WO2013077337A1 - 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法 - Google Patents

組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2013077337A1
WO2013077337A1 PCT/JP2012/080106 JP2012080106W WO2013077337A1 WO 2013077337 A1 WO2013077337 A1 WO 2013077337A1 JP 2012080106 W JP2012080106 W JP 2012080106W WO 2013077337 A1 WO2013077337 A1 WO 2013077337A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
substrate
section
small pieces
tissue
dividing
Prior art date
Application number
PCT/JP2012/080106
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
森本　伸彦
Original Assignee
オリンパス株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by オリンパス株式会社 filed Critical オリンパス株式会社
Priority to CN201280057563.3A priority Critical patent/CN103959036A/zh
Priority to EP12851303.3A priority patent/EP2784473A4/en
Priority to JP2013545938A priority patent/JP6210882B2/ja
Publication of WO2013077337A1 publication Critical patent/WO2013077337A1/ja
Priority to US14/282,498 priority patent/US20140255978A1/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N1/31—Apparatus therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/08—Homogenizing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N1/31—Apparatus therefor
    • G01N1/312—Apparatus therefor for samples mounted on planar substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
    • G01N2001/2873—Cutting or cleaving
    • G01N2001/288—Filter punches

Definitions

  • the present invention relates to a tissue dividing device, a cell sorting device, a cell sorting system, a tissue display system, a substrate, an extension member, a tissue dividing method, and a cell sorting method.
  • an LMD (Laser Microdetection) method is known as a technique for cutting and collecting a micro area of about several tens of microns from a tissue section used for pathological diagnosis or the like (see, for example, Non-Patent Document 1). .
  • a minute area to be collected from a slice is irradiated with a UV laser to cut the minute area from the slice.
  • Leica MICROSYSTEMS “Leica LMD6500 Leica LMD7000”, P.I. 2, [online], [search August 30, 2012], Internet ⁇ URL: http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20LMD7000/Brochures/LMD6500_7000_EN.pdf>
  • the present invention has been made in view of the above-described circumstances, and is a tissue dividing apparatus that can divide and collect a section of a living tissue into pieces of a size including a sufficient amount of cells with a simple configuration and operation.
  • An object of the present invention is to provide a cell sorting device, a cell sorting system, a tissue display system, a substrate, an extension member, a tissue dividing method, and a cell sorting method.
  • the present invention provides the following means.
  • a substrate having a surface to which a section of biological tissue can be attached, a substrate provided so as to be divided into a plurality of small pieces, and the substrate by dividing the substrate into a plurality of small pieces.
  • a tissue division apparatus provided with the division part which divides
  • the section pasted on the substrate is obtained by a simple configuration and operation in which the section on which the biological tissue section is pasted is divided into a plurality of small pieces by the dividing section. At the same time, it can be divided into pieces having the same shape as the small pieces, and the pieces attached to the small pieces together with the small pieces can be collected. Further, since the slice is dynamically divided together with the substrate, the thickness of the slice and the size of the fragment are not strictly limited as compared with the LMD method. Thus, by increasing the thickness of the slice or by increasing the size of the piece, the slice can be divided into sized pieces containing a sufficient amount of cells.
  • the substrate includes an assembly of the plurality of small pieces divided in advance, and the dividing unit applies a force for moving the small pieces relatively to the substrate. May be divided.
  • substrate is formed with the groove
  • the dividing unit may apply a force that relatively moves the small pieces in a direction intersecting the surface to the substrate.
  • the division unit may be configured to move some of the plurality of small pieces in the intersecting direction. By doing this, it is possible to move some small pieces in a substantially normal direction of the substrate surface and divide them into other small pieces, and to cut off a part of the section attached to the surface of some small pieces. it can.
  • the partial small piece may be a small piece to which a region to be collected of the slice is attached.
  • the dividing portion includes a support member that supports at least one of the surface on which the piece of the small piece is pasted and the surface opposite to the surface,
  • the partial piece may be moved in the intersecting direction by moving the support member in the intersecting direction.
  • the dividing unit may further include a dividing auxiliary unit that assists in dividing the section attached to the small piece.
  • the division assisting portion is arranged with the substrate sandwiched between the support member and the end surface thereof facing the substrate, and the end surface has a hole into which the small piece moved by the support member can be inserted. The angle formed by the end surface and the inner surface of the hole may assist division of the section.
  • the dividing unit may press the one surface in the intersecting direction by the support member. By doing in this way, a part of small piece can be moved easily.
  • the support member supports a surface on which the section is attached with the section interposed therebetween, and the support member and the section It is good also as providing the protective member arrange
  • an adsorption member that is disposed between the support member and the surface on the opposite side of the small piece and that adsorbs the surface on the opposite side is provided.
  • the support member may pull the opposite surface of the small piece in the intersecting direction. By doing in this way, a part of small piece can be moved easily.
  • the dividing portion supports the surface on which the section of the small piece is attached and the surface on the opposite side while being opposed to each other with the substrate interposed therebetween, and intersects. It is good also as providing the said 2 supporting member moved integrally in the direction.
  • a surface having a surface to which a section of biological tissue can be attached, a substrate provided so as to be divided into a plurality of small pieces, and the substrate by dividing the substrate into a plurality of small pieces.
  • a cell sorting apparatus including a dividing unit that divides a pasted section into pieces having substantially the same shape as the small piece, and a collection unit that collects the piece of the section divided by the dividing unit.
  • a third aspect of the present invention is a cell sorting system including the cell sorting device described above and an observation device for observing a section on the substrate.
  • a tissue display system comprising the cell sorting device described above, an observation device for observing a section on the substrate, and a display unit for displaying the section observed by the observation device. It is.
  • the slice has a surface to which a section of biological tissue can be pasted and is provided so as to be divided into a plurality of small pieces, and is pasted on the surface by being divided into a plurality of small pieces. It is the board
  • substrate which divides.
  • a substrate having a surface on which a section of biological tissue can be pasted and provided in a manner that can be divided into a plurality of small pieces, on the surface opposite to the surface on which the section is pasted.
  • an extension member that can extend in the surface direction of the substrate and that divides the substrate bonded by extending in the surface direction into a plurality of small pieces.
  • a seventh aspect of the present invention is a pasting step of pasting a section across a plurality of small pieces on the surface of a substrate that has a surface on which a section of biological tissue can be pasted and can be divided into a plurality of small pieces. And a division step of dividing the section pasted on the surface of the substrate by dividing the substrate into a plurality of small pieces.
  • a pasting step of pasting the section on a substrate having a surface on which a section of biological tissue can be pasted and capable of being divided into a plurality of small pieces, and the section pasted A cell sorting method comprising: a dividing step of dividing the section into pieces having substantially the same shape as the small pieces by dividing the substrate into a plurality of small pieces; and a collecting step of collecting the pieces of the divided pieces. It is.
  • a section of a living tissue can be divided into fragments of a size including a sufficient amount of cells with a simple configuration and operation.
  • FIG. 1 is an overall configuration diagram of a cell sorting system according to a first embodiment of the present invention. It is a side view of the glass substrate adhere
  • the cell sorting system 100 includes an optical microscope (observation device) 2 and a cell sorting device 1 according to this embodiment.
  • the optical microscope 2 is an upright type.
  • the optical microscope 2 has an image pickup device 3 such as a CCD camera for picking up an image of its visual field connected to the camera port 2a.
  • the video imaged by the imaging device 3 is displayed on a monitor (not shown).
  • the cell sorting system 100 constitutes a tissue display system together with this monitor.
  • the video may be displayed on a monitor after being subjected to video processing by a video processing device (not shown) such as an image processor.
  • the cell sorting apparatus 1 includes a glass substrate (substrate) 4 to which a section of biological tissue is attached, an adhesive sheet (extension member) 5 that can be stretched in a direction along the surface and to which the glass substrate 4 is bonded, An extension stage (dividing part, extension part, pressing member) 6 for extending the adhesive sheet 5, a jig 7 for holding the adhesive sheet 5 extended by the extension stage 6, and a small piece of the glass substrate 4 from the adhesive sheet 5 And a collection unit 8 for collecting 4b.
  • the cell dividing apparatus according to the present invention corresponds to a configuration including a substrate 4, an extension stage 6, and a jig 7.
  • the glass substrate 4 is a flat plate having a flat surface. As shown in FIGS. 2A and 3A, lattice-like grooves (partition lines) 4 a are formed on the surface of the glass substrate 4 at a predetermined interval.
  • the groove 4a may be formed, for example, by laser processing, chemical etching, dicing, or the like, or may be formed manually by an operator using glass cutting or the like.
  • the glass substrate 4 preferably has a thickness capable of stably supporting a section of living tissue, for example, 0.05 mm to 0.5 mm.
  • the interval between the grooves 4a can be appropriately changed depending on the size of the fragment to be collected from the slice.
  • the interval between the grooves 4a is 0.05 mm to 5.5 mm so that a sufficient amount of cells are contained in the collected fragment while collecting a fragment of a desired region from the section with sufficiently fine positional accuracy. 0 mm is preferable.
  • an optically transparent one is used so that the transmitted light image of the slice stuck on the glass substrate 4 can be observed with the optical microscope 2.
  • the glass substrate 4 may be subjected to chemical treatment such as silanization on the surface in order to improve the adhesion between the surface and the slice. Further, the glass substrate 4 may be subjected to, for example, a coating process for preventing adsorption of nucleic acids, proteins, and the like according to the purpose such as an inspection performed after collecting the small pieces 4b.
  • the pressure-sensitive adhesive sheet 5 has an adhesive that is coated on one surface thereof, and has a tackiness that allows the glass substrate 4 to be bonded sufficiently firmly and peelable by a sampling portion 8 described later. Moreover, the adhesive sheet 5 can extend in the direction along the surface. When the pressure-sensitive adhesive sheet 5 is stretched in the direction along the surface in a state where the glass substrate 4 is adhered on the pressure-sensitive adhesive sheet 5, the glass substrate 4 is also pulled in the direction along the surface along with the extension of the pressure-sensitive adhesive sheet 5. And as FIG. 3B shows, the glass substrate 4 is cut
  • the pressure-sensitive adhesive sheet 5 is optically transmissive or semi-transmissive. Thereby, when the adhesive sheet 5 is observed with the optical microscope 2, it is possible to observe an object disposed on the opposite side of the objective lens of the optical microscope 2 with the adhesive sheet 5 interposed therebetween.
  • the adhesive sheet 5 for example, a dicing tape used for temporarily fixing a wafer in a dicing step of a semiconductor manufacturing process can be suitably used.
  • FIG. 2A shows an example in which the glass substrate 4 is bonded to the pressure-sensitive adhesive sheet 5 with the groove 4a facing the pressure-sensitive adhesive sheet 5, but as shown in FIG. 2B, the glass substrate 4 is grooved. 4a may be bonded to the pressure-sensitive adhesive sheet 5 with the pressure-sensitive adhesive sheet 5 facing away from the pressure-sensitive adhesive sheet 5.
  • the extension stage 6 has a substantially cylindrical shape, and both ends are formed substantially parallel and flat.
  • the extension stage 6 has a step on the side so that the upper end portion (hereinafter referred to as a small diameter portion) 6a has a smaller diameter than the other portion (hereinafter referred to as the large diameter portion) 6b. Yes.
  • the jig 7 includes a lower frame (fixing member) 9a that can be attached with the adhesive sheet 5 spread, an upper frame 9b that covers the lower frame 9a from above, and a grip ring that holds the adhesive sheet 5 in an extended state.
  • the grip rings 10a and 10b include an outer ring 10a and an inner ring 10b.
  • the inner diameter dimension of the outer ring 10a and the outer diameter dimension of the inner ring 10b are substantially the same.
  • windows 9c and 9d penetrating in the plate pressure direction are formed at substantially central portions, respectively.
  • An outer ring 10a is fitted inside the window 9d of the upper frame 9b along the inner peripheral surface thereof.
  • the 9c window of the lower frame 9a has a diameter equal to or larger than the outer diameter of the small diameter portion 6a.
  • Jig 7 is used as follows. First, the inner ring 10b is fitted along the outer periphery of the small diameter portion 6a. Further, the adhesive sheet 5 to which the glass substrate 4 is bonded is bonded to the lower surface of the lower frame 9a with the glass substrate 4 placed at the position of the window 9c and the side to which the glass substrate 4 is bonded facing upward. . Thereby, the periphery of the area
  • the outer ring 10a and the inner ring 10b are fitted by covering the lower frame 9a with the upper frame 9b while the adhesive sheet 5 is stretched. Thereby, the part corresponding to the window 9c of the adhesive sheet 5 is held by the grip rings 10a and 10b in an extended state.
  • a mark for example, a scale for knowing how much the adhesive sheet 5 has been extended may be attached to the adhesive sheet 5.
  • the collection unit 8 includes a collection needle 11 and a manipulator 12 that operates the collection needle 11.
  • the distal end portion of the sampling needle 11 has a diameter dimension substantially equal to or smaller than that of the small piece 4b.
  • the manipulator 12 holds the sampling needle 11 at the tip of the arm 12a.
  • the manipulator 12 moves the arm 12a in a three-dimensional direction according to an operation by the operator.
  • a method for collecting a fragment containing a desired cell from a section of a living tissue using the cell sorting apparatus 1 and the cell sorting system 100 configured as described above will be described below with reference to FIG.
  • a section (section) for collection is cut out from the living tissue (Step S1). )
  • the cut out section for pasting is pasted on the glass substrate 4 (step S2, pasting step).
  • the sample section is acquired by observing the collection section with the optical microscope 2 (step S3).
  • the section for collection is cut out by, for example, a freeze embedding method or a paraffin embedding method.
  • the thickness of the section to be collected depends on the use of the collected cells, but may be larger than the section thickness (about several to 10 ⁇ m) used for normal pathological specimens, for example, about 50 ⁇ m thick.
  • a section for collection is cut out. When the size of the cut-out section is smaller than the interval between the grooves 4a of the glass substrate 4, the collection section is stuck on the glass substrate 4 so that the collection section straddles the groove 4a.
  • a section for staining having a thickness of about several ⁇ m to 10 ⁇ m is cut out from a position adjacent to the cutting position of the section for collecting biological tissue.
  • the cut section for staining is pasted on a slide glass, and then stained for pathological diagnosis, for example (step S4).
  • the stained section is observed with the optical microscope 2 to obtain a stained image (step S5).
  • a region where a desired cell is present, for example, a cancer cell is collected.
  • the eroded area is determined (step S6).
  • step S7 the acquired specimen image and the stained image are displayed so as to be overlapped so that the sections in each image are exactly overlapped (step S7), and the small piece 4b corresponding to the determined region to be collected in the section for staining is displayed.
  • the position, for example, the column number and the column number of the small piece 4b are recorded (step S8).
  • the glass substrate 4 is bonded to the adhesive sheet 5.
  • the glass substrate 4 is divided by extending the adhesive sheet 5 using the extension stage 6 and the jig 7 (step S9, division step). At this time, the section for collection affixed on the glass substrate 4 is also pulled into the surface together with the glass substrate 4 to be divided into pieces at the position of the groove 4a.
  • the pressure-sensitive adhesive sheet 5 is held in an extended state by the grip rings 10a and 10b, and the pressure-sensitive adhesive sheet 5 is placed on the specimen stage 2b so that the surface to which the glass substrate 4 is bonded faces downward.
  • the adhesive sheet 5 may be placed on the specimen stage 2b in a state of being peeled from the lower frame 9a, or may be placed on the specimen stage 2b together with the lower frame 9a.
  • the manipulator 12 is operated within the field of view to place the collection needle 11 behind the small piece 4b to be collected. Then, the small piece 4b is peeled off from the pressure-sensitive adhesive sheet 5 by pushing the surface of the small piece 4b to be collected, which is bonded to the pressure-sensitive adhesive sheet 5, with the collection needle 11 (step S10, collection step).
  • the tube rack 13 may be disposed below the specimen stage 2b, and the collection tube 13a may be installed in advance at the position where the small piece 4b is dropped. According to the above procedure, a fragment of an area where desired cells are present can be collected from the collection section together with the small piece 4b. The collected cells are used for genetic testing, for example.
  • a region where desired cells are present can be selectively collected from a section only with a simple configuration and operation. Further, since an expensive configuration such as a UV laser light source is unnecessary, there is an advantage that the manufacturing cost can be reduced. Further, unlike the LMD, since the section is mechanically cut, it is possible to easily cut even a relatively thick section, and the size of the small piece 4b can be easily enlarged only by adjusting the interval between the grooves 4a. it can. Therefore, since it has been necessary to collect fragments from a plurality of sections in order to collect a sufficient number of cells in the past, an operation requiring a great deal of labor is only required to collect one or a small number of small pieces 4b. There is an advantage that labor and time required for the process can be greatly reduced.
  • the glass substrate 4 on which the lattice-like grooves 4a are formed is used as the substrate on which the section is pasted.
  • a substrate 4 may be used.
  • the glass pieces 4 b are bonded in advance on the adhesive sheet 5 as shown in FIG. 7. By doing in this way, when the adhesive sheet 5 is extended, the glass substrate 4 can be more easily and reliably divided at the boundary (partition line) between the small pieces 4b.
  • the following methods can be used as an example in order to make the piece divided
  • the glass substrate 4 is bonded onto the pressure-sensitive adhesive sheet 5, and the glass substrate 4 is scratched in a lattice shape by glass cutting. Then, by manually dividing the glass substrate 4 at the position of the scratch, the small pieces 4b can be easily arranged on the adhesive sheet 5 as shown in FIG. At this time, it is preferable to carry out while protecting the surface of the glass substrate 4 with a film or the like so that the glass substrate 4 is not soiled.
  • adopted by the said embodiment is an example, and is not limited to this structure.
  • the material of the substrate may be a resin other than glass.
  • the shape of the small piece 4b may be a shape that can be closely arranged on the surface of the pressure-sensitive adhesive sheet 5, and may be, for example, a regular hexagon or a triangle.
  • the substrate 4 ′ may be configured by using spherical glass beads or resin beads 4 c as small pieces and arranging them on the adhesive sheet 5, preferably in a single layer.
  • a substrate having magnetism may be used.
  • magnetic particles having a diameter of 1 ⁇ m to 500 ⁇ m may be densely arranged on the surface of the pressure-sensitive adhesive sheet 5, or a metal plate such as stainless steel may be used as the substrate.
  • a substrate that does not transmit visible light such as metal is used as the substrate, the transmitted light image of the pressure-sensitive adhesive sheet 5 is observed with an optical microscope, so that even if the small piece 4b is small, it can be visually recognized more clearly.
  • a magnet may be used as the collection unit 8.
  • a magnet having approximately the same size as the magnetic particles is provided at the tip of the sampling needle 11. Then, by bringing the tip of the collection needle 11 close to the magnetic particles from the side opposite to the adhesive sheet 5, desired magnetic particles can be captured by the magnetic force at the tip of the collection needle 11 and collected from the adhesive sheet 5.
  • the upright optical microscope 2 is used and the extension stage 6 is provided separately from the optical microscope 2.
  • the configuration of the cell sorting system 100 is the same. It is not limited to.
  • an inverted type may be used as the optical microscope 2, and the extension stage 6 may be mounted on the optical microscope 2.
  • FIG. 9 shows an example of a configuration in which an extension stage 6 and a jig 7 are provided on the inverted optical microscope 2.
  • the specimen stage 2b is provided so as to be slidable in the horizontal direction along the guide rail 2c between the observation position of the optical microscope 2 and the position removed from the main body of the optical microscope 2.
  • the adhesive sheet 5 is extended on the extension stage 6 by moving the jig 7 downward with the specimen stage 2b placed at the observation position. Thereafter, the specimen stage 2b is slid, and the small piece 4b is collected using the collection unit 8 provided separately from the optical microscope 2.
  • FIG. 10 shows an example of a configuration in which the extension stage 6, the jig 7, and the sampling unit 8 are provided in the upright optical microscope 2.
  • the extension stage 6 is provided above the specimen stage 2b so as to be movable in the vertical direction integrally with the objective lens, and pressed against the adhesive sheet 5 held above the specimen stage 2b by the jig 7 from above. It is like that.
  • a series of operations from extending the adhesive sheet 5 to collecting the small piece 4b can be performed on the specimen stage 2b.
  • the specimen 4b to be collected is determined by comparing the specimen image of the collection section and the staining image of the section for staining. Instead, an image of the section for collection is used. The small piece 4b to be collected may be determined.
  • the small piece 4b to be collected on the spot may be selected while observing the collection section with the optical microscope 2 (step S11), and the adhesive sheet 5 may be extended (step S9) and the small piece 4b may be collected (step S10). . By doing in this way, a procedure can further be simplified as needed.
  • the adhesive sheet 5 was extended using the substantially cylindrical extension stage 6, the method of extending the adhesive sheet 5 is not limited to this.
  • an outer cylinder 14a and an inner cylinder 14b that can be accommodated in the outer cylinder 14a may be used instead of the extension stage 6, instead of the extension stage 6, an outer cylinder 14a and an inner cylinder 14b that can be accommodated in the outer cylinder 14a may be used.
  • the adhesive sheet 5 is placed on the upper end surface of the outer cylinder 14a and fixed to the side surface of the outer cylinder 14a.
  • Reference numeral 15 denotes a fixing member for fixing the adhesive sheet 5 to the side surface of the outer cylinder 14a.
  • the inner cylinder 14b is protruded relatively from the inside of the outer cylinder 14a, or the inner cylinder 14b is moved from the outside of the outer cylinder 14a as shown in FIG. Push relatively into the tube 14a.
  • the adhesive sheet 5 can be extended substantially uniformly in each direction.
  • the adhesive sheet 5 is held in a fixed shape by the holder 16 at a position excluding the region where the glass substrate 4 is bonded, and the glass substrate 4 is bonded as shown in FIG. 15B.
  • the adhesive sheet 5 may be extended by pressing the formed region against the extension stage 6.
  • grip rings that can be kept in close contact with each other by magnetic force may be used.
  • the grip rings 10c and 10d are composed of an upper ring 10c and a lower ring 10d having the same diameter
  • the upper ring 10c is composed of a magnet
  • the lower ring 10d is a metal such as stainless steel. Consists of.
  • the adhesive sheet 5 can also be held in an extended state by sandwiching the adhesive sheet 5 between the upper ring 10c and the lower ring 10d and bringing the rings 10c and 10d into close contact with each other by magnetic force.
  • Both rings 10c and 10d may be made of magnets that generate an attractive force with respect to each other.
  • the small piece 4b is peeled off from the adhesive sheet 5 and collected by pushing the small piece 4b from the back with the sampling needle 11, but instead, the inside can be sucked to a negative pressure.
  • a simple collection container may be used. Even in this case, the small container 4b can be peeled off from the adhesive sheet 5 and collected in the collecting container by bringing the collecting container close to the small sheet 4b to be collected from the side opposite to the adhesive sheet 5.
  • the adhesive sheet 5 what loses adhesiveness by irradiating an ultraviolet-ray.
  • an ultraviolet light source collecting unit
  • the small piece 4b can be easily peeled off and collect
  • the same effect can be obtained by guiding ultraviolet light with an optical fiber and locally irradiating the fiber end toward the position of the small piece 4b to be collected.
  • FIGS. 1-10 a cell sorting apparatus and a cell sorting system according to a second embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS.
  • the cell sorting device and the cell sorting system according to the present embodiment are different from the first embodiment described above in the configuration of the substrate, the dividing unit, and the collecting unit. Therefore, these configurations will be mainly described, and the description of the configurations common to the first embodiment will be omitted.
  • the substrate 20 is composed of an assembly of a plurality of small pieces 20a that are two-dimensionally arranged in a planar shape, and as shown in FIG. 17, the side surfaces of the substantially rectangular parallelepiped small pieces 20a are held in close contact with each other. ing. At least one end face of these small pieces 20a is on the same plane so as to form a substantially flat surface to which a section for collecting biological tissue (hereinafter, simply referred to as a section) can be attached. Has been placed.
  • tissue bonding surfaces the surfaces of the substrate 20 and the small pieces 20a to which the sections are attached are also referred to as tissue bonding surfaces.
  • Such an arrangement structure of the small pieces 20a is held by being bundled together by an annular member 21 such as a rubber band which generates a pressing force in the radially inward direction. That is, the side surfaces of the adjacent small pieces 20a are pressed against each other, whereby the arrangement structure of the small pieces 20a is maintained by the frictional force generated between the side surfaces.
  • an annular member 21 such as a rubber band which generates a pressing force in the radially inward direction. That is, the side surfaces of the adjacent small pieces 20a are pressed against each other, whereby the arrangement structure of the small pieces 20a is maintained by the frictional force generated between the side surfaces.
  • the arrangement structure of the remaining pieces 20a is stably maintained even if one piece 20a is removed.
  • the small piece 20a may be hold
  • the substrate 20 is preferably a material that can be easily microfabricated, has a surface with good adhesion to the slice, and does not contain biological material, such as glass, metal, or plastic.
  • the shape of the small piece 20a should just be a shape which can maintain an arrangement
  • the cell sorting apparatus includes a support member 22 and a division assisting section 23 instead of the adhesive sheet 5, the extension stage 6 and the jig 7 in the first embodiment.
  • the support member 22 has a contact surface 22a that is brought into contact with the end surface in a smaller area than the end surface of one small piece 20a.
  • 18 shows a columnar member having a substantially hemispherical end surface as an example of the support member 22, but the contact surface 22a of the support member stably presses the end surface of the small piece 20a.
  • Any shape is possible as long as it is possible.
  • the shape may be a substantially flat shape so as to be in contact with the end face of the small piece 20a in a sufficiently wide area.
  • the division assisting part 23 assists the segmentation using the support member 22.
  • assistant part 23 is a cylindrical member, and has the hole 23a formed along a longitudinal direction and opened to both end surfaces. At least one end surface of the division assisting portion 23 is a flat surface formed substantially perpendicular to the longitudinal direction. When this one end surface is arranged in contact with the end surface of the small piece 20a, the hole 23a extends along the thickness direction of the small piece 20a.
  • the cross-sectional shape of the hole 23a may be any shape that is larger than the end face of the small piece 20a and allows the small piece 20a to pass through, but preferably has a cross-sectional shape that is slightly larger than the end face of the small piece 20a.
  • a method for collecting a fragment containing a desired cell from a section of a biological tissue using the thus configured cell sorting apparatus and cell sorting system will be described.
  • the tissue dividing method and the cell sorting method according to the present embodiment are the same as those according to the first embodiment shown in FIG. 6, the step of dividing the section (step S9), and the step of collecting the divided fragments (step) Different in S10). Therefore, only these two steps will be described.
  • the support member 22 is disposed (hereinafter also referred to as an opposite surface). Further, the division assisting portion 23 is disposed so that the opening of the hole 23a and the support member 22 face each other with the substrate 20 interposed therebetween, and one end face of the division assisting portion 23 is brought into contact with the slice A.
  • the operation of the support member 22 is performed by the manipulator 12 similarly to the collection needle 11 of the first embodiment.
  • a part of the section A attached to the tissue adhesion surface of the separated small piece 20a is cut into pieces A ′ having a shape substantially equivalent to the tissue adhesion surface of the small piece 20a by being pulled downward with respect to the other parts.
  • an angle formed by one end face of the division assisting portion 23 and the inner peripheral surface of the hole 23a acts on the slice A like a blade.
  • the section A is more easily cut, and the shape of the fragment A ′ is more accurately matched with the tissue adhesion surface of the small piece 20a.
  • the small piece 20a thus separated together with the fragment A ′ of the section A is dropped and collected in a collection tube 13a arranged in advance below the specimen stage 2b.
  • a region where desired cells are present can be selectively collected from the section A only with a simple configuration and operation. Further, since an expensive configuration such as a UV laser light source is unnecessary, there is an advantage that the manufacturing cost can be reduced. Further, unlike the LMD, since the section A is mechanically cut, even a relatively thick section A can be easily cut, and the size of the fragment A ′ can be easily enlarged by adjusting the size of the small piece 20a. can do. Therefore, since it is necessary to collect fragments from a plurality of sections in order to collect a sufficient number of cells in the prior art, it is only necessary to collect one or a small number of small pieces 20a. There is an advantage that labor and time required for the process can be greatly reduced.
  • the opposite surface of the small piece 20a is pressed by the support member 22.
  • the tissue bonding surface of the small piece 20a may be pressed. Good.
  • the small piece 20a separated by the support member 22 can be dropped as it is onto the lower collection tube 13a by placing the substrate 20 on the specimen stage 2b with the side on which the section A is attached facing upward. it can.
  • a protective member 24 disposed between them may be provided. Good. By doing so, substances such as biomolecules contained in the section A are prevented from adhering to the support member 22, so that the plurality of small pieces 20a are separated using the same support member 22 continuously. Even if the fragments A ′ are collected, contamination between the fragments A ′ via the support member 22 can be prevented.
  • a protective member 24 having a size substantially equal to or smaller than the tissue bonding surface of the small piece 20a may be used, and the protective member 24 may be recovered together with the small piece 20a after the small piece 20a is separated.
  • the protective member 24 is preferably made of a material that does not affect the analysis of the fragment A 'attached to the small piece 20a. Even in this case, contamination between the fragments A ′ via the support member 22 can be prevented.
  • the section A is prepared by the paraffin embedding method
  • a substance such as a biomolecule contained in the section A adheres to the support member 22 when the support member 22 and the section A come into contact with each other. Very low. Therefore, even if the small pieces 20a are continuously separated by the same support member 22 without using the protection member 24, the possibility of contamination between the collected pieces A 'is sufficiently low.
  • the protective member 24 may not be used.
  • the tissue bonding surface or the opposite surface of the small piece 20a may be pressed by other means.
  • the divided portion includes a pipe member having an opening narrower than the end face of the small piece 20a, and the compressed air is supplied into the pipe member in a state where the opening is disposed opposite to the end face of the small piece 20a. It is good also as spraying compressed air on the end surface of this and pressing this end surface.
  • the small piece 20a is separated by pressing the tissue bonding surface of the small piece 20a.
  • the opposite surface of the small piece 20a may be pulled.
  • the support member 22 ' is used to separate the small pieces 20a. That is, as shown in FIG. 21, an adsorption member 25 that adsorbs the opposite surface of the small piece 20 a is provided on the contact surface 22 a ′ of the support member 22 ′, and the contact surface 22 a ′ is brought into contact with the opposite surface via the adsorption member 25. By doing so, the small piece 20a is adsorbed to the support member 22 ′. And one small piece 20a can be isolate
  • FIG. 21 shows a support member 22 ′ having a substantially flat contact surface 22a ′.
  • the adsorbing member 25 for example, a member having adhesiveness on the surface is used.
  • a magnet may be used as the attracting member 25.
  • the opposite surface of the small piece 20a can be pulled to separate the small piece 20a.
  • two support members 22, 22 ′′ are used to support both end faces of the small piece 20a, and these support members 22, 22 ′′ are integrally raised. It is good also as separating the small piece 20a by moving to a direction or a downward direction. Moreover, in the said embodiment, the direction which isolate
  • a porcine colon was used as a living tissue, and a section having a thickness of 50 ⁇ m and four sides of about 10 mm was cut out from the living tissue by a freeze embedding method. After pasting the cut sections on four cover glasses that are pasted on a dicing sheet (extension member) so that the corners are adjacent to each other so as to straddle the boundary (partition line) of the cover glasses The sections were air dried. A cover glass having a side dimension of 18 mm and a thickness of 0.13 mm to 0.17 mm was used. That is, in this embodiment, one substrate is constituted by four cover glasses as small pieces, and these four cover glasses are separated from each other by grooves.
  • a dicing tape was affixed to an upper frame (fixing member) formed with a circular window penetrating in a substantially central part so that a section was disposed in a substantially central part of the window.
  • an upper frame fixing member
  • the columnar stage pressing member, extension part, split part
  • positioned in the window of a dicing tape was extended in the plane direction.
  • the four cover glasses were separated from each other, and the section pasted on the cover glass was divided into four pieces at the boundary of the cover glass.
  • 23 and 24 show photographs of the sections before and after dividing the sections in this way.
  • FIG. 23 shows a state before the dicing tape is extended.
  • a line L appearing in the vertical direction at the approximate center of the photograph is a boundary (dividing line) of the cover glass.
  • FIG. 24 shows a state in which the dicing tape is extended, and it can be seen that the section is neatly divided along the boundary of the cover glass. From the above experiment, it was confirmed that even a relatively thick section can be easily and sufficiently divided along the dividing line by using the tissue dividing apparatus, the cell sorting apparatus and the cell sorting system of the present invention. It was.
  • a cell sorting device comprising: a dividing unit that divides into pieces having substantially the same shape; and a collecting unit that collects the small pieces divided by the dividing unit.
  • the substrate and the biological tissue section attached to the substrate are divided by the dividing unit, and the divided pieces are collected by the collecting unit.
  • Section pieces can be taken together with small pieces.
  • increasing the amount of cells adhering to each piece by increasing the thickness of the section or by making the piece larger in the plane direction, it is possible to collect a small amount of biological sample such as a gene simply by collecting one or several pieces. A sufficient amount of cells can be easily collected for examination.
  • An extension member that adheres a surface opposite to the surface to which the section of the substrate is attached and can extend in a direction along the surface, and the divided portion includes at least some small pieces included in the substrate.
  • Item 6 The cell sorting apparatus according to Item 5, further comprising an extending portion that extends the extending member in a direction along the surface in the bonded region.
  • the section pasted on the substrate is divided together with the substrate by extending the stretching member with the stretching section in a state where the substrate on which the section is pasted is adhered to the stretching member. can do.
  • Item 10 The cell sorting device according to any one of Item 6 to Item 9, wherein the extension member is made of an optically transparent or translucent material. According to the invention of Additional Item 10, the position of the small piece on the extension member can be confirmed when the transmitted light image of the extension member is observed with an optical microscope.
  • Appendix 11 The cell sorting device according to any one of appendices 1 to 10, wherein the small piece has a rectangular parallelepiped shape having a thickness dimension of 0.05 mm to 0.5 mm and a side dimension of 0.05 mm to 5.0 mm. . According to the invention according to the supplementary item 11, it is possible to attach a sufficient amount of cells to each small piece while selecting and collecting a desired region from the section with sufficiently fine accuracy.
  • the extension portion has a fixing member that fixes a peripheral portion of the extension member in a region where the substrate is bonded to a predetermined shape, and the region of the extension member fixed by the fixing member is the substrate.
  • the cell sorting device according to any one of supplementary items 6 to 11, further comprising a pressing member that presses from a surface opposite to the surface to which the adhesive is adhered.
  • the extension member can be extended only with a simple configuration and operation.
  • Additional Item 13 In any one of Additional Item 6 to Additional Item 12, wherein the sampling portion includes a needle member that protrudes from a surface opposite to a surface to which the small piece is bonded to the position where the small piece of the extension member is bonded.
  • Appendix 14 14.
  • the cell sorting device according to any one of appendix 6 to appendix 13, further comprising a holding member that holds the region of the extension member in an extended state.
  • the extension member is extended and held in a state where there is an interval between the pieces, and the collection of the pieces by the collection unit can be facilitated.
  • a cell sorting system comprising: the cell sorting device according to any one of appendices 1 to 18; and an observation device that observes the section on the substrate.
  • the invention according to supplementary item 19 it is easier to select a small piece to be collected or to collect the selected small piece by observing the section pasted on the substrate or the small piece formed after the division with the observation device. And more accurately.
  • a cell sorting method comprising: a dividing step of dividing the section of the substrate and the biological tissue by the dividing line by pulling; and a collecting step of collecting the small pieces divided in the dividing step.
  • the section pasted on the substrate together with the substrate is divided into a plurality of small pieces by pulling the substrate in the splitting step.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

　生体組織の切片を簡便な構成と操作で十分な量の細胞を含む寸法の断片に分割する。複数の小片（２０ａ）に分割可能に設けられ生体組織の切片（Ａ）を貼り付け可能な表面を有する基板と、該基板を複数の小片（２０ａ）に分割することによって表面に貼り付けられた切片（Ａ）を小片（２０ａ）と略同等の形状の断片に分割する分割部（２２，２３）とを備える組織分割装置を提供する。

Description

組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法
　本発明は、組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法に関するものである。
　従来、病理診断などに用いられる組織の切片から、数十ミクロン程度の微小領域を切り取って採取するための技術としてＬＭＤ（Ｌａｓｅｒ　Ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ）法が知られている（例えば、非特許文献１参照。）。ＬＭＤ法は、切片の採取すべき微小領域にＵＶレーザを照射することにより、切片から微小領域を切り取っている。
Ｌｅｉｃａ　ＭＩＣＲＯＳＹＳＴＥＭＳ、"ライカ　ＬＭＤ６５００　ライカ　ＬＭＤ７０００"、Ｐ．２、［ｏｎｌｉｎｅ］、［平成２４年８月３０日検索］、インターネット＜URL：http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20LMD7000/Brochures/LMD6500_7000_JP.pdf＞
　しかしながら、切片から癌細胞などの特定の細胞が存在する領域を切り取り、切り取った微小な断片に含まれる細胞から抽出した核酸、遺伝子、アミノ酸、ペプチド、たんぱく質、脂質、糖鎖などの微量な生体試料の検査を実施したい場合、特に遺伝子検査を実施したい場合、ＬＭＤ法によって採取された断片に含まれる細胞数では少なすぎて検査に必要な量の遺伝子を抽出することができない。したがって、多数の切片をマイクロダイセクションして十分な数の細胞を収集しなければならず、１度の遺伝子検査を行うのに膨大な労力および時間を要するという問題がある。
　一方、切り取る断片の面積を大きくする、または、生体組織から切き出す切片を厚くすることが考えられる。しかしながら、ＬＭＤ法で切り取る断片を大きくしようした場合、レーザを走査可能な領域を大きくしたり、レーザを走査して切り取った断片をレーザの圧力で吹き飛ばすためにレーザの出力を高くしたりする必要がある。そのために装置の構成が一層大掛かりになり装置の価格も高騰するという不都合がある。また、切片を厚くした場合、レーザで切片を切断するためにはやはりレーザの出力を高くする必要があるという不都合がある。
　本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、生体組織の切片を簡便な構成と操作で十分な量の細胞を含む寸法の断片に分割して採取することができる組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法を提供することを目的とする。
　上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
　本発明の第１の態様は、生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有し、複数の小片に分割可能に設けられた基板と、該基板を複数の小片に分割することによって前記表面に貼り付けられた切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割部とを備える組織分割装置である。
　本発明の第１の態様によれば、生体組織の切片が貼り付けられた基板を分割部によって複数の小片に分割するだけの簡便な構成と操作によって、基板上に貼り付けられた切片を基板と共に小片と略同等の形状の断片に分割し、小片と共に該小片に付着している断片を採取することができる。また、基板と共に力学的に切片が分割されるので、切片の厚さや断片の大きさはＬＭＤ法に比べて厳しく制限されない。したがって、切片を厚くし、または、小片の寸法を大きくすることにより、切片を十分な量の細胞を含む寸法の断片に分割することができる。
　上記第１の態様においては、前記基板が、予め分割された前記複数の小片の集合体からなり、前記分割部が、前記小片同士を相対的に移動させる力を前記基板に加えることで前記基板を分割してもよい。あるいは、上記第１の態様においては、前記基板は、前記複数の小片に区画する溝が形成され、前記分割部が、前記小片同士を相対的に移動させる力を前記基板に加えることで前記基板を分割してもよい。
　このようにすることで、小片同士を相対的に移動させる力を基板に加えることにより予め設定された形状の小片に容易に基板を分割することができる。
　上記第１の態様においては、前記分割部が、前記小片同士を前記表面に交差する方向に相対的に移動させる力を前記基板に加えることとしてもよい。この場合、前記分割部が、前記複数の小片のうち一部の小片を前記交差する方向に移動させる構成であってもよい。
　このようにすることで、基板表面の略法線方向に一部の小片を移動させて他の小片と分割し、一部の小片の表面に貼り付けられていた切片の一部を切り取ることができる。
　この構成においては、前記一部の小片が、前記切片のうち採取すべき領域が貼り付けられている小片であることとしてもよい。
　また、この構成においては、前記分割部が、前記一部の小片の前記切片が貼り付けられている面および該面とは反対側の面のうち少なくとも一方の面を支持する支持部材を備え、該支持部材を前記交差する方向に移動させることで前記一部の小片を前記交差する方向に移動させることとしてもよい。
　このようにすることで、一部の小片のみを容易に表面に交差する方向に移動させることができる。
　上記の支持部材を備える構成においては、前記分割部が、前記一部の小片に貼り付けられた前記切片の分割を補助する分割補助部をさらに備えることとしてもよい。この場合、前記分割補助部は、前記支持部材との間に前記基板を挟み該基板に端面を向けて配置され、前記支持部材によって移動された前記一部の小片が挿入可能な孔を前記端面に有する略筒状の部材を備え、前記端面と前記孔の内面とが成す角が前記切片の分割を補助することとしてもよい。
　このようにすることで、小片が筒状の部材の孔内に挿入される過程において当該小片に貼り付けられている切片をより確実に切り取ることができる。
　上記の支持部材を備える構成においては、前記分割部が、前記支持部材によって前記一方の面を前記交差する方向に押圧することとしてもよい。
　このようにすることで、一部の小片を容易に移動させることができる。
　上記の支持部材によって小片の一方の面を押圧する構成においては、前記支持部材が、前記切片を間に挟んで前記切片が貼り付けられている面を支持し、前記支持部材と前記切片との間に配置され該切片の表面を覆って保護する保護部材を備えることとしてもよい。
　このようにすることで、支持部材と切片とが直接接触することが防止され、同一の支持部材を連続して使用して切片から複数の断片を採取したとしても、一の断片に含まれる生体分子等の物質が支持部材を介して他の断片に移動すること（コンタミネーション）を防ぐことができる。
　上記の支持部材を備える構成においては、前記支持部材と前記一部の小片の前記反対側の面との間に配置されると共に該反対側の面を吸着する吸着部材を備え、前記分割部が、前記支持部材によって前記一部の小片の前記反対側の面を前記交差する方向に引っ張ることとしてもよい。
　このようにすることで、一部の小片を容易に移動させることができる。
　上記の支持部材を備える構成においては、前記分割部が、前記基板を間に挟んで対向配置され前記小片の前記切片が貼り付けられている面および前記反対側の面を支持すると共に前記交差する方向に一体に移動させられる２つの前記支持部材を備えることとしてもよい。
　本発明の第２の態様は、生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有し、複数の小片に分割可能に設けられた基板と、該基板を複数の小片に分割することによって前記表面に貼り付けられた切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割部と、該分割部によって分割された前記切片の断片を採取する採取部とを備える細胞分取装置である。
　本発明の第３の態様は、上記に記載の細胞分取装置と、前記基板上の切片を観察する観察装置とを備える細胞分取システムである。
　本発明の第４の態様は、上記に記載の細胞分取装置と、前記基板上の切片を観察する観察装置と、該観察装置によって観察された切片を表示する表示部とを備える組織表示システムである。
　本発明の第５の態様は、生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有するとともに複数の小片に分割可能に設けられ、複数の小片に分割されることによって前記表面に貼り付けられた前記切片を分割する基板である。
　本発明の第６の態様は、生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有するとともに複数の小片に分割可能に設けられた基板の、前記切片が貼り付けられる表面とは反対側の面に接着され、前記基板の表面方向に伸展可能な伸展部材であって、前記表面方向に伸展することによって接着されている前記基板を複数の小片に分割する伸展部材である。
　本発明の第７の態様は、生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有すると共に複数の小片に分割可能に設けられた基板の前記表面に複数の前記小片にまたがって切片を貼り付ける貼付ステップと、前記基板を複数の小片に分割することによって前記基板の表面に貼り付けられている切片を分割する分割ステップとを含む組織分割方法である。
　本発明の第８の態様は、生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有すると共に複数の小片に分割可能に設けられた基板に前記切片を貼り付ける貼付ステップと、前記切片が貼り付けられた前記基板を複数の小片に分割することによって前記切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割ステップと、前記分割された前記切片の断片を採取する採取ステップとを含む細胞分取方法である。
　本発明によれば、生体組織の切片を簡便な構成と操作で十分な量の細胞を含む寸法の断片に分割することができるという効果を奏する。
本発明の第１の実施形態に係る細胞分取システムの全体構成図である。 溝を粘着シート側に向けて粘着シートに接着されたガラス基板の側面図である。 溝を粘着シートと反対側に向けて粘着シートに接着されたガラス基板の側面図である。 粘着シートに接着したガラス基板を示す図である。 粘着シートの伸展により分割されたガラス基板を示す図である。 伸展用ステージおよび治具の構成を示す図である。 図４の伸展用ステージおよび治具の使用方法を説明する図であり、粘着シートを伸展させた状態を示している。 図４の伸展用ステージおよび治具の使用方法を説明する図であり、粘着シートをグリップリングで保持した状態を示している。 図１の細胞分取装置および細胞分取システムを使用して切片から細胞を採取する手順を説明するフローチャートである。 基板の変形例を示す図である。 基板のもう１つの変形例を示す図である。 図１の細胞分取システムの変形例を示す図である。 図１の細胞分取システムのもう１つの変形例を示す図である。 図１の細胞分取システムを使用して細胞を採取する手順の変形例を示すフローチャートである。 外筒および内筒を用いた粘着シートを伸展させる方法の変形例を示す図であり、外筒に粘着シートを設置した状態を示す図である。 図１２の外筒および内筒を用いて粘着シートを伸展させた状態を示す図である。 図１２の外筒および内筒を用いて別の方法により粘着シートを伸展させた状態を示す図である。 粘着シートを伸展させる方法のもう１つ変形例を示す図であり、粘着シートの伸展前を示している。 粘着シートを伸展させる方法のもう１つ変形例を示す図であり、粘着シートの伸展後を示している。 グリップリングの変形例を示す図である。 本発明の第２の実施形態に係る細胞分取装置および細胞分取システムが備える基板の構成を示す図である。 本発明の第２の実施形態に係る細胞分取装置および細胞分取システムが備える支持部材および分割補助部の構成を示す図である。 図１８の支持部材および分割補助部を使用した切片の分割方法を説明する図である。 図１８の支持部材および分割補助部を使用した切片の分割方法を説明する図である。 図１８の支持部材を使用した切片の分割方法の変形例を示す図である。 支持部材の変形例と該支持部材を使用した切片の分割方法を説明する図である。 図１８の支持部材の変形例を示す図である。 本発明の実施例により作成した切片の写真であり、分割前の状態を示している。 図２３の切片の分割後の状態を示す写真である。
（第１の実施形態）
　以下に、本発明の第１の実施形態に係る細胞分取装置１および細胞分取システム１００について図１から図１６を参照して説明する。
　本実施形態に係る細胞分取システム１００は、図１に示されるように、光学顕微鏡（観察装置）２と、本実施形態に係る細胞分取装置１とを備えている。
　光学顕微鏡２は、正立型である。光学顕微鏡２は、その視野を撮像するＣＣＤカメラなどの撮像装置３がカメラ用ポート２ａに接続されている。撮像装置３によって撮像された映像は図示しないモニタに表示されるようになっている。細胞分取システム１００は、このモニタと共に組織表示システムを構成している。映像は、イメージプロセッサなどの図示しない映像処理装置によって映像処理が施されてからモニタに表示されてもよい。
　細胞分取装置１は、生体組織の切片が貼付されるガラス基板（基板）４と、その表面に沿う方向に伸展可能でありガラス基板４が接着される粘着シート（伸展部材）５と、該粘着シート５を伸展させる伸展用ステージ（分割部、伸展部、押圧部材）６と、該伸展用ステージ６で伸展させる粘着シート５を保持する治具７と、粘着シート５からガラス基板４の小片４ｂを採取する採取部８とを備えている。本発明に係る細胞分割装置は、基板４と、伸展用ステージ６と、治具７とからなる構成に相当する。
　ガラス基板４は、平坦な表面を有する平板状である。ガラス基板４の表面には、図２Ａおよび図３Ａに示されるように、所定の間隔を空けて格子状の溝（分割線）４ａが形成されている。溝４ａは、例えば、レーザ加工や化学エッチング、ダイシングなどにより形成されてもよく、ガラス切りなどを用いて操作者の手作業により形成されてもよい。
　ガラス基板４は、生体組織の切片を安定に支持可能な厚さ、例えば、０．０５ｍｍから０．５ｍｍが好ましい。溝４ａの間隔は、切片から採取すべき断片の大きさによって適宜変更可能である。例えば、溝４ａの間隔は、切片内から十分に細かい位置精度で所望の領域の断片を採取しつつ、採取した断片に十分な量の細胞が含まれているように、０．０５ｍｍから５．０ｍｍが好ましい。ガラス基板４は、その上に貼付された切片の透過光像を光学顕微鏡２で観察できるように、光学的に透明なものが用いられる。
　ガラス基板４は、その表面と切片との密着性を向上するために、表面にシラン化などの化学処理が施されていてもよい。また、ガラス基板４は、小片４ｂの採取後に行う検査などの目的に応じて、例えば、核酸やタンパク質などが吸着を防ぐためのコーティング処理などが施されていてもよい。
　粘着シート５は、一方の面に接着剤が塗布され、ガラス基板４を十分に堅固にかつ後述する採取部８により剥離可能に接着可能な粘着性を有している。また、粘着シート５はその表面に沿う方向に伸展可能である。粘着シート５上にガラス基板４を接着した状態で粘着シート５をその表面に沿う方向に伸展させたときに、粘着シート５の伸展に伴ってガラス基板４もその表面に沿う方向に引っ張られる。そして、図３Ｂに示されるように、ガラス基板４が溝４ａの位置で切断されて複数の小片４ｂに分割するようになっている。このときに、ガラス基板４の表面上に貼付された切片Ａも同時にその表面に沿う方向に引っ張られて溝４ａに沿って切断される。
　粘着シート５は、光学的に透過性または半透過性を有している。これにより、光学顕微鏡２で粘着シート５を観察したときに、該粘着シート５を挟んで光学顕微鏡２の対物レンズと反対側に配置された物体も観察可能になっている。粘着シート５としては、例えば、半導体製造プロセスのダイシングステップにおいてウエハの一時的な固定に使用されるダイシングテープを好適に用いることができる。
　なお、図２Ａには、ガラス基板４が溝４ａを粘着シート５側に向けて粘着シート５に接着されている例が示されているが、図２Ｂに示されるように、ガラス基板４が溝４ａを粘着シート５と反対側に向けて該粘着シート５に接着されてもよい。
　伸展用ステージ６は、図４に示されるように、略円柱状であり、両端が略平行にかつ平坦に形成されている。伸展用ステージ６は上端側の部分（以下、小径部分という。）６ａが、他の部分（以下、大径部分という。）６ｂよりも小さい径寸法を有するように、側面に段差が形成されている。
　治具７は、粘着シート５を広げた状態で貼付可能な下枠（固定部材）９ａと、該下枠９ａに上からかぶせる上枠９ｂと、粘着シート５を伸展した状態に保持するグリップリング１０ａ，１０ｂ（保持部材）とを有している。グリップリング１０ａ，１０ｂは、外リング１０ａと内リング１０ｂとからなる。外リング１０ａの内径寸法と内リング１０ｂの外径寸法とは略同一である。下枠９ａと上枠９ｂは、略中央部分に板圧方向に貫通した窓９ｃ，９ｄがそれぞれ形成されている。上枠９ｂの窓９ｄの内側にはその内周面に沿って外リング１０ａが嵌めこまれている。下枠９ａの９ｃ窓は、小径部分６ａの外径寸法以上の直径を有している。
　治具７は次のように使用される。まず、内リング１０ｂを小径部分６ａの外周に沿って嵌める。また、ガラス基板４が接着された粘着シート５を、ガラス基板４を窓９ｃの位置に配置し、ガラス基板４が接着されている側を上方に向けた状態で下枠９ａの下面に接着する。これにより、粘着シート５のガラス基板４が接着された領域の周辺が所定の形状に固定される。次に、粘着シート５の窓９ｃと一致している部分を伸展用ステージ６の上端面に押し当てた状態で下枠９ａを下方向に押圧して移動させる。これにより、図５Ａに示されるように、粘着シート５の窓９ｃと一致している部分が伸展用ステージ６から押圧されて伸展する。この粘着シート５の伸展に伴ってガラス基板４が複数の小片４ｂに分割される。
　次に、図５Ｂに示されるように、粘着シート５を伸展させたままの状態で上枠９ｂを下枠９ａにかぶせることにより外リング１０ａと内リング１０ｂを嵌める。これにより、粘着シート５の窓９ｃと一致する部分が伸展された状態にグリップリング１０ａ，１０ｂによって保持される。
　なお、このようにして粘着シート５を伸展させたときに、該粘着シート５がどの程度伸展したかを知るための目印、例えば、目盛りが粘着シート５に付されていてもよい。
　採取部８は、採取針１１と、該採取針１１を操作するマニピュレータ１２とを備えている。採取針１１の先端部は、小片４ｂと略同一またはそれ以下の直径寸法を有している。マニピュレータ１２は、アーム１２ａの先端に採取針１１を保持している。マニピュレータ１２は、操作者による操作に従ってアーム１２ａを３次元方向に移動させるようになっている。
　このように構成された細胞分取装置１および細胞分取システム１００を使用して生体組織の切片から所望の細胞を含む断片を採取する方法について、図６を参照して以下に説明する。
　本実施形態に係る細胞分取装置１および細胞分取システム１００を使用して生体組織の切片から目的の細胞を採取するには、まず、生体組織から採取用切片（切片）を切り出し（ステップＳ１）、切り出した採取用切片をガラス基板４上に貼付する（ステップＳ２、貼付ステップ）。そして、採取用切片を光学顕微鏡２で観察して検体画像を取得する（ステップＳ３）。
　採取用切片の切り出しは、例えば、凍結包埋法やパラフィン包埋法などにより行われる。採取用切片の厚さは、採取した細胞の用途にもよるが、通常の病理標本などに用いられる切片の厚さ（約数μｍから１０μｍ）より厚くてもよく、例えば、５０μｍ程度の厚さで採取用切片が切り出される。切り出した採取用切片の寸法がガラス基板４の溝４ａの間隔よりも小さいときには、採取用切片が溝４ａをまたぐように採取用切片をガラス基板４上に貼付する。
　また、採取用切片とは別に、生体組織の採取用切片の切り出し位置と隣接した位置から厚さ数μｍから１０μｍ程度の染色用切片を切り出す。切り出した染色用切片は、スライドガラスに貼付した後に、例えば、病理診断用の染色を施しておく（ステップＳ４）。そして、染色済みの染色用切片を光学顕微鏡２で観察して染色画像を取得し（ステップＳ５）、取得した染色画像内において所望の細胞が存在している採取すべき領域、例えば、癌細胞に浸食されている領域を決定する（ステップＳ６）。
　次に、取得した検体画像と染色画像とを、各画像内の切片がぴったり重なり合うように重畳して表示し（ステップＳ７）、染色用切片内の決定した採取すべき領域に一致する小片４ｂの位置、例えば、その小片４ｂの列番号と段番号を記録する（ステップＳ８）。
　次に、ガラス基板４を粘着シート５に接着する。なお、粘着シート５に予め接着しておいたガラス基板４上に切り出した採取用切片を貼付してもよい。次に、粘着シート５を伸展用ステージ６および治具７を使用して伸展させることによりガラス基板４を分割する（ステップＳ９、分割ステップ）。このときに、ガラス基板４上に貼付された採取用切片もガラス基板４と共にその表面方向に引っ張られることにより溝４ａの位置で断片に分割される。
　次に、粘着シート５をグリップリング１０ａ，１０ｂによって伸展した状態に保持し、ガラス基板４が接着された側の面が下方を向くように粘着シート５を標本ステージ２ｂ上に設置する。このときに、粘着シート５を、下枠９ａから剥離した状態で標本ステージ２ｂに設置してもよく、下枠９ａと共に標本ステージ２ｂに設置しても良い。
　次に、記録しておいた位置の小片４ｂを光学顕微鏡２で観察しながら、その視野内でマニピュレータ１２を操作することより採取針１１を採取すべき小片４ｂの背後に配置する。そして、採取すべき小片４ｂの、粘着シート５に接着している側の面を採取針１１で突くことにより小片４ｂを粘着シート５から剥離させて落下させる（ステップＳ１０、採取ステップ）。このときに、標本ステージ２ｂの下方にチューブラック１３を配置し、小片４ｂの落下位置に予め回収チューブ１３ａを設置しておいてもよい。
　以上の手順により、採取用切片から所望の細胞が存在する領域の断片を小片４ｂと共に採取することができる。採取された細胞は、例えば、遺伝子検査などに用いられる。
　このように、本実施形態によれば、簡便な構成と操作のみで切片から所望の細胞が存在する領域を選択的に採取することができるという利点がある。また、ＵＶレーザ光源のような高価な構成が不要であるので、製造コストを安価に抑えることができるという利点がある。また、ＬＭＤと異なり切片を力学的に切断しているので、比較的厚い切片でも容易に切断可能であると共に、溝４ａの間隔を調節するだけで小片４ｂの大きさを容易に拡大することができる。したがって、従来十分な細胞数を回収するために複数の切片から断片を採取する必要があり多大な労力を要していた作業が、１つまたは少数の小片４ｂを採取するだけで済むので、作業に要する労力と時間とを大幅に削減することができるという利点がある。
　上記実施形態においては、切片を貼付する基板として、格子状の溝４ａが形成されたガラス基板４を用いることとしたが、これに代えて、ガラスの小片４ｂが平面方向に配列されてなるガラス基板４を使用してもよい。
　この場合、ガラス基板４の形状を保持するために、図７に示されるように、予め粘着シート５上にガラスの小片４ｂが配列された状態で接着されている。このようにすることで、粘着シート５を伸展させたときに、小片４ｂ同士の境界（分割線）においてより容易にかつ確実にガラス基板４を分割することができる。
　なお、予め分割された小片を粘着シート５上に配列した状態にするには、一例として以下のような方法を用いることができる。
　粘着シート５上にガラス基板４を接着し、該ガラス基板４にガラス切りで格子状に傷をつける。そして、ガラス基板４を傷の位置で徒手的に割ることにより、容易に図７のように小片４ｂが粘着シート５上に配列した状態とすることができる。このときに、ガラス基板４が汚れないように、ガラス基板４表面をフィルムなどで保護しながら行うことが好ましい。
　また、上記実施形態で採用した基板の構成は一例であり、この構成に限定されるものではない。
　例えば、基板の素材は、ガラスの他に樹脂などでもよい。小片４ｂの形状としては、粘着シート５の表面に密に配列可能な形状であればよく、例えば、正六角形や三角形でもよい。また、図８に示されるように、小片として球状のガラスビーズや樹脂ビーズ４ｃを用い、これらを粘着シート５上に好ましくは単層で配列させることにより基板４’が構成されていてもよい。
　また、基板として磁性を有するものを用いても良い。例えば、直径が１μｍから５００μｍの磁性粒子を粘着シート５の表面に密に配列させてもよいし、ステンレスなどの金属板を基板として使用してもよい。基板として金属のような可視光を透過させないものを用いた場合には、光学顕微鏡で粘着シート５の透過光像を観察したときに、小片４ｂが小さくてもよりはっきりと視認することができる。
　この場合、採取部８として、磁石を使用してもよい。例えば、採取針１１の先端に、磁性粒子と略同一の大きさの磁石を設ける。そして、採取針１１の先端を、磁性粒子に粘着シート５と反対側から近づけることにより、所望の磁性粒子を磁力によって採取針１１の先端に捕捉して粘着シート５から採取することができる。
　また、上記実施形態においては、正立型の光学顕微鏡２を使用し、伸展用ステージ６が光学顕微鏡２と別体で設けられている構成を採用したが、細胞分取システム１００の構成はこれに限定されるものではない。例えば、光学顕微鏡２として倒立型を使用してもよく、伸展用ステージ６を光学顕微鏡２に搭載してもよい。
　図９は、倒立型の光学顕微鏡２に、伸展用ステージ６と治具７とを設けた構成の一例を示している。標本ステージ２ｂは、光学顕微鏡２の観察位置と、光学顕微鏡２の本体から外れた位置との間でガイドレール２ｃに沿って水平方向にスライド可能に設けられている。このような構成においては、標本ステージ２ｂを観察位置に配置した状態で治具７を下方に移動させることにより伸展用ステージ６上で粘着シート５を伸展させる。その後、標本ステージ２ｂをスライドさせ、光学顕微鏡２と別体で設けられた採取部８を使用して小片４ｂが採取される。
　図１０は、正立型の光学顕微鏡２に、伸展用ステージ６、治具７および採取部８を設けた構成の一例を示している。伸展用ステージ６は、標本ステージ２ｂの上方に対物レンズと一体で上下方向に移動可能に設けられ、治具７によって標本ステージ２ｂの上方に保持された粘着シート５に対して上方から押し当てられるようになっている。この構成においては、標本ステージ２ｂ上で、粘着シート５の伸展から小片４ｂの採取までの一連の作業を行うことができる。
　また、上記実施形態においては、採取用切片の検体画像と染色用切片の染色画像とを照らし合わせることにより採取すべき小片４ｂを決定することとしたが、これに代えて、採取用切片の画像から採取すべき小片４ｂを決定してもよい。
　比較的厚い採取用切片の場合、細胞が厚さ方向に重なっているため、染色を施しても個々の細胞の形状や細胞の分布などを正確に像から認識することが難しい。しかし、そのような染色像や未染色の切片の像からでも、大まかな組織形状や細胞の分布に基づいて採取すべき領域を判別可能な場合には、例えば、図１１に示されるように、光学顕微鏡２で採取用切片を観察しながらその場で採取すべき小片４ｂを選択し（ステップＳ１１）、粘着シート５の伸展（ステップＳ９）および小片４ｂの採取（ステップＳ１０）を行ってもよい。このようにすることで、必要に応じて手順をさらに簡略化することができる。
　また、上記実施形態においては、略円柱状の伸展用ステージ６を使用して粘着シート５を伸展させることとしたが、粘着シート５を伸展させる方法はこれに限定されるものではない。
　例えば、伸展用ステージ６に代えて外筒１４ａおよび該外筒１４ａ内に収納可能な内筒１４ｂを使用してもよい。
　この場合、図１２に示されるように、粘着シート５を外筒１４ａの上端面に被せて外筒１４ａの側面に固定する。符号１５は、粘着シート５を外筒１４ａの側面に固定するために固定部材を示している。次に、図１３に示されるように、内筒１４ｂを外筒１４ａの内部から相対的に突出させるか、または、図１４に示されるように、内筒１４ｂを外筒１４ａの外部から該外筒１４ａ内に相対的に押し込む。これにより、粘着シート５を各方向に略均一に伸展させることができる。
　また、図１５Ａに示されるように、ガラス基板４が接着された領域を除いた位置において粘着シート５をホルダ１６により一定の形状に保持し、図１５Ｂに示されるように、ガラス基板４が接着された領域を伸展用ステージ６に押し当てることにより粘着シート５を伸展させてもよい。
　また、グリップリングとして、磁力によって互いに密着状態に維持できるものを用いてもよい。例えば、図１６に示されるように、グリップリング１０ｃ，１０ｄは、同一の径寸法を有する上リング１０ｃと下リング１０ｄとからなり、上リング１０ｃは磁石からなり、下リング１０ｄはステンレスなどの金属からなる。上リング１０ｃと下リング１０ｄとの間に粘着シート５を伸展させた状態で挟んで両リング１０ｃ，１０ｄを互いに磁力で密着させることによっても、粘着シート５を伸展した状態に保持することができる。両方のリング１０ｃ，１０ｄが、互いに引力を発生させる磁石からなっていてもよい。
　また、上記実施形態においては、採取針１１で小片４ｂを背後から突くことにより該小片４ｂを粘着シート５から剥離させて回収することとしたが、これに代えて、内部が陰圧に吸引可能な回収容器を使用してもよい。このようにしても、回収容器を採取すべき小片４ｂに粘着シート５と反対側から近づけることにより、小片４ｂを粘着シート５から剥離させて回収容器内に回収することができる。
　また、粘着シート５として、紫外線が照射されることにより粘着性が失われるものを用いてもよい。
　この場合、例えば、光学顕微鏡２に紫外光源（採取部）を搭載する。そして、紫外光源から放射された紫外線を、対物レンズを介して採取すべき小片４ｂの位置に局所的に照射することにより、小片４ｂを容易に粘着シート５から剥離させて回収することができる。他にも、光ファイバで紫外光を導き、ファイバ端を採取すべき小片４ｂの位置に向けて局所的に照射することによっても、同様の効果を得られる。
（第２の実施形態）
　次に、本発明の第２の実施形態に係る細胞分取装置および細胞分取システムについて図１７から図２２を参照して説明する。
　本実施形態に係る細胞分取装置および細胞分取システムは、基板、分割部および採取部の構成において前述した第１の実施形態と異なる。したがって、これらの構成について主に説明し、第１の実施形態と共通する構成についての説明を省略する。
　本実施形態において、基板２０は、平面状に２次元配列された複数の小片２０ａの集合体からなり、図１７に示されるように、略直方体の小片２０ａの側面同士が密着した状態に保持されている。これらの小片２０ａの少なくとも一方の端面は、生体組織の採取用切片（本実施形態においては、以下、単に切片という。）を貼り付け可能な略平坦な表面を形成するように、同一平面上に配置されている。以下、基板２０および小片２０ａの、切片が貼り付けられる面を組織接着面ともいう。
　このような小片２０ａの配列構造は、例えば、半径方向内方向の押圧力を発生する輪ゴムのような環状の部材２１によって１つに束ねられることによって保持されている。すなわち、隣接する小片２０ａの側面同士が互いに押圧し合い、それによって側面間に発生する摩擦力により小片２０ａの配列構造は保持されている。この配列構造において各小片２０ａはその周囲に隣接する複数の小片２０ａによって支持されているため、１つの小片２０ａが除かれたとしても残された小片２０ａの配列構造は安定に保持される。
　なお、小片２０ａは、隣接する側面同士が接着剤によって接着され、または、組織接着面とは反対側の面に接着剤が塗布されることにより配列状態に保持されていてもよい。また、基板２０は、微細加工が容易な材料であり、切片との接着性が良好な表面を有し、生物材料の混入がない材料、例えば、ガラス、金属、またはプラスチックからなるものが好ましい。また、小片２０ａの形状は、配列構造を維持可能な形状であればよく、球状や円柱状、または直方体以外の多角柱状であってもよい。小片２０ａが正六角柱の場合には、配列構造がさらに安定なものとなる。
　また、本実施形態において、小片２０ａとは、１個の直方体の小片と、該小片を除く小片群との両方を示す。
　また、本実施形態に係る細胞分取装置は、第１の実施形態における粘着シート５、伸展用ステージ６および治具７に代えて、支持部材２２および分割補助部２３を備えている。
　支持部材２２は、１つの小片２０ａの端面よりも狭い面積で該端面と接触させられる接触面２２ａを有している。なお、図１８には、支持部材２２の一例として、略半球形の一端面を有する円柱状の部材が示されているが、支持部材の接触面２２ａは、小片２０ａの端面を安定して押圧可能な形状であればよく、例えば、小片２０ａの端面と十分に広い面積で接触するように略平坦な形状であってもよい。
　分割補助部２３は、支持部材２２を使用した切片の分割を補助するものである。分割補助部２３は、筒状の部材であり、長手方向に沿って形成されて両端面に開口する孔２３ａを有している。分割補助部２３の少なくとも一方の端面は、長手方向に対して略垂直に形成された平坦面である。この一方の端面を小片２０ａの端面に接触させて配置したときに、孔２３ａが小片２０ａの厚さ方向に沿って延びるようになっている。孔２３ａの横断面形状は、小片２０ａの端面よりも大きく小片２０ａが通過可能な形状であればよいが、小片２０ａの端面よりも若干大きい横断面形状を有していることが好ましい。
　このように構成された細胞分取装置および細胞分取システムを使用して生体組織の切片から所望の細胞を含む断片を採取する方法について説明する。本実施形態に係る組織分割方法および細胞分取方法は、図６に示される第１の実施形態に係るそれらと、切片を分割する工程（ステップＳ９）および分割された断片を採取する工程（ステップＳ１０）において異なる。したがって、これら２つの工程についてのみ説明する。
　基板２０を切片Ａが貼付されている組織接着面を下方に向けて標本ステージ２ｂに設置した後、図１９Ａに示されるように、採取すべき小片２０ａの、組織接着面とは反対側の面（以下、反対面ともいう。）に支持部材２２を配置する。また、分割補助部２３を、孔２３ａの開口と支持部材２２とが基板２０を間に挟んで対向するように配置し、分割補助部２３の一方の端面を切片Ａに接触させる。支持部材２２の操作は、第１の実施形態の採取針１１と同様にマニピュレータ１２によって行われる。
　次に、図１９Ｂに示されるように、支持部材２２を下方に移動させることにより、小片２０ａの反対面を支持部材２２の接触面２２ａで押圧してこの小片２０ａを下方に移動させる（分割ステップ、採取ステップ）。小片２０ａ同士は摩擦力によって互い支持し合っているので、周囲の小片２０ａ群の配列状態は保持されたまま、支持部材２２によって押圧された小片２０ａのみが周辺の小片２０ａ群に対して下方に移動して分離する。
　分離した小片２０ａの組織接着面に貼付されている切片Ａの一部は、他の部分に対して下方に引っ張られることにより小片２０ａの組織接着面と略同等の形状の断片Ａ’に切断される。このときに、分割補助部２３の一方の端面と孔２３ａの内周面とが成す角が、切片Ａに対して刃のように作用する。これにより、切片Ａがより容易に切断されると共に、その断片Ａ’の形状は小片２０ａの組織接着面とより正確に一致したものとなる。このようにして切片Ａの断片Ａ’と共に分離した小片２０ａは、標本ステージ２ｂの下方に予め配置された回収チューブ１３ａに落下して回収される。
　以上の手順により、切片Ａから所望の細胞が存在する領域の断片Ａ’を小片２０ａと共に採取することができる。
　このように、本実施形態によれば、簡便な構成と操作のみで切片Ａから所望の細胞が存在する領域を選択的に採取することができるという利点がある。また、ＵＶレーザ光源のような高価な構成が不要であるので、製造コストを安価に抑えることができるという利点がある。また、ＬＭＤと異なり切片Ａを力学的に切断しているので、比較的厚い切片Ａでも容易に切断可能であると共に、小片２０ａの寸法を調節するだけで断片Ａ’の大きさを容易に拡大することができる。したがって、従来十分な細胞数を回収するために複数の切片から断片を採取する必要があり多大な労力を要していた作業が、１つまたは少数の小片２０ａを採取するだけで済むので、作業に要する労力と時間とを大幅に削減することができるという利点がある。
　なお、上記実施形態においては、支持部材２２により小片２０ａの反対面を押圧することとしたが、これに代えて、図２０に示されるように、小片２０ａの組織接着面を押圧することとしてもよい。この場合、基板２０を、切片Ａが貼り付けられている側を上方に向けて標本ステージ２ｂに設置することにより、支持部材２２によって分離した小片２０ａをそのまま下方の回収チューブ１３ａに落下させることができる。
　支持部材２２により小片２０ａの組織接着面を押圧する場合、支持部材２２の接触面２２ａと切片Ａとが直接接触することを防ぐために、これらの間に配置される保護部材２４を備えることとしてもよい。
　このようにすることで、切片Ａに含まれる生体分子等の物質が支持部材２２に付着することが防止されるので、同一の支持部材２２を連続して使用して複数の小片２０ａを分離し断片Ａ’を採取したとしても、支持部材２２を介した断片Ａ’間のコンタミネーションを防ぐことができる。
　この場合、小片２０ａの組織接着面と略同一の大きさまたはそれより小さい保護部材２４を使用し、小片２０ａを分離した後に小片２０ａと共に保護部材２４も回収することとしてもよい。この場合、保護部材２４は、小片２０ａに付着した断片Ａ’の分析に影響を与えない材料からなるものが好ましい。このようにしても、支持部材２２を介した断片Ａ’間のコンタミネーションを防ぐことができる。
　なお、切片Ａがパラフィン包埋法によって作成されている場合は、支持部材２２と切片Ａとが接触したときに切片Ａに含まれる生体分子等の物質が支持部材２２に付着する可能性は十分に低い。したがって、保護部材２４を使用せずに同じ支持部材２２で連続して小片２０ａを分離したとしても、採取した断片Ａ’間のコンタミネーションが発生する可能性は十分に低い。一方、凍結包埋法で作成された切片Ａのように生体組織の切断面が露出している切片の場合も、採取する断片Ａ’が十分に大きく、微量のコンタミネーションが発生したとしてもその後の断片Ａ’の分析結果に影響が無い場合は保護部材２４を使用しなくてもよい。
　また、上記実施形態においては、支持部材２２に代えて、他の手段によって小片２０ａの組織接着面または反対面を押圧することとしてもよい。例えば、分割部が、小片２０ａの端面よりも狭い開口を有する管部材を備え、開口を小片２０ａの端面に対向配置した状態で管部材の内部に圧縮空気を供給することにより、開口から小片２０ａの端面に圧縮空気を噴き付けて該端面を押圧することとしてもよい。
　また、上記実施形態においては、小片２０ａの組織接着面を押圧することにより該小片２０ａを分離することとしたが、これに代えて、小片２０ａの反対面を引っ張ることとしてもよい。
　この場合も小片２０ａの分離に支持部材２２’が使用される。すなわち、図２１に示されるように、支持部材２２’の接触面２２ａ’に小片２０ａの反対面を吸着する吸着部材２５を設け、該吸着部材２５を介して接触面２２ａ’を反対面に接触させることにより、支持部材２２’に小片２０ａが吸着する。そして、支持部材２２’を矢印で示される方向に移動させることにより、１つの小片２０ａを分離することができる。分離した小片２０ａは、吸着部材２５から剥離して回収される。なお、図２１には、略平坦な接触面２２ａ’を有する支持部材２２’が示されている。
　吸着部材２５としては、例えば、表面に粘着性を有する部材が用いられる。小片２０ａが磁性物質を含む場合には、吸着部材２５として磁石を使用することとしてもよい。また、上述した管部材を使用し、開口を端面に対向配置して管部材内を吸引することによっても、小片２０ａの反対面を引っ張って該小片２０ａを分離することができる。
　また、上記実施形態においては、図２２に示されるように、２つの支持部材２２，２２”を使用して小片２０ａの両端面を支持し、これらの支持部材２２，２２”を一体的に上方向または下方向に移動させることにより小片２０ａを分離することとしてもよい。
　また、上記実施形態においては、小片２０ａを分離する方向は鉛直方向に対して上方・下方に限らず、斜め方向に小片２０ａを移動させて分離することとしてもよい。
　次に、上述した実施形態の実施例について説明する。
　本実施例では、細胞分取装置により生体組織の切片が分割されることを確認するため、以下の実験を行った。
　生体組織としてブタの結腸を使用し、生体組織から、厚さが５０μｍ、４辺が約１０ｍｍの切片を凍結包埋法により切り出した。切り出した切片を、ダイシングシート（伸展部材）上に角が互いに隣接するように配列して貼付された４枚のカバーガラス上に、該カバーガラスの境界（分割線）をまたぐように貼付した後、切片を風乾した。カバーガラスは、各辺寸法が１８ｍｍ、厚さが０．１３ｍｍから０．１７ｍｍのものを使用した。すなわち、本実施例においては、小片としての４つのカバーガラスから１つの基板が構成され、これらの４つのカバーガラスは溝によって互いに区切られている。
　次に、ダイシングテープを、略中央部に円状の窓が貫通して形成されている上枠（固定部材）に、切片が窓の略中央部分に配置されるように貼り付けた。次に、カバーガラスが貼付されている側の面を上方に向け、窓内に円柱状のステージ（押圧部材、伸展部、分割部）が配置された状態で、上枠を略水平に保ちながら押し下げることにより、ダイシングテープの窓内に配置されている部分をその平面方向に伸展させた。これにより、４枚のカバーガラスを互いに離間させ、カバーガラス上に貼付されていた切片を、カバーガラスの境界において４つの断片に分割した。このようにして切片を分割する前と後の切片の写真を図２３および図２４に示す。
　図２３は、ダイシングテープを伸展する前の状態を示している。写真の略中央に縦方向現れている線Ｌが、カバーガラスの境界（分割線）である。
　図２４は、ダイシングテープを伸展させた状態を示しており、切片がカバーガラスの境界に沿ってきれいに分割されていることが分かる。
　以上の実験から、本発明の組織分割装置、細胞分取装置および細胞分取システムを用いることにより、比較的厚い切片であっても容易にかつ分割線に沿って十分にきれいに分割できることが確認された。
　上述した第１の実施形態および実施例から、以下の付記項に記載の本発明のもう１つの態様が導かれる。
（付記項１）
　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有し、複数の小片に分割可能に設けられた基板と、該基板を複数の小片に分割することによって前記表面に貼り付けられた切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割部と、該分割部によって分割された前記小片を採取する採取部とを備える細胞分取装置。
　付記項１に係る発明によれば、基板と該基板に貼り付けられた生体組織の切片を分割部によっていっしょに分割し、分割された小片を採取部によって採取するだけの簡便な構成と操作で小片と共に切片の断片を採取することができる。また、切片を厚くし、または、小片を平面方向に大きくすることにより、各小片に付着した細胞の量を増やし、１個または数個の小片を採取するだけで遺伝子などの微量な生体試料の検査にも十分な量の細胞を容易に採取することができる。
（付記項２）
　前記基板は、前記複数の小片が平面状に配列されてなり、前記分割部が、前記小片同士を相対的に移動させる力を前記基板に加えることで前記基板を分割する付記項１に記載の細胞分取装置。
（付記項３）
　前記基板は、前記複数の小片に区画する溝が形成されている付記項２に記載の細胞分取装置。
（付記項４）
　前記基板が、分離した前記複数の小片の集合体からなる付記項２に記載の細胞分取装置。
（付記項５）
　前記分割部が、前記小片同士を前記表面に沿う方向に相対的に移動させる力を前記基板に加える付記項１から付記項４のいずれかに記載の細胞分取装置。
（付記項６）
　前記基板の前記切片が貼り付けられる表面とは反対側の面を接着すると共に前記表面に沿う方向に伸展可能な伸展部材を備え、前記分割部が、少なくとも前記基板に含まれる一部の小片が接着されている領域において前記伸展部材を前記表面に沿う方向に伸展させる伸展部を備える付記項５に記載の細胞分取装置。
　付記項６に係る発明によれば、切片が貼り付けられた基板を伸展部材上に接着した状態で、伸展部により伸展部材を伸展させることにより、基板上に貼り付けられた切片を基板と共に分割することができる。
（付記項７）
　前記伸展部材が、前記基板の前記反対側の面を剥離可能に接着する付記項６に記載の細胞分取装置。
　付記項７に係る発明によれば、基板を分割した後に小片を伸展部材から剥離して容易に回収することができる。
（付記項８）
　前記伸展部材が、その表面に粘着性を有する付記項７に記載の細胞分取装置。
　付記項８に係る発明によれば、基板を容易に伸展部材上に接着することができる。
（付記項９）
　前記基板は、分離した前記複数の小片が、互いに隣接して配列した状態で前記伸展部材に接着されてなる付記項６または付記項７に記載の細胞分取装置。
　付記項９に係る発明によれば、伸展部材を伸展させたときに基板を容易にかつ確実に小片に分割することができる。
（付記項１０）
　前記伸展部材が、光学的に透明または半透明な材料からなる付記項６から付記項９のいずれかに記載の細胞分取装置。
　付記項１０に係る発明によれば、伸展部材の透過光像を光学顕微鏡で観察したときに伸展部材上の小片の位置を確認することができる。
（付記項１１）
　前記小片が、０．０５ｍｍから０．５ｍｍの厚さ寸法と０．０５ｍｍから５．０ｍｍの辺寸法とを有する直方体状である付記項１から付記項１０のいずれかに記載の細胞分取装置。
　付記項１１に係る発明によれば、切片から所望の領域を十分に細かい精度で選択して採取しつつ、各小片に十分な量の細胞を付着させることができる。
（付記項１２）
　前記伸展部が、前記伸展部材の、前記基板が接着されている領域の周辺部位を所定の形状に固定する固定部材と、該固定部材により固定された前記伸展部材の前記領域を、前記基板が接着されている面と反対の面の側から押圧する押圧部材とを備える付記項６から付記項１１のいずれかに記載の細胞分取装置。
　付記項１２に係る発明によれば、伸展部材を簡便な構成と操作のみで伸展させることができる。
（付記項１３）
　前記採取部が、前記伸展部材の前記小片が接着されている位置を、該小片が接着されている面とは反対側の面から突く針部材を備える付記項６から付記項１２のいずれかに記載の細胞分取装置。
　付記項１３に係る発明によれば、複数の小片の中から特定の小片だけを容易に伸展部材から剥離させて採取することができる。
（付記項１４）
　前記伸展部材の前記領域を伸展した状態に保持する保持部材を備える付記項６から付記項１３のいずれかに記載の細胞分取装置。
　付記項１４に係る発明によれば、伸展部材を伸展させて各小片同士の間に間隔が空いた状態に保持し、採取部による小片の採取をより容易にすることができる。
（付記項１５）
　前記保持部材が、前記伸展部材の前記基板が接着されている側の面を下向きに保持可能である付記項１４に記載の細胞分取装置。
　付記項１５に係る発明によれば、保持部材により伸展部材を、基板を下に向けて保持した状態で小片を剥離させることにより、小片を自重により落下させて容易に回収することができる。
（付記項１６）
　前記保持部材により保持された前記伸展部材の、前記基板が接着されている面の側に配置され、内部が陰圧に吸引される回収容器を備える付記項１４または付記項１５に記載の細胞分取装置。
　付記項１６に係る発明によれば、回収容器を採取すべき小片に接近させるだけで容易に該小片を回収容器内に回収することができる。
（付記項１７）
　前記小片が、０．００１ｍｍから０．５ｍｍの直径寸法を有する磁性粒子である付記項９に記載の細胞分取装置。
　付記項１７に係る発明によれば、例えば、回収した小片を溶液中で処理する際に磁力を利用して溶液から分離するなど、処理を効率化することができる。
（付記項１８）
　前記採取部が、前記小片の寸法と略同一の大きさの空間に、前記磁性粒子を引き寄せる磁力を発生させる磁石を有する付記項１７に記載の細胞分取装置。
　付記項１８に係る発明によれば、磁石を所望の小片に接近させることにより、該小片を磁石に捕捉して容易に伸展部材から採取することができる。
（付記項１９）
　付記項１から付記項１８のいずれかに記載の細胞分取装置と、前記基板上の前記切片を観察する観察装置とを備える細胞分取システム。
　付記項１９に係る発明によれば、基板上に貼付された切片や分割後に形成された小片などを観察装置によって観察することにより、採取すべき小片の選択や、選択した小片の採取をより容易にかつより正確に行なうことができる。
（付記項２０）
　所定の分割線によって複数の小片に分割可能な基板の表面上に、前記分割線をまたいで生体組織の切片を貼付する貼付ステップと、前記切片が貼付された前記基板を前記表面に沿う方向に引っ張ることにより、前記基板および前記生体組織の切片を前記分割線で分割する分割ステップと、該分割ステップにおいて分割された前記小片を採取する採取ステップとを備える細胞分取方法。
　付記項２０に係る発明によれば、貼付ステップにおいて切片を基板に貼付した後、分割ステップにおいて基板を引っ張ることにより基板と共に該基板上に貼付された切片を複数の小片に分割し、分割された複数の小片の中から採取ステップにおいて小片を選択して採取することにより、生体組織の切片から遺伝子検査にも十分な量の細胞を簡便な構成と操作で採取することができる。
１　細胞分取装置
２　光学顕微鏡（観察装置）
２ａ　カメラ用ポート
２ｂ　標本ステージ
３　撮像装置
４　ガラス基板（基板）
４ａ　溝（分割線）
４ｂ　小片
５　粘着シート（伸展部材）
６　伸展用ステージ（分割部、伸展部、押圧部材）
７　治具
８　採取部
９ａ　下枠（固定部材）
９ｂ　上枠
９ｃ，９ｄ　窓
１０ａ　グリップリング、外リング（保持部材）
１０ｂ　グリップリング、内リング（保持部材）
１０ｃ　グリップリング、上リング（保持部材）
１０ｄ　グリップリング、下リング（保持部材）
１１　採取針（針部材）
１２　マニピュレータ
１２ａ　アーム
１３　チューブラック
１３ａ　回収チューブ
１４ａ　外筒
１４ｂ　内筒
１５　固定部材
１６　ホルダ
２０　基板
２０ａ　小片
２１　環状の部材
２２　支持部材
２２ａ　接触面
２３　分割補助部
２３ａ　孔
２４　保護部材
２５　吸着部材
１００　細胞分取システム

Claims (20)

  1. 　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有し、複数の小片に分割可能に設けられた基板と、
    　該基板を複数の小片に分割することによって前記表面に貼り付けられた切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割部とを備える組織分割装置。
  2. 　前記基板が、予め分割された前記複数の小片の集合体からなり、
    　前記分割部が、前記小片同士を相対的に移動させる力を前記基板に加えることで前記基板を分割する請求項１に記載の組織分割装置。
  3. 　前記基板は、前記複数の小片に区画する溝が形成され、
    　前記分割部が、前記小片同士を相対的に移動させる力を前記基板に加えることで前記基板を分割する請求項１に記載の組織分割装置。
  4. 　前記分割部が、前記小片同士を前記表面に交差する方向に相対的に移動させる力を前記基板に加える請求項１から請求項３のいずれかに記載の組織分割装置。
  5. 　前記分割部が、前記複数の小片のうち一部の小片を前記交差する方向に移動させる請求項４に記載の組織分割装置。
  6. 　前記一部の小片が、前記切片のうち採取すべき領域が貼り付けられている小片である請求項５に記載の組織分割装置。
  7. 　前記分割部が、前記一部の小片の前記切片が貼り付けられている面および該面とは反対側の面のうち少なくとも一方の面を支持する支持部材を備え、該支持部材を前記交差する方向に移動させることで前記一部の小片を前記交差する方向に移動させる請求項５または請求項６に記載の組織分割装置。
  8. 　前記分割部が、前記一部の小片に貼り付けられた前記切片の分割を補助する分割補助部を備える請求項７に記載の組織分割装置。
  9. 　前記分割補助部は、前記支持部材との間に前記基板を挟み該基板に端面を向けて配置され、前記支持部材によって移動された前記一部の小片が挿入可能な孔を前記端面に有する略筒状の部材を備え、前記端面と前記孔の内面とが成す角が前記切片の分割を補助する請求項８に記載の組織分割装置。
  10. 　前記分割部が、前記支持部材によって前記小片の前記一方の面を前記交差する方向に押圧する請求項７から請求項９のいずれかに記載の組織分割装置。
  11. 　前記支持部材が、前記切片を間に挟んで前記切片が貼り付けられている面を支持し、
    　前記支持部材と前記切片との間に配置され該切片の表面を覆って保護する保護部材を備える請求項１０に記載の組織分割装置。
  12. 　前記支持部材と前記一部の小片の前記反対側の面との間に配置されると共に該反対側の面を吸着する吸着部材を備え、
    　前記分割部が、前記支持部材によって、前記一部の小片の前記反対側の面を前記交差する方向に引っ張る請求項７から請求項９のいずれかに記載の組織分割装置。
  13. 　前記分割部が、前記基板を間に挟んで対向配置され前記小片の前記切片が貼り付けられている面および前記反対側の面の両方を支持すると共に前記交差する方向に一体に移動させられる２つの前記支持部材を備える請求項７から請求項９のいずれかに記載の組織分割装置。
  14. 　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有し、複数の小片に分割可能に設けられた基板と、
    　該基板を複数の小片に分割することによって前記表面に貼り付けられた切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割部と、
    　該分割部によって分割された前記切片の断片を採取する採取部とを備える細胞分取装置。
  15. 　請求項１４に記載の細胞分取装置と、
    　前記基板上の切片を観察する観察装置とを備える細胞分取システム。
  16. 　請求項１４に記載の細胞分取装置と、
    　前記基板上の切片を観察する観察装置と、
    　該観察装置によって観察された切片を表示する表示部とを備える組織表示システム。
  17. 　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有すると共に複数の小片に分割可能に設けられ、複数の小片に分割されることによって前記表面に貼り付けられた前記切片を分割する基板。
  18. 　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有すると共に複数の小片に分割可能に設けられた基板の、前記切片が貼り付けられる表面とは反対側の面に接着され、前記基板の表面方向に伸展可能な伸展部材であって、
    　前記表面方向に伸展することによって接着されている前記基板を複数の小片に分割する伸展部材。
  19. 　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有すると共に複数の小片に分割可能に設けられた基板の前記表面に複数の前記小片にまたがって切片を貼り付ける貼付ステップと、
    　前記基板を複数の小片に分割することによって前記基板の表面に貼り付けられている切片を分割する分割ステップとを含む組織分割方法。
  20. 　生体組織の切片を貼り付け可能な表面を有すると共に複数の小片に分割可能に設けられた基板に前記切片を貼り付ける貼付ステップと、
    　前記切片が貼り付けられた前記基板を複数の小片に分割することによって前記切片を前記小片と略同等の形状の断片に分割する分割ステップと、
    　前記分割された前記切片の断片を採取する採取ステップとを含む細胞分取方法。
PCT/JP2012/080106 2011-11-25 2012-11-20 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法 WO2013077337A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201280057563.3A CN103959036A (zh) 2011-11-25 2012-11-20 组织分割装置、细胞分取装置、细胞分取系统、组织显示系统、基板、伸展部件、组织分割方法以及细胞分取方法
EP12851303.3A EP2784473A4 (en) 2011-11-25 2012-11-20 TISSUE SEGMENTATION APPARATUS, CELL SORTING APPARATUS, CELL SORTING SYSTEM, TISSUE DISPLAY SYSTEM, SUBSTRATE, EXTENSIBLE ELEMENT, TISSUE SEGMENTATION METHOD, AND CELL SORTING METHOD
JP2013545938A JP6210882B2 (ja) 2011-11-25 2012-11-20 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、組織分割方法および細胞分取方法
US14/282,498 US20140255978A1 (en) 2011-11-25 2014-05-20 Tissue dividing apparatus, tissue dividing method, and cell collecting method

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011-257772 2011-11-25
JP2011257772 2011-11-25

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US14/282,498 Continuation US20140255978A1 (en) 2011-11-25 2014-05-20 Tissue dividing apparatus, tissue dividing method, and cell collecting method

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013077337A1 true WO2013077337A1 (ja) 2013-05-30

Family

ID=48469779

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2012/080106 WO2013077337A1 (ja) 2011-11-25 2012-11-20 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20140255978A1 (ja)
EP (1) EP2784473A4 (ja)
JP (1) JP6210882B2 (ja)
CN (1) CN103959036A (ja)
WO (1) WO2013077337A1 (ja)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015115439A1 (ja) * 2014-01-29 2015-08-06 株式会社ジェイ・エム・エス 生体組織切断装置およびその用途
WO2015125343A1 (ja) * 2014-02-18 2015-08-27 オリンパス株式会社 細胞分取方法
US9291534B2 (en) 2011-11-24 2016-03-22 Olympus Corporation Cell collection apparatus and cell collecting method
WO2016067456A1 (ja) * 2014-10-31 2016-05-06 オリンパス株式会社 画像処理方法および細胞分取方法
WO2018021240A1 (ja) * 2016-07-25 2018-02-01 学校法人同志社 病態診断支援システム、病態診断データ生成システム、および病態診断支援方法
WO2020096031A1 (ja) * 2018-11-09 2020-05-14 株式会社Ｌｓｉメディエンス 遺伝子検査用標本スライド

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102015108017A1 (de) * 2015-05-20 2016-11-24 Leica Microsystems Cms Gmbh Verfahren und Untersuchungssystem zur Untersuchung und Bearbeitung einer mikroskopischen Probe
US10000732B2 (en) * 2015-11-20 2018-06-19 National Health Research Institutes Microfluidic dual-well device for highthroughput single-cell capture and culture
EP3591400B1 (de) * 2018-07-02 2023-03-01 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG Beschichtete festphasenfragmente und deren herstellung

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11148887A (ja) * 1997-11-17 1999-06-02 Japan Science & Technology Corp 生体サンプルの切断方法および切断片回収方法、 並びにそのための装置
JP2000504824A (ja) * 1996-02-05 2000-04-18 ペー・アー・エル・エム・ゲーエムベーハー レーザー照射を用いる平坦に配置される生物学的対象への非接触顕微注射、分別及び採取方法並びに装置
JP2002202229A (ja) * 2000-10-31 2002-07-19 Fuji Photo Film Co Ltd 生体試料の切断方法およびそれに用いる装置
JP2002286592A (ja) * 2001-03-22 2002-10-03 Olympus Optical Co Ltd サンプルからその一部分を選抜する方法、その選抜方法に用いる担体、その選抜用担体の製造方法およびその選抜を行う装置
JP2003521685A (ja) * 2000-01-25 2003-07-15 エスエル マイクロテスト ビッセンシャフトリケ ゲレーテ ゲーエムベーハー 生物学的材料層の一部を単離する方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3448510A (en) * 1966-05-20 1969-06-10 Western Electric Co Methods and apparatus for separating articles initially in a compact array,and composite assemblies so formed
JPS5946429B2 (ja) * 1978-12-22 1984-11-12 株式会社東芝 発光表示装置の製造方法
EP0117262B1 (de) * 1983-02-25 1988-04-20 Winfried Dr. med. Stöcker Verfahren und Vorrichtungen für Untersuchungen an unbeweglich gemachtem biologischem Material
JPH11163006A (ja) * 1997-11-27 1999-06-18 Hitachi Ltd ペレットボンディング方法
JP2004537712A (ja) * 2000-10-18 2004-12-16 バーチャル・アレイズ・インコーポレーテッド 多重細胞分析システム
CN1172173C (zh) * 2001-07-26 2004-10-20 清华大学 单一细胞样本显微切割方法及其系统
JP4674810B2 (ja) * 2005-12-28 2011-04-20 セイコーインスツル株式会社 自動薄切片標本作製装置及び自動薄切片標本作製方法
DE102007017807A1 (de) * 2006-05-19 2008-02-14 Merz, Hartmut, Prof. Dr. med. Vorrichtung und Verfahren zur Herstellung von auf Objektträgern angeordneten Proben
JP5710098B2 (ja) * 2008-03-27 2015-04-30 日立化成株式会社 半導体装置の製造方法
JP5493460B2 (ja) * 2008-08-20 2014-05-14 日立化成株式会社 半導体装置の製造方法及びダイシングテープ一体型接着シート
WO2011149009A1 (ja) * 2010-05-28 2011-12-01 オリンパス株式会社 細胞分取装置、細胞分取システムおよび細胞分取方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000504824A (ja) * 1996-02-05 2000-04-18 ペー・アー・エル・エム・ゲーエムベーハー レーザー照射を用いる平坦に配置される生物学的対象への非接触顕微注射、分別及び採取方法並びに装置
JPH11148887A (ja) * 1997-11-17 1999-06-02 Japan Science & Technology Corp 生体サンプルの切断方法および切断片回収方法、 並びにそのための装置
JP2003521685A (ja) * 2000-01-25 2003-07-15 エスエル マイクロテスト ビッセンシャフトリケ ゲレーテ ゲーエムベーハー 生物学的材料層の一部を単離する方法
JP2002202229A (ja) * 2000-10-31 2002-07-19 Fuji Photo Film Co Ltd 生体試料の切断方法およびそれに用いる装置
JP2002286592A (ja) * 2001-03-22 2002-10-03 Olympus Optical Co Ltd サンプルからその一部分を選抜する方法、その選抜方法に用いる担体、その選抜用担体の製造方法およびその選抜を行う装置

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEICA LMD 6500 LEICA LMD 7000, 30 August 2012 (2012-08-30), Retrieved from the Internet <URL:http://www.leica- microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20LMD7000/Brochures /LMD6500 7000 JP.pdf>
See also references of EP2784473A4

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9291534B2 (en) 2011-11-24 2016-03-22 Olympus Corporation Cell collection apparatus and cell collecting method
WO2015115439A1 (ja) * 2014-01-29 2015-08-06 株式会社ジェイ・エム・エス 生体組織切断装置およびその用途
JPWO2015115439A1 (ja) * 2014-01-29 2017-03-23 株式会社ジェイ・エム・エス 生体組織切断装置およびその用途
US10036689B2 (en) 2014-01-29 2018-07-31 Jms Co., Ltd. Biological tissue cutting device and use thereof
WO2015125343A1 (ja) * 2014-02-18 2015-08-27 オリンパス株式会社 細胞分取方法
WO2016067456A1 (ja) * 2014-10-31 2016-05-06 オリンパス株式会社 画像処理方法および細胞分取方法
WO2018021240A1 (ja) * 2016-07-25 2018-02-01 学校法人同志社 病態診断支援システム、病態診断データ生成システム、および病態診断支援方法
US10846850B2 (en) 2016-07-25 2020-11-24 The Doshisha Morbidity diagnosis support system, morbidity diagnosis data-generating system, and morbidity diagnosis support method
WO2020096031A1 (ja) * 2018-11-09 2020-05-14 株式会社Ｌｓｉメディエンス 遺伝子検査用標本スライド

Also Published As

Publication number Publication date
JP6210882B2 (ja) 2017-10-11
EP2784473A1 (en) 2014-10-01
EP2784473A4 (en) 2015-07-01
CN103959036A (zh) 2014-07-30
JPWO2013077337A1 (ja) 2015-04-27
US20140255978A1 (en) 2014-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6210882B2 (ja) 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、組織分割方法および細胞分取方法
JP5715125B2 (ja) 細胞分取装置、細胞分取システムおよび細胞分取方法
US8664002B2 (en) Method and system for collecting cells following laser microdissection
US11275015B2 (en) System and method for retrieving and analyzing particles
US8535905B2 (en) Method for isolating a part of a layer of biological material
US20080069737A1 (en) Apparatus for receiving biological specimens and method for laser dissection of biological specimens
ATE235681T1 (de) Konvexes klebefilmsystem für laseranheftungs- mikrodissektionsanalyse
US7456938B2 (en) Laser microdissection on inverted polymer films
JP4344474B2 (ja) レーザ捕捉顕微分析のための機械的処理システム
JP2010504505A (ja) 微細なサンプルを捕捉し、輸送し、沈着させる装置および方法
US7651856B2 (en) Mounting device for mounting a retainer means for a biological object and corresponding method for laser micro-dissection
JP6572547B2 (ja) 微小粒子回収装置
JP2006194848A (ja) 微小試料片採取方法
EP2784472A1 (en) Cell sorting device and cell sorting method
Rodriguez et al. Automated laser capture microdissection for tissue proteomics
JP5849331B2 (ja) 微小付着物剥離システムおよび微小付着物剥離方法
JP2014106091A (ja) 基板回収装置
US20230181177A1 (en) Micro Punch for Targeted Material Excision
US20150111242A1 (en) Cell collecting apparatus and method of use
KR20160113136A (ko) 세포막 관찰 및 해석 장치, 세포막 관찰 및 해석 방법
JP2004012361A (ja) 連続吸引式マイクロサンプリングシステム、装置及び分析法並びに連続吸引式マイクロキャピラリ

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12851303

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013545938

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012851303

Country of ref document: EP