WO2013172741A2 - Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси) циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения - Google Patents

Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси) циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения Download PDF

Info

Publication number
WO2013172741A2
WO2013172741A2 PCT/RU2013/000384 RU2013000384W WO2013172741A2 WO 2013172741 A2 WO2013172741 A2 WO 2013172741A2 RU 2013000384 W RU2013000384 W RU 2013000384W WO 2013172741 A2 WO2013172741 A2 WO 2013172741A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
yloxy
pentan
cyclohexene
guanidino
carboxylic acid
Prior art date
Application number
PCT/RU2013/000384
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2013172741A3 (ru
Inventor
Александр Васильевич ИВАЩЕНКО
Original Assignee
Асави, Ллс
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to KR1020147034876A priority Critical patent/KR101902567B1/ko
Priority to EP13791641.7A priority patent/EP2848606B1/en
Priority to MX2014013761A priority patent/MX360369B/es
Priority to CN201380024800.0A priority patent/CN104284884B/zh
Application filed by Асави, Ллс filed Critical Асави, Ллс
Priority to JP2015512601A priority patent/JP6034960B2/ja
Priority to BR112014028362-1A priority patent/BR112014028362B1/pt
Priority to DK13791641.7T priority patent/DK2848606T3/en
Priority to EA201401238A priority patent/EA024765B1/ru
Priority to PL13791641T priority patent/PL2848606T3/pl
Priority to AU2013263513A priority patent/AU2013263513B2/en
Priority to CA2872733A priority patent/CA2872733C/en
Priority to UAA201410979A priority patent/UA113201C2/uk
Publication of WO2013172741A2 publication Critical patent/WO2013172741A2/ru
Publication of WO2013172741A3 publication Critical patent/WO2013172741A3/ru
Priority to ZA2014/08026A priority patent/ZA201408026B/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/16—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/16—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring the ring being unsaturated

Definitions

  • This invention relates to new compounds - fluorine-substituted (3R, 4R, 5S) - 5-guanidino-4-acylamino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acids and their esters - inhibitors of neuraminidase activity.
  • neuraminidase are pathogenic to humans and animals, such as birds, horses, pigs, seals. Such pathogens include influenza virus. Neuraminidase is associated with the pathogenicity of the influenza virus.
  • the new fluoro-substituted (31, 4K, 58) -5-guanidino-4-acylamino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acids and their esters are of interest as drug substances for the creation of new drugs, intended for the prevention and treatment of influenza.
  • Known inhibitors of neuraminidase are (3R, 4R, 5S) -5-amino-3-alkyloxy-4-acetylaminocyclohexene-1-carboxylic acids A1, the most active of which is (3R, 4R, 5S) -5-aMHHO-4 -a4eTKnaMHHo-3- (neHTaH-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acid A2, which, as shown by X-ray diffraction data for the acid complex with the influenza virus neuraminidase, effectively binds to the active site of the enzyme (Oseltamivir Carboxylate) [C. U. Kim, W. Lew, M. A. Williams, et al. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 681-690.].
  • Oseltamivir carboxylate A3 ethyl ester known as Oseltamivir phosphate or Tamiflu (Oseltamivir Phosphate, Tamiflu) [J. C. Rohloff, K. M. Kent, M. J. Postich, et al. J. Org. Chem. 1998, 63, 4545.], is the medicinal precursor of oseltamivir carboxylate A2.
  • Alkenyl means an aliphatic linear or branched hydrocarbon group containing from 2 to 7 carbon atoms and including at least one carbon-carbon double bond. Branched means that one or more lower alkyl groups, such as methyl, ethyl or propyl, are attached to a linear alkenyl chain.
  • Preferred alkyl groups are methyl, trifluoromethyl, cyclopropylmethyl, cyclopentylmethyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl, 3-pentyl, methoxyethyl, carboxymethyl, methoxycarbnylmethyl, benzyloxycarbonylmethylmethyl and pyridinyl.
  • Preferred alkenyl groups are ethenyl, propenyl, n-butenyl, isobutenyl, 3-methylbut-2-enyl, n-pentenyl, and cyclohexylbutenyl.
  • Alkyl means an aliphatic hydrocarbon linear or branched group with 1-12 carbon atoms in the chain. Branched means that the alkyl chain has one or more "lower alkyl” substituents.
  • Alkyl may have one or more identical or different substituents (“alkyl substituents”) including halogen, alkenyloxy, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl, aroyl, cyano, hydroxy, alkoxy, carboxy, alkynyloxy, aralkoxy, aryloxy, aryloxycarbenyl, alkylthio, heteroaryo , aralkylthio, arylsulfonyl, alkylsulfonylheteroaralkyloxy, annelated heteroarylcycloalkenyl, annelated heteroarylcycloalkyl annelated heteroarylheterocyclenyl, annelirovannyi heteroarylhetero
  • Preferred alkyl groups are methyl, trifluoromethyl, cyclopropylmethyl, cyclopentylmethyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, ret-butyl, n-pentyl, 3-pentyl, methoxyethyl, carboxymethyl, methoxycarbonylmethylmethyloxycarbylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonymethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethyloxycarbonylmethylene .
  • Alkynyl means an aliphatic linear or branched hydrocarbon group containing from 2 to 12 carbon atoms and including at least one carbon-carbon triple bond. Branched means that one or more lower alkyl groups, such as methyl, ethyl or propyl, are attached to the linear alkynyl chain.
  • Preferred alkyl the groups are methyl, trifluoromethyl, cyclopropylmethyl, cyclopentylmethyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl, 3-pentyl, methoxyethyl, carboxymethyl, methoxycarbnylmethyl, benzyloxycarbonylmethyl and pyridylmethyloxy.
  • Preferred alkynyl groups are ethynyl, propynyl, n-butynyl, isobutynyl, 3-methylbut-2-ynyl, n-pentynyl, buta-1,3-diine and hexa-1,3,5-triine.
  • Hydrate means a stoichiometric or non-stoichiometric composition of a compound or its salt with water.
  • Medical substance (drug substance, drug substance) means a physiologically active substance of synthetic or other (biotechnological, plant, animal, microbial and other) origin, having pharmacological activity and is the active principle of a pharmaceutical composition used for the manufacture and manufacture of a drug drug (funds).
  • Medical product (preparation) a substance (or a mixture of substances in the form of a pharmaceutical composition), in the form of tablets, capsules of injections, ointments, and other finished forms designed to restore, correct, or alter physiological functions in humans and animals, as well as for the treatment and disease prevention, diagnosis, anesthesia, contraception, cosmetology and more.
  • Neuraminidase is an enzyme common to animals and a number of microorganisms. It is a glycohydrolase that cleaves alpha-ketosidically linked sialic acids from glycoproteins, glycolipids and oligosaccharides. Many of the microorganisms containing neuraminidase are pathogenic to humans and other animals, including poultry, horses, pigs and seals. Such pathogens include the influenza virus. Neuraminidase is associated with the pathogenicity of the influenza virus. Presumably, it promotes the elution of newly synthesized virions from infected cells and the movement of the virus (due to its hydrolase activity) through the mucus of the respiratory tract.
  • “Pharmaceutical composition” means a composition comprising a compound of formula 1 and at least one of the components selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable and pharmacologically compatible excipients, solvents, diluents, carriers, excipients, distribution and perceiving means of delivery, such as preservatives, stabilizers, fillers, grinders, moisturizers, emulsifiers, suspending agents, thickeners, sweeteners, perfumes, flavors, antibacterial agents, fungicides, lubricants, prolonged delivery regulators, the choice and ratio of which depends on the nature and method of administration and dosage.
  • suspending agents examples include ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene, sorbitol and sorbitol ether, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar-agar and tragacanth, as well as mixtures of these substances. Protection against the action of microorganisms can be achieved using a variety of antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, sorbic acid and the like.
  • the composition may also include isotonic agents, for example, sugars, sodium chloride and the like.
  • the prolonged action of the composition can be achieved using agents that slow down the absorption of the active principle, for example, aluminum monostearate and gelatin.
  • suitable carriers, solvents, diluents and delivery vehicles are water, ethanol, polyalcohols, and also mixtures thereof, vegetable oils (such as olive oil) and injectable organic esters (such as ethyl oleate).
  • excipients are lactose, milk sugar, sodium citrate, calcium carbonate, calcium phosphate and the like.
  • grinders and distributors are starch, alginic acid and its salts, silicates.
  • lubricants are magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, talc, and high molecular weight polyethylene glycol.
  • the pharmaceutical composition for oral, sublingual, transdermal, intramuscular, intravenous, subcutaneous, local or rectal administration of the active principle, alone or in combination with another active principle, can be administered to animals and humans in a standard administration form, in the form of a mixture with traditional pharmaceutical carriers.
  • Suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, gelatine capsules, pills, powders, granules, chewing gums and oral solutions or suspensions, sublingual and buccal administration forms, aerosols, implants, local, transdermal, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intranasal or intraocular administration forms and rectal administration forms.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” means the relatively non-toxic organic and inorganic salts of the acids and bases of the present invention.
  • salts can be obtained in situ during the synthesis, isolation or purification of the compounds or prepared specially.
  • base salts can be prepared specifically based on the purified free base of the claimed compound and a suitable organic or inorganic acid.
  • salts thus obtained are hydrochlorides, hydrobromides, sulfates, bisulfates, phosphates, nitrates, acetates, oxalates, valeriates, oleates, palmitates, stearates, laurates, borates, benzoates, lactates, tosylates, citrates, maleates, fumarates, succinates, tartrates mesylates, malonates, salicylates, propionates, ethanesulfonates, benzenesulfonates, sulfamates and the like (Detailed description of the properties of such salts is given in Berge SM, et al., Pharmaceutical Salts J.
  • Salts of the claimed acids can also be specially prepared by reacting the purified acid with a suitable base, and metal and amine salts can be synthesized.
  • Metal salts include sodium, potassium, calcium, barium, zinc, magnesium, lithium and aluminum salts, the most desirable of which are sodium and potassium salts.
  • Suitable inorganic bases from which metal salts can be obtained are hydroxide, carbonate, sodium bicarbonate and hydride, potassium hydroxide and bicarbonate, potash, lithium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, zinc hydroxide.
  • amines and amino acids are selected that are sufficiently basic to form a stable salt and are suitable for medical use (in particular, they should have low toxicity).
  • amines include ammonia, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, ethylamine, diethylamine, triethylamine, benzylamine, dibenzylamine, dicyclohexylamine, piperazine, ethylpiperidine, tris (hydroxymethyl) aminomethane and the like.
  • tetraalkylammonium hydroxides for example, such as choline, tetramethylammonium, tetraethylammonium and the like, can be used for salt formation.
  • amino acids the main amino acids can be used - lysine, ornithine and arginine.
  • neuraminidase inhibitors which are previously unknown previously fluorine-substituted (311.4Rch, 58) -4-acylamino-5-guanidino-3- (pentan-3- yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acids and their esters of the general formula, pharmaceutically acceptable salts and / or hydrates.
  • R represents hydrogen, optionally substituted C1-C 5 alkyl, C 2 - C 5 alkenyl or C 2 -C 5 alkynyl; Rf represents a CH 2 F or CHF 2 radical.
  • compounds of the general formula 1 are preferred in which R is hydrogen, methyl or ethyl.
  • more preferred compounds of the general formula 1 are: (W, 41, 58) -5-guanidino-4-fluoroacetylamino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acid 1.1, its methyl ester 1.2 and ethyl 1.3 ether, (ZK, 4K, 58) -5-guanidino-4-difluoroacetylamino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1 carboxylic acid 1.4, its methyl ether 1.5 and ethyl 1.6 ether.
  • Influenza virus neuraminidase inhibitors of general formula 1 are prepared starting from alkyl 4-amino-5- (ire / i-butoxycarbonylamino) -3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylate of general formula 2 according to the following scheme.
  • New influenza neuraminidase inhibitors which are previously unknown (ZK, 4K, 58) -4- (2-fluoroacetylamino) - and (3R, 4R, 5S) -4- (2,2-difluoroacetylamino) - 5-guanidino-3 - (pentan-3-yloxy) cyclohexen-1-carboxylic acids and their esters of the general formula 1 and their pharmaceutically acceptable salts also showed high influenza activity in animal models of influenza pneumonia.
  • Antineuraminidase activity of the compounds was determined according to the method described in [Who Collaborating Center for Reference & Research on Influenza, Australia, Standard Operating Procedure WHO - 025. Reviewed by: Aeron Hurt, Senior Philosoph Review Date: 13/3/2009].
  • the new compounds of General formula 1 are a drug source for the preparation of pharmaceutical compositions and formulations for the prevention and treatment of influenza in warm-blooded animals and humans.
  • the subject of this invention is a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as a drug principle, the compounds of general formula 1 or their pharmaceutically acceptable salts in a therapeutically effective amount.
  • compositions may include pharmaceutically acceptable excipients.
  • pharmaceutically acceptable excipients is meant diluents, excipients and / or carriers used in the pharmaceutical field.
  • the pharmaceutical composition along with the compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt and / or hydrate thereof of the present invention may include other active substances, including those having anti-influenza activity, provided that they do not cause undesirable effects.
  • the use of the pharmaceutical composition of the present invention in clinical practice it can be mixed with traditional pharmaceutical carriers.
  • the carriers used in the pharmaceutical compositions of the present invention are carriers that are used in the pharmaceutical industry to obtain common forms, including: in oral forms, binders, lubricants, disintegrants, solvents, diluents, stabilizers, suspending agents, colorless are used agents, flavoring agents of taste; antiseptic agents, solubilizers, stabilizers are used in injection forms; in local forms, bases, diluents, lubricants, antiseptic agents are used.
  • the subject of this invention is a method for producing a pharmaceutical composition by mixing with an inert excipient and / or solvent, at least one drug principle (substance) of the general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof in a therapeutically effective amount.
  • the subject of this invention is also a medicament having influenza activity, in the form of tablets, capsules or injections, placed in a pharmaceutically acceptable package, intended for the prophylaxis of treatment of influenza in humans and warm-blooded animals, including an influenza drug principle (substance) of the general formula 1 or a pharmaceutical composition comprising a new drug onset of general formula 1 in a therapeutically effective amount.
  • a medicament having influenza activity in the form of tablets, capsules or injections, placed in a pharmaceutically acceptable package, intended for the prophylaxis of treatment of influenza in humans and warm-blooded animals, including an influenza drug principle (substance) of the general formula 1 or a pharmaceutical composition comprising a new drug onset of general formula 1 in a therapeutically effective amount.
  • the subject of the present invention is also therapeutic cocktails for treating influenza, comprising, as one of the components, a new drug or a new pharmaceutical composition containing, as an active component, at least one compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt and / or hydrate thereof.
  • a therapeutic cocktail for “treating influenza, along with the medicament of the present invention may include other known drugs for treating influenza, or drugs that enhance the patient’s immune system.
  • a method for the prevention and treatment of influenza in animals and humans consists in administering to the patient a new drug, a new pharmaceutical composition or a new therapeutic cocktail.
  • Medicines may be administered via an inhaler, orally or parenterally (e.g., intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically).
  • the clinical dosage of an agent of general formula 1 in patients can be adjusted depending on the therapeutic efficacy and bioavailability of the active ingredients in the body, their metabolic rate and excretion from the body, as well as on the age, gender and stage of the patient’s disease, with a daily dose in adults usually is 10 ⁇ 500 mg, preferably 50 ⁇ 300 mg. Therefore, when preparing the pharmaceutical composition of the drug of the present invention in the form of dosage units, it is necessary to take into account the above effective dosage, with each dosage unit of the drug containing 10 ⁇ 500 mg of an agent of general formula 1, preferably 50 ⁇ 300 mg. As directed by your doctor or to a pharmacist, these drugs can be taken several times during certain periods of time (preferably one to six times).
  • the subject of this invention is also a method of inhibiting the activity of neuraminidase in vivo, including influenza neuraminidase, comprising the step of contacting a compound of general formula 1 and a neuraminidase.
  • Example 1 Obtaining (GL, 4 g, 55) -ethyl 4- (2,2-difluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-mesylate arboxylate 1.6 * ⁇ 80 ⁇ .
  • the resulting 4b product (2.15 g, 0.0048 mol) was dissolved in 20 ml of a 10% solution of trifluoroacetic acid in methylene chloride and stirred at room temperature for 12 hours. Then the solvents were distilled off in vacuo, the remaining oil was dissolved in ethyl acetate, washed with 5% NaHC0 3 solution, dried over Na 2 S0 4 , filtered and dried in vacuum. The product yield is 96% (1.605 g). Additional purification is carried out by column chromatography - eluent is ethyl acetate THF or by recrystallization from hexane.
  • Example 2 (H, 41., 55) -ethyl 4- (2-fluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylate mesylate L3-CH3BOZH is prepared according to the procedure described in the example 1 using monofluoroacetic acid as an acylating agent.
  • LCMS (M + H): Found 373; Calculated 372.44.
  • Example 3 (GL, 4?, 55) -4- (2,2-difluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acid 1.4.
  • To a solution of 250 mg (ZL, 4L, 55-ethyl 5- ((2) -2,3-bis (otter »7-butoxycarbonyl) guanidino) -4- (2,2-difluoroacetamido) -3- (pentan-3 - yloxy) cyclohexene-1-carboxylate 6b in 5 ml of dioxane add 2.5 ml of a 5% solution lithium hydroxide and stirred the reaction mass at room temperature for 45 minutes.
  • lithium hydroxide is passivated by adding 300 ⁇ l of acetic acid, the solvents are distilled off in vacuo. The resulting precipitate was extracted with isopropyl alcohol, the extract was dried over Na 2 S0 4 and in vacuo. 200 mg (84%) (3L, 4 / g, 55) -5 - ((2) -2,3-bis (t / 7eot-butoxycarbonyl) guanidino) -4- (2,2-difluoroacetamido) -3 are obtained - (pentan-3-yloxy) cyclohexen-1-carboxylic acid 8b.
  • Example 5 (3 / ?, 4, 55) -Metyl 4- (2-fluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylate mesylate 1.2-CHjSC H was obtained by the method, described in example 1 using as starting (3 / ?, 4L, 55) -methyl 4-amino-5- (t /> e / and-butoxycarbonylamino) -3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1- carboxylate and monofluoroacetic acid as an acylating agent.
  • Example 6 (3?, 4 / g, 55) -Metyl 4- (2,2-difluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylate mesylate 1.5 'CH.sub.3SO.sub.2 was obtained by the procedure described in example 1 using as the source (GL, 4 /., 55) -methyl 4-amino-5 - (/ ipre-butoxycarbonylamino) -3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylate and difluoroacetic acid as an acylating agent.
  • LCMS (M + H): Found 373; Calculated 372.44.
  • Example 7 Obtaining a pharmaceutical composition in the form of tablets.
  • 1600 mg of starch, 1600 mg of ground lactose, 400 mg of talc and 1000 mg (3 / g, 4 / g, 55) -4- (2-fluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene are mixed -1-carboxylic acid 1.1.
  • the resulting bar is crushed into granules and sieved through sieves, collecting granules with a size of 14-16 mesh.
  • the granules obtained are tabletted into a suitable tablet form weighing 560 mg each.
  • Example 8 Obtaining a pharmaceutical composition in the form of capsules. Thoroughly mix (3 / ?, 4 / ?, 55) -4- (2-fluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acid 1.1 with lactose powder in a 2: 1 ratio The resulting powdery mixture is packaged in 300 mg in a suitable size gelatin capsule.
  • Example 9 Obtaining a pharmaceutical composition for intramuscular, intraperitoneal or subcutaneous injection.
  • 500 mg of (3R, 4R, 5Si) -4- (2-fluoroacetamido) -5-guanidino-3- (pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acid 1.1 are mixed with 300 mg of chlorobutanol, 2 ml of propylene glycol and 100 ml injection water. The resulting solution is filtered and placed in 1 ml ampoules, which are sealed.
  • Example 10 Determination of the activity of compounds of General formula 1 in relation to neuraminidase of influenza viruses.
  • working dilutions were determined for the allantoic influenza virus strains A / California / 07/09 (H1N1) and A / Aichi / 2/69 (H3N2), as well as for the resistant A / Vladivostok / 16 influenza virus obtained in the cell culture. / 09 (H1N1).
  • 60 ⁇ l of each two-fold diluted virus was prepared in the reaction buffer mixture (RBS, 50 mM MES, 5 mM CaCl 2 , pH 6.5) in a 96-well round-bottom plate.
  • antineuraminidase activity of the compounds 50 ⁇ l dilutions of compounds of the general formula 1 and analogues of the formula were added to RBS in the 96-well flat bottom plates for measuring fluorescence (FluoroNunc, black, Cat. No. 237105) in order to determine the antineuraminidase activity of the compounds A2 and formulas A4 (concentration 0.03; 0.3; 3; 30; 300; 3000; 30,000 nm - each concentration per row).
  • wells of row A were used, to which 50 ⁇ l of RBS was added.
  • 50 ⁇ l of the selected working dilutions of each virus on RBS was added to the corresponding wells.
  • Example 11 The study of the influenza activity of the compounds of General formula 1 (1.1, 1.Z., 1.4 and 1.6) on the model of influenza pneumonia in mice.
  • Pre-weighed mice non-linear females, average weight 12-15 g
  • the influenza virus A / Aichi / 2/69 (H3N2) (10 LD 50 in 50 ⁇ l).
  • LD 50 was determined by titration of the allantoic virus in the same mice, which were then used in the main experiment.
  • the following treatment regimen for the compounds was used: 24 hours before infection, 1 hour before infection, after 24 hours and then 1 time per day for 5 days.
  • a single-use insulin syringe with a special needle was used, the effect of the following doses was studied: 25 mg / kg / day of compounds in a volume of 100 ⁇ l.
  • Tamiflu was used in doses from 5 mg / kg / day to 30 mg / kg / day.
  • the groups “treated with compounds” of general formula 1 and Tamiflu of formula A3 there were 10 mice each. The treated and control animals were monitored daily; in the first 5 days after infection, mice were weighed every day, then every other day.
  • the chemotherapeutic activity of the compounds in a mouse influenza pneumonia model was evaluated by the protection against fatal viral infection and weight loss in groups of animals treated with the drug compared to the control group. The decrease or increase in weight was calculated separately for each mouse and expressed as a percentage. Moreover, the weight of the animal before infection was taken as 100%. For all mice of the same group, the average percentage loss or weight gain was determined.
  • the dose of the virus is determined containing 10 LD 50 in a volume of 100 ⁇ l. All animals in the experiment are infected with this dose of the virus.
  • the efficacy of the compounds of general formula 1 in the mouse influenza pneumonia model was evaluated by the number of animals surviving after virus infection, average life expectancy and weight change of infected animals.
  • the anti-influenza efficacy of the studied drugs of general formula 1 and Tamiflu of formula A3 is expressed in a decrease in the rate of weight loss in the treated mice groups compared to the “virus control” group.
  • Animal weight loss is one of the clinical signs of the manifestation of influenza pneumonia. A greater decrease in animal weight indicates a more severe course of the disease. Mice were weighed at 1, 2, 3, 4, 5 days after infection, and then every other day until 15 days observations. It was found that in the viral control group, animals lost the most weight 5 days after infection (about 10%). In contrast to viral control, in the groups of animals undergoing treatment with all of these compounds of the general formula 1 and Tamiflu, on average, weight loss was not observed. Starting from day 9, all animals in the groups "treated with compounds" actively and stably gained weight.
  • the invention can be used in medicine and veterinary medicine.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к новым ингибиторам активности нейраминидазы и их использованию для профилактики и лечения инфекции гриппа, а именно к фторзамещенным 4-ациламино-5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновым кислотам и их эфирам общей формулы 1, и их фармацевтически приемлемым солям и/или гидратам, где R представляет собой водород, необязательно замещенный С1-С5алкил, С2-С5алкенил или С2-С5алкинил; Rf представляет собой CH2F или CHF2. Приводится фармацевтическая композиция, способ ее получения и способ профилактики и лечения вирусных заболеваний.

Description

Фторзамещенные (ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения
Область техники
Данное изобретение относится к новым соединениям - фторзамещенным (3R,4R,5S)- 5-гуанидино-4-ациламино -3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновым кислотам и их эфирам - ингибиторам активности нейраминидазы.
Предшествующий уровень техники
Многие микроорганизмы, содержащие нейраминидазу, патогенны по отношению к человеку и животным, таким как птицы, лошади, свиньи, тюлени. Такие патогенные микроорганизмы включают вирус гриппа. Нейраминидаза связана с патогенностью вируса гриппа.
В этой связи новые фторзамещенные (31 ,4К,58)-5-гуанидино-4-ациламино -3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновые кислоты и их эфиры представляют интерес в качестве лекарственных субстанций для создания новых препаратов, предназначенных для профилактики и лечения гриппа. Известны ингибиторы нейраминидазы - (3R,4R,5S)-5- амино-3-алкилокси-4-ацетиламиноциклогексен-1 -карбоновые кислоты А1, причем, наиболее активной из них является (3R,4R,5S)-5-aMHHO-4-a4eTKnaMHHo-3-(neHTaH-3- илокси)циклогексен-1 -карбоновая кислота А2, которая, как показывают рентгеноструктурные данные для комплекса кислоты с нейраминидазой вируса гриппа, эффективно связывается с активным центром фермента (Oseltamivir Carboxylate) [С. U. Kim, W. Lew, M. A. Williams, et al. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 681-690.].
Этиловый эфир озельтамивир карбоксилата A3, известный как озельтамивир фосфат или тамифлю (Oseltamivir Phosphate, Tamiflu) [J. С. Rohloff, К. M. Kent, М. J. Postich, et al. J. Org. Chem. 1998, 63, 4545.], является лекарственным предшественником озельтамивир карбоксилата А2.
Известна также (ЗR,4R,5S)-5-гyaнидинo-4-τpиφτopaцeτилaминo-3-(πeнτaн-3- илокси)циклогексен-1 -карбоновая кислота А4, обладающая активностью по отношению к нейраминидазе H5N1 вируса гриппа [Q.-S. Du, R.-B. Huang, Y.-T. Wei, Z.-W. Pa, L.-Q. Du, K.-C. Chou. Fragment-Based Quantitative Structure-Activity Relationship (FB-QSAR) for Fragment-Based Drug Design. J. Comput. Chem. 2008, 30(2), 295-304]. Известна 5-(ацетиламино)-4-[(аминоиминометил)амино]-2,6-ангидро-3,4,5- тридеокси-0-глицеро-0-галактонон-2-эноновая кислота (zanamivir), обладающая активностью по отношению к нейраминидазе вирусов гриппа А и В, а также вируса гриппа H1N1 [J. М. Woods, R. С. Bethell, J. A. Coates, et al. 4-Guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N- acetylneuraminic acid is a highly effective inhibitor both of the sialidase (neuraminidase) and of growth of a wide range of influenza A and В viruses in vitro. Antimicrob Agents Chemother. 1993, 37(7), 1473-14
Figure imgf000004_0001
A3 A4
Поиск высокоэффективных противогриппозных лекарственных препаратов, в том числе обладающих повышенной активностью по отношению к резистентным вирусам гриппа, по-прежнему является одним из основных направлений создания новых фармакологических средств для лечения гриппа. В этой связи актуальным является разработка новых противогриппозных субстанций, фармацевтических композиций и лекарственных препаратов, а также способов их получения и применения.
Раскрытие изобретения
Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения.
«Алкенил» означает алифатическую линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от 2 до 7 атомов углерода и включающую, по крайней мере, одну углерод- углеродную двойную связь. Разветвленная означает, что к линейной алкенильной цепи присоединены один или несколько низших алкильных групп, таких как метил, этил или пропил. Алкильная группа может иметь один или несколько заместителей, например, таких как галоген, алкенилокси, циклоалкил, циано, гидрокси, алкокси, карбокси, алкинилокси, аралкокси, арилокси, арилоксикарбонил, алкилтио, гетероаралкилокси, гетероциклил, гетероциклилалкилокси, алкокси арбонил, аралкоксикарбонил, гетроаралкилоксикарбонил или Rk aRk+iaN-, Rk aRk+1 aNC(=0)-, RkaRk+iaNS02-, где Rk a и Rk+ia независимо друг от друга представляют собой «заместители амино группы», значение которых определено в данном разделе, например, атом водорода, алкил, арил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклил или гетероарил, или Rk a и Rk+ia вместе с атомом N, с которым они связаны, образуют через Rk a и Rk+ia 4 - 7 членный гетероциклил или гетеоцикленил. Предпочтительными алкильными группами являются метил, трифторметил, циклопропилметил, циклопентилметил, этил, н- пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил, 3-пентил, метоксиэтил, карбоксиметил, метоксикарбнилметил, бензилоксикарбонилметил и пиридилметилоксикарбнилметил. Предпочтительными алкенильными группами являются этенил, пропенил, н-бутенил, изо- бутенил, З-метилбут-2-енил, н-пентенил, и циклогексилбутенил.
«Алкил» означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи. Разветвленная означает, что алкильная цепь имеет один или несколько «низших алкильных» заместителей. Алкил может иметь один или несколько одинаковых или различных заместителей («алкильных заместителей») включая галоген, алкенилокси, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, ароил, циано, гидрокси, алкокси, карбокси, алкинилокси, аралкокси, арилокси, арилоксикарбнил, алкилтио, гетероарилтио, аралкилтио, арилсульфонил, алкилсульфонилгетероаралкилокси, аннелированный гетероарилциклоалкенил, аннелированный гетероарилциклоалкил, аннелированный гетероарилгетероцикленил, аннелированныи гетероарилгетероциклил, аннелированныи арилциклоалкенил, аннелированныи арилциклоалкил, аннелированныи арилгетероцикленил, аннелированныи арилгетероциклил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или Rk aRk+iaN-, Rk aRk+iaNC(=0)-, Rk aRk+iaNC(=S)-, Rk aRk+iaNS02-, где Rk a и Rk+ia независимо друг от друга представляют собой «заместители амино группы», значение которых определено в данном разделе, например, водород, алкил, арил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклил или гетероарил, или Rk a и Rk+ia вместе с атомом N, с которым они связаны, образуют через Rk a и Rk+ia 4 - 7 членный гетероциклил или гетероцикленил. Предпочтительными алкильными группами являются метил, трифторметил, циклопропилметил, циклопентилметил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, рет-бутил, н-пентил, 3-пентил, метоксиэтил, карбоксиметил, метоксикарбонилметил, этоксикарбонилметил, бензилоксикарбонилметил метоксикарбонилметил и пиридилметилоксикарбнилметил. Предпочтительными «алкильными заместителями» являются циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонил, аралкокси, арилокси, алкилтио, гетероарилтио, аралкилтио, алкилсульфонил, арилсульфонил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или Rk aRk+iaN-, Rk aRk+iaNC(=0)-, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арил гетеро ци кли л .
«Алкинил» означает алифатическую линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от 2 до 12 атомов углерода и включающую, по крайней мере, одну углерод-углеродную тройную связь. Разветвленная означает, что к линейной алкинильной цепи присоединены один или несколько низших алкильных групп, таких как метил, этил или пропил. Алкильная группа может иметь один или несколько заместителей, например, таких как галоген, алкенилокси, циклоалкил, циано, гидрокси, алкокси, алкинилокси, аралкокси, арилокси, арилоксикарбонил, алкилтио, гетероаралкилокси, гетероциклил, гетероциклилалкилокси, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетроаралкилоксикарбонил или Rk aRk+iaN-, Rk aRk+iaNC(=0)-, Rk aRk+iaNS02-, где Rk a и Rk+ia независимо друг от друга представляют собой «заместители амино группы», значение которых определено в данном разделе, например, атом водорода, алкил, арил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклил или гетероарил, или Rk a и Rk+ia вместе с атомом N, с которым они связаны, образуют через Rk a и Rk+ia 4 - 7 членный гетероциклил или гетероцикленил. Предпочтительными алкильными группами являются метил, трифторметил, циклопропилметил, циклопентилметил, этил, н- пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил, 3-пентил, метоксиэтил, карбоксиметил, метоксикарбнилметил, бензилоксикарбонилметил и пиридилметилоксикарбнилметил. Предпочтительными алкинильными группами являются этинил, пропинил, н-бутинил, изо- бутинил, З-метилбут-2-инил, н-пентинил, бута-1,3-диин и гекса-1,3,5-триин.
«Гидрат» означает стехиометрическую или нестехиометрическую композицию соединения или его соли с водой.
«Лекарственное начало» (лекарственная субстанция лекарственное вещество, drug- substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).
«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции), в виде таблеток капсул инъекций, мазей и др. готовых форм предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.
Нейраминидаза (сиалидаза, ацилнейраминил гидролаза и ЕС 3.2.1.18) является обычным для животных и ряда микроорганизмов ферментом. Она представляет собой глико гидролазу, которая отщепляет альфакетосидикально связанные сиаловые кислоты от гликопротеинов, гликолипидов и олигосахаридов. Многие из микроорганизмов, содержащих нейраминидазу, патогенны по отношению к человеку и другим животным, включая птицу, лошадей, свиней и тюленей. Такие патогенные организмы включают вирус гриппа. Нейраминидаза связана с патогенностью вируса гриппа. Предположительно она содействует элюированию вновь синтезированных вирионов из инфицированных клеток и движению вируса (благодаря ее гидролазной активности) через слизь респираторного тракта.
«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлимых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, алгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения, в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения. «Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально, исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как, холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин и аргинин.
Авторы обнаружили новые ингибиторы нейраминидазы, представляющие собой неизвестные ранее фторзамещенные (311,4Рч,58)-4-ациламино-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоновые кислоты и их эфиры общей формулы фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты.
Figure imgf000010_0001
1
где R представляет собой водород, необязательно замещенный С1-С5алкил, С2- С5алкенил или С2-С5алкинил; Rf представляет собой CH2F или CHF2 радикал.
Новые соединения общей формулы 1 , как установили авторы, неожиданно оказались в 5-259 раз более эффективными ингибиторами нейраминидазы других штамов вирусов гриппа, чем известный озельтамивир карбоксилат А2 (Табл. 1).
Таблица 1. Антинейраминидазная активность (3R,4R,5S)-5-ryaHHAHHO-4- фторацетиламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновая кислота 1.1 и озельтамивир карбоксилата А2 на панели штамов вирусов гриппа.
N° ингибитора
Вирус А2 1.1 ICA2 5o / ICu 5o
1С50, пМ (число экспериментов)
А/Калифорния /07/09 (H1 1) 0,86 ± 0,42 (8) 0,18 ± 0,08 (6) 5
А/Курица/Ростов на Дону /35/07/ (H5N1) 1,78 ± 0,09 (2) 0,20 ± 0,00 (2) 9
А/Перт/261/2009 (H1N1 pdm09; 275 Y) 360 ± 87 (4) 1,39 ± 0,38 (4) 259
B/Brisbane/60/2008 25,42 ± 0,51 (2) 1,27 ± 0,14 (2) 20
В/Перт/211/2001 (197D) 39,24 ± 2,44 (4) 2,08 ±0,71 (4) 19
В/Перт/211/2001 (197Е) 230,2 ± 62,6 (4) 6,65 ± 0,90 (4) 35 Новые соединения общей формулы 1, как установили авторы, оказались более эффективными ингибиторами неираминидазы вирусов гриппа, чем и известный Zanamivir (Zan) (Табл. 2).
Таблица 2. Антинейраминидазная активность (31 ,4К,58)-5-гуанидино-4- фторацетиламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновая кислота 1.1 и Zanamivir (Zan) на панели штамов вирусов гриппа.
Figure imgf000011_0001
И, наконец, авторы установили, что новые соединения более эффективны в культуре клеток MDCK в отношении штаммов вируса гриппа Ia/California 07/09 (HlNl) и высокопатогенного штамма Ia/duck/MN/1525/81 (H5N1) в сравнении с Осельтамивиром карбоксилатом и Zanamivir (Tabl. 3). В частности (ЗК,4 ,58)-5-гуанидино-4- фторацетиламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновая кислота 1.1 в отношении штама Ia/California/07/09 (HlNl) в 13 раз активнее Озельтамивира карбоксилата (А2) и в 20 раз активнее Zanamivir (Zan)., а в отношении высокопатогенного штамма Ia/duck/MN/1525/81 (H5N1) - в 24 раза активнее Осельтамивира карбоксилата и в 16 раз активнее Zanamivir (Zan).
(ЗК,4 ,58)-5-Гуанидино-4-(2-трифторацетиламино)- З-(пентан-З-илокси)- циклогексен-1 -карбоновая кислота А4 показала нейраминидазную активность по отношению к вирусу А/ алифорния/04/09 И 50 = 80 пМ, а к вирусу А/Владивосток/16/09 А4 И 50 > 1000 пМ.-Неизвестная ранее (31 ,4К,58)-5-гуанид,ино-4-фторацетиламино-3-(пентан- 3-илокси)циклогексен-1 -карбоновая кислота 1.1 имеет нейраминидазную активность по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09 в 400 раз больше, чем А4, а по отношению к вирусу А/Владивосток/16/09 - новая кислота 1.1 имеет ИК50 = 4 пМ, т.е. в 250 раз активнее своего известного 4-(2-трифторацетильного) аналога. Более высокую нейраминидазную активность, чем аналог А4 имеет и (ЗК,4 ,5Б)-5-гуанидино-4-дифторацетиламино-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1 -карбоновая кислота 1.4: по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09, соответствующую ИК50 = 0,3 пМ (т.е. в 2,7 раза активнее А2 и в 267 раз активнее А4); по отношению к вирусу А/Владивосток/16/09 - новая кислота 1.4 имеет ИК50 = 7 пМ (т.е. в 1 18 раза активнее А2 и более чем в 140 раз активнее А4).
Таблица 3. Специфическая активность (ЗК.,41 ,58)-5-гуанидино-4-фторацетиламино- 3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1 -карбоновая кислота (1.1) в культуре клеток MDCK в отношении штаммов вируса гриппа Ia/California/07/09 (H1N1) и высокопатогенного штамма Ia/duck/MN/ 1525/81 (H5N1) в сравнении с Осельтамивиром карбоксилатом (А2) и Занамивиром (Zan).
Figure imgf000012_0001
Согласно данному изобретению предпочтительными являются соединения общей формулы 1, в которых R представляет собой водород, метил или этил.
Согласно данному изобретению более предпочтительными соединениями общей формулы 1 являются: (ЗЯ,41 ,58)-5-гуанидино-4-фторацетиламино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1 -карбоновая кислота 1.1, ее метиловый эфир 1.2 и этиловый 1.3 эфир, (ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-дифторацетиламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1 карбоновая кислота 1.4, ее метиловый эфир 1.5 и этиловый 1.6 эфир.
Figure imgf000013_0001
1.4 1.5 1.6
Ингибиторы нейраминидазы вирусов гриппа общей формулы 1 получают, исходя из алкил 4-амино-5-( ире/и-бутоксикарбониламино)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1 - карбоксилата общей формулы 2 по нижеследующей схеме.
Figure imgf000014_0001
8(a,b) 1.1 , 1.4
Новые ингибиторы нейраминидазы вирусов гриппа, представляющие собой неизвестные ранее (ЗК,4К,58)-4-(2-фторацетиламино)- и (3R,4R,5S)-4-(2,2- дифторацетиламино)- 5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1 -карбоновые кислоты и их эфиры общей формулы 1 и их фармацевтически приемлемые соли проявили также высокую противогриппозную активность на животных моделях гриппозной пневмонии. Антинейраминидазную активность соединений определяли по методу, описанному в [Who Collaborating Centre for Reference & Research on Influenza, Australia, Standard Operating Procedure WHO - 025. Reviewed by: Aeron Hurt, Senior Scientist Review Date: 13/3/2009].
Согласно данному изобретению новые соединения общей формулы 1 представляют собой лекарственное начало для приготовления фармацевтической композиции и готовых лекарственных форм для профилактики и лечения гриппа у теплокровных животных и людей.
Предметом данного изобретения является фармацевтическая композиция, включающая в качестве лекарственного начала соединения общей формулы 1 или их фармацевтически приемлемые соли в терапевтически эффективном количестве.
Фармацевтические композиции могут включать фармацевтически приемлемые эксципиенты. Под фармацевтически приемлемым экспициентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители. Фармацевтическая композиция наряду с соединением общей формулы 1 или их фармацевтически приемлемой солью и/или гидратом по настоящему изобретению может включать и другие активные субстанции, в том числе, обладающие противогриппозной активностью, при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов.
При необходимости использования фармацевтической композиции по настоящему изобретению в клинической практике она может смешиваться с традиционными фармацевтическими носителями.
Носители, используемые в фармацевтических композиций по настоящему изобретению, представляют собой носители, которые применяются в сфере фармацевтики для получения распространенных форм, в том числе: в пероральных формах используются связующие вещества, смазывающие агенты, дезинтеграторы, растворители, разбавители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, бесцветные агенты, корригенты вкуса; в формах для инъекций используются антисептические агенты, солюбилизаторы, стабилизаторы; в местных формах используются основы, разбавители, смазывающие агенты, антисептические агенты.
Предметом данного изобретения является способ получения фармацевтической композиции смешением с инертным наполнителем и/или растворителем, по крайней мере, одного лекарственного начала (субстанции) общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли в терапевтически эффективном количестве.
Предметом данного изобретения является также лекарственное средство, обладающее противогриппозной активностью, в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, предназначенное для профилактики лечения гриппа у людей и теплокровных животных, включающее в свой состав противогриппозное лекарственное начало (субстанцию) общей формулы 1 или фармацевтическую композицию, включающую новое лекарственное начало общей формулы 1 в терапевтически эффективном количестве.
Предметом данного изобретения являются также терапевтические коктейли для лечения гриппа, включающие в качестве одного из компонентов новое лекарственное средство или новую фармацевтическую композицию, содержащих в качестве активного компонента, по крайней мере, одно соединение общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль и/или гидрат.
Терапевтический коктейль для « лечения гриппа, наряду с лекарственным средством по данному изобретению, может включать другие известные препараты, предназначенные для лечения гриппа, или препараты, усиливающие иммунную систему пациента.
В соответствии с данным изобретением способ профилактики и лечения гриппа у животных и людей заключается во введении пациенту нового лекарственного средства, новой фармацевтической композиции или нового терапевтического коктейля.
Лекарственные средства могут вводиться через ингалятор, перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или местно). Клиническая дозировка средства общей формулы 1 у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 10 ~ 500 мг, предпочтительно - 50 ~ 300 мг. Поэтому во время приготовления из фармацевтической композиции лекарственного средства по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 10 ~ 500 мг средства общей формулы 1 предпочтительно - 50 ~ 300 мг. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз).
Предметом данного изобретения является также способ ингибирования активности нейраминидазы в естественных условиях, в том числе нейраминидазы гриппа, включающий стадию контактирования соединения общей формулы 1 и нейраминидазы.
Данное изобретение иллюстрируется, но не ограничивается следующими примерами.
Пример 1. Получение (ЗЛ,4 г,55)-этил 4-(2,2-дифторацетамидо)-5-гуанидино-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1- арбоксилата мезилата 1.6*СНз80зН. (3R,4R,5S)-3rnn 4-амино-5-( я еот-бутоксикарбониламино)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилат (2 г, 0.0054 моль, 1 экв), 1#-бензо[с1][1,2,3]триазол-1-ол (0.867 г, 0.0065 моль, 1.2 экв), N1- ((этилимино)метилен)-^ 2-диметилэтан- 1,2 -диамин гидрохлорид (1.239 г, 0.0065 моль, 1.2 экв) и диизопропилэтиламин (2.212 г, 0.0178 моль, 3.3 экв) растворяют в 20 мл ТГФ и по каплям добавляют 2,2-дифторуксусную кислоту ЗЬ (0.624 г, 0.0065 моль, 1.2 экв). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение четырех часов. Затем растворители отгоняют в вакууме, оставшееся масло растворяют в этилацетате, промывают 5% раствором NaHC03, сушат над Na2S04, фильтруют и сушат в вакууме. Выход (3 ?,4Л,55)-этил 5-( ире/и-бутоксикарбониламино)-4-(2,2-дифторацетамидо)-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилата 4Ь составляет 89% (2.15 г). LCMS (М+Н): Найдено 449; Вычислено 448.51. Полученный продукт 4Ь (2.15 г, 0.0048 моль) растворяют в 20 мл 10%-ного раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене и перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем растворители отгоняют в вакууме, оставшееся масло растворяют в этилацетате, промывают 5% раствором NaHC03, сушат над Na2S04, фильтруют и сушат в вакууме. Выход продукта составляет 96% (1.605 г). Дополнительную очистку проводят методом колоночной хроматографии - элюент этилацетат ТГФ или перекристалицацией из гексана. Получают (ЗД,4 ,5.5)-этил 5-амино-4- (2,2-дифторацетамидо)-3-(пентан-3-илоки)циклогексен- 1 -карбоксилат 5Ь, который растворяют в хлористом метилене и добавляют эквивалентное количество метансульфоновой кислоты. Через 10 минут растворитель отгоняют, полученный продукт промывают гексаном и сушат в вакууме. Выход мезилата 5Ь-СНз80 Н 90%. LCMS (М+Н): Найдено 349; Вычислено 348.39. Ή ЯМ? (DMSO-d6), 400 МГц: 8.91 (д, J= 13,2 Гц, 1Н), 7.83 (уш, ЗН), 6.74 (с, 1Н), 6.22 (т, J = 54 Гц, 1Н), 4.31 (д, J= 8.4 Гц, 1Н), 4.16 (к, J = 7,2 Гц, 2Н), 3.45 (м, 1Н), 3.15 (д.д, J, = 1 1.2 Гц, J2 = 8,8 Гц, 1Н), 2.59 (д.д., J, = 18 Гц, J2 = 6 Гц, 1Н), 2.38 (м, Ш), 2.31 (с, ЗН), 1.66 (м, 1Н), 1.57 (м, 1Н), 1.47 (м, 1Н), 1.39 (м, 1Н), 1.22 (T, J = 7.6 Гц, ЗН), 0.891 (т, J = 7.2 Гц, ЗН), 0.842 (т, J = 7.2 Гц, ЗН). (3R,4R,5S)-3mn 5-амино-4-(2,2- дифторацетамидо)-3-(пентан-3-илоки)циклогексен-1-карбоксилата 5Ь (1.6 г; 0.004598 моль; 1 экв) растворяют в 16 мл ДМФА и охлаждают в ледяной бане. Затем добавляют триэтиламин (2.57 г; 0.0253 моль; 5.5 экв), Л^-ди-Ьос-тиомочевину (0.00505 моль; 1.35 г; 1.1 экв) и хлорид ртути(П) (0.0055 моль; 1.49 г; 1.2 экв). Полученную смесь перемешивают при охлаждении в ледяной бане в течение 1.5 часов. По окончании реакции осадок отфильтровывают через селит, ДМФА отгоняют в вакууме, полученное масло растворяют в этилацетате, промывают 5% раствором NaHC03, сушат над Na2S04, фильтруют и сушат в вакууме. Получают 1.82 г (67%) (ЗЛ,4Л,55)-этил 5-((2)-2,3-бис(отре/и- бутоксикарбонил)гуанидино)-4-(2,2-дифторацетамидо)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1- карбоксилата 6b. LCMS (М+Н): Найдено 591 ; Вычислено 590.67. (ЗЛ,4 ?,55 -этил 5-((Z)-2,3- бис(тре/и-бутоксикарбонил)гуанидино)-4-(2,2-дифторацетамидо)-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоксилат 6Ь (1.82 г; 0.00308 моль) растворяют в 20 мл 10%-ного раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене и перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем растворители отгоняют в вакууме, оставшееся масло растворяют в этилацетате, промывают 5% раствором NaHC03, сушат над Na2S04, фильтруют и сушат в вакууме. Получают 1.1 г (92%) (3./?,4./?,55)-этил 4-(2,2- дифторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилата 1.6 Полученный продукт растворяют в хлористом метилене и добавляют эквивалентное количество метансульфоновой кислоты. Через 10 минут растворитель отгоняют, полученный продукт промывают гексаном и сушат в вакууме. Получают (ЗЛ,4Л,55)-этил 4- (2,2-дифторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилата мезилата 1.6 CH3S03H, выход 95%. LCMS (М+Н): Найдено 391; Вычислено 390.43. Ή ЯМР (DMSO-d6), 400 МГц: 8.67 (д, J= 8,4 Гц, 1Н), 7.63 (д, J= 9.6Гц, 1Н), 6.65 (с, 1Н), 6.27 (т, J = 53.6 Гц, Ш), 4.14 (к, J = 7,2 Гц, 2Н), 4.12 (м, 7Н), 3.54 (м, 1Н), 3.41 (м, 1Н), 2.6 (м, 1Н), 2.36 (с, ЗН), 1.66 (м, 1Н), 1.44 (м, 4Н), 1.22 (T, J= 7.2 Гц, ЗН), 0.856 (T, J= 7.6 Гц, ЗН), 0.795 (T, J= 7.6 Гц, ЗН). Используя в качестве исходного соединения 2 (ЗЛ,4Л,55)-аллил-4-амино-5-(т/?е/и- бутоксикарбониламино)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилат и (3/?,4i?,5S)-npon-
2- инил-4-амино-5-(от ?е/«-бутоксикарбониламино)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1- карбоксилат аналогично получали аллиловый эфир (3R,4R,5S)-5-ryaHHflHHo-4-(2,2- дифторацетамидо)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.7 (LCMS (М+Н): найдено 354; вычислено 353.44, по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09 ИК50 <1 пМ) и προπ-2-иниловый эфир (ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-(2,2,-дифторацетамидо)-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.8 (LCMS (М+Н): найдено 352; вычислено 351.42, по отношению к вирусу АЛ алифорния/04/09 ИК50 <1 пМ).
Используя в качестве исходного соединения соответствующий (3 ?,4/г,55)-4-амино-5- (/и/?ети-бутоксикарбониламин)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилат 2 получали:
2-циклогексилэтиловый эфир (ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-(2,2-дифторацетамидо)-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.9 (LCMS (М+Н): найдено 460; вычислено 459.55, по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09 ИК50 <1 пМ);
2-фенилэтиловый эфир (3R,4R,5S)- 5-гуанидино-4-(2,2-дифторацетамидо)-3-(пентан-
3- илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.10 (LCMS (М+Н): найдено 454; вычислено 453.51, по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09 ИК50 <1 пМ);
2-пиридин-З-илэтиловый эфир (3R,4R,5S)- 5-гуанидино-4-(2,2-дифторацетамидо)-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.11 (LCMS (М+Н): найдено 455; вычислено 454.49, по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09 ИК50 <1 пМ);
2-метоксиэтиловый эфир (3R,4R,5S)- 5-гуанидино-4-(2,2-дифторацетамидо)-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.12 (LCMS (М+Н): найдено 422; вычислено 421.46, по отношению к вирусу А/Калифорния/04/09 ИК50 <1 пМ).
Пример 2. (З ,41.,55)-этил 4-(2-фторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоксилата мезилат ЬЗ-СНзБОзН получают по методике, приведенной в примере 1 с использованием монофторуксусной кислоты в качестве ацилирующего агента. LCMS (М+Н): Найдено 373; Вычислено 372.44.
Пример 3. (ЗЛ,4 ?,55)-4-(2,2-дифторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоновая кислота 1.4. К раствору 250 мг (ЗЛ,4Л,55 -этил 5- ((2)-2,3-бис(отре»7-бутоксикарбонил)гуанидино)-4-(2,2-дифторацетамидо)-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоксилата 6Ь в 5 мл диоксана добавляют 2,5 мл 5%-го раствора гидроксида лития и перемешивают реакционную массу при комнатной температуре в течение 45 минут. Затем гидроксид лития пассивируют добавляя 300 мкл уксусной кислоты, растворители отгоняют в вакууме. Полученный осадок экстрагируют изопропиловым спиртом, экстракт сушат над Na2S04 и в вакууме. Получают 200 мг (84%) (ЗЛ,4/г,55)-5-((2)-2,3-бис(т/7еот-бутоксикарбонил)гуанидино)-4-(2,2-дифторацетамидо)-3- (пентан-3-илокси)циклогексен-1 -карбоксильной кислоты 8b. LCMS (М+Н): Найдено 563; Вычислено 562.62. Растворяют 200 мг полученной кислоты 8Ь в 2 мл 10%-ного раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене и перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем растворители отгоняют в вакууме. (3R,4R,5S)-4- (2,2-дифторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновую кислоту 1.4 выделяют методом HPLC. LCMS (М+Н): Найдено 363; Вычислено 362.28. Ή ЯМР (DMSO-d6), 400 МГц: 8.68 (д, J = 8,4 Гц, 1Н), 7.6д (д, J = 10 Гц, 1Н), 7.26 (уш, 2Н), 6.91 (уш, 2Н), 6.63 (с, 1Н), 6.27 (т, J= 53.6 Гц, 1Н), 4.18 (д, J= 8 Гц, 2Н), 4.09 (м, 1Н), 3.54 (к, J = 10 Гц, 1Н), 3.39 (м, 2Н), 2.57 (д.д, J, = 18 Гц, J2 = 6 Гц, 1Н), 2.31 (м, 1Н), 1.44 (м, 4Н), 0.85 (т, J= 8 Гц, ЗН), 0.795(т, J= 7.6 Гц, ЗН).
Пример 4. (З ,4/?,55 -4-(2-фторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоновую кислоту 1.1 получают аналогично примеру 3. LCMS (М+Н): Найдено 345; Вычислено 345. Ή ЯМР (DMSO-d6), 400 МГц: 8.16 (д, J = 10 Гц, 1Н), 7.56 (д, J= 9.6 Гц, 1Н), 6.64 (с, Ш), 4.80 (д, J= 47.3 Гц, 2Н), 4.21 (д, J= 8,4 Гц, 1Н), 3.89 (к, J = 10.4 Гц, 1Н), 3.71 (м, 1Н), 2.67 (м, 1Н), 2.25 (м, 1Н), 1.42 (м, 4Н), 0.85 (т, J = 7.2 Гц, ЗН), 0.78 (т, J = 7.2 Гц, ЗН).
Пример 5. (3/?,4 ,55)-Метил 4-(2-фторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоксилата мезилат 1.2 -CHjSC H был получен по методике, приведенной в примере 1 с использованием в качестве исходного (3/?,4Л,55)-метил 4-амино- 5-(т/>е/и-бутоксикарбониламино)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоксилата и монофторуксусной кислоты в качестве ацилирующего агента. LCMS (М+Н): Найдено 359; Вычислено 358.42.
Пример 6. (3 ?,4/г,55)-Метил 4-(2,2-дифторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоксилата мезилат 1.5 'СНзвОзН был получен по методике, приведенной в примере 1 с использованием в качестве исходного (ЗЛ,4/.,55)-метил 4-амино- 5-(/ире и-бутоксикарбониламино)-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1карбоксилата и дифторуксусной кислоты в качестве ацилирующего агента. LCMS (М+Н): Найдено 373; Вычислено 372.44.
Пример 7. Получение фармацевтической композиции в форме таблеток.
Смешивают 1600 мг крахмала, 1600 мг измельченной лактозы, 400 мг талька и 1000 мг (3/г,4/г,55)-4-(2-фторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.1. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 560 мг каждая.
Пример 8. Получение фармацевтической композиции в форме капсул. Тщательно смешивают (3/?,4/?,55)-4-(2-фторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.1 с порошком лактозы в соотношении 2 : 1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.
Пример 9. Получение фармацевтической композиции для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций. Смешивают 500 мг (3R,4R,5Si)-4-(2- фторацетамидо)-5-гуанидино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновой кислоты 1.1 с 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропиленгликоля и 100 мл инъекционной воды. Полученный раствор фильтруют и помещают по 1 мл в ампулы, которые запаивают.
Пример 10. Определение активности соединений общей формулы 1 по отношению к нейраминидазе вирусов гриппа. В предварительных экспериментах были определены рабочие разведения для штаммов аллантоисных вирусов гриппа A/California/07/09 (H1N1) и А/Аичи/2/69 (H3N2), а также для полученного в культуре клеток озельтамивир резистентного вируса гриппа А/Владивосток/ 16/09 (H1N1). Для этого было приготовлено по 60 мкл каждого двухкратно разведеного вируса на реакционной буферной смеси (РБС, 50 мМ MES, 5 мМ СаС12, рН 6,5) в 96-луночном планшете с круглым дном. Из этого планшета по 50 мкл двухкратно разведеного вируса было перенесено в 96- луночные планшеты с плоским дном для измерения флуоресценции (FluoroNunc, черные, кат. No. 237105), далее к ним был добавлен равный объем субстратного буфера (СБ, 12,5 мМ 2'-(4-метилумбеллиферил)-а-0-М-ацетилнейраминовой кислоты, Sigma, на 40 мМ ацетатного буфера рН=5,8). В качестве контроля были использованы лунки, к которым вместо вируса было добавлено по 50мкл РБС. После инкубации планшета при 37° в течение 1 часа при слабом покачивании к каждой лунке планшета было добавлено по 100 мкл стоп- pacTBopa(2.225mL 0.824М NaOH в l l.OmL этанола), после чего было проведено измерение флуоресценции на приборе Varioskan Flach (Thermo Scientific) при λεχ =360 нм и
Figure imgf000022_0001
448 нм. Для дальнейшей работы были выбраны те разведения вирусов, которые соответствовали середине линейного участка кривой зависимости разведения вируса от величины флуоресценции. Для определения антинейраминидазной активности соединений в 96- луночные планшеты с плоским дном для измерения флуоресценции (FluoroNunc, черные, кат. No. 237105) в лунки рядов от В до Н было добавлено по 50 мкл приготовленных на РБС разведений соединений общей формулы 1 и аналогов формулы А2 и формулы А4 (концентрации 0,03;0,3; 3; 30; 300; 3000; 30000 нм - каждая концентрация на ряд). В качестве вирусного контроля были использованы лунки ряда А, к которым было добавлено по 50 мкл РБС. Далее к соответствующим лункам было добавлено 50 мкл выбранных рабочих разведений каждого из вирусов на РБС. В качестве контроля были использованы лунки, к которым вместо вируса был добавлен такой же объем РБС. После перемешивания и инкубации при комнатной температуре в течение 45 минут ко всем лункам был добавлен равный объем СБ. После перемешивания и инкубации планшета при 37° в течение 1 часа к каждой лунке планшета было добавлено по 100 мкл стоп-раствора. Измерение флуоресценции было проведено на приборе Varioskan Flach (Thermo Scientific) при λβΧ =360 нм и Xem-448 нм. Все определения проводились не менее чем в двух повторах (две лунки планшета). Процент ингибирования нейраминидазной активности изучаемым веществом общей формулы 1 определяли по формуле: процент ингибирования = 100-(УЕФ опыта - УЕФ контроля / УЕФ вирусного контроля в отсутствии соединения - УЕФ контроля). Концентрация препарата, уменьшающая значение величины УЕФ на 50%, принималась за ингибирующую концентрацию 50 (ИК50).
Пример 11. Изучение противогриппозной активности соединений общей формулы 1 (1.1, 1.З., 1.4 и 1.6) на модели гриппозной пневмонии мышей. Предварительно взвешенные мыши (самки нелинейные, средний вес 12-15 г) инфицировались интраназально под легким эфирным наркозом вирусом гриппа А/Аичи/2/69 (H3N2) (10 ЛД50 в 50 мкл). В предварительном опыте было проведено определение ЛД50 путем титрования аллантоисного вируса на таких же мышах, которые затем использовались в основном опыте. Была использована следующая схема лечения соединениями: за 24 часа до инфицирования, за 1 час до инфицирования, через 24 часа и далее 1 раз в день в течение 5 дней. Для перорального введения использовали одноразовый инсулиновыи шприц со специальной иглой (лаваж), исследовался эффект следующих доз: 25 мг/кг/день соединений в объеме 100 мкл. В качестве препарата сравнения был использован Тамифлю в дозах от 5 мг/кг/день до 30 мг/кг/день. В группе «вирусного контроля», в группах «леченых соединениями» общей формулы 1 и Тамифлю формулы A3 было по 10 мышей в каждой. За лечеными и контрольными животными велось ежедневное наблюдение, в первые 5 дней после инфицирования мышей взвешивали каждый день, далее - через день. Химиотерапевтическую активность соединений на модели гриппозной пневмонии мышей оценивали по показателю защиты от смертельной вирусной инфекции, и снижению веса в группах животных, леченых препаратом по сравнению с контрольной группой. Уменьшение или увеличение веса рассчитывалось отдельно для каждой мыши и выражалось в процентах. При этом за 100% принимался вес животного перед инфицированием. Для всех мышей одной группы определялось среднее значение процента потери или увеличения веса.
В предварительном опыте определяют дозу вируса, содержащую 10 ЛД50 в объеме 100 мкл. Всех животных в опыте заражают этой дозой вируса. Эффективность действия соединений общей формулы 1 на модели гриппозной пневмонии мышей оценивалась по количеству животных, выживших после инфицирования вирусом, средней продолжительности жизни и изменению веса инфицированных животных.
Было установлено, что на 7-й день наблюдения все мыши, зараженные вирусом и не прошедшие лечение указанными соединениями (группа «вирусного контроля»), погибли.
Проведенные эксперименты показали, что к последнему дню гибели животных из группы «вирусного контроля» лечение указанными соединениями общей формулы 1 и Тамифлю животных из групп «леченных соединениями» позволило предотвратить их гибель полностью.
Противогриппозная эффективность изученных препаратов общей формулы 1 и Тамифлю формулы A3 выражается в снижении темпов потери веса в группах леченных мышей по сравнению с группой «вирусного контроля». Потеря веса животного является одним из клинических признаков проявления гриппозной пневмонии. Большее снижение веса животного свидетельствует о более тяжелом протекании заболевания. Взвешивание мышей проводилось на 1, 2, 3, 4, 5 дни после инфицирования, а далее через день до 15 дня наблюдения. Было установлено, что в группе вирусного контроля животные больше всего теряли вес на 5 день после инфицирования (около 10%). В отличие от вирусного контроля в группах животных, проходящих лечение всеми указанными соединениями общей формулы 1 и Тамифлю, в среднем не наблюдалось потери веса. Начиная с 9 дня, все животные в группах «леченных соединениями» активно и стабильно набирали в весе.
Таким образом, показана высокая эффективность лечения гриппозной пневмонии мышей соединениями формулы 1.1, 1.3, 1.4 и 1.6.
Промышленная применимость
Изобретение может быть использовано в медицине и ветеринарии.

Claims

Формула изобретения
1. Фторзамещенные (31 ,4К,58)-4-ациламино-5-гуанидино-3-(пентан-3- илокси)ци логексен -1- карбоновые кислоты и их эфиры формулы 1 и их фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты,
Figure imgf000025_0001
1
где R представляет собой водород, необязательно замещенные С1-С5алкил, С2- С5алкенил или С2-С5алкинил; Rf представляет собой CH2F или CHF2 .
2. Соединения по п.1, представляющие собой соединения общей формулы 1, в которых R представляет собой водород, метил или этил.
3. Соединения по п.1, представляющие собой
(ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-фторацетиламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1- карбоновая кислота,
метиловый эфир (31 ,4К,58)-5-гуанидино-4-фторацетиламино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1 -карбоновой кислоты,
этиловый эфир (ЗК,4 ,58)-5-гуанидино-4-фторацетиламино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен-1 -карбоновой кислоты,
(ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-дифторацетиламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1- карбоновая кислота,
метиловый эфир (ЗК,4К,58)-5-гуанидино-4-дифторацетиламино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен- 1 -карбоновой кислоты,
этиловый эфир (ЗЯ,4К,58)-5-гуанидино-4-дифторацетиламино-3-(пентан-3- илокси)циклогексен- 1 -карбоновой кислоты.
4. Лекарственное начало, обладающее активностью в отношении нейраминидазы, представляющее собой соединение по любому из пунктов 1-3.
5. Фармацевтическая композиция, обладающая противовирусной активностью и предназначенная для лечения гриппа и сопутствующих заболеваний, вызванной вирусом гриппа, включающая лекарственное начало по п. 4 в терапевтически эффективном количестве.
6. Фармацевтическая композиция по п. 5, в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку.
7. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 5 или 6, для лечения пневмонии, обусловленной вирусом гриппа, в эффективном количестве.
8. Способ ингибирования активности нейраминидазы, заключающийся в контактировании нейраминидазы с соединением по любому из пунктов 1-3.
9. Способ по п.8, в котором в качестве нераминидазы используют нераминидазу вируса гриппа.
10. Способ профилактики и лечения гриппа и заболеваний, обусловленных вирусом гриппа, заключающийся во введении терапевтически эффективного количества лекарственного начала по п. 4, или фармацевтической композиции по любому из пунктов 5-7.
PCT/RU2013/000384 2012-05-12 2013-05-07 Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси) циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения WO2013172741A2 (ru)

Priority Applications (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BR112014028362-1A BR112014028362B1 (pt) 2012-05-12 2013-05-07 Ácidos (3r, 4r, 5s)-5-guanidino-4-acetamido-3-(pentan-3-iloxi)cicloexeno-1-carboxílicos flúor substituídos, os seus ésteres, composição farmacêutica e uso da mesma
MX2014013761A MX360369B (es) 2012-05-12 2013-05-07 Acidos (3r,4r,5s)-5-guanidino-4-acetamido-3-(pentan-3-iloxi)cicloh exen-1-carboxilicos fluorosustituidos, sus esteres y uso de los mismos.
CN201380024800.0A CN104284884B (zh) 2012-05-12 2013-05-07 氟取代的(3r,4r,5s)-5-胍基-4-乙酰氨基-3-(戊烷-3-基氧基)环己烯-1-甲酸、它们的酯及它们的应用
EA201401238A EA024765B1 (ru) 2012-05-12 2013-05-07 Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения
JP2015512601A JP6034960B2 (ja) 2012-05-12 2013-05-07 フッ素置換（３ｒ、４ｒ、５ｓ）−５−グアニジノ−４−アセトアミド−３−（ペンタン−３−イルオキシ）シクロヘキセン−１−カルボン酸、そのエステル及びその使用
EP13791641.7A EP2848606B1 (en) 2012-05-12 2013-05-07 Fluoro-substituted (3r, 4r, 5s)-5-guanidino-4-acylamino-3-(pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acids, esters thereof and a method for the use thereof
DK13791641.7T DK2848606T3 (en) 2012-05-12 2013-05-07 FLUORO-SUBSTITUTED (3R, 4R, 5S) -5-GUANIDINO-4-ACYLAMINO-3- (PENTAN-3-YLOXY) CYCLOHEXEN-1-CARBOXYLIC ACIDS, ESTERS THEREOF AND A PROCEDURE FOR USE THEREOF
KR1020147034876A KR101902567B1 (ko) 2012-05-12 2013-05-07 플루오로치환된 (3r,4r,5s)-5-구아니디노-4-아세트아미도-3-(펜탄-3-일옥시)사이클로헥센-1-카복실릭 엑시드, 이의 에스테르 및 이의 용도
PL13791641T PL2848606T3 (pl) 2012-05-12 2013-05-07 Fluoropodstawione kwasy (3R, 4R, 5S)-5-guanidyno-4-acyloamino-3-(pentan-3- yloksy)cyklohekseno-1-karboksylowe, ich estry i sposób ich stosowania
AU2013263513A AU2013263513B2 (en) 2012-05-12 2013-05-07 Fluoro-substituted (3R, 4R, 5S)-5-guanidino-4-acylamino-3-(pentan-3-yloxy) cyclohexene-1-carboxylic acids, esters thereof and a method for the use thereof
CA2872733A CA2872733C (en) 2012-05-12 2013-05-07 Fluorosubstituted (3r,4r,5s)-5-guanidino-4-acetamido-3-(pentan-3-yloxy)cyclohexene-1-carboxylic acids, their esters and use thereof
UAA201410979A UA113201C2 (xx) 2012-05-12 2013-07-05 Фторзамісні (3r,4r,5s)-5-гуанідино-4-фторациламіно-3-(пентан-3-ілокси)циклогексен-1-карбонові кислоти, їх ефіри і спосіб застосування
ZA2014/08026A ZA201408026B (en) 2012-05-12 2014-11-03 Flouro-substituted (3r,2r,5s)-5-guanidino-4-acylamino-3-(pentan-3-yloxy)cyclohexene-1-carbixylic acids, esters thereof and method for the use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012119272 2012-05-12
RU2012119272/04A RU2489422C1 (ru) 2012-05-12 2012-05-12 Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2013172741A2 true WO2013172741A2 (ru) 2013-11-21
WO2013172741A3 WO2013172741A3 (ru) 2014-01-09

Family

ID=49159508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2013/000384 WO2013172741A2 (ru) 2012-05-12 2013-05-07 Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси) циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения

Country Status (17)

Country Link
US (1) US8895613B2 (ru)
EP (1) EP2848606B1 (ru)
JP (1) JP6034960B2 (ru)
KR (1) KR101902567B1 (ru)
CN (1) CN104284884B (ru)
AU (1) AU2013263513B2 (ru)
BR (1) BR112014028362B1 (ru)
CA (1) CA2872733C (ru)
DK (1) DK2848606T3 (ru)
EA (1) EA024765B1 (ru)
HU (1) HUE035856T2 (ru)
MX (1) MX360369B (ru)
PL (1) PL2848606T3 (ru)
RU (1) RU2489422C1 (ru)
UA (1) UA113201C2 (ru)
WO (1) WO2013172741A2 (ru)
ZA (1) ZA201408026B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103923060A (zh) * 2014-03-27 2014-07-16 山东大学 奥司他韦衍生物及其制备方法和应用

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106905193B (zh) * 2017-02-15 2018-11-27 中国药科大学 芳酰基胍基奥司他韦羧酸衍生物及其制备方法和应用
US20190081317A1 (en) * 2017-09-11 2019-03-14 Andreas Keil Web coating and calendering system and method
CN110272381A (zh) * 2019-06-19 2019-09-24 五邑大学 含吡啶片段的奥司他韦类似物及其应用
WO2022022448A1 (zh) * 2020-07-29 2022-02-03 广州市恒诺康医药科技有限公司 神经氨酸酶抑制剂类化合物、其药物组合物及其用途

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AUPM354694A0 (en) * 1994-01-27 1994-02-17 Biota Scientific Management Pty Ltd Chemical compounds
SI9620042A (sl) * 1995-02-27 1998-12-31 Gilead Sciences, Inc. Novi selektivni inhibitorji virusnih ali bakterijskih neuraminidaz
JP3233392B2 (ja) * 1998-01-22 2001-11-26 三共株式会社 ノイラミン酸誘導体を含有する抗インフルエンザ薬
US6518048B2 (en) * 2000-04-10 2003-02-11 Hoffmann-La Roche Inc. Stereo-specific synthesis of shimikic acid derivatives with improved efficiency
EP2276479B1 (en) * 2008-04-15 2014-07-02 SineVir Therapeutics LLC Prodrugs of neuraminidase inhibitors
RU2469020C1 (ru) * 2011-11-08 2012-12-10 Александр Васильевич Иващенко (3r,4r,5s)-5-амино-4-ациламино-3-(1-этил-пропокси)-циклогекс-1-ен-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BERGE S.M. ET AL.: "Pharmaceutical Salts", J.PHARM.SCI., vol. 66, 1977, pages 1 - 19
C. U. KIM; W. LEW; M. A. WILLIAMS ET AL., J. AM. CHEM. SOC., vol. 119, 1997, pages 681 - 690
J. C. ROHLOFF; K. M. KENT; M. J. POSTICH ET AL., J. ORG. CHEM., vol. 63, 1998, pages 4545
J. M. WOODS; R. C. BETHELL; J. A. COATES ET AL.: "4-Guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid is a highly effective inhibitor both of the sialidase (neuraminidase) and of growth of a wide range of influenza A and B viruses in vitro", ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER, vol. 37, no. 7, 1993, pages 1473 - 1479
Q.-S. DU; R.-B. HUANG; Y.-T. WEI; Z.-W. PA; L.-Q. DU; K.-C. CHOU: "Fragment-Based Quantitative Structure-Activity Relationship (FB-QSAR) for Fragment-Based Drug Design", J. COMPUT. CHEM., vol. 30, no. 2, 2008, pages 295 - 304
See also references of EP2848606A4

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103923060A (zh) * 2014-03-27 2014-07-16 山东大学 奥司他韦衍生物及其制备方法和应用
CN103923060B (zh) * 2014-03-27 2016-05-25 山东大学 奥司他韦衍生物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
DK2848606T3 (en) 2017-10-02
EA024765B1 (ru) 2016-10-31
RU2489422C1 (ru) 2013-08-10
US20130303609A1 (en) 2013-11-14
EP2848606B1 (en) 2017-08-30
ZA201408026B (en) 2015-11-25
US8895613B2 (en) 2014-11-25
EP2848606A4 (en) 2015-12-23
PL2848606T3 (pl) 2018-01-31
BR112014028362B1 (pt) 2022-02-01
CN104284884A (zh) 2015-01-14
MX2014013761A (es) 2015-02-04
CA2872733C (en) 2017-03-21
WO2013172741A3 (ru) 2014-01-09
UA113201C2 (xx) 2016-12-26
EA201401238A1 (ru) 2015-02-27
CN104284884B (zh) 2016-07-13
AU2013263513A1 (en) 2014-11-06
JP6034960B2 (ja) 2016-11-30
MX360369B (es) 2018-10-29
JP2015521186A (ja) 2015-07-27
AU2013263513B2 (en) 2016-10-06
EP2848606A2 (en) 2015-03-18
BR112014028362A2 (pt) 2018-04-17
KR20150017734A (ko) 2015-02-17
KR101902567B1 (ko) 2018-09-28
HUE035856T2 (hu) 2018-05-28
CA2872733A1 (en) 2013-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9771361B2 (en) Inhibitors of influenza viruses replication
JP5509080B2 (ja) 抗インフルエンザ活性を有するオセルタミビル含有ホスホネートコンジナーの合成
WO1999033781A1 (en) Substituted cyclopentane and cyclopentene compounds useful as neuraminidase inhibitors
RU2489422C1 (ru) Фторзамещенные (3r,4r,5s)-5-гуанидино-4-ациламино-3-(пентан-3-илокси)циклогексен-1-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения
KR101422744B1 (ko) （１ｓ，２ｓ，３ｓ，４ｒ）－３－［（１ｓ）－１－아세틸아미노－２－에틸－부틸］－４－구아니디노－２－하이드록시－사이클로펜틸―１－카복실산 하이드레이트 및 이의 약제학적 용도
EP0933993A1 (en) Substituted cyclopentane compounds useful as neuraminidase inhibitors
RU2469020C1 (ru) (3r,4r,5s)-5-амино-4-ациламино-3-(1-этил-пропокси)-циклогекс-1-ен-карбоновые кислоты, их эфиры и способ применения
WO2016007046A1 (ru) Замещенные 2-тиоксо-имидазолидин-4-оны и их спироаналоги, противораковый активный компонент, фармацевтическая композиция, лекарственный препарат, способ лечения рака простаты
EP3294735B1 (en) Inhibitors of influenza viruses replication
JP2022500375A (ja) ピリドピラジン系及びピリドトリアジン系インフルエンザウィルス複製阻害剤
CN112771048B (zh) 流感病毒复制抑制剂及其中间体和用途
CN110240624B (zh) 一种雄甾烷衍生物及其制备方法与应用
CN114502150B (zh) 一种用于治疗病毒性感冒的药物组合物及其制剂
RU2520836C1 (ru) (3r,4r,5s)-4-амино-5-(2,2-дифторацетиламино)-3-(1-этилпропокси)-циклогекс-1-енкарбоновая кислота и ее эфиры, способ их получения и применения
CN113116899A (zh) 一种用于治疗流感的药物组合物及含有该药物组合物的制剂

Legal Events

Date Code Title Description
DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: A201410979

Country of ref document: UA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2872733

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013263513

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20130507

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2014/013761

Country of ref document: MX

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015512601

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2014/16289

Country of ref document: TR

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2013791641

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2013791641

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201401238

Country of ref document: EA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20147034876

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13791641

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112014028362

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112014028362

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20141112