CN103959036A - 组织分割装置、细胞分取装置、细胞分取系统、组织显示系统、基板、伸展部件、组织分割方法以及细胞分取方法 - Google Patents

Abstract

用简便的构成和操作将生物组织切片分割成包含充分量的细胞的尺寸的片断。提供一种组织分割装置，其具备：基板，设置成能够分割成多个小片(20a)且具有能够贴合生物组织切片(A)的表面；和分割部(22，23)，通过将该基板分割成多个小片(20a)而将表面所贴合的切片(A)分割成与小片(20a)大致同等形状的片断。

Description

组织分割装置、细胞分取装置、细胞分取系统、组织显示系统、基板、伸展部件、组织分割方法以及细胞分取方法

技术领域

本发明涉及组织分割装置、细胞分取装置、细胞分取系统、组织显示系统、基板、伸展部件、组织分割方法以及细胞分取方法。

背景技术

一直以来，作为从病理诊断等中应用的组织的切片中切取而采集数十微米左右的微小区域的技术已知有LMD(激光显微解剖，Laser Microdissection)法(参照例如非专利文献1。)。LMD法通过对切片的应该采集的微小区域照射UV激光而从切片切取微小区域。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Leica MICROSYSTEMS、“ライカLMD6500ライカLMD7000”、P.2、[online]、[平成24年8月30日检索]、互联网＜URL：http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica％20LMD7000/Brochures/LMD6500_7000_JP.pdf＞

发明内容

发明要解决的问题

然而，从切片切取存在癌细胞等特定细胞的区域，对于从切取的微小的片断所包含的细胞中提取的核酸、基因、氨基酸、肽、蛋白质、脂质、糖链等微量的生物体试样实施检查的情况下，特别是想要实施基因检查的情况下，通过LMD法采集的片断中所包含的细胞数过少而不能提取出检查所需要量的基因。因此，存在不得不显微解剖多个切片而收集充分个数的细胞，进行1次基因检查需要庞大的劳力和时间的问题。

另一方面，可以考虑增大切取的片断的面积或者增厚从生物组织切出的切片。然而，想要增大用LMD法切取的片断的情况下，需要使激光能够扫描的区域变大、或者为了用激光的压力将扫描激光而切取的片断吹起而需要提高激光的功率。因此，存在装置的构成变得更加庞大、装置的价格也上涨的不便。另外，增厚切片的情况下，存在为了用激光切断切片依然需要提高激光的功率的不便。

本发明是鉴于上述的事实而做出的，目的在于提供：能够以简便的构成和操作将生物组织切片分割成包含充分量的细胞的尺寸的片断并进行采集的组织分割装置、细胞分取装置、细胞分取系统、组织显示系统、基板、伸展部件、组织分割方法以及细胞分取方法。

用于解决问题的方案

为了达到上述目的，本发明提供以下的手段。

本发明的第一方式为组织分割装置，其具备：基板，具有能够贴合生物组织切片的表面且设置成能够分割成多个小片；和分割部，通过将该基板分割成多个小片而将贴合于前述表面的切片分割成与前述小片大致同等的形状的片断。

根据本发明的第一方式，用分割部将贴合有生物组织切片的基板分割成多个小片，能够通过这样的简便的构成和操作来将贴合于基板的切片与基板一起分割成与小片大致同等的形状的片断并能够与小片一起采集附着于该小片上的片断。另外，由于切片是与基板一起被通过力学方式分割，所以与LMD法相比较切片的厚度、片断的大小没有严格限制。因此，能够通过增厚切片或者增大小片的尺寸来将切片分割成包含充分量的细胞的尺寸的片断。

上述第一方式中，也可以是前述基板由预先分割了的前述多个小片的集合体构成，前述分割部通过对前述基板施加使前述小片之间相对地移动的力而分割前述基板。或者，上述第一方式中，也可以是前述基板形成有用于将该基板划分为前述多个小片的槽，前述分割部通过对前述基板施加使前述小片之间相对地移动的力而分割前述基板。

由此，能够通过对基板施加使小片之间相对地移动的力来容易地将基板分割成预先设定的形状的小片。

上述第一方式中，也可以是前述分割部对前述基板施加使前述小片之间沿着与前述表面交叉的方向相对地移动的力。该情况下，也可以是前述分割部为使前述多个小片中的一部分小片沿着前述交叉的方向移动的构成。

由此，能够使一部分小片沿着基板表面的大致法线方向移动而与其他的小片分割，能够切取贴合于一部分小片的表面上的切片的一部分。

该构成中，也可以是前述一部分小片为贴合有前述切片中应该采集的区域的小片。

另外，该构成中，也可以是前述分割部具备支承部件，该支承部件支承前述一部分小片的贴合有前述切片的面以及与该面相反侧的面中的至少一个面，通过使该支承部件沿着前述交叉的方向移动而使前述一部分小片沿着前述交叉的方向移动。

由此，能够容易地只使一部分小片沿着与表面交叉的方向移动。

上述的具备支承部件的构成中，也可以是前述分割部还具备分割辅助部，该分割辅助部辅助贴合于前述一部分小片的前述切片的分割。该情况下，也可以是所述分割辅助部具备大致筒状的部件，该大致筒状的部件以在其与前述支承部件之间夹着前述基板且端面面向该基板的方式配置，在前述端面上具有利用前述支承部件移动的前述一部分小片能够插入的孔；前述端面与前述孔的内表面所成的角辅助前述切片的分割。

由此，在小片被插入筒状的部件的孔内的过程中，能够更可靠地切取贴合于该小片的切片。

在上述的具备支承部件的构成中，也可以是前述分割部利用前述支承部件沿着前述交叉的方向按压前述一个面。

由此，能够容易地使一部分小片移动。

上述的通过支承部件按压小片的一面的构成中，也可以是前述支承部件隔着前述切片支承贴合有前述切片的面，所述组织分割装置具备保护部件，所述保护部件配置于前述支承部件与前述切片之间且覆盖该切片的表面而进行保护。

由此，能够防止支承部件与切片直接接触，即便连续地使用同一支承部件而从切片中采集多个片断，也能够防止一片断中所包含的生物分子等物质通过支承部件移动至其他片断中(污染)。

上述的具备支承部件的构成中，也可以是具备吸附部件，所述吸附部件配置于前述支承部件与前述一部分小片的前述相反侧的面之间并且吸附该相反侧的面；前述分割部利用前述支承部件沿着前述交叉的方向牵拉前述一部分小片的前述相反侧的面。

由此，能够容易地使一部分小片移动。

上述的具备支承部件的构成中，也可以是前述分割部具备2个前述支承部件，2个所述支承部件在它们之间夹着前述基板而相对配置，支承前述小片的贴合有前述切片的面和前述相反侧的面两者，并且能使两者沿着前述交叉的方向一齐移动。

本发明的第2方式为一种细胞分取装置，其具备：基板，具有能够贴合生物组织切片的表面且设置成能够分割成多个小片；分割部，通过将该基板分割成多个小片而将贴合于前述表面的切片分割成与前述小片大致同等的形状的片断；以及采集部，采集被该分割部分割的前述切片的片断。

本发明的第3方式为一种细胞分取系统，其具备：上述记载的细胞分取装置和观察前述基板上的切片的观察装置。

本发明的第4方式为一种组织显示系统，其具备：上述记载的细胞分取装置、观察前述基板上的切片的观察装置、和显示通过该观察装置观察的切片的显示部。

本发明的第5方式为一种基板，具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个小片，通过被分割成多个小片而将贴合于前述表面的前述切片分割。

本发明的第6方式为一种伸展部件，其与基板的贴合有切片的表面的相反侧的面粘接、能够沿着前述基板的表面方向伸展；所述基板具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个小片，通过沿着前述表面方向伸展而将处于粘接状态的前述基板分割成多个小片。

本发明的第7方式为一种组织分割方法，其包括：贴合步骤，在基板的表面上跨越多个小片而贴合切片，所述基板具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个前述小片；以及分割步骤，通过将前述基板分割成多个小片而分割贴合于前述基板的表面的切片。

本发明的第8方式为一种细胞分取方法，其包括：贴合步骤，在具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个小片的基板上贴合前述切片；分割步骤，通过将贴合了前述切片的前述基板分割成多个小片而将前述切片分割成与前述小片大致同等形状的片断；以及采集步骤，采集前述被分割的前述切片的片断。

发明的效果

通过本发明，起到能够以简便的构成和操作将生物组织切片分割成包含充分量的细胞的尺寸的片断的效果。

附图说明

图1为本发明的第一实施方式的细胞分取系统的总体构成图。

图2A为使槽面向粘合片侧与粘合片粘接的玻璃基板的侧面图。

图2B为使槽面向粘合片的相反侧与粘合片粘接的玻璃基板的侧面图。

图3A为表示与粘合片粘接的玻璃基板的图。

图3B为表示通过粘合片的伸展而被分割的玻璃基板的图。

图4为表示伸展用台和夹具的构成的图。

图5A为用于说明图4的伸展用台以及夹具的使用方法的图，表示使粘合片伸展后的状态。

图5B为用于说明图4的伸展用台和夹具的使用方法的图，表示用夹圈保持粘合片的状态。

图6为说明使用图1的细胞分取装置和细胞分取系统从切片采集细胞的顺序的流程图。

图7为表示基板的变形例的图。

图8为表示基板的另一个变形例的图。

图9为表示图1的细胞分取系统的变形例的图。

图10为表示图1的细胞分取系统的另一个变形例的图。

图11为表示使用图1的细胞分取系统采集细胞的顺序的变形例的流程图。

图12为表示应用了外筒和内筒的使粘合片伸展的方法的变形例的图，为表示在外筒设置粘合片的状态的图。

图13为表示使用图12的外筒和内筒使粘合片伸展的状态的图。

图14为表示使用图12的外筒和内筒通过其他的方法使粘合片伸展的状态的图。

图15A为表示使粘合片伸展的方法的另一变形例的图，表现粘合片的伸展前。

图15B为表示使粘合片伸展的方法的另一变形例的图，表现粘合片的伸展后。

图16为表示夹圈的变形例的图。

图17为表示本发明的第二实施方式的细胞分取装置和细胞分取系统所具备的基板的构成的图。

图18为表示本发明的第二实施方式的细胞分取装置和细胞分取系统所具备的支承部件和分割辅助部的构成的图。

图19A为对于使用了图18的支承部件和分割辅助部的分割切片的方法进行说明的图。

图19B为对于使用了图18的支承部件和分割辅助部的分割切片的方法进行说明的图。

图20为表示使用了图18的支承部件的分割切片的方法的变形例的图。

图21为对于使用了支承部件的变形例和使用了该支承部件的分割切片的方法进行说明的图。

图22为表示图18的支承部件的变形例的图。

图23为通过本发明的实施例制作的切片的照片，表示分割前的状态。

图24为表示图23的切片的分割后的状态的照片。

具体实施方式

(第一实施方式)

以下，对于本发明的第一实施方式的细胞分取装置1和细胞分取系统100，边参照图1～图16边进行说明。

本实施方式的细胞分取系统100如图1所示具备：光学显微镜(观察装置)2和本实施方式的细胞分取装置1。

光学显微镜2为正立型。在光学显微镜2中，对于其视场进行摄像的CCD照相机等摄像装置3与照相机用端口2a连接。摄像装置3所拍摄的图像在没有图示的监视器中显示。细胞分取系统100与该监视器一起构成组织显示系统。图像也可以被图像处理器等没有图示的图像处理装置实施图像处理后显示于监视器。

细胞分取装置1具备：贴合生物组织切片的玻璃基板(基板)4、能够沿着其表面的方向伸展且与玻璃基板4粘接的粘合片5(伸展部件)、使该粘合片5伸展的伸展用台6(分割部、伸展部、按压部件)、保持被该伸展用台6伸展的粘合片5的夹具7、从粘合片5采集玻璃基板4的小片4b的采集部8。本发明的细胞分割装置相当于包含基板4、伸展用台6和夹具7的构成。

玻璃基板4为具有平坦的表面的平板状。如图2A和图3A所示，在玻璃基板4的表面上，隔有规定的间隔而形成格子状的槽(分割线)4a。槽4a例如可以通过激光加工、化学蚀刻、切割等形成，也可以通过操作者使用玻璃切割器等的徒手作业而形成。

玻璃基板4优选为能够稳定地支承生物组织切片的厚度，例如0.05mm～0.5mm。可以根据应该从切片采集的片断的大小而适宜变更槽4a的间隔。例如，为了从切片内以充分细的位置精度采集所希望区域的片断并且使采集的片断中包含充分量的细胞，槽4a的间隔优选为0.05mm～5.0mm。为了能够用光学显微镜2观察贴合于玻璃基板4上的切片的透过光像，玻璃基板4使用光学上透明的材质。

为了提高玻璃基板4的表面与切片的密合性，也可以对玻璃基板4的表面实施硅烷化等化学处理。另外，对于玻璃基板4，根据在采集小片4b后所进行的检查等的目的，例如，也可以实施用于防止核酸、蛋白质等吸附的涂敷处理等。

粘合片5的一面上涂布了粘接剂，具有能够充分牢固地并且能够通过后述的采集部8剥离地粘接玻璃基板4的粘接性。另外，粘合片5能够在沿着其表面的方向上伸展。以在粘合片5上粘接了玻璃基板4的状态使粘合片5沿着其表面的方向伸展时，伴随着粘合片5的伸展，玻璃基板4也在沿着其表面的方向上被牵拉。于是，如图3B所示，玻璃基板4在槽4a的位置被切断而分割成多个小片4b。此时，贴合于玻璃基板4的表面的切片A也同时地沿着其表面的方向被牵拉从而沿着槽4a而被切断。

粘合片5具有光学的透过性或半透过性。因此，用光学显微镜2观察粘合片5时，也能够观察到配置在隔着该粘合片5位于与光学显微镜2的物镜相反侧的位置的物体。作为粘合片5，例如，可以优选使用在半导体制造工艺的切割步骤中为了暂时固定晶圆而使用的切割带。

需要说明的是，图2A中显示了玻璃基板4将槽4a面向粘合片5侧而与粘合片5粘接的例子；然而如图2B所示，玻璃基板4也可以将槽4a面向粘合片5的相反侧而与该粘合片5粘接。

伸展用台6如图4所示，为大致圆柱状，两端大致平行并且平坦地形成。伸展用台6以上端侧的部分(以下，称为小径部分。)6a具有小于其他部分(以下，称为大径部分。)6b的直径尺寸的方式在侧面形成有台阶。

夹具7具有：能够将粘合片5以扩展状态贴合的下框(固定部件)9a、能够从上方覆盖该下框9a的上框9b、使粘合片5保持伸展状态的夹圈10a、10b(保持部件)。夹圈10a，10b由外环10a和内环10b构成。外环10a的内径尺寸与内环10b的外径尺寸大致相等。下框9a和上框9b分别在大致中央部分形成了贯通板厚方向的窗9c，9d。在上框9b的窗9d的内侧沿着其内周面嵌入有外环10a。下框9a的窗9c的直径与小径部分6a的外径尺寸相同或更大。

夹具7如下使用。首先，沿着小径部分6a的外周嵌入内环10b。另外，以将玻璃基板4配置于窗9c的位置且使玻璃基板4的粘接侧向上方的状态，将粘接了玻璃基板4的粘接粘合片5粘接在下框9a的下表面。由此，粘合片5的粘接了玻璃基板4的区域的周边以规定的形状被固定。接着，在将粘合片5的与窗9c一致的部分按压在伸展用台6的上端面的状态下，向下方按压下框9a而使之移动。由此，如图5A所示，粘合片5的与窗9c一致的部分被从伸展用台6按压而伸展。伴随着该粘合片5的伸展，玻璃基板4被分割成多个小片4b。

接着，如图5B所示，在使粘合片5伸展保持不变的状态下将上框9b覆盖于下框9a，从而使外环10a与内环10b嵌合。由此，粘合片5的与窗9c一致的部分在伸展状态下被夹圈10a，10b保持。

需要说明的是，这样使粘合片5伸展时，也可以在粘合片5上标记用于知道该粘合片5伸展到什么程度的标记例如刻度。

采集部8具备：采集针11、操纵该采集针11的操纵器12。采集针11的前端部具有与小片4b大致相同或其以下的直径尺寸。操纵器12在臂12a的前端保持有采集针11。操纵器12能够在操作者的操作下使臂12a在3维方向移动。

以下，参照图6说明使用这样构成的细胞分取装置1和细胞分取系统100从生物组织切片采集包含所希望的细胞的片断的方法。

为了使用本实施方式的细胞分取装置1和细胞分取系统100从生物组织切片采集目标细胞，首先，从生物组织切出采集用切片(切片)(步骤S1)，将切出的采集用切片贴合于玻璃基板4(步骤S2、贴合步骤)。接着，用光学显微镜2观察采集用切片而取得被检体图像(步骤S3)。

采集用切片的切出通过例如冷冻包埋法、石蜡包埋法等进行。采集用切片的厚度也取决于采集的细胞的用途，也可以厚于用作通常的病理标本等中的切片的厚度(大约数μm～10μm)，能够切出例如50μm左右厚度的采集用切片。切出的采集用切片的尺寸小于玻璃基板4的槽4a的间隔时，以采集用切片跨越槽4a的方式将采集用切片贴合于玻璃基板4。

另外，除了采集用切片以外，从生物组织的与采集用切片的切出位置相邻的位置切出厚度数μm～10μm左右的染色用切片。切出的染色用切片在贴合于载玻片之后，预先实施例如病理诊断用的染色(步骤S4)。接着，用光学显微镜2观察染色后的染色用切片而取得染色图像(步骤S5)；在取得的染色图像内确定存在所希望的细胞的应该采集的区域例如被癌细胞侵蚀的区域(步骤S6)。

接着，将取得的被检体图像和染色图像以各图像内的切片完全重合的方式重叠而显示(步骤S7)；记录染色用切片内确定的与应该采集的区域一致的小片4b的位置，例如该小片4b的列序号和段序号(步骤S8)。

接着，使玻璃基板4与粘合片5粘接。需要说明的是，也可以在预先与粘合片5粘接的玻璃基板4上贴合切出的采集用切片。接着，通过使用伸展用台6和夹具7使粘合片5伸展而分割玻璃基板4(步骤S9、分割步骤)。此时，贴合于玻璃基板4上的采集用切片也与玻璃基板4一起沿着其表面方向被牵拉，从而在槽4a的位置被分割成片断。

接着，通过夹圈10a，10b使粘合片5保持伸展状态，以粘接有玻璃基板4的一侧的面面向下方的方式将粘合片5设置于标本台2b上。此时，可以将粘合片5以从下框9a剥离的状态设置于标本台2b上，也可以与下框9a一起设置于标本台2b上。

接着，边用光学显微镜2观察事先记录的位置的小片4b边在该视场内操作操纵器12，由此将采集针11配置于应该采集的小片4b的背后。接着，用采集针11将应该采集的小片4b的、与粘合片5粘接的一侧的面顶下而使小片4b从粘合片5剥离后使其落下(步骤S10、采集步骤)。此时，可以在标本台2b的下方配置管支架13，在小片4b的落下位置预先设置回收管13a。

通过以上的顺序，能够从采集用切片中与小片4b一起采集所希望的细胞存在的区域的片断。采集的细胞应用于例如基因检查等。

这样，通过本实施方式，具有只需以简便的构成和操作就能够从切片中选择性地采集存在所希望的细胞的区域的优点。另外，由于不需要UV激光光源这样的高价的构成，所以存在能够将制造成本抑制得廉价的优点。另外，由于与LMD不同，是通过力学方式切断切片，所以即便是比较厚的切片也能够容易地切断，并且只调节槽4a的间隔就能够容易地扩大小片4b的大小。因此，存在如下优点：以往的为了回收充分的细胞数而需要从多个切片采集片断、耗费大量劳动的操作，只需采集1个或少数小片4b就能完成，所以操作所需要的劳力和时间大幅地削减。

上述实施方式中，使用形成了格子状的槽4a的玻璃基板4作为贴合切片的基板，取而代之，也可以使用使玻璃的小片4b在平面方向上排列而成的玻璃基板4。

该情况下，为了保持玻璃基板4的形状，如图7所示，以预先在粘合片5上排列了玻璃的小片4b的状态进行粘接。由此，使粘合片5伸展时，在小片4b之间的边界(分割线)能够更容易并且可靠地分割玻璃基板4。

需要说明的是，为了制成为将预先分割了的小片排列于粘合片5上的状态，作为一例，可以使用以下这样的方法。

在粘合片5上粘接玻璃基板4，在该玻璃基板4上用玻璃切割器格子状地制造划痕。接着，通过按照划痕的位置徒手地割断玻璃基板4，能够容易地如图7地制成为小片4b排列于粘合片5上的状态。此时，为了不污染玻璃基板4，优选边用薄膜等保护玻璃基板4表面边进行。

另外，上述实施方式中采用的基板的构成为一例，但不限定于该构成。

例如，基板的原材料除了玻璃之外也可以为树脂等。对于小片4b的形状，只要是能够在粘合片5的表面密密地排列的形状即可，可以为例如正六角形、三角形。另外，如图8所示，也可以使用球状的玻璃珠、树脂珠4c作为小片，使它们在粘合片5上优选单层排列而构成基板4’。

另外，也可以使用具有磁性的物质作为基板。例如，可以使直径1μm～500μm的磁性粒子在粘合片5的表面上密密地排列，也可以使用不锈钢等金属板作为基板。使用金属这样的不透过可见光这样的物质作为基板的情况下，用光学显微镜观察粘合片5的透过光像时，即便小片4b小也能够更清楚地识别。

该情况下，也可以使用磁石作为采集部8。例如，在采集针11的前端设置与磁性粒子大致同一大小的磁石。接着，通过使采集针11的前端从粘合片5的相反侧接近磁性粒子，能够利用磁力使采集针11的前端捕捉并从粘合片5中采集所希望的磁性粒子。

另外，上述实施方式中，采用使用正立型的光学显微镜2、伸展用台6与光学显微镜2分开而设置的构成，但细胞分取系统100的构成不限于此。例如，也可以是光学显微镜2使用倒立型、在光学显微镜2上搭载伸展用台6。

图9表示在倒立型的光学显微镜2上设置了伸展用台6和夹具7的构成的一例。标本台2b被设置成在光学显微镜2的观察位置与偏离光学显微镜2的主体的位置之间能够沿着导轨2c在水平方向上滑动。这样的构成中，以在观察位置配置标本台2b的状态使夹具7向下方移动，而在伸展用台6上使粘合片5伸展。之后，使标本台2b滑动，使用与光学显微镜2分开设置的采集部8采集小片4b。

图10表示在正立型的光学显微镜2上设置了伸展用台6、夹具7和采集部8的构成的一例。伸展用台6设置成在标本台2b的上方能够与物镜一体地沿着上下方向移动，能够从上方按压通过夹具7保持在标本台2b的上方的粘合片5。该构成中，能够在标本台2b上进行从粘合片5的伸展至小片4b的采集为止的一连串的操作。

另外，上述实施方式中，通过将采集用切片的被检体图像和染色用切片的染色图像对比而确定应该采集的小片4b，然而也可以取而代之，由采集用切片的图像确定应该采集的小片4b。

采集用切片比较厚的情况下，细胞在厚度方向上重叠，所以即便实施染色也难以正确地由图像识别各个细胞的形状、细胞的分布等。但是，从这样的染色图像、未染色的切片的图像也能够根据大概的组织形状、细胞的分布判断应该采集的区域的情况下，也可以例如如图11所示，边用光学显微镜2观察采集用切片边在该情况下选择应该采集的小片4b(步骤S11)、进行粘合片5的伸展(步骤S9)以及小片4b的采集(步骤S10)。如此，能够根据需要进一步简化顺序。

另外，上述实施方式中，使用了大致圆柱状的伸展用台6使粘合片5伸展，然而使粘合片5伸展的方法不限于此。

也可以例如，使用外筒14a以及能够收纳于该外筒14a内的内筒14b代替伸展用台6。

该情况下，如图12所示，将粘合片5盖在外筒14a的上端面并在外筒14a的侧面进行固定。附图标记15表示用于将粘合片5固定于外筒14a的侧面的固定部件。接着，如图13所示，使内筒14b由外筒14a的内部相对地突出，或者如图14所示，将内筒14b由外筒14a的外部向该外筒14a内相对地压入。由此，能够使粘合片5在各方向大致均匀地伸展。

另外，也可以如图15A所示，在除了粘接了玻璃基板4的区域以外的位置，用保持件16使粘合片5保持一定的形状，如图15B所示，将粘接了玻璃基板4的区域按压在伸展用台6，由此使粘合片5伸展。

另外，作为夹圈也可以使用能够通过磁力维持相互密合状态的夹圈。例如，如图16所示，夹圈10c，10d由具有同一直径尺寸的上环10c和下环10d构成，上环10c由磁石制成，下环10d由不锈钢等金属制成。在上环10c和下环10d之间，以使粘合片5伸展的状态夹持粘合片5，用磁力使两环10c，10d相互密合，由此也能够将粘合片5保持伸展状态。两环10c，10d也可以由相互产生引力的磁石制成。

另外，上述实施方式中，通过用采集针11从背后顶起小片4b使该小片4b从粘合片5剥离而进行了回收，然而也可以取而代之使用内部能够吸引至负压的回收容器。如此，也能够通过使回收容器从粘合片5的相反侧接近应该采集的小片4b来使小片4b由粘合片5剥离而回收至回收容器内。

另外，作为粘合片5，也可以使用通过照射紫外线而丧失粘接性的物质。

该情况下，例如，在光学显微镜2上搭载紫外光源(采集部)。接着，通过物镜对于应该采集的小片4b的位置局部地照射由紫外光源放射的紫外线，由此能够使小片4b容易地从粘合片5剥离而进行回收。其他地，通过用光纤引导紫外光使光纤端部向应该采集的小片4b的位置局部地进行照射，也能得到同样的效果。

(第二实施方式)

接着，对于本发明的第二实施方式的细胞分取装置和细胞分取系统，参照图17～图22进行说明。

本实施方式的细胞分取装置和细胞分取系统，基板、分割部和采集部的构成与前述的第一实施方式不同。因此，主要对于这些构成进行说明，对于与第一实施方式共通的构成省略说明。

本实施方式中，基板20由平面状地2维排列的多个小片20a的集合体构成，如图17所示，保持为大致长方体的小片20a的侧面之间密合的状态。这些小片20a的至少一个端面配置于同一平面上，以形成能够贴合生物组织的采集用切片(本实施方式中，以下，简单地称为切片。)的大致平坦的表面。以下，将基板20和小片20a的、切片所贴合的面称为组织粘接面。

这样的小片20a的排列结构被例如环状的部件21扎成1束而保持，所述环状的部件21是产生沿半径方向向内的挤压力的橡胶圈之类。即，相邻接的小片20a的侧面之间相互挤压，由此通过侧面间产生的摩擦力保持小片20a的排列结构。该排列结构中，各小片20a被与其周围相邻接的多个小片20a支承，所以即便去除了1个小片20a，剩下的小片20a的排列结构也能够稳定地保持。

需要说明的是，也可以通过小片20a的相邻接的侧面之间被粘接剂粘接，或者与组织粘接面相反侧的面上被涂布粘接剂来保持排列状态。另外，基板20优选为容易进行微细加工的材料，具有与切片的粘接性良好的表面，由不会混入生物材料的材料例如玻璃、金属或塑料制成。另外，小片20a的形状只要是能够维持排列结构的形状即可，可以为球状、圆柱状或者长方体以外的多棱柱状。小片20a为正六棱柱的情况下，排列结构变得更加稳定。

另外，本实施方式中，小片20a是指1个长方体的小片、以及去除了该小片的小片群两者。

另外，本实施方式的细胞分取装置具备支承部件22和分割辅助部23代替第一实施方式中的粘合片5、伸展用台6和夹具7。

支承部件22具有能够以比1个小片20a的端面狭小的面积与该端面接触的接触面22a。需要说明的是，图18中，作为支承部件22的一例，示出了具有大致半球形的一端面的圆柱状的部件，但支承部件的接触面22a只要是能够稳定地按压小片20a的端面的形状即可，例如，可以为能够以足够大的面积与小片20a的端面接触的、大致平坦的形状。

分割辅助部23对于使用支承部件22的切片分割予以辅助。分割辅助部23为筒状的部件，具有沿着长边方向形成的在两端面开口的孔23a。分割辅助部23的至少一个端面为与长边方向大致垂直地形成的平坦面。使该端面与小片20a的端面接触而配置时，孔23a沿着小片20a的厚度方向延伸。孔23a的横截面形状只要是比小片20a的端面大且小片20a能够通过的形状即可，优选具有比小片20a的端面稍大的横截面形状。

对于使用这样构成的细胞分取装置和细胞分取系统从生物组织切片采集包含所希望的细胞的片断的方法，进行说明。本实施方式的组织分割方法和细胞分取方法的分割切片的工序(步骤S9)以及采集被分割的片断的工序(步骤S10)，与图6所示的第一实施方式的这些工序不同。因此，只对这两道工序进行说明。

将基板20以贴合有切片A的组织粘接面面向下方而设置于标本台2b上之后，如图19A所示，在应该采集的小片20a的、与组织粘接面相反侧的面(以下，也称为相反面。)上配置支承部件22。另外，按照孔23a的开口与支承部件22之间夹着基板20而相对的方式来配置分割辅助部23，使分割辅助部23的一端面与切片A接触。支承部件22的操作与第一实施方式的采集针11同样地通过操纵器12而进行。

接着，如图19B所示，通过使支承部件22向下方移动，从而用支承部件22的接触面22a按压小片20a的相反面，使该小片20a向下方移动(分割步骤、采集步骤)。小片20a之间通过摩擦力而相互支承，所以周围的小片20a群的排列状态被原样保持，只有被支承部件22按压的小片20a相对于周边的小片20a群向下方移动而分离。

分离的小片20a的组织粘接面所贴合的切片A的一部分，相对于其他的部分被向下方牵拉，由此被切断成与小片20a的组织粘接面大致同等形状的片断A’。此时，分割辅助部23的一端面与孔23a的内周面成的角对于切片A起到如刀刃的作用。由此，切片A更容易被切断，并且其片断A’的形状与小片20a的组织粘接面更精确地一致。这样，与切片A的片断A’一起分离的小片20a落在预先配置于标本台2b的下方的回收管13a中而被回收。

通过以上的顺序，能够与小片20a一起从切片A采集存在所希望的细胞的区域的片断A’。

这样，通过本实施方式，具有只需以简便的构成和操作就能够从切片A选择地采集存在所希望的细胞的区域的优点。另外，由于不需要UV激光光源这样的高价的构成，所以存在能够将制造成本抑制得廉价的优点。另外，由于与LMD不同，是通过力学方式切断切片A，所以即便是比较厚的切片A也能够容易地切断，并且只需调节小片20a的尺寸就能够容易地扩大片断A’的大小。因此，存在如下优点：以往的为了回收充分的细胞数而需要从多个切片采集片断耗费大量劳动的操作，只需采集1个或少数小片20a就能完成，所以操作所需要的劳力和时间大幅地削减。

需要说明的是，上述实施方式中通过支承部件22按压了小片20a的相反面，而取而代之，如图20所示，也可以按压小片20a的组织粘接面。该情况下，以贴合有切片A的一侧面向上方的方式将基板20设置于标本台2b上，由此使被支承部件22分离的小片20a直接落到下方的回收管13a中。

通过支承部件22按压小片20a的组织粘接面的情况下，为了防止支承部件22的接触面22a与切片A直接接触，也可以具备配置于它们之间的保护部件24。

通过这样做，能够防止切片A所包含的生物体分子等物质附着于支承部件22，所以即便连续地使用同一支承部件22分离多个小片20a而采集片断A’，也能够防止由支承部件22造成的片断A’间的污染。

该情况下，使用与小片20a的组织粘接面大致同一大小或比其小的保护部件24，也可以在分离小片20a之后与小片20a一起回收保护部件24。该情况下，保护部件24优选由不对附着于小片20a上的片断A’的分析产生影响的材料制成。如此，也能够防止由支承部件22造成的片断A’间的污染。

需要说明的是，切片A通过石蜡包埋法制成的情况下，支承部件22与切片A接触时，切片A所包含的生物分子等物质附着于支承部件22的可能性充分地低。因此，即便不使用保护部件24而用相同的支承部件22连续地分离小片20a，采集的片断A’间的污染发生的可能性也充分地低。另一方面，如用冷冻包埋法制作的切片A那样，是生物组织的切断面露出的切片的情况下，在采集的片断A’充分地大、即便发生微量的污染对于之后的片断A’的分析结果也没有影响的情况下，也可以不使用保护部件24。

另外，上述实施方式中，也可以代替支承部件22通过其他的手段按压小片20a的组织粘接面或相反面。例如，也可以是分割部具备管部件，所述管部件具有比小片20a的端面狭小的开口，与小片20a的端面相对地配置开口的状态下向管部件的内部供给压缩空气，由此从开口向小片20a的端面吹送压缩空气而按压该端面。

另外，上述实施方式中通过按压小片20a的组织粘接面而分离该小片20a，但也可以取而代之牵拉小片20a的相反面。

该情况下也可以在小片20a的分离中使用支承部件22’。即，如图21所示，在支承部件22’的接触面22a’上设置吸附小片20a的相反面的吸附部件25，通过该吸附部件25使接触面22a’与相反面接触，由此小片20a吸附于支承部件22’上。接着，通过使支承部件22’沿着箭头所示的方向移动，能够分离出1个小片20a。从吸附部件25剥离、回收所分离的小片20a。需要说明的是，图21中示出具有大致平坦的接触面22a’的支承部件22’。

作为吸附部件25，可以使用例如表面具有粘接性的部件。小片20a包含磁性物质的情况下，也可以使用磁石作为吸附部件25。另外，也可以通过使用上述的管部件，与端面相对地配置开口，通过对管部件内部进行抽吸而牵拉小片20a的相反面，分离该小片20a。

另外，上述实施方式中，如图22所示，也可以通过使用2个支承部件22、22”支承小片20a的两端面，使这些支承部件22、22”一齐向上方或向下方移动而分离小片20a。

另外，上述实施方式中，分离小片20a的方向不限于沿着铅垂方向向上/向下，也可以使小片20a沿着斜向移动而分离。

实施例

接着，对于上述实施方式的实施例进行说明。

本实施例中，为了确认能够用细胞分取装置分割生物组织切片，进行以下的实验。

使用猪的结肠作为生物组织，通过冷冻包埋法从生物组织切出厚度为50μm、4边大约10mm的切片。在切割片(伸展部件)上以角相互相邻接的方式排列而贴合的4枚盖玻片上，以跨越该盖玻片的边界(分割线)的方式贴合切出的切片，之后风干切片。盖玻片使用各边尺寸为18mm、厚度为0.13mm～0.17mm的盖玻片。即，本实施例中，由作为小片的4个盖玻片构成1个基板，这4个盖玻片被槽相互分隔开来。

接着，在大致中央部贯通形成有圆形窗的上框(固定部件)上以使切片配置于窗的大致中央部分的方式贴合切割带。接着，使贴合有盖玻片的一侧的面面向上方，以窗内配置了圆柱状的载物台(按压部件、伸展部、分割部)的状态，将上框边保持大致水平边按下，由此使切割带的配置于窗内的部分沿着其平面方向伸展。由此，使4枚盖玻片相互分离，将贴合于盖玻片上的切片在盖玻片的边界处分割成4个片断。将这样分割切片之前和之后的切片的照片示于图23和图24中。

图23表示伸展切割带之前的状态。在照片的大致中央沿着纵方向出现的线L为盖玻片的边界(分割线)。

图24表示使切割带伸展的状态，可知切片沿着盖玻片的边界被整齐地分割。

由以上的实验可以确认，通过使用本发明的组织分割装置、细胞分取装置和细胞分取系统，即便是比较厚的切片，也能够容易地并且沿着分割线被充分整齐地分割。

由上述的第一实施方式和实施例导出以下的备注项中记载的本发明的另一方式。

(备注项1)

一种细胞分取装置，其具备：基板，具有能够贴合生物组织切片的表面且设置成能够分割成多个小片；分割部，通过将该基板分割成多个小片而将贴合于所述表面的切片分割成与前述小片大致同等的形状的片断；以及采集部，采集被该分割部分割的前述小片。

根据备注项1的发明，用分割部将基板和该基板所贴合的生物组织切片一起分割，再将分割出的小片用采集部进行采集，只需这样简便的构成和操作就能够将切片的片断与小片一起采集。另外，能够通过增厚切片或者沿着平面方向增大小片来增加各小片上附着的细胞的量，只需采集1个或数个小片，就能够容易地采集应对基因等微量的生物体试样的检查也充分量的细胞。

(备注项2)

根据备注项1所述的细胞分取装置，前述基板的前述多个小片排列成平面状，前述分割部通过对前述基板施加使前述小片之间相对地移动的力而分割前述基板。

(备注项3)

根据备注项2所述的细胞分取装置，前述基板形成有用于将该基板划分为前述多个小片的槽。

(备注项4)

根据备注项2所述的细胞分取装置，前述基板由已经分离的前述多个小片的集合体构成。

(备注项5)

根据备注项1～备注项4的任一项所述的细胞分取装置，前述分割部对前述基板施加使前述小片之间沿着前述表面的方向相对地移动的力。

(备注项6)

根据备注项5所述的细胞分取装置，其具备：伸展部件，与前述基板的贴合有前述切片的表面的相反侧的面粘接、并且能够沿着前述表面的方向伸展；前述分割部具备伸展部，所述伸展部至少在前述基板上所包含的粘接有一部分小片的区域使前述伸展部件沿着前述表面的方向伸展。

根据备注项6的发明，在贴合有切片的基板粘接于伸展部件的状态下，通过伸展部使伸展部件伸展而能够将贴合于基板的切片与基板一起分割。

(备注项7)

根据备注项6所述的细胞分取装置，前述伸展部件与前述基板的前述相反侧的面能够剥离地粘接。

根据备注项7的发明，将基板分割之后能够将小片由伸展部件剥离而容易地回收。

(备注项8)

根据备注项7所述的细胞分取装置，前述伸展部件的表面具有粘接性。

根据备注项8的发明，能够将基板容易地粘接在伸展部件上。

(备注项9)

根据备注项6或备注项7所述的细胞分取装置，前述基板由已经分离的前述多个小片以相互相邻接地排列的状态粘接于前述伸展部件上而成。

根据备注项9的发明，能够在使伸展部件伸展时容易并且可靠地将基板分割成小片。

(备注项10)

根据备注项6～备注项9的任一项所述的细胞分取装置，前述伸展部件由光学上透明或半透明的材料制成。

根据备注项10的发明，用光学显微镜观察伸展部件的透过光像时，能够确认伸展部件上的小片的位置。

(备注项11)

根据备注项1～备注项10的任一项所述的细胞分取装置，前述小片为具有0.05mm～0.5mm的厚度尺寸和0.05mm～5.0mm的边长尺寸的长方体状。

根据备注项11的发明，能够以充分细的精度从切片中选择并采集所希望的区域并且在各小片上附着充分量的细胞。

(备注项12)

根据备注项6～备注项11的任一项所述的细胞分取装置，前述伸展部具备：固定部件，将前述伸展部件的、粘接了前述基板的区域的周边部位以规定的形状进行固定；和按压部件，从与粘接了前述基板的面相反的面一侧按压被该固定部件固定的前述伸展部件的前述区域。

通过备注项12的发明，只需简便的构成和操作就能使伸展部件伸展。

(备注项13)

根据备注项6～备注项12的任一项所述的细胞分取装置，前述采集部具备针部件，该针部件将前述伸展部件的粘接了前述小片的位置从与粘接了该小片的面相反侧的面顶起。

通过备注项13的发明，能够容易地从多个小片中仅使指定的小片从伸展部件剥离而进行采集。

(备注项14)

根据备注项6～备注项13的任一项所述的细胞分取装置，其具备保持部件，使前述伸展部件的前述区域保持为伸展状态。

根据备注项14的发明，使伸展部件伸展而保持在各小片之间隔有间隔的状态，能够更容易地利用采集部进行小片的采集。

(备注项15)

根据备注项14所述的细胞分取装置，前述保持部件能够使前述伸展部件的粘接了前述基板一侧的面向下地将其保持。

通过备注项15的发明，通过利用保持部件在基板向下地保持伸展部件的状态下使小片剥离，由此能够使小片利用自身重力落下而容易进行回收。

(备注项16)

根据备注项14或备注项15所述的细胞分取装置，其具备回收容器，所述回收容器配置于被前述保持部件保持的前述伸展部件的、粘接了前述基板的面的一侧，内部被抽吸至负压。

通过备注项16的发明，只需使回收容器接近应该采集的小片，就能够容易地将该小片回收至回收容器内。

(备注项17)

根据备注项9所述的细胞分取装置，前述小片为具有0.001mm～0.5mm直径尺寸的磁性粒子。

通过备注项17的发明，例如，在溶液中处理所回收的小片时，能够有效地利用磁力从溶液中分离等，可以提高处理效率。

(备注项18)

根据备注项17所述的细胞分取装置，前述采集部在与前述小片尺寸大致相同的大小的空间内具有产生吸引前述磁性粒子的磁力的磁石。

通过备注项18的发明，通过使磁石接近所希望的小片，能够使磁石捕捉并容易地从伸展部件采集该小片。

(备注项19)

一种细胞分取系统，其具备：备注项1～备注项18的任一项所述的细胞分取装置、观察前述基板上的前述切片的观察装置。

通过备注项19的发明，通过利用观察装置观察基板所贴合的切片、分割后形成的小片等，能够更容易并且更正确地进行应该采集的小片的选择、选择的小片的采集。

(备注项20)

一种细胞分取方法，其具备：贴合步骤，在能够通过规定的分割线分割成多个小片的基板的表面上跨越前述分割线而贴合生物组织切片；分割步骤，通过沿着前述表面的方向牵拉贴合有前述切片的前述基板而用前述分割线分割前述基板和前述生物组织切片；以及采集步骤，采集在该分割步骤中被分割的前述小片。

通过备注项20的发明，贴合步骤中在基板上贴合切片之后，在分割步骤中牵拉基板而将该基板所贴合的切片与基板一起分割成多个小片，在采集步骤中从被分割的多个小片中选择并采集小片，由此能够以简便的构成和操作从生物组织切片中采集对于基因检查量也充分的量的细胞。

附图标记说明

1 细胞分取装置

2 光学显微镜(观察装置)

2a 照相机用端口

2b 标本台

3 摄像装置

4 玻璃基板(基板)

4a 槽(分割线)

4b 小片

5 粘合片(伸展部件)

6 伸展用台(分割部、伸展部、按压部件)

7 夹具

8 采集部

9a 下框(固定部件)

9b 上框

9c，9d 窗

10a 夹圈、外环(保持部件)

10b 夹圈、内环(保持部件)

10c 夹圈、上环(保持部件)

10d 夹圈、下环(保持部件)

11 采集针(针部件)

12 操纵器

12a 臂

13 管支架

13a 回收管

14a 外筒

14b 内筒

15 固定部件

16 保持件

20 基板

20a 小片

21 环状的部件

22 支承部件

22a 接触面

23 分割辅助部

23a 孔

24 保护部件

25 吸附部件

100 细胞分取系统

Claims (20)

1.一种组织分割装置，其具备：

基板，具有能够贴合生物组织切片的表面且设置成能够分割成多个小片；和

分割部，通过将该基板分割成多个小片而将贴合于所述表面的切片分割成与所述小片大致同等形状的片断。

2.根据权利要求1所述的组织分割装置，其中，

所述基板由预先分割了的所述多个小片的集合体构成，

所述分割部通过对所述基板施加使所述小片之间相对地移动的力而分割所述基板。

3.根据权利要求1所述的组织分割装置，其中，

所述基板形成有用于将该基板划分为所述多个小片的槽，

所述分割部通过对所述基板施加使所述小片之间相对地移动的力而分割所述基板。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的组织分割装置，其中，所述分割部对所述基板施加使所述小片之间沿着与所述表面交叉的方向相对地移动的力。

5.根据权利要求4所述的组织分割装置，其中，所述分割部使所述多个小片中的一部分小片沿着所述交叉的方向移动。

6.根据权利要求5所述的组织分割装置，其中，所述一部分小片为贴合有所述切片中的应该采集的区域的小片。

7.根据权利要求5或6所述的组织分割装置，其中，所述分割部具备支承部件，该支承部件支承所述一部分小片的贴合有所述切片的面以及与该面相反侧的面中的至少一个面，通过使该支承部件沿着所述交叉的方向移动而使所述一部分小片沿着所述交叉的方向移动。

8.根据权利要求7所述的组织分割装置，其中，所述分割部具备分割辅助部，该分割辅助部辅助贴合于所述一部分小片的所述切片的分割。

9.根据权利要求8所述的组织分割装置，其中，所述分割辅助部具备大致筒状的部件，该大致筒状的部件以在其与所述支承部件之间夹着所述基板且端面面向该基板的方式配置，在所述端面上具有利用所述支承部件移动的所述一部分小片能够插入的孔；所述端面与所述孔的内表面所成的角辅助所述切片的分割。

10.根据权利要求7～9中任一项所述的组织分割装置，其中，所述分割部利用所述支承部件沿着所述交叉的方向按压所述小片的所述一个面。

11.根据权利要求10所述的组织分割装置，其中，

所述支承部件隔着所述切片支承贴合有所述切片的面，

所述组织分割装置具备保护部件，所述保护部件配置于所述支承部件与所述切片之间且覆盖该切片的表面而进行保护。

12.根据权利要求7～9中任一项所述的组织分割装置，其具备：

吸附部件，其配置于所述支承部件与所述一部分小片的所述相反侧的面之间并且吸附该相反侧的面，

所述分割部利用所述支承部件沿着所述交叉的方向牵拉所述一部分小片的所述相反侧的面。

13.根据权利要求7～9中任一项所述的组织分割装置，其中，

所述分割部具备2个所述支承部件，2个所述支承部件在它们之间夹着所述基板地相对配置，支承所述小片的贴合有所述切片的面和所述相反侧的面两者，并且能使两者沿着所述交叉的方向一齐移动。

14.一种细胞分取装置，其具备：

基板，具有能够贴合生物组织切片的表面且设置成能够分割成多个小片；

分割部，通过将该基板分割成多个小片而将贴合于所述表面上的切片分割成与所述小片大致同等形状的片断；和

采集部，采集被该分割部分割的所述切片的片断。

15.一种细胞分取系统，其具备：

权利要求14所述的细胞分取装置、和

观察所述基板上的切片的观察装置。

16.一种组织显示系统，其具备：

权利要求14所述的细胞分取装置、

观察所述基板上的切片的观察装置、和

显示通过该观察装置观察的切片的显示部。

17.一种基板，具有能够贴合生物组织切片的表面且设置成能够分割成多个小片；通过分割成多个小片而将贴合于所述表面上的所述切片分割。

18.一种伸展部件，其与基板的贴合有切片的表面的相反侧的面粘接、能够沿着所述基板的表面方向伸展；所述基板具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个小片，

通过沿着所述表面方向伸展而将处于粘接状态的所述基板分割成多个小片。

19.一种组织分割方法，其包括：

贴合步骤，在基板的表面上跨越多个小片而贴合切片，所述基板具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个所述小片；以及

分割步骤，通过将所述基板分割成多个小片而分割贴合于所述基板的表面的切片。

20.一种细胞分取方法，其包括：

贴合步骤，在具有能够贴合生物组织切片的表面并且设置成能够分割成多个小片的基板上贴合所述切片；

分割步骤，通过将贴合有所述切片的所述基板分割成多个小片而将所述切片分割成与所述小片大致同等形状的片断；以及

采集步骤，采集所述被分割的所述切片的片断。