WO2011076117A1 - 绝经期促性腺素组合物 - Google Patents

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WO2011076117A1
WO2011076117A1 PCT/CN2010/080097 CN2010080097W WO2011076117A1 WO 2011076117 A1 WO2011076117 A1 WO 2011076117A1 CN 2010080097 W CN2010080097 W CN 2010080097W WO 2011076117 A1 WO2011076117 A1 WO 2011076117A1
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fsh
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international units
protein
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PCT/CN2010/080097
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洪云海
高霄梁
季斌
季晓铭
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上海天伟生物制药有限公司
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    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Definitions

  • the present invention relates to the field of protein purification and biomedicine.
  • the present invention relates to a composition of menopausal gonadotropins and their stabilizers which have good stability. Background technique
  • HMG Human Menopausal Gonadotropins
  • FSH Follicle-stimulating hormone
  • LH leute ini zing hormone
  • Glycoprotein hormone which consists of two subunits, the alpha chain and the beta chain.
  • the a subunit of FSH is identical to the alpha subunit of levo ini zing hormone (LH) and chorionic gonadotropin (CG), with 92 amino acids and a molecular weight of approximately 14500 D.
  • Asparagine at positions 52 and 78 is an amino acid that undergoes glycosylation.
  • the beta subunit of FSH consists of 111 amino acids with a molecular weight of approximately 18,000 D, wherein asparagine at positions 7 and 24 is an amino acid that undergoes /glycosylation. While the LH ⁇ -subunit consists of 121 amino acids, molecular weight of about 14800 D; CG of the ⁇ -subunit has 145 amino acids, molecular weight 22000-39000 DH.
  • the bioavailability ratio of FSH and LH in HMG is between 10:1 and 1:10, usually 2:1 to 1: lo
  • HMG is mainly used to treat infertility and assisted reproduction in vitro.
  • HMG can be extracted from the urine of menopausal women, and FSH and LH can also be prepared by DNA recombination techniques.
  • the preparation form of HMG is usually a lyophilized powder needle, which is administered by intramuscular injection.
  • High-purity menopausal gonadotropin (pHMG) is a successor of HMG, which is a product with high purity and low impurity obtained by further purifying HMG to remove a large amount of heteroprotein, so it does not cause an allergic reaction in human body, and Because of these advantages, it can be used for subcutaneous injection, improve patient compliance, facilitate patient use, and alleviate pain.
  • the form of pHMG can be lyophilized powder needle or water needle.
  • W02004087213 discloses formulations containing HMG, sucrose and the surfactant Pluroni c and L-methionine. Although the above three formulations are relatively stable, the addition of various surfactants and excipients poses a great potential for the safety of the formulation.
  • the present invention is directed to a pharmaceutical composition comprising a menopausal gonadotropin comprising a high purity menopausal gonadotropin.
  • a protein composition comprising: menopausal gonadotropin (HMG) and / or a variant thereof, and sucrose.
  • the composition is in liquid form or in solid form.
  • the solid form is a freeze-dried powder.
  • the solid form of the composition comprises 0.1-200 FSH international units per mg of the composition, based on the FSH bioavailability.
  • the solid form of the composition contains 0.5 to 50 FSH international units per mg of the composition.
  • the solid form of the composition contains 1-20 FSH international units per mg of the composition based on the FSH bioavailability.
  • the composition in liquid form contains from 1 to 2000 FSH International Units per mL of composition, based on FSH bioavailability.
  • liquid form of the composition is contained in terms of FSH biological potency
  • the biopotency ratio of follic sputum hormone (FSH) to luteinizing hormone (LH) ranges from 10:1 to 1:10. Preferably, it is between 3:1 and 1:2; more preferably between 2:1 and 1:1.
  • the composition contains a menopausal gonadotropin which is a high-purity menopausal gonadotropin (pHMG) having a specific activity of not less than 5000 FSH international units/mg protein; more preferably a specific activity Do not Less than 6000 FSH international units / mg protein; more preferably, the specific activity is not less than 8000 FSH international units / mg protein.
  • pHMG menopausal gonadotropin
  • the composition contains menopausal gonadotropins from human urine-derived menopausal gonadotropins and/or variants thereof.
  • composition may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier;
  • pharmaceutically acceptable carrier may be selected from one or more of the following: pH adjusting agent, non- Ionic surfactants, preservatives, salts, disaccharides, mannitol.
  • the pH adjusting agent is a phosphate.
  • composition of the present invention is obtained by plugging, sealing or freeze-drying, followed by tamping and sealing.
  • the pH of the aqueous solution in the step (1) is from 6. 0 to 8. 5; preferably from 6. 5 to 8. 0.
  • the present invention provides a form of preparation of a menopausal gonadotropin having good stability, ease of use, and safety and efficacy.
  • sucrose at this time acts not only as a diluent and an excipient, but more importantly as a protective agent, which protects the conformational changes that may occur during storage and subsequent storage of glycoprotein molecules.
  • the resulting degeneration is deactivated. On the other hand, it also greatly improves the stability of the product.
  • the inventors have completed the present invention.
  • "menopausal gonadotropin”, “urinary gonadotropin” and “HMG” are used interchangeably and refer to a class of glycoprotein hormones or variants thereof produced by the pituitary, containing both FSH and LH. Active ingredient. It may be a recombinant menopausal gonadotropin or a variant thereof, or a human urine-derived menopausal gonadotropin or a variant thereof.
  • follicle stimulating hormone and “FSH” are used interchangeably and refer to a class of hormones or variants thereof that promote sperm or follicle production, promote ovarian development, which can be naturally preceded by the pituitary gland.
  • Leaf secretion can be extracted from the urine of menopausal women or can be obtained by recombinant techniques.
  • Luteinizing hormone and “LH” are used interchangeably to refer to a type of hormone that is secreted by the basal cells of the anterior pituitary gland and acts on mature oocytes to cause ovulation and produce corpus luteum. Or its variants.
  • impurity refers to substances other than menopaus gonadotropins, and refers to heteroproteins other than FSH, LH, such as degradation subunits, polymeric subunits, and the like.
  • sucrose acts as a protective agent to prevent denaturation of the glycoprotein molecules due to conformational changes that may occur during lyophilization and subsequent storage.
  • compositions provided herein contain menopausal gonadotropins; sucrose; and/or a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the sum of the weights of sucrose and menopausal gonadotropin is from 6 to 100%, preferably from 80 to 99%, more preferably from 90 to 98%, based on the total weight of the composition.
  • the content is in the range of 0.1-200 FSH international units, preferably 0.5-50 FSH international units, more preferably in the FSH bio-potency. For the 1-20 FSH International Unit.
  • the FSH bioavailability is in the range of 1-2000 FSH international units, preferably 30-1000 FSH international units.
  • the weight ratio of menopausal gonadotropin to sucrose is 0.00001: 1 - 1: 1, preferably 0.0001: 1 - 0.01: 1.
  • the ratio of the biopotency of follic sputum hormone (FSH) to luteinizing hormone (LH) is between 10:1 and 1:10; It is between 3:1 and 1:2; more preferably between 2:1 and 1:1.
  • FSH follic sputum hormone
  • LH luteinizing hormone
  • puri fi ed Human Menopausal Gonadotropins (pHMG) refers to HMG that is more than 5000 FSH international units (IU) / mg protein, preferably live at 6000 FSH IU. Above /mg protein, more preferably than 8000 FSH IU/mg protein.
  • the term "pharmaceutically acceptable carrier” refers to a carrier for the administration of a therapeutic agent, including various excipients and diluents.
  • the term refers to pharmaceutical carriers which are not themselves essential active ingredients and which are not excessively toxic after administration. Suitable carriers are well known to those of ordinary skill in the art. A full discussion of pharmaceutically acceptable excipients can be found in Remington's Pharmaceut i cal Sc ences (Mack Pub. Co., N. J. 1991).
  • the pharmaceutically acceptable carrier in the composition may include liquids such as water, saline, glycerol and ethanol.
  • auxiliary substances such as disintegrants, wetting agents, emulsifiers, pH buffering substances and the like may also be present in these carriers.
  • compositions can be prepared in a variety of dosage forms depending on the route of administration. These dosage forms are administered in one of the following ways: oral, spray inhalation, rectal administration, nasal administration, buccal administration, topical administration, parenteral administration, such as subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, intrathecal, intraventricular, intrasternal And intracranial injection or input, or with an explant reservoir. Among them, subcutaneous or muscle administration is preferred in the treatment.
  • the dosage and method of use of the active ingredient in the pharmaceutical composition of the present invention depends on various factors including the age, weight, sex, natural health status, nutritional status of the active ingredient, the intensity of active ingredient activity, the rate of taking, the rate of metabolism, and the condition.
  • the severity of the diagnosis and the subjective judgment of the doctor is recommended, typically at least about 30 FSH international units per day, and in most cases no more than about 600 FSH international units per day, preferably about 75 - 450 FSH international units. /day.
  • specific doses should also consider factors such as the route of administration, the health of the patient, etc., which are within the skill of the skilled physician.
  • the compositions provided by the present invention have good stability.
  • the stable pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by first dissolving phosphate and sucrose in water, then adding menopausal gonadotropin, stirring uniformly, tamping, sealing or freeze-drying, followed by tamping and sealing.
  • a composition of menopausal gonadotropin is provided for easy storage and transportation;
  • the pharmaceutical composition of the menopausal gonadotropin obtained by the method of the present invention has good stability.
  • the invention is further illustrated below in conjunction with specific embodiments. It is to be understood that the examples are not intended to limit the scope of the invention.
  • the experimental methods in which the specific conditions are not indicated in the following examples are usually carried out according to conventional conditions or according to the conditions recommended by the manufacturer. Percentages and parts are by weight unless otherwise stated.
  • Method for determination of protein content The measurement was carried out according to the Lowry method.
  • menopausal gonadotropin HMG
  • FSH biopotency 330 IU/mg
  • FSH specific activity 475 IU/mg
  • the protein, LH biopotency was 306 IU/mg
  • the LH specific activity was 440 IU/mg protein.
  • a, shelf temperature is +4 ° C for 20 minutes
  • the shelf temperature is reduced to below -40 °C for 3 hours;
  • the degree of vacuum is turned on, and the degree of vacuum is reduced to less than lOOmTor;
  • high-purity menopausal gonadotropin (pHMG) was purchased from Shanghai Tianwei Bio-Pharmaceutical Co., Ltd., and its FSH bio-potency was 7530 IU/mg, and the FSH specific activity was 10,750 IU. /mg protein, LH biopotency is 7709 IU/mg, and LH specific activity is 11006 IU/mg protein.
  • Example 3 The materials used in Example 3 and Comparative Example 3 were the same as in Example 2.
  • Control Formulation 3 containing 75 IU of FSH and 75 IULH (Formula disclosed in US 5,650,390) pHMG 12.5 ⁇ g
  • the preparation method is the same as that in the example 1 of the control formulation containing 75 IU of FSH and 75 IU of LH (the formulation disclosed in W02004112826A1):
  • the preparation method was the same as in Example 1.
  • Example 4 The materials used in Example 4 and Comparative Example 4 were the same as in Example 2.
  • Control Formulation 5 containing 75 IU FSH and 75 IU LH (as disclosed in WO2004087213 with pHMG 12.5 ⁇ g)

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Description

绝经期促性腺素组合物
技术领域
本发明涉及蛋白质纯化和生物医药领域。 具体而言， 本发明涉及绝经期 促性腺素及其稳定剂的组合物， 它具有良好的稳定性。 背景技术
绝经期促性腺素 （Human Menopausal Gonadotropins，简称 HMG ) 含有卵 泡剌激素（Fol l icle- stimulating hormone , 简称 FSH)和黄体生成激素 (leute ini zing hormone , 简称 LH)两种活性成分， 是由垂体产生的糖蛋白激 素， 它由 α 链和 β 链两个亚基组成。 FSH 的 a 亚基与黄体生成激素 (leute ini zing hormone ， 简称 LH) 禾口 绒毛膜促性腺素 (chorionic gonadotropin, 简称 CG)的 α亚基完全相同， 具有 92个氨基酸， 分子量约为 14500 D， 第 52和 78位置上的天冬酰胺是发生 -糖基化的氨基酸。 FSH的 β亚基由 111个氨基酸组成， 分子量约为 18000 D， 其中第 7和 24位置上的 天冬酰胺是发生 / ^糖基化的氨基酸。 而 LH的 β亚基由 121个氨基酸组成， 分子量约为 14800 D ; CG的 β亚基则有 145个氨基酸，分子量 22000-39000 DH。 HMG中 FSH和 LH的生物效价比例为 10 : 1至 1 : 10之间， 通常为 2 : 1至 1 : l o
临床上 HMG主要用于治疗不育症以及体外的辅助生殖。 HMG可以从绝经 期妇女的尿液中提取出来， 也可通过 DNA重组技术分别制备 FSH和 LH。
HMG 的制剂形式通常为冻干粉针， 使用方式为肌肉注射。 高纯度绝经期 促性腺素 （pHMG ) 是 HMG的后继产品， 它是将 HMG进行进一步的纯化， 去除 大量杂蛋白而获得的纯度高、杂质少的产品， 因此不会造成人体的过敏反应， 并且由于这些优点它可以用于皮下注射， 提高患者的顺应性， 方便患者的使 用、 减轻痛苦， pHMG的制剂形式可以为冻干粉针， 也可以是水针。
在 HMG和 pHMG制剂的研制方面， 获得一种稳定性良好、 使用方便、 安 全性高的剂型是患者、 医生所需要的以及各制造厂商致力于开发的方向。 但 目前的现有技术并不稳定， 对于制剂的运输过程、 储存过程的温度控制都要 求较苛刻， 稍有不慎就容易导致产品失去活性或降解， 特别是在高纯度绝经 期促性腺素领域， 这个问题尤其突出。 US5650390 公开了一种含有 HMG， 蔗 糖和甘氨酸的制剂配方。 W020041 12826A1公开了含有 HMG， 蔗糖和表面活性 剂吐温 （Tween ) 以及 L-蛋氨酸的制剂配方。 W02004087213公开了含有 HMG， 蔗糖和表面活性剂普流尼克 （Pluroni c ) 以及 L-蛋氨酸的制剂配方。 虽然上 述三种制剂配方还算比较稳定， 但由于添加了多种表面活性剂及赋形剂给制 剂的安全性带来了很大的隐患。
因此本领域迫切需要开发出一种具有良好稳定性、 使用方便、 安全有效 的绝经期促性腺素的制剂形式。 发明内容
本发明旨在提供一种含有绝经期促性腺素包括高纯度的绝经期促性腺 素的药物组合物。 在本发明的第一方面， 提供了一种蛋白质组合物， 所述的组合物包含： 绝 经期促性腺素 （HMG ) 和 /或其变体， 和蔗糖。
在另一优选例中， 所述的组合物是液体形式或固体形式。
在另一优选例中， 所述的固体形式是冷冻干燥粉末。
在另一优选例中， 以 FSH 生物效价计， 所述固体形式的组合物中含有 0. 1-200 FSH国际单位 /mg组合物。
在另一优选例中，以 FSH生物效价计，所述固体形式的组合物中含有 0. 5-50 FSH国际单位 /mg组合物。
在另一优选例中， 以 FSH生物效价计， 所述固体形式的组合物中含有 1-20 FSH国际单位 /mg组合物。
在另一优选例中，以 FSH生物效价计，所述液体形式的组合物中含有 1-2000 FSH国际单位 /mL组合物。
在另一优选例中， 以 FSH 生物效价计， 所述液体形式的组合物中含有
30-1000 FSH国际单位 /mL组合物。
在另一优选例中， 所述组合物所含有的绝经期促性腺素中， 卵泡剌激素 (FSH) 与黄体生成素 （LH) 的生物效价比例范围为 10 : 1至 1 : 10之间； 较佳 地， 为 3 : 1至 1 : 2之间； 更佳地为 2 : 1至 1 : 1之间。
在另一优选例中， 所述组合物所含有的绝经期促性腺素是高纯度绝经期促 性腺素 （pHMG ) ， 其比活不低于 5000 FSH国际单位 /mg蛋白； 较优选为比活不 低于 6000 FSH国际单位 /mg蛋白； 更优选为比活不低于 8000 FSH国际单位 /mg 蛋白。
在另一优选例中， 所述组合物所含有的绝经期促性腺素来自人尿来源的绝 经期促性腺素和 /或其变体。
在另一优选例中， 所述组合物还可以包含药学上可接受的载体； 所述的药 学上可接受的载体， 可以选自以下物质中的一种或一种以上： pH 调节剂、 非离 子表面活性剂、 防腐剂、 盐、 二糖、 甘露醇。
在另一优选例中， 所述的 pH调节剂是磷酸盐。 在本发明的第二方面， 提供了一种用于制备上述的本发明提供的蛋白质组 合物的方法， 所述的方法包括步骤：
( 1 ) 制备含绝经期促性腺素和蔗糖的水溶液；
( 2 ) 将水溶液分装到瓶中； 和
( 3 ) 压塞、 密封或进行冷冻干燥后再压塞、 密封， 得到上述的本发明提供 的组合物。
在另一优选例中， 所述的步骤（1 ) 中的水溶液的 pH为 6. 0— 8. 5 ; 优选 6. 5 -8. 0。 在本发明的第三方面， 提供了一种上述的本发明提供的蛋白质组合物在 制备治疗不育综合症的药物中的用途。 据此， 本发明提供了一种具有良好稳定性、 使用方便、 安全有效的绝经 期促性腺素的制剂形式。 具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究， 惊奇地发现绝经期促性腺素与合适的稳 定剂一蔗糖组合后， 可以得到稳定的组合物。
发明人发现， 此时蔗糖不仅起稀释剂和赋形剂的作用， 更重要的是起保 护剂的作用， 它可以保护糖蛋白分子在冷冻干燥过程中和以后的储存过程中 可能发生的构象变化所导致的变性失活， 另外一方面， 它对产品的稳定性也 有很大的提高。 在此基础上， 发明人完成了本发明。 如本文所用， "绝经期促性腺素" 、 "尿促性素" 和 "HMG" 可以互换 使用， 都是指一类由垂体产生的糖蛋白激素或其变体， 含有 FSH和 LH两种 活性成分。 可以是重组的绝经期促性腺素或其变体、 或是人尿来源的绝经期 促性腺素或其变体。
如本文所用， "卵泡剌激素" 和 "FSH" 可以互换使用， 都是指一类用 于促进精子或卵泡产生、 促进卵巢发育的激素或其变体， 其可在天然情况下 由垂体前叶分泌， 可从绝经期妇女的尿液中提取或可通过重组技术获得的。
如本文所用， "黄体生成激素" 和 "LH" 可以互换使用， 都是指是由脑 垂体前叶嗜碱性细胞分泌的， 作用于成熟的卵胞， 能引起排卵并生成黄体的 一类激素或其变体。
如本文所用， "杂质" 是指除了绝经期促性腺素之外的其它物质，是指 除 FSH、 LH以外的杂蛋白， 如降解亚基、 聚合亚基等。 在探索改进现有技术方法的过程中， 发明人注意到将绝经期促性腺素与 蔗糖进行适当的配比， 特别是绝经期促性腺素和蔗糖的浓度在一个合适范围 内， 那么此时蔗糖会起到保护剂的作用， 防止糖蛋白分子在冷冻干燥过程中 和以后的储存过程中可能发生的构象变化所导致的变性失活。
本发明提供的组合物中含有绝经期促性腺素； 蔗糖； 和 /或药学上可接 受的载体。 以组合物的总重量计， 蔗糖和绝经期促性腺素的重量之和是组合 物总重量的 6— 100%， 较佳地是 80— 99%， 更佳地是 90— 98%。
剂型为冻干粉针的情况下， 在每毫克本发明提供的组合物中， 以 FSH生 物效价计， 含量在 0.1-200 FSH国际单位， 较佳地为 0.5-50FSH国际单位， 更佳地为 1-20 FSH国际单位。
剂型为水针的情况下， 在每毫升本发明提供的组合物中， 以 FSH生物效 价计， 含量在 1-2000 FSH国际单位， 较佳地为 30-1000 FSH国际单位。
在本发明提供的组合物中，绝经期促性腺素和蔗糖的重量比为 0.00001： 1 - 1: 1， 较佳地为 0.0001: 1 - 0.01： 1。
在本发明提供的组合物中，所述的绝经期促性腺素中，卵泡剌激素（FSH) 与黄体生成素 （LH) 的生物效价比例为 10: 1至 1: 10之间； 较优选为 3: 1 至 1: 2之间； 更优选为 2: 1至 1: 1之间。 如本文所用， "高纯度绝经期促性腺素 （puri f i ed Human Menopausal Gonadotropins, pHMG ) ，， 是指比活在 5000 FSH国际单位 ( IU ) /mg蛋白以 上的 HMG， 优选比活在 6000 FSH IU/mg蛋白以上， 更佳地为比活在 8000 FSH IU/mg蛋白以上。
如本文所用， 术语 "药学上可接受的载体" 指用于治疗剂给药的载体， 包括各种赋形剂和稀释剂。 该术语指这样一些药剂载体： 它们本身并不是必 要的活性成分， 且施用后没有过分的毒性。 合适的载体是本领域普通技术人 员所熟知的。 在 Remington' s Pharmaceut i cal Sc i ences (Mack Pub. Co.， N. J. 1991 )中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。 在组合物中药 学上可接受的载体可包括液体， 如水、 盐水、 甘油和乙醇。 另外， 这些载体 中还可能存在辅助性的物质， 如崩解剂、 润湿剂、 乳化剂、 pH缓冲物质等。
所述药物组合物可以根据不同给药途径而制备成各种剂型。 这些剂型以 下面方式之一施用： 口服、 喷雾吸入、 直肠用药、 鼻腔用药、 颊部用药、 局 部用药、 非肠道用药， 如皮下、 静脉、 肌肉、 腹膜内、 鞘内、 心室内、 胸骨 内和颅内注射或输入， 或借助一种外植储器用药。 其中治疗时优选皮下或肌 肉给药方式。
另外需要指出， 本发明药物组合物中有效成分的使用剂量和使用方法取 决于诸多因素， 包括患者的年龄、 体重、 性别、 自然健康状况、 营养状况、 有效成分活性强度、 服用、 代谢速率、 病症的严重程度以及诊治医师的主观 判断。 建议安全有效量， 以 FSH生物效价计通常至少约 30 FSH国际单位 /天， 而且在大多数情况下不超过约 600 FSH国际单位 /天， 较佳地该剂量是约 75 - 450 FSH国际单位 /天。 当然， 具体剂量还应考虑给药途径、 病人健康状况等 因素， 这些都是熟练医师技能范围之内的。 本发明提供的组合物具有良好的稳定性。
本发明的稳定的药物组合物可以这样制备：将磷酸盐、蔗糖先用水溶解， 然后加入绝经期促性腺素， 搅拌均匀， 压塞、 密封或进行冷冻干燥后再压塞、 密封。 本发明提到的上述特征， 或实施例提到的特征可以任意组合。 本案说明 书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用， 说明书中所揭示的各个特 征， 可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。 因此除有特 别说明， 所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。 本发明的主要优点在于：
1、 提供了一种绝经期促性腺素的组合物， 便于保存和运输；
2、 本发明方法获得的绝经期促性腺素的药物组合物， 具有良好的稳定 性。 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中未注明具体条件的实 验方法， 通常按照常规条件、 或按照制造厂商所建议的条件。 除非另外说明， 否则百分比和份数按重量计算。
除非另行定义， 文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所 熟悉的意义相同。 此外， 任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应 用于本发明中。 文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。 生物效价的测定方法： 按照中国药典 2005版附录 XI I M、 附录 XI I N的 方法测定 FSH、 LH生物效价。
蛋白质含量测定方法： 按 Lowry法进行测定。
液体中 FSH比活的计算方法：比活 =每毫升液体中 FSH生物效价（IU/mL )
÷每毫升液体中的蛋白含量 （mg蛋白 /mL ) 。
固体中 FSH比活的计算方法：比活 =每毫克固体中 FSH生物效价（IU/mg ) ÷每毫克固体中的蛋白含量 （mg蛋白 /mg ) 实施例 1
实施例 1 和对照例 1 所用原料中， 绝经期促性腺素 （HMG ) 购自上海天 伟生物制药有限公司， 其 FSH生物效价为 330国际单位 /mg， FSH比活为 475 国际单位 /mg蛋白， LH生物效价为 306国际单位 /mg， LH比活为 440国际单 位 /mg蛋白。
每支含 75 IU FSH和 75 IU LH的配方 1 :
HMG 250 μ g 蔗糖 30mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg 制备过程：
按上述配方 1计算出实际生产规模所需的各个原辅料的量， 先在容器中 加入注射用水， 然后加入 Na¾P04 · ¾0， Na2HP04 · 2¾0和蔗糖， 搅拌 10分钟 至完全溶解；
测定 pH是否在 7.0±0.2， 若不在此范围则用 1M NaOH溶液或 1M HC1溶 液调 pH至 7.0±0.2;
将 HMG加入上述溶液， 搅拌 10分钟至完全溶解；
测定 pH是否在 7.0±0.2， 若不在此范围则用 1M NaOH溶液或 1M HC1溶 液调 pH至 7.0±0.2;
用 0.22μ ηι Durapore 膜进行无菌过滤， 滤过液分装至抗生素瓶中， 半 加塞， 装盘放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥， 冷冻干燥程序如下：
a、 搁板温度为 +4°C维持 20分钟；
b、 搁板温度降至 -40°C以下维持 3小时；
c、 开启冷阱， 冷阱温度降至 -45°C以下；
d、 开启真空度， 真空度降至 lOOmTor以下；
e、 搁板温度升至 -10°C维持 10小时；
d、 搁板温度在 2小时内从 -10°C升至 +35°C， 然后在 +35°C维持 5小时； f、 干燥结束后充氮气， 压塞， 出箱， 轧盖。 对照例 1
每支含 75IU FSH和 75IU LH的对照例配方 1:
HMG 250 μ g
甘露醇 10mg
Na¾P04 H20 0.69mg
Na2HP04 2H20 0.8mg
制备方法同实施例 1。 上述 2个配方在 40±2°C， RH75±10%下的稳定性结果如下:
Figure imgf000009_0001
可见， 采用本发明所获得的组合物配方 1的稳定性明显优于对照例。 实施例 2
实施例 2和对照例 2所用原料中， 高纯度绝经期促性腺素 （pHMG) 购自 上海天伟生物制药有限公司， 其 FSH生物效价为 7530国际单位 /mg， FSH比 活为 10750国际单位 /mg蛋白， LH生物效价为 7709国际单位 /mg， LH比活为 11006国际单位 /mg蛋白。
每支含 75IU FSH和 75IU LH的配方 2:
pHMG 12.5 μ g
蔗糖 15mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg 每支含 75IU FSH和 75IU LH的配方 3:
pHMG 12.5 μ g
蔗糖 30mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg 制备方法同实施例 1。 对照例 2
每支含 75IU FSH和 75IU LH的对照例配方 2:
pHMG 12.5 μ g Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg
制备方法同实施例 1。 上述 3个配方在 40±2°C， RH75±10%下的稳定性结果如下:
Figure imgf000010_0001
可见， 采用本发明所获得的组合物配方 2和配方 3的稳定性明显优于对 照例。 实施例 3
实施例 3 和对照例 3 中所用原料同实施例 2。
每支含 150IU FSH 和 150IU LH 的配方 4:
pHMG 25 μ g
蔗糖 7.5mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg 每支含 75IU FSH 和 75IU LH 的配方 5
pHMG 12.5 μ g
蔗糖 75mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg
制备方法同实施例 1 对照例 3
每支含 75IUFSH和 75IULH的对照例配方 3 (US5650390公开的配方） pHMG 12.5 μ g
蔗糖 20mg
甘氨酸 lOmg
Na¾P04 ¾0 0.69mg
Na2HP04 2H20 0.8mg
制备方法同实施例 1 每支含 75IU FSH 和 75IU LH 的对照例配方 4 ( W02004112826A1 公开 的配方） ：
pHMG 12.5 μ g
蔗糖 30mg
吐温 20 0.05mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg
L-蛋氨酸： 0. lmg
制备方法同实施例 1。
实施例 3和对比例 3中 4个配方在 40±2°C， RH75±10%下的稳定性结果 如下:
0 1 个月 3 个月 6 个月
FSH (IU/支） 174 168 170 169 配方 4
LH (IU/支） 156 162 140 153
FSH (IU/支） 79 74 82 77 配方 5
LH (IU/支） 80 87 76 78 对照例配方 FSH (IU/支） 81 67 72 69 3 LH (IU/支） 83 84 77 71 对照例配方 FSH (IU/支） 90 90 76 68 4 LH (IU/支） 80 87 75 72 可见， 采用本发明所获得的组合物配方 4 和配方 5 的稳定性明显优于 对照例。 实施例 4
实施例 4 和对照例 4 所用原料同实施例 2。
每支含 75IU FSH 和 75IU LH 的液体配方 6:
pHMG 12.5 μ g
蔗糖 30mg
Na¾P04 · H20 0.69mg
Na2HP04 · 2H20 0.8mg
间甲酚 0.375mg
加注射用水至 0.5mL
制备过程：
按上述配方 6计算出实际生产规模所需的各个原辅料的量， 先在容器中 加入注射用水， 然后加入 Na¾P04 · ¾0， Na2HP04 · 2¾0， 蔗糖和间甲酚， 搅拌 10分钟至完全溶解；
测定 pH是否在 7.0±0.2， 若不在此范围则用 1M NaOH溶液或 1M HC1溶 液调 pH至 7.0±0.2;
将 HMG加入上述溶液， 搅拌 10分钟至完全溶解；
测定 pH是否在 7.0±0.2， 若不在此范围则用 1M NaOH溶液或 1M HC1溶 液调 pH至 7.0±0.2;
用 0.22μηι Durapore膜进行无菌过滤， 滤过液无菌分装至抗生素瓶中。 对照例 4
每支含 75IU FSH 和 75IU LH 的对照例配方 5 (W02004087213公开的配 pHMG 12.5 μ g
蔗糖 7.5mg
普流尼克 F68 0.0125mg
L-蛋氨酸: 0.0125mg
间甲酚 0.375mg Na¾P04 · H20 0. 69mg
Na2HP04 · 2H20 0. 8mg
制备方法同实施例 4。 实施例 5
稳定性实验
上述 2个配方在 2~8 °C下的稳定性结果如下
Figure imgf000013_0001
可见， 采用本发明所获得的组合物配方 6 的稳定性明显优于对照例 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并非用以限定本发明的实质技 术内容范围， 本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围 中， 任何他人完成的技术实体或方法， 若是与申请的权利要求范围所定义的 完全相同， 也或是一种等效的变更， 均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims

权 利 要 求
1.一种蛋白质组合物， 所述的组合物包含： 蔗糖， 和绝经期促性腺素（HMG ) 和 /或其变体。
2. 如权利要求 1所述的组合物， 其特征在于， 所述的组合物是液体形式或 固体形式。
3. 如权利要求 2所述的组合物， 其特征在于， 所述的固体形式是冷冻干燥 粉末。
4. 如权利要求 2所述的组合物， 其特征在于， 以 FSH生物效价计， 所述固 体形式的组合物中含有 0. 1-200 FSH国际单位 /mg组合物。
5. 如权利要求 4所述的组合物， 其特征在于， 以 FSH生物效价计， 所述固 体形式的组合物中含有 0. 5-50 FSH国际单位 /mg组合物。
6. 如权利要求 4所述的组合物， 其特征在于， 以 FSH生物效价计， 所述固 体形式的组合物中含有 1-20 FSH国际单位 /mg组合物。
7.如权利要求 2所述的组合物， 其特征在于， 以 FSH生物效价计， 所述液 体形式的组合物中含有 1-2000 FSH国际单位 /mL组合物。
8.如权利要求 7所述的组合物， 其特征在于， 以 FSH生物效价计， 所述液 体形式的组合物中含有 30-1000 FSH国际单位 /mL组合物。
9. 如权利要求 1一 8任一所述的组合物， 其特征在于， 所述的绝经期促性 腺素中， 卵泡剌激素 （FSH ) 与黄体生成素 （LH ) 的生物效价比例范围为 10 : 1 至 1： 10之间。
10. 如权利要求 9所述的组合物， 其特征在于， 所述的绝经期促性腺素中， 卵泡剌激素 （FSH ) 与黄体生成素 （LH ) 的生物效价比例范围为 3 : 1至 1 : 2之 间； 优选为 2 : 1至 1 : 1之间。
1 1 . 如权利要求 9 所述的组合物， 其特征在于， 所述的绝经期促性腺素是 高纯度绝经期促性腺素 （pHMG ) ， 其比活不低于 5000 FSH国际单位 /mg蛋白； 较优选为比活不低于 6000 FSH国际单位 /mg蛋白；更优选为比活不低于 8000 FSH 国际单位 /mg蛋白。
12. 如权利要求 1 所述的组合物， 其特征在于， 所述的绝经期促性腺素来 自人尿来源的绝经期促性腺素和 /或其变体。
13. 如权利要求 1 所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物还可以包含药 学上可接受的载体。
14. 如权利要求 13所述的组合物， 其特征在于， 所述的药学上可接受的载 体， 可以选自以下物质中的一种或一种以上： pH 调节剂、 非离子表面活性剂、 防腐剂、 盐、 二糖、 甘露醇。
15. 如权利要求 14所述的组合物， 其特征在于， 所述的 pH调节剂是磷酸
16. 一种用于制备如权利要求 1 15 任一所述的蛋白质组合物的方法， 其 特征在于， 所述的方法包括步骤：
( 1 ) 制备含绝经期促性腺素和蔗糖的水溶液；
( 2 ) 将水溶液分装到瓶中；
( 3 ) 压塞、 密封或进行冷冻干燥后再压塞、 密封， 得到如权利要求 1 16 任一所述的组合物。
17.如权利要求 16所述的制备方法， 其特征在于， 所述的步骤 （1 ) 中的水 溶液的 pH为 6. 0 8. 5 ; 优选 6. 5— 8. 0。
18. 一种如权利要求 1 15任一所述的蛋白质组合物在制备治疗不育综 合症的药物中的用途。
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