KR20120106850A - 인간폐경성선자극호르몬의 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간폐경성선자극호르몬을 함유한 단백질 조성물을 제공하며, 상기 단백질 조성물에는 안정제인 자당이 포함되어 있다. 본 발명에서 제공한 단백질 조성물은 강화된 안정성을 가지고 있다.

Description

인간폐경성선자극호르몬의 조성물{COMPOSITIONS OF MENOPAUSAL GONADOTROPHINS}
본 발명은 단백질 정제 및 생물 의약 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 인간폐경성선자극호르몬 및 그의 안정제의 조성물에 관한 것이며, 상기 조성물은 우수한 안정성을 가지고 있다.
인간폐경성선자극호르몬(Human Menopausal Gonadotropins, 약칭 HMG)은 난포자극호르몬(Follicle-stimulating hormone，약칭 FSH) 및 황체형성호르몬(leuteinizing hormone，약칭 LH)의 두가지 활성성분을 포함하고 있다. 이들은 뇌하수체에서 생성되는 당단백질 호르몬으로서, α사슬 및 β사슬 두 개의 소단위로 구성된다. FSH의 α소단위는 황체형성호르몬(LH)과 융모성생식선자극호르몬 (chorionic gonadotropin，약칭 CG)의 α소단위와 완전 동일하며, 92개 아미노산을 가지고 있고 분자량은 약 14500D이다. 그 중, 제52번과 78번 위치의 아스파라긴(asparagine)은 N-글루코실화된 아미노산이다. FSH의 β소단위는 111개의 아미노산으로 구성되었으며, 분자량은 약 18000D이다. 그 중, 제 7 번과 24번 위치의 아스파라긴은 N-글루코실화된 아미노산이다. 그러나, LH의 β소단위는 121개의 아미노산으로 구성되었으며, 분자량은 약 14800D이다. CG의β소단위는 145개의 아미노산으로 구성되었으며, 분자량은 22000 내지 39000DH이다. HMG 중, FSH와 LH의 생물적 역가비는 10：1 내지 1：10이며，일반적으로 2：1 내지 1：1이다.
임상에서, HMG는 주로 불임치료 및 체외 보조생식에 사용된다. HMG는 폐경기 여성의 뇨액에서 분리할 수 있으며, 또한 DNA재조합 기술을 통해 FSH와 LH를 각각 제조할 수 있다.
HMG 제제 형식은 일반적으로 동결건조 분말 주사제이며 사용방식은 근육주사이다. 고순도 인간폐경성선자극호르몬(pHMG)은 HMG에 이어 나온 제품이며, HMG를 진일보 정제하여 대량의 잡질 단백질을 제거하여 얻은 순도가 높고 잡질이 적은 제품이다. 이로 인하여, 인체에 대한 과민반응을 일으키지 않을 뿐만 아니라, 이러한 장점에 의해 피하주사 방식을 취할 수 있어, 환자의 적응성을 제고시킬 수 있으며, 환자의 사용에 편리하고 고통을 경감시킬 수 있다. pHMG 제제의 형식은 동결건조 분말 주사제 또는 수액 주사제이다.
HMG 및 pHMG 제제의 연구에 있어서, 안정성이 우수하고, 사용이 편리하며, 안전성이 높은 제제는 환자와 의사가 필요로 하고, 각 제조상에서 개발하려고 노력하는 방향이다. 그러나, 현재 기존기술이 불안정하고, 제제의 운송, 저장과정에서 온도제어에 대한 요구가 엄격하여, 약간의 부주의로 인해서도 제품의 활성이 쉽게 떨어지거나 분해될 수 있다. 특히, 고순도의 인간폐경성선자극호르몬 분야에서 이 문제가 더 뚜렷이 나타나고 있다. US5650390에는 HMG, 자당 및 글리신을 포함한 제제의 조제방법이 공개되었다. WO2004112826A1에는 HMG，자당, 계면활성제인 트윈(Tween) 및 L-메티오닌을 포함한 제제의 조제방법이 기재되어 있다. WO2004087213에는 HMG, 자당, 계면활성제인 플루로닉(Pluronic) 및 L-메티오닌을 포함한 제제의 조제방법이 기재되어 있다. 상기 세 가지 제제의 조제방법이 비교적 안정하기는 하나, 여러 종류의 계면활성제 및 부형제를 첨가하여 안전성에 큰 위험을 가져다주고 있다.
그리하여, 본 분야에서는 안정성이 우수하고, 사용이 편리하며, 안전하고 효과적인 인간폐경성선자극호르몬의 제제 형태의 개발을 절박히 요구하고 있다.
본 발명의 목적은 일종의 고순도의 인간폐경성선자극호르몬을 함유한 약물 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 방면에서, 인간폐경성선자극호르몬(HMG) 및/또는 그의 변이체와 자당을 포함한 단백질 조성물을 제공한다.
다른 바람직한 실시예에서, 상기 단백질 조성물은 액체형태 또는 고체형태이다.
다른 바람직한 실시예에서, 상기 고체형태는 동결건조 분말이다.
다른 바람직한 실시예에서, FSH 생물적 역가에 따라 계산하면, 상기 고체형태의 조성물에 0.1 내지 200 FSH 국제단위/mg 조성물을 포함한다.
다른 바람직한 실시예에서, FSH 생물적 역가에 따라 계산하면, 상기 고체형태의 조성물에 0.5 내지 50 FSH 국제단위/mg 조성물을 포함한다.
다른 바람직한 실시예에서, FSH 생물적 역가에 따라 계산하면, 상기 고체형태의 조성물에 1 내지 20 FSH 국제단위/mg 조성물을 포함한다.
다른 바람직한 실시예에서, FSH 생물적 역가에 따라 계산하면, 상기 액체형태의 조성물에 1 내지 2000 FSH 국제단위/mL 조성물을 포함한다.
다른 바람직한 실시예에서, FSH 생물적 역가에 따라 계산하면, 상기 액체형태의 조성물에 30 내지 1000 FSH 국제단위/mL 조성물을 포함한다.
다른 바람직한 실시예에서, 상기 조성물에 함유된 인간폐경성선자극호르몬 중, 난포자극호르몬(FSH)과 황체형성호르몬(LH)의 생물적 역가비의 범위는 10：1 내지 1：10이며, 바람직하게는 3：1 내지 1：2이며, 더 바람직하게는 2：1 내지 1：1이다.
다른 바람직한 실시예에서, 상기　조성물에 함유된 인간폐경성선자극호르몬은 고순도의 인간폐경성선자극호르몬(pHMG)이며, 특이활성도는 5000 FSH 국제단위/mg 단백질 이상이며, 바람직하게 특이활성도는 6000 FSH 국제단위/mg 단백질 이상이며, 더 바람직하게, 특이활성도는 8000 FSH 국제단위/mg 단백질 이상이다.
다른 바람직한 실시예에서, 상기 조성물에 함유된 인간폐경성선자극호르몬은 인간뇨에서 유래된 인간폐경성선자극호르몬 및/또는 그 변이체이다
다른 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하며, 상기 약학적으로 허용가능한 담체는 pH조정제, 비이온 계면활성제, 방부제, 염, 이당류, 마니톨에서 선택되는 1종 또는 1종 이상이다.
다른 바람직한 실시예에서, 상기 pH조정제는 인산염이다.
본 발명의 두 번째 방면에서, 상기 본 발명에서 제공하는 단백질 조성물의 제조방법을 제공하며, 상기 방법에는 하기 단계가 포함된다.
(1) 인간폐경성선자극호르몬과 자당을 포함한 수용액을 제조하는 단계,
(2) 수용액을 앰플병에 분주하는 단계, 및
(3) 압력 막음, 밀봉 또는 동결건조 후 압력 막음, 밀봉을 통해 본 발명에서 제공하는 상기 조성물을 얻는 단계
바람직한 실시예에서, 상기 단계(1)의 수용액의 pH는 6.0 내지 8.5이며, 더 바람직하게는 6.5 내지 8.0이다.
본 발명의 세 번째 방면에서, 상기 본 발명에서 제공한 단백질 조성물을 불임증후군 치료 약물의 제조에 사용하는 용도를 제공한다.
이로써, 본 발명은 우수한 안정성을 가지고 있고, 사용이 편리하며, 안전하고 효과적인 인간폐경성선자극호르몬의 제제 형태를 제공한다.
발명자는 광범위하고 심도 있는 연구를 통해, 놀랍게도 인간폐경성선자극호르몬과 적당한 안정제인 자당을 조합하여 안정한 조성물을 얻을 수 있음을 발견하였다.
발명자는 자당이 희석제 및 부형제의 작용을 할 뿐만 아니라, 더 중요하게는 보호제의 작용을 하는 것을 발견하였다. 자당은 당단백질 분자가 동결건조 과정 및 그후의 저장 과정에서 발생할 수 있는 형태 변화로 인한 변성, 불활성화를 방지할 수 있으며, 제품에 대한 안정성에도 큰 기여를 한다. 이에 기초하여, 발명자는 본 발명을 완성하였다.
본 명세서에서 사용되는 "인간폐경성선자극호르몬", "메노트로핀", 및 "HMG"는 서로 교환사용 가능하고, 모두 뇌하수체에서 생성되는 당단백질 호르몬의 일종 또는 그 변이체이며, FSH와 LH 두 가지 활성성분을 포함하고 있다. 재조합된 인간폐경성선자극호르몬 또는 그 변이체 이거나 인간뇨에서 유래된 인간폐경성선자극호르몬 및 그 변이체도 가능하다.
본 명세서에서 사용되는 "난포자극호르몬"과 "FSH"는 서로 교환사용 가능하고, 모두 정자 혹은 난포 생성을 촉진하는데 사용되며, 난소발육을 촉진시키는 일련의 호르몬 혹은 그 변이체를 가리킨다. 또한, 자연적인 상황 하에서 뇌하수체 전엽으로부터 분비되며, 폐경기에 처한 부녀의 뇨액에서 추출하거나 혹은 재조합기술을 통해서 얻을 수도 있다.
본 명세서에서 사용되는 "황체형성호르몬"과 "LH"는 서로 교환사용 가능하며, 뇌하수체 전엽의 호염기성 세포에서 분비되는 물질로서, 성숙한 난포에 작용하여 배란을 촉진시키거나 또는 황체의 일련의 호르몬 또는 그 변이체를 생성시킬 수 있다.
본 명세서에서, "불순물"은 인간폐경성선자극호르몬 외의 기타 물질, 즉 FSH, LH 이외의 잡질 단백질을 가리킨다. 예를 들어, 분해된 소단위 또는 중합된 소단위 등을 가리킨다.
기존 방법에 대한 탐색 및 개선 과정에서, 발명자는 인간폐경성선자극호르몬과 자당을 적당한 비율로 조합하는 경우, 특히, 인간폐경성선자극호르몬과 자당의 농도가 적당한 범위 내에 있을 경우, 자당은 보호제의 작용을 하여 당단백질 분자가 동결건조 과정 및 이후의 저장과정에서 형태의 변화로 인한 변성, 불활성화를 방지할 수 있음을 발견하였다.
본 발명에서 제공하는 조성물에는 인간폐경성선자극호르몬, 자당 및/또는 약학적으로 허용가능한 담체가 포함된다. 조성물의 중량 합계로 계산 시, 자당과 인간폐경성선자극호르몬의 중량 합계는 조성물 전체 중량의 6 내지 100％이며，바람직하게는 80 내지 99％이며，더 바람직하게는 90 내지 98％이다.
제형이 동결건조 분말 주사제인 경우, 본 발명에서 제공하는 조성물 1mg 당, FSH의 생물적 역가로 계산할 경우, 0.1 내지 200 FSH 국제단위，바람직하게는 0.5 내지 50 FSH 국제단위，더 바람직하게는 1 내지 20 FSH 국제단위가 포함된다.
제형이 주사액인 경우, 본 발명에서 제공한 조성물 1ml 당, FSH의 생물적 역가로 계산할 경우, 1 내지 2000 FSH 국제단위，더 바람직하게는 30 내지 1000 FSH 국제단위가 포함된다.
본 발명에서 제공하는 조성물에 있어서, 인간폐경성선자극호르몬과 자당의 중량비는 0.00001：1 내지 1：1이며, 바람직하게는 0.0001：1 내지 0.01：1이다.
본 발명에서 제공하는 조성물에 있어서, 상기 인간폐경성선자극호르몬 중, 난포자극호르몬(FSH)과 황체형성호르몬(LH)의 생물적 역가비는 10：1 내지 1：10이며, 바람직하게는 3：1 내지 1：2이며, 더 바람직하게는 2：1 내지 1：1이다.
본 명세서에서 사용된 "고순도의 인간폐경성선자극호르몬(purified Human Menopausal Gonadotropins, pHMG)"은 특이 활성도가 5000 FSH 국제단위(IU)/mg 단백질 이상인 HMG를 가리키며, 바람직하게는 특이 활성도가 6000 FSH IU/mg 단백질 이상인 HMG, 더 바람직하게는 특이 활성도가 8000 FSH IU/mg 단백질 이상인 HMG를 가리킨다.
본 명세서에서 사용되는 기술용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 치료제 투여에 사용되는 담체를 가리키며, 각종 부형제와 희석제를 포함한다. 이 기술용어는, 그 자체가 필요한 활성 성분이 아니며, 또한 투여 후 과도한 독성이 없는 일부 약제 담체를 가리킨다. 적합한 담체는 해당 분야의 당업자가 잘 알고 있는 담체이다. Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Pub. Co.，N.J. 1991)에서 약학적으로 허용가능한 부형제에 대한 충분한 내용을 찾아볼 수 있다. 조성물 중 약학적으로 허용가능한 담체는, 예를 들어 물, 식염수, 글리세린 및 에탄올 등 액체가 포함된다. 그외, 이러한 담체 중에는 또한, 예를 들어 붕괴제, 습윤제, 유화제 및 pH완충물질 등 보조적 물질이 존재할 수 있다.
상기 약물 조성물은 상이한 투약 경로에 따라 여러 가지 제형으로 만들어진다. 이러한 제형은 내복, 분무 흡입, 직장 내 투여, 비강 내 투여, 얼굴부위 투여, 국부적 투여, 비장 내 투여, 피하, 정맥, 근육, 복막 내, 척수관 내, 심실 내, 흉골 내 및 두개골 내 주사 및 주입, 또는 외부 저장기기에 의한 투여 등 방식으로 투여된다. 그 중, 치료 시, 바람직하게 피하 또는 근육 투여방식을 취한다.
그 외 주의해야 할 점은, 본 발명의 약물 조성물 중, 유효성분의 사용량과 사용방법은 환자의 연령, 체중, 성별, 자연건강 상황, 영양상황, 유효성분의 활성 강도, 복용, 대사속도, 병증의 엄중한 정도 및 주치 의사의 주관적인 판단 등 여러 가지 요소에 의해 결정된다. 안전 유효량의 제안 사용량은 FSH 생물적 역가로 계산할 경우, 적어도 약 30 FSH 국제단위/일이며，대부분 상황에서 약 600 FSH 국제단위/일을 초과하지 않는다. 바람직한 사용량은 약 75 내지 450 FSH 국제단위/일이다. 당연히, 구체적인 사용량은 투여 경로, 환자의 건강상황 등의 요소를 고려해야 하며, 이는 모두 숙련된 의사의 기능범위에 속한다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 우수한 안정성을 가지고 있다.
본 발명의 안정한 약물 조성물은 하기와 같이 제조할 수 있다. 즉 인산염과 자당을 우선 물에 용해시킨 후, 인간폐경성선자극호르몬을 첨가하여 균일하게 교반한 다음, 압력 막음, 밀봉 또는 동결건조 후 재차 압력 막음, 밀봉을 진행한다.
본 발명에 기재된 상기 특징 또는 실시예에 기재된 특징은 임의로 조합할 수 있다. 본 발명의 명세서에 기재한 모든 특징은 임의의 조성물 형태로 사용할 수 있으며, 명세서에 기재된 매개 특징은 임의의 동일하거나 균등하거나 또는 유사한 목적을 이룰 수 있는 대체적 특징에 의해 대체될 수 있다. 특별한 설명이 있지 않으면, 기재된 모든 특징은 균등하거나 유사한 특징의 일반 예이다.
본 발명의 장점은 다음과 같다.
1. 보존과 운송에 편리한 인간폐경성선자극호르몬의 조성물을 제공한다.
2. 본 발명의 방법에 의해 얻은 인간폐경성선자극호르몬의 약물 조성물은 우수한 안정성을 가지고 있다.
이하 구체적인 실시예로 본 발명에 대해 상세히 설명한다. 하기 실시예들은 본 발명을 예시한 것일 뿐이고, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 하기 실시예 중 조건을 표기하지 않은 실험방법은 일반적인 조건, 또는 제조상에서 추천하는 조건 하에서 진행된 것이다. 특별한 설명이 없는 경우, 백분비, 분량수는 중량으로 계산한 것이다.
특별한 정의가 없는 경우, 본 발명에서 사용한 모든 전문적 및 과학적 용어는 본 분야의 당업자들이 인지하고 있는 뜻과 같다. 또한, 기재된 내용과 유사하거나 동일한 임의의 방법 및 재료는 모두 본 발명에 사용할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바람직한 실시방법과 재료는 시범용으로 사용된다.
생물적 역가의 측정방법: 중국약전(2005판) 부록 XII M, XII N의 방법에 따라 FSH, LH의 생물적 역가를 측정한다.
단백질 함량의 측정은 Lowry법에 의해 측정한다.
액체 중 FSH의 특이활성도의 계산방법：특이활성도 = 1ml 액체 중 FSH 생물적 역가(IU/mL)÷1ml 액체 중 단백질 함량(mg 단백질/mL)
고체 중 FSH의 특이활성도의 계산방법：특이활성도 = 1mg 고체 중 FSH 생물적 역가(IU/mg)÷1mg 고체 중 단백질의 함량(mg 단백질/mg)
실시예 1
실시예 1과 대조예 1에서 사용한 원료 중, 인간폐경성선자극호르몬(HMG)은 상하이탠웨이생물제약회사(上海天偉生物制藥有限公司)에서 구매하였으며, FSH 생물적 역가는 330 국제단위/mg이며，FSH 특이활성도는 475 국제단위/mg 단백질이며，LH의 생물적 역가는 306 국제단위/mg이며，LH의 특이활성도는 440 국제단위/mg 단백질이다.
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 배합 1：
HMG 250μg
자당 30mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조과정:
상기 배합 1에 따라 실제생산 규모에 필요한 각 원료 및 보조제의 양을 계산한 후, 먼저 용기에 주사용수를 첨가하였으며, 이어서 NaH2PO4?H2O, Na2HPO4?2H2O와 자당을 넣어 10분간 교반하여 완전히 용해시켰다.
pH가 7.0±0.2 범위에 있는지를 측정하였으며, 이 범위에 있지 않을 경우, 1M NaOH 용액 또는 1M HCl용액으로 pH를 7.0±0.2로 조정한다.
상기 용액에 HMG를 넣어 완전히 용해하도록 10분간 교반하였다.
pH가 7.0±0.2 범위에 있는지를 측정하였으며, 이 범위에 있지 않을 경우, 1M NaOH 용액 또는 1M HCl용액으로 pH를 7.0±0.2로 조정한다.
0.22μm Durapore막을 이용하여 무균 여과 후, 여과액을 항생물질을 포함한 엠플병에 분주한다. 반쯤 막은 후, 플레이트에 놓고 동결건조기에 넣어 동결건조시켰다. 동결건조 과정은 하기와 같다.
a. 선반의 온도는 +4℃이며, 20분간 유지시킨다.
b. 선반 온도를 -40℃ 이하로 낮춰 3시간 유지시킨다.
c. 콜드 트랩을 가동시켜, 콜드 트랩 온도를 -45℃ 이하로 낮춘다.
d. 진공도를 가동시켜, 진공도를 100mTor 이하로 낮춘다.
e. 선반 온도를 -10℃까지 올려 10시간을 유지시킨다.
d. 선반 온도를 2시간에 걸쳐 -10℃에서 +35℃까지 올린 후, +35℃에서 5시간을 유지시킨다.
f. 건조가 끝난 후, 질소를 채우고 압력 막음 후 박스포장 및 덮개를 덮는다.
대조예 1
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 대조예 배합 1：
HMG 250μg
마니톨 10mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조방법은 실시예 1과 같다.
40±2℃，RH 75±10%에서 상기 2가지 배합의 안정성 결과는 하기와 같다.
0일 1개월 3개월 6개월
배합 1 FSH(IU/병) 79 85 76 72
LH(IU/병) 76 82 65 74
대조예 배합 1 FSH(IU/병) 74 70 49 45
LH(IU/병) 62 55 42 46
본 발명에서 얻은 조성물 배합 1의 안정성이 대조예에 비해서 뚜렷이 높음을 알 수 있다.
실시예 2
실시예 2와 대조예 2에서 사용한 원료 중, 고순도 인간폐경성선자극호르몬(pHMG)은 상하이탠웨이생물제약회사에서 구매하였으며, FSH 생물적 역가는 7530 국제단위/mg이며，FSH 특이활성도는 10750 국제단위/mg 단백질이며，LH의 생물적 역가는 7709 국제단위/mg이며，LH의 특이활성도는 11006 국제단위/mg 단백질이다.
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 배합 2：
pHMG 12.5μg
자당 15mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 배합 3：
pHMG 12.5μg
자당 30mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조방법은 실시예 1과 같다.
대조예 2
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 대조예 배합 2：
pHMG 12.5μg
락토스 10mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조방법은 실시예 1과 같다.
40±2℃，RH 75±10%에서 상기 3가지 배합의 안정성 결과는 하기와 같다.
0 1개월 3개월 6개월
배합 2 FSH(IU/병) 85 85 88 72
LH(IU/병) 82 78 81 75
배합 3 FSH(IU/병) 87 80 90 74
LH(IU/병) 80 87 76 78
대조예 배합 2 FSH(IU/병) 81 64 67 55
LH(IU/병) 76 70 63 54
본 발명에서 얻은 조성물 배합 2와 배합 3의 안정성이 대조예에 비해 뚜렷이 높음을 알 수 있다.
실시예 3
실시예 3과 대조예 3에서 사용한 원료는 실시예 2와 동일하다.
병당 150 IU FSH와 150 IU LH를 포함한 배합 4：
pHMG 25μg
자당 7.5mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 배합 5：
pHMG 12.5μg
자당 75mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조방법은 실시예 1과 같다.
대조예 3
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 대조예 배합 3(US5650390호에 기재된 배합)：
pHMG 12.5μg
자당 20mg
글리신 10mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조방법은 실시예1과 같다.
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 대조예 배합 4(WO2004112826A1호에 기재된 배합)：
pHMG 12.5μg
자당 30mg
트윈20 0.05mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
L-메티오닌：0.1mg
제조방법은 실시예 1과 같다.
40±2℃，RH 75±10%에서, 실시예 3과 대조예 3의 4가지 배합의 안정성 결과는 하기와 같다.
0 1 개월 3 개월 6 개월
배합 4 FSH(IU/병) 174 168 170 169
LH(IU/병) 156 162 140 153
배합 5 FSH(IU/병) 79 74 82 77
LH(IU/병) 80 87 76 78
대조예 배합 3 FSH(IU/병) 81 67 72 69
LH(IU/병) 83 84 77 71
대조예 배합 4 FSH(IU/병) 90 90 76 68
LH(IU/병) 80 87 75 72
본 발명에서 얻은 조성물의 배합 4와 배합 5의 안정성이 대조예에 비해 뚜렷이 높음을 알 수 있다.
실시예 4
실시예 4와 대조예 4에서 사용한 원료는 실시예 2와 동일하다.
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 액체 배합 6:
pHMG 12.5μg
자당 30mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
메타크레졸(meta-cresol) 0.375mg
0.5mL가 되게 주사용수를 첨가
제조과정:
상기 배합 6에 따라 실제 생산 규모에 필요한 각 원료 및 보조제의 양을 계산한 후, 먼저 용기에 주사용수를 첨가하였으며, 이어서 NaH2PO4?H2O, Na2HPO4?2H2O 와 자당과 메타크레졸을 넣어 10분간 교반하여 완전히 용해시켰다.
pH가 7.0±0.2 범위에 있는지를 측정하며, 이 범위에 있지 않을 경우, 1M NaOH 용액 또는 1M HCl용액으로 pH를 7.0±0.2로 조정한다.
상기 용액에 HMG를 넣고 완전히 용해하도록 10분간 교반하였다.
pH가 7.0±0.2 범위에 있는지를 측정하며, 이 범위에 있지 않을 경우, 1M NaOH 용액 또는 1M HCl용액으로 pH를 7.0±0.2로 조정한다.
0.22μm Durapore막을 이용하여 무균 여과 후, 여과액을 항생물질을 포함한 앰플병에 분주하였다.
대조예 4
병당 75 IU FSH와 75 IU LH를 포함한 대조예 배합 5(WO2004087213호에 기재된 배합):
pHMG 12.5μg
자당 7.5mg
플루로닉 F68 (Pluronic F68) 0.0125mg
L-메티오닌 0.0125mg
메타크레졸 0.375mg
NaH2PO4?H2O 0.69mg
Na2HPO4?2H2O 0.8mg
제조방법은 실시예 4와 동일하다.
실시예 5
안정성 실험
2 내지 8℃에서, 상기 2가지 배합의 안정성 결과는 다음과 같다.
0 1 개월 3 개월 6 개월
배합 6 FSH(IU/병) 79 80 83 83
LH(IU/병) 78 81 74 75
대조예 배합 5 FSH(IU/병) 87 77 74 73
LH(IU/병) 82 74 65 62
본 발명에서 얻은 조성물 배합 6의 안정성이 대조예에 비해 뚜렷이 높음을 알 수 있다.
이상 실시예는 본 발명의 보다 바람직한 실시예일 뿐이며, 본 발명의 실질적 기술내용 범위를 한정하는 것을 목적으로 하지 않는다. 본 발명의 실질적 기술내용은 본 출원의 특허청구범위로 광범위하게 한정되며, 타인이 완성한 기술방안 또는 방법이 본 출원의 특허청구범위에서 한정한 것과 동일하거나 또는 균등한 변화일 경우, 역시 본 발명의 특허청구범위에 속하는 것임을 밝힌다.

Claims (18)

  1. 자당, 인간폐경성선자극호르몬(HMG) 및/또는 그의 변이체를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 단백질 조성물이 액체형태 또는 고체형태인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 고체형태가 동결건조 분말인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  4. 제2항에 있어서,
    FSH 생물적 역가로 계산할 경우, 상기 고체형태의 조성물에 0.1 내지 200 FSH 국제단위/mg 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    FSH 생물적 역가로 계산할 경우, 상기 고체형태의 조성물에 0.5 내지 50 FSH 국제단위/mg 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  6. 제4항에 있어서,
    FSH 생물적 역가로 계산할 경우, 상기 고체형태의 조성물에 1 내지 20 FSH 국제단위/mg 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  7. 제2항에 있어서,
    FSH 생물적 역가로 계산할 경우, 상기 액체형태의 조성물에 1 내지 2000 FSH국제단위/mL 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    FSH 생물적 역가로 계산할 경우, 상기 액체형태의 조성물에 30 내지 1000 FSH 국제단위/mL 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인간폐경성선자극호르몬 중, 난포자극호르몬(FSH)과 황체형성호르몬(LH)의 생물적 역가비가 10：1 내지 1：10인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 인간폐경성선자극호르몬 중, 난포자극호르몬(FSH)과 황체형성호르몬(LH)의 생물적 역가비가 3：1 내지 1：2이며, 바람직하게는 2：1 내지 1：1인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 인간폐경성선자극호르몬은 고순도의 인간폐경성선자극호르몬(pHMG)이며, 상기 호르몬의 특이활성도는 5000 FSH 국제단위/mg 단백질 이상이며, 바람직하게는 6000 FSH 국제단위/mg 단백질 이상이며, 더 바람직하게는 8000 FSH 국제단위/mg 단백질 이상인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 인간폐경성선자극호르몬은 인간뇨에서 유래한 인간폐경성선자극호르몬 및/또는 그 변이체인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 단백질 조성물에 약학적으로 허용가능한 담체를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용가능한 담체는 pH조정제, 비이온 계면활성제, 방부제, 염, 이당류, 마니톨에서 선택되는 1종 또는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 pH조정제가 인산염인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 기재된 단백질 조성물의 제조방법으로서,
    (1) 인간폐경성선자극호르몬과 자당을 포함한 수용액을 제조하는 단계,
    (2) 수용액을 앰플병에 분주하는 단계, 및
    (3) 압력 막음, 밀봉 또는 동결건조 후 압력 막음, 밀봉을 통해 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 단백질 조성물을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 조성물의 제조방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 단계(1)에서, 수용액의 pH는 6.0 내지 8.5이며, 바람직하게는 6.5 내지 8.0인 것을 특징으로 하는 단백질 조성물의 제조방법.
  18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 단백질 조성물을 불임 증후군의 약물을 제조하는데 사용하는 용도.
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