WO2011098035A1 - 一种青藤碱衍生物、合成方法及其用途 - Google Patents

一种青藤碱衍生物、合成方法及其用途 Download PDF

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sinomenine
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姚祝军
孙兵
楼杨通
杨震宇
陈爱中
马钊
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中国科学院上海有机化学研究所
中国科学院上海生命科学研究院
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a sinomenine derivative, a synthesis method and a use thereof, and the sinomenine derivative comprises an oxidized derivative, a sinomenine C-10 substituted derivative.
  • the sinomenine derivative is obtained by a method such as oxidation of sinomenine and the like, oxidation de-aromatization, conjugate addition aromatization to introduce a C-10 substituent, and the like.
  • the present invention also relates to the properties and uses of these sinomenine derivatives as tumor necrosis factor alpha inhibitors in the treatment or prevention of immune-like diseases in mammals and disorders associated with abnormal tumor necrosis factor alpha activity. Background technique
  • Qingfeng vine is a common Chinese medicine.
  • the name "Qingfeng vine” was first seen in the Song Dynasty.
  • the "Graphic Scriptures” and “Compendium of Materia Medica” have detailed records.
  • Qingfeng cane gum and roots contain sinomenine (sinomenine
  • the structure of sinomenine is similar to that of morphine. It consists of a hydrogen phenanthrene nucleus and an ethylamine bridge. It contains four rings and three chiral centers. The compound numbers are shown in the figure.
  • Sinomenine has anti-inflammatory, immunosuppressive, analgesic, antihypertensive, anti-arrhythmia and other pharmacological activities, clinically used to treat rheumatoid arthritis, arrhythmia and other diseases.
  • Therapeutic rheumatoid arthritis is the most accurate clinical application of sinomenine. At present, there are preparations such as Zhengqingfengtongning tablets, sinomenine sustained-release tablets, sinomenine hydrochloride injection, and scutellaria tablets for clinical use.
  • the main routes of administration are oral, intramuscular, acupoint injection, iontophoresis, etc. .
  • Rheumatoid arthritis is a chronic systemic autoimmune disease characterized by joint synovitis.
  • the drugs used for the treatment of rheumatoid arthritis mainly include non-anti-inflammatory drugs represented by aspirin, corticosteroids, disease modulators such as gold preparations ( ⁇ ), penicillamine, chloroquine, levorotatory Imidazole, immunosuppressive agents (such as methotrexate (MTX), Chinese medicine tripterygium wilfordii, Kunming mountain sea bream, sinomenine, etc.) sinomenine is structurally unique compared to other drugs, compared to current non-inflammatory drugs The research has been relatively mature, and the research on sinomenine is far from deep enough, and it has unique value for its research.
  • non-anti-inflammatory drugs represented by aspirin, corticosteroids, disease modulators such as gold preparations ( ⁇ ), penicillamine, chloroquine, levorotatory Imidazole, immunosuppressive agents (such as methotrexate (MTX), Chinese medicine tripterygium wilfordii, Kunming mountain sea
  • sinomenine itself has a short biological half-life, large dosage, and clinical treatment generally requires long-term oral administration; sinomenine has a strong release of histamine, easy Causes rash, and clinical side also has side effects such as gastrointestinal side effects; and sinomenine itself is not stable enough for light and heat, and is easy to decompose.
  • the phenolic hydroxyl group is present in the sinomenine structure and is easily oxidized by the oxidizing agent.
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor alpha
  • TNF-a cells are widely available, including various immune cells, endothelial cells, fibroblasts, epidermal cells, keratinocytes, smooth muscle cells, astrocytes, osteoblasts, and the like.
  • the macrophages contained in the heart are a rich source of the inflammatory cytokine TNF-a.
  • the human TNF-a gene encodes a precursor protein whose signal peptide immobilizes the precursor protein on the cell membrane to become an active transmembrane interferon. The signal peptide was removed by enzymatic cleavage to produce secreted TNF-a with a molecular mass of 17KD.
  • the NF- ⁇ B and p38_MAPK signaling pathways are involved in TNF-a expression.
  • TNF-a has a wide range of biological activities, such as: participation in inflammatory and immune responses, anti-tumor, involvement in pathological processes such as endotoxic shock, causing cachexia, etc., which have a dual role: on the one hand in the body's immune regulation, body physiology Function and anti-infection play an important role. On the other hand, if sustained release or excessive production will cause fever, shock, cachexia, etc. At the same time, TNF-a can further induce the production of cytokines such as Baijie-6, Baijie-8 and Baiji-10. These pro-inflammatory cytokines are involved in acute reactions, fever reactions, and release of chemotactic peptides. Activation of endothelial cells results in increased vascular permeability.
  • TNF-a is a pro-inflammatory cytokine that is central to the pathogenesis of rheumatoid arthritis and is involved in the development of rheumatoid arthritis.
  • TNF-a is mainly produced by macrophages and can induce the production of other inflammatory factors such as interleukin-1 and interleukin-6, activate adhesion factors, promote the production of metalloproteinases, inhibit the synthesis of cartilage proteoglycans, and cause bone and Destruction of cartilage.
  • anti-TNF-a antibody and soluble TNF-a receptor fusion protein are mainly used to treat antibody rheumatoid arthritis, and good results have been achieved. Their anti-inflammatory and immunosuppressive activities can be effectively evaluated by measuring the inhibition rate of the compound against tumor necrosis factor a (TNF-a) in vitro. Summary of the invention
  • a first object of the present invention is to provide several sinomenine oxidation products and derivatives based thereon.
  • a second object of the present invention is to provide a process for the preparation of the above sinomenine derivatives.
  • a third object of the present invention is to provide a property and use of the above sinomenine derivative as a tumor necrosis factor a inhibitor in the treatment or prevention of an immune-like disease in a mammal and a disorder associated with abnormal tumor necrosis factor a activity.
  • a fourth object of the present invention is to provide a method for treating an immune-like disease of a subject and a disorder associated with abnormal tumor necrosis factor a activity, the method comprising administering a sinomenine derivative of the present invention to a subject in need of such treatment .
  • R H or R 10 CO
  • R 2 H or R 10 CO
  • R 3 R u O, R 12 S, R 13 R 14 N, OH, R o
  • R 10 COO or 15 ⁇ ⁇ ;
  • R4 H or R 16 R 17 R 18 Si;
  • R 5 , R6 together form oxygen a group;
  • R 7 H, halogen or hydroxymethyl;
  • R 8 hydroxy or H;
  • R 9 hydroxy or H; or
  • R 8 , R 9 taken together to form an oxo group; . ⁇ .
  • Hydrocarbyl group (preferably C 6 hydrocarbon group, more preferably C 4 hydrocarbon group, still preferably d- 6 alkyl group, more preferably C 4 alkyl group;);
  • Rn Cw Q hydrocarbon group;
  • R 12 Cw Q hydrocarbon group, with one to three a substituted or unsubstituted five- or six-membered aromatic ring, a five- or six-membered nitrogen-containing heterocyclic ring having one to three substituents or without a substituent, having one to three substituents or a five- or six-membered oxygen-containing heterocyclic ring having no substituent, or a five- or six-membered sulfur-containing heterocyclic ring having one to three substituents or not, the substituent being Cw Q Hydrocarbyl, halogen, alkyl CM, CM fluoroalkyl, nitro, cyano, methoxy or hydroxy;
  • R 13 hydrocarbyl, 5- or 6-membered with one to three substituents or
  • the five- or six-membered aromatic ring is a cyclopentenyl group or a phenyl group
  • the five- or six-membered nitrogen-containing heterocyclic ring is a pyrrolyl group, an imidazolyl group, a pyrazolyl group or a pyridyl group
  • the five- or six-membered oxygen-containing heterocyclic ring is a furyl group or a pyranyl group
  • the five- or six-membered sulfur-containing heterocyclic ring is a thienyl group.
  • Ri H or R 1 () CO ;
  • R 2 H or R 1 () CO ;
  • R 3 R u O, R 12 S, Ri 3 Ri 4 N,
  • R 10 COO or 15 ⁇ ⁇ ;
  • R4 H or R 16 R 17 R 18 Si;
  • R 9 hydroxy or H; or
  • Rn C ⁇ alkyl
  • R 12 Cw alkyl, phenyl with one to three substituents or unsubstituted, imidazolyl with one to three substituents or unsubstituted, a furyl or pyranyl group having one to three substituents or not having a substituent, or a thienyl group having one to three substituents or not having a substituent, the substituent being a halogen, a C 4 alkyl group, C ⁇ 4 fluoroalkyl, nitro, cyano, d.
  • Rl5 H or Ci 6 yard
  • Rl6 Ci 6 yard or base
  • Rl7 Ci 6 yard or base
  • 18 . 16 6 base or phenyl.
  • Ri H or R 1 () CO ;
  • R 2 H or R 1 () CO ;
  • R 3 R u O, R 12 S, Ri 3 Ri 4 N,
  • Rl8 CBu 4 yard base.
  • Cw alkyl preferably d- 4 alkyl, R 2 .
  • Representing H or a substituent selected from the group consisting of halogen, C ⁇ 4 alkyl, C ⁇ 4 fluoroalkyl, nitro, cyano, d- 4 alkoxy or hydroxy; n l, 2, or 3.
  • the sinomenine derivative has the following structural formula:
  • a method for preparing a sinomenine oxidized derivative according to the invention which can be carried out according to the following steps 1), 1) to 2), 3), 3) to 4), 3) and 5) , 6) or 6) -7) A total of seven steps are obtained:
  • sinomenine or its hydrochloride is reacted with iodobenzene diacetate for 0.5 4 hours to obtain compound Cl, the molar ratio of sinomenine or its hydrochloride to iodobenzene diacetate is 1: 1-2;
  • R 13 R 14 H, H 2 0, Rl5N ⁇ ⁇ , (R 1 () CO) 2 0 or R 16 R 17 R 18 SiX molar ratio is 1: 1-10;
  • sinomenine or its derivatives in an organic solvent, ice water bath ⁇ at room temperature, in acid chloride or anhydride The compound C9 is obtained in 0.524 hours, and the molar ratio of the sinomenine or its derivative to the acid chloride or the acid anhydride is 1:1-5; the compound C9 is reacted with the chromium trioxide in the aqueous sulfuric acid solution at room temperature 1 ⁇ 24
  • the compound C10 is obtained in an hour, the molar ratio of C9 to chromium trioxide is 1: 1-4;
  • Compound C10 is obtained in an organic solvent, in an ice water bath or at room temperature by sodium borohydride for 1 to 24 hours to obtain a compound C11 having a molar ratio of compound C10 to sodium borohydride of 1:1-4; or in an ice water bath. Or a normal temperature, a lithium hydroxide aqueous solution is hydrolyzed for 0.5 24 hours to obtain a compound C11, the compound C10 and lithium hydroxide molar ratio is 1: 1-10;
  • the organic solvents referred to above include, but are not limited to, methanol, ethanol, n-propanol, n-butanol, isopropanol, dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane, carbon tetrachloride, diethyl ether, tetrahydrofuran, Benzene, toluene, xylene, acetone, butanone, acetonitrile, hydrazine, hydrazine-dimethylformamide or dimethyl sulfoxide.
  • the compound C2-2 is obtained for 0.5 24 hours, the molar ratio of the sinomenine or its derivative to the acid chloride or acid anhydride is 1: 1-5;
  • C2-1 and C2-2 represent R 1() CO, R 2 represents R 1() CO ; R 12 represents U, R 2 .
  • the composition further contains other therapeutic agents for immune diseases.
  • the therapeutic agent for the other immune-like disease is selected from the group consisting of a non-anti-inflammatory drug, a glucocorticoid, and an immunosuppressive agent.
  • the sinomenine derivative for the preparation of a medicament for the treatment of an immune disorder.
  • the immune-related diseases include inflammatory bowel disease, inflammation, rheumatoid arthritis, juvenile rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, osteoarthritis, refractory rheumatoid joints Inflammation, chronic non-rheumatoid arthritis, Crohn's disease, asthma.
  • a method of treating an immune-like disease in a subject comprising administering a sinomenine derivative of the invention to a subject in need of such treatment.
  • a sinomenine derivative for use in the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of a condition associated with abnormal tumor necrosis factor alpha activity in a mammal.
  • disorders associated with abnormal T F- ⁇ activity include: inflammatory bowel disease, inflammation, rheumatoid arthritis, juvenile rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, osteoarthritis , refractory rheumatoid arthritis, chronic non-rheumatoid arthritis, osteoporosis/bone resorption, Crohn's disease, septic shock, endotoxin shock, atherosclerosis, ischemia-reperfusion injury, coronary heart disease , vasculitis, amyloidosis, multiple sclerosis, sepsis, chronic recurrent uveitis, hepatitis C virus infection, malaria, ulcerative colitis, cachexia, psoriasis, Wegenrer's granulomatosis, meningitis, pulp Cell tumor, endometriosis, Behcet's disease, AIDS, HIV infection, autoimmune disease, immunodeficiency, general susceptibility to immunodeficiency
  • a method of treating or preventing a condition associated with abnormal tumor necrosis factor a activity in a mammal comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of a sinomenine derivative of the invention, eg, a preferred embodiment provides One or more sinomenine derivatives, preferably in the form of a pharmaceutical composition.
  • T Fa tumor necrosis factor a
  • the invention utilizes the phenolic hydroxyl group which is easily oxidized in the sinomenine structure, and synthesizes a series of sinomenine derivatives by oxidation or the like, and has the unique method and novel structure.
  • the activity of sinomenine derivatives was evaluated using an in vitro TNF-a inhibition assay. The results showed that most of the compounds exhibited some anti-inflammatory activity, some The compound exhibits better activity than sinomenine and is expected to be used in the treatment of immune diseases such as rheumatoid arthritis (RA).
  • Other compounds 33, 34, 35 showed a promoting effect of T F- ⁇ and deserved further study.
  • Fig. 1 shows the results of evaluation of anti-inflammatory and immunosuppressive activities of some of the compounds involved in the present invention using an in vitro tumor necrosis factor a (TNF-a) inhibition assay.
  • the abscissa is the compound number listed in the corresponding examples, and the ordinate is the TNF-a inhibition rate (IR), and the concentration used is 10 ⁇ .
  • Fig. 2 shows the results of evaluation of anti-inflammatory and immunosuppressive activities of preferred compounds of the present invention using an in vitro tumor necrosis factor a (TNF-a) inhibition assay.
  • the abscissa is the compound number listed in the corresponding examples, and the ordinate is the TNF-a inhibition rate, and the concentration used is 10 ⁇ .
  • Figure 3 is a graph showing the results of anti-inflammatory activity of representative compound 1 in a preferred compound of the present invention in an experimental LPS-induced endotoxin shock model.
  • the abscissa is the compound number listed in the respective examples or the mass of the compound 1 per kilogram of body weight of the mouse, and the ordinate is the concentration of TNF-a.
  • TNF-a exerts its effects primarily through two T F receptors, T F receptor 1 (renamed CD 120a) and TNF receptor ⁇ (renamed CD 120b). Most of the T F- ⁇ action is transmitted through CD120a, which is inducible and preferentially reacts with membrane-bound TNF-a (Tartaglia et al, 1992, Vandenabeele et al, 1995, Grell et al, 1995).
  • T F- ⁇ The physiological function of T F- ⁇ has been well studied and it has been described that organic compounds that interfere with TNF-a activity, such as inhibition of TNF-a activity, are useful in the treatment of many diseases (conditions).
  • Tumor necrosis factor-a is a major cytokine released by mononuclear phagocytes in response to immune stimuli.
  • Administration of TNF a to animals and humans can cause inflammation, fever, cardiovascular dysfunction, hemorrhage, coagulation, and a series of acute reactions similar to acute infections and shock states. Excessive or uncontrolled T F is produced in or in animals.
  • T F- ⁇ also plays an important role in bone resorption disorders including arthritis (Betolinni et al., Nature 319, 516-8 (1986)).
  • TNF alpha can stimulate stimulators (Osteoclast) is produced and activated to stimulate bone resorption and inhibit bone formation.
  • T F- ⁇ the hypercalcemia associated with malignant tumors released by tumors and host tissues
  • US Calci. Tissue Int. 46 (Suppl.), S3-10 (1990)
  • the immune response is closely related to the increase in serum T F- ⁇ concentration in patients (Holler et al., Blood,
  • T F- ⁇ Fatal hyperacute neurological syndrome Brainstem malaria is also associated with high levels of T F- ⁇ in the blood, which is the most dangerous form of malaria.
  • serum T F-a levels are directly related to the condition and often occur in patients with acute malaria attacks (Grau et al., N. Engl. J. Med. 320 (24),
  • T F- ⁇ also plays an important role in chronic pneumonia. Storage of silicon-containing particles in the lungs can cause silicosis. Silicon lung is progressive respiratory failure caused by fibrosis of lung tissue. In animal pathology models, antibodies to TNF-a completely block the mouse lung fibrosis induced by silica dust (Pignet et al., Nature, 344:245-7 (1990)). Animal experiments have also demonstrated that T F- ⁇ is abnormally high in animal serum of pulmonary fibrosis caused by silica dust or asbestos ash (Bissonnette et al., Inflammation 13(3), 329-339 (1989)).
  • TNF-a The cause of inflammation in patients with reperfusion injury (Reperfhsion Injury) may also be due to abnormal levels of TNF-a in patients, and TNF-a is considered to be the chief culprit in tissue damage caused by ischemia (Uadder et al, PNAS 87). , 2643-6 (1990)).
  • T F- ⁇ can initiate replication of retroviruses including HIV-1 (Duh et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 86, 5974-8 (1989)]. HIV enters T-cells. T-cells need to be activated before, and once the activated sputum cells are infected with the HIV virus, these sputum cells must remain activated to allow the HIV virus gene to be successfully expressed and/or allow the HIV virus to replicate smoothly. In particular, T F- ⁇ plays an important role in the expression of HIV-regulated HIV protein or in viral replication. Therefore, inhibition of TNF-a production may inhibit the replication of H-Vi virus in T-cells. (Poll et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 87, 782-5 (1990); Monto et al., Blood 79, 2670 (1990): Poll et al, AIDS Re s. Human Retrovirus, 191 I. 197 (1992)].)
  • cAMP regulates many types of cellular functions, such as inflammatory reactions, including asthma and inflammation [Lome and Cheng, Drugs of the futune, 17 (9), 799-807, 1992).
  • TNF-a plays an important role in the process of liver necrosis in patients with viral hepatitis (Yu Yanyan et al., Chinese Journal of Internal Medicine 1996, 35: 28-31), suggesting that TNF-a inhibitors are chronic. It is of great significance in the treatment of liver disease and liver damage.
  • Li Yingxun et al found that the levels of monocyte synthesis and secretion of tumor necrosis factor in peripheral blood of patients with chronic liver disease were significantly increased, and induced the secretion of other cytokines (such as Il- ⁇ , 11-6 and 11-8), and participated in hepatocytes. Injury process (Journal of Qiqihar Medical College, 22 (10): 1119-1120 2001). Their results are consistent with the findings of Yoshioka et al. (Hepatology, 1989, 10: 769-777) and Wang Xin et al. (Chinese Journal of Infectious Diseases, 1997, 15 (2): 85-88).
  • T F- ⁇ inhibitors can significantly inhibit the secretion of T Fa from peripheral blood mononuclear cells in patients with hepatitis, thus laying a molecular pathological basis for the treatment of hepatitis, cirrhosis and liver cancer with TNF-a inhibitors. .
  • T F Promote the expression of cell adhesion molecules by promoting the synthesis and release of inflammatory cytokines (Abboud HE Kidney Int. 1993; 43: 252-267) (Egido J. et al, Kidney Int. 1993; 43 (suppl 39): 59-64j, and the synthesis and release of prostaglandin Gi (PGEz) and platelet activating factor (PAF) (Ca bis usi G. et al., Kidney Int., 43 (suppl 39): 32-36), Inflammatory cells accumulate and adhere, microvascular dilatation and permeability increase, induce fever, neutrophil increase and hemodynamic changes and other inflammatory reactions, causing kidney cell damage. Many studies suggest that T F- ⁇ It plays an important role in the onset and deterioration of nephritis.
  • TNF-a participates in the regulation of immune function by activating macrophages, immunostimulating T lymphocyte proliferation, regulating B lymphocyte differentiation and enhancing the cytotoxicity of natural killer cells (NK).
  • NK natural killer cells
  • Toxic shock Hemodynamic Shock, Sepsis Syndrom, Post Ischemic Reperfusion Injury (Malaria;), Mycobacterial Infection; Meningitis ;), Psoriasis Congestive Heart Failure Fibrotic disease cachexia (Cachexia;), transplant immunological rejection, cancer, autoimmune disease, AIDS chance of disease Infection (Opportunisticulation in AIDS) Rheumatoid arthritis (RA) Hepatitis, nephritis, rheumatoid spondylitis (Rheumatoid Spondylitis), etc.
  • RA Rheumatoid arthritis
  • RA Hepatitis, nephritis, rheumatoid spondylitis
  • Inflammatory cytokines such as TF are involved in the pathogenesis of psoriasis (B onifati and Ameglio, Int. J. Derm. (International Journal of Dermatology) 38: 241-251, 1999).
  • Leonardi et al (New Eng. J. Med. 349: 2014-2022, 2003) found that treatment with the TF antagonist etanercept resulted in a significant reduction in the severity of psoriasis during the 24 week treatment period. Boyman et al ((J. Exp. Med.
  • T cell proliferation and subsequent disease development are dependent on TF production and can be inhibited by TF antibodies or soluble receptors.
  • Boyman et al. concluded that TF-dependent activation of colonized T cells is responsible for the development of silver swarf Diseased lesions are necessary and sufficient.
  • TNF secretion in TB patients in Kenya were evaluated. The results show that due to the major genes, there is a strong genetic influence on TF expression in TB, and there may be heterozygous advantages. The effect of the shared environment on TF expression is The smallest. Stein et al.; TNF is the intrinsic phenotype of TB, which increases the ability to detect disease-susceptible loci.
  • S Ps Mononucleotide polymorphisms in the regulatory regions of cytokine genes are associated with sensitivity to many complex diseases.
  • TNF is a pro-inflammatory cytokine that provides a host's rapid defense against infection, but in excess It is fatal because TF is used to target multiple pathogens, each involving different forms of risk and benefit, so it is expected that this will promote the diversity of genetic elements that control TF production.
  • Hemnann et al. (Europ. J. Clin. Invest. 28: 59-66, 1998) used PCR-SSCP and sequencing to screen for the complete coding region of the T F- ⁇ gene and 1,053 by upstream of the transcription start site for polymorphism the study.
  • Five polymorphisms were identified: four at positions 857, -851, -308, and 238 in the upstream region from the first transcriptional nucleotide, and one at the +691 position in the untranslated region.
  • Three of the SNPs at nucleotides 238, -308, and -376 for the TF transcription initiation site replaced guanine with adenine. Knight et al. (Nature Genet.
  • allelic types are a 23861-238A, -3086/-308A, and a 3766/-376A. They pointed out changes in the T F- ⁇ promoter region with respect to the following Sensitivity-related: cerebral malaria (McGuire et al, Nature. 371: 508-511, 1994), mucosal cutaneous leishmaniasis (Cabrera et al, J. Exp. Med. 182: 1259-1264, 1995), meningococcal Death caused by disease (Nadel et al, J. Infect, Dis. 174: 878-880, 1996), leprosy (Roy et al., J. Infect. Dis.
  • Zinman et al. ((I. Clin. Endocr. Metab. 84: 272-278, 1999) studied T F- ⁇ and is associated with insulin resistance and diabetes in isolated indigenous Canadian populations with very high rates of NIDDM. The relationship between anthropometric and physiological variables. Using the Dynamic Balance Assessment (HOMA) model to assess insulin resistance, they found in TNF-a and fasting insulin, HOMA insulin resistance, waist circumference, fasting glycerol, and systole Moderate but statistically significant association between blood pressure; in all cases, the coefficient for women is stronger than the coefficient for men. The authors conclude that in the same indigenous Canadian population, in glucose Within the tolerance range, circulating TNF-a concentrations were positively correlated with insulin resistance. This data shows the possible role of TNF-a in the pathophysiology of insulin resistance.
  • HOMA Dynamic Balance Assessment
  • Tfa was analyzed in 3 groups of DRB 1 * 1502-DQB 1 *0601 - positively diabetic patients who started ketosis-free and non-insulin dependent for more than 1 year.
  • Group A Includes 11 antibodies against glutamate-free enzymes (GADab-positive patients who developed insulin dependence within 4 years of diabetes onset.
  • Group B included 11 GADab-positive patients who remained insulin-free Dependence exceeded 12 years.
  • Group C included 12 GADab-negative type 2 diabetic patients, and the control group included 18 non-diabetic subjects.
  • DRB 1 * 1502-DQB 1 *0601 Strong association with the T Fa -13 allele
  • DRB 1 * 1502-DQB 1 * 0601 is strongly associated with the T Fa-12 allele in group A patients, but not in group B patients.
  • GADablDRB was diagnosed with type 2 diabetes at the outset.
  • 1 * 1502-DQB 1 *0601 In patients with positive diabetes, T F- ⁇ is associated with a predisposition to insulin-dependent progression, and determining that these patients' TNF-a genotypes may allow for better prediction of their clinical course.
  • TNF-a gene is a altered gene for diabetes
  • Li et al. J Clin. Endocr. Metab. 88: 2767-2774, 2003; studied from patients with type 1 and type 2 diabetes (type 1/2 family). ; or type 2 diabetes patients with a common type 2 diabetes family and T F- ⁇ promoter polymorphisms in type 1 diabetes and control subjects with adult seizures (G at positions 308 and 238)
  • One A substitution is associated with the HLA-DQB 1 genotype.
  • TNF-a (308) AA/AG genotype frequency is increased in adult type 1 patients (55%, 69 out of 126;), but compared with controls (; 33%, 95/284; less than 0.0001 for type 1 P) similar to type 2 patients (35%, 33/93) or common type 2 family (31%, 122 of 395) from the 1/2 family TNF-a (308)
  • TNF- a is unlikely to be the second gene on the short arm of chromosome 6 responsible for altering the phenotype of type 2 diabetic patients from a family with type 1 and type 2 diabetes.
  • TNF-a Since the expression of TNF-a has been reported to increase in the adipose model of obese rodents and obese humans, TNF-a is considered to be a candidate gene for obesity.
  • Norman et al. J Clin. Invest. 96: 158-162, 1995
  • BMI body mass index
  • TNF-a gene polymorphisms studied were equally distributed in patients with androgen excess and controls.
  • carriers with a 308A variant showed increased basal and leuprolide-stimulated serum androgen and 17-methionine levels when considering the patient group and the control group.
  • the pediatric mortality risk score was significantly correlated with IGFBPI, IGFBP3 protease activity, IL6 and TNF-a levels, and total IGF 1 and free IGF 1 levels.
  • GH and IGFBP The level of 1 is extremely increased in non-survivors, while the total and free IGF 1 levels are significantly reduced with high levels of cytokines IL6 and T Fa.
  • the second T F- ⁇ polymorphism described by D'Alfonso and Richiardi also includes G-to- ⁇ conversion at position 238 of the gene.
  • alopecia areata Galbraith and Pandey (Hum. Genet. 96: 433-436, 1995) found that the T1/T2 phenotype was distributed in patients with patchy forms of the disease and patients with systemic ((totalis/universalis) disease There is a distinct T 1 /T2 phenotypic distribution. There is no significant difference in the distribution of the phenotypes for the second system.
  • T F-LT tumor necrosis factor-lymphotoxin
  • T F- ⁇ may be involved in the pathogenesis of ankylosing spondylitis and rheumatoid arthritis.
  • Gorman et al (New Eng. J. Med. 346: 1349-1356, 2002) tested the efficacy of inhibiting T F- ⁇ in the treatment of ankylosing spondylitis. They used etanercept, a chimeric fusion protein of human 75-kD (p75) T FR2 (T FRSF 1 B), which is associated with human IgG 1? . Partially connected. Treatment for 4 months in 40 patients with active inflammatory disease resulted in rapid, significant, and sustained improvement.
  • Winchester et al. (Hum. Genet. 107: 591-596, 2000) studied a 3086-A variant of the TNF-a gene and an insertion/deletion variant of angiotensin converting enzyme (ACE) in two population groups.
  • ACE angiotensin converting enzyme
  • Van Heel et al. (Hum. Molec. Genet. 11: 1281 - 1289, 2002) indicated that TNF expression is increased in inflammatory bowel disease (IBD) and that TF is localized at the IBD3 sensitive locus.
  • IBD inflammatory bowel disease
  • P 0.001 in 587 IBD households.
  • ulcerative colitis and Crohn's disease an additional genetic association between TNF-857C and the IBD subtype was observed, but this phenomenon was only observed in patients who did not carry the normal NOD2 mutation. These data show hereditary concealment. Sexual model.
  • the transcription factor OCT1 binds to T F-857T, but does not bind to T F-857C, and interacts with the pro-inflammatory FKB p65 subunit RELA at adjacent binding sites in vivo and in vitro. The authors speculate that these are in the digestive tract tissue. The interaction of transcription factors with specific alleles of TF may be related to the pathogenesis of IBD.
  • the pharmaceutical composition of the preferred embodiment can be used to treat diseases mediated by T F- ⁇ activity. Also provided are methods of treating a condition mediated by T Fa activity, comprising administering to a subject in need of such treatment a therapeutically effective amount of a compound of a preferred embodiment, for example, in the form of a pharmaceutical composition.
  • Treatment includes treating an existing disease or condition, and preventing (preventing) the disease or condition.
  • Conditions such as diseases, which can be treated with compounds of preferred embodiments, for example by inhibiting or repressing TNF-a activity, include those mediated by TNF-a activity.
  • the condition (disease) includes (chronic) inflammatory diseases, allergic diseases, autoimmune diseases, cardiovascular diseases, neurodegenerative diseases, viral diseases such as retrovirus diseases, cancer, pain, diseases occurring after transplantation.
  • the disease or condition includes rheumatoid arthritis, osteoarthritis, osteoporosis, multiple sclerosis, atherosclerosis, psoriasis, systemic lupus erythematosus (SLE), (acute) kidney Small glomerulonephritis, asthma, such as asthma bronchiectasis, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), respiratory distress syndrome (A1ZDS), inflammatory bowel disease (eg, Crohn's disease), colitis (eg, ulcerative colon Inflammation, sepsis, malaria (eg, cerebral malaria), AmS, neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Gebba's syndrome, graft versus host disease (GvHD), vasculitis: Uveitis, (insulin-dependent) diabetes (eg, diabetes), (adult) (multiple) traumatic consequences (eg organ failure), acute and chronic pain (eg, neuropathic pain, such as primary and secondary inflammation) Dermatitis
  • hydrocarbyl by itself or as part of another substituent denotes a straight chain (ie, unbranched;) or branched, or a cyclic hydrocarbon group, or a combination thereof, which may be sufficiently saturated, Saturated or polyunsaturated, having the specified number of carbon atoms (ie, d-do represents 1-10 carbon atoms).
  • saturated hydrocarbon groups include, but are not limited to, the following groups: methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, t-butyl, isobutyl, sec-butyl, cyclohexyl, (cyclohexyl) Methyl, cyclopropylmethyl, for example, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-octyl homologs and isomers, and the like.
  • unsaturated hydrocarbon group examples include, but are not limited to, vinyl, 2-propenyl, butenyl, 2-isopentenyl, 2-(butadienyl), 2,4-pentadienyl, 3 -(1,4-pentadienyl), ethynyl, 1- and 3-propynyl, 3-butynyl, and higher homologs and isomers.
  • Alkyl means a branched, branched or cyclic saturated hydrocarbon group, and the term includes a linear alkyl group such as methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, fluorene.
  • the term also includes branched chain isomers of straight chain alkyl groups, including but not limited to: -CH (CH 3) 2, -CH (CH 3) (CH 2 C3 ⁇ 4), -CH (CH 2 C3 ⁇ 4) 2, _C (CH 3 ) 3 , _C (CH 2 CH 3 ) 3 , _CH 2 CH (CH 3 ) 2 , _ CH 2 CH (CH 3 ) (CH 2 CH 3 ), _ CH 2 CH (CH 2 CH 3 ) 2 , ⁇ CH 2 C (CH 3 ) 3 , _ CH 2 C (C C3 ⁇ 4) 3 , -CH (CH 3 ) CH (CH 3 ) (CH 2 CH 3 ) , -CH 2 CH 2 CH (CH 3 ) 2 , -CH 2 CH 2 CH (C3 ⁇ 4) (CH 2 C3 ⁇ 4) , — CH2CH2CH (CH2CH3) 2, — CH2CH2CH2
  • cycloalkyl groups such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and cyclooctyl, and these rings may be substituted by the above straight and branched alkyl groups.
  • preferred alkyl groups include straight chain alkyl groups having from 1 to 10 carbon atoms and branched alkyl groups, more preferably C M alkyl groups such as d- 4 alkyl groups.
  • CH fluorinated alkyl refers to a C ⁇ 4 alkyl group contains 1-9 fluorine atoms.
  • alkoxy means “alkyl-0-" wherein alkyl is as defined above.
  • aryl ring refers to a monocyclic and polycyclic carbocyclic aromatic group having 5 to 14 ring carbon atoms, and a carbocyclic aryl group is an aryl group in which all ring atoms in the aromatic ring are carbon. . Examples of the aromatic ring are phenyl, naphthyl and the like.
  • heterocyclyl refers to a C3-C20 cyclic group having 1-3 heteroatoms as ring atoms and the remaining ring atoms being carbon atoms, wherein the heteroatoms are selected from 0, 3 or hetero
  • the ring group includes a nitrogen-containing hetero ring, an oxygen-containing hetero ring, a sulfur-containing hetero ring, and examples of the five- or six-membered nitrogen-containing heterocyclic ring as described herein, such as pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl or pyridyl, pyrimidinyl.
  • examples of the five- or six-membered oxygen-containing heterocyclic ring are a furyl group or a pyranyl group
  • examples of the five- or six-membered sulfur-containing heterocyclic ring are, for example, a thienyl group.
  • oxo refers herein to oxygen in which a double bond is attached to a carbon atom.
  • halogen refers to F, Cl, Br or I.
  • the present invention includes the sinomenine derivative of the present invention and a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Examples of the pharmaceutically acceptable salt include salts of the sinomenine derivative of the present invention with inorganic acids and organic acids, and examples of inorganic acids which may be used include hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, and the like;
  • examples of the organic acid include formic acid, oxalic acid, acetic acid, tartaric acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, and the like, and also include basic amino acids such as arginine.
  • salts to be accepted include a salt of a sinomenine derivative of the present invention and an inorganic base or an organic base, and examples of the inorganic base include an alkali metal hydroxide (for example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, etc.). Alkaline earth metal hydroxides (e.g., calcium hydroxide, magnesium hydroxide, etc.), and aluminum, ammonium hydroxides, and the like.
  • organic base examples include trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, hydrazine, ⁇ '-dibenzylethylenediamine, and the like.
  • the sinomenine derivative of the present invention may include its enantiomers, diastereomers, tautomers and cis/trans conformers. All such isomeric forms are included in the preferred embodiments, including mixtures thereof.
  • the compounds of the preferred embodiments may have chiral centers, for example they may contain asymmetric carbon atoms and may thus be enantiomerically or non-stereospecifically The conformation of the construct and its mixture, for example in the form of a racemate, is present.
  • the asymmetric carbon atom may be in the (R)-, (S)-, or (R,S)-configuration, preferably in the ((R)- or (S)-configuration or may exist as a mixture.
  • the isomer mixture can be separated according to conventional methods for obtaining pure isomers.
  • the compounds of the preferred embodiments may also include tautomers, wherein the tautomers may be present.
  • the crystalline forms of the compounds of the preferred embodiments may exist as polymorphs, which are included in the preferred embodiments.
  • the compounds of some preferred embodiments may also form solvates with water or other organic solvents. The solvates are similarly included within the scope of the preferred embodiments.
  • the present invention also provides a composition comprising the sinomenine derivative of the present invention.
  • the sinomenine derivative of the present invention can be mixed with a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent by a conventional method to form a composition of the present invention.
  • the composition can be a pharmaceutical composition.
  • Such carriers include, but are not limited to, saline, buffer, dextrose, water, glycerol, ethanol, and combinations thereof.
  • the composition of the present invention may be in the form of a solid (e.g., granules, tablets, lyophilized powder, suppository, capsule, sublingual tablet, etc.) or a liquid (e.g., oral solution or injection), or other suitable shape.
  • the active ingredient of the present invention is usually present in an amount of from 0.01 to 99% by weight of the composition, preferably from 0.1 to 95%, more preferably from 0.1 to 90%, most preferably from 1 to 80%.
  • composition of the present invention may be in a single dose or in multiple doses. It is usually contained in an amount of from 1 to 1000 mg per dose, preferably from about 2 to 500 mg per dose, more preferably from 5 to 100 mg per dose, based on the administered dosage.
  • the compounds of the present invention can be used in a conventional form including, but not limited to,: oral, intramuscular, subcutaneous, intravenous, and the like. Oral administration is preferred.
  • the application amount of the composition of the present invention is calculated based on the active substance. It is usually from about 0.01 to 500 mg/kg body weight per day, preferably from about 0.1 to 50 mg/kg body weight.
  • the invention also provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising: (a) an effective amount of a sinomenine derivative of the invention; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient.
  • composition of the present invention includes a pharmaceutical composition as long as it contains the sinomenine derivative of the present invention as an active ingredient.
  • the term "containing" means that the various ingredients can be used together in the mixture or composition of the present invention.
  • a "pharmaceutically acceptable" ingredient is a substance which is suitable for use in humans and/or animals without excessive adverse side effects (e.g., toxicity, irritation, and allergic reaction), i.e., having a reasonable benefit/risk ratio.
  • an effective amount refers to an amount of a therapeutic agent that treats, alleviates or prevents a target disease or condition, or an amount that exhibits a detectable therapeutic or prophylactic effect.
  • the precise effective amount for a subject will depend on the size and health of the subject, the nature and extent of the condition, and the combination of therapeutic and/or therapeutic agents selected for administration. Therefore, it is useless to specify an accurate effective amount in advance. However, for a given situation, routine experimentation can be used to determine the effective amount that the clinician can judge.
  • an effective dose is from about 0.01 mg/kg to 500 mg/kg, preferably from 0.05 mg/kg to 200 mg/kg of body weight of the active substance of the present invention.
  • the active substances of the invention may also be used together with other therapeutic agents.
  • the pharmaceutical composition may also contain a pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carrier refers to a carrier for the administration of a therapeutic agent. They meet the following conditions: They do not themselves induce the production of antibodies harmful to the individual receiving the composition, and are not excessively toxic after administration. These vectors are well known to those of ordinary skill in the art. A full discussion of pharmaceutically acceptable carriers can be found in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Pub. Co., N.J. 1991; Such carriers include, but are not limited to, saline, buffer, dextrose, water, glycerol, ethanol, adjuvants, and combinations thereof.
  • the pharmaceutically acceptable carrier in the therapeutic composition may contain a liquid such as water, saline, glycerol and ethanol.
  • auxiliary substances such as wetting or emulsifying agents, pH buffering substances and the like may also be present in these carriers.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a composition thereof can be administered orally and intravenously, intramuscularly or subcutaneously; preferably, it is administered orally.
  • Solid carriers include: starch, lactose, dicalcium phosphate, microcrystalline cellulose, sucrose and kaolin, while liquid carriers include: sterile water, polyethylene glycol, non-ionic Surfactants and edible oils (such as corn oil, peanut oil and sesame oil;), as long as they are suitable for the characteristics of the active ingredient and the particular mode of administration desired.
  • Adjuvants commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions may also be advantageously included, such as flavoring agents, coloring agents, preservatives, and antioxidants such as vitamin E, vitamin C, BHT, and BHA.
  • compositions of the invention and pharmaceutical compositions thereof may also be stored in a sterilizing device suitable for injection or drip.
  • the sinomenine derivative as an active ingredient accounts for 0.01 to 99% by weight, preferably 0.1 to 95%, more preferably 0.1 to 90%, most preferably 1 -80%, the balance being a pharmaceutically acceptable carrier and other additives.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared into any conventional preparation form by a conventional method.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be in a variety of dosage forms as long as it is a dosage form capable of effectively bringing the active ingredient into the mammal.
  • the compositions can be formulated in a variety of forms suitable for the desired mode of administration.
  • the pharmaceutical composition may be formulated as a tablet, a pill, a powder, a lozenge, a sachet, a cachet, an elixir, a suspension, an emulsion, a solution, a syrup, an aerosol (as a solid or in a liquid matrix), Ointments, soft gels and hard gelatin capsules, suppositories, sterile injectable solutions, aseptically packaged powders, and the like.
  • the sinomenine derivative of the present invention is preferably present in a suitable solid or liquid carrier or diluent.
  • the sinomenine derivative composition of the present invention is preferably administered orally, and the oral form includes, but is not limited to, tablets, capsules, dispersible powders, granules or suspensions (containing, for example, about 0.05 to 5% of a suspending agent), syrup (containing For example, about 10-50% sugar;), and an expectorant (containing about 20-50% ethanol;), or in the form of a sterile injectable solution or suspension (containing about 0.05-5% suspending agent in an isotonic medium) Parenteral administration.
  • these pharmaceutical preparations may contain from about 25 to about 90%, usually from about 5 to about 60% by weight, of the active ingredient in admixture with the carrier.
  • composition of the invention can be administered directly to the subject.
  • the subject to be prevented or treated may be an animal; especially a human.
  • the pharmaceutical composition containing the active substance of the present invention can be administered orally, subcutaneously, intradermally, intravenously or the like.
  • the therapeutic dosage regimen can be a single dose regimen or a multiple dose regimen.
  • sinomenine derivatives of the present invention and compositions thereof may also be administered parenterally or intraperitoneally.
  • Solutions or suspensions of these active substances can also be prepared in water suitably mixed with a surfactant such as hydroxypropylcellulose.
  • Dispersions can also be prepared in glycerol, liquids, polyethylene glycols, and mixtures thereof in oils. These preparations contain preservatives to prevent the growth of microorganisms under normal conditions of storage and use.
  • the pharmaceutical forms suitable for injection include: sterile aqueous solutions or dispersions and sterile powders (for the preparation of sterile injectable solutions or dispersions). In all cases, these forms must be sterile and must be fluid to facilitate fluid discharge from the syringe. Must be stable under manufacturing and storage conditions and must be protected against micro-production Contamination effects of substances such as bacteria and fungi.
  • the carrier may be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, an alcohol such as glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycol; suitable mixtures thereof and vegetable oils.
  • the effective dose of the active ingredient employed will vary with the mode of administration and the severity of the condition being treated. However, generally, when the extract of the present invention is administered at a dose of about 1 to 300 mg/kg of animal body weight per day, a satisfactory effect can be obtained, preferably administered in 1-3 divided doses per day, or in a sustained release form. Dosing. For most large mammals, the total daily dose is about 5-1000 mg, preferably about 10-500 mg. Dosage forms suitable for internal administration comprise from about 1 to 200 mg of the active ingredient intimately mixed with a solid or liquid pharmaceutically acceptable carrier. This dosage regimen can be adjusted to provide an optimal therapeutic response. For example, several separate doses may be administered per day, or the dose may be proportionally reduced, as is critical to the condition of the treatment.
  • compositions or medicaments of the invention may also contain other active ingredients such as non-inflammatory anti-inflammatory drugs, glucocorticoids, immunosuppressive agents and the like.
  • Example 36 4-acetyl sinomenine (0.5 g, 1.35 mmol, 1 equiv) was added to the reaction flask, and 1.5 M aqueous sulfuric acid (8 mL) was dissolved. Cr0 3 was added with stirring at room temperature the solid (0.27 g, 2.70 mmol, 2 equiv) 0 addition was completed, dropwise addition of concentrated sulfuric acid (0.36 mL, 6.62 mmol, 4.9 equiv) 0 complete addition, stirred at room temperature overnight. After the treatment, saturated sodium sulfite was added to the reaction mixture, and saturated sodium hydroxide was added to adjust to weak acidity, and saturated sodium hydrogencarbonate was added to make it alkaline, and extracted with dichloromethane. The methylene chloride layer was washed with water, saturated sodium chloride, dried over anhydrous Na 2 S0 4, evaporated to dryness and purified through column chromatography to give the product (0.17 g, 32%).
  • Example 40 In vitro tumor necrosis factor a (T Fa) inhibition assay: The mouse macrophage cell line J774 was inoculated into a 48-well plate at a culture density of 1 X 10 5 /well, using DMEM containing 10% FBS at 37 ° C, 6%. C0 2 was incubated for 12 hours. And then diluted with DMEM medium containing lg / ml LPS to a final concentration of small molecules to 10_ 5 mol / l, the original medium was replaced. Continue to culture for 5 hours. The cell supernatant was collected and assayed by ELISA for TNF-0. The results are shown in Figures 1 and 2.
  • compound SB202190 [4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole, CAS 152121-30-7, was purchased from sigma.
  • P38 MAPK specificity Inhibitors inhibit TNF-[alpha] production by inhibiting p38 phosphorylation. ⁇ as a positive control
  • MATERIALS C57BL/6 mice (6-8 weeks old) were purchased from Shanghai Slack Laboratory Animals Inc. (SLAC). The animals were raised in the Experimental Animal Center (clean grade) of the Biochemistry Cell Institute of the Shanghai Academy of Sciences, Chinese Academy of Sciences, and provided adequate Water source and standard feed.
  • LPS Lipopolysaccharides
  • the cytokine (T F-alpha) ELISA kit (Cat. No. MTA00) was purchased from R&D.
  • mice were weighed sequentially, and different concentrations of small molecule drugs 1 were prepared by intraperitoneal injection of 200 ⁇ physiological saline (low, medium, and high experimental groups were injected at 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg body weight). ), the control group was intraperitoneally injected with 200 ⁇ physiological saline;
  • Induction model was administered intraperitoneally with lOO L LPS (injection dose of 2.5 mg/kg body weight) 1 hour after administration; (4) 200 ⁇ l of blood was taken from the eyelids 1.5 hours after LPS injection, and the blood sample was allowed to stand at 4 ° C for 12 hours, centrifuged at 6000 rpm for 10 minutes, and the supernatant serum was separated;

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Description

一种青藤碱衍生物、 合成方法及其用途 技术领域
本发明涉及一种青藤碱衍生物、合成方法及其用途，所述的青藤碱衍生物包 括氧化衍生物、 青藤碱 C-10取代衍生物。 通过对青藤碱及其类似物的氧化， 氧 化去芳香化、 共轭加成芳构化引入 C-10取代基等方法， 得到青藤碱衍生物。 本 发明还涉及这些青藤碱衍生物作为肿瘤坏死因子 α抑制剂在治疗或预防哺乳动 物中免疫类疾病和与不正常肿瘤坏死因子 α活性相关病症方面的性质和用途。 背景技术
青风藤是一常见中药， "青风藤"名称始见于宋， 《图经本草》和《本草纲目》 都有较详细记载。 有祛风湿通经络， 止痛功能。 用于风湿性及类风湿性关节炎、 四肢疼痛麻木及损伤疮肿等症。 主要分布于陕西、 河南、 湖北、 江苏、 安徽、 浙 江、 江西、 福建等省。 青风藤茎胶及根含青藤碱 （sinomenine 青风藤碱
( sinoacutine)、 双青藤碱 (disinomenine) 乙基青藤碱 (ethylsinomenine, 即异 青藤碱 isosinomenine)、 四氢表小檗碱 sinactine)、 尖防己碱 （acutumine)、 N-去 甲尖防己碱（acutumidine)、 土藤碱 (tuduranine) 木兰碱 (magnoflorine), 另含 微量的光千金藤碱 （stepherine)、 白兰花碱 （ michelalbine )、 dl-紫丁香树脂酚
(dl-syringaresinol) 以及 β-谷
Figure imgf000003_0001
青藤碱 1 青藤碱 (sinomenine, 1)是从青风藤 (Sinomenium acutum)中分离得到的异喹啉 类生物碱， 化学名称为， （9a， 13a, 14a) -7,8-二脱氢 -4-羟基 -3,7-二甲氧基 -17- 甲基-吗啡喃 -6-酮，分子式为 C19H23N04，分子量为 329.38， [ a ]20 D= -71 ° ,(c = 2.1， 乙醇；)。 青藤碱结构与吗啡类似， 由氢菲核及乙胺桥组成， 含有四个环， 三个手 性中心， 化合物的编号如图所示。 青藤碱具有抗炎、 免疫抑制、 镇痛、 降压、 抗心律失常等多种药理活性， 临 床用于治疗类风湿性关节炎、心律失常等疾病。治疗类风湿性关节炎是青藤碱疗 效最确切的临床应用。 目前， 已有正青风痛宁片、 青藤碱缓释片、 盐酸青藤碱注 射剂、 毛青藤碱片等制剂应用于临床， 主要的给药途径有口服、 肌肉注射、 穴位 注射、 离子导入等。 类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis)是一种以关节滑膜炎 为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。滑膜炎持久反复发作，可导致关节内软骨 和骨的破坏， 关节功能障碍， 甚至残废。 类风湿性关节炎至今尚无特效疗法， 仍 停留于对炎症及后遗症的治疗。 目前，用于治疗类类风湿性关节炎的药物主要有 以阿司匹林为代表的非 体抗炎药物，皮质激素类药物，疾病调节剂如金制剂（金 诺芬） 、 青霉胺、 氯喹、 左旋咪唑、 免疫抑制剂 （如氨甲蝶吟 （MTX) ， 中药 雷公藤、 昆明山海棠、 青藤碱等。 而青藤碱相对其它药物在结构上有其独特性， 相对目前非 体抗炎药物的研究已经比较成熟， 青藤碱的研究还远远不够深入， 对其开展研究具有独特的价值。
青藤碱单体制剂应用于临床存在的主要缺陷有： 青藤碱本身生物半衰期较 短，药剂量偏大，且临床治疗一般需长期口服；青藤碱具有很强的释放组胺作用， 容易引起皮疹， 同时临床上还伴有胃肠道不良反应等副作用； 还有就是青藤碱本 身对光、 热不够稳定， 易分解。
因而围绕如何提高药物疗效、降低毒副作用， 改变青藤碱原料的剌激性和不 稳定性， 人们对其剂型开展了广泛的研究， 有较多的报道。通过采用适宜的剂型 如缓释、 控释、 凝胶、 喷雾剂等新剂型， 在某种程度上确实提高青藤碱的临床疗 效， 降低不良反应， 取得了一定的成果。 但要从根本上解决青藤碱的上述缺点， 仅仅通过剂型的改良很难完成， 需要对青藤碱的结构进行修饰和改造， 开展药物 化学方面的研究与优化， 以获得高效、 低毒的新一代青藤碱衍生物。
目前为止， 国内有多个研究小组和单位对青藤碱开展了研究，这也体现了青 藤碱的中国特色。 叶仙蓉等 （药学学报， 2004， 39 (3 )， 180-183 ) 对青藤碱 C 环进行了结构改造。上海药物所的秦国伟课题组以青藤碱作为先导化合物开展了 记忆增强类药物的研究 （ WO2004048340A1 )。 南京大学的潘毅课题组 (CN1785976A, CN1785977A, CN1821244A) 李建新课题组 （CN101265266, CN101148437A ) , 湖南正清制药集团有限公司 （ CN1876634A )， 四川大学 (CN1800164A, CN1948291A) 我们课题组 （CN1687065A、 CN1687070A) 以及 专利 WO200707070等对青藤碱类化合物开展了抗炎、 免疫抑制活性方面的结构 改造和研究。
青藤碱结构中存在酚羟基， 容易在氧化剂作用下被氧化。 由此， 我们研究了 青藤碱在氧化条件下的反应性， 获得了一系列结构新颖的衍生物， 并通过体外肿 瘤坏死因子 α (TNF-α) 抑制实验评价了它们的活性。
TNF-a细胞来源广泛， 包括各种免疫细胞、 内皮细胞、 成纤维细胞、 表皮细 胞、 角质细胞、 平滑肌细胞、 星形细胞、 成骨细胞等。 心脏含有的巨噬细胞， 是 炎性细胞因子 TNF-a的丰富来源。 人 TNF- a基因编码前体蛋白， 其信号肽将前 体蛋白固定为在细胞膜上，成为具有活性的跨膜干扰素。经酶剪切去除信号肽生 成分泌型 TNF-a， 分子质量为 17KD， NF- κ B和 p38_MAPK信号通路参与 TNF- a 表达。 TNF-a具有广泛的生物学活性， 如： 参与炎性反应和免疫应答、 抗肿瘤、 参与内毒索性休克等病理过程， 引起恶病质等， 其具有双重作用： 一方面在机体 免疫调节、机体生理功能和抗感染等方面发挥重要作用， 另一方面若持续释放或 产生过多则会引起发热、 休克、 恶病质等。 同时 TNF-a可进一步诱导白介 -6、 白 介 -8、 白介 -10等细胞因子的产生， 这些促炎性细胞因子参与体内急性反应、 发 热反应、 引起趋化肽释放等， 还可使内皮细胞活化而导致血管通透性增加。
TNF-a在类风湿关节炎中的作用： TNF-a是类风湿关节炎发病机制中居中心 地位的促炎症细胞因子， 参与类风湿关节炎的发生发展过程。 TNF-a主要由巨噬 细胞产生，可以诱导其他炎症因子如白细胞介素一 1、白细胞介素一 6等的产生， 激活黏附因子， 促进金属蛋白酶的产生， 抑制软骨蛋白多糖合成， 造成骨和软骨 的破坏。现在临床上主要是应用抗 TNF-a抗体和可溶性 TNF-a受体融合蛋白治疗 抗体类风湿关节炎， 并取得良好的疗效。 通过体外测定化合物对肿瘤坏死因子 a (TNF-a) 抑制率可以有效地评价了它们的抗炎、 免疫抑制活性。 发明内容
本发明第一个目的是提供几种青藤碱氧化产物及在此基础上的衍生物。本发 明的第二个目的是提供制备上述青藤碱衍生物的方法。本发明的第三个目的是提 供上述青藤碱衍生物作为肿瘤坏死因子 a抑制剂在治疗或预防哺乳动物中免疫 类疾病和与不正常肿瘤坏死因子 a活性相关病症方面的性质和用途。 本发明的第 四个目的是提供一种治疗对象的免疫类疾病和与不正常肿瘤坏死因子 a活性相 关病症的方法， 所述方法包括将本发明的青藤碱衍生物给予需要该治疗的对象。 在本发明的第一方面， 提供了一种青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可 接受
Figure imgf000006_0001
其中 R = H或 R10CO; R2 = H或 R10CO; R3 = RuO、 R12S、 R13R14N、 OH、 R o
R10COO或 15χ^^ ; R4 = H或 R16R17R18Si; R5 = RuO、 OH或 CH3COO; = H或 RuO; 或者 R5, R6合在一起形成氧代基团； R7 = H、 卤素或羟甲基； R8 =羟 基或 H; R9 =羟基或 H; 或者 R8， R9合在一起形成氧代基团； 《。 =。^。的烃 基 (优选 C^6烃基， 更优选 C^4烃基， 还优选 d_6烷基， 更优选 C^4烷基；)； Rn = CwQ烃基； R12 = CwQ烃基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六 元的芳环、 带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的含氮杂环、 带有 一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的含氧杂环、或带有一〜三个取代基 或不带取代基的五元或者六元的含硫杂环， 所述的取代基是 CwQ的烃基、 卤素、 CM的烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 甲氧基或羟基； R13 = 烃基、 带 有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的芳环、带有一〜三个取代基或不 带取代基的五元或者六元的含氮杂环、带有一〜三个取代基或不带取代基的五元、 或者六元的含氧杂环或带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的含硫 杂环， 所述的取代基是 CWQ的烃基、 卤素、 CM的烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基或羟基； R14 = H或 Cwo的烃基； 或者 R13和 R14与它们所连 接的 N原子一起形成带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的含氮杂 环， 所述的取代基是卤素、 CM烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基 或羟基； Ri5 =H或 Cw。的焼基； Ri^ Cw。的烃基或苯基； Rn z Cw。的烃基或 苯基； R18 = CW。的烃基或苯基。
较佳地， 所述的五元或者六元的芳环是环戊烯基或苯基， 所述的五元或者 六元的含氮杂环是吡咯基、 咪唑基、 吡唑基或吡啶基， 所述的五元或者六元的含 氧杂环是呋喃基或吡喃基， 所述的五元或者六元的含硫杂环是噻吩基。
较佳地， Ri = H或 R1()CO; R2 = H或 R1()CO; R3 = RuO、 R12S、 Ri3Ri4N、
R o
OH、 R10COO或 15χ^^ ; R4 = H或 R16R17R18Si; R5 = RuO、 OH或 CH3COO; = H或 RuO; 或者 R5, R6合在一起形成氧代基团； R7 = H、 卤素或羟甲基； =羟基或 H; R9=羟基或 H; 或者 R8,R9合在一起形成氧代基团； 《 0 =。^ 烷基； Rn C^烷基； R12 = Cw烷基、带有一〜三个取代基或不带取代基的苯基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的咪唑基、带有一〜三个取代基或不带取代基的 呋喃基或吡喃基、 或带有一〜三个取代基或不带取代基的噻吩基， 所述的取代基 是卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 d.4烷氧基或羟基； R13=C^6 烷基、带有一〜三个取代基或不带取代基的苯基、带有一〜三个取代基或不带取代 基的咪唑基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的呋喃基或吡喃基， 或带有一〜 三个取代基或不带取代基的噻吩基， 所述的取代基是卤素、 烷基、 含氟 烷基、 硝基、 氰基、 d_6烷氧基或羟基； R14 = H或 烷基； 或者 R13和 R14与 它们所连接的 N原子一起形成带有一〜三个取代基或不带取代基的咪唑基； 所述 的取代基是卤素、 CM烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 d_4烷氧基或羟基；
Rl5 = H或 Ci 6院基； Rl6 = Ci 6院基或本基； Rl7= Ci 6院基或本基； 18=。1 6院 基或苯基。
更佳地， Ri =H或 R1()CO; R2 = H或 R1()CO; R3 = RuO、 R12S、 Ri3Ri4N、
R o
OH、 R10COO或 15χ^^; R4 = H或 R16R17R18Si; R5 = RuO、 OH或 CH3COO;
= H或 RuO; 或者 R5, R6合在一起形成氧代基团； R7 = H、 卤素或羟甲基； =羟基或 H; R9=羟基或 H; 或者 R8,R9合在一起形成氧代基团； R1Q = CM 烷基； Rn C^烷基； R12 = CM烷基、带有一〜三个取代基或不带取代基的苯基， 所述的取代基是卤素、 烷基、 含氟烷基、 硝基、 氰基、 d_4烷氧基或羟 基； R13= CM烷基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的苯基， 所述的取代基是 卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 d.4烷氧基或羟基； R14 = H或 Ci^6烷基； 或者 R13和 R14与它们所连接的 N原子一起形成带有一〜三个取代基 或不带取代基的咪唑基； 所述的取代基是卤素、 烷基、 含氟烷基、硝基、 氰基、 CM烷氧基或羟基； R15 = H或 CM烷基； R16=C^4烷基； R17=C^4烷基；
Rl8=C卜 4院基。 优选所述的青藤碱衍生物具有如下结构式:
Figure imgf000008_0001
H或 R1()CO; = 11或11。。0， 其中 Rio是
Cw烷基， 优选 d_4烷基， R2。代表 H或者选自下组的取代基： 卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 d_4烷氧基或羟基； n=l， 2， 或 3。
一步优选所述的青藤碱衍生物具有如下结构式：
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
在本发明的第二方面提供了本发明所述的青藤碱氧化衍生物制备方法， 可 以采用如下步骤 1)、 1) ~2)、 3)、 3) ~4)、 3) 和 5)、 6) 或者 6) -7) 共七种 步骤获得：
1)， 在室温下水中， 青藤碱或其盐酸盐与二醋酸碘苯反应 0.5 4小时， 获得 化合物 Cl， 所述的青藤碱或其盐酸盐与二醋酸碘苯的摩尔比为 1: 1-2；
0
2) 化合物 C1 与 RuOH、 R12SH、 R13R14 H、 H20、 5^\或 (R1()CO)20 在有机溶剂中反应获得化合物 C2， 或者 C1在有机溶剂中与 R16R17R18SiX反应 获得化合物 C3， 反应时间为 0.5 48小时， 所述的化合物 C1与 RuOH、 R12SH、 o
R13R14 H、 H20、 Rl5N^\、 （R1()CO)20或 R16R17R18SiX的摩尔比为 1: 1-10；
3)青藤碱或者其衍生物在常温下和甲醇中，与二醋酸碘苯反应 0.5 48小时， 获得化合物 C4或化合物 C5，所述的青藤碱或其衍生物与二醋酸碘苯的摩尔比为 1： 1-2；
4) 化合物 C4在有机溶剂中， 冰水浴〜常温下， 通过硼氢化钠还原 1~24小 时获得 C7， 所述的化合物 C4与硼氢化钠摩尔比为 1: 1-4； 或者在有机溶剂中 通过与三氯化铝回流反应 1~24小时获得 C6， 所述的化合物 C4与三氯化铝摩尔 比为 1: 1-5；
5) 化合物 C5在有机溶剂中， 冰水浴〜常温下， 通过硼氢化钠还原 1~24小 时获得化合物 C8， 所述的化合物 C5与硼氢化钠摩尔比为 1: 1-4； 或者在冰水 浴或常温下， 通过氢氧化锂水溶液反应 0.5 24小时水解获得化合物 C6， 所述的 化合物 C5与氢氧化锂摩尔比为 1: 1-10；
6)青藤碱或者其衍生物在有机溶剂中， 冰水浴〜常温下， 在酰氯或者酸酐作 用 0.5 24小时获得化合物 C9， 所述的青藤碱或者其衍生物与酰氯或者酸酐的摩 尔比为 1: 1-5； 化合物 C9在常温下， 与三氧化铬在硫酸水溶液中反应 1~24小 时获得化合物 C10， 所述的 C9与三氧化铬的摩尔比为 1: 1-4；
7) 化合物 C10在有机溶剂中， 冰水浴或常温下， 通过硼氢化钠还原 1~24 小时获得化合物 Cll， 所述的化合物 C10与硼氢化钠摩尔比为 1: 1-4； 或者在 冰水浴或常温下， 氢氧化锂水溶液水解 0.5 24小时获得化合物 Cll， 所述的化 合物 C10与氢氧化锂摩尔比为 1: 1-10；
Figure imgf000011_0001
化合物 C1 C11的结构式如下:
Figure imgf000012_0001
其中 Ri R2、 R3、 、 R_5、 R6 R7、 R8、 !¾、 Rio Rn Ri2 Ri3 Ri4 R15、 R16、 R17、 R18如前所述； R19 = H或 R1()CO; 所述 X为卤素， 包含氯、 溴 或碘。
以上所指的有机溶剂包括但不限于甲醇、 乙醇、 正丙醇、 正丁醇、 异丙醇、 二氯甲烷、 氯仿、 1,2-二氯乙烷、 四氯化碳、 乙醚、 四氢呋喃、 苯、 甲苯、 二甲 苯、 丙酮、 丁酮、 乙腈、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺或二甲亚砜。
推荐采用如下步骤获得青藤碱衍生物:化合物 C1与 R12SH在有机溶剂中反 应获得化合物 C2， 反应时间为 0.5 48小时， 所述的化合物 C1与 R12SH的摩尔 比为 1: 1-10； 其中 R12代表 U， R2。代表 H或者选自下组的取代基： 卤 素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基或羟基； n=l， 2， 或 3; 其中化合物 C1如前所述， 化合物 C2的结构式如下：
Figure imgf000012_0002
式中 R =H或 R1()CO; = 11或11。。0; Ri。 = Cw烷基， 优选 C .4烷基。 或者推荐采用如下步骤 1) 或 1) ~2) 获得： 1) 化合物 C1与 R12SH在有 机溶剂中反应获得化合物 C2-l，所述的化合物 CI与 R12SH 的摩尔比为 1 : 1~10； 2)化合物 C2-1在有机溶剂中，冰水浴〜常温下，在酰氯或者酸酐作用 0.5 24 小时获得化合物 C2-2, 所述的青藤碱或者其衍生物与酰氯或者酸酐的摩尔比为 1： 1-5；
Figure imgf000013_0001
C2-2
-l、 C2-2的结构式如下:
Figure imgf000013_0002
C2-1 禾卩 C2-2 其中 代表 R1()CO， R2代表 R1()CO; R12代表 U， R2。代表 H或者 选自下组的取代基： 卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基 或羟基； n= l， 2, 或 3 ; Rio =
Figure imgf000013_0003
¾¾¾J 优选 CM烷基。 在本发明的第三方面， 提供了一种药物组合物， 其含有有效量的本发明所 述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物， 以及药学 上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂。
在一优选的实施方式中， 所述组合物还含有其它的免疫类疾病的治疗剂。 在一优选的实施方式中， 所述其它的免疫类疾病的治疗剂选自非 体抗炎 药、 糖皮质激素和免疫抑制剂。 在本发明的第四方面， 提供了所述的青藤碱衍生物在制备治疗免疫类疾病 的药物中的用途。 在一优选的实施方式中， 所述免疫类疾病包括炎症性肠疾病、 炎症、 类风 湿性关节炎、 幼年型类风湿关节炎、 银屑病关节炎、 骨关节炎、 顽固性类风湿性 关节炎、 慢性非类风湿性关节炎、 Crohn's病、 哮喘。 在本发明的第五方面， 提供了一种治疗对象的免疫类疾病的方法， 所述方 法包括将本发明所述的青藤碱衍生物给予需要该治疗的对象。 在本发明的第六方面， 提供了青藤碱衍生物在用于制备治疗或预防哺乳动 物中与不正常肿瘤坏死因子 α活性相关病症的药物。
在一优选的实施例中， 不正常 T F-α活性相关的病症包括：炎症性肠疾病、 炎症、 类风湿性关节炎、 幼年型类风湿性关节炎、 银屑病关节炎、 骨关节炎、 顽 固性类风湿性关节炎、 慢性非类风湿性关节炎、 骨质疏松症 /骨重吸收、 Crohn's 病、 感染性休克、 内毒素休克、 动脉粥样硬化、 缺血一再灌注损伤、 冠心病、 血 管炎、 淀粉样变、 多发性硬化、 败血症、 慢性再发性葡萄膜炎、 丙型肝炎病毒感 染、 疟疾、 溃疡性结肠炎、 恶病质、 银屑病、 Wegenrer's肉芽肿病、 脑膜炎、 浆 细胞瘤、 子宫内膜异位、 Behcet's病、 AIDS、 HIV感染、 自身免疫性疾病、 免 疫缺陷、 普通易变免疫缺陷病 (CVID )、 慢性移植物杭宿主病、 外伤和移植排斥 反应、成人呼吸窘迫综合症、肺纤维化、再发性卵巢癌、淋顽固性多发性骨健瘤、 骨髓增殖性疾病、 糖尿病、 幼年型糖尿病、 强直性脊柱炎、 皮肤延迟型过敏病、 阿尔茨海默病、 系统性红斑狼疮、 变应性哮喘。 还提供一种治疗或预防哺乳动物中与不正常肿瘤坏死因子 a活性相关病症 的方法，所述方法包括向需要其的患者施用有效量的本发明的青藤碱衍生物，例 如优选实施方案提供的、优选地以药物组合物形式存在的一种或多种青藤碱衍生 物。 研究中使用体外肿瘤坏死因子 a (T F-a)抑制实验来评价青藤碱衍生物的 抗炎、 免疫抑制活性 （结果见附图 1、 附图 2以及附图 3 )。 本发明利用青藤碱结构中存在易被氧化的酚羟基，通过氧化等方法合成了一 系列青藤碱衍生物， 方法独特、结构新颖。使用体外 TNF-a抑制实验对青藤碱衍 生物进行了活性评价， 结果表明大多数化合物都表现出了一定的抗炎活性， 一些 化合物表现出了比青藤碱更好的活性， 有望应用于类风湿关节炎 （RA) 等免疫 类疾病的治疗。 而另外一些化合物 33， 34, 35表现出了 T F-α的促进作用， 值 得进一步研究。
附图说明
图 1为本发明涉及的部分化合物使用体外肿瘤坏死因子 a (TNF-a) 抑制实 验进行抗炎、免疫抑制活性评价的结果。横坐标是对应实施例中分别列出的化合 物编号， 纵坐标是 TNF-a抑制率 (IR)， 所用的浓度为 10μΜ。
图 2为本发明优选化合物使用体外肿瘤坏死因子 a (TNF-a) 抑制实验进行 抗炎、免疫抑制活性评价的结果。横坐标是对应实施例中分别列出的化合物编号， 纵坐标是 TNF-a抑制率， 所用的浓度为 10μΜ。
图 3为在实验性 LPS诱导的内毒素休克模型中验证本发明优选化合物中代 表化合物 1的抗炎活性结果。横坐标是对应实施例中分别列出的化合物编号或小 鼠每千克体重用化合物 1的质量， 纵坐标是 TNF-a的浓度。 具体实施方式
TNF-a主要通过两种 T F受体， T F受体 1(重新命名为 CD 120a)和 TNF 受体 Π(重新命名为 CD 120b)发挥其作用。 大部分的 T F-α作用通过 CD120a传 递， 而所述 CD120b 受体是可诱导的并且优先与膜结合的 TNF-a反应 (Tartaglia 等， 1992, Vandenabeele等， 1995, Grell等， 1995)。 己经充分研究了 T F-α的生 理功能并且描述了干扰 TNF-a活性， 例如抑制 TNF-a活性的有机化合物在治疗 许多疾病 (病症)中是有用的。
肿瘤坏死因子- a (TNF-a)是由单核噬细胞在应答免疫剌激时释放出的主 要细胞素。 对动物和人施用 TNF a可引起炎症、 发热、 心血管功能异常、 出血、 凝血和一系列与急性感染及休克状态相类似的急性反应。动物体内或人体内产生 过量的或者不受控制的 T F。 常提示患有如下疾病:内毒素血症和 /或中毒休克综 合症（Tracey et al, Nature 330, 662-4 1987; Hinshawet al.， Circ Shock 30,279-92(1990));恶病质 (Dezube et al.， Laucet, 335 (8690), 662 (1990));成人呼 吸紧张综合症 (ARDS)(Millar et al.， Laucet 2(8665), 712-714(1989))。
T F-α也在包括关节炎在内的骨吸收类疾症中起重要作用 (Betolinni et al., Nature 319 ,516-8 (1986))。 体外和体内试验均证明 TNF α可通过剌激破骨细胞 (Osteoclast)的生成和激活来剌激骨再吸收， 并抑制骨的生成。
至今， 与 T F-α关系最明显的疾病是肿瘤和宿主组织释放 T F a与恶性肿 瘤相关的高钙血症 (Calci . Tissue Int. (US) 46 (Suppl. ) , S3-10 (1990) )„ 在骨髓移 植病人身上，免疫反应与病人血清 T F-α浓度增加紧密相关 (Holler et al.， Blood,
75 (4)， 1011-1016(1990))。
致死性超急性神经性综合症脑干型疟疾也与血液中 T F-α水平高有关， 该 病是疟疾类疾病中最危险的一种。病发时， 血清 T F-a水平与病情直接相关， 并 常可在急性疟疾发作病人身上发生 (Grau et al.， N. Engl. J. Med. 320 (24) ,
1586-91(1989))。
T F-α在慢性肺炎中亦起着重要作用。肺中含硅微粒的贮存可引起硅肺。硅 肺是由肺组织的纤维化反应而引起的进行性呼吸衰竭症。 在动物病理模型中， TNF-a的抗体可完全阻断硅尘引起的小鼠肺纤维化过程 (Pignet et al. , Nature , 344:245-7 (1990))。 动物实验也证明在硅尘或石棉灰引起的肺纤维化的动物血清 中 T F-α异常高 （Bissonnette et al., Inflammation 13(3),329-339(1989))。 病理研 究揭示肺结节病人肺组织中的 T F-α水平也比平常人要高得多〔Baughman et al. , J. Lab. Clin. Med. 115 (1) , 36-42 (1990)。 提示 TNF-a抑制剂在慢性肺病和 肺损伤的治疗上有重大意义。
在再灌注损伤病人 (Reperfhsion Injury)中引起炎症的原因也可能由于病人体 内 TNF-a水平异常， 并且 TNF-a被认为是引起缺血所导致的组织损伤的罪魁祸 首 (Uadder et al， PNAS 87, 2643-6(1990))。
实验证明 T F-α可启动包括 HIV-1在内的逆转录病毒的复制 （Duh et al. , Proc.Nat. Acad. Sci.， 86, 5974-8 (1989)〕。 HIV进入 T一细胞前需激活 T一 细胞， 并且一旦被激活的 Τ一细胞被 HIV病毒感染， 这些 Τ一细胞必须继续保 持在激活状态才能使 HIV病毒基因顺利表达和 /或让 HIV病毒顺利复制。而细胞 素， 特别是 T F-α, 在 T一细胞调控的 HIV蛋白表达过程中或病毒复制过程中 起着重要作用。 因此， 抑制 TNF-a的生成便可能抑制 H工 V病毒在 T-细胞中的 复制。 (Poll et al. , Proc. Nat. Acad. Sci. , 87, 782-5 (1990)； Monto et al. ,Blood 79,2670(1990):Poll et al , AIDS Re s. Human Retrovirus, 191一 197 (1992)〕。）
cAMP可调节很多类细胞功能， 比如炎症反应， 包括哮喘、发炎 〔Lome and Cheng, Drugs of the futune , 17 (9), 799-807, 1992)。发炎时白细胞的 cAMP浓度的 升高抑制了白细胞的激活， 随后释放出炎症调控因子， 包括 T F-α, 而加剧病人 体内炎症。 因此， 抑制 T F-a的释放可缓解包括哮喘在内的炎症类疾病。
最近， 于岩岩等发现 TNF-a在病毒性肝炎病人的肝坏死进程中起着重要作 用 （于岩岩等， 中华内科杂志 1996, 35: 28-31 ), 提示 TNF-a抑制剂在慢性肝病 和肝损伤的治疗中有重大意义。
李应续等发现慢性肝病患者外周血单核细胞合成和分泌肿瘤坏死因子的水 平明显增高， 且诱导其它细胞因子 (比如 Il-ΐβ , 11-6和 11-8)的分泌， 并共同参与 肝细胞的损伤过程 （齐齐哈尔医学院学报， 22 (10 ) : 1119-1120 2001 )。 他们的结 果与 Yoshioka等 (Hepatology, 1989,10:769-777) 和王新等 （中华传染病杂志， 1997, 15 (2 ): 85-88) 的研究结论符合。 他们进而发现小分子 T F-α抑制剂反应 停可显著地抑制肝炎病人外周血单核细胞分泌 T F-a， 从而为 TNF-a抑制剂用 于治疗肝炎、 肝硬化及肝癌奠定了分子病理学基础。
T F。 通过促使炎症性细胞因子的合成与释放 （Abboud H. E. Kidney Int. 1993; 43:252-267 ) , 促使细胞粘附分子的表达 （Egido J. et al, Kidney Int. 1993 ;43 (suppl 39):59-64j, 及剌激前列腺素 Gi (PGEz)和血小板活化因子 (PAF)的 合成和释放（Ca二二 usi G. et al. , Kidney Int. , 43 (suppl 39):32-36), 使炎症细胞 聚集与粘附， 微血管扩张与通透性增强， 诱发发热， 循环中性粒细胞增加及血液 动力学改变等炎性反应，从而引起肾细胞的损伤。很多研究提示 T F-α在肾炎的 发病及恶化中起着重要的作用。
TNF-a通过激活巨噬细胞， 免疫性剌激 T淋巴细胞增生， 调节 B淋巴细胞 的分化及增强自然杀伤细胞 (NK)的细胞毒性作用， 从而参与了免疫功能的调节。 因而， 降低病人体内 TNF-a水平和 /或增加其 cAMP水平是一个有效的策略来治 疗很多炎症性、感染性、免疫性或恶性肿瘤类疾病， 包括但不限于败血症性休克 (Sepsis Shock) 内毒素休克、 血液动力性休克 (Hemodynamic Shock) 脓毒症 (Sepsis Syndrom) 后局部缺血再灌注损伤 (Post Ischemic Reperfusion Injury) 疾 (Malaria；)、分支杆菌感染 (Mycobacterial Infection；)、脑膜炎 (Meningitis；)、银屑病 (Psoriasis) 充血性心脏衰竭（Congestive Heart Failure) 纤维化疾病（Fibrotic disease) 恶病质（Cachexia；)、 移植免疫排斥、 癌症、 自身免疫病（Autoimmune disease), AIDS的机会致病感染 (Opportunisticlnfection in AIDS) 类风湿性关节炎 (RA) 肝炎、 肾炎、 类风湿性脊椎炎 (RheumatoidSpondylitis)等。
炎性细胞因子如 T F涉及银屑病的发病机理 ( B onifati和 Ameglio, Int. J. Derm. (国际皮肤病杂志） 38: 241-251 , 1999) 。 Leonardi等 (New Eng. J. Med.349: 2014-2022, 2003)发现用 T F拮抗剂依那西普治疗在 24周的治疗阶段中导致银屑 病严重程度的明显降低。 Boyman等 ((J. Exp. Med. 199: 731-736, 2004)将人的无症 状的银屑病前 (prepsoriatic)皮肤的角膜刀活检组织切片移植到 AGR129小鼠上， 所述 AGR129小鼠缺乏 I型和 II型干扰素受体以及 Rag2， 并且由此缺乏 B和 T 细胞并且显示严重受损的 NK细胞活性。在移植后， 人 T细胞经历局部增殖， 这 对于发展显示乳头瘤病和棘皮症的银屑病表型是关键的。 在移植前和移植后 8 周对银屑病前皮肤进行的免疫组织化学分析显示：在移植组织中表皮角化细胞， 树突细胞， 内皮细胞和免疫细胞活化。 T细胞增殖和随后的疾病发展依赖于 T F 的产生并且可以由 T F的抗体或可溶性受体所抑制。 Boyman等得出结论:定居 T 细胞的 T F—依赖性的活化对于发展银屑病病灶是必要的和充分的。
在小鼠中的研究 CFlynn等， Immunit. 2: 561-572, 1995)和在接受英夫利昔单 抗 (remicade)的用于治疗类风湿性关节炎和局限性回肠炎的患者中的观察 (IBD 1； (Keane等， N. Eng. J. Med.345: 1098-1104, 2001)已经显示抗体介导的 'TNF的中和 增加了对肺结核的敏感性。然而，过量的 TNF可能与严重的 TB病理相关 (Barnes 等， J.Immun. l45: 149-154,1990)。 使用通径 (path)和种族隔离分析并且控制环境差 异， Stein等 (Hum. Hered. 60: 109-118, 2005)评估了在乌干达 TB患者中的 TNF分 泌水平。 所述结果显示， 由于主要基因， 存在对于 TB中 T F表达的强烈的遗 传影响， 并且可能存在杂合体优势。 共有的环境对 T F表达的影响是最小的。 Stein等推论; TNF是 TB的内在表型，其可以增加检测疾病一易感基因座的能力。
细胞因子基因的调节区的单核昔酸多态性 ((S Ps)与对许多复杂疾病的敏感 性相关。 TNF 是促炎性细胞因子， 其提供宿主针对感染的快速防御形式， 但是 过量则是致命的。 因为， T F 用于针对多种病原体， 每种涉及不同形式的风险 和益处， 所以可以预期的是这将促进控制 T F产生的遗传元件的多样性。
Hemnann等 (Europ. J. Clin. Invest. 28: 59-66, 1998)使用 PCR-SSCP和测序以 筛选 T F-α基因的完整编码区和转录起始位点上游 1,053 by来进行多态性研究。 鉴定了 5种多态性 :4种位于上游区自第一个转录核昔酸的一 857， -851， -308， 和一 238位置， 还发现一种在非翻译区的 +691位置处。 三种位于关于 T F转录 起始位点的核昔酸一 238， -308， 和 -376处的 SNPs都将鸟嘌吟取代为腺嘌吟。 Knight等 (Nature Genet.22: 145-150, 1999)提及等位基因类型为一 23861-238A, -3086/-308A, 和一 3766/-376A。 他们指出在 T F-α启动子区的变化与对下列的 敏感性相关:脑型疟 (McGuire等， Nature. 371 : 508-511, 1994), 粘膜皮肤利什曼病 (Cabrera等， J. Exp. Med. 182: 1259-1264, 1995),脑膜炎球菌疾病的引起的死亡 ((Nadel等， J. Infect, Dis. 174: 878-880, 1996), 瘤型麻风 (Roy等， J. Infect. Dis. 176: 530-532, 1997), 瘫痕性沙眼 (Conway等 Infect. Immun. 65: 1003-1006, 1997)和哮 喘 (Moffatt和 Cookson, Hum. Molec. Genet. 6: 551一 554, 1997)。
Flora等 (Hum. Molec. Genet. 12: 375-378, 2003)测试了在 MHC区中的多态性 与轻度疟疾之间的连锁。 两点分析显示轻度疟疾与 T Fd (lod = 3.27)-—种在 MHC 区中的高度多态性标记一之间的连锁。 多点分析还显示轻度疟疾与 MHC 区之间的连锁的证据，其中与 T F具有峰值接近度 ((lod = 3.86)。作者推测在 T F 中的遗传变异可能影响对于轻度疟疾的敏感性， 但是多态性 T F-238, T F-244, 和 T F-308不大可能解释轻度疟疾与 MHC区域之间的连锁。
由 Funayama等进行的统计学分析值 ((Invest. Ophthal. Yis. Sci.45: 4359-4367, 2004)显示在患有 POAG的日本患者中， 在 optineurin中的多态性和 T F基因之 间的可能的相互作用将增加青光眼的发展和可能的进展的危险。
通过对 T F和 T FR超家族成员的转录起始位点上游 500 by的启动子区进 行测序， Kim等 ( lmmunogenetics. 57:297-303, 2005)鉴定了韩国供者中的 23个新 的调节 S Ps。 序列分析显示 S Ps中的 9个改变了推定的转录因子结合位点。 S P数据库的分析显示 SNP等位基因频率与日本受试者的那些相似， 但是不同 于高加索人或非洲人群的那些。
Zinman等 ((.I. Clin. Endocr. Metab. 84: 272-278, 1999)研究了在具有非常高发 率 NIDDM的分离的土著加拿人群中， T F-α和与胰岛素抗性和糖尿病相关的人 体测量和生理变量之间的关系。 使用动态平衡评估 (HOMA)模型来评估胰岛素抗 性， 他们发现在 TNF-a和空腹胰岛素， HOMA胰岛素抗性， 腰围， 空腹甘油三 醋， 和心脏收缩血压之间的中度的、 但是统计学显著的关联;在所有的情形中， 对于女性的系数强于对于男性的系数。作者得出结论， 即在该同种土著加拿大人 群中， 在葡糖耐量的范围内， 循环 TNF-a浓度与胰岛素抗性呈正相关。该数据显 示 TNF-a在胰岛素抗性的病理生理学中的可能作用。
Obayashi等 ((J. Clan. Endocr. Metab.85: 3348-3351, 2000)研究了在成年发作 的糖尿病患者中， T F-α对胰岛素依赖性的素因的影响， 所述患者具有 I型糖尿 病 ( IDDM)-保护性 HLA单倍型。分析了 3组 DRB 1 * 1502-DQB 1 *0601—阳性 糖尿病患者的 T F-a， 所述患者开始无酮病和非胰岛素依赖性超过 1年。 组 A 包括针对谷氨酸脱梭酶 (GADab升阳性患者的 11种抗体， 所述患者在糖尿病发 作的 4年内发展了胰岛素依赖性。 组 B包括 11个 GADab—阳性患者， 所述患 者仍旧保持无胰岛素依赖性超过 12年。组 C包括 12个 GADab—阴性 2型糖尿 病患者， 并且对照组包括 18个无糖尿病受试者。 在组 C和对照受试者中， DRB 1 * 1502-DQB 1 *0601与 T F-a -13等位基因强相关 DRB 1 * 1502-DQB 1 * 0601 在组 A患者中与 T F-a-12等位基因强相关， 但是在组 B患者中， 不是这样。有 趣的是， 来自在组 B中的无一 TNF-a -12和无〜 TNF-a -13的所有患者的血清通 过蛋白质印迹与 GAD65蛋白反应。 该作者得出结论， 即在开始被诊断为 II型糖 尿病的 GADablDRB 1 * 1502-DQB 1 *0601—阳性糖尿病患者中， T F-α与胰岛 素依赖性的进展的素因相关，并且确定这些患者的 TNF-a基因型可以容许更好的 预测它们的临床进程。
为了研究 TNF-a基因是否是糖尿病的改变基因， Li等 ((J Clin. Endocr. Metab. 88: 2767-2774, 2003；)研究了在来自具有 1型和 2型糖尿病 (1/2型家族;)或常见 2型 糖尿病家族的 2型糖尿病患者以及在具有成年发作的 1型糖尿病和对照受试者中 的 T F-α启动子多态性 (在位置一 308和一 238的 G—到一 A置换)与 HLA-DQB 1基因型相关。 TNF-a (308) AA/AG基因型频率在成年发作的 1型患者中增加 (55%, 126中的 69个；)， 但是与对照比较 (； 33%, 95/284;针对 1型 P小于 0.0001)其 在来自 1/2型家族的 2型患者 (35%, 33/93)或普通 2型家族 (31%, 122 of 395)类似。 TNF-a (308) A和 DQB 1 * 02等位基因在 1型患者 (Ds = 0.81; P小于 0.001对在 对照中 Ds = 0.25)和在来自 1/2型家族的 2型患者 (；针对对照 Ds=0.59, P小于 0.05) 是连锁不平衡的， 但是在普通 2型患者中则不是这样 (Ds = 0.39)。 在来自 1/2型 家族仅与 DQB * 02—起的 2型患者中， 多态性与胰岛素一缺陷型表型相关， 而 与具有 GG的那些相比， 具有 AA/AG的普通 2型患者具有更低的腰：臀比 [0.92 (0.12)对 0.94 (0.11), P = 0.008]和更低的空腹 C肤浓度【0.48 (0.47)对 0.62 (0.46) nrnol/升， P=0.020]， 而不管 DQB 1 * 02是否存在。 作者得出结论， 即 TNF-a不 大可能是负责改变 2型糖尿病患者的表型的染色体 6的短臂上的第二个基因，所 述 2型糖尿病患者来自具有 1型和 2型糖尿病的家族。
Shbaklo等 (Hum. Immunol. 64: 633-638, 2003)在黎巴嫩的 210名糖尿病患者 组中评估在位置一 863和一 1031的 T F-α启动子多态性和它们与 1型糖尿病的 关联。 它们的结果显示在该群体中， -863的 C等位基因是占优势的， 而 A等位 基因非常少 (2%)。 然而， 在位置一 1031 C和 T等位基因分布在患者组 (分别地 17.8%对 82.2%)和对照组 ((21.4%对 79.6%)相似。没有发现在位置 1031的 TNF-a 基因型与 1型糖尿病相关，如通过基于家族的关联测试和传递不平衡测试所证实 的。 然而， 当对患者基因型进行比较时， 发现在 1型糖尿病男性中存在隐性 CC 基因型， 但是在 1型糖尿病女性中不存在隐性 CC基因型。
从患有心肌梗塞的 641 名患者和 710 名对照受试者的研究， Hemnann等 (Europ. I. Clin. Invest. 28: 59-66, 199)得出结论， 即 T F-α基因的多态性不大可能 以一种重要的方式促进冠状动脉心脏疾病的风险，但是一 308突变应该与肥胖症 相关进一步研究。
因为己经报道了 TNF-a的表达在肥胖症啮齿类动物模型和肥胖人的脂肪组 织中增加， TNF-a被认为是肥胖症的候选基因。 Norman 等 （J Clin. Invest. 96: 158-162, 1995)对皮玛印第安人的靠近 T F-α基因的 3个多态二核营酸重复序列 基因座的基因型进行评分。在同胞配对连锁分析中， 如通过流体静力学称重所测 量的， 体脂肪的百分比与最接近 (10 kb)T F-a的标记连锁 (304个同胞配对， P = 0.002)。通过变量分析， 相同的标记与体重指数 (BMI)相关 ((P二 0.01)。 为了搜索 可能有助于肥胖症的在 TNF-a中的 DNA变体， 他们对来自 20个肥胖和 20个较 瘦受试者的基因进行了 SSCP分析。没有证实在位于启动子区的单一多态性的等 位基因和体脂肪的百分比之间存在关联。
Rosmond等（J Clin. Endocr. Nfetab. 86: 2178-2180, 2001)在 284名 1944年出 生的不相关的瑞典人中检验了在 T F-α基因启动子的位置一 308的 G—到一 A 置换对肥胖症和胰岛素、葡萄糖和脂质代谢以及循环激素包括唾液皮质醇的估计 的可能的影响。 基因型揭示对于等位基因 G的等位基因频率为 0.77， 而对于等 位基因 A的等位基因频率为 0.23。 在 TNF-a基因型之间唾液皮质醇水平的差异 的检测揭示:与其他的基因型比较， 在稀有的等位基因的纯合体中， 在早晨、 在 用标准化的午餐剌激之前以及在用标准化的午餐剌激后 30和 60分钟，皮质醇水 平明显更高。此外， 与其他基因型组相比， 稀有等位基因的纯合体具有向更高平 均值的体重指数、 腰臀比和腹部径向直径的趋势。 结果还显示在具有 A/A基因 型的人中朝向升高的胰岛素和葡萄糖水平的较弱的趋势。 Rosmond等提示皮质醇 分泌的增加与这种多态性相关可能是构成先前观察到的 Ncol TNF-a多态性和肥 胖症、 以及胰岛素抗性之间的相关性基础的内分泌机制。
为了评估 TNF-a在雄激素过多症的发病机理中的作用， Escobar-Morreale等 ((J. Clin. Endocr. Metab. 86:3761-3767, 2001)在体重指数匹配的 60个雄激素过多 症患者和 27个健康对照的组中， 评估了血清 T F-α水平以及在 T F-a基因的启 动子区中的一些多态性。 与对照比较， 雄激素过多症患者具有轻度增加的血清 TNF-a水平。 当受试者根据体重分类时， 与较瘦对照相比， 血清 TNF-a仅在较瘦 患者中增加;当比较肥胖患者与肥胖对照时发现这种差异并不具有统计学上的显 著意义。研究的 TNF-a基因多态性等同地分布在雄激素过多症患者和对照中。然 而， 当考虑患者组和对照组时， 具有一 308A变体的携带者显示增加的基础和醋 酸亮丙瑞林剌激的血清雄激素和 17-经基孕酮水平。 作者得出结论， 即 TNF-a系 统可能有助于雄激素过多症的发病机理。
De Groof等 ((J. Clin. Endocr. Metab. 87: 3118-3124, 2002)在感染 (admission) 后的头三天， 在 27名由于脑膜炎球菌的败血症而具有严重的脓毒性休克的儿童 中评估了 GH/IGF 1轴和 IGF—结合的蛋白质 (IGFBPs), IGFBP3蛋白酶，葡萄糖， 胰岛素和细胞因子的水平。 中位值年龄是 22个月。 在 6小时 GH曲线中， 与在 存活者中的平均 GH水平相比， 非存活者具有极高的 GH水平， 其明显的不同。 对于总 IGF 1， 游离 IGF 1, IGFBP 1, IGFBP3蛋白酶活性， IL6,和 T F-α的水平， 在非存活者和存活者之间发现了显著的不同。 儿科死亡率风险评分与 IGFBPI, IGFBP3蛋白酶活性， IL6和 TNF-a的水平以及总的 IGF 1和游离 IGF 1的水平显 著相关。 GH和 IGFBP 1的水平在非存活者中极度增加， 而总的和游离的 IGF 1 水平显著降低并且伴随高水平的细胞因子 IL6和 T F-a。
Mira等 （J.A.M.A. 282: 561-568, 1999)报道了在患有脓毒性休克的患者中， 他们称之为 T F2等位基因的一 3086-A多态性的频率的多中心病例对照研究的 结果。研究了患有脓毒性休克的 89名患者和 87名健康的不相关的血液供体。在 患有脓毒性休克的患者中死亡率是 54%。对照和患者的多态性频率仅在 T F2等 位基因中不同 (在脓毒性休克和对照组分别为 39%对 18%, P=0.002)。 在脓毒性 休克患者中， 在那些己经死亡的患者中， T F2多态性频率明显更高 (52%对比在 存活组中的 24% P=0.008) 。 T F-α的浓度对于 T F2(68%)比对于 TNF 1(52%) 要高，但是它们的中位值没有明显不同。 Mira等估计具有 T F2等位基因的患者 具有 3.7-倍的死亡风险。
因为致死的脑型疟与高循环水平的肿瘤坏死因子一 α相关， 所以 McGuire 等 (Natune 371 : 508-511, 1994)在 R比亚儿童中进行了大规模的病例对照研究。 该 研究显示 T F2等位基因的纯合体具有 7的相对死亡风险或由于脑型疟而具有严 重的神经学后遗症， 所述 T F2等位基因是 TNF-α基因启动子区的变体 (Wilson 等， Hum. Molec. Genet. 1: 353,1992)。 尽管 TNF2等位基因与一些邻近的 HLA 等位基因具有连锁不平衡， 但是 McGuire等显示该疾病关联不依赖于 HLA I类 和 II类变化。 所述数据显示细胞因子基因的调节多态性可以影响严重感染的后 果。 比亚人中的 T F2等位基因维持在 0.16的基因频率显示在纯合体中的脑 型疟的增加危险由一些生物学优势所平衡。
Hill (Proc. Assoc. Am. Phys. Ill : 272-277, 1999)综述了对于疟疾的敏感性和 抗性的遗传基础， 并且列表显示了 10种已知影响针对镰状疟原虫和 /或间日疟原 虫的敏感性或抗性的基因。他指出 T F基因启动子的不受调节的变体 (Wilson等， Hum. Molec. Genet. 1:仅 353, 1992)与脑型疟 (McGuire等， Nature 371 : 508-511, 1994)的关联已经促进了评估可能减少该细胞因子活性的药剂 (van Hensbroek 等， J. Infect. Dis. 174: 1091— 1097, 1996)。
通过 T F启动子区的系统 DNA指纹， Knight等 (Nature Genet.22: 145-150, 1999)鉴定了这样的 S P， 所述 S P 导致螺旋一转角一螺旋转录因子 OCT 1 (POU2F 1)与复合蛋白质 .DNA相互作用的新区域的结合并且改变在人单核细胞 中的基因表达。 在约 5%的非洲人中发现的 OCT1—结合基因型在大规模的比较 西非和东非人群的病例和对照的研究中， 在关于其他已知的 T F多态性和连锁 的 HLA等位基因校正后， 与针对脑型疟的倍增加的敏感性相关。
Galbraith和 Pandey (Hum. Genet. 96: 433-436, 1995)在患有斑秃的 50名患者 中研究了肿瘤坏死因子一 α的 2个多态性系统。 Wilson等 (Hum. Molec. Genet. 1 : 353, 1992)在人中检测了首个双等位基因 T F-α多态性；这包括在该基因的启动子 区的位置一 308从 G-A的单个碱基改变。 这种较少见的等位基因， 在一 308的 A (称为 T2)显示在患有 IDDM的患者中的增加的频率， 但是这取决于 HLA-DR3 中的共同发生的增加， 所述 HLA-DR3 与 T2 相关。 由 D'Alfonso 和 Richiardi(Immunogenetics 39: 150-154, 1994)所述的第二个 T F-α多态性， 还包括 在该基因的位置一 238处的 G—到 ·Α转换。在斑秃中， Galbraith和 Pandey (Hum. Genet. 96: 433-436, 1995)发现 T1/T2表型的分布在具有该疾病的斑片形式的患者 和具有系统 ((totalis/universalis)疾病的患者之间不同的 T 1 /T2表型分布。 在关于 第二个系统的表型的分布中没有明显的差异。该结果显示在 2种斑秃形式之间的 遗传异质性并且提示该 T F-α基因紧密连锁定位在染色体 6上的主要组织相容 性复合物中，其中该基因被定位在染色体 6上并且可能在该疾病的斑片形式的发 病机理中具有作用。 Mulcahy等 ((Arn. J. Hum. Genet. 59:676-683, 1996)在 50个复合类风湿性关 节炎 (RA)家族中确定了来自 T F区的 5个微卫星标记的遗传特性。 总之， 观察 到了 47 个不同的单倍型。 其中一个在 35.3%的受影响的个体中出现， 而仅在 20.5%的未受影响的个体中出现 ((P小于 0.005)。 该单倍型说明了 21.5%的母体单 倍型转移到受影响的子代中， 仅 7.3%的单倍型没有传递到受影响的子代 ((P=0.0003)中。另外的研究显示肿瘤坏死因子一淋巴毒素 (T F-LT)区域影响针对 RA 的敏感性， 这与 HLA-DR 不同。 所述研究使用如 Spielman 等 ((Am. J. Hum. Genet. 52: 506-516, 1993)所述的传递不平衡测试 (transmission disequilibrium test, TDT)。
T F-α可能涉及强直性脊柱炎和类风湿性关节炎的发病机理。 Gorman 等 (New Eng. J. Med. 346: 1349-1356, 2002)测试了在治疗强直性脊柱炎中抑制 T F-α的功效。 他们使用依那西普， 一种人 75-kD (p75)T FR2 (T FRSF 1 B)的 嵌合融合蛋白， 其与人 IgG 1的？。 部分连接。 在患有活动的炎性疾病的 40名 患者中治疗 4个月导致快速、 显著和持续的改善。
Ota等 (Genes Immunity 1 : 260-264, 2000；)使用位于所述基因附近的二核昔酸 重复序列多态性，测试了来自 136个家庭的 192个同胞配对的成年日本妇女在骨 质疏松症和骨质减少表型和 T F-α基因座的等位基因变体之间的遗传连锁。 T F-a基因座显示与骨质疏松症的连锁的证据，其中在不一致的配对中平均等位 基因共享为 0.478(P二 0.30)，在一致受影响的配对中为平均等位基因共享为 0.637 (P=0.001)。 与骨质疏松症的连锁在一致受影响的配对中也是显著的 ((P=0.017)。 局限于他们同龄组的经绝后的妇女的分析显示对于两种表型相似的或甚至更强 的连锁。
Winchester等 (Hum. Genet. 107: 591-596, 2000)在 2个群体组中研究了 TNF-a 基因的一 3086-A变体和血管紧张素转化酶 (ACE)的插入 /缺失变体与自我报道的 儿童哮喘史之间的关联。 -308A等位基因在英国 /爱尔兰群体中与自我报道的儿童 哮喘之间显著相关， 但是在南非群体中则不是这样。 ACE DD基因型在任一群体 中都不与儿童哮喘相关。 因此， -308A等位基因或连锁的主要组织相容性复合物 变体在英国 /爱尔兰群体中可能是儿童哮喘的遗传危险因子。
Koss等 (Genes Immun. 1 : 185-190, 2000)发现具有与末端结肠炎比较的大面 积结肠炎 (extensive compared to distal colitis)的女性而不是男性明显更可能具有 T F基因的一 3086-A启动子多态性。 相关性在这样的女性中甚至更强， 所述女 性还在 LTA基因的位置 720具有 A而不是 C。 这些多态性还在具有局限性回肠 炎的患者中与显著更高的 T F产生相关， 而在具有溃疡性结肠炎的患者中， 在 T F基因中的位置一 238用 A取代 G与 T F的更低的产生相关。
Sashio等 ((Immunogenetics 53: 1020-1027, 2002)研究 TNF基因和 T FRSF 1 B基因的多态性在针对溃疡性结肠炎和局限性回肠炎的敏感性中的作用。他们研 究了具有局限性回肠炎的 124名患者，具有溃疡性结肠炎的 106名患者和 111名 不相关的健康对照。 他们检查了 T F-α基因的 2个 S Ps:-3086-A和一 2386-A。 在溃疡性结肠炎患者和对照之间， 在单倍型 AGC308A, -2386)的携带频率上具 有差异 (优势率 4.76) 。
Van Heel等 (Hum. Molec. Genet. 11 : 1281— 1289, 2002)指出 TNF表达在炎 性肠病 ((IBD)中增加并且 T F被定位在 IBD3敏感性基因座上。他们通过传递不 平衡和病例一对照分析显示在 2个独立的高加索人同龄组中， T F-857C启动子 多态性与 IBD的新关联是明显的 (；总的来说， 在 587个 IBD家庭中 P = 0.001)。 对于溃疡性结肠炎和局限性回肠炎， 观察到 TNF-857C与 IBD亚型的另外的遗 传关联， 但是仅在不携带普通 NOD2 突变的患者中观察到这种现象。 这些数据 显示遗传的隐性模型。 转录因子 OCT1结合 T F-857T, 但是不结合 T F-857C, 并且在体内和体外在邻近结合位点与促炎性 FKB p65亚基 RELA相互作用。作 者猜测在消化道组织中这些转录因子与 T F的特异性等位基因的相互作用可能 与 IBD的发病机理相关。
在患有局限性回肠炎的 304名澳大利亚患者和 231名健康对照的的病例一 对照研究中， Fowler等 (.1. Med. Genet. 42:523-528, 2005)发现更高产生的 IL10 -10826和 T F-α -857C等位基因与狭窄疾病的显著相关性。 在多元分析后当这 些等位基因组合并持续时， 相关性最强。
为了研究 T F-a启动子多态性是否与乙型肝炎病毒 (HP V)感染的清除相关， Kim等 (Hum. Molec. Genet. 12:2541-2546, 2003)研究了 1,400名韩国受试者的基 因型， 其中 1,109名是慢性 HB V携带者， 291名自发恢复。 先前报道的与更高 血浆水平相关的 T F启动子等位基因介 308A的存在或一 863A等位基因的缺失) 与 HBV 感染的消退强相关。 单倍型分析揭示 TNF-a单倍型 1 C-1031T;-863C; -857C; -3086;-2386；— 1636)和单倍型 2 (-1031C;-863A;-857C;-3086;-2386;— 1636) 与 HB V清除显著相关， 分别显示保护性抗体产生和持续性的 HB V感染 ((P= [0132] 优选实施方案的药物组合物可以用于治疗由 T F-α活性介导的疾病。 还提 供了治疗由 T F-a活性介导的疾病的方法，所述治疗包括向需要所述治疗的受试 者施用治疗有效量的优选实施方案的化合物，例如以药物组合物的形式施用。还 提供将优选实施方案的化合物用于制备药物，以及将优选实施方案的化合物用于 制备药物的应用， 所述药物例如用于治疗由 TNF-a活性介导的疾病的药物组合 物。 治疗包括治疗现存疾病或病症， 以及预防 (预防)疾病或病症。
病症例如疾病， 其可以用优选实施方案的化合物例如通过抑制或阻抑 TNF-a活性治疗， 包括由 TNF-a活性介导的那些。 所述病症 (疾病)包括 (慢性)炎 性疾病， 变应性疾病， 自身免疫疾病， 心血管疾病， 神经变性疾病， 病毒疾病如 逆转录病毒疾病， 癌症， 疼痛， 在移植后发生的疾病。 更具体地， 所述疾病或病 症包括类风湿性关节炎， 骨关节炎， 骨质疏松症， 多发性硬化， 动脉粥样硬化， 银屑病， 系统红斑狼疮 ((SLE), (急性)肾小球性肾炎， 哮喘， 如哮喘支气管扩张， 慢性阻塞性肺疾病 (COPD), 呼吸窘迫综合征 (A1ZDS), 炎性肠病 (例如， 局限性 回肠炎)， 结肠炎 (例如， 溃疡性结肠炎)， 败血症， 疟疾 (例如， 脑型疟疾)， AmS, 神经变性疾病如阿尔茨海默病， 帕金森病， 格一巴二氏综合征， 移植物抗宿主疾 病 (GvHD)，血管炎：葡萄膜炎，（胰岛素一依赖性)糖尿病 (例如，糖尿病)，（成年) (多 发性)创伤的后果 (例如器官功能衰竭)， 急性和慢性疼痛 (例如， 神经病痛， 如原 发和继炎性皮炎)， 特应性皮炎， 脱发， 鼻炎 (变应性)， 变应性结膜炎， 脑膜炎， 重症肌无力， 硬皮病， 结节病；和癌症， 如血液构建系统的癌症形式。 定义
除非另有说明， 术语"烃基"本身或作为其他取代基的一部分表示直链 (即未 分支的；)或支链的， 或环状烃基， 或其组合， 它们可以是充分饱和的、 单不饱和 的或多不饱和的，具有所指定的碳原子数 (即 d-do表示 1-10个碳原子)。饱和烃 基的例子包括但不限于诸如以下的基团： 甲基， 乙基， 正丙基， 异丙基， 正丁基， 叔丁基， 异丁基， 仲丁基， 环己基， （环己基)甲基， 环丙基甲基， 例如， 正戊基、 正己基、 正庚基、 正辛基的同系物和异构体， 等等。 不饱和烃基的例子包括， 但 不限于， 乙烯基， 2-丙烯基， 丁烯基， 2-异戊烯基， 2- (丁间二烯基)， 2,4-戊二烯 基， 3-(1,4-戊二烯基)， 乙炔基， 1-和 3-丙炔基， 3-丁炔基， 以及高级同系物和异 构体。 "烷基 "表示支链、 支链或环状的饱和烃基， 该术语包括直链烷基， 如甲 基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊基、 己基、 庚基、 辛基、 壬基、 癸基、 十一烷基、 十 二烷基等。 该术语还包括直链烷基的支链异构体， 包括但不限于： -CH (CH3) 2、 -CH (CH3) (CH2C¾) 、 -CH (CH2C¾) 2 、 _C (CH3) 3 、 _C (CH2CH3) 3 、 _CH2CH (CH3) 2 、 _CH2CH (CH3) (CH2CH3) 、 _CH2CH (CH2CH3) 2 、 ~CH2C (CH3) 3 、 _CH2C (C C¾) 3 、 -CH (CH3) CH (CH3) (CH2CH3) 、 -CH2CH2CH (CH3) 2 、 -CH2CH2CH (C¾) (CH2C¾) 、 — CH2CH2CH (CH2CH3) 2、 — CH2CH2C (CH3) 3、 — CH2CH2C (CH2CH3) 3、 _CH (CH3) C¾CH (CH3) 2、 -CH (CH3) CH (CH3) CH (C¾) 2、 -CH (CH2CH3) CH (C¾) CH (CH3) (CH2C¾)等。 该术语还包括 环烷基， 如环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基和环辛基， 且这些环可被 上述直链和支链烷基取代。 因此， 优选的烷基包括具有 1-10个碳原子的直链烷 基和支链烷基， 更优选 CM烷基， 例如 d—4烷基。
在本文中， 术语 "CH含氟烷基"指的是含有 1-9个氟原子的 C^4烷基。 在本文中， 术语 "烷氧基"表示 "烷基 -0-" ， 其中烷基的定义如上所述。 在本文中， 术语"芳环"是指具有 5-14个环碳原子的单环和多环碳环芳族基 团，碳环芳基是芳族环中所有环原子均是碳的芳基。芳环的例子如苯基、萘基等。
在本文中， 术语 "杂环基"是指具有 1-3个杂原子作为环原子且其余环原子 为碳原子的 C3-C20环状基团， 其中所述杂原子选自 0、 3或 杂环基包括含氮 杂环、含氧杂环、含硫杂环， 文中所述的五元或者六元的含氮杂环的例子如吡咯 基、 咪唑基、 吡唑基或吡啶基、 嘧啶基等， 所述的五元或者六元的含氧杂环的例 子如呋喃基或吡喃基， 所述的五元或者六元的含硫杂环的例子如噻吩基。
术语"氧代"在文中表示双键连接于碳原子的氧。
术语 "卤素"指的是 F、 Cl、 Br或 I。 本发明包括本发明的青藤碱衍生物及其药学上可接受的盐。
药学上可接受的盐的例子包括本发明的青藤碱衍生物与无机酸和有机酸形 成的盐， 可使用的无机酸的例子包括盐酸、 氢溴酸、 硝酸、 硫酸、 磷酸， 等等； 有机酸的例子包括甲酸、 草酸、 乙酸、 酒石酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 苹果酸、 甲磺 酸、 苯磺酸、 对甲苯磺酸， 等等， 还包括与碱性氨基酸如精氨酸、 赖氨酸、 鸟氨 酸等形成的盐， 以及与酸性氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐； 药学上可接 受的盐的例子还包括本发明的青藤碱衍生物与无机碱或有机碱形成的盐，所述无 机碱的例子包括碱金属氢氧化物 (例如， 氢氧化钠、氢氧化钾等）， 碱土金属氢氧 化物 (例如， 氢氧化钙、 氢氧化镁等）， 以及铝、 铵的氢氧化物， 等等。 可使用的 有机碱的例子包括三甲胺、 三乙胺、 吡啶、 皮考啉、 乙醇胺、 二乙醇胺、 三乙醇 胺、 二环己基胺、 Ν，Ν' -二苄基乙二胺， 等等。
本发明的青藤碱衍生物， 可以包括其对映异构体， 非对映异构体， 互变异构 体和顺式 /反式构象异构体。 所有这些异构体形式包括在优选实施方案中， 包括 其混合物.优选实施方案的化合物可以具有手性中心， 例如它们可以包含不对称 的碳原子并且可以因此以对映异构体或非立体异构体及其混合物例如外消旋物 的形式存在。 不对称的碳原子可以以 (R) -， (S)-, 或 (R,S)-构型， 优选地以 ((R)-或 (S)-构型或可以作为混合物存在。 根据需要， 根据获得纯异构体的常规方法可以 分离异构体混合物。优选实施方案的化合物还可以包括互变异构体，其中所述互 变异构体可以存在。
此外，优选实施方案的化合物的一些晶形可以作为多晶型物存在，其包含在 优选实施方案内。此外， 一些优选实施方案的化合物还可以与水或其它有机溶剂 形成溶剂合物。 所述溶剂合物类似地包含在优选实施方案的范围内。 组合物
本发明还提供了含有本发明青藤碱衍生物的组合物。
在本发明中， 可用常规方法将本发明的青藤碱衍生物与药学上可接受的载 体、 赋形剂或稀释剂相混合， 形成本发明组合物。 所述组合物可为药物组合物。 所述载体包括 (但并不限于)： 盐水、 缓冲液、 葡萄糖、 水、 甘油、 乙醇、 及其组 合。 本发明的组合物可以为固态 (如颗粒剂、 片剂、 冻干粉、 栓剂、 胶囊、 舌下 含片等)或液态 (如口服液或注射剂等)或其他合适的形状。本发明活性成分的含量 通常为组合物重量的 0.01-99%， 较佳地为 0.1-95%， 更佳地为 0.1-90%， 最佳地 1-80%。
本发明的组合物， 可以为单剂或多剂形式。 按施用剂量计， 通常含有 l-1000mg/剂， 较佳地约 2-500mg/剂， 更佳地 5-100mg/剂。
本发明的合物可以通过常规形式使用， 其中包括 (但并不限于；)： 口服、肌注、 皮下注射、 静脉注射等。 优选口服。 本发明组合物的施用量， 按活性物质计算， 通常为每天约 0.01-500mg/kg体重， 较佳地约 0.1-50mg/kg体重。 药物组合物及其用途
本发明还提供了一种药物组合物， 它含有： （a)有效量的本发明的青藤碱衍 生物； 以及 (b)药学上可接受的载体、 稀释剂或赋形剂。
如本文所用， 术语"本发明的组合物"包括药物组合物， 只要其含有本发明 的青藤碱衍生物作为活性成分。
本发明中， 术语 "含有"表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合 物中。
本发明中， "药学上可接受的"成分是适用于人和 /或动物而无过度不良副反 应 (如毒性、 剌激和变态反应)， 即有合理的效益 /风险比的物质。
本文所用的术语"有效量 "指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量， 或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该 对象的体型和健康状况、 病症的性质和程度、 以及选择给予的治疗剂和 /或治疗 剂的组合。 因此， 预先指定准确的有效量是没用的。 然而， 对于某给定的状况而 言， 可以用常规实验来确定该有效量， 临床医师是能够判断出来的。
为了本发明的目的， 有效的剂量为给予个体约 0.01 毫克 /千克至 500毫克 / 千克， 较佳地 0.05毫克 /千克至 200毫克 /千克体重的本发明活性物质。 此外， 本 发明的活性物质还可与其他治疗剂一起使用。
药物组合物还可含有药学上可接受的载体。术语 "药学上可接受的载体"指 用于治疗剂给药的载体。它们符合如下条件： 本身不诱导产生对接受该组合物的 个体有害的抗体， 且给药后没有过分的毒性。这些载体是本领域普通技术人员所 熟知的。在《雷明顿药物科学》（Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Pub. Co. , N.J. 1991年；)中可找到关于药学上可接受的载体的充分讨论。这类载体包括 (但并不限于)： 盐水、 缓冲液、 葡萄糖、 水、 甘油、 乙醇、 佐剂、 及其组合。
治疗性组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。 另外， 这些载体中还可能存在辅助性的物质， 如润湿剂或乳化剂、 pH缓冲物质 等。
所述化合物或其药学上可接受的盐及其组合物可通过口服以及静脉内、肌内 或皮下等途径给药； 优选的是口服给药。 固态载体包括： 淀粉、乳糖、磷酸二钙、 微晶纤维素、 蔗糖和白陶土， 而液态载体包括： 无菌水、 聚乙二醇、 非离子型表 面活性剂和食用油 (如玉米油、 花生油和芝麻油；)， 只要适合活性成分的特性和所 需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例 如调味剂、 色素、 防腐剂和抗氧化剂如维生素 E、 维生素 C、 BHT和 BHA。
本发明的组合物及其药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具 中。 通常， 在本发明的药物组合物中， 青藤碱衍生物作为活性成分占总重量的 0.01-99%, 较佳地为 0.1-95%， 更佳地为 0.1-90%， 最佳地 1-80%， 其余为药学 上可接受的载体以及其他添加剂等物质。 给药方式和剂型
本发明的药物组合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。
本发明所述的药物组合物的剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分 有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。组合物可以制成适合所需给药方式 的各种形式。 例如， 药物组合物可以制成片剂、 丸剂、 粉剂、 锭剂、 袋剂、 扁囊 剂、 酏剂、 悬浮剂、 乳剂、 溶液、 糖浆、 气雾剂 (作为固体或在液体基质中)、 油 膏、 软凝胶和硬凝胶胶囊、 栓剂、 无菌可注射液、 无菌包装的粉末等。 本发明的 青藤碱衍生物较佳为存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。
本发明的青藤碱衍生物组合物优选口服给药，口服形式包括但不限于：片剂、 胶囊、 可分散的粉末、 颗粒或悬浮液 (含有如约 0.05-5%悬浮剂)、 糖浆 (含有如约 10-50%糖；)、 和酏剂 (含有约 20-50%乙醇；)， 或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式 (在等渗介质中含有约 0.05-5%悬浮剂)进行非肠胃给药。 例如， 这些药物制剂可 含有与载体混合的约 25-90%， 通常约为 5-60% (重量;)的活性成分。
一旦配成本发明的组合物，可将其直接给予对象。待预防或治疗的对象可以 是动物； 尤其是人。含本发明活性物质的药物组合物， 可以经口服、皮下、皮内、 静脉注射等方式应用。 治疗剂量方案可以是单剂方案或多剂方案。
本发明的青藤碱衍生物及其组合物也可经肠胃外或腹腔内给药。也可在适当 混合有表面活性剂 (如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性物质的溶液或悬浮液。 还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和 使用条件下， 这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。
适应于注射的药物形式包括： 无菌水溶液或分散液和无菌粉 (用于临时制备 无菌注射溶液或分散液)。 在所有情况中， 这些形式必须是无菌的且必须是流体 以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的， 且必须能防止微生 物 (如细菌和真菌)的污染影响。 载体可以是溶剂或分散介质， 其中含有如水、 醇 (如甘油、 丙二醇和液态聚乙二醇；)、 它们的适当混合物和植物油。
所用的活性成分的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而 变化。然而， 通常当本发明提取物每天以约 l-300mg/kg动物体重的剂量给予时， 能得到令人满意的效果， 较佳地每天以 1-3次分开的剂量给予， 或以缓释形式给 药。 对大部分大型哺乳动物而言， 每天的总剂量约为 5-1000mg， 较佳地约为 10-500mg。 适用于内服的剂量形式， 包含与固态或液态药学上可接受的载体密 切混合的约 l-200mg 的活性成分。 可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。 例 如， 由治疗状况的迫切要求， 可每天给予若干次分开的剂量， 或将剂量按比例地 减少。
本发明的组合物或药物还可含有其它活性成分，例如非 体抗炎药、糖皮质 激素、 免疫抑制剂等。
当两种或两种以上的药物联合给药时，一般具有优于两种药物分别单独给药 的效果。优选地， 联合施用的药物或其它制剂不干扰本发明青藤碱衍生物的治疗 活性。 实施例
下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。应理解， 这些实施例仅用于说明 本发明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件， 或按照制造厂商所建议的条件。
Figure imgf000031_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.615 g, 1.96 mmol), 二氯甲烷 (10 mL；)。 常 温搅拌下， 加入对甲基苯硫酚（0.368 g, 2.96 mmol, 1.5 equiv)。加毕， 继续搅拌， 至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液中加入石油醚， 使固体析出， 抽滤， 滤饼 用石油醚洗， 干燥， 得产物 （0.68 g, 79%) 。 m.p. 224-225 °C (dec); [a]D = 7.0 (c 0.50, CHC13-CH30H = 10: 1); Ή MR (DMSO-de, 400 MHz): δ 9.47 (IH, s), 8.18 (IH, s), 7.57 (2H, d, J= 8.0 Hz), 7.25 (2H d, J = 7.6 Hz), 7.02 (IH, d, J = 8.4 Hz), 6.67 (IH, d, J = 8.0 Hz), 6.27 (IH, d, J = 2.0 Hz), 4.47 (IH, s), 4.18 (IH, d, J= 15.2 Hz), 3.53 (3H, s), 3.11-3.18 (IH, m), 2.99 (IH brs), 2.39 (IH, d, J= 15.2 Hz), 2.33 (3H, s), 2.24-2.32 (IH, m), 1.93 (3H, s), 1.80 (IH td, J = 4.4, 10.8 Hz), 1.62-1.76 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 75 MHz): δ 192.4, 149.4, 143.9, 137.3, 132.7, 132.0, 129.8, 128.3, 123.7, 120.3, 117.8, 113.3, 59.7, 53.9, 48.4, 45.9, 44.7, 43.6, 41.7, 35.5, 20.6; IR (KBr): 3325.9, 2940.9, 2831.0, 1666.8, 1619.8, 1491.3, 1291.3, 1202.0, 1151.8, 1092.9, 808.1, 497.4 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C25H28Ni04Si (M+H+)的计算值： 438.1734, 实测值： 438.1742.
Figure imgf000032_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 加入 4- (三氟甲基）苯硫酚 （0.62 g, 3.51 mmol, 1.1 equiv)。 加毕， 继 续搅拌， 自然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白 色固体 （1.21 g, 77%) 。 m.p. 240-241 °C (dec); [a]D 27 = -19.9 (c 0.60, DMSO); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.53 (IH, s), 8.24 (IH, s), 7.82 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.75 (2H, d, J = 8.0 Hz), 6.96 (IH, d, J = 8.4 Hz), 6.68 (IH, d, J = 8.0 Hz), 6.19 (IH, d, J = 2.0 Hz), 4.79 (IH, s), 4.19 (IH, d, J = 15.2 Hz), 3.53 (3H, s), 3.18 (IH, d, J = 2.8 Hz), 3.03 (IH, s), 2.41 (IH, d, J = 15.2 Hz), 2.31-2.39 (IH, m), 2.16 (3H, s), 1.84-1.97 (IH, m), 1.68-1.78 (2H, m); 19F NMR (CDC13, 400 MHz): δ-59.69; IR (KBr): vmax 3437.6, 2954.3, 1692.0: 1682.3, 1629.7, 1484.1, 1323.9, 1286.4, 1202.8, 1173.2, 1116.4, 1091.5, 1061.8, 812.2 cm"1; MS (ESI, m/z): 492.0 (M+H)+, C25H24F3N04S的分析计算值 C: 61.09; H: 4.92; N: 2.85, 实测值 C: 60.97; H: 4.98; N: 2.68.
实施例 3
Figure imgf000033_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加 2-溴苯硫酚（0.36 mL, 3.51 mmol, 1.1 equiv)的二氯甲烷 (15 mL)溶液。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至 TLC 显示原料消失。 处理， 反应液蒸 干， 过柱纯化， 得白色固体 （1.25 g, 78%) 。 m.p. 205-207 °C (dec); [a]D 27 = 14.7 (c 0.50, DMSO); 1H MR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.50 (1H, s), 8.20 (1H, s), 7.90 (1H, t, J = 1.6 Hz), 7.65 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.53 (1H, d, J= 8.0 Hz), 7.37 (1H, t, J= 8.0 Hz), 7.00 (1H, d, J= 8.4 Hz), 6.67 (1H, d: J= 8.4 Hz), 6.23 (1H, d, J= 2.0 Hz), 4.66 (1H, s), 4.18 (1H, d, J= 15.2 Hz), 3.52 (3H s), 3.15 (1H, d, J= 2.8 Hz), 3.01 (1H, s), 2.40 (1H, d, J= 15.2 Hz), 2.28-2.36 (1H, m)， 2.06 (3H, s), 1.79-1.91 (1H, m), 1.66-1.78 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 192.4, 149.5, 144.1, 144.0, 138.4, 133.4, 131.0, 130.4, 130.1, 127.6, 123.8, 122.1, 120.5, 117.7, 113.3, 59.9, 53.9, 48.4, 45.9, 44.6, 43.3, 41.7, 39.7, 35.3; IR (KBr): vmax 3457.1, 2932.2, 1694.1, 1626.4, 1556.6, 1484.5, 1449.8, 1379.7, 1286.9, 1203.5, 1175.0, 1146.3, 1085.5, 1001.8, 911.9, 787.3, 514.0 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C24H25N04SBr (M+H+)的计算值： 502.0682, 实测值： 502.0691.
实施例 4
Figure imgf000034_0001
100 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.5 g, 1.6 mmol), 二氯甲烷 (10 mL；)。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加苯硫酚 （0.18 mL, 1.75 mmol, 1.1 equiv) 的二氯甲烷 (5 mL)。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液中加入无水乙 醚， 使固体析出， 抽滤， 滤饼用乙醚洗， 干燥， 得产物 （0.55 g, 81%) 。 m.p. 210-212 °C (dec); [a]D 25 = -3.4 (c 0.20, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H MR (DMSO-de, 400 MHz): δ 9.49 (1H, s), 8.19 (1H, s), 7.68 (1H, d, J= 7.2 Hz), 7.43 (2H t, J = 7.2 Hz), 7.36 (1H, t, J = 7.2 Hz), 7.01 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.67 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.26 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.55 (1H, s), 4.18 (1H, d, J = 15.2 Hz), 3.53 (3H, s), 3.15 (1H, d, J= 2.8 Hz), 3.00 (1H, brs), 2.39 (1H, d, J = 15.2 Hz), 2.26-2.34 (1H, m), 1.96 (3H, s), 1.82 (1H, td, J= 4.8, 10.8 Hz), 1.67-1.76 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 75 MHz): δ 192.5, 149.4, 144.0, 144.0, 135.6, 132.3, 129.2, 128.2, 127.6, 123.8, 120.3, 117.8, 113.3, 59.8, 53.9, 48.4, 46.0, 44.7, 43.4, 41.7, 35.5; IR (KBr): 3449.4, 2932.2, 2497.0, 1692.9, 1630.6, 1580.5, 1481.4, 1381.9, 1286.7, 1202.0, 1145.5, 1001.2, 812.9, 750.2 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C24H26Ni04Si (M+H+)的计算值： 424.1577, 实测值： 424.1577.
实施例 5
Figure imgf000034_0002
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 1.0 g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)， 冰水 浴冷却下慢慢滴加 3-甲基溴苯硫酚 （0.42 mL, 3.51 mmol, 1.1 equiv) 的二氯甲烷 (15 mL)溶液。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液 蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （1.12 g, 80%) 。 m.p. 230-231 °C (dec); [a]D 27 = 1.7 (c 0.60, DMSO); 1H MR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.50 (1H, s), 8.21 (1H, s), 7.49 (1H, s), 7.45 (1H, d, J= 7.2 Hz), 7.30 (1H, t, J = 7.2 Hz), 7.16 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.01 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.67 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.26 (1H, s), 4.55 (1H, s), 4.19 (1H, d, J= 15.2 Hz), 3.53 (3H, s), 3.16 (1H, s), 2.99 (1H, s), 2.39 (1H, d, J = 15.6), 2.33 (3H, s), 2.21-2.36 (1H, m), 1.99 (3H, s), 1.78-1.90 (1H, m), 1.60-1.78 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 192.4, 149.4, 144.0, 138.6 135.4, 132.4, 129.0, 128.2, 123.7, 120.3, 117.8, 113.3, 59.8, 53.9, 48.4, 45.9, 44.7, 43.2, 41.7, 35.4, 20.7; IR (KBr): vmax 3435.5, 2938.8, 1693.4, 1625.5, 1483.7, 1450.5, 1275.0, 1202.9, 1023.8, 787.9, 726.6, 516.8 cm"1; HRMS (MALDI m/z) C25H28N04S (M+H+)的计算值： 438.1734, 实测值： 438.1741.
实施例 6
Figure imgf000035_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 加入对溴苯硫酚（0.66 g, 3.51 mmol, 1.1 equiv)。 加毕， 继续搅拌， 自 然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体（1.54 g, 96%) 。 m.p. 224-225 °C (dec); [a]D 27 = -20.5 (c 0.50, DMSO); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.53 (1H, s), 8.22 (1H, s), 7.55-7.73 (4H, m), 6.99 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.67 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.22 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.57 (1H, s), 4.18 (1H, d, J = 15.2 Hz), 3.51 ( 3H, s), 3.14 (1H, d, J = 2.8 Hz), 3.00 (1H, s), 2.40 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.27-2.35 (IH, m), 2.01 ( 3H, s), 1.77-1.88 (IH, m), 1.65-1.77 (2H, m); "C MR (DMSO-de, 100 MHz): δ 192.5, 149.5, 144.2, 144.0, 135.2, 134.0, 132.1, 127.8, 123.8， 120.7, 120.4, 117.7, 113.3, 59.9, 54.0, 48.4, 45.9, 44.7, 43.5, 41.8, 39.8, 35.4; IR (KBr): vmax 3311.5, 2936.4, 1665.3, 1621.8, 1490.8, 1472.3, 1587.2, 1490.8, 1472.3, 1380.1, 1290.5, 1177.4, 1150.7, 1089.9, 1005.2, 813.5, 611.9 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C24H25N04SBr (M+H+)的计算值： 502.0682, 实测值： 502.0697.
Figure imgf000036_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加 2-甲基溴苯硫酚 （0.41 mL, 3.51 mmol, 1.1 equiv) 的二氯甲 烷 (15 mL)溶液。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应 液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （1.06 g, 76%) 。 m.p. 216-217 °C (dec); [a]D 27 = -18.4 (c 0.50, DMSO); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.49 (IH, s), 8.19 (IH, s), 7.70-7.78 (IH, m), 7.31-7.38 (IH, m), 7.22-7.31 (2H, m), 7.02 (IH, d, J = 8.4 Hz), 6.68 (IH, d, J = 8.4 Hz), 6.36 (IH, d, J = 2.0 Hz), 4.45 (IH, s), 4.19 (IH, d, J = 15.2 Hz), 3.53 (3H, s), 3.13 (IH, d, J = 3.2 Hz), 3.02 (IH, s), 2.41 (IH, d, J = 15.2 Hz), 2.26-2.36 (IH, m), 1.94 (3H, s), 1.84 (IH, dt, J = 4.8, 11.2 Hz), 1.65-1.78 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 192.4, 149.5, 144.0, 144.0, 139.2, 134.5, 132.7, 130.5, 128.3, 127.5, 126.5, 123.9, 120.2, 117.8, 113.4, 60.1, 53.9, 48.5, 45.9, 44.6, 42.4, 41.7, 39.8, 35.3, 20.3; IR (KBr): vmax 3448.4, 2944.5, 1683.1, 1647.4, 1479.5, 1379.7, 1283.3, 1200.7, 1146.3, 912.9, 812.5, 761.9 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C25H28N04S (M+H+)的计算值： 438.1734, 实测值: 438.1750.
Figure imgf000037_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.5 g, 1.6 mmol), 二氯甲烷 (10 mL；)。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加对叔丁基苯硫酚（0.29 mL, 1.68 mmol, 1.05 equiv)的二氯甲 烷 (5 mL)溶液。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应 液蒸干， 过柱纯化， 得产物 （0.51 g, 67%) 。
m.p. 232-233 。C (dec); [a]D 25 = 5.84 (c 0.30, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H MR (DMSO-de, 400 MHz): δ 9.47 (IH, s), 8.18 (IH, s), 7.58 (2H, d, J= 8.0 Hz), 7.44 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.00 (IH, d, J = 8.4 Hz), 6.67 (IH, d, J = 8.4 Hz), 6.26 (IH, d, J = 1.6 Hz), 4.51 (IH, s), 4.18 (IH, d, J = 15.2 Hz), 3.53 (3H, s), 3.14 (IH, brs), 2.99 (IH, brs), 2.39 (IH, d, J = 15.2 Hz), 2.25-2.35 (IH, m), 1.96 (3H, s), 1.82 (IH, td, J = 4.8, 10.8 Hz), 1.66-1.76 (2H, m), 1.29 (9H, s); 13C NMR (CDC13/CD30D = 10/1, 75 MHz): δ 195.0, 151.2, 150.2, 143.9, 143.4, 132.4, 132.2, 128.9, 126.2, 122.7, 121.0, 117.8, 113.6, 60.6, 54.6, 48.9, 46.5, 45.5, 43.9, 41.8, 40.3, 35.9, 34.5, 31.1; IR (KBr): 3439.7, 2935.5, 2866.3, 2359.0, 1693.1, 1631.3, 1482.2, 1286.6, 1202.5, 1146.2, 813.6 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C28H34N1O4S1 (M+H+)的计算值： 480.2203, 实测值： 480.2208.
9
Figure imgf000037_0002
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 加入对氯苯硫酚（0.51 g, 3.51 mmol, l . l equiv)。 加毕， 继续搅拌， 自 然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体（1.32 g, 90%) 。 m.p. 230-231 °C (dec); [a]D 27 = -10.6 (c 0.40, DMSO); 1H MR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.48 (1H, s), 8.18 (1H, s), 7.70 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.48 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.00 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.67 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.24 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.56 (1H, s), 4.18 (1H, d, J = 15.2 Hz), 3.52 (3H, s), 3.14 (1H, d, J = 2.1 Hz), 3.00 (1H, s), 2.40 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.26-2.35 (1H, m), 2.00 (3H, s), 1.83 (1H, dt, J = 5.6, 11.2 Hz), 1.65-1.76 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 192.4, 149.5, 144.1, 144.0, 134.6, 133.8, 132.3, 129.1, 127.9, 123.8, 120.4, 117.7, 113.3, 59.9, 53.9, 48.4, 45.9, 44.7, 43.6, 41.8, 39.7, 35.4; IR (KBr): vmax 3350.8, 2940.3, 1665.9, 1620.6, 1490.8, 1474.9, 1290.9, 1203.1, 1152.0, 1093.0, 815.3 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C24H25N04SC1 (M+H+)的计算值： 458.1187, 实测值： 458.1195. 实施例 10
Figure imgf000038_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加 2-溴苯硫酚（0.42 mL, 3.51 mmol, 1.1 equiv)的二氯甲烷 (15 mL)溶液。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至 TLC 显示原料消失。 处理， 反应液蒸 干， 过柱纯化， 得白色固体 （1.52 g, 95%) 。 m.p.204-205 °C (dec); [a]D 27 = 0.4 (c 0.50, DMSO); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.53 (1H, s), 8.22 (1H, s), 7.93 (1H, dd, J = 1.2, 8.0 Hz), 7.75 (1H, dd, J = 1.2, 8.0 Hz), 7.47 (1H, dt, J = 1.2, 7.6 Hz), 7.29 (1H, dt, J= 1.2, 8.0 Hz), 7.08 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.69 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.42 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.66 (1H, s), 4.19 (1H, d, J = 15.2 Hz), 3.54 (3H, s), 3.06 (1H, d, J = 2.8 Hz), 3.03 (1H, s), 2.41 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.28-2.36 (1H, m), 1.96 (3H, s), 1.85 (1H, dt, J = 4.2, 10.0 Hz), 1.67-1.78 (2H, m); 13C MR (DMSO-de, 100 MHz): δ 192.4, 149.5, 144.3, 144.1, 135.9, 134.1, 133.2, 129.3, 128.4, 127.4, 126.6, 124.1, 120.3, 117.8, 113.4, 59.7, 54.1, 48.5, 45.9, 44.5, 42.8, 41.7, 39.8, 35.3; IR (KBr): vmax 3467.2, 2948.6, 1677.2, 1617.6, 1486.7, 1447.7, 1378.9, 1281.5, 1199.7, 1146.9, 1099.5, 819.1, 761.5 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C24H25N04SBr (M+H+)的计算值： 502.0682, 实测值： 502.0695.
实施例 11
Figure imgf000039_0001
50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( l .O g, 3.19 mmol), 二氯甲烷 (30 mL；)。 冰水 浴冷却下， 加入对氟苯硫酚（0.45 g, 3.51 mmol, 1.1 equiv)。 加毕， 继续搅拌， 自 然升温至 TLC显示原料消失。处理，反应液蒸干，过柱纯化，得淡黄色固体（1.22 g, 87%) 。 m.p. 220-221 °C (dec); [a]D 27 = -11.1 (c 0.60, DMSO); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.48 (1H, s), 8.19 (1H, s), 7.72-7.79 (2H, m), 7.28 (2H, t, J = 8.8 Hz), 7.04 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.67 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.27 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.46 (1H, s), 4.18 (1H, d, J = 15.2 Hz), 3.52 (3H, s), 3.14 ( 1H, d, J = 3.2 Hz), 3.00 (1H, s), 2.39 (1H, d, J = 15.2 Hz), 2.25-2.35 (1H, m), 1.91 (3H, s), 1.80 (1H, dt, J = 4.4, 10.8 Hz), 1.65-1.75 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 192.4, 161.8 (d, J = 244.1 Hz), 149.5, 144.1, 144.0, 135.3 (d, J = 8.4 Hz), 131.0 (d, J = 3.0 Hz), 128.0, 123.8, 120.4, 117.8, 116.2 (d, J= 21.7 Hz), 113.3, 59.6, 53.9, 48.4, 45.9, 44.8, 44.1, 41.6, 39.8, 35.5; 19F NMR (CHCl3/MeOH=l : l, 300 MHz): -113.89; IR (KBr): vmax 3350.0, 2948.4, 2836.5, 1666.2, 1615.2, 1589.9, 1489.4, 1291.7, 1200.2, 1176.0, 1092.6, 904.8, 814.0 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C24H25N04SF (M+H+)的计算值： 442.1483, 实测值: 442.1496.
实施例 12
Figure imgf000040_0001
化合物 1 C398 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （427 mg, 90%) 。 m.p. 206-207。C; [a]D 26 = -42.9 (c 0.40, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.67(1H, d, J = 8.8 Hz), 7.50 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.16-7.24 (3H, m), 6.28 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.41 (1H, s), 3.77 (1H, d, J= 16.0 Hz), 3.64 (3H, s), 3.43 (1H, d, J= 3.2 Hz), 3.08 (1H, s), 2.51 ( 1H, d, J = 16.0 Hz), 2.38 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.32-2.37 (1H, m), 2.22 (3H, s), 2.04 (3H, s), 1.94 (1H, dt, J = 2.8, 12.0 Hz), 1.84 (1H, dt, J = 4.4, 12.4 Hz), 1.56 (1H, d, J = 12.0 Hz); 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.7, 168.0, 167.5, 150.9, 142.2, 141.0, 138.5, 136.3, 133.2, 132.0, 130.9, 130.2, 128.0, 121.8, 116.8, 60.7, 54.9, 50.2, 46.0, 45.7, 44.3, 42.1, 40.8, 37.5, 21.2, 21.0, 20.9; IR (KBr): vmax 3418.8, 2929.8, 1774.5, 1689.6, 1622.1, 1472.0, 1372.9, 1262.9, 1203.3, 1177.8, 1144.3, 1088.3, 1013.3, 929.7, 812.0, 500.0 cm"1;. MS (MALDI, m/z): 522.1 (M+H)+, C29H31N06S的分析计算值 C: 66.77; H: 5.99; N: 2.69, 实测值 C: 66.86; H: 6.02; N: 2.79.
实施例 13
Figure imgf000041_0001
化合物 9 (417 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （431 mg, 87%) 。 m.p. 176-178 °C; [a]D 26 = -60.4 (c 0.50, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.62 (1H, d, J= 8.8 Hz), 7.54 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.39 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.20 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.20 (1H, d, J= 2.0 Hz), 4.44 (1H, s), 3.77 (1H, d, J= 15.6 Hz), 3.63 (3H, s), 3.41 (1H, d, J = 3.2 Hz), 3.10 ( 1H, s), 2.51 (1H, d, J = 16.0 Hz), 2.37-2.44 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.10 (3H, s), 1.96 (1H, dt, J = 2.8, 12.4 Hz), 1.86 (1H, dt, J = 4.4, 12.0 Hz), 1.57 (1H, d, J = 12.0 Hz); 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.6, 167.9, 167.5, 151.0, 142.3, 141.0, 135.7, 134.7, 134.1, 133.9, 130.9, 129.6, 127.9, 121.9, 116.3, 60.9, 54.9, 50.1, 45.8, 45.5, 44.4, 42.1, 40.7, 37.3, 20.9, 20.8; IR (KBr): vmax 3448.4, 2932.9, 1774.5, 1693.0, 1624.7, 1475.0, 1438.9, 1370.6, 1263.6, 1202.0, 1171.1, 1145.8, 1093.1, 1011.7. 931.2, 818.3 cm"1;. MS (ESI, m/z): 541.9 (M+H)+, C28H28C1N06S的分析计算值 C: 62.04; H: 5.21; N: 2.58, 实测值 C: 61.75; H: 5.33; N: 2.73.
Figure imgf000041_0002
化合物 11 (402 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得淡黄色固体 （406 mg, 85%) 。 m.p. 185-187 °C; [a]D 26 = -53.6 (c 0.50, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.65 (1H, d, J =8.4 Hz), 7.57-7.63 (2H, m), 7.20 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.07-7.17 (2H, m), 6.24 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.36 (1H, s), 3.77 (1H, d, J = 16.0 Hz), 3.63 (3H, s), 3.42 (1H, d, J = 3.2 Hz), 3.10 (1H, s), 2.51 (1H, d, J = 16.0 Hz), 2.36-2.43 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.02 (3H, s), 1.93 (1H, dt, J= 2.8, 12.4 Hz), 1.85 (1H, dt, J= 4.4, 12.4 Hz), 1.57 (1H, d, J = 12.4 Hz); 19F NMR (CDC13, 400 MHz): -110.93; 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.6, 167.9, 167.5, 162.8 (d, J = 248 Hz), 151.0, 142.2, 141.0, 135.8, 135.5 (d, J = 8.2 Hz), 130.9, 130.6 (d, J = 3.4 Hz), 127.9, 121.8, 116.6 (d, J = 21.8 Hz), 116.4, 60.7, 54.9, 50.1, 45.8, 45.5, 44.8, 41.9, 40.7, 37.3, 20.9, 20.8; IR (KBr): vmax 3435.1, 2928.5, 1774.2, 1694.0, 1624.1, 1587.8, 1489.2, 1474.4, 1371.7, 1263.7, 1202.7, 1173.2, 1145.2, 1089.1, 1012.8, 931.1, 836.6, 816.8 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C28H29N06SF (M+H+)的计算值： 526.1694, 实测值： 526.1701.
实施例 15
Figure imgf000042_0001
化合物 10 (457 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中，冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得淡黄色固体 （480 mg, 90%) 。 m.p. 196-198 °C (dec); [a]D 26 = -11.8 (c 0.50, CHC13); 1H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 7.78 (1H, d, J= 8.8 Hz), 7.67-7.76 (2H, m), 7.39 (1H, dt, J= 1.2, 7.6 Hz), 7.18-7.25 (2H, m), 6.45 (1H, d, J= 2.0 Hz), 4.62 (1H, s), 3.78 (1H, d, J= 16.0 Hz), 3.66 (3H, s), 3.32 (1H, d, J = 12.8 Hz), 3.10 (1H, s), 2.52 (1H, d, J = 16.0 Hz), 2.35-2.43 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.01 (3H, s), 1.93-2.00 (1H, m), 1.86 (1H, dt, J = 4.4, 12.4 Hz), 1.53-1.58 (1H, m); IR (KBr): vmax 3435.3, 2932.1, 1774.6, 1693.6, 1618.6, 1473.0, 1442.5, 1420.9, 1369.9, 1263.4, 1200.6, 1174.8, 1143.9, 1017.1, 928.8, 877.9, 751.5 cm"1; MS (MALDI, m/z): 586.3 (M+H)+, C28H28BrN06S的分析计算值为 C: 57.34; H: 4.81; N: 2.39, 实测值 C: 57.09; H: 4.79; N: 2.25.
Figure imgf000043_0001
化合物 6 (457 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （464 mg, 87%) 。 m.p. 122-124 °C; [a]D 26 = -46.8 (c 0.40, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.61 (1H, d, J= 8.8 Hz), 7.54 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.46 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.20 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.19 (1H, d, J= 2.0 Hz), 4.45 (1H, s), 3.77 (1H, d, J= 15.6 Hz), 3.63 (3H, s), 3.41 (1H, d, J = 3.2 Hz), 3.10 (1H, s), 2.51 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.38-2.45 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.11 (3H, s), 1.96 (1H, dt, J = 2.4, 12.0 Hz), 1.86 (1H, dt, J = 4.4, 12.4 Hz), 1.57 (1H, d, J = 12.4 Hz); 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.5, 167.9, 167.5, 151.0, 142.3, 141.0, 135.6, 134.7, 134.0, 132.5, 130.9, 127.9, 122.3, 121.9, 116.2, 60.9, 54.8, 50.0, 45.8, 45.4, 44.2, 42.1, 40.7, 37.2, 20.9, 20.8; IR (KBr): vmax 3400.7, 2931.5, 1774.0, 1692.0, 1624.7, 1473.6, 1370.4, 1263.6, 1201.5, 1170.3, 1145.0, 1088.6, 1007.2, 930.8, 816.6 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C28H29N06SBr的 计算值 (M+H+): 586.0894, 实测值： 586.0908. 实施例 17
Figure imgf000044_0001
化合物 7 (398 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （437 mg, 92%) 。 m.p. 188-190 °C; [a]D 26 = -38.9 (c 0.50, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.66 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.59-7.64 (1H, m), 7.23-7.33 (3H, m), 7.20 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.36 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.41 (1H, s), 3.78 (1H, d, J = 16.0 Hz), 3.65 (3H, s), 3.38 (1H, d, J = 3.2 Hz), 3.10 (1H, s), 2.56 (3H, s), 2.52 (1H, d, J = 16.0 Hz), 2.33-2.42 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.01 (3H, s), 1.96 (1H, dt, J = 2.8, 12.4 Hz), 1.85 (1H, dt, J = 4.4, 12.4 Hz), 1.57 (1H, d, J = 12.4 Hz); 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.6, 167.9, 167.5, 150.9, 142.1, 141.0, 140.2, 136.1, 134.3, 133.5, 131.0, 130.9, 128.3, 127.7, 126.7, 121.8, 116.7, 60.6, 54.8, 50.2, 45.8, 45.5, 42.8, 41.9, 40.7, 37.3, 20.9, 20.9, 20.8; IR (KBr): vmax 3444.8, 2919.7, 1774.3, 1693.2, 1621.3, 1470.8, 1373.3, 1262.6, 1201.8, 1144.1, 1013.3, 930.7 cm"1; MS (ESI, m/z): 522.0 (M+H)+, C29H31N06S的分析计算值为 C: 66.77; H: 5.99; N: 2.69, 实测值 C: 66.78; H: 6.05; N: 2.81.
实施例 18
Figure imgf000045_0001
化合物 2 (447 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （508 mg, 97%) 。 m.p. 111-113 °C; [a]D 26 = -44.1 (c 0.50, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.62-7.69 (4H, m) , 7.57 (1H, d, J= 8.8 Hz), 7.20 (1H, d, J= 8.4 Hz), 6.16 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.62 (1H, s), 3.78 (1H, d, J= 16.0 Hz), 3.64 (3H, s), 3.43 (1H, d, J= 3. Hz), 3.12 (1H, s), 2.53 (1H, d, J = 16.0 Hz), 2.40-2.47 (1H, m), 2.39 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.02 (1H, dt, J= 2.8, 12.4 Hz), 1.87 (1H, dt, J= 4.4, 12.4 Hz), 1.57 (1H, d, J= 12.8 Hz); 19F NMR (CDC13, 400 MHz): δ -61.40; 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.5, 167.9, 167.5, 151.1, 142.4, 141.1, 140.9, 135.3, 130.9, 129.6 (q, J = 42.7 Hz), 127.9, 126.2 (q, J = 3.6 Hz), 125.2, 122.5, 122.0, 116.0, 61.3, 54.8, 50.0, 45.8, 45.2, 43.5, 42.3, 40.7, 37.1, 20.9, 20.8; IR (KBr): vmax 3521.5, 2934.7, 1776.8, 1693.3, 1626.0, 1604.4, 1475.9, 1372.6, 1326.3, 1263.4, 1202.5, 1169.8, 1121.4, 1061.9, 1013.2, 946.1, 819.9 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C29H29N06SF3 (M+H+)的计算值： 576.1662, 实测值： 576.1681.
Figure imgf000045_0002
化合物 5 (398 mg, 0.91 mmol) 溶于吡啶 （；4 mL)中， 冰水浴冷却下慢慢滴加 乙酸酐（ 172 μί, 1.82 mmol, 2.0 equiv), 自然升温继续反应至 TLC显示原料反应 完全。 处理， 反应液蒸干， 过柱纯化， 得白色固体 （394 mg, 83%) 。 m.p. 166-168 °C (dec); [a]D 26 = -28.8 (c 0.50, CHC13); 1H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 7.66 (IH, d, J = 8.4 Hz), 7.40 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.26-7.32 (IH, m), 7.20 (IH, d, J = 8.8 Hz), 7.16 (IH, d, J= 7.6 Hz), 6.27 (IH, d, J= 2.0 Hz), 4.48 (IH, s), 3.77 (IH, d, J= 16.0 Hz), 3.65 (3H, s), 3.44 (IH, d, J= 2.8 Hz), 3.10 (IH, s), 2.51 (IH, d, J= 15.6 Hz), 2.38-2.45 (IH, m), 2.39 (3H, s), 2.38 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.08 (3H, s), 1.97 (IH, dt, J = 2.8, 12.4 Hz), 1.86 (IH, dt, J = 4.4, 12.4 Hz), 1.57 (IH, d, J = 12.4 Hz); 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 191.6, 167.9, 167.5, 150.9, 142.1, 140.9, 139.3, 136.0, 135.2, 133.1, 130.8, 129.5, 129.2, 128.9, 128.0, 121.8, 116.6, 60.7, 54.9, 50.1, 45.9, 45.5, 43.9, 41.9, 40.7, 37.3, 21.3, 20.9, 20.8; IR (KBr): vmax 3428.0, 2930.0, 1771.0, 1695.6, 1629.2, 1476.0, 1370.5, 1262.9, 1203.2, 1174.5, 1144.4, 1012.8, 879.0 cm"1; HRMS (MALDI, m/z) C29H32N06S (M+H+)的计算值： 522.1945, 实测值： 522.1850.
Figure imgf000046_0001
1L的茄形瓶中加入青藤碱盐酸盐 （21 g, 57.4 mmol, 1 equiv), 加入蒸熘水 (420 mL) 溶解。 常温搅拌下加入二醋酸碘苯 （BAIB ) (21 g, 65.2 mmol, 1.1 equiv) 加毕， 常温搅拌 1小时。 反应液呈棕红色。 处理， 反应液中加入固体碳 酸氢钠调成碱性。 加入二氯甲烷萃取。 二氯甲烷层用水洗， 饱和 NaCl洗， 无水 N S04干燥。 过滤， 蒸干。 过柱， 用二氯甲焼 /丙酮 1/1做流动相， 得产物（12 g, 67%) 。 m.p. 187-188 °C (dec); [a]D 25 = 563.3 (c 0.80, CHC13); 1H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 7.04 (IH, d, J= 9.6 Hz), 6.56 (IH, d, J= 5.6 Hz), 6.44 (IH, d, J= 9.2 Hz), 5.28 (IH d, J = 2.0 Hz), 4.06 (1H, d, J = 16.0 Hz), 3.73 (1H, dd, J = 2.8, J = 5.6 Hz), 3.48 (3H, s), 2.96 (1H, brs), 2.58-2.65 (1H, m), 2.42 (3H, s), 2.37 (1H, d, J= 16.4 Hz), 2.05 (1H td, J = 3.6, 12.8 Hz), 1.89-1.95 (1H, m), 1.84 (1H, td, J = 5.2, 12.8 Hz); 13C MR (CDC13, 100 MHz): δ 192.5, 181.1, 152.4, 147.0, 141.0, 140.3, 139.1, 124.8, 116.9, 114.8, 58.0, 54.9, 48.1, 46.5, 45.7, 43.0, 40.2, 35.7; IR (KBr): 2946.3, 2829.9, 2254.0, 1684.7, 1627.4, 1466.7, 1363.2, 1199.8, 1150.1, 727.0 cm"1; HRMS (ESI, m/z) 。 ！^^^^ +！^)的计算值： 314.1387, 实测值： 314.1399.
Figure imgf000047_0001
250 mL的茄形瓶中加入化合物 20 (4 g, 12.8 mmol, 1 equiv), 加入 Ν,Ν-二甲 基甲酰胺（50 mL)溶解，再加入 TBSC1 (叔丁基二甲基氯化硅）（2.9 g, 19.3 mmol, 1.5 equiv 加毕，冰水浴冷却，慢慢加入 DIPEA (二异丙基乙基胺）（3.2 mL, 19.4 mmol, 1.5 equiv)。 加毕， 继续搅拌， 自然升温至室温。 反应至 TLC显示原料消 失。 处理， 往反应液中慢慢加入水 （约 lOO mL), 析出大量黄色固体。 抽滤， 滤 饼用水洗， 二氯甲烷溶解， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸干得产物 （5.0 g, 92%) 。
[a]D 26 = 387.6 (c 1.18, CHC13); 1H NMR (CDC13, 300 MHz): δ 6.94 (1H, d, J = 9.3), 6.47 (1H, d, J = 5.7), 6.30 (1H, d, J = 9.6), 5.23 (1H, s), 4.22 (1H, d, J = 16.2), 3.65 (1H, dd, J = 5.7, 2.7), 3.47 (3H, s), 2.89 (1H, brs), 2.52-2.65 (1H, m), 2.42 (3H, s), 2.30 (1H, d, J = 15.9), 2.12 (1H, td, J = 12.6, 3), 1.98 (1H, d, J = 12.9), 1.80 (1H, td, J = 4.8, 12.6), 1.01 (9H, s), 0.34 (3H, s), 0.21 (3H, s); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 191.9, 181.5, 152.2, 148.2, 140.1, 139.5, 138.4, 126.6, 122.9, 114.9, 57.8, 54. 8, 47.6, 46.6, 45.9, 43.0, 40.4, 35.8, 26.9, 19.7, -1.9, -2.2; IR (KBr): 3063.8, 2953.5, 2934.7, 2904.5, 2856.9, 2798.7, 1693.6, 1630.0, 1560.0, 1373.0, 1249.9, 1200.5, 1150.0, 838.3, 807.0, 784.0 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C24H34N1O4S11 (M+H+)的计算值： 428.22516, 实测值： 428.22532. 22
Figure imgf000048_0001
100 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 2 g, 6.38 mmol) , 甲醇 (20 mL；)。 加毕， 常 温搅拌，至 TLC显示原料消失。处理， 反应液蒸干，过柱，用二氯甲焼 /甲醇 30/1 作为流动相， 得产物 （1.4 g, 64% ) 。 m.p. 159-160 °C (dec); [a]D 25 = -56.8 (c 0.26, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H MR (DMSO-de, 400 MHz): δ 9.38 (1H, s), 8.05 (1H, s), 6.63 (2H, s), 5.76 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.14 (1H, d, J = 15.2 Hz), 4.06 (lH,s), 3.45 (3H, s), 3.30 (3H, s), 3.21-3.25 (1H, m), 2.90 (1H, brs), 2.40 (3H, s), 2.36 (1H, d, J = 15.6 Hz), 1.75-1.85 (1H, m), 1.67-1.73 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 192.4, 149.4, 143.6, 144.1, 130.4, 122.7, 120.5, 119.0, 113.1, 72.1, 57.2, 56.9, 53.8, 48.6, 46.3, 44.1, 42.1, 40.2, 35.1 ; IR (KBr): 3284.2, 2941.2, 2811.4, 1674.4, 1629.6, 1479.1, 1363.6, 1288.5, 1200.2, 1150.5, 1087.3, 1073.9, 1007.0, 919.5, 828.6 cm"1; HRMS (ESI, m/z) Ci9H24Ni05 (M+H+)的计算值： 346.1649, 实测值： 346.1665.
Figure imgf000048_0002
100 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.6 g, 1.91 mmol ) , 乙醇 (20 mL)。 加毕， 常温搅拌， 至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液蒸干， 过柱， 用二氯甲焼 /甲醇 30/1作为流动相， 得产物 （0.3 g, 44% ) 。 m.p. 191-193 °C (dec); [a]D 26 = -28.3 (c 0.40, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H NMR (DMSO-de, 300 MHz): δ 9.41 (1H, brs), 8.09 (1H, s), 6.64 (1H, d, J = 8.1 Hz), 6.60 Uv
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100 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.5 g, 1.6 mmol), 正丁醇 (15 mL)。 加毕， 常温搅拌， 至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液蒸干， 过柱， 用二氯甲焼 /甲醇 30/1作为流动相， 得产物 （0.35 g, 57%) 。 m.p. 182-184 °C (dec); [a]D 25 = -26.3 (c 0.50, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H MR (DMSO-de, 400 MHz): δ 9.38 (IH, brs), 8.07 (IH, brs), 6.64 (IH, d, J= 8.4 Hz), 6.60 (IH, d, J = 8.4 Hz), 5.78 (IH, d, J = 2.0 Hz), 4.15 (IH, s), 4.14 (IH, d, J = 15.2 Hz), 3.67-3.75 (IH, m), 3.50-3.58 (IH, m), 3.32 (3H, s), 3.14-3.22 (IH, m), 2.90 (IH, brs), 2.39 (3H, s), 2.31-2.38 (2H, m), 1.81 (IH, td, J = 4.8, 10.8 Hz), 1.64-1.75 (2H, m), 1.46-1.60 (2H, m), 1.32-1.43 (2H, m), 0.91 (3H, t, J = 7.2 Hz); 13C NMR (DMSO-d6, 75 MHz): δ 192.3, 149.3, 144.1, 143.5, 130.8, 122.7, 120.4, 119.0, 113.2, 70.5, 68.7, 57.8, 53.6, 48.5, 46.3, 44.0, 42.1, 40.2, 35.0, 31.8, 18.9, 13.6; IR (KBr): 3443.0, 2953.3, 2912.2, 2858.5, 2508.6, 1690.8, 1633.3, 1582.1, 1483.4, 1289.9, 1229.7, 1147.6, 1073.3, 1005.7, 795.5 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C22H30N1O5 (M+H+)的计算值: 388.2119, 实测值： 388.2135.
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50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.5 g, 1.6 mmol), 二氯甲烷 (10 mL；)。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加苯胺 （0.18 mL, 1.92 mmol, 1.1 equiv)。 加毕， 继续搅拌， 自 然升温至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液中加入无水乙醚， 使固体析出， 抽 6 £09\ S 8S1 9 £091 6S191 8 S891 88182 98262 8110£ 0191£ Z'£09£
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C680.0/ll0ZN3/X3d SC0860/llOZ OAV 50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.5 g, 1.6 mmol), 1 M HC1水溶液 （10 mL；)。 加毕， 继续搅拌， 至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液中加入饱和碳酸氢钠调 成碱性， 蒸干， 过柱纯化， 得产物 （0.14 g, 53%) 。
m.p. 171-173 °C (dec); [a]D 26 = -44.9 (c 0.10, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H MR (DMSO-de, 400 MHz): δ 9.33 (IH, brs), 8.04 (IH, brs), 6.69 (IH, d, J= 8.4 Hz), 6.64 (IH, d, J = 8.0 Hz), 5.89 (IH, d, J= 2.0 Hz), 4.93 (IH, brs), 4.53 (IH, s), 4.15 (IH, d, J= 15.2 Hz), 3.34 (3H, s), 3.09 (IH, brs), 2.90 (IH, brs), 2.27-2.46 (5H, m), 1.77-1.90 (IH, m), 1.61-1.75 (2H, m); 13C NMR (DMSO-d6, 75 MHz): δ 192.5, 149.2, 143.9, 143.5, 132.8, 122.4, 120.0, 119.2, 113.3, 62.5, 61.7, 53.8, 48.6, 46.3, 43.8, 42.4, 40.3, 35.0; IR (KBr): 3383.0, 2960.5, 2897.1, 1674.2, 1621.2, 1492.5, 1285.5, 1201.6, 1155.2, 1103.7, 1025.1, 831.2 cm"1; HRMS (ESI, m/z) Ci8H22Ni05 (M+H+)的计算值: 332.1493, 实测值： 332.1490.
实施例 30
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100 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 1 g, 3.2 mmol, 1 equiv), DMSO (二甲基亚 砜） （10 mL)。 常温搅拌下， 加入丙酮 （2.5 mL, 1.91 mmol, 10.6 equiv), L-脯氨 酸 （0.1 g, 0.87 mmol, 0.27 equiv)。 加毕， 继续搅拌， 至 TLC显示原料消失。 处 理， 反应液中加入水，用二氯甲烷萃取多次，二氯甲烷层用水洗，饱和氯化钠洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸干， 过柱纯化， 得产物 （0.17 g, 14%) 。
m.p. 219-221 °C; [a]D 26 = -64.9 (c 0.30, CHC13-CH30H = 10: 1); 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz): δ 9.20 (IH, brs), 8.01 (IH, brs), 6.57 (IH, d, J = 8.0 Hz), 6.40 (IH, d, J = 8.0 Hz), 5.83 (IH, s), 4.19 (IH, d, J = 15.0 Hz), 3.44 (3H, s), 3.41 (IH, dd, J = 8.5, 5.0 Hz), 2.91-3.00 (3H, m), 2.82 (IH, dd, J= 15.0, 4.5 Hz), 2.36 (IH, d, J= 15.0 Hz), 2.33-2.36 (IH, m), 2.32 (3H, s), 2.17 (3H, s), 1.83-1.93 (IH, m), 1.67-1.75 (2H, m); 13C NMR (DMSO-de, 125 MHz): δ 207.5, 192.6, 150.2, 143.9, 142.6, 133.2, 122.9, 117.5, 116.9, 113.5, 60.1, 54.1, 51.7, 48.6, 46.2, 45.2, 42.3, 35.8, 30.0, 27.9; IR (KBr): 3486.4, 3017.7, 2931.8, 2859.7, 1688.6, 1626.8, 1488.0, 1450.5, 1365.7, 1286.2, 1203.7, 1147.4, 1086.0, 807.9 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C2iH26Ni05 (M+H+)的计算值: 372.1806, 实测值： 372.1820.
实施例 31
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50 mL茄形瓶中加入化合物 20 ( 0.507 g, 1.6 mmol, 1 equiv), 吡啶 ( lO mL) 溶解， 慢慢滴加乙酸酐 （5 mL, 2 mmol, 1.25 equiv)。 加毕， 常温搅拌， 至 TLC 显示原料消失。 处理， 反应液蒸干， 加入饱和碳酸氢钠水溶液调成碱性， 用二氯 甲烷萃取多次， 二氯甲烷层用水洗， 饱和 NaCl洗， 无水 Na2S04干燥， 蒸干， 得产物 （0.565 g, 79%)。 m.p. 198-199 °C; [a]D 26 = -82.0 (c 0.50, CHC13); 1H MR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 7.22 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.18 (1H, d, J = 8.4 Hz), 5.89 (1H, d, J = 2.0 Hz), 3.50 (1H, d, J= 15.6 Hz), 3.39 (3H, s), 3.26 (1H, d, J= 1.8 Hz), 3.06 (1H, brs), 2.73 (1H, 15.6), 2.46 (3H, s), 2.39-2.45 (1H, m), 2.36 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.09 (3H, s), 1.76-1.88 (2H m), 1.38 (1H, d, J = 9.6 Hz); 13C NMR (DMSO-d6, 75 MHz): δ 190.7, 169.6, 167.7, 149.8, 142.6, 140.7, 135.1, 130.9, 127.4, 122.2, 117.6, 64.0, 58.6, 54.0, 49.0, 45.6, 43.4, 42.2, 40.4, 35.9, 21.0, 20.5, 20.4; MS (ESI, m/z): 458.7 (M+H+). IR (KBr): 3411.8, 2938.0, 2845.7, 1777.1, 1727.3, 1691.0, 1632.9, 1375.0, 1234.9, 1200.7, 1146.6, 1014.8 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C24H28Ni08 (M+H+)的计算值： 458.1804, 实 测值： 458.1804.
实施例 32
Figure imgf000055_0001
25 mL茄形瓶中加入青藤碱 (0.1 g, 0.30 mmol, 1 equiv) , 甲醇 （2.5 mL)溶解， 常温下加入二醋酸碘苯 （0.1 g, 0.31 mmol, 1 equiv), 反应液呈浅黄色。 TLC监测 到原料消失。处理， 加入饱和 NaHC03,用 DCM萃取， 合并有机相， 用饱和 NaCl 洗， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸干， 残留物经柱层析分离纯化得产物 10 β -乙 酰氧基青藤碱 （12 mg, 10%)， 10 β -甲氧基青藤碱 （58 mg, 53%)。 化合物 32 m.p. 232-234。C (dec); [a]D 25 = -73.5 (c 1.4, CHC13); 1H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 6.70-6.76 (2H, m), 6.12 (1H, brs), 6.03 (1H, s), 5.62 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.34 (1H, d, J = 15.6 Hz), 3.83 (3H, s), 3.50 (3H, s), 3.22 (1H, brs), 3.10 (1H, brs), 2.60 (3H, s), 2.53-2.61 (1H, m), 2.45 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.10 (3H, s), 2.05 (1H, td, J = 11.6, 4.8 Hz), 1.83-1.96 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 193.4, 170.2, 150.9, 146.8, 144.3, 129.4, 122.4, 120.6, 116.6, 109.3, 65.0, 60.8, 55.9, 54.5, 49.1, 46.8, 44.8, 42.8, 40.7, 35.8, 21.5; IR (KBr): 3373.8, 2938.9, 2840.3, 2248.7, 1725.8, 1682.0, 1634.5, 1488.2, 1463.7, 1283.7, 1234.2, 1145.9, 1058.2, 1006.4, 947.2, 729.7 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C2iH26Ni06 (M+H+)的计算值： 388.1755, 实测值： 388.1755.
化合物 33 m.p. 201-203 °C (dec); [a]D 25 = -38.8 (c 1.4, CHC13); 1H NMR (CDC13, 300 MHz): δ 6.85 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.72 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.07 (1H, brs), 5.73 (1H, d, J = 2.1 Hz), 4.32 (1H, d, J = 15.9 Hz), 4.17 (1H, s), 3.82 (3H, s), 3.55 (3H, s), 3.45 (3H, s), 3.32 (1H, d, J = 3.0 Hz), 3.03 (1H, brs), 2.54 (3H, s), 2.45-2.53 (1H, m), 2.41 (1H, d, J = 15.6 Hz), 1.99 (1H, td, J = 3.6, 11.7 Hz), 1.77-1.93 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 193.6, 150.6, 146.3, 144.2, 131.8, 121.9, 120.8, 117.8, 109.1, 72.5, 58.5, 57.6, 56.0, 54.7, 49.3, 46.9, 45.0, 42.6, 40.9, 35.8; IR (KBr): 3441.6: 2917.4, 2848.2, 2247.1, 1687.1, 1628.8, 1486.4, 1439.7, 1278.0, 1202.5, 1150.5, 1078.4, 1056.1, 1029.7, 948.8, 827.2, 731.7 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C2oH26Ni05 (M+H+)的计算值： 300. Ι δθό, 实测值： 360.1809. 实施例 33
Figure imgf000056_0001
反应瓶中加入 1-羟甲基青藤碱 （0.1 g, 0.28 mmol, 1 equiv), 甲醇 （2.5 mL) 溶解， 常温下加入二醋酸碘苯 CO. l g, 0.31 mmol, 1.1 equiv), 反应液呈浅黄色。 TLC监测到原料消失。 处理， 加入饱和 NaHC03,用 DCM萃取， 合并有机相， 用 饱和 NaCl洗， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸干， 残留物经柱层析分离纯化得产 物 1-羟甲基 -10 β -乙酰氧基青藤碱 （18 mg, 22%)， 1-羟甲基 -10 β -甲氧基青藤碱 ( 59 mg, 54%)。 化合物 34 m.p. 176-178。C (dec); [a]D 26 = -54.3 (c 0.2, CHC13); 1H MR (CDC13, 500 MHz): δ 6.96 (IH, s), 6.23 (IH, brs), 6.15 (IH, s), 5.54 (IH, d, J = 1.5 Hz), 4.50 (IH, d, J = 13.0), 4.42 (IH, d, J = 12.5 Hz), 4.38 (IH, d, J = 15.5 Hz), 3.85 (3H, s), 3.49 (3H, s), 3.31 (IH, brs), 3.18 (IH, brs), 2.66 (3H, s), 2.58-2.63 (IH, m), 2.46 (IH, d, J= 16.0 Hz), 2.09 (3H, s), 2.01-2.08 (IH, m), 1.91-1.96 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 125 MHz): δ 193.3, 169.7, 150.9, 147.2, 143.8, 131.6, 125.0, 122.5, 116.0, 109.9, 63.2, 62.0, 60.6, 56.0, 54.5, 48.8, 47.1, 43.8, 42.5, 40.6, 35.1, 21.3; IR (KBr): 3419.3, 2937.2, 2842.3, 1730.0, 1688.5, 1631.2, 1464.3, 1438.5, 1371.0, 1288.7, 1230.0, 1150.2, 1107.5, 1076.1, 1014.7 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C22H28Ni07 (M+H+)的计算 值： 418.1860, 实测值： 418.1871.
化合物 35 m.p. 167-169 °C; [a]D 26 = -62.3 (c 0.2, CHC13); 1H NMR (CDC13, 500 MHz): δ 6.85 (IH, s), 5.66 (IH, s), 4.55 (IH, d, J = 12.0 Hz), 4.56 (3H, s), 4.37 (IH, d, J = 12.0 Hz), 4.35 (IH, d, J = 15.5 Hz), 3.81 (3H, s), 3.56 (3H, s), 3.50 (IH, brs), 3.42 (3H, s), 3.21 (IH, brs), 2.59-2.63 (IH, m), 2.61 (3H, s), 2.44 (IH, d, J= 16.0 Hz): 2.02-2.08 (IH, m), 1.89-1.98 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 125 MHz): δ 193.3, 150.8, 146.8, 143.9, 132.6, 128.6, 122.1, 116.6, 111.5, 71.1, 63.7, 57.4, 55.9, 55.7, 54.7, 48.8: 47.0, 43.6, 42.1, 40.8, 34.6; IR (KBr): 3381.2, 2938.1, 1685.9, 1630.0, 1600.9, 1465.8: 1289.6, 1202.4, 1107.1, 1073.7, 1035.7, 947.8 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C2iH28Ni06 (M+H+)的计算值: 390.1911, 实测值： 390.1912.
实施例 34
Figure imgf000057_0001
反应瓶中加入化合物 33 (0.1 g, 0.28 mmol, 1 equiv), 甲醇 （2.5 mL) 溶解， 常温下加入二醋酸碘苯 （0.09 g, 0.28 mmol, 1 equiv), 反应液呈浅黄色。 TLC监 测到原料基本消失。 处理， 加入饱和 NaHC03， 用 DCM萃取， 合并有机相， 用 饱和 NaCl洗， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸干， 残留物经柱层析分离纯化得产 物 10羰基青藤碱 ( 11 mg, 12%), 10,10-二甲氧基青藤碱 (41 mg, 41%)。 化合物 37 m.p. 219-221。C (dec); [a]D 25 = -190.5 (c 0.7, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.65 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.80 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.11 (1H, brs), 5.35 (1H, d, J= 2.0 Hz), 4.35 (1H, d, J= 16.0 Hz), 3.91 (3H, s), 3.43 (3H, s), 3.37 (1H, d, J = 3.6 Hz), 3.19-3.24 (1H, m), 2.64-2.73 (1H, m), 2.47 (1H, d, J = 16.0 Hz), 2.39 (3H, s), 1.94-2.12 (3H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 193.2, 192.7, 152.9, 151.9, 144.1, 129.7, 126.2, 119.5, 113.4, 108.8, 67.0, 56.1, 54.9, 49.3, 47.2, 46.4, 43.1, 41.4, 35.2; IR (KBr): 3421.2, 2937.8, 2842.4, 2248.6, 1691.2, 1627.3, 1590.9, 1482.8, 1457.9, 1351.0, 1310.5, 1275.5, 1201.8, 1174.7, 1152.1, 1099.3, 1050.8, 733.6 cm"1; HRMS (ESI, m/z) Ci9H22Ni05 (M+H+)的计算值： 344.1493, 实测值： 344.1496. 化合物 36 m.p. 181-183。C (dec); [a]D 25 = -28.8 (c 1.5, CHC13); 1H NMR (CDC13, 300 MHz): δ 7.15 (1H, d, J = 8.7 Hz), 6.73 (1H, d, J = 8.7 Hz), 5.86 (1H, d, J = 1.8 Hz), 4.29 (1H, d, J= 15.3 Hz), 3.84 (3H, s), 3.49 (3H, s), 3.40 (3H, s), 3.24-3.32 (2H, m), 2.95 (3H, s), 2.72 (3H, s), 2.54 (1H, td, J= 3.3, 12.6 Hz), 2.36-2.47 (2H, m), 1.89 (1H, td, J = 4.8, 12.6 Hz), 1.53-1.63 (1H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 194.1, 148.9， 147.0, 144.0, 128.7, 122.4, 119.6, 119.4, 107.8, 97.5, 61.3, 55.9, 54.5, 49.4, 48.9, 48.3, 45.4, 43.4, 42.5, 41.8, 32.8; IR (KBr): 3436.1, 2918.4, 2848.9, 1686.0, 1625.9, 1482.2, 1439.0, 1310.9, 1273.6, 1203.5, 1151.1, 1115.7, 1075.8, 732.5 cm"1; HRMS (ESI, m/z) C2iH28Ni06 (M+H+)的计算值： 390.1911, 实测值： 390.1919.
实施例 35
Figure imgf000058_0001
反应瓶中加入化合物 33 (0.1 g, 0.28 mmol, 1 equiv), 三氯化铝 （0.1 g, 0.42 mmol, 1.5 equiv), N2置换， 加入苯 （5 mL) ，升温回流。 反应液呈浑浊， 有很 多不溶物粘附在瓶壁上， 反应至 TLC显示原料已经消失。 处理， 反应液中加入 饱和 NaHC03溶液， 通过硅藻土过滤， 用 DCM洗固体， 滤液用 DCM萃取， 合 并有机相， 水洗， 饱和 NaCl洗， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸干， 残留物经柱 层析分离纯化得产物 (43 mg, 45%)。
[a]D 25 = -28.9 (c=0.80, CHC13); 1H NMR (CDC13, 300 MHz): δ 6.93 (IH, d, J = 8.4), 6.78 (IH, d, J = 8.4), 6.21 (IH, brs), 5.87 (IH, brs), 4.84 (IH, s), 4.36 (IH, d, J = 15.6), 3.85 (3H, s), 3.46-3.59 (IH, m), 3.54 (3H, s), 3.27 (IH, brs), 2.67 (3H, s), 2.57-2.66 (IH, m), 2.49 (IH, d, J = 15.6), 2.08-2.21 (IH, m), 1.86-2.06 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 193.3, 150.9, 146.7, 144.4, 132.6, 121.1, 120.2, 116.1, 109.8, 63.6, 62.6, 56.1, 54.9, 48.9, 47.1, 43.8, 42.5, 40.5, 35.1; IR (KBr): 3436.1, 2918.4, 2848.9, 1686.0, 1625.9, 1482.2, 1439.0, 1310.9, 1273.6, 1203.5, 1151.1, 1115.7, 1075.8, 732.5 cm"1; MS 346.2. (M+l)+.
实施例 36
Figure imgf000059_0001
反应瓶中加入 4-乙酰基青藤碱 (0.5 g, 1.35 mmol, 1 equiv), 1.5 M硫酸水溶液 ( 8 mL)溶解。常温搅拌下加入 Cr03固体（0.27 g， 2.70 mmol, 2 equiv )0加毕， 滴加浓硫酸 (0.36 mL, 6.62 mmol, 4.9 equiv) 0 加毕， 常温搅拌过夜。 处理， 反 应液中加入饱和亚硫酸钠， 再加入饱和氢氧化钠调成弱酸性，加入饱和碳酸氢钠 调成碱性， 用二氯甲烷萃取。 二氯甲烷层用水洗， 饱和氯化钠洗， 无水 Na2S04 干燥， 蒸干， 过柱， 得产物 （0.17 g, 32%)。
1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.98 (1Η, d, J = 8.4), 6.91 (1H, d, J = 8.8), 5.35 (1H, d J = 2.4), 3.82-3.91 (1H, m), 3.84 (3H, s), 3.43 (3H, s), 3.34 (1H, d, J = 3.6), 3.19 (1H, t, J = 1.8), 2.62-2.71 (1H, m), 2.53 (1H, d, J = 16.0), 2.38 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.10 (1H, td, J = 12.4, 3.2), 1.99 (1H, td, J = 12.8, 4.8), 1.70-1.81 (1H, m); MS 385.9 (M+l)+.
实施例 37
Figure imgf000059_0002
反应瓶中加入 4-乙酰基 -10-羰基-青藤碱 (0.5 g, 1.3 mmol),四氢呋喃（10 mL) 溶解。 冰水浴冷却下， 慢慢滴加 l M LiOH水溶液。 加毕， 继续反应， 自然升温 至室温。 反应至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液中加入稀盐酸调成酸性， 再 加入饱和碳酸氢钠调成碱性， 用旋蒸蒸去四氢呋喃， 加入二氯甲烷萃取， 二氯甲 烷层用水洗， 饱和氯化钠洗， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸干， 得产物 10-羰基 青藤碱 (0.4 g， 90% 谱图同实施例 34。 实施例 38
Figure imgf000060_0001
反应瓶中加入 4-乙酰基 -10-羰基青藤碱 (0.1 g, 0.26 mmol, 1 equiv) , 乙醇 （4 mL)溶解。放入 -5 °C冷浴中，一次性加入硼氢化钠（ 15 mg， 0.40 mmol, 1.5 equiv ) 0 反应搅拌过夜。 处理， 反应液中加入醋酸水溶液淬灭反应， 用旋蒸蒸干溶剂， 加 入饱和碳酸氢钠调成碱性，用二氯甲烷萃取。二氯甲烷层用水洗，饱和氯化钠洗， 无水 Na2S04干燥， 蒸干， 过柱， 得产物 39 ( 44 mg, 44% ) , 40 ( 23 mg, 23%)。 化合物 39 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.65 (1Η, d, J = 8.4), 6.86 (1H, d, J = 8.8), 5.96 (1H, s), 5.25 (1H, d, J = 4.8), .4.55 (1H, d, J = 1.6), 3.95 (3H, s), 3.73 (1H, d, J = 15.2), 3.39 (3H, s), 3.25 (1H, d, 3.2), 2.74-2.77 (1H, m), 2.63-2.71 (1H, m), 2.33 (3H, s), 1.94-2.08 (2H, m), 1.80 (3H, s), 1.63-1.79 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 194.4, 170.5, 153.5, 150.7, 144.4, 129.9, 129.2, 119.1, 108.5, 97.8, 68.2, 68.0, 56.1, 54.6, 48.0, 45.6, 42.9, 37.2, 35.4, 35.1, 20.9; JR (KBr): 3246.0, 2936.8, 2906.0, 2798.8, 1722.4, 1663.7, 1587.5, 1482.4, 1370.2, 1309.9, 1275.6, 1238.9, 1203.3, 1171.0, 1085.0, 1060.7, 1020.6, 863.4 cm"1; MS 388.0 (M+l)+. 化合物 40 [a]D 25 = -158.4 (c 1.5, CHC13); 1H MR (CDC13, 400 MHz): δ 7.96 (1H, d, J = 8.8), 6.93 (1H, d, J = 8.4), 4.32 (1H, s), 7.06-7.16 (1H, m), 3.87 (3H, s), 3.39 (3H, s), 3.19 (1H, d, J = 3.2), 2.99-3.18 (1H, m), 2.91 (1H, brs), 2.60-2.70 (1H, m), 2.49 (1H, brs), 2.37 (3H, s), 2.33 (3H, s), 2.04 (1H, brs), 1.89 (1H, td, J = 4.8, 12.8), 1.59-1.79 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 75 MHz): δ 193.6, 168.5, 156.5, 156.1, 138.4, 136.2, 129.5, 125.8, 110.2, 94.3, 67.4, 66.1, 56.1, 54.6, 47.4, 46.2, 43.0, 41.7, 38.5, 36.2, 20.9; MS 388.0 (M+l)+. 实施例 39
Figure imgf000061_0001
反应瓶中加入化合物 39 (0.2 g, 0.52 mmol), 四氢呋喃 （ 10 mL) 溶解。 冰水 浴冷却下， 慢慢滴加 1 M LiOH水溶液 （10 mL)。 加毕， 继续反应， 自然升温至 室温。 反应至 TLC显示原料消失。 处理， 反应液中加入稀盐酸调成酸性， 再加 入饱和碳酸氢钠调成碱性， 用旋蒸蒸去四氢呋喃， 加入二氯甲烷萃取， 二氯甲烷 层用水洗， 饱和氯化钠洗， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸干， 得产物 10-羰基青 藤碱 ( 0.18 g, 100%)。
1H MR (CDC13, 300 MHz): δ 7.64 (1Η, d, J = 8.7), 6.83 (1H, d, J = 8.4), 6.26 (1H, brs), 4.40 (1H, s), .4.21 (1H, d, J = 5.1), 3.92 (3H, s), 3.69 (1H, d, J = 15.0), 3.41 (3H, s), 3.24 (1H, d, J = 3.3), 2.70-2.75 (1H, m), 2.62-2.71 (1H, m), 2.34 (3H, s), 2.04-2.11 (1H, m), 1.94-2.02 (1H, m), 1.89 (1H, brs), 1.66-1.82 (2H, m); 13C NMR (CDC13, 100 MHz): δ 194.5, 156.76, 151.4, 144.1, 129.7, 129.5, 119.5, 108.6, 95.1, 68.3, 66.2, 56丄 54.51, 47.9, 45.8, 42.9, 40.0, 35.7, 35.2; IR (KBr): 3432.3, 2910.0, 2844.7, 1668.4, 1592.3, 1483.4, 1441.4, 1349.9, 1308.2, 1276.6, 1206.1, 1170.8, 1052.9, 791.6, 518.7 cm"1; MS 346.0 (M+l)+.
实施例 40 体外肿瘤坏死因子 a ( T F-a) 抑制实验： 接种小鼠巨噬细胞系 J774于 48 孔板， 培养密度 1 X 105/孔， 用含有 10% FBS 的 DMEM 37°C， 6% C02培养 12 小时。 再用含有 l g/ml LPS的 DMEM培养液稀释小分子至终浓度为 10_5mol/l, 置换原来的培养基。 继续培养 5小时。 收集细胞上清， 进行 ELISA测定 TNF-0 实验结果见附图 1和图 2。 实验中使用化合物 SB202190【4-(4-氟苯基 )-2-(4-羟基 苯基) -5-(4-吡啶基） -1H-咪唑， CAS 152121-30-7， 购于 sigma, p38 MAPK特异性 抑制剂， 通过抑制 p38磷酸化从而抑制 TNF-α产生。 】作为阳性对照
Figure imgf000062_0001
从图 1结果上看， 大多数化合物都表现出了一定的抗炎活性，特别是化合物 1， 4， 31 , 39, 8， 40表现出了明显的活性； 而另外一些化合物 33， 34, 35表 现出了 T F-α的促进作用。 从图 2结果上看， 青藤碱 10位苯硫基取代的一系列化合物都表现出较好抗 炎活性。
实施例 41
内毒素休克模型实验
材料： C57BL/6小鼠 （6-8周龄） 购自上海斯莱克实验动物公司 （SLAC), 动物饲养于中国科学院上海生科院生化细胞所实验动物中心 （清洁级）， 并提供 充足的水源和标准饲料。
Lipopolysaccharides (LPS) 购自 Sigma公司 （其中用于细胞实验的 LPS货 号为 L4391 , 用于动物实验的 LPS货号为 L3129), 溶于无菌生理盐水后分装， -70°C保存。
细胞因子 （T F-alpha) ELISA检测试剂盒 （货号： MTA00) 购自 R&D公 司。
步骤： （1 ) 6-8周龄雄性 C57BL/6小鼠随机分组， 5只 /组用于内毒素休克模型实 验；
(2)对小鼠依次称重， 通过腹腔注射 200μί生理盐水配制的不同浓度的小 分子药物 1 (低， 中， 高实验组的注射剂量依次为 25mg/kg， 50mg/kg， 100mg/kg 体重）， 对照组腹腔注射 200μί生理盐水；
(3 ) 给药 1小时后腹腔注射 lOO L LPS (注射剂量为 2.5mg/kg体重） 诱导 模型； (4) LPS注射后 1.5小时眼眶取血 200μί， 将血样于 4°C 静置 12小时， 6000rpm离心 10分钟， 分离上层血清；
( 5 ) 采用 ELISA试剂盒检测血清样品中 T F-alpha炎症细胞因子水平。 从图 3结果上看， 化合物 1对内毒素休克模型实验中小鼠体内的 T F-α炎 症因子有很显著的抑制作用， 且呈现剂量依赖性。 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考， 就如同每一篇文献 被单独引用作为参考那样。 此外应理解， 在阅读了本发明的上述讲授内容之后， 本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请 所附权利要求书所限定的范围。

Claims

权 利 要 求
1. 一种青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、 酯或溶剂合物， 其特征是具有如下结构：
Figure imgf000064_0001
其中 R = H或 R10CO; R2 = H或 R10CO; R3 = RuO、 R12S、 R13R14N、 OH、 o
R10COO或 Rl5x^\^ ; R4 = H或 R16R17R18Si; R5 = RuO、 OH或 CH3COO; = H或 RuO; 或者 R5, R6合在一起形成氧代基团； R7 = H、 卤素或羟甲基； R8 =羟 基或 H; R9 =羟基或 H; 或者 R8， R9合在一起形成氧代基团； Rni C^的烃基； Rif C^o烃基； R12 = CwQ烃基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者 六元的芳环、 带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的含氮杂环、 带 有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的含氧杂环、或者带有一〜三个取 代基或不带取代基的五元或者六元的含硫杂环， 所述的取代基是 C^H)的烃基、 卤素、 C^4的烷基、 或 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 甲氧基或羟基； Ru C^o 烃基、带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或者六元的芳环、带有一〜三个取 代基或不带取代基的五元或者六元的含氮杂环、 带有一〜三个取代基或不带取代 基的五元或者六元的含氧杂环、 或者带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或 者六元的含硫杂环， 所述的取代基是 C^o的烃基、 卤素、 CM的烷基、 CM含 氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基或羟基； R14 = H或 C^H)的烃基； 或者 R13和 R14与它们所连接的 N原子一起形成带有一〜三个取代基或不带取代基的五元或 者六元的含氮杂环， 所述的取代基是卤素、 CM烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰 基、 C^4烷氧基或羟基； R15 =H或 C^。的焼基； Ri^ C^。的烃基或苯基； R17 = Cwo的烃基或苯基； R18 = C^。的烃基或苯基。
2. 如权利要求 1所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、 酯或溶剂合物， 其特征在于， R = H或 R1QCO; R2 = H或 R1QCO; R3 = RuO、
R o
R12S、 R13R14N、 OH、 R10COO或 15χ^^ ; R4 = H或 R16R17R18Si; R5 = RuO、 OH或 CH3COO; Re = H或 RuO; 或者 R5, 合在一起形成氧代基团； R7 = H、 卤素或羟甲基； =羟基或 H; R9 =羟基或 H; 或者 R8, R9合在一起形成氧代 基团； R1Q = Cw烷基； Rif C^烷基； R12 = Cw烷基、 带有一〜三个取代基或 不带取代基的苯基、带有一〜三个取代基或不带取代基的咪唑基、带有一〜三个取 代基或不带取代基的呋喃基或吡喃基、 或带有一〜三个取代基或不带取代基的噻 吩基， 所述的取代基是卤素、 CM烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 d_4烷氧 基或羟基； R13=Cw烷基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的苯基、 带有一〜 三个取代基或不带取代基的咪唑基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的呋喃基 或吡喃基，或带有一〜三个取代基或不带取代基的噻吩基，所述的取代基是卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、硝基、氰基、 d_6烷氧基或羟基； R14 = H或 烷基； 或者 R13和 R14与它们所连接的 N原子一起形成带有一〜三个取代基或不带取代 基的咪唑基； 所述的取代基是卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、硝基、氰基、 d_4 烷氧基或羟基； R15 = H或 烷基； R16=Cw烷基或苯基； R17=Cw烷基或苯 基； R18=C卜 6焼基或苯基。
3. 如权利要求 1 所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、 酯或溶剂合物， 其特征在于， R = H或 R1QCO; R2 = H或 R1QCO; R3 = RuO、
R o
R12S、 R13R14N、 OH、 R10COO或 15χ^^ ; = H或 R16R17R18Si; R5 = RuO、 OH或 CH3COO; Re = H或 RuO; 或者 R5, 合在一起形成氧代基团； R7 = H、 卤素或羟甲基； =羟基或 H; R9 =羟基或 H; 或者 R8, R9合在一起形成氧代 基团； RiQ Cw烷基； Rn Cw焼基； R12 = Cw烷基、 带有一〜三个取代基或 不带取代基的苯基， 所述的取代基是卤素、 烷基、 含氟烷基、 硝基、 氰 基、 d_4烷氧基或羟基； R13 = CM烷基、 带有一〜三个取代基或不带取代基的苯 基， 所述的取代基是卤素、 CM烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 d_4烷氧基 或羟基； R14 = H或 烷基； 或者 R13和 R14与它们所连接的 N原子一起形成 带有一〜三个取代基或不带取代基的咪唑基； 所述的取代基是卤素、 烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 d.4烷氧基或羟基； R15 = H或 C^4烷基； R16= CM 院基； Rl7=Ci 4院基； Rl8=Ci 4院基。
4. 如权利要求 1所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、 酯或溶剂合物， 其特征是具有如下结构式：
Figure imgf000066_0001
H或 R1()CO; = 11或11。。0， 其中 Rio是
Cw烷基， R2。代表 H或者选自下组的取代基：： 卤素、 CM烷基、 CM含氟烷基、 硝基、 氰基、 CM烷氧基或羟基； n=l， 2， 或 3。
5. 如权利要求 4所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、
Figure imgf000066_0002
Figure imgf000067_0001
6. 如权利要求 1所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、
Figure imgf000067_0002
Figure imgf000068_0001
O 、 OAc O O OH OH
41 和 \ 42
7. 如权利要求 1所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、酯 或溶剂合物，其特征是所述的五元或者六元的芳环是环戊烯基或苯基，所述的五 元或者六元的含氮杂环是吡咯基、 咪唑基、 吡唑基或吡啶基， 所述的五元或者六 元的含氧杂环是呋喃基或吡喃基， 所述的五元或者六元的含硫杂环是噻吩基。
8.—种如权利要求 1所述的青藤碱衍生物或其异构体或其药学上可接受的 盐、 酯或溶剂合物的合成方法， 其特征是采用如下 1)、 1) ~2)、 3)、 3) ~4)、 3) 和 5)、 6) 或者 6) -7) 共七种步骤获得：
1)， 在室温下水中， 青藤碱或其盐酸盐与二醋酸碘苯反应 0.5 4小时， 获得 化合物 Cl， 所述的青藤碱或其盐酸盐与二醋酸碘苯的摩尔比为 1: 1-2；
0
2) 化合物 C1 与 RuOH、 R12SH、 R13R14 H、 H20、 5^\或 (R1()CO)20 在有机溶剂中反应获得化合物 C2， 或者 C1在有机溶剂中与 R16R17R18SiX反应 获得化合物 C3， 反应时间为 0.5 48小时， 所述的化合物 C1与 RuOH、 R12SH、 o
R13R14 H、 H20、 Rl5N^\、 （R1()CO)20或 R16R17R18SiX的摩尔比为 1: 1-10；
3)青藤碱或者其衍生物在常温下和甲醇中，与二醋酸碘苯反应 0.5 48小时， 获得化合物 C4或化合物 C5，所述的青藤碱或其衍生物与二醋酸碘苯的摩尔比为 1： 1
Figure imgf000069_0001
4) 化合物 C4在有机溶剂中， 冰水浴〜常温下， 通过硼氢化钠还原 1~24小 时获得 C7， 所述的化合物 C4与硼氢化钠摩尔比为 1 : 1-4； 或者在有机溶剂中 通过与三氯化铝回流反应 1~24小时获得 C6， 所述的化合物 C4与三氯化铝摩尔 比为 1 : 1-5；
5 ) 化合物 C5在有机溶剂中， 冰水浴〜常温下， 通过硼氢化钠还原 1~24小 时获得化合物 C8， 所述的化合物 C5与硼氢化钠摩尔比为 1 : 1-4； 或者在冰水 浴或常温下， 通过氢氧化锂水溶液反应 0.5 24小时水解获得化合物 C6， 所述的 化合物 C5与氢氧化锂摩尔比为 1 : 1-10；
6)青藤碱或者其衍生物在有机溶剂中， 冰水浴〜常温下， 在酰氯或者酸酐作 用 0.5 24小时获得化合物 C9， 所述的青藤碱或者其衍生物与酰氯或者酸酐的摩 尔比为 1 : 1-5； 或者化合物 C9在常温下， 与三氧化铬在硫酸水溶液中反应 1~24 小时获得化合物 C10， 所述的 C9与三氧化铬的摩尔比为 1 : 1-4； 所述的青藤碱 或者其衍生物具有如下结构式
Figure imgf000069_0002
7) 化合物 C10在有机溶剂中， 冰水浴或常温下， 通过硼氢化钠还原 1~24 小时获得化合物 Cll， 所述的化合物 C10与硼氢化钠摩尔比为 1 : 1-4； 或者在 冰水浴或常温下， 氢氧化锂水溶液水解 0.5 24小时获得化合物 Cll， 所述的化 合物 C10与氢氧化锂摩尔比为 1 : 1-10；
C11的结构式如下：
Figure imgf000069_0003
Figure imgf000070_0001
其中 Ri R2、 R3、 、 R_5、 R6 R7、 R8、 !¾、 Rio Rn Ri2 Ri3 Ri4 Ris R16、 R17、 R18如权利要求 1所述； R19 = H或 R1()CO; 所述 X为卤素。
9. 如权利要求 8所述的方法， 其特征是采用如下步骤获得： 化合物 C1与 R12SH在有机溶剂中反应获得化合物 C2， 反应时间为 0.5 48小时， 所述的化合 物 C1与 R12SH的摩尔比为 1 : 1-10； 其中 R12代表 ^， R2。代表 H或者 选自下组的取代基： 卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基 或羟基； n= l， 2， 或 3 ; 其中化合物 C1的结构如权利要求 8所述， 化合物 C2 的结构式如下：
Figure imgf000070_0002
式中 R = H或 R1()CO; R2 = H或 R1()CO; Rn^ C^烷基。
10. 如权利要求 8 所述的方法， 其特征是采用如下步骤获得： 1 ) 化合物 C1与 R12SH在有机溶剂中反应获得化合物 C2-l，所述的化合物 C1与 R12SH 的 摩尔比为 1 : 1-10；
2)化合物 C2-1在有机溶剂中，冰水浴〜常温下，在酰氯或者酸酐作用 0.5 24 小时获得化合物 C2-2, 所述的青藤碱或者其衍生物与酰氯或者酸酐的摩尔比为 1： 1-5；
化合物 Cl、 C2-l、 C2-2的结构式如下：
Figure imgf000071_0001
C1 C2-1 和 C2-2 其中 代表 R1()CO， R2代表 R1()CO; R12代表 U， R2。代表 H或者 选自下组的取代基： 卤素、 C^4烷基、 C^4含氟烷基、 硝基、 氰基、 C^4烷氧基 或羟基； n= l， 2， 或 3 ; Rn^ Cw烷基。
11.如权利要求 8、 9或 10任一项所述的方法， 其特征是所述的有机溶剂是 甲醇、 乙醇、 正丙醇、 正丁醇、 异丙醇、 二氯甲烷、 氯仿、 1,2-二氯乙烷、 四氯 化碳、 乙醚、 四氢呋喃、 苯、 甲苯、 二甲苯、 丙酮、 丁酮、 乙腈、 Ν,Ν-二甲基甲 酰胺 或二甲亚砜。
12. 一种药物组合物，其含有有效量的权利要求 1-7中任一项所述的青藤碱 衍生物或其异构体或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物， 以及药学上可接受的 载体、 赋形剂或稀释剂。
13. 如权利要求 12所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物还含有其它的 免疫类疾病的治疗剂。
14. 如权利要求 13所述的组合物， 其特征在于， 所述其它的免疫类疾病的 治疗剂选自非 体抗炎药、 糖皮质激素和免疫抑制剂。
15. 一种如权利要求 1-7中任一项所述的青藤碱衍生物的用途，其特征是用 于制备治疗免疫类疾病的药物。
16. 如权利要求 15 的用途， 其中所述免疫类疾病包括炎症性肠疾病、 炎 症、 类风湿性关节炎、 幼年型类风湿关节炎、 银屑病关节炎、 骨关节炎、 顽固性 类风湿性关节炎、 慢性非类风湿性关节炎、 Crohn's病、 哮喘。
17. 一种如权利要求 1-7中任一项所述的青藤碱衍生物的用途，其特征是用 于制备用于治疗或预防哺乳动物中与不正常肿瘤坏死因子 a活性相关病症的药 物。
18. 如权利要求 16的用途，其中所述与不正常 T F-α活性相关的病症包括: 炎症性肠疾病、炎症、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、 骨关节炎、 顽固性类风湿性关节炎、 慢性非类风湿性关节炎、 骨质疏松症 /骨重 吸收、 Crohn's病、 感染性休克、 内毒素休克、 动脉粥样硬化、 缺血一再灌注损 伤、 冠心病、 血管炎、 淀粉样变、 多发性硬化、 败血症、 慢性再发性葡萄膜炎、 丙型肝炎病毒感染、 疟疾、 溃疡性结肠炎、 恶病质、 银屑病、 Wegenrer's肉芽肿 病、 脑膜炎、 浆细胞瘤、 子宫内膜异位、 Behcet's病、 AIDS、 HIV感染、 自身 免疫性疾病、 免疫缺陷、 普通易变免疫缺陷病 (CVID )、 慢性移植物杭宿主病、 外伤和移植排斥反应、 成人呼吸窘迫综合症、 肺纤维化、 再发性卵巢癌、 淋顽固 性多发性骨健瘤、 骨髓增殖性疾病、 糖尿病、 幼年型糖尿病、 强直性脊柱炎、 皮 肤延迟型过敏病、 阿尔茨海默病、 系统性红斑狼疮、 变应性哮喘。
19. 一种治疗对象的免疫类疾病的方法，所述方法包括将权利要求 1-7中任 一项所述的青藤碱衍生物给予需要该治疗的对象。
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