg体重， 分别相当于人每日摄入量的 5、 10和 30倍。 将样品以蒸馏水配制成相应浓度（16.41mg干粉 /mL、 32.81mg干粉 /mL、 98.438mg干粉 /mL) 的灌胃液进行实验， 小鼠灌胃量按 O.lmUlOg 体重计算。 空白对照组给予等体积蒸馆水灌胃。 每日灌胃 1次， 连续 30天。
2.2.2检测指标
2.2.2.1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化： 同实施例 51。
2.2.2.2 脾细胞抗体形成能力： 同实施例 51。
2.2.2.3腹腔巨噬细胞吞噬能力： 同实施例 51。
2.3统计方法：实验数据以 ¾tS表示，采用单因素方差分析，比较空白对照组、模型对照组、 组合物 4各组之间的差异， PO.05判断为差异具有显著性。
3结果
3.1 组合物 4抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
3.1.1 对血清 DHBV DNA滴度的影响
结果见表 1。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 4高剂量组于给药后 14天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 4中剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低剂 量组于给药 28天血清 DHBV DNA滴度明显降低。
3.1.2对血清 DHBsAg的 OD值改变情况
结果见表 2。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 4髙剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 4中剂量组于给药后 28天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组有降低的趋势， 但无显著统计学意义。 表 1 组合物 4对血清 DHBV DNA滴度的影响 （ x±s, n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 28d 停药 7d
(g生药/ kg)
模型对照组 - 1507.3±123.5 1521.3±129.8 152S.7±121.69 1536.7±135.6 1508.6±143.7 1523.fttl48.2 拉米夫定对
50mg 1277.3±I50.2"** 132J.1±161.4A*: 照组 1498.8±122.0 1438.2±129.7 1387.5±134.8A* 1288.9±140.2A A**
受试药低剂
1.0 1496.2±135.1 1464.5±121.3 1414.6±118.9* 1406.8± 129.6* 1355.2±152.4A** 1360.5±146.5k* 量组
受试药中剂
2.0 1497.8±120.2 1447.24±125.8 H07.2±136.5* 1373.7±130.6 * 1318.7±126.7**** 1320.3±151.2k*! 量组
受试药高剂
6.0 1501.6±117.9 1444.6± 119.6 1376.7±126.7A** 1364.5±142.34** 1284,2*132.2"** 1302.6±135.6"' 量组
与用药前比较， AP<0.05, "PO.01 ; 与模型对照组比较， *P<0.05， **P<0.01 o 表 2 组合物 4对血清 DHBsAg的 OD值改变情况（ n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 2ld 用药 28d 停药 7d
( 生药 kg)
模型对照组 - 0.75±0.21 0.71±0.18 0.77±0.09 0.73±0.15 0.72*0.14 0.74±0.12 拉米夫定对照组 50mg 0.74±0.09 0.64±0.17 0.51±0-08" 0.43±0.12"** 0.33±0.11 iA** 0.34±0.10"** 受试药低剂量组 1.0 0.76±0.12 0.72±0.15 0.70±0.11 0.67±0.14 0.66±0.15 0.65±0.16 受试药中剂量组 2.0 0.74±0.17 0.66±0.10 0.65±0.15 0.62±0.12* 0.55±0.16" 0.52±0.15**** 受试药高剂量组 6.0 0.74±0.15 0.66±0.13 0.62*0.16 0.57±0.08*** 0.48±0.10"，* 0.42±0.11AA**
与用药前比较， AP<0.05, Α ΑΡ<0.01 ; 与模型对照组比较， *Ρ<0.05, **Ρ<0.01。
3.1.3对血清 ALT、 AST的影响
结果见表 3。 模型组血清中 ALT、 AST值明显高于正常。 拉米夫定组和组合物 4低、 中、 高剂量组均有明显的降低血清 ALT和 AST的作用。
表 3 组合物 4对血清 ALT、 AST的影响 （ its, n=12, U/L) 剂量
组别 第 28天 ALT 笫 35天 ALT 第 28天 AST 第 35天 AST
(g生药 kg)
模型对照组 - 68.76±9.72 65.92±12.18 85.05±18.77 99.16±12.34 拉米夫定对照组 50mg 30.23±6.44** 31.87±6.80** 46.41±8.85** 40.06±6.44** 受试药低剂量组 1.0 44.25±9.24** 42.67±7.20** 54.34±8.29** 54,90±9.22** 受试药中剂量组 2.0 36.72±6.56** 38.49±8.23** 45.92±7.42** 45.2W8.16** 受试药高剂量组 6.0 31.88±7.825** 30.14±9.04** 42.16±9.10** 40.38±7.28** 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01 o
3.1. 对肝脏组织病理学检査的影响
结果见表 4。 正常鸭肝组织细胞结构完整， 呈索状排列， 肝窦清晰， 汇管区清晰。模型组 肝实质细胞见明显变性， 改变和弥漫分布的点状、 灶状坏死。 表现为小叶结构不完整， 肝索 紊乱， 界板参差不齐， 浸润的炎细胞向小叶内延伸， 并可见肝细胞呈灶状坏死、 桥接坏死。 拉米夫定组鸭肝组织结构正常，肝细胞形态正常，肝窦清晰。 经本发明组合物 4中、 髙剂量治 疗后，肝脏病理变化有所减轻,肝小叶结构基本完整， 肝细胞变性改变明显轻于模型组， 仅见 点、 灶状坏死散在分布， 轻度的碎片样坏死仅见于少数肝小叶。
表 4 组合物 4对肝组织病理学的影响 （ its) 剂量 动物数
组别 点状坏死（+) 点状坏死 (-) 灶状坏死（+) 灶状坏死 C-)
(g生药 kg) (只）
模型对照组 - 12 12 0 11 1 拉米夫定对照组 50mg 12 \** 11** 2* 10* 受试药低剂量组 1.0 12 8 4 9 3 受试药中剂量组 2.0 12 7 5 7 5 受试药髙剂量组 6.0 12 3* 9* 1** 11** 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01。
3.2 组合物 4对免疫功能的影响
结果见表 5、 6、 7。 与空白对照组相比较， 组合物 4中、 高剂量组脾淋巴细胞转化率、 腹 腔巨噬细胞吞噬功能、溶血空斑数均有明显升高， 且有统计学意义， 组合物 4低剂量组也有升 高的趋势但无统计学意义， 提示组合物 4有提高小鼠免疫功能的作用。
表 5 组合物 4对小鼠脾淋巴细胞转化率的影响 （ i±s)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数 （只） 脾淋巴细胞转化率 空白对照组 0.0 12 0.262±0.058
转移因子对照组 27.3mg 12 0.395±0.087**
受试药低剂量组 2.0 12 0.296±0.064
受试药中剂量组 4.0 12 0.358±0.059*
受试药高剂量组 12.0 12 0.392±0.067** 与空白对照组相比， * P<0.05, ** P<0.01.
表 6 组合物 4对腹腔巨 ¾细胞吞噬功能的影响 （ its)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数（只） 吞噬鸡红细胞 吞噬鸡红细胞
吞噬率 (％) 吞噬指数 空白对照组 0.0 12 31.1±8.6 0.49±0.08 转移因子对照组 27.3mg 12 59.9±9.0** 0.76±0.11 ** 受试药低剂量组 2.0 12 35.7±6.8 0.58±0.12 受试药中剂量组 4.0 12 45.3±9.0* 0.64±0.16* 受试药高剂量组 12.0 12 53.4±10.8** 0.72±0.15**
与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01 < 表 7组合物 4对小鼠抗体生成细胞功能的影响 （ ¾3)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数 （只） 溶血空斑数（/106脾细胞） 空白对照组 0.0 12 142.0±23.2
转移因子对照组 27.3mg 12 178.5±21.8** 受试药低剂量组 2.0 12 152.6±15.8
受试药中剂量组 4.0 12 166.1±19.2*
受试药髙剂量组 12.0 12 172.3±21.3** 与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01.
4. 结论：
经动物实验研究表明： 组合物 4能抑制病毒性肝炎鸭血清 HBV DNA的复制、 降低血清 HBsAg的滴度， 降低血清中 ALT和 AST的含量， 且对病毒所致的肝细胞损伤有保护作用， 提示组合物 4对鸭病毒性肝炎有较好的防治作用。同时组合物 4能提髙小鼠淋巴细胞转化率、 腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数， 提示组合物 4有较好的升髙机体免疫功能的作用。 实施例 55： 实施例 5获得的组合物 5防治乙型病毒性肝炎动物试验报告：
1.实验材料
1.1样品来源： 受试药为实施例 5的组合物 5复合粉（西洋参、 灵芝、 发酵虫草菌粉、 玫瑰 花）由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉干粉相当于总生药材 12.56g, 给药时用 0号胶囊包装。
1.2实验动物： 同实施例 551。
1.4仪器： 同实施例 1。
2实验方法
2.1 实施例 5的组合物 5抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒性肝损伤动物模型的复制： 同实施例 51。
2.1.2动物分组与给药： 同实施例 51。
2.1.3检测指标
2.1.3.1 血清 DHBV DNA滴度： 同实施例 51。
2.1.3.2 血清 DHBsAg值： 同实施例 51。
2.1.3.3 血清 ALT、 AST检测： 同实施例 51。
2.1.3.4 各组肝脏病理 ( HE染色）检测： 同实施例 51。 2.2 组合物 5对免疫功能的影响
2.2.1 动物分组与给药： 小鼠分为 5组， 即空白对照组、 转移因子胶襄阳性对照组、 实施例 5 的组合物 5 (下称组合物 5)低、 中、 高剂量组， 各剂量组实验动物数为 12只。 转移因子胶 囊组灌胃 27.3mg kg， 低剂量组灌胃 2.0g生药/ kg体重； 中剂量组灌胃 4.0g生药/ kg体重： 高 剂量组灌胃 12g生药/ kg体重， 分别相当于人每日摄入量的 5、 10和 30倍。 将样品以蒸馏水 配制成相应浓度（15.92mg干粉 /mL、 31.85mg干粉 /mL、 95.55mg干粉 /mL)的灌胃液进行实 验， 小鼠灌胃量按 0.1mL/10g体重计算。空白对照组给予等体积蒸馏水灌胃。每日灌胃 1次， 连续 30天。
2.2.2检测指标
2.2.2.1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化： 同实施例 51。
2.2.2.2 脾细胞抗体形成能力： 同实施例 51。
2.2.2.3腹腔巨噬细胞吞噬能力： 同实施例 51。
2.3统计方法：实验数据以 ¾hS表示，采用单因素方差分析， 比较空白对照组、模型对照组、 组合物 5各组之间的差异， P<0.05判断为差异具有显著性。
3结果
3.1 组合物 S抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
3.1.1 对血清 DHBV DNA滴度的影响
结果见表 1。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 I4d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 5髙剂量组于给药后 14天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 5中剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低剂 量组于给药 28天血清 DHBV DNA滴度明显降低。
3.1.2对血清 DHBsAg的 OD值改变情况
结果见表 2。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 5髙剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 5中剂量组于给药后 28天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组有降低的趋势， 但无显著统计学意义。
表 1 组合物 5对血清 DHBV DNA滴度的影响 （ ^fcs, n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 28d 停药 7d
(g生药kg)
模型对照组 - 1507.3±123.5 1521.3±129.8 1528.7±121.69 1536.7±135.6 1508.6±143.7 1523.9±148.2 拉米夫定对
50mg .9±140.2"** 1277.3±150.2"** 1321.1±161.4" 照组 1498.8±122.0 1438.2±129.7* 1387.5±134.8A* 1288
受试药低剂
1.0 1506.2± 128.8 1466.7± 132.2 1418.5±117.6* 13 9.6±141.6* 1361.6±150.8"** 1370.2±119.6A* 量组
受试药中剂
2.0 1504.6±120.4 1444.6± 139.6 1409.7±133.2* 1380.6±115.8A** 1321.8±152.3**** 1319.7±129.7**: 量组
受试药离剂
6.0 1499.6±125.4 1431.2±126.8 1382.7±H0.2A** 1378.2±151.0*** 1298.7±148.9"" 1304.3±145.8", 量组
与用药前比较， AP<0.05, A AP<0.01 : 与模型对照组比较， *P<0.05 **P<0.01 表 2 组合物 5对血清 DHBsAg的 OD值改变情况（ i±s, n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 I d 用药 2Id 用药 28d 停药 7d
(g生药 kg)
模型对照组 - 0.75±0.21 0.71±0.18 0.77±0.09 0.73±0.15 0.72±0.14 0.74±0.12 拉米夫定对照组 50mg 0.74±0.0 0.64±0.17 0.51 0.08" 0.43±0.12"** ο.33±αι ι"»· 0.34±0.10"" 受试药低剂量组 1.0 0.78±0.14 0.77 0.13 0.72±0.09 0.6¾=0.16 0.68±0.17 0.69±0.16 受试药中剂量组 2.0 0.75±0.18 0.72±0.14 0.69±0.16 0.64±0.12* 0.58±0.13** 0.52±0.14 受试药 «剂量组 6.0 0.75±0.10 0.69±0.15 0.68±0.14 0.58±0.12A** 0.46±0.18""
与用药前比较， *P<0.05, "PO.01 ; 与模型对照组比较， 叩 0.05 **P<0.01 3.1.3对血清 ALT AST的影响
结果见表 3。 模型组血清中 ALT AST值明显高于正常。 拉米夫定组和组合物 5低、 中、 高剂量组均有明显的降低血清 ALT和 AST的作用。
表 3 组合物 5对血清 ALT AST的影响 （ i±s n=12, U L) 剂量
组别 第 28天 ALT 第 35天 ALT 第 28天 AST 第 35天 AST
(g生药 kg)
模型对照组 - 68.76±9.72 65,92±12.18 85.05±18.77 99.16± 12.34 拉米夫定对照组 50mg 30.23±6.4 ** 31.87±6.80** 46.41±8.85** 40.06±6.44** 受试药低剂量组 1.0 46.36±7.66** 44.52±9.56** 56.90±10.02** 55.52±9.21 ** 受试药中剂量组 2.0 38.45±9.38** 40.93±7.93** 47.86±9.46** 46.17± 10.26** 受试药商剂量组 6.0 33.68±6.29** 32.87 10.22" 43.35±8.98" 42.80±8.97** 模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01 o
3.1.4对肝脏组织病理学检查的影响
结果见表 4。 正常鸭肝组织细胞结构完整， 呈索状排列， 肝窦清晰， 汇管区清晰。模型组 肝实质细胞见明显变性， 改变和弥漫分布的点状、 灶状坏死。 表现为小叶结构不完整， 肝索 紊乱， 界板参差不齐， 浸润的炎细胞向小叶内延伸， 并可见肝细胞呈灶状坏死、 桥接坏死。 拉米夫定组鸭肝组织结构正常，肝细胞形态正常，肝窦清晰。经组合物 5中、高剂量治疗后，肝 脏病理变化有所减轻，肝小叶结构基本完整， 肝细胞变性改变明显轻于模型组， 仅见点、 灶状 坏死散在分布， 轻度的碎片样坏死仅见于少数肝小叶。
表 4 组合物 5对肝组织病理学的影响 （ i±s) 剂量 动物数
组别 点状坏死 （+) 点状坏死 （-) 灶状坏死 （+) 灶状坏死
(g生药/ kg) (只）
模型对照组 - 12 12 0 11 1 拉米夫定对照组 50mg 12 1 ** 11** 2* 10* 受试药低剂量组 1.0 12 8 4 7 5 受试药中剂量组 2.0 12 5 7 5 7 受试药髙剂量组 6.0 12 1 ** 11 2* 10* 与模型对照组比较， *P<0.05， **p<o .
3.2 组合物 5对免疫功能的影响
结果见表 5、 6、 7。 与空白对照组相比较， 组合物 5中、 髙剂量组脾淋巴细胞转化率、 腹 腔巨噬细胞吞噬功能、溶血空斑数均有明显升高， 且有统计学意义， 组合物 5低剂量组也有升 髙的趋势但无统计学意义， 提示组合物 5有提高小鼠免疫功能的作用。
表 5 组合物 5对小鼠脾淋巴细胞转化率的影响 ( Its)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数（只） 脾淋巴细胞转化率 空白对照组 0.0 12 0.253±0.054 转移因子对照组 27.3mg 12 0.386±0.082** 受试药低剂量组 2.0 12 0.298±0.076
受试药中剂量组 4.0 12 0.362±0.077* 受试药髙剂量组 12.0 12 0.388±0.080** 与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01.
组合物 5对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 （ i±s)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数 （只） 吞噬鸡红细胞 吞噬鸡红细胞 吞噬率(％) 吞噬指数 空白对照组 0.0 12 32.81±7.9 0.47±0.09 转移因子对照组 27.3mg 12 58.3±9.2** 0.78±0.12** 受试药低剂量组 2.0 12 35.2±7.6 0.50±0.16 受试药中剂量组 4.0 12 44.6±9.3* 0.60±0.14* 受试药髙剂量组 12.0 12 52.7±10.2** 0.67±0.10** 与空白对照组相比， * P<0.05, ** PO.01。 组合物 5对小鼠抗体生成细胞功能的影响 （ ts)
组别 剂量（g生药 kg) 动物数 （只） 溶血空斑数（/106脾细胞） 空白对照组 0.0 12 140.7±20.6
转移因子对照组 27.3mg 12 176.1±21.2** 受试药低剂量组 2.0 12 153.0±21.6
受试药中剂量组 4.0 12 161.7±22.3*
受试药髙剂量组 12.0 12 175.6±22.8** 与空白对照组相比， * P<0.05，** PO.01.
4. 结论：
经动物实验研究表明： 组合物 5能抑制病毒性肝炎鸭血清 HBV DNA的复制、 降低血清 HBsAg的滴度， 降低血清中 ALT和 AST的含量， 且对病毒所致的肝细胞损伤有保护作用， 提示组合物 5对鸭病毒性肝炎有较好的防治作用。同时组合物 5能提高小鼠淋巴细胞转化率、 腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数， 提示组合物 5有较好的升高机体免疫功能的作用。 实施例 56: 实施例 6获得的组合物 6防治乙型病毒性肝炎动物试验报告：
1.实验材料
1.1样品来源： 受试药为组合物 6复合粉（西洋参、 灵芝、 发酵虫草菌粉、 冬虫夏草、 玫瑰 花） 由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉千粉相当于总生药材 13.78g, 给药时用 0号胶囊包装。 对照药为组合物 4复合粉（西洋参、 灵芝、 冬虫夏草、 玫 瑰花）由江中药业股份有限公司提供， 样品为棕色固体粉末状， lg复合粉干粉相当于总生药 材 12.19g。
1.2实验动物： 同实施例 51。
1.3试剂： 同实施例 51。
1. 仪器： 同实施例 51。
2实验方法
2.1 组合物 6抗鸭乙型肝炎的药效学实验研究
2.1.1 鸭乙型肝炎病毒性肝损伤动物模型的复制： 同实施例 1。
2.1.2动物分组与给药： 将 DHBV感染成功的雏鸭 72只随机分为 6组，每组 12 只。 模型对照 组、 拉米夫定阳性药对照组、 组合物 4对照组、 实施例 6的组合物 6 (下称组合物 6)低、 中、 高剂量组。 模型组喂服淀粉胶嚢 200mg/kg， 拉米夫定组喂服拉米夫定 50mg/kg, 组合物 4对照 组喂服 2.0g生药/ kg组合物 4, 组合物 6低、 中、 髙剂量组分别按 l.Og生药/ kg、 2.0g生药/ kg、 6.0g生药/ kg喂服， 每天给药 1 次， 连续 28天。 停药观察 7天。 2.1.3检测指标
2.1.3.1 血清 DHBV DNA滴度： 同实施例 51。
2.1.3.2 血清 DHBsAg值： 同实施例 51。
2.1.3.3 血清 ALT、 AST检测： 同实施例 51。
2.1.3.4 各组肝脏病理 ( HE染色）检测： 同实施例 51。
2.2 组合物 6对免疫功能的影响
2.2.1 动物分组与给药： 小鼠分为 6组， 即空白对照组、 转移因子胶襄阳性对照组、 组合物 4 对照组、 组合物 6低、 中、 高剂量组， 各剂量组实验动物数为 12只。 转移因子胶囊组灌胃 27.3mg/kg, 低剂量组灌胃 2.0g生药 kg体重； 中剂量组灌胃 4.0g生药/ kg体重； 高剂量组灌 冑 12g生药/ kg体重， 分别相当于人每日摄入量的 5、 10和 30倍。 将样品以蒸馏水配制成相 应浓度（14.52mg干粉 /mL、 29.03mg千粉 /mL、 87.09mg干粉 /mL)的灌胃液进行实验， 小鼠 灌胃量按 0. nL/10g体重计算。 空白对照组给予等体积蒸馏水灌胃。 每日灌胃 1次， 连续 30 天。 组合物 4对照组小鼠给予中剂量 4.0g生药/ kg体重（相当于人每日摄入量的 10倍）， 将 样品以蒸馏水配制成 32.81mg干粉 /mL灌胃液进行实验， 灌胃量按 O.lmL/lOg体重计算。 2.2.2检测指标
2.2.2.1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化： 同实施例 51。
2.2.2.2 脾细胞抗体形成能力： 同实施例 51。
2.2.2.3腹腔巨噬细胞吞噬能力： 同实施例 51。
23统计方法：实验数据以 ¾:S表示，釆用单因素方差分析， 比较空白对照组、模型对照组、 组合物 6各组之间的差异， PO.05判断为差异具有显著性。
3结果
3.1组合物 抗鸭乙型肝炎的药效学实验研宄
3.1.1 对血清 DHBV DNA滴度的影响
结果见表 1。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 6高剂量组于给药后 14天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 6中剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组于给药 28天血清 DHBV DNA滴度明显降低。提示组合物 6有抑制 DHBV DNA复制的作 用， 其作用强度与组合物 4相似。
3.1.2对血清 DHBsAg的 OD值改变情况
结果见表 2。 模型组血清中 DHBV DNA滴度无明显降低。 拉米夫定组于用药 14d后出现 有血清 DHBV DNA滴度明显降低。 组合物 6高剂量组于给药后 21天出现有血清 DHBV DNA 滴度明显降低， 组合物 6中剂量组于给药后 28天出现有血清 DHBV DNA滴度明显降低， 低 剂量组有降低的趋势， 但无显著统计学意义。提示组合物 6有降低 D HBsAg滴度的作用， 其作 用强度与组合物 4相似。
表 1 组合物 ό对血清 DHBV DNA滴度的影响 （ its' n=12) 剂量
组别 (g生药 用药前 用药 7d 用药 Ud 用药 21d 用药 28d 停药 7d 模型对照组 - 1507.3±123.5 1521.3±129.8 1528.7士 121.69 1536.7±135.6 1508.6±143.7 1523.9±148.2 拉米夫定对
50mg 0.2"** 1321.1±161.4A* 照组 1498.8±122.0 1438.2±129.7 1387.5±134.g** 1288.9±1 0.2"** 1277,3±15
组合物 4对
2.0 1497.8±120.2 1447.24±125.8 1407.2±136.5* 1373.7±130.6*** 1318.7±126.7"" 1320.3±151.2**! 照组
受试药低剂
1.0 1508.2± 110.3 1476.5±125.4 1423.9±129.0* 14.05.2±133.7* 1376.8±128.0*** 1376.5±152.4**' 量组
受试药中剂
2.0 1505.2±131.7 1445.9±126.7 1408.5±140.2* 1384.5±122.7A«* 13" .&il51.3"" Β36. ±129.0**! 量组
受试药高剂
6.0 1504.3±122.7 1433.7±150.6 1382.1±124.6*** 1370.4±150.2Δ** 1296.6±118.7"" 1320.ft±161.1 A*< 量组
与用药前比较， *P<0.05, A AP 0.01 i 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01 » 表 2 组合物 6对血清 DHBsAg的 OD值改变情况（ ^ts, n=12) 剂量
组别 用药前 用药 7d 用药 14d 用药 21d 用药 停药 7d
(g生药/ kg)
模型对照组 - 0.75±0.21 0.71±0.18 0.77±0.09 0.73±0.15 0.72±0.14 0.74±0.12 拉米夫定对照组 50mg 0.74±0.09 0.64±0.17 0.51±0.08** 0.43±0.12"** 0.33±0.11 "*· 0.34±0.10"** 组合物 4对照组 2.0 0.74±0,17 0.66±0.10 0.65±0.15 0.62*0.12* 0.55±0.16** 0.52±0.15"" 受试药低剂量组 1.0 0.75±0.14 0.71±0.15 0.7O±0.12 0.68±0.14 0.69±0.16 0.68±0.12 受试药中剂量组 2.0 0.76±0.18 0.69±0.14 0.67±0.14 0.62±0.13* 0.58±0.12" 0.50±0.18"** 受试药高剂量组 6.0 0.78±0.12 0.70±0.15 0.66±0.12 0.56±0.1 * 0.47±0.17"·· 0.3 ±0.17"** 与用药前比较， *P<0.05, "P<0.01 ; 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01.
3.1.3 对血清 ALT、 AST的影响
结果见表 3。 模型组血清中 ALT、 AST值明显髙于正常。 拉米夫定组和组合物 6低、 中、 髙剂量组均有明显的降低血清 ALT和 AST的作用。 提示组合物 6有降低 ALT、 AST的作用， 其 作用强度与组合物 4相似。
表 3 组合物 6对血清 ALT、 AST的影响 （ i±s, n=12, U L) 剂量
组别 第 28天 ALT 第 35天 ALT 第 28天 AST 第 35天 AST
(g生药 kg)
模型对照组 - 68.76±9.72 65.92±12.18 85.05±18.77 99.16±12.34 拉米夫定对照组 50mg 30.23±6.44** 31.87±6.80** 46.41±8.85** 40.06±6.44** 组合物 4对照组 2.0 36.72±6.56** 38.49±8.23** 45.92±7.42** 45.29±8.16** 受试药低剂量组 1.0 48.66±9.48** 45.78±8.77** 54.88±7.60** 55.83±12.05** 受试药中剂量组 2.0 40.27±12.33** 41.28±9.06** 47.92±8.33** 46.03±9.80** 受试药高剂量组 6.0 33.17±9.02** 34.60±10.23** 45.60±9.05** 40.27±7.28** 与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01。
3.1.4对肝脏组织病理学检査的影响
结果见表 4。 正常鸭肝组织细胞结构完整， 呈索状排列， 肝窦清晰， 汇管区清晰。模型组 肝实质细胞见明显变性， 改变和弥漫分布的点状、 灶状坏死。 表现为小叶结构不完整， 肝索 紊乱， 界板参差不齐， 浸润的炎细胞向小叶内延伸， 并可见肝细胞呈灶状坏死、 桥接坏死。 拉米夫定组鸭肝组织结构正常，肝细胞形态正常，肝窦清晰。经组合物 6中、高剂量治疗后，肝 脏病理变化有所减轻，肝小叶结构基本完整， 肝细胞变性改变明显轻于模型组， 仅见点、 灶状 坏死散在分布，轻度的碎片样坏死仅见于少数肝小叶。提示组合物 6有减轻病毒感染所致肝损 伤病理的作用， 其作用强度与组合物 4相似。
表 4 组合物 6对肝组织病理学的影响 （ its) 剂量 动物数
组别 点状坏死 (+) 点状坏死 （-) 灶状坏死 （+) 灶状坏死 （-)
( 生药/ kg) (只）
模型对照组 - 12 12 0 11 1 拉米夫定对照组 50mg 12 ]** 2* 10牢 组合物 4对照组 2.0 12 7 5 7 5 受试药低剂量组 1.0 12 8 4 8 4 受试药中剂量组 2.0 12 6 6 6 6 受试药高剂量组 6.0 12 2* 10* 2* 10* 与模型对照组比较， *P<0.05, "P<0.01。
3.2 组合物 6对免疫功能的影响
结果见表 5、 6、 7。 与空白对照组相比较， 组合物 6中、 高剂量组及组合物 4对照组脾淋巴 细胞转化率、腹腔巨噬细胞吞噬功能、溶血空斑数均有明显升高， 且有统计学意义， 组合物 6 低剂量组也有升高的趋势但无统计学意义，提示组合物 6有提高小鼠免疫功能的作用，其对免 疫功能的提高作用与组合物 4相似。
表 5 组合物 6对小鼠脾淋巴细胞转化率的影响 （ i±s) 组别 剂量（g生药/ kg) 动物数（只） 脾淋巴细胞转化率 空白对照组 0.0 12 0.253±0.054
转移因子对照组 27.3mg 12 0.386±0.082**
组合物 4对照组 4.0 12 0.358±0.059*
受试药低剂量组 2.0 12 0.296±0.082
受试药中剂量组 4.0 12 0.359±0.070*
受试药高剂量组 12.0 12 0.399±0.060** 与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01.
表 6 组合物 6对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 （ its) 组别 剂量 （g生药 kg) 动物数 （只） 吞噬鸡红细胞 吞噬鸡红细胞
, 吞噬率 (％) 吞噬指数 空白对照组 0.0 12 32.81±7.9 0.47±0.09 转移因子对照组 27.3mg 12 58.3±9.2** 0.78±0.12** 组合物 4对照组
4.0 12 45.3±9.0* 0.64±0.16* 受试药低剂量组 2.0 12 36.3±6.8 0.54±0.15 受试药中剂暈组 4.0 12 45.4±10.6* 0.67±0.13* 受试药髙剂量组 12.0 12 53.8±9.7** 0.73±0.12** 与空白对照组相比， * P<0.05, ** P<0.01 o 表 7 组合物 6对小鼠抗体生成细胞功能的影响 （ i±s)
组别 剂量（g生药/ kg) 动物数（只） 溶血空斑数（/106脾细胞） 空白对照组 0.0 12 140.7±20.6
转移因子对照组 27.3mg 12 176.1±21.2** 组合物 4对照组 4.0 12 166.1±19.2*
受试药低剂量组 2.0 12 151.6±19.2
受试药中剂量组 4.0 12 162.8±20.8*
受试药高剂量组 12.0 12 173.5±21.2** 与空白对照组相比， * P<0.05，** P<0.01.
4. 结论：
经动物实验研宄表明： 组合物 6能抑制病毒性肝炎鸭血清 HBV DNA的复制、 降低血清
HBsAg的滴度， 降低血清中 ALT和 AST的含量， 且对病毒所致的肝细胞损伤有保护作用， 提示组合物 6对鸭病毒性肝炎有较好的防治作用。同时组合物 6能提高小鼠淋巴细胞转化率、 腹腔巨噬细胞吞噬功能、 溶血空斑数， 提示组合物 6有较好的升髙机体免疫功能的作用。 其 作用强度与组合物 4相似。 实施例 57: 本发明组合物防治乙型肝炎的临床实验
72例乙型肝炎患者服用本发明组合物 3个月后， 检测病人体内的 HBV- DNA载量， 具体研 宄如下：
1、 试验样 P :
( 1)本发明组合物 A: 称取西洋参 300g、灵芝 400g、发酵虫草菌粉 200g、玫瑰花 300g, 西洋参、 灵芝切片， 发酵虫草菌粉置于布袋中， 以上四味加水浸泡 20min， 加热煎煮 3次， 每次 1小时， 每次加水 10倍量， 合并 3次提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 放冷后高速离心除 杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液常规工艺制成 20000ml口服液。
(2)本发明组合物 B: 称取西洋参 300g、 灵芝 400g、 冬虫夏草 67g、 玫瑰花 300g, 西 洋参、 灵芝切片， 冬虫夏草打粉置于布袋中， 以上四味加水浸泡 30min, 加热煎煮 3次， 第 一次加 13倍量水， 煎煮 2小时， 以后每次加水 10倍量， 煎煮提取 1小时， 合并 3次提取液 过滤， 滤液浓缩至适量， 放冷后高速离心除杂， 加入口服液常用辅料， 混合均匀， 按口服液 常规工艺制成 20000ml口服液。
2、 服用方法： 各试验组分别服用相对应的样品， 每日服用 1次， 每次 1瓶 (200ml/瓶）。
3、 服用时间： 3个月。
4、 观察期间不服用其他中药制剂或保健食品。
5、 检测结果
Figure imgf000043_0001
注. · * *与服用前相比， Ρ<0. 01
HBV-DNA即是乙肝病毒的脱氧核糖核酸（即乙肝病毒基因）。 HBV-DNA是 HBV感染 最直接、特异性强和灵敏性高的指标, HBV-DNA阳性，提示 HBV复制和有传染性。 HBV-DNA 越高表示病毐复制越厉害， 传染性强。 以上临床研究表明， 本发明组合物 A组和 B组均能显 著降低病人体内的 HBV- DNA载量， 表明本发明组合物抗乙肝病毒作用， 可用于治疗乙型病毒 性肝炎患者。

Claims

权 利 要 求 书
1. 由含有下面成份的原料制成的组合物在制备防治乙型肝炎的组合物中的用途：灵芝、西洋 参或人参、 发酵虫草菌粉和 /或冬虫夏草。
2. 权利要求 1的用途， 其特征在于， 其中所述原料进一步含有玫瑰花、灵芝孢子粉、灵芝孢 子油、 太子参、 人参叶、 党参、 黄芪中的一种或几种。
3. 权利要求 1的用途， 其特征在于， 其中所述原料含有： 灵芝 5〜200份、西洋参或人参 5〜
150份、 发酵虫草菌粉 1〜90份和 /或冬虫夏草 1~120份。
4. 权利要求 3的用途， 其特征在于， 其中所述原料是： 灵芝 5〜200份、 西洋参或人参 5〜
150份、 发酵虫草菌粉 1~90份和 /或冬虫夏草 1〜120份。
5. 根据权利要求 3或 4所述的用途，其特征在于：其中灵芝 20~120份、西洋参或人参 10〜
90份、 发酵虫草菌粉 3〜60份和 /或冬虫夏草 3~90份。
6. 根据权利要求 5所述的用途， 其特征在于： 其中灵芝 40份、 西洋参或人参 30份、发酵虫 草菌粉 20份和 /或冬虫夏草 6.7份。
7. 根据权利要求 3— 6任一项所述的用途，其特征在于：其中所述原料进一步包含玫瑰花 5〜
90份、 灵芝孢子粉 5〜150份、 灵芝孢子油 1〜90份、 太子参 10〜400份、 人参叶 1〜120 份、 党参 3〜400份、 黄芪 3~400份中的一种或几种的任意组合。
8. 根据权利要求 7所述的用途， 其特征在于： 其中玫瑰花 10〜60份、 灵芝孢子粉 10〜120 份、灵芝孢子油 10〜60份、 太子参 20〜200份、人参叶 20〜90份、 党参 20〜200份、黄 芪 20〜200份中的一种或几种的任意组合。
9. 根据权利要求 8所述的用途， 其特征在于： 其中玫瑰花 30份、灵芝孢子粉 30份、灵芝孢 子油 20份、太子参 40份、人参叶 30份、党参 40份、黄芪 40份中的一种或其任意组合。
10.根据权利要求 7所述的用途， 其特征在于： 其中所述原料含有灵芝 5〜200份、 西洋参或 人参 5〜150份、 发酵虫草菌粉 1〜90份和 /或冬虫夏草 1〜120份、 玫瑰花 5~90份。
11.根据权利要求 10所述的用途,其特征在于:所述原料为灵芝 5〜200份、西洋参或人参 5〜
150份、 发酵虫草菌粉 1〜90份和 /或冬虫夏草！〜 120份、 玫瑰花 5〜90份。
12.根据权利要求 10或 11所述的用途， 其特征在于： 其中灵芝 20〜120份、 西洋参或人参
10〜90份、 发酵虫草菌粉 3〜60份和 /或冬虫夏草 3~90份、 玫瑰花 10〜60份。
13.根据权利要求 12所述的用途，其特征在于：所述原料为灵芝 40份、西洋参或人参 30份、 发酵虫草菌粉 20份和 /或冬虫夏草 6.7份、 玫瑰花 30份。
14.根据权利要求 10—13任一项所述的用途， 其特征在于： 所述原料进一步包含灵芝孢子粉
5〜150份、 灵芝孢子油 1〜90份、 太子参 10〜400份、 人参叶 1〜120份、 党参 3~400 份、 黄芪 3〜400份中的一种或几种的任意组合。
15.根据权利要求 3、 4、 10或 11所述的用途， 其特征在于： 用太子参 20〜200份、 人参叶 20~90份、 党参 20〜200份、 黄芪 20〜200份替代西洋参或人参 5〜150份。
16. 根据权利要求 1-15任一所述的用途， 其特征在于： 其中所述发酵虫草菌粉所属的菌种为 蝙蝠蛾拟青霉或蝙蝠蛾被毛孢或中华束丝孢或粉红胶霉或抱霉属真菌或麦角菌科真菌冬 虫夏草头孢或中华被毛孢中的一种或几种的任意组合。
17.根据权利要求 7、 8、 9、 14任一所述的用途， 其中灵芝孢子粉是破壁灵芝孢子粉。
18.根据权利要求 1〜15任一所述的用途， 其特征在于： 其中所述防治乙型肝炎的组合物可 以加入保健品或药品或产品中可接受的附加剂或赋形剂制备成任意剂型。
19.根据权利要求 18所述的用途， 其特征在于： 所述剂型是片剂、 口服液、颗粒剂、胶襄剂、 煎膏剂、 滴丸剂、 丸剂、 散剂、 锭剂、 流浸膏剂、 浸膏剂、 注射剂、 糖浆剂中的任意一 种。
20.权利要求 1一 15任一项的用途， 其特征在于， 其中用所述原料制成的组合物是通过下面 的方法制成的： 将所述原料混合， 或者所述原料混合后水提和 /或醇提得到组合物， 或 者所述原料中的一种或几种经水提和 /或醇提提取物作活性成份组成所述组合物。
21.根据权利要求 20所述的用途， 其特征在于： 用所述原料制成的所述组合物是通过以下步 骤制成的：
1) 称取中药材原料；
2) 用醇或水对上述药材回流提取， 得到提取液做活性成份， 加入附加剂， 制成各种剂 型。
22.根据权利要求 20所述的用途， 其特征在于： 用所述原料制成的所述组合物是通过以下步 骤制成的：
1)称取中药材原料， 将原料药材加甲醇或乙醇进行提取， 提取液回收甲醇或乙醉， 得到 提取物 I；
2)将上述药渣挥干醇后， 加水进行提取， 得到提取物 Π ;
3)合并提取物 I和提取物 II , 过滤， 滤液浓縮至适量， 加入药学上常用辅料， 采用药剂 学上常规工艺制成所需制剂。
23.根据权利要求 20所述的用途， 其特征在于： 用所述原料制成的所述组合物是通过以下步 骤制成的-
1) 原料准备： 称取中药材原料；
2) 提取浓縮： 将步骤 1中处理好的原料加水浸泡后， 加热煎煮多次， 合并提取液过滤， 滤液浓缩至适量， 浓缩液放冷后髙速离心除杂， 备用；
3) 制备制剂： 将步骤 2 中所得的浓缩液单独或加入医学上可接受的辅料， 采用药剂学 上常规工艺制成所需制剂。
24.根据权利要求 23组合物的用途,其特征在于还可以包括以下步骤：
步骤 2) 中浸泡时间为 20分钟〜 60分钟， 加热煎煮 1〜3次， 每次 1 ~2小时,加水 量为 6〜13倍。
25. 根据权利要求 20— 2 4任一项所述的用途， 其特征在于： 其中所述醇是甲醇或乙醇。
26. 根据权利要求 22所述的用途， 其特征在于： 甲醇浓度 5〜95%， 乙醇浓度为 5~95%。
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