WO2012146049A1 - 一种治疗口腔疾病的中药组合物及其制备工艺、质量检测方法 - Google Patents

一种治疗口腔疾病的中药组合物及其制备工艺、质量检测方法 Download PDF

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Definitions

  • Oral ulcers are also known as recurrent aphthous stomati s (RAS), recurrent oral ulcer (ROU), recurrent ahthae or canker sor e S.
  • Traditional Chinese medicine also known as “mouth sores” and “mouth sputum”, is a superficial ulcer that occurs on the oral mucosa. It can range in size from rice to soybean, round or oval, and the ulcer surface is concave and congested around. Ulcers are characterized by periodicity, recurrence, and self-limiting. They occur on the lips, cheeks, and tongue. Patients are more upset and painful. The etiology and pathogenesis are still unclear.
  • the incentives may be local trauma, nervousness, food, drugs, hormones, water changes, and vitamin or trace element deficiency.
  • Systemic diseases, genetics, immunity and microbes may play an important role in their occurrence and development. Treatment is mainly based on local treatment, and severe cases require systemic treatment.
  • oral ulcers have the following causes: First, exogenous six kinky, mainly dry and flaming, dry and evil, dry and easy to sputum, fire is a yang, its inflammation, stagnation, Aphthous is a hair. Therefore, mouth sores are more likely to recur in the fall and when the climate is abrupt.
  • the second is that the diet is not good, due to overeating spicy and fat products or partial eclipse, causing heat and endogenous, following the attack, fumigation of the tongue, and often consume the heart and lungs of the Yin and Jin, causing a sore.
  • the third is emotional extremes, the patient is over-thinking, upset, five-year-old sullen and smoldering, smoldering, smoldering, smoldering, or smoldering in the small intestine, attacking the mouth, Can cause mouth sores; or more often have anger, liver qi stagnation, liver qi stagnation, stagnation and smoldering, dark consumption of yin and blood, causing the cramps to be unregulated, by the time, the qi stagnation Very, the liver is so strong that it causes a mouth sore on the tongue.
  • the fourth is the body yin deficiency, the patient's body yin deficiency, or long-term illness and yin, virtual fire endogenous, burning wound tongue, and even mouth sores.
  • the fifth is fatigue and internal injury, or a long illness, spleen, spleen deficiency, water and wet, not stained, stained tongue, and cause mouth sores; or stagnation heat, steaming on damp heat, can also cause mouth sores. What's more, the temper is extremely weak, hurts the spleen and yang, the spleen and yang are insufficient, the cold and damp heat, the stain on the mouth, can cause mouth sores.
  • Sixth is the insufficiency of innate observation, or long-term use of cold, injury to the spleen and kidney, spleen and kidney yang, yin and cold, cold and wet on the tongue, cold coagulation, long-term tongue sores.
  • the six senses of irritability, internal organs, viscera and heat are the main cause of the disease, the main disease is the heart and spleen (stomach).
  • Another object of the present invention is to provide a process for the preparation of a pharmaceutical composition.
  • a further object of the present invention is to provide a method for detecting a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is composed of the following drug substances:
  • Centella asiatica 50-500 parts by weight of charcoal wood 50-500 parts by weight Centella asiatica 50-500 parts by weight of charcoal wood 50-500 parts by weight.
  • composition of the original drug of the pharmaceutical composition of the present invention is preferably:
  • composition of the original drug composition of the pharmaceutical combination of the present invention is more preferably:
  • the pharmaceutical composition of the present invention is prepared into a clinically accepted internal preparation such as a tablet, a capsule, a granule, a pill, a powder, an oral liquid, a syrup according to a conventional process, such as a tablet, a capsule, a sustained release capsule or a sustained release droplet. Oral preparations such as pills.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is added to a conventionally accepted external preparation such as a patch, an aerosol, a liniment, a mouthwash or the like according to a conventional process by adding a conventional excipient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is prepared by: decoction of Centella asiatica with water 1-3 times, each time adding 4- 12 times of water, each boiling 0. 5- 2 hours, decoction filtered, centrifuged, The emulsified styrene-type macroporous resin was eluted with 2- 6 times the amount of alkaline ethanol solution, the water was eluted to neutral, and the above eluate was discarded, followed by 2-6 times by weight of ethanol and 0.5. 1 ⁇ 1. 30, drying, pulverizing into fine powder, ready for use; decoction of charcoal wood 1 - 1. 5 times by weight of water is eluted and collected, and the collected liquid is recovered and concentrated to 60 ° C. 4 (Tl.
  • the preparation method of the pharmaceutical composition of the invention is as follows: the snow grass is decoctioned twice with water, the first time adding 8 times water decoction for 1 hour, the second time adding 6 times water decoction for 1 hour, the decoction is filtered. After centrifugation, the filtrate was passed through a styrene-type macroporous adsorption resin, and eluted with 4 times by weight of a 20% ethanol solution containing 1% sodium hydroxide. The water was eluted to neutrality, and the above eluate was discarded, and then 4 weights were successively used. The mixture is eluted with 60% ethanol and 1 weight of water, and the collected liquid is recovered. The relative density is 1. 1 ⁇ 1.
  • the preparation method of the pharmaceutical composition of the invention is as follows: the snow grass is decoctioned twice with water, the first time adding 8 times water decoction for 1 hour, the second time adding 6 times water decoction for 1 hour, the decoction is filtered. After centrifugation, the filtrate was passed through a styrene-type macroporous adsorption resin, and eluted with 4 times by weight of a 20% ethanol solution containing 1% sodium hydroxide. The water was eluted to neutrality, and the above eluate was discarded, and then 4 weights were successively used. The mixture is eluted with 60% ethanol and 1 times by weight of water, and the collected liquid is recovered. The relative density is 1.14 ⁇ 1.
  • the preparation method of the pharmaceutical composition patch of the invention is as follows: the snow grass is decoctioned twice with water, the first time adding 8 times water decoction for 1 hour, the second time adding 6 times water decoction for 1 hour, frying After liquid filtration, centrifugation, the filtrate was passed through a styrene-type macroporous adsorption resin, and eluted with 4 times of a 20% ethanol solution containing 1% sodium hydroxide. The water was eluted to neutrality, and the above eluate was discarded. The mixture is eluted with 4 times by weight of 60% ethanol and 1% by weight of water, and the collected liquid is recovered. The relative density is 1. 14 ⁇ 1.
  • the correspondence between the parts by weight and the parts by volume of the present invention is in the relationship of g/ml or kg/1.
  • the unit preparation of the dosage form prepared by the present invention (e.g., each tablet, granules per pack, capsules per capsule, spray per ml) has a relatively high crude drug content of 0. ⁇ .
  • the detection method of the pharmaceutical composition of the present invention includes one or more of the following identification methods or content determination methods: Identification method:
  • 5 is a developing agent, unrolled, taken out, air-dried, sprayed with 5% phosphomolybdic acid ethanol solution, heated at 80-120 °C for 3-7 minutes; in the chromatogram of the test sample, corresponding to the chromatogram of the reference substance Position on the spot, showing the same color;
  • 5-1. 5 is a developing agent, placed in a developing cylinder saturated with ammonia vapor, unrolled, taken out, dried, and placed under a 365 nm ultraviolet light; in the chromatogram of the test sample, in the chromatogram and control with the reference drug The corresponding color fluorescent spots on the corresponding position of the chromatogram;
  • the content determination method is determined by high performance liquid chromatography (Chinese Pharmacopoeia 2005 edition, an appendix VI D); Chromatographic conditions and system suitability test with 18 ⁇ ⁇ silicon germanium bonded silica as a filler; methanol-water
  • 26 - 78 :24-72 is the mobile phase; detection by evaporative light scattering detector; the theoretical plate number should be no less than 2000 according to the peak of hydroxycamptoside;
  • the preparation of the reference solution is taken to a constant amount of the weight of the reference substance of the asiaticoside, accurately weighed, and the methanol is made into a solution containing 0.6 mg per lml, that is, obtained;
  • the method is to accurately absorb the reference solution 3 ⁇ 1 , lO u l, and the test solution is 5 ⁇ 10 ⁇ 1, into the liquid chromatograph, and the measurement is performed by the two-point logarithmic equation of the external standard;
  • the external preparation of the pharmaceutical composition contains Centella asiatica with cetyl glycosides (C 48 H 78 0 2 . ), not less than 1.0 mg, and the external preparation refers to the amount of the crude drug and the patch per The tablets have the same amount of drug.
  • the detection method of the pharmaceutical composition of the present invention is preferably one or more of the following identification methods or content determination methods: Identification method: paragraph
  • the precision is determined, the precision is determined, the precision is determined, the precision is determined, and the precision is determined. 25ml of absolute ethanol, weighed; power 250W, ultrasonic treatment at 40kHz for 45 minutes, let cool, then weigh the weight, make up the weight lost with absolute ethanol, shake, filter; take the filtrate, that is ;
  • the method is to accurately absorb the reference solution 3 ⁇ 1 , 10 ⁇ 1 , and the test solution is 5 ⁇ 10 ⁇ 1, into the liquid chromatograph, and measure it by the two-point logarithmic equation of the external standard.
  • the external preparation of the pharmaceutical composition contains Centella asiatica with hydroxysalicyside (H 78 0 2 .), not less than 1.0 mg, and the external preparation contains a considerable amount of crude drug equivalent to each tablet.
  • the amount of raw medicine is the same.
  • the pharmaceutical composition of the invention has the effects of clearing away heat and detoxifying, reducing swelling and relieving pain, treating the mouth caused by wind and heat attack, lung and stomach heat, and seeing mouth sores, gum swelling or bleeding, stomatitis, mouth ulcer, Gingivitis is effective and has no side effects.
  • RESULTS In this study, the anti-inflammatory effects of the patch of the present invention were examined by two models of mouse xylene auricle swelling and rat carrageenan ankle swelling; infection of oral ulcers by guinea pig Candida albicans and guinea pig acetic acid stimulation of oral ulcers Two models were used to investigate the effects of anti-oral ulcers; two models were induced by acetic acid-induced mouse writhing reaction and mouse hot plate method to investigate the analgesic effect; the weight of mouse immune organs, mouse serum hemolysin antibody production, mice late Three models of hair hypersensitivity were used to examine the effects on immune function.
  • the patch of the present invention has significant bacteriostatic action against Gram-positive bacteria such as Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus hemolyticus, Staphylococcus epidermidis, but against Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Cray Gram-negative bacteria such as K. pneumoniae have weaker bacteriostasis (see Table 1).
  • Aerobacteria (10) 3.125 ⁇ 100 100 3.125 ⁇ 25 6.25 0.0625 ⁇ 64 0.5 Klebsiella pneumoniae (10) 6.25 ⁇ 100 100 6.25 ⁇ 25 6.25 0.125 ⁇ >128 0.25 Escherichia coli (10) 0.78 ⁇ 50 50 3.125 ⁇ 25 6.25 0.25 ⁇ 32 0.5 Pseudomonas aeruginosa (10) 50 ⁇ 100 50 3.125 ⁇ ; 12.5 3.125 2 ⁇ 28 4 Staphylococcus aureus (10) 0.39 ⁇ 1.56 0.39 1.56 ⁇ 25 3.125 0.0625 ⁇ 32 0.25 Staphylococcus epidermidis (10) 0.195 ⁇ 1.56 0.39 1.56 ⁇ 12.5 6.25 0.125 ⁇ 32 4 Salmonella typhimurium (10) 3.125 ⁇ 50 6.25 3.125 ⁇ 6.25 6.25 0.125 ⁇ 16 0.25 Shigella flexneri (10) 1.56
  • the patch 400 and 200 mg/kg of the present invention can significantly inhibit xylene-induced ear swelling in mice, and the patch effect of the present invention is stronger than that of the same dose of ice boron (see Table 2).
  • the patch 200, 100 and 50 mg/kg of the invention can alleviate the peak of paw swelling in rats caused by carrageenan, and the patch effect of the invention is slightly stronger than that of the same dose of ice boron (see Table 3). .
  • the patch of the present invention 6, 2 and 0.7 mg/day/day can reduce the area of oral ulcer caused by Candida albicans infection to varying degrees, and the ulcer area is significantly smaller than that of the blank adjuvant group after 5 days of administration. There was a significant increase in the number of ulcer-healing animals after 7 days of high-dose administration compared with the blank adjuvant group.
  • the positive drug paste can also promote the healing of the ulcer, and the intensity of action is comparable to that in the patch of the present invention (see Tables 4 and 5).
  • Watermelon cream patch height 6 7.8 ⁇ 4.3** 4.1 + 3.4** 1.7 ⁇ 2.1** 0.2 ⁇ 0.6**
  • Watermelon cream patch 2 10.8 ⁇ 4 ⁇ 1 5.8 + 4.2** 2.8 ⁇ 2.6* 0.7 ⁇ 1.3* * Watermelon cream patch is 0.77 ⁇ 3.8 6.3 ⁇ 3.7* 3.5 ⁇ 2.6* 1.1 ⁇ 1.6*
  • the patch of the invention of 6, 2 and 0.7 mg / day / day can reduce the area of oral cavity ulcer caused by chemical stimulation of acetic acid to different degrees, and the high and middle dose groups can be significantly reduced from the third and fifth days of administration, respectively.
  • the ulcer area was weaker in the low-dose group, and the ulcer area on the fifth day of administration alone was significantly lower than that in the blank adjuvant group.
  • High dose administration after 7 days of ulceration There was a significant increase in the number of wound healing animals compared with the blank adjuvant group.
  • the positive drug paste can also promote the healing of the ulcer, and the intensity of action is comparable to that in the patch of the present invention (see Tables 6, 7).
  • Watermelon cream patch height 6 23.5 + 3.9 21.9 ⁇ 4.0 18.8 ⁇ 4.2* 13.9 ⁇ 4.1* Watermelon cream patch 2 24.6 soil 4.7 22.8 ⁇ 4.7' 19.8 ⁇ 4.9 16.2 ⁇ 5.7 Watermelon cream patch 0.7 24.1 ⁇ 4.3 22.7 ⁇ 4.3 19.7 ⁇ 4.4 16.1 ⁇ 4.5
  • Watermelon cream patch height 6 9.5 + 4.0** 5.1 ⁇ 3.3** 2.1+2.2** 0.2 ⁇ 0.6**
  • Watermelon cream patch is 0.7.2.3 ⁇ 4.9 9.1 ⁇ 4.9 5.1 ⁇ 4.0* 2.5 ⁇ 2.9
  • the patch of the present invention 400 mg/kg can significantly increase the threshold of hot plate pain in mice, and 200 and 100 mg/kg have no significant effect on the threshold of hot plate pain in mice (see Table 9).
  • Watermelon cream patch height 400 30.7 ⁇ 3.8 41.0 ⁇ 12.2* 34.3 ⁇ 13.8 31.8 ⁇ 9.8
  • Watermelon cream patch 200 29.7 ⁇ 7.4 35.0 ⁇ 13.5 32.9 soil 11.5 29.3 ⁇ 9.6
  • Watermelon cream patch 100 28.8 ⁇ 8.2 30.2 ⁇ 9.5 33.5 ⁇ 9.2 26.5 ⁇ 8.4
  • the patch of 200, 100 and 50 mg/kg of the present invention has a certain inhibitory effect on the organ coefficient of the mouse immune organs (thymus and spleen), but there is no statistically significant effect (see Table 10). .
  • the patch of the present invention 200 mg/kg exhibited a promoting effect on the production of serum hemolysin antibody in mice, and 50 mg/kg showed an inhibitory effect, but there was no statistically significant effect. There was no significant change in the 100 mg/kg group (see Table 11).
  • Watermelon cream patch 100 19.5 ⁇ 1.0 23.7 ⁇ 2.'2 571.6 ⁇ 46.4
  • Watermelon cream patch 50 50 19.6 ⁇ 1.0 25.1 ⁇ 2.8 549.7 ⁇ 59.3
  • the patch of the present invention has a certain antibacterial effect on Gram-negative bacteria and Gram-positive bacteria, and the inhibitory effect on Gram-positive bacteria is stronger than that of Gram-negative bacteria.
  • the patch of the invention can inhibit the swelling of the ear of the mouse caused by xylene and the swelling of the ankle of the rat caused by carrageenan, and has obvious swelling and anti-inflammatory effects.
  • the patch of the present invention has the effects of reducing the ulcer area and promoting healing.
  • the patch of the present invention has an analgesic effect.
  • the patch of the present invention may have various aspects of immunomodulatory effects, but the intensity of action is weak.
  • mice taking ICR mice, using the patch dry paste powder of the present invention (prepared according to the method of Example 1), the mice were intragastrically administered with a drug volume of 0.4 ml/20 g, and the mouse was measured.
  • the LD50 value of Stomach Watermelon Cream Uling Patch is 3.43g/kg, and its 95% confidence limit is 3.13-3.72g/kg (equivalent to about 2286 times the clinical human dose).
  • the dead mice were examined by naked eyes and no obvious lesions were found in the organs.
  • SD rats were subjected to a long-term toxicity test for oral administration of the patch of the present invention (prepared according to the method of Example 1).
  • 80 SD rats the test was divided into high dose group (600mg/kg), middle dose group (110mg/kg), low dose group (20mg/kg) and blank control group (3% blank excipient), 20 animals in each group. , male and female.
  • the route of administration was oral administration, once daily, 6 days per week, and the test period was 13 weeks. About 1/2 of the animals in each test group observed a 4-week recovery period change.
  • the long-term toxicity test of new Chinese medicine the general condition, weight change, blood cytology and biochemistry of the animals were observed. Indications, gross anatomy and histopathological examination.
  • the safe dose of the watermelon cream yin patch for oral administration for 13 weeks can be considered as 110mg/kg, 110mg/kg has a slight effect on weight gain and individual indicators In addition to the changes, the remaining indicators are normal. If the person is 60 kg, the safe dose (110 mg/kg) of the watermelon cream is about 73 times that of the human dose (90 mg/person/day).
  • the oral mucosa was taken for histological examination. The results showed that the mucosal surface was covered with intact epithelium, no obvious degeneration, necrosis, no ulcer formation, and no hyperplasia. There was no obvious congestion, edema and inflammatory cell infiltration in the lamina propria.
  • Borneol is very volatile, has a low melting point temperature, and is extremely easy to lose during the preparation process. Therefore, it is important to choose a suitable addition method to ensure the borneol content in the finished product. Heating is required during the one-step granulation process. Considering the volatility of the borneol, the borneol is not easily added before granulation. We compared several methods of adding granules after granulation, and the results are shown in Table 13.
  • Decoction of Centella asiatica with water for 2 times the first time with 8 times of water decoction for 1 hour, the second time with 6 times of water decoction for 1 hour, decoction filtered, centrifuged, filtrate through styrene type macropores
  • Adsorb the resin elute with 4 volumes of 20% ethanol solution containing 1% sodium hydroxide, elute with water to neutrality, discard the above eluent, and wash with 4 times by weight of 60% ethanol and 1 weight of water successively. Remove and collect, collect the recovered ethanol, concentrate to 60 ° C, the relative density is 1. 14 ⁇ 1.
  • the filtrate is further concentrated to 60 ° C, the relative density is 1.13 ⁇ 1.17, dry, pulverized into fine powder and mixed with the above-mentioned snow grass powder and watermelon cream, add dextrin 30g, mix, make Granules, cold air drying to normal temperature, after dissolving the borneol with 2 times of ethanol, spray borneol ethanol solution into the granules, then add carbomer 9g, sucralose lg, magnesium arginate and talc powder 2g. It is compressed into tablets, sprayed on one side with a hydrophobic film coat, dried, and made into a bio-adhesive tablet, and made into 1000 pieces, each containing a relatively high drug amount of 0.6 g.
  • Decoction of Centella asiatica with water for 2 times the first time with 8 times of water decoction for 1 hour, the second time with 6 times of water decoction for 1 hour, decoction filtered, centrifuged, filtrate through styrene type macropores
  • Adsorb the resin elute with 4 times by weight of 1% sodium hydroxide in 20% ethanol, elute with water to neutrality, discard the above eluent, and then wash with 4 times by weight of 60% ethanol and 1 weight of water successively.
  • the relative density is 1.05 ⁇ 1.07
  • hydrochloric acid is added to make the concentration reach 1%, filtered, and the filtrate is further concentrated to 60 ° C, the relative density is 1.13.17, dried, pulverized into fine powder and the above-mentioned Centella asiatica hook and watermelon frost mixed powder, dextrin was added 27k g, mixing, granulating, cold air dried to ambient temperature, with 1.5 weight Dissolved in ethanol times borneol, borneo
  • Watermelon cream 4.5kg borneol 1.5kg Centella asiatica 450kg Mahogany wood 150kg.
  • Watermelon cream 1. 5kg borneol 4. 5kg Centella asiatica 150kg credit wood 450kg.
  • Decoction of Centella asiatica with water for 2 times the first addition of water 8 times times decoction for 1 hour, the second addition of water 6 times times to boil for 1 hour, decoction filtered, centrifuged, filtrate through styrene type macroporous adsorption resin , eluted with 4 times by weight of 1% sodium hydroxide in 20% ethanol, eluted with water to neutrality, discarded the above eluate, and then successively eluted with 4 times by weight of 60% ethanol and 1 weight of water and Collect, collect the recovered ethanol, concentrate to 60 ° C, the relative density is 1. 14 ⁇ 1.
  • Watermelon cream 4. 5kg borneol 1. 5kg Centella asiatica 450kg Mahogany wood 150kg.
  • the above-mentioned drugs are added to conventional excipients according to a conventional process to prepare sustained-release capsules.
  • Watermelon cream 2. 5 kg borneol 3 kg Centella asiatica 160 kg Mahogany wood 190 kg; The above drugs are added to conventional excipients according to the conventional process to make a liniment.
  • Watermelon cream 4 kg borneol 3 kg Centella asiatica 260 kg credit wood 380 kg.
  • the above-mentioned drugs are added to a conventional excipient to prepare a mouthwash according to a conventional process.
  • test solution Take the reference product of asiaticoside and madecassoside, add methanol to make a mixed solution containing 0.5mg per 1ml, as a reference solution; according to the thin layer chromatography Appendix VI B test, the content of the extraction
  • the test solution prepared by the same method and the above reference solution are each 5 ⁇ 10 ⁇ 1, respectively, are placed on the same silica gel G thin layer plate, and are developed with chloroform-methanol-water 7:3:0.5 as a developing agent.
  • test solution Take 30 tablets of the sample of Example 1, accurately weighed, finely ground, take about 0.5g, accurately weighed, precision added 25ml of absolute ethanol, weighed; power 250W, frequency 40kHz Ultrasonic treatment for 45 minutes, let cool, then weigh the weight, make up the lost weight with absolute ethanol, shake well, filter; take the filtrate, then obtain; the method of precision draw the reference solution 3 ⁇ 1, ⁇ , for The test solution is 5 ⁇ 10 ⁇ 1, injected into the liquid chromatograph, and measured. It is calculated by the two-point logarithmic equation of the external standard.
  • Each patch containing Centella asiatica is not less than 1.0 mg based on cetyl glycosides (C 48 H 78 0 2 ).
  • test solution As a reference solution; according to the thin layer chromatography Appendix VI B test, the test solution and the above reference drug solution and the reference solution are each 5 ⁇ 10 ⁇ 1, respectively, on the same silica gel G thin layer plate, Toluene-ethyl acetate-methanol-isopropanol-concentrated ammonia test solution 12:6: 3:3: 1 as developing solvent, set in ammonia-vaporized expansion cylinder, unroll, remove, dry, set 365nm ultraviolet light Under the lamp; in the chromatogram of the test sample, the same color fluorescent spot is displayed at the position corresponding to the chromatogram of the reference drug and the chromatogram of the reference substance;
  • the content determination method was determined by high performance liquid chromatography (Chinese Pharmacopoeia 2005 edition, an appendix VI D); chromatographic conditions and system adaptability test using 18 ⁇ ⁇ silicon germanium bonded silica as a filler; methanol-water 52: 48 For the mobile phase; evaporative light scattering detector detection; the number of theoretical plates should be no less than 2000 according to the peak of hydroxycamptoside; the preparation of the reference solution is taken from the dry to constant weight of asiaticoside reference substance, precision The solution of 0.6 mg per lml is obtained by adding methanol;
  • test solution Take 30 tablets of the sample of Example 1, accurately weighed, finely ground, take about 0. 5g, precision weighed, precision added 25ml of absolute ethanol, weighed; power 250W, frequency 40kHz After sonicating for 45 minutes, let cool, then weigh the weight, make up the lost weight with absolute ethanol, shake it, filter it; take the filtrate to obtain, then obtain the reference solution, accurately absorb the reference solution 3 ⁇ 1 , ⁇ ⁇ ⁇ , the test solution is 5 ⁇ 10 ⁇ 1, injected into the liquid phase Chromatograph, determination, using the two-point logarithmic equation of the external standard, that is, obtained;
  • Each patch containing Centella asiatica is not less than 1.0 mg based on cetyl glycosides (C 48 H 78 0 2 ).
  • test solution prepared by the same method and the above reference solution are each 5 ⁇ 10 ⁇ , respectively, on the same silica gel G thin layer plate, and the solution is trichloromethane-methanol-water 7:3:0.5 as a developing agent.

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Description

说 明 书
一种治疗口腔疾病的中药组合物及其制备工艺、 质量检测方法 背景资料
口腔溃疡又称为复发性阿弗他性口炎（recurrent aphthous stomati ti s , RAS)、 复发性口腔溃疡（recurrent oral ulcer, ROU)、 复发性口疮（recurrent ahthae) 或 canker sore S。 中医又称为 "口疮" 、 "口糜"， 是发生在口腔粘膜上的表浅性溃疡， 大小可从米粒至黄豆大小、 成圆形或卵圆形， 溃疡面为凹、 周围充血。 溃疡具有周期性、 复发性及自限性等特点,好发于唇、 颊、 舌缘等， 患者比较痛苦心烦。 病因及致病机制仍 不明确。 诱因可能是局部创伤、 精神紧张、 食物、 药物、 激素水^ ^改变及维生素或微量 元素缺乏。 系统性疾病、 遗传、 免疫及微生物在其发生、 发展中可能起重要作用。 治疗 主要以局部治疗为主， 严重者需全身治疗。
祖国医学界早已对口腔溃疡有记载。 按照中医的理论体系， 口腔溃疡有以下几种病 因：一是外感六淫， 主要是燥、 火两邪， 燥邪干涩， 易伤津液， 火为阳邪， 其性炎上， 津 伤火灼， 口疮乃发。 故口疮多在秋季及气候突变时容易复发。 二是饮食不节， 由于过食 辛辣肥厚之品或偏食， 致火热内生， 循经上攻， 熏蒸口舌， 并常耗伤心肺肾之阴津， 致 口疮发生。 三是情志过极， 患者素日思虑过度， 心烦不寐， 五志郁而化火， 心火亢盛， 上炎熏灼口舌， 或心火下移于小肠， 循经上攻于口， 均可致口舌生疮;或平素多有郁怒， 肝郁气滞， 肝气不疏， 郁而化火， 暗耗阴血， 致冲任经脉不调， 经行之时， 经气郁遏更 甚， 肝火旺盛， 上灼口舌而致口疮。 四是素体阴亏， 患者素体阴液不足， 或久病阴损， 虚火内生， 灼伤口舌， 乃至口舌生疮。 五是劳倦内伤， 或久病伤脾， 脾气虚损， 水湿不 运， 上渍口舌， 而致口疮;或郁久化热， 湿热上蒸， 亦可致口疮。 更有甚者， 脾气虚极， 伤及脾阳， 脾阳不足， 寒湿生热， 上渍于口， 可发口疮。 六是先天察赋不足， 或久用寒 凉， 伤及脾肾， 脾肾阳虚， 阴寒内盛， 寒湿上渍口舌， 寒凝血淤， 久致口舌生疮。 总之 外感六淫燥火， 内伤脏腑热盛是致病主因， 主病之脏在于心和脾（胃）。
现有技术中有较多的治疗药物， 包括外 和内服， 化学药和中药， 中药治疗体现了 传统医药的特色， 具有一定优势， 特别是西瓜霜为治疗口腔咽喉的良药， 其系列产品均 较好的解除了不同需要的口疮患者的病痛。 但是由于现有技术西药的服用副作用较多， 或者中药治疗一般需要用到味苦的药材， 苦味较难消除， 或者没用涉及到患处直接用药 的中药， 不能满足不同现代生活人们的需要。
发明内容 本发明目的在于提供一种治疗口腔溃疡的药物组合物。
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物的制备方法。
本明还一目的在于提供一种药物组合物的检测方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明药物组合物是由如下原料药组成：
西瓜霜 0. 5-5重量份 冰片 0. 5-5重量份
积雪草 50-500重量份 功劳木 50-500重量份。
本发明药物组合物的原药料组成优选为：
西瓜霜 1-3重量份 冰片 1-3重量份 积雪草 150- 200重量份
功劳木 150-200 重量份；或西瓜霜 2-4 重量份 冰片 2-4 重量份 积雪草 250- 450重量份 功劳木 250- 400重量份。
本发明药物组合的原药料组成更优选为：
西瓜霜 3重量份、 冰片 3重量份、 积雪草 300重量份、 功劳木 300重量份； 或西 瓜霜 1. 5重量份、 冰片 4. 5重量份、 积雪草 150重量份、 功劳木 450重量份； 或 西瓜霜 4. 5重量份、 冰片 1. 5重量份、 积雪草 450重量份、 功劳木 150重量份； 或西瓜霜 2. 5重量份、 冰片 3重量份、 积雪草 160重量份、 功劳木 190重量份； 或西瓜霜 4重量份、 冰片 3重量份、 积雪草 260重量份、 功劳木 380重量份。 本发明药物组合物按照常规工艺加入常规辅料制成临床接受的内服制剂， 如片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 口服液、 糖浆； 缓释片剂、 缓释胶囊或缓释滴丸等内服 制剂。本发明药物组合物按照常规工艺加入常规辅料制成临床接受的外用制剂， 如贴片、 气雾剂、 擦剂、 漱口液等。
本发明药物组合物的制备方法为： 将积雪草加水煎煮 1-3次， 每次加 4- 12重量倍水， 每次煎煮 0. 5- 2小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 2- 6重量倍碱 性乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 2-6重量倍乙醇和 0. 5- 1. 5 重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 10〜1. 30， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 1-4次， 每次加 4-10重量倍水， 每次 0. 5- 2小时， 滤过， 浓缩至 60Ό时相对密度为 1. l(Tl. 30， 加浓乙醇至含醇量达 60%， 搅匀， 静置 4〜12小时， 离心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 03^1. 10， 加入盐酸使浓 度达到 1 %， 过滤， 滤液继续浓缩至 60Ό时相对密度为 1. 10〜1. 30， 干燥， 粉碎成细粉与 上述积雪草细粉、 西瓜霜冰片混匀， 加入常规辅料或常规溶剂制成临床接受的片剂、 胶 囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 口服液、 糖桨、 气雾剂或缓控释制剂。 本发明药物组合物的制备方法为： 将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎 煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸 附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗 脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓縮至 60°C时相对密度为 1. 1Γ1. 18, 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加 6 重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩至 6CTC时相对密度为 1. 12〜1. 16， 加 85 %乙醇至含 醇量达 60%， 搅匀， 静置 8小时， 离心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对 密度为 1. 05〜1. 07， 加入盐酸使浓度达到 1 %， 过滤， 滤液继续浓缩至 6ΌΌ时相对密度为 1. 13~1. 17的浸膏， 备用； 上述浸膏与西瓜霜、 冰片混匀， 加入常规溶剂配制成临床接受 的口服液、 糖浆或气雾剂。
本发明药物组合物的制备方法为： 将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎 煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸 附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗 脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 14~1. 18， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加 6 重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 12〜1. 16， 加 85 %乙醇至含 醇量达 60%， 搅匀， 静置 8小时， 离心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对 密度为 1. 05〜1. 07， 加入盐酸使浓度达到 1 %， 过滤， 滤液继续浓缩至 60°C时相对密度为 1. 13〜1. 17， 干燥， 粉碎成细粉与上述积雪草细粉和西瓜霜混匀， 加入糊精 30重量份， 混匀， 制成颗粒， 冷风干燥至常温， 用 2重量倍的乙醇溶解冰片后， 在颗粒中喷入冰片 乙醇溶液， 再加入卡波姆 4- 14重量份、 三氯蔗糖 0. 5-1. 5重量份、 硬脂酸镁 0. 5- 1. 5重 量份与滑石粉 1-3重量份混匀， 压制成片剂， 单面喷涂疏水薄膜衣， 干燥， 制成单向释 放的缓控释制剂。 。
本发明药物组合物贴片剂的制备方法为： 将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加 8重量 倍水煎煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型 大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去 以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓縮至 60°C时相对密度为 1. 14~1. 18， 千燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加 6重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 12〜1. 16， 加 85 % 乙醇至含醇量达 60%， 搅匀， 静置 8小时， 离心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60 °C时相对密度为 1. 05~1. 07， 加入盐酸使浓度达到 1 %， 过滤， 滤液继续浓缩至 60°C时相 对密度为 1. 13~1. 17， 干燥， 粉碎成细粉与上述积雪草细粉和西瓜霜混匀， 加入糊精 30 重量份， 混匀， 制成颗粒， 冷风干燥至常温， 用 2重量倍的乙醇溶解冰片后， 在颗粒中 喷入冰片乙醇溶液， 再加入卡波姆 9重量份、 三氯蔗糖 1重量份、 硬脂酸镁 1重量份与 滑石粉 2重量份混匀， 压制成片剂， 单面喷涂疏水薄膜衣， 干燥， 制成生物粘贴片剂。
本发明所述的重量份和体积份的对应关系为 g/ml或 kg/1的关系。
本发明所制成的剂型的单位制剂 （如片剂每片、 颗粒剂每包、 胶囊剂每粒、 喷雾剂 每毫升） 的相当生药量含量为 0.广 5. 0克。
本发明药物组合物的检测方法包括如下鉴别方法或含量测定方法中的一种或几种： 鉴别方法：
(1) 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 15片的相当生药量相同的制剂量， 加水 15ml， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml， 即生成白色沉淀。 此沉淀在盐酸中不 溶解。
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 lml含 0. 5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5〜10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已垸- 醋酸乙酯 8-26: 1. 5-4. 5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%磷钼酸乙醇溶液，于 80-120 °C加热 3-7分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0. 25g， 加无水乙醇 5ml，超声处理 7-23min， 滤过， 滤液作为 对照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0. 5mg 的溶液， 作为对照 品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上 述对照药材溶液和对照品溶液各 5〜10 μ 1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋 酸乙酯一甲醇—异丙醇一浓氨试液 6-18 : 3-9: 1. 5-4. 5 : 1. 5-4. 5:0. 5-1. 5为展开剂，置氨 蒸气饱和的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置 365nm紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同的颜色荧光斑点；
(4) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成每 lml各含 0. 5mg 的混合溶液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液用含量测定中的同法制 备的供试品溶液及上述对照品溶液各 5〜10 μ 1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯 甲垸一甲醇一水 4-10: 1. 5-4. 5:0. 3-0. 7为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙 醇溶液， 于 80-120°C加热至斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置 上， 显相同顔色的斑点；
含量测定方法 照高效液相色谱法 （中国药典 2005年版一部附录 VI D) 测定； 色谱条件与系统适应性试验 以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂； 以甲醇-水
26 - 78 :24-72为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按羟基积雪草苷峰计算应不低 于 2000;
对照品溶液的制备 取干燥至恒重的羟基积雪草苷对照品适量， 精密称定， 加甲 醇制成每 lml含 0. 6mg的溶液， 即得；
供试品溶液的制备 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 30片的相当生药 量相同的制剂量， 精密称定， 取 0. 5g， 精密称定， 精密加入无水乙醇 25ml， 称定重量； 功率 250W, 频率 40kHz下超声处理 30-60分钟， 放冷， 再称定重量， 用无水乙醇补足减 失的重量， 摇匀， 滤过； 取续滤液， 即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液 3 μ 1、 lO u l, 供试品溶液 5~10 μ 1， 注入液相 色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计算， 即得；
本药物组合物外用制剂中含积雪草以羟基积雪草苷 （C48H7802。） 计， 不得少于 1. 0mg， 所述外用制剂中指^ f含相当生药量与贴片每片的相当生药量相同。
本发明药物组合物的检测方法优选如下鉴别方法或含量测定方法中的一种或几种： 鉴别方法： „
(1) 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 15片的相当生药量相同的制剂量， 研细， 加水 15ml， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml， 即生成白色沉淀。 此沉淀在盐 酸中不溶解。
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 lml含 0. 5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5~10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已烷- 醋酸乙酯 17 : 3为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5%磷钼酸乙醇溶液， 于 105°C加热 5 分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0. 25g， 加无水乙醇 5ml，超声处理 15min， 滤过， 滤液作为对 照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0. 5mg 的溶液， 作为对照品 溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述 对照药材溶液和对照品溶液各 5~10 μ 1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸 乙酯一甲醇一异丙醇一浓氨试液 12 : 6 : 3 : 3 : 1为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开， 取出， 晾干， 置 365nm紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色 谱相应的位置上， 显相同的颜色荧光斑点；
(4) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成每 lml各含 0. 5mg 的混合溶液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品 溶液及上述对照品溶液各 5〜10 μ 1, 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯甲垸一甲醇 一水 7 :3:0. 5为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙醇溶液， 于 105°C加热至 斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同顔色的斑点； 含量测定方法 照高效液相色谱法 （中国药典 2005年版一部附录 VI D) 测定； 色谱条件与系统适应性试验 以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂； 以甲醇-水 52:48为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按羟基积雪草苷峰计算应不低于 2000; 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的羟基积雪草苷对照品适量， 精密称定， 加 甲醇制成每 lml含 0. 6mg的溶液， 即得；
供试品溶液的制备 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 30片的相当生药 量相同的制剂量， 精密称定， 研细， 取 0. 5g， 精密称定， 精密加入无水乙醇 25ml， 称定 重量； 功率 250W, 频率 40kHz下超声处理 45分钟， 放冷， 再称定重量， 用无水乙醇补足 减失的重量， 摇匀， 滤过； 取续滤液， 即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液 3 μ 1、 10 μ 1， 供试品溶液 5~10 μ 1， 注入液相 色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计算， 即得；
本药物组合物外用制剂中含积雪草以羟基积雪草苷 （ H7802。） 计， 不得少于 l. Omg, 所述外用制剂中指所含相当生药量与贴片每片的相当生药量相同。
本发明药物组合物具有清热解毒， 消肿止痛之功效， 对治疗风热上攻、 肺胃热盛所 致的口糜， 症见口舌生疮、 牙龈肿痛或出血， 口腔炎， 口腔溃疡， 牙龈炎效果显著， 无 副作用。
下述实验例用于进一步说明本发明， 但不限于本发明。
实验例 1
药理： 根据新药申报要求， 考察本发明贴片（按照实施例 1方法制备）的体外抑菌 活性； 采用动物模型， 观察本发明贴片抗炎、 抗溃疡、 镇痛以及对免疫功能的作用， 为临床用药提供实验依据。
方法： 本研究通过小鼠二甲苯耳廓肿胀和大鼠角叉菜胶足跖肿胀 2个模型， 考 察本发明贴片的抗炎作用； 通过豚鼠白色念珠菌感染口腔溃疡和豚鼠醋酸刺激口腔 溃疡 2个模型考察抗口腔溃疡作用； 通过醋酸致小鼠扭体反应和小鼠热板法 2个模 型， 考察镇痛作用； 通过小鼠免疫器官重量、 小鼠血清溶血素抗体生成、 小鼠迟发 型超敏反应 3个模型， 考察对免疫功能的影响。
结果- (1)本发明贴片对于金黄色葡萄球菌， 肺炎链球菌， 溶血链球菌， 表皮葡萄球 菌等革兰氏阳性细菌具有显著的抑菌作用， 但对肠杆菌科、 假单胞菌、 克雷伯氏肺 炎杆菌等革兰氏阴性细菌的抑菌作用较弱（见表 1)。
表 1. 西瓜霜贴片、 冰硼散及头孢他啶最低抑菌浓度 （MIC) 的测定
西瓜霜贴片 冰硼散 头孢他啶 受试菌株 （数量） MIC MIC™ IC MICso IC IGo
(mg/ml) (mg/ml) (mg/ml) (mg/ml) (u g/ml) ( V- g/ml) 产气杆菌 （10) 3.125〜100 100 3.125〜25 6.25 0.0625〜64 0.5 克雷伯氏肺炎杆菌 （10) 6.25^100 100 6.25〜25 6.25 0.125〜〉128 0.25 大肠杆菌 （10) 0.78〜50 50 3.125〜25 6.25 0.25〜32 0.5 绿脓杆菌 （10) 50~100 50 3.125〜； 12.5 3.125 2〜 28 4 金黄色葡萄球菌 （10) 0.39^1.56 0.39 1.56~25 3.125 0.0625〜32 0.25 表皮葡萄球菌 （10) 0.195〜1.56 0.39 1.56~12.5 6.25 0.125〜32 4 伤寒杆菌 （10) 3.125~50 6.25 3.125^6.25 6.25 0.125^16 0.25 福氏痢疾杆菌 （10) 1.56^100 3.125 6.25 6.25 0.0625〜0.5 0.125 嗜麦芽假单胞菌 （10) 3.125 3.125 3.125〜6.25 6.25 0.5〜〉128 4 不动杆菌 （2) 0.195, 0.195 —— 3.125， 6.25 ― 16, ,4 ― 枸橼酸杆菌 （2) 50， ' 50 ― 6.25， 6.25 一 8， 128 ― 沙雷氏菌 (2) 50, 50 ― 12.5 ― 0.25， 0.125 ― 粪链球菌 （1) 3.125 一 12.5 ― 128 一 大肠杆菌 ATCC25922 50 ― 12.5 一 0.5 ― 绿脓杆菌 ATCC27853 100 ― 12.5 ― 2 ― 金黄色葡萄球菌
0.39 ― 12.5 ― 8 ― ATCC25925
肺炎球菌 （15) 0. Γ6.25 3.125 12.5~25 25 0.125~8 0.5 溶血链球菌 （18) 0.78〜3.125 1.56 6.25~25 12.5 0.125〜32 0.5
—： 菌株数少， 无 MIG
(2) 本发明贴片 400和 200 mg/kg均可显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀， 本发明贴片作用强于同剂量的冰硼散（见表 2)。 表 2.西瓜霜贴片对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀的抑制作用 （n=10，
冰硼散. 西瓜霜贴片 西瓜霜贴片 西瓜霜贴片 组 另 IJ 空白辅料
400mg/kg 棚 rag/kg 200mg/kg 100mg/kg 肿胀度 （mg) 8.5±1.3 5.7±1. 7** 5.0 ±1.3** 6.4士 1. 7.0±1.5* 肿胀率 (%) 86.5± 17.0 60.7±21 .1** 49.0±15.7**. 64.7 + 13.4** 70.0±21.3
* 0.05， **Κ0.01, 与空白辅料组比较。
(3) 本发明贴片 200、 100和 50 mg/kg均可明显减轻角叉菜胶引起的大鼠足跖 肿胀峰值， 本发明贴片作用略强于同剂量冰硼散（见表 3)。
表 3.西瓜霜贴片对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀的抑制作用 （n=10， X ±S) 致炎前 致炎后不同时间肿胀度， ml (肿胀率， ％) 组别
体积 （ml) lh 2h 4h 6h
0.27 ±0· 08 0.57±0.11 0.53 ±0.07 0.36±0.12 空白辅料 1.18 ±0.08
(22.8±7.9) (48·9±11.3) (45.1±7·9) (31.1±11.7) 冰硼散 0.19 ±0.07* 0.30 + 0.06** 0.29 ±0.13** 0.22±0.11*
1.17±0.06
200mg/kg (16.0±5.9*) (25.9±5.8**) (24.8 ±12.0**) (18.6±9.7*) 西瓜霜贴片 0.16 ±0.09* 0.26 ±0.08** 0.28 ±0.13** 0.16 ±0.11**
1.18 ±0.06
200 mg/kg (13.9±8.6*) (21.8±7.5**) (23.7±11.9**) (13.5±10.4**) 西瓜霜贴片 0.21±0.06 0.33 ±0.13** 0.37 ±0.10** 0.27 ±0.18
1.18±0.07
100 mg/kg (17.5±5.0) (28·9±12.1**) (31.3±9.8**) (23.5±16.4)· 西瓜霜贴片 0.23 ±0.06 0.46 ±0.09* 0.41 + 0.09** 0.31±0.13
1.18士 0.06
50 mg/kg (19.2±5.8) (38.9±9.3*) (35.1±8· 7*) (26.2±11.·7)
*Κ0.05, ** 0.01， 与空白辅料组比较。 括号内数据为肿胀率 （％)
(4) 本发明贴片 6、 2和 0.7mg/只 /天均可不同程度使豚鼠白色念珠菌感染引起 的口腔溃疡面积减小， 给药 5天后溃疡面积均显著小于空白辅料组。 高剂量给药 7天 后溃疡愈合动物数与空白辅料组比较有显著增加。 阳性药意可贴也可促进溃疡的愈 合， 作用强度与本发明贴片中剂量相当 （见表 4、 5)。 表 4.西瓜霜贴片对豚鼠感染口腔溃疡模型溃疡面积的影响 （n=10, x士 s)
剂量 不同给药时间溃疡面积（mm2)
组别
(mg/只 /天） 0d Id 2d 3d 空白辅料 23.4±3.3 25.0±3.4 22·6±3.5 18·2±4.3 意可贴
0.3 24.5±4.3 23.2±3.9 19.9±3.5 16.0±3.9 (醋酸地塞米松）
西瓜霜贴片高 6 23.8±3.6 20.9 ±3.8* 17.0±3, 9** 12.5±3.9** 西瓜霜贴片中 2 24.3±4.1 21.7±3.9 19.3±3.6 14.7±4.0 西瓜霜贴片低 0.7 24.8±4.1 22.5 ±4.0 19.0±4.1 14.5±4.4
4d 5d 6d 7d 空白辅料 14.4±4.1 11.5±4.0 7.1±4.1 3.2±2.4 意可贴
0.3 10.5±3.5* 6.4 ±3.3** 3.3±2.7* 0.6 + 1.1** (醋酸地塞米松）
西瓜霜贴片高 6 7.8 ±4.3** 4.1 + 3.4** 1.7±2.1** 0.2±0.6** 西瓜霜贴片中 2 10.8±4· 1 5.8 + 4.2** 2.8 ±2.6* 0.7±1.3** 西瓜霜贴片低 0.7 10.7±3.8 6.3±3.7* 3.5 ±2.6* 1.1±1.6*
* 0.05， ** 0.01, 与同期空白辅料组比较。 表 5. 西瓜霜贴片对豚鼠感染口腔溃疡模型溃疡愈合时间的影响 （rv =10)
剂量 不同给药时间溃疡愈合动物数（只） ：愈合动物总数 组别
(mg/只 /天〕 1 4d 5d 6d 7d (只） 空白辅料 0 0 1 2 3 意可贴
0.3 0 1 2 4 7
(醋酸地塞米松)
西瓜霜贴片高 6 1 1 3 4 9** 西瓜霜贴片中 2 0 2 2 3 7 西瓜霜贴片低 0.7 0 0 2 3 5
** 0.01, 与空白辅料组比较。 ( x2[2X2]法检验)
(5) 本发明贴片 6、 2和 0.7mg/只 /天均可不同程度使醋酸化学刺激引起的豚鼠 口腔溃疡面积减小， 高、 中剂量组分别自给药第 3、 5天可显著减少溃疡面积， 低剂 量组作用较弱， 仅给药第 5天的溃疡面积显著低于空白辅料组。 高剂量给药 7天后溃 疡愈合动物数与空白辅料组比较有显著增加。 阳性药意可贴也可促进溃疡的愈合, 作用强度与本发明贴片中剂量相当（见表 6、 7)。
表 6.西瓜霜贴片对豚鼠醋酸口腔溃疡模型溃疡面积的影响 （n=10, 土 s)
剂量 不同给药时间溃疡面积（mm2)
组别
(mg/只 /天） 0d Id 2d 3d 空白辅料 24.3土 5.2 24.7±5.8 22.2±5.3 18.8±4.8 意可贴
0.3 24.5 ±4.1 24·2±4.5 21.2±46 16.7±4.4 (醋酸地塞米松）
西瓜霜贴片高 6 23.5 + 3.9 21.9±4.0 18.8±4.2* 13.9±4.1* 西瓜霜贴片中 2 24.6土 4.7 22.8±4.7' 19.8±4.9 16.2±5.7 西瓜霜贴片低 0.7 24.1±4.3 22.7±4.3 19.7±4.4 16.1±4.5
4d 5d 6d 7d .
空白辅料 16.2±4.8 15.5±4.5 9.2±3.6 5.2±3.2 意可贴 ―
0.3 11.6±3.9* 7.2 ±3.8** 4.1+3.4** 1.0 + 1.4** (醋酸地塞米松）
西瓜霜贴片高 6 9.5 + 4.0** 5.1±3.3** 2.1+2.2** 0.2±0.6** 西瓜霜贴片中 2 12.0±5.4 7.0±4.6** 3.4 + 3.4** 1.5 ±2.1** 西瓜霜贴片低 0.7 12.3±4.9 9.1±4.9 5.1±4.0* 2.5±2.9
*K0.05, **Κ0.01, 与空白辅料组比较。 表 7. 西瓜霜贴片对豚鼠醋酸口腔溃疡模型溃疡愈合时间的影响 （η =10)
剂量 不同给药时间溃疡愈合动物数（只） 愈合动物总数 组别
(mg/只 /天） 4d 5d 6d 7d (只） 空白辅料 0 0 0 2 2 意可贴
0.3 0 1 2 3 6
(醋酸地塞米松）
西瓜霜贴片高 6 0 2 2 5 9** 西瓜霜贴片中 2 0 1 3 2 6 西瓜霜贴片低 0.7 0 0 2 2 4
** 0.01， 与空白辅料组比较。 (经 x2[2X2〕法检验) (6) 本发明贴片 400、 200和 100mg/kg三个剂量组对醋酸致小鼠扭体反应均有明 显的抑制作用（见表 8)。
表 8. 西瓜霜贴片对醋酸致小鼠扭体反应的抑制作用 （n=10， 土 s) 组别 剂量 （mg/kg) 扭体次数 抑制率（％)
空白对照组 45±12
盐酸曲马多 100 14 ±11** 70 西瓜霜贴片高 400 17 ±13** 62 西瓜霜贴片中 200 24+16** 48 西瓜霜贴片低 100 28±17* 39
* ο.05, **moi， 与空白对照组相比。
(7) 本发明贴片 400mg/kg可明显提高小鼠热板痛阈值， 而 200和 100mg/kg对小 鼠热板痛阈值无明显影响（见表 9)。
表 9. 西瓜霜贴片对小鼠热板痛阈值的影响 （n=10， ±s)
剂量 痛阈 （
组别
(mg/kg) 给药前 0.5h lh 1.5h
空白对照组 29.9±5.3 30.8±8·3 31.3±8.4 '29.4±9.6
51.0±10.3* 47.4±13.1* 42.7±12.4 盐酸曲马多 100 29.9±9.6
* * *
西瓜霜贴片高 400 30.7±3.8 41.0±12.2* 34.3 ±13.8 31.8±9.8 西瓜霜贴片中 200 29.7±7.4 35.0±13.5 32.9土 11.5 29.3±9.6 西瓜霜贴片低 100 28.8±8.2 30.2±9.5 33.5±9.2 26.5 ±8.4
* 0.05, ** 0.01, 与空白对照组相比。
(8) 本发明贴片 200、 100和 50mg/kg 3个剂量组对小鼠免疫器官 （胸腺和脾） 的脏器系数有一定的抑制作用， 但均无统计学显著影响（见表 10)。 表 10. 西瓜霜贴片对小鼠免疫器官 （胸腺和脾）脏器系数的影响 （n=10, X ±s)
剂量 脏器系数 （mg/10g BW)
组别
(mg/kg) 胸腺 脾
空白对照组 26.7 + 11.7 48.9±7.0 环磷酰胺 15 17.0±5.2* 40.6 ±9.7* 西瓜霜贴片高 200 21.3土 8.1 44.5 ±10.2 西瓜霜贴片中 100 23.3±6.3 45.2 ±9.7
西瓜霜贴片低 50 26.5±7.0 46.7±5.4
*R0.05, 与对照组相比。
(9) 本发明贴片 200 mg/kg对小鼠血清溶血素抗体生成表现为促进作用， 而 50mg/kg表现为抑制作用， 但均无统计学显著影响。 100 mg/kg组无明显变化（见表 11)。
表 11. 西瓜霜贴片对小鼠血清溶血素抗体生成的影响 （ n=10, X土 s)
剂量 体重 （g)
组别 样品 HCs。
(mg/kg) d0 d7
空白对照组 19.0±0.8 25.5±2.8 565.8 ±84.6 环磷酰胺 15 19.3±θ 7 22.8±1.7* 198.1±47.4** 西瓜霜贴片高 200 19.5±1.1 23.5±1.3 604.9±38.5
西瓜霜贴片中 100 19.5±1.0 23.7±2.'2 571.6±46.4
西瓜霜贴片低 50 19.6±1.0 25.1±2.8 549.7 ±59.3
* .05, 0.01与对照组相比。
(10) 本发明贴片 100和 50mg/kg对小鼠迟发型超敏反应有增强趋势， 使胸腺和 脾重量系数有所降低， 但与空白对照组相比， 均未达到统计学显著差异。 200mg/kg 组无明显变化（见表 12)。 表 12. 西瓜霜贴片对小鼠迟发型超敏反应及胸腺和脾重量的影响 （n=10，
剂量 体重（g) 肿胀度 脏器系数（mg/10g BW) 组别
(rag/kg) d0 d7 (mg) 胸腺 脾 空白对照组 19.5±0.7 25.9±1.9 5.9±0.6 21.1±8.4 43.3 ±14.7 环璘酰胺 15 19.7±0.8 . 23.2 ±2.2** 4.7±1.3* 13.3±4.4* 31.3±10.8 西瓜霜贴片高 200 19·4±1·0 24.1±1.6 6.0±1·2· 17.4±6.0 38.3±13.4 西瓜霜贴片中 100 19.6±1.1 25.0±1.6 6.4±1.0 17.8±4.1 41.9±16.3 西瓜霜贴片低 50 19.6±0.6 25.8±1.0 6.3 ±0.6 18.3±6.6 39.2 ±13.2
*R .05, * 0.01与对照组相比。
结论： 本研究表明本发明贴片对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均有一定抗 菌作用， 对革兰氏阳性细菌的抑制作用强于革兰氏阴性细菌。 本发明贴片可抑制二 甲苯引起小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶引起大鼠足跖肿胀， 具有明显的消肿与抗炎作 用。 对于白色念珠菌感染和醋酸化学刺激引起的豚鼠口腔溃疡模型， 本发明贴片均 具有缩小溃疡面积和促进愈合的作用。 本发明贴片镇痛作用显著。 本发明贴片可能 具有多方面的免疫调节作用， 但作用强度较弱。
实验例 2 急性毒性试验 . ,
(1)、 取 ICR小鼠， 以本发明贴片干膏粉（按照实施例 1方法制备）一次性给小鼠灌 胃投药，给药容量均为 0.4 ml/20 g，测得小鼠灌胃西瓜霜疡宁贴片的 LD50值为 3.43g/kg, 其 95%的置信限为 3.13-3.72g/kg (相当于临床人用剂量约 2286倍）。死亡小鼠肉眼尸检， 脏器未见明显病变。
(2)、 取 SD大鼠， 在最大给药容量 （2.0ml/100g)和最大给药浓度 （300mg/ml) 条 件下， 大鼠灌胄本发明贴片 6g/kg (约为每日临床人用量的 4000倍） 后动物可见活动减 少， 精神不佳， 给药后约 24小时后， 行为、 活动基本恢复正常。 动物无死亡， 在以后的 观察期内体重增长正常， 未见明显异常症状。
实验例 3 长期毒性试验
取 SD大鼠进行经口腔给药本发明贴片（按照实施例 1方法制备）的长期毒性试验研 究。 SD大鼠 80只，试验分高剂量组 (600mg/kg)、中剂量组（110mg/kg)、低剂量组（20mg/kg) 及空白对照组 (3%空白辅料）， 每组动物 20只， 雌雄各半。 给药途径为口腔涂抹给药， 每 天一次，每周给药 6天，试验周期为 13周。各试验组约 1/2动物观察了 4周恢复期变化。 按中药新药的长期毒性试验要求观察了动物的一般状况、 体重变化、 血液细胞学及生化 学指征、 大体解剖及组织病理学检查。
大鼠连续经口腔给予本发明贴片 13周后， 试验周期内， 除高剂量组动物在开始给药 数周内活动有所减少外， 其余各剂量组动物均行为活动如常， 一般情况良好。 从整体上 看动物体重增长正常。 从单性别来看， 在给药 13周及 4周恢复期中， 高剂量雄性动物体 重较明显的低于对照组， 中剂量仅给药 4〜7周雄性体重呈短暂的明显下降， 但给药期间 高、 中剂量组体重增长值未见明显的持续抑制作用， 同时， 各剂量组雌雄动物体重总均 值在给药期间均未明显改变， 因此， 高剂量组雄性动物的体重偏低是由于前几周的不适 应导致的延续效应， 贴片对体重和体重增长没有明显影响。
给药及恢复期间， 与对照组相比， 给药各组动物的摄食量既有增高， 又可见降低， 未见持续的明显变化， 因此属于散在波动， 无临床意义。
血液学结果表明， 与对照组相比， 仅部分指标的明显改变（给药 13周低剂量组 MCHC 明显降低， 中剂量组 PLT明显升高。 恢复期中， 中剂量组恢复期雄性 MCH和 MCHC显著降 低， 高剂量组雌性动物 PLT显著降低）， 但这些单性别发生变化的指标, 往往雌雄总均值 无明显变化， 同时这些改变均不存在剂量相关性。 血液生化学结果显示， 仅高剂量组雄 性动物给药 13周 ALB下降 （ 0. 05 ), 其余各剂量组的各项指标与对照组相比均无显著 差异， 为散在波动， 无临床意义。
各剂量组动物主要脏器的脏器重量与脏器系数均无异常改变， 系统尸检和病理切片 结果显示， 各受检脏器均未见明显与给药相关的病理改变。
给药 13周的大体观察和组织学检查， 未见对给药部位口腔粘膜的刺激性反应。 综上， 在本试验条件下， 西瓜霜疡宁贴片经口给药 13周对大鼠的安全剂量可以认为 是 110mg/kg， 110mg/kg除对体重增长有轻度影响以及个别指标有所变化之外， 其余各项 检测指标均正常。 若人以 60 kg计， 西瓜霜疡宁贴片对大鼠的安全剂量 （110mg/kg) 约 相当于人用剂量 （90mg/人 /天） 的 73倍。
实验例 4 过敏性和局部剌激性试验
( 1 )、 皮肤过敏试验：
通过豚鼠皮肤过敏反应， 考察西瓜霜疡宁贴片 （按照实施例 1方法制备） 实验动物局 部用药后的过敏反应情况。结果显示， 西瓜霜疡宁贴片在最大配药浓度 30% (w : W) 下未 见对豚鼠的皮肤过敏反应。
( 2 ) 、 刺激性试验：
在 SD大鼠经口给药西瓜霜疡宁贴片 （按照实施例 1方法制备） 的长期毒性试验研究 中， SD大鼠 80只， 试验分高 ( 600mg/kg), 中 ( HOmg/kg), 低剂量组 ( 20mg/kg) 及空 白对照组 （3%空白辅料)， 每组动物 20只， 雌雄各半。 给药途径为口腔涂抹给药， 给药 量 0. 2g/100g体重， 每天一次， 每周给药 6天， 试验周期为 13周。 13周给药期间， 每天 给药前观察口腔粘膜给药部位， 全部动物均未见充血、 红肿等刺激性症状。 13周给药结 束， 取口腔粘膜进行组织学检査， 结果显示粘膜表面被覆上皮完整， 无明显变性、 坏死， 无溃疡形成， 亦无过度增生。 固有层内无明显充血、 水肿及炎性细胞浸润。
实验例 5 冰片的加入方法筛选实验
冰片挥发性很强， 熔点温度较低， 制剂过程中极易损失， 因此选择合适的加入方法 对于保证成品中冰片含量至关重要。 一步制粒过程中需加热， 考虑到冰片的挥发性， 因 此冰片不易在制粒前加入。 我们分别比较了几种制粒后冰片的加入方法， 结果如表 13所 示
表 13 冰片加入方法研究
冰片加入方法
用较细筛网粉碎成细粉后加入 使冰片熔解堵塞筛网， 同时反复粉碎温度升高致使挥发损失增
¾α
用较粗筛网粉碎后加入 大小不一， 与颗粒混合不均， 压片时存在花斑
2倍量乙醇溶解后常温喷雾入颗粒 冰片分布均匀， 压片效果好
结果表明： 将西瓜霜粉、 糊精、 积雪草与功劳木干膏粉混匀一步制粒后， 冷风干燥 至常温， 用 2倍量的乙醇溶解冰片后， 在颗粒中喷入冰片乙醇溶液， 所得颗粒冰片分布均 匀。
因此， 我们选择使用 2倍量乙醇溶解冰片后喷雾入颗粒的方式入药。 下述实施例用于进一步说明本发明,但不限于本发明。
实施例 1 贴片剂
西瓜霜 3g 冰片 3g 积雪草 300g 功劳木 300g。
将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎 煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4体积倍含 1 %氢氧化钠 的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60 %乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 14~1. 18， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加 6体积倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩 至 60°C时相对密度为 1. 12~1. 16， 加 85 %乙醇至含醇量达 60 %， 搅匀， 静置 8小时， 离 心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 05〜1. 07， 加入盐酸使浓度 达到 1%， 过滤， 滤液继续浓缩至 60°C时相对密度为 1.13~1.17， 干燥， 粉碎成细粉与上 述积雪草细粉和西瓜霜混匀， 加入糊精 30g， 混匀， 制成颗粒， 冷风干燥至常温， 用 2 重量倍的乙醇溶解冰片后，在颗粒中喷入冰片乙醇溶液，再加入卡波姆 9g、三氯蔗糖 lg、 硬脂酸镁 lg与滑石粉 2g混勾， 压制成片剂， 单面喷涂疏水薄膜衣， 干燥， 制成生物粘 贴片剂， 制成 1000片， 每片含相当生药量 0.6g。
实施例 2 胶囊剂
西瓜釋 1.5kg 冰片 4.5kg 积雪草 l kg 功劳木 450kg。
将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎 煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1%氢氧化钠 的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1.14〜1.18， 干燥， 粉碎成细粉，、备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加 6重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩 至 60°C时相对密度为 1.12〜1.16, 加 85%乙醇至含醇量达 60%， 搅匀， 静置 8小时， 离 心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1.05〜1.07， 加入盐酸使浓度 达到 1%， 过滤， 滤液继续浓缩至 60°C时相对密度为 1.13 .17， 干燥， 粉碎成细粉与上 述积雪草细粉和西瓜霜混勾， 加入糊精 27kg， 混匀， 制成颗粒， 冷风干燥至常温， 用 1.5 重量倍的乙醇溶解冰片后， 在颗粒中喷入冰片乙醇溶液， 加入常规辅料制成胶囊剂。 每 粒含相当生药量 lg。 实施例 3 气雾剂
西瓜霜 4.5kg 冰片 1.5kg 积雪草 450kg 功劳木 150kg。
将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加水 8重量倍煎煮 1小时， 第 2次加水 6重量倍煎 煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1%氢氧化钠 的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1.14〜1.18， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加水 6重量倍， 每次 1小时， 滤过， 浓缩 至 60°C时相对密度为 1.12〜1.16， 加 85%乙醇至含醇量达 60%， 搅匀， 静置 8小时， 离 心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1.05〜1.07， 加入盐酸使浓度 达到 1%， 过滤， 滤液继续浓缩至 60Ό时相对密度为 1.13〜1.17浸膏， 备用； 上述浸膏 与西瓜霜、 冰片混匀， 加入常规溶剂配制成临床接受的气雾剂或擦剂或漱口水。 每 ml含 相当生药量 0.6g。 实施例 4 口服液
西瓜霜 1. 5kg 冰片 4. 5kg 积雪草 150kg 功劳木 450kg。
将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加水 8重量倍煎煮 1小时， 第 2次加水 6重量倍煎 煮 1小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠 的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 14~1. 18， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加水 6重量倍， 每次 1小时， 滤过， 浓缩 至 60°C时相对密度为 1. 12〜1. 16, 加 85 %乙醇至含醇量达 60 %， 搅匀， 静置 8小时， 离 心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓缩至 60Ό时相对密度为 1. 05〜1. 07, 加入盐酸使浓度 达到 1 % , 过滤， 滤液继续浓缩至 60°C时相对密度为 1. 13〜1. 17浸膏， 备用； 上述浸膏 与西瓜霜、 冰片混匀， 加入常规溶剂配制成临床接受的口服液。 每支含相当生药量 2g。 实施例 5 丸剂
西瓜霜 3kg 冰片 3kg 积雪草 300kg 功劳木 300kgo
将上述药物按照常规工艺加入常规辅料制成丸剂。 每丸含相当生药量 3g。 实施例 6 缓释片剂
西瓜霜 4. 5kg 冰片 1. 5kg 积雪草 450kg 功劳木 150kg。
将上述药物按照常规工艺加入常规辅料制成缓释片剂。 每片含相当生药量 0. 8g。 实施例 7 缓释胶囊
西瓜霜 3kg 冰片 3kg 积雪草 300kg 功劳木 300kg。
将上述药物按照常规工艺加入常规辅料制成缓释胶囊。
实施例 8 擦剂
西瓜霜 2. 5 kg 冰片 3 kg 积雪草 160 kg 功劳木 190 kg; 将上述药物按照常规 工艺加入常规辅料制成擦剂。
实施例 9 漱口液
西瓜霜 4 kg 冰片 3 kg 积雪草 260 kg 功劳木 380 kg。 将上述药物按照常规工 艺加入常规辅料制成漱口液。
实施例 10 贴片剂的检测方法 鉴别方法：
(1)取实施例 1的贴片剂 15片， 研细， 加水 15ml， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml, 即生成白色沉淀， 此沉淀在盐酸中不溶解。
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 1ml含 0.5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5〜10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已垸- 醋酸乙酯 17:3为展开剂， 展开， 取出， 晾千， 喷以 5%磷钼酸乙醇溶液， 于 105°C加热 5 分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0.25g， 加无水乙醇 5ml,超声处理 15min， 滤过， 滤液作为 对照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 1ml含 0.5mg 的溶液， 作为对照 品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶 液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一浓 氨试液 12:6:3:3:1为展开剂， 置氨蒸气饱和的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置 365nm 紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相 同的颜色荧光斑点；
(4) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品， 加甲醇制成每 1ml各含 0.5mg 的混合溶 液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供 试品溶液及上述对照品溶液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯甲烷一 甲醇一水 7:3:0.5为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙醇溶液， 于 105Ό加 热至斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同顔色的斑点； 含量测定方法 照高效液相色谱法 （中国药典 2005年版一部附录 VI D)测定； 色谱条件与系统适应性试验 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 52:48 为流动相； 蒸发光散射检测器检测； 理论板数按羟基积雪草苷峰计算应不低于 2000; 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的羟基积雪草苷对照品适量， 精密称定， 加甲 醇制成每 lml含 0.6mg的溶液， 即得；
供试品溶液的制备 取实施例 1的贴片剂 30片， 精密称定， 研细， 取约 0.5g， 精 密称定， 精密加入无水乙醇 25ml， 称定重量； 功率 250W, 频率 40kHz下超声处理 45分 钟， 放冷， 再称定重量， 用无水乙醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过； 取续滤液， 即得； 测定法 分别精密吸取对照品溶液 3 μ1、 ΙΟμΙ, 供试品溶液 5~10μ1, 注入液相 色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计算， 即得；
贴片每片含积雪草以羟基积雪草苷 （C48H7802。） 计， 不得少于 1.0mg。 实施例 11 检测方法
鉴别方法：
( 1 )取实施例 1的贴片剂 15片， 研细， 加水 15ml， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml , 即生成白色沉淀， 此沉淀在盐酸中不溶解。
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 lml含 0. 5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5〜10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已烷- 醋酸乙酯 17 : 3为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5%磷钼酸乙醇溶液， 于 105°C加热 5 分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0. 25g， 加无水乙醇 5ml,超声处理 15min， 滤过， 滤液作为 对照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0. 5mg 的溶液， 作为对照 品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶 液各 5〜10 μ 1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一浓 氨试液 12:6: 3:3: 1为展开剂， 置氨蒸气饱和的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置 365nm 紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相 同的颜色荧光斑点；
(4) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品， 加甲醇制成每 lml各含 0. 5mg 的混合溶 液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供 试品溶液及上述对照品溶液各 5〜10 μ 1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯甲垸一 甲醇一水 7 :3 :0. 5为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙醇溶液， 于 105°C加 热至斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同顔色的斑点。 实施例 12 检测方法
含量测定方法 照高效液相色谱法 （中国药典 2005年版一部附录 VI D) 测定； 色谱条件与系统适应性试验 以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 52 :48 为流动相； 蒸发光散射检测器检测； 理论板数按羟基积雪草苷峰计算应不低于 2000; 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的羟基积雪草苷对照品适量， 精密称定， 加甲 醇制成每 lml含 0. 6mg的溶液， 即得；
供试品溶液的制备 取实施例 1的贴片剂 30片， 精密称定， 研细， 取约 0. 5g, 精 密称定， 精密加入无水乙醇 25ml， 称定重量； 功率 250W, 频率 40kHz下超声处理 45分 钟， 放冷， 再称定重量， 用无水乙醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过； 取续滤液， 即得； 测定法 分别精密吸取对照品溶液 3 μ 1、 ΙΟ μ Ι, 供试品溶液 5~10 μ 1， 注入液相 色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计算， 即得；
贴片每片含积雪草以羟基积雪草苷 （C48H7802。） 计， 不得少于 1.0mg。
实施例 13 检测方法
鉴别方法：
(1)取实施例 1的贴片剂 15片， 研细， 加水 15ral， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml, 即生成白色沉淀， 此沉淀在盐酸中不溶解。
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 lml含 0.5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法跗录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5〜10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已垸- 醋酸乙酯 17:3为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5%磷钼酸乙醇溶液， 于 105°C加热 5 分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0.25g， 加无水乙醇 5ml，超声处理 15rain， 滤过， 滤液作为 对照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0.5mg 的溶液， 作为对照 品溶液; 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶 液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一浓 氨试液 12:6:3:3:1为展开剂， 置氨蒸气饱和的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置 365ΠΠ1 紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相 同的颜色荧光斑点。
实施例 14 检测方法 .
(1) 取功劳木对照药材 0.25g， 加无水乙醇 5ml,超声处理 15min， 滤过， 滤液作为 对照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0.5mg 的溶液， 作为对照 品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶 液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一浓 氨试液 12:6:3:3:1为展开剂， 置氨蒸气饱和的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置 365ΓΜ 紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相 同的颜色荧光斑点；
(2) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成每 lml各含 0.5mg 的混合溶液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品 溶液及上述对照品溶液各 5〜10μΓ, 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯甲垸一甲醇 一水 7:3:0.5为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙醇溶液， 于 105°C加热至 斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同顔色的斑点。

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种治疗口腔溃疡的药物组合物， 其特征在于该组合物的原料药组成为- 西瓜霜 0. 5-5重量份 冰片 0. 5-5重量份
积雪草 50-500重量份 功劳木 50-500重量份。
2、 如权利要求 1所述的药物组合物， 其特征在于该组合物的原料药组成为： 西瓜霜 1-3重量份、 冰片 1-3重量份、 积雪草 150- 200重量份、 功劳木 150- 200重量 份； 或西瓜霜 2-4重量份、冰片 2- 4重量份、积雪草 250-450重量份、 功劳木 250- 400 重量份。
3、 如权利要求 1所述的药物组合物， 其特征在于该组合物的原料药组成为： 西瓜霜 3重量份、冰片 3重量份、积雪草 300重量份、功劳木 300重量份；或西瓜霜 1. 5 重量份、 冰片 4. 5重量份、 积雪草 150重量份、 功劳木 450重量份； 或西瓜霜 4. 5重 量份、 冰片 1. 5重量份、 积雪草 450重量份、 功劳木 150重量份； 或西瓜霜 2. 5重量 份、 冰片 3重量份、 积雪草 160重量份、 功劳木 190重量份； 或西瓜霜 4重量份、 冰 片 3重量份、 积雪草 260重量份、 功劳木 380重量份。
4、 如权利要求 1-3之一所述的药物组合物， 其特征在于该组合物按照常规工艺加入 常规辅料制成内服制剂， 包括片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 口服液、 糖浆或缓 释片剂、 缓释胶囊或缓释滴丸； 或按照常规工艺加入常规辅料制成外用制剂， 包括贴片、 气雾剂、 擦剂或漱口液。 -
5、 如权利要求 1-3之一所述的药物组合物， 其特征在于该组合物按照常规工艺加入 常规辅料制成临床接受的缓释片剂、 缓释胶囊或缓释滴丸。
6、 如权利要求 1-3之一所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于该方法为： 将积 雪草加水煎煮 1-3次， 每次加 4-12重量倍水， 每次煎煮 0. 5- 2小时， 煎液滤过， 离心， 滤 液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 2-6重量倍碱性乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上 洗脱液， 再相继用 2- 6重量倍乙醇和 0. 5-1. 5重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓 缩至 60Ό时相对密度为 1. l(Tl. 30， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 1-4次， 每 次加 4-10重量倍水， 每次 0. 5- 2小时， 滤过， 浓缩至 60Ό时相对密度为 1. 10^1. 30, 加浓 乙醇至含醇量达 60%， 搅匀， 静置 Γ12小时， 离心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓縮至 60°C时相对密度为 1. 03^1. 10, 加入盐酸使浓度达到 1 %， 过滤， 滤液继续浓缩至 6CTC 时相对密度为 1. 1CT1. 30的浸膏， 备用， 浸膏与上述积雪草细粉、 西瓜霜和冰片混匀， 按 照常规工艺加入常规辅料制成内服制剂， 包括片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 口 服液、 糖浆或缓释片剂、 缓释胶囊或缓释滴丸； 或按照常规工艺加入常规辅料制成外用 制剂， 包括贴片、 气雾剂、 擦剂或漱口液。
7、 如权利要求 6所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于该方法为： 将积雪草加 水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎煮 1小时， 煎液 滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠的 20 %乙醇溶 液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗 脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60Ό时相对密度为 1. 14〜1. 18， 备用； 将功劳木煎 煮 3次， 每次加 6重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 12~1. 16 的浸膏， 加 85 %乙醇至含醇量达 60%， 搅勾， 静置 8小时， 离心， 得醇沉上清液， 回收 乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 05~1. 07， 加入盐酸使浓度达到 1 %， 过滤， 滤液继续 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 13~1. 17的浸膏， 备用； 上述浸膏与西瓜霜、 冰片混匀； 按 照常规工艺加入常规辅料制成内服制剂， 包括片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 口 服液、 糖浆或缓释片剂、 缓释胶囊或缓释滴丸； 或按照常规工艺加入常规辅料制成外用 制剂， 包括贴片、 气雾剂、 擦剂或漱口液。
8、 如权利要求 6所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于该方法为： 将积雪草加 水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎煮 1小时， 煎液 滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠的 20%乙醇溶 液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60%乙醇和 1重量倍水洗 脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60°C时相对密度为 1. 1Γ1. 18， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每次加 6重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩至 60°C时相对 密度为 1. 12〜1. 16， 加 85%乙醇至含醇量达 60 %， 搅匀， 静置 8小时， 离心， 得醇沉上 清液，回收乙醇，浓缩至 60°C时相对密度为 1. 05~1. 07，加入盐酸使浓度达到 1 %，过滤， 滤液继续浓缩至 60Ό时相对密度为 1. 13〜1. 17， 干燥， 粉碎成细粉与上述积雪草细粉和 西瓜霜混匀， 加入糊精 30重量份， 混匀， 制成颗粒， 冷风干燥至常温， 用 2重量倍的乙 醇溶解冰片后， 在颗粒中喷入冰片乙醇溶液， 再加入卡波姆 4-14 重量份、 三氯蔗糖 0. 5-1. 5重量份、硬脂酸镁 0. 5-1. 5重量份与滑石粉 1-3重量份混匀， 压制成片剂， 单面 喷涂疏水薄膜衣， 制成单向释放的缓控释制剂。
9、 如权利要求 8所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于该方法为：
将积雪草加水煎煮 2次， 第 1次加 8重量倍水煎煮 1小时， 第 2次加 6重量倍水煎煮 1 小时， 煎液滤过， 离心， 滤液过苯乙烯型大孔吸附树脂， 用 4重量倍含 1 %氢氧化钠的 20%乙醇溶液洗脱， 水洗脱至中性， 弃去以上洗脱液， 再相继用 4重量倍 60 %乙醇和 1 重量倍水洗脱并收集， 收集液回收乙醇， 浓缩至 60Ό时相对密度为 1.14〜1.18， 干燥， 粉碎成细粉， 备用； 将功劳木煎煮 3次， 每欠加 6重量倍水， 每次 1小时， 滤过， 浓缩 至 60°C时相对密度为 1.12〜1.16， 加 85%乙醇至含醇量达 60%， 搅勾， 静置 8小时， 离 心， 得醇沉上清液， 回收乙醇， 浓縮至 60Ό时相对密度为 1.05〜1.07， 加入盐酸使浓度 达到 1%, 过滤， 滤液继续浓缩至 60Ό时相对密度为 1.13〜1.17， 千燥， 粉碎成细粉与上 述积雪草细粉和西瓜霜混匀， 加入糊精 30重量份， 混匀， 制成颗粒， 冷风干燥至常温， 用 2重量倍的乙醇溶解冰片后， 在颗粒中喷入冰片乙醇溶液， 再加入卡波姆 9重量份、 三氯蔗糖 1重量份、 硬脂酸镁 1重量份与滑石粉 2重量份混匀， 压制成片剂， 单面喷涂 疏水薄膜衣， 制成生物粘贴片剂。
10、 如权利要求 1-3之一所述的药物组合物外用制剂的检测方法， 其特征在于该检 测方法包括如下鉴别方法或含量测定方法中的一种或几种- 鉴别方法：
(1)取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 15片的相当生药量相同的制剂量， 研细， 加水 15ml， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml， 即生成白色沉淀， 此沉淀在盐 酸中不溶解；
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 lml含 0.5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5〜10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已垸- 醋酸乙酯 8-26: 1.5-4.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%磷钼酸乙醇溶液，于 80-120 °C加热 3-7分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0.25g， 加无水乙醇 5ml，超声处理 7-23min， 滤过， 滤液作 为对照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0.5mg 的溶液， 作为对 照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品 溶液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一 浓氨试液 6-18:3-9: 1.5- 4.5:1.5- 4.5:0.5- 1.5为展开剂， 置氨蒸气饱和的展开缸内， 展 开， 取出， 晾干， 置 365nm紫外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照 品色谱相应的位置上， 显相同的颜色荧光斑点；
(4) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品， 加甲醇制成每 lml各含 0.5mg 的混合溶 液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供 试品溶液及上述对照品溶液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯甲烷一 甲醇一水 4- 10:1.5- 4.5:0.3- 0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液， 于 80-120°C加热至斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相 同顔色的斑点；
含量测定 照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适应性试验 以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂； 以甲醇-水 26 - 78 :24- 72为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按羟基积雪草苷峰计算应不低 于 2000;
对照品溶液的制备 取干燥至恒重的羟基积雪草苷对照品适量， 精密称定， 加 甲醇制成每 lml含 0. 6mg的溶液， 即得；
供试品溶液的制备 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 30片的相当生药 量相同的制剂量， 精密称定， 研细， 取 0. 5g， 精密称定， 精密加入无水乙醇 25ml， 称定 重量； 功率 250W, 频率 40kHz下超声处理 30-60分钟， 放冷， 再称定重量， 用无水乙醇 补足减失的重量， 摇匀， 滤过； 取续滤液， 即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液 3 μ 1、 ΙΟ μ Ι, 供试品溶液 5〜10 μ 1， 注入液相 色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计算， 即得；
本药物组合物外制剂中含积雪草以羟基积雪草苷（C48H7802。）计， 不得少于 1. 0mg， 所 述外用制剂中指所含相当生药量与贴片每片的相当生药量相同。
11、 如权利要求 10所述的药物组合物的检测方法， 其特征在于该检测方法包括如下 鉴别方法或含量测定方法中的一种或几种：
鉴别方法-
(1) 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 15片的相当生药量相同的制剂量， 研细， 加水 15ml， 摇匀， 滤过， 滤液加氯化钡试液 lml， 即生成白色沉淀， 此沉淀在盐 酸中不溶解；
(2) 取冰片对照品， 加无水乙醇制成每 lml含 0. 5mg的溶液， 作为对照品溶液； 照 薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品溶液及上述对照品溶 液各 5〜10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上， 以环已烷- 醋酸乙酯 17:3为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5%磷钼酸乙醇溶液， 于 105'C加热 5 分钟； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
(3) 取功劳木对照药材 0. 25g， 加无水乙醇 5ml,超声处理 15min， 滤过， 滤液作为对 照药材溶液； 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每 lml含 0. 5mg 的溶液， 作为对照品 溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶液 各 5〜10 μ 1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一浓氨 试液 12:6:3:3:1为展开剂， 置氨蒸气饱和的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置 365nm紫 外光灯下检视； 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同 的颜色荧光斑点；
(4) 取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成每 1ml各含 0.5mg 的混合溶液， 作为对照品溶液； 照薄层色谱法附录 VI B试验， 吸取用含量测定中的同法制备的供试品 溶液及上述对照品溶液各 5〜10μ1， 分别点于同一硅胶 G薄层板上， 以三氯甲垸一甲醇 一水 7:3:0.5为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙醇溶液， 于 105°C加热至 斑点显色清晰； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同顏色的斑点； 含量测定方法 照高效液相色谱法 （中国药典 2005年版一部附录 VI D) 测定； 色谱条件与系统适应性试验 以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂； 以甲醇-水 52： 48为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按羟基积雪草苷峰计算应不低于 2000； 对照品溶液的制备 取千燥至恒重的羟基积雪草苷对照品适量， 精密称定， 加 甲醇制成每 1ml含 0.6mg的溶液， 即得；
供试品溶液的制备 取外用制剂， 取量为所含相当生药量与贴片 30片的相当生药 量相同的制剂量， 精密称定， 研细， 取 0.5g， 精密称定， 精密加入无水乙醇 25ml， 称定 重量； 功率 250W, 频率 40kHz下超声处理 45分钟， 放冷， 再称定重量， 用无水乙醇补足 减失的重量， 摇匀， 滤过； 取续滤液， 即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液 3 μ1、 ΙΟμΙ, 供试品溶液 5~10μ1， 注入液相 色谱仪， 测定， 用外标两点法对数方程计算， 即得；
本药物组合物外用制剂中含积雪草以羟基积雪草苷 （C48H7802。） 计， 不得少于 1.0mg， 所述外用制剂中指所含相当生药量与贴片每片的相当生药量相同。
12、 如权利要求 1-3之一所述的药物组合物在制备治疗口腔溃疡的药物中的应用。
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